Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Аллостерические центры "биосинтетической" L-треониндегидратазы из дрожжей Saccharomyces carlsbergensis

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Рабинович, Сергей Эдуардович

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И ОБОЗНАЧЕНИЙ. 4

ВВЕДЕНИЕ. б

ШВА I. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР.

1. Роль аллостерических ферментов в регуляции метаболических путей в айвой клетке.

2. Доказательства пространственной обособленности аллостерических центров.

3. Участие ^Н-групп в функционировании аллостерических ферментов.

Свойства "биосинтетической" I, -треониндегидратазы из микроорганизмов.

5. Свойства "биосинтетической" Ь -треониндегидратазы из дрожжей.

6. Канцеростатическая активность Ь-треониццегвдра-тазы.

7. Постановка задачи собственных исследований.

ШВА II .МЕТОЛУ И МАТЕРИАЛЫ.

1. Очистка "биосинтетической" Ь -треониндегидратазы из дрожжей са^Ьеьдеп&ё

2. Определение активности.

3. Определение концентрации белка.

Определение связывания Р^С] -эффекторов с "биосинтетической" Ь-треониндегидратазой.

5. Методика десенсибилизации активаторной функции фермента.

6* Метод модификации пиридоксаль-5»-фосфатом.

7. Метод модификации 5,5»-дитиобис-(2-нитробензойной) кислотой.

8* Химические синтезы аналогов L-валина и L-изолейцина. 649. Материалы.

ГЛАВА III .КИНЕТИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ "АКТИВАТОРНОГО" Ш0-СТЕРИЧЕСКОГО ЦЕНТРА "БИОСИНТЕТИЧЕСКОЙ" L«ТРЕОНИНДЕГИДРАТАЗЫ ИЗ ДРОЖЖЕЙ Ä carfgbergen StS.

ГЛАВА 1У.КИНЕТИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ "ИНГИБИТОРНОГО" АЛЛО-СТЕРИЧЕСКОГО ЦЕНТРА "БИОСИНТЕТИЧЕСКОЙ" L-TPEO-НИНДЕГИДРАТАЗЫ ИЗ ДРОЖЖЕЙ S. Carte hercjeriSig

ГЛАВА У. ИССЛЕДОВАНИЕ СВЯЗЫВАНИЯ [14С] -ЭФФЕКТОРОВ С "АКТИВАТОРНЫМ" И "ИНГЙБИТОРНЫМ" ЦЕНТРАМИ "БИОСИНТЕТИЧЕСКОЙ" L -ТРЕОНИНДЕГИДРАТАЗЫ ИЗ ДРОЖЖЕЙ

S. cai-fabergenSig

ГЛАВА У1 .ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ РОЛЬ SH-ГРУПП "БИОСИНТЕТ0ЧЕСКОЙ" L-ТРЕОНИНДЕГИДРАТАЗЫ ИЗ ДРОЖЖЕЙ S. carfsbercjen.

ГЛАВА УН. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.

ВЫ В ОДЫ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Аллостерические центры "биосинтетической" L-треониндегидратазы из дрожжей Saccharomyces carlsbergensis"

Биосинтетическая" L-треониддегвдратаза (КФЛ.2.1.16), катализирующая гидролитическое дезаминирование L -треонина с образованием ¿^-кетомасляной кислоты и аммиака, является первым ферментом цепи биосинтеза L -изолейцина и регулируется этой аминокислотой по принципу отрицательной обратной связи. обладает строгой специфичностью по отношению к своему ретроингибитору ( L-изолейцину) и довольно строгой субстратной специфичностью. У микроорганизмов и растений существует еще один изофермент ТД -"биодеградативный". Так же как и ТД^ он является классическим аллостерическим ферментом, активирующими эффекторами которого являются смесь Г-SH и АМФ или АДФ у облигатно анаэробных бактерий. Исследование Т^ из микроорганизмов послужило одной из экспериментальных основ для создания общей теории аллостерической регуляции ферментов модели Моно, Уаймена и Шан&ё [172] . У животных оба эти изофермента отсутствуют; отсутствие ТДС - одна из причин незаменимости L-изолейцина для животных и человека [18] . Обнаруженная в печени человека [i] и ряда животных Ь-^реонин-L -сериндегидратаза является важным ферментом глюконеогенеза из аминокислот и, возможно, выполняет также другие физиологические функции.

Актуальность темы. Представляя собой классический пример аллостерического регуляторного фермента, ТДд микробного происхождения является удобным объектом для изучения общих механизмов аллостерической регуляции. В этом смысле TJ^ рассматривается в качестве обобщённой модели регуляторных ферментов для поиска биологически активных химических соединений или выявления повреждающих факторов внешней среды по принципу их воздействия на аллосте-рические центры фермента. Кроме того, высокоочищенные препараты

ТД обладают противораковой и, в первую очередь, антилейкозной активностью [17] . Так, показано, что ТД йэ печени овцу [ПО*III] обладает канцеростатической активностью на культуре ткани.

Хотя аллостеричеекая природа Т^ из микроорганизмов и растений и регуляция активности и синтеза этого фермента аллостери-ческими эффекторами не вызывает сомнений, вопрос о механизме алло-стерических взаимодействий на уровне молекулы фермента во многом остаётся открытым для из любого источника, в том числе и для фермента из дрожжей, а функциональная роль отдельных аминокислотных остатков в аллостерическом функционировании регуляторных ферментов практически не изучена для ТД„ из любых источников и вообще недостаточно изучена для других аллостерических ферментов.

ТДС из дрожжей плохо изучена с точки зрения аллостерической природы и аллостерических взаимодействий; в литературе содержится много противоречивых данных. Данный фермент из пивных дрожжей саг££Ьегдеп£1Я в этом плане почти не исследован; он, так же как и аналогичный фермент из других видов высших дрожжей, не был получен в десенсибилизированном по отношению к аллостерическим эффекторам состоянии.

Цель работы. Получить доказательство наличия аллостерических регуляторных центров в высокоочищенной ТДС из пивных дрожжей 2 > изучение некоторых их свойств, специфичности и сродства к эффекторам, определение количества аллостерических центров в молекуле фермента, получение фермента в десенсибилизированном по отношению к различным аллостерическим эффекторам состоянии при помощи химической модификации такими специфическими реагентами как ионы н|+ , ПЛФ, ДТНБ и изучение рада свойств такого избирательно десенсибилизированного фермента. Исследование кинетическим методом и методом связывания [^с] -эффекторов функциональных групп аллостерических центров , существенных для связывания эффекторов и для инициации вызванных таким связыванием конформационных переходов в активном олигомере исследованного фермента, т.е. для аллостерического перехода.

Научная новизна работы. Показано наличие в составе гвкса-мерной молекулы ЗДС из пивных дрожжей 2. "активаторных" аллостерических центров, связывающих Ь -валин, низкие концентрации Ь -изолейцина и ряд I - ^(-аминокислот с алифатическим радикалом, а такие "ингибиторных" аллостерических центров, связывающих высокие, ретроингибирующие фермент концентрации -изолейцина. Исследована специфичность эффекторов для данных аллостерических центров. Разработаны методы избирательной химической модификации фермента, делающей его десенсибилизированным по отношению к активации Ь -валином, низкими концентрациями Ь-изолейцина или по отношению к ингибированию высокими концентрациями Ь-изолейцина. Установлено, что существенными группами для аллостериче-ской активации фермента являются <ЗН-группы остатков цистеина, а для процесса аллостерического ингибирования - £ -/^-группа остатка лизина. Исследована роль этих существенных функциональных групп в связывании эффекторов на этих центрах и участии их в гетеротроп-ных аллостерических взаимодействиях между "активаторными" и активными, "ингибиторными" и активными центрами фермента. Методом связывания [^С] -эффекторов показано, что в составе активного гек-самера фермента содержатся два "активаторных" и три "ингибитор-ных" аллостерических центра, между которыми устанавливается гете-ротропное взаимодействие, в основе которого лежит механизм "исключающего" связывания лигандов. Модификацией !ЩС при помощи ДТНБ исследованы число, реакционная способность и функциональная роль ЗН-групп фермента. Показано, что в нативной гексамерной молекуле ТДС содержится три типа &Н-групп, различающихся по своей реак - 9 ционной способности по отношзнию к ДТНБ и существенных не только для процесса аллостерической активации, но также для самой каталитической активности фермента и процессов ассоциации гексамера в более высокомолекулярные каталитически неактивные агрегаты. Полученные результаты вносят существенный вклад в изучение и в об' щую теорию аллостерической регуляции.

Практическое значение работы состоит в создании обобщённой модели аллостерических регуляторных ферментов для отбора химических соединений на биологическую активность, в том числе и возмое-ную фармакологическую активность, по принципу их воздействия на аллостерические свойства исследуемого фермента.

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Рабинович, Сергей Эдуардович

ВЫВОДЫ

1. Кинетическим методом и методом связывания [^С] -эффекторов показано, что высокоочищенная "биосинтетическая" Ь-треонинде-гидратаза из пивных дрожжей сагёйкегдепзсй содержит в расчёте на каталитически активный гексамер с молекулярной массой 300 ООО дальтон два "активаторных" аллостеричеоких центра, связывающих валин, низкие концентрации Ь-изолейцина и ряд I - оС-аминокислот. Для активирующего действия этих Ь - о(-аминокислот необходимо наличие в них свободной Л- А/Е^-группы, важное значение имеет строение углеводородного радикала, разветвление цепи которого у ^-с-атома существенно для максимальной активации. Существенными для аллоете-рической активации фермента являются 2 $Н-группы в расчёте на "ак-тиваторный" центру одна из которых участвует в связывании аминокислот-активаторов, а другая - в передаче конформационного сигнала от "активаторного" аллостерического центра на активный центр, т.е. в гетеротропном аллостерическом переходе.

2. Этими же методами показано наличие в гексамерной молекуле фермента 3 "ингибиторных" аллостерических центров, специфически связывающих лишь высокие концентрации -изолейцина, вероятно, благодаря высокой гвдрофобности этой |,-с>(-аминокислоты. Существенной для аллостерического ингибирования фермента Ь-изолейцином является ¿-А/^-группа остатка лизина, которая хотя и участвует в связывании Ь-изолейцина, но её основная роль заключается в передаче конформационного сигнала от "ингибиторного" аллостерического центра на активный.

3. Обнаружен феномен "исключающего" связывания Ь-изолейцина на обоих типах аллостерических центров и значительно большее сродство этой Ь-аминокислоты к "активаторному" центру по сравнению с "ингибиторным". Показано, что "активаторные" и "ингибитор-ныв" аллостерические центры не перекрываются с активными центрами фермента и между собой.

Титрование $Н-групп денатурированного фермента при помощи ДТНБ с восстановлением 3- ^-мостиков при помощи Д/аВН^ показало, что в гексамерной молекуле "биосинтетической" Ь -треонивдегид-ратазы из пивных дрожжей содержится 30 $Н-групп, 6 из которых участвуют в образовании 3 ¡3-3-мостиков, соединяющих субъединицы фермента в димеры, содержащие один активный и один "ингибиторный" центры.

5. В нативной молекуле фермента титруется 18 &Н-групп, по своей реакционной способности разделяющиеся на три типа по б групп в каждом. 4 из 6 быстро титруемых £н-групп участвуют в алло-стерической активации фермента, все £Н-группы 2-го типа участвуют в проявлении каталитической активности, а 6 $Н-групп 3-его типа участвуют в процессе ассоциации гексамерного фермента до высокомолекулярных каталистически неактивных агрегатов. Аллостерические эффекторы ( Ь-валин и Ь-изолейцин) , препятствующие такой ассоциации, экранируют эти $Н-группы 3-его типа, что отражает изменения конформации фермента под действием аллостерических эффекторов.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Рабинович, Сергей Эдуардович, Москва

1. Акопов M .А., Каган З.С., Берегов Т.Т., филипцев П.Я. Обнаружение и свойства L-треонин-L-сериндегвдратазы печени человека. - Биохимия, 1978, т.43, il 10, с. 1860-1872*

2. Алексеенко Л.Л., Золотов Н*Н., Орехович В.Н. О действии "группоспецифических" ингибиторов на высокоочищенную пролил-(.),L)-аланинпептидилгидролазу аденогипофиза. Докл. АН СССР, 1980, т.250. № I, с.233-237.

3. Дорожко А.И., Кабанов Г.А., Каган З.С. Кинетическое изучение десенсибилизированной "биосинтетической" L-треонивдегидра-тазы из бактерии Е.со& K-I2. Мол. биол., 1973, т.7, № 3,с.332-336.

4. Дорожко А.И., Ковалёва С4В., Яковлева Л.И., Либер Е.Е., Каган 3*С. Очистка, множественность молекулярных форм и кинетические свойства "биосинтетической" L-треониндегвдратазы из бактерии E.coft K-I2. Биохимия, 1975, т*40, №6, с.1216-1230.

5. Диксон M., Уэбб Э. Ферменты. М.: Мир, 1982, т.1, с.202

6. Каган З.С. Синтез о(-кетокислот через азлактоны /V-ацил-- d -амино- .(З-алкил (арил)акриловой кислоты и новый синтез di-ке-то- J3 -метил-н.-валериановой кислоты. Изв. АН СССР, Оэд. хим. наук, 1957, т.12, с.1486-1488.

7. Казан З.С. Синтез d , £ -диокси-.Р-метил-н.-валериановой кислоты. Изв. АН СССР, отд.хим. наук, 1962, J6 2, с.317-320.

8. Каган З.С., Чойшнер Г. Синтез и некоторые свойства o(,J3-эпокси- Jà-метил-н.-валериановой (метилзтилглицидной) кислоты. -Изв. АН СССР, сер. хим., 1965, Я 7, с.1222-1225.

9. Каган З.С., Томова B.C. Дезаминирование треонина и сери-на и его аллостеричеекая регуляция у микроорганизмов, растений и животных. Усп. совр. биол., 1968, т.66, № 3, с.315-338.

10. Каган З.С., Синельникова Э.М., Кретович В.Л. L-Треонин-дегидратаза цветковых паразитных и сапрофитных растений. Биохимия, 1969, т.34, В 3, с.564-575.

11. Каган З.С., Синельникова Э.М., Кретович В.Л. "Биосинтетическая" L-треониндегидратаза шампиньона. Биохимия, 1969, т.34, №6, с .1279-1287.

12. Каган З.С., Хашимов Д.А., Курганов Б.И. Кинетические свойства растворимой "биосинтетической" L -треониндегидратазы проростков гороха. Биохимия, 1970, т.35> $ 5, с.937-952.

13. Каган З.С., Игнатьева Л.М. Аллостерические свойства де-карбоксилазы мезо- Л, в -диаминопимелиновой кислоты у накапливающего L-лизин штамма èhevibocienam -22. Докл. АН СССР, 1971, T.I97, tè 5, с¿1196-1199.

14. Каган З.С., Дорожко А.И., Синельникова Э.М., Ковалева С.В, Яковлева Л.И., Дворецкова Т.В. Треониндегидратазы как возможные антираковые препараты. Материалы 2-ого Всесоюзного Симпозиума по- 141 медицинской энзимологии, г.Душанбе, 1974, с.69-70.

15. Каган 3.С. Аллостерическая регуляция ферментов азотного обмена у растений. В кн. "Аллостерические ферменты". Итоги науки и техники. Биологическая химия, т.8. - М., ВИНИТИ, 1975, с.164-234.

16. Каган З.С. Регуляторные энзимопатии. Вопр.мед.хим., 1982, т.28, №3, с.73-80.

17. Ковалева C.B., Дорокко А*И., Беляева Н.Ф*, Каган З.С. Некоторые свойства "биосинтетической" L -треониндегидратазы из субклеточных структур пивных дрожжей Êaccharomijceg cah£gbehjer7£&-Укр. биохим. ж., 1981, т.53, $ 5, с.31-37.

18. Ковалева C.B. Регуляторные свойства L-треоницдегвдра-тазы из дрожжей Saccharomyceg carEgbergensis . Автореф. кавд.дисс., 1983, М., МГУ.

19. Кретович В.Л., Лосева Л.П. Выделение и свойства L -трео-ниндегидратазы из ïïloiohûcter irineéandil # докл. АН СССР, 1970, т.193, В I, с.219-222.

20. Кретович В.Л., Лосева Л.П. Выделение и некоторые свойства высокоочищенной "биосинтетической" L -треониндегидратазы Дго-iobctciet" vinefandit . Микробиология, 1973, т.42, №4, с.599-607.

21. Кретович В.Л., Лосева Л.П. Аллостерические свойства "биосинтетической" L-треониндегидратазы flzoiobacter vineéanMi .

22. Микробиология, 1973, т.42, $ 5, с.772-778.

23. Курганов Б.И. Особенности кинетического поведения ферментов, состоящих из субъединиц. Хим. технол.полимеров, 1967, т.II, 16 1, с.140-162.

24. Курганов Б.И. Аллостерические ферменты. М., Наука, с .5962.- 142

25. Курганов Б.И. Аллостерические ферменты. М., Наука, 1978, с. I17-169♦

26. Кузин A.M., Ермекова В.М. Радиочувствительность аллостерического центра фосфофруктокиназы. Докл. АН СССР, 1969, т.188, В 5, с.1166-1168.

27. Лисовская Н.П., Ливанова Н.Б. Регуляция действия мышечных фосфорилаз. В кн. "Аллостерические ферменты". Итоги науки и техники. Биологическая химия. - М., ВИНИТИ, 1975, т.8, с.ПО-154.

28. Малер Г., Кордес Ю;. В кн. Основы биологической химии. М., Мир, 1970, с.40-44.

29. Мецлер Д. Биохимия. М., Мир, В80, с.214-217.

30. Недугова Н.Е., Рабинович С.Э., Каган З.С., Грачёва И.М. Влияние высших спиртов на активность "биосинтетической" L -трео-ницдегидратазы из пивных дроккей $Qcckafom.yceg cat-febet^ensig .

31. Биохимия, 1979, fc.44, № 4, с.594-598.

32. Нефёдова M.В., Натальина В.М., Шапошников Г.Л. Изучение L -треониндегццратазы у продуцента ауратина Actinomyces gp. 2.

33. Микробиология, 1973, т.42, № 2, с.208-212.34. 'Розанова H.A., Четверикова Е.П. Динамика четвертичной структуры креатинкиназы из скелетных мышц кролика. Биохимия, 1981, Т.46, № 12, с.2125-2135«

34. Смуруженкова Т.В., Доронско А.И., Каган З.С. Олигомериза-ция "биосинтетической" L-треониндегццратазы из пивных дрожаей Sacckaf-omyces: cahfgbergen ¿¿g . Биохимия, 1984, т.49 (в печати) .

35. Томова B.C., Каган З.С., Кретович В.Л. Исследование L-треониндегидратаз проростков гороха. Биохимия, 1968, т.33,2, с.244-255.

36. Торчинский Ю.М. Сера в белках. М., Наука, 1977, с.43-46.

37. Юрчинский Ю.М. Сера в белках. М., Наука, 1977, с.168

38. Фёрст 3. В кн. Структура и механизм действия ферментов. И., Мир, 1980, с.328-331.

39. Фрейндлих М., Амбаргер Г. В кн. Ферменты и синтез биополимеров. М., Мир, 1967, с.234-248.

40. Anderson W.P. Steitz T.A. Structure of yeast hexokinase.-J. Mol. Biol., 1975, v. 92, H 2, p. 279-287.

41. Badwey J.A., Wasthead E.W. Sulfhydrye oxidation and multiple forms of human erythrocyte pyruvate kinase. -Isozymes. I. Molecular Structure, 1975, Acad. Press, INC, p. 509-521.

42. Barritt G.J., Morrison J.P. Purification and properties of thereonine dehydratase from Rhodepseudomonas spheroides. -Biochim. et Biophys. acta, 1972, v. 284, N 2, p. 508-520.

43. Bariitt G.J., Morrison J.P. Kinetic studies onthereac-tion catalysed by threonine dehydratase from Rhodopseudomonas spheroides. Biochim,et Biophys. acta, 1972, v. 284, N 2, p. 521-53

44. Baumgarten J., Schlegel H.G. Threonine Deaminase aus Arthrobacter Stamm 23* Arch. Mikrobiol., 1971, v. 75,p. 312-326.

45. Bitensky M.W., Yielding K.L., Tomkins G.M. The reversal by organic mercurials of "allosteric" changes in glutamate dehydrogenase >• J. Biol Chem., 1965, v. 240, N 2, p. 668-673*

46. Blangy D., Buc. H., Monod J. Kinetics of the allosteric interactions of phosphofructokinase from Escherichia coli.

47. J. Mol. Biol., 1968, v. 31, B 1, p. 13-35.

48. Boll M., Holzer H., Unter Suchungen zur Serin De hedratase ' Reaktion in Hefe. - Biochem., t., 1965, B. 343, N 4-, S. 504-518.

49. Brunner A., Devillers Mire A., de Robichon - Szul-majster H., Regulation of iBoleucine - valine biosynthesisin Saccharomyses cerevisiae. Eur. J. Biochem., 1969, v. 10, H 1, p. 172-183.

50. Brunner A., Robichon- Szulmajster H. Allosteric behavior of yeast threonine deaminase under partially inactivating conditions. FEBS Lett., 1969, v. 5, N 2, p. 141-144.

51. Burns R.O., Zarlengo M.H. Threonine deaminase from Salmonella typhimurium. J. Biol. Chem., 1968, v. 243, N 1, p. 178-185.

52. Bums R.O. Threonine deaminase (Salmonella typhimurium) in metabolism of amino acids and amines. Methods in Enzymology,1971, Part B, v. 7, p. 555-560.

53. Calhoun D.H., Rimerman R., Hatfield G.W. Threonine deaminase from Escherichia coli I. Purification and properties. -J. Biol. Chem,". 1973, v. 248, N 10, p. 3511-3516.

54. Calhoun D.H., Kuska J.S., Hatfield G.W. Threonine deaminase from Escherichia coli. II. Maturation and physical properties of the enzyme from a mutant altered in its regulationof gene expression. J. Biol. Chem., 1974, v. 250, N 10, p. 127-131.

55. Cassady W.E., Leiter E.H., Bergquist A., Wagner P. Separation of mitochondrial membranes of Heurospora crassa.II. Submitochondrial localization of the iaoleucine-valine biosyn-thetic pathway. J. Cell. Biol., 1972, v. 53, p. 66-72.

56. Cennamo C., Boll M., Holzer H. Ober Threonin-Dehydra-tase aus Saccharomyces cerevisiae. Biochem. Z., 1964, B. 340, II 2, S. 125-145.

57. Changeux J.-P. Allosteric interactions on biosynthetic L-threonine deaminase from E. coli K-12. Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol., 1963, v. 28, p. 497-504.

58. Cohlberg J.A., Pigiet V.P., Schachman H.K. Structure and arrangement of the regulatory subunits in aspartate transcarpamylase. Biochemistry, 1972, v. 11, H 18, p. 33963411.

59. Cohn M., Phillips A.T. Purification and characterization of a Bg independent threonine dehydratase from Pseudomonas putida. Biochemistry, 1974, v. 13, N 6, p. 1208-1214.

60. Colowick S.P. Womack P.O. Binding of diffusible molecules by macromolecules: rapid measurement by rate of dialysis. J. Biol. Chem., 1969, v. 244, Jff 3, p. 774-777.

61. Conway A., Koshland D.E. Jr Negative cooperativity in enzyme action. Two binding of diphoshopyridine nucleotideto D-glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase. Biochemistry, 1968, v. 7. N 12, p. 4011-4019.

62. Cosson M.-P., Patoloni D. Investigations on the structural perturbations induced by the binding of mercuric chloride to L-glytamate dehydrogenase. Arch. Biochem. and Biophys., 1977, v. 180, N 1, p. 49-56.

63. Cosson M.-P., Gros C., Talbot J.C. Identivication of a cysteine residue of glutamate dehydrogenase that binds P-chlormercuribenzoic acid. Biochem. and Biphys. Res. Commun., 1976, v. 72, N 4. p. 1304-1310.

64. Dalziel K. Egan R.R. The binding of oxidized coenzymes by glutamate dehydrogenase and the effects of glutarate and purine nuclotides. Biochem. J., 1972, v. 126, N 3, p. 975-984.

65. Datta P. Threonine deaminase- biosynthetic. Bhodopseu-domonas spheroides. Methods in Enzymology, 1971, v. 17 B, p. 566-571.

66. Datta P., Bhadra R. Biodegradative threoninedehydratase, Reduction of ferricyanide by an intermediate of the enzyme -catalyzed reaction. Eur. J. Biochem., 1978, v. 91, N 2, p.527-532.

67. David M., Rasched I., Sung H., Essential arginine residues in glutamate dehydrogenase. FEBS Lett., 1976, v. 62. E 3, p. 288-292.

68. Davis B.D. The telonomic significance of biosynthetic control mechamisms. Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol., 1961, v. 26, p. 1-10.

69. Davis L. Functional and stereochemical specificety at the B-carbon atom of substrates in threonine dehydratase-catalyzed -elimination reactions. J. Biol. Chem., 1979, v. 254, N 10, p. 4126-4131.

70. Decedue C.J., Hofler J.G., Burns R.O. Threonine deaminase from Salmonella typhimurium • Relationship letwfeen regulatory sites. J. Biol. Chem., 1975, v. 250, N4, p. 1562-1570.

71. Elodi P. The role of the sulfhydryl groups in the stabilisation of the structure of the D-glyceraldegyde-3-phospate-dehydrogenase. Biochem. et biophys. acta, 1960, v 40, IT 2, p. 272-276.

72. Engel P.O. Ferdinand W. The significance of abrupt trausitons in Lineweaver-Burk plots with particular referenceto glutamate dehydrogenase. Negative and positive cooperativity in catalytic rate constants. Biochem. J., 1973, v. 131, N 1, p. 97-105.

73. Evans P.R. Hudson P.J. Structure and control of phospofructokinase from Bacillus stearothemophilus. Nature, 1979, v. 279, p. 500-504.

74. Feldberg R.S. Datta P.L.-Threonine deaminase of Rhodoepirillum rubruuu Purification and characterixation. -Eur. J. Biochem., 1971, v. 21, N 3, p. 438-446.

75. Fisher J.R. A guide for interpreting substrate nonlinear steady-state enzyme kinetic data using random models. -Arch. Biochem. and Bj^hys., 1972, v. 152, N 2, p. 638-645.

76. Frieden C. Treatment of enzyme Kinetic data. II.

77. The multisite case: comparison of allosteric models and a possible new mechanism. J. Biol. Chem., 1967, v. 242, N 10, p. 40454052.8

78. Frieden C. Kinetic aspects of regulation of metabolic processes. The hysteretic enzyme concept. J. Biol. Chem.-1511970, v. 245, U 21, p. 5788-5799.

79. Friedrich R.G., Szabolcsi G. Protein denatiration by the blocking of thiol gro<u.ipa. Acta biochem. et biophys., Acad. Sci. Hung., -1967, v. 2, N 1, p. 59-67.

80. George A.1., Borders C.L. Chemical modification of histidyl and lysyl residues in yeast enolase. Biochem. et biophys. acta, 1979, v. 569, N 1, p. 63-69.

81. Gerhart J.C., Schachman H.K. Distinct subunits for the regulation and catalytic activity of aspartate transcar-bamylase. Biochemistry, 1965, v. 4, N 6, p. 1054, -1062.

82. Gerhart J.C., Holoubek H. The purification of aspar-tate trnscarbamylase of Escherichia coli and separation of its protein subunits. J. Biol. Chem., 1967, v. 242, N 12, p. 2886-2892.

83. Gould K.G., Engel P.C. Deseusitization of bovine liver glutamate dehydrogenase by 1-fluoro-2,4- dinitrobenzene. Biochem. Soc. Trans., 1978, v. 6, p. 1226-1228.

84. Creenfield R.S., Wellner D. Purification and properties of the threonine dehydratase of sheep liver,-2?ed. Proc. 1976,v. 35, N 7, p. 1749.

85. Greenfield P.S. Purification and characterization of sheep Liver threonine deaminase and a study of the effects of the enzyme on normal and malignant alls in vitro. Dissert. Abstr. Int., 1977, v. 38. N 2, p. 646-647.

86. Greenfielld R.S., Wellner D. Effects of threonine- deaminase on growth and viability of mammalian ' cells in tissue culture selective cytotoxicity to wards leukemia cells. Cancer Res. 1977, v. 37, N 8, p. 2523-2529«

87. Grimminger H., Rahimi-Larid^ani I., Koerner K.,1.ngems F. Purification of threonine deaminase from Escherichia coli . FEBS Lett., 1973, v. 35. U 2, p. 273-275«

88. Guha A., Englard S., Listowsky I. Beef heart malic dehydrogenases. VII. Reactivity of sulfhydryl groups and conformation of the supernatant enzyme. J. Biol. Chem., 1968, v. 243, U 3, p. 609-615.

89. Hajimo G., Keizo H., Hisa Kazu 0., Hidehiko K., Hideaki G. Biosynthetic threonine deaminase from Proteus morganii. -Agr. and Biol. Chem., 1982, v. 46, N 4, p. 1035-1042.

90. Harding W.M., Tubbs J.A., Mc. Daniel D., Similar effects by valine and isoleucine on threonine deaminase. Canad. J. Biochem., 1978, v. 48, N 1, p. 812-815.

91. Hatfield G.W., Umbarger H.E. A time-dependent activation of threonine deaminase. Biochem. and Bipjahys. Res.* Communs, 1968, v. 33, К 3, p. 397-401.

92. Hatfield G.W., Burns R.O. Specific binding of leilcyl transfer RNA to immuture form of L-threonine deaminase: its implications in repression. Proc. Hat. Acad. Sci. USA. 1970, v. 66, U 4, p. 1027-1035.

93. Hatfield g.w., Burns R.O. Ligand- induced maturation of threonine deaminase. Science, 1970, v. 167, И 3914, P* 7576.

94. Hatfield G.W., Burns R.O. Threonine deaminase from Salmonella typhimurium. III. The intermediate substructure. -J. Biol. Chem., 1970, v. 245, N 4, p. 787-791.

95. Holzer H., Gennamo C., Boll M. Product activation of yeast threonine dehydratase by ammonia. Biochem. and Biophys. Res. Commun., 1964, v. 14, N 6, p. 487-492.

96. Hucho P., Rasched I., Sund H. Studies of glutamate gehydrogenase: analysis of functional areas and functionalgroups. Eur., J. Biochem., 1975, v. 52, N 2, p. 221-230.

97. Ipata P.L., Cercignani G. The effect of pH on the allosteric properties of sheep brain 5'-nucleotidase. PEBS Lett., 1970, v. 7, N 2, p. 129-131.

98. Isenberg S., Neumann E.B. Studies L-serine deaminase in Escherichia coli K-12. J. Bacterid., 1974, v. 118, N 1, p. 53-58.

99. Jacques Y., Truffa-Bachi P. The threonine-sensitive homoserine dehydrogenase and aspartokinase activities of Escherichia coli K-12. Eur. J. Biochem., 1976, v. 62, N 3, p. 485490.

100. Jones R., Dwek R.A., Walker 1.0. Spin-labelled phos-phofructokinase. A simple and direct approach to the studyof allosteric equilibria under near- physiological conditions•-Eur. J. Biochem., 1975, v. 60, N 1, p. 187-198.

101. Kagan Z.S., DoroZhko A.I. pH-Dependent intermediate plateaux in the Kinetics of the reaction catalysed by bio-synthetic L-threonine dehydratase of Esherichia coli K-12. -Biochem. et biophys. acta, 1973, v-302. N 1, p. 110-128.

102. Kameshita I., Tokushige M., Izui K., Hirohiko K. Reversible desansitization of phosphoenolpyruvate carboxylase to multiple effectors by butanedione. Biochem. and Biohphys. Res. Commun., 1977, v. 76, N 3, p. 905-909.

103. Karassevitch X.u, Robichon-Szulma^sten H. Resersible dissociation of threonine deaminase in an ilvl mutant of Saccha-romyces cerevisiae. Mol. and Gen. Genet. 1972, v. 117, N 1, p. 113-123.

104. Kleppe K., Sanner T., Pigl A. Preferential deactivation of the allosteric function of aspartate transarbamylase by X-rays. Biochem. et biophys. acta, 1966, v. 118, N 1, p. 210211.

105. Kleppe K., Spaeren U. Feedback inhibition and ionizing radiation. Mechanism of inactivation of allosteric propertiesof aspartate transcarbamylase by X-rays. Biochemistry, 1967^: v. 6, N 11, p. 3497-3502.

106. Kuno S., Toraya T., Fukui S. Chemical modification of coenzyme B12- dependent diol dehydratase with pyridoxal-5.1-phoppate: lysyl essential for interaction between two components of the enzyme. Arch. Biochem. and Biphys., 1981, v. 211,12, p. 722-730.

107. Kurganov B,I., Kagan Z.S., Dorozhko A.I., Yakovlev V.A. Kinetic manifestations of allosteric interactions in models of11regulatory enzymes with „indirect co-operativity. J. Theor. Biol., 1974, v. 47, H 1, p. 1-41.

108. Kurganov B.I., Dorozhro A.I. , Kagan Z.S., Yakovlev V.A., The theoretical analys of kinetic behaviour of "histeretic" allosteric enzymes. I. The Kinetic manifestations of slow conformational Changes of an oligomeric enzyme in the

109. Monod, Wyman and Changeux Model . 3« Theor, Biol.,1976, v. 60, N 1, p. 247-269.

110. Landfear S.M., Lipscomb W.N. Functional modifications of aspartate transcarbamylase induced by nitration with tetra-nitromethane. J. Biol Chem., 1978, v. 253, N 11, p. 39883996.

111. Lawrence F.K., Laskowski M., The basic trypsin in hibitor of bovine pancreas. VII. Reduction with borohydride of disulfide bond linking half-cystine residues 14 and 28. -J. Biol. Chem., 1967, v. 242, N21, p. 4925-4929.

112. Leitzmann C., Bernlohr R.W. Threonine dehydratase of Bacillus licheniformis. II. Purification and properties. -Biocheim. et Biophis. acta, 1968, v. 2151, N 2, p. 449-460.

113. Lessie I.G. Neidhardt F.C. Formation and operationof the histidine-degrading pathway in Pseudomonas aeruginosa. -F. Bacteriol., 1967, v. 93, Я 6, p. 1800-1810.

114. Lessie T.G., Whitely H.R. Properties of threonine deaminase from a bacterium able to use threonine as sole source ofcarbon. J. Bacteriol., 1969, v. 100, N 2, p. 878889.

115. Madsen N.B. The interaction of muscle phosphorylasewith p-chloromercuribenzoate. I. Inhibition of activity and effect on the molecular weight. J. Biol. Chem., 1956, v. 223, N 2, p. 1067-1074.

116. Madsen N.B., Cori C.P. The interaction of muscle phosphorylase with p-chloromercuribenzoate. II.A study by light scattering. J. Biol. Chem., 1956, v. 223, N 2, p. 10551065.

117. Magee P.T. Regulation of amino acid metabolismin yeast , different points of involvement in regulation for threonine deaminase and isoleucyl-t-RNA synthase. Proc. 1-st. Intersect. Cong. Int. Ass. Microbiol. Soc., 1975, v. 1, p. 373-390.

118. Magee P.T., Robichon-Szulma^ster H. The regulation of isoleucine-valine biosynthesis in S. Cerevisiae. 3. Properties and regulation of the activity of acetohydroxy acid synthetase. jsur. J. Muochem., 1968, v. 3, N 4, p. 507511.

119. Mansour T.E., Coman R.F. Affinity, labeling of A1P-ADP sites in heart phosphofructokinase by 5-p-fluorosul-fonylbenzoyl adenosine» Biochem. and Biphys. Res. Commun., 1978, v. 81, N 4,p. 1370-1376.

120. Mansour T.E., Martensen T.M. Heart phosphofructokinase. Allosteric Kinetics following affincity labeling modification of the enzyme. J. Biol. Chem., 1978, v. 253, N 10, p. 3628-3634.

121. Martin K.G. The first enzyme in histidine biosynthesis: the nature of feedback inhibition by histidine. J. Biol. Chem., 1963, v. 238, 11, p. 257-268.

122. Mathias M.M., Kemp K.G. Allosteric properties of muscle phosphofructokinase. III. Thiol reactiovity as an indicator of conformational state. Biochemistry, 1972, v. 11, He4, p. 578-584.

123. Meighen E.A., Pigiet V.P., Schachman H.K. Hybridization of native and chemically modified enzyme. III. The catalytic subunits of aspartate transcarbamylase. Proc. Nat. Acad. Sci. USA., 1970, v. 65, N 1, p. 234-241.

124. Miyajima R., Shiio I. Regulation of aspartate family amino acid biosynthesis in Brevibacterium flavum. III. Properties of homoserine dehydrogenase. J. Biochem., 1970, v. 68. N 3, p. 311-319.

125. Monod J., Jacob J. Teleonomic mechanism in cellular metabolism, growth and differentiation. Cold. Spring Harbor Sympos. Quant. Biol. 1961, v. 2б/р. 389-401.

126. Monod J. Changeuz J.-P., Jacob J. Allosteric proteins and cellular control systems. J. Molec. Biol., 1963, v. 6,1. N 4, p. 306-329.

127. Monod J., У/ущап J., Changeux J.-P. On the natureof allosteric transitions: a plausible model. J. M'ol. Biol., 1965, v. 12, N 1, p. 88-118.

128. Muirhead H., Greer J. Three dimensional Fourierosynthesis of human deoxyhaemoglobin at 3,5A resolution. Nature, 1970, v. 229, N 5271, p. 516-519.

129. Muramatsu N., Uosoh Y., Some catalytic and molecur properties of threonine deaminase from Bacillus stearother-mophilus• J. Biochem., 1976, v. 80, N 3, p. 485-490.

130. Nishida M., Yielding K.L. Alteractions in catalytic and regulatory properties of glutamate dehydrogenase resulting from reaction with one molecle of ^ C-labeled methylmereuric iodide. Arch. Biochem. and Biophys., 1970, v. 141, N 2, p. 409-415.

131. Ohyama H., Yamada T. X-Ray modification of the allosteric functions of rat thymocyte phosphofructokinase. Biochem. et biophys. acta, 1973, v. 302, N 2, p. 261-266.

132. Pal P.K., Colman R. The importance of arginine residues in the catalytic and regulatory functions of bovine liver glutamate dehydrogenase. Eur. J. Biochem., 1976, v. 68,1. N 3, P. 437-443.

133. Pal P.K., Colman R.P. Affinity labeling of an allosteric GTP site of bovine liver glutamate dehydrogenase by 5-p-fluorosulfonylbenzoylguanosine. Biochemistry, 1979, v. 18,1. N 5, p. 838-845.

134. Palacian E., Neet K.E. Pyruvate carboxylase. Effect of the chemical modification of the sulfhydryl groups on the activity and quatermary structure. Biochem. et biophys. acta, 1970, v 212, N 1, p. 158-169.

135. Perutz M.F., Muirhead H., Cox J.M., Goaman X.C.G* Three-dimensional Fourier synthesis of horse oxyhemoglobinoat 2,8 A resolution! the atomic model. Nature. 1968, v. 219, IT 5150, p. 131-139.

136. Phelps C., Hateli Y. Inhibition of D (-) hydroxyfcu-tyrate dehydrogenase by butanedione, phenylglyoxal, and diethyl pyrocarbonate. - Biochemistry, 1981, v. 20, N 3, P* 459-463.

137. Piszkiewicz D., Landon M., Smith E. Bovine glutamate dehydrogenase. Loss of allosteric inhibitiry by guanosine triphosphate and nitration of tyrosine 412. J. Biol, chem., 1971, v. 246, N 5, p. 1324-1329.

138. Pontremoli S., Grazi E., Accorsi A. Fructose diphos-phatase from rabbit liver. VIII. The involvement of tyrosine residues in the catalytic activity. J. Biol. Chem., 1967,v. 242, N 1, p. 61-66.

139. Prisco G. Effect of pH and ionic strength on the catalytic and allosteric properties of native and chemically modified ox liver glutamate dehydrogenase. Arch. Biochem. and Biphys., 1975, v. 171, N 2, p. 604-612.

140. Ramos F., Wiame J.-M. Occurence of catabolic L-serine1.threonine) deaminase in Saccharomyces cerevisiaie. -Eur. J. Bi^hem., 1982, v.123, N 3, p. 571-576.

141. Ray M., Bhaduri A. Presence of two conformationally vicinal sulfhydryl groups at the active site of UDP-glucose-4-epimerase from Saccharomyces fragilis. J. Biol. Chem., 1980, v. 255. N 22, p. 10771-10781.

142. Ray W.J., Koshland D.E. Jr. A method for characterizing the type and numbers of groups involved in enxyme action. -J. Biol. Chem., 1961, v. 236, IT 7, p. 1973-1979.

143. Robichon-Szulmajster H., Magee P.T. The regulation of isoleucinevaline biosynthesis in Saccharomyces cerevisiae.

144. Threonine deaminase. Eur. J. Biochem., 1968, v. 3, N 4, p. 492-501.

145. Rodriguez J.M., Potot H.C. Studies oiijthe conversion of multiple forms of tyrosine aminotransferase in rat liver. -Arch. Biochem. B^phys., 1976, v. 177, N 1, p. 185-195.

146. Rogers K.S., Thompson T.E., Hellerman L. The effects of silver ions, organic mercurials and jiH on the dissociation of bovine liver glutamate dehydrogenase. Biochem. et biophys. acta, 1962, v. 64, N 1, p. 202-204.

147. Ronca-Testoni S., Ronca G. Musele 5-adenylic acid aminohydrolase. Kinetic properties of rat muscle enzyme treated with pyridoxal-5-phosphate. J. Biol. Chem, 1974, v. 249,1. U 24, p.» 7723-7728.

148. J. Biol. Chem., 1967, v. 242, N 11, p. 2760-2763.

149. Rosental H.K. A graphic method for the determination and presentation of binding parameters in a complex system.-Analyt. , Biochem., 1967, v. 20, N 3, p. 525-532.

150. Rosner A. Control of lysine biosynthesis in Bacillus subtilis: inhibition of diaminopimelate decarboxylase by lysine. J. Bacteriol., 1975, v. 121, N 1, p. 20-28.

151. Rozengurt E., de Asua L.J., Carminatti H. Allosteric inhibition of muscle pyruvate Kinase by phenylalanine. FEBS Lett., 1970, v. 11, N 4, p. 284-286.

152. Ryan E.D., Kohlhaw G.B. Subcellular localizationof isleucine-valine biosynthetic enzymes in yeast. J. Bacteriol., 1974, v. 120, N 2, p. 631-637.

153. Sancher C., Changeux J.-P., Sur les propriétés de la L-threonine desaminase de biosynthese d'un mutant d'E.coli K-12. Bull. Soc., chim. biol., 19bb, v. 48, N 5, p. 705713.

154. Sanner T., Pihl A. Effect of X-rays on the regulatory functions of glutamate dehydrogenase from beef liver. Rad. Res., 1972, v. 51., N 1, p. 155-166.

155. Sanwal B.D., Wright J.A., Smando R. Al&osieric control of the activity of malic enayrae in E. coli. Biochem. and Biophys. Res. Commun., 1968, v. 31, N 4., p. 623-627.

156. Saunders G.C., Weber B.H. Investigation of the role of lysine in the subunit contact regions of rabbit muscle aldolase. Arch. Biochem. and Biphys., 1975, v. 168, N 2, p. 525-530.

157. Schlessinger J., Levitzki A. Molecular basis of negative cooperativity in rabbit muscle glyceraldehyde-3-phospa-te dehydrogenase. J. Mol. Biol., 1974, v. 82, H 4, p. 547561.

158. Schwab A., Lukton A. Oxidation and sulfonation of the highly reactive sulfhydryl groups of muscle phosphorylase b. Biochemistry, 1974, v. 13, N 19,.p. 3840-3845.

159. Seehra J.S., Gore M.G., Chaudhry A.G., Jordan P.M. 5-Aminolevulinic acid dehydratase. The role of sulfhydryl groups in 5-aminolevulinic acid dehydratase from bovine liver. Eur. J. Biochem., 1981, v. 114, N 2, p. 263-269.

160. Sedmak J.J., Grossberg S.E. A rapid sensitive and versatile assay for protein using coomassie brilliant blue G-250. Analyt.- Biochem., 1977, v. 79, N 3, p. 544-552.

161. Shizuta X., Hayashi 0. Regulation of biod;egradative threonine deaminase. Curr. Top. Cell. Regulat., 1976, v. 11, p. 90-146.

162. Simpson R.B. Association constans of methylmercury with sulfhydryl and other bases. J. Am. Chem. Soc., 1961, v. 83, N 23, p. 4711-4717.

163. Subramani S., Schachman H.K. The mechanism of dissociation of aspartate transcarbamoylase by p-mercuriben-zoate. J. Biol. Chem., 1981, v. 256. IT 3, p. 1255-1262.

164. Suda H., Zu-Gen-Jun, Kutny R.M., Hatalini P., Pontre-moli S., Horecker B.L., Location of lysyl residues at the allosteric site of fructose-1,6-bisphosphatase. Arch. Biochem. and Biphys., 1982, v. 217, I 1, p. 10-14.

165. Suzuki T., Abiko T., Shimuzu M. Activation and inhibition of purified phospotransacetylase from Escherichiacoli B by pyruvate and NADI^ and certain nucleotides. Biochem. and Biphys. Res. Commun., 1969 , v. 35, H 1, p. 102-108.

166. Szabolcsi G., Biszku E., Szorenyi E. Comparative studies on D-glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase. VII. Studies on the digestibility of the enzyme isolated from various mammals. Biochim. et Biophys. acta, 1959, v. 35, IT 1,p. 237-241.

167. Szentirmai A., Horvath I. Properties of threonine deaminase in Mycobacterium pellegrino. Acta microbiol. Acad. Sci. Hung., 1970, v. 17, H 1, p. 17-27.

168. Van Tol A. Regulatory sulfhydryl groups, Conformational change and allosteric inhibition in rabbit muscle fructose diphosphatase. Arch. Biochem. Biophys., 1974, v. 162, IT 1,p. 238-247.

169. Umbarger H.E. Evidence for a negativefeedback mechanism in the biosynthesis on isoleucine. Sciense, 1956, v. 123, N 3201, p. 848.

170. Umbarger H.E., Brown B. Threonine deamination in Escherichia coli. II. Evidence for two L-threonine deaminases. -J. Bacterid., 1957, v. 73, K 1, p. 105-112.

171. Umbarger H.E. Amino acid biosynthesis and its regulation. Ann. Rew. Biochem., 1978, v. 47, p. 533-606.

172. Warren S.G., Edwards B.F.P., Evans D.R., Wiley D.C., Lipscomb W.N. Aspartate transcarbamoylase from Escherichiaocoli: electron density at 5,5 A resolution. Proc. Nat. Acad.

173. Sci. USA, 1973, v. 70, N 4, p. 1117-1121.

174. Webster R.E., Gross S.R. Glutamine synthetase of Basillus stearothermophilus. II. Regulation and thermostability. -Biochemistry, 1974, v. 13, N 16, p. 3215-3221.

175. Weng L., Heinrikson R.L., Mansour T.E. Amino acid sequence at the allosteric site of sheep heart phosphofructo-kinase. J. Biol. Chem., 1980, v. 255, N 4, p. 1492-1496.

176. Wiley D.C., Lipscomb W.N. Crystallographic determination of symmetry of aspartate transcarbamylase. Nature, 1968, v. 218., N 5147, p. 1119-1121.

177. Williams V.R., Lartique D.J. Quanternary structureand certain allosteric properties of aspartase. J. Biol Chem., 1967, v. 242, N 12, p. 2973-2978.

178. Williams V.R., Scott R.M. Nucleotide effectors of aspartase. Biochem. and Biophys. Res. Commun., 1968, v. 31, N 3, p. 433-437.

179. Wu T.-W., Scrimgeour K.G. Properties of inosinic acid dehydrogenase from Bacillus subtilis. II. Kinetic properties. Canad . J. Biochem., 1973, v. 51, N 10, p. 13911398.

180. Yates R.A. Pardee A.B. Control of pyrimidine biosynthesis in Escherichia coli by a feedback mechanism. J. Biol. Chem., 1956, v. 221, N 2, p. 757-770.

181. Yun S., Suelter C.H. Kinetic study of yeast pyruvate kinase after modification of exposed sulf-hydryl residues. J. Biol. Chem., 1979, v. 254, N 6, p. 1806-1810.-.