Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Биохимический статус новорожденных телят при сочетанном использовании энтеросорбента, биоцидного препарата и реологических средств

ВАК РФ 03.01.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Биохимический статус новорожденных телят при сочетанном использовании энтеросорбента, биоцидного препарата и реологических средств"

На правах рукописи

005009645

ПАВЛОВ МАКСИМ НИКОЛАЕВИЧ

БИОХИМИЧЕСКИЙ СТАТУС НОВОРОЖДЕННЫХ ТЕЛЯТ ПРИ СОЧЕТАННОМ ИСПОЛЬЗОВАНИИ ЭНТЕРОСОРБЕНТА, БИОЦИДНОГО ПРЕПАРАТА И РЕОЛОГИЧЕСКИХ СРЕДСТВ

03.01.04 - биохимия

2 б рнв гт

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Курск-2012

005009645

Работа выполнена в ФГБОУ ВПО «Курская государственная сельскохозяйственная академия имени профессора И.И. Иванова»

Научный руководитель: доктор ветеринарных наук

Наумов Михаил Михайлович

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор

Шапошников Андрей Александрович

кандидат биологических наук, доцент Чепелев Николай Александрович

Ведущая организация: ФГБОУ ВПО «Белгородская государственная сельскохозяйственная академия имени ВЛ. Горина»

Защита состоится "2012 г. в часов на заседании

диссертационного совета еД 220.040.03 при ФГБОУ ВПО «Курская государственная сельскохозяйственная академия им. проф. И.И. Иванова» по адресу: 305021. г. Курск, ул. К. Маркса, 70.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБОУ ВПО «Курская государственная сельскохозяйственная академия им. проф. И.И. Иванова».

Автореферат разослан М'^^/А 2012 г.

Ученый секретарь -— Г.Ф. Рыжкова

1. Общая характеристика работы Актуальность темы. Изучением клинической биохимии новорожденных телят при различных патологиях занимались многие ученые (В.Т. Самохин, 1982; A.A. Шапошников, 2003; М.И. Редкий, 2004), что позволило им предложить и обосновать применение большого количества лечебно-профилактических средств. В настоящее же время одной из наиболее острых проблем современного животноводства остаются диспепсии телят. Так, например, летальность при диспепсиях достигает 20 - 80 % (В.Г. Данилов, 2001). Причиной высокого падежа больных диспепсией животных, в частности, является однобокий подход в лечении, при котором воздействия осуществляются, главным образом, на отдельные этиологические или патогенетические аспекты болезни. В связи с чем весьма перспективна разработка комплексных способов лечения заболевших диспепсией животных, при которых воздействуют на ряд основных причин и патогенетических сдвигов болезни. Кроме того, эффективность терапии больных диспепсией новорожденных телят во многом зависит от наших познаний в патогенезе болезни. Вопросам же агрегации и внутрисосудистой активации тромбоцитов новорожденных телят в доступной научной литературе уделено недостаточно внимания. Надо указать, что морфофункциональное состояние тромбоцитов может изменяться при различных патологиях, усугубляя при этом течение основного заболевания, а в ряде случаев выступая и в качестве главного нарушения (A.C. Шитикова, 1997; Д.Г. Чинчаладзе, 2006). Поэтому изучение агрегационной функции и внутрисосудистой активности тромбоцитов новорожденных телят в норме и при диспепсии является актуальной и заслуживающей пристального внимания проблемой. Исходя из вышесказанного, нами было предложено сочетанное использовании энтеросорбента Полисорб-ВП, биоцидного препарата Биопаг-Д и реологических средств (реополиглюкина с глюкозой и изотонического раствора натрия хлорида) в качестве нового комплексного способа лечения заболевших диспепсией телят с коррекцией возникающих нарушений агрегации тромбоцитов (AT) и их внутрисосудистой активации (ВАТ). Испытания указанного способа были проведены в рамках данной работы.

Цель работы. Определить биохимический статус новорожденных телят при сочетанном использовании энтеросорбента Полисорб-ВП, биоцидного препарата Биопаг-Д и реологических средств (реополиглюкина с глюкозой и изотонического раствора натрия хлорида), применяемых для лечения диспепсии и коррекции патологической активации тромбоцитов.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи исследований:

1. Изучить изменения агрегации и внутрисосудистой активации тромбоцитов у новорожденных телят, больных диспепсией, по сравнению со здоровыми новорожденными телятами.

2. Установить влияние сочетанного использования энтеросорбента Полисорб-ВП, биоцидного препарата Биопаг-Д и реологических средств (реополиглюкина: с глюкозой и изотонического раствора натрия хлорида) на биохимический статус новорожденных телят, их клинико-физиологическое состояние, морфологические свойства крови.

3. Апробировать в промышленных условиях сочетанное использование энтеросорбента Полисорб-ВП, биоцидного препарата Биопаг-Д и реологических средств (реополиглюкина с глюкозой и изотонического раствора натрия хлорида) в качестве способа лечения больных диспепсией теляг с учетом необходимости коррекции нарушений АТ и ВАТ.

Научная новизна. Впервые изучено влияние сочетанного использования Полисорба-ВП, Биспгха-Д, реополиглюкина с глюкозой и изотонического раствора натрия хлорида на биохимический статус новорожденных телят, их клинико-физиологическое состояние, морфологические свойства крови. Установлено, что при сочетанном использовании больным диспепсией новорожденным телятам указанных средств не наблюдается отрицательного влияния на белковый обмен, активность ферментов переаминирования, содержание общего билирубина и средних молекул, происходит снижение интенсивности пероксидного окисления липидов плазмы крови и тромбоцитов. Впервые изучены показатели АТ и ВАТ у новорожденных телят, больных простой и токсической диспепсией, в разные стадии болезни.

Теоретическая и практическая значимость работы. Дано биохимическое обоснование сочетанного использования энтеросорбента Полисорб-ВП, биоцидного препарата Биопаг-Д и реологических средств (реополиглюкина с глюкозой и изотонического раствора натрия хлорида) в качестве способа лечения больных диспепсией новорожденных телят с коррекцией патологической активации тромбоцитов (патент РФ на изобретение № 2277995). Показан высокий терапевтический эффект и дана экономическая оценка использования предложенного способа для лечения больных телят.

На основе полученных данных по агрегации и внутрисосудистой активации тромбоцитов предложен новый способ прогнозирования развития токсической формы диспепсии у новорожденных телят с начальными признаками диспепсии (патент РФ на изобретение № 2419093).

На защиту выносятся следующие основные положения:

1. Индуцированная агрегация и внутрисосудистая активация тромбоцитов больных диспепсией новорожденных телят в разные стадии болезни.

2. Биохимический статус новорожденных телят, их клинико-физиологическое состояние, морфологические свойства крови при сочетанном использовании энтеросорбента Полисорб-ВП, биоцидного препарата Биопаг-Д и реологических средств (реополиглюкина с глюкозой и изотонического раствора натрия хлорида).

3. Сочетанное использование энтеросорбента Полисорб-ВП, биоцидного препарата Биопаг-Д и реологических средств (реополиглюкина с глюкозой и изотонического раствора натрия хлорида) в качестве способа лечения больных диспепсией новорожденных телят с коррекцией патологической активации тромбоцитов.

Апробация работы и публикации. Материалы диссертационной работы доложены и одобрены на: Международной научной конференции по патофизиологии животных, г. Санкт- Петербург, 10 - 12 мая 2006 г.; Международной научно-производственной конференции «Актуальные проблемы ветеринарной патологии и морфологии животных», посвященной 100-летию со дня рождения профессора A.A. Авророва, г. Воронеж, 22 - 23 июня 2006 г.; Международном научно-практическом конгрессе «Актуальные проблемы ветеринарной медицины», г. Санкт-Петербург, 28 - 29 августа 2006 г.; Всероссийской научно-практической конференции «Региональные проблемы повышения эффективности агропромышленного комплекса», г. Курск, 20 - 22 мая 2007 г.; Международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы ветеринарной медицины», посвященной 125-летию ветеринарии Курской области, г. Курск, 23 мая 2008 г.

По материалам диссертации опубликовано 8 научных работ, в том числе 3 статьи в изданиях, рекомендованных ВАК, и 1 монография. Получено 2 патента РФ на изобретения.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 150 страницах компьютерного текста и включает следующие разделы: введение, обзор литературы, материалы и методы исследований, собственные исследования, обсуждение полученных результатов, выводы, предложения для производства, список литературы, приложения. Список литературы состоит из 246 источников, в том числе 68 иностранных. Работа иллюстрирована 24 таблицами и 3 рисунками.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Основным объектом исследования являлись новорожденные телята черно-песгрой породы: до 10-дневного возраста при нормальном состоянии и с диспепсией. Работа проводилась в два этапа. На первом этале (рис. 1) на базе ФГУП «Учебно-опытно? хозяйство «Знаменское» КГСХА имени профессора И.И. Иванова» были изучены основные клинико-биохимические показатели, АТ и ВАТ новорожденных телят в норме и при диспепсии. Для этого по

принципу аналогов с учетом происхождения, возраста и живой массы при рождении были сформированы 2 группы телят. Условия содержания, кормления и ухода за животными были одинаковыми. Агрегационную функцию тромбоцитов (AT) определяли визуальным микрометодом Шитиковой A.C. (1984). Внутрисосудистую активацию тромбоцитов оценивали визуально с использованием фазовоконтрасного микроскопа (A.C. Шитикова, 1997). При этом определяли процентное соотношение различных в зависимости от активации форм тромбоцитов: дискоцитов, дискоэхиноцитов, сфероцитов, сфероэхиноцитов и биполярных форм тромбоцитов, а также производили подсчет суммы активных форм, тромбоцитов, определяли число малых, средних и больших агрегатов на 100 свободных кровяных пластинок.

На втором этапе исследований на базе СХПК «Имени Черняховского» Курского района Курской области были проведены испытания сочетанного использования энтеросорбента, биоцидного препарата и реологических средств. Схема опыта второго этапа работы представлена в таблице 1.

Таблица 1 - Схема опыта второго этапа исследований

Группа Количество голов в группе Получаемое лечение Дозировка препаратов

I 10 Препарат «Биопаг-Д» 0,1 мл 0,1%-ного раствора на 1 кг живой массы теленка 2 раза в сутки внутрь с молозивом-молоком

II 10 Препарат «Биопаг-Д» 0,1 мл 0,1%-ного раствора на 1 кг живой массы теленка 2 раза в сутки внутрь с молозивом-молоком

Реополиглюкин с глюкозой 5 - 10 мл на 1 кг живой массы в сутки внутривенно

Изотонический раствор натрия хлорида 50-400 мл на животное внутривенно

III 10 Энтеросорбент «Полисорб-ВП» 0,2 т/кг массы тела животного внутрь в виде водной взвеси за I час перед дачей молозива-молока или через 2 часа после кормления

IV 10 Энтеросорбент «Полисорб-ВП» 0,2 г/кг массы тела животного внутрь в виде водной взвеси за 1 час перед дачей молозива-молока или через 2 часа после кормления

Реополиглюкин с глюкозой 5 - 10 мл на 1 кг живой массы в сутки внутривенно

Изотонический раствор натрия хлорида 50 - 400 мл на животное внутривенно

V 10 Препарат «Биопаг-Д» 0,1 мл 0,1%-ного раствора на 1 кг живой массы теленка 2 раза в сутки внутрь с молозивом-молоком

Энтеросорбент «Полисорб-ВП» 0,2 г/кг массы тела животного внутрь в виде водной взвеси за 1 час перед дачей молозива-молока или через 2 часа после кормления

Реополиглюкин с глюкозой 5 - 10 мл на 1 кг живой массы в сутки внутривенно

Изотонический раствор натрия хлорида 50-400 мл на животное внутривенно

VI 10 Тилан-50 (тилозин-50) 0,2 мл/кг внутримышечно 1 раз в сутки до выздоровления

Отвар конского щагсля на изотоническом растворе натрия хлорида Внутрь утром и вечером по 0.5 л

Биохимический статус новорожденных телят, их клинико-физиологическое состояние, морфологические свойства крови при сочетанном применении энтеросорбента Полисорб-ВП, биоцидного препарата Биопаг-Д, реополиглюкина с глюкозой и изотонического раствора натрия хлорида, а также терапевтическая эффективность с учетом эффективности коррекции

нарушении ЛТ и ВАТ предложенного способа была определена в сравнении с результатами от отдельного использования Полисорба-ВП, Полисорба-ВП + реополиглкжина с глюкозой и изотонического раствора натрия хлорида; Биопага-Д; Биопага-Д + реополиглкжина с глюкозой и изотонического раствора натрия хлорида и от лечения, применяемого в хозяйстве. Экспериментальные группы второго этапа исследований формировались из телят с начальными признаками диспепсии по принципу аналогов (с учетом возраста, массы тела и клинического состояния телят). Условия содержания, кормления и ухода для всех животных были одинаковыми.

Клинические исследования проводили общепринятыми методами с определением габитуса, температуры тела, исследования слизистых оболочек, кожи, лимфатических узлов и систем организма: кровообращения, дыхания, пищеварения, мочевой и нервной.

Морфо-биохимический анализ крови включал определение следующих компонентов: эритроцитов и лейкоцитов путем подсчета их в счетной камере Горяева; гематокритней величины - по И. Тодорову (1963); количество общего белка - рефрактометрическим методом; белковых фракций -унифицированным методом электрофоретического разделения белков сыворотки крови в агаровом геле. Содержание средних молекул в плазме крови определяли спектрофотометрически по методу Габриэляна Н.И., Липатовой Л.И. (1984). Интенсивность течения процессов пероксидного окисления липидов (ПОЛ) в плазме крови и отмытых и ресуспензированных тромбоцитах оценивали по концентрации малонового диальдегида (МДА) (A.A. Чиркин, 2002). Билирубин в сыворотке крови определяли по диазореакции (метод Ендрассика-Клеггорна-Грофа); активность ферментов аспартат-аминотрансферазы (АсАТ) и апанинаминотрансферазы (АлАТ) в сыворотке крови устанавливали динитрофенилгидрозоновым методом (И.П. Кондрахин, 2004). Антиокислительную активность (АОА) плазмы крови и тромбоцитов определяли путем установления способности биологического материала тормозить окислительно-восстановительную реакцию в системе Fe2+ - 2,6-дихлорфенолиндофенол (2,6-ДХФИФ) (И.П. Кондрахин, 2004).

Тромбоциты для исследования выделяли из богатой тромбоцитами плазмы дифференциальным центрифугированием.

Статистическую обработку данных производили на ПК с помощью программы Excel из пакета прикладных программ MS Office 2003. Результаты представлены в виде среднего арифметического и стандартной ошибки. Достоверность различий между показателями устанавливали с помощью критерия Крамера-Уэлча (Д.А. Новиков, 2005) при заданном уровне значимости 0,05.

3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 3.1. Индуцированная агрегация и внутрисосудистая активация тромбоцитов клинически здоровых и больных диспепсией новорожденных

телят

Средний показатель агрегации тромбоцитов клинически здоровых новорожденных телят с 1 по 10 сутки жизни составил: 29,92±],16с для коллагена; 38,97±1,61с для АДФ; 41,02±1,61с для ристомицина и 97,05±4,01с для адреналина. Средние показатели внутрисосудистой активации тромбоцитов здоровых новорожденных телят оказались равными следующим величинам: 82,02±0,72 % - доля дискоцитов; 17,98±0,72 % - сумма активных форм тромбоцитов. Среднее содержание дискоэхиноцитов, сфероцитов, сфероэхиноцитов и биполярных форм тромбоцитов в крови здоровых новорожденных телят с 1 по 10 сутки жизни составило 10,27±0,42; 4,64±0,20; 2,57±0,08; 0,51±0,03 процентов соответственно. Среднее число малых агрегатов равнялось 3,59±0,14; а средних и больших агрегатов на 100 свободных тромбоцитов - 0,14±0,03.

В начале простой диспепсии установленные параметры агрегации тромбоцитов хотя и опережали средние показатели, но находились в пределах границ, свойственных здоровым новорожденным телятам. В разгар же болезни отмечалось более существенное усиление индуцированной агрегации со всеми используемыми агонистами. Так феномен снежной бури у больных диспепсией телят в простой форме в разгар болезни наступал быстрее, чем в среднем у здоровых новорожденных особей на 4,62с при использовании коллагена; на 6,03с - с АДФ; на 4,85с - с ристомицином и на 21,52с быстрее при использовании адреналина. Ускорение составило 15,44; 15,47; 11,82 и 22,17 процента для коллагена, АДФ, ристомицина и адреналина соответственно (р<0,05). В стадию выздоровления параметры агрегации тромбоцитов телят, больных простой диспепсией, возвратились в границы, характерные для здоровых новорожденных особей, и составили 29,29±0,07с при применении коллагена; 37,06±0,07с при применении АДФ; 39,49±0,08с при применении ристомицина и 94,07±0,06с при применении адреналина.

При токсической диспепсии в начале болезни результаты агрегации тромбоцитов укладывались в рамки естественных колебаний, свойственных здоровым новорожденным телятам. Однако уже на данном этапе болезни проявлялось заметное усиление агрегации тромбоцитов. Так ускорение в сравнении с показателями АТ в начале простой диспепсией составило 0,66с при использовании коллагена; 0,83с - с АДФ; 0,77с - с ристомицином и 2,22с при

применении адреналина или 2,33; 2,27; 1,99 и 2,43 процента соответственно (р<0,05). Но наиболее ярко нарушения агрегации тромбоцитов проявились в разгар токсической диспепсии, когда феномен снежной бури обнаруживался значительно раньше, чем у здоровых новорожденных телят. Так при использовании индукторе! коллагена ускорение АТ происходило на 12,33с или 41,21%; с АДФ - на 15,94с или 40,90%; с ристомицином - на 16,91с или 41,22%; и прк применении адреналина агрегация ускорялась на 39,98с или 41,19%. АТ в разгар токсической диспепсии наступала также быстрее (на 30,47; 30,08; 33,34 и 24,44 процента для коллагена, АДФ, ристомицина и адреналина соответственно], чем и в аналогичный период у телят с простой диспепсией, что свидетельствует о более глубоких изменениях функционирования тромбоцитов при данной форме болезни. Об этом говорит и тот факт, что в стадию выздоровления от токсической диспепсии установленные параметры агрегации тромбоцитов, равные 25,47±0,11с для коллагена; 34,13±0,14с для АДФ; 36,33±0,18с для ристомицина и 87,67±0,48с для адреналина, не возвращались к значениям начала болезни и соответственно отличались от данных здоровых иовороаденных телят.

У телят с простой диспепсией отмеченные в начале болезни и в стадию выздоровления параметры ВАТ укладывались в пределы естественных колебаний здоровых новорожденных телят, тогда как показатели в разгар простой диспепсии выходили за эти пределы. При сопоставлении со средними значениями здоровых телят в разгар простой диспепсии количество дискоцитов снижалось, а сумма активированных форм тромбоцитов увеличивалась на 3,22 %. При этом доля тромбоцитов с начальными признаками активации -дискоэхиноцитов возрастала на 1,83%; а более активированных сфероцитов и сфероэхиноциов - на 0,86 и 0,53 процента соответственно (р<0,05). Одновременно увеличивалось число малых агрегатов на 0,71 % и средних и больших агрегатов - не. 0,26 % при р<0,05. Выявить зависящее от стадии заболевания изменение числа биполярных форм тромбоцитов при простой диспепсии не удалось. Их содержание составило 0,50 % и недостоверно отличалось от рассчитанного среднего показателя здоровых новорожденных телят.

При токсической диспепсии были обнаружены существенные сдвиги во внутрисосудистой активации тромбоцитов. По сравнению со здоровыми новорожденными телятами уже в начале токсической диспепсии отмечалось достоверное снижение на 2,45% числа интактных кровяных пластинок при одновременном увеличении на тот же процент суммы активных форм

тромбоцитов, происходящем как за счет дискоэхиноцитов, так и за счет более активированных форм - сфероцитов и сфероэхиноцитов, а также биполярных тромбоцитов. Кроме того, в начале токсической диспепсии в 1,39 раза увеличилось число малых и в 5,07 раза — число средних и больших агрегатов на 100 свободных кровяных пластинок. Описанные тенденции повышения внутрисосудистой активации тромбоцитов при токсической диспепсии усилились в разгар болезни, когда содержание дискоцитов снизилось, а сумма активированных форм тромбоцитов увеличилась на 15,02% в сопоставлении со средними данными здоровых новорожденных телят. При этом доля дискоэхиноцитов возросла на 6,31%; сфероцитов - на 5,07% и сфероэхиноцитов - на 3,43% при р<0,05. Биполярных форм в разгар болезни насчитывалось 0,71±0,18%, что соответствовало уровню в начале диспепсии. Число малых агрегатов составило 12,14±0,26; а средних и больших агрегатов насчитывалось 4,43±0,37 на 100 свободных тромбоцитов, что превышало средние показатели здоровых телят в 3,38 и 31,64 раза соответственно (р<0,05). В стадию выздоровления количество неактивированных дискоцитов повышалось до 78,33±0,42%, но еще оставалось существенно (на 3,69 %) ниже значений, свойственных здоровым новорожденным телятам. Сумма активных форм тромбоцитов в стадию выздоровления от токсической диспепсии снижалась до 21,67±0,42%, но была на 3,69 % больше средних значений здоровых телят. В этот период болезни происходило также снижение числа малых агрегатов на 57,41 % и числа средних и больших агрегатов на 84,88 % от данных в разгар болезни (р<0,05).

Из представленного выше материала видно, что при диспепсии (преимущественно в разгар болезни) происходит патологическая активация тромбоцитов: усиливается агрегационная функция с одновременными снижением в кровотоке доли дискоцитов и увеличением суммы активных форм тромбоцитов. У больных телят в кровотоке увеличивается число малых, средних и больших агрегатов на 100 свободных кровяных пластинок. Описываемые тенденции более отчетливо проявляются при токсической диспепсии. Кроме того, в стадию выздоровления от токсической диспепсии параметры агрегационной функции и внутрисосудистой активации тромбоцитов достоверно отличаются от таковых у здоровых новорожденных телят, т.е. при выздоровлении от токсической диспепсии сохраняется повышенная функциональная активность тромбоцитов. В связи с чем возникает необходимость применять такое лечение заболевших диспепсией телят, которое кроме купирования диспепсии корректировало бы возникающую

гиперактивность тромбоцитов. Апробирование такого лечения мы произвели в рамках второго этапа исследований.

3.2. Апробация в промышленных условиях сочетанного использования энтеросорбента Полисорб-ВП, биоцидного препарата Биопаг-Д и реологических средств (реополипиокина с глюкозой и изотонического раствора натрия хлорида)

Больным диспепсией новорожденным телятам применяли энтеросорбент Полисорб-ВП, биоцидный препарата Биопаг-Д, реополиглюкин с глюкозой и изотонический раствор натрия хлорида. Полисорб ВП - полифункциональный энтеросорбент на основе высокодисперсного кремнезема. Он обладает выраженными сорбционными и детоксикационными свойствами. В просвете желудочно-кишечного тракта препарат связывает и выводит из организма эндогенные и экзогенные токсические вещества различной природы. «Биопаг-Д» - антимикробный препарат, изготовленный на основе полигексаметиленгуанидин хлорида, имеет широкий спектр биоцидного действия: он эффективен против грамположительных и грамотрицательных бактерий, различного рода грибов. Реополиглюкин с глюкозой уменьшает вязкость крови, восстанавливает кровоток в мелких капиллярах, нормализует артериальное и венозное кровообращение, предотвращает и снижает агрегацию форменных элементов крови, оказывает дезинтоксикационное действие. Входящая в состав препарата глюкоза усиливает реологическое действие препарата и служит дополнительным источником энергии. Раствор натрия хлорида изотонический применяется при обезвоживании различного происхождения, в качестве дезинтоксикационного средства, при состояниях приводящих к дефициту ионов натрия, хлора. Хорошо совместим и рекомендуется для совместного использования с реополиглюкином.

В результате сочетанного применения указанных средств планировалось купировать основные признаки диспепсии (диарею, обезвоживание, интоксикацию), восполнить возникающий дефицит в организме ионов натрия, снизить повышенную интенсивность процессов пероксидного окисления липидов, скорректировать нарушения со стороны агрегации тромбоцитов и их внутрисосудистой активации.

Биохимический статус новорожденных телят, их клинико-физиологическое состояние, морфологические свойства крови при сочетанном применении указанных препаратов, а также терапевтическая эффективность с учетом эффективности коррекции нарушений АТ и ВАТ предложенного

способа была определена в сравнении с результатами в группах животных при отдельном использовании Полисорба-ВП (1 группа), Полисорба-ВП + реополиглюкина с глюкозой и изотонического раствора натрия хлорида (II группа); Биопага-Д (III группа); Биопага-Д + реополиглюкина с глюкозой и изотонического раствора натрия хлорида (IV группа) и от лечения, применяемого в хозяйстве (VI группа).

3.2.1. Биохимический статус больных диспепсией новорожденных телят при сочетанном использовании энтеросорбснта Полисорб-ВП, биоцндного препарата Биопаг-Д и реологических средств (реополиглюкина с глюкозой и изотонического раствора иагрия хлорида) В начале диспепсии содержание общего белка по группам подопытных телят колебалось от 57,35±0,53 до 59,98±0,47 г/л. При этом альбуминов насчитывалось от 25,77±0,87 до 26,57±0,88; альфа-глобулинов - от 10,29±0,85 до 11,14±0,53; бета-глобулинов - от 11,55±0,93 до 12,92±0,82 и гамма-глобулинов - от 9,19±0,б6 до 9,65±0,81 г/л.

В разгар диспепсии во всех группах больных телят происходило увеличение содержания общего белка и его фракций (табл. 2).

В I группе уровень общего белка относительно начала диспепсии повысился на 6,99%, альбуминов - на 7,44%; альфа-глобулинов - на 7,01%; бета-глобулинов - на 4,54% и гамма-глобулинов - на 8,71%. Во II группе повышение составило 5,25% для общего белка и 5,90; 4,96; 3,33 и 7,25 процентов для альбуминов, альфа-глобулинов, оега-глобулинов и гамма-глобулинов соответственно. В 111 группе общий белок составил 63,12 г/л, что на 5,24% выше показателя в начале диспепсии. Содержание альбуминов в Ш группе увеличилось на 5,31 %, альфа-глобулинов - на 6,31 %; бета-глобулинов -на 2,25%; гамма-глобулинов - на 7,07%. В IV группе уровень общего белка повысился на 5,20%; альбуминов - на 5,37%; альфа-глобулинов - на 6,07%; бета-глобулинов - на 5,31% и гамма-глобулинов - на 4,56%. В V группе в разгар диспепсии содержание общего белка превысило значения начапа болезни на 4,15%; альбуминов - на 4,06%; альфа-глобулинов - на 4,22%; бета-глобулинов - на 3,98% и гамма-глобулинов - на 4,57%. В VI группе подъем содержания общего белка составил 7,20%; а по отдельным белковым фракциям повышение в сравнении с началом диспепсии составило 6,34; 11,08; 5,37 и 7,71 процентов для альбуминов, альфа-глобулинов, бета-глобулинов и гамма-глобулинов соответственно. Отмечаемая в разгар диспепсии гиперпротеинемия у телят всех групп обусловлена, по нашему мнению, развивающимся

эксикозом. При этом чем выше гематокритная величина у телят, тем более выражено было повышение содержания общего белка и его фракций в крови.

Таблица 2. Содержание общего белка и белковых фракций в крови больных диспепсией телят исследуемых групп в разгар диспепсии_

Группы животных Показатели

общий белок, г/л альбумины, г/л альфа-глобулины, г/л бета-глобулины, г/л гамма-глобулины, г/л

1(11=10) Биопаг 61,67±0,63 27,73±0,93 11,61±0,76 12,21±0,88 10,11 ±0,84

II (п=10) Биопаг — Реололи-глкжин с глюкозой + Физраствор 61,121:0,58 27,29±0,93 11,43±0,66 12,41 ±0,95 10,06±0,81

III (п=10) Полисорб 63,12±0,61* 27,98±0,90 11,77±0,64 13,21±0,92 10,15±0,79

IV (п=10) Полисорб + Реопсли-глюкин с глюкозой + Физраствор 62,33±0,55 27,68±0,92 11,53±0,71 13,10±0,86 10,09±0,79

V(п=10) Биопаг + Полисорб + Реополи-глюкнн с глюкозой + Физраствор 61,43±0,71 27,41±0,93 11,61±0,64 12,81±0,52 9,61 ±0,73

VI(п=10) контрольная 61..48±0,65 27,83±0,91 11,43±0.90 12,17±0,97 10,0б±0,85

" - р<0,05 по сравнению с результатами в VI группе животных, находящихся на принятом в хозяйстве лечении

В стадию выздоровления уровень общего белка и его фракций (г/л) у всех телят снижался до следующих величин: 58,62±0,58 - 59,99±0,56 - общий белок; 26,08±0,83 - 26,83±0,89 - альбумины; 10,76±0,92 - 11,33±0,55 - альфа-глобулины; 11,88±0,79 - 12,86±0,85 - бета-глобулины; 9,37±0,67 - 9,64±0,78 -гамма-глобулины.

Белковый коэффициент (отношение альбуминов к глобулинам) во всех группах животных во все периоды диспепсии находился в пределах физиологических границ и колебался от 0,80 до 0,84.

Активность аспартатаминотрансферазы (нмоль/с-л) в начале диспепсии у телят всех групп находилась в пределах 92,74±0,67 - 93,71±0,73 и по группам животных существенно не различалась. В разгар диспепсии активность АсАТ относительно начала болезни повышалась на 4,46% в I группе; 4,48% во II группе; 3,34% в III группе; 3,24% в IV группе; 2,26% в V группе и на 4,44% в VI группе. В стадию выздоровления происходило снижение активности АсАТ до 96,11±0,71 в I группе; 96,07±0,67 во II группе; 94,15±0,53 в III группе; 94,48±0,49 в IV группе; 93,21±0,57 в V группе и до 96,12±0,68 нмоль/с-л в VI группе (табл. 3).

Таблица 3. Активность АсАТ у больных диспепсией телят исследуемых групп в разные стадии болезни__

Группы животных АсАТ, нмоль/с-л

начало диспепсии разгар диспепсии стадия выздоровления

I (п=10) Биопаг 93,71±0,73 97,89±0,76 96,11 ±0,71

II (п=10) Биопаг + Реополи-глюкин с глюкозой + Физраствор 93,56±0,77 97,75±0,77 96,07±0,67

III (п=10) Полисорб 92,74±0,67 95,84±0,71* 94,15±0,53*

IV (п=10) Полисорб + Реололи-глюкин с глюкозой +• Физраствор 93,01 ±0,66 96,02±0,69* 94,48±0,49*

V (п=10) Биопаг + Полисорб + Реополи-глюкин с глюкозой + | Физраствор 92,77±0,69 94,87±0,63* 93,21±0,57*

VI (п=10 ) контрольная 93,68±0,74 97,84±0,72 %_12±а68

* - р<0,05 по сравнению с результатами в VI группе животных, находящихся на принятом в хозяйстве лечении

Активность аланинаминотрансферазы (нмоль/с-л) от начала диспепсии к стадии выздоровления снижалась: в I группе от 83,40±0,61 до 83,03±0,55; во И группе от 83,11±0,75 до 83,01±0,68; в III группе от 82,02±0,63 до 81,12±0,59; в

IV группе от 82,56±0,71 до 82,04±0,б9; в V группе от 82,15±0,58 до 81,82±0,60 и в VI группе от 83,11±0,64 до 82,93±0,61.

Содержание в крови телят общего билирубина (мкмоль/л) в начале диспепсии колебалось от 4,59±0,33 до 4,71±0,22. В разгар болезни концентрация общего билирубина в сравнении с началом диспепсии повышалась на 3,83% у телят I группы; на 3,65% во II группе; на 3,05% в III группе; на 3,47% в IV группе; на 1,30% в V группе и на 2,97% в VI группе. В стадию выздоровления уровень общего билирубина в крови снижался до 4,82±0,23 в I группе; 4,81±0,2б во II группе; 4,67±0,32 в III группе; 4,69±0,21 в IV группе; 4,61 ±0,26 в V группе и до 4,80±0,23 в VI группе (табл. 4).

Таблица 4. Содержание общего билирубина в крови больных диспепсией телят исследуемых групп в разные стадии болезни_

Группы животных Билирубин общий, мкмоль/л

начале диспепсии разгар диспепсии стадия выздоровления

1(п=10) Биопаг 4,70±0,20 4,88±0,27 4,82±0,23

II (п==1С) Биопаг + Реополи-глюкин с глюкозой + Физраствор 4,66±0,21 4,83±0,19 4,81 ±0,26

III (п-10) Поли;орб 4,:59±0.33 4,73±0,28 4,67±0,32*

IV (п=10) Полисорз -Реополи-глюкнн с глюкозой + Физраствор 4.61±0,27 4,77±0,22 4,69±0,21 *

V (п:=10) Биопаг + Полисорб + Реопол I-глюкин с глюксзол Физраст?о: 4,52±0.29 4.68±0,19 4,61±0,26*

VI1п=10) контрольная 4,71 ±0,22 4,85±0,25 4,80±0.23

* - р<0,05 по сравнению с результатами в VI группе животных, находящихся на принятом в хозяйстве лечении

Описываемое повышение в разгар диспепсии активности АсАТ в крови телят всех групп язляегся, на наш взгляд, малосущественным, поскольку не превышает вгрхних физиологических границ. А установленное снижение активности АлАТ от начала болезни к стадии выздоровления полностью

вписывается в характерные для новорожденных телят особенности функционирования ферментной системы печени (снижение активности АлАТ с увеличением возраста). При этом важно, что и уровень общего билирубина в крови телят, хотя и повышался в разгар диспепсии, но оставался в пределах физиологических норм. Все это указывает на отсутствие выраженных нарушений в функциональной активности печени.

В начале диспепсии, установленная по концентрации малонового диальдегида, интенсивность пероксидного окисления липидов плазмы и тромбоцитов по группам телят достоверно не различалась. Аналогично и антиокислительная активность (ч-мин"1- -10'3) плазмы и тромбоцитов в начале диспепсии по группам телят существенно не различалась и колебалась от 1,63±0,08 до 1,65±0,09 в плазме крови и от 1,79±0,07 до 1,82±0,11 в тромбоцитах.

В разгар болезни происходило увеличение концентрации малонового диальдегида как в плазме крови, так и в тромбоцитах при одновременном снижении в исследуемых образцах антиокислительной активности. Наиболее выраженной эта тенденция была в I и II группах больных телят, у которых концентрация МДА в плазме превысила значения начала диспепсии на 50,59% (в I группе) и 51,72% (во II группе). В тромбоцитах увеличение содержания МДА составило 43,04 и 40,00 процентов для I и II группы соответственно. При этом АОА плазмы крови в I группе уменьшилась на 21,95%; а во II группе - на 22,70%. АОА тромбоцитов сократилась на 20,44% у животных I группы и на 18,99% - у животных II группы. Самым низким рост интенсивности пероксидного окисления липидов был в V группе. У животных данной группы в разгар диспепсии концентрация МДА превысила значения начала болезни в плазме крови на 35,71%; а в тромбоцитах - на 29,49%. Антиокислительная активность плазмы крови у животных V группы в сравнении с началом диспепсии была снижена на 12,43%; а АОА тромбоцитов - на 10,99%. В III группе концентрация МДА в плазме крови в разгар болезни была на 40,70% выше значений начала болезни, а концентрация МДА в тромбоцитах - на 37,18% выше. АОА плазмы крови и тромбоцитов животных данной группы была снижена на 17,58 и 15,39 процентов соответственно. В IV группе МДА в плазме крови в разгар диспепсии накопилось на 43,02% больше, чем в начале болезни; а в тромбоцитах - на 36,71% больше. При этом АОА плазмы крови была уменьшена на 18,29%; а АОА тромбоцитов - на 15,00%. У животных VI группы концентрация МДА в плазме крови в разгар диспепсии превысила значения начала болезни на 48,24%; а в тромбоцитах аналогичное превышение составило 38,75%. АОА плазмы крови и тромбоцитов у животных VI группы в разгар диспепсии была ниже начала болезни на 20,73 и 18,33 процента соответственно.

В стадию выздоровления показатель интенсивности ПОЛ (концентрация МДА) в плазме крови и тромбоцитах всех телят, участвующих во втором этапе исследований, снижался до значений, сопоставимых с началом диспепсии (0,81±0,08 - 0,89±0,12 мкмоль/мл - содержание МДА в плазме; 0,74±0,05 -0,79±0,07 мкмоль/мл - концентрация МДА в тромбоцитах). А антиокислительная активность (ч • мин'1 • 10"') плазмы и тромбоцитов в стадию

выздоровления была существенно ниже, чем в начале болезни, и колебалась в следующих пределах: 1,50±0,08 -1,57±0,11 - АОА плазмы; 1,60±0,11 -1,70±0,16 - АОА тромбоцитов.

Уровень средних молекул с максимумом поглощения при 254 нм в крови телят в начале диспепсии по группам животных существенно не различался и составлял 0,39±0,03 - 0,41±0,04 усл.ед. В разгар диспепсии эндогенная интоксикация у телят всех групп относительно начала болезни достоверно усиливалась. Концентрация СМ254 составила 0,43±0,03 - в I и II группах; 0,41±0,02 - е; Ш, IV и V группах и 0,42±0,03 усл.ед. - в VI группе, что превышало значения начала болезни на 7,50; 4,89; 5,13; 2,50; 2,50 и 5,00 процентов для I, II, III, IV, V и VI группы соответственно. В стадию выздоровления у ровень СМ254 в крови телят всех групп снижался до 0,38±0,04 -в I группе; 0,36±0,03 - во II группе; 0,35±0,03 - в III группе; 0,33±0,02 - в IV группе; 0;.32±0,02 - в V группе и 0,35±0,03 - в VI группе.

3.2.2. {Влияние сочетанного использования энтеросорбента Полисорб-ВП, биоцидного препарата Биопаг-Д и реологических средств (реополиглюкина с глюкозой и изотонического раствора натрия хлорида) на клинический статус и морфологические свойства крови больных диспепсией новорожденных телят

Исходные клиническое состояние и морфологические параметры крови по группам телят, участвующих во втором этапе исследований, существенно не различались. Температура тела больных диспепсией новорожденных телят в начаге болезни колебалась от 39,20±0,04 до 39,31±0,08 °С; частота сердечных сокращений э 1 минуту - от 124,70±0,94 до 125,80±0,81; а частота дыхания в 1 минуту - от 33,30±0,48 до 34,52±0,53. Эритроцитов в крови насчитывалось от 5,58^=0,27 до 6,00±0,31 • 1012/л; лейкоцитов - от 8,44±0,30 до 8,70±0,33 ■ 10%. Гематокритнгд величина находилась в пределах 39,43±0,29-39,68±0,35 об.%.

В разгар диспепсии происходило снижение температуры тела телят, участвующих в эксперименте, при одновременном увеличении частоты сердечных сокращений и дыхательных движений в 1 минуту. Наиболее выраженной эта тенденция была у телят первой, третьей и шестой групп, а менее выраженной - во второй, четвертой и пятой группах. С увеличением гематокритной величины повышалось содержание эритроцитов и лейкоцитов в крови больных телят. Эритроцитов в разгар диспепсии насчитывалось в I группе 6,83±0,31; во II группе - 6,81±0,28; в Ш группе - 6,92±0,30; в IV группе - 6,91±0,27; в V группе - 6,89±0,23 и в VI группе - 6,77±0,41 • 1012/л. Лейкоцитоз содержалось 9,31±0,45 в I группе; 9,29±0,44 во II группе; 9,07±0,46 в III группе; 8,97±0,37 в IV группе; 8,72±0,27 в V группе и 9,02±0,39 - 109/л в VI группе. Гематокригная величина (об.%) наиболее высокой была в 1 группе животных (43,38±1,40); во II группе - равнялась 42,51±1,47; в III группе -41,8(5±1,54; в IV группе - 41,43±0,93; в V группе - 40,18±0,32 и в VI группе -41,79±1,66.

В стадию выздоровления во всех группах телят в сравнении с разгаром диспепсии повышалась температура тела, сокращались частота сердечных сокращений и дыхательных движений в 1 минуту. На фоне снижения

гематокритной величины уменьшалось содержание эритроцитов и лейкоцитов. При этом температура тела располагалась на уровне 39,12±0,05 - 39,32±0,06 °С. Частота сердечных сокращений в 1 минуту колебалась от 104,11± 1,31 до 109,67±4,07; а частота дыхания в 1 минуту - от 30,00±0,67 до 31,83±1,05. Эритроцитов насчитывалось от 6,20±0,26 до 6,78±0,14 • 10|2/л; лейкоцитов - от 7,91±0,17 до 8,29±0,27 • 109/л.

3.2.3. Влияние сочетанного использования энтеросорбента Полисорб-ВП, биоцндного препарата Биопаг-Д и реологических средств (реополиглюкина с глюкозой и изотонического раствора натрия хлорида) на агрегацию и внутрисосудистую активацию тромбоцитов больных диспепсией новорожденных телят

В начале болезни показатели индуцированной агрегации во всех группах животных существенно не различались между собой и находились в границах, свойственных здоровым новорожденным телятам. В разгар болезни самой низкой и наиболее приближенной к значениям здоровых новорожденных телят была агрегационная функция тромбоцитов животных V группы, которым комплексно применяли энтеросорбент Полисорб-ВП, биоцидный препарат Биопаг-Д, реополиглюкин с глюкозой и изотонический раствор натрия хлорида. У них индуцированная агрегация равнялась с коллагеном 26,55±1,16; с АДФ -33,17±1,61; с ристомицином - 36,26±1,61 и с адреналином - 75,63±3,24с. Замедление в сравнении с показателями VI контрольной группы составило 15,53% для коллагена; 10,75% для АДФ; 11,47% для ристомицина и 8,09% для адреналина (р<0,05). Агрегация тромбоцитов в стадию выздоровления по всем группам животных находилась в пределах, свойственных здоровым новорожденным телятам.

При определении исходного состояния внутрисосудистой активации тромбоцитов было установлено, что доля интактных дискоцитов, сумма активных форм тромбоцитов и число агрегатов кровяных пластинок различного размера различались несущественно. В разгар болезни максимальная доля интактных тромбоцитов отмечалась у телят V группы, комплексно получавших Полисорб-ВП, Биопаг-Д, реополиглюкин с глюкозой и изотонический раствор натрия хлорида . В их кровотоке содержалось 80,10±0,85% дискоцитов, а сумма активных форм кровяных пластинок составила 19,90±0,85%. Дискоэхиноцитов насчитывалось 11,30±0,54%, сфероцитов - 5,20±0,31% и сфероэхиноцитов -2,90±0,23%, что на 2,20; 1,70 и 1,10 процента соответственно ниже, чем у животных VI контрольной группы. Число малых агрегатов по сравнению с контролем было уменьшено в 1,68 раза, а средних и больших - в 6,96 раза. Содержание биполярных форм кровяных пластинок в разгар диспепсии по группам животных достоверно не различалось. В стадию выздоровления во всех группах животных происходила коррекция внутрисосудистой активации тромбоцитов по количеству дискоцитов и сумме активных форм тромбоцитов, однако наиболее приближенными к оптимальным значениям здоровых телят были параметры, полученные в V группе, где животных лечили сочетанным применением энтеросорбента, биоцидного препарата и гемореологических средств.

4. ВЫВОДЫ

1. У больных диспепсией новорожденных телят в сравнении с клинически здоровыми телятами происходит патологическая активация тромбоцитов: АТ в разгар простой диспепсии усиливается на 15,44% при применении коллагена; на 15,47% при применении АДФ; на 11,82% при использовании ристомииина и на 22,17% при использовании адреналина; в разгар токсической диспепсии аналогичное усиление составляет 41,21%; 40,90%; 41,2.1% и 41,19% для коллагена, АДФ, ристомицина и адреналина соответственно.

2. В кровотоке больных диспепсией новорожденных телят в сравнении со здоровыми телятами увеличивается сумма активированных тромбоцитов на 3,22% при простой диспепсии и на 15,02% при токсической диспепсии. Число малых агрегатов тромбоцитов возрастает на 0,71% при простой и в 3,38 раза при токсической диспепсии, а число средних и больших агрегатов - на 0,26% и в 31,64 раза при простой и токсической диспепсии соответственно.

3. Сочетанное использование энтеросорбента Полисорб-ВП, биоцидного препарата Биопаг-Д и реологических средств (реополиглюкина с глюкозой и изотонического раствора натрия хлорида) не влияет отрицательно на клинический статус, морфологические свойства крови, белковый обмен, активность ферментов переаминирования (АсАТ, АлАТ) и содержание общего билирубина в крови больных диспепсией новорожденных телят.

4. При сочеганном использовании энтеросорбента Полисорб-ВП, биоцидного препарата Биопаг-Д и реологических средств (реополиглюкина с глюкозой и изотонического раствора натрия хлорида) происходит снижение в сравнении с контролем интенсивности пероксидного окисления липидов (содержания МДА) плазмы крови и тромбоцитов на 9,52% и 9,01% соответственно.

5. При сочетанном использовании энтеросорбента Полисорб-ВП, биоцидного препарата Биопаг-Д и реологических средств (реополиглюкина с глюкозой и изотонического раствора натрия хлорида) наблюдаются 90%-ный терапевтический эффект и максимальная в сравнении с контролем коррекция нарушений со стороны агрегации тромбоцитов и их внутрисосудистой активации: АТ снижается на 15,53% при использовании коллагена; 10,75% при применении АДФ; 11,47% при добавлении ристомицина и на 8,09% при использовании адреналина. Сумма активированных тромбоцитов уменьшается на 5,00%; число малых агрегатов сокращается в 1,68 раза, а средних и больших

- в 6,96 раза. Однако полного устранения функциональной гиперактивности кровяных пластинок не наступает.

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Сочетанное применение энтеросорбента «Полисорб-ВП», антимикробного препарата «Биопаг-Д», реополиглюкина с глюкозой и изотонического раствора натрия хлорида может применяться в качестве эффективного способа лечения больных диспепсией новорожденных телят с коррекцией возникающих нарушений агрегации и внутрисосудистой активации тромбоцитов (патент РФ на изобретение № 2377995).

2. Предложен способ прогнозирования развития токсической формы диспепсии у новорожденных телят с начальными признаками диспепсии (патент РФ на изобретение № 2419093). При выявлении у новорожденных телят с начальными признаками диспепсии ускорения агрегации тромбоцитов свыше 7% от контроля можно прогнозировать развитие токсической диспепсии.

3. Разработаны и опубликованы Практические рекомендации по применению гуанидинсодержащих препаратов в ветеринарии.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ

* - работы, опубликованные в рекомендованных ВАК РФ изданиях

1. Наумов, М.М. Способ ранней диагностики, своевременного лечения и профилактики нарушения пищеварения и задержки развития у новорожденных телят при диспепсии / М.М. Наумов, С.М. Сулейманов, И.Н. Медведев, Е.В. Баскаков, М.Н. Павлов // Актуальные проблемы ветеринарной патологии и морфологии животных: мат-лы междунар. научн,-производ. конф., г. Воронеж, 22 - 23 июня 2006 г. - Воронеж, 2006. - С. 739 -742.

2. Медведев, И.Н. Перспективы применения энтеросорбентов при желудочно-кишечной патологии у новорожденных телят / И.Н. Медведев, М.М. Наумов, М.Н. Павлов // Актуальные проблемы ветеринарной медицины: мат-лы междунар. научн.-практ. конгресса., г. Санкт-Петербург, 2В - 29 августа 2006 г. - СПб, 2006. - С. 156 - 159.

3. "Медведев, И.Н. Агрегационная активность тромбоцитов у новорожденных телят с диспепсией / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова, М.М. Наумов, М.Н. Павлов // Известия Тимирязевской сельскохозяйственной академии. - 2006. - №4.-С. 172- 176.

4. Практические рекомендации по применению гуанидинсодержащих препаратов в ветеринарии / Сост. А.Ю. Айдиев, М.М. Наумов, И.Н. Медведев ... М.Н. Павлов. - Курск: Изд-во ЦР Лоцман, 2007. - 28 с.

5. Наумов, М.М. Функциональная гиперактивность тромбоцитов новорожденных телят как патогенетический аспект диспепсии / М.М. Наумов. М.Н. Павлов // Актуальные проблемы ветеринарной медицины: мат-лы междунар. научн.-практ. конф., г. Курск, 22 - 23 мая 2008 г. - Курск, 2008.-С. 274-278.

6. Полимерные биоциды-полигуанидины в ветеринарии / М.М. Наумов, Л.А. Жукова, З.Д. Ихласова, М.Н. Павлов и др. - Курск: Изд-во Курск, гос. с/х. ак., 2010. - 84 с.

7. *Наумов, М.М. Уровень эндогенной интоксикации и функционирование системы антиоксидантной защиты у больных диспепсией новорожденных телят при комплексной терапии / М.М. Наумов, М.М. Павлов // Вестник Курской государственной сельскохозяйственной академии. - 2010. - № 4. -С. 70 - 72.

8. *Наумов, М.М. Активность ферментов переаминирования и содержание общего билирубина в крови новорожденных телят при комплексной терапии ! М.М. Наумов, М.М. Павлов // Вестник Курской государственной сельскохозяйственной академии.-2011.- №6.-С.71 -72.

ПАТЕНТЫ РФ

9. Способ лечения больных диспепсией новорожденных телят с коррекцией патологической активации тромбоцитов / М.М. Наумов, М.Н Павлов // Патент РФ на изобретение № 2377995. Приоритет от 16.06.2008. Опубл. 10.01.2010. Бюл.№ 1.

10.Способ прогнозирования развития токсической формы диспепсии у новорожденных телят с начальными признаками диспепсии / М.М. Наумов, М.Н Павлов // Патент РФ на изобретение N° 2419093. Приоритет от 18.11.2009. Опубл.20.05.2011. Бюл. N° 14.

Сдано в набор 18.01.2012 г. Подписано в печать 18.01.2012 г. Усл. печ. л. 1,0. Заказ 26. Тираж 100 экз.

Отпечатано в ООО «Учитель» г. Курск, ул. Садовая, 31.

Текст научной работыДиссертация по биологии, кандидата биологических наук, Павлов, Максим Николаевич, Курск

61 12-3/506

Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «КУРСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ СЕЛЬСКОХОЗЯЙС ТВЕННАЯ АКАДЕМИЯ ИМЕНИ ПРОФ. И.И. ИВАНОВА»

ПАВЛОВ МАКСИМ НИКОЛАЕВИЧ

БИОХИМИЧЕСКИЙ СТАТУС НОВОРОЖДЕННЫХ ТЕЛЯТ ПРИ СОЧЕТАННОМ ИСПОЛЬЗОВАНИИ ЭНТЕРОСОРБЕНТА, БИОЦИДНОГО ПРЕПАРАТА И РЕОЛОГИЧЕСКИХ СРЕДСТВ

03.01.04 - биохимия

Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических

наук

Научный руководитель: доктор ветеринарных наук Наумов М.М.

Курск - 2012

ОГЛАВЛЕНИЕ

стр.

СПИСОК ПРИНЯТЫХ СОКРАЩЕНИЙ...............................................5

ВВЕДЕНИЕ...................................................................................6

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ......................................................10

1Л. Этиопатогенез диспепсии...................................................10

1.2. Биохимический статус здоровых и больных диспепсией новорожденных телят......................................................21

1.3. Строение и функции кровяных пластинок............................24

1.4. Биохимические основы активации и агрегации тромбоцитов..................................................................28

1.5. Лечение при диспепсиях....................................................34

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.....................43

ГЛАВА 3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ..........................................50

3.1. Индуцированная агрегация и внутрисосудистая активация тромбоцитов клинически здоровых новорожденных телят...........................................................................50

3.2. Индуцированная агрегация и внутрисосудистая активация тромбоцитов новорожденных телят, больных диспепсией.......................................................................................59

3.3. Апробация в промышленных условиях сочетанного использования энтеросорбента Полисорб-ВП, биоцидного препарата Биопаг-Д и реологических средств (реополиглюкина с глюкозой и изотонического раствора натрия хлорида).............................................................................................70

3.3.1. Эффективность сочетанного использования энтеросорбента Полисорб-ВП, биоцидного препарата Биопаг-Д и реологических средств (реополиглюкина с глюкозой и изотонического раствора натрия хлорида) для лечения

больных диспепсией новорожденных телят....................................................................74

3.3.2. Влияние сочетанного использования энтеросорбента Полисорб-ВП, биоцидного препарата Биопаг-Д и реологических средств (реополиппокина с глюкозой и изотонического раствора натрия хлорида) на агрегацию и внутрисосудистую активацию тромбоцитов больных диспепсией новорожденных телят..................................................................................78

3.3.3. Влияние сочетанного использования энтеросорбента Полисорб-ВП, биоцидного препарата Биопаг-Д и реологических средств (реополиппокина с глюкозой и изотонического раствора натрия хлорида) на клинический статус и морфологические свойства крови больных диспепсией новорожденных телят...................................................................89

3.3.4. Биохимический статус больных диспепсией новорожденных телят при сочетанном использовании энтеросорбента Полисорб-ВП, биоцидного препарата Биопаг-Д и реологических средств (реоиолиглюкина с глюкозой и изотонического раствора натрия хлорида)...............................................................92

3.3.5. Определение экономической эффективности сочетанного использования энтеросорбента Полисорб-ВП, биоцидного препарата Биопаг-Д и реологических средств (реополиглюкина с глюкозой и изотонического раствора натрия хлорида) для терапии больных диспепсией новорожденных телят.........................................................105

ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ..................108

ВЫВОДЫ..................................................................................116

ПРЕДЛОЖЕНИЯ ДЛЯ ПРОИЗВОДСТВА..........................................118

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ..................................................................120

ПРИЛОЖЕНИЯ..............................................................................147

СПИСОК ПРИНЯТЫХ СОКРАЩЕНИЙ

АДФ - аденозиндифосфат АлАТ - аланинаминотрансфераза АОА - антиокислительная активность АсАТ - аспартатаминотрансфераза АГ - агрегация тромбоцитов АТФ - аденозинтрифосфат

ВАТ - внутрисосудистая активация тромбоцитов

ДХФИФ - дихлорфенолиндофенол

МДА - малоновый диальдегид

ПАТ - полиалкиленгуанидин

ПГМГ - полигексаметиленгуанидин

ПОЛ - перекисное (пероксидное) окисление липидов

СМ254 - средние молекулы с максимумом поглощения при 254 нм

ТхА2 - тромбоксан А2

ФАТ - фактор активации тромбоцитов

цАМФ - циклический аденозинмонофосфат

цГМФ - циклический гуанозинмонофосфат

ВВЕДЕНИЕ

Одной из наиболее острых проблем современного животноводства являются болезни молодняка [174]. Из незаразных заболеваний молодняка чаще других регистрируют желудочно-кишечные болезни, в частности диспепсии, которыми переболевают до 100% новорожденных животных [50]. Диспепсия рассматривается не как местное, а как общее заболевание, при котором в патологический процесс вовлекаются все системы организма [10, 35, 49, 104]. Так, кроме расстройства желудочно-кишечного тракта, включающего нарушения функционирования печени и поджелудочной железы, из наиболее характерных изменений отмечают расстройства в сердечно-сосудистой системе и в крови. Однако данные о функционировании тромбоцитов новорожденных телят при диспепсии в доступных научных источниках скудны. Надо указать, что морфофункциональное состояние (агрегационная функция и

внутрисосудистая активность) тромбоцитов может изменяться при различных патологиях, усугубляя при этом течение основного заболевания, а в ряде случаев выступая и в качестве главного нарушения 1164, 174]. Поэтому изучение агрегационной функции и внутрисосудистой активности тромбоцитов новорожденных телят в норме и при диспепсии является актуальной и заслуживающей пристального внимания проблемой.

При этом методам терапии и предупреждения диспепсий как в отечественных, так и в зарубежных научных кругах посвящено значительное количество работ. И в данный момент в распоряжении ветеринарных врачей уже имеется большой арсенал различных лечебно-профилактических средств, среди которых - антимикробные, пробиотические, ферментные и другие препараты. В последнее время для лечения и профилактики диспепсий применяют ряд нетрадиционных способов - используют электроактивированную воду (анолит), низкоинтенсивное лазерное излучение; вещества, стимулирующие секрецию в сычуге, и пр. Однако, не

смотря на заметные достижения, проблема борьбы с диспепсиями еще далека от своего полного решения. Так, например, летальность при диспепсии достигает 20 - 80 % [50], что наносит огромный экономический ущерб животноводству. Одной из причин высокого падежа больных диспепсией животных является однобокий подход в лечении, при котором воздействия осуществляются, главным образом, на отдельные этиологические или патогенетические аспекты болезни: усиленно размножающуюся микрофлору, дефицит у животных в ферментных и других веществах, сниженную резистентность и др. В связи с чем весьма перспективна разработка комплексных способов лечения заболевших диспепсией животных, при которых воздействуют на ряд основных причин и патогенетических сдвигов болезни. Так нами был предложен новый комплексный способ лечения заболевших диспепсией телят с коррекции возникающих нарушений АТ и ВАТ. Его испытания были проведены в рамках данной работы. Комплексная схема лечения включала в себя применение энтеросорбента Полисорб-ВП, антимикробного препарата Биопаг-Д, реополиглюкина с глюкозой и изотонического раствора натрия хлорида. При этом преследовалась цель не только устранить чрезмерное размножение в желудочно-кишечном тракте условно-патогенной и патогенной микрофлоры, ликвидировать основные признаки диспепсии (диарею, обезвоживание, интоксикацию), восполнить возникающий недостаток в организме ионов натрия, но и снизить повышенную интенсивность процессов пероксидиого окисления липидов как неспецифического повреждающего фактора, и купировать нарушения со стороны агрегации тромбоцитов и их внутрисосудистой активации.

Цель работы. Определить биохимический статус новорожденных телят при сочетанием использовании энтеросорбента Полисорб-ВП, биоцидного препарата Биопаг-Д и реологических средств (реополиглюкина с глюкозой и изотонического раствора натрия хлорида), применяемых для лечения диспепсии и коррекции патологической активации тромбоцитов.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи исследований:

1. Изучить изменения агрегации и виутрисосудистой активации тромбоцитов у новорожденных телят, больных диспепсией, по сравнению со здоровыми новорожденными телятами.

2. Установить влияние сочетанного использования энтеросорбента Полисорб-ВП, биоцидного препарата Биопаг-Д и реологических средств (реополиглюкина с глюкозой и изотонического раствора натрия хлорида) на биохимический статус новорожденных телят, их клинико-физиологическое состояние, морфологические свойства крови.

3. Апробировать в промышленных условиях сочетанное использование энтеросорбента Полисорб-ВП, биоцидного препарата Биопаг-Д и реологических средств (реополиглюкина с глюкозой и изотонического раствора натрия хлорида) в качестве способа лечения больных диспепсией телят с учетом необходимости коррекции нарушений АТ и ВАТ.

Научная новизна. Впервые изучено влияние сочетанного использования Полисорба-ВП, Биопага-Д, реополиглюкина с глюкозой и изотонического раствора натрия хлорида на биохимический статус новорожденных телят, их клинико-физиологическое состояние, морфологические свойства крови. Установлено, что при сочетанном использовании больным диспепсией новорожденным телятам указанных средств не наблюдается отрицательного влияния на белковый обмен, активность ферментов переаминирования, содержание общего билирубина и средних молекул, происходит снижение интенсивности пероксидного окисления липидов плазмы крови и тромбоцитов.

Теоретическая и практическая значимость работы. Дано биохимическое обоснование сочетанного использования энтеросорбента Полисорб-ВП, биоцидного препарата Биопаг-Д и реологических средств

(реополиглюкина с глюкозой и изотонического раствора натрия хлорида) в качестве способа лечения больных диспепсией новорожденных телят с коррекцией патологической активации тромбоцитов (патент РФ на изобретение № 2377995). Показан высокий терапевтический эффект и дана экономическая оценка использования предложенного способа для лечения больных телят.

На основе полученных данных по агрегации и внутрисосудистой активации тромбоцитов предложен новый способ прогнозирования развития токсической формы диспепсии у новорожденных телят с начальными признаками диспепсии (патент РФ на изобретение № 2419093).

На защиту выносятся следующие основные положения:

1. Индуцированная агрегация и внутрисосудистая активация тромбоцитов больных диспепсией новорожденных телят в разные стадии болезни.

2. Биохимический статус новорожденных телят, их клинико-физиологическое состояние, морфологические свойства крови при сочетанном использовании энтеросорбента Полисорб-ВП, биоцидного препарата Биопаг-Д и реологических средств (реополиглюкина с глюкозой и изотонического раствора натрия хлорида).

3. Сочетанное использование энтеросорбента Полисорб-ВП, биоцидного препарата Биопаг-Д и реологических средств (реополиглюкина с глюкозой и изотонического раствора натрия хлорида) в качестве способа лечения больных диспепсией новорожденных телят с коррекцией патологической активации тромбоцитов.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 1.1. Этиопатогенез диспепсии

Диспепсия новорожденных телят - остропротекающее заболевание молозивного периода, характеризующееся нарушением функции органов пищеварения, обмена веществ и интоксикацией организма [31].

Диспепсия имеет сложную многокомпонентную этиологию, что создает определенные трудности в диагностике и лечении. Причины диспепсии удобно разделить на следующие основные:

1. Факторы, оказывающие неблагоприятное воздействие на внутриутробное формирование организма.

2. Негативные условия внешней среды, влияющие на приплод в первые дни их жизни.

3. Микробный фактор.

Действие факторов, оказывающих неблагоприятное воздействие на внутриутробное формирование организма, часто приводит к рождению физиологически незрелых, недоразвитых телят (гипотрофиков). Диспепсия у таких телят возникает, в частности, из-за неспособности их организма нормально переваривать молозиво, а также вследствие сниженной резистентности [35, 104]. Одним из наиболее часто встречающихся факторов, оказывающих неблагоприятное действие на внутриутробное формирование организма теленка, является неполноценное кормление коров-матерей. Многие авторы [38, 44, 70, 71, 108, 134, 146, 158, 167, 171, 199, 221] указывают, что диспепсии у новорожденных телят в основном обусловлены неполноценным кормлением стельных коров и нетелей. Недостаточное, несбалансированное кормление этих животных вызывает у них нарушение обмена веществ, что отрицательно отражается на росте и развитии плода, и в конечном итоге рождается теленок с пониженной резистентностью [16, 40, 44, 72, 166, 169]. Также к рождению телят с низким уровнем резистентности и ослабленными адаптационными механизмами может привести стрессовое

состояние материнского организма в период плодоношения [22, 61, 109]. Такое состояние сопровождается повышенной функциональной активностью гипофиза и коры надпочечников. При этом в плод поступают в больших количествах материнские кортикостероиды, которые тормозят развитие у него гипофиз-адреналовой системы. Все это в дальнейшем может привести к возникновению диспепсии.

В последнее время появились сообщения, что неонатальная патология молодняка крупного рогатого скота, в частности диспепсия, может быть обусловлена химическим и техногенным загрязнением окружающей среды, территориально-производственных систем агробиогеоценоза и популяций продуктивных животных. Кашин A.C., Гречкин А.П. и Воробьев К.В. [78] отмечают, что в районах с напряженной эколого-антропогенной обстановкой усиливается хроническое трансплацентарное повреждающее воздействие приоритетных экотоксикантов на плод в системе мать - плацента - плод -приплод. На таком фоне 80 - 90 % телят рождаются морфологически и функционально недоразвитыми. Из них у 30 % развивается гипотрофия и гипоплазия еще в утробном периоде, что проявляется функциональным нарушением органов пищеварения, а в последующем - дыхательной системы. Наибольшее токсическое действие оказывают кадмий, свинец, ртуть, никель, хром, мышьяк и др. в сочетании с нитратами, нитритами, микотоксинами, радионуклидами, метаболитами и изомерами устойчивых органических загрязнителей (хлорорганических, карбоновых, ртутьорганических пестицидов); полициклическими ароматическими углеводородами и пр. Диспепсию телят, вызванную указанными выше антропогенными загрязнителями, относят к так называемым антропогенным экологическим болезням молодняка [78].

Среди неблагоприятных условий внешней среды, действующих на приплод в первые дни их жизни и способных привести к диспепсии, выделяют два основных фактора [104]: а) климатический (переохлаждение,

перегревание, сквозняки); б) алиментарный (понижение иммунобиологических свойств молозива, перекорм, длительное голодание, неправильная выпойка молозива и т.д.). На то, что переохлаждение, перегревание и другие нарушения технологии содержания новорожденных животных вызывают усиление перистальтики кишечника, нарушают его секреторно-абсорбционную функцию и приводят к диспепсии рефлекторно-стрессового характера указывают многие авторы [70, 104, 117, 134, 159, 181, 198].

Ряд исследователей [63, 75, 76, 77, 111, 112, 208, 221] обращают внимание на роль в возникновении диспепсии неполноценного по содержанию иммуноглобулинов молозива. При употреблении такого молозива у теленка не создается высокой напряженности колострального иммунитета, в результате чего восприимчивость к условно-патогенной и патогенной микрофлоре возрастает. Причиной желудочно-кишечных болезней у телят может быть также скармливание им молозива, содержащего токсические вещества, в том числе высокие концентрации нитратов и нитритов [120, 127, 230], или же - молозива с нарушенными физико-химическими свойствами [21, 105, 132, 139]. Многие авторы [189, 196, 242] наблюдали возникновение диспепсии у телят вследствие нарушения режима и норм выпойки молозива. А. Ф. Пилуй [124], Б. М. Анохиным [10], В. В. Митюшиным [104], Н. Т. Винниковым [32], И. П. Кондрахиным [84] и многими другими учеными достоверно установлено, что при выпаивании молозива из ведра или сосковой поилки с отверстием большого диаметра снижается рефлекторное выделение слюны и сычужного сока. Молозиво попадает в рубец, где происходит его гнилостное брожение. Все это способствует развитию диспепсии. Кроме того, при скармливании холодного или горячего молозива также н�