Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Сравнительный анализ структурно-функциональных особенностей глюкоамилаз из Saccharomyces cerevisiae и Aspergillus awamori

ВАК РФ 03.00.02, Биофизика

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Кожокина, Оксана Михайловна

ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

ГЛАВА 1. Современные представления о механизме действия ферментов.

ГЛАВА 2. Структурно-функциональные свойства амилолитических ферментов.

2.1. Основные представления о структурных особенностях амилаз.

2.2. Физико-химические свойства и механизм действия амилолитических ферментов.

2.3. Применение амилолитических ферментов.

2.4. Особенности структуры и функции глюкоамилазы.

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

ГЛАВА 3. Объекты и методы исследований.

3.1. Объекты исследований.

3.2. Методы исследований.

3.2.1. Глюкозооксидазный метод определения каталитической активности глюкоамилазы.

3.2.2. Очистка и определение молекулярной массы ферментов методом гель-хроматографии.

3.2.3. Подготовка образцов для анализа методом инфракрасной спектрофотометрии (ИКС).

3.2.4. Аналитический электрофорез белков по модифицированному методу Дэвиса.

3.2.5. Цифровая методика дифференциально-термического анализа (ДТА) для исследования процесса термической инактивации белков.

3.2.6. Метод получения компьютерных моделей пространственной структуры белковых молекул на базе программы MolScript.

3.2.7. Фотоокисление белков в присутствии метиленового голубого.

3.2.8. Статистическая обработка результатов экспериментов.

ГЛАВА 4. Выделение, очистка и исследование некоторых физико-химических свойств глюкоамилаз из Saccharomyces cerevisiae JTB-7 и

Aspergillus awamori.

ГЛАВА 5. Кинетико-термодинамические аспекты процесса термической инактивации глюкоамилаз.

ГЛАВА 6. Сравнительный анализ аминокислотных последовательностей и особенностей вторичной структуры глюкоамилаз различного происхождения.

ГЛАВА 7. Особенности строения активного центра глюкоамилазы.

Молекулярный механизм катализа реакции гидролиза крахмала.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Сравнительный анализ структурно-функциональных особенностей глюкоамилаз из Saccharomyces cerevisiae и Aspergillus awamori"

Актуальность проблемы. В последние десятилетия при совершенствовании многих биотехнологических процессов широко используются амилазы микроорганизмов, которые заменяют и вытесняют энзимы растительного и животного происхождения. Исследование структурно-функциональных свойств амилолитических ферментов приобретает особую значимость в связи с применением их в различных отраслях промышленности в роли биокатализаторов, а также в медицине в качестве лекарственных препаратов. Особый теоретический и практический интерес представляют исследования по выявлению оптимальных режимов функционирования ферментных препаратов глюкоамилазы (а-1,4:1,6-глюкан-4,6-глюкогидролазы, КФ 3.2.1.3), осуществляющих гидролиз гликозидных связей в молекулах крахмала. Использование глюкоамилазы в биотехнологии в роли катализатора связано с подбором эффективных продуцентов данного энзима, в качестве которых в нашей работе предложены микромицеты Aspergillus awamori и дрожжи Saccharomyces cerevisiae J1B-7. Поиск путей регулирования биокаталитической активности фермента неразрывно связан с расшифровкой закономерностей и молекулярного механизма катализа реакции гидролиза субстрата. Для решения поставленной задачи необходимо осуществить детальное исследование физико-химических, кинетико-термодинамических свойств глюкоамилазы, особенностей первичной, вторичной, третичной структуры этого энзима, провести идентификацию функциональных групп его активного центра.

Выполненная нами работа проведена в соответствии с тематикой научных исследований кафедры биофизики и биотехнологии Воронежского госуниверситета, входящей в координационный план научно-исследовательских работ РАН.

Цели и задачи исследования. Целью данной работы является проведение сравнительного анализа структурно-функциональных особенностей глюкоамилаз из Saccharomyces cerevisiae и Aspergillus awamori.

Для достижения поставленной цели предусматривалось решение следующих задач:

• разработка эффективной методики выделения и очистки препарата глюкоамилазы из дрожжей S. cerevisiae JIB-7;

• исследование некоторых физико-химических свойств ферментов из S. cerevisiae и Asp. awamori;

• изучение кинетико-термодинамических аспектов реакции гидролиза крахмала глюкоамилазами плесневого и дрожжевого происхождения;

• создание модели перехода типа «упорядоченная , глобула -хаотический клубок» в процессе денатурации белковых макромолекул объектов исследования;

• анализ аминокислотных последовательностей изучаемых ферментов для выявления гомологичных фрагментов их полипептидных цепей;

• определение соотношения типов вторичной структуры и их топографии в пространственной модели молекул глюкоамилазы из S. cerevisiae и Asp. awamori;

• идентификация и установление местоположения функционально-значимых групп в активном центре ферментов плесневого и дрожжевого происхождения.

Научная новизна.

- впервые в качестве источника глюкоамилазы предложен штамм хлебопекарных дрожжей S. cerevisiae JIB-7; разработаны эффективные методы выделения и очистки данного фермента;

- выявлены оптимальные режимы функционирования ферментных препаратов глюкоамилазы из S. cerevisiae и Asp. awamori;

- рассмотрены основные этапы процесса термической инактивации глюкоамилаз, выделенных из S. cerevisiae и Asp. awamori;

- предложена модель перехода глобула-клубок, включающая промежуточные стадии процесса разворачивания белковой молекулы глюкоамилазы;

- осуществлен анализ первичных структур глюкоамилаз рода Saccharomyces и Aspergillus; выявлены гомологичные фрагменты их полипептидных цепей;

- с помощью методов ИК-спектрофотометрии и компьютерного моделирования осуществлено изучение особенностей вторичной структуры глюкоамилаз плесневого и дрожжевого происхождения; выявлена топология всех составляющих элементов в третичной структуре молекул этих ферментов;

- осуществлена идентификация функциональных групп активных центров глюкоамилаз из S. cerevisiae и Asp. awamori;

- с привлечением экспериментальных данных и результатов компьютерного моделирования предложен молекулярный механизм катализа реакции гидролиза гликозидных связей в молекуле крахмала с помощью глюкоамилазы.

Практическая значимость. Результаты исследований дают дополнительную информацию о процессах термической инактивации белковых молекул, позволяют расширить представления о молекулярных механизмах ферментативного расщепления полисахаридов. Подобранные рациональные условия функционирования глюкоамилаз, выделенных из различных источников, могут применяться для оптимизации режимов реакций катализа в биотехнологическом производстве. Полученные данные могут быть использованы при чтении студентам биологических факультетов ВУЗов курсов «Химическая энзимология», «Физико-химическая биология», «Молекулярная биология и биофизика», «Биофизика».

Апробация работы. Основные результаты диссертационной работы были представлены на VI Международной конференции «Экология и здоровье человека. Экологическое образование. Математические модели и информационные технологии» (Криница, 2001), Научной сессии сотрудников Воронежского государственного университета (Воронеж, 2001), II

Международном симпозиуме «Фракталы и прикладная синергетика» (Москва, 2001), IX Международной конференции «Математика. Компьютер. Образование» (Дубна, 2002), 6-й Пущинской школе-конференции молодых ученых «Биология - наука XXI века» (Пущино, 2002), Международной школе-семинаре «Нелинейные процессы в дизайне материалов» (Воронеж, 2002), II Научной конференции «Современные наукоемкие технологии» (Хургада (Египет), 2003).

Публикации. По теме диссертационной работы имеется 10 публикаций: из них 3 статьи и 7 тезисов.

На защиту выносятся следующие положения:.

1. Эволюционная близость молекул глюкоамилаз плесневого и дрожжевого происхождения, характеризующихся низкой степенью гомологичности полипептидных цепей, проявляется на более высоких уровнях иерархии белковых глобул.

2. Делеции и замены остатков в полипептидных цепях глюкоамилаз рода Aspergillus не затрагивают функционально значимых групп их активных центров, располагающихся в консервативных областях аминокислотных последовательностей белковых молекул.

3. Высокая степень подобия пространственной организации белковых молекул глюкоамилазы из S. cerevisiae и Asp. awamori определяет идентичность механизмов катализа гидролиза крахмала, осуществляемого данными ферментами.

4. Разворачивание белковой глобулы глюкоамилазы вследствие термической денатурации не является кооперативным процессом, а включает ряд промежуточных состояний.

5. Схема процессов гипотетического механизма катализа гидролиза а-1,4-гликозидных связей в молекуле крахмала.

Структура и объем работы.

Диссертационная работа включает 177 страниц машиннописного текста; состоит из Введения, 7 Глав, Заключения, Выводов, Списка литературы (220

Заключение Диссертация по теме "Биофизика", Кожокина, Оксана Михайловна

выводы

1. Разработанная методика очистки, включающая стадии ультрафильтрации на мембране УФМ-50, осаждения изопропиловым спиртом и гель-хроматографии на сефадексах G-25 и G-100, позволила получить гомогенный препарат глюкоамилазы из культуральной жидкости дрожжей S. cerevisiae JIB-7 с 70-кратной степенью чистоты.

2. Оптимальными условиями функционирования фермента плесневого происхождения являются: t° = 40°С, рН = 4,7, [S] = 1,16 ' 10"6 моль/л; для энзима из дрожжей данные параметры составляют: t° = 37°С, рН = 4,7, [S] = 1,17 ' 10"6 моль/л.

3. Препарат глюкоамилазы из дрожжей S. cerevisiae является менее термостабильным, чем фермент плесневого происхождения. Действие температур 80-82°С приводит к необратимой денатурации молекул этих ферментов.

4. Процесс термической инактивации глюкоамилаз как переход между макроскопическими состояниями «упорядоченная глобула - хаотический клубок» характеризуется сменой трех промежуточных стадий.

5. Аминокислотные последовательности глюкоамилаз из Asp. awamori и S. cerevisiae гомологичны на -13%.

6. Функционально- важные группы всегда локализованы в консервативных областях первичных структур ферментов, эволюционно близких друг другу. Делеции и вставки отдельных аминокислотных остатков и их цепочек не затрагивают каталитический домен молекулы глюкоамилазы.

7. В образовании упорядоченных элементов вторичной структуры задействованы -66% всех аминокислотных остатков полипептидных цепей глюкоамилаз из Asp. awamori и S. cerevisiae. а-Спирали и Р-слои не имеют четко выраженной тенденции располагаться в каких-либо определенных местах третичной структуры (внутри или на поверхности глобулы, в области N- или С-конца).

8. На основании результатов определения величин рК диссоциирующих групп, фотоокисления белков в присутствии метиленового голубого и компьютерного моделирования выявлено, что в состав активного центра молекул глюкоамилаз из Asp. awamori и S. cerevisiae входят индольное кольцо остатка триптофана и три карбоксильные группы аспарагиновой и глутаминовой кислот.

9. За образование фермент-субстратного комплекса ответственными являются О-гликозилированные участки крахмалсвязывающего домена молекулы глюкоамилазы и Тгр-120. Гидролиз а-1,4-гликозидных связей в молекуле крахмала осуществляется карбоксильными группами пары Asp-Glu, обладающими протон-акцепторными и протон-донорными свойствами.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Для исследования структурно-функциональных свойств нами были получены гомогенные препараты глюкоамилазы из Aspergillus awamori и Saccharomyces cerevisiae JIB-7.

Оптимальными режимами функционирования энзима плесневого происхождения являются: t = 40°С, рН = 4,7, [S] = 1,16 " 10'6 моль/л; для фермента из дрожжей данные параметры составляют: t = 37°С, рН = 4,7, [S] = 1,17' 10"6 моль/л.

Изучение физико-химических свойств глюкоамилаз позволило выявить узкий диапазон значений температур проявления каталитической активности фермента из S. cerevisiae, в связи с чем был проведен ряд экспериментов, позволивший изучить процесс термической инактивации энзимов, относящихся к различным систематическим группам. Исследование термостабильности препаратов глюкоамилаз, кинетико-термодинамических параметров термоинактивации, а также дифференциально-термический анализ конформационных переходов в белковой глобуле указывают на однотипность протекания механизма термической инактивации для ферментов как дрожжевого, так и плесневого происхождения. На основе полученных результатов нами предложена схема процесса перехода типа «упорядоченная глобула - хаотичный клубок» для молекулы глюкоамилазы, включающая ряд промежуточных стадий.

Для проведения корректного исследования механизмов действия глюкоамилаз, выделенных из различных источников, был осуществлен сравнительный анализ структур их белковых макромолекул.

В итоге выполненных исследований установлена гомологичность первичных структур глюкоамилаз из Asp. awamori и Saccharomyces cerevisiae на -13%. Обнаружена высокая степень корреляции одиночных аминокислотных остатков; встречаемость дуплетов и триплетов наблюдается гораздо реже. Выявлено, что основное количество гомологичных звеньев представлено остатками Ser и Thr, обеспечивающих хорошую гидратацию ферментов и служащих местами присоединения углеводных компонентов в гликопротеидах. Высокое содержание остатков с алкильными боковыми цепями (Ala, Val, Leu, lie, Met) в молекуле глюкоамилазы из Asp. awamori указывает на устойчивость этого энзима к действию органических растворителей.

Для выявления константных областей аминокислотных последовательностей ферментов узкой группы был осуществлен сравнительный анализ сиквенсов субъединиц глюкоамилаз из микромицетов рода Aspergillus: Asp. niger, Asp. awamori XI00, Asp. awamori var. kawachi, Asp. shirousami, Asp. oryzae. Обнаружено, что первичные структуры рассматриваемых белковых молекул гомологичны друг другу на -86%.

Выявлено, что в состав константных областей полипептидных цепей глюкоамилаз плесневого происхождения входят остатки Asp, Glu и Тгр, что позволяет предположить их участие в осуществлении катализа реакции гидролиза гликозидных связей в молекуле крахмала.

Сопоставление первичных структур глюкоамилаз Asp. specias показало, что частота замен остатков на протяжении полипептидных цепей отличается высокой вариабельностью. Установлено, что делеции аминокислот затрагивают только О-гликозилированный домен белковой глобулы и не отражаются на функциональных свойствах фермента. Анализ топологии остатков Cys в полипептидной цепи исследуемых глюкоамилаз показал, что данные аминокислоты занимают жестко фиксированные позиции и входят в состав абсолютно идентичных участков первичной структуры, обусловливая существование системы дисульфидных связей. Итог сравнения аминокислотных последовательностей субъединиц глюкоамилаз из микромицетов рода Aspergillus представлен в виде схемы. Высокая степень гомологичности показана для ферментов из Asp. awamori XI00 и Asp. shirousami; самые существенные различия обнаружены между глюкоамилазми из Asp. awamori XI00 и Asp. oryzae.

Для выявления особенностей вторичной структуры были зарегистрированы ИК-спектры препаратов глюкоамилазы из Asp. awamori и S. cerevisiae. Установлено, что соотношение упорядоченных структур и нерегулярных участков в молекулах изучаемых ферментов статистически не отличаются друг от друга. Для уточнения информации о вторичной структуре глюкоамилаз различного происхождения, полученной методом ИК-спектрофотометрии, были построены трехмерные изображения всех ее элементов с помощью программы моделирования протеиновых и протеидовых структур MolScript. Анализ топологии и соотношения различных типов вторичной структуры показал, что для фрагмента субъединицы молекулы глюкоамилазы из Aspergillus awamori характерна плотная упаковка ядра в виде 13 ос-спиралей, 11 Р-слоев и 19 неупорядоченных участков; для фермента из Saccharomycopsis fibuligera, взятого в качестве представителя энзима дрожжевого происхождения, свойственно наличие 13 ос-спиралей, 13 Р-слоев и 23 аморфных участков. Выявлено, что Р-структура изучаемых энзимов имеет антипараллельные цепи. Показано, что -66% аминокислотных остатков полипептидных цепей глюкоамилаз из Asp. awamori и S. fibuligera задействованы в образовании упорядоченных элементов вторичной структуры. Топология ос-спиралей, Р-структур и неупорядоченных участков в молекулах анализируемых белков свидетельствует об их эволюционной близости.

С привлечением методов графического определения величин констант ионизации (рК), фотоокисления белков в присутствии метиленового голубого и компьютерного моделирования установлены функционально значимые группы активного центра глюкоамилаз. Найденное значение рК| =3,8 соответствует величине рК карбоксильных групп Asp и Glu; значение рК2 =5,2 не имеет однозначной трактовки. Фотоокисление ферментных препаратов в п присутствии метиленового голубого (10" моль/л) позволило исключить участие остатка гистидина в акте катализа реакции гидролиза крахмала и отнести рК2 =5,2 к отклонению значения рК карбоксильной группы Asp или Glu от ожидаемой величины, обусловленному влиянием микроокружения данных остатков. Метод компьютерного моделирования дал возможность установить порядковый номер и положение каталитически активных групп в полости активного центра молекулы глюкоамилазы из Asp. awamori: Asp-55, Glu-179 и Glu-400, а также Тгр-120, выполняющего субстратсвязывающую функцию, фотоокисление которого в присутствии метиленового голубого мы, очевидно, и наблюдали. Топология His-254, находящегося вблизи активного центра фермента, на стыке а-спирального и аморфного участков указывает на высокую мобильность данного остатка при изменении физико-химических условий, а также факторов микроокружения, и подтверждает нашу гипотезу о его пассивном отношении к акту катализа.

Анализ пространственных моделей субъединиц молекул глюкоамилазы из Asp. awamori и S. fibuligera позволил выявить следующие черты сходства третичной структуры этих ферментов: 1) аналогичную плотную упаковку гидрофобного ядра; 2) положение активного центра в полости (щели), наличие в нем молекул Н20; 3) участие в каталитическом акте карбоксильной группы Glu.

На основе экспериментальных данных и результатов компьютерного моделирования нами предложена схема гипотетического механизма гидролиза а-1,4-гликозидных связей в молекуле крахмала. Показано, что ответственными за связывание субстрата являются О-гликозилированные участки крахмалсвязывающего домена молекулы глюкоамилазы и Тгр-120; расщепление гликозидных связей осуществляет пара Asp-55 - Glu-X, обладающая выраженными донорно-акцепторными свойствами. Установлено, что именно суммарный электрический заряд полости активного центра фермента, различный на каждой стадии процесса катализа, обеспечивает внедрение молекулы крахмала в «активную полость», ее фиксацию и протягивание через щель в процессе гидролиза до глюкозы.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Кожокина, Оксана Михайловна, Воронеж

1. Диксон М. Ферменты / М. Диксон, Э. Уэбб: В 3 т./ Пер. с англ. Л.М. Гинодмана, М.И. Левянт; Под ред. В.К. Антонова, А.Е. Браунштейна. М.: Мир.-Т. 1,- 1982.-392 с.

2. Цыперович А.С. Ферменты / А.С. Цыперович. Киев: "Техшка", 1971. -360 с.

3. Березин И.В. Практический курс ферментативной кинетики / И.В. Березин, А.А. Клесов. М.: Изд-во МГУ, 1976. - 320 с.

4. Попов Е.М. Структурная организация белков / Е.М. Попов. М.: Наука, 1989.-361 с.

5. Попов Е.М. Структурно-функциональная организация белков / Е.М. Попов. -М.: Наука, 1992.-358 с.

6. Волькенштейн М.В. Молекулярная биофизика / М.В. Волькенштейн. М.: Наука, 1975.-503 с.

7. Блюменфельд Л.А. Проблемы биологической физики / Л. А. Блюменфельд. -М.: Наука, 1974.-336 с.

8. Ленинджер А. Биохимия / А. Ленинджер. М.: Мир, 1976. - 957 с.

9. Овчинников Ю.А. Биоорганическая химия / Ю.А. Овчинников. М.: Просвещение, 1987. - 815 с.

10. Келети Т. Основы ферментативной кинетики / Т. Келети. М.: Мир, 1990. -352 с.

11. Березин И.В. Основы физической химии ферментативного катализа / И.В. Березин, К. Мартинек. М.: Высш. шк., 1977. - 280 с.

12. Кретович В.Л. Введение в энзимологию / В.Л. Кретович. М.: Наука, 1986. -336 с.

13. Чернавский Д.С. Концепция «белок-машина» и ее следствия / Д.С. Чернавский, Ю.И. Хургин, С.Э. Шноль // Биофизика. 1987. - Т. 32, вып. 5. -С. 775-781.

14. Кантор Ч. Биофизическая химия / Ч. Кантор, П. Шиммел: В 3 т./ Пер. с англ. А.А. Богданова, Ю.С. Лазуркина, М.Д. Франк-Каменецкого; Под ред. А.А. Богданова.- М.: Мир.-ТЛ 1984.-336 с.

15. Refined crystal structures of glucoamylase Aspergillus awamori Var. XI00 / A.E. Aleshin, C. Hoffmann, L.M. Firsov et. al. // J. Mol. Biol. 1994. - Vol. 238, №6.-P. 575-591.

16. Liljas A. X-Ray studies of protein interactions / A. Liljas, M. G. Rossmann // Ann. Rev. Biochem. 1974. - Vol. 43. - P. 475-507.

17. Structure-function relationships in glucoamylases encoded by variant Saccharomycopsis fibuligera genes / A. Solovicova, T. Christensen, E. Hostinova et. al. // Eur. J. Biochem. 1999. - Vol. 264, № 8. - P. 756-764.

18. Kendrew J.C. The three-dimensional structure of a protein molecule / J.C. Kendrew//Sci. Am. 1961. - Vol. 205.-P. 96-110.

19. Perutz M.F. Structure and mechanism of haemoglobin / M.F. Perutz // Brit. Med. Bull. 1976.-Vol. 32, №3,-P. 195-208.

20. Lysozyme / Eds. E.E. Osserman, R.E. Confield, S. Beychok. New York, 1974. -334 p.

21. Kraulis P. MOLSCRIPT: a program to produce both detailed and shematic plots of protein structures / P. Kraulis // J. Appl. Grystallogr. 1991. - Vol. 24. - P. 946-950.

22. Сюняев Ш.Р. Использование множественного структурного выравнивания для распознавания типа пространственной архитектуры белка / Ш.Р. Сюняев, Ф. Айзенхабер, В.Г. Туманян // Биофизика. 1999. - Т. 44, вып. 4. -С. 620-623.

23. Dynamical probe microscopy of lysozyme crystal growth / L.N. Rashkovich, N.V. Gvozdev, M.I. Sil'nicova et. al. // Scanning Probe Microscopy 2002: Proceedings of International Workshop, March 3-6 2002, N. Novgorod. - N. Novgorod, 2002.-P. 199.

24. Моделирование пространственной структуры белков с помощью метода тритиевой планиграфии / Е.Н. Богачева, А.П. Мороз, А.В. Шишков и др. //

25. Съезд биофизиков России, Москва, 23-27 авг. 1999 г.: Тез. докл. М., 1999.-Т. 1.-С. 14-15.

26. Карплус М. Динамика белковой структуры / М. Карплус, Дж.Э. Мак-Каммон // В мире науки. 1986. - № 6. - С. 4-15.

27. Мажуль В.М. Внутримолекулярная динамика и функциональная активность белков / В.М. Мажуль, Е.М. Зайцева, Д.Г. Щербин // Биофизика. 2000. - Т. 45, вып. 6. - С. 965-989.

28. Гольданский В.И. Роль конформационных подсостояний в реакционной способности белковых молекул / В.И. Гольданский, Ю.Ф. Крупянский, Е.Н. Фролов // Молекулярная биология. 1983. - Т. 17, № 3. - С. 532-542.

29. Исследование динамики белков методами мессбауэровской спектроскопии / Ю.Ф. Крупянский, К.В. Шайтан, В.И. Гольданский и др. // Биофизика. -1987. Т. 32, вып. 5. - С. 761-774.

30. Харакоз Д.П. Нелинейная упругость и динамика глобулярных белков / Д.П. Харакоз // Биофизика. 2000. - Т. 45, вып. 4. - С. 620-630.

31. Статистические распределения дипептидов в белковых структурах и динамические свойства некоторых белковых фрагментов / К.В. Шайтан, А .Я. Муковский, А.А. Беляков и др. // Биофизика. 2000. - Т. 45, вып. 3. -С. 399-406.

32. Структура и стабильность биологических макромолекул / Под. ред. М.В. Волькенштейна. М.: Мир, 1973. - 584 с.

33. Privalov P.L. Stability of proteins / P.L. Privalov // Adv. Protein. Chem. 1982. -Vol. 35.-P. 1-104.

34. Бирштейн T.M. Конформация макромолекул / T.M. Бирштейн, О.Б. Птицын. М.: Наука, 1964. - 391 с.

35. Richardson I.S. The anatomy and taxonomy of protein structure / I.S. Richardson // Adv. Prot. Chem. 1981. - Vol. 34. - P. 167-339.

36. Хорлин А.Я. Активные центры карбогидраз / А.Я. Хорлин // Структура и функции активных центров ферментов: Мат. симп. к 70-летию акад. Браунштейна. М., 1974. - С. 39-69.

37. Абатуров JI.В. Динамическая функциональная структура глобулярных белков / JI.B. Абатуров, Н.Г. Носова // II Съезд биофизиков России, Москва, 23-27 авг. 1999 г.: Тез. докл. -М., 1999.-Т. 1.-С. 7-8.

38. Аксенов С.И. Вода и ее роль в регуляции биологических процессов / С.И. Аксенов. -М.: Наука, 1990. 113 с.

39. Браунштейн А.Е. Процессы и ферменты клеточного метаболизма / А.Е. Браунштейн. М.: Наука, 1987. - 546 с.

40. Галич И.П. Амилазы микроорганизмов / И.П. Галич. Киев: Наук, думка, 1987.- 192 с.

41. Квеситадзе Г.И. Грибные и бактериальные амилазы / Г.И. Квеситадзе. -Тбилиси: Мецниереба, 1984. 154 с.

42. Takagi Т. Bacterial and mold amylases / Т. Takagi, H. Toda, Т. Isemura // Enzymes.- 1971.-№5.-P. 235-271.

43. Toda H. The complete aminoacid sequence Taka-amylase A / H. Toda, H. Kondo, K. Narita// Proc. Jap. Acad. 1982. - Vol. 588, № 2. - P. 208-212.

44. Seon B.K. Stepwise reduction of disulfide bonds in Taka- amylase A / B.K. Seon//Ibid. 1967.-Vol. 61, № 5.-P. 606-614.

45. Svensson B. The complete aminoacid sequence of the glycoprotein, glucoamylase GI, from Aspergillus niger / B. Svensson, K. Larsen, I. Svendsen // Ibid. 1983. - Vol. 48, № 4. - P. 529-544.

46. Anai M. The structure of glycopeptide obtain from Taka-amylase A / M. Anai, T. Ikenaka, Y. Matsushima // Ibid. 1966. - Vol. 59, № 1. - P. 57-62.

47. Pazur J.H. Comparison of the properties of glucoamylases from Rhizopus niveus and Aspergillus niger / J.H. Pazur, B. Lui, F. Mishel // Biotechnol. and Appl. Biochem. 1990.-Vol. 12, № l.-P. 63-78.

48. Substrate binding mechanism of Glu-180 ->Gln, Asp-176 -> Asn, and wild-type glucoamylases from Aspergillus niger / U. Christensen, K. Olsen, B. Stoffer et. al.//Biochemistry.- 1996.-Vol. 35, №47. -P. 15009-15010.

49. Степанов B.M. Молекулярная биология. Структура и функции белков: Учеб. для биол. спец. Вузов / В.М. Степанов; Под ред. А.С. Спирина. М.: Высш. шк., 1996.-335 с.

50. Шерман С.А. Конформационный анализ и установление пространственной структуры белковых молекул / С.А. Шерман, A.M. Андрианов, А.А. Ахрем. Минск: Наука и техника, 1989. - 240 с.

51. Шульц Г. Принципы структурной организации белков / Г. Шульц, Р. Ширмер /. Пер. с англ. В.Е. Шкловера; Под ред. Е.М. Попова. М.: Мир, 1982.-360 с.

52. Двойные и вилочковые водородные связи в а-спиралях глобулярных белков / А.В. Файн, И.Н. Березовский, В.О. Чехов и др. // Биофизика. -2001. Т. 46, вып. 6. - С. 273-278.

53. Yang A.-S. Free energy determinants of secondary structure formation. I. a -Helices / A.-S. Yang, B. Hang // J. Mol. Biol. 1995. - Vol. 252, № 3. - P. 351356.

54. Ефимов A.B. Стандартные структуры в белковых молекулах. I. а-(3-Шпильки / А.В. Ефимов // Молекулярная биология. 1986. - Т. 20, № 2. -С. 329-339.

55. Мурзин А.Г. Многогранники, описывающие укладку спиралей в белковой глобуле / А.Г. Мурзин, А.В. Финкельштейн // Биофизика. 1983. - Т. 28, № 5.-С. 905-911.

56. Crystal structure of the cell cycleregulatory protein sue 1 reveals a P-hinge conformational switch / Y. Bourne, A. Arvai, S. Bernstein et. al. // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1995. - Vol. 92, № 22. - P. 10232-10236.

57. Janecek S. Sequence similarities in a/p-barrel enzymes revealed by conserved regions of ос-amylase / S. Janesek // FEBS Lett. 1993. - Vol. 316, № 1. - P. 2326.

58. Janecek S. Functionally essential, invariant glutamate near the C-terminus of strand P 5 in various a/p B.-barrel enzymes as a possible indicator of their evolutionary relatedness / S. Janecek, S. Balaz // Protein Eng. 1995. - Vol. 8, № 8.-P. 809-813.

59. Machius M. Three-dimensional structure of calcium depleted thermostable a-amylase from Bacillus licheniformis at 2,2 A° resolution / M. Machius, G. Wiegand, R. Huber // Protein Eng. 1995. - Vol. 8, № 1. - P. 21.

60. Бреслер C.E. Введение в молекулярную биологию / С.Е. Бреслер. M.-JI.: Наука, 1966.-516 с.

61. Башаров М.А. Концепция посттрансляционного сворачивания белков: насколько она реалистична? / М.А. Башаров // Биохимия. 2000. - Т. 65, вып. 10.-С. 1400-1408.

62. Machius М. Crystal structure of calcium depleted Bacillus licheniformis a-amylase at 2,2 A° resolution / M. Machius, G. Wiegand, R. Huber // J. Mol. Biol. 1995. - Vol. 264, № 4. - P. 545-559.

63. Nucleotide sequence and expression of the glucoamilase encoding gene gla A from Aspergillus oryzae // Y. Hata, K. Tsuchiya, K. Kitamoto et.al. // Gene. -1991.-Vol. 108. - P. 145-150.

64. Structure of glucoamylase from Saccharomycopsis fibuligera at 1,7 A° resolution / J. Sevcik, A. Solovicova, E. Hostinova et. al. // Acta Crystallogr. -1998. Vol. 54, № 5. p. 854-866.

65. Influence of the carbogydrate moiety on the stability of glycoproteins / C. Wang, M. Eufemi, C. Turano et. al. // Biochemistry. 1996. - Vol. 35, № 23. - P. 72997307.

66. Kusunoki M. X-Ray structure and catalytic mechanism of Taka-amylase A / M. Kusunoki, Y. Matsuura, H. Tanaka // J. Jap. Soc. Starch. Sci. 1983. - Vol. 30, N2.-P. 141-147.

67. Toda H. Replacement of the essential calcium in Taka-amylase A with other divalent cations / H. Toda, K. Narita // Ibid. 1967. - Vol. 62, № 6. - P. 767768.

68. Perutz M.F. Stereochemistry of cooperative effects in haemoglobin / M.F. Perutz // Nature. 1970. - Vol. 228, № 5237. - P. 726-734.

69. Артюхов В.Г. Гемопротеиды: Закономерности фотохимических превращений в условиях различного микроокружения / В.Г. Артюхов. -Воронеж: Изд-во Воронеж, ун-та, 1995. 280 с.

70. Electron microscopy of negatively stained jackbean urease at three levels of quaternary structure, and comparison with hydrodynamic studies / W.N. Fishbein, W.F. Engler, J.L. Griffin et.al. // Eur. J. Biochem. 1977. - Vol. 73. -P. 185-190.

71. Rasched J.R. Studies of glutamate dehydrogenase. Analysis of quaternary structure and contract areas between the polipeptide chains / J.R. Rasched, A. Bohn, H. Sund // Eur. J. Biochem. 1977. - Vol. 74. - P. 365-377.

72. Tamaki N. Studies on the oligomeric structure of yeast aldehyde dehydrogenase by cross-linking with bifunctional reagents / N. Tamaki, K. Kimura, T. Hama // J. Biochem. 1978. - Vol. 83. - P. 821-825.

73. Bocker E.A. Arginine decarboxylase from Escherichia coli B: Mechanism of dissociation from the decamer to dimmer / E.A. Bocker // Biochemistry. 1978. -Vol. 17.-P. 258-263.

74. Артюхов В.Г. Кинетические закономерности фотоинактивации лактатдегидрогеназы под воздействием УФ-излучения в условиях различного микроокружения / В.Г. Артюхов, Ю.А. Лысенко, М.А. Наквасина//Биофизика. 2000. - Т. 45, вып. З.-С. 427-431.

75. Изучение некоторых свойств глюкоамилазы сорбционными и спектральными методами / Т.А. Ковалева, В.Ф. Селеменев, A.M. Плохих и др. // Теория и практика сорбционных процессов. Воронеж, 1985. - Вып. 17.-С. 58-61.

76. Трикуленко А.В. Термодинамические и стереохимические критерии оценки стабильности гидрофобных ядер глобулярных белков / А.В. Трикуленко // Биохимия. 1998. - Т. 63, вып. 11. - С. 1518-1522.

77. Лим В.И. Принципы формирования пространственной структуры белков и нуклеиновых кислот. Стереохимическое моделирование / В.И. Лим, Г.В. Аглямова // Молекулярная биология. 1999. - Т. 33, № 6. - С. 1027-1034.

78. Скугарев А.В. Поиск ядер сворачивания в пространственных структурах белков / А.В. Скугарев, О.В. Галзитская, А.В. Финкелылтейн // Молекулярная биология. 1999.-Т. 33, №6.-С. 1016-1026.

79. Птицын О.Б. Сворачивание белков: нуклеация и компактные интермедиаты / О.Б. Птицын // Биохимия. 1998. - Т. 63, вып. 4. - С. 435443.

80. Птицын О.Б. Самоорганизация белковых структур мост между физикой и биологией / О.Б. Птицын, А.В. Финкельштейн, К.М. Добсон // Молекулярная биология. - 1999.-Т. 33, № 6.-С. 1012-1015.

81. Мартин И. Фолдинг белка, протекающий с участием шаперониновой системы GroEL/GroES / И. Мартин // Биохимия. 1998. - Т. 63, вып. 4. - С. 444-452.

82. Фишер М.Т. Участие шаперонина GroE в фолдинге и сборке додекамерной глутаминсинтетазы / М.Т. Фишер // Биохимия. 1998. - Т. 63, вып. 4. - С. 453-472.

83. Марусич Е.И. Шапероны в сборке бактериофага Т4 / Е.И. Марусич, Л.П. Курочкина, В.В. Месянжиков // Биохимия. 1998. - Т. 63, вып. 4. - С. 473482.

84. Уонг Ч. Изомеразная и шаперонная активности протеиндисульфидизомеразы необходимы для ее функционирования как фолдазы / Ч. Уонг // Биохимия. 1998. - Т.63, вып. 4. - С. 483-490.

85. Курганов Б.И. Рефолдинг белков с участием искусственных шаперонов / Б.И. Курганов, И.Н. Топчиева // Биохимия. 1998. - Т. 63, вып. 4. - С. 491499.

86. Логинова Л.Г. Новые формы термофильных бактерий / Л.Г. Логинова, Л.А. Егорова. М.: Наука, 1977. - 175 с.

87. Имшенецкий А.А. Микробиологические процессы при высоких температурах / А.А. Имшенецкий. М.-Л.: Изд-во АН СССР, 1944. - 164 с.

88. Campbell L.L. Thermostable a-amylase of Bacillus stearothermofilus / L.L. Campbell, G.B. Manning // J. Mol. Biol. 1961. - Vol. 236, № 11. - P. 29622965.

89. Heinen W. Variability of molecular size of extracellular amylase produced by intact cells and protoplasts of Вас. caldolyticus / W. Heinen, A.M. Lauwers // Arch. Microbiol. 1975. - Vol. 106, №3. - P. 201-205.

90. Pavlova I.N. Termostable starch degrading enzymes from a strain of thermophilic Bacillus licheniformis / I.N. Pavlova, N.A. Kichakova // Microbiol. 1994.-Vol. 56, № l.-P. 91.

91. Kuo M.J. Isolation of amylolytic strains of Thermoactinomyces vulgaris and production of thermophilic actinomycete amylases / M.J. Kuo, P. A. Hartman // J. Bacteriol. 1966. - Vol. 92, № 3. - P. 723-726.

92. Studies on the amylase from Streptomyces hydroscopicus SF-1084 / H. Hidaka, Y. Koaze, K. Yoshida et. al. // J. Jap. Soc. Starch. Sci. 1974. - Vol. 25, № 2. -P. 148-154.

93. Obi S.K. Some properties of a nighly thermostable a-amylase from a Thermoactinomyces sp. / S.K. Obi, F.J. Odibo // Can. J. Microbiol. 1984. -Vol. 30, №6. -P. 780-785.

94. Alkylation of glucoamylase with acrolein and properties of obtained conjugate / P. Moszczynski, E. Miller, P. Mallgorzata et. al. // Zesz. nauk. Bud. 1994. - № 48.-P. 5-13.

95. Jeang Ch.-L. Purification and characterization of a ran-starch digesting amylase from a soie bacterium Cytophaga sp. / Ch.-L. Jeang, Y.-H Lee, L.-W. Chang // Biochem. and Mol. Biol. Int. 1995. - Vol. 35, № 3. - P. 549-557.

96. Kabo К. Modulation of the behavior of a protein in polyacrylamide gel electrophoresis in the presence of dodecyl sulfate by varying the cations / K. Kabo, T. Takagi // Anal. Biochem. 1995. - Vol. 224, № 2. - P. 572-579.

97. Shi Y.-C. Влияние различных факторов на конформацию и активность а-амилазы из Bacillus subtilis 86315 / Y.-C. Shi, Y.-M. Jiang, Y. Wu // Chin. Biochem. J. 1995.-Vol. 11, №2.-P. 205-209.

98. Шевелькова A.H. Изучение ингибирующего действия диметиламинометилферроцена на амилазы / А.Н. Шевелькова, А.Д. Рябов,

99. A.П. Синицын // Биохимия. 1993. - Т. 58, вып. 6. - С. 928-937.

100. Влияние ферментативного и химического дегликозилирования на физико-химические свойства глюкоамилазы из Asp. awamori X100/D27 / К.И. Неустроев, A.M. Голубев, A.M. Фирсов и др. // Биохимия. 1993. - Т. 58, №4.-С. 100-103.

101. Гвоздева Е.А. Характеристика центров связывания бифункционального белка-ингибитора протеиназ и а-амилазы / Е.А. Гвоздева, Л.Г. Мацкевич,

102. B.В. Мосолов // Биохимия. 1994. - Т. 59, N 9. - С. 1200-1204.

103. Жеребцов Н.А. Амилолитические ферменты в пищевой промышленности / Н.А. Жеребцов. М.: Лег. и пищ. пром-сть, 1984. - 160 с.

104. Ферменты / Под ред. А.Е. Браунштейна. М.: Мир, 1964.-312 с.

105. Ikenaka Т. Chemical modification on Taka-amylase A . I. Dinitrophenylation of Taka-amylase A / T. Ikenaka // J. Biochem. 1959. - Vol. 46, № 2. - P. 177183.

106. Hoschke A. A study of the role of amylolytic enzymes / A. Hoschke, E. Laszlo, Y. Hollo//Carbohydr. Res. 1980. - Vol. 81, № 1. - P. 145-156.

107. Ковалева Т.А. Кинетико-термодинамические аспекты катализа полисахаридов свободными и иммобилизованными амилазами / Т.А. Ковалева // Биофизика. 2000. - Т. 45, № 3. - С. 439-444.

108. Жеребцов Н.А. Механизм расщепления 2,1-фруктозидных связей инулина инулазой / Н.А. Жеребцов, О.С. Корнеева, Т.Н. Тертычная // Биохимия. 1995. - Т. 60. - С. 80-95.

109. Actions of a- and P-amylase to tri- and tetra-saccharides containing xylose / Y. Nitta, A. Suzuki, K. Takeo et. al. // J. Appl. Glycosci. 1996. - Vol. 43, № 2. -P. 167-172.

110. Takase K. Interaction of catalytic-site mutants of Bacillus subtilis a-amylase with substrates and acarbose / K. Takase // Biochim. et biophys. acta. 1992. -Vol. 1112, № 3. - P. 278-282.

111. Ферментные препараты в пищевой промышленности / Под ред. В.Л. Кретовича, В.Л. Яровенко. -М.: Пищ. пром-сть, 1975. 535 с.

112. Действие иммобилизованных препаратов амилаз и протеаз на измельченный ячмень / Д.Б. Лифшиц, Т.А. Доморникова, Е.С. Паценкер и др. // Пищ. пром-сть. 1981. - Т. 109, № 3. - С. 45-46.

113. Klyosov A.A. The thermostability of glucoamylase immobilized in different ways has a certain limit / A.A. Klyosov, V.B. Gerasimas // Biochim. et biophys. acta. -1979.-Vol. 571,№ l.-P. 162-165.

114. ИЗ. Ладур Т.А. Производство сахаристых продуктов из крахмалсодержащего сырья с применением ферментов / Т.А. Ладур. М.: ЦНИИТЭпищепром,1978.-472 с.

115. Ферментний лкарський препарат "амшаза медична" / 1.П. Галич, О.С. Циперович, Г.Г. Артюх и др. // Фармац. журн. 1973. - № 5. - С. 56-60.

116. Кабанова B.C. Совещание по применению ферментных препаратов / B.C. Кабанова // Фермент, и спиртовая пром-сть. 1983. - № 7. - С.41-43.

117. Макаров К.А. Иммобилизованные препараты в медицине / К.А. Макаров, С.А. Кибардин. М.: Медицина, 1980. - 124 с.

118. Ферменты медицинского назначения / Под ред. Н.М. Терещина. Л.: Медицина, 1975. - 111 с.

119. Номенклатура ферментов / Под ред. А.Е. Браунштейна. М.: ВИНИТИ,1979.-320 с.

120. Рыжакова В.Г. Выделение и очистка препаратов глюкоамилазы / В.Г. Рыжакова, Р.Ф. Фениксова // Прикл. биохим. и микробиол. 1967. - Т. 4, вып. 1.-С. 5-12.

121. Котова Г.А. Глюкоамилаза микроорганизмов / Г.А. Котова, В.Б. Котов, А.С. Сорокина. М.: Пищепромиздат, 1975.-41 с.

122. Савельев А.Н. Углеводный состав и некоторые свойства глюкоамилазы из Aspergillus awamori / А.Н. Савельев, М.Ф. Яковлева, JI.M. Фирсов // Биохимия. 1984. - Т. 49, вып. 11. - С. 1754-1765.

123. Coutinho P.M. Structure-function relationships in the catalytic and starchbinding domains of glucoamylase / P.M. Coutinho, P.I. Reilly // Protein Eng. 1994. - Vol. 7, № 3. - P. 393-400.

124. Савельев А.Н. Об отсутствии множественной атаки олигомерного субстрата глюкоамилазой из Aspergillus awamori / А.Н. Савельев, M.JI. Цендина, JI.M. Фирсов //Биохимия. 1985. - Т. 50, вып. 10. - С. 1653-1660.

125. Ковалева Т.А. Физико-химические и кинетико-термодинамические аспекты катализа свободными и иммобилизованными амилазами: Автореф. дис. . докт. биол. наук / Т.А. Ковалева. Воронеж, 1998. - 48 с.

126. Tanaka A. Randon attack as the hydrolytic reaction mode of disaccharides by Rhizopus glucoamylase / A. Tanaka, S. Takeda // Biosci., Biotechnol., and Biochem. 1995. - Vol. 59, №7. - P. 1372-1373.

127. Synthesis of 2-deoxy-glucooligosaccharides through condensation of 2-deoxy D-glucose by glucoamylase and a-glucosidase / H. Nakano, K. Hamayasu, K. Fujita et. al. // Biosci., Biotechnol. and Biochem. 1995. - Vol. 59, № 9. - P. 1732-1736.

128. Zhang Y. Secondary structure of holo-enzyme and apo-enzyme of aminoacylase unsing CD and FTJR spectroscopy / Y. Zhang, P.R. Chen, H. Biao // Sci. in China. Ser. B. 1994. - Vol. 37, № 12.-P. 1471-1478.

129. Диань И. Определение нуклеотидной последовательности и локализация гена глюкоамилазы гриба Aspergillus awamori XI00. Создание электрофоретического кариотипа / И. Диань, J1.M. Фирсов // Биотехнология. 1995. -№9-10.-С. 14-21.

130. Глюкоамилаза микромицета Aspergillus awamori 466. Препаративное получение / B.C. Григоров, И.Д. Руадзе, Ю.И. Слепокурова и др. // Биотехнология. 1999. - № 4. - С. 45-48.

131. Фениксова Р.В. Выделение и очистка препаратов глюкоамилазы Aspergillus awamori / Р.В. Фениксова, В.Г. Рыжакова // Прикл. биохим. и микробиол. 1968. - Т. 4, вып. 3. - С. 270-276.

132. Новые ферментные препараты из актиномицетных культур, вызывающих протопластирование и лизис аскомицетных дрожжей / Н.Г. Старостина, С.В. Кононова, Е.Н. Ратнер и др. // Прикл. биохим. и микробиол. 1999. - Т. 35, № 2. - С. 141-145.

133. Оптимизация процесса гидролиза белковых субстратов дрожжевыми протеазами Saccharomyces carlsbergensis / А.Д. Неклюдов, А.Н. Иванкин, Г.И. Мосина и др. // Прикл. биохим. и микробиол. 1998. - Т. 34, № 4. - С. 394-397.

134. Штамм дрожжей Saccharomyces vini М-1 для производства розовых игристых вин / Ш.А. Абрамов, С.Ц. Котенко, O.K. Власова и др. // Прикл. биохим. и микробиол. 1995. - Т. 31, № 6. - С. 657-660.

135. Лисюк Г.М. Стеринообразование у дрожжей Saccharomyces carlsbergensis в зависимости от условий аэрации / Г.М. Лисюк, Л.В. Пермякова // Прикл. биохим. и микробиол. 1988. - Т. 24, вып. 5. - С. 660664.

136. Родопуло А.К. Липиды и жирные кислоты у винных дрожжей / А.К. Родопуло, И.А. Егоров, Р.Х. Егофарова // Прикл. биохим. и микробиол. -1988.-Т. 24, вып.1.-С. 94-97.

137. Абдуразакова С.Х. Изучение ферментативной активности дрожжей при разных условиях культивирования / С.Х. Абдуразакова, И.Г. Арсланбекова, Е.А. Ежова // Прикл. биохим. и микробиол. 1985. - Т. 21, вып. 6. - С. 729731.

138. Разделение дрожжевых клеток различных видов с помощью флотации / В.Н. Иванов, А.А. Пиндрус, Е.В. Стабникова и др. // Прикл. биохим. и микробиол. 1987. - Т. 23, вып. 5. - С. 706-713.

139. Биосорбция тяжелых металлов дрожжами Saccharomyces vini / Н.Г. Сариневили, A.JI. Панасюк, Е.И. Столярова и др. // Прикл. биохим. и микробиол. 1992. - Т. 28, вып. 3. - С. 402-408.

140. Влияние иммобилизации на метаболизм дрожжей / И.В. Кузьмичева, В.В. Плотникова, Н.В. Гриц и др. // Прикл. биохим. и микробиол. 1998. -Т. 34, №3.-С. 251-255.

141. Structure of Saccharomyces cerevisiae a agglutinin / M.-H. Chen, Zh.-M. Shen, S. Robin et. al. // J. Biol. Chem. 1995. - Vol. 270, № 44. - P. 2616826177.

142. Науменко Н.И. Изучение автолиза дрожжей Saccharomyces serevisiae, выращенных на этаноле / Н.И. Науменко, С.В. Гордиенко // Прикл. биохим. и микробиол. 1985. - Т. 21, вып. 6. - С. 719-722.

143. Clatrin-dependent localization of a-l,3-mannosyltransferase to the golgi complex of Saccharomyces serevisiae / T.R. Graham, M. Seeger, G.S. Payne et. al. // J. Cell Biol. 1994. - Vol. 127, №3. - P. 667-678.

144. Vukovic R. Structure of the Saccharomyces serevisiae cell wall / R. Vukovic, V. Mrsa // Croat, chem. acta. 1995. - Vol. 68, № 3. - P. 597-605.

145. Краллиш И.JI. Влияние ингибиторов белкового синтеза на активность митохондриальных ферментов дрожжей Saccharomyces serevisiae приобезвоживании / И. Краллиш, Б.Э. Дамберг // Прикл. биохим. и микробиол. 1987.-Т. 23, вып. 5.-С. 613-616.

146. Изменение состава летучих азотсодержащих оснований при длительном хранении автолизата пекарских дрожжей Saccharomyces serevisiae / Н.И. Светлова, И.Л. Журавлева, Р.В. Головня и др. // Прикл. биохим. и микробиол. 1987.-Т. 23, вып. 1.-С. 93-99.

147. Крылова Н.И. Влияние соотношения этанола и глюкозы в среде на бродильную активность и состав хлебопекарных дрожжей / Н.И. Крылова,

148. B.К. Ерошин // Прикл. биохим. и микробиол. 1990. - Т. 26, вып. 6. - С. 812-818.

149. Новая питательная среда для выращивания дрожжей / Ш.А. Абрамов,

150. C.Ц. Котенко, Д.Л. Эфендиева и др. // Прикл. биохим. и микробиол. 1995. -Т. 31, №5.-С. 232-233.

151. Влияние РНКазы Bacillus intermedius на рост культуры дрожжей Saccharomyces serevisiae / Ф.Г. Куприянова-Ашина, А.Ю. Луцкая, А.И. Колпаков и др. // Прикл. биохим. и микробиол. 1996. - Т. 32, № 2. - С. 254-259.

152. Применение панкреатической РНКазы в производстве хлебопекарных дрожжей / А.Ю. Луцкая, А.И. Колпаков, P.M. Кепечева и др. // Прикл. биохим. и микробиол. 1998.-Т. 34, № 5.-С. 588-591.

153. Андреищева Е.Н. Адаптация дрожжей к солевому стрессу / Е.Н. Андреищева, Р.А. Звягильская // Прикл. биохим. и микробиол. 1999. - Т. 35, №3.-С. 243-256.

154. Геотермальная вода в составе питательной среды и морфофизиологические свойства дрожжей Saccharomyces serevisiae / Ш.А. Абрамов, С.Ц. Котенко, Э.А. Халилова и др. // Прикл. биохим. и микробиол. 1999. - Т. 35, № 3. - С. 349-352.

155. John A.Y. Pulsed field gel electrophoresis labeling method to study the pattern of Saccharomyces serevisiae chromosomal DNA synthesis during the

156. Gl/S phase of the cell cycle / A.Y. John, B. Wang, S.Q. Zhang // Anal. Biochem. 1995.-Vol. 227, №1.-P. 32-39.

157. Secondary structure conservation of the U3 small nucleolar RNA introns in Saccharomyces / F. Brule, A. Gregoire, V. Segauet et. al. // C. r. Acad. sci. Ser. 3,- 1995.-Vol. 318, № 12.-P. 1197-1206.

158. Structure-function analysis of the DNA binding domain of Saccharomyces serevisiae ABF1 / G. Cho, J. Kim, H.M. Rho et. al. // Nucl. Acids. Res. 1995. - Vol. 23, № 15. - P. 2980-2987.

159. Chae H.Z. Dimerisation of thiol-specific antiozidant and the essential role of cystein 47 / H.Z. Chae, T.B. Uhm, S.G. Rhee // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. -1994.-Vol. 91, № 15.-P. 7022-7026.

160. Primary structure and function of a second essential member of the heterooligomeric TCP 1 chaperonin complex of yeast TCP 1 (3 / D. Miklos, Sh. Caplan, D. Mertens et. al. // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1994. - Vol. 91, № 7. -P. 2743-2747.

161. Абрамов Ш.А. Морфофизиологические и биохимические свойства нового штамма Saccharomyces cerevisiae Y-503 / Ш.А. Абрамов, С.Ц. Котенко, Д.А. Аливердиева // Прикл. биохим. и микробиол. 1997. - Т. 33, № 3. - С. 325-328.

162. Preferential transfer of truncated oligosaccharides to the first sequon of yeast exoglucanase in Saccharomyces serevisiae alg 3 cells / R. Cueva, M.D. Munoz, E. Andaluz et. al // Biochim. et biophys. acta. 1996. - Vol. 1289, № 3. - P. 336-342.

163. Крахмалсодержащая среда для нового штамма пекарских дрожжей со встроенным геном глюкоамилазы / М.Г. Алексеева, В.М. Кантере, В.Н.

164. Талантов и др. // Прикл. биохим. и микробиол. 1993. - Т. 29, вып. 2. - С. 253-258.

165. Клонирование гена а-амилазы дрожжей Saccharomycopsis fibuligera и его экспрессия в Saccharomyces cerevisiae / Л.Ф. Баева, Д.Г. Козлов, Е.Э. Бревнова и др. // Прикл. биохим. и микробиол. 1996. - Т. 32, № 3. - С. 311-314.

166. Кочетов Г.А. Практическое руководство по энзимологии: Учеб. пособие / Г.А. Кочетов; Под ред. С.Е. Северина. М.: Высш. шк., 1980. - 272 с.

167. Северин С.Е. Практикум по биохимии / С.Е. Северин. М.: Изд-во МГУ, 1979.-430 с.

168. Детерман Г. Гель-хроматография / Г. Детерман М.: Мир, 1970. - 252с.

169. Артюхов В.Г. Оптические методы анализа интактных и модифицированных биологических систем / В.Г. Артюхов, О.В. Путинцева. Воронеж: Изд-во Воронеж, ун-та, 1996. - 240 с.

170. Землянухин А.А. Большой практикум по физиологии и биохимии растений: Учеб. пособие / А.А. Землянухин, Л.А. Землянухин. Воронеж: Изд-во Воронеж, ун-та, 1996. - 188 с.

171. Nesterenko M.V. A symple modification of Blum's silver stain method allows for 30 minite detection of proteins in polyacrylamide gels / M.V. Nesterenko, M. Tilley, S.J. Upton // J. Biochem. Biol. 1994. - Vol. 28. - P. 239-242.

172. Автоматизированная система дифференциально-термического анализа / Л.А. Битюцкая, Д.В. Китин, М.Ю. Хухрянский и др. // Заводская лаборатория. 1990. - № 4. - С. 53-56.

173. Bityutskya L.A. System of kinetic parameters of the transition prosseses under melting of crystalline substances / L. A. Bityutskya, E.S. Mashkina // Phase Transition. 2000. - Vol. 71.-P. 317-330.

174. Влияние удаления протеолитических ферментов на очистку амилазы / Ш.С. Ташмухамедова, Х.Т. Хасанов, М.М. Рахимов и др. // Прикл. биохим. и микробиол. 1995. - Т. 31, № 3. - С. 272-274.

175. Коршунов В.В. Синтез глюкоамилазы и а-амилазы термотолерантным грибом Aspergillus awamori ИНМИ / В.В. Коршунов, Л.Г. Логинова // Прикл. биохим. и микробиол. 1988. - Т. 24, вып. 1. - С. 80-86.

176. Выделение и характеристика внеклеточных а-глюкозидазы, инвертазы и глюкоамилазы из Aspergillus awamori / Й. А. Сарейкайте, Г.Б. Герасимене, Г.Й. Денис и др. // Прикл. биохим. и микробиол. 1989. - Т. 25, вып. 4. - С. 458-466.

177. Кичакова Н.А. Очистка и идентификация амилолитических ферментов Bacillus licheniformis / Н.А. Кичакова, И.Н. Павлова, И.Я. Захарова // Прикл. биохим. и микробиол. 1998. - Т. 34, № 5. - С. 503-507.

178. Нестеренко М.В. Выделение различных форм а-амилаз из пшеницы / М.В. Нестеренко, В.А. Кузовлев, В.В. Мосолов // Прикл. биохим. и микробиол. 1990.-Т. 26, вып. 5.-С. 598-601.

179. Слепокурова Ю.И. Глюкоамилаза Aspergillus awamori 466: выделение, иммобилизация и свойства: Автореф. дис. . канд. биол. наук / Ю.И. Слепокурова. Воронеж, 2000. - 18 с.

180. Калашников Е.Я. Производство амилолитических и протеолитических ферментов и применение их в пивоваренной промышленности / Е.Я. Калашников М.: ГосИНТИ, 1959. - 24 с.

181. Fogarty W.M. Production and purification of a maltose-producing amylase from Bacillus subtilis IMD198 / W.M. Fogarty, E.J. Bourke // J. Chem. Tech. and Biotechnol. 1983.-Vol. 338.-P. 145-154.

182. Гунькина Н.И. Исследование амилаз гибридного штамма дрожжей Saccharomyces cerevisiae Y-717 с целью интенсификации производства этанола: Автореф. дисс. . канд. техн. наук / Н.И. Гунькина. Воронеж, 1997.- 16 с.

183. Яровенко В.В. Концентрирование ферментных растворов методом ультрафильтрации / В.В. Яровенко М.: ОНТИТЭИ Микробиопром, 1978. -36 с.

184. Manjunath P. Fungal glucoamylases / P. Manjunath, B.C. Shenoy, M.R. Raghavendra Rao // J. Appl. Biochem. 1983. - Vol. 5, № 4-5. - P. 235-260.

185. Characterization of the two forms glucoamylase from Asp. niger / B. Svensson, T.Y. Pedersen, J. Svendsen et. al. // Carlsberg Res. Commun. 1982. -Vol. 47, № l.-P. 55-69.

186. Yamashita I. Nucleotide sequence of the extracellular glucoamilase gene STAI in the yeast Saccharomyces diastaticus / I. Yamashita, K. Suzuki, S. Fukui //J. Bacterid. 1985.-Vol. 161, №2.-P. 567-573.

187. Rhizopus raw-starch-degrading glucoamylase: Its cloning and expression in yeast / T. Aschikari, N. Nakamura, Y. Tanaka et.al. // Agr. Biol. Chem. 1986. -Vol. 50, №4.-P. 957-964.

188. Solution structure of the granular starch binging domain of glucoamilase from Aspergillus niger by nuclear magnetic resonance spectroscopy / K. Sorimachi, A.I. Jacks, M.-F. Le Gal-Coeffet et.al. // J. Mol. Biol. 1996. - Vol. 259, № 5. -P. 970-987.

189. Williamson G. O-glycosylation in Aspergillus glucoamilase. Conformation and role in binding / G. Williamson, N.J. Belshaw, M.P. Williamson // Biochem. J. 1992. - Vol. 282, № 2. - P. 423-428.

190. Yould G.W. Facilitative glucose transporters: an expression family / G.W. Yould, G.I. Bell//Trends Biochem. Sci. 1990. - Vol. 15.-P. 18-23.

191. Кушнер В.П. Конформационная изменчивость и денатурация биополимеров / В.П. Кушнер. JI.: Наука, 1977. - 275 с.

192. Березин И.В. Структура и функции активных центров ферментов / И.В. Березин, К. Мартинек. М.: Наука, 1974. - 238 с.

193. Варфоломеев С.Д. Кинетические методы в биохимических исследованиях / С.Д. Варфоломеев, С.В. Зайцев. М.: Изд-во МГУ, 1982. -343 с.

194. Уэндлант У. Термические методы анализа / У. Уэндлант. М.: Мир, 1978.-528 с.

195. Использование метода термоденатурации для изучения аддуктов а-химотрипсина с полиалкиленоксидами / Н.В. Ефремова, Е.М. Сорокина, Б.И. Курганов и др. // Биохимия. 1998. - Т. 63, вып. 4. - С. 524-531.

196. Уверский В.Н. Равновесное разворачивание частично свернутых форм А2 и Аз стафилококковой нуклеазы сопровождается формированием промежуточного состояния / В.Н. Уверский // Биохимия. 1998. - Т. 63, вып. 4.-С. 557-562.

197. Изучение активационного барьера тепловой денатурации белков методом сканирующей микрокалориметрии / С.А. Потехин, Е.И. Тиктопуло, О.И. Лосева и др. // II Съезд биофизиков России, Москва, 23-27 авг. 1999 г.: Тез. докл.-М., 1999. Т.1. - С. 72-73.

198. Мецлер Д. Биохимия: Химические реакции в живой клетке / Д. Мецлер: В 3 т./ Пер. с англ.; Под ред. А.Е. Браунштейна. М.: Мир. - Т.1. -1980. -407 с.

199. Основы биохимии / А. Уайт, Ф. Хендлер, Э. Смит и др.: В 3 т./ Пер. с англ. В.П. Скулачева; Под ред. Ю.А. Овчинникова-М.: Мир. -Т.1.- 1981. 532 с.

200. Characteristic and function of rawstarch affinity site on Aspergillus awamori var. kawachi glucoamylase I molecule / S. Hayachida, K. Nakamura, W. Kanlayakrit et.al. // Agr. Biol. Chem. -1989. - Vol. 53. - P. 143-149.

201. Chemical mappinieq of the active site of the glucoamylase of Aspergillus niger / R.I. Lemieux, V. Spohv, M. Boeh et.al. // Can. J. Chem. 1996. - Vol. 74, №3.-P. 319-335.

202. Structure of the raw starch affinity site on the Aspergillus awamori var. kawachi glucoamilase / S. Hayashida, K. Nakahara, K. Kuroda et.al. // Agr. Biol. Chem. - 1989. - Vol. 53. - P. 135-141.

203. Смит А. Прикладная ИК-спектроскопия: Основы, техника, аналитическое применение / А. Смит / Пер. с англ. Б.Н. Тарасевича; Под ред. А.А. Мальцева. М.: Мир, 1982. - 328 с.

204. Чанг Р. Физическая химия с приближениями к биологическим системам / Р. Чанг / Пер. с англ. М.Г. Гольдфельда; Под ред. Ю.Ш. Мошковского. -М.: Мир, 1980.-662 с.

205. Чиргадзе Ю.Н. Инфракрасные спектры и структура полипептидов и белков / Ю.Н. Чиргадзе. М.: Наука, 1965. - 136 с.

206. Виноградова Р.П. Физико-химические методы в биологии / Р.П. Виноградова, В.А. Цудзевич, С.Н. Храпунов. Киев: Вища шк., 1983. - 287 с.

207. Advances in microbial amylases / A. Pandey, P. Nigam, C.R. Soccol et. al. // Biotechnol. Appl. Biochem. 2000. - Vol. 31.-P. 135-152.

208. Goto M. Expression and functional analysis of a hyperglycosylated glucoamylase in a parential host, Aspergillus awamori var. kawachi / M. Goto, K. Ekino, K. Furukawa // Appl. Environ. Microbiol. 1997. - Vol. 63, № 7. - P. 2940-2943.

209. Авнерс В.Я. Секреция глюкоамилазы и инвертазы при непрерывном культивировании дрожжей Saccharomyces cerevisiae в режиме оксистата /

210. B.Я. Авнерс, А.В. Глазунов, В.Э. Стерхин // Биотехнология. 1993. - № 6.1. C. 24-26.

211. Неустроев К.Н. Кислая протеиназа и множественность форм глюкоамилазы из Aspergillus awamori / К.Н. Неустроев, JI.M. Фирсов // Биохимия. Т. 55, № 5. - С. 776-785.

212. Wang B.-D. Inoluction of a mitosis delay and cell lysis by high-level secretion of mouse a-amylase from Saccharomyces cerevisiae / B.-D. Wang, T.-T. Kuo // Appl. Environ. Microbiol. 2001. - Vol. 67, № 8. - P. 3693-3701.

213. Красновский А.А. Фосфоресцентный анализ синглетного молекулярного кислорода в фотобиохимических системах / А.А. Красновский // Биологические мембраны. 1998. - Т. 15, № 5. - С. 530-547.

214. Ковалева С.В. Фотоокисление и модификация диэтилпирокарбонатом «биосинтетической» L-треониндегидратазы из пивных дрожжей Saccharomyces carlsbergensis / С.В. Ковалева, А.И. Дорожко, З.С. Каган // Биохимия, 1984.-Т. 49, вып. 8.-С. 1253-1261.

215. Модификация функциональных групп молекулы стрептокиназы при фотоокислении / О.А. Казючиц, В.Н. Никандров, Г.С. Янковская и др. // Биохимия. 1990.-Т. 55, № 10.-С. 1847-1859.

216. Прайор У. Свободные радикалы в биологии / У. Прайор: В 2 т./ Пер. с англ. М.Г. Гольдфельда, JI.A. Сибельдиной; Под ред. Н.М. Эммануэля. -М.: Мир. Т. 2. - 1979. - 328 с.

217. Артюхов В.Г. Биофизика: Учеб. пособие / В.Г. Артюхов, Т.А. Ковалева, В.П. Шмелев. Воронеж: Изд-во Воронеж, ун-та, 1994. - 336 с.

218. Лосева Л.П. Роль остатков гистидина в конструктивной NAD(P)-глутаматдегидрогеназе Chlorella pyrenoidosa 82Т / Л.П. Лосева, М.В. Бендианишвили, В.Р. Шатилов // Биохимия. 1986. - Т. 51, № 5. - С. 840849.

219. Варфоломеев С.Д. Биокинетика: Практич. курс / С.Д. Варфоломеев М.: ФАИР-ПРЕСС, 1999. - 720 с.