Жизненные циклы, патогенность и дифференциация кокцидий родов Sacrocystis и Cystoisospora

Вершинин, Игорь Иванович

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Жизненные циклы, патогенность и дифференциация кокцидий родов Sacrocystis и Cystoisospora
ВАК РФ 03.00.19, Паразитология

Автореферат диссертации по теме "Жизненные циклы, патогенность и дифференциация кокцидий родов Sacrocystis и Cystoisospora"

ТЮМЕНЬ - 2000

Работа выполнена в Уральской государственной сельскохозяйственной академии.

ОФИЦИАЛЬНЫЕ ОППОНЕНТЫ:

1. Доктор медицинских наук, профессор

В.И. Мефодъев

2. Доктор ветеринарных наук, профессор, Заслужен-

ный деятель науки РФ Б.А. Тимофеев

3. Доктор медицинских наук РОССИЙСКАЯ

Защита состоится 14 января 2000 г. в 10 часов на заседании диссертационного совета Д 020.86.01 при Всероссийском научно-исследовательском институте ветеринарной энтомологии и арахнологии, по адресу 625041, г. Тюмень, ул. Институтская, 2 ВНИИВЭА.

С диссертацией в виде научного доклада можно ознакомиться в библиотеке ВНИИВЭА.

Диссертация в виде научного доклада разослана " А1" 1999 г.

В.К. Ястребов

ГОСУДАРСТВЕННАЯ

БИБЛИОТЕКА

ВЕДУЩАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ:

Уральский институ ветеринарной медицины

Ученый секретарь диссертационного совета доктор биологических наук, профессор

Н.В. Салопов

I. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

( Настоящая диссертационная работа, представленная в виде научного

доклада, является итогом 25-летних (с 1971 по 1996 гг.) исследований по .^Ц^аркоспоридиям и цистогооспорам сельскохозяйственных, и домашних животных, выполненных в соответствии с тематическими планами Уральской государственной сельскохозяйственной академии и Государственным планом 0.65.05, заеданием 05.03.Д по программе головной организации (Всероссийский научно-исследовательский: институт экспериментальной ветеринарии им. Я.Р. Коваленко). Номера государственнойрегистрации: 01.818001881; 01.9.20000890 (1971-1995 гг.)

АКТУАЛЬНОСТЬ РАБОТЫ

Саркоспоридии (Sarcocystis) относятся к числу наиболее распространенных и все еще мало изученных паразитов сельскохозяйственных животных. Практически все взрослое поголовье крупного рогатого скота и овец инвазировано саркоспорвдиями. Несмотря на то, что впервые саркоспоридии были выявлены в 1843 год}' (MiescherF., 1843), до 1972 года они оставались организмами неизвестной природы и невыясненного систематического положения. А поскольку до 1972 года ' __ была известна лишь диетная стадия (саркодиста) в мышечной ткани животных, которая не вызывала сильных изменений в организме, то саркоспоридии считались безвредными структурами, что в известной мере сдерживало расшифровку их жизненных циклов. Выяснение кокиддийной природы токсоплазмы (1969, 1970 гг.), близко родственной саркоспоридиям, послужило толчком к изучению жизненных циклов саркоспоридий. Фейер (Fayer R., 1970, 1972) первым получил на культуре тканей доказательства кокцидийной природы саркоспоридий. Дальнейшее подтверждение кокцидийной природы Sarcocystis получили немецкие исследователи (Rommel М., Heydom А.О.; Heydom А.О., Rommel М., 1972; Rommel М. et al, 1972). Было установлено, что саркоспоридии - это , кокцидии с облигатно гетероксенным двуххозяинным циклом развития,

, т<чем собака, кошка и человек выступают как дефинитивные хозяева, в !ни'ше которых происходит гаметогенез и образование ооцист ::юроидной структуры, а крупный рогатый скот, овцы, свиньи | тись промежуточными хозяевами, в организме которых протекает

i g лое развитие саркоспоридий. Выяснилось также, что многие виды н оспоридий являются высокопатогенными (в острую фазу болезни) и - вызывать анорексию, тяжелое переболевание, резкое снижение -активности, аборты, менингоэнцефалиты, гибель животных, нность (и качество мяса) животных с цистами саркоспоридий

(хроническая фаза болезни) резко снижается. Только от саркоцистоза крупного рогатого скота в США ежегодный ущерб составляет 95 миллионов долларов (Payer R., Dubey J.P., 1986). Нельзя исключать причастность саркостгоридиозной инвазии к эозинофильному миозиту овец, крупного рогатого скота. Два вида саркоспоридий (Sarcocystis hominis и S. Snihommis) вызывают у человека (дефинитивного хозяина этих видов) кишечную форму саркоспоридиоза. Иногда (очень редко) у человека в мышечной ткани находят (постмортзльно) саркоцисты, то есть человек может быть и промежуточным хозяином определенных видов саркоспоридий. Предполагается (на основании структуры выявленных cap ко цист), что у человека могут паразитировать саркоцисты не менее 10 видов рода Sarcocystis от различных животных, а существование вида S. lindemaniii Rivolta. 1879, считавшегося специфичным для человека, подвергается сомнению (Н.С. Jeffrey, 1974; Beaver et al, 1979). Таким образом, оказалось, что цисты саркоспоридий из мышечной ткани сельскохозяйственных животных, известные под родовым названием Sarcocystis, представляют собой стадию развития кокцидий, описанных ранее у кошек, собак, других плотоядных и человека как некоторые виды Isospora. Незнание жизненных циклов Sarcocystis привело к том)', что разные стадии одного и того же паразита, то есть тканевые цисты в промежуточном хозяине и ооцисты изосдороидной структуры из фекалий дефинитивного хозяина (домашние и дикие плотоядные, человек) обозначали соответственно двумя: различными родовыми названиями: ?

Sarcocystis и Isospora. Это внесло путаницу в номенклатуру видов Isospora, поскольку спорулированные ооцисты и сгторсцисты Sarcocystis также были описаны как изоспоры. Номенклатура видов рода Sarcocystis сельскохозяйственных животных также сильно запутана. Поскольку ранние авторы, описывая (по саркоцистам) один и тот же вид Sarcocystis, но применяя при этом разные методы исследования (гистосрезы, нативный материал) давали ему разные названия, то это породило путаницу, которая не устранена полностью до настоящего времени. У крупного рогатого скота цистные стадии были описаны под названиями Sarcocystis hirsuta, S. fusiformis, S. blanchardi, Miescheria cruzi и другими. Стадии саркоспоридий крупного рогатого скота, выделенные из фекалий собак и кошек были описаны под названием Isospora bigemina. У овец цистные стадии были описаны под названиями S. tenella, Baibiania gigantea. Стадии саркоспоридий овец, выделенные из фекалий собак назывались I. bigemina. У свиней цисты саркоспоридий были описаны под названиями S. miescheriana, Synchytrium miescheriana; у лошадей -S. bertrami. Все ооцисты и спороцисты, выделенные из фекалий собак назвали Isospora bigemina.

После выявления циклов развития саркоспоридий оказалось, что за такими названиями как S. tenella, S. ftisiformis, S. miescheriana, S. bertrami

"скрывается" не один; а. несколько самостоятельных видов Sarcocystis, что еще более осложнило их видовую идентификацию. В настоящее время установлено, что у крупного рогатого скота паразитируют 3 вида саркоспоридий, у овец - 4, у коз - 3, у лошадей - 2, у свиней - 2. ^^едительных данных, подтверждающих наличие у свиней третьего вида, с окончательным хозяином кошкой, пока нет.

К сожалению, до настоящего времени многие недоразумения происходят из-за использования разной терминологии применительно к изучению саркоспоридий. Часто термин "саркоцисты" употребляется для обозначения кокцидий рода Sarcocystis (независимо от стадии жизненного цикла возбудителя), не учитывая, что так можно называть лишь одну стадию паразита - тканевую цисту. Именно этим можно объяснить появление таких словосочетаний как "спороцисты саркоцист"; "жизненный цикл развития саркоцист" и так далее. Необходимо упорядочить и употребление терминов "саркоспоридиоз" и "саркоцистоз".

Одним из основных критериев видовой идентификации саркоспоридий (наряду с морфологией зрелых саркоцист) является хозяинная специфичность. К 1986 году род Sarcocystis включал более 122 видов, для которых дефинитивные и промежуточные хозяева выявлены лишь у 56 (N.D. Levine, 1986). Ежегодно этот список пополняется. Но не все признают хозяинную специфичность саркоспоридий и их видовое многообразие. Д.И. Панасюк, В.Н. Минтюгов, Е.П. Быкова (1971) считают, / что существует только один вид - S. miescheriana. Д.И. Панасюк, ЩгГВ. Кононенко. Ю.К. Горбов (1975) считают, что "саркоцисты на любой стадии развития легко приживаются у других видов животных". Ю.К. Горбов (1976) пол)'лил положительный результат экспериментального заражения белых мышей путем длительного скармливания им мышечной ткани с саркоцистами крупного рогатого скота, овец и свиней. Izzel Din Afaf, A.M. Shommein (1974) в Судане выявили микросаркоцисты в сердечных и жевательных мышцах белых мышей после скармливания им саркоцист из сердец крупного рогатого скота и пришли к выводу об отсутствии хозяинной специфичности у саркоспоридий.

t До недавнего времени (1972-1973 гг.) мало,si*ар известно о путях

передачи саркоспоридий. Многочисленные попытки передать в экспериментальных условиях саркоцистозную инвазию путем инокуляции цистных мерозоитов обычно оканчивались неудачей (Reich, 1888; Pfeiffer, 1889; Kasparek, 1895; Smith, 1901;Negre, 1907;*Chiwy-Colback, 1926; Awad, 1954; Mando-ur, 1965; Tadros, 1970) (цит. no: Tadros et Laarman, 1976).

He нашло подтверждение и предположение о внутриутробной передачу инвазии (Gamharn et Lainson, 1960, Lainson, 1986; Cunningham, 1973). Не находили цисты саркоспоридий в плодах у сильно

vb*

кнвазированных саркоспоридиими коров (Viljoeu. 1918), овец (Bertram, 1892). короткохвостых полевок (Tadros, 1976).

Положительный, результат от скармливания животным .мышечной ткани с саркоцистами саркоспоридий получили: Leuckart. 1863; Smith, 190.1. 1905; Koch, 1904; Negre. 1907; Negri, 1908; Darling, 1910; Crawley, v 1914: Morullar, 1920; Babudicrv. 1932; Sebek, I960; Mandour. 1965; A wad. 1973).

За последние 25 лет опубликовано более 800 работ, в том числе обзорных статей и монографических исследований, посвященных саркоспоридиям, их жизненным циклам, ультраструктуре цистных и других стадий паразита, таксономии, эпизоотологии, вызываемой патологии, хозяинной специфичности, а также близко родственным тканевым цистообразующим кокцидиям (Markus et al, 1974; Suteu, 1975; Dubey, 1976; Lev me, 1977; Tadros Laarman, 1976:1982; Бейер, 1977, 1979, 1988; Бейер и соавт., 1981; Бейер и Полянский, 1979; Beyer, Radchenko, 1995; Mehlhorn, Neydom, 1978; Вершинин, 1977, 1979, 1996; Chobobotar, Sholtyseck, 1982; Dubey et al, 1989). Коллектив авторов (C.M. Пак и др., 1984) издал монографию: "Саркосноридии животных в Казахстане", в которой приведен видовой состав саркоспоридий сельскохозяйственных и диких млекопитающих Казахстана и морфобиолотическая характеристика выявленных видов. Саркоцдаэзу овец посвящена диссертационная работа С.А. Позова (1990), а морфофункциональным проявлениям таразито-хозяинных отношений при саркоспоридиозе овец - диссертация . В.М. Сахно (1997). Морфологическая и иммунологическая характеристика ^ родов Sarcocystis и Toxoplasma дана в диссертационной работе М.Д. Новака (1994). О новых путях распространения саркоспоридий у мышей и крыс, биологических особенностях саркоспоридий у мышевидных грызунов сообщают Грикенене и др. (1993); Grikienieiie, Kutkiene, 1998; Kntkiene, Grikienieiie, 1998; Kytkene, Frikenetie, 1998; Радченко и соавт., 1998.

В специальной литературе нет объяснения механизма патогенного действия саркоспоридий у промежуточных и дефинитивных хозяев. Недостаточно четко разработаны критерии дифференциации саркоспоридий от близко родственных паразитов (Toxoplasma, Besnoitia, Hammondia, Frenkeüa, Cystoisospora).

Изучение жизненных, циклов Cystoisospora (=Isospora от плотоядных) необходимо по той причине, что к настоящему'' времени у собак и кошек выявлено более 40 видов эймериидных кокцидий, относящихся к родам Cystoisospora, Sarcocystls, Toxoplasma, Hammondia, Besnoitia. Все они имеют изоспороиднуго структуру ооцист и без знания циклов развития, струюурных особенностей эндогенных стадий хозяинной специфичности, дифференциация их не всегда возможна.

Кроме того. без знания жизненных цистов тканевых цисгообразующих кокцидай (и в то« числе саржоспоридий) нельзя изучать эпизоотологию (эпидемиотологию) вызываемых ими болезней, патогенез, клинические проявления. диагностику. лечебно-профилактические *#к$)олр пятая.

ЦЕЛЬ РАБОТЫ

Целью работы было воспроизвести экспериментально и дать описание в сравнительном плане всех стадий жизненного цикла одного из наиболее распространенных видов 8атсосу.ча'5 и СузЫяозрога домашних животных; изучить характер патогенного воздействия на организм инвазированных животных. Разработать критерии дифференциации ЗагсосуБйБ и СуэЮ^оБрога от близко родственных организмов.

ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ

' 3.

Выявить видовой состав Sarcocystis у крупного рогатого скота, овец, коз, свиней, лошадей в зоне Среднего Урала.

Изучить развитие Sarcocystis от крупного рогатого скота в дефинитивном и промежуточном хозяевах.

Проследить развитие S. cruzi в культуре ткани при заражении спорозоитами.

Изучить развитие S. gigantea в культуре ткани при заражении цистными мерозоитами.

Изучить патологоморфологические изменения при остром экспериментальном саркоцистозе телят.

Изучить патологоморфологические изменения при экспериментальном энтеральном саркоцистозе у собак.

Изучить возрастную восприимчивость собак к саркоцистозной инвазии и возможность супер - и реинвазирования. Воспроизвести цикл развития Cystoisospora felis, С. ohioensis. Для разработки критериев дифференциации Sarcocystis и Cystoisospora (=Isospora от плотоядных) от близко родственных организмов (Toxoplasma, Besnoitia, Hammondia) предполагается экспериментально заразить котят (раздельно) тканевыми цистами Toxoplasma gondii и Besnoitia besnoiti, зрелыми ооцистами токсоплазмы, а также проследить развитие паразита в культуре ткани при заражении спорозоитами Toxoplasma gondii. Собак намечено заразить экспериментально зрелыми ооцистами Hammondia he3rdomi.

10. Разработать методические рекомендации по диагностике и

профилактике саркоцисгозов сельскохозяйственных животных и

цистоизоспорозов кошек, собак.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА

Впервые выявлен видовой состав саркоспоридий у крупного рогатого скота, овец, свилей, лошадей в зоне Среднего Урала.

Впервые в мире дефинитивным: хозяином Sarcocystis cruzi от крупного рогатого скотаи S. tenella (= S. ovicanis) от овец зарегистрирован песец.

Впервые в нашей стране в условиях эксперимента изучено развитие S. cruzi в дефинитивном и промежуточном хозяевах.

Впервые проведено культивирование со стадии спорозоита S. cruzi в культурах ткани,

Впервые изучено развитие S. gigantea в культуре ткани при заражении цистными мерозоитами.

Впервые дано объяснение механизм}' патогенного действия саркоспоридий в разные фазы развития в промежуточном и дефинитивном хозяине.

Разработаны морфологические и биологические критерии дифференциации Sarcocystis, Cystoisospora от близко родственных организмов (Toxoplasma, Hammondia, Besnoitia, Frenkelia).

Даны оригинальные микрофотографии основных стадий развития тканевых цистообразующих кокцидий.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ РАБОТЫ

Результаты исследований, выполненных автором, могут быть использованы в практической деятельности ветеринарных врачей ветеринарных лабораторий, мясокомбинатов, лабораторий ветсан-экспертизы рынков, ветврачей лечебниц, хозяйств.

Результаты полученных исследований легли в основу впервые изданных (совместно с лабораторией протозоологии ВИЭВ) "Методических рекомендаций по диагностике и профилактике саркоцистозов сельскохозяйственных животных", одобренных ГУВМСХ СССР и утвержденных В АСХНИЛ в 1981 году.

В декабре 1992 года изданы "Рекомендации по борьбе с эймериозами и изоспорозами животных", Москва (в соавторстве с ВИЭВ, МВА, ВНИИБП, ВВИ), одобренные секцией паразитологии отделения ветеринарной медицины Российской сельскохозяйственной академии, а в

1994 год\ переизданные под названием "Методические рекомендации по 6opi,бе с эймериозами и изоспорозами животных", Москва.

В июне 1999 года изданы "Методические указания по лабораторной диагностике токсоплазмоза" (в соавторстве с Центральной научно-^'гедодической ' ветеринарной лабораторией, Всероссийским государственным научно-исследовательским институтом контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов и Всероссийский!. институтом экспериментальной ветеринарии), утвержденные Департаментом ветеринарии Минсельхозпрода России.

Подана заявка на патент Российской Федерации "Способ обезвреживания мясопродуктов дта профилактики саркоцистозов сельскохозяйственных животных" № 90/99 (в соавторстве с Н.В. Телятниковойи Ю.А. Кирсановым).

Материалы диссертации вошли в книгу "Протозойные болезни сельскохозяйственных животных" под редакцией профессора

H.И. Степановой, М. "Колос", 1982, 351 с. ив учебное пособие (монографию): "Кокцидиозы животных и их дифференциальная диагностика", Екатеринбург, 1996. 264 е., написанное лично автором.

На защиту выносятся следу ющие вопросы:

I. Саркоспоридии - это эймериидные тканевые цистообразующие кокцидии.

2. Острый саркоцистоз у промежуточных хозяев, вызываемый патогенными видами Sarcocystis, совпадающий с предцистной мерогонией, протекает по типу аллергоза.

3. Критерии дифференциации Sarcocystis и Cystoisospoia от родственных организмов (Toxoplasma, Besnoitia, Hammondia, Frenkelia) основаны прежде всего на морфологии цистных стадий и структуре жизненных циклов этих кокцидий.

ПУБЛИКАЦИИ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ

По теме диссертации опубликовано 83 работы в научных трудах УрГСХА, ВАСХНИЛ, в тематическом сборнике "Токсоплазмиды" АН СССР, изд-во "Наука": в книге "Протозойные болезни сельскохозяйственных животных", М. "Колос". 1982, 351 е.; в журналах "Ветеринария", "Доклады ВАСХНИЛ", "Цитология", "Вестник ветеринарии", а также в материалах Международных и Всероссийских научно-производственных конференций и совещаний.

Результаты научных исследований включены в базовый учебник "Паразитология и инвазионные болезни сельскохозяйственных животных" для ветеринарных вузов под редакцией профессора К.И. Абуладзе (М. "Колос", 1982), а также в последующем его переиздании (1990).

В 1996 году вышла монография (учебное пособие): И.И. Вершинин "Кокцидиозы животных и их дифференциальная диагностика", Екатеринбург, 1996, 264 с.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ

Материалы диссертационной работы доложены и обсуждены на отчетных ежегодных научных конференциях Уральской государственной сельскохозяйственной академии (1972-1998); на Всесоюзной научной конференции "Состояние изученности кровепаразитарных и малоизученных протозайных болезней сельскохозяйственных животных и перспективы их ликвидации в стране", Москва, 1975; на Республиканской конференции "Паразитарные болезни сельскохозяйственных животных и меры борьбы с ними", Алма-Ата, 1979; на секции "Паразитология и профилактика инвазионных болезней сельскохозяйственных животных" "Отделения ветеринарии ВАСХНИЛ", Москва, 1977, 1980; на Всесоюзном симпозиуме по кишечным простейшим, Вильнюс, 1979; на совещании-семинаре Заведующих кафедрами паразитологии 11-22 ноября 1980 г., Москва; на заседании рабочей группы по протозойным болезням сельскохозяйственных животных Координационного совета по программе О.СХ.90. Москва, 1984; на Республиканской конференции "Ветеринарные проблемы индустриального животноводства", Тарту, 1983; на III съезде >

Всесоюзного общества протозоологов "Современные проблемы протозоологии", Вильнюс, 1982; на Всесоюзной научно-производственной конференции "Протозойные болезни сельскохозяйственных животных, переносчики их возбудителей и современные методы борьбы с ними", Самарканд-Джамбай, 1983; на Всесоюзной научной конференции "Проблемы развития науки на Урале до 1990-2000 гг.", Свердловск, 1981; на IV съезде Всесоюзного общества протозоологов "Современные проблемы протозоологии", Ленинград, 1987; на Республиканском симпозиуме "Профилактика болезней птиц", Тарту, 1989; на Международных конференциях "Ветеринарная медицина' 94, '95, '96", Тарту, 1994, 1995, 1996; на Республиканской конференции "Достижения ветеринарной науки и практики по повышению продуктивности сельскохозяйственных животных", Тарту, 1988; на Заседании рабочей комиссии ОНК Вет "Паразитология и профилактика инвазионных болезней сельскохозяйственных животных", Москва, 1990; на V Всесоюзном съезде протозоологов (Витебск, сентябрь 1992 г.); на Заседании секции отделения ветеринарной медицины РАСХН "Инвазионные болезни сельскохозяйственных животных", Мо'сква, 1995; на Совещании паразитологического общества при РАН "Паразитологические проблемы больших городов" Второе совещание по (

теме "Окружающая среда и проблемы паразитарного загрязнения", Санкт-Петербург, 1996; на Межрегиональной научно-практической конференции "Опыт и проблемы повышения качества молочной продукции", Курган, 1997 часть 1-2; на Межрегиональной научно-практической конференции ф "Экологические аспекты продовольственной безопасности, контроль за качеством пищевых продуктов", 1998; на конференции Уральской медицинской академии и Уральской государственной академии "Практические мероприятия цо профилактике патогенного воздействия факторов окружающей среды на здоровье населения", Екатеринбург, 1998; на Международной научно-производственной конференции по протозоологии "Диагностика, лечение и профилактика протозойных болезней животных", Москва, 1997.

II. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1. Материалы и методы исследования

Изучение саркоспоридий сельскохозяйственных и домашних животных проводили с 1971 по 1996 гг., а цистоизоспор (= изоспор Лц ~ плотоядных) - с 1968 по 1996 гг. Исследования проведены на базе кафедры инфекционных и инвазионных болезней Уральской государственной сельскохозяйственной академии, учебного хозяйства "Уралец", а также в производственных условиях на мясокомбинатах городов: Екатеринбург, Богданович, Алапаевск, Красноуфимск, Нижний Тагил, Невьянск, Каменск-Уральский, Ирбиг, Троицк, а также в хозяйствах области.

За указанный период с целью выявления видового состава саркоспоридий у сельскохозяйственных животных паразитодоги ческому обследованию подвергнуты мышцы пищевода, сердца, диафрагмы, скелетная мускулатура туш животных разных возрастов, поступавших на мясокомбинаты и рынки из городов Свердловской, Челябинской и Курганской областей.

В Свердловской области послеубойному паразитологическому обследованию подвергли животных Алапаевского, Артинского, Ачитского, Каменского, Байкаловского, Белоярского, Богдановичского, Верхне-Пышминского, Ирбитского, Красноуфимского, Невьянского, Серовского, Сысертского, Талицкого и Тугулымского районов; из Курганской области -Альменьевского, Калматовского, Катайского, Лебяжьевского, Притоболъского районов.

Мышечные пробы исследовали методом визуального осмотра, компрессорной саркоцистоскопии, методом М. Козар. 1971; методом А. Какуриной. 1970; методом переваривания проб в искусственном желудочном соке или растворе трипсина., а также заражали исследуемым материалом собак и кошек. В отдельных случаях проводили ^ ^ гистологическое исследование материала (кусочки сердца, жевательных мышц, языке, диафрагмы, конечностей). Материал исследовали по общепринятой методике (с заливкой блоков в целлоидин и последующей окраской гематоксилин-эозином). Для изучения структуры цистных мерозоитов применяли метод А. Козелки на (см. Вершинин, 1982), В этом случае при иммерсионной системе микроскопа в мерозоитах хорошо видны светлые ядра с ярко-красными глыбками хроматина. Передняя часть мерозоита окрашивается в розовый, а задняя - в голубой цвет (при окраске по Романовскому - Гимзе). Проведена сравнительная оценка постмортальных методов выявления саркоцист сельскохозяйственных животных.

Всего обследовано 2870 туш крупного рогатого скота, 867 овец, 1650 свиней, 94 лошадей и 47 коз.

Кроме того, чтобы исключить или подтвердить возможность внутриутробного заражения телят от коров с интенсивной саркоцистозной инвазией исследовали 38 шгодов в возрасте 4-6 месяцев, а также 47 телят первых двух недель жизни, павших от диспепсии или колибактериоза.

Чтобы проследить развитие ЗагсосуяПз спга в промежуточном г

хозяине в учхозе "Уралец" проведен опыт на 15 телятах черно-пестрой породы в возрасте 1,5-2 месяца, живой массой 75-90 кг. Хозяйство благополучно по инфекционным болезням. Телята свободны и от кокцидий Телят поделили на две группы: первая -12 голов (подопытная) и вторая - 3 головы (контрольная). Телят первой группы содержали индивидуально, чтобы исключить возможность проглатывания транзитных спороцист саркоспоридий, а телят второй группы содержали вместе. Навоз удаляли из помещения два раза в день гидросмывом. Материалом для заражения служили спороцисты Б. сги/л, полученные от трех собак-дворняжек 3-4 месячного возраста, которым предварительно (за две недели до опыта) скормили в два приема по 200-300 граммов фарша, приготовленного из сердец с саркоцистами крупного рогатого скота через два часа после убоя животных. С поверхности слизистой оболочки всего тонкого кишечника собак-доноров (собак умерщвляли током) соскабливали слизистую оболочку (кишечник предварительно промывали водой) и собранную слизь хранили в холодильнике в колбе с физиологическим раствором при + 2 0 С.

Телятам первой (подопытной) группы перорально было дано По 100.000-150.000 спороцист 8. сгаг!. Подопытные телята были убиты через 5, 10,15, 20,25, 30,40, 50, 70, 80, 90 и 100 дней после заражения.

Из всех внутренних органов (сердце, легкие, печень, лимфатические узлы, почки, селезенка, поджелудочная железа, головной мозг и др.) были сделаны мазки: - отпечатки с последующей окраской по Романовскому-Гимзе, а также взяты кусочки каждого органа и помещены в 10 %-ный раствор нейтрального формалина для последующего гистологического исследования по общепринятой методике. Контрольных телят заражению не подвергали. Они были убиты через 100 дней после начала опыта и подвергнуты аналогичному с подопытными животными исследованию.

Для изучения развития 8. епш в организме дефинитивного хозяина для опыта отобрали 13 собак-дворняжек в возрасте от 1,5 до 6 месяцев, свободных от кокцидиозной инвазии. Животные с аскаридатозной и цветодозной инвазией ^начала опыта были дегельминтизированы пиперазином-адипинатом и празиквантелом.

31 собакам (подопытная группа) было скормлено сырое саркоцистозное мясо крупного рогатого скота (кусочки сердца) ло 200-300 граммов одному животному. Две собаки (вторая группа) являлись контролем и заражению не подвергались. Материал для заражения подопытных животных получали на Свердловском мясокомбинате и сразу же после убоя крупно го рогатого скота доставляли в кафедру и не позднее чем через 3-4 часа скармливали собакам. Подопытные собаки предварительно были выдержаны на 12-часовой голодной диете. Собак (подопытных и контрольных) на протяжении опыта кормили кашами, хлебом, молоком.

Подопытные собаки были убиты через 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 11, и 14 дней после заражения. Контрольные через 14 дней после начала опыта.

Для выявления эндогенных форм саркоспоридий с поверхности слизистой оболочки гонкого отдела кишечника, предварительно промытого водой, на всем его протяжении делали соскобы через каждые 5 см, отступя на такое же расстояние от желудка. Соскобы исследовали под микроскопом с фазово-контрастным устройством. Кусочки кишечника из разных участков фиксировали в 10 %-ном нейтральном формалине и оставляли для гистологического исследования, которое проводили по общепринятой методике.

Для изучения возможности развития 8. ш.ш в культуре ткани при заражении спорозоитами спорулированные спороцисты и ооцисты 8. спи были получены из кишечника собаки, свободной от кокцидий, которой за 15 дней до убоя было скормлено сырое мясо крупного рогатого скота, инвазированного саркоцистами саркоспоридий.

Для культивирования 8. сгц/л использовали: фибробласты куриные (ФК), полученные из 9 дневных куриных эмбрионов. Клеточный монослов появлялся через сутки после внесения клеток эмбриона в питательную среду. Питательной средой в период получения монослоя являлся гидролизат лактальбумина с добавлением 10 %-ной сыворотки крови

крупного рогатого скота, пенициллина н стрептомицина по 100 ЕД на 1 мл среды. После заражения клеток к гидрол.юату лактальбумиш добавляли лишь пенициллин и стрептомицин в указанных выше количествах. Питательную среду сменяли ежедневно вплоть до прекращения опыта.

Для получения спорозоитов S. cruzi соскабливали слизистую ^ ф оболочку тонкого отдела кишечника собаки в местах с наибольшим скоплением спороцист и ооцист саркоспоридий. Собранный материал помещали в

5 %-ный раствор бикарбоната натрия из расчета I : 5, тщательно взбалтывали 2-3 минуты, затем центрифугировали в течение 5-7 минут при 2000 оборотах в минуту. Надосадочную жидкость сливали, так как в ней ооцист и спороцист не было. На электромешалке механически разрушали оболочки ооцист. К полученной взвеси спороцист добавляли 5 мл I %-ного трипсина и 0,5 мл желчи собаки, после чего взвесь помещали в водяную баню при температуре 38-38,5 и С на 1,5-2 часа. Периодически взвесь спороцист взбалтывали (через 15-20 минут) и проводили контроль за ходом эксцистирования спорозоитов. При получении 80 %-ного выхода спорозоитов эксцистирование прекращали. После внесения спорозоитов в пробирки с монослоем ФК наблюдение за их развитием проводили через 14, 20, 36, 56, 72 часа. Через эти интервалы извлекали покровные стекла с монослоем и развивающимися в нем спорозоитами, фиксировали в метиловом спирте, а затем окрашивали гематоксилин-эозином.

Через такие же интервалы извлекали из пробирок монослой, который не подвергался заражению спорозоитами, а служил контролем. Его также фиксировали, окрашивали и исследовали.

Для того, чтобы изучить развитие Sarcocystis gigantea (= S. ovifelis) в культурах тканей при заражении диетными мерозоитами монослой фибробластов был получен от 30-25-дневных эмбрионов овец (ФО), и от 9-10-дневных куриных эмбрионов (ФК). Оба типа монослоев были заражены мерозоитами S. gigantea, которые извлекались из цист, локализованных в адвентиции пищеводов овец. Цисты вылущивались из ткани пищевода и помещались в физиологический раствор при 38 0 С. Оболочку и внутренние перегородки цист разрушали механически. Тщательное разделение зонтов проводили пипеткой, многократно набирая и выпуская взвесь цистозоитов в физиологическом растворе. К содержимому цист добавляли 2-3 мл гидролизата лактальбумина и фильтровали через 4 слоя стерильной марли для удаления остатков разрушенных цист. Подсчет мерозоигов проводили в камере Горяева. В пробирки с монослоем вносили по 1 млн. зоитов на 1 мл питательной среды и инкубировали при 37-38 0 С. Питательной средой в период получения, монослоя служил дактадьбумин с добавлением 10 %-ной сыворотки крови крупного рогатого скота и антибиотиков (пенициллин и стрептомицин), по 100 ед. на 1 мл среды.

После .инокуляции мсрозоитов к гидролизату лакталъбумина добавляли только пенициллин и стрептомицин в тех же дозах. Питательную среду в пробирках заменяли свежей через 20-24 часа. Монос.пой ФО с развивающимися зонтами фиксировали метанолом через 21, 24. 36, 48. 54, 60 и 72 часа, а монослой ФК через iX. 24. 36r 48; 54: 60 и 72 часа. Препараты окрашивали гематоксилин-зозмном. Контролем служили 12 пробирок с монослоем ФО и ФК. в которые зоитов не вносили.

С целью изучения патологоморфологических изменений, при остром экспериментальном саркоцистозс телят, двум двухмесячным телятам чернопестрой породы перорально было дано соответственно 3 и 5 млн. спороцист S. cruzi каждому. Третий теленок такого же возраста заражению не подвергался и служил контролем. На 25-й день после заражения подопытные телята были вынужденно убиты из-за их крайне тяжелого состояния.

Патологоморфологические изменения при экспериментальном энтеральном саркоцистозе у собак изучали у собак-доноров, подвергавшихся интенсивному заражению путем скармливания сердец крупног о рогатого скота с цистами S. cruzi.

Возрастную восприимчивость собак к саркоцистозной инвазии я возможность многократного (3-6 раз) реинвазирования с интервалом в две недели после прекращения выделения спороцист проводили в опытах на 36 собаках (4 подопытных группы) в возрасте от двух месяцев до 10 лет.

Для изучения жизненного цикла Cystoisospora felis (= Isospora felis) ^ ооцисты вначале были получены от котенка со спонтанной инвазией, поступившего на кафедру терапии института в июле 1968 года, а в последующем от кошек, подвергнутых экспериментальному заражению этим видом изоспор.

Свежевыделенные ооцисты, а также ооцисты, отмытые от фецес и перенесенные в 2,5 %-ный раствор бихромата калия (К2 Cr2 О7) для споруляции при комнатной температуре, находились под постоянным наблюдением до образования спороцист и спорозоитов. Проводилось регулярное измерение и микрофотографирование ооцист на разных этапах спорогонии.

Выделение ооцист из фекалий проводили посредством центрифужного метода Дарлинга, но без глицерина (в качестве флотирующей жидкости был использован лишь насыщенный раствор Na С1). Отмывали водой от соли также с помощью центрифуги. Подсчитывали отмытые ооцисты в опытах по заражению по методике, описанной в диссертационной работе П.И. Пашкина, 1966.

В опытах по выяснению возрастной восприимчивости животных было 12 кошек в возрасте от одной недели до 15 лет. Кошек содержали индивидуально в клетках, подвергавшихся ежедневной тщательной очистке и периодическому обеззараживанию огнем паяльной лампы.

Перед введением в опыт животных 10 дней выдерживали в особом помещении, чтобы исключить спонтанную инвазию изоспорами. Кормили кухонными отходами, молоком два раза в день из чистой посуды, подвергавшейся ежедневному кипячению.

Дозы спорулированных, предварительно отмытых от бихромата калия ооцист 1. felis, применявшиеся для заражения, варьировали в пределах от 5 до 50 тысяч одному животному, в зависимости от его возраста. Оодисты давали per os с помощью глазной пипетки в небольшом количестве воды (от 2 до 5 мл). Фекалии животных исследовали ежедневно до тех пор, пока животное не было убито или не погибало в ходе опыта.

Зараженные кошки были убиты через 2, 5, 8, 11, 14, 17, 20 дней после заражения (по 3 животных в каждый период). С поверхности слизистой оболочки тонкого кишечника на всем его протяжении делали скальпелем соскобы через каждые 5 см, отступя от желудка. Всего от одного животного брали обычно 14-18 проб.

Толстый отдел кишечника делили на три части и соответственно исследовали. Соскоб изучали компрессорно между предметным и покровным стеклами, используя различные объективы биологического микроскопа. Всех обнаруженных паразитов сразу же измеряли. Кусочки кишечника из разных его участков консервировали для последующего гистологического исследования. Из внутренних органов (сердце, печень, почки, селезенка, головной мозг), а также мезентериальных лимфатических узлов и мышц делали мазки, подсушивали, фиксировали . спиртом ректификатом и красили по Романовскому-Гимзе в течение 40-60 1 ^ минут. Часть материала консервировали для последующего гистологического исследования.

Три котенка, свободные от изослорц в возрасте: трех недель, двух и четырех месяцев были убиты как контрольные для сопоставления с результатами микроскопии соскобов кишечника подопытных животных.

Изучение жизненного цикла Cystoisospora rivolta проведено на щенках 2-3-месячного возраста. В опыте было 7 щенков от собак-дворняжек (5 подопытных, а 2 - в контроле). Все щенки до начала опыта трижды, в течение недели, были обследованы на гельминтозы и цистоизоспорозы. Четыре щенка с токсокарами подвергнуты дегельминтизации декарисом. Щенков содержали индивидуально в клетках, кормили овсяной кашей, хлебом и кухонными отходами.

Исходным материалом для заражения были клонированные культуры ооцист С. ohioensis, полученные первоначально от щенка со спонтанной инвазией С. ohioensis. Дозы для заражения составляли 10.000-30.000 спорулированных ооцист одному щенку при пероральной даче. Двух контрольных щенков заражению не подвергали. Подопытные, щенки были убиты, а их кишечники обследованы на наличие и локализацию эндогенных стадий цистоизоспор через 2, 3, 4, 5, 6 дней после заражения.

1б

Контрольных щенков обследовали постмортально на 7-й д;ень опыта. Методы паразитологического исследования кишечника щенков аналогичны таковым для С. felis.

Для сравнительного изучения энтеральных стадий развития в кошке, а Цк?зд<жс стадий образующихся в культурах тканей у Toxoplasma gondii и Besooitia besnoiti после инокуляции слорозоитов этих паразитов намечено было получить в больших количествах ооцисты этих двух видов кокцидий.

Для сравнительного изучения с другими цистообразующими кокцидиями энтеральных. стадий развития Toxoplasma gondii и Besnoitia besnoiti в кошке, а также в культурах тканей после инокуляции спорозоитов этих паразитов, намечено было получить в больших количествах ооцисты токсоплазмы и В. besnoiti.

С этой целью в 1975 году из лаборатории токсоплазмоза ИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи АМН СССР (от Д.Н. Засухина, М.А. Савиной) получена белая мышь с цистами авирулентного штамма тохссоплазмы в головном мозге.

После скармливания кусочков мозга с цистами токсоплазмы дв}гм котятам двухмесячного возраста, свободным от кокцидий, через 5 и 7 дней соответственно начали выделяться с фекалиями в колоссальных количествах неспорулированные ооцисты токсоплазмы. Процесс выделения ооцист у одного котенка составил 7, а у другого 10 дней. Ооцисты токсоплазмы из фекалий выделяли, используя центрифужный метод Дарлинга, где глицерин заменили насыщенным раствором Na GL ^ Отмытые (путем трехкратного центрифугирования) свежевыделенные ооцисты переносили в колб)' со стерильной дистиллированной водой, Для лучшей аэрации колбу соединяли резиновыми шлангами с микрокомпрессором МК-2. Воздух, нагнетаемый микрокомпрессором, пропускали (по методшее Т. А. Шибаловой) через колбу с серной кислотой.

Перед проведением опыта спорулированные ооцисты токсоплазмы (споруляция проходила за 2-3 дня при комнатной температуре) подвергали, "обезвреживанию" по методике Джексона (Jackson, 1964). Спорозоиты получали по методике Дорана и Фарра (Doran, Farr, 1962) в модификации: Т.А. Шибаловой (1968) с небольшими изменениями: спороцисты инкубировали при 38 °С с добавлением кошачьей желчи. Полученные спорозоиты отмывали теплым буферным раствором, посредством центрифугирования и после суспендирования использовали для заражения культуры клеток. Заражению подвергали первично трипсинизированную линию культуры куриных фибробластов (КФ), полученную из 10-12-дневных эмбрионов цыплят. Питательной средой, для культуры клеток, служили первые два дня 10 %-ный гидролизат-лактальбумин на растворе Хенкса, к которому добавляли 10 % сыворотки крови крупного рогатого скота, а также индикатор феноловый красный из расчета 10 мг/мл, стрептомицин и пенициллин по 100 ед. каждого на 1 м.ч

питательной среды рН питательной среды поддерживали на уровне 7.17,2. Температуру в термостате поддерживали в пределах 38-39 0 С. После двухнедельного культивирования в пробирках на половинках покровных стекол развивался монослой клеток. На этот слой клеток вносили спорозоиты токсоплазмы, предварительно проверенные под ^ ф микроскопом на жизнеспособность. Дозы заражения составляла .100.000 спорозоитов на одя\- пробирку. Последующее обновление среды производили каждые 20-24 часа. Зараженный монослой клеток периодически подвергали микроскопии (после фиксации в метиловом спирте и последующей окраски гематоксилин-эозином). Контролем служила извлеченная в те же часы и также окрашенная, но не зараженная культура ФК.

Для изучения эндогенного развития токсоплазмы был проведен опыт по скармливанию котятам цист и спорулированных о оцист токсоплазмы. С целью получения ооцист Besnoitia besnoiti трем котятам (при двз^х контрольных) трехмесячного возраста были скормлены по 50, 150 и 400 цист безноитий, выделенных из кожи и подкожных фасций крупного рогатого скота и интенсивной инвазией (120-250 цист безноитий на 1 см 2) (материал для заражения получен был в 1975 году из Казахского НИВИ от М.В. Хвана). Копрологические исследования котят проводили через 5 дней после заражения в течение месяца. Заражения котят не произошло.

Поскольку, проводя многократно опыты по скармливанию собакам сырой саркоцистозной говядины, иногда на^-ряду со спороцистами t

саркоспоридий мы в фехсалиях выявляли неспорулированные ооцисты л -V Hammondia heydomi, то мы провели опыт по заражению спорулированными ооцистами этой кокцидии собак, а позднее - мышечной тканью этих собак накормили подопытных собак.

Все стадии развития кокцидий в опытах были сфотографированы микрофотонасадкой МФН-1, МФН-2,

Результаты опытов обработаны статистически, достоверность различий оценивали по Стьюденту.

2.2. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.2.1. Видовой состав БагсоеувШ у крупного рогатого скота, овец, коз, свиней, лошадей в зоне Среднего Урала

В Свердловской области экстенсивность саркоцистозной инвазии крупного рогатого скота варьировала в различных районах от 10 до 90 %. С возрастом животных экстенсивность и интенсивность инвазии нарастает.

Отмечена обратная зависимость между упитанностью .животных и интенсивностью инвазии. При исследовании 4-6 месячных плодов от коров с интенсивной саркоцистозной инвазией внутриутробной инвазии не установлено. Не было ее и у телят первых двух недель жизни.

Если применять с целью диагностики саркоцистозной инвазии метод переваривания мышечной ткани в трипсине или желудочном соке, то процент пораженных животных значительно возрастет. Доминирующим видом у крупного рогатого скота, выявлен 8. спш. Основная локализация этого вида - сердце. Количество саркоцист в 26 срезах компрессорш колебалась (в случаях интенсивной инвазии) в пределах 100-250. Максимальное количество саркоцист (до 200 и более) обнаружено в левых желудочках сердца. Саркоцисты в сердечной мышце имели удлиненно-овальную форму с закругленными краями. Размер - 0,08-0,33x0,02-0.08 мы. В мышечных волокнах диафрагмы преобладали тонкие длинные саркоцисты размером 0,14-0,5 х 0,02-0,11 мм. Саркоцисты в мышечных срезах из диафрагмы иногда были видны невооруженным глазом (при просмотре окрашенных срезов в компрессории на источник света) в виде мелких темных штрихов. Диаметр саркоцист, локализовавшихся в миокарде часто в 5-6 раз превышал диаметр мышечных клеток. Стенка (оболочка) саркоцист тонкая (около 1 мкм) гладкая со слабо заметными редкими ворсинчатыми выростами. Полость цисты поделена септами на отдельные сегменты, заполненные мерозоитами длиной 10-13 мкм.

I У свиней экстенсивность саркоцистозной инвазии составила 6 %

(Вершинин, 1990). Наиболее часто саркоцисты находили в пищеводе, диафрагме. Величина саркоцист (п =70): 150-380 мкм в длину и 25-100 мкм в ширину; толщина стенки цисты 2,5-3,7 мкм (в среднем 3,2 мкм) оболочка цисты имеет поперечную исчерченность. Размер мерозоитов в зрелых цистах - 13,7-18,8 мкм в длину (в среднем 10,7 мкм) и 3,5-5,4 мкм в ширину (в среднем. 3,7 мкм). В результате опыта по скармливанию саркоцистозной свинины собакам и кошкам заражение произошло лишь у собак. Таким образом, у свиней выявлен вид 8. ппезсЬепапа (= 8. зшеатэ).

Зараженность саркоспоридиями лошадей составила 19,1 % (Вершинин, 1990), Саркоцисты чаще находили в пищеводе, диафрагме, реже в скелетной мускулатуре. Величина саркоцист (п = 50) была 370850 мкм' в длину и 41,6-70 мкм в ширину; толщина оболочки цисты & среднем 2 мкм. Имеется поперечная исчерченность оболочки цисты. Размер мерозоитов в зрелых цистах ш£»лас» в пределах, 15-20 мкм (в среднем. 18,7 мкм) в длину и 4,4 (в среднем) в ширин}' Скармливание мышечной ткани лошадей трем шенкам и трем котятам в возрасте от 2 до 5 месяцев вызвало заражение лишь у щенят. Препатентный период составил 11,13 и 14 дней. Таким образом, у лошадей выявлен вид 8.1дуеп.

У овец, как правило, преобладает зараженность видом Б. 1епс11а (= Б. oy.icau.is) - до 95-100 %; а вид 5. д1цап1'еа (= 8. о\т1еП5) регистрируется у 45 % овец старше двухлетнего возраста,

У коз саркоцисты выявлены у 38.3 % в пищеводах. диафрагме, скелетных мышцах. Саркоцисты имели размер 145 = 900x55 -80 мкм, хотя ^^ у отдельных животных их величина достигала .1.5-2 мм и более. Оболочка (стенка) цисты - 2.5-3 мкм с поперечной исчерченностью. Мерозоиты в зрелых цистах были, 11.5-15.5 х 3.0-4.5 мкм. Мышечной тканью коз с саркоцистами накормили трех щенков и двух котят. Через 7 и 8 дней соответственно щенки стали выделять спороцисты величиной 13-15 х 8,510 мкм. Котята спороцист не выделяли. Таким образом, у домашних коз выявлен вид 8. саргасашБ.

Ниже в таблице приведена сравнительная оценка постмортальных методов выявления саркоцист у группы животных разных видов.

Обнаружено инвазированных животных

Вид животного Кол-во исследованных живот- Методом компрессорной микроскопии Методом Какуриной А.Г. Методом Козар М. Методом Козелкина А. Методом переваривания мышц в трипсине

ных Всего % Всего % Всего % Всего % Всего %

Крупный рогатый скот 54 38 70,3 44 81,4 41 75,9 14 25,9 54 100,0

Овцы 28 17 60,7 20 71,4 21 75,0 6 21,4 26 93,0

Свиньи 45 4 8,8 6 13,3 5 11,1 3 6.4 12 26,6

Лошади 17 4 23,5 5 29,4 4 23,5 2 11,8 - -

Всего: 144 63 46,5 75 54,2 71 49,3 25 10,4 92 63,0

2.2.2. Развитие ЗагсосузИз епт в дефинитивном и промежуточном хозяевах

Результаты постмортального паразитологического обследования 11 подопытных собак, которых накормили саркоцистозной мышечной тканью сердец крупного рогатого скота, были следующими: у собаки убитой в первый день после заражения (через 10 часов) гамонты

обнаружены в бокаловидных клетках кишечных ворсинок. Мужские гамонты (микрогамонты) имели размер 7.0 N 5.2 мкм. а женские (макрогамонты) - 6.7 * 5.5 мкм. Все гамонты были заключены в паразитофорные вакуоли и располагались возле верхушек ворсинок. ^¿Кенск.их макрогамонтов было в десятки раз больше (по сравнению с мужскими). Макрогамонты на второй день имели размер 9-15 мкм в диаметре и у них было компактное хроматиновое ядро (при окраске по Романове кому-Гим.зе). Количество микрогамет в зрелых микрогамонтах варьировалось от 3 до 12. Микрогамонты имели овальной формы остаточные тела. Весь процесс гаметогонии, по-видимому, происходит очень быстро, так как у собаки, убитой через три дня после заражения уже встречалось большое количество молодых, с очень тонкой оболочкой, ооцист. То же можно было наблюдать у собаки, убитой через четыре дня после заражения. В цитоплазме только что сформировавшейся ооцисты « видны крупные гранулы диаметром до 1,5 мкм. Такие гранулы хорошо видны в свежем материале при световой микроскопии. По-видимому, гаметогония происходит асинхронно, поскольку и ооцисты и гамонты можно находить в одно и то же время.

Ядро неспорулированной ооцисты часто располагалось на периферии ооцисты:.

Во все последующие дни после заражения (с 5 по 9-й) происходит спорогония ооцист в клетках стромы кишечных ворсинок (то есть 1 субэпителиально). Особенно четко заметны последовательные деления У ядра в оописте в период с 5-го по 7-й день. Вначале ядро оодисты делится на два более мелких ядра, которые располагаются по полосам цитоплазмы. Одновременно с делением ядра происходит "перешнуровка" на две части цитоплазмы ооцисты. После второго ядерного деления образуются два споробласта, каждый с двумя ядрами, расположенными также по полюсам, которые, вскоре сформировав оболочку, становятся спороцистами. Затем в каждой спороцисте формируется по четыре спорозоита и остаточное тело, состоящее из мелких гранул. Тонкая оболочка зрелых ооцист прогибается, плотно облегая спороцисты, или совсем разрывается и спороцисты оказываются свободными. Именно поэтому, как правило, в фекалиях окончательных хозяев находят свободные спороцисты.

Спороциста (в отличие от ооцисты) имеет довольно толстую оболочку, форма у нее яйцевидная, обычно с несколько упрощенной одной стороной. Средний размер ее 10,8 х 16.3 мкм. Особенно много спороцист (и ооцист) находится в строме верхушек кишечных ворсинок. Стадий бесполого развития саркосноридий в кишечной стенке (ворсинках) не выявлено.

С целью выяснения возможности отыскать иных (кроме собаки) дефинитивных хозяев Б. епш, в ноябре-декабре 1973 года в Мраморском зверохозяйстве Полевского района Свердловской области четырем песцам,

свободным от кокдидиозной инвазии, скормили свежее сырое мясо крупного рогатого скота (сердце, пищеводы, диафрагму), полученное на Свердловском мясокомбинате сразу же после убоя .животных. Через 14 дней после заражения убили. В соскобах слизистой оболочки тонкого кишечника (главным образом в тощей и подвздошной кишке) обнаружены спороцисты размером 14-16 мкм в длину и 9-10.5 мкм в ширину. Форма спороцист эллипсоидальная с несколько уплощенной одной стороной. В спороцистах заметны четыре, банановидной формы,, спорозоита и гранулярное остаточное тело. Значительно в меньшем количестве встречались зрелые ооцисты с очень тонкой, прогнувшейся наружной оболочкой. Размер ооцист был 18,9-19.8 мкм в длину и 14,8-15,3 мкм в ширину (Вершинин, Леонтьева, 1974). Таким образом, песец был зарегистрирован как дефинитивный хозяин дня S. cruzi (8 норок, находившихся в аналогичных условиях и одновременно с песцами, кормившиеся саркоцистозным мясом крупного рогатого скота - не заразились).

В 1975 году в том же Мраморе ком хозяйстве шести песцам скормили однократно свежий мясной фарш из мяса овец (сердце, диафрагма) с микросаркоцистами S. tenella (= S. ovicanis). Этим же фаршем накормили 6 норок. Двум норкам скормили по 10 макросаркоцист из пищеводов овец. В результате заражение произошло лишь у песцов, но не норок (Вершинин, 1977).

В опыте, целью которого было изучить развитие S. cruzi в организме телят, всем 12-и телятам подопытной группы перорально было дано по х у 100.000-150.000 спороцист. В ходе опыта через каждые 5 дней (от начала заражения) убивал ц по одному теленку для паразите логического обследования. Результаты опыта: У теленка, убитого через 5 дней после заражения (ДПЗ), отклонений в состоянии не отмечено, температура тела была нормальной, аппетит хороший. Стадий развития паразита постмортально не выявлено.

У теленка, убитого через 10 ДПЗ, также ничего не обнаружено при паразитологическом обследовании. Клинически животное в период наблюдения за ним было здорово.

У теленка, убитого через 15 ДПЗ, в день его выведения из опыта отмечено повышение температуры тела до 40,2 0 С, но без какого-либо ухудшения в состоянии (теленок был бодр, аппетит хороший). В эндотелии артериол тонкого кишечника в небольшом количестве обнаружены зрелые меронты первой генерации S. cruzi. Размер меронтов в среднем (п = 15) 38,5 х 22,5 мкм. Количество мерозоитов в меронте - 80-105. Величина мерозоитов - 6,1 х 1,4 мкм.

У теленка, убитого через 20 ДПЗ, в капиллярах печени, почек, сердца, тонкого кишечника в небольшом количестве найдены незрелые меронты

второй генерации. Размер меронтов - 18,5 х 10.2 м.к.м с количеством ядер в меронте от 6 до 32 (п = 12).

У теленка, убитого через 25 ДПЗ, на 22-й день опыта температура тела повысилась до 39,90 С, теленок заметно угнетен, наружные лимфатические ^^ узлы несколько увеличены, болезненны при пальпации, аппетит понижен, животное часто лежит. На 23-й, 24-й ДПЗ состояние животного резко ухудшилось. Отмечена почти полная потеря аппетита, шерстный покров стал тусклым, взъершенным,, видимые слизистые оболочки анемичны. Температура тела повысилась до 41,1 и С, появился понос, тахикардия (90-100 ударов в минуту), дыхание стадо шумным, учащенным (35-40 дыхательных экскурсий в минуту). Появилась шаткость походки, упитанность заметно снизилась. Такое состояние продолжалось и через 25 ДПЗ, то есть до дня убоя животного. При паразитологическом обследовании меронты второй генерации обнаружены в эндотелии капилляров, реже мелких артерий практически всех внутренних органов (сердце, селезенка, почки, лимфатические узлы, печень и др.). Особенно много меронтов обнаружено в клубочках почек. Встречались как зрелые, так и незрелые меронты. Размер и форма меронтов зависела от органа или ткани, где они локализовались. В мышечной ткани меронты всегда были значительно длиннее, чем в других тканях. Следует отметить, что меронты и первой и второй генерации никогда не располагались в паразите форной вакуоли, а лежали непосредственно в цитоплазме инвазированной клетки. , Размер зрелых меронтов был 19,0 х 11,5 мкм (п = 25), а размер мерозоитов,

' у. число которых в одном меронте варьировалось от 6 до 35, составлял 7,6 х .1,4 мкм.

У телят, убитых через 30, 35, 40 ДПЗ, отмечена аналогичная картина (как клиническая, так и патологсинорфологическая). Выражен был резко геморрагический диатез, отечность ткана? и органов, увеличение лимфатических узлов.

Незрелые саркоцисты появились у телят, убитых через 40-50-70 дней ДПЗ. Саркоцисты с зрелыми мерозоитами и тонкой стенкой циста появились у телят, убитых через 80,90 и 100 ДПЗ.

2.2.3. Развитие Б. сги/л в культуре ткани при заражении спорозоитами

Через 14 часов после заражения клеток монослоя ФК в большом количестве встречались спорозоиты, один конец которых был всегда заострен. Размеры их (по результатам измерения 20 экземпляров) были 8-11 мкм в длину и 2-2,5 мкм в ширину. Отчетливо были заметны ядро и

цитоплазма. Через 20 часов оба конца спорозонта округлялись п (некоторые из них уже превращались в шаровидные формы, очень похожие на трофозокты с хорошо заметным шаровидным ядром и цитоплазмой. Диаметр этих шаровидных форм был 7-7.5 мкм (п = 5). Как спорозоиты. так и формы, похожие на трофозоитов. локализовались в цитоплазме клетки часто в непосредственной близости от ядра, которое иногда вследствие близости паразита несколько деформировалось.

Через 36. а особенно через . 56 часов, находили многочисленные скопления мелких паразитов, в каждом из которых насчитывались десятки особей. Через 72 часа после заражения монослоя преобладали большие скопления паразитов (до 150-200 и более). В одном препарате их находили более десяти. Форма таких скоплений была различная - от шаровидной до овальной. Диаметр шаровидных скоплений достигал 55 мкм; овальной формы скопления были 88 х 59 мкм; 77 х 46 мкм, хотя встречались скопления и значительно меньших размеров, в которых насчитывалось от 10-15 до 50 паразитов. При микроскопии под иммерсионным объективом можно было видеть, что паразиты, составлявшие различной величины скопления, не однородны. Среди них встречались особи шаровидной, яйцевидной и удлиненно-грушевидной формы, различной величины, а также формы в виде розеток, состоявшие из трех, четырех и пяти "лепестков". Дальнейшее наблюдение за развитием саркоспоридий было прекращено из-за гибели монослоя.

В контрольных пробирках с монослоем ФК ничего подобного не было <

обнаружено.

Анализируя полученные данные, следует отметить исключительную репродуктивную способность и выраженное цитопатогенное действие эндозоитов Sarcocystis на клетки монослоя. Если через 14 часов после заражения спорозоит внутри клеток был еще неактивен (не изменялась форма, величина), то через 20 часов спорозоит превращался в шаровидной формы трофозоит, а через 36-56 часов встречались уже многочисленные скопления мелких паразитов, состоявшие из десятков особей. Через 72 часа большая часть клеток монослоя гибла (от единичных клеток оставались лишь ядра), а скопления паразитов сферической и овальной формы насчитывали уже до 150-200 и более паразитов. Из-за гибели монослоя дальнейшие наблюдения были прекращены.

Таким образом, интенсивное развитие паразитов уже через 72 часа привело к гибели клеток монослоя. Накопленные к настоящему времени факты относительно типов агамной репродукции эймериидных кокцидий in vivo и in vitro позволяют сравнить эти наши наблюдения с данными других авторов по развитию ряда близко родственных организмов: Toxoplasma, Besnoitia, Isospora, Hammondia.

Как известно, у Toxoplasma gondii вне зависимости от того, что вносится в культу ру клеток - эндозоиты или спорозоиты - репроду кция

паразитов происходит по типу эндодиогении (а также эндополигении). После ряда повторных делений паразитов образуются большие скопления токсопла ум. расположенных беспорядочно или в форме розеток (Акиншина, .1963, 1964).

Различные по величине скопления паразитов в нашем опыте (особенно шаровидной и овальной формы), по-видимому, являются меронтами первой генерации S. cruzi. В пользу такого предположения можно привести следующие доводы:

1. Диаметр шаровидных скоплений достигал 55 мкм. а овальных - 88.\ 59 мкм; 77 х 46 мкм. В опыте Фейера (Fayer, 1977), а также в нашем опыте шизонты S. cruzi первой генерации имели аналогичные размеры и насчитывали до 100 и более мерозоитов.

2. Наличие в скоплениях, наблюдавшихся нами, особей шаровидной, яйцевидной и удлиненно-грушевидной формы, а также паразитов в виде розеток, состоявших из трех, четырех и пяти "лепестков" свидетельствует о том, что репродукция паразитов наряду с шизогонией осуществляется, по-видимому, и путем эндополигении. При электронной микроскопии установлено, что в организме телят одновременно с шизогонией часть мерозоитов S. cruzi делилась по типу эндодиогении (Mehlhoni, Heydom, 1978) и эндополигении.

Репродукция по типу эндодиогении установлена в культурах клеток у Isospora canis (Fayer, Maburt, 1972). у кокцидий кошек - I. rivolta (Faver, 1972). По типу эндодиогении бесполое размножение может происходить в кишечнике собаки у I. canis (Hilaili et al. 1979), у I. felis (Ferguson et al, 1980; Daly, Marcus, 1981). Шолтизек (Sclioltyseck, 1973) считает, что шизогония у кокцидий происходит в два этапа. На первом этапе в результате митотического деления ядра паразита формируется многоядерный шизонт, который затем дает начало одноядерным цитомерам, на втором этапе ядро каждого цитомера делится по типу эндодиогении и это ведет у образованию двух дочерних клеток (мерозоитов). По-видимому, нечто подобное наблюдали и мы в нашем опыте культивирования S. cruzi.

Следует отметить, что in wo, то есть в организме экспериментально инвазированных спороцистами S. cruzi телят, шизонты первой генерации появляются через 15-16 дней в эндотелии мелких и средних артерий тонкого и толстого отдела кишечника, почках, поджелудочной железы, головном мозге через 15-16 дней после заражения (Fayer, 1977), а у телят, зараженных спороцистами S. cruzi от койота - уже на 7-й день после заражения в мезентериальных лимфоузлах (Dubey. 1982).

Появление меронтов первой генерации уже через 36-72 часа после инокуляции спорозоитов S. cruzi в монослой клеток следует объяснять, по-видимому, необычной средой обитания, поскольку паразиты не

встречают защитного юшуко генного противодействия, как это имеет место 1и \туо.

Способность дальнейшего развития саорозоитов 5. саш в культуре ткани фибробластов куриных эмбрионов (а не в клетках эндотелия кровеносных сосудов крупного рогатого скота - промежуточного хозяина -»•»*> паразита) еще более сближает Багсосувйв с классическими эймериидньши кокцидиями, спорозоиты и шизонты которых ¡п у.пго также могут развиваться в клетках, в которых в естественных условиях паразиты, не локализуются. Надо полагать, что если для получения клеточного монослоя использовать клетки эмбриона крупного рогатого скота, то результативность культивирования спорозоитов Б. епш будет выше.

2.2.4. Развитие Sarcocystis gigantea в культурах тканей при заражении цистными мерозонтами

Через 18 часов после заражения в культурах клеток ФК были видны многочисленные цистозоиты (мерозоиты). внедрившиеся в цитоплазму клеток. Размер цистозоитов был 9-12 х 2,25 мкм. Большинство паразитов локализовалось в непосредственной близости к ядрам клеток куриных фибробластов. Через 21-24 часа после заражения размер отдельных цистозоитов был меньше (5-7 х 1,5-2 мкм), края округлые. Такие паразиты h (трофозоиты) были заключены в паразитофорную вакуоль и располагались возле самого ядра, в ядре или на ядре зараженной клетки. Встречались и совершенно округлившиеся зоиты. Аналогичная картина наблюдалась и в моносдое ФО.

Через 36 часов после заражения встречались паразиты овальной или шаровидной формы с признаками деления ядра, которые локализовались в цитоплазме клеток ФО обычно возле ядер и были окружены паразитофорной вакуолью. В это же время встречались в значительном количестве паразиты лимоновидной формы с несколько заостренными концами и крупным, преломляющим свет шаровидным образованием в центре. Длина их была 7-8 мкм, ширина - 3,5-5 мкм. В одной клетке можно было видеть 1, 2 и 3 таких паразита. Локализовались они обычно возле ядра клетки. Наряд}' с вышеописанными встречались паразиты эллипсоидальной формы, а также округло-овальные образования с нечетко просматривавшимися гранулами. Размер этих образований (а = 30) был в среднем 10-12 х 8-10 мкм. Они всегда были заключены внутри паразитофорной вакуоли и, находясь в тесной близости с ядром клетки хозяина, приводили к его деформации.

Через 48 часов после заражения вблизи ядер клеток ФО обнаруживались многоядерные образования шаровидной формы, имеющие диаметр 7-9 мкм. Такие .многоядерные паразиты также располагались внутри паразите форнойвакуоли.

Через 54-60 часов после заражения в клетках ФО обнаруживались тс же формы, что и через 36 и 48 часов. Однако к этому времени наиболее многочисленными были шаровидные цистообразные стадии диаметром 14-15 мкм; их цитоплазма содержала отчетливо выраженные, одинаковые по размеру гранулы. Эти стадии также располагались в тесном контакте с ядром клетки хозяина.

К 72-му часу моносдои ФО и ФК разрушались, что препятствовало дальнейшим наблюдениям. В контрольных пробирках паразиты обнаружены не были.

Проведенное исследование показало, что при культивировании S. gigantea монослой фибробластов эмбрионов овцы был более подходящей средой, чем монослой фибробластов куриного эмбриона.

Стадии бесполого развития (шизонты) S. gigantea обнаружены не были, и это объясняет столь быстрое появление стадий половой фазы цикла. Макрогаметы появлялись уже через 36 часов после заражения и достигали в среднем 10-12 мкм. Микрогаметоциты были видны отчетливо к 48 часу и достигали в диаметре 7-9 мкм; среднее количество ядер на микрогаметоцит составляло 6-10.

Сравнение развития в культуре тканей Sarcocystis sp. от вороньего дрозда (Fayer, 1970, 1972) с развитием S. gigantea говорит о значительном сходстве в характере расположения и взаимоотношения с клетками хозяина эндогенных стадий сравниваемых объектов. Интересно отметить, что эндогенные стадии многих кокцидий, включая виды Eimeria, Isospora, Toxoplasma, Besnoitia, Sarcocystis, имеют тенденцию развиваться в тесном контакте с ядром зараженной клетки.

2.2.5. Пато лого анатомические изменения при остром экспериментальном саркоцистозе телят

Ниже приведены результаты опыта, проведенного в июне 1980 г. в учхозе "Уралец" Свердловского сельскохозяйственного института.

Двум двухмесячным телятам перорально было дано соответственно 3 и 5 млн. спороцист Б. Ьоуюатя каждому. Третий теленок такого же возраста заражению не подвергался и служил контролем. На 25-й день после заражения подопытные телята были вынуждено убиты из-за крайне тяжелого состояния. У подопытных животных наблюдали сильную

слабость. исхудание. потерю аппетита. угнетение. бледность, конъюнктивиты, лихорадку (у одного теленка температура тела было 41.5 0 С. у другого - 41.6 0 С), тахикардию, учащение дыхания, одышку ,

(выдох сопровождался стоном), скрежет зубами, серозно-слизистые выделения из глаз (у одного теленка), периодическое подергивание соматических мышц, понос, шаткость походки (животное передвигалось с трудом), повышенную жажду, взъерошенность шерстяного покрова.

При визуальном патологоанатомическом исследовании обнаружено сильное увеличение всех наружных и внутренних лимфатических узлов. Они были отечны с многочисленными точечными кровоизлияниями. В грудной и брюшной полостях находилась в небольшом количестве желтого цвета прозрачная жидкость. На серозных покровах сычуга, преджелудков и особенно тонкого и толстого кишечника - обширные кровоизлияния (на многих участках кишечник, казалось, был залит кровью). Кровоизлияния находили в мочевом пузыре (обширные, сплошные), почках, поджелудочной железе, надпочечниках (точечные и пятнистые), эндокарде (разлитые) и эпикарде, легких (точечные). Мышцы были темно-коричневого цвета с мраморным рисунком. Результаты гистологического исследования отдельных органов и тканей приведены ниже.

Сердце. Мышечные волокна пропитаны эритроцитами и гемосидерином. Цвет их при окраске гематоксилин-эозином коричневатый. На участках с лизированными мышечными волокнами - /

полиморфноклеточная инфильтрация (мононукдеарные клетки, клетки г /к' ' РЭС, лимфоциты). Под эндокардом - множественные геморрагические инфаркты. Мышечная ткань в этих очагах полностью некротизирована и пропитана кровью. В патологический процесс вовлечены и волокна Пуркинье. Оболочка их и большая часть клеток лизированы. В других волокнах, лежащих более глубоко, наблюдаются регенерационные процессы в виде появления четырехъядерных клеток, расположенных, как правило, в центре волокна. В мело-уточной соединительной ткани наблюдается тромбоз кровеносных сосудов малого и крупного калибра. Эндотелий сосудов в состоянии активной пролиферации. Шизонты паразитов найдены среди клеточных элементов в участках лимфоидной инфильтрации. Здесь же встречались единичные плазматические клетки с интенсивно окрашенной цитоплазмой Почти во всех гистосрезах отмечается диапедез эритроцитов.

Скелетные мышцы. Окрашены неравномерно, что типично для зернистой дистрофии мышечных волокон. В межмышечных пространствах обильная полиморфноклеточная инфильтрация, представленная в основном клетками РЭС, макрофагами и клетками типа эпителиоидных. Поперечная исчерченность выражена не во всех волокнах. Между

волокнами видны ряды эритроцитов. Клетки эндотелия кровеносных сосудов в состоянии активной пролиферации.

Легкие. Крове на полнены с интерстицкальными геморрагиями междольчатая ткань и альвеолы отечны. Клеточная инфильтрация представлена в основном лимфоцитами и макрофагами.

Мозг. Очаговые кровоизлияния разной величины в обоих слоях мозга. Перицеллюлярный отек и некроз единичных нервных клеток с превращением их в клетки-тени. Наблюдаются периваску.тарные муфточки из клеток глии и клеток РЭС; в белом веществе обнаруживаются рассеянные глиальные узелки, некоторые из них находятся в непосредственной близости с кровоизлияниями.

Лимфатические узлы (мезентериальные и медиастинальные) Центральные синусы резко расширены и затоплены полиморфно-клеточным инфильтратом,, состоящим в основном из гистиоцитов, незрелых плазматических клеток (плазмобластов), лимфобластов, клеток РЭС. В центральных синусах наряду с клеточной инфильтрацией обнаруживаются шизонты. Здесь же наблюдается диапедез эритроцитов и их распад. Лимфатические сосуды расширены, эндотелий их в состоянии активной пролиферации. Периваскулярно появляются фибробяасты и фиброциты, которые дают основу роста соединительной ткани. Кроме этого, обнаруживается большое количество эозинофилов, причем некоторые из них в состоянии дегрануляции (идет процесс освобождения биологически активных веществ: гистамина5Аидр.). Соединительнотканные элементы перегородок и ворот лимфатических узлов в состоянии активного размножения. Некоторые кровеносные сосуды, расположенные в области ворот, полностью облитерированы размножающимися клетками эндотелия.

Селезенка. В центральных артериях - активная пролиферация эндотелия. Красная пульпа обильно инфильтрирована эритроцитами, незрелыми клетками лимфоидного ряда. В трабекулярных сосудах наблюдается набухание стенки и периваскулярный эритродиапедез и плазморрагии. Соединительнотканные клетки трабекул в состоянии активного размножения и представлены в основном бластными формами.

Печень. В междолыдавой соединительной ткани и внутри долек -инфильтраты из лимфоидных клеток разной степени зрелости, клеток РЭС и единичных плазматических. Пространства Диссе расширены, в них также обнаружен клеточный инфильтрат и единичные шизонты еаркоспоридий. В некоторых клеточных очагах наблюдаются кровоизлияния. Центральные вены запустевшие, капилляры обескровлены. Просвет артерий закрыт, клеточные элементы стенок в состоянии активной пролиферации.

Почки. Рисунок почки не везде выражен четко. Встречаются довольно обширные участки, в которых вся почечная ткань обильно

инфильтрирована полиморфноклеточньш инфильтратом с преобладанием молодых форм лимфоидных клеток. Среди диффузной инфильтрации встречаются очаги величиной с почечный клубочек, представленные гслетками РЭС, фибробластами и крупными мононуклеарами. Просветы канальцев сужены, заполнены слабо оксифильным содержимым. Границы клеток эпителия выражены нечетко. Эндотелий капиллярной сети мозгового слоя в состоянии активной пролиферации. В периваскулярной зоне дуговых артерий - инфильтрат преимущественно из клеток РЭС, фибробластов и лимфоидных клеток разной степени зрелости. Встречаются также единичные лейкоциты.

Тонкий отдел кишечника. Слизистая оболочка сильно инфильтрирована незрелыми лимфоидными клетками, эозинофилами, клетками типа эпителиоидных, отдельными плазматическими клетками. В слизистой отмечается геморрагическое пропитывание и десквамация эпителия. Бокаловидные клетки редуцированы. Массовые 1фовоизлияния наблюдаются в обоих слоях мышечной оболочки. Вокруг нервных сплетений - лимфоидноклеточная инфильтрация. Очень сильно выражено диффузное геморрагическое пропитывание серозной оболочки.

Толстый отдел кишечника. Массовые кровоизлияния в мышечной оболочке. Диффузное геморрагическое пропитывание серозной и слизистой оболочек. В мышечной соединительной ткани активная макрофагальная реакция с наличием клеток РЭС, плазмобластов, лимфоидных клеток разной степени зрелости. В области крипт обильная полиморфноклеточная инфильтрация с преобладанием эозинофилов, ~ ' лимфоцитов и клеток РЭС.

Следует отметить, что диффузная инфильтрация эозинофилами, лимфоцитами, клетками РЭС, плазматическими клетками и активная пролиферация эндотелия сосудов отмечена практически во всех внутренних органах обоих телят.

Во всех исследованных органах и тканях подопытных телят при гистологическом исследовании обнаружены шизонты саркоспоридий. Тяжесть патологоанатомических изменений у телят, подвергнутых заражению, была одинакова, несмотря на то, что дозы спороцист были разные (3 и 5 млн., соответственно). Контрольный теленок, убитый одновременно с телятами, подвергавшимися заражению, был здоров в течение всего опыта. При патологоанатомическом вскрытии никаких изменений во внутренних органах и тканях не выявлено.

Таким образом, в острую фазу болезни, совпадающую с шизогонией паразитов, в организме крупного рогатого скота при заражении спороцистами Я. Ьотюашв во всех паренхиматозных органах развиваются сильнейшие воспалительные процессы пролиферативного характера с резко выраженными нарушениями кровообращения. Из-за повышенной проницаемости стенок кровеносных сосудов и обширных массовых

Г-

кровоизлияний развивается анемия. Снижение количества эритроцитов и содержания гемоглобина приводит к кислородной недостаточности в организме. Чтобы компенсировать дефицит кислорода, усиливается работа сердца, легких (у животных отмечают тахикардию, учащенное дыхание).

1*4*- Клеточная инфильтрация участков сердечной мышцы с лизированными мышечными волокнами, многочисленные геморрагические инфаркты с некрозом и пропитыванием кровью мышечных волокон и другие нарушения гистологической структуры миокарда являются причиной тяжелых функциональных нарушений в работе этого органа. В патологический процесс вовлекаются и волокна Пуркинье, что приводит к нарушению ритма сердечных сокращений. Эластичность и сократимость мышечных волокон понижается, развивается острая сердечная недостаточность. Геморрагическое воспаление кишечника ведет к расстройству пищеварения. Дегенеративно-воспалительные изменения в скелетной мускулатуре вызывают затруднение в передвижении животных. Кровоизлияния в головном мозге, по-видимому, являются причиной различных нервных проявлений. Нарушаются также функции жизненно важных органов. Анализируя клинические и постмортальные наблюдения при остром экспериментальном саркоцистозе крупного рогатого скота, можно предполагать, что в период шизогонии наряда с токсическим и механическим воздействием саркоспоридий патологоморфологические изменения развиваются по типу аллергических реакций, вызванных сенсибилизацией организма продуктами обмена паразитов. Об -Л инвазионной аллергизации организма свидетельствуют пролиферативньге процессы в ретикулоэндотелиальной системе и лимфоидной ткани, обусловленные, по-видимому, раздражением специфическими антигенами. За аллергическую природу постмортальных изменений говорит набухание, гиперплазия и инфильтрация тканей эозино филами, клетками РЭС, пролиферация эндотелия кровеносных сосудов мышц, печени, почек, мозга и других органов.

Механизм действия аллергических реакций в сенсибилизированном организме объясняется, как известно, высвобождением поврежденными клетками (при контакте в них антигена с антителом) биологически активных веществ: гистамина, ацетилхолина, брадикшшнл гепарина и других. Гистамин повышает клеточную проницаемость, расширяет капилляры, увеличивает проницаемость стенок сосудов, повышает сократимость гладкой мускулатуры. Аналогично гистамину действие ацетилхолина и брадикинина. Воздействуя на находящиеся поблизости чувствительные к ним клетки, гистамияоподобные вещества вызывают аллергический ответ организма. Поскольку известно, что слизистая оболочка желудочно-кишечного тракта содержит много гистамина, то вполне допустимо, что обширные диффузные кровоизлияния на всем протяжении желудочно-кишечного тракта именно с этим и связаны.

Подобное объяснение, по-видимому, можно дать и различным нарушениям в состоянии кожи при остром спонтанном саркоцистозе (кровоизлияния в коже у поросят, ломкая шерсть у овец, шелушение кожи и выпадение волос на хвосте и конечностях у крупного рогатого скота).

Как установил Фейер (1977), при экспериментальном заражении телят спороцнстами 8. Ьоукашя шизонты первой генерации появляются через 15-16 дней после заражения в эндотелии мелких и средних артерий и толстом отделе кишечника, включая слепую кишку, в почках, поджелудочной железе, головном мозге. Шизонты второй генерации появляются через 24-33 дня после заражения и локализуются в эндотелиаяьных клетках кровеносных капилляров почти каждого органа телят. Средняя величина шизонтов второй генерации - 9,1 х 14,8 мкм, а среднее количество ядер в них - 27.

При саркоцистозе организм сенсибилизируется, по-видимому, в период бесполого размножения паразита под воздействием шизонтов, мерозоитов и продуктов их обмена. Если животные впервые встречаются с саркоцистозной инвазией, то шизонты первой генерации и продукты их жизнедеятельности еще не вызывают аллергических реакций, но сенсибилизируют организм. На образование шизонтов второй генерации сенсибилизированный организм отвечает уже аллергическими реакциями. Характер этих реакций определяется видом Батсосуййз, дозой инвазионного начала, иммунологическим и общим состоянием животного. Если животное уже встречалось с саркоцистозной инвазией, то иммунный аллергический ответ, обусловленный реактивной перестройкой организма д, V от предшествовавшего заражения, проявляется и на образование шизонтов первой генерации.

В нашем опыте все три теленка были выражены и содержались в условиях, исключавших контакт с собаками - распространителями инвазионного начала. Учитывая это обстоятельство, мы считаем, что причиной тяжелых воспалительных процессов у телят явились шизонты 8. Ьолтсатз второй генерации, вызвавшие аллергическое воспаление в различных органах и тканях организма, сенсибилизированного шизонтами первой генерации.

2.2.6. Энтеральный саркоцистоз собак и других окончательных хозяев саркоспоридий

При энтеральном саркоцистозе у окончательных хозяев (кошка, собака, другие плотоядные, человек) случаи диареи, по-видимому, могут быть объяснены следующим. При гистологическом исследовании тонкого кишечника кошек и собак, которых интенсивно инвазировали

саркоспоридиями. на участках кишечника, где локализовались различные стадии саркоспоридий, отмечали выраженную гиперемию в толще слизистой оболочки и особенно ворсинок. Соединительнотканная основа ворсинок преимущественно в области верхушек была разрыхлена, а эпителий десквамирован. Ворсинки часто были полностью обнажены, то есть не имели эпителиального слоя. Подобные нарушения при интенсивной инвазии, очевидно, могут быть и у человека. Известно, что Эпителиальные клетки слизистой оболочки тонкого, кишечника (энтероциты) с их микроворсинками и гликокаликсом играют особо важную роль в пристеночном пищеварении у высших животных и человека, синтезируя и, кроме того, адсорбируя из полости тонкой кишки ферменты, осуществляющие заключительные этапы гидролиза белков, жиров и углеводов, а также обеспечивающие стерильность процесса всасывания. Особенно интенсивно пристеночное пищеварение происходит в верхних отделах тощей кишки, где и локализуется максимальное количество эндогенных форм саркоспоридий у собак. Десквамация энтероцитов ворсинок на определенных участках тонкого кишечника при интенсивной инвазии может, очевидно, нарушать внеклеточное, внутриклеточное и мембранное пищеварение. Через оголенные ворсинки и кровь могут проникать энтерококки, кишечные палочки, дрожжевые грибки, другие микроорганизмы и вызывать интоксикацию. Диарея, тошнота, слабость у человека при энтеральном саркоцистозе, возможно, связаны с описанными нарушениями.

Преждевременная десквамация эпителия тонкого кишечника со всеми вытекающими последствиями может происходить не только в результате воздействия продуктов обмена паразитов, но и оттого, что масса спороцист и ооцист давит на сосуды стромы кишечных ворсинок и это нарушает трофику эпителия.

2.2.7. Возрастная восприимчивость собак к саркоцистошой инвазии, а также супер- и реннвазировашпо

В результате опытов, проведенных на 36 собаках (4 подопытных группы) в возрасте от 2 месяцев до 10 дет, установлено следующее: 1. После однократного скармливания сырого свежего мяса крупного рогатого скота (сердце, диафрагма, пищеводы) с интенсивной саркоцистозной инвазиеи собакам, свободным от кокцидий, все животные, независимо от возраста, через 9-14 дней стали выделять с фекалиями ооцисты и спороцисты саркоспоридий. Препатентный период у собак в возрасте 5, 7 и 10 составил соответственно 12, 13 и 14

дней". У собак в возрасте до года лреяатенгный период исчислялся 9-10 днями. Начиная с 3-4 дня патентного периода, собаки выделяли только спору дарованные спороцисты. Спороцисты. на протяжении патентного периода, выделялись не регулярно: у некоторых собак в отдельные дни выделения спороцист не наблюдали, а затем оно продолжалось снова. Общее хсоличество дней патентного периода в течение которых происходило выделение спороцист варьировало от 7 до 36. Длительнее выделяли спороцисты собаки в возрасте до года. Максимальный патентный период (72 дня) отмечен у щенка в возрасте 3,5 месяца.

2. Многократное (3-6 раз) реинвазирование собак, с интервалом в две недели после прекращения выделения спороцист и новым инвазированием приводило к удлинению (на 2-5 дней) препатентного и укорочению в 3-4 раза патентного периодов с появлением в значительных количествах аберрантных ооцист и спороцист.

3. При паразите логическом обследовании тонкого кишечника двух собак, выделявших спороцисты 8. спш, и повторно зараженных саркоцистозным мясом крупного рогатого скота (сердце, диафрагма) через 4 и 6 дней соответственно после установления факта выделения собаками спороцист в результате первого заражения, установлено, что наряду со спорулированными спороцистами (в большом количестве) встречались и незрелые ооцисты саркоспоридий на стадии споронта и двух споробластов, что подтверждает возможность супер-инвазирования собак.

2.2.8, Цикл развития Cystoisospora felis (Wenyon, 1923) Frenkel,1977

Описание ооцист

На основании сопоставления формы, величины и строения 300 экземпляров свежевыделенных и находившихся в разных стадиях спорогонии ооцист от кошек разных возрастов, подвергавшихся искусственному заражению, мы отметили следующее: форма ооцист яйцевидная, один из полюсов обычно несколько вытянут, хотя иногда встречаются экземпляры, у которых эта своеобразная "вытянутость" одного из полюсов сглажена. Оболочка ооцист гладкая, бесцветная, однослойная, толщиной 1,4-1,5 мкм.

Длина ооцист варьировала в пределах 36-48 мкм (в среднем 41 мкм), ширина от 30 до 36 мкм (в среднем 33 мкм). Изредка попадались ооцисты, которые из-за атипичного положения их имели шаровидную форму. Микропиле нет.

К момент)" выхода оодист во внешнюю сред)" цитоплазма зиготы уже отслаивается от оболочки и формирует протоплазменный шар (споронт). который чаще располагается: в центре ооцисты, незначительно касаясь ее боковых стенок. Диаметр его равен 27-29 мкм. Вскоре споронт начинает сжиматься и постепенно отделяется вначале от одной, а затем и от другой стенок ооцисты. Полностью отделившийся: споронт располагается в центре ооцисты. образуя свободное пространство между ее стенками. Диаметр его в это время составляет 21-25 .мкм. Постепенно споронт начинает вытягиваться и появляются первые признаки деления - маленькие бороздки по бокам. Они постепенно углубляются и в результате споронт делится на два споробласта шаровидной формы диаметром 16-19 мкм. Ни полярной гранулы, ни остаточного тела ооцисты мы ни разу не наблюдали. Затем вокруг споробластов появляется оболочка, и образуется спороциста. Форма спороцисты чаще сферичная или несколько овальная, размер ее 1618,5 мкм в диаметре или 17-19 мкм в длин)' и 16-18 мкм в ширину. Стенка спороцисты гладкая, бесцветная, толщиной 0.5 мкм. Штидовского тельца нет. Расположение спороцист в ооцисте неодинаково: иногда они располагаются посередине параллельно продольной оси ооцист, иногда сдвинуты в сторону от срединной линии. Образование спорозоитов начинается с разрыхления протоплазмы в спороцисте и появления неоднородных по цвету' и величине участков (то более светлых, то более темных), которые постепенно становятся округлыми и, вытягиваясь, приобретают червеобразную форм) . Процесс формирования спорозоитов в спороцистах происходит не всегда равномерно: в одной из спороцист развитие может происходить несколько быстрее. Расположение спорозоитов в спороцисте может быть различным. После образования спорозоитов в спороцисте всегда имеется большое остаточное тело шаровидной формы диаметром 11-12 мкм. Очень часто в спороцисте уже образовавшиеся спорозоиты располагаются так, что видна бывает лишь часть спорозоитов в виде светлых шариков (одного-двух, трех или четырех), тесно прилегающих один к другому и к свободному краю остаточного тела, а остальная часть спорозоитов из-за остаточного тела не видна. Полностью формирование четырех спорозоитов в обеих спороцистах у отдельных ооцист завершалось за 48-50 часов при температуре 22 0 С. При оптимальных условиях она может завершиться за 12 часов.

Эндогенные стадии С. felis

Дефинитивный хозяин - кошка, дев, тигр, рысь и, по-видимому, другие кошачьи; факультативные промежуточные хозяева (точнее резервуарные) при экспериментальном заражении - мыши, крысы,

хомячки, собаки, цыплята, телята. После проглатывания с.порулированных ооцист котятами в эпителиальных клетках тонкого ichllicчинка происходит бесполое размножение паразита с формированием шизонтов трех генераций. Зрелые шизонты первой генерации величиной 23 х 16 мкм и состоящие из 4-16 мерозоитов, появляются на 3-4 день после заражения. v.,* Величина мерозоитов в них - 13 к 4 мкм. Зрелые шизонты второй генерации появлялись на 5 -й день после заражения и измерялись в среднем 20 х 15 мкм. Зрелые шизонты третьей генерации появлялись на 6. 7-й день после заражения. Размер мерозоитов третьей генерации в среднем 7x2 мкм. Мерогония у С. felis происходит по типу шизогонии и эндодиогении. Половые стадии (макрогаметы и микрогаметоциты) появляются с 6. 7-го дня после заражения. Зрелые микрогаметоциты имеют размер от 46 х 26 мкм до 52,4-54,8 х 39,4-42,6 мкм, а макрогаметы -18-10 мкм до 18-24 х 14-18 мкм. Препатентный период после проглатывания зрелых ооцист составляет обычно 7-8 дней, а патентный -10-12 дней. Внекишечные стадии (гипнозоиты) в организме кошек обнаруживать в гистосрезах из внутренних органов очень трудно. Лучше с целью выявления гипнозоитов из тканей кошек или резервуарных хозяев прибегнуть к перевариванию исследуемого материала в искусственном желудочном соке.

Цикл развития СуяШш^рога оЫоегша

(ОиЬеу, 1975) Кгепке!, 1977 А /

Спорулированные ооцисты эллипсоидной формы, величиной 19-27 х 18-23 мкм. Оболочка ооцисты гладкая, без микропиле. Полярной гранулы и остаточного тела ооцисты нет. В спороцистах нет штидевского тельца. Окончательный хозяин - собака. Резервуарные хозяева - мышь, кошка и, по-видимому, другие животные. Мерогония паразита происходит в эпителиальных клетках ворсинок тонкого кишечника. На второй день после заражения в энтероцитах тощей кишки и паразитофорных вакуолях находят по два мерозоита. На третий день появляются одноядерные и многоядерные мерозоиты и шизонты, содержащие зрелых мерозоитов и этот процесс бесполого размножения длится до пятого дня. Два типа шизонтов обнаружены: первый с мерозоитами 11x3 мкм, а второй - с мерозоитами размером 7,5 х 1,5 мкм. В одной паразитофорной вакуоли могут находиться одноядерные, двуядерные и многоядерные мерозоиты. На четвертый день после заражения в эпителиальных клетках тонкого кишечника, слепой и ободочной кишок появляются гаметоциты. Ооцисты в фекалиях появляются на 6-7 день и спорулируют в течение одних суток. Если внутренние органы резервуарного хозяина с гипнозоитами С. оЫоепя15 будут съедены собакой, то ооцисты у последней выделяются

также на 6-й день. Бесполос размножение паразита (мсрогония) происходит вначале по типу зндодиогении. затем - шизогонии. Патентный период - 7-10 дней.

Клинически выраженный цистоизоспороз в основном регистрируется ^..jiHuib у котят и щенят первых месяцев жизни. Чем моложе животное, тем серьезнее и продолжительнее болезнь. Перманентное проглатывание небольших количеств зрелых ооцист создает иммунитет к суперинвазии. Одномоментное проглатывание большой дозы ооцист ведет к разрушению и десквамации эпителия, атрофии и некрозу крипт в тонком и частично толстом кишечнике (каждый шизонт и гаметоцит разрушает клетку хозяина). У больших животных отмечают угнетение, жидкие водянистые фекалии, анорексию, анемию, исхудание. Изменение водного баланса приводит к увеличению вязкости крови и нарушению работы сердца. При конросжопическом обследовании собак следует иметь в виду, что ооцисты С burrowsi, С. ohioensis и I. neorivolta невозможно дифференцировать ни до, ни после спорогонии, так как они идентичны. Ооцисты С. felis и С canis соответственно от кошек и собак дифференцируются легко, так как они значительно крупнее ооцист других кокцвдий кошек и собак.

Основные виды цистоюоспор кошек и собак

Дефини-^ тивяый хозяин Название возбудителя Размеры ооцист, мкм Резервуарный хозяин при экспериментальном заражении Прети-тентный период, дни

Кошка Cystoisospora felis 41 хЗЗ (36-48x30-36) Мышевидные грызуны, собака, крупный рогатый скот, цыплята 7-8

Кошка С. rivolta 25x20 (21-28x 18-23) -" - 5-6

Собака С. canis 38x30 (34-42 х 28-32) Мышевидные грызуны, кошка 9 - 11

Собака С. ohioensis 24x21 (19-27 х 18-23) ч 5-6

Собака С. burrowsi те же Мышевидные грызз'ны (крысы, мыши) 6

Собака С. neorivolta те же 9 6-7

У мышей цистоподобные стадии встречаются преиму щественно в мезентериальных лимфатических узлах, особенно в лимфоидных фолликулах и реже - в мозговом веществе. Гипнозоиты С. felis в мазках -отпечатках, окрашенных по методу Романовского-Гимзы. измерялись 7-10 х 6.28 мкм,. а гипнозоиты. заключенные в своеобразную капсулу (на ^ >!*г. гистосрезах), измерялись 13-26 х 6-14 мкм. а вместе с "капсулой" -25-36 х 7-14 мкм.

Гипнозоиты в резерву арных хозяевах сохраняются многие месяцы. При дифференциации ооцист Cystoisospora необходимо учитывать (после спорогонии) возможность обнаружения аберрантных форм (И.И. Вершинин, 1982).

Патологоанатомические изменения. При патодогоанатомическом вскрытии котят и щенков, подвергавшихся экспериментальному заражению большими дозами ооцист С. felis и С. ohioensis соответственно, наблюдали катаральное или геморрагическое воспаление тонкого отдела кишечника (И.И. Вершинин, 1972).

J.P. Dubey (1978) отмечал десквамацию эпителия, атрофию и некроз ворсинок, крипт в кишечнике у щенков, убитых через 96 часов после заражения ооцистами С. ohioensis.

2.2.9. Эндогенное и экзогенное развитие токсоплазмы

Намечено было изучить эндогенные формы токсоплазм в кишечнике кошек после заражения их цистами токсоплазм (маловирулентный штамм) из мозга белых мышей, а также в результате заражения спорулированными ооцистами.

Трем котятам (первая группа) был дан перорально мозг белых мышей с цистами токсоплазм, трем котятам (вторая группа) - спорулированные ооцисты токсоплазм (по 10.000 ооцист каждому) и трех котят не заражали (контроль). Кормили всех животных хлебом и молоком. Котят первой группы убили через 2, 5 и 7 дней, котят второй группы - через 10, 15 и 25 дней после зараясения. Контрольных котят убили через 25 дней от начала опыта. Исследовали свежие соскобы слизистой оболочки, а также мазки-отпечатки. окрашенные по Романовскому-Гимзе.

В результате установлено, что заражение произошло у всех котят первой группы и лишь у одного котенка (убитого через 15 дней) - во второй. У всех заразившихся котят в тонком кишечнике и особенно в подвздошной кишке найдены в большом количестве макрогаметы и в незначительном количестве - микрогаметоциты. Средний размер зрелых макрогамег был 9x11,0 мкм. а микрогаметоцитов - 8,5 х 6,5 мкм. Ооцисты

токсоллазм обнаружены лишь у двух котят первой группы, убитых через 5 и 7 дней после заражения. Незрелые оо цисты шаровидной или полу шаровидно и формы были величиной 12,1 х 10.3 мкм. После спору ляции ооцистыв среднем имели размер 12,4 х 11 мкм. а спор о цисты в ¿г них - 8,4 х 6 мкм. В каждой спороцисте было по 4 спорозоита (размер которых после эксцистирования был в среднем 7,5 х 1,8 мкм) и остаточное тело, состоявшее из гранул, которые вначале располагались компактно, а позднее "рассеивались". Часть ооцист не. спору.тировала. Цитоплазма их состояла из многочисленных глыбок. Подобные дегенеративные изменения цитоплазмы ооцисты часто встречаются у различных изоспор кошек и собак. В тонком кишечнике заразившихся котят наряду с половыми формами обнаружены шизонты токсоплазм различной величины с тем или иным количеством мерозоитов. У котенка первой группы, убитого через 7 дней после заражения, найдены шизонты, мерозоиты в которых походили на гроздья бананов. Шизонты имели размер: 8,8-11 мкм в длину и 6,6-8,7 мкм в ширину. В каждом шизонте было по 4-8 мерозоитов. Свободные мерозоиты были 6,6-7,7 мкм в длину и 1,76-2,2 мкм в ширину.

У котят контрольной группы паразитов не обнаружено.

2.3. РАЗВИТИЕ TOXOPLASMA GONDII В КУЛЬТУРЕ ТКАНИ V" ПРИ ЗАРАЖЕНИИ СПОРОЗОИТАМИ

Первые препараты с зафиксированным развитием снорозоитов в культуре клеток были приготовлены через 10-12 часов после заражения монослоя. Около половины клеток (ФК) в таких препаратах были инвазированы спорозоитами. Паразит находился в клетке с ядром, иногда его деформируя. Из числа инвазированных клеток около 5 % были поражены сразу двумя спорозоитами. Продолжение развития паразита отмечали в препаратах (ФК), зафиксированных через 19-20 часов. Вокруг внедрившихся спорозоитов в клетках имелась паразитофорная вакуоль. Её размеры составляли 4,5-6,0 (5,4) х 4,6-6,0 (5,0) мкм. Пораженные клетки находились в жизнеспособном состоянии, но не размножались. Внедрившиеся спорозоиты имели размеры 2,3-3.1 (2,7) х 2,0-2,6 (1,8) мкм. Цитоплазма паразита окрашивалась в розовый цвет, а ядро - в интенсивно синий.

К 40-му часу в препаратах (ФК) наблюдали скопления паразитов овальной или овальновытянутой формы. Их размеры были: 16.0-21,1 (18,5) х 10,5-16,1 (13,8) мкм. В каждом содержалось по 12-20, а в некоторых до 160 эндозоитов. В культуре ткани (ФК) отмечено повторное инвазирование

клеток. Из внедрившихся эндозоитов развивались "трофо зоиты" следующей генерации меронтов.

К 60-му часу культивирования эндозоиты формировали скопления овальной формы в виде розетки- величиной 13.0-26.4 (15.5) х 10.1-22,7 (12.1) мкм. В каждом скоплении было 12-80эндозоитов, располагавшихся компактно. Клетки, в которых развивались паразиты, были увеличенными, а ядра раздробленными на отдельные гранулы.

К 70-му часу отдельные незрелые эндозоиты принимали округлую форму. По мере созревания они удлинялись и принимали форму дольки апельсина. Их размеры составляли 2,8-3,3 (2,9) х 0,6-1,2 (1,0) мкм.

К 80-му часу скопления эндозоитов в большинстве своем были распавшимися, а свободные эндозоиты внедрялись в новые клетки.

К 93-95-му часу эндозоиты превращались в трофозоитов. Они были яйцевидной формы, размером 3,2 х 2 мкм.

К 105-110-му часу они формировали скопления овальной формы величиной 11,6-14,1 (12,0) х 10,0-10,8 (10,3) мкм. Количество эндозоитов в них было от 8 до 28. Размеры эндозоитов составляли 2,8-3,6 (3,2) х 1,4-2,0 (1,8) мкм. К этому времени непораженными оставались около 10-15 % клеток монослоя. Чуть позднее эндозоиты в пораженных клетках принимали округлую форму. На этой стадии развитие паразитов прервалось.

Анализируя результаты проведенного культивирования токсоплазмы, со стадии спорозоита обращает на себя внимание способность паразита быстро разрушать клетки монослоя. Ускоренное развитие паразита в -yV культуре ткани, по сравнению с развитием in vivo, обусловлено более благоприятной средой обитания для паразита (отсутствие иммуногенного фактора и др.).

2.3.1. Опыт заражения собак спорулированными ооцистами Hammondia heydorni

В 70-х годах XX столетия американские исследователи (Wallace, 1973; Frenkel, 1974; Frenke!. Dubey, 1975) выявили паразита сходного с токсоплазмой и. саркоспоридиями. но и значительно отличавшегося от них. Он получил родовое название Hammondia Frenke! et Dubey, 1995. Род Включает два вида (существование третьего многими исследователями отвергается) из них типовой Hammondia hammondi - наиболее изучен. Как и токсоплазма Н. hammondi имеет сходные по величине удлиненные цистозоиты (2x7 мкм), а энтеральная фаза развития в дефинитивном хозяине (кошке) включает мерогонию и гаметогонию. Ооцисты идентичны с таковыми у токсоплазмы и по структуре и по размерам (10,6 х 11,4 мкм).

У НашшоасЦа. как и у Загсосузиз. лвуххозяинный жизненный цикл. Цнсгы образуются в скелетных мышцах промежуточного хозяина (коза, крыса, хомяк, морская свинка).

Второй вид рода - Н. Капнпопс!!. Дефинитивный хозяин - собака, ^^лисица и. по-видимому, другие псовые. Промежуточный хозяин - крупный рогатый скот некоторые другие травоядные, а также собака. Ооцисты в кишечнике собаки идентичны таковым у токсоплазмы. Цистные стадии в тканях промежуточного хозяина еще не выявлены. Хейдорн (Неус1ощ. 1973) после скармливания собакам сырого мяса крупного рогатого скота обнаружил в их фекалиях неспорулированные ооцисты, идентичные с ооцистами токсоплазмы. Заражение собак спорулированными ооцистами не приводило к выделению ооцист. Наряду с этим собаки, накормленные мышечной тканью собак, зараженных перорально за 6-8 недель до этого зрелыми ооцистами, заражались и выделяли аналогичные ооцисты. У собак после скармливания им мышечной ткани инвазированных ооцистами собак, препатентный период составил 6-8 дней, а патентный -2-9. Таким образом, в условиях эксперимента собака оказалась не только дефинитивным, но и промежуточным хозяином паразита.

Проводя очередные опыты по скармливанию саркоцистозного мяса собакам, мы периодически находили в фекалиях собак ооцисты (неспорулированные), идентичные ооцистам токсоплазмы у кошек. Зная о работах Хейдорна, мы (Вершинин и соавт., 1984) с целью изучения эндогенного развития Н. 1таттопс!1 скормили 8 щенкам, свободным от V, кокцидий, мышечную ткань двух собак, подвергнутых 5а два месяца до убоя заражению спорулированными ооцистами Н. Ьаттошй. В результате постмортального паразитологического исследования тонкого отдела кишечника подопытных щенков на 2, 3, 4, 5, 6, 7, 9 и 10 дни после заражения установили, что на всем протяжении тонкого кишечника в цитоплазме эпителия ворсинок происходит развитие паразита. В мазках из слизистой оболочки, окрашенных по методу Романовскогр-Гимзы, обнаружены бесполые и половые стадии паразитов. Молодые гамонты выявлены через 4-5 дней после заражения, а на 6-й и 7-й дни наряд}" с гамонтами и пшзонтами встречались также зрелые гаметы и в небольшом количестве неспорулированные ооцисты. Зрелые макрогаметы были чаще сферической формы диаметром 9,9 мкм. Зрелые микрогаметоциты имели более чем 10 микрогамет.

Поскольку многократные попытки исследователей отыскать цистную стадию Н. Ьаппнопс!! в тканях промежуточных хозяев (крупный рогатый скот, собака и другие животные) были безуспешны, по-видимому, есть смысл подвергнуть мышечную ткань промежуточных хозяев перевариванию в искусственном желудочном соке (иди растворе трипсина) с целью обнаружения возможных "гипнозоитов" паразита.

2.3.2. Дифференциация тканевых цистообразующих кокцидий

Все цистообразующие кокцидии - внутриклеточные паразиты: с очень сходной ультраструктурной организацией гомологичных бесполых нду» половых стадий развития, В их жизненных циклах так же как у типичных эймериидных кокцидии (Енпепа, ЬоБрога) чередуются мерогония, гаметогония, спорогония. Мерогония может происходить по типу шизогонии, эндодиогении, эндополигении. Гаметогенез у цистообразующих и "классических" эймериидных кокцидий, в основном протекает однотипно (Бейер, 1977) и завершается образованием ооцист изоспороидной структуры. Последние не имеют микропиле, остаточного тела, а спороцисты без штидевского и субштидевского телец, но с остаточным телом; механизм эксцистирования у них аналогичен. Все эти организмы формиручот тканевые цисты, а в их жизненных циклах прослеживаются промежуточные стадии постепенного перехода от факультативной до облигатной гетероксенности. Цисты, как правило, формируются в тканях промежуточных хозяев (травоядные, всеядные и др.). Половое развитие происходит в стенке тонкого кишечника дефинитивных хозяев (плотоядные животные).

Цисты определенных родов и видов кокцидии различаются по величине, морфологическим особенностям, структуре стенки цисты, локализации. Идентификация цистообразующих кокцидии только по тканевым цистам при световой микроскопии довольно затруднительна в случаях смешанной инвазии, особенно при атипичной локализации цист. Особенно сложна дифференциация Загсосуэйв^Тохорквига в острую фазу болезни, когда бесполое размножение паразитов этих двух видов происходит в эндотелии кровеносных сосудов различных органов и тканей. Нарушение проницаемости стенок кровеносных сосудов, повреждения их, геморрагии, расстройства кровообращения^ сопровождающиеся: тромбозами; воспалительные изменения в паренхиматозных органах и тканях наблюдаются при остром саркоцистозе /

и токсошгазмозе. Безноитии также могут поражать сосудистую систему. Поражения репродуктивной сферы. Миокардиты и миозиты отмечают в острую фазу при саркоцистозе и токсоплазмозе.

Дифференциация цистообразующих кокцидий по структуре ооцист, выделяемых окончательными хозяевами, возможна далеко не всегда, поскольку все они имеют изоспороидную структуру ооцист, а число видов кокцидий, жизненные циклы которых расшифрованы, неуклонно растет. Если до 1970 года у собаки, кошки и человека было известно всего 7 видов рода коБрога, то в настоящее время, с учетом цистообразующих кокцидий, количество видов паразитов с изоспороидными ооцистами у этих хозяев

превышает 40. Это часто является причиной путаницы ооцист Cystoisospora и цистообразующих кокцидий.

У некоторых цистообразующих кокцидий ооцисты (и спороцисты) выделяются с фекалиями уже спорулированные (Sarcocystis^ Frenkelia), у *, других - неспорулированные (Toxoplasma, Besnoitia, Hanmiondia). Однако и этот (очень важный) критерий дифференциации имеет ограниченное применение, поскольку за обнаруженной в фекалиях кошки или собаки ооцистой (или спороцистой) Sarcocystis может "скрываться" не один, а несколько видов этого рода, так как структурно и по размерам ооцисты и спороцисты многих видов Sarcocystis идентичны. Например, ооцисты и спороцисты S cruzi, S. tenella, S. capracanis и S. eguicanis, выделяемые собакой. Спороцисты (и ооцисты) Frenkelia невозможно дифференцировать от спороцист (и ооцист) Sarcocystis из-за их структурного сходства.

Неспорулированные ооцисты определенных видов цнстообразующих кокцидий, выделяемых с фекалиями кошкой и собакой, также могут быть сходны морфологически и по размерам, что различить их невозможно (например, ооцисты Toxoplasma gondii, Hammondia hammondi, Besnoitia cUalingi, выделяемые кошкой). Иногда дезориентировать исследователя могут аберрантные формы ооцист Sarcocystis, Toxoplasma, других цистообразующих кокцидий, а также ооцисты Cystoisospora.

Таким образом, строение ооцисты не может быть надежным критерием вида (а иногда и рода кокцидий). Поэтом}' при дифференциации V- / цистообразующих кокцидий необходимо учитывать особенности их жизненных циклов, морфологию паразита в разных фазах развития, хозяинную и органотканевую специфичность, характер вызываемой патологии, результаты серологических, аллергических исследований, биопробы, эпизоотологические данные, симптоматику.

Ниже приведены основные морфобиологические критерии дифференциации тканевых цистообразующих кокцидий, а также кокцидий рода Cystoisospora, поскольку они представляют начальный этап перехода от гомоксенности к факультативной, а затем и облигатной гетероксенности жизненных циклов этих паразитов. В настоящее время к тканевым цистообразукпцим кокцидиям относят следующие роды: Cystoisospora, Toxoplasma, Besnoitia, Haiiunoitdia, Sarcocystis, Frenkelia. Систематическое положение этих кокцидий все еще является предметом споров и разногласий, что вполне естественно, учитывая большое число видов и сложность их жизненных циклов. Общепризнанна принадлежность этих кокцидий к тип}' Apicomplexa Lewie, 1970, классу Sporozoa Leuckart, 1879, отряду Eucoccidiida Leger et Dubosq, 1910, подотряд}' Eimeriina Leger, 1911. Относительно принадлежности их к семейству и подсемейству пока единства у исследователей нет (подробнее о систематическом положении

цистообразующих кокцидий см. Levine. 1973; FreiikeL 1977: Бейер. 1977;

Вершинин. 1979).

0тличтсльш>1ми особенностями Sarcocystis являются:

1. Облигатная. гетероксенность жизненного цикла у видов,^"г паразитирующих у сельскохозяйственных животных. Отсутствие бесполого развития паразита в дефинитивном хозяине.

2. Смещение мерогонии (бесполого размножения) в организм промежу точного хозяина.

3. Наличие трех типов клеток в тканевой цисте (метроциты. про межу точные клетки, мерозоиты).

4. Спорогония ооцист происходит в строме кишечных ворсинок (в lamina propria) дефинитивных хозяев; во внешнюю среду с фекалиями выделяются уже спорулированные ооцисты, а чаще свободные спороцисты. Оболочка ооцисты тоньше, чем у спороцист (а у Cystoisospora наоборот: она толще, чем у спороцист).

5. Ооцисты и спороцисты не инвазионны для дефинитивных хозяев (то есть собак, кошек, диких плотоядных).

6. Из-за субэпителиальной локализации ооцист в кишечнике

дефинитивных хозяев ■._.:_ патентный период длится до

месяца и более. ^ ■

ут

7. Дефинитивные хозяева легко подвержены супер-и реинвазированию, независимо от возраста животных (по-видимому, из-за отсутствия иммуногенных стадий мерогонии в их кишечнике).

8. В предцистную мерогонию в промежуточном хозяине меронты свободно лежат в цитоплазме инвазированных клеток (в эндотелии кровеносных сосудов у сельскохозяйственных животных и в гепатоцитах у мышевидных грызунов). Они (меронты) не заключены в паразите фор ную вакуоль.

9. В цистной стадии у Sarcocystis выражен тропизм к мышечной ткани (чаще они формируются в сердечной или скелетной мускулатуре, мышцах диафрагмы, пищевода, языка и др.). Лишь иногда их находят в головном мозге.

10. Наружная оболочка (стенка цисты) может быть тонкой, гладкой (< 1 мкм в толщину), а может быть толстой (> 5-7 мкм) с радиальной исчерченно стыо.

11. Полость цисты разделена перегородками (септами на отдельные сегменты - камеры).

1.2. Молодые (незрелые) цисты., не содержащие цистных мерозоитов, не инвазионны: для дефинитивных хозяев.

13. Ядро инвазированной клетки: в промежуточном хозяине не претерпевает -значительных изменений.

4. Род Sarcocyslis включает более 130 видов.

15. Промежуточные и дефинитивные хозяева могут быть инвазированы несколькими видами Sarcocystis.

16. Хозяинная специфичность Sarcocystis сильнее выражена у сельскохозяйственных животных. Широкой хозяинной специфичностью (за некоторыми исключениями) обладают виды саркоспоридий, встречающихся у мышевидных грызунов, птиц.

17. Патогенность видов Sarcocystis различна. Более патогенны виды, которые передает собака (и другие псовые), по сравнению с теми, что передает кошка.

18. Виды саркоспоридий, которые передает кошка, не передает собака и наоборот.

19. В эпизоотологии саркоцистозов основная роль принадлежит собаке (и диким псовым) в отличие от токсоплазмоза, где главную роль в эпизоотологии и эпидемиологии играет кошка.

Род Cystoisospora Frenkel, 1977.

Цикл развития факультативно гетероксенный. Окончательные хозяева отдельных видов - собаки, кошки, пушные звери; резервуарные -мышевидные грызуны, цыплята, крупный рогатый скот и другие животные. Ооцисты спорулируют во внешней среде. Оболочка ооцисты толще оболочки спороцисты. Спорулированные ооцисты инвазионны для окончательных и промежуточных хозяев. Половому процессу^ в кишечнике дефинитивных хозяев предшествует бесполое размножение. Возможна внекишечная локализация бесполых стадий в дефинитивном хозяине. Цистоподобные однозоитные стадии (гипнозоиты) овальной формы, длиной до 21-35, шириной до 7-14 мкм, без септ, локализуются в лимфоидной ткани и многих органах резервуарных хозяев. Меро- и гипнозоиты неинвазионны для промежуточных хозяев.

Род Toxoplasma Nicolle et Manceaux, 1908.

Представлен одним видом. Цикл развития факультативно гетероксенный. Дефинитивный хозяин - кошка и другие виды кошачьих; промежуточные хозяева - более 350 видов позвоночных животных (млекопитающие, птицы) и человек. Ооцисты выделяемые кошкой, спорулируют во внешней среде. Размер ооцист - 12 х 10 мкм. Половому

процессу в кишечнике кошки предшествует бесполое размножение. Эндозоиты паразитируют в клетках почти всех органов, имеют форму полумесяца размером 4-7 .ч 2-3 мкм. Скопления эндозоитов в паразитофоряых вакуолях клеток, не имеющие собственной оболочки, называют псевдоцистами. Цисты имеют обычно округлую форму 10-J.00 ^ Д мкм в диаметре с тонкой (до 1 мтш) оболочкой, без септ, содержат согни однотипных цистозоитов. Локализуются в нервной, мышечной ткани и различных органах. Эндозоиты, цисты и спорулировашше ооцисты инвазионны как для промежуточного, так и для дефинитивного хозяина.

Род Besnoitia Henry, 1913.

Включает 6 родов. Типовой вид В. besnoiti. Цикл развития этого вида факультативно иди облигатно гетероксенный. Дефинитивный хозяин -кошка (по данным В.М. Петешева и соавт., 1974), промежуточные -крупный рогатый скот, антилопы, овцы, козы, кролики, хомяки и др. Ооцисты размером 15 х 13 мкм выделяются с фекалиями кошки неспорулированными. Эндозоиты в промежуточных хозяевах имеют форму полумесяца, величиной 5-9 х 2-5 мкм. Структурно они сходны с эндозоитами то неоплазмы. Цисты формируются в коже, подкожных фасциях, сухожилиях конечностей, апоневрозах мышц, склере, слизистых оболочках. Цисты безножтий сферической формы, диаметром до 0,6 мм, без септ, имеют очень толстую (до 30 мкм и более) оболочку. Размеры и структура всех цистозоитов в цисте одинаковые. Форма цистозоитов банановидная или в виде полумесяца, длина 6-12, ширина 2-5 мкм. В конце л физиологического раствора при температуре 37-38 0 С. Цистозоиты ! обладают подвижностью. Цисты инвазионны для дефинитивного, а у некоторых видов (В. besnoiti, В. dorlingi, В. jellisoni) для промежуточных хозяев. Ооцисты инвазионны дтя промежуточных (но не дефинитивных) хозяев.

Род Hammoruiia Frenkel and Dubey, 1975.

Типовой вид Н. hamniondi. Цикл развития облигатно гетероксенный. Дефинитивный хозяин этого вида - кошка, промежуточный - мыши, крысы, хомячки, морские свинки. Цисты выделяются кошкой неспорулированными, размером 12 х 11 мкм. Морфологически идентичны таковым у токсоплазмы. Половому процессу в кишечнике кошки предшествует бесполый. Цисты веретеновидные, с тонкой оболочкой, септ нет, длина 100-340 мкм, ширина 40-95 мкм; локализуются главным образом в скелетной мускулатуре. Цисты инвазионны только для окончательного (но не промежуточного) хозяина, ооцисты - наоборот (инвазионны для промежуточного, и не инвазионны для окончательного хозяина).

Род Fraikelia Biocca, 1968.

Известно два вида. Цикл развития облигатно гегероксенный, типовой вид F. microti. Дефинитивный хозяин - канюк (Buteo buteo). промежуточные - мыши., крысы, ондатры, золотистые хомячки, кролики и * другие грызуны. Цисты обычно локализуются в головном мозге грызунов. Оболочка цисты тонкая, полость цисты разделена внутренними перегородками. Размер цист - 0,2-1.0 мм. Цисты второго вида F. glareoli встречаются в головном мозге береговой полевки, имеют сферическую форму, достигают 400 мкм в диаметре. Как и в цистах Sarcocystis в развивающихся цистах различают метроциты. промежуточные клетки и цистные мерозоиты. Цистные мерозоиты имеют удлиненную серповидную форм}7 тела, располагаются в центре цисты и имеют размер 8-10 х 1-3 мкм. Спороцисты выделяются конюком уже спорулированные и имеют размер 12,5 х 8,8 мкм. Спороцисты френкелий практически не отличимы ог спороцисг саркоспоридий.

Обнаружение изоспороидных ооцист у целой группы родов тканевых цистообразующих кокцидий сильно затрудняет или делает невозможной использование ооцисты в качестве критерия вида кокцидий у дефинитивных хозяев. Так, у собак четыре вида Sarcocystis имеют идентичную структуру ооцист и спороцист. У человека трудно дифференцировать по ооцистам (и спороциставд) S. hominis и S. suihominis (которые ранее проходили под названием Isospora hominis). Ооцисты Toxoplasma gondii и Hammondia hammondi, выделяемые кошкой, . ^ практически не различимы и лишь биопроба на белых мышах позволит правильно их идентифицировать. Мышам, свободным от кокцидий перорально ,ДЛ«*"спорулированные ооцисты неизвестной видовой принадлежности. Основная масса цист Hammondia у мышей образуется в мышцах (особенно бедренных). А у токсоплазмы цисты находят главным образом в головном мозге и очень редко в мышцах инвазированных мышей. В отличие от токсоплазмы, инвазию Н. hammondi нельзя поддерживать путем слепых пассажей бесполых стадий паразита мышам.

При дифференциации бесполых стадий Sarcocystis и Toxoplasma в промежуточных хозяевах следует иметь в виду, что в эндотелии (и субэндотелии) кровеносных сосудов различных органов могут локализоваться как меронты саркоспоридий, так и псевдоцисты токсоплазмы (в острую фазу саркоцистоза и токсоплазмоза соответственно). При анализе гистологических срезов следует учитывать, что меронты саркоспоридий локализуются непосредственно в цитоплазме инвазированной клетки, а псевдоцисты токсоплазмы заключены в паразитофорную вакуоль.

Цистные стадии саркоспоридий локализуются в мышечной и очень редко в нервной ткани, а цисты токсоплазмы с одинаковой частотой встречаются в нервной ткани, в сердце, скелетных мышцах, в гладкой

мускулатуре в различных opi а пах (у крупного рогатого скота, особенно много цист токсоплазмы находят в печени). Оболочка цисты токсоплазмы тонкая ( I мкм) и не подвержена возрастным изменениям (за исключением небольшого ее утолщен и я) У цист саркоспоридий с возрастом структура стенки цисты может значительно изменяться (например, у S. gigantea). В ^ ^ цисте у токсоплазмы нет септ, а цистозоиты однотипны. В развивающейся цисте саркоспоридий различают три типа клеток: метроциты. промежу точные и мерозоиты. Размер цист токсоплазмы р.авен 10-100 мкм. а цисты у некоторых видов рода Sarcocystis могут достигать 20 мм и более. В старых цистах Toxoplasma gondii (и Frenkelia) остатки хозяинной клетки могут полностью исчезнуть (чего не бывает у Sarcocystis). Цистозоитами токсоплазмы можно вызвать заражение как дефинитивного, так и промежуточного хозяев паразита. При разрыве даст токсоплазмы (по разным причинам) возможно рецидивирование острой фазы болезни, так как цистозоиты трансформируются в эндозоиты, а последние, формируя псевдоцисты, вызывают массовое разрушение клеток хозяина. Подобное невозможно у Sarcocystis, так как цистный мерозоит являясь по сути гамонтом, может развиваться только в кишечнике дефинитивного хозяина. Предцистные меронты и мерозоиты саркоспоридий вызывать заражение дефинитивного хозяина не могут. Предцистные стадии токсоплазмы вызывают заражение дефинитивного хозяина (кошки). Трансплацентарная передача инвазии в острую фазу болезни - один из путей заражения при токсоплазмозе. При саркоцистозах у сельскохозяйственных животных внутриутробной передачи инвазии практически не происходит. #

Наиболее широко распространенный и патогенный вид S. cruzi от крупного рогатого скота может вызвать у неиммунных животных, независимо от возраста, острую фаз)' болезни с летальным исходом (при соответствующей дозе возбудителя). Вызвать клинически выраженный токсоплазмоз у крупного рогатого скота практически невозможно (описанные случаи гибели крупного рогатого скота от токсоплазмоза, как теперь установлено, связаны с острым саркоцистозом). Это необходимо учитывать при дифференциальной серологической диагностике.

В отличие от токсоплазмы. при заражении которой у кошек и собак формируются специфические антитела к ней, собаки и кошки, зараженные саркоспоридиями, остаются серонегативными, независимо от времени исследования после заражения (по-видимому, из-за отсутствия фазы мерогонии в дефинитивном хозяине, стадии которой являются иммуногенными). У рода Toxoplasma, представленного одним видом -Т. gondii, в качестве дефинитивного хозяина выявлена кошка и другие представители семейства Felidae. Род Sarcocystis к настоящему- времени насчитывает более 130 видов, а дефинитивными хозяевами ¿могут быть плотоядные из семейства Canidae, Felidae, Mustellidae, хищные птицы и другие, а также человек.

Циклы, развития Hammondi а и Sarcocystis облигагно гетсроксенные, но есть в них и существенные биологические различия. Например, молодые днсты хаммондий (независимо от их размера) являются уже инвазионными, тогда как цисты саргсоспоридий должны прежде созреть и л ^лпшь потом они могут вызывать заражение дефинитивного хозяина.

У Н. hammondi в кишечнике кошки - дефинитивного хозяина происходит бесполое размножение паразита перед гаметогонией. тогда как у Sarcocystis цистные мерозциты в кишечнике дефинитивных хозяев сразу трансформируются в мужские и. женские гаметы.

Цисты Н. hammondi и Т. gondii на ультраструктурном уровне очень сходны (Mehlhoni, Frenkel, 1980). за исключением размеров цистозоитов, которые* Н. hammondi были 4-5 мкм, а у Т. gondii - 7-8 мкм. Цисты указанных двух видов дифференцируют от цист Sarcocystis по отсутствию у них септ в цисте, а также метроцитов и промежуточных клеток, причем первые сохраняются даже в старых цистах саркоспоридий. У многих видов Sarcocystis (S. cruzi, S. hirsuta, S. hominis, S. tenella и других) с возрастом появляются видовые отличительные выросты на стенке цисты (Mehlhom et al, 1971). У S. gigantea (= S. ovifelis) вокруг инвазированной клетки формируется вторичная стенка цисты. Виды Frenkelia у сельскохозяйственных и домашних животных не паразитируют. Цисты френкелий формируют цисты в нейронах в головном (реже спинном) мозге грызунов, причем ядро клетки хозяина гипертрофируется. У Besnoitia а цистной стадии выражен тропизм к соединительной ткани (у Sarcocystis - к Ч , л мышечной). В цистах безноитий первичная паразитофорная вакуоль значительно расширяется и в конце концов полностью заполняется большим количеством паразитов. Ядро клетки хозяина обычно подвергается гипертрофии и гиперплазии. Клетка хозяина окружается слоями, образующими вторичную стенку цисты. Инвазированная клетка гипертрофируется, достигая гигантских размеров. Ядро ее делится путем амитоза, образуя большое количество ядер и в результате кчетка становится многоядерной (Schulz, 1960). В образовавшейся в цитоплазме клетки вакуоли паразиты, интенсивно размножаясь, отодвигают ядра на периферию клетки хозяина. В конце концов цитоплазма инвазированной клетки и ее многочисленные ядра образуют на периферии узкую зону. Вокруг такого гипертрофированного гистиоцита концентрируются фибробласты. в результате соединительнотканные волокна коллагенизируются, а затем гиалинизируются, формируя толстую гомогенную стенку цисты у крупного рогатого скота, . ■■.. и

достигают 600 в диаметре. Когда они единичные, то имеют сферическую или почти сферическую форму. Когда их очень много, они могут быть сдавлены. Цистозоиты в мазках имеют форму полумесяца и измеряются в среднем 2x7 мкм. В физиологическом растворе они подвижны.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Сравнительный анализ Жизненных циклов Sarcocystis. Cysioisospora. других цистообразующих кокцидий, изученных к настоящему времени А Я"*, (как in vivo, так и ш vitro), дает основание заключить, что несмотря на большое их разнообразие, у всех у них прослеживается филогенетическая близость с классическими кокцидиями родов Eimeria и Isospora и постепенный переход от паразитирования в кишечнике к тканевом}' паразитизму, от гомоксенности - к гетероксенности. Последнее привело к постепенной утрате роли ооцисты как основной инвазионной стадии и замене ее тканевой цистой. Определенным доказательством того, что кишечный цикл развития в эволюции цистообразующих кокцидий был основным, служит сходство стадий гаметогонии у гомоксенных (Eimeria, Isospora), то есть более древних форм и гетероксенных кокцидий. Т.В. Бейер (1977), проведя сравнительный анализ жизненных циклов Eimeria, Isospora, Toxoplasma, Besnoitia, Hammondia, Sarcocystis и Frenkelia, выявила у всех у них сходство в характере гаметогенеза. У всех перечисленных выше родов гамонты (= гаметоциты) развиваются независимо и раздельно друг от друга. У всех отмечена оогамия (то есть женские гаметы имеют вид яйцеклеток^да^сие- дадазоидрв). В отлнчие от ядра макрогаметоцита ядро/с последующим формированием микрогамет. Завершается половой процесс формированием зиготы и ^ ооцисты. '

' В отличие от гомоксенных кокцидий у тагах гетероксенных кокцидий как Sarcocystis и Frenkelia половой процесс включает две отчетливые ступени - гамогонию и гаметогошио, которые разделены не только во времени, но и в пространстве (Бейер, 1989), то есть эти фазы гаметогенеза осуществляются в разных хозяевах: первая - в промежуточном, а вторая - в дефинитивном. Циста Sarcocystis я Frenkelia -это меронт, в котором из стадии метроцита через стадию промежуточной метки формируются цисгные мерозоиты, которые гомологичны стадии гамонта.

Несмотря на значительный полиморфизм цистных стадий отдельных родов (разная форма, величина, толщина и структура стенки цисты, наличие или отсутствие септ, метроцитов и т.д.) и различную локализацию (мышечная, соединительная, нервная ткани) все они представляют собой трансформированную паразигофорную вакуоль в инвазированной клетке хозяина (Mehlhom, Heydom, 1978). Успехи в изучении тканевых цистообразующих организмов (их ультраструктуры, циклов развития) во многом изменили наши прежние представления о кокщедщг,заставили критически переосмысливать многие подходы к изучению диагностики, патогенеза, терапии и профилактики кокцидиозов. До 1970 года у кошек,

собак и человека было известно всего 7 видов кокцидий рода Isospora. В настоящее врем« у этих хозяев выявлено более 40 видов кокцидий с нзоспороидной структурой ооцнет. Биологические особенности этих кокцидий разнообразны и часто непредсказуемы. Например,, в пределах ipQ^ta Besnoitia есть виды (В. wallacei), заражение которыми промежуточных хозяев возможно только через ооцисты. Наряду с этим цисты В. besnoiti, В. darlingi, В. jellisoni инвазионны для других промежуточных хозяев.

Анализ жизненных циклов цистообразующих коюцидий сельскохозяйственных животных позволяет также говорить о них как о паразитах обычно с узкой хозяинной специфичностью (несмотря на имеющиеся исключения). Широта специфичности паразита определяется тем кругом хозяев, в организме которых происходит половой процесс, а не бесполое размножение (В.А. Догель, 1962). Поэтому узкая специфичность в отношении дефинитивных хозяев у Toxoplasma (кошачьи), Besnoitia (кошачьи), у видов Hammondia (кошачьи, псовые для определенных видов), у видов Sarcocystis (кошачьи, псовые, приматы, хищные рептилии, птицы соответственно), у Frenkelia (канюк) является показателем более высокого эволюционного развития по сравнению с такими кокцидиями как I. arctopitheci от мартышки и виды рода Cryptosporidium от млекопитающих и птиц.

Как известно, узкая хозяинная специфичность - свидетельство давности системы "паразит - хозяин" и отражает филогению как паразита, ^ ?ак и хозяина. О длительности совместной эволюции цистообразующих кокцидий и их хозяев, а так же первичности энтеральных, а не тканевых стадий в этом процессе свидетельствует взаимная адаптация паразита и хозяина, проявляющаяся снижением иммунологической реактивности со стороны последнего, и как следствие этого - обычно доброкачественное течение беАчзни. у дефинитивных хозяев. О более позднем появлении в процессе эволюции второго биологического звена - промежуточного хозяина в циклах развития цистообразующих кокцидий (то есть о переходе к гетероксенности) косвенно можно судить по сильно выраженной иммунологической реактивности со стороны хозяина в период предцистной мерогонии.

В настоящее время накопилось много данных о том, что острая фаза саркоцистоза, токсотгазмоза, безноитиоза, вызванная иредцистными мерозоитами (эндозоитами), протекает по типу аллергоза с реакциями гиперчувстБительности различного типа и может завершаться гибелью промежуточного хозяина. Не вызывает сомнения, что и в этом случае наблюдается проявление защитно-приспособительных реакций, назначение которых - освобождение (очищение) организма от чужеродного белка (аллергена) и восстановление нарушенного гомеостаза. Однако следует иметь в виду, что в ходе аллергических проявлений наряду

с защитно-приспособительными реакциями (защитное воспаление, образование антител и др.) происходит и разрушительный для организма промежу точного хозяина процесс.

По-видимому, у промежуточных хозяев еще не произошло адаптации к антигенным структурам паразита, выделяемым меронтами в больших дозах, что может приводить к летальным исходам.

Цистообразующие гетероксенные кокцидии (за исключением токсоплазмы), как правило, специфичны и в отношении промежуточного хозяина, а развитие вне кишечных стадии у них ограничено определенным крутом органов и тканей. Учитывая вышеизложенное, яри дифференциации тканевых цистообразующих кокцидии прежде всего необходимо ориентироваться на структуру их жизненных циклов (круг дефинитивных и промежуточных хозяев, хозяинная специфичность, пути передачи инвазии и т.д.) структуру и локализацию энтеральных и внекишечных (предцистных и цистных стадий, патогенность, результаты серологического и аллергического исследования, биопробы (И.И. Вершинин, 1996).

ВЫВОДЫ

Доминирующим видом у крупного рогатого скота в Свердловской области выявлен Sarcocystis cruzi; экстенсивность инвазии взрослых животных в отдельных районах области достигала 90 %. Экстенсивность саркоцистозной инвазии у свиней составляет 6 %. Выявлен лишь один вид - S. miescheriana (= S. suicanis). Зараженность саркоцистозной инвазией лошадей составила 19,1 %. Выявлен вид S. fayeri. У овец зараженность видом S. tenella (= S. ovíémií) достигала 95-100 %, а видом S. gigantea (= S. ovifelis) у овец старше двух лет -45 %. У коз выявлен вид S. capracanis, экстенсивность инвазии -38,3 %.

При паразитологическом исследовании 38 плодов в возрасте 4-6 месяцев от коров с интенсивной саркоцистозной инвазией, а также 47 телят, павших от диспепсии или колибактериоза, саркоцистозной инвазии не установлено.

Подтверждено, дано описание и сделаны микрофотографии двух предцистных генераций меронтов S. cruzi в организме телят, подвергавшихся экспериментальному заражению спороцистами этого вида.

N >

Прослежено развитие S. criizi в организме собак после заражения их мышечной тканью (сердце, диафрагма, пищевод) крупного рогатого скота с саркоцистозной инвазией. Все стадии развития паразита измерены и сфотографированы.

Сравнение стадий развития S. cruzi в культуре ткани куриных эмбрионов (после .инокуляции спорозоитов) показало большое сходство развивающихся паразитов (скопления вегетативных форм) с меронтами первой генерации S. cruzi, в эндотелии кровеносных сосудов у экспериментально зараженных телят в нашем опыте. В монослое фибробластов эмбрионов овец, в который инокулировали цистные мерозоиты S. gigantea развились все стадии половой фазы жизненного цикла паразита от макро- и микрогамет до незрелых ооцист.

В эксперименте по изучению развития Toxoplasma gondii в культуре ткани фибробластов куриных эмбрионов, проведенном с целью сравнить рост эндозоитов токсоплазмы со стадиями саркоспоридий в культурах тканей, установлено, что наиболее характерными были скопления паразитов в виде "розеток". "Розетки" состояли, как правило, из четного числа паразитов. Характерным было расположение эндозоитов возле ядра клетки монослоя. Отдельные клетки были "нафаршированы" как парными, так и одиночными эндозоитами. В таких клетках ядро было деформировано, часто поделено на сегменты и сдвинуто на периферию клетки. При экспериментальном заражении телят большими дозами сдароцист S. cruzi пагологоанатомические изменения особенно выражены в период появления меронтов второй генерации, то есть на 25-30 дни после заражения. В острую фазу болезни, совпадающую со второй мерогонией, во всех паренхиматозных органах развиваются сильнейшие воспалительные процессы пролиферативного характера с резко выраженными нарушениями кровообращения. Наружные и внутренние лимфатические узлы увеличены, отечны с кровоизлиянием. Кровоизлияния наблюдаются во всех внутренних органах. По-видимому, патологические процессы при остром саркоцистозе развиваются по типу аллергических реакций гиперчувствительности.

При энтеральном саркоцистозе у собак (и других плотоядных) при интенсивной инвазии происходит десквамация энтероцитов ворсинок на определенных участках тонкого кишечника. Через оголенные ворсинки в кровь могут попадать энтерококки, кишечные палочки, другие микроорганизмы и вызывать интоксикацию. Десквамация эпителия ворсинок может происходить и оттого, что масса ооцист и спороцист давит на сосуды стромы кишечной ворсинки и нарушает трофику кишечного эпителия.

10. Многократное (3-6 раз) реинвазированис собак с интервалом в две недели после прекращения" выделения спороцист саркослоридий и новым инвазированием приводило к удлинению (на 2-5 дней) препатентного и укорочению в 3-4 раза патентного периода с появлением в возраставших количествах аберрантных ооцист спороцист.

П . После однократного скармливания сырого мяса крупного рогатого скота (сердечные мышцы, диафрагма, пищеводы) с цистами S. cruzi собакам в возрасте от 2-х месяцев до 10 лет заражение произошло у всех животных.

12. Выявлены, измерены, сфотографированы стадии эндогенного и экзогенного развития Cystoisospora felis и С. ohioensis от котят и щенят соответственно для дифференциации от других цистообразующих кокцидий.

13. Прослежено развитие эндогенных стадий Hammondia heydorni в кишечнике собаки после экспериментального заражения спорулированными ооцистами паразита (для целей дифференциации от родственных организмов).

14. Не удалось получить выделения с фекалиями кошек ооцист Besnoitia besnoiti после скармливания тканевых цист паразита.

15. При дифференциации тканевых цистообразующих кокцидий прежде всего необходимо ориентироваться на структуру их жизненных циклов (круг дефинитивных хозяев, хозяинная специфичность, пути передачи инвазии и т.д.), морфологию и локализацию энтеральных и ^v ^ внешнекишечных предцистных и цистных стадий, патогенность, результаты серологического и аллергического исследования, биологическую диагностику.

Сведения о практическом использовании результатов исследования

Материалы исследований нашли применение в учебном процессе Уральской государственной, сельскохозяйственной академии, других вузов; вошли в два издания учебника для студентов вузов "Паразитология и инвазионные болезни сельскохозяйственных, животных" ред. профессора К.И. Абуладзе, М„ 1982 и 1990 гг.;

были использованы в следующих документах: 1, Методические рекомендации по диагностике и профилактике саркоцистозов сельскохозяйственных животных. - М., 1981. Одобрены Главным управлением ветеринарии МСХ СССР 22.09.80 г. и утверждены секцией "Паразитология и профилактика инвазионных

болезней сельскохозяйственных животных Отделения ВАСХНИЛ 4.10.80 г.

2. Методические рекомендации по борьбе с эймериозами и изоспорозами животных. - М... 1992. Одобрены секцией

^ паразитологии отделения ветеринарной медицины РАСХН 8.12.92 г.

3. Методические рекомендации по диагностике саркоцнстозов животных. Екатеринбург. 1998.

4. Методические рекомендации по диагностике цистоизоспорозов животных. Екатеринбург, 1999. ¿нягносгикг.

5. Методические указания по лабораторной }^оксопдазмоза животных. М, 1999. Утверждены зам. руководителя Департамента ветеринарии Минсельхозпрода России.

6. Результаты исследований по лабораторной диагностике и дифференциации саркоспоридий и цистоизоспор от других цистообразующих кокцидай могут быть использованы ветеринарными специалистами лечебных учреждений, ветеринарных лабораторий, лабораторийветсанэкспертизы рынков и др.

В выполнении отдельных исследований принимали участие сотрудники УрГСХА - В.И. Петренко, Л.И. Дроздова, В.В. Жуков, Н.В. Телятникова.

Участие других соиспошле/еи отражено в списке опубликованных работ.

список

оанмшьк рабо^онублмкопаггных по материалам диссертации

и-

1. Вершинин И.И., Леонтьева Ф.Ф., Петренко В.И. К изучению биологии изоспора фелис (Василевски, 1904. Веньон, 1923). // Тезисы научно-практической конференции. Свердловск, 1971. с. 15-17.

2. Вершинин Й.И., Петренко В.И., Леонтьева Ф.Ф. К изучению биологии изоспораривольта (Грасси, 1879, Веньон, 1923). - Там же, с. 17-19.

3. Вершинин И.И., Петренко В.И. К биологии Isospora bigemina, // Ветеринария, 1972, №9, с. 74-77.

4. Вершинин И.И. йзоспоры и изоспорозы плотоядных. // Тезисы докладов к зональной научно-производственной конференции по ветеринарии и животноводству. Троицк, июнь, 1972, с. 14.

5. Вершинин И. И. О цикле развития Sarcocystis tenella. // Ветеринария,

1973, № 10, с. 75-78.

6. Вершинин И.И. К изучению кокцидий норок. - За дальнейшее развитие животноводства, // Тез. докл. V Свердл. конф. НТО. Свердловск, октябрь, 1973, с. 16-17.

7. Вершинин И.И. К иммунитету при изоспорозах и саркоцистозах r v кошек. Тр. Свердл. НИВС, 1973, выпуск 7, с. 59-60.

8. Вершинин И И. О цикле развития Sarcocystis hirsuta. // Ветеринария,

1974, №2, с. 77-80.

9. Вершинин И.И., Леонтьева Ф.Ф. О заражении песцов и норок саркоцистами крупного рогатого скота. // Достижения химии в животноводстве. Тез. докл. VI Свердл. конф. молодых ученых, чл. НТО. Свердловск, 1974, с. 9-10.

10. Вершинин И.И. О новом виде саркоцист животных. Там же, с. 10-11.

11. Вершинин И.И., Леонтьева Ф.Ф., Петренко В.И. К изучению изоспорозов домашних плотоядных. - Тр. Свердл. СХИ, 1974, т. 31, с. 101-112.

12. Вершинин Й.И., Петренко В.И. - Жизненный цикл Isospora bigemina (Stiles, 1891), Luke, 1906. Тамже, с. 113-126.

13. Вершинин И.И. Токсоплазмоз. - В кн.: Болезни поросят. Свердловск,

1975, с. 73-78.

1.4. Вершинин И.И., Леонтьева Ф.Ф. Опыт заражения собак, кошек и других животных спороцистами саркоспоридий. За научно-технический прогресс в сельском хозяйстве. //Тез. докл. VÍÍ Сверяя, конф. НТО. Свердловск, июнь. 1975. -с. 19-20.

ТЗ^ Вершинин И.И. Об эндогенном и экзогенном развитии то неоплазм. Там же. с. 20-21.

16. Вершинин И.й. Саркоцисты крупного рогатого скота. // Докл. ВАСХНИЛ, 1975.. № I, с. 30-32.

.17. Вершинин И.И., Петренко В.И., Леонтьева Ф.Ф. Развитие саркоциств культурах тканей при заражении зоитами (эндодиодитами). // Состояние изученности крове паразитарных и малоизученных протозойных болезней сельскохозяйственных животных и перспективы их ликвидации в стране. Тез. дога, научной конф. (Самарканд, 6-9 октября 1975 г.). Москва, 1975, с. 70-71.

18. Вершинин И.И., Петренко В.И. Леонтьева Ф.Ф. Развитие Sarcocystis hirsuta (= S. fusiformis) в культуре ткани при заражении спорозоитами. //Сб. трудов ЭСХА, 1975, №99, с. 102-106, Та рту.

1.9. Вершинин И.И. Критерии дифференциации ооцист изоспор, саркоцист и токсоплазм домашних плотоядных. Там же, с. 71-72.

20. Вершинин И.И. Видовой состав саркоспоридий крупного рогатого л скота и овец на Среднем Урале. Профилактика и лечение болезней

сельскохозяйственных животных. Пермь, 1982, с. 55-63.

21. Вершинин И.И., Петренко В.И., Кундрюкова Л.И., Васильева Г.В. Патологоанатомические изменения при остром экспериментальном саркоцистозе телят. Там же, с. 64-70.

22. Вершинин И.И. К дифференциации изоспор, саркоцист, токсогагазм и родственных им организмов. Профилактика и лечение болезней сельскохозяйственных животных. Тр. Свердл. СХИ, т. XLIX Пермь, 1977, с. 63-69.

23. Вершинин И.И. О видовом составе саркоцист крупного рогатого скота. Там же, с. 71-78.

24. Вершинин И.И. Саркоцисты и родственные им организмы. - В кн.: Арахнозы и нротозайные болезни сельскохозяйственных животных. М., 1977, с. 192-215.

25. Вершинин И.й. Песцы - окончательные хозяева микросаркоцист овец. - В кн.: Достижения науки - сельскохозяйственное производство. // Тез. докл. VIII Свердл. конф. НТО. Свердловск, 1977, с. 12.

26. Вершинин И.И. Саркослоридии и изоспоры животных и человека. Протозоология, вып. 4. Изд. "Наука". 1979, с. 24-33, А -А -

Вершинин И.И.. Петренко В.И.. Леонтьева Ф.Ф. Развитие ЭагсосузиБ 1:епс11а в культурах тканей нри заражении цнстозоитами. Там же.

Вершинин И.И. Саркоцистозы животных. - В кн.: Паразитарные болезни сельскохозяйственных животных и меры борьбы с ними. Изд. "Кайнар". Алма-Ата.. 1.979. с. 112-113. >

Вершинин И.И. Систематическое положение саркоспоридий, изоспор и родственных им организмов. Тр. Свердловского и Кировского с/х институтов "Этиология, и профилактика болезней с/х животных" т. 56, Пермь, 1979, с. 106-114.

Вершинин И.И., Петренко В.И. Изучение токсоплазмид на Среднем Урале. // Всесоюзн. науч. конф. "Проблемы развития науки на Урале до 1990-2000 гг." Секция с/х наук. Свердловск, 1981, с. 153-156.

Вершинин И.И., Петренко В.И., Колмаков Ю.А., Савин А.Ю. К биологии Хаммондия хейдорни. // Тез. научн.-произв. конф. "Актуальные вопросы решения продовольственной программы на Среднем Урале". Свердловск, 1984, с. 21-23.

Вершинин И.И. Саркоспоридии (Загсосувйв) и саркоцистозы. - В кн.: Теоретические и практические вопросы ветеринарии. Т. 2. Заразные болезни. // Мат. республик, конф. "Ветеринарные проблемы индустриального производства". Тарту, 1983, с. 83-90.

Вершинин И.И. Профилактика саркоцистоза домашних животных и человека. - В кн.: Задачи ветеринарной науки и практики по повышению эффективности животноводства Свердловской области. // Тез. докл. научной конф. 25-26 марта 1980 г. Свердловск, 1980, с. 29-31.

Вершинин И.И. Аберрантные формы кишечных саркоспоридий и изоспор у плотоядных животных. - В кн.: Кишечные простейшие. Вильнюс^ 1982, с. 35-39.

Вершинин И.И. Биологические особенности саркоспоридий. - В кн.: Современные проблемы протозоологии (Материалы к третьему съезду Всесоюзного общества протозоологов). Вильнюс, 1982, с. 62.

Вершинин И.И., Петренко В.И. Биологические особенности изоспор собак и кошек. Там же, с. 284.

Вершинин И.И. Саркоцистозы. - В кн.: Протозойные болезни сельскохозяйственных животных. Изд. "Колос". М., 1982, с. 215-254.

Вершинин И.И. Изосхторозы собак и кошек. Там же, с. 254-272.

Вершинин И.И. Кокцидиоз крупного рогатого скота. - Там же, с. 272-288.

40. Вершинин И. И. Кокцидиоз овец. Там же, с. 288-297.

41. Вершинин И.Й. Кокцидиоз свиней. Там же. с. 298-307.

42. Вершинин И.И. Современное представление о саркоспоридиях и

А_ саркоцистозах животных. // Тезисы докладов. Протозойные болезни

сельскохозяйственных животных, переносчики их возбудителей и современные методы борьбы с ними. // Тез. докл. на Всесоюзной научно-производственной конференции 10-12 ноября 1983 г. Самарканд-Джамбай, 1983, с. 208-210.

43. Петренко В.И., Вершинин И.И. Лечение телят при остром экспериментальном саркоцистозе. // Тез. научн.-произв. конф. "Актуальные вопросы решения продовольственной программы на Среднем Урале". Свердловск, 1984, с. 13.

44. Вершинин И.И. К патогенезу при саркоцистозах животных. // Тез. научн.-произв. конф. "Профилактика заболеваний с/х животных в хозяйствах Свердловской области". Свердловск, 1985, с. 36-37.

45. Вершинин И.И., Петренко В.И., Жуков В В. К эпизоотологии саркоцистозов сельскохозяйственных животных. // Тез. научн.-практ, конф. "Достижения науки и практики в решении продовольственной программы га Среднем Урале". Свердловск, 1985, с. 52-53.

46. Петренко В.И., Вершинин И.И. Методика применения содового л раствора (№ НСО з) для обнаружения эндогенных форм кокцидий. //

Тез. научн.-практ. конф. "Технология содержания и профилактика заболеваний с/х животных". Свердловск, 1988, с. 50.

47. Вершинин И.И. К филогении цистообразуюгцих эймериидных кокцидий. Тр. СНИВС, вып. 9, Свердловск, 1987, с. 79-87.

48. Верпшнин И.И. Критерии дифференциации цистообразующих кокцидий. Тр. СНИВС, вып. 9. Свердловск, 1987, с. 88-91.

49. Вершинин И.И. Патогенное действие саркоспоридий. // Тез. докл. IV съезда ВОПР "Современные проблемы протозоологии" АН СССР, Ленинград., "1987, с. 191-192.

50. Вершинин. И.И., Шкуратова И.А., Миллер И.В. Тканевые цистообразующие кокцидий птиц. // Материалы симпозиума 12-13 октября 1989 "Профилактика болезней птиц". Тарту, 1989, с. 65-67.

51. Вершинин И.Й. О видовом составе саркоспоридий свиней и лошадей на Среднем Урале. // Тез. XXX научн. конф. посвященной 50-детию ин-та (28-30 ноября 1990 г.). Свердловск, 1990, с. 65-66.

52. Вершинин И.И., Петренко В.И. Багсосувйв (РгоСогоа, Арюогпр1еха) и вызываемые ими болезни. Межвузовский сб. научн. трудов "Новое в профилактике и лечении животных". Пермь, 1991, с. 5-18.

•Hi

53. Вершинин И.И. Жизненные циклы кокцидий рола Sarcocystis. Цитология, т. 34, M., 1992, с. 35-36.

54. Вершинин И.И. Отличительные особенности токсоплазмы и саркоспоридий, // Тез. XXXIV научн. конф. (23-25 марта 1993 г.). Екатеринбург, 1993, с. 84.

55. Вершинин И.И. Цистоизоспорозы собак и кошек (на эстонском языке). // Международная конф. "Ветеринарная медицина' 94". Тарту.

1994, с. 166-170.

56. Вершинин И. И. M орфологические и биологические особенности Sarcocystis Lankester, 1882. Тр. СНИВС "Проблемы профилактики и лечения заболеваний с/х животных", вып. 10. Екатеринбург; Диамант,

1995, с. 165-169.

57. Жуков В.В., Вершинин И.И., Петренко В.И., Телятникова Н.В. Серологическая диагностика саркоцистоза крупного рогатого скота. Там же, с. 170-175.

58. Вершинин И.И., Петренко В.И. Морфологические и биологические особенности цистоизослор собак и кошек. Там же, с, 176-181.

59. Вершинин И.И., Петренко В.И., Телятникова Н.В. Идентификация ооцист кокцидий собак и кошек. Там же, с. 182-186.

60. Петренко В.И., Вершинин И.И., Телятникова Н.В. Паразитозы собак и кошек. //Междунар. конф. "Ветеринарная медицина' 95". Тарту, 1995, у-, 4 с. 52-67.

61. Вершинин И.И. Идентификация видов Sarcocystis Lankester 1882. Там же, с. 68-82.

62. Вершинин И.И. Дифференциация тканевых цистообразующих кокцидий. //Междунар. конф. "Teadustoode kogumik collectied studies". Prof. I. Kaarde 100. Tartu, 1996, с. 52-80.

63. Вершинин И.И. Minks coccidia in the fur-bearing animal farm of Central Ural, (на эстонском языке). // Междунар. конф. "Veterinaar meditsiin' 96". Tartu, 16-18 октября 1996, с. 89-92.

64. Вершинин И.И. Токсоплазмоз кошек и собак. // Сб. статей "Актуальные вопросы ветеринарной медицины мелких домашних животных", вып. 2. Екатеринбург, 1997, с. 40-46.

65. Вершинин И.И. Терминология инвазивных стадий кокцидий. Там же, с. 54-56.

66. Вершинин И.И. Критерии видовой идентификации саркоспоридий. // Тез. докл. Второго совещания по теме "Окружающая среда и

.проблемы паразитарного загрязнения". РАН. Санкт-Петербург. 1996. с. 20-21.

67. Вершинин И.И., Телятникова Н.В.. Петренко В.И, Леонтьева Т.В. Энтеральные протозоозы собак и кошек. /У Сб. ст. "Актуальные

''"^вопросы ветеринарной медицины мелких домашних животных", вып. 2. Екатеринбург. 1997. с. 48-54.

68. Вершинин И.И. Паразиты мышечной ткани сельскохозяйственных животных и их диагностика. // .Материалы межрегиональной научн,-практ. кокф. "Опыт и проблемы повышения качества молочной продукции" (26-27 сентября 1997 г.), часть 1-я. Курган, 1997, с. 45-48.

69. Вершинин И.И. Эпизоотология и профилактика саркоцистозов крупного рогатого скота. Там же. часть 2-я, с. 69-72.

70. Вершинин И.И., Петренко В.И, Телятникова Н.В. Сравнительная оценка эффективности методов постмортального выявления саркоцист животных.//Там же. с, 73-75.

71. Вершинин И.И., Телятникова Н.В. Основные источники и пути заражения животных и человека саркоцистозами и токсоплазмозом. // Материалы межрегиональной научн.-практ. конф. "Опыт и проблемы обеспечения продовольственной безопасности государства", секция 5 (28-30 мая 1998 г.). Екатеринбург, 1998, с. 207-211.

^72, Вершинин И.И. Дифференциальная диагностика тканевых цистообразующих кокцидий. // Материалы Международной научно-произв. конф. по протозоологии (11-12 ноября 1997 г.). Москва. Вестник ветеринарии, №7, 1998, с. 56-60.

73. Вершинин И.И., Петренко В.И., Телятникова Н.В. К диагностике острого саркоцистоза животных. // Материалы конф. "Практические мероприятия по профилактике патогенного воздействия факторов окружающей среды на здоровье населения". Екатеринбург, 1998, с. 200-202.

74. Вершинин И.И. Кокцидиозы животных и их дифференциальная диагностика. Монография (учебное пособие). Допущено Главным управлением высших учебных заведений Министерства сельского хозяйства и продовольствия РФ в качестве учебного пособия для студентов высших учебных заведений по специальности "Ветеринария". Екатеринбург, 1996. 264 с.

Всего в списке опубликованных работ по диссертационной теме

83 наименования.

Таблица

Критерии дифференциации цистообразующих кокцидий

Род кокцидий Цикл развития «J 4> а я к к я о «is Ооциегы выделяются Ооцисты инвазион-ны для хозяина Локализация цист Форма и величина цист, наличие септ Развивающаяся циста содержит

Бесполые г цни в кише 1 оконвдтелЬ) хозяина неспорули-рованные I 3 а s 4 « >> 3 о, а 5 3 я к о и оконча-| тельного промежуточного метроциты цистозоиты промежуточные клетки

1. Cysfeoisospora Факультативно гетероксенный + + - 4. + Лимфоидная и другие ткани Овальная, длина до 21-35 мкм, ширина до 7-14 мкм, септ нет +

2. Toxoplasma Факультативно гетероксенный + 4- + + Нервная, мышечная и другие ткани Круглая или овальная, до 100-200 мкм, септ нет л-

3. Besnoitia (B.besnoitia) Факультативно или облигатно гетероксенный + + + Соединительная ткань, кожа, апоневрозы мышц, склера, слизис-стые оболочки Сферическая или овальная, до 0,6 мм и более в диаметре, септ■ нет

4. Hammondia (H.hamiuoiidO Облигатно гетероксенный + + + Скелетная, мышечная ткань, редко - сердце и иногда головной мозг Веретеновидная. длина - 100 х 300 мкм, ширина - 40 х 65 мкм, септ нет +

5. Sarcocystis Облигатно гетероксенный + + Мышечная ткань (сердце, скелетные мышцы), иногда мозг Веретеновидная, овальная, нитевидная. Длина от десятых долей миллиметра до 1,5 см и более, септы имеются + +

6. Frenkelia Облигатно гетероксенный + + Нервная ткань (головной и спинкой мозг) Круглая или овальная, до 0,8 мм в диаметре или дольчатая до 1. мм в диаметре, септы есть + + >

Таблица I. Ооцисты кокцидий кошек и собак. Оригинал. Микрофото автора, х 1000

Рис. 1. Незрелые ооцисты Toxoplasma gondii и ооциста Cystoisospora

rivolta из фекалий кошки (смешанная инвазия).

Рис. 2. Две незрелые ооцисты T.gondii из фекалий кошки.

Рис. 3. Спорулированная ооциста T.gondii из фекалий кошки.

Рис. 4. Слорулированные ооцисты Hammondia heydorni из фекалий

собаки.

Рис. 5. Спорулированная ооциста Cystoisospora felis. Рис. 6. Спорулированная ооциста С.rivolta от кошки. Рис. 7. Спорулированная ооциста C.ohioensis от собаки. Рис. 8. Спорулированная ооциста Sarcocystis cruzi от собаки.

Таблица II. Ооцнсты и спороцисты саркоспоридий собак и кошек. Оригинал. Микрофото автора.

Рис. 1. Спорулированнме ооцнсты S.cruzi из соскоба слизистой оболочки тонкого кишечника собаки. Нативный материал, х 800.

Рис. 2. Спорулированные ооцнсты S.cruzi в кишсчкои ворсинке собаки. Эпителий ворсинки десквамироваи. Гисторез. Окраска гематоксилин-эозином. х 800.

Рис. 3, 8. Незрелые ооцнсты S.cruzi из соскоба слизистой оболочки тонкого кишечника собаки. Наганный материал, х 800.

Рис. 4. Спорулированная спороцнста и нациста S.cruzi. Окраска метиленовым синим, х 800. Рис. 5, 7. Спорулированнме ооцнсты S.be.rtrami из фекалии собаки. Нативиый материал. х1100. Рис. 6. Спорулированная ооцнета S.gigantea из фекалии котки. Нативный материал, х 800. Рис. 9. Спорулированнме ооцисты S.cruzi из соскоба слизистой оболочки тонкого кишечника собаки на 8-й день после скармливания саркоцнет из мышц крупного рогатого скота. Нативиый материал, х 800.

Рис. 10. Спорулированные спороцистм S.cruzi на фекалий собаки. Нативный материал, х 1100. Рис. 11, 12. Спорулированные спороцисты S.gigantea из фекалий кошки. Нативный материал, х 1700 и х 600 соответственно.

Рис. 13. Разрушенные спороцисты после выхода спорозоитов S.cruzi. XÍ700.

Рис. 14. Спорулированная спороцнста S.tenella (—S.ovicanis) из фекалий песца. Нативный

материал, х 800.

Рис. 15. Спорулированная спороцнста S.teneJla в кишечной ворсинке песца. Эпителий ворсинки десквамироваи. Гистосрез. Окраска гематоксилин-эозином, х 600.

Таблица IV. Спорогония ооцист Sarcocystis tenella (S.ovicanis) в lamina propria ворсинок тонкого кишечника песца. Оригинал. Микрофото автора. Рис. 1-6: Формирование ооцист S.tenella. Нативный материал, х 500. Рис. 7. Микрогаметоцит S.tenella. Нативный материал, х 600. Рис. 8. Микрогаметы S.tenella Соскоб слизистой тонкого кишечника песца. Окраска по Романовскому-Гимзе. х 600.

ее

Таблица V. Меронты Загсосуяйв спш в эндотелии (и субэндотелии) кровеносных сосудов телят в острую фазу экспериментального сарко-дистоза. Оригинал. Микрофото автора. Рис. 1 - Меронт в кровеносном сосуде почки, х 750. Рис. 2 - Меронт в субсерозном слое тонкой кишки, х 750. Рис. 3 - Меронты в мезентериальном лимфатическом узле, х 750. Рис. 4 - Меронт в просвете сосуда диафрагмы, х 500. Рис. 5, 6 - Меронты в мышечной ткани, х 750.

Таблица VI. Тканевые цисты кокцидий. Оригинал. Микрофото автора. Рис. 1 - Циста ЗагсосуБ^я сги'/А, сердечная мышца. Нативный материал, х 300.

Рис. 2, 5, 6 - Цисты Б.спш из мышцы сердца крупного рогатого скота. Гистосрезы. Окраска гематоксилин-эозином, х 900; 500 и 900 соответственно.

Рис. 3 - Циста Б.спт, мышцы диафрагмы. Нагнвный материал, х 600. Рис. 4 - Циста Б.спт, мышцы диафрагмы крупного рогатого скота. Нативный материал, х 120.

Рис. 7 - Циста З.саргасашв. Мышцы диафрагмы козы. Нативный материал, х 250

Таблица VIII. Развитие Toxoplasma gondii в культурах клеток после инокуляции спорозоигов. Оригинал, микрофото автора. Рис. 1-8. Эндозоиты токсоплазмы в культурах клеток через 70-80 часов после инокуляции спорозоитов (видна паразитофорная вакуоль), х 1000.

Информация о работе

Вершинин, Игорь Иванович
доктора биологических наук
Тюмень, 2000
ВАК 03.00.19

Автореферат

Похожие работы

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему Жизненные циклы, патогенность и дифференциация кокцидий родов Sacrocystis и Cystoisospora ВАК РФ 03.00.19, Паразитология

Автореферат диссертации по теме "Жизненные циклы, патогенность и дифференциация кокцидий родов Sacrocystis и Cystoisospora"

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Жизненные циклы, патогенность и дифференциация кокцидий родов Sacrocystis и Cystoisospora
ВАК РФ 03.00.19, Паразитология