Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Активность антиоксидантных ферментов в норме и при окислительном стрессе на примере метаболического синдрома

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Активность антиоксидантных ферментов в норме и при окислительном стрессе на примере метаболического синдрома"

На правах рукописи

ЦЩ/

РАДАЕВА Марина Вячеславовна /

АКТИВНОСТЬ АНТИОКСИДАНТНЫХ ФЕРМЕНТОВ В НОРМЕ И ПРИ ОКИСЛИТЕЛЬНОМ СТРЕССЕ НА ПРИМЕРЕ МЕТАБОЛИЧЕСКОГО СИНДРОМА

Специальность 03.00.04 - «Биохимия»

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени • кандидата биологических наук

003456600

Нижний Новгород 2008

003456600

Работа выполнена на кафедре клинической лабораторной диагностики в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «НИЖЕГОРОДСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ МЕДИЦИНСКАЯ АКАДЕМИИЯ ФЕДЕРАЛЬНОГО АГЕНТСТВА ПО ЗДРАВООХРАНЕНИЮ И СОЦИАЛЬНОМУ РАЗВИТИЮ».

Научный руководитель:

доктор биологических наук, профессор Клавдия Николаевна Конторщикова Официальные оппоненты:

доктор биологических наук Валентин Васильевич Анастасиев доктор медицинских наук, профессор Геннадий Андреевич Бояринов

Ведущая организация:

Государственное образовательное учреждение высшего профессионального Образования «Самарский государственный медицинский университет Росздрава», г. Самара

Защита состоится «_»_2008 г. в_часов на заседании диссертационного совета

Д 212.166.15 при Нижегородском государственном университете им. Н.И. Лобачевского по адресу: 603950, Н.Новгород, пр. Гагарина, д. 23, корп. 1, биологический факультет. С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ННГУ им. Н.И. Лобачевского

Автореферат разослан «_»_2008 г.

Ученый секретарь

Диссертационного совета, д.б.н., доцент

A.C. Корягин

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы.

Метаболический синдром (МС) является одной из самых изучаемых патологий в мире в связи с тем, что сходные нарушения метаболизма связывают распространенные заболевания современного человека - атеросклероз, артериальная ги-пертензия, сахарный диабет 2 типа, ожирение. По современным представлениям МС характеризуется совокупностью нарушений системной, в том числе гормональной регуляции липидного, углеводного, белкового и других видов обмена веществ под действием внешних и внутренних факторов (Ройтберг Г.Е.,2007). Выделение МС имеет большое клиническое значение, поскольку, с одной стороны, это состояние является обратимым, с другой, важно решить вопрос о тактике ведения данного больного в связи с тем, что среди лиц с МС риск развития ише-мической болезни сердца и/или инсульта в три раза выше, при этом значительно увеличивается смертность от сердечно-сосудистых заболеваний (13 против 2,2%).

Эффективность использования различных критериев для выявления МС неравнозначна, что делает необходимым обсуждение и проведение сравнительного анализа существующих критериев диагностики и требует дальнейшего, более глубокого изучения биохимических показателей при метаболическом синдроме.

Накопление продуктов липидного и углеводного обмена запускает реакции де-токсикации, в том числе и свободно-радикальные процессы. Свободно-радикальные реакции направлены на поддержание гомеостаза, но при высокой интенсивности могут привести к развитию окислительного стресса.

Окислительный стресс является одним из тех стимуляторов, которые помогают включать клеточную адаптацию организма (Бурмистров и др., 1997; Дубинина, 1998; Del Maestro, 1980; Smith et al., 1991; Van der Vliet, Bast, 1992). Соотношение активности антиоксидантных систем и количества продуктов пероксидации может меняться в зависимости от состояния организма, влияния различных факторов среды. В здоровом организме поддерживается сбалансированное соотношение. Стрес-сорная реакция в норме может сопровождаться кратковременным подъемом АФК. Это обусловлено реакцией адаптации организма к экстремальным условиям, в которых АФК выполняют роль вторичных мессенджеров, участвуя в передаче сигнальной трансдукции, в экспрессии ряда генов. В результате обеспечивается своевре-

менная мобилизация антиоксидантной защиты, которая обеспечивает снижение уровня реакционноспособных соединений, препятствуя тем самым проявлению их токсического действия.

Токсическое действие АФК проявляется при состояниях окислительного стресса, который сопровождается резкой интенсификацией свободно-радикальных процессов и снижением активности антиоксидантной защиты. Усиление свободно-радикальных процессов и развитие состояния окислительного стресса являются одним из патогенетических звеньев многих заболеваний, в том числе сердечнососудистых, воспалительных, а также старения организма (Болдырев, 1995; Гусев, Скворцова, 2001; Дубинина, 2003; Дубинина и др., 1998; Зенков и др., 2001; Beal, 1997; Davies, 1995; Gibson, 2002).

Работ, посвященных исследованию свободно-радикального окисления при различных патологических состояниях, довольно много (Меныцикова и др., 2008). Однако данных о развитии окислительного стресса при метаболическом синдроме явно недостаточно, причем это касается, прежде всего, исследований активности антиок-сидантных ферментов.

В последние годы для коррекции метаболических нарушений успешно применяются озоновые технологии (Бояринов Г.А. и др.,1999; Густов A.B. и др . 1999; Масленников О.В. и др., 2006,2008; Bocci V.,1997; Viebahn-Hansler R., 1999). По данным Конторщиковой К.Н.и Перетягина С.Щ2006) основным действующим началом озона является нормализация про- и антиоксидантного баланса организма.

В то же время исследований, посвященных использованию озоновых технологий в коррекции нарушений метаболического синдрома, проведено недостаточно, в основном они касаются уже сформировавшихся осложнений - атеросклероза, сахарного диабета.

Цели и задачи исследования.

Целью данной диссертационной работы является изучение активности антиокси-дантных ферментов при окислительном стрессе у больных с метаболическим синдромом до и после коррекции нарушений низкими терапевтическими дозами озона.

Соответственно поставленной цели решались следующие задачи:

1. Определить уровень основных биохимических показателей плазмы крови при метаболическом синдроме до и после коррекции нарушений.

2. Изучить активность антиоксидантных ферментов крови людей с метаболическим синдромом до и после лечения.

3. Исследовать интенсивность свободно-радикального окисления крови при метаболическом синдроме по данным биохемилюминесценции.

4. Проанализировать уровни продуктов перекисного окисления липидов и окис-ленно-модифицированных белков крови больных с метаболическим синдромом до и после коррекции

5. Исследовать активность фагоцитоза и измерить уровень оксида азота в крови больных с метаболическим синдромом до и после лечения.

Научная новизна.

Впервые при метаболическом синдроме изучено развитие окислительного стресса и охарактеризовано повышением уровней продуктов перекисного окисления липидов и окисленно-модифицированных белков.

Определен вклад в нарушение баланса про- и антиоксидантных систем оксида азота плазмы крови и состояния активности фагоцитоза.

Впервые у больных с метаболическим синдромом с помощью современных методов анализа выявлен дисбаланс в активности антиоксидантных ферментов - су-пероксиддисмутазы, каталазы, глутатионпероксидазы и глутатионредуктазы до и после коррекции нарушений.

Практическая значимость работы:

Представлена эффективность использования унифицированных методов оценки активности антиоксидантных ферментов для контроля за коррекцией метаболических нарушений, как с помощью лекарственных препаратов, так и озоновых технологий с низкими дозами озона.

Полученные результаты дополняют имеющиеся данные по исследованию особенностей протекания метаболического синдрома в зависимости от проводимой коррекции.

Положения, выносимые на защиту.

1. Метаболический синдром характеризуется развитием окислительного стресса, проявляющегося разбалансировкой активности антиоксидантных ферментов и

накоплением продуктов пероксидации белков (ОМБ) и липидов (ДК, ТК и ОШ).

2. Нарушение баланса про- и антиоксидантных систем при метаболическом синдроме обусловлено активацией фагоцитоза, выработкой оксида азота, повышенным уровнем липидов.

3. Нормализация ПОЛ в сыворотке крови под действием озона связана со снижением уровней основных биохимических показателей, коррекцией активности антиоксидантных ферментов, нормализацией фагоцитоза и уровня оксида азота.

Апробация работы.

Результаты работы представлены на 1 Азиатско-Европейской конференции (Казань, март 2007 г), на 2 Азиатско-Европейской конференции (Мисхор, Ялта, 2008), 7 Всероссийской научно-практической конференции с международным участием "Озон в биологии и медицине" (Нижний Новгород, 2007).

Публикации.

По теме диссертации опубликовано 6 работ в ведущих отечественных журналах, рекомендованных ВАК и 1 тезисы доклада конференции.

Структура и объем диссертации.

Диссертационная работа в объеме страниц состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, собственных результатов и их обсуждения, заключения, выводов, списка литературы.

Диссертация иллюстрирована 7 рисунками и 21 таблицами. Библиографические указания включают 202 источника литературы (из них 116 отечественных и 86 иностранных).

Автор благодарит за совместную работу сотрудников кафедры клинической лабораторной диагностики Нижегородской государственной медицинской академии, а также врачей Медицинского центра ЗАО «Тополь», и прежде всего профессора, д.м.н. Масленникова Олега Викторовича и главного врача Грибкову Ирину Авенеровну; врачей Клинической городской больницы N5 и кандидата медицинских наук ассистента кафедры факультетской терапии НижГМА Григорьеву Наталью Юрьевну.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Характеристика обследуемых групп.

В основу работы положено исследование плазмы крови 75 человек, из них 60 пациентов относились по сочетанию критериев и поставленных диагнозов к симпто-мокомплексу «метаболический синдром». Для формирования данной группы были использованы критерии, разработанные в рамках проводимой экспертами Национальной образовательной программы США Adult Treatment Panel 111 (ATP 111) и предложенные к использованию диабетической конференцией (International Diabetes Federation, 2005). Висцеральное ожирение, являющееся в данной программе главным критерием МС, отмечалось у всех 60 обследованных. У 42 человек имело место сочетание главного критерия и двух дополнительных, у 11 - кроме главного, еще трех дополнительных и у 7 - кроме главного, еще четырех критериев (табл. 1).

В первую (основную) группу вошли 25 человек с МС. В этой группе коррекция метаболических нарушений осуществлялась низкими дозами озона. Курс озоноте-рапии состоял из 6 процедур внутривенного введения озонированного физиологического раствора с концентрацией озона 300-400 мкг/л. (Руководство по озонотера-пии, 2008).

Таблица 1

Диагностические критерии метаболического синдрома

Критерий Висцеральное ожирение Артер. гипертензия Гипер-ТГ Гипоаль ЛП Глюкоза натощак выше 5,6 ммоль/л или СД

Количество больных 100% 65% 53% 57% 48%

Вторая группа (контроль) из 35 человек проходили лечение в Клинической городской больнице №5, где применялся комплекс препаратов, корригирующих уровень показателей липидного обмена, глюкозы и положительно воздействующих на вазодилатацию.

Нормой служила плазма крови 15 практически здоровых человек, сопоставимых по возрасту и полу группам больных.

Методы.

Всем обследованным в сыворотке крови измеряли уровень глюкозы глюкозо-оксидазным методом, оценивали липидный профиль, включающий общий ХС, ТГ, ХС-ЛПНП, ХС-ЛПВП, стандартными тест-системами фирмы «Dyasys» (Германия) на биохимическом анализаторе «Ral Clima МС-15».

Количественное определение апо А,, апо В и hs CPR осуществляли методом ИФА с использованием тест-систем фирмы «ROSHE» (Германия).

Оценку свободно-радикального окисления в плазме и эритроцитах крови проводили методом индуцированной хемилюминесценции (Кузьмина, 1983) на биохе-милюминометре БХЛ-07, сопряженном с компьютером IBM. Из параметров хеми-люминограммы учитывались Imax, S, tg (-2 а).

Определение продуктов пероксидации липидов в плазме и эритроцитах включало измерение уровней первичных продуктов - диеновых конъюгатов (ДК), вторичных - триеновых конъюгатов (ТК) и конечных продуктов оснований Шиффа (ОШ) по методу И.А. Волчегорского (1989).

Определение степени окислительной модификации белков по уровню карбонильных производных (Дубинина, 1995).

Определение фагоцитарной активности клеток крови осуществляли хеми-люминесцентным методом (Владимиров Ю.А., Шерстнев М.П., 1989) с учетом суммарных показателей Imax (mv) и S (mv).

О концентрации оксида азота в крови судили по содержанию в плазме его конечных метаболитов - нитрита и нитрата как наиболее верифицированных маркеров оценки метаболизма оксида азота в организме человека. (ГШ. Голиков и др., 2000)

Уровень антиоксидантной защиты оценивали по активности ферментов СОД, ГПО, ГЛР с помощью унифицированных тест-систем фирмы RANDOX (Англия) и каталазы по методу Дубининой Е.Е.

Парциальное давление кислорода (рО 2 ), углекислоты (РСО 2 ) и рН венозной крови определяли на радиометре ALB-555 (Дания).

Для статистической обработки полученных данных использовался лицензионный программный продукт Microsoft Excel Statistik 6.0. Результаты представлены в виде M±sd, где M - средняя величина, о - среднее квадратичное отклонение. Коэффициенты достоверности представлены по критерию Стьюдента (t).

РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Изучение биохимических показателей, характеризующих метаболический синдром.

Поскольку в диагностике МС особое значение имеет оценка показателей углеводного и липидного обмена, в плазме крови измерялись уровни глюкозы, определялся липидный спектр, включающий уровни общего холестерина ХС, ХСЛПНП, ХСЛПВП, ТГ, KA, ano В, ano А, и ano А,/апо В. (табл. 2, 3).

Таблица 2

Уровни биохимических показателей плазмы крови при метаболическом синдроме и у практически здоровых (М±о)

Группа обследованных ХС общ ТГ ХСЛПНП ХСЛПВП КА Глюкоза

Рекомен. уровни <5,2 <1,7 <3,5 1,04-1,30 3 <5,6

Практ. здоровые, п=15 4,61+0,22 0,8±0,12 2,38±0,91 1,65+0,14 1,8 4,78±0,20

Метаболический синдром,п=60 б,57±0,20* 2,52±0,15* 4,3±1,1* 0,95±0,03* 5,7* 10,25±0,94*

*- достоверность различий по сравнению с рекомендуемым уровнем (р<0,05)

Таблица 3

Уровни апопротеинов плазмы крови больных с метаболическим синдромом (М±а)

Группы обследованных ano В ano А, ano A,/ ano В

Больные МС, п=60 1,18±0,20* 1,29+0,30 1,093±0,09

Рекомен. уровень <0,5 1,1-1,9 >1,1

*- достоверность различий по сравнению с рекомендуемым уровнем (р<0,05)

Исследование показателей липидного обмена продемонстрировало значительное увеличение уровня общего ХС у 77% больных более чем на 25% по сравнению с рекомендуемым уровнем. Повышение содержания ХСЛПНП отмечалось у 79% обследованных с МС и достоверно отличалось от группы практически здоровых лиц. Напротив, содержание ХСЛПВП было снижено в 1,8 раз по сравнению со здоровыми

людьми. Отсюда, коэффициент атерогенности (КА) у обследованных пациентов с МС равнялся 5,7 и тем самым превышал рекомендованный уровень почти в 2 раза.

Уровень ТГ оказался значительно повышен у 53% в среднем на 48% по сравнению с рекомендованным уровнем и более чем в 3 раза по сравнению с группой здоровых лиц. Тот факт, что гипертриглицеридемия выявлена только у половины обследованных с МС, можно предположить наличие других биохимических критериев данного состояния.

Содержание апоВ в среднем по всей группе обследованных с МС было повышено более чем в 2 раза, хотя отношение атерогенных и антиатерогенных апопротеи-нов не отличалось достоверно от рекомендуемого уровня.

По критериям ATP 111 уровни ТГ и ХСЛПВП, а именно отношение ТГ/ХСЛПВП можно использовать для косвенной оценки инсулинорезистентности, которая и лежит в основе развития МС. В работе Ройтберга Г.Е., 2007 приводится пороговое значение этого отношения, которое равняется 1,32. Нашими исследованиями было показано, что у практически здоровых лиц отношение ТГ/ХСЛПВП равнялось 0,48±0,12, в то время как у больных с метаболическим синдромом было в 5 раз выше и в 2 раза превышало пороговую величину и составляло 2,65±0,98. Полученные данные дают дополнительное подтверждение наличия метаболического синдрома у обследованных лиц.

Учитывая достоверное увеличение средних уровней ТГ, общего ХС, ХС ЛПНП и ano В при снижении ХС ЛПВП, можно с уверенностью говорить о наличии у обследованных больных атерогенных дислипидемий и связанном с этим высоким риском развития сердечно-сосудистых осложнений.

Известно, что при уровне hs СРБ, меньшем 1,0 мг/л, риск развития сердечнососудистых осложнений минимален, при 1,1-1,9 - низкий, при 2,0-2,9 - умеренный, а при более 3,0 мг/л — высокий. В нашей работе более, чем у половины обследованных с МС уровень этого показателя оказался достоверно повышенным и составлял в среднем 3,6 ±0,8 мг/л, что еще раз подтверждает наличие риска сердечнососудистых заболеваний.

Концентрация глюкозы плазмы крови натощак у обследованных с МС была повышена в среднем в 2 раза по сравнению с рекомендованным значением у 56% пациентов и по сравнению с группой практически здоровых лиц, что свидетельствует о выраженном нарушении углеводного обмена. Гипергликемия способствует глики-

рованию различных белков, в том числе апопротеинов апо В и апо А,. Гликирова-ние апо А,, основного апопротеина ЛПВП, нарушает функцию переноса ХС из тканей организма в печень и способствует прогрессированию атеросклероза. Накопление гликированных и насыщенных липидами ЛП приводит к тому, что они не могут поступать в ткани рецепторным путем, а начинают удаляться фагоцитирующими клетками. С функционированием фагоцитирующих клеток и высоким уровнем ли-пидов связана интенсификация свободно-радикальных реакций и развитие окислительного стресса. Для подтверждения его наличия у больных с МС исследовали состояние про- и антиоксидантных систем.

Интегральная оценка СРО основывалась на анализе хемилюминограммы плазмы крови и эритроцитов (табл. 4). У больных с МС величина I тах была достоверно выше на 40% в плазме и на 31% в эритроцитах; Б - повышена в плазме на 43%, а в эритроцитах на 21%; показатель tg(-2a) был выше нормы в плазме на 73% и в эритроцитах на 39%; отношение I шах/Б в плазме повышено на 10%.

Таблица 4

Параметры хемилюминограммы плазмы крови и эритроцитов больных

с метаболическим синдромом по сравнению с практически здоровыми (М±а)

Объект анализа Показатели

1тах Б 1тах/ Б

Плазма крови п=60 17,57±4,8* 200,6±87,02* 4,86±2,70* 0,087±0,0091*

Норма, п=15 12,5±5,2 140,0+45,76 2,81 ±1,02 0,096+0,001

Эритроциты п=60 15,85±6,61* 236,6±100,Г 3,51±2,07* 0,069±0,0087

Норма, п=15 13,51±3,4 215+95,72 2,53±1,98 0,0063+0,0059

* - достоверность различий по сравнению с нормой (р<0,05).

Активация свободно-радикальных реакций в крови компенсировалась антиокси-антной защитой до тех пор, пока не происходила разбалансировка антиоксидант-ых ферментов (табл. 5): активность СОД в эритроцитах больных с МС снижалась о сравнению с практически здоровыми лицами на 77% , каталазы на 34% при уве-ичении активности ГПО в 3 раза и ГЛР в 2 раза. Достоверное снижение активности

СОД и каталазы явилось одной из причин развития окислительного стресса, поскольку данные ферменты ответственны за удаление первичных АФК - супероксидного анион-радикала и перекиси водорода. Чрезмерно высокая активность ГПО и ГЛР объясняется большим количеством образовавшихся при окислительном стрессе продуктов липопероксидации.

Таблица 5

Активность антиоксидантных ферментов эритроцитов больных

с метаболическим синдромом по сравнению с практически здоровыми (М±а)

Группа обследованных лиц сод КАТ ГПО ГЛР

МС, п=60 0,0042±0,000173* 67,33±10,76* 373,6±278,2* 104,2+44,9*

Практ. здоровые, п=15 0,018±0,0012 99,033±11,60 109±10,2 54,0±15,3

* - достоверность различий по сравнению с нормой (р<0,05).

Для уточнения причин активации свободно-радикальных реакций в крови анализировали состояние фагоцитоза. У обследованных с МС в среднем по группе активность фагоцитоза в цельной крови была достоверно повышенной по сравнению с практически здоровыми: показатель 1тах- в 1,88 раза, показатель Б - в 2,76 раза, что свидетельствовало об активации системы, направленной на детоксикацию накопившихся измененных соединений, в том числе гликированных, насыщенных липидами и подвергшихся окислительной модификации.

В активации свободно-радикального окисления плазмы крови принимают участие МО-радикалы. N0* синтезируется как эндотелиальными , так и фагоцитирующими клетками. Эндотелиальный N0 - основной вазодилататор, препятствующий тоническому сокращению сосудов нейронального, эндокринного или локального происхождения. N0 вызывает релаксацию гладкой мускулатуры сосуда, угнетает адгезию и агрегацию тромбоцитов, макрофагальную активность. Снижение его синтеза эндотелиальными клетками может быть связано с факторами риска атеросклероза, такими как СД, гипертония, гиперхолестеринемия.

Макрофагальный N0 является провоспалительным фактором: при активации транскрипции фермента цитокинами синтез N0 возрастает в десятки раз. В наших исследованиях уровень оксида азота определялся по содержанию конечных продук-

тов - нитратов. Поэтому полученные данные представляют суммарный ответ всех видов МО-синтаз.

В результате установлено, что у 80% обследованных с МС имело место достоверное увеличение количества нитратов в среднем до 30,95±10,5 мк моль/л при норме 21-24 мк моль/л, что свидетельствовало об активации воспалительных процессов в кровеносных сосудах данной категории больных. У 20% обследованных с МС содержание нитратов было достоверно снижено до 14,05±11,8 мк моль/л, что свидетельствовало об отсутствии выраженных воспалительных реакций и снижении функции эндотелиальной МО-синтазы. Значение коэффициента корреляции между показателями фагоцитоза Б и средним уровнем оксида азота равняется +0,67 и указывает на их взаимосвязь через работу фагоцитирующих клеток.

Развитие окислительного стресса с нарушением общей антиоксидантной активности и разбалансировки активности антиоксидантных ферментов вызывает окисление субстратов крови и прежде всего белков и липидов.

Окислительная модификация белков признается в настоящее время не только одним из ранних, но и наиболее надежных индикаторов поражений тканей при свободно-радикальных реакциях.

При анализе крови больных с МС выявлено значительное повышение ОМБ при всех длинах волн, а именно, при 356 нм - в 6,7 раз; при 363 нм - в 6,8 раз; при 370 нм - в 6,7 раз. Наиболее выраженные изменения отмечались при 430 нм - в 13,2 раза и при 530 нм - в 58,8 раз (табл. 6).

Таблица 6

Уровень окисленно-модифицированных белков плазмы крови больных

метаболическим синдромом по сравнению с практически здоровыми (М±ст)

Группы обследованных 356 нм 363 нм 370 нм 430 нм 530 нм

Метаболический синдром, п=50 99,85£21,57* 100,39+32,31* 99,78+34,75* 82,90£28,95* 67,10+18,96*

Практ. здоровые, п=15 14,07+0,08 14,66+0,08 14,81+0,06 6,28±0,01 1,14+0,04

* - достоверность различий по сравнению с нормой (р<0,05).

Основными молекулярными продуктами свободно-радикального окисления ли-пидов являются первичные - ДК, вторичные - ТК и конечные - ОШ. В плазме крови больных МС содержание всех продуктов было достоверно повышено по сравнению с группой практически здоровых лиц: ДК - на 21%, ТК - на 16% и ОШ - почти в 5 раз. В эритроцитах, соответственно, содержание ДК было повышено на 31%, ТК- на 34% и ОШ более, чем в 6 раз (табл. 7).

Таблица 7

Содержание продуктов перекисного окисления липидов плазмы крови и эритроцитов у больных метаболическим синдромом по сравнению с практически здоровыми (М±о)

Показатели ДК ТК ОШ Ош/ДК+ТК

Плазма крови, п=50 0,195±0,061 0,11±0,051* 39,34+12,30* 128,9±45,1*

Норма, п=15 0,165±0,051 0,04±0,001 3,25±0,25 19,2±3,9

Эритроциты, п=50 0,210+0,175 0,210±0,193 62,29±40,41* 148,3+52,3*

Норма, п= 15 0,152±0,091 0,149+0,082 10,11±4,61 40,3+10,9

* - достоверность различий по сравнению с нормой (р<0,05).

Коэффициент ОШ/ДК+ТК, отражающий направленность процесса в сторону образования токсичных соединений Ош, в плазме был повышен более, чем в 6 раз, а в эритроцитах - в 3,2 раза.

При анализе корреляционных взаимоотношений между показателями антиокси-дантных ферментов и продуктами пероксидации достоверно значимыми оказались корреляции между активностью фермента ГПО и уровнями молекулярных продуктов ПОЛ: ДК, ТК и ОШ. Отрицательный знак коэффициента корреляции свидетельствует о накоплении соответствующих продуктов ДК и ТК при снижении активности данных ферментов.

Наличие достоверно значимых коэффициентов корреляции между продуктами окисления липидов - ДК, ТК и ОШ и белков (ОМБ) свидетельствовало о том, что пероксидации были подвержены и липиды и белки.

Исследование влияния низких терапевтических доз озона на биохимические показатели крови больных с МС.

В основной группе больным с МС проводили монотерапию озоном без назначения других лекарственных средств. Поэтому в наших исследованиях озонотерапию

ожно рассматривать как альтернативный метод лечения и профилактики осложне-ий МС.

При коррекции метаболических нарушений как озоном, так и лекарственными зепаратами, отмечались достоверные изменения исходных величин. Наиболее вы-аженные различия в изменении показателей больных двух сравниваемых групп на-людались только для показателей уровня глюкозы. У больных обеих групп отмеча-ось снижение: при назначении стандартной терапии, включающей специальные са-ароснижающие препараты - на 21%, в основной группе - только на 5%.

Через три недели после начала лечения показатели, характеризующие липидный рофиль, в плазме крови больных основной контрольной групп достоверно снижа-ись. При этом отмечалось снижение на 5 % уровня общего холестерина при повы-ении содержания ХС ЛПВП также на 5%, что сказывалось на достоверном сниже-ии значения КА с 6, 4 до 5,4. Достоверное снижение ТГ наблюдалось у 62% боль-ых МС в 1 группе (на 49%) и у 67% - во 2 группе (на 51%). Изменение уровней ТГ больных обеих групп, имеющих изначально нормальные показатели, проходило в еференсных пределах.

После проведенного курса монотерапии озоном в среднем по всей группе боль-ых с метаболическим синдромом имело место достоверное снижение в плазме крои содержания белка, основного для ЛПНП - апоВ - на 8% и, соответственно, вели-ины отношения апоА1/апоВ также на 8% (таб. 8). Сходные изменения отмечались в плазме крови больных контрольной группы, в лечении которых применялась тандартная терапия.

Таблица 8

Уровни апопротеинов больных метаболическим синдромом до и после лечения

Группы обследованных

Показатели

апоА,

апоВ

апоА,/апоВ

Лечение озоном, п=25

До лечения

1,29+0,91

1,18±0,81

1,093+0,85

После лечения

1,29±0,98

1,09±0,74*

1,183±0,77*

Стандартное лечение, п=35

До лечения

1,28±0,87

1,19±0,89

1,091+0,67

После лечения

1,27±0,83

1,08+0,77*

1,182±0,71*

■ достоверность различии по сравнению с уровнями до лечения.

При анализе уровней высокочувствительного С-реактивного белка в среднем больных обеих сравниваемых групп после проведенного лечения имело место сниж ние с 3,3 мг/л до 2, 7 мг/л. (см. рисунок). Полученные данные указывали на против воспалительные эффекты озона, сравнимые с таковыми при стандартной терапии.

3,4 3,2 3 2,8 2,6 2,4

□—лечение озоном; В— стандартное лечение

Уровень Ьк-СКР в плазме крови больных МС до и после лечения. * - достоверность различий по сравнению с уровнями до лечения

При оценке влияния двух видов лечения на показатели окислительного стресс продемонстрировано следующее. Показатели свободно-радикального окисления 1шах и Б имели тенденцию к снижению и в плазме и в эритроцитах, тогда как дост верное повышение показателя -2 до нормы свидетельствовало об увеличении акти ности неферменативного звена антиоксидантной защиты в обеих группах больных.

Снижение уровней ДК и ТК и в плазме и в эритроцитах больных МС обей групп также имело характер тенденции. В то же время и в плазме и в эритроцита количества ОШ-токсичного продукта у больных из основной группы достоверн снижалось, тогда как в контрольной группе, достоверно повышалось (табл. 9 и 10

Таблица

Уровни молекулярных продуктов в плазме крови больных метаболическим синдромом до и после лечения (М±о)

Группы обследованных ДК ТК ОШ

Лечение озоном, п=25 До лечения 0,17±0,059 0,09±0,034 25,4+11,55

После лечения 0,15±0,047 0,10±0,032 21,9±10,81*

Стандартное лечение, п=35 До лечения 0,22±0,066 0,13±0,067 48,62+25,207

После лечения 0,20±0,067 0,10±0,054 53,76±52,152*

*- достоверность различий по сравнению с уровнями до лечения (р<0,05).

Таблица 10

Уровни молекулярных продуктов в эритроцитах больных метаболическим синдромом до и после лечения (М±о)

Группы обследованных

ДК

тк

ош

Лечение озоном, п=25

До лечения

0,19+0,148

0,25±0,245

97,51±40,81

После лечения

0,19±0,08б

0,20±0,022*

81,91+39,18*

Стандартное лечение, п=35

До лечения

0,23+0,21*

0,17+0,14*

27,08±19,006

После лечения

0,24+0,15

0,14+0,11

54,22±30,68*

* - достоверность различий по сравнению с уровнями до лечения (р<0,05).

Что касается показателей ОМБ в среднем крови у больных с МС из контрольной >уппы после лечения стандартной терапией изменений не обнаружено. У больных МС из основной группы под действием озонотерапии происходило достоверное нижение уровней карбонильных производных на всех длинах волн (табл. 11).

Таблица 11

Уровень ОМБ плазмы крови больных МС до и после лечения (М± ст)

Группа обследованных

Длина волн

356 nm

363 nm

370 nm

430 nm 530 nm

Лечение озоном, n=25

До лечения

15,58±1,05

15,85+1,12

15,86±1,18

7,25±0,52

1,82+0,15

После лечения

12,34+0,84'

12,53+0,89*

12,48+0,93*

5,95±0,46*

1,36+0,12"

Стандартное лечение, п=35

До лечения

12,30+0,53

12,65±0,54

12,61+0,57

5,96±0,38

1,34+0,22

После лечения

12,12±0,81

12,31+0,74

12,36+0,73

5,95±0,46

1,28+0,24

* - достоверность различий по сравнению с уровнями до лечения (р<0,05).

У больных с МС и в контрольной, и в основной группе в среднем отмечалось остоверное повышение активности СОД на 251 % и на 12%, соответственно. Сход-ая направленность отмечается и при исследовании активности каталазы: в кон. ольной группе повышение составляет 200% и в группе с монотерапией озоном -4,5%. Активность ферментов ГПО и ГЛР в обеих группах снижалась достоверно,

что можно объяснить снижением количества гидроперекисей ДК + ТК в кров больных из обеих групп (табл. 12).

Таблица 1

Активность антиоксидантных ферментов в эритроцитах обследованных с MC до и после лечения (М±о)

Группы обследованных

КА

СОД

ГПО

ГЛР

Лечение

озоном,

п=25

До лечения

67,33+23,1

0,0042+0,00173

373,6±278,20

104,2+44,9

После лечения

95,93±30,4*

0,054+0,00182*

328+178,31*

81+27,35*

Стандартное лечение, п=35

До лечения

68,09+27,5

0,0060+0,00163

243,7+99,86

105,1+31,8

После лечения

123,4+42,6*

0,0154+0,0249*

188,8+104,50*

91,47+31,00*

* _

достоверность различий по сравнению с уровнями до лечения (р<0,05).

После проведенного курса монотерапии озоном с низкими терапевтическими до зами отмечалась коррекция уровней оксида азота. У больных с МС с высоким уровнями N0 имело место снижение с 35, 52±6,98 до 24,83±4,32 мкмоль/л, у 20° больных исходные уровни 12,85±5,21 мкмоль/л .напротив, повысились до 25 14±6,12 мкмоль/л.

Показатели активности фагоцитоза цельной крови снижались после проведение го курса озонотерапии : 1тах - в 1, 5 раза и Б - в 7 раз, что было даже ниже, чем практически здоровых людей и соответствовало снижению уровней токсичных про дуктов липопероксидации - ОШ и измененных белков (табл. 13). У больных кон трольной группы достоверных изменений в показателях активности фагоцитоза н отмечалось.

Таблица 13

Показатели фагоцитоза у больных с метаболическим синдромом до и после лечения озоном (М±о)

Группы обследованных I шах S

До лечения, п=25 359,67±154,43* 260892,0±97102*

После лечения, п=15 203,05+96,53 36943,2±34338

* - достоверность различий по сравнению с уровнями до лечения (р<0,05).

Монотерапия больных метаболическим синдромом из основной группы заклю-алась во внутривенном введении озоно-кислородной смеси в составе озонирован-ого физиологического раствора. Чтобы оценить, как изменяются в результате тако-о лечения показатели газов, в крови, взятой из кубитальной, вены определялось арциальное напряжение кислорода (р02) и углекислого газа (рС02), а также рН. В сходных пробах крови обследованных лиц с диагнозом МС средние уровни пока-ателей рН были достоверно ниже нормы (р<0,05). Это свидетельствовало о накоп-ении в организме продуктов закисления внутренней среды в результате гипоксиче-ких нарушений метаболизма. Подтверждением явилось снижение в 2 раза величи-ы р02.0 нарушении аэробных реакций в тканях свидетельствовало снижение в 1,5 аза уровня рС О 2 крови.

После проведения курса озонотерапии показатель рН повысился до уровня норы, что указывало на улучшение работы ферментных систем, зависящих от величи-ы данного параметра. Отмечалось достоверное увеличение показателя р02 на 30% показателя рС02 на 12,5% , что свидетельствовало об улучшении снабжения тка-ей кислородом и только частичном восстановлении аэробных процессов, посколь-> полного восстановления исследуемых параметров за анализируемый период в 3 едели не отмечалось.

Таким образом, анализ биохимических показателей плазмы крови и эритроцитов ольных с метаболическим синдромом, леченных стандартными лекарственными фепаратами или озоном в виде озонированного физиологического раствора, выяви-ш более выраженную коррекцию баланса антиоксидантных ферментов, нормализа-ию свободно-радикальных реакций и уровней продуктов окисления белков (ОМБ) липидов (ДК, ТК и ОШ) при монотерапии озоном.

Следствием улучшения метаболических показателей после проведенной терапии, вилось и улучшение клинического состояния больных. У обследованных из кон-юльной группы хорошие результаты лечения имели место у 88 % больных, у 12% - неудовлетворительные. У больных с МС, в лечении которых применялось нутривенное введение озонированного физиологического раствора с низкими тера-1евтическими концентрациями, хорошие результаты отмечались у 90% , удовлетво-ительные у 10% при отсутствии неудовлетворительных.

В связи с вышесказанным можно утверждать, что интересным и важным пред-тавляется углубленное изучение различных сторон метаболизма при МС. В по-

следнее время важную роль в патогенезе и прогрессировании метаболических н рушений придают интенсификации свободно-радикальных процессов. Важно отм тить, что окислению подвергаются не только липиды, но и белки, в том числе бе ковые компоненты ферментов, рецепторов, ионных каналов плазматических ме бран, определяющих возможность нормального функционирования различных кл ток и тканей в целостном организме. Кроме того, МС характеризуется рядом нар шений липидного обмена, включающих гипертриглицеридемию. Эти показател могут служить важными критериями в диагностике МС, а также в контроле за э фективностью проводимого лечения.

Данное исследование было посвящено изучению при метаболическом синдром активности антиоксидантных ферментов и связанных с изменением их состояни свободно-радикальных реакций.

Обнаруженный дисбаланс в активности основных антиоксидантных фермента СОД, каталазы, ГПО, ГЛР, снижении общего пула неферментативной антиокс дантной защиты при повышенных показателях свободно-радикального окислени позволило сделать заключении о развитии окислительного стресса при метаболич ском синдроме.

В наших исследованиях развитие указанного варианта окислительного стрес подтверждалось достоверным увеличением активности фагоцитоза, повышением среднем, хотя и не у всех больных, уровней оксида азота. В результате имело мест значительное увеличение в крови продуктов пероксидации белков и липидов, в то числе и в эритроцитах. Вследствие этого ухудшается транспорт кислорода в ткан его полноценная утилизация, что отражается на показателях газов крови и рН кров!

При анализе биохимических показателей крови больных с МС после проведе ного лечения выявлена идентичность в коррекции уровней липидограммы, Ье- СРБ обеих сравниваемых группах. Однако в отношении уровней глюкозы более эффе тивным (в 4 раза) оказалось стандартное лечение с применением сахароснижающи препаратов больными с сахарным диабетом 2 типа.

Оба варианта лечения оказались сравнимыми в коррекции большинства показ телей окислительного стресса. В обеих группах имела место тенденция к снижени показателей свободно-радикального окисления и продуктов пероксидакции лип дов. Принципиальным отличием явилось более резкое увеличение активности СО и каталазы у больных контрольной группы, что можно объяснить дополнительно

токсикацией организма больных производными лекарственных препаратов и до-олнительной активностью систем детоксикации с выработкой АФК и, соответст-нно, и антиоксидантных ферментов, контролирующих их уровень. Подтверждени-этому явилось повышение у больных контрольной группы после лечения количе-ва ОШ и в плазме и в эритроцитах и неизменностей количества ОМБ. Использо-ние озонотерапии оказалось более эффективным для коррекции токсических про-лений окислительного стресса. Имело место достоверное снижение до нормы постелей фагоцитоза и оксида азота, коррекция в балансе антиоксидантных фер-ентов, снижении уровней токсических продуктов пероксидации липидов и белков, о положительно в свою очередь отразилось на функционировании эритроцитов, в стности, их кислородтранспортной функции.

На основании проведенных исследований можно заключить, что использование она в лечении больных с МС сопоставимо в эффективности коррекции показате-й метаболизма и окислительного стресса со стандартной терапией и даже превос-дит по некоторым параметрам. В связи с этим использование озонированного фи-ологического раствора может представлять как монотерапию, так и дополнитель-ым к стандартной терапии при высоких уровнях глюкозы.

Выводы:

. При метаболическом синдроме имеют место следующие нарушения:

- достоверное по сравнению с нормой увеличение уровня глюкозы в 2 раза;

- выраженные дислипидемии, проявляющиеся повышением уровней общего ХС,ТГ, ano В, ХСЛПНП при снижении ХСЛПВП;

- повышение на 90% значения коэффициента атерогенности;

- увеличение количества hs- СРБ на 180%.

После проведенного курса лечения больных с метаболическим синдромом как в основной группе с монотерапией озоном, так и в контрольной группе со стандартной терапией ,отмечалась достоверная нормализации уровней липидов, ano Б и hs- СРБ. Исключением явилось более выраженное снижение уровней глюкозы в контрольной группе.

. Метаболический синдром характеризуется развитием окислительного стресса, проявляющегося разбалансировкой про- и антиоксидантных систем организма.

4. Активность антиоксидантных ферментов в эритроцитах больных метаболиче ским синдромом до лечения отличается нарушением баланса: активность СОД каталазы достоверно снижена на 77% и 34%, соответственно, активность ГПО ГЛР, напротив, повышена на 300% и 200%.

Внутривенная озонотерапия способствует восстановлению баланса антиоксидант ных ферментов, а именно повышению активности СОД и каталазы и снижени ГПО и ГЛР. При стандартной терапии динамика изменения активностей ферменте сходная, но отличается резким увеличением активности СОД и каталазы.

5. Активация свободно-радикального окисления в крови больных с МС проявляете достоверным повышением параметров хемилюминограммы: 1тах на 40% в плаз ме и на 30% в эритроцитах; Б - на 43% и на 21%, соответственно; -2а соответ ственно, в плазме и в эритроцитах, на73% и 30%.

После проведенного лечения больных из основной и контрольной групп наблю дается тенденция к снижению величин показателей 1шах и Б в обеих группах Значение - 2а достоверно доходит до нормы в обеих группах, что косвенн свидетельствует о снижении количества и активности неферментативных анти оксидантов.

6. Развитие окислительного стресса при метаболическом синдроме в большей сте пени связано с активностью фагоцитоза и уровнем оксида азота, величины кото рых повышаются по сравнению с нормой, соответственно для фагоцитоза 1тах в 1,88 раза, Б - в 2,76 раз; уровень N0 в среднем в 1,5 раза.

После проведенного лечения в группе больных из основной группы активност фагоцитоза снижается до нормы, в контрольной группе не изменяется. Содержа ние оксида азота у больных в обеих группах с исходно сниженным уровнем по вышается, что, предположительно, свидетельствует об активации эндотелильно

- N0 синтазы, при исходно высоких, напротив, снижается только в основно группе, что, возможно, связано с его макрофагальным происхождением.

7. Следствием активации свободно-радикальных реакций в крови больных с мета болическим синдромом является значительное увеличение количества продукте пероксидации белков и липидов:

- содержание ОМБ, соответственно, для различных группировок аминокисло увеличивается от 6,7 до 58,8 раз;

- содержание продуктов липопероксидации: ДК - на 21%, ТК - на 16%, конечных продуктов ОШ - почти в 5 раз. После проведенного лечения в основной группе больных с МС отмечается тенденция к снижению уровней ДК и ТК. После лечения озоном в плазме и эритроцитах уровни ОШ достоверно снижаются, в крови больных контрольной группы достоверно повышаются.

Уровни ОМБ остаются в течении трех недель наблюдения без изменений в крови больных контрольной группы, в крови больных основной группы после озоно-терапии достоверно снижаются.

Список сокращений:

2,4-ДНФГ - 2,4-динитрофенилгидразин АГ - артериальная гипертония АОС - антиоксидантная система АФК - активные формы кислорода ИБС - ишемическая болезнь сердца ИР - инсулинорезистентность ЛП - липопротеины

ЛПВП - липопротеины высокой плотности ЛПНП - липопротеины низкой плотности ЛПОНП - липопротеины очень низкой плотности ЛППП - липопротеины промежуточной плотности МДА - малоновый диальдегид ДК - диеновые конъюгаты ТК - триеновые конъюгаты ОШ - основания Шиффа

Список опубликованных работ по теме диссертации

1. Масленников О.В. Озонотерапия в лечении и профилактике осложнений сахарного диабета / .В. Масленников, М.В. Ведунова, И.А. Грибкова, М,В. Радаева // Казанский медицинский жур-

. -2007. - №4. - т. 88, приложение. - с. 140-141.

2. Конторщикова К.Н. Патогенетические механизмы лечебного воздействия озона на организм ловека. Оценка эффективности использования озоновых технологий у больных метаболическим ндромом / К.Н. Конторщикова, М.В. Ведунова, М.В. Радаева, И.Е. Округ. // Харькивська хи-, гична школа. - 2007. - №3 (26). - т. 4. - с. 26-27.

3. Масленников О.В. Озонотерапия при заболеваниях, ассоциированных с атеросклерозом О.В. Масленников, М.В. Ведунова, И.А. Грибкова, М.В. Радаева // Казанский медицинский ¡кур нал. -2007. - №4. - т. 88, приложение. - с. 128-130.

4. Радаева М.В. Состояние перекисного окисления липидов и антиокидантной системы как по казатель эффективности и безопасности озонотерапии / М.В. Радаева, К.Н. Конторщикова, Е.Ф Королева // Казанский медицинский журнал. -2007. - №4. - т. 88, приложение. - с. 129-131.

5. Конторщикова К.Н. Озонотерапия в коррекции обменных нарушений при метаболическо синдроме / К.Н. Конторщикова, М.В. Ведунова, М.В. Радаева, Е.Ф. Королева // Вестник физиоте рапии и курортологии. - 2008. - № 5. - с.35-37.

6. Масленников О.В. Сахарный диабет и атеросклероз. Применение озонотерании / О.В. Мае ленников, М.В. Ведунова, И.А. Грибкова, М.В. Радаева // Вестник физиотерапии и курортологи - 2008. - № 5. - с.98-100.

7. Радаева М.В. Состояние антиоксидантной и детоксицирующих систем при коррекции мет болических нарушений малыми дозами озона / М.В. Радаева, М.В. Ведунова, К.Н, Конторщиков //Вестник Нижегородского университета им. Н.И. Лобачевского - 2008. -№ 2. - с. 100-102.

Подписано к печати 13.11.06. Формат 60х84'/1<. Бумага писчая. Печать офсетная. Гарнитура «Тайме» Усл. печ. л. 1. Тираж 100 экз. Заказ 206.

Подписано к печати 13.11.08. Формат 60х84'Лб. Бумага писчая. Печать офсетная. Гарнитура «Тайме» Усл. печ. л. 1. Тираж 100 экз. Заказ 206.

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Радаева, Марина Вячеславовна

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Метаболический синдром.

1.2. Свободнорадикальное окисление.

1.2.1. Механизм перекисного окисления липидов.

1.2.2. Фагоцитирующие клетки и оксид азота.

1.1.3. Механизм свободно-радикального окисления белков.

1.2.4 Антиоксидантные системы защиты.

1.3. Патологические изменения, индуцируемые перекисным окислением липидов и окислительной модификацией белков.

1.3.1. Окислительный стресс.

1.3.2. Биологические свойства озона.

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Материалы исследования.

2.2. Методы исследования.

2.2.1. Определение уровня глюкозы глюкозооксидазным методом.

2.2.2. Оценка липидного профиля стандартными тест-системами.

2.2.3. Количественное определение апо А1? апо В методом ИФА.

2.2.4. Определение количества Ьб СРЫ белка методом ИФА.

2.2.5. Метод индуцированной хемилюминесценции (Кузьмина, 1983).

2.2.6. Определение продуктов перекисного окисления липидов в сыворотке и эритроцитах.

2.2.7. Определение степени окислительной модификации белка по уровню карбонильных производных (Дубинина, 1995).

2.2.8. Определение общего белка биуретовым методом.

2.2.9. Определение фагоцитарной активности клеток крови хемилюминесцентным методом (Владимиров, Шерстнев, 1989).

2.2.10. Метод оценки концентрации NO по содержанию конечных метаболитов - нитрата и нитрита (Голиков и др., 2000).

2.2.11. Исследование ферментов антиоксидантной защиты.

2.2.12. Определение газового состава в венозной крови.

2.3. Статистическая обработка результатов.

Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.

3.1. Исследование биохимических параметров плазмы крови эритроцитов при метаболическом синдроме.

3.1.1. Характеристика больных с метаболическим синдромом.

3.1.2. Изучение биохимических показателей, характеризующих метаболический синдром.

3.1.3. Изучение свободно-радикальных процессов в плазме крови и эритроцитах при метаболическом синдроме.;.

3.1.4. Оценка корреляционных взаимоотношений.

3.2. Исследование влияния низких терапевтических доз озона на биохимические показатели крови больных с метаболическим синдромом.

3.2.1. Изучение биохимических показателей, характеризующих метаболический синдром после лечения озоном по сравнению со стандартной терапией.

3.2.2. Анализ показателей свободно-радикального окисления при коррекции метаболических нарушений.

3.2.3. Исследование газов крови и рН крови больных метаболическим синдромом до и после лечения озоном.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Активность антиоксидантных ферментов в норме и при окислительном стрессе на примере метаболического синдрома"

Метаболический синдром (МС) является одной из самых изучаемых патологий в мире в связи с тем, что сходные нарушения метаболизма связывают самые распространенные заболевания современного человека - атеросклероз, артериальная гипертензия, сахарный диабет 2 типа, ожирение. По современным представлениям метаболический синдром характеризуется совокупностью нарушений системной, в том числе гормональной регуляции липидного, углеводного, белкового и других видов обмена веществ под действием внешних и внутренних факторов (Ройтберг Г.Е., 2007).

Диагностировать МС у считается важным для решения вопроса о тактике ведения пациента в связи с тем, что среди лиц с МС риск развития ишемической болезни сердца и/или инсульта в три раза выше, при этом значительно увеличивается смертность от сердечно-сосудистых заболеваний (13 против 2,2%).

Эффективность использования различных критериев для выявления МС неравнозначна, что делает необходимым обсуждение и проведение сравнительного анализа существующих критериев диагностики и требует дальнейшего, более глубокого изучения биохимических показателей.

Развитие метаболического синдрома сопровождается накоплением продуктов углеводного и липидного обменов. Длительная циркуляция в крови избыточного количества этих продуктов приводит к конформационным изменениям лиганд-ных структур апопротеинов и в соответствии с этим к активации иммунологических реакций, и, в конечном счете, к образованию атеросклеротических бляшек (Кехгос1е, Виги^.Машоп, 2001).

Развивающаяся гипоксия наряду с накоплением продуктов липидного и углеводного обмена способствует активации реакций детоксикации, в том числе и свободно-радикальных процессов. С одной стороны, свободно-радикальные реакции направлены на поддержание гомеостаза, но, с другой, могут привести к развитию окислительного стресса.

Окислительный стресс является одним из тех стимуляторов, которые помогают включить клеточную адаптацию организма (Бурмистров, Дубинина, Ару-тюнян, 1997; Дубинина, 1998; Del Maestro, 1980; Smith, 1992; Van der Vliet, Bast, 1992). Соотношение активности антиоксидантных систем и количества продуктов пероксидации может меняться в зависимости от состояния организма, влияния различных факторов среды. В здоровом организме поддерживается сбалансированное соотношение между антиоксидантными системами и уровнем продуктов пероксидации, а также между самими компонентами антиоксидантной системы защиты. В тканях происходит постоянная генерация активных форм кислорода (АФК), которые, являясь сигнальными молекулами, обеспечивают сохранение нормального метаболического фона, необходимого для функциональной активности клеток. Стрессорная реакция организма в норме может сопровождаться кратковременным подъемом АФК. Это обусловлено реакцией адаптации организма к экстремальным условиям, в которых АФК выполняют роль вторичных мессенджеров, участвуя в передаче сигнальной трансдукции, в экспрессии ряда генов. С АФК связана экспрессия редокс-чувствительных генов, необходимых для включения адаптационных механизмов организма в экстремальных условиях. В результате обеспечивается своевременная мобилизация антиоксидантной защиты, которая участвует в снижении уровня реакционноспособных соединений, препятствуя тем самым проявлению их токсического действия.

Токсическое действие АФК проявляется при состояниях окислительного стресса, который сопровождается резкой интенсификацией свободно-радикальных процессов и снижением активности антиоксидантной защиты. Усиление свободно-радикальных процессов и развитие состояния окислительного стресса являются одним из патогенетических звеньев многих заболеваний, в том числе сердечно-сосудистых, воспалительных, а также старения организма (Болдырев, 1995; Гусев, Скворцова, 2001; Дубинина, 2003; Зенков, Ланкин, Меньшикова, 2001; Beal, 1997; Davies, 1995; Gibson, 2002).

Работ, посвященных исследованию свободно-радикального окисления при различных патологических состояниях довольно много (Бояринов Г.А. и др., 1999; Густов A.B. и др . 1999; Масленников О.В. и др., 2006, 2008; Bocci V., 1997; Viebahn-Hansler R., 1999; Меныцикова Е.Б. и др., 2008). Однако данных о развитии окислительного стресса при метаболическом синдроме явно недостаточно, причем это касается, прежде всего, исследований активности антиоксидантных ферментов.

В последние годы для коррекции метаболических нарушений активно применяются озоновые технологии (Масленников, 1999).

По данным Конторщиковой К.Н.и Перетягина С.П.(2006) основным действующим началом озона является нормализация про- и антиоксидантного баланса организма. В то же время исследований, посвященных использованию озоновых технологий в коррекции нарушений метаболического синдрома проведено недостаточно, в основном они касаются уже сформировавшихся осложнений MC (атеросклероз, сахарный диабет).

Целью данной диссертационной работы является изучение активности антиоксидантных ферментов при окислительном стрессе у больных с метаболическим синдромом до и после коррекции нарушений низкими терапевтическими дозами озона.

Соответственно поставленной цели решались следующие задачи:

1 Определить уровни основных биохимических показателей плазмы крови при метаболическом синдроме до и после коррекции нарушений.

2 Изучить активность антиоксидантных ферментов крови людей с метаболическим синдромом до и после лечения.

3 Исследовать интенсивность свободно-радикального окисления крови при метаболическом синдроме по данным биохемилюминесценции.

4 Проанализировать уровни продуктов перекисного окисления липидов и окисленно-модифицированных белков сыворотки крови больных с метаболическим синдромом до и после коррекции.

5 Исследовать активность фагоцитоза и измерить уровень оксида азота в крови больных с метаболическим синдромом до и после лечения.

Научная новизна.

Впервые при метаболическом синдроме изучено развитие окислительного стресса и охарактеризовано повышением уровней продуктов перекисного окисления липидов и окисленно модифицированных белков(ОМБ).

При метаболическом синдроме определен вклад в нарушение баланса про- и антиоксидантных систем повышенного уровня оксида азота плазмы крови и высокой активности фагоцитоза.

Впервые у больных с метаболическим синдромом с помощью современных методов анализа выявлен дисбаланс в активности антиоксидантных ферментов -супероксиддисмутазы, каталазы, глутатионпероксидазы и глутатионредуктазы до и после коррекции нарушений озоном.

Практическая значимость работы.

Представлена эффективность использования унифицированных методов оценки активности антиоксидантных ферментов для контроля за коррекцией метаболических нарушений как с помощью лекарственных препаратов, так и озоновых технологий с низкими дозами озона.

Полученные результаты дополняют имеющиеся данные по исследованию особенностей протекания метаболического синдрома в зависимости от проводимой коррекции.

Положения, выносимые на защиту.

- Метаболический синдром характеризуется развитием окислительного стресса, проявляющегося разбалансировкой активности антиоксидантных ферментов, накоплением продуктов пероксидации белков (ОМБ) и липидов (ДК, ТК и ОШ).

- Нарушение баланса про- и антиоксидантных систем при метаболическом синдроме обусловлено активацией фагоцитоза, выработкой оксида азота, повышенным уровнем липидов.

- Нормализация ПОЛ в сыворотке крови под действием озона связана со снижением уровней основных биохимических показателей, коррекцией активности антиоксидантных ферментов, нормализацией фагоцитоза и выработки оксида азота клетками эндотелия.

Апробация работы.

Результаты работы представлены на 1-й Азиатско-Европейской конференции (Казань, март 2007 г), на 2 Азиатско-Европейской конференции (Мисхор, Ялта, 2008 , 7 Всероссийской научно-практической конференции с международным участием « Озон в биологии и медицине» (Нижний Новгород, 2007).

Публикации.

По теме диссертации опубликовано 6 работ в ведущих отечественных журналах, рекомендованных ВАК и 1 тезисы доклада конференции.

Структура и объем диссертации.

Диссертационная работа в объеме 124 страниц состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, собственных результатов и их обсуждения, заключения, выводов, списка литературы.

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Радаева, Марина Вячеславовна

ВЫВОДЫ

1. При метаболическом синдроме имеют место следующие нарушения:

- достоверное по сравнению с нормой увеличение уровня глюкозы в 2 раза;

- выраженные дислипидемии, проявляющиеся повышением уровней общего ХС,ТГ, ano В, ХСЛПНП при снижении ХСЛПВП;

- повышение на 90% значения коэффициента атерогенности;

- увеличение количества hs- СРБ на 180%. 2. После проведенного курса лечения больных с метаболическим синдромом как в основной группе с монотерапией озоном, так и в контрольной группе со стандартной терапией ,отмечалась достоверная нормализации уровней липи-дов, ano Б и hs- СРБ. Исключением явилось более выраженное снижение уровней глюкозы в контрольной группе.

3. Метаболический синдром характеризуется развитием окислительного стресса, проявляющегося разбалансировкой про- и антиоксидантных систем организма.

4. Активность антиоксидантных ферментов в эритроцитах больных метаболическим синдромом до лечения отличается нарушением баланса: активность СОД и каталазы достоверно снижена на 77% и 34%, соответственно, активность ГПО и ГЛР, напротив, повышена на 300% и 200%.

Внутривенная озонотерапия способствует восстановлению баланса антиоксидантных ферментов, а именно повышению активности СОД и каталазы и снижению ГПО и ГЛР. При стандартной терапии динамика изменения активностей ферментов сходная, но отличается резким увеличением активности СОД и каталазы.

5. Активация свободно-радикального окисления в крови больных с МС проявляется достоверным повышением параметров хемилюминограммы: 1шах на 40% в плазме и на 30% в эритроцитах; Б - на 43% и на 21%, соответственно; tg -2а соответственно, в плазме и в эритроцитах, на 73% и 30%.

После проведенного лечения больных из основной и контрольной групп наблюдается тенденция к снижению величин показателей 1тах и Б в обеих группах. Значение ^ - 2а достоверно доходит до нормы в обеих группах, что косвенно свидетельствует о снижении количества и активности неферментативных антиоксидантов.

6. Развитие окислительного стресса при метаболическом синдроме в большей степени связано с активностью фагоцитоза и уровнем оксида азота, величины которых повышаются по сравнению с нормой, соответственно для фагоцитоза 1шах - в 1,88 раза, Б - в 2,76 раза; уровень N0 в среднем в 1,5 раза.

После проведенного лечения в группе больных из основной группы активность фагоцитоза снижается до нормы, в контрольной группе не изменяется. Содержание оксида азота у больных в обеих группах с исходно сниженным уровнем повышается, что, предположительно, свидетельствует об активации эндотелиальной - N0 синтазы, при исходно высоких, напротив, снижается только в основной группе, что, возможно, связано с его макрофагальным происхождением.

7. Следствием активации свободно-радикальных реакций в крови больных с метаболическим синдромом является значительное увеличение количества продуктов пероксидации белков и липидов: содержание ОМБ, соответственно, для различных группировок аминокислот увеличивается от 6,7 до 58,8 раз;

- содержание продуктов липопероксидации: ДК - на 21%, ТК - на 16%, конечных продуктов ОШ - почти в 5 раз. После проведенного лечения в основной группе больных с МС отмечается тенденция к снижению уровней ДК и ТК. После лечения озоном в плазме и эритроцитах уровни ОШ достоверно снижаются, в крови больных контрольной группы достоверно повышаются.

Уровни ОМБ остаются в течении трех недель наблюдения без изменений в крови больных контрольной группы, в крови больных основной группы после озоно-терапии достоверно снижаются.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Среди населения старше 30 лет распространенность метаболического синдрома составляет 10 -30%. Высокая вариабельность распространенности МС, по данным различных исследований, связана, прежде всего, с неопределенностью используемых диагностических критериев.

В связи с тем, что в последние годы было предложено большое количество определений МС, оценка и сравнение эпидемиологических показателей в различных популяциях представляется достаточно сложной и неоднозначной задачей. Так, по данным Европейского многоцентрового популяционного исследования в соответствии с критериями Международной федерации диабета (2005) была оценена распространенность МС в 7 странах Европы в зависимости от пола и возраста (цит. по Ротберг Г.Е.,2007). Среди лиц с МС 91% мужчин и 90% женщин имели артериальную гипертензию, гипергликемия натощак более 5,6 ммоль/л или СД 2-типа отмечались у 73 и 64%, соответственно. Повышенный уровень ТГ и/или снижение ХС-ЛПВП наблюдались в 77% у обоих полов.

В 2000 году были проведены исследования распространенности МС в соответствии с рекомендациями ВОЗ в Финляндии и Швеции (Руога1а М. Е1 а1., 2000). Оказалось, что среди обследованных с выявленным МС риск развития ишемической болезни сердца и/или инсульта был в три раза выше, при этом значительно увеличивалась смертность от сердечно-сосудистых заболеваний (13 против 2,2%).

Диагностировать МС у обследованных пациентов считается важным для решения вопроса о тактике ведения данного больного. Эффективность использования различных критериев определения МС неравнозначна, что делает необходимым обсуждение и проведение сравнительного анализа существующих критериев диагностики и требует дальнейшего, более глубокого изучения биохимических показателей при метаболическом синдроме.

В связи с вышесказанным можно утверждать, что интересным и важным представляется не только проведение проспективных исследований, но и углубленное изучение различных сторон метаболизма при данной патологии. К факторам риска развития МС относятся наследственные нарушения, гиподинамия, высокоуглеводный характер питания, психоэмоциональные перегрузки, курение. Все эти причины приводят к дисбалансу защитных систем организма, к которым относится и антиоксидантная система. В последнее время важную роль в патогенезе и прогрессировании метаболических нарушений придают интенсификации свободнорадикальных процессов. Важно отметить, что окислению подвергаются не только липиды, но и белки, в том числе белковые компоненты ферментов, рецепторов, ионных каналов плазматических мембран, определяющих возможность нормального функционирования различных клеток и тканей в целостном организме. Кроме того, МС характеризуется рядом нарушений липидного обмена, включающих гипертриглицеридемию и повышенное содержание НЭЖК в сыворотке крови. Эти показатели могут служить важными критериями в диагностике МС, а также в контроле за эффективностью проводимого лечения.

В связи с этим целью нашей работы явилась оценка свободно-радикального окисления липидов, белков и выявление особенностей липидного обмена (ТГ, НЭЖК) сыворотки крови больных с МС до и после лечения с включением озона и традиционной терапией.

Данное исследование было посвящено изучению при метаболическом синдроме активности антиоксидантных ферментов и связанных с изменением их состояния свободно-радикальных реакций.

Под наблюдением находилось 60 человек, которые согласно разработанным критериям АТР111 были отнесены к симптомокомлексу МС . Все больные проходили обследование на подтверждение данного диагноза и дальнейшее лечение в двух медицинских учреждениях. Больные контрольной группы находились на лечении в Клинической городской больнице №5 и получали стандартную лекарственную терапию, больные из основной группы наблюдались в Медицинском центре ЗАО «Тополь» и основное лечение состояло во внутривенном введении озонированного физиологического раствора с низкими терапевтическими концентрациями озона. У всех обследованных больных с МС при биохимическом анализе крови установлено достоверное увеличение уровней глюкозы, дислипи-демии с выраженными нарушениями в уровнях общего ХС, ХС-ЛПНП и ХС-ЛПВП, ТГ, апоВ, высокочувствительного СРБ.

Обнаруженный дисбаланс в активности основных антиоксидантных ферментов СОД, каталазы, ГПО, ГЛР, снижение общего пула неферментативной анти-оксидантной защиты при повышенных показателях свободно-радикального окисления , значительно увеличенных уровнях продуктов пероксидации белков и липидов позволило сделать заключение о развитии окислительного стресса при метаболическом синдроме.

В здоровом организме без метаболических нарушений окислительный стресс выполняет адаптационную роль, в основном отвечая за активацию антиокси-дантной защиты при образовании избыточного количества активных форм кислорода. Когда в организме создается порочный круг, связанный и с интенсивным образованием АФК клетками-фагоцитами (в том числе и оксида азота) против токсичных соединений, каковыми могут быть продукты деструкции белков, углеводов, липопротеидов при большом количестве субстрата для протекания свободно-радикальных реакций, можно говорить о токсическом окислительном стрессе.

В наших исследованиях развитие указанного варианта окислительного стресса подтверждалось достоверным увеличением активности фагоцитоза, повышением в среднем, хотя и не у всех больных, уровней оксида азота макрофагально-го происхождения. В результате имело место значительное увеличение в крови продуктов пероксидации белков и липидов. Накопление конечных продуктов ПОЛ - ОШ в эритроцитах может вызвать снижение деформируемости эритроцитов. В результате ухудшается транспорт кислорода в ткани, его полноценная утилизация, что отражается на показателях газов крови и рН крови. Изменение деформируемости эритроцитов является не только важным фактором транспорта кислорода в ткани и обеспечения их потребности в нем, но и механизмом, влияющим на эффективность функционирования антиоксидантной защиты и, в конечном итоге, всей организации поддержания прооксидантно-анти-оксидантного равновесия всего организма.

При анализе биохимических показателей крови больных с МС после проведенного лечения показана идентичность в коррекции уровней липидограммы, Ьб-СРБ в обеих сравниваемых группах. Однако в отношении уровней глюкозы более эффективным (в 4 раза) оказалось стандартное лечение с применением саха-роснижающих препаратов больными с сахарным диабетом 2 типа.

Оба варианта лечения оказались сравнимыми в коррекции большинства показателей окислительного стресса. В обеих группах имела место тенденция к снижению показателей свободно-радикального окисления и продуктов пероксидак-ции белков и липидов. Принципиальным отличием явилось более резкое увеличение активности СОД и каталазы у больных контрольной группы, что можно объяснить дополнительной интоксикацией организма больных производными лекарственных препаратов и дополнительной активностью систем детоксикации с выработкой АФК и, соответственно, и антиоксидантных ферментов, контролирующих их уровень. Подтверждением этому является повышение у больных контрольной группы после лечения количества ОШ в эритроцитах.

На основании проведенных исследований можно заключить, что использование озона в лечении больных с МС оказалось сопоставимо в эффективности коррекции показателей метаболизма и окислительного стресса со стандартной терапией и даже превосходит по некоторым параметрам. В связи с этим использование озонированного физиологического раствора может явиться методом монотерапии, но с учетом высоких уровней глюкозы и дополнительным к стандартной терапии.

102

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Радаева, Марина Вячеславовна, Нижний Новгород

1. Абрамова Ж.И., Оксенгендлер Г.И. Человек и противоокиелительные вещества. Л.: Наука. - 1985. - 232 с.

2. Алмазов В.А., Конторщикова К.Н., Гуревич B.C. перекисное окисление липидов и газовый состав крови при озонотерапии в постреанимационном периоде // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 1991. -№5.-С. 486-488.

3. Анисимов В.Н. Средства профилактики преждевременного старения (ге-ропротекторы) // Успехи геронтологии. 2000. - №4. - С. 275-277.

4. Аметов A.C., Демидова Т.Ю., Косых С.А. Синтез оксида азота в эндотелии сосудов у больных сахарным диабетом 2-го типа // Клин, медицина. -2005.-№8.-С. 62-68.

5. Андреев В.Н., Кушнарева Ю.Е., Старков A.A. Метаболизм активных форм кислорода в митохондриях // Биохимия. 2005. - Т. 70, №2. - С. 246-264.

6. Арутюнян A.B., Дубинина Е.Е., Зыбина H.H. Методы оценки свободнора-дикального окисления и антиоксидантной системы организма. Методические рекомендации под ред. В.Х. Хавинсона. СПб. - 2000. - 103 с.

7. Барабой В.А. Механизмы стресса и перекисного окисления липидов // Успехи современной биологии. -1991.-Т. 111, №6. С. 923-931.

8. Барабой В.А., Брехман И.И., Голоткин В.Г., Кудряшов Ю.Б. Перекисное окисление и стресс. СПб.: Наука. - 1992. - 292 с.

9. И. Барабой В.А., Сутковой Д.А. Окислительно-антиоксидантный гомеостаз в норме и патологии / Под ред. академика АМН Украины Ю.А. Зозули. — Киев: «Чернобыльинтеринформ». 1997. - 420 с.

10. Барсель В.А., Щедрина И.С., Вахляев В.Д. и др. Состояние системы пере-кисного окисления липидов у больных ишемической болезнью сердца // Кардиология. 1998. - №5. - С. 18-20.

11. Белова Л. А., Оглоблина О.Г., Белов A.A., Кухарчук В.В. Процессы модификации липопротеинов, физиологическая и патогенетическая роль модифицированных липопротеинов // Вопр. мед. химии. 2000. - Т. 46, №1. -С. 8-21.

12. Беляков H.A., Чубриева С.Ю. Метаболический синдром // Ожирение / Под ред. H.A. Беляков, В.И. Мазурова. Спб. 2005. - 217 с.

13. Беляков H.A., Чубриева С.Ю., Глухов Н.В. Метаболический синдром у женщин (патофизиология и клиника). СПб. - 2005. - 217 с.

14. Биоантиокислители в регуляции метаболизма в норме и патологии. / Под ред. Журавлева А.И. М.: Наука. - 1982. - 240 с.

15. Бобырев В.Н. Свободнорадикальное окисление в патогенезе заболеваний, сопряженных со старением // Патол. Физиология и эксперим. медицина. -1989.-№5.-С. 90-94.

16. Бойцов С.А., Голощапов A.B. Связь основных параметров сердечнососудистого синдрома со степенью нарушений углеводного обмена и выраженностью абдоминального ожирения у мужчин // Артериальная гипер-тензия. 2003. - Т.9, №2. - С. 87-93.

17. Болдырев A.A. Окислительный стресс и мозг // Соросовский образовательный журнал. 2001. - Т.7, №4. - С. 21-28.

18. Болдырев A.A. Двойственная роль свободно-радикальных форм кислорода в ишемическом мозге // Нейрохимия. 1995. - Т. 12, №3. - С. 3-13.

19. Бондарь H.A., Климонтов В.В., Поршенников H.A. Окислительная модификация белков при диабетических микроангиопатиях // Сахарный диабет. 2000. - №3. - С. 9-11.

20. Бондарь И. А., Климонтов В. В., Поршенников И. А. Окислительная модификация белков при диабетических микроангиопатиях // Сахарный диабет. 2004. - №3. - С. 9-11.

21. Бондарь Т.М., Ланкин В.З., Антоновский В.Л. Восстановление органических гидропероксидов глутатионпероксидазой и глутатион-8-транс-феразой: влияние структуры субстрата // Докл. АН СССР. 1989. - Т. 304. -С. 217-220.

22. Бояринов Г.А., Соколов В.В. Озонированное искусственное кровообращение. Экспериментальное обоснование и результаты применения.v Н.Новгород. «Покровка». 1999. - 318 с.

23. Бурлакова Е.Б., Храпова И.Г. перекисное окисление липидов мембран и природные антиоксиданты // Успехи химии. 1990. -№9. - С. 1540-1557.

24. Бурмистров С.О., Дубинина Е.Е., Арутюнян A.B. Перекисное окисление липидов, белков и активность антиоксидантной системы сыворотки крови новорожденных и взрослых // Акушерство и гинекология. 1997. - №6. -С. 36-40.

25. Вермель А.Е. Кардиальный синдром X // Клиническая медицина. 2006. -№6. - С.5-9.

26. Владимиров Ю.А. Развитие хемилюминесцентных методов исследования для диагностики сердечно-сосудистых заболеваний // Биохемилюминес-ценция в сельском хозяйстве. М.: Наука. - 1986. -С. 57-65

27. Владимиров Ю.А. Свободные радикалы в биологических системах // Со-росовский образовательный журнал. 2000. - №12. - С. 13-19.

28. Владимиров Ю.А. Свободные радикалы и антиоксиданты // Вестн. РАМН. -1998.-№7.-С. 43-50.

29. Владимиров Ю.А., Шерстнев М.П. Хемилюминесценция клеток животных // Итоги науки и техники. Биофизика. - 1989. - Т. 24.

30. Владимиров Ю.Ф., Азизова O.A., Деев А.И. Свободные радикалы в живых системах // Итоги науки и техники. Сер. Биофизика. 1991. - Т. 29. -249 с.

31. Волчегорский И.А., Налимов А.Г., Яровинский Б.Г., Лифшиц Р.И. Сопоставление различных подходов к определению продуктов ПОЛ в гептан-изопропанольных экстрактах крови // Вопросы медицинской химии. -1989.-№1.-С. 127-131.

32. Гинзбург М.М. Ожирение и метаболический синдром. Влияние на состояние здоровья, профилактика и лечение. Самара: Парус - 2000. - 160 с.

33. Голиков П.П. Оксид азота в клинике неотложных заболеваний. М.: Мед-практика-М. - 2004. - 180 с.

34. Горбатенкова Е.А., Владимиров Ю.А., Парамонов Н.В., Азизова O.A. Красный свет гелий-неонового лазера реактивирует супероксид-дисмутазу // Бюл. эксперим. биологии и медицины. 1989. - С. 302-305.

35. Граник В.Г., Григорьев Н.Б. Оксид азота (NO). Новый путь к поиску лекарств. М.: «Вузовская книга», 2004. - 360 с.

36. Гусев Е.И., Скворцова В.И. Ишемия головного мозга. М.: Медицина. -2001.-327 с.

37. Давыденкова Е.Ф., Шаффран М.Г., Векслер Б.М. и др. Липиды и липопе-роксиды крови в семьях больных ишемической болезнью сердца // Кардиология. 1989. - №6. - С. 10-14.

38. Дедов И.И., Мельникова Г.А. Ожирение: этиология, патогенез, клинические аспекты. М.: Медицинское Информационное Агенство. 2006. - 452 с.

39. Дедов И.И., Шестакова М.В. Сахарный диабет и артериальная гипертен-зия. М: Медицинское информативное агентство. 2006. -344 с.

40. Диденко В.А. Метаболический синдром X: история вопроса и этиопатоге-нез // Лабораторная медицина. 1999. - №2. - С. 49-56.

41. Долгов В.В., Селиванова A.B., Ройтман А.П., Щетникович К.А., Аметов A.C., Демидова Т.Ю., Ильин A.B. Лабораторная диагностика нарушений обмена углеводов. Метаболический синдром, сахарный диабет. М. Тверь: ООО «Издательство «Триада». - 2006. - 128 с.

42. Дубинина Е.Е. Биологическая роль супероксидного анион-радикала и супероксиддисмутазы в тканях организма // Успехи совр. биологии. -1989.-Т. 108, №1.С. 3-18.

43. Дубинина Е.Е. Продукты метаболизма кислорода в фундаментальной активности клеток. (Жизнь и смерть, созидание и разрушение). Физиологические и клинико-биохимические аспекты. СПб.: Изд-во Медицинская пресса.-2006.-400 с.

44. Дубинина Е.Е. Роль активных форм кислорода в качестве сигнальных молекул в метаболизме тканей при состояниях окислительного стресса // Вопр. мед. химии. 2001. - Т. 47, №6. - С. 561-581.

45. Дубинина Е.Е. Роль окислительного стресса при патологических состояниях нервной системы // Сб. статей РАН «Успехи функциональной нейро-химии». Под ред. Дамбиновой С.А. и Арутюняна A.B. Изд. СПб университета. - 2003. - С. 285-301.

46. Дубинина Е.Е. Характеристика внеклеточной супероксиддисмутазы // Вопр. мед. химии. 1995 - Т. 41., вып. 6. - С. 8-12.

47. Дубинина Е.Е., Бурмистров С.О., Ходов Д.А., Поротов Г.Е. Окислительная модификация белков сыворотки крови человека, метод ее определения // Вопросы медицинской химии. 1995. - Т.41, №1. - С. 24-26.

48. Журавлев A.A., Зубкова С.М. Антиоксиданты. Свободно-радикальная патология. М.:ФГОУ ВПО МГ АВМ и Б им. К.И. Скрябина. - 2008. - 269 с.

49. Задиодиченко И.С., Адашева Т.В., Демичева О.Ю. Артериальная гипертония при метаболическом синдроме: патогенез, основы терапии. // Consilium medicum.- 2004. Т.6, №9. - С. 234-236.

50. Зайчик А.Ш., Чурилов Л.П., Строев Ю.И. Понятие о метаболическом синдроме // Патофизиология. Т.П. Патохимия. Патофизиология эндокринной системы и метаболизма. 3-е изд. СПб. 2007. - №5. - С. 63-74.

51. Закирова А.Н. Корреляционные связи перекисного окисления липидов, ан-тиоксидантной защиты и микрореологических нарушений в развитии ИБС // Терапевтический архив. 1996. - №9. - С. 37-40.

52. Зенков Н.К., Ланкин В.З., Меныцикова Е.Б. Окислительный стресс. Биохимический и патофизиологический аспекты. М.: Наука/Интерпериодика. - 2001. - 340 с.

53. Зенков H.K., Меныцикова Е.Б. Активированные кислородные метаболиты в биологических системах // Успехи соврем, биологии. 1993. - Т.113, вып. 3. - С. 286-296.

54. Зенков Н.К., Меныцикова Е.Б., Вольский H.H., Козлов В.А. Внутриклеточный окислительный стресс и апоптоз // Успехи соврем, биологии. -1999.-Т. 117, вып.5.-С. 439-449.

55. Зенков Н.К., Меньшикова Е.Б., Шереин С.М. Окислительный стресс. Диагностика, терапия, профилактика. Новосибирск. 1993. - 181 с.

56. Зенков Н.К., Меныцикова Е.Б., Шкурупий В.А. Механизмы активации макрофагов // Успехи совр. биологии. 2007. - Т. 127, №3. - С. 243-256.

57. Камышников B.C. Справочник по клинико-биохимической и лабораторной диагностике. М.:»МЕДпресс-информ». - 2004. - 920с.

58. Климов А.Н., Никуличева Н.Г. Обмен липидов и липопротеидов и его нарушения / Руководство для врачей. СПб: Питер. - 1999. - 240 с.

59. Коган А.Х., Кудрин А.Н., Кактурский JI.B., Лосев H.H. Свободноради-кальные перекисные механизмы патогенеза ишемии и инфаркта миокарда и их фармакологическая регуляция // Патол. физиология и эксперим. терапия. 1992. - №2. - С. 5-15.

60. Конторщикова К.Н. Влияние озона на метаболические показатели крови в эксперименте in vitro // Гипоксия и окислительные процессы: сбор. науч. трудов / Нижегородский мед. институт. Нижний Новгород. - 1992. - С. 50-54.

61. Конторщикова К.Н. Озон и перекисное окисление липидов // Тез. докл. 1-ой Всероссийской научно-практической конференции «Озон в биологии и медицине». 1992. - С. 12-13.

62. Конторщикова К.Н. Озонотерапия: Биологические механизмы эффективности // Эксперим. и клиническая дерматокосметология. 2004. - №3. - С. 13-21.

63. Конторщикова К.Н. Перекисное окисление липидов в норме и патологии: Учебное пособие. Н.Новгород. - 2000. - 24 с.

64. Конторщикова К.Н., Перетягин С.П. Закономерности формирования адаптационных механизмов организмов млекопитающих при системном воздействии низкими дозами озона. Диплом открытия №309, № А-387 от 9 февраля 2006.

65. Коротаева A.A. Липиды и статины в процессах воспаления, тромбообразо-вания и тромболиза // Фундаментальные исследования и прогресс кардиологии. М.: Машмир. - 2002. - С. 141-146.

66. Костючек Д.Ф., Соколова Л.В. Окислительная модификация белка и эндогенная интоксикация как показатели тяжести гестоза // Журнал акушерства и женских болезней. 1998. - №2. - С. 31-35.

67. Кузин А.И., Чередникова М.А., Васильев A.A., Камерер О.В. Артериальная гипертензия и сахарный диабет 2 типа у больных метаболическим синдромом: особенности влияния на липидный спектр. // Артериальная гипертензия. 2003. - №2. - С. 26-30.

68. Кулинский В.И. Биохимические аспекты воспаления // Биохимия. 2007. -Т. 72.-С. 733-746.

69. Кузьмина Е.И., Нелюбин A.C., Щенникова М.К. Применение индуцированной ХЛ для оценок свободно-радикальных реакций в биологических субстратах // Биохимия и биофизика микробиологов. 1983. - С. 41-48.

70. Курашвили Л.В., Волков A.C. Прогностическая значимость определения холестерина во фракции липопротеидов высокой плотности // Клиническая диагностика. 1993. - №3. - С. 5-8.

71. Ланкин В.З., Вихерт A.M., Тихазе А.К. и др. Роль перекисного окисления липидов в этиологии и патогенезе атеросклероза // Вопр. мед. химии. -1989.-№3.-С. 18-24.

72. Ланкин В.З., Лисина М.О., Арзамасцева Н.Е. и др. Окислительный стресс при атеросклерозе и диабете // Бюл. эксперим. биологии и медицины. -2005. Т. 140, №7. - С. 48-51.

73. Ланкин В.З., Тихазе А.К., Беленков Ю.Н. Свободнорадикальные процессы при заболеваниях сердечно-сосудистой системы // Кардиология. 2000. -Т. 40. №7.-С. 48-61.

74. Ланкин В.З., Тихазе А.К., Ракита Д.Р. и др. Утилизация активных форм кислорода и липопероксидов в крови больных инфарктом миокарда // Терапевт. арх. 1985. - №5. - С. 58-62.

75. Либерман И. С. Метаболический синдром в свете эволюционно-генетических закономерностей // Российский кардиологический журнал. -2002. -№1. С.3-10.

76. Лущак В.И. Свободнгорадикальное окисление белков и его связь с функциональным состоянием организма // Биохимия. 2007. - Т. 72, вып. 8. -С. 995-1017.

77. Ляхович В.В., Вавилин В.А., Зенков Н.К., Меныцикова Е.Б. Активная защита при окислительном стрессе. Антиоксидант-респонсивный элемент // Биохимия. 2006. - Т. 71,вып.9.-С. 1183-1197.

78. Максименко A.B. Модифицированные препараты супероксиддисмутазы и каталазы для защиты сердечно-сосудистой системы и легких. Успехи совр. биологии. - 1993. - Т. 113, №3. - С. 351-365.87