Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Жизненные циклы, патогенность и дифференциация кокцидий родов Sacrocystis и Cystoisospora

ВАК РФ 03.00.19, Паразитология

Содержание диссертации, доктора биологических наук, Вершинин, Игорь Иванович

В опытах по выяснению возрастной восприимчивости животных было 12 кошек в возрасте от одной недели до 15 лет. Кошек содержали индивидуально в клетках, подвергавшихся ежедневной тщательной очистке и периодическому обеззараживанию огнем паяльной лампы. Перед введением в опыт животных 10 дней выдерживали в особом помещении, чтобы исключить спонтанную инвазию изоспорами. Кормили кухонными отходами, молоком два раза в день из чистой посуды, подвергавшейся ежедневному кипячению.

Дозы спорулированных, предварительно отмытых от бихромата калия ооцист I.felia, применявшиеся для заражения, варьировали в пределах от 5 до 50 тысяч одному животному, в зависимости от его возраста. Ооцисты давали per os с помощью глазной пипетки в небольшом количестве воды (от 2 до 5 мл).

§екалии животных исследовали ежедневно до тех пор, пока животное не было убито или не погибало в ходе опыта.

Зараженные кошки были убиты через 2, 5, 8, II, 14, 17, 20 дней после заражения (по 3 животных в каждый период). С поверхности слизистой оболочки тонкого кишечника на всем его протяжении делали скальпелем соскобы через каждые 5 см, отступя от желудка. Всего от одного животного брали обычно 14-18 проб.

Толстый отдел кишечника делили на три части и соответственно исследовали. Соскоб изучали компрессорно между предметным и покровным стеклами, используя различные объективы биологического микроскопа. Всех обнаруженных паразитов сразу же измеряли. Кусочки кишечника из разных его участков консервировали для последующего гистологического исследования. Из внутренних органовСсерд-це, печень, почки, селезенка, головной мозг), а также мезентери-альных лимфатических узлов и мышц делали мазки, подсушивали фиксировали спиртом ректификатом и красили по Романовеному-Гимзе в течение 40-60 минут. Часть материала консервировали для последующего гистологического исследования.

Три котенка, свободные от изоспор, в возрасте трех недель, двух и четырех месяцев, были убиты как контрольные для сопоставления с результатами микроскопии соскобов кишечника подопытных животных.

Изучение жизненного цикла Cystoisospora rivolta проведено на щенках 2-3 месячного возраста. В опыте было 7 щенков от собак -дворняжек (5 подопытных, а 2 - в контроле). Все щенки до начала опыта трижды, в течение недели, были обследованы не гельминтозы и цистоизоспорозы. Четыре щенка с токсокарами подвергнуты дегельминтизации декариеом. Щенков содержали индивидуально в клетках, кормили овсяной кашей, хлебом и кухонными отходами.

Исходным материалом для заражения были клонированные культуры ооцист C.ohioensis, полученные первоначально от щенка со спонтанной инвазией C.ohioensis. д0зы для заражения составляли 10.000-30.000 спорулированных ооцист одному щенку при перораль-ной даче. Двух контрольных щенков заражению не подвергали. Подопытные щенки были убиты, а их кишечники обследованы на наличие и локализацию эндогенных стадий цистоизоспор через 2,3,4,5,6дней после заражения. Контрольных щенков обследовали постмортально на 7-й день опыта. Методы паразитологического исследования кишечника щенков аналогичны таковым для c.feiia.

Для сравнительного изучения энтеральных стадий развития в кошке, а также стадий, образующихся в культурах тканей у Toxoplasma gondii u Besnoitia besnoiti после инокуляции спорозои-тов этих паразитов намечено было получить в больших количествах ооцисты этих двух видов кокцидий.

Для сравнительного изучения с другими цистообразующими кок-цидиями энтеральных стадий развития Toxoplasma gondii u Besnoitia besnoiti в кошке, а также в культурах тканей после инокуляции спорозоитов этих паразитов, намечено было получить в больших количествах ооцисты токсоплазмы и В.besnoiti.

С этой целью в 1975 году из лаборатории токсоплазмоза ЙЭМ им. Н.Ф.Гамалеи АМН СССР (от Д.Н.Засухина, М.А.Савиной) получена белая мышь с цистами авирулентного штамма токсоплазмы в головном мозге.

После скармливания кусочков мозга с цистами токсоплазмы двум котятам двухмесячного возраста, свободным от кокцидий, через 5 и 7 дней соответственно начали выделяться с фекалиями в колоссальных количествах неспорулированные ооцисты токсоплазмы. Процесс ввделения ооцист у одного котенка составил 7, а у другого Юдней. Ооцисты токсоплазмы из фекалий выделяли, используя центрифужный метод Дарлинга, где глицерин заменили насыщенным раствором №аС1. Отмытые (путем трехкратного центрифугирования) свежевнделенные ооцисты переносили в колбу со стерильной дистиллированной водой. Для лучшей аэрации колбу соединяли резиновыми шлангами с микрокомпрессором МК-2. Воздух, нагнетаемый микрокомпрессором, пропускали (по методике Т.А.Шибаловой) через колбу с серной кислотой.

Перед проведением опыта спорулированные ооцисты токсоплазмы (споруляция проходила за 2-3 дня при комнатной температуре) подвергали "обезвреживанию" по методике Джексона (Jackson, 1964). Спорозоиты получали по методике Дорана и fappa ( Doran, Parr, 1962) в модификации Т.А.Шибаловой (1968) с небольшими изменениями: епороцисты инкубировали при 38°С с добавлением кошачьей желчи. Полученные спорозоиты отмывали теплым буферным раствором, посредством центрифугирования и после суспеццирования использовали для заражения культуры клеток. Заражению подвергали первично трипсинизированную линию культуры куриных фибробластов (К#), полученную из 10-12 дневных эмбрионов цыплят. Питательной средой, для культуры клеток, служили первые два дня 10%-ный гидролизат лактальбумин на растворе Хенкса, к которому добавляли 10% сыворотки крови крупного рогатого скота, а также индикатор феноловый красный из расчета 10 мг/мл, стрептомицин и пенициллин по ЮОед. каждого на I мл питательной среды.рН питательной среды поддерживали на уровне 7,1-7,2. Температуру в термостате поддерживали в пределах 38^39°С. После двухнедельного культивирования в пробирках на половинках покровных стекол развивался монослой клеток. На этот слой клеток вносили спорозоиты токсоплазмы, предварительно проверенные под микроскопом на жизнеспособность. Дозы заражения составляли 100.000 спорозоитов на одну пробирку. Последующее обновление среды производили каждые 20-24 часа. Зараженный монослой клеток периодически подвергали микроскопии (после фиксации в метиловом спирте и последующей окраски гематоксилин- . эозином). Контролем служила извлеченная в те же часы и также окрашенная, но не зараженная культура Ж.

Для изучения эндогенного развития токсоплазмы был проведен опыт по скармливанию котятам цист и спорулированных ооцист токсоплазмы. С целью получения ооцист Besnoitis besnoiti трем котятам (при двух контрольных) трехмесячного возраста были скормлены по 50, 150 и 400 цист безноитий, выделенных из кожи и подкожных фасций крупного рогатого скота и интенсивной инвазией(

-250 цист безноитий на I см ) (материал для заражения получен был в 1975 году из Казахского ШВИ от М.В.Хвана). Копрологичес-кие исследования котят проводили через 5 дней после заражения в течение месяца. Заражения котят не произошло.

Поскольку, проводя многократно опыты по скармливанию собакам сырой саркоцистозной говядины, иногда наряду со спороциста-4 ми саркоспоридий, мы в фекалиях выявляли неспорулированные ооцисты Hammondia heydorni, то мы провели опыт по заражению спору-лированными ооцистами этой кокцидии собак, а позднее - мышечной тканью этих собак накормили подопытных собак.

Все стадии развития кокцидий в опытах были сфотографированы микрофотонасадкой М#Н-1,

§Н-2.

Результаты опытов обработаны статистически, достоверность различий оценивали по Стъюденту.

2.2. Результаты исследований

2.2.1. Видовой состав Sarcocystis у крупного рогатого скота, овец, коз, свиней, лошадей в зоне Среднего

Урала

В Свердловской области экстенсивность саркоцистозной инвазии крупного рогатого скота варьировала в различных районах от 10 до 90$. С возрастом животных экстенсивность и интенсивность инвазии нарастает. Отмечена обратная зависимость между упитанностью животных и интенсивностью инвазии. При исследовании 4-6 месячных плодов от коров с интенсивной саркоцистозной инвазией внутриутробной инвазии не установлено. Не было ее и у телят первых двух недель жизни.

Если применять с щелью диагностики саркоцистозной инвазии метод переваривания мышечной ткани в трипсине или желудочном соке, то процент пораженных животных значительно возрастает. Доминирующим видом у крупного рогатого скота выявлен S.cruzi. иснов' ная локализация этого вида - сердце. Количество саркоцист в 26 срезах компрессория колебалось (в случаях интенсивной инвазии) в пределах 100-250. Максимальное количество саркоцист (до 200 и более) обнаружено в левых желудочках сердца. Саркоциеты в сердечной мышце имели удлиненно-овальную форму с закругленными краями. Размер - 0,08-0,33 х 0,02-0,08 мм. В мышечных волокнах диафрагмы преобладали тонкие длинные саркоцисты размером 0,14-0,5 х 0,02-0,11 мм. Саркоцисты в мышечных срезах из диафрагмы иногда были видны невооруженным глазом (при просмотре окрашенных срезов в компрессории на источник света) в виде мелких темных штрихов. Диаметр саркоцист, локализовавшихся в миокарде,часто в 5-6 раз превышал диаметр мышечных клеток. Стенка (оболочка) саркоцист тонкая (около I мкм) гладкая со слабо заметными редкими ворсинчатыми выростами. Полость цисты поделена септами на отдельные сегменты, заполненные мерозоитами длиной 10-13 мкм.

У свиней экстенсивность саркоцистозной инвазии составила &% (Вершинин, 1990). Наиболее часто саркоцисты находили в пищеводе» диафрагме. Величина саркоцист (п=70): 150-380 мкм в длину и 25100 мкм в ширину; толщина стенки цисты 2,5-3,7 мкм (в среднем 3,2 мкм), оболочка цисты имеет поперечную исчерченность. Размер мерозоитов в зрелых цистах - 13,7-18,8 мкм в длину (в среднем 10,7 мкм) и 3,5-5,4 мкм в ширину (в среднем 3,7 мкм). В результате опыта по скармливанию саркоцистозной свинины собакам и кошкам заражение произошло лишь у собак. Таким образом, у свиней выявлен вид S.miescheriana («S.suicanis).

Зараженность саркоспоридиями лошадей составила 19,1% (Вершинин, 1990). Саркоцисты чаще находили в пищеводе, диафрагме, реже в скелетной мускулатуре. Величина саркоцист (п=50) была 370-850 мкм в длину и 41,6-70 мкм в ширину; толщина оболочки цисты в среднем 2 мкм. Имеется поперечная исчерченность оболочки цисты. Размер мерозоитов в зрелых цистах колебался в пределах 15-20 мкм (в среднем 18,7 мкм) в длину и 4,4 (в среднем) в ширину. Скармливание мышечной ткани лошадей трем щенкам и трем котятам в возрасте от 2 до 5 месяцев вызвало заражение лишь у щенят. Препатентный период составил 11,13 и 14 дней. Таким образом, у лошадей выявлен вид S.fayeri.

У овец, как правило, преобладает зараженность видом S.tenel-la (=S.ovicanis) - до 95-100%, а ВИД S.gigantea (=S.ovifelis) регистрируется у 45% овец старше двухлетнего возраста.

У коз саркоцисты выявлены у 38,3% в пищеводах, диафрагме, скелетных мышцах. Саркоцисты имели размер 145=900x55-80 мкм,хотя у отдельных животных их величина достигала 1,5-2 мм и,более. Оболочка (стенка) цисты - 2,5-3 мкм с поперечной исчерченностью. Ме-розоиты в зрелых цистах были 11,5-15,5 х 3,0-4,5 мкм. Мышечной тканью коз с саркоцистами накормили трех щенков и двух котят. Через 7 и 8 дней соответственно щенки стади выделять спороцисты величиной 13-15 х 8,5-10 мкм. Котята спороцист не выделяли. Таким образом, у домашних коз выявлен вид S.capracanis.

Ниже в таблице приведена сравнительная оценка поетмортальных методов выявления саркоцист у группы животных разных видов.

2.2.2. Развитие Sarcocystis cruzi в дефинитивном и промежуточном хозяевах

Результаты постмортального паразитологичеекого обследования II подопытных собак, которых накормили саркоцистозной мышечной тканью сердец крупного рогатого скота, были следующими: у собаки, убитой в первый день после заражения (через 10 часов) гамонты обнаружены в бокаловидных клетках кишечных ворсинок. Мужские гамонты (микрогамонты) имели размер 7,0x5,2 мкм, а женские (макроганонты) - б,7х5,5мкм. Все гамонты были заключены в паразитофорные вакуоли и распологалиеь возле верхушек ворсинок. Женских макрогамонтов было в десятки раз больше (по сравнению с мужскими). Макрогамонты на второй день имели размер 9-15 мкм в диаметре и у них было компактное хроматиновое ядро (при окраске по Романовеному-Гимзе).Количество микрогамет в зрелых микрогамОнтах варьировалось от 3 до 12. Микрогамонты имели овальной формы остаточные тела. Весь процесс гаметогонии, по-видимому, происходит очень быстро, так как у собаки, убитой через три дня после заражения уже встречалось большое количество молодых, с очень тонкой оболочкой, ооцист. То же можно было наблюдать у собаки, убитой через четыре дня после заражения. В цитоплазме только что сформировавшейся ооцисты видны крупные гранулы диаметром до 1,5 мкм. Такие гранулы хорошо видны в свежем материале при световой микроскопии. По-видимому, гаметогония происходит асинхронно, поскольку и ооцисты и гамонты можно находить в одно и то же время.

Дцро неспорулированной ооцисты часто располагалось на периферии ооцисты.

Во все последующие дни после заражения (с 5 по 9-й) происходит спорогония ооцист в клетках етромы кишечных ворсинок (то есть субэпителиально). Особенно четко заметны последовательные деления ядра в ооцисте в период с 5-го по 7-й день. Вначале ядро ооцисты делится на два более мелких ядра, которые располагаются по полосам цитоплазмы. Одновременно с делением ядра происходит "перешнуровка* на две части цитоплазмы ооцисты. После второго ядерного деления образуются два споробласта, каждый с двумя ядрами, расположенными также по полюсам., которые, вскоре сформировав оболочку, становятся спороцистами. Затем в каждой споро-цисте формируется по четыре спорозоита и остаточное тело, состоящее из мелких гранул. Тонкая оболочка зрелых ооцист прогибается, плотно облегая спороцисты, или совсем разрывается и спороцисты оказываются свободными. Именно поэтому, как правило, в фекалиях окончательных хозяев находят свободные спороцисты.

Спороциста (в отличие от ооцисты) имеет довольно толстую оболочку, форма у нее яйцевидная, обычно с несколько упрощенной одной стороной. Средний размер ее 10,8x16,3 мкм. Особенно много спороцист (и ооцист) находится в строме верхушек кишечных ворсинок. Стадий бесполого развития саркоспоридий в кишечной стенке (ворсинках) не выявлено.

С целью выяснения возможности отыскать иных (кроме собаки) дефинитивных хозяев S.cruzi, в ноябре-декабре 1973 года в Мра-морском зверохозяйстве Полевского района Свердловской области четырем песцам, свободным от кокцидиозной инвазии, скормили свежее сырое мясо крупного рогатого скота (сердце, пищеводы, диафрагму), полученное на Свердловском мясокомбинате сразу же после убоя животных. Через 14 дней после заражения их убили. В соско-бах слизистой оболочки тонкого кишечника (главным образом в тощей и подвздошной к иже) обнаружены спороцисты размером 14-16 мкм в длину и 9-10,5 мкм в ширину. Форма спороцист эллипсоидаль^ ная с несколько уплощенной одной стороной. В спороцистах заметны четыре, банановидной формы, спорозоита и гранулярное остаточное тело. Значительно в меньшем количестве встречались зрелые ооцисты с очень тонкой, прогнувшейся наружной оболочкой. Размер ооцист был 18,9-19,8 мкм в длину и 14,8-15,3 мкм в ширину (Вершинин, Леонтьева, 1974). Таким образом, песец был зарегистрирован как дефинитивный хозяин для S.cruzi (8 норок, находившихся в аналогичных условиях и одновременно с песцами, кормившиеся сар-коциетозным мясом крупного рогатого скота - не заразились).

В 1975 году в том же Мраморском хозяйстве шести песцам скормили однократно свежий мясной фарш из мяса Овец (сердце, диафрагма) с микросаркоцистами S.tenella (=S;ovicanis). Этим же фаршем накормили б норок. Двум норкам скормили по 10 макросарко-цист из пищеводов овец. В результате заражение произошло лишь у песцов, но не норок (Вершинин, 1977).

В опыте, целью которого было изучить развитие s.cruzi в организме телят, всем 12-и телятам подопытной группы перорально было дано по 100.000-150.000 спороцист. В ходе опыта через каждые 5 дней (от начала заражения) убивали по одному теленку для паразитологического обследования. Результаты опыта: у теленка, убитого через 5 дней после заражения (ДПЗ), отклонений в состоянии не отмечено, температура тела была нормальной, аппетит хороший. Стадий развития паразита постмортально не выявлено.

У теленка, убитого через 10 ДПЗ, также ничего не обнаружено при паразителогическом обследовании. Клинически животное в период наблюдения за ним было здорово.

У теленка, убитого через 15 ДПЗ, в день его выведения из опыта отмечено повышение температуры тела до 40,2°С, но без какого-либо ухудшения в состоянии (теленок был бодр, аппетит хороший). В эндотелии артериол тонкого кишечника в небольшом количестве обнаружены зрелые меронты первой генерации s.cruzi. Размер меронтов в среднем (п«15) 38,5x22,5 мкм. Количество мерозоитов в меронте - 80-105. Величина мерозоитов - 6,1x1,4 мкм.

У теленка," убитого через 20 ДПЗ, в капиллярах печени, почек, сердца, тонкого кишечника в небольшом количестве найдены незрелые меронты второй генерации. Размер меронтов - 18,5x10,2 мкм с количеством ядер в меронте от 6 до 32 (1Ы2).

У теленка, убитого через 25 ДПЗ, на 22-й день опыта температура тела повысилась до 39,9°С, теленок заметно угнетен, наружные лимфатические узлы несколько увеличены, болезненны при пальпации, аппетит понижен, животное часто лежит. На 23-й, 24-й ДПЗ состояние животного резко ухудшилось. Отмечена почти полная потеря аппетита, шерстный покров стал тусклым, взъерошенным, видимые слизистые оболочки анемичны. Температура тела повысилась до 41,1°С, появился понос, тахикардия (90-100 ударов в минуту), дыхание стало шумным, учащенным (35-40 дыхательных экскурсий в минуту). Появилась шаткость походки, упитанность заметно снизилась. Такое состояние продолжалось и через 25 ДПЗ, то есть до дня убоя животного. При паразитологическом обследовании меронты второй генерации обнаружены в эндотелии капилляров, реже мелких артерий практически всех внутренних органов (сердце, селезенка, почки, лимфатические узлы, печень и др.). Особенно много меронтов обнаружено в клубочках почек. Встречались как зрелые, так и незрелые меронты. Размер и форма меронтов зависела от органа или ткани, где они локализовались. В мышечной ткани меронты всегда были значительно длиннее, чем в других тканях. Следует отметить, что меронты и первой и второй генерации никогда не располагались в пара-зитофорной вакуоли, а лежали непосредственно в цитоплазме инвазированной клетки. Размер зрелых меронтов был 19,0x11,5 мкм (п« 25), а размер мерозоитов, число которых в одном меронте варьировалось от б до 35, составлял 7,6x1,4 мкм.

У телят, убитых через 30, 35, 40 ДОЗ, отмечена аналогичная картина (как клиническая, так и патологоморфологическая). Выражен был резко геморрагический диатез, отечность тканей и органов, увеличение лимфатических узлов.

Незрелые саркоцисты появились у телят, убитых через 40-5070 дней ДПЗ. Саркоцисты с зрелыми мерозоитами и тонкой стенкой цисты появились у телят, убитых через 80, 90 и 100 ДПЗ.

2.2.3. Развитие S.oruzi в культуре ткани при заражении спорозоитами

Через 14 часов после заражения клеток монослоя Ж в большом количестве встречались епорозоиты, один конец которых был всегда заострен. Размеры их (по результатам измерения 20 экземпляров) были 8-II мкм в длину и 2-2,5 мкм в ширину. Отчетливо были заметны ядро и цитоплазма. Через 20 часов оба конца спорозоита округлялись и некоторые из них уже превращались в шаровидные формы, очень похожие на трофозоиты с хорошо заметным шаровидным ядром и цитоплазмой. Диаметр этих шаровидных форм был 7-7,5 мкм (п=5). Как епорозоиты, так и формы, похожие на трофозоитов, локализовались в цитоплазме клетки часто в непосредственной близости от ядра, которое иногда вследствие близости паразита несколько деформировалось.

Через 36, а особенно через 56 часов, находили многочисленные скопления мелких паразитов, в каждом из которых насчитывались десятки особей. Через 72 часа после заражения монослоя преобладали большие скопления паразитов (до 150-200 и более). В одном препарате их находили более десяти. Форма таких скоплений была различная - от шаровидной до овальной. Диаметр шаровидных скоплений достигал 55 мкм; овальной формы скопления были 88x59 мкм; 77x46 мкм, хотя встречались скопления и значительно меньших размеров, в которых насчитывалось от 10-15 до 50 паразитов. При микроскопии под иммерсионным объективом можно было видеть, что паразиты, составлявшие различной величины скопления, не однородны. Среди них встречались особи шаровидной, яйцевидной и удлиненно-грушевидной формы, различной величины, а также формы в виде розеток, состоявшие из трех, четырех и пяти "лепестков". Дальнейшее наблюдение за развитием саркоспоридий было прекращено из-за гибели монослоя.

В контрольных пробирках с монослоем ® ничего подобного не было обнаружено.

Анализируя полученные данные, следует отметить исключительную репродуктивную способность и выраженное цитопатогенное действие эндозоитов Sarcocystis на клетки монослоя. Если через 14 часов после заражения спорозоит внутри клеток был еще неактивен (не изменялись форма, величина), то через 20 часов спорозоит превращался в шаровидной формы трофозоит, а через 36-56 часов встречались уже многочисленные скопления мелких паразитов, состоявшие из десятков особей. Через 72 часа большая часть клеток монослоя гибла (от единичных клеток оставались лишь ядра), а скопления паразитов сферической и овальной формы насчитывали уже до 150-200 и более паразитов. Из-за гибели монослоя дальнейшие наблюдения были прекращены.

Таким образом, интенсивное развитие паразитов уже через 72 часа привело к гибели клеток монослоя. Накопленные к настоящему времени факты относительно типов агамной репродукции эймериидных кокцидий invivo u in vitro позволяют сравнить эти наши наблюдения с данными других авторов по развитию ряда близко родственных организмов:

Как известно, у Toxoplasma gondii вне зависимости от того, что вносится в культуру клеток - эндозоиты или епорозоиты -репродукция паразитов происходит по типу эндодиогении (а также эндополигении). После ряда повторных делений паразитов образуются большие скопления токсоплазм, расположенных беспорядочно или в форме розеток (Акиншина, 1963, 1964).

Различные по величине скопления паразитов в нашем опыте (особенно шаровидной и овальной формы), по-видимому, являются ме-ронтами первой генерации S.cruzi. В пользу такого предположения можно привести следующие доводы:

1. Диаметр шаровидных скоплений достигал 55 мкм, а овальных

- 88x59 мкм; 77x46 мкм. В опыте

§ейера ( Payer, 1977), а также в нашем опыте шизонты S.cruzi первой генерации имели аналогичные размеры и насчитывали до 100 и более мерозоитов.

2. Наличие в скоплениях, наблюдавшихся нами, особей шаровидной, яйцевидной и удлиненно-грушевидной формы, а также паразитов в виде розеток, состоявших из трех, четырех, пяти "лепестков" свидетельствует о том, что репродукция паразитов наряду с шизогонией осуществляется, по-видимому, и путем эндополигении. При электронной микроскопии установлено, что в организме телят одновременно с шизогонией часть мерозоитов s.cruzi делилась по типу эндодиогении (Mehlhorn, Heydorn, 1978) и эндополигении.

Репродукция по типу эндодиогении установлена в культурах клеток у Isospora canis (Payer, M&hrt, 1972), у кокцидий кошек

- I.rivolta (Payer,1972). По типу эвдодиогении бесполое размножение может происходить в кишечнике собаки у I.canis (Hilaili et al, 1979), у I.felis (Ferguson et al, 1980j Daly, Markus, 1981). Шолтизек ( Scholtyseck, 1973) считает, что шизогония у кокцидий происходит в два этапа. На первом этапе в результате митотического деления ядра паразита формируется многоядерный ши~ зонт, который затем дает начало одноядерным цитомерам, на втором этапе ядро каждого цитомера делится по типу эндодиогении и это ведет к образованию двух дочерних клеток (мерозоитов). По-видимому, нечто подобное наблюдали и мы в нашем опыте культивирования S.cruzi.

Следует отметить, что in vivo, то есть в организме экспериментально инвазированных спороцистами s.cruzi телят, шизонты первой генерации появляются через 15-16 дней в эндотелии мелких и средних артерий тонкого и толстого отдела кишечника, почках, поджелудочной железы, головном мозге через 15-16 дней после заражения (Payer, 1977), а у телят, зараженных спороцистами S. cruzi от койота - уже на 7-й день после заражения в мезентери-альных лимфоузлах (Dubey, 1982).

Появление меронтов первой генерации уже через 36-72 часа после инокуляции спорозоитов S.cruzi в монослой клеток следует объяснять, по-видимому, необычной средой обитания, поскольку паразиты не встречают защитного иммуногенного противодействия, как это имеет место in vivo.

Способность дальнейшего развития спорозоитов S.cruzi в культуре ткани фибробластов куриных эмбрионов (а не в клетках эндотелия кровеносных сосудов крупного рогатого скота - промежуточного хозяина паразита) еще более сближает Sareocystis с классическими эймериидными кокцидиями, спорозоиты и шизонты которых in vitro также могут развиваться в клетках, в которых в естественных условиях паразиты не локализуются. Надо полагать, что если для получения клеточного монослоя использовать клетки эмбриона крупного рогатого скота, то результативность культивирования спорозоитов S.cruzi будет выше.

2.2.4. Развитие Sarcocystis gigantea в культурах тканей при заражении цистными мерозоитами

Через 18 часов после заражения в культурах клеток Ш были видны многочисленные цистозоиты (мерозоиты), внедрившиеся в цитоплазму клеток. Размер цистозоитов был 9-12 х 2,25 мкм. Большинство паразитов локализовалось в непосредственной близости к ядрам клеток куриных фиброблаотов. Через 21-24 часа после заражения размер отдельных цистозоитов был меньше (5-7 х 1,5-2 мкм), края округлые. Такие паразиты (трофозоиты) были заключены в паразитофор-ную вакуоль и располагались возле самого ядра, в ядре или на ядре зараженной клетки. Встречались и совершенно округлившиеся зоиты. Аналогичная картина наблюдалась и в монослое iO.

Через 36 часов после заражения встречались паразиты овальной или шаровидной формы с признаками деления ядра, которые локализовались в цитоплазме клеток $0 обычно возле ядер и были окружены паразитофорной вакуолью. В это же время встречались в значительном количестве паразиты лимоновидной формы с несколько заостренными концами и крупным, преломляющим свет шаровидным образованием в центре. Длина их была 7-8 мкм, ширина - 3,5-5 мкм. В одной клетке можно было видеть I, 2 и 3 таких паразита. Локализовались они обычно возле ядра клетки. Наряду с вышеописанными, встречались паразиты эллипсоидальной формы, а также округло -овальные образования с нечетко просматривавшимися гранулами. Размер этих образований (п*30) был в среднем 10-12 х 8-10 мкм. Они всегда были заключены внутри паразитофорной вакуоли и, находясь в тесной близости с ядром клетки хозяина, приводили к его деформации.

Через 48 часов после заражения вблизи ядер клеток

§0 обнаруживались многоядерные образования шаровидной форм», имеющие диаметр 7-9 мкм. Такие многоядерные паразиты также располагались в^три паразитофорной вакуоли.

Через 54-60 часов после заражения в клетках

§0 обнаруживались те же формы, что и через 36 и 48 часов. Однако к этому времени наиболее многочисленными были шаровидные цистообразные стадии диаметром 14-15 мкм; их цитоплазма содержала отчетливо выраженные, одинаковые по размеру гранулы. Эти стадии также располагались в тесном контакте с ядром клетки хозяина.

К 72-му часу монослои Ш и Ж разрушались, что препятствовало дальнейшим наблюдениям. В контрольных пробирках паразиты обнаружены не были.

Проведенное исследование показало, что при культивировании S.gigantea монослой фибробластов эмбрионов овцы был более подходящей средой, чем монослой фибробластов куриного эмбриона.

Стадии бесполого развития (шизонты) s.gigantea обнаружены не были, и это объясняет столь быстрое появление стадий половой фазы цикла. Макрогаметы появлялись уже через 36 часов после заражения и достигали в среднем 10-12 мкм. Микрогаметоциты были видны отчетливо к 48 часу и достигали в диаметре 7-9 мкм; среднее количество дцер на микрогаметоцит составляло 6-10.

Сравнение развития в культуре тканей Sarcocystis sp. от вороньего дрозда ( Payer, 1970, 1972) с развитием S.gigantea говорит о значительном сходстве в характере расположения и взаимоотношения с клетками хозяина эндогенных стадий сравниваемых объектов. Интересно отметить, что эндогенные стадии многих кокцидий, включая виды Eimeria, Isospora, Toxoplasma, Besnoitia, Sarcocystis, имеют тенденцию развиваться в тесном контакте с ядром зараженной клетки.

2.2.5. Натологоанатомические изменения при остром экспериментальном саркоцистозе телят

Ниже приведены результаты опыта, проведенного в июне 1980г. в учхозе "Уралец" Свердловского сельскохозяйственного института.

Двум двухмесячным телятам перорально было дано соответственно 3 и 5 млн. спороцист S.bovicanis каждому. Третий теленок такого же возраста заражению не подвергался и служил контролем, на 25-й день после заражения подопытные" телята были вынуждено убиты из-за крайне тяжелого состояния. У подопытных животных наблюдали сильную слабость, исхудание, потерю аппетита, угнетение, бледность, конъюнктивиты, лихорадку (у одного теленка температура тела была 41,5°С, у другого - 41,б°С), тахикардию,учащение дыхания, одышку (выдох сопровождался стоном), скрежет зубами, серозно-слизистые выделения из глаз (у одного теленка), периодическое подергивание соматических мышц, понос, шаткость походки (животное передвигалось с трудом), повышенную жажду, взъерошенность шерстяного покрова.

При визуальном патологоанатомическом исследовании обнаружено сильное увеличение всех наружных и внутренних лимфатических узлов. Они были отечны с многочисленными точечными кровоизлияниями. В грудной и брюшной полостях находилась в небольшом количестве желтого цвета прозрачная жидкость. На серозных покровах сычуга, преджелудочков и особенно тонкого и толстого кишечника - обширные кровоизлияния (на многих участках кишечник, казалось, был залит кровью). Кровоизлияния находили в мочевом пузыре (обширные, сплошные), почках, поджелудочной железе, надпочечниках (точечные и пятнистые), эндокарде (разлитые) и эпикарде, легких (точечные). Мышцы были темно-коричневого цвета с мраморным рисунком. Результаты гистологического исследования отдельных органов и тканей приведены ниже.

СЕРДЦЕ. Мышечные волокна пропитаны эритроцитами и гемоси-дерином. Цйет их при окраске гематоксилин-эозином коричневатый. На участках с лизированными мышечными волокнами - полиморфно-клеточная инфильтрация (мононуклеарные клетки, клетки РЭС, лимфоциты) . Под эндокардом - множественные геморрагические инфаркты. Мышечная ткань в этих очагах полностью некротизирована и пропитана кровью. В патологический процесс вовлечены и волокна Пуркинье. Оболочка их и большая часть клеток лизированы. В других волокнах, лежащих более глубоко, наблюдаются регенерацион-ные процессы в виде появления четырехъядерных клеток, расположен ных, как правило, в центре волокна. В межуточной соединительной ткани наблюдается тромбоз кровеносных сосудов малого и крупного калибра. Эндотелий сосудов в состоянии активной пролиферации. Шизонты паразитов найдены среди клеточных элементов в участках лимфоидной инфильтрации. Здесь же встречались единичные плазматические клетки с интенсивно окрашенной цитоплазмой. Почти во всех гистосрезах отмечается диапедез эритроцитов.

СКЕЛЕТНЫЕ МЫШЦЫ, икрашенн неравномерно, что типично для зернистой дистрофии мышечных волокон. В межмышечных пространствах обильная полиморфноклеточная инфильтрация, представленная в основном клетками РЭС, макрофагами и клетками типа эпителиоид-ных. Поперечная исчерченность выражена не во всех волокнах.Между волокнами видны ряды эритроцитов. Клетки эндотелия кровеносних сосудов в состоянии активной пролиферации.

ЛЕГКИЕ. Кровенаполнены с интерстициальными геморрагиями междольчатая ткань и альвеолы отечны. Клеточная инфильтрация представлена в основном лимфоцитами и макрофагами.

МОЗГ. Очаговые кровоизлияния разной величины в обоих слоях мозга. Перицеллюлярный отек и некроз единичных нервных клеток с превращением их в клетки-тени. Наблюдаются периваскулярные муфточки из клеток глии и клеток РЭС: в белом веществе обнаруживаются рассеянные глиальные узелки, некоторые из них находятся в непосредственной близости с кровоизилияниями.

ЛИМФАТИЧЕСКИЕ УЗДЫ, (мезентериальные и медиастинальные). Центральные синусы резко расширены и затоплены полиморфномлеточ-ным инфильтратом, состоящим в основном из гиетиоцитов, незрелых плазматических клеток (плазмобластов), лимфобластов, клеток ЕЭС. В центральных синусах народу с клеточной инфильтрацией обнаруживаются шизонты. Здесь же наблюдается диапедез эритроцитов и их распад. Лимфатические сосуды расширены, эндотелий их в состоянии активной пролиферации. Периваскулярно появляются фибробласты и фиброциты, которые дают основу роста соединительной ткани. Кроме этого, обнаруживается большое количество эозинофилов, причем некоторые из них в состоянии дегрануляции (идет процесс освобождения биологически активных веществ: гистаминаза и др.). Соединительнотканные элементы перегородок и ворот лимфатических узлов в состоянии активного размножения. Некоторые кровеносные сосуды, расположенные в области ворот, полностью облитерированы размножающимися клетками эндотелия.

СЕЛЕЗЕНКА. В центральных артериях - активная пролиферация эндотелия. Красная пульпа обильно инфильтрирована эритроцитами, незрелыми клетками лимфоидного ряда. В трабекулярных сосудах наблюдается набухание стенки и периваскулярный эритродиапедез и плаз-моррагии. Соединительнотканные клетки трабекул в состоянии активного размножения и представлены в основном властными формами.

ПЕЧЕНЬ. В междольковой соединительной ткани и внутри долек - инфильтраты из лимфоидных клеток разной степени зрелости, клеток ЮС и единичных плазматических. Пространства Диссе расширены, в них также обнаружен клеточный инфильтрат и единичные шизонты саркоспоридий. В некоторых клеточных очагах наблюдаются кровоизлияния. Центральные вены запустевшие, капилляры обескровлены. Просвет артерий закрыт, клеточные элементы стенок в состоянии активной пролиферации.

ПОЧКИ. Рисунок почки не везде выражен четко. Встречаются довольно обширные участки, в которых вся почечная ткань обильно инфильтрирована полиморфноклеточным инфильтратом с преобладанием молодых форм лимфоидных клеток. Среди диффузной инфильтрации встречаются очаги величиной с почечный клубочек, представленные клетками РЭС, фибробластами и крупными мононуклеарами. Просветы канальцев сужены, заполнены слабо оксифильным содержимым. Границы клеток эпителия выражены нечетко. Эндотелий капиллярной сети мозгового слоя в состоянии активной пролиферации. В периваскуляр-ной зоне дуговых артерий - инфильтрат преимущественно из клеток РЭС, фибробластов и лимфоидных клеток разной степени зрелости. Встречаются также единичные лейкоциты.

ТОНКИЙ ОТДЕЛ КИШЕЧНИКА. Слизистая оболочка сильно инфильтрирована незрелыми лимфоидными клетками, эозинофилами, клетками типа эпителиоидных, отдельными плазматическими клетками. В слизистой отмечается геморрагическое пропитывание и десквамация эпителия. Бокаловидные клетки редуцированы. Массовые кровоизлияния наблюдаются в обоих слоях мышечной оболочки. Вокруг нервных сплетений - лимфоидноклеточная инфильтрация. Очень сильно выражено диффузное геморрагическое пропитывание серозной оболочки.

ТОЛСТЫЙ ОТШ КИШЕЧНИКА. Массовые кровоизилияния в мышечной оболочке. Диффузное геморрагическое пропитывание серозной и слизистой оболочек. В мышечной соединительной ткани активная мак-рофагальная реакция с наличием клеток РЭС, плазмобластов, лимфо-идных клеток разной степени зрелости. В области крипт обильная полиморфноклеточная инфильтрация с преобладанием эозинофилов, лимфоцитов и клеток РЭС.

Следует отметить, что диффузная инфильтрация эозинофилами, лимфоцитами, клетками РЭС, плазматическими клетками и активная пролиферация эндотелия сосудов отмечена практически во всех внутренних органах обоих телят.

Во всех исследованных органах и тканях подопытных телят при гистологическом исследовании обнаружены шизонты саркоспоридий. Тяжесть патологоанатомических изменений у телят, подвергнутых заражению, была одинакова, несмотря на то, что дозы спороцист были разные (3 и 5 млн., соответственно). Контрольный теленок, убитый одновременно с телятами, подвергавшимися заражению, был здоров в течение всего опыта. При патологоанатомическом вскрытии никаких изменений во внутренних фганах и тканях не выявлено.

Таким образом, в острую фазу болезни, совпадающую с шизогонией паразитов, в организме крупного рогатого скота при заражении спороцистами S.bovicanis во всех паренхиматозных органах развиваются сильнейшие воспалительные процессы пролифератив-ного характера с резко выраженными нарушениями кровообращения. Из-за повышенной проницаемости стенок кровеносных сосудов и обширных массовых кровоизлияний развивается анемия. Снижение количества эритроцитов и содержания гемоглобина приводит к кислородной недостаточности в организме. Чтобы компенсировать дефицит кислорода, усиливается работа сердца, легких (у животных отмечают тахикардию, учащенное дыхание). Клеточная инфильтрация участков сердечной мышцы с лизированными мышечными волокнами, многочисленные геморрагические инфаркты с некрозом и пропитыванием кровью мышечных волокон и другие нарушения гистологической структуры миокарда являются причиной тяжелых функциональных нарушений в работе этого органа. В патологический процесс вовлекаются и волокна Пуркинье, что приводит к нарушению ритма сердечных сокращений. Эластичность и сократимость мышечных волокон понижается, развивается острая сердечная недостаточность. Геморрагическое воспаление кишечника ведет к расстройству пищеварения. Дегенеративно-воспалительные изменения в скелетной мускулатуре вызывают затруднение в передвижении животных. Кровоизлияния в головном мозге, по-видимо му, являются причиной различных нервных проявлений. Нарушаются также функции жизненно важных органов. Анализируя клинические и постмортальные наблюдения при остром экспериментальном еаркоциетозе крупного рогатого скота, можно предполагать, что в период шизогонии нардцу с токсическим и механическим воздействием сар-коспоридий патологоморфологические изменения развиваются по типу аллергических реакций, вызванных сенсибилизацией организма продуктами обмена паразитов. Об инвазионной аллергизации организма свидетельствуют пролиферативные процессы в ретикулоэндотелиаль-ной системе и лимфоидной ткани, обусловленные, по-видимому, раздражением специфическими антигенами. За аллергическую природу постмортальных изменений говорит набухание, гиперплазия и инфильтрация тканей эозинофилами, клетками РЭС, пролиферация эндотелия кровеносных сосудов мышц, печени, почек, мозга и других органов.

Механизм действия аллергических реакций в сенсибилизированном организме объясняется, как известно, высвобождением поврежденными клетками (при контакте в них антигена с антителом) биологически активных веществ: гистамина, ацетилхолина, брадикинина, гепарина и других. Гистамин повышает клеточную проницаемость, расширяет капилляры, увеличивает проницаемость стенок сосудов,повышает сократимость гладкой мускулатуры. Аналогично гистамину действие ацетилхолина и брадикинина. Воздействуя на находящиеся поблизости чувствительные к ним клетки, гистаминоподобные вещества вызывают аллергический ответ организма. Поскольку известно, что слизистая оболочка желудочно-кишечного тракта содержит много гистамина, то вполне допустимо, что обширные диффузные кровоизлияния на всем протяжении желудочно-кишечного тракта именно с этим и связаны. Подобное объяснение, по-видимому, можно дать и различным нарушениям в состоянии кожи при остром спонтанном саркоцистозе (кровоизлияния в коже у поросят, ломкая шерсть у овец, шелушение кожи и выпадение волос на хвосте и конечностях у крупного рогатого скота).

Как установил Фейер (1977), при экспериментальном заражении телят спороцистами S.bovicanis шизонты первой генерации появляются через 15-16 дней после заражения в эндотелии мелких и средних артерий и толстом отделе кишечника, включая слепую кишку, в почках, поджелудочной железе, головном мозге. Шизонты второй генерации появляются через 24-33 дня после заражения и локализуются в эндотелиальных клетках кровеносных капилляров почти каждого органа телят. Средняя величина шизонтов второй генерации - 9,1 х 14,8 мкм, а среднее количество ядер в них - 27.

При еаркоциетозе организм сенсибилизируется, по-видимому, в период бесполого размножения паразита под воздействием шизонтов, мерозоитов и продуктов их обмена. Если животные впервые встречаются с саркоцистозной инвазией, то шизонты первой генерации и продукты их жизнедеятельности еще не вызывают аллергических реакций, но сенсибилизируют организм. На образование шизонтов второй генерации сенсибилизированный организм отвечает уже аллергическими реакциями. Характер этих реакций определяется видом Sarcocystis, дозой инвазионного начала, иммунологическим и общим состоянием животного. Если животное уже встречалось с саркоцистозной инвазией, то иммунный аллергический ответ, обусловленный реактивной перестройкой организма от предшествовавшего заражения, проявляется и на образование шизонтов первой генерации,

В нашем опыте все три теленка были выращены и содержались в условиях, исключавших контакт с собаками - распространителями инвазионного начала. Учитывая это обстоятельство, мы считаем, что причиной тяжелых воспалительных процессов у телят явились шизонты S.bovicajiis второй генерации, вызвавшие аллергическое воспаление в различных органах и тканях организма, сенсибилизрван-ного шизонтами первой генерации.

2.2.6. Энтеральный еаркоцистоз собак и других окончательных хозяев саркоспоридий

При энтеральном еаркоциетозе у окончательных хозяев (кошка, собака, другие плотоядные, человек) случаи диареи, по-видимому, могут быть объяснены следующим. При гистологическом исследовании тонкого кишечника кошек и собак, которых интенсивно инвазировали еаркоспоридиями, на участках кишечника, где локализовались различные стадии саркоспоридий, отмечали выраженную гиперемию в толще слизистой оболочки и особенно ворсинок. Соединительнотканная основа ворсинок,преимущественно в области верхушек, была разрыхлена, а эпителий десквамирован. Ворсинки часто были полностью обнажены, то есть не имели эпителиального слоя. Подобные нарушения при интенсивной инвазии, очевидно, могут быть и у человека. Известно, что эпителиальные клетки слизистой оболочки тонкого кишечника (энтероциты) с их микроворсинками и гли-кокаликсом играют особо важную роль в пристеночном пищеварении у высших животных и человека, синтезируя и, кроме того, адсорбируя из полости тонкой кишки ферменты, осуществляющие заключительные этапы гидролиза белков, жиров и углеводов, а также обеспечивающие стерильность процесса всасывания. Особенно интенсивно пристеночное пищеварение происходит в верхних отделах тощей кишки, где и локализуется максимальное количество эндогенных форм саркоспоридий у еооак. Десквамация энтероцитов ворсинок на определенных участках тонкого кишечника при интенсивной инвазии может, очевидно, нарушать внеклеточное, внутриклеточное и мембранное пищеварение. Через оголенные ворсинки и кровь могут проникать энтерококки, кишечные палочки, дрожжевые грибки, другие микроорганизмы и вызывать интоксикацию. Диарея, тошнота, слабость у человека при энтеральном саркоцистозе, возможно, связаны с описанными нарушениями.

Преждевременная десквамация эпителия тонкого кишечника со всеми вытекающими последствиями может происходить не только в результате воздействия продуктов обмена паразитов, но и оттого,что масса спороцист и ооцист давит на сосуды стромы кишечных ворсинок и это нарушает трофику эпителия.

2.2.7. Возрастная восприимчивость собак к саркоцистозной инвазии, а также супер- и реинвазированию i результате опытов, проведенных на 36 собаках (4 подопытных группы) в возрасте от 2 месяцев до 10 лет, установлено следующее :

1. После однократного скармливания сырого свежего мяса крупного рогатого скота (сердце, диафрагма, пищеводы) с интенсивной саркоцистозной инвазией собакам, свободным от кокцидий, все животные, независимо от возраста, через 9-14 дней стали выделять с фекалиями ооцисты и спороцисты саркоспоридий. Препатентный период у собак в возрасте 5, 7 и 10 составил соответственно 12,13 и 14 дней. У собак в возрасте до года препатентный период исчислялся 9-10 днями. Начиная с 3-4 дня патентного периода, собаки выделяли только спорулированные спороцисты. Спороцисты, на протяжении патентного периода, выделялись не регулярно; у некоторых собак в отдельные дни выделения спороцист не наблюдали, а затем оно продолжалось снова. Общее количество дней патентного периода,в течение которых происходило выделение спороцист, варьировало от 7 до 36. Длительнее выделяли спороцисты собаки в возрасте до года. Максимальный патентный период (72 дня) отмечен у щенка в возрасте 3,5 месяца.

2. Многократное (З-б раз) реинвазирование собак, с интервалом в две недели после прекращения выделения спороцист и новым инвазированием приводило к удлинению (на 2-5 дней) препатентного и укорочению в 3-4 раза патентного периодов с появлением в значительных количествах аберрантных ооцист и спороцист.

3. При паразитологическом обследовании тонкого кишечника двух собак, выделявших спороцисты s.cruzi, и повторно зараженных еаркоцистозным мясом крупного рогатого скота (сердце, диафрагма) через 4 и 6 дней соответственно после установления факта выделения собаками спороцист в результате первого заражения, установлено, что наряду со спорулированными спороцистами (в большом количестве) встречались и незрелые ооцисты саркоспоридий на стадии споронта и двух снороблаетов, что подтверждает возможность суперинвазирования собак.

2.2.8. Цикл развития Cystoisospora felis (Wenyon, 1923) Prenkel,

Описание ооцист

На основании сопоставления формы, величины и строения 300 экземпляров свежевыделенных и находившихся в разных стадиях спорогонии ооцист от кошек разных возрастов, подвергавшихся искусственному заражению, мы отметили следующее: форма ооцист яйцевидная, один из полюсов обычно несколько вытянут, хотя иногда встречаются экземпляры, у которых эта своеобразная "вытянутость" одного из полюсов сглажена. Оболочка ооцист гладкая, бесцветная, однослойная, толщиной 1,4-1,5 мкм.

Длина ооцист варьировала в пределах 36-48 мкм (в среднем 41 мкм), ширина от 30 до 36 мкм (в среднем 33 мкм). Изредка попадались ооцисты, которые из-за атипичного положения их имели шаровидную форму, йикропиле нет.

К моменту выхода ооцист во внешнюю среду цитоплазма зиготы уже отслаивается от оболочки и формирует протоплазменный шар (споронт)., который чаще располагается в центре ооцисты, незначительно касаясь ее боковых стенок. Диаметр его равен 27-29 мкм. Вскоре споронт начинает сжиматься и постепенно отделяется вначачале от одной, а затем и от другой етенок ооцисты. Полностью отделившийся епоронт располагается в центре ооцисты, образуя свободное пространство между ее етенками. Диаметр его в это время составляет 21-25 мкм. Постепенно епоронт начинает вытягиваться и появляются первые признаки деления - маленькие бороздки по бокам, ини постепенно углубляются и в результате епоронт делится на два спороблаета шаровидной формы диаметром 16-19 мкм. Ми полярной гранулы, ни остаточного тела ооцисты мы ни разу не наблюдали. Затем вокруг спороблаетов появляется оболочка, и образуется споро-циста. Норма спороцисты чаще еферичная или несколько овальная, размер ее 16-18,5 мкм в диаметре или 17-19 мкм в длину и 16-18мкм в ширину. Стенка спороцисты гладкая, бесцветная, толщиной 0,5мкм. Штидовекого тельца нет. Расположение спороцист в ооцисте неодинаково: иногда они располагаются посередине параллельно продольной оси ооцист, иногда сдвинуты в сторону от срединной линии, ибразо-вание спорозоитов начинается с разрыхления протоплазмы в епороцие-те и появления неоднородных по цвету и величине участков (то более светлых, то более темных), которые постепенно становятся округлыми и, вытягиваясь, приобретают червеобразную форму. Процесс формирования спорозоитов в енороцистах происходит не всегда равномерно: в одной из спороцист развитие может происходить несколько быстрее. Расположение спорозоитов в спороцисте может быть различным. Мосле образования спорозоитов в спороцисте всегда имеется большое остаточное тело шаровидной формы диаметром 11-12 мкм. ичень часто в спороцисте уже образовавшиеся епорозоиты располагаются так, что видна бывает лишь часть спорозоитов в виде светлых шариков (одного-двух, трех или четырех), тесно прилегающих один к другому и к свободному краю остаточного тела, а остальная часть спорозоитов из-за остаточного тела не видна. Полностью формирование четырех спорозоитов в обеих спороцистах у отдельных ооцист завершалось за 48-50 часов при температуре 22°С. цри оптимальных условиях она может завершиться за 12 часов.

Эндогенныеадииfells

Дефинитивный хозяин - коша, лев, тигр, рысь и, по-видимому, другие кошачьи; факультативные промежуточные хозяева (точнее реки,баки, цыплята, телята, после проглатыванияорулированных ооцист котятами в эпителиальных клетках тонкого кишечника происходит бесполое размножение паразитаформированием шизон?ов трех генераций. Зрелые шизонты первой генерации величиной 23x16 мкм истоящие из 4-16 мерозоитов, появляются на 3-4 день после заражения. Величина мерозоитов в них - 13 х 4 мкм. Зрелые шизонты второй генерации появлялись на 5-й день после заражения и измерялись веднем 20 х 15 мкм. Зрелые шизонты третьей генерации появлялись на 6, 7-й день после заражения. Размер мерозоитов третьей генерации веднем 7x2 мкм. Мерогоння уfelis происходит по типу шизогонии и эндодиогении. Половыеадии (макрогаметы и микмикрогаметоциты имеют размер от 46 х 26 мкм до 52,4-54,8x39,4-42,6 мкм, а макрогаметы - 18-10 мкм до 18-24 х 14-18 мкм. Препа-тентннй период после проглатывания зрелых ооцист составляет обычно 7-8 дней, а патентный - 10-12 дней. Внекишечные стадии (гипно-зоиты) в организме кошек обнаруживать в гистосрезах из внутренних органов очень трудно. Лучше с целью выявления гипнозоитов из тканей кошек или резервуарных хозяев прибегнуть к перевариванию исследуемого материала в искусственном желудочном соке. при экспериментальном заражении - мыши, крысы, хомяч появляются с 6, 7-го дня после заражения. Зрелые

Цикл развития Cystoisospora ohioensis (Dubey, 1975) Frenkel,

Спорулированные ооцисты эллипсоидной формы, величиной 19-27 х 18-23 мкм. иболочка ооцисты гладкая, без микропиле. Полярной гранулы и остаточного тела ооцисты нет. Вороцистах нет шти-девского тельца, окончательный хозяин -бака. Резервуарные хозяева - мышь, кошка и, по-видимому, другие животные. Мерогония паразита происходит в эпителиальных клетках ворсинок тонкого кишечника. На второй день после заражения в энтероцитах тощей кишки и паразитофорных вакуолях находят по два мерозоита. На третий день появляются одноядерные и многоядерные мерозоиты и шизонты,держащие зрелых мерозоитов и этот процесс бесполого размножения длится по пятого дня. Два типа шизонтов обнаружены: первыймерозоитами 11x3 мкм, а второй -мерозоитами размером 7,5x1,5 мкм. В одной паразитофорной вакуоли могут находиться одноядерные, двуядерные и многоядерные мерозоиты. На четвертый день после заражения в эпителиальных клетках тонкого кишечника,епой и ободочной кишок появляются гаметоциты. ооцисты в фекалиях появляются на Ь-7 день иорулируют в течение однихток. Если внутренние органы резервуарного хозяинагипнозоитамиohioensis будутеденыбакой, то ооцисты у последней выделяются также на 6-й день. Бесполое размножение паразита (мерогония) происходит вначале по типу эндодиогении, затем - шизогонии. Патентный период - 7-10 дней.

Клинически выраженный цистоизоспороз в основном регистрируется лишь у котят и щенят первых месяцев жизни. Чем моложе животное, тем серьезнее и продолжительнее болезнь. Перманентное проглатывание небольших количеств зрелых ооцист создает иммунитет к суперинвазии, одномоментное проглатывание большой дозы ооцист ведет к разрушению и дееквамации эпителия, атрофии и некрозу крипт в тонком и частично толстом кишечнике (каждый шизонт и гаметоцит разрушает клетку хозяина). У больших животных отмечают угнетение, жидкие водянистые фекалии, анорексию, анемию, исхудание. Изменение водного баланса приводит к увеличению вязкости крови и нарушению работы сердца. При копроскопичееком обследовании еооак следует иметь в виду, что ооцисты C.burrowsi, C.ohioensis u I. neorivolta невозможно дифференцировать ни до, ни после спорогонии, так как они идентичны, иоцисты С.felis u C.c&nis соответственно от кошек и собак дифференцируются легко, так как они значительно крупнее ооцист других кокцидий кошек и собак. исновные виды цистоизоепор кошек и собак

Дефини- I Ня^вямир ! Размеры ! Резервуарный ! Препативный ! "JSJJJJJr ! ооцист, ! хозяин при экс-! тентный хозяин ! ьоаиудшели | j периментальном ! период,

М1Ш 1 заражении ! дни

Кошка

Кошка Собака

Собака Собака

Собака

Cystoisospora 41 х 33 Мышевидные гры-felis (36-48x30- зунн, собака,

-36) крупный рогатый скот, цыплята

С. rivoits. С. салis

C.oMoensis С. burrowsi

25 х 20 (21-28x18-23)

38 х 30 Мышевидные гры-(34-42х зуны, к ошк а х 28-32)

24 х 21 (19-27x18-23) те же Мышевидные грызуны (крысы ,мыши )

9- II

С. neorivolta те же

J мшей цистопбдобные стадии встречаются преимущественно в мезентериальных лимфатических узлах, особенно в лимфоидных фолликулах и реже - в мозговом веществе. Гипнозоиты C.felis в мазках - отпечатках, окрашенных по методу Романовского-Гимзе, измерялись 7-10 х 6,28 мкм, а гипнозоиты, заключенные в своеобразную капсулу (на гистосрезах), измерялись 13-26 х 6-14 мкм, а вместе с "Капсулой" - 25-36 х 7-14 мкм.

Гипнозоиты в резервуарных хозяевах сохраняются многие месяцы. При дифференциации ооцист' Cystoisospora необходимо учитывать (после спорогонии) возможность обнаружения аберрантных форм (И.й.Вершинин, 1982).

Патологоанатомические изменения. При патологоанатомическом вскрытии котят и щенков, подвергавшихся экспериментальному заражению большими дозами ооцист C.felis и С.ohioensis соответственно, наблюдали катаральное или геморрагическое воспаление тонкого отдела кишечника (И.й.Вершинин, 1972).

J.P. Dubey (1978) отмечал десквамацию эпителия, атрофию и некроз ворсинок, крипт в кишечнике у щенков, убитых через 96 часов после заражения ооцистами С.ohioensis.

2.2.9. Эндогенное и экзогенное развитие токсоплазмы

Намечено было изучить эндогенные формы токсоплазм в кишечнике кошек после заражения их цистами токеоплазм (маловирулентный штамм) из мозга белых мышей, а также в результате заражения спору лированнымн ооцистами.

Трем котятам (первая группа) был дан перорально мозг белых мышей с цистами токсоплазм, трем котятам (вторая группа) - спо-рулированные ооцисты токсоплазм (по 10.000 ооцист каждому) и трех котят не заражали (контроль). Кормили всех животных хлебом и молоком. Котят первой группы убили через 2, 5 и 7 дней, котят второй группы - через 10, 15 и 25 дней после заражения. Контрольных котят убили через 25 дней от начала опыта. Исследовали свежие соскобы слизистой оболочки, а также мазки-отпечатки, окрашенные по Романовеному-Гимзе.

В результате установлено, что заражение произошло у всех котят первой группы и лишь у одного котенка (убитого через 15 дней) - во второй. У всех заразившихся котят в тонком кишечнике и особенно в подвздошной кишке найдены в большом количестве макрогаметы и в незначительном количестве - микрогаметоциты. Средний размер зрелых макрогамет был 9 х 11,0 мкм, а микрогаметоци-тов - 8,5 х 6,5 мкм. иоцисты токсоплазм обнаружены лишь удеух котят первой группы, убитых через 5 и 7 дней после заражения. Незрелые ооцисты шаровидной или полушаровидной формы были величиной 12,1 х 10,3 мкм. После споруляции ооцисты в среднем имели размер 12,4 х II мкм, а спороцисты в них - 8,4 х 6 мкм. В каждой спороцисте было по 4 спорозоита (размер которых после эксциети-рования был в среднем 7,5 х 1,8 мкм) и остаточное тело, состоявшее из гранул, которые вначале располагались компактно, а позднее "рассеивались". Часть ооцист не спорулировала. Цитоплазма их состояла из многочисленных глыбок. Подобные дегенеративные изменения цитоплазмы ооцисты часто встречаются у различных изоспор кошек и собак. В тонком кишечнике заразившихся котят наряду с половыми формами обнаружены шизонты токсоплазм различной величины с тем или иным количеством мерозоитов. У котенка первой группы, убитого через 7 дней после заражения, найдены шизонты, меро-зоиты в которых походили на гроздья бананов. Шизонты имели размер: 8,8-11 мкм в длину и 6,6-8,7 мкм в ширину. В каждом шизонте было но 4-8 мерозоитов. Свободные мерозоиты были 6,6-7,7 мкм в длину и 1,76-2,2 мкм в ширину.

У котят контрольной группы паразитов не обнаружено.

2.3. Развитие Toxoplasma gondii в культуре ткани при заражений спорозоитами

Первые препараты с зафиксированным развитием спорозоитов в культуре клеток были приготовлены через 10-12 чаеов после заражения монослоя, иколо половины клеток (Ш£) в таких препаратах были инвазированы спорозоитами. Паразит находился в клетке с ядром, иногда его деформируя. Из числа инвазированных клеток около Щ> были поражены сразу двумя спорозоитами. Продолжение развития паразита отмечали в препаратах (IK), зафиксированных через 19-20 часов. Вокруг внедрившихся спорозоитов в клетках имелась пара-зитофорная вакуоль. Её размеры составляли 4,5-6,0 (6,4) х 4,66,0 (5,0) мкм. Пораженные клетки находились в жизнеспособном состоянии, но не размножались. Внедрившиеся епорозоиты имели размеры 2,3-3,1 (2,V) х 2,0-2,6 (1,8) мкм. Цитоплазма паразита окрашивалась в розовый цвет, а ядро - в интенсивно синий.

К 40-му часу в препаратах

§■£) наблюдали скопления паразитов овальной или овальновытянутой формы. Мх размеры были: 16,021,1 (18,5) х 10,6-16,1 (13,8) мкм. В каждом содержалось по 1220, а в некоторых до 1о0 эндозоитов. В культуре ткани {Ш) отмечено повторное инвазировамие клеток. Из внедрившихся эндозоитов развивались "трофозоиты* следующей генерации меронтов.

К 60-му часу культивирования эндозоиты формировали скопления овальной формы в виде розетки величиной 13,0-26,4 (15,5) х х 10,1-22,7 (12,1) мкм. В каждом скоплении было 12-80 эндозоитов, располагавшихся компактно. Клетки, в которых развивались паразиты, были увеличенными, а ядра раздробленными на отдельные гранулы.

К 70-му часу отдельные незрелые эндозоиты принимали округлую форму. По мере созревания они удлинялись и принимали форму дольки апельсина. Их размеры составляли 2,8-3,3 (2,9) х 0,6-1,2 (1,0)мкм.

К 80-му часу скопления эндозоитов в большинстве своем были распавшимися, а свободные эндозоиты внедрялись в новые клетки.

К 93-95-му часу эндозоиты превращались в трофозоитов. ини были яйцевидной формы, размером 3,2 х 2 мкм.

К 105-110-му часу они формировали скопления овальной формы величиной 11,6-14,1 (12,0) х 10,0-10,8 (10,3) мкм. Количество эндозоитов в них было от 8 до 28. Размеры эндозоитов составляли 2,8-3,6 (3,3) х 1,4-2,0 (1,8) мкм. К этому времени непораженными оставались около 10-15% клеток моносяоя. Чуть позднее эвдозоиты в пораженных клетках принимали округлую форму. На этой стадии развитие паразитов прервалось.

Анализируя результаты проведенного культивирования токсоплазмы, со стадии спорозоита обращает на себя внимание способность паразита быстро разрушать клетки монослоя. Ускоренное развитие паразита в культуре ткани, по сравнению с развитием обусловлено более благоприятной средой обитания для паразита (отсутствие иммуногенного фактора и др.).

2.3.1. Опыт заражения собак спорулированными ооцистами

Hammondia keydorni

В 70-х годах XX столетия американские исследователи (Wallace, 1973; Frenkel, 1974; Frenkel, Dubey, 1975) выявили паразита, сходного с токсоплазмой и саркоспоридиями, но и значительно отличавшегося от них. ин получил родовое название Навага on aia Frenkei et Dubey, 1995. Род включает два вида (существование третьего многими исследователями отвергается), из них типовой Hammondia hammondi - наиболее изучен. Как и токсоплаз-ма H.hammondi имеет сходные по величине удлиненные цистозоиты (2x7 мкм), а энтеральная фаза развития в дефинитивном хозяине (кошке) включает мерогонию и гаметогонию. иоцисты идентичны с таковыми у токсоплазмы и по структуре и по размерам (10,6x11,4 мкм).

У Hammondia, как и у Sarcocystis двуххозяинный жизненный цикл. Цисты образуются в екелетных мышцах промежуточного хозяина (коза, крыса, хомяк, морская свинка).

Второй вид рода - H.heydomi. Дефинитивный хозяин - собака, лисица и, по-видимому, другие псовые. Промежуточный хозяин -крупный рогатый скот, некоторые другие травоядные, а также собака. иоцисты в кишечнике собаки идентичны таковым у токсоплазмы. Циетные стадии в тканях промежуточного хозяина еще не выявлены. Хейдорн ( Heydorn, 1973) поеле скармливания собакам сырого мяса крупного рогатого скота обнаружил в их фекалиях неспорулирован-ные ооцисты, идентичные с ооцистами токсоплазмы. Заражение собак спорулированными ооцистами не приводило к выделению ооцист. Наряду с этим собаки, накормленные мышечной тканью собак, зараженных перорально за 6-8 недель до этого зрелыми ооцистами, заражались и выделяли аналогичные ооцисты. У собак после скармливания им мышечной ткани инвазированных ооцистами собак, препатентный период составил 6-8 дней, а патентный - 2-9. Таким образом, в условиях эксперимента собака оказалась не только дефинитивным, но и промежуточным хозяином паразита.

Проводя очередные опыты по скармливанию еаркоциетозного мяса собакам, мы периодически находили в фекалиях собак ооцисты неспорулированные), идентичные ооцистам токсоплазмы у кошек. Зная о работах Хейдорна, мы (Вершинин и соавт., 1984) с целью изучения эндогенного развития H.heydorni скормили 8 щенкам, свободным от кокцидий, мышечную ткань двух собак, подвергнутых за два.месяца до убоя заражению спорулированными ооцистами н. hammondi. В результате постмортального паразитологического исследования тонкого отдела кишечника подопытных щенков на 2, 3, 4, 5, 6, 7, 9 и 10 дни после заражения установили, что на всем протяжении тонкого кишечника в цитоплазме эпителия ворсинок происходит развитие паразита. В мазках из слизистой оболочки, окрашенных по методу Романовского-Гимзе, обнаружены бесполые и половые стадии паразитов. Молодые гамонты выявлены через 4-5 дней после заражения, а на 6-й и 7-й дни наряду с гамонтами и шнзонтами встречались также зрелые гаметы и в небольшом количестве неспорулированные ооцисты. Зрелые макрогаметы были чаще сферической формы диаметром 9,9 мкм. Зрелые микрогаметоциты имели более чем 10 микрогамет.

Поскольку многократные попытки исследователей отыскать цис-тную стадию Н.hammondi в тканях промежуточных хозяев (крупный рогатый скот, собака и другие животные) были безуспешны, по-видимому, есть смысл подвергнуть мышечную ткань промежуточных хозяев перевариванию в искусственном желудочном соке (или растворе трипсина) с целью обнаружения возможных "гипнозоитов* паразита.

2.3.2. Дифференциация тканевых цистообразующих кокцидий

Все цистообразующие кокцидии - внутриклеточные паразиты с очень сходной ультраструктурной организацией гомологичных бесполых и половых стадий развития. В их жизненных циклах так же как у типичных эймермидннх кокцидий (Eimeria, laospora) чередуются мерогония, гаметогония, спорогония. Мерогония может происходить по типу шизогонии, эндодиогении, эндополигении. Гаметогенез у цистообразующих и "классических" эймериидннх кокцидий, в основном протекает однотипно (Бейер, 1977) и завершается образованием ооцист изоспороидной структуры. Последние не имеют микропиле, остаточного тела, а спороцисты без штидевского и субжтидевского телец, но с остаточным телом; механизм экецистирования у них аналогичен. Все эти организмы формируют тканевые цисты, а в их жизненных циклах прослеживаются промежуточные стадии постепенного перехода от факультативной до облигатной гетероксенноети. Цисты, как правило, формируются в тканях промежуточных хозяев(травоядные, всеедные и др.). Половое развитие происходит в стенке тонкого кишечника дефинитивных хозяев (плотоядные животные).

Цисты определенных родов и видов кокцидий различаются по величине, морфологическим особенностям, структуре стенки цисты, локализации. Идентификация цистообразующих кокцидий только по тканевым цистам при световой микроскопии довольно затруднительна в случаях смешанной инвазии, особенно при атипичной локализации цист, исобенно сложна дифференциация Sarcocystis, Toxoplasma в острую фазу болезни, когда бесполое размножение паразитов этих двух видов происходит в эндотелий кровеносннх сосудов различных органов и тканей. Нарушение проницаемости стенок кровеносных сосудов, повреждения ^х, геморрагии, расстройства кровообращения, сопровождающиеся тромбозами; воспалительные изменения в паренхиматозных органах и тканях наблюдаются при остром еаркоциетозе и токеоплазмозе. Безноитии также могут поражать сосудистую систему. Поражения репродуктивной сферы, миокардиты и миозиты отмечают в острую фазу при еаркоциетозе и токеоплазмозе.

Дифференциация цистообразующих кокцидий по структуре ооцист, выделяемых окончательными хозяевами, возможна далеко не всегда, поскольку все они имеют изоспороидную структуру ооцист, а число видов кокцидий, жизненные циклы которых расшифрованы, неуклонно растет. Если до 1970 года у собаки, кожи и человека было известно всего 7 видов рода isospora, то в настоящее время, с учетом цистообразующих кокцидий, количество ввдов паразитов с изоспороидными ооцистами у этих хозяев превышает 40. Это часто является причиной путаницы ооцист Cystoisospora и цистообразующих кокцидий.

У некоторых цистообразующих кокцидий ооцисты (и спороцисты) выделяются с фекалиями уже енорулированные (Sarcocystis, Frenkelia), у других - неспорулированные (Toxoplasma, Besnoi-tia, Hammondia). иднако и этот (очень важный) критерий дифференциации имеет ограниченное применение, поскольку за обнаруженной в. фекалиях кожи или собаки ооцистой (или спороцистой) Sarcocystis может "скрываться* не один, а несколько видов этого рода, так как структурно и по размерам ооцисты и спороцисты многих видов Sarcocystis идентичны. Например, ооцисты и спороцисты s* cruzi, S.tenella, S.capracanis u S.eguicanis, выделяемые собакой. Спороцисты (и ооцисты) Frenkelia невозможно дифференцировать от спороцист (и ооцист) S&rcocystis из-за их структурного сходства. леспорулированные ооцисты определенных видов цистообразующих кокцидий, выделяемых с фекалиями кишкой и собакой, также могут быть сходны морфологически и по размерам, что различить их невозможно (например, ооцисты Toxoplasma gondii, Hammondia hammondi, Besnoitia darlingi, выделяемые кожой). Иногда дезориентировать исследователя могут аберрантные формы ооцист Sarcocystis, Toxoplasma, других цистообразующих кокцидий, а также ооцисты Cystoisospora.

Таким образом, строение ооцисты не может быть надежным критерием вида (а иногда и рода кокцидий). Поэтому при дифференциации цистообразующих кокцидий необходимо учитывать особенности их жизненных циклов, морфологию паразита в разных фазах развития, хозяинную и органотканевую специфичность, характер вызываемой патологии, результаты серологических, аллергических исследований, биопробы, эпизоотологические данные, симптоматику.

Ниже приведены основные морфобиологические критерии дифференциации тканевых цистообразующих кокцидий, а также кокцидий рода Cystoisospora, поскольку они представляют начальный этап перехода от гомоксенности к факультативной, а затем и облигат-ной гетероксенности жизненных циклов этих паразитов. В настоящее время к тканевым цистообразующим кокцидиям относят следующие роды: Cystoisospora, Toxoplasma, Besnoitia, Hammondia,

Sarcocystis, Frenkelia. Систематическое положение этих кокцидий все еще является предметом споров и разногласий, что вполне естественно, учитывая большое число видов и сложность их жизненных циклов, ибщепризнанна принадлежность этих кокцидий к типу Apicomplexa Levine, 1970, классу Sporozoa Leuekart, 1879,-отряду Eucoccidiida Leger et Dubosg, 1910, подотряду Eimeriina Leger, I9II. Относительно принадлежности их к семейству и подсемейству пока единства у исследователей нет (подробнее о систематическом положении цистообразующих кокцидий см. Levine, 1973; Prenkei, 1977; Бейер, 1977; Вершинин, 1979. итличительными особенностями Sarcocystis являются:

1. иблигатная гетерокеенность жизненного цикла у видов, паразитирующих у сельскохозяйственных животных. Отсутствие бесполого развития паразита в дефинитивном хозяине.

2. Смещение мерогонии (бесполого размножения) в организм промежуточного хозяина.

3. наличие трех типов клеток в тканевой цисте (метроциты, промежуточные клетки, мерозоиты).

4. Спорогония ооцист происходит в строме кишечных ворсинок (в lamina propria ) дефинитивных хозяев; во внешнюю среду с фекалиями выделяются уже спорулированные ооцисты, а чаще свободные спороцисты. оболочка ооцисты тоньше, чем у спороцист (а у Cystoisospora наоборот: она толще, чем у спороцист).

5. иоцисты и спороцисты не инвазионны для дефинитивных хозяев (то есть собак, кошек, диких плотоядных).

6. Из-за субэпителиальной локализации ооцист в кишечнике дефинитивных хозяев патентный период длится до месяца и более.

7. Дефинитивные хозяева легко подвержены супер- и реинвази-рованию, независимо от возраста животных (по-видимому, из-за отсутствия иммуногенных стадий мерогонии в их кишечнике).

8. В предциетную мерогонию в промежуточном хозяине меронты свободно лежат в цитоплазме инвазированных клеток (в эндотелии кровеносных сосудов у сельскохозяйственных животных и в гепато-цитах у мышевидных грызунов), ини (меронты) не заключены в пара-зитофорную вакуоль.

9. В цистной стадии у Sarcocystis выражен тропизм к мышечной ткани (чаще они формируются в сердечной или скелетной мускулатуре, мышцах диафрагмы, пищевода, языка и др.). Лишь иногда их находят в головном мозге.

10. Наружная оболочка (стенка цисты) может быть тонкой, гладкой ( I мкм в толщину), а может быть толстой ( 5-7 мкм) с радиальной исчерченностью.

11. Полость цисты разделена перегородками (септами на отдельные сегменты - камеры).

12. Молодые (незрелые) цисты, не содержащие цистных мерозоитов, не инвазионны для дефинитивных хозяев.

13. Ядро инвазированной клетки в промежуточном хозяине не претерпевает значительных изменений.

14. Род Sarcocystis включает более 130 видов.

15. Промежуточные и дефинитивные хозяева могут быть инвази-рованы несколькими видами Sarcocystis.

16. Хозяинная специфичность Sarcocystis сильнее выражена у сельскохозяйственных животных. Широкой хозяинной специфичностью (за некоторыми исключениями) обладают виды саркоспоридий, встречающихся у мышевидных грызунов, птиц.

17. Патогенность видов Sarcocystis различна. Более патогенны виды, которые передает собака (и другие псовые), по сравнению с теми, что передает кошка.

18. Виды саркоспоридий, которые передает кошка, не передает собака,и наоборот.

19. В эпизоотологии саркоцистозов основная роль принадлежит собаке (и диким псовым) в отличие от токсоплазмоза, где главную роль в эпизоотологии и эпидемиологии играет кожа.

Род Cystoisospora Frenkel, 1977.

Цикл развития факультативно гетероксенный. Окончательные хозяева отдельных видов - собаки, кожи, пушные звери; резерву-арные - мышевидные грызуны, цыплята, крупный рогатый скот и другие животные. Оонисты спорулируют во внешней среде. Оболочка ооцисты толще оболочки спороцисты. Спорулированные ооцисты инвази-онны для окончательных и промежуточных хозяев. Половому процессу в кишечнике дефинитивных хозяев предшествует бесполое размножение. Возможна внекишечная локализация бесполых стадий в дефинитивном хозяине. Цистоподобные однозоитные стадии (гипнозоиты) овальной формы, длиной до 21-35, шириной до 7-14 мкм, без септ, локализуются в лимфоидной ткани и многих органах резервуарных хозяев. Меро- и гипнозоиты неинвазионны для промежуточных хозяев. р0д Toxoplasma Mcolle et Manceaux, I9Q8.

Представлен одним видом. Цикл развития факультативно гете-роксенный. Дефинитивный хозяин - кошка и другие виды кошачьих; промежуточные хозяева - более 350 видов позвоночных животных (млекопитающие, птицы) и человек. Ооцисты, выделяемые кошкой, спорулируют во внешней среде. Размер ооцист - 12x10 мкм. Половому процессу в кишечнике кошки предшествует бесполое размножение. Эндозоиты паразитируют в клетках почти всех органов, имеют форму полумесяца размером 4-7 х 2-3 мкм. Скопления эндозоитов в пара-зитофорных вакуолях клеток, не имеющие собственной оболочки, называют пеевдоцистами. Цисты имеют обычно округлую форму 10-100 мкм в диаметре с тонкой (до I мкм) оболочкой, без септ, содержат сотни однотипных цистозоитов. Локализуются в нервной, мышечной ткани и различных органах. Эндозоиты, цисты и спорулированные ооцисты инвазионны как для промежуточного, так и для дефинитивного хозяина.

Род Besnoitia Henry, 1913.

Включает б родов. Типовой вид В.besnoiti. Цикл развития этого вида факультативно или облигатно гетероксенный. Дефинитивный хозяин - кошка (по данным В.М.Петешева и соавт., 1974), промежуточные - крупный рогатый скот, антилопы, овцы, козы, кролики, хомяки и др. иоцисты размером 15 х 13 мкм выделяются с фекалиями кошки неспорулированными. Эндозоиты в промежуточных хозяевах имеют форму полумесяца, величиной 5-9 х 2-5 мкм. Структурно они сходны с эадозоитами токсоплазмы. Цисты формируются в коже, подкожных фасциях, сухожилиях конечностей, апоневрозах мышц, склере, слизистых оболочках. Цисты безноитий сферической формы, диаметром до 0,6 мм, без септ, имеют очень толстую (до 30 мкм и более) оболочку. Размеры и структура всех цистозоитов в цисте одинаковые. Форма цистозоитов банановидная или в виде полумесяца, длина 6-12, ширина 2-5 мкм. В конце физиологического раствора при температуре 37-38°С. Цистозоиты обладают подвижностью. Цисты инвазионны для дефинитивного, а у некоторых видов (B.besnoiti, B.dorlingi, B.jellisoni) дЛЯ промежуточных хозяев. иоцисты инвазионны для промежуточных (но не дефинитивных) хозяев. р0д Hammondia Frenkel and Dabey, 1975,

Типовой вид Н.hammondi. цЙКЛ развития облигатно гетероксен-ный. Дефинитивный хозяин этого вида - кожа, промежуточный - мыши, крысы, хомячки, морские свинки. Цисты выделяются кошкой неспорулированными, размером 12 х II мкм. Морфологически идентичны таковым у токсоплазмы. Половому процессу в кишечнике кожи предшествует бесполый.- Цисты веретеновидные, с тонкой оболочкой, еепт нет, длина 100-340 мкм, ширина 40-95 мкм; локализуются главным образом в скелетной мускулатуре. Цисты инвазионны только для окончательного (но не промежуточного) хозяина, ооцисты - наоборот (инвазионны для промежуточного, и не инвазионны для окончательного хозяина).

Род Frenkelia Blocca, 1968.

Известно два вида. Цикл развития облигатно гетероксенный, типовой вид F.microti. Дефинитивный хозяин - канюк (Btiteo bu-teo), промежуточные - мыши, крысы, ондатры, золотистые хомячки, кролики и другие грызуны. Цисты обычно локализуются в головном мозге грызунов, иболочка цисты тонкая, полость цисты разделена внутренними перегородками, размер цист - 0,2-1,0 мм. Цисты второго вида F.glareoli встречаются в головном мозге береговой по левки, имеют сферическую форму, достигают 400 мкм в диаметре.Как и в цистах Sarcocystis в развивающихся цистах различают метро-циты, промежуточные клетки и цистные мерозоиты. Цистные мерозоиты имеют удлиненную серповидную форму тела, располагаются в центре цисты и имеют размер 8-10 х 1-3 мкм. Спороцисты выделяются конюком уже спирулированные и имеют размер 12,5 х 8,8 мкм. Спороцисты френкелий практически не отличимы от спороцист саркоспоридий. обнаружение изоспороидных ооцист у целой группы родов тканевых цистообразующих кокцидий сильно затрудняет или делает невозможной использование ооцисты в качестве критерия вида кокцидий у дефинитивных хозяев. Так, у собак четыре вида Sarcocystis имеют идентичную структуру ооцист и спороцист. У человека трудно дифференцировать по ооцистам (и спороцистам) S.hominis u S.sui-hominis (которые ранее проходили под названием Isospora homi-nis ). иоцисты Toxoplasma gondii n Hammondia hammondi, выделяемые кошкой, практически не различимы и лишь биопроба на белых мышах позволит правильно их идентифицировать. Мышам, свободным от кокцидий перорально дают спорулированные ооцисты неизвестной видовой принадлежности. Основная масса цист Hammondia у мышей образуется в мышцах (особенно бедренных). А у токсоплазмы цисты находят главным образом в головном мозге и очень редко в мышцах инвазированных мышей. В отличие от токсоплазмы, инвазию н.hammondi нельзя поддерживать путем слепых пассажей бесполых стадий паразита мышам.

При дифференциации бесполых стадий Sarcocystis u Toxoplasma в промежуточных хозяевах следует иметь в виду, что в эндотелии (и субэндотелии) кровеносных сосудов различных органов могут локализоваться как меронты саркоспоридий, так и псевдоцисты токсоплазмы (в острую фазу саркоцистозе и токсоплазмоза соответственно). При анализе гистологических срезов следует учитывать, что меронты саркоспоридий локализуются непосредственно в цитоплазме инвазирован-ной клетки, а псевдоцисты токсоплазмы заключены в паразитофорную вакуоль.

Цистные стадии саркоспоридий локализуются в мышечной и очень редко в нервной ткани, а цисты токсоплазмы с одинаковой частотой встречаются в нервной ткани, в сердце, скелетных мышцах, в гладкой мускулатуре в различных органах (у крупного рогатого скота, особенно много цист токсоплазмы находят в печени), иболочка цисты токсоплазмы тонкая (I мкм) и не подвержена возрастным изменениям (за исключением небольшого ее утолщения). У цист саркоспоридий с возрастом структура стенки цисты может значительно изме- . няться (например, у s.gigantea ). В цисте у токсоплазмы нет септ, и цистозоиты однотипны. В развивающейся цисте саркоспоридий различают три типа клеток: метроциты, промежуточные и мерозоиты. газмер цист токсоплазмы равен 10-100 мкм, а цисты у некоторых видов рода Sarcocystis могут достигать 20 мм и более. В старых цистах Toxoplasma gondii (u Frenkelia) остатки хозяинной клетки могут полностью исчезнуть (чего не бывает у Sarcocystis ). Циетозоита-ми токсоплазмы можно вызвать заражение как дефинитивного, так и промежуточного хозяев паразита. При разрыве цист токсоплазмы (по разным причинам) возможно рецидивирование острой фазы болезни, так как цистозоиты трансформируются в эвдозоиты, а последние, формируя псевдоцисты, вызывают массовое разрушение клеток хозяина. Подобное невозможно у Sarcocystis, так как цистный мерозоит, являясь по сути гамонтом, может развиваться только в кишечнике дефинитивного хозяина. Предцистные меронты и мерозоиты саркоспо-ридий вызывать заражение дефинитивного хозяина не могут. Нредцистные стадии токсоплазмы вызывают заражение дефинитивного хозяина (кошки). Трансплацентарная передача инвазии в острую фазу болезни - один из путей заражения при токеоплазмозе. При саркоцис-тозах у сельскохозяйственных животных внутриутробной передачи инвазии практически не происходит.

Наиболее широко распространенный и патогенный вид S.cruzi от крупного рогатого скота может вызвать у неиммунных животных, независимо от возраста, острую фазу болезни с летальным исходом (при соответствующей дозе возбудителя). Вызвать клинически выраженный токсоплазмоз у крупного рогатого скота практически невозможно (описанные случаи гибели крупного рогатого скота от токеоплазмозе, как теперь установлено, связаны с острым саркоцистозом). Это необходимо учитывать при дифференциальной серологической диагностике.

В отличие от токсоплазмы, при заражении которой у кошек и собак формируются специфические антитела к ней, еобаки и кошки, зараженные саркоспоридиями, остаются серонегативными, независимо от времени исследования после заражения (по-видимому, из-за отсутствия фазы мерогонии в дефинитивном хозяине, стадии которой являются иммуногенными). У рода Toxoplasma, представленного одним видом - т.gondii, в качестве дефинитивного хозяина выявлена кошка и другие представители семейства Felidae. Род Sarcocystis к настоящему времени насчитывает более 130 видов, а дефинитивными хозяевами могут быть плотоддные из семейства Canidae, Felidae, Mustellidae, хищные птицы и другие, а также человек.

Циклы развития Hammondia u Sarcocystis облигатно гетеро-ксенные, но есть в них и существенные биологические различия. Например, молодые цисты хаммондий (независимо от их размера) являются уже инвазионными, тогда как цисты саркоепоридий должны прежде созреть и лишь потом они могут вызывать заражение дефинитивного хозяина. у Н.hammondi в кишечнике кошки - дефинитивного хозяина происходит бесполое размножение паразита перед гаметогонией,тогда как у Sarcocystis цистные мерозоиты в кишечнике дефинитивных хозяев сразу трансформируются в мужские и женские гаметы.

Цисты Н.hammondi u Т.gondii на ультраструктурном уровне очень сходны (Mehlhorn, Frenkel, 1980), за исключением размеров цистозоитов, которые у Н.hammondi были 4-5 мкм, а у Т.gondii - 7-8 мкм. Цисты указанных двух видов дифференцируют от цист Sarcocystis по отсутствию у них септ в цисте, а также метроцитов и промежуточных клеток, причем первые сохраняются даже в старых цистах саркоспоридий. У многих видов Sarcocystis (S.cruzi, S.hirsuta, S.hominis, S.tenella и других) с возрастом появляются видовые отличительные выросты на стенке цисты (Mehlhorn et al,1971). у s.gigantea (-S.ovifelis) вокруг инвазионной клетки формируется вторичная стенка цисты. Виды Frenkelia у сельскохозяйственных и домашних животных не паразитируют. Цисты френкелий формируют цисты в нейронах в головном(реже спинном) мозге грызунов, причем ядро клетки хозяина гипертрофируется. У Besnoitia в цистной стадии выражен тропизм к соединительной ткани (у Sarcocystis - к мышечной). В цистах безноитий первичная паразитофорная вакуоль значительно расширяется и в конце концов полностью заполняется большим количеством паразитов. Ддро клетки хозяина обычно подвергается гипертрофии и гиперплазии. Клетка хозяина окружается слоями, образующими вторичную стенку цисты, йнвазированная клетка гипертрофируется, достигая гигантских размеров. Ядро ее делится путем амитоза, образуя большое количество ядер и в результате клетка становится многоядерной ( Schulz,I960). В образовавшейся в цитоплазме клетки вакуоли паразиты, интенсивно размножаясь, отодвигают ядра на периферию клетки хозяина. В конце концов цитоплазма инвазирован-ной клетки и ее многочисленные, ядра образуют на периферии узкую зону. Вокруг такого гипертрофированного гистиоцита концентрируются фиброблаеты, в результате соединительнотканные волокна колла-генизируются, а затем гиалинизируются, формируя толстую гомогенную стенку цисты у крупного рогатого скота, достигая 600 мкм в диаметре. Когда они единичные, то имеют сферическую или почти сферическую форму. Когда их очень много, они могут быть сдавлены. Цистозоиты в мазках имеют форму полумесяца и измеряются в среднем 2x7 мкм. В физиологическом растворе они подвижны.

Заключение Диссертация по теме "Паразитология", Вершинин, Игорь Иванович

вывода

1. Доминирующим видом у крупного рогатого скота в Свердловской области выявлен Sarcocystis cruzi; экстенсивность инвазии взрослых животных в отдельных районах области достигала 90$. Экстенсивность саркоцистозной инвазии у свиней составляет 6$. Выявлен лишь один вид - S.miescheriana (=S.suicanis). Зараженность саркоцистозной инвазией лошадей составила 19,1$. Выявлен вид S.fayeri. У овец зараженность видом S.tenella (=S.ovica~ пхз) достигала 95-100%, а видом S.gigantea (=S.ovifelis) у овец старше двух лет - 45$. У коз выявлен вид S.capracanis, экстенсивность инвазии - 38,3$.

2. При паразителогическом исследовании 38 плодов в возрасте 4-6 месяцев от коров с интенсивной саркоцистозной инвазией, а также 47 т'елят, павших от диспепсии или колибактериоза, саркоцистозной инвазии не установлено.

3. Подтверждено, дано описание и сделаны микрофотографии двух предцистных генераций меронтов S.cruzi в организме телят, подвергавшихся экспериментальному заражению спороцистами этого вида.

4. Прослежено развитие S.cruzi в организме собак после заражения их мышечной тканью (сердце, диафрагма, пищевод) крупного рогатого скота с саркоцистозной инвазией. Все стадии развиЛ тия паразита измерены и сфотографированы.

5. Сравнение стадий развития s.cruzi в культуре ткани куриных эмбрионов (после инокуляции спорозоитов) показало большое сходство развивающихся паразитов (скопления вегетативных форм) с меронтами первой генерации S.cruzi в эцдотелии кровеносных сосудов у экспериментально зараженных телят в нашем опыте.

6. В монослое фибробластов эмбрионов овец, в который иноку-лировали цистные мерозоиты S.gigantea развились все стадии половой фазы жизненного цикла паразита от макро- и микрогамет до незрелых ооцист.

7. В эксперименте по изучению развития Toxoplasma gondii в культуре ткани фибробластов куриных эмбрионов, проведенном с целью сравнить рост эндозоитов токсоплазмы со стадиями саркоспо-ридий в культурах тканей, установлено, что наиболее характерными были скопления паразитов в виде "розеток". "Розетки" состояли, как правило, из четного числа паразитов. Характерным было расположение эндозоитов возле ядра клетки монослоя. Отдельные клетки были "нафаршированы" как парными, так и одиночными эндозоитами. В таких клетках ядро было деформировано, часто поделено на сегменты и сдвинуто на периферию клетки.

8. При экспериментальном заражении телят большими дозами спороцист S.cruzi патологоанатомические изменения особенно выражены в период появления меронтов второй генерации, то есть на 25-30 дни после заражения. В острую фазу болезни, совпадающую со второй мерогонией, во всех паренхиматозных органах развиваются сильнейшие воспалительные процессы пролиферативного характера с резко выраженными нарушениями кровообращения. Наружные и внутренние лимфатические узлы увеличены, отечны с кровоизлиянием. Кровоизлияния наблюдаются во всех внутренних органах. Но-видимо-му, патологические процессы при остром саркоцистозе развиваются по типу аллергических реакций гиперчувствительности.

9. При знтеральном саркоцистозе у собак (и у других плотоядных) при интенсивной инвазии происходит десквамация энтероцитов ворсинок на определенных участках тонкого кишечника. Через оголенные ворсинки в кровь могут попадать энтерококки, кишечные палочки, другие микроорганизмы и вызывать интоксикацию. Десквамация эпителия ворсинок может происходить и оттого, что масса ооцист и спороцист давит на сосуды стромы кишечной ворсинки и нарушает трофику кишечного эпителия.

10. Многократное (3-6 раз) реинвазирование собак с интервалом в две недели после прекращения выделения спороцист саркоспоридий и новым инвазированием приводило к удлинению (на 2-5 дней) препатентного и укорочению в 3-4 раза патентного периода с появлением в возраставших количествах аберрантных ооцист и спороцист.

11. После однократного скармливания сырого мяса крупного рогатого скота (сердечные мышцы, диафрагма, пищеводы) с цистами S.cruzi собакам в возрасте от 2-х месяцев до 10 лет заражение произошло у всех животных.

12. Выявлены, измерены, сфотографированы стадии эндогенного и экзогенного развития Cystoisospora felis u G.oliioensis от котят и щенят соответственно для дифференциации от других цистообразующих кокцидий.

13. Прослежено развитие эндогенных стадий Hammondia hey-dorni в кишечнике собаки после экспериментального заражения спорулированными ооцистами паразита (для целей дифференциации от родственных организмов).

14. Не удалось получить выделения с фекалиями кошек ооцист Besnoitia. besnoiti после скармливания тканевых цист паразита.

15. При дифференциации тканевых цистообразующих кокцидий прежде всего необходимо ориентироваться на структуру их жизненных циклов (круг дефинитивных хозяев, хозяинная специфичность, пути передачи инвазии и т.д.), морфологию и локализацию энтеральных и внекишечных предцистных и цистных стадий, патогенность, результаты серологического и аллергического исследования, биологическую диагностику.

Сведения о практическом использовании результатов исследования

Материалы исследований нашли применение в учебном процессе Уральской государственной сельскохозяйственной академии, других вузов; вошли в два издания учебника для студентов вузов "Паразитология и инвазионные болезни сельскохозяйственных животных" ред. профессора К.И.Абуладзе, I., 1982 и 1990 гг. ; были использованы в следующих документах:

I. Методические рекомендации по диагностике и профилактике саркоцистозов сельскохозяйственных животных,- М., 1981. удобрены Главным управлением ветеринарии МСХ СССР 22.09.80 г. и утверждены секцией "Паразитология и профилактика инвазионных болезней сельскохозяйственных животных Утдедения ВАСХНИЛ 4.10.80 г. ,

80.

2. Методические рекомендации по борьбе с эймериозами и изоспорозами животных.- М., 1992. Одобрены секцией паразитологии отделения ветеринарной медицины РАСХН 8.12.92 г.

3. Методические рекомендации по диагностике саркоцистозов животных. Екатеринбург, 1998.

4. Методические рекомендации по диагностике цистоизоспоро-зов животных. Екатеринбург, 1999.

5. Методические указания по лабораторной диагностике токсо-плазмоза животных. М., 1999. Утверждены зам.руководителя Департамента ветеринарии Минсельхозпрода России.

Ь. Результаты исследований по лабораторной диагностике и дифференциации саркоспоридий и цистоизоспор от других цистообразующих кокцидий могут быть использованы ветеринарными специалиста ми лечебных учреждений, ветеринарных лабораторий, лабораторий ветсанэкспертизы рынков и др.

В,выволнении отдельных исследований принимали участие сотрудники УрГСХА - В.И.Петренко, Л.И.Дроздова, В.В.Жуков, Н.В.Те-лятникова.

Участие других соисполнителей отражено в списке опубликованных работ.