Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Биохимические аспекты гигиенической характеристики грибного мицелия как продукта пищевого назначения

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Биохимические аспекты гигиенической характеристики грибного мицелия как продукта пищевого назначения"

На правах рукописи

ХАРАТЯН Тамара Зреююевна

БИ0ХИМ1№СКИЕ АСПЕКта ГИГИЕНИЧЕСКОЙ ХАРАКТЕРИСТИКИ ГРИБНОГО МИЦЕЛИЯ КАК ПРОДУКТА ПЖЕВОГО НАЗНАЧЕНИЯ

03.00.04 - Биохимия 14.00.07- - Гигиена •

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Ростов-на-Дону 1995

Работа выполнена в Ростовском государственном медиц,!нском университете.

НАУЧШЕ РУКОВОДИТЕЛИ

ОФШИАЛЬНУЕ ОППОНЕНТЫ

ВЕШАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ

- Заслуженный деятель науки РФ. доктор медицинских наук, профессор Шепелев А. П. Доктор медицинских наук старший научный сотрудник Нетреба Г. К.

- Доктор биологических наук старший научный сотрудник • Микашинович З.И. Кандидат .медицинских наук, старший научный сотрудник Свечникова Л. В,

- Институт питания Российской Академии медицинских наук

Защита состоится "У,.?," Р./С&1&Я/). 1995г. в

часов

на заседании диссертационного совета Д 084.53.01 при Ростовском государственном медицинском университете. /344022 г. Ростов-на-Дону, пер. Нахичеванский. 23./

у

С диссертацией молшо ознакомиться в библиотеке Ростовского государственного медицинского университета.

Автореферат разослан ",,//," 1995г.

Ученый секретарь диссертационно го

совета, доцент Коргенов Н.Я.

- 3 -ВВЕДЕНИЕ .

Актуальность проблемы. В связи с дефицитом традиционных белковый ресурсов изыскание дополнительных резервов пищевого белка для всевозрастащего населения планеты - одна из актуальнейших проблем современной науки. Мировой дефицит белка определяется в настоящее время в 20 миллионов тонн, а к 2000 году он возрастет в трое. Очень остро стоит вопрос обеспечения населения нашей страны высококачественными белками.

Возрастающая потребность в белке не может быть удовлетворена только за счет интенсификации сельского'хозяйства. Одним из перспективных путей получения дополнительного белка является метод глубинного культивирования грибного мицелия СВ. Г. Бабицкая, А. Г. Лабанюк, 1976: А. С. Бухало, 1988). Ценность этого способа получения белка состоит в том, что для его культивирования могут быть использованы практически все растительные отходы: выращивание бази-диальных грибов можно производить на зерне злаковых, картофеле, свекловичной мелассе, соке люцерны. 3 качестве продуцента биомассы могут служить грибы преимущественно рода Ро1урозиз. По питательным и вкусовым качествам мицелий ' высших грибов обладает несомненным преимуществом перед многими продуктами растительного происхождения С Ю. П. Черотченко, 1970).

Для обеспечения гарантий безвредности и обоснования возможности использования нетрадиционных белков С мицелиальной массы) в питании человека необходимо провести медико-биологическую и гигиеническую оценку этих белков С В. А. Тутельян, 1983: Ю. Г. Новодержкина. 1984: Г. К. Нетреба, 1986).

Наиболее важным требованием при этом является оптимальный аминокислотный состав, отражающей биологическую ценность нетрадиционных белков.

Важным аспектом иследований является установление безвредности

белкового продукта, полученного по оригинальной технологии. Однако до настоящего времени нет общепринятый методических подходов, позволяющих адекватно оценить нетрадиционные пищевые продукты. Эта задача чрезвычайно важна в связи с тем, что скорость изменения внешней среды, включая и качество пищи, загрязнение ее чужеродными веществами превышает скорость биологической адаптации как в Филогенезе, так и в онтогенезе.

ЦЕЛЬ РАБОТЫ: На основе комплексного изучения основных парамет-рор, характеризующих состояние обменных процессов и анализа изофер-ментного спектра лактатдегидрогеназы, сукцинатдегидрогеназы, изо-цитратдегидрогеназы, глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы в печени .и сыворотке крови, обосновать возможность использования грибного Мицелия в качестве пищевой добавки.

Для реализации указанной цели поставлены следуюцие задачи:

1. Изучить состав грибного мицелия.

. 2. На основе исследований содержания общего белка и соотношения белковых фракций, уровня аминокислот и нуклеиновых кислот я органам и тканях животных ь хроническом С 24 мес.) и на шести поколениях в хроническом эксперименте изучить биологическую ценность нетрадиционного белкового продукта.

3. На основе изучения: активности фруктозо-1,6-дифосфатальдола-

зы, глюкозо-6--фосфатдегидрогеназы, щелочной фосфцтазы. аланинами-нотранферазы и аспартатаминотрансферазы в сыворотке и печени на поколениях крыс определить влияние грибного мицелия на обменные процессы.

4 Изучить изоФерментный спектр лактатдегидрогеназы, сукцинатдегидрогеназы, изоцитратдегидрогеназы, глккозо-6-фосфатдегидрогеназы в сыворотке крови животных в хроническом С 24 мес.) эксперименте и на шести поколениях, для выявления отдаленных изменений метаболических процессов.

5. Установить оптимальную квоту включения грибного мицелия в качестве пишевого продукта.

- 5 -

ПОЛЖЕНИЯ ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ.

Грибной мицелий отличается высоким содержанием белка, витаминов группы В, достаточной сбалансированностью эссенцмальных аминокислот; лимитирувдей кислотой является триптофан.

2. Отсутствие изменений в уровне общего белка, соотношений белковым фракций, количество аминокислот и нуклеиновых кислот в тканях и органах свидетельствует о высокой биологической ценности нового белкового продукта - грибного мицелия.

3. .По данным активности фруктозо-1,6-фосфатальдолазы. щелочной фосфссгазы в сыворотке крови и печени животных установлена отсутствие вредного влияния грибного мицелия.

4. На основании изучения изоферментного спектра лактатдегидроге-

назы. сукцинатдегидрогеназы, изоцитратдегидрогеназы, глюкозо-6-фос-Фатдегидрагеназы на шести поколениях крыс в сыворотке крови показана целесообразность использования этих параметров для оценки нетрадиционных белковых продуктов.

5. Установлена оптимальная квота грибного мицелия, которая может быть испльзована в качестве добавки в продукты питания.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА \ ,,

В результате проведенного исследования изучен химический состав и биологическая ценность нового грибного продукта грибного мицелия, полученного методом глуоинного культивировиния. Установлена оптимальная квота включения грибного мицелия в состав пищевых продуктов. Впервые изучены особенности метаболических процессов (содержание общего белка и соотношение белковых фракций, уровень аминокислот и нуклеиновых кислот в органах и тканях животных) для оценки биологической ценности нового нетрадиционного белка, полученного из

грибного мице.пия методом глубинного культивирования.

Впервые использовано для гигиенической оценки нового нетрадиционного белкового прол/кта изучение изойерментного спектра лактат-дегисрогеназы. сукцинатдегидрогеназы, изоцитратдегидрогеназы, глк*-козо-б-ФосФтгдегидрогоназы, на ыести поколениях крыс, что позво-

ляет выявить скрытые отдаленные изменения метаболических процессов.

Показано, что изоферментный спектр в сыворотке крови крыс, кото-рык содержат на рационе при включении оптимальной квоты 25%, не изменяется, но реагирует на увеличение С 50%) или уменьшение С15%) содержания этого белка.

Предложенный комплекс методов, позволяет выявить скрытые отдаленные изменения метаболических процессов, что не дает применение только общепринятым методов.

Теоретическая и практическая значимость работы.

Используемый в работе комплекс методик может бьггь рекомендован для оценки новых белковых продуктов. Полученные результаты послужат обоснованием для проведения следующего этапа работы: Клинических испытаний и внедрения грибного мицелия в питание человека в качестве белковых добавок.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены на 5-ой Северо-Кавказской научно-практической конференции по итогам выполнения в 1985 году комплексно-целевой научной программы "Гигиенические аспекты окружающей среды", на 10-ой Северо-Кавказской научно-практической конференции с Всесоюзным участием, посвященной подведению итогов выполнения в .1990 году комплексно-целевой научной . программы" Гигиенические аспекты охраны окружашей среды".

Публикация материалов исследования: по теме диссертации опубликовано 10 научных работ, из них 2 в центральной печати.

Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов •• исследования, результатов собственных исследований, заключения, выводов, списка литературы. Работа изложена на 152 страницах машинописного текста, иллюстрирована рисунками, таблицами. Список литературы включает работы отечественых и зарубежных авторов.

- 7 -

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДО ИССЛЕДОВАНИЯ

Эксперименты проведены на 1400 взрослых половозрелых крысах С самцах и самках шести поколений), которым включали в рацион мице-лиальную биомассу в количестве 15%, 25%, 50%' в расчете на суточную, потребность белка в рационе.

При выборе периодов наблюдения мы руководствовались большей степенью реактивности животных в течении первых Чрех месяцев. Однако, учитывая то, что для гигиенической оценки продуктов необходимы более длительные исследования, сроки экспериментов на поколениях были продлены до 6 месяцев.

ДЙя изучения биологической ценности и безвредности нового белкового продукта использованы методы биохимические, генетические, ток-сиколого-гигиенические, морфогистохимические. статистические.

Содержание общего белка в сыворотке крови и печени определяли биуретовым методом.

Определение белковых фракций проводили методом диск-электрофореза в полиакрилемидном геле. Количественное определение различных фракций белка производили при помощи денситометрии окрашенных элек-трофореграммС П Maypep, 1971). Суммарное количество нуклеиновых кислот в сёменниках определяли методом А. С. СпиринаС1977). Аминокислотный состав белков -определяли методом Е.А. Noltman, А. 'Г. Mahouold, S. А. СиЫ С1962) на ёминокислотном анализаторе chitash. Активность аспартатаминотрансферазы й аланинаминотрачсферазы в сыворотке крови и печени определяли методом Райтмана и ФренкеЛяС1959), . активность фруктпзо-i, 6-дифосфатапьдолазы - по Брунксу в модификации В. И. Товарниикаго и Е. Н. Волуйской (1965), щелочной фос.фотазы - по А. И. Боденскому (1933).. ■

ИзоФерментный спектр в сыворотке крови определяли методом диск-электрофореза в полиакрилашдном геле С Л. С Пупкевч, В. 8. Ilk ло><ое, 1984). Выявлениз Фср'Л'ЧТоз и их и^фс-рмантнык йюрм проводили спеии-

Фическими для каждого энзима субстратными смесями, содержащими нит-росиний тетразолий и феназинметасульфат.

Липиды экстрагировали из гомогенеэированных тканей смесью хлороформа метанола в соотношении 2:1. -

Холестерин определяли по методу С. Д. Балаховского, И. С. Бала-ковекого (1953), липидный фосфор определяли по методу С1967). Неэстерефицированные жирные кислоты СНЭЖК) определяли методом ОапсотЬе (1963). Для осаждения фосфолипидов мы использовали метод Ногп51е1п( 1967) в модификации А. В. Садьисова (1П71).

Изучение генр.ративной функции животных, функциональное состояние сперматозоидов оценивли по методу Е. Н. Милованова в модификации Г. И. Егоровой. Определение тератогенной активности мице-лиальной массы определяли на 20 день беременности. Подсчитывали количество эмбрионов, желтых тел, число резорбций. Определяли доим-плантациопную, постимплантационную и общую эмбриональную смертность.

После родов все плоды исследовали для регистрации аномалий развития на серии срезов.

Для выявления мутагенности грибного мицелия использовали метод доминальных летальных мутаций, а для количественной оцеики мутагенного действия подсчитывали количество живых эмбрионов, количество погибши« эмбрионов, количество желтых тел беременности. У каждой самки учитывали общую эмбриональную смертность.

Морфогистслогические исследования. Гистологическому исследованию подвергали органы пищеварительного аппарата - желудок, тонкий кишечник, печень, поджелудочную железу: органы выделительной и половой системы: почки, семенники, предстательную железу, яичники и матку. Начерпали Фиксировали в 10%-ном растворе нейтрального Формалина. в Фиксаторах Шабадаш и Кануа. Ткани уплотняли в парафине или замораживали. Срази окрашивали гемаюксилин-эозином. Полисахариды выявляли по ШабадашуС 1962).

Статистическая обработка. Полученный цифровой материал подвергался статистической обработке методами параметрической и непараметрической статистики с использованием критериев для малы« выборок, а также критерия Вилкоксона-Манна-Уитни СЕ. В. Губмер, A.A. Генкин 1973).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Химический состав грибного мицелия. ОдниМ-413 важных требований к новым нетрадиционным белковым продуктам, является постоянство химического состава. Во всех изученных образцах мицелия определено вы/

сокое содержание белка, до 45%. Это значительно выше, чем в белках растительного присхожденияС пшеница 11,7%), и животного присхожде-ния Смясо свиней 21%). В грибном мицелии определены липиды до 6,5%, углеводов не обнаружено. Исследуемый белковый продукт отличается, также достаточно высоким уровнем витаминов группы В: Bl, В2, В12. При анализе аминокислотного спектра грибного мицелия необходимо отметить, что в состав! белка входят все эссенциальные аминокислоты, что является важным показателем, характеризующим биологическую ценность белкового продукта. Аминокислотный состав белков мицелия также характеризует его высокую биологическую ценность. Так , скор для изолейцина-составил 91%, цистеина и метионина - 100%, валина-7%, лейцина-60%, триптоФэ'на-55%. Определнно, что главной лимитирующей аминокислотой для этого белкового прдукта является триптофан. Необходимо отметить также достаточно высокое содержание в грибном, мицелии нуклеиновых кислот. Оно превышает их содержание b мясе, молоке, яйцах, но приближается к такому продукту как печень. Это может явиться одним из существенных осложнений при попытках использовать мицелий в питании чг-ловигса, так как потребление с пищей повышенных количеств нуклеиновых кислот приводит к накоплению в крови и тканях человека избыточных количеств мо'ювеп кислоты. Олнакп, создание высокоценных белковым продуктов с вклкгкгуиеч грибмогп мидалия и

- 10 -

лимитированием его квоты позволит избежать этих отклонений.

Метаболические процессы как показатель биологической ценности нового белкового продукта - грибного мицелия. Известно, что образующиеся при технологическом производстве кормовых и пищевых бел-нов биологически активные вещества природного происхождения, а также различные примеси могут оказывать существенное влияние на ме/а- . Салические процессы в организме при длительном их потреблении. Наиболее существенное значение в этом плане имеют результаты исследо-вакий этого воздействия в поколениях с использованием наиболее чув-ртвтельных биологических методов. Так как в грибном мицелии было определено повышенное содержание нуклеиновых кислот, исследование их уровня в тканях животных, получавших грибной мицелий, было особенно важным. ' : •

Суммарное количество нуклеиновых кислот в семенниках и печени крыс исходного и всех последующих поколений, получавших грибной ми-цэлий в количестве 15% и 25% С срок кормления 3 и 6 месяцев 3, не отличалось статистически достоверно от контрольны* значений и совпадало с данными литературы С А. А. Покровский, В. А. Тимошенко, 1972), исключение составляют животные с 50%-ной заменой Силка на грибной мицелий, при которой наблюдается достоверное увеличение У[хзвня нуклеиновых кислот в печени крыс во втором поколении. Однако в последующ™ поколениях суммарное содержание нуклеиновых кислот было на уровне контрольных значений. По-видимому, лимитировании квоты мицелияС особенно 15% и 25%} позволяет избежать накопления суммарного количества нуклеиновых кислот при длительном их пи-ммшнии с на шести поколениях). Этот Факт можйт свидетельствовать о биологической ценности нового белкового продукта - грибного мицелия.

Известно, ччи организм че'лоьека и животного способен адаптироваться к изменению белковой части рациона, но иногда механизм Фер-1ь-ит".ои адаптации оказывается малолМсктиьпым, и утилизация белка

нарушается. На доступность белков.пищеварительным Ферментам влияет ряд Факторов, связанных главным образом с их неполным перевариванием, что наблюдается при наличии перекрестных связей в молекуле белка в присутсвии ингибиторов прогеаз, или протеазы не способны

ч

проникнуть через клеточную стенку или воздействовать на белковую молекулу модифицированного белка. Вот почему биологический эксперимент дает ответ на вопрос о биологической ценности нового или нетрадиционного белка.

В динамике эксперимента определено, что 15%-ная замена белка на грибной мицелий в диете животных 3-х и 6-ти месяцев приводила к увеличению суммарного количества аминокислот по сравнению с контролем. Однонаправленный процесс протекал и при 25%-ной замене белка в рационах. Однако 50%-ная замена на белок грибного мицелия достоверно снижала суммарное количество аминокислот в печени крыс. Эта жа тенденция повторялась во втором поколении крыс, получавших диету с грибным мицелием. \

В третьем поколении значения суммарного^количества аминокислот в печени крыс увеличиваются, но эти изменения статистически недостоверны. и наконец, в четвертом поколении суммарное количество аминокислот в печени крью, получавших грибной мицелий в квоте 50% по белку статистически достоверно не отличается от контроля. Таким образом. постепенно, на протяжении четырех поколений происходит Ферментная адаптация к новому белковому продукту.

При изучении аминокислотного состава тканей крыс, в рацион которых включали различные количества .ювого белкового продукта, можно отметить, что 50%-ное включение в рацион животных грибного мицелия вызывает статистически достоверное сниженик уровня эссенииальных аминокислот*, гистидина в 3,5 раза, лейцина- в 2 раза, валина, изо-, лейцина. тт-иптыЬана, особенно в первом и втором поко пениям, что мо--жь г емшетидьетвовач ъ о напряженности ЦизрмРнтатийНЫх систьм, .сяч-

занных с использованием необычного белкового продукта. Однако, в последующих поколениях С третье и четвертое) статистически значимые изменения в уровне аминокслот, особенно незаменимых, становится минимальным. По-видимому, в течениии нескольких поколений завершается ферментная адаптация к необычному белковому продукту, что согласуется с данными Л. А. Тиунова И Г. А. Васильева С1966), Л. А. . ТиуноваС 1982). которые предложили в качестве критерия безвредности факторов малой интенсивности изучать состояние ферментных систем. Следовательно, использование этой квоты грибного мицелия можно считать нецелесообразным. 25%-ное включение в рацион животных грибного мицелия приводит к увеличению в печени крыс первого поколения некоторых зссенциальных аминокислот: метионина, валина, лейцина: во втором поколении наблюдалось, кроме вышеперечисленных, еще и повышение уровня лизина и фенилалина.

В третьем и четвертом поколениях крыс включение; в рацион живот- • ных 25% грибного мицелия не вызывало статистически значимых отклонений в уровне зссенциальных аминокислот. 15%-ное включение грибного мицелия вызывает в поколении увеличение уровня зссенциальных аминокислот, а в последущих - снижение незаменимых аминокислот.. Таким образом, 15%-ная замена белка на белок грибного мицелия является менее предпочтительной, чем 25^-ная.

Известно, что состав пищевых рационов непосредственно влияет нп ссд&Ржание аминокислот в тканях организма (.В. Я. Медовар, Л. А. Синеок, 1992: 1087). Это влияние связано, во-первых, с несбалансированностью пищевого рациона, когда недостаток в рационах незаменимых аминокислот приводит к дефициту белка в тканях организма, что неблагоприятно воздействует на метаболические процессы в организме. Во-вторых, возможна задержка Фэрментативной адаптации к изменению бьиишвой части рациона, и утилизация белкл нарушается. В наших исследованиях. вероятно, ии^ег место ка.с первоп. гак и второе, ск;о-

бенно при использовании 50% белка мицелия. При 15%-ной замене белка, видимо, тоже имеет место Несбалансированность рациона. Известно, что лимитирующей аминокислотой грибного^мицелия является триптофан, а эта незаменимая аминокислота играет Важнейшую роль в мета-, болических процессах. Как известно, триптофан Служит исходным субстратом для синтеза никотиновой кислоты в организме. Из триптофана образуется серотонйн, обладающий мощным^Ъосудосуживаюдим свойством и способствующий повышению кровяного давления, участвующий в свертывании крови и выполняющий другие важные функции СС. Я. Каплан-" " Исключение триптофана из рациона приво-

крови, развитию гипохромной анемии, катаракты: васкуляризации роговицы, авитаминозу РР.

Что касается 25%-ной замены, то эта квота мицелия является наиболее благоприятной, содержание эссенциальных аминокислот в псанях. всех поколений превышает контрольные значения или не отличается от таковых.

Одним из важных показателей состояния белковых резервов организма является содержание общего белка и соотношение белковых фракций. При 50%-ной замене белка на белок мицелия во 2 поколении было отмечено снижение общего белка- за счет резкого снижения альбумина и бета-глобулинов. 15%-ная и 25%-ная замена белка на белок грибного мицелия не вызывала значимых изменений по сравнению с контролем в уровне общего белца в крови и печени животных и в соотношении бел-

ковых фракций С рис. 1 и 2). г

Только многосторонняя "оценка оргачизЦэ кёк единой биологической системы может сделать достоверным суждение о безвредности изучаемого белкового продукта - грибного мицелия. Чтобы выявить скрытые изменения адаптационных сюзможностей организма, мы провели исследования активности ферментов при длительном применении изучаемого пре-

уменьшению содержания белков в плазме

■■ альбумин - йета-гпоблпин

— — алъфа- глобулин ----гаина-глойулнн

Рис. 1. Динамика со/\е)шанмп йелкопых ф1>.(кц| п снчщтткп кропи ысстн поколений КЦЫС. пилуМ^'Ч1»!^ . гривпо»"! ММЦГ!«»»"> « ТОЧЧЧМЧ мс.-«щ«»г» (%)

- 15 -

К1 Г2 ГЗ Г4 Г5 ГВ

Рис. 2. Динамика содержаи!-.я йспкопых 'фракций в сыворотке крови |1Ю!.:ТИ покппсниП крыс, ПОП9ЧЛВШ1Х гри(>н«!"| М1щеп1»"1 в теченкв 6 иесяцпв

- 16 - • I

дукта на шести поколениях крыс. Полученные результаты позволили выявить следующую закономерность; при 25%-ном включении грибного мицелия в рацион крыс, в печени не наблюдалось нарушений в активности Фруктозо-1. в-дифосфатальдолазы, глюкозо-6-фосфатдегидрогена-' зы. щелочной фосфатазы, а также аланинаминотрансферазы. При введении в рацион животных 15% и 50% грибного мицелия в течении шести месяцев удалось выявить отклонение только аспартатаминотрансфераз. Именно при такой квоте мицелия в наших исследованиях было определено сьижение уровня глутаминовой и аспарагиновой кислот.

Как ивестно, существует обратная зависимость между активностью аспартатаминотрансфераз и содержанием аспарагиновой и глутаМиновой кислот, и такая корреляция определена в.нашем эксперименте!

При 15%-ном и 50%-ном включении в диету крыс грибного мицелия во втором поколении животных можно отметить изменение активности всех без исключения ферментов. Так, наблюдается снижение активности глю-козо-6-фосфатде гидро геназы, которая контролирует гексомонофосфатный путь, обеспечивает клетки необходимым количеством пентозофосфа- . тов и НАДФН для биосинтеза нуклеотидов и кофакторов, снижение активности этого Фермента сочетается со снижением уровня треонина и аланина в тканях животных при использовании 50%-ного грибного мицелия. Такую корреляцию наблюдал Б.Я.МедоварС1989) в своих исследованиях. Некоторые изменения в активности ферментов были отмечены и в Третьем поколении. Они связаны с отклонениями в уровне эссен-циальных кислот от контроля. Таким образом, можно объяснить изменение активности изучаемых ферментов у крыс при 50%-ной замене белка на белок грибного мицелия несбалансированностью рациона. Частоту отклонений в активности ферментов при 15% и 50%-ном включении грибного мицелия можно объяснить также и Ферментной адаптацией именно в этот срок.

При анализе зависимости активности изученных Ферментов от коли-

- 17 - '

чества грибного мицелия, включенного в рацион крыс, определено, что оптимальней дозой мокко считать 25%-ную замену белка на грибной мицелий. Необходимо сделать еще один вывод: именно длительные исследования позволили выявить выраженные изменения в активности ферментов, что подтверждает правомочность предпринятых нами исследований активности Ферментов на шести поколениях крыс. Отсутствие изменений в активности ферментов у крыс нескольких поколений позволяет объяснить это Ферментной адаптацией. Так, по мнению Л. А.' Тиунова и Г. А. ВасильеваС1966), если наблюдается колебание активности фер-.ментативной системы под действием каких-либо факторов это уже свидетельствует о напряженности, то есть о признаке вредного действия.

Изучение изоферментного спектра тканей крыс, по данным В. Л. КретовичС 1967), М. Н. Петрунь и др С1982), может выявить возможное негативное влияние нового белкового продукта. .

При изучении изоферментного состава ЛДГ нами установлено, что при 15%-ной и 50%-ной замене белка на белок мицолия наблюдается повышение коэффициента ЛДГ5/ЛДГ1 как в исходном С24 месяца), так и во всех последующих поколениях. При 25%-ной замене белка на белок мицелия наблюдается, напротив, снижение коэффициента за счет увеличения ЛДГ1. Интересно отметить, что что этот Факт наблюдается во втором и третьем поколениях. Поскольку ряд авторов С М. Н. Петрунь и цр. . 1982) квалифицируют снижение коэффициента ЛДГ5/ЛДГ1 как свидетельство усиления резистентности организма к неблагоприятным воздействиям внешней среды, можно сделать вывод о благоприятном влиянии рациона с 25-ным включением грибного мицнлия на метаболические процессы в организме С рис.3). Такова одна ии регуляторньш.

N

Функций изоферментов, отмеченных Умбергер и сбавт. (196'/')

По данным В. Л. К|<его1'ИЧ (1967), М. Н. Петрунь и др. (19821,. присутствие в клетке множественных молекулярных Форм фермента способствует слаженности процессов обмана веществ в клетке, быстрой

Содержание Г-Б-ФДГ, V. мицелия. У.

КОНТРОЛЬ

15 г.

25И

50и

1

ИЦДГ, •/

№ '

СДГ,//.

лдг, и

>

Рис. 3. Изоферменхные спехтры ключевых ферментов в сывсгоотхе хрови хрыс, получавших разное количество мицелия в рационе в течение 24 месяцев С/О

00

1

-1

-2

И-а

-4

-5

приспособляемости к постоянным изменениям внешних воздействий. Резкие колебания в уровне фракций при 50%- ной замене белка на белок грибного мицелия вплоть до исчезновения отдельных фракций свидетельствуют о признаках адаптационной перестройки биохимических процессов. Таки>1 образом, биохимические критерии безвредности новый белковых продуктов, которые можно отнести к так называемым "факторам малой интенсивности", являэтся наиболее тонкими и чувсвительны-ми. Использованные нами методы определения активности ферментов и изоФерментного спектра крови на шести поколениях крыс позволили .выявить скрытые нарушения метаболических процессов, которые не били установлены при использовании других методических подходов. Из проведенных исследований можно сделать вывод, что использование рационов, в которых 50% белка заменено белком грибного мицолия, вызывает перестройку организма, но существует истинное приспособление без патологической основы явления, без напряжения систем адаптации. Однако возможно., что при продолжении воздействия факторов среды неумолимо наступает стадия декомпенсаторной патологии I" И. В. Сэ-ноцкий, И. А. Уланова. 1976). Вот почему так важно всесторонне изу-. чить особенности метаболических реакций у животных в течении длительного времени С на нескольких поколениях), чтобы уловить не,-только возможное явное вредное влияние, но и напряженность адаптационных механизмов организма.

Показатели липидного обмена у крыс, получавших грибной мицелий, несомненно, помогают решить вопрос о возможной токсичности нового белкового продукта, а также его пищевой ценности.

Проведенные исследования показали, что наиболее низкий уровень полиненасыщенных жирных кислот отмечался у крыс 2 поколения ЬП"/-ным включением грибного мицелия за гчет достоверного снижения ара.шлоновой кислоты. На уровень предшественника арахидоновоЯ-лйно-.певой кислоты в два раза превышал контрольный значений. Снижение,

уровня ненасыщенных жирных кислот у крыс второго поколения, получавших мицелий в течении 3-х месяцев, сопровождалось снижением содержания эфиров холестерина на фоне более высокого, чем в контроле суммарно го количества холестерина и общих липидов. Удлинение срока кормления до шести месяцев сопровождалось повышением содержания эфирсв холестерина в группе с 25%-ным включением грибного мицелия, что может свидетельствовать о высокой степени обмениваемости и выведение холестерина из организма.

В липидах печени крыс третьего поколения содержание арахидоно-вой кислоты было высоким во всех группах, включая контрольную. Содержание холестерина, фосфолипидов. бета-липопротеидов, эфиров холестерина, показатель эстерификации у крыс, не отличались- от контрольных значений. Суммарное содержание насыщенных, моноеновых, по-лиеновых и жирных кислот с нечетным числом атомов углерода . в указанных группах также соответствовало контролю. Это свидетельствует об отсутствии отдаленных последствий и какого-либо неблагоприятного влияния исследуемого продукта на пять поколений крыс. Известно, что начальными реакциями в комплексе нарушений обмена липидов является изменение баланса, между ПНЖК и системой биологических ан-тиоксидантов (Ю. А. Владимиров, 1992), что. приводит к усилению процессов перекисного окисления липидов, изменению проницаемости мембран и обуславливает нарушения метаболизма.

Можно сделать вывод об отсутстви отрицательного влияния грибного мицелия на обмен липидов. Однако, надо отметить признаки адаптационной перестройки биохимических процессов, которые не привели к срыву только благодаря высокой обеспеченности организма животных эссенциальными жирными кислотами.

Для использования биомассы в качестве прдуцентов пищевого белкового подукта необходимы комплексные медико-биологические испытания, в частности, изучение генеративной функции СИ. И. Аксюк, 1984). При

анализе результатов исследований гэнадотропного действия грибного мицелия на пяти поколениях самцов установлено, что в первом и втором поколениях достоверно снижается вес семенников, однако описанные изменения находятся в пределах физиологической нормы. В последующих поколениях изменения отсутствуют, что может свидетельствовать об адаптации организма к необычному белку.

При гистологическом изучении строение семенников всех опытных групп- однотипно и соответствует контролю, - что согласуется с предыдущими результатами.

При изучении тератогенного эффекта не обнаружено достоверным различий во1всех опытных группах по сравнению с контрольной в количестве желтых тел в яичниках, числе резорбций, живых и мертвых плодов, показателе доимплантационной, постимплантационной и общей эмбриональной смертности.

Во втором поколении отмечается достоверное увеличение числа живых эмбрионов и числа желтых тел при 15%-ной и 25%-ной замене на белок мицелия. При изучении мутагенного Действия (грибного миивлия использовался метод доминантных летальных мутаций.

При анализе полученных данных не обнаружено статистически достоверных сдвигов по следующим показателям: число желтых тел, живых эмбрионе»'., резорбций, доимплантационная смертность, постимпланта-иионнья и общая эмбриональная смертность. Не выявлено достоверного увеличения числа аберэций хромосом в клетках костного мозга у крыс, находящихся на экспериментальном рационе по сравнению с контрольной группой.

Контроль га Физиологическим состоянием животных, ыасой тела животных, относительной массой внутренних органон, гистсструктурой ткзнрй. Пгырнлмнныр нами токси'колого-гиг ионические исследования позволяют констатировать. что в печении вор го периода наблюдения животные сокр-ииыи активность, ориентацию, жнюший аппетит, чистый.

гладкий шерстный покров. Снижение массы тела и относительной массы почек и легких отмечалось при 100%-ной замене белка. При 50%-ной замене белка наблюдали статистически достоверное снижение массы тела, которое сочеталось со снижением в это время уровня треонина и' лизина в тканях организма, аминокислот, по мнению ряда эеторов С С. Я. Капланский, 19625 1964), ответственных за задержку роста животных. 15%-ная и 25%-ная замена белка не вызывала отклонений в массе тела и относительной массе внутренних органов от контрольных значений.

. Включение в рацион в течении двух лет грибного мицелия в количестве 15% и 25% по белку не вызывает патологических изменений в органах пищеварительного'аппарата, генеративных органах и. почках, что свидетельствует о безвредности белкового продукта - грибного мицелия.

Выявленная высокая биологическая ценность грибного мицелия и его безвредность позволяют рекомендовать этот белковый продукт для проведения клинических испытаний с целью использования его в питании человека.

ВЫВОДЫ

1. Грибной .мицелий, выращенный на мелассе, по своему химическому составу, уровню белков, витаминов превосходит растительные продукты и приближаются по аминокислотному составу к продуктам животного происхождения.

Аминокислотный состав грибного мицелия свидетельствует о его высокой биологической ценности: лимитируюцей аминокислотой является триптофан. ,

2. Биохимическиз показатели, характеризующие биологическую ценность белка С содержание общего белка и соотношение белковых фракций, уровень аминокислот и нуклеиновых кислот в органах и тканях животных) свидетельствуют о высокой биологической ценности рационов с включением 25% грибного мицелия.

3. Активность фруктозо-1,е-дифосфатальдолазы, глюкозо-б-фосфзт-дегилпогеназы, щелочной фосфатазы, аланинаминотрансферазы и аспаг>-татаминотрансферазы не изменяется но сравнению с контрольными значениями в сыворотке крови и печени животных при включении 25% грибного мицелия.

Увеличение квоты мицелия до 50% в первом и втором поколениях вызывает перестройку организма на уровне изученных Ферментов.

/

4. ИзоФерментный спектр лактатдегидрогеназы, сукцинатдегидроге-най^, глюкозо-6-фосфатдагидрогеназы, изоцитратдегидрогеназы в тканях животных, получавших 25% мицелия, не отличается от контроля, что свидетельствует о безвредности данной квоты грибиого мицелия: 50%-ное включение грибного мицелия вызывает перестройку изофермен-тного спектра в 1-ом и 2-ом поколениях.

5. .Содержание полиненасыщенных жирных кислот, общего холестерина и другие показатели липидноГо обмена, крыс при 25%-ном включении не отличались от контрольных значений.

Генетические исследования, прведенные на поколениях, не выявили изменений при 25%-ном включении мицелия в рацион животных.

6.. На основании проведенных исследований; можно считать оптимальной и безвредной дозой 25% "включения мицелия.'

7. Для оценки нетрадиционных белковых продуктов можно рекПменло-вать новый методический подход, включаший изучения изофэрментного спектра в сыворотке крови животных, генетический исследования, а также изучение аминокиелбтного состава -тканей и некоторых показателей метаболизма на нескольких поколениях животных. Предложенный комплекс методов позволяет .выявить скрытые отдаленные изменения ига • таболических npoueccor, что не 'дает пр;'м<чьите только «■.¿.•аеиргнятая методов.

- 24 -СПИСОК

научных трудов Харатян Тамары Эреклоевны.

1. Мутагенный и ци то генетический эффект грибного мицелия ВСБ--927 СЛ. Ю. Елизарова).-// В мат. конф." Гигиеническ. аспекты охраны окру жаиц. среды." Ростов-н/Д. 1,986г. с.-61.

2. Характеристика•гонадотропного действия грибного мицелия на организм крыс СЛ. Ю Елизарова, В. С. .Отливщикова).-// В мат. конф.

"Гигиеническ. аспекты охраны окружаш. среды." Ростов-н/Д. 1987г.

1»

с. -77. г' '

• 3. Исследование безвредности и отдаленных последствий влияния пищевого грибного мицвлия на организм крыс. (Г. К. Нетреба, Л. Ю. Елизарова).-// В мат. конФ." Гигиенические аспекты охраны окружают, среды." Москва, 1986г. ; • -

4. Оценка эмбриотоксической и тератогенной активности триметидо-на. С Л. Ю. Елизарова).-//В мат. конФ. 43 отчетной научной конференции, посвященной 70-летип Великой Октябрьской социалистической ре, волюции. Москва, 1987.

5. Влияние грибного мицелия на белковый обдан крыс.-// В мат. конФ. " Гигиенические аспекты охраны окружающей среды." Ростов -н/Д, 1988г., с.-123.

6. Изоферментный спектр ЛДГ сыворотки крови крыс при применении грибного мицелия.-//В мат. конФ. "Гигиенические аспекты охраны окружающей среды. Ростов-н/Д, 1989г., с. -157.

7. Аминокислотный состав сыво|хэ"км крови и печени крыс, получивших в рационе грибной мицелий.-//В мат. конф. " Гигиенические аспекты охраны окружающей среды, г. Ростов н/Д, 1990 г.. с.-208.

Й. Оценка безвредности грибного мицелия на 6 поколениях крыс. -//В мат. конФ. " Гигиенические аспекты охраны окружающей ссеьы." г. Ростов н/Д., 1990 г., С.-ГЮ8.

У. Оценка влиянии на организм крыс грибною миин пия РЗ 64 по :

динамике активности изошпретдегидрогеназы.-//В мат. конф. " Гигие-/

нические аспекты охраны окружающей среды." г. Ростов н/Д. 1991 г., с.-20.

10. Характеристика пищевой ценности и безвредное™ грибного мицелия Г5 -64. -//Известия высших учебных заведений. Северо-Кавказский регион.Редколлегия " Естественные науки." г. Ростов н/Д. 1994г.

Подписано к печати 9&г

Формат бумаги 60 х 84. 1/16« Бумага офсетная. Печать ocf.ce г вея. Печ. лист

Заказ -£56 \ тираж -/СО У,

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Харатян, Тамара Эреклоевна

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Белок - важнейший компонент питания

1.2. Поиски новых и нетрадиционных источников белка - важнейшая задача науки

1.3. Медико-биологические аспекты исследования качества нетрадиционных белковых продуктов

1.4. Биохимические критерии гигиенической оценки нетрадиционных пищевых продуктов

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ С СОБСТВЕННЫЕ

ИССЛЕДОВАНИЯ)

ГЛАВА 3. ХИМИЧЕСКИЙ СОСТАВ И БИОЛОГИЧЕСКАЯ ЦЕННОСТЬ

ГРИБНОГО МИЦЕЛИЯ

ГЛАВА 4. МЕТАБОЛИЧЕСКИЕ ПРОЦЕССЫ КАК ПОКАЗАТЕЛЬ ПИЩЕВОЙ

ЦЕННОСТИ НОВОГО БЕЛКОВОГО ПРОДУКТА - ГРИБНОГО МИЦЕЛИЯ

4.1. Содержание нуклеиновых кислот в тканях крыс, получавших в рационах грибной мицелий

4.2. Аминокислотный состав тканей крыс, получавших рацион с включением грибного мицелия

4.3. Уровень белка и соотношение белковых фракций в тканях крыс

ГЛАВА 5. БИОХИМИЧЕСКИЕ И ДРУГИЕ АСПЕКТЫ БЕЗВРЕДНОСТИ НОВОГО

БЕЛКОВОГО ПРОДУКТА - ГРИБНОГО МИЦЕЛИЯ

5.1. Ферменты констелляции в сыворотке крови и печени крыс, в рацион которых включали грибной мицелий

5.2. Изоферментный спектр тканей крыс, в рацион которых включали грибной мицелий

5.3. Показатели липидного обмена у крыс, получавших в рационах грибной мицелий

5.4. Влияние рационов с включением грибного мицелия на массу тела и гистоструктуру тканей крыс

Введение Диссертация по биологии, на тему "Биохимические аспекты гигиенической характеристики грибного мицелия как продукта пищевого назначения"

АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ В связи с дефицитом традиционных белковых ресурсов изыскание дополнительных резервов пищевого белка для все возрастающего населения планеты - одна из актуальнейших проблем современной науки.

Мировой дефицит белка определяет в настоящее время в 20 миллионов тонн, а к 2000 году он возрастет втрое. Очень остро стоит вопрос обеспечения населени нашей страны высококачественными белками.

Возрастающая потребность в белке не может быть удовлетворена только за счет интенсификации сельского хозйства. Одним из перспективных путей получения дополнительного белка явлется метод глубинного культивирования грибного мицелия.

Ценность этого способа получения белка состоит в том, что для его культивирования могут быть использованы практически все растительные отходы, и по прогнозам специалистов, к 2000 году во многих странах мира грибы будут выращивать в таких же колличесвах, как сейчас картофель, что может покрыть значительную часть мирового дефицита белка.

В последние годы в Российской Федерации и за рубежем значительно расширились исследования, направленные на использование культур высших грибов для получения пищевой и кормовой мице-лиальной биомассы.

Выращивание базидиальных грибов можно производить на зерне злаковых, картофеле, свекловичной массе, соке люцерны. В качестве продуцента биомассы могут служить грибы РоХуробиз. По питательности и вкусокым качествам мицелий высших грибов обладает несомненным преимуществом перед многими продуктами растительного происхождения. Для обеспечения гарантий безвредности и обоснования возможности использования нетрадиционных белков Смицелиальной массы) в питании человека необходимо провести медико-биологичесую и гигиеническую оценку этик белков.

Наиболее важным требованием при этом является оптимальный аминокислотный состав, отражающий биологическую ценность традиционных белков.

Важным аспектом исследования является установление безвредности белкового продукта, полученного по оригинальной технологии. Оценку безведности необходимо производить на основе изучения динамики метаболических процессов на нескольких поколениях крыс.

Длительные испытания нового белкового продукта позволят с помощью наиболее адекватных биохимических методов выявить состояние адаптационных систем организма.

ЦЕЛЬ РАБОТЫ: На основе комплексного изучения основных параметрров, характеризующих состояние обменных процессов и анализа изофер-ментного спектра лактатдегидрогеназы, сукцинатдегидрогеназы, изо-цитратдегидрогеназы, глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы в печени и сыворотке крови, обосновать возможность использования грибного мицелия в качестве пищевой добавки.

Для реализации указанной цели поставлены следующие задачи:

1. Изучить состав грибного мицелия.

2. На основе исследований содержания общего белка и соотношения белковых фракций, уровня аминокислот и нуклеиновых кислот в органах и тканях животных в хроническом С 24 мес.) и на шести поколениях в хроническом эксперименте изучить биологическую ценность нетрадиционного белкового продукта.

3. На основе изучения: активности фруктозо-1,6-дифосфаталь до лазы, глюкозо-8-фосфатдегидрогеназы, щелочной фосфотазы, аланинами-нотранферазы и аспартатаминотрансферазы в сыворотке и печени на поколениях крыс определить влияние грибного мицелия на обменные процессы.

4. Изучить изоферментный спектр лактатдегидрогеназы, сукцинатдегидрогеназы, изоцитратдегидрогеназы, глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы в сыворотке крови животных в хроническом С 24 мес.) эксперименте и на шести поколениях, для выявления отдаленных изменений метаболических процессов.

5. Установить оптимальную квоту включения грибного мицелия в качестве пищевого продукта.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА

В результате проведенного исследования изучен химический состав и биологическая ценность нового грибного продукта грибного мицелия, полученного методом глубинного культивирования. Установлена оптимальная квота включения грибного мицелия в состав пищевых продуктов. Впервые изучены особенности метаболических процессов С содержание общего белка и соотношение белковых фракций, уровень аминокислот и нуклеиновых кислот в органах и тканях животных) для оценки биологической ценности нового нетрадиционного белка, полученного из грибного мицелия методом глубинного культивирования.

Впервые использовано для гигиенической оценки нового нетрадиционного белкового продукта изучение изоферментного спектра лактат-дегидрогеназы, сукцинатдегидрогеназы, изоцитратдегидрогеназы, глю-козо-6-фосфатдегидрогеназы, на шести поколениях крыс, что позволяет выявить скрытые отдаленные изменения метаболических процессов.

Показано, что изоферментный спектр в сыворотке крови крыс, которых содержат на рационе при включении оптимальной квоты 25%, не изменяется, но реагирует на увеличение С 50%) или уменьшение С15%) содержания этого белка.

Предложенный комплекс методов, позволяет выявить скрытые отдаленные изменения метаболических процессов, что не дает применение только общепринятых методов.

ТЕОРЕТИЧЕСКАЯ И ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ РАБОТЫ. Используемый в работе комплекс методик может быть рекомендован для оценки новых белковых продуктов.

Полученные результаты послужат обоснованием для проведения следующего этапа работы: клинических испытаний и внедрения грибкового мицелия в питание человека в качестве белковых добавок.

- 7

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Харатян, Тамара Эреклоевна

- 139 -ВЫВОДЫ

1- Грибной мицелий, выращенный на мелассе, по своему химическому составу, уровню белков, витаминов превосходит растительные продукты и приближаются по аминокислотному составу к продуктам животного происхождения.

Аминокислотный состав грибного мицелия свидетельствует о его высокой биологической ценности: лимитирующей аминокислотой является триптофан.

2. Биохимические показатели, характеризующие биологическую ценность белка С содержание общего белка и соотношение белковых фракций, уровень аминокислот и нуклеиновых кислот в органах и тканях животных) свидетельствуют о высокой биологической ценности рационов с включением 25% грибного мицелия.

3. Активность фруктозо-1,6-дифосфатальдолазы, глкжозо-6-фосфат-дегидрогеназы, щелочной фосфатазы, аланинаминотранеферазы и аспар-татаминотрансферазы не изменяется по сравнению с контрольными значениями в сыворотке крови и печени животных при включении 25% грибного мицелия.

Увеличение квоты мицелия до 50% в первом и втором поколениях вызывает перестройку организма на уровне изученных ферментов.

4. Изоферментный спектр лактатдегидрогеназы, сукцинатдегидроге-назы, глюкозо-8-фосфатдегидрогеназы, изоцитратдегидрогеназы в тканях животных, получавших 25% мицелия, не отличается от контроля, что свидетельствует о безвредности данной квоты грибного мицелия: 50%-ное включение грибного мицелия вызывает перестройку изофермен-тного спектра в 1-ом и 2-ом поколениях.

5. Содержание полиненасыщенных жирных кислот, общего холестерина и другие показатели липидного обмена крыс при 25%-ном включении не отличались от контрольных значений.

- 140

Генетические исследования, прведенные на поколениях, не выявили изменений при 25%-ном включении мицелия в рацион животных.

6. На основании проведенных исследований, можно считать оптимальной и безвредной дозой 25% включения мицелия.

7. Для оценки нетрадиционных белковых продуктов можно рекомендовать новый методический подход, включающий изучение изоферментного спектра в сыворотке крови животных, генетические исследования, а также изучение аминокислотного состава тканей и некоторых показателей метаболизма на нескольких поколениях животных. Предложенный комплекс методов позволяет выявить скрытые отдаленные изменения метаболических процессов, что не дает применение только общепринятых методов.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Харатян, Тамара Эреклоевна, Ростов-на-Дону

1. Аджигитов Ф. И., Косиченко Л. П. и др. Частота аббераций кромосомв костном мозге обезьян и их потомства после воздействия афгла-токсином. М. : Медицина, В.1. - 1984, - 150 с.

2. Алимова Е. К., Аствацатурьян А. Т., Рыжков Ю. Д., Шилова Ж. И. Жирнокислотный состав липидов свиней, получавших в кормовом рационе БВК.// Вопросы использования БВК в животноводстве. Новочеркасск, 1975. - С. 34-35.

3. Андриасов А.Н., Левитина Н. Л. Влияние различного количества БВКв рационе на условно-рефлекторную деятельность крыс. Медико-биологические исследования углеводородных дрожжей- -М.: Наука,1972. - С.256-261.

4. Бабицкая В.Г., Стахеев И.В., Плавская А.И. Мицелиальные грибы- продукты белка на целлюлозе.// Микробиология и фитопатология.- 1979. Т. 13. - N2. - С. 118-122.

5. Бабицкая В.Г., Лобянок А. Г. Микроскопические грибы как важныйисточник, кормового и пищевого белка.// Микробиология промышленности. 1976. - N1. - С.25-28.

6. Балаховский С.Д., Балаховский И. С. Методы химического анализакрови. М. : Медицина, 1953. - С. 518.

7. Бариляк И.Р., Козачук С. Ю. Цитогенетическое влияние этанола назародышевые клетки.// Цитология. 1981. - N2. - С. 27-30.- 142

8. Билай В.И., Закордонец Л.А., Коваль Э.В. Гифолеицеты как источник белка. Производство высших съедобных грибов в СССР.

9. Киев: Наукова Думка, 1978. С. 400. 10. Бисько H.A. Высшие съедобные базидиомицеты в поверхностнойи глубинной культуре. Киев: Наукова Думка, 1983. - С. 145.

10. Бонашевская Т. И., Беляева Н. И., Кумпан Н. В., Панасюк Л. В. Морфо-функциональные исследования в гигиене. М.: Медицина, 1984. - 310 с.

11. Бременер С. М. Гигиена питания. М.: Медицина, 1961. - С 400с.

12. Бухало A.C. Высшие съедобные базидиомицеты в чистой культуре.- Киев: Наукова Думка, 1988. С. 143.

13. Бухало А. С. Рост съедобных базидиомицетов в глубинной культуре. //Микология и фитопатология. 1973. - Т. 7. - N4. -С. 349-353.

14. Ветер Я. К. Вивчения динамики росту та позаклитинных монофеномонооксигеназ у деяких видив роду .// Укроботанич журнал. -1983. 40. - N5. - С. 74-76.

15. Вечер А. С. Доклады АН БССР. 1979. - Т. 23. - 9. - С. 855.

16. Вихерт A.M., Жданов B.C., Матова Е. Е., Аптекарь С. Г. Географическая патология атеросклероза. М.: Медицина, 1981. -С. 214.

17. ВОЗ Биохимические исследования могут служить полезным ориентиром для общей оценки состояния отдельных органов и организма в целом. 1981. - N5. - С.14.

18. ВОЗ Существует ли проблема белка? // Хроника ВОЗ. 522.1. С. 13-15.

19. ВОЗ Серия технических докладов. // 1990. N12.

20. Высоцкий В. Г., Яцышина Т. В., Рымаренко Е.М., Мамаева Е.М. Ометодах определения биологической ценности белков.// Мед. реф. журн. 1976. - N6. - С. 24-35.

21. Высоцкий В. Г., Яцышина Т. В., Мамаева Е. Л. К вопросу о терминологии, используемой при определении качества белков.// Вопр. питания. 1977. - N6. - С.3-9.

22. Высоцкий В. Г. Методические принципы медико-биологической оценки пищевого качества новый источников пищевых белков.// Медико-биологическая оценка новых источников пищевых белков. Ростов-на-Дону, 1984. - С. 22-36.

23. Высоцкий В. Г. Использование биомассы микроорганизмов для пищевых целей. М. - Пущино, 1985. - С. 89-96.

24. Гаркави Л.X., Квакина Е.Б., Уколова М.А. Адаптационные реакции и резистентность организма. Ростов-на-Дону, 1990.- Гл. Адаптационные реакции организма. - С.5.

25. Готлиб A.M., Плащина И. Г., Дианова В. Т., Макарченко С. С. и др.

26. Тез.докл. УП Всесоюзной конференции. Новые источники пищевого белка. Тбилиси, 1986. - С.49-50.

27. Дудка И.А., Промышленное культивирование съедобных грибов.

28. Киев: Наукова Думка, 1978. 305 с.

29. Журавоский Г. Н., Корякина Н. И., Буриченко В. К. / М, 1982.10 с. Деп. в ВИНИТИ. 20.11.85, N80.

30. Капич А. Н., Бабицкая В. Г., Стахеев И. В. Базидиомицеты продуценты белка на отходах картофелеперерабатывающей промышленности, сельском хозяйстве и медицине. Минск: Наука и техника, 1979. - С. 33

31. Капланский С. Я. Некоторые проблемы патологии обмена аминокислот. Химические основы процессов жизнедеятельности. -М.: Медицина, 1962. - С. 402.

32. Капланский С.Я., Акопян Ж. И. Некоторые проблемы патологии обмена кислот. // Вопросы медицинской химии. 1964. - N3. -С. 451-456.

33. Киркенштейн А. М. Опыт советской медицины в годы Великой Отечественной войны. М.: Медицина,1948. - 305 с.

34. КремерЮ. Н., Шмидт А. А. Вопросы биохимии белково-витаминногопитания. Рига, 1960. - Г2. - Белковая недостаточность. -С Л 9-21.

35. Кремер Ю. Н. Биохимия белкового питания. Анаболические эффекты пищевого белка и определяющие их факторы. Рига, 1965. -С. 194-195, 187.

36. Курляндский Б. А. К вопросу об адаптации организма при действии химических факторов. // Гигиена и санитария. N6. 1973. - N7. - С. 22-24.

37. Левитан Ж.Ю. Рациональное питание.// Современные медико-биологические методы оценки продуктов моря. Киев: НИИ гигиены питания, 1983. - С.12.

38. Лобач . ., Шабаренко Т.М., Шпарун Т.М. Тез. докл. II Всесоюзной конференции Новые источники пищевого белка. Тбилиси, 1986. - С. 31.

39. Миурер Г. Диск-электрофорез. Теория и практика электрофорезав полиакриламидном геле. М.: Мир, 1971. - 248 с.

40. Медовар Б.Я., Синеок Л. Л. Влияние состава пищевых рационов насодержание свободных аминокислот и показатели кислотноос-новного состояния в сыворотке крови при старении./'/ Вопросы питания. 1992. - N4. - С. 56-58.

41. Микеладзе Г.Г., Шарашенидзе Н.П., Кешеалшвили Н.Г. Использование биомассы микроорганизмов для пищевых целей. Пущино, 1985. - С. 119.

42. Морозова Г. Ф. Промышленное получение мицелия высших грибов.

43. М.: Медицина, 1978. 308 с.- 145

44. Морозова Г. Р., Спешына Д. Н., Макарова М. А. Кинареевская Т. В.,

45. Шакир И. В. // Тез.докладов VI I Всесоюзной конференции. Новые источники пищевого белка. Тбилиси,1986. - С. 122.

46. Нетреба Г. К. Гигиеническая характеристика и обоснование методических подходов к оценке продуктов питания, полученных использованием белков микробиологического синтеза. Рос-товна-Дону. - Автореф. дисс.докт. мед. наук, 1986. - 320 с.

47. Новодержкина Ю. Г. Гигиенические аспекты изучения новых белковых продуктов.// Медико-биологическая оченка новых источников пищевых веществ. 1984, С.13-17.

48. Новиков Ю.Ф., Даниляк Н. И., Сомичаевский В. Д., Коганов М. М.,

49. Новиков H.H.// Тез. докл. VII Всесоюзной конференции. Новые источники пищевого белка. Тбилиси, 1986. - С. 68.

50. Окунев В.Н., Мирошниченко А.И., Рымарь-Щербина Н.Б. Влияниедисбаланса аминокислот на некоторые процессы обмена веществ. // Рациональное питание здорового и больного человека. Киев, 1972. - С. 76-80.

51. Пичхадзе Г.М. Ферментные констелляции печени в крови крыс приразличных условиях питания. М. Автореф. дис. . кан-д.мед. наук, 1973. - 160 с.

52. Петровский К. С. Гигиена питания. М.: Медицина, 1971. - Г. 2.- Белки С. 19-22.

53. Петрунь Н.М., Громашевская Л.Л., Фетисова Т.В. Изоферменты вмедицине. Киев: Здоров'я, 1982. - 210 с.

54. Плащина И. Г., Толстогузов, В. Г., Комяков 0. Г. и др. // Тез.докл. VII Всесоюзной конференции Новые источники пищевого белка. Тбилиси, 1986. - С.17-19.

55. Покровский A.A., Щербакова А.И. Динамика изменений ферментных систем печени в условиях холинобелковой недостаточности.// Архив патол. 1966. - N6. - С. 45-50.- 146

56. Покровский A.A. Актуальные проблемы медицинской энзимологии.- М.: Медицина, 1969. 205 с.

57. Покровский A.A. Биохимические методы исследования в клинике.- М.: Медицина, 1969. 401 с.

58. Покровский А. А., Щербакова А. И., Литвинова Г. С., Путята Е. В.

59. Влияние продуктов сельскохозяйственных животных, получавших в корм БВК, на ферментные спектры печени и крови крыс.//' Медико-биологические исследования углеводородных дрожжей.- М.: Наука, 1972. -С. 369-373.

60. Покровский A.A. Роль биохимии в развитии науки о питании.1. М., 1974.

61. Покровский A.A., Самсонов М.Л. Справочник по диетологии.//

62. Гл. Значение белка в питании здорового и больного человека.- М.6 1981. 410 с.

63. Пупкевич Л.С., Шолохов В.В. // Вопросы питания. 1984.58. Подильчак

64. Росивал Л., Энгст Р., Со ко лай А. Посторонние вещества и пищевые добавки в продуктах М.: Легкая и пищевая промышленность, 1982. - 204 с.

65. Рогожкин С. В. Ресурсы и перспективы получения пищевых белковиз различных источников. М.: Пищевые ресурсы. - В. 2., 1979. - С. 85-86.61. Рысина Т. 3.

66. Рычков Р. С. Продовольственная программа задачи науки. М.:1. Наука, 1983. С. 198.

67. Савицкая Т. Н. Особенности строения брижеечных и траксобронхиальных лимфатических узлов у потомства крыс после воздействия тетрациклина.// Архив анат., гист. и эмбриол. 1984. N11. - С. 66-72.

68. Саноцкий И.В., Уланова И. П. Критерии вредности в гигиене итоксикологии при оценке опасности химических соединений. -М.: Медицина, 1983. С. 254.

69. Стукалов С.В., Чеботарев А. П. Динамика изменения частот цитогенетических эффектов после мутагенного воздействия. /У Бюл. экспер. биол. и мед. 1983. - N11. - С. 91-93.

70. Сааков Б. А., Рыжков Ю. Д., Трапезонцева P.A., Приходъко Е.М.,

71. Новодержкина Ю. Г. Содержание белка и белковых фракций сыворотки крови у животных, получавших рационы с БВК.// Вопросы использования БВК в животноводстве. Новечеркасск, 1967. - С. 29-33.

72. Москаленко Е.П. Динамика коклюша. Методические рекомендациидля студентов. Ростов-на-Дону, 1984. - 410 с.

73. Тиунов Л. А. Структурные основы адаптации и компенсации нарушенных функций. М.: Медицина, 1987. - 410 с.

74. Товарницкий В. И., Валуйская Е. Н. в модификации В. А. Анапоньцев, В.Р.Обухова. Наставление по применению реактивов для определения активности фермента фруктозо-1,6-дифосфа-тальдолазн.// Лаб.дело. 6. 7. - 1965.,

75. Тодоров И. Клинические лабораторные методы исследования в педиатрии. София, 1961. - 408 с.

76. Топарская В. Н. Физиология и патология углеводного, липидногои белкового обмена. М.: Медицина, 1987. - 240 с.

77. Тутельян В.А., Кравченко Л. В. Микротоксины: Медицинские ибиологические аспекты. М.: Медицина, 1985. - 250 с .

78. Тутельян В. А. Изучение метаболизма, фармакокинетики и механизма действия ксенобиотиков: значения для оценки , безопасности пиши.// Вести. АМН СССР. 1986. - N11. - С. 8-14.- 148

79. Трахтенберг И.М., Тычинин В. А. К общебиологическим представлениям об адаптации, компенсации и привыканию в современной профилактической токсикологии. // Гигиена и санитария. -1977. N1. - С. 69-72.

80. Черотченко Ю. П., Стерины грибов из сем. и их использование всистематике. Автореф. дис. канд. биол. наук. - .П.,1970. 22 с.

81. Черников М.П./У Вопросы питания. 1986. - N1. - С. 42-44.

82. Черников М. П. Протеолиз и биологическая ценность белков.

83. М.: Медицина, 1980. С. 162.

84. Шатерников Б.А., Высоцкий В. Г. Проблема белка в питании и основные направления ее дальнейшей разработки.// Вопросы питания. 1980. - N5. - С. 24-32.

85. Шатерников В.А. Теоретические и клинические аспекты науки опитании . T.I - М., 1980& - С. 134.

86. Шатерников В.А., Тутельян В.А., Аксюк И.Н., Градусов Ю.Н.,

87. Шатерников В.А., Уголев A.M. Эволюция пищеварения и принципыэволюции функций. Элементы современного функционализма. -М.: Наука, 1985. С. 3, 75-76.

88. Шатерников В. А., Ников П. С.

89. Askar A. Faba Beans / vicia Fava L./and their role in humandiet/ Food a.nutr.Bull. 1986. - Vol.8n N3. - p. 15-24.

90. Anstall H., Trujillo L. Determination of free fatty acid inplasma by a colorimetic procedure: an apptaisal of the method and comparison with other technics-Clin. ehem., 1965,8,741.

91. Albanese A., Huggans R., Hide P., Orbo 0. Protein reguirementof old ade Ceridti Geriatices, 1956, 7C. 109-112.

92. Blieberg-Daniel F. Relaions entre les indicatewrsbiochimigues de e etat nutritionnel et les piroteines de laphas inflammatoire / Cah Nutr.Diet 1990 - Vol.25 N4. -p. 237.

93. Bodansky A. L. The determination of acid phosphotase activity.-Biol.ehem., 1933, N101, p.93-97.

94. Dancombe W. The colormetrie determination of longchain bathyacids in the 0,05-0,5 mmol range. Biochern. J., 1963,88,7.

95. Decker C. D., Conley C. C., Richert 5. H. / European Meeting of

96. Meat Research Workers 32-nd Proceedings. Genta, 1986. -p. 333-336.

97. Eggum B. 0. Blood ora Neasuremend as a Technique for assessing

98. Protein Ovrolity / Brit. Q Nutr, 1970. C. 983-986

99. Edelman J., Fewell A., Solomons G.L. / Nut2. Abstr. Rev. 1983.- Vol.53 N6, p.471-480.

100. Entnenman C. The preparation of tissue lipid extracts. T.Aweroil chem. Soc.,1961,38.10,-534.

101. FA0, traditional and njn- traditional foods/ FA0 Food and

102. Nutrition Ser N2. Rome,1981.

103. Fishman W. H. Cancer Bull. 1980, v32, p. 45-47.- 150

104. Folch T., Lees M., Sloane-standley G. A. A simple metod forthe isolation and purification of total lipides from animal tisues. Q. Biol. Chem. ,226, 1,497.1957.

105. Freer S. N., Detroy R. W. Biological delignification of 14 c.lal-led lignocelluloses by baidiomycet.es: degradation and Solubilizotion of the lignin and cellulose components. Ylid. N6 1982.-74 p. 943-951.

106. Hages M., Pietrai R. K. /Eu.-1987. Vol.3.-p. 74.

107. Hanusova M. Ymfloence of some nitrogen ofn the growth of

108. Cladosporium fulvum Cooke in a liquid medium.-Ochr. rostl. 1977. -N13. -P. 13-18.

109. Hambraeus L. Naturally occurring toxicats in food / Adverseeffectsof foods/ Eds E. E.Yelliffe, Newjork-London: plenum Press. -1982. -Nl. -P. 13-36.

110. Hambralus L. Naturally occurring toxicants in food./ EdsE.

111. F. Jell iff e Lei life D. B. Newjork-London: Plenum Press.1982.-Nl.-P. 13-36.

112. Hawksworth D. L., Sutton B.C., Ainsworth G. C. Ainsworth et

113. Bisbys dictionary of the fungi/including lichens/.-7-the ed.-kew; Surrey:Commonwealth Mycol. Jnst:1983. P.445.

114. Hlghley, Measurement of cellulose activity in brown andwhiterot fungion dyed cellulose. Mater und Orgaism. N31983. P. 167-170.

115. Henley K.S., Schmidtw Enzymes in serum, their use indiagnosis. Basel: Springfield. Thomas 1966.

116. Horton E. S./Ibid.-1983.-Vol. 38.-N6.-P. 972-977.

117. Koji J. et al./Agr. a biol. Chem.-1981.-Vol. 45 P. 258-259.

118. Liebman., Chopin L. F., Cartert E. et al./Hypertension.-1986.1. Vol. 8.-P. 843-850.

119. Maho V., Groscolas R. Modalitees et limites d utilisationdes reseroe energetigues au cocors die jeunplonge/ Cah Natur Diet.-1990.-Vol. 25 N3.-181-182.

120. Maskensie R., Blohm J., Auxir E., Luther A. Rapidco1ormetriemicromethod for free fatty acids.-J. lipid. Rer., 1967, 8,-P. 589.

121. Menden E. Die Bedeatung der Ernährung fur die1.benserwattung /Ernährung. -1990. -Bd. 14N7-8. -5. 403-407.

122. Nanji A.A. Decreased activity of commonly measured serumenzymes Causes and clinical significance / Amer J. med. Technol.1983.-Vol.29,N4.-P.241-245.

123. Nerud F., Zouchova Z., Musilek V. Lipolytic activity insubmerged cultures of some woddestrooooying

124. Bas i di omycetes/ Ces. mvko1. -1982. -36.N1.-P.45-46.

125. Noltman E.A., Mahowald T.A., Cubi S.A. Pef 1962.-C.237.

126. Pellet P.L. Protein reguirements in humans / Amer J.clin.

127. Nutr. 1990. -Vol. 51, N5. -P. 723-737.

128. Pietrzir K./Vitamin Deficiency-Aetiology and Terminology/

129. Ed. F. Fi ndanza.-Perugia, 1986.

130. Rolz C. Ann. Rep. Fer.-ment. Proc.-1984.-Vol.7.-P.213-356.

131. Rosenberg H., Culie R., Erkezt H. Lysine and thrionine sup1ementation of rice. J.Nutr, 1958, 69, 217.

132. Sauberlich H. E. / Surv Svnthe. Path.Res.-1983.-Vol.2.1. P. 120-133

133. Waggle, Kolar C. W. Types of soy protein products/ Soy proteinand human nutrition/ Eds H. L. Wilicke.,-N1 Acad. Press,1979.-P. 19-52.

134. Walike B.C., Walike J.W. Relative lactose intolerance/J.Amer.med. Ass. -1977. -Vol. 238, N9. -P. 948-951.