Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Анализ генетических причин развития врождённой расщелины губы и/или нёба

ВАК РФ 03.02.07, Генетика

Автореферат диссертации по теме "Анализ генетических причин развития врождённой расщелины губы и/или нёба"

На правах рукописи

Мещерякова Татьяна Ивановна

АНАЛИЗ ГЕНЕТИЧЕСКИХ ПРИЧИН РАЗВИТИЯ ВРОЖДЁННОЙ РАСЩЕЛИНЫ ГУБЫ И/ИЛИ НЁБА

03.02.07 - генетика

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени кандидата медицинских наук

¿сЕнт

005561815

Москва-2015

005561815

Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном научном учреждении «Медико-генетический научный центр» (ФГБНУ «МГНЦ») и Государственном бюджетном учреждении здравоохранения города Москвы «Научно-практический центр медицинской помощи детям с пороками развития черепно-лицевой области и врождёнными заболеваниями нервной системы Департамента здравоохранения города Москвы» (ГБУЗ «НПЦ мед. помощи детям»).

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор Петрнн Александр Николаевич Официальные оппоненты:

Асанов Алий Юрьевич - доктор медицинских наук, профессор, Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Первый Московский государственный медицинский университет имени И.М. Сеченова» МЗ РФ, заведующий кафедрой медицинской генетики

Демикова Наталия Сергеевна - доктор медицинских наук, Государственное бюджетное образовательное учреждение дополнительного профессионального образования «Российская медицинская академия последипломного образования» МЗ РФ, профессор кафедры медицинской генетики с курсом пренатальной диагностики

Ведущая организация:

Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Белгородский государственный национальный исследовательский университет» (г. Белгород).

Защита состоится 26 октября 2015г. в 14-00 часов на заседании Диссертационного ученого совета Д 001.016.01 при Федеральном государственном бюджетном научном учреждении «Медико-генетический научный центр» (115478, Москва, ул. Москворечье, д.1; www.med-gen.ru).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБНУ «Медико-генетический научный центр» по адресу: 115478, Москва, ул. Москворечье, д.1.

Автореферат разослан «¿¿У» ¿^¿¿-2015 г.

Ученый секретарь Диссертационного совета Д 001.016.01 по защите диссертаций на соискание ученой

степени кандидата наук, на соискание ученой степени доктора наук, доктор медицинских наук, профессор

Зинченко Рена Абульфазовна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность исследования

Среди всех пороков развития у детей, врождённая расщелина губы и/или нёба (ВРГ и/или Н) занимает одно из первых мест по частоте встречаемости (Чуйкин С.В.и др., 2005). Средняя частота порока составляет 0,5 - 1,5 случая на 1000 новорожденных детей (Демикова Н.С., 2011).

Дети с ВРГ и/или Н требуют постоянного педиатрического наблюдения, комплексных оперативных и реабилитационных мероприятий. Почти 20-30% случаев ВРГ и/или Н встречаются в сочетании с другими врождёнными аномалиями развития (Rustemeyer J. et al., 2000). Нередко ВРГ и/или Н представлены моногенными состояниями с высоким риском повторения (Oxford Medical Databases), а также хромосомными заболеваниями.

Существенной проблемой является установление точного нозологического диагноза. ВРГ и/или Н представляет собой сложную по клиническому и генетическому составу группу заболеваний, включающую синдромальные, моногенные, хромосомные, мультифакториальные и тератогенные формы (Каспарова Н.Н. и др., 1981; Давыдов Б.Н., 2006). В большинстве случаев изолированная ВРГ и/или Н имеет мультифакториальную природу, что подразумевает одновременное воздействие генетических факторов и внешнесредовых воздействий (Лазюк Г.И. и др., 1991; Демикова Н.С., 2005; Жученко Л.А. и др., 2008; Бочков Н.П. и др., 2011).

Современные представления о роли тератогенных факторов в процессах формирования врождённых пороков развития (ВПР) основаны на том, что эффекты внешнесредового воздействия чаще всего реализуются в результате комбинированного влияния нескольких факторов (Лазюк Г.И. и др., 1991). Возможно, что организм матери, во-первых, должен быть генетически восприимчив к действию повреждающих внешнесредовых факторов, во-вторых, развивающийся плод по разному реагирует на внешнесредовые воздействия и, в-третьих, сам агент обладает повреждающим эффектом тогда, когда он действует в соответствующей дозе и в критический момент эмбриогенеза (Шайхутдинова Д.И., 2007; Чуйкин С.В. и др., 2010). Доказано негативное влияние на развитие плода неполноценного и несбалансированного питания, гормональных нарушений, физических и химических факторов, ядов, ряда лекарственных веществ и биологических агентов (вирусы, бактерии и их токсины, простейшие).

В последние годы большое внимание уделяют анализу полиморфизмов генов, как факторов генетической предрасположенности к развитию данной патологии. В разных популяциях получены достоверные ассоциации

полиморфизмов генов: IRF6, АВСВ1, MTHFR, ADH1A, ADH1B, ADH1C, MSX1, NAT2, CYP1A1, PVRL1 с повышенным риском развития ВРГ и/или Н (Jugessur A. et al., 2011; Lourenco da Silva A. et al., 2006; Murthy J. et al., 2009). Однако, для популяций России,, эти данные получены на относительно небольшой выборке пациентов (Назаренко М.С. и др. 2011; Шульженко В.И. и др., 2010).

По данным мониторинга врождённых пороков развития в некоторых регионах Российской Федерации отмечается рост частоты ВРГ и/или Н, что может быть обусловлено истинным увеличением случаев порока в популяции (Демикова Н.С., 2011).

Современные методы диагностики позволяют изучать факторы генетической предрасположенности, участвующие в морфогенезе губы и нёба. Именно это служит основой для разработки методов профилактики ВРГ и/или Н в семьях с отягощенным анамнезом.

Цель исследования: изучить нозологическую структуру ВРГ и/или Н и оценить роль полиморфизмов генов MTHFR, IRF6, ADH1C, WNT3A, WNT11, CYP1A1, NAT2, АВСВ1 в развитии ВРГ и/или Н мультифакториального генеза.

Задачи исследования:

1. Определить нозологическую структуру ВРГ и/или Н в выборке больных с учетом этиологии заболевания.

2. Исследовать полиморфные варианты генов MTHFR (rsl 801133), IRF6 (rs2013162), ADH1C (rs698, rsl693482, rs2241894), WNT3A (rsl745420), WNT11 (rsl533767), CYP1A1 (rs4646421), NAT2 (rs 1799930), ABCB1 (rsl045642) и провести сравнительный анализ частот генотипов и аллелей этих генов у детей с изолированной ВРГ и/или Нив контрольной группе.

3. Изучить межгенные взаимодействия генов MTHFR (rsl801133), IRF6 (rs2Ó13162), ADH1C (rs698, rsl693482, rs2241894), WNT3A (rsl745420), WNT11 (rsl533767), CYP1A1 (rs4646421), NAT2 (rsl799930), ABCBI (rsl045642) и определить их роль в формировании риска развития ВРГ и/или Н.

4. Сформулировать научно обоснованные положения для прогнозирования вероятности рождения здоровых детей в семьях с отягощенным анамнезом по ВРГ и/или Н.

Научная новизна

Проведено исследование нозологической структуры лицевой расщелины с выделением мультифакториальных, хромосомных и моногенных форм. Диагностирован и описан фенотип с редкой формой несбалансированной хромосомной транслокации. Впервые в России среди больных с ВРГ и/или Н описана группа пациентов с бранхио-окуло-фациальным синдромом (BOFS). Для

BOFS разработана ДНК-диагностика, определена локализация горячих точек мутаций (в экзоне 4 гена TFAP2Á) и выявлены две ранее неописанные мутации в гене TFAP2A. Создан Банк образцов ДНК больных с ВРГ и/или Н. Впервые в России у детей с изолированной ВРГ и/или Н проведен комплексный молекулярно-генетический анализ 10 полиморфизмов 8 генов MTHFR (rsl801133), IRF6 (rs2013162), ADH1C (rs698, rsl693482, rs2241894), WNT3A (rs 1745420), WNTU (rsl533767), CYP1A1 (rs4646421), NAT2 (rsl799930), ABCB1 (rsl045642). По результатам молекулярно-генетического исследования установлена роль полиморфизмов генов MTHFR, IRF6, ADH1C, WNT3A, WNT11, CYP1A1, NAT2, АВСВ1 в формировании риска развития ВРГ и/или Н. Определены генетические маркеры повышенного риска развития ВРГ с/без Н.

Научная и практическая значимость По результатам молекулярно-генетического исследования установлена роль полиморфных вариантов генов MTHFR, IRF6, ADH1C, WNT3A, WNT11, CYP1A1, NAT2, АВСВ1 в этиологии изолированной ВРГ и/или Н, что расширяет научные представления о молекулярных механизмах тератогенеза на ранних этапах эмбриогенеза человека. Результаты исследования позволят более точно прогнозировать вероятность рождения здоровых детей в семьях с отягощенным анамнезом по исследованной патологии и могут быть использованы при медико-генетическом консультировании больных с ВРГ и/или Н. Усовершенствованный алгоритм обследования детей с лицевой расщелиной оказывает врачам помощь в плане верификации точного нозологического диагноза. Материалы работы могут быть приняты для создания научно-практических и методических рекомендаций в процессе обучения врачей-генетиков, стоматологов, челюстно-лицевых хирургов, педиатров.

Основные положения, выносимые на защиту

1.В нозологической структуре ВРГ и/или Н среди обследованных детей ведущее место занимают пороки развития мультифакториального генеза (73,9%).

2. Для бранхио-окуло-фациапьного синдрома на выборке российских больных определена локализация горячих точек мутаций - экзон 4 гена TFAP2A.

3. Анализ ассоциаций 10 полиморфных вариантов восьми генов MTHFR (rsl 801133), IRF6 (rs2013162), ADH1C (rs698, rsl693482, rs2241894), WNT3A (rs 1745420), WNT11 (rsl533767), CYP1A1 (rs 4646421), NAT2 (rs 1799930) и ABCB1 (rsl 045642) установил, что аллель T гена IRF6 (rs2013162) является маркером повышенного риска развития ВРГ с/без Н.

4. При анализе межгенных взаимодействий показано, что двухлокусная модель полиморфных вариантов генов - rs2013162 IRF6 (G/T) х rsl045642 АВСВ1

(С/Т) оказывает синергический эффект и является предрасполагающей к развитию ВРГ с/без Н.

Степень достоверности результатов

Основные положения диссертационной работы основаны на материалах первичной документации и полностью им соответствуют. Высокая степень достоверности и обоснованности выводов, основных научных положений диссертации определяются достаточно большим объемом материала. Результаты, полученные автором в ходе анализа, свидетельствуют о решении поставленных задач и соответствуют данным зарубежной литературы. Проведенный статистический анализ подтверждает достоверность сделанных выводов.

Апробация работы

Материалы диссертационного исследования доложены на IX Международной научно-практической конференции «Современные медицинские технологии в клинической генетике и детской эпилептологии» (Москва, 2013 г.), IX Ежегодном конгрессе специалистов перинатальной медицины (Москва,

2014 г.), Третьем Российском Конгрессе с международным участием «Молекулярные основы клинической медицины - возможное и реальное» (Санкт-Петербург, 2015 г.), конференции «Пренатальная диагностика пороков развития ЦНС, черепно-лицевой области и солидных опухолей в городе Москве» (Москва,

2015 г.).

Результаты исследования внедрены в работу ГБУЗ «Научно-практический центр медицинской помощи детям с пороками развития черепно-лицевой области и врожденными заболеваниями нервной системы Департамента здравоохранения города Москвы».

Соответствие диссертации паспорту научной специальности

В соответствии с формулой специальности «03.02.07 - Генетика (медицинские науки)», охватывающей явления изменчивости и наследственности, закономерности процессов хранения, передачи и реализации генетической информации на молекулярном, клеточном, организменном и популяционном уровнях в области «Генетика человека. Медицинская генетика. Наследственные болезни. Генотоксикология. Генотерапия».

Личный вклад автора в проведение исследования

Диссертационная работа представляет собой самостоятельный труд автора. Автор непосредственно участвовала в клиническом осмотре больных и заборе биологического материала, заполняла медицинскую документацию, планировала обследования. Автором лично разработана генетическая карта семьи для стандартизации обследования и учета больных с ВРГ и/или Н. Автором

проанализирована современная отечественная и зарубежная литература по теме диссертации, выполнена статистическая обработка полученных данных, сформулированы результаты и выводы.

Публикации

Основные результаты по материалам диссертационной работы изложены в 10 опубликованных работах, из них 3 - в рецензируемых изданиях, рекомендованных ВАК МОН РФ, 5 работ в материалах конгрессов и конференций в РФ и 2 - за рубежом.

Структура и объём диссертации

Диссертация состоит из введения, обзора литературы (глава 1), двух глав собственных исследований (глава 2 и 3), обсуждения результатов, выводов и практических рекомендаций, содержит 1 приложение. Работа изложена на 117 страницах машинописного текста, иллюстрирована 13 рисунками. Цифровой материал представлен в 14 таблицах, список литературы содержит 192 ссылки, включающих 49 источников отечественной и 143 источника зарубежной литературы.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Характеристика клинических групп

Объектом для данного исследования явились дети с ВРГ и/или Н. Всего за период с 2010 года по 2014 год медико-генетическое обследование проведено у 494 детей с ВРГ и/или Н в возрасте от 4 дней до 18 лет. Среди обследованных пациентов 318 (64,3%) мальчиков и 176 (35,7%) девочек. Вся информация о больных вносилась в специально составленную генетическую карту семьи.

В ходе проведенного клинического обследования сформирована группа детей с изолированной ВРГ и/или Н (без сочетанной патологии со стороны других органов и систем), состоящая из 117 человек (77 мальчиков и 40 девочек), русских, которые родились и проживали в городе Москве. С целью изучения ассоциаций полиморфных вариантов генов-кандидатов MTHFR, IRF6, ADH1C, WNT3A, WNT11, CYP1A1, NAT2, АВСВ1 с врождённой расщелиной губы и/или нёба в данной группе детей проведено молекулярно-генетическое исследование.

Для сравнения распределения частот аллелей и генотипов изучаемых полиморфизмов сформирована контрольная группа, которая состояла из 82 здоровых детей в возрасте от 5 до 10 лет, русских жителей города Москвы. По этническому составу и возрасту контрольная группа соответствовала анализируемой выборке детей с ВРГ и/или Н. Группу здоровых детей составили 45 мальчиков и 37 девочек. Критериями отбора в контрольную группу являлись нормальное

практическое здоровье детей на момент обследования и отсутствие родственников с ВРГ и/или Н.

Все клинические, цитогенетические и молекулярно-генетические исследования проводились с письменного информированного согласия законных представителей пробандов на использование материалов при выполнении лечебно-диагностических мероприятий, связанных с основным заболеванием. Настоящее исследование одобрено этическим комитетом ФГБНУ «МГНЦ».

Методы исследования.

Клинико-генеалогический анализ. Путем опроса родителей больного определяли состояние здоровья пробанда и его родственников. При необходимости проводили дополнительное клиническое обследование членов семьи. Родословную изображали графически в генетической карте семьи больного с ВРГ и/или Н, с указанием всех случаев ВРГ и/или Н среди родственников. На основании полученных данных определяли наличие наследственной природы порока развития и устанавливали тип его наследования.

Синдромологический анализ. С целью выявления устойчивых сочетаний признаков наследственного заболевания проводился обобщенный анализ фенотипа больных. Для установления нозологического диагноза заболевания у детей с множественными ВПР (в составе которых выявлена ВРГ и/или Н) использовались справочная литература, информационно-справочные и диагностические программы, электронные информационно-поисковые системы (Козлова С.И., 2007; Кеннет Л. Джонс, 2011; Оксфордская медицинская база данных (Oxford Medical Database); белорусская программа «СинДиаг»; Online Mendelian Inheritance in Man - OMIM (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/omim)).

Цитогенетическое исследование. С целью верификации диагноза у детей с множественными ВПР (в составе которых выявлена ВРГ и/или Н), а также у пробандов с изолированной ВРГ и/или Н, имеющих родственников с аналогичной патологией, проводилось цитогенетическое исследование. Цитогенетические препараты получали из лимфоцитов периферической крови, культивированных в течение 72 часов в соответствии с общепринятой методикой. Для дифференциального окрашивания хромосом использовали GTG-метод (Захаров А.Ф. и др., 1982). Заключение о кариотипе составляли в соответствии с правилами Международной номенклатуры хромосом ISCN - 2005 (ISCN (2005), 2005).

Молекулярно-цитогенетическое исследование. Для идентификации хромосомного дисбаланса проводилось молекулярно-цитогенетическое исследование в лаборатории молекулярной патологии «Геномед» (Москва) на оборудовании компании Afiymetrix (США) с использованием SNP-

олигонуклеотидных гибридизационных чипов (микроматриц) CytoScan™ HD (Affymetrix, США).

Молекулярно-генетическое исследование полиморфизмов генов MTHFR, IRF6, ADH1C, WNT3A, WNT11, CYP1A1, NAT2, АВСВ1. В качестве биологического материала для молекулярно-генетического исследования использовали слюну и кровь. Выделение геномной ДНК из слюны и цельнозамороженной крови осуществляли методом фенольно-хлороформной экстракции (Вдовиченко К.К. и др., 2003). В рамках работы проведено генотипирование 10 полиморфизмов (SNP-маркеры) 8 генов: MTHFR (rsl801133), IRF6 (rs2013162), ADH1C (rs698, rsl693482, rs2241894), WNT3A (rsl745420), WNT11 (rsl533767), CYP1A1 (rs4646421), NAT2 (rsl799930), ABCB1 (rsl045642).

Анализ локуса гена IRF6 (rs2013162) осуществляли методом полимеразной цепной реакции (ПЦР). ПЦР для амплификации анализируемой последовательности экзона 5 гена IRF6 проводили в аппарате Терцик (ДНК-технология) с использованием праймеров, покрывающих экзон 5 гена IRF6 с прилежащими участками интронов. С целью оптимизации ПЦР для праймеров рассчитан оптимальный температурно-временной режим отжига и подобрана соответствующая концентрация MgCl2 (Маркова С.И., 2007).

ПЦР в режиме реального времени (Real-time ПЦР) для амплификации анализируемых последовательностей генов: MTHFR (rsl801133), ADH1C (rs698, rsl 693482, rs2241894), WNT3A (rsl745420), WNT11 (rsl533767), CYP1A1 (rs4646421), NAT2 (rsl799930), ABCB1 (rsl045642) проводили на анализаторе Gene Amp PCR System 9700 (Applied Biosystems) с использованием набора праймеров и зондов Applied Biosystems "Tag Man SNP Genotyping Assays".

Молекулярно-геиетическое исследование генов моногенных заболеваний. С целью подтверждения диагноза моногенно наследуемых заболеваний (бранхио-окуло-фациальный синдром и синдром Ван дер Вуде) проводилось молекулярно-генетическое исследование у 10 человек из 7-ми семей. Методом прямого секвенирования проанализирована нуклеотидная последовательность кодирующей области гена IRF6 (экзоны 3,4,5,6,7,8,9) и гена TFAP2A.

Выделение ДНК из лейкоцитов периферической крови проводилось по стандартной методике, рекомендованной производителем Wizard® Genomic DNA PurificationKit (URL: http://worldwide.promega.com). Для амплификации кодирующей последовательности 7-ми экзонов гена TFAP2A и фланкирующих интронных областей разработан дизайн праймеров. Анализ полученных нуклеотидных последовательностей проводили с использованием общедоступных программ пакета BLAST (URL: http://www.wip.ncbi.nlm.nih.gov/gorf/gorf.html; URL: http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi).

Статистическая обработка результатов. Анализ данных проводили по стандартным статистическим методикам. Соответствие распределения наблюдаемых частот генотипов исследуемых генов, теоретически ожидаемого по равновесию Харди-Вайнберга, проверяли с использованием критерия %2 (Реброва О.Ю., 2002). Вычисление проводили с помощью калькулятора для расчета статистики в исследованиях «случай-контроль» на сайте «Ген Эксперт» (Россия, http://gen-exp.ru/calculator_or.php).

Анализ межгенных взаимодействий проводили с помощью программного обеспечения MDR (Multifactor Dimensionality Reduction (mdr-2.0_beta_8.3; http://www.multifactordimensionalityreduction.org/)) и его модифицированной версии GMDR (Generalized Multifactor Dimensionality Reduction,

(www.healthsystem.virginia.edu/internet/addictiohgenomics/Software)).

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ Клиническая характеристика врождённой расщелины губы и/или нёба

При клиническом осмотре 494 больных установлено, что у 366 (74,1%) пациентов врождённая расщелина губы и/или нёба являлась изолированным ВПР, а у 128 (25,9%) больных, помимо ВРГ и/или Н, присутствовали и другие врождённые аномалии развития, что соответствовало множественным ВПР.

В ходе исследования выявлено, что структура лицевой расщелины в группе изолированного порока развития и в группе расщелин, сочетающихся с другими аномалиями, различается. Так, в группе изолированной лицевой расщелины самую большую долю составила расщелина губы и нёба (66,9% случаев), затем следовала расщелина нёба (19,9%). В группе множественных ВПР, наоборот, чаще встречалась расщелина нёба (66,4% случаев), а второй по частоте оказалась ВРГ и Н (28,9%). И в той, и в другой группах минимальную долю составили случаи ВРГ (табл. 1).

Таблица 1. Клинические формы врождённой расщелины губы и/или нёба

Клиническая форма изолированный ВПР п = 366 множественные ВПР п = 128

кол-во пациентов % кол-во пациентов %

Расщелина нёба 73 19,9 85 66,4

Расщелина губы 48 13,1 6 4,7

Расщелина губы и нёба 245 66,9 37 28,9

Среди всех случаев ВРГ и Н и случаев ВРГ преобладала изолированная форма порока развития - 86,9% и 88,9% соответственно. Напротив, среди случаев расщелины нёба - изолированная форма составила 46,2% (рис. 1).

С точки зрения этиологии и эмбриогенеза ВРГ и/или Н подразделяют на две группы: первая группа - расщелина нёба (порок развития вторичного нёба); и вторая группа - расщелина губы с или без расщелины нёба (порок развития первичного нёба). В нашем наблюдении среди пациентов с изолированной ВРГ и/или Н преобладала группа детей, имеющих расщелину губы с или без расщелины нёба - 292 (80%) случая, расщелина нёба встречалась в 73 (20%) случаях. Таким образом, в рассматриваемой выборке изолированная ВРГ с/без Н встречалась в 4 раза чаще, чем изолированная ВРН.

ВРН ВРГ ВРГ и н

Рисунок 1. Соотношение случаев изолированной формы лицевой расщелины и случаев ВРГ и/или Н в составе множественных ВПР (%).

При сравнении распределения клинических форм ВРГ и/или Н среди мальчиков и девочек выявлено, что у девочек чаще наблюдалась изолированная расщелина нёба, которая составила - 39 случаев (53,4%), у мальчиков соответственно 34 случая (46,6%), то есть такая клиническая форма встречается у представительниц женского пола чаще, чем у представителей мужского, что соответствует известному распределению данного порока по полу (Gundlach К.К. et al., 2006; Genisca А.Е. et al„ 2009; Dixon M.J. et al., 2011). Распределение клинических форм ВРГ и/или Н с учетом половой принадлежности представлено на рис. 2.

С другой стороны, среди мальчиков превалировала врождённая расщелина губы с или без расщелины нёба, что наблюдалось в 199 случаях. У девочек данные формы расщелины наблюдались в 94 случаях. Таким образом, как изолированная расщелина губы, так и изолированная расщелина губы и нёба у представителей мужского пола встречаются в 2 раза чаще, чем у девочек, что также соответствует

распределению этого порока в зависимости от пола пробанда (Gundlach К.К. et al., 2006; Genisca А.Е. et al., 2009; Dixon M.J. et al., 2011).

Рисунок 2. Распределение клинических форм ВРГ и/или H с учетом половой принадлежности (%).

Следовательно, среди обследованных детей с ВРГ и/или H превалировала группа пациентов мужского пола с изолированной расщелиной губы с/без нёба. Множественные ВПР (в составе которых выявлена ВРГ и/или Н) присутствовали у 25,9% больных, причем в данной группе детей случаев расщелины нёба оказалось в 3 раза больше, чем в группе детей с изолированной формой порока развития.

Спектр и характеристика хромосомных синдромов с ВРГ и/или H

У 128 пациентов, помимо ВРГ и/или Н, также диагностированы другие пороки развития (врожденные пороки сердца, пороки развития глаз, почек, опорно-двигательного аппарата, половых органов и др.) и им установлен диагноз множественные ВПР.

В группе больных с множественными ВПР (в составе которых выявлена ВРГ и/или Н) и детей с изолированной ВРГ и/или Н, имеющих родственников с аналогичной патологией, проведено цитогенетическое исследование с целью исключения хромосомных аномалий. По результатам цитогенетического анализа у 155 больных установлено, что 144 человека имели нормальный кариотип и 9 (1,8% от всей выборки) - аномальный кариотип. Причем все хромосомные аномалии диагностированы в группе детей с множественными ВПР (в составе которых выявлена ВРГ и/или Н). Спектр хромосомной патологии представлен в таблице 2.

Таким образом, в группе обследованных детей с ВРГ и/или H хромосомная патология оказалась обусловлена анеуплоидиями и аберрациями хромосом. В том числе выявлено 2 случая с численными хромосомными нарушениями (трисомии по 13 и 21 парам хромосом) и 7 случаев со структурными хромосомными перестройками, вовлекающими хромосомы 1, 4, 5, 9, 13 и 22. Среди лицевых

расщелин, связанных с хромосомными аномалиями, ВРН встречалась в 7 (77,8%) случаях, а ВРГ и Н - в 2 (22,2%) случаях.

Таблица 2. Спектр хромосомной патологии в обследованной выборке больных с врождённой расщелиной губы и/или нёба

Число Частота (%)

Вид хромосомной патологии, кариотип пациентов (абс.), n=9 синдрома в выборке п=494

Синдром Дауна (47, XX, +21) 1 0,2

Синдром Патау (47, XX, +13) 1 0,2

Синдром Вольфа Хиршхорна, делеция короткого плеча 4р (46 XX, del (4)(р15.3)) 1 0,2

Синдром Лежена, делеция короткого плеча 5р (46, XX, del(5)(pl4)) 1 0,2

Синдром делеции 22ql 1.2 (arr 22q 11.21 (18,916,842-21,465,659)х 1) 3 0,6

46, XX, der(9)t( 1 ;9)(q32.3;p22.2) 1 0,2

46, XX, add(13)(pl 1) 1 0,2

Спектр и характеристика моногенных синдромов с ВРГ и/или Н

По результатам клинико-генеалогического, синдромологического анализа и дополнительных клинических исследований у 65 детей (13,2%) с множественными ВПР, включающих ВРГ и/или Н, и имеющих нормальный кариотип, диагностировано 25 моногенных синдромов. У 45 пациентов (9,1%) установлен диагноз синдром Пьера Робена, который сочетает в себе триаду симптомов: микрогения, глоссоптоз и расщелина нёба. У 3 человек (0,6%) ВРГ и/или Н являлась компонентом тератогенных синдромов: АРАМ-комплекс и алкогольный фетальный синдром; у 6 пациентов (1,2%) - имели место неклассифицированные множественные ВПР. В одном случае (0,2%) пациенту с изолированной расщелиной губы и нёба установлен клинический диагноз синдром Ван дер Вуде. Нозологический спектр заболеваний, в состав которых входила ВРГ и/или Н, представлен в таблице 3.

Среди моногенных заболеваний ведущее место занимали синдромы с АД типом наследования (19 нозологий). Синдромы с АР типом наследования представлены 2-мя нозологическими формами, а с Х-сцепленным - 4-мя нозологическими формами.

Семейные случаи заболевания, сопровождающегося ВРГ и/или Н, встречались в 17 семьях. Следует отметить, что среди 50 семей с заболеванием, наследующимся по АД типу, в 38 (76%) семьях выявлен лишь один пораженный

ребенок, а родители не имели признаков аналогичной патологии, что указывает на спорадический характер патологии.

Таблица 3. Нозологический спектр заболеваний, включающих ВРГ и/или Н

синдром OMIM тип наел. кол-во пациентов п=120 семейные случаи (кол-во семей)

Аномалад Пьера Робена 261800 не известен 45 2

Краниосиностозы: - с. Апера - с. Крузона - с. Пфайффера - с. Сетре-Хотцена #101200 #123500 #101600 #101400 АД 9 2

Фронтоназальная дисплазия #136760 АД 9 1

Бранхио-окуло-фациальный #113620 АД 6 2

Оро-фацио-дигитальный #311200 Х-Д 6 1

Ван дер Вуде #119300 АД 5 4

Краниофронтоназальная дисплазия #304110 Х-Д 4 1

Гольденхара 164210 АД 4 —

Стиклера #108300 АД 3 2

Эктродактилии, эктодермальной дисплазии и расщелины губы и нёба (ЕЕС) 129900 АД 1 1

BPES #110100 АД 3 —

Корнелии де Ланге #122470 АД 3 —

Аарскога #305400 100050 Х-Р АД 2 -

Опица-Фриаса #145410 #300000 АД Х-Р 2 1

Клиппеля-Фейля #118100 #214300 АД АР 1 -

Фримана -Шелдона #193700 АД 1 —

Петерса + #261540 АР 1 —

Грейга #175700 АД 1 —

Грима кабуки #147920 АД 1 _

Протея #176920 АД 1 —

Дубовица 223370 АР 1 —

Кампомелическая дисплазия #114290 АД —

Мебиуса 157900 АД 1 -

АОАМ-комплекс 217100 2 -

Алкогольный фетальный синдром 1 -

Множественные ВПР, неклассифицированные 6 -

Примечание: тип наел. - тип наследования; АД - аутосомно-доминантный; АР -аутосомно-рецессивный; Х-Д - Х-сцепленный доминантный; Х-Р - Х-сцепленный рецессивный; знак # указывает на наличие установленной мутации.

Из 14 семей с Х-сцепленным типом наследования в 3 семьях наблюдались повторные случаи рождения больных детей. Семейный случай синдрома Пьера Робена с неизвестным типом наследования выявлен в двух неродственных семьях, в которых пораженными членами семьи оказались ребенок и один из родителей.

У 10 человек из 7-ми семей проведено молекулярно-генетическое исследование моногенных синдромов. В семейном случае синдрома Ван дер Вуде у ребенка и его матери идентифицирована мутация р.Аг§ 400 Тгр в экзоне 9 гена /ЛГб в гетерозиготном состоянии, что подтвердило диагноз моногенного заболевания с АД типом наследования.

У шести детей и одной матери (6 семей) с фенотипическими проявлениями бранхио-окуло-фациального синдрома (ВОРБ) выполнена ДНК-диагностика с целью выявления мутаций в гене ТГАР2А. По результатам молекулярно-генетического исследования у 4 человек (3 детей и 1 мать) установлены различные миссенс— мутации в экзоне 4 гена ТРАР2А (табл. 4).

Таблица 4.Результаты молекулярного анализа гена ТРАР2А среди пациентов с ВОРБ

мутация аннотация количество пациентов

Л25Ю/ + с.751 А>С (те 121909574) 1

112138/ + с.637С>А (не зарегистрирована) 2, семья

У2ЮО/ + с.629Т>А (не зарегистрирована) 1

У остальных 3 обследованных детей при проведении прямого секвенирования гена ТРАР2А (7-ми экзонов и фланкирующих интронных областей) мутаций не обнаружено. Не исключено, что в данных случаях имеют место крупные делеции гена ТРАР2А, которые не определяются методом прямого секвенирования (Мещерякова Т.И. и др., 2013).

Таким образом, результаты настоящего исследования позволили установить выраженную этиологическую гетерогенность ВРГ и/или Н. В обследованной группе больных этиологическая структура порока представлена следующим образом: 73,9% составила изолированная форма порока развития

мультифакториапьного генеза, 0,2% - изолированная форма ВРГ и Н моногенной этиологии и 25,9% - множественные пороки с ВРГ и/или Н, включающие моногенные (13,4%), хромосомные (1,8%) и тератогенные (0,6%) синдромы, а также аномалад Пьера Робена (9,1%) и неклассифицированные комплексы ВПР (1,9%).

Анализ ассоциаций полиморфизмов генов MTHFR, IRF6, ADH1C, WNT3A, WNTll, CYP1A1, NAT2, АВСВ1 с риском формирования ВРГ и/или Н

Молекулярно-генетическое исследование 10 полиморфизмов 8 генов-кандидатов проведено на выборке 117 человек, у которых достоверно установлена изолированная ВРГ и/или Н. Группа контроля состояла из 82 здоровых детей, не имеющих родственников с ВРГ и/или Н. Среди выбранных для исследования генов: один ген контролирует синтез фермента фолатного обмена (MTHFR), три гена являются генами эмбрионального развития (IRF6, WNT3A, WNT11), один ген контролирует синтез фермента, участвующего в окислении этанола (ADH1Q, и три гена относятся к генам системы детоксикации ксенобиотиков (CYP1A1, NAT2, АВСВ1).

Распределение частот генотипов полиморфизмов rsl 801133 MTHFR, rs2013162 IRF6, rs698 ADH1C, rsl693482 ADH1C, rs2241894 ADH1C, rsl745420 WNT3A, rsl533767 WNTll, rs4646421 CYP1A1, rsl799930 NAT2, rsl045642 ABCB1 и их соответствие популяционному равновесию уравнения Харди - Вайнберга проводилось раздельно в группе детей с ВРГ и/или Нив контрольной группе. Отклонения от равновесия уравнения Харди - Вайнберга в сравниваемых группах не обнаружено.

С учетом особенностей этиологии и эмбриогенеза губы и нёба сформированы две группы пациентов. В первую группу отнесены 102 ребенка с врожденной расщелиной губы с или без расщелины нёба, а во вторую группу — 15 детей с расщелиной только нёба. Проведено изучение распределения частот аллелей и генотипов полиморфизмов генов MTHFR, IRF6, ADH1C, WNT3A, WNTll, CYP1A1, NAT2, АВСВ1 в каждой из двух групп больных детей по сравнению с контрольной группой здоровых детей.

Установлено, что в группе больных с ВРГ с/без Н распределение частот аллелей и генотипов гена IRF6 существенно отличалось от контрольной группы за счет преобладания носителей аллеля Т (таблица 5).

Так, в группе больных с ВРГ с/без Н частота гомозиготных генотипов Т/Т составила 51,7%, что в 3 раза превышает частоту в контрольной группе, равную 17,6% (х2= 17,34, р=0,0002) (рис. 3).

Таблица 5. Сравнительный анализ распределения частот аллелей и генотипов полиморфизма гб20 13162 гена ШРб среди больных с ВРГ с/без Н и здоровых, п (%)

аллели, генотипы частота аллелей и генотипов х2(р) (ж (95% с1)

врг с/без Н контроль

Аллели

в 50 (0,281) 39 (0,574) 18,25; *р=2-10"5 0,29 (0,16-0,52)

Т 128 (0,719) 29 (0,426) 3,44(1,93 -6,16)

Генотипы

в/в 7 (0,079) 11 (0,324) 17,34; *р=0,0002 0,18(0,06-0,51)

в/Т 36 (0,404) 17 (0,500) 0,68 (0,31 - 1,50)

Т/Т 46 (0,517) 6(0,176) 4,99 (1,88- 13,23)

Примечание: Уровни значимости р различий частот генотипов между группами (жирный шрифт *р<0,05 с11=1)

50 51,7

40,4

32,4 ЕЗ ВРГ с/без Н □ контроль

17,6

7,9

1

вв вт тт

Рисунок 3. Распределение частот генотипов гена 1КР6 среди больных с ВРГ с/без Н и здоровых (%).

Соответственно, при наличии гомозиготного генотипа Т/Т гена ШР'б (гв2013162) относительный риск развития ВРГ с/без Н увеличивается в 5 раз ((Ж=4,99, 95% С1=1,88 - 13,23).

Значительно чаще встречается носительство аллеля Т гена ШГб (гз2013162) у детей с ВРГ с/без Н по сравнению с контрольной группой здоровых детей (X2 =18,25, р=2-10"5; СЖ = 3,44; 95 % С1=1,93 - 6,16).

При сравнительном анализе частот аллелей и генотипов остальных полиморфизмов 801133 МТНРЯ, гв698 АЭН1С, Ы693482 АОН1С, ге2241894 АОН1С, ГБ 1745420 ШТЗА, ГБ1533767 ШТ11, ге4646421 СУР1А1, 799930 ЫАТ2, гб 1045642 АВСВ1 в группе больных с ВРГ с/без Н и в контрольной группе здоровых различия не достигали уровня статистической значимости.

При сравнительном анализе частот аллелей и генотипов полиморфизмов генов-кандидатов (МТНП*, ШГб, А ОН 1С, \VNT3A, №N111, СУР1А1, /\'А Т2, АВСВ1) в группе больных с врожденной расщелиной только нёба и здоровых из

контрольной группы различия не достигали уровня статистической значимости, что, вероятно, обусловлено небольшой выборкой больных.

Роль межгенных взаимодействий в развитии врожденной расщелиной губы с или без расщелины нёба

Для моделирования взаимодействия генов при ВРГ с/без Н использованы программы: Multifactor Dimensionality Reduction (MDR) (Moore J.H. et al., 2004; Hahn L.W. et al., 2003) и модифицированная версия - Generalized MDR (GMDR), позволяющие анализировать неодинаковые по числу выборки (Lou X-Y. et al., 2007; Chen G.B. et al., 2011). Данный метод позволяет проводить одновременный анализ множества полиморфизмов генов, выбирая из них такие комбинации, которые имеют наибольшую патогенетическую значимость для развития болезни. Мультилокусные генотипы группируются по степени риска развития заболевания, что влечет снижение числа рассчитываемых параметров. Многократный перекрестный пересчет первичных данных по различным группам риска позволяет построить модель межгенного взаимодействия и предсказать на её основе с высокой точностью наличие предрасположенности к конкретному заболеванию. Результаты анализа межгенных взаимодействий в группе детей с ВРГ с/без Н представлены в таблице 6.

Таблица 6. Значимые модели взаимодействия изучаемых генов-кандидатов (GMDR)

Оптимальные модели межгенных взаимодействий Опытная взвешенная точность Контрольная взвешенная точность Тест на значимость (Р) Воспроизводимость модели (CV consistency)

rs2013162 IRF6 0,6673 0,6692 9(0,0107) 10/10

rs2013162 IRF6x rs 1045642 ABCB1 0,7178 0,6467 8(0,0547) 8/10

Среди детей с ВРГ с/без H наиболее значимым полиморфизмом является rs2013162 гена IRF6 (G/T). Опытная взвешенная точность rs2013162 гена IRF6 (G/T) составила 0,6673, контрольная взвешенная точность 0,6692, воспроизводимость модели 10/10, значимость 9 (0,0107).

Генотип Т/Т гена 1RF6 у детей является маркером повышенного риска развития ВРГ с/без H (OR=4,879 [CI 95%: 1,693-14,056]; х2=13,38; р=0,0025); Генотип G/G гена IRF6 у детей является маркером пониженного риска развития ВРГ с/без H (OR=Û,1494 [Cl 95%: 0,03779-0,5904]; х2=13,38; р=0,0059).

При анализе выборки детей с ВРГ с/без Н и контрольной группы здоровых детей оптимальной моделью межгенного взаимодействия, предрасполагающей к развитию ВРГ с/без Н, оказалась двухлокусная модель генов — гб20 13162 тгб (С/Т) х ге1045642 АВСВ1 (С/Т). Подтверждением этого вывода свидетельствует сочетание максимальных показателей каждого критерия в таблице 6 и рисунке 4. Опытная взвешенная точность 0,7178, контрольная взвешенная точность 0,6467, воспроизводимость модели 8/10, значимость 8 (0,0547).

Графическое представление двухлокусной модели межгенных взаимодействий генов-кандидатов предрасположенности к ВРГ с/без Н у детей представлено на рис. 4 (МОЯ).

№6

Рисунок 4. Двухлокусная модель межгенных взаимодействий генов-кандидатов предрасположенности к ВРГ с/без Н у детей (МОЯ). Более темным цветом выделены генотипы повышенного риска; более светлым - пониженного риска. В каждой ячейке левая диаграмма - группа больных, правая - контрольная группа.

Генотипы повышенного риска развития ВРГ с/без Н в двухлокусной модели - /ЯГб (С/Т)*Т/Т - АВСВ1 (С/Т),*С/Т (ОЯ=28,662 [С1 95%: 1,635-502,36]; ЯЯ=2,063 [1,608-2,645]; х2=11,76; р=0,0004); генотипы пониженного риска тгб (0/Т)*С,/С - А ВС В1 (С/Т)* С/С (СЖ=0.07448 [С1 95%: 0,003866-1,435]; Х2=5,58; р=0,0309).

Проведенный анализ межгенных взаимодействий позволил оценить особенности взаимодействий ДНК-локусов исследованных генов, а также установить наиболее патогенетически значимые межгенные взаимодействия, детерминирующие риск формирования ВРГ с/без Н.

Полученные результаты анализа межгенных взаимодействий свидетельствуют о ключевой роли в формировании повышенного риска к ВРГ с/без Н полиморфизма гена 1ЯГ6 (гз2013162), входящего в состав всех статистически значимых моделей.

Алгоритм обследования детей с врожденной расщелиной губы и/или нёба

Результаты проведенного исследования явились основанием для усовершенствования алгоритма обследования детей с врожденной расщелиной губы и/или нёба (рис.5).

ВРГ и/или Н

наличие других микроаномалнй и ВНР

отсут

■V

ствие ВРГ и/пли Н родственников

наличие ВРГ и/или Н у родственников

стандартное щрио нитрование /ХМА

исследование мутаций в гене ЩР'6

кариотипи ХМ А норма

аномалия кцрнотипа

нет мутаций в | [ мутация в \ синдесмологический | хромосомная

тепе //<74 ;; гене 1НР6 анализ : аномалия

(»У-

изолированиям I ы н ф а кто р и ал ь и и и) • ВРГ и/или Н

генотигшрование тиморфичма гена

поиск мутации (еиквенс гена, *МР1.Л. секвснирование экзома)

Рисунок. 5. Схема алгоритма клинико-генетического обследования пациентов с ВРГ и/или Н.

Примечание: *МРЬА — мультиплексная амплификация лигированных зондов.

Принципиально новым здесь является диагностика ВРГ и/или Н, направленная на выявление тератогенных и хромосомных синдромов, а также моногенных и мультифакториальных заболеваний среди всей когорты пациентов с данным пороком развития. Отдельно выделена группа пациентов с изолированной формой ВРГ и/или Н, имеющих отягощенный семейный анамнез по данному пороку развития. Чаще всего эта группа больных остается недообследованной, а прогноз риска повторения заболевания - неоднозначным. Не исключено, что в некоторых таких случаях причиной порока может являться моногенная патология с высоким риском повторения. В алгоритме даны рекомендации по обследованию пациентов из этой группы.

В случае отсутствия сочетанных аномалий и множественных ВПР и отягощенного семейного анамнеза по ВРГ и/или Н порок развития считается изолированным мультифакториального генеза. С целью более точного прогнозирования относительно риска повторения заболевания в семье рекомендуется проведение генотипирования полиморфизма гена (ге2013162).

ВЫВОДЫ

1. В обследованной выборке детей с ВРГ и/или Н установлена клинико-генетическая структура порока развития: 73,9% составила изолированная ВРГ и/или Н мультифакториального генеза, 0,2% - изолированная ВРГ и Н моногенной этиологии и 25,9% - множественные пороки с ВРГ и/или Н, включающие моногенные (13,2%), хромосомные (1,8%) и тератогенные (0,6%) синдромы, а также аномалад Пьера Робена (9,1%) и неклассифицированные комплексы ВПР (1,2%).

2. Выявлено, что хромосомные аномалии при множественных пороках с ВРГ и/или Н представлены количественными и структурными нарушениями. В том числе описана редкая форма несбалансированной хромосомной транслокации 46, XX, с1ег(9Ж1;9)(я32.3;р22.2).

3. В обследованной группе детей с множественными ВПР моногенные синдромы представлены 25 нозологическими формами с различными типами наследования (АД - 19 нозологий, АР - 2 нозологии, Х-сцепленный - 4 нозологии).

4. Разработана ДНК-диагностика для бранхио-окуло-фациального синдрома (ВОГБ). Впервые в России для ВОРБ определена локализация горячих точек мутаций (в экзоне 4 гена ТРАР2А) и выявлены две ранее неописанные мутации в гене ТГА Р2А.

5. Проведен анализ ассоциаций полиморфных вариантов генов MTHFR (rs 1801133), IRF6 (rs2013162), ADH1C (rs698, rsl693482, rs2241894), WNT3A (rsl745420), WNTU (rsl533767), CYPIAi (rs4646421), NAT2 (rsl799930) и ABCB1 (rs 1045642) с изолированной ВРГ и/или Н. Установлено, что аллель Т гена IRF6 (rs2013162) ассоциирован с повышенным риском развития ВРГ с/без Н.

6. Показано, что оптимальной моделью межгенного взаимодействия, предрасполагающей к развитию ВРГ с/без Н, является двухлокусная модель с вовлечением полиморфных вариантов генов - rs2013162 IRF6 (G/T) х rsl045642 АВСВ1 (С/Т).

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. При обследовании детей с ВРГ и/или Н необходимо проведение медико-генетического консультирования с использованием усовершенствованного диагностического алгоритма. Это обеспечит высокую эффективность установления нозологического диагноза и последующего анализа клинико-генетической структуры заболевания.

2. Для более точного прогнозирования риска повторения заболевания в семьях с отягощенным анамнезом по ВРГ с/без Н в качестве генетического маркера необходимо использовать данные о полиморфных вариантах гена IRF6 (rs2013162).

3. Создание базы данных с выделением групп семей, подлежащих медико-генетическому консультированию, является необходимым элементом профилактики ВРГ и/или Н.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ Статьи, опубликованные в изданиях, рекомендуемых ВАК МОН РФ:

1. Мещерякова Т.И., Маркова С.И., Жилина С.С., Гончаков Г.В., Гончакова С.Г., Абрамов A.A., Мутовин Г.Р. Изучение влияния полиморфизма С677Т гена MTHFR на риск формирования несиндромальных орофациальных расщелин // Российский вестник перинатологии и педиатрии. -2013. -№ 3. -С. 38-41.

2. Мещерякова Т.И., Маркова С.И., Жилина С.С., Гончаков Г.В., Гончакова С.Г., Абрамов A.A., Петрин А.Н., Мутовин Г.Р. Полиморфизм С677Т гена MTHFR и риск формирования несиндромальных орофациальных расщелин // Медицинская генетика. - 2013. -Т. 12. - № 2(128). - С. 25-27.

3. Мещерякова Т.И., Зинченко P.A., Жилина С.С., Васильева Т.А., Петрова Н.В., Петрин А.Н., Мутовин Г.Р. Клинический полиморфизм и молекулярная диагностика бранхио-окуло-фациального синдрома // Детская больница. - 2013. -№4(54).-С. 28-32.

Публикации в других изданиях:

4. Шахтарин В.В., Жилина С.С., Мутовин Г.Р., Гончаков Г.В., Гончакова С.Г., Мещерякова Т.И., Маркова С.И., Абрамов A.A., Рогожина Е.М., Дрозд О.В., Притыко А.Г. Расщелины губы и/или нёба. Анализ этиологии и роли генетической детерминированности изолированных форм в российской популяции // Инновационные технологии в генетике и детской эпилептологии: Сб. науч. работ под ред. Притыко А.Г. - М.: ООО «ГрафАртстудио». -2011. - С.115-123.

5. Мещерякова Т.И., Зинченко P.A., Жилина С.С., Васильева Т.А., Петрова Н.В., Петрин А.Н., Мутовин Г.Р. Бранхио-окуло-фациальный синдром (BOFS). Обзор литературы и описание клинического случая // Современные медицинские технологии в клинической генетике и детской эпилептологии: Сб. науч. работ по материалам IX Международной научно-практической конференции -М.: РадиоСофт. - 2013. - С.78-87.

6. Мещерякова Т.И., Петрин A.A., Маркова С.И., Абрамов A.A., Жилина С.С., Мутовин Г.Р., Гончаков Г.В., Гончакова С.Г., Притыко А.Г. Анализ полиморфизма генов 1RF6, MTHFR и MDR1 детей с изолированными расщелинами губы и/или нёба // Образование, наука и практика в стоматологии по единой тематике «Стоматология и социально-значимые заболевания» Сб. тр. 10-й Всерос. Научн.-практ. конф. / под ред. О.О. Янушевича, И.Ю. Лебеденко. - СПб.: Человек. - 2013. - С.161-162.

7. Мещерякова Т.И., Зинченко P.A., Жилина С.С., Васильева Т.А., Петрова Н.В., Петрин А.Н., Мутовин Г.Р., Кожанова Т.В. Результаты клинического и молекулярно-генетического анализа у пациентов с бранхио-окуло-фациальным синдромом // Молекулярная диагностика. Сб.трудов / колл.авт., под ред. В.И. Покровского. - М.: ООО "Издательство МБА". -2014. - Т. 2. - С. 210-211.

8. Петрин А.Н., Мещерякова Т.И., Маркова С.И., Жилина С.С., Гончаков Г.В., Гончакова С.Г., Абрамов A.A., Тарлычева Л.В., Зинченко P.A., Мутовин Г.Р. Полиморфизм С677Т гена MTHFR и риск формирования несиндромальных орофациальных расщелин // Медицинская генетика. - 2015. - Т.14. - № 3(153). -С. 62.

9. Meshcheryakova T., Zinchenko R., Zhilina S., VasilevaT., Petrova N., Petrin A., Mutovin G., Kozhanova T. The results of clinical and molecular analysis of data of patients with branchio-oculo-facial syndrome // European Human Genetics Conference 2014, May 31-June 3, 2014, Milan, Italy //European J. of Hum.Gen. - 2014. - V.22, supp.l (J 11.53).-P. 451.

10. Tatjana I. Meshcheryakova, Rena A. Zinchenko, Tatiana A. Vasilyeva, Andrey V. Marakhonov, Svetlana S. Zhylina, Nika V. Petrova, Tatiana V. Kozhanova, Maxim S. Belenikin, Alexander N. Petrin, Gennady R. Mutovin. A Clinical and

Molecular Analysis of Branchio-Oculo-Facial Syndrome Patients in Russia Revealed New Mutations in TFAP2A // Annals of Human Genetics. - 2015; 79: 2 - P. 148-152.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

АД аутосо м н о-дом и н антн ы й

АР аутосомно-рецессивный

ВПР врожденный порок развития

ВРГ врожденная расщелина губы

BPH врожденная расщелина нёба

ВРГ и H врожденная расщелина губы и нёба

ВРГ и/или H врожденная расщелина губы и/или нёба

ВРГ с/без H врожденная расщелина губы с или без нёба

ДНК дезоксирибонуклеиновая кислота

ПЦР полимеразная цепная реакция

х-д Х-сцепленный доминантный

Х-Р Х-сцепленный рецессивный

BOFS бранхио-окуло-фациальный синдром

OMIM Online Mendelian Inheritance in Man

SNP полиморфизм длины рестрикционных фрагментов

АВСВ1 (MDR1) ген множественной лекарственной резистентности

(Р-гликопротеин)

ADH1C алкогольдегидрогеназа 1С

CYP1A1 цитохром Р-450, семейство А, подсемейство I

IRF6 интерферон-регулирующий транскрипционный фактор 6

MTHFR 5,10-метилентетрагидрофолат-редуктаза

NAT2 ариламин-М-ацетилтрансфераза 2

TFAP2A транскрипционный фактор АР-2 альфа

WNT белок сигнального пути Wnt