Закономерности формирования микробоценозов и биологические свойства симбионтов у новорожденных в условиях акушерско-гинекологического стационара

Шевчук, Евгения Александровна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Закономерности формирования микробоценозов и биологические свойства симбионтов у новорожденных в условиях акушерско-гинекологического стационара
ВАК РФ 03.02.03, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Закономерности формирования микробоценозов и биологические свойства симбионтов у новорожденных в условиях акушерско-гинекологического стационара"

На правах рукописи

Шевчук Евгения Александровна

ЗАКОНОМЕРНОСТИ ФОРМИРОВАНИЯ МИКРОБОЦЕНОЗОВ И БИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА СИМБИОНТОВ У НОВОРОЖДЕННЫХ В УСЛОВИЯХ АКУШЕРСКО-ГИНЕКОЛОГИЧЕСКОГО СТАЦИОНАРА

03.02.03 - микробиология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Иркутск - 2013

ЯНВ 2013

005048475

Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Читинская государственная медицинская академия» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации

Научный руководитель:

доктор медицинских наук,

профессор Примак Татьяна Дмитриевна

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук Дубровина Валентина Ивановна

(заведующая лабораторией патофизиологии ФКУЗ «Иркутский научно-исследовательский противочумный институт » Роспотребнадзора

кандидат биологических наук Юринова Галина Валерьевна

(доцент кафедры физико-химической биологии Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Иркутский государственный университет»)

Ведущая организация:

Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Иркутский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации

Защита состоится «_»_2013г. в_часов на заседании диссертационного Совета

ДМ 001.038.01 Федерального государственного бюджетного учреждения «Научный центр проблем здоровья семьи и репродукции человека» Сибирского отделения Российской академии медицинских наук по адресу: 664003 г. Иркутск, ул.Тимирязева, 16.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Федерального государственного бюджетного учреждения «Научный центр проблем здоровья семьи и репродукции человека» Сибирского отделения Российской академии медицинских наук

Автореферат разослан «_»_2013 г.

Ученый секретарь Диссертационного Совета, кандидат медицинских наук

Кулеш Дмитрий Владимирович

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. В последние годы во всех странах мира отмечается увеличение частоты госпитальных инфекций у новорожденных, особенно детей, находящихся в отделениях реанимации и интенсивной терапии (ОРИТ), где концентрируются наиболее тяжелые больные с перинатальной патологией (Володин H.H.,2004; Дементьева Г.М. и со-авт.,2007; Brito A.S.J.,2002; Nagata Е.,2002; Stroll B.J., 2011). Показатель частоты внутри-больничных инфекций (ВБИ) у новорожденных согласно данным официальной статистики составляет в среднем 0,6 - 1%, однако, по результатам выборочных исследований ВБИ регистрируются у 15 18% новорожденных (Ковалева Е.П., Семина H.A.,2002; Касихина С .А. и соавт.,2004; Kreymann K.G et al., 2007).

Важнейшей особенностью периода новорожденное™ является наиболее тесная связь состояния ребенка с течением внутриутробного периода. Первыми микроорганизмами, с которыми контактирует плод, являются бактерии, присутствующие в материнском организме. Идентичность условно-патогенной микрофлоры (УПМ) родовых путей матери и ЖКТ новорожденного доказана многими исследователями (Минасян B.C. и соавт.,2006; Беляева И. А. и соавт.,2007; Савченко Т.Н.,2011). Одновременно колонизация детей условно - патогенными микроорганизмами происходит при контакте с медицинским персоналом через руки, предметы и воздух родильного помещения (Коршунова Г.С.,2004; Егоричева С.Д. и соавт.,2005; Абаев Ю.К.,2006; Dellinger R.P. et al., 2004; Beilid L.L., Ohning B.L.,2006).

В этиологической структуре госпитальной инфекции новорожденных грамположитель-ная флора составляет от 17 до 40% и представлена стафилококками и стрептококками. Причем роль S. aureus несколько снизилась, а преобладают коагулазоотрицательные стафилококки (КОС), например, S. epidermidis, S.warneri. Наблюдается неуклонный рост Enterococcus faecalis и Enterococcus faecium. Грамотрицательная флора представлена Е. coli, Klebsiella spp, Enterobacter spp, Proteus spp. Кроме того, наблюдается отчетливый рост частоты инфекции новорожденных, обусловленной грибами рода Candida (Акимкин В.Г.,2003; Егоричева С.Д. и соавт.,2005; Самсыгина Г.А. и соавт.,2007; Любимова A.B. и соавт.,2010). Следовательно, условия отделений акушерско-гинешлогического стационара, где находятся новорожденные, необходимо рассматривать с позиций специфической экологической системы.

В условиях экологического и социального неблагополучия, изменившейся иммунологической резистентности организма человека, нерационального использования значительного арсенала антибактериальных препаратов и антисептических средств наблюдается изменение этиологической структуры возбудителей современных гнойно-септических инфекций (ГСИ) (Воробьев A.A., 2002; Володин H.H., 2008; Oston S. et al., 2004). Профилактика ГСИ включает комплекс дезинфекционных мероприятий, направленных на уничтожение патогенных и условно-патогенных микроорганизмов на объектах в окружении пациента, при этом недостаточно учитывается специфика, закономерности бактериальной контаминации и перманентного реинфицирования новорожденных (Сидоренко C.B., 2003; Белобородое В.Б., 2005; Кафарская Л.И. и др., 2007; Донских Е.Е., 2010)

В свою очередь, представители нормальной микрофлоры составляют систему биологической защиты организма. Условно-патогенные микроорганизмы (УПМ) и, главным образом, облигатная микрофлора в составе различных биотопов в форме нормобиоценоза являются основополагающими компонентами саморегуляции, иммунологических реакций и неспецифической защиты организма (Грачева Н.М, Бовдаренко В.М, 2009; Нилова Л Ю 2009; Kaibni M.N. et al. 2009).

В большинстве лечебных учреждений общее количество микроорганизмов в 1 м5 воздуха превышает существующие нормы (Милева О.И. и соавт., 2004). Оздоровительный эффект чистого природного воздуха состоит не только в отсутствии пыли, как главного источника микробов и бактерий. Воздух оздоравливается атмосферным электричеством, точнее его носителями - аэроионами (АИ) (Чижевский А.Л., 1976, 1989, 1995; Партылов B.C., 2001; Колотова О.В., 2002; Ryushi Т., 1998; Nakane Н. Et al., 2002).

Метод аэроионификации может быть применен без дополнительных изысканий в операционных, перевязочных, палатах (инфекционных, родильных и др.), боксах микробиологических лабораторий (Лившиц М.Н., 1990; Скипетров В.П., 2005; Пакин В.Н., 2011; Dudley С. A., Moss R. L„ 1999; Fletcher L.A. et al., 2007).

Исследование нормальной микрофлоры новорожденных, беременных и родильниц, изучение влияния аэроионов и пробиотиков на ее свойства позволяет расширить научные знания о профилактике ВБИ и разработать новые перспективные методы снижения уровня госпитального инфицирования в акушерско-гинекологических стационарах.

Цель: Изучить закономерности становления микробиоценозов новорожденных во взаимосвязи с микробиотой матери и бактериальной обсемененностью объектов окружающей среды (ООС) в условиях акушерско-гинекологичекого стационара и определить влияние на выделенную микрофлору отрицательно заряженных аэроионов (ОАИ) в присутствии лактобактерий.

Для выполнения указанной цели поставлены следующие задачи:

1. Изучить закономерности формирования, качественный и количественный состав микробиоценозов новорожденных по дням жизни в условиях детского отделения (ДО) и ОРИТ с оценкой антибиотикорезистентных свойств микроорганизмов.

2. Исследовать микробные ассоциации цервикального канала беременных женщин, родильниц, объектов окружающей среды с определением антибиотикоре-зистентности выделенных штаммов микроорганизмов.

3. Изучить влияние аэроионов в присутствии лактобактерий на антибиотикоре-зистентность условно-патогенных микроорганизмов, выделенных в условиях акушерско-гинекологичекого стационара.

4. Разработать способ коррекции микроэкологических нарушений репродуктивного тракта женщин с применением аэроионов и пробиотических микроорга-

низмов.

Научная новизна и теоретическая значимость

Разработана концептуальная схема комплексного микроэкологического мониторинга новорожденных ДО и ОРИТ в период постнатальной адаптации, учитывающая колонизацию УПМ различных биотопов организма ребенка, матери и окружающей среды.

Показаны закономерности формирования микробиоценозов новорожденных по биотопам и дням жизни, характеризующиеся у детей ОРИТ в отличие от ДО постепенным заселением микробиологических локусов к 10-му дню жизни преимущественно грамположи-тельными кокками с отставанием процесса контаминации биолокусов бифидобактериями и лактобактериями.

Впервые установлено изменение антибиотикорезистентности бактерий в виде увеличения зон подавления роста выделенных штаммов Б. \уагпеп антибактериальными средствами под влиянием потока аэроионов отрицательной полярности (ОАИ) при участии лактобактерий, возможно, по механизму квантовой реакции, когда свободные электроны поглощаются молекулами антагонистических микробных клеток, и по принципу когерентности происходит распределение энергии в наиболее чувствительные структуры клеток (плазмиды, реактивные центры ферментных групп).

Предложен новый способ коррекции микробиоты репродуктивного тракта женщин с применением комплекса бифидобактерий и лактобактерий (Патент РФ № 2354368).

Практическая значимость работы

Проведенный микробиологический мониторинг микробных ассоциаций новорожденных, женщин, объектов ООС с определением антибиотикорезистентных свойств выделенных штаммов позволил создать базу данных с целью отслеживания циркуляции условно-патогенных и патогенных штаммов в условиях акушерско-гинекологического стационара.

Полученные результаты по влиянию отрицательных аэроионов при участии лактобактерий на культуральные и биологические свойства микроорганизмов, включая их антибио-тикочувствительность, позволили предложить аэроионы в сочетании с лактобактериями ввиду их безопасности в ряд мер профилактики внутрибольничиого инфицирования.

Материалы исследований позволили разработать новый эффективный и безопасный способ коррекции микроэкологических нарушений репродуктивного тракта женщин с применением пробиотических микроорганизмов.

Материалы диссертации использованы при:

- разработке и внедрении Патента РФ № 2354368 «Способ лечения вульвовагинального кандидоза» (Заявка № 2008103407, приоритет изобретения от 29 января 2008 г);

- внедрении в практику работы ООО «Читинская медицинская компания» (Акт внедрения результатов НИР от 11.05.2009);

- внедрении в практику работы Перинатального центра ГУЗ «Краевая клиническая больница» Забайкальского края (Акт о внедрении результатов НИР от 12.09.2010 г);

- организации и проведении учебного процесса на кафедре микробиологии с вирусо-

логией и иммунологией ГОУ ВПО «Читинская государственная медицинская академия» (Акт о внедрении результатов НИР от 11.09.2009).

Положения, выносимые на защиту:

1. Формирование микробиоценозов новорожденных ДО происходило преимущественно первые трое суток, у детей ОРИТ постепенно к десятым суткам жизни. Состав микробных ассоциаций у новорожденных в ОРИТ в сравнении с группой детей ДО отличался преобладанием энтерококков и КОС, отсутствием в микробном пейзаже бифидобакгерий и лактобакгерий в связи с применением с первых часов жизни лечебно-диагностических манипуляций, химиотерапевтических средств и искусственного вскармливания.

2. Микробиоценоз половых путей женщин в третьем триместре беременности, представленный преимущественно лактобактериями и грамположительными кокками, в ранний послеродовый период характеризовался увеличением количества анаэробов, в других биотопах родильниц преобладали неположительные кокковидные бактерии.

3. Биотопы новорожденных, женщин и ООС содержали преимущественно КОС и энтерококки, значительная часть которых отличалась антибиотикорезистентными свойствами, у родильниц достигая двух третей от числа выделенных грамположительных кокков.

4. Отрицательнозаряженные аэроионы в присутствии лактобакгерий in vitro подавляют рост и размножение S. warneri, снижают антибиотикорезистентность микроба к ряду антибиотиков в два и более раз.

5. Комплексный метод коррекции микрофлоры половых путей родильниц имеет высокую эффективность (96,7%), безопасен и физиологичен, поскольку позволяет большинству женщин нормализовать микрофлору половых путей, способствуя ее восстановлению после родов и благоприятному воздействию на формирующуюся микробиоту организма новорожденных.

Апробация результатов исследования

Основные положения работы и материалы исследований были доложены и обсуждены на:

- Областной межведомственной конференции Всероссийской научной конференции «Современные проблемы науки и образования» (Москва, 2006);

- IX съезде Всероссийского научно-практического общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов «Итоги и перспективы обеспечения эпидемиологического благополучия населения РФ» (Москва, 2007);

- Краевой научно-практической конференции, посвященной 85-летию Государственной санитарно-эпидемиологической службы РФ (Чита, 2007);

- Международной научно-практической конференции «Состояние и перспективы специализированной медицинской помощи» (Улан-Удэ, 2007);

- Международной научно-практической конференции, посвященной 30-летию детской инфекционной больницы №4 г. Тулы «Третьи Тульские педиатрические чтения» (Тула, 2007);

- IX Тихоокеанской конференции «Актуальные проблемы экспериментальной, профилактической и клинической медицины» (Владивосток, 2008);

- Всероссийской научной конференции «Теоретические основы эпидемиологии, современные профилактические аспекты инфекционных и массовых неинфекционных заболеваний» (Санкт-Петербург, 2008);

- V Scientific Conference «Present-day problems of experimental and clinical medicine» (Thailand, 2008);

- VIII Конгрессе детских инфекционистов России «Актуальные вопросы инфекционной патологии и вакцинопрофилактики» (Москва, 2009);

- Региональной научно-практической конференции, посвященной 75-летию санитарной службы Забайкальского края (Чита, 2010);

- 14th International Congress on Infectious diseases (Miami, 2010);

- Научной конференции «Этиологические, эпидемиологические и клинические аспекты инфекционных болезней» (Иркутск, 2010);

- Межрегиональном семинаре «Научные и практические аспекты дисбиозов» (Иркутск, 2011).

Публикации

По теме диссертации опубликовано 20 печатных работ, в том числе 4 статьи в изданиях, рекомендованных ВАК РФ, 2 монографии и патент РФ.

Личное участие автора осуществлялось на всех этапах работы и заключалось в выполнен™ всех микробиологических исследований, статистической обработке результатов, анализе полученных данных, в обобщении и оформлении результатов.

Структура и объем диссертации

Диссертация изложена на 158 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, собственных результатов, общего заключения и выводов, включает 42 таблицы, 35 рисунков и список литературы, содержащий 187 источников, в том числе 134 отечественных и 53 зарубежных.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы, объем н методы исследования

Микробиологический мониторинг включал бактериологическое исследование биологического материала 70 новорожденных отделения реанимации и интенсивной терапии (ОРИТ), 50 новорожденных детского отделения (ДО), 60 беременных женщин и 64 родильниц. У новорожденных исследовались ротоглотка - 1, 3, 7 сутки, кожа подмышечных впадин и пупочная ранка на 3, 5 сутки, кал на УПМ - 5, 10 сутки. Материалом для микробиологических исследований беременных и родильниц являлось отделяемое цервикаль-ного канала. Из объектов внешней среды (ООС) изучали контаминацию предметов ухода,

обихода, медицинского оборудования и инструментария, рук медицинского персонала, специализированной одежды и обсеменение воздуха (табл. 1).

Таблица 1

Объем выполненных исследований

Наименование исследований Количество исследований

Микробиологические исследования новорожденных 880

Микробиологические исследования микробиоты женщин 256

Бактериологические исследования ООС 3125

Исследование штаммов выделенных культур: - биохимическая идентификация - определение антибиотикорезистентности 1801 1530

Исследование влияния ОАИ на стафилококки in vitro: - на ростовые свойства - на антибиотикорезистентность 17 17

При проведении анализа за основу были взяты положения, представленные в «Клинико-организационном руководстве по организации работы акушерского стационара на основе новых технологий родовспоможения и инфекционного контроля» в 2003 г в рамках проекта «Мать и дитя». Данное руководство разработано при участии Санкт-Петербургской государственной медицинской академии им. И.И.Мечникова, Комитета по здравоохранению Администрации, Медицинского Информационно-аналитического Центра г. Санкт-Петербурга, Управления Здравоохранения Администрации Пермской области.

Отбор проб из объектов окружающей среды осуществляли методом исследования смывов, посевов материала на стерильность. Воздух исследовали седиментационным методом на общее микробное число (ОМЧ), наличие золотистого стафилококка и плесневых грибов.

Посев биологического материала от пациентов проводили на готовые коммерческие питательные среды и среды, приготовленные в условиях лаборатории клинической микробиологии. Для выделения анаэробных микроорганизмов использовали анаэростат (ЫоМепеих), эксикатор со свечой и питательные среды - Блаурокко, лактоагар, кровяно-анаэробный бактериологический агар (КАБА). Выделение и идентификацию чистых культур микроорганизмов проводили на основании общепринятых методов по морфологическим, тинкториальным, культуральным и биохимическим свойствам. Для идентификации штаммов использовали стандартные тест-системы 51арЬуТс51, Б^ери/Гев^ ЕтсгоТсэ! и АпаегоТеэ! (ЪаСЬета, Чехия). Выделенные чистые культуры стафилококков идентифицировали по 22 тестам: плазмокоагуллаза, лецитоветилаза, гемолизин, уреаза, аргинин, ор-нитин, бетта-галактозидаза, бетга-гиалуронидаза, эскулин, нитраты, фосфатаза, галактоза, сахароза, трегалоза, маннитол, ксилоза, мальтоза, манноза, лактоза, ацетоин, цитохромок-сидаза, пирролидонилариламинидаза.

Выделенные штаммы стафилококков, стрептококков, энтеробактерий тестировали на чувствительность к 18 антибиотикам на основании МУ 4.2.1890-04 «Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам диско-диффузионным методом в соответствии со стандартами Национального комитета по клиническим лабораторным стандартам (NCCLS, США). Дополнительно идентификацию микроорганизмов и определение минимальных подавляющих концентраций (МПК) проводили с применением автоматического микробиологического анализатора VITEC 2 Compact 30 (bio Merieux Inc., США). Использовали показатель МПКм - МПК антибиотика эффективного для 90% исследуемых штаммов в единицах мг/л.

Для проверки качества питательной среды, дисков и правильности методики постановки всех этапов определяли чувствительность контрольных штаммов микроорганизмов. Выбор референтных штаммов для проведения контроля качества определяли видом исследуемого микроорганизма:

Е. faecalis АТСС 29212;

Е. coli АТСС 25922;

S. aureus АТСС 25923.

17 штаммов S. warneri, выделенных от новорожденных, женщин и ООС и обладающих антибиотикорезистентными свойствами, выращивали на питательной среде, приготовленной с добавлением бактерий рода Lactobacillus, а также эти культуры подвергали воздействию аэроионов.

Опыт 1: КОС +лактобактерии

В 100 мл свежеприготовленной среды Мюллера-Хинтона для определения антибио-тикорезистентности добавляли 12 мл биологически активной добавки «Наринэ» (БАД ТУ-9224-004-45448778-02), содержащей живые ацидофильные бактерии Lactobacillus acidophilus штамма N.V.Ep. 317/402 и разливали в чашки Петри. Готовили взвеси суточных кулыур S. warneri в физиологическом растворе хлорида натрия по стандарту мутности 5х108. На питательную среду засевали взвесь, затем на одну партию чашек накладывали диски с антибиотиками. Инкубировали при ЗТС 24 часа. Контролем служили две партии чашек: первая со средой Мюллера-Хинтона без добавок с нанесенной взвесью культуры S. warneri и дисками с антибиотиками, вторая - с этой же средой без добавок с нанесенной взвесью культуры S. warneri. Использовали следующий набор антибиотиков: оксациллин, амикацин, ванкомицин, цефтазидим, эритромицин и меропенем, как наиболее часто применяемый в условиях ОРИТ новорожденных. Через сутки инкубации оценивали антибио-тикорезистентность ДДМ и параллельно определяли МПК,Щ на VITEC 2 Compact -30.МПК.

Опыт 2: КОС + аэроионы

Готовили взвеси культур аналогично опыту № 1. Взвеси в количестве 1 мл засевали на питательный агар. Одну часть взвеси засевали по методу Голда (микробиологической петлей диаметром 2 мм на четыре сектора, после каждого сектора петлю прожигали) и помещали под поток отрицательно заряженных аэроионов (ОАИ) прибора «Сферион» (ООО

«Сьютиби», г. Новосибирск), который производит не менее 5 х 103 отрицательных ионов в 1 см3 воздуха. Время воздействия составило 60, 90 и 120 минут. Затем чашки инкубировали при ЗГС 24 часа, после чего определяли антибиотикорезистентность культур ДЦМ и МПК на VITEC 2 Compact. Контролем служили чашки с посевом штаммов S. wameri без воздействия аэроионов. Другую часть взвеси разливали в стерильные чашки Петри по 1,0 мл и растирали шпателем, затем также помещали под поток отрицательно заряженных аэроионов на тоже время. Контрольная чашка со взвесью воздействию аэроионов не подвергалась и выдерживалась с такой же экспозицией и температурой.

Опыт 3: КОС + лактобактерпи + аэроионы

Готовили питательную среду и взвеси аналогично опыту № 1. Одну партию чашек с культурой и дисками и вторую партию с культурой без дисков помещали под чистый поток ОАИ. Время воздействия составило 90, 120 и 180 минут. Контролем служили чашки со средой Мюллера-Хинтона без добавок с нанесенной взвесью культур S. wameri и дисками с антибиотиками, вторая - без добавок с нанесенной взвесью культуры S. wameri, не подвергавшихся воздействию аэроионов. Через сутки инкубации оценивали антибиотикорезистентность ДЦМ и параллельно определяли МПК на VITEC 2 Compact -30.МПК.

С целью нормализации выявленных изменений 30 женщинам была проведена коррекция микробиоты половых путей. Аэронификатор «Сферион» (ООО» Сьютиби», г. Новосибирск) использовался для очистки и насыщения воздуха помещения отрицательно заряженными аэроионами (ОАИ) в течение дня. Применяли препараты пробиотического ряда: в первой фазе лечения бактериально-ферментный пробиотик с антибактериальной активностью «Наринэ-ф-баланс с микроэлементами», содержащий лактобактерии Lactobacillus acidophilus штамма N.V.Ep. 317/402, ионы железа и цинка (БАД ТУ 9229-002-2357163307); далее комплекс облигатных бактерий «Биовестин-лакто», содержащий Bifidum ado-lescentis МС-4, Bifidum bifidum 792, Lactobacillus plantarum 8PA3, обладающих высокой антагонистической активностью в отношении условно-патогенных и патогенных микроорганизмов (БАД СГР №77.99.23.3.У.6097.6.05).

Статистическую обработку полученных данных проводили с помощью пакета программы «Statistica-5» и «Ехе1». Использовались следующие методы статистического анализа: проверка нормальности распределения количественных признаков при малом числе наблюдений с использованием W-критерия Шапиро-Уилка, основанная на регрессии порядковых статистик. Для оценки значимости различий при нормальном распределении количественных признаков использовали t-критерий Стьюдента (для независимых выборок и для двух связанных между собой вариационных рядов), двусторонние доверительные интервалы; при ненормальном распределении количественных признаков использовали непараметрический критерий W- Вилкоксона (применяемого для сравнения выборок с попарно связанными вариантами). Наличие связей между показателями определяли, используя коэффициент корреляции Пирсона (г); выборочные параметры, приводимые далее в таблицах, имеют следующие обозначения: средняя арифметическая (М), средняя ошибка

средней арифметической (m), объем анализируемой подгруппы (п), (г) - коэффициент корреляции, р - достигнутый уровень значимости. Уровень доверительной вероятности был задан равным 95%.

Выполненная работа не ущемляет права и не подвергает опасности благополучие субъектов исследования, осуществлена с информированного согласи пациентов согласно Приказу Министерства здравоохранения РФ №266 от 19.06.2003 г, соответствует этическим нормам Хельсинской декларации (2000).

Результаты исследований и их обсуждение

Процесс формирования микробиоценозов новорожденных ОРИТ и ДО отличался по целому ряду показателей. В 1 сутки жизни микрофлора ротоглотки не выявлялась в 82,8 % в ОРИТ и в 50% случаев в ДО, к 3 суткам отсутствие роста отмечалось у 34,2% в ОРИТ, в ДО в 100% случаев зев детей был контаминирован. Заселение микрофлорой пупочного остатка и подмышечных впадин новорожденных ОРИТ также происходило в более поздние сроки, чем в ДО. Установлено, что основные характеристики биотопов новорожденных положительно коррелировали между собой.

В составе микробного пейзажа ротоглотки новорожденных ОРИТ S. mitis, Е. faecalis, S. haemolyticus, S. warneri присутствовали с первых дней жизни. Преобладали штаммы S. haemolyticus (до 41,4%) и Е. faecalis (до 17,1 %). (табл.2). Микроорганизмы ротоглотки новорожденных ДО были представлены S. mitis (до 76%) и Lactobacillus spp. (до 36%) (табл. 3).

Таблица 2

Микробный пейзаж ротоглотки новорожденных ОРИТ по суткам жизни

Микроорганизмы 1 сутки (n=70) 3 сутки (n=70) 7 сутки (n=70)

абс. % абс. % абс. %

S. mitis 7 10,0±3,5 10 14,3±4,1 11 15,7±4,3

S. oralis - - 3 4,3±2,4

S. warnerii 2 2,8±1,9 4 5,7±2,7 6 8,6±3,3

S. haemolyticus 2 2,8±1,9 24 34,2±5,6 29 41,4±5,9*

S. epidermidis 3 4,3±2,4

E. faecalis 3 4,3±2,4 9 12,8±3,9 12 17,1±4,5*

E. faecium 4 5,7±2,7

K. pneumoniae - 2 2,8±1,9 2 2,8±1,9

E. coli - 2 2,8±1,9 2 2,8±1,9

Candida spp. - 3 4,3±2,4 5 7,1±3,0*

Примечание: * - статистически значимая разница между показателями встречаемости микроорганизмов по дням жизни, р < 0,05

Таблица 3

Микробный пейзаж ротоглотки новорожденных ДО по суткам жизни

Микроорганизмы 1 сутки (n=50) 3 сутки (n=50)

абс % абс %

S. mitis 15 30,0±6,4 38 76,0±6,0*

S. oralis 2 4,0±2,7 8 16,0±5,1*

S. haemolyticus - 8 16,0±5,1

S. warneri 2 4,0±2,7

Lactobacillus spp. 8 16,0±5,1 18 36,0±6,7*

Candida spp. 8 16,0±5,1 -

Примечание:* - статистически значимая разница между показателями встречаемости микроорганизмов по дням жизни, р < 0,05

Лактобактерии встречались только в зеве новорожденных ДО (36,0%; lg 4,4±0,8). Представители транзиторной микрофлоры были обнаружены только в микробиоценозе зева новорожденных ОРИТ: E.faecalis (12,8%; Ig 3,4±0,68 КОЕ/мл), К. pneumoniae (2,8%; lg 2,5±0,5ШЕ/мл), Е. coli (2,8%; lg2,5±0,5 КОЕ/мл), Candida (4,3%; lg 4,5±0,5ШЕ/ мл). Обнаружена прямая корреляционная связь между количеством выделенных в пупочном остатке микроорганизмов у детей ОРИТ и ДО (г=0,5; р<0,05) (табл. 4).

Таблица 4

Микробный пейзаж пупочного остатка у новорожденных на 3 сутки

ОРИТ (n=70) ДО (n=50)

Микроорганизмы % M±m, % M±m,

lgKOE/мл lg КОЕ/мл

S. warneri 7,1 ±3,0 4,75±0,25 18,0±5,4* 1,75±0,25

S. haemolyticus 4,3±2,4 4,0±0,5 70,0±6,4* 2,0±0,5

S. epidermidis - - 6,0±3,3 2,0±0,5

E. faecalis 18,6±4,6 4,7±0,1

E. faecium 4,3±2,4 4,7±0,1

Примечание:* - статистически значимая разница между удельным весом микроорганизмов в разные сроки, р < 0,05

Установлено, что с 1 суток жизни кожа подмышечных впадин новорожденных обоих отделений не была стерильной. В ОРИТ к 3 суткам преобладали грамположительные кокки S. warneri (14,3%; lg 3,8±0,4 КОЕ/мл), S. haemolyticus (1,4%; lg 3,0±0 КОЕ/мл), S. epidermidis (10,0%; lg 4,3±0,6 КОЕ/мл), E.faecalis (14,3%; lg 3,8±0,4 КОЕ/мл). В ДО были обнаружены S. warneri (92,0%; 3,8±0,4 КОЕ/мл) и S. epidermidis (4,0%; lg 3,9±0,6 КОЕ/мл).

Микробиоценоз кишечника новорожденных ОРИТ характеризовался как дисбиотиче-ский, что было обусловлено отсутствием лакто - и бифидобактерий, а также кишечной палочки с нормальной ферментативной активностью. Микробный пейзаж кишечника детей обоих отделений по аэробному спектру совпадал и был представлен Enterococcus spp., КОС,

Candida spp. Максимальных значений достигали штаммы E.faecalis (74,3±5,2 и 66,0±6,6%), из КОС - 5. haemolyticus (20,0±4,7 и 42,0±6,9%). В ДО удельный вес анаэробных бактерий родов Bifidobacterium spp. и Lactobacillus spp. составил 12,0±4,5% и 8,0±3,8%. Плотность популяций резидентной микрофлоры наблюдалось в количестве lg 6,5-7,5КОЕ/мл.

Формирование нормальной микрофлоры ребенка начинается сразу после рождения. Исследованные локусы новорожденных, находящихся в ОРИТ, контаминировались преимущественно грамположительными кокками, заселение происходило постепенно. Локусы детей ДО с первых суток активно заселялись микрофлорой. Наиболее разнообразный микробный пейзаж наблюдался в локусах новорожденных ОРИТ после 3 суток жизни. У детей ДО микробный фон формировался с первых суток, содержал грамположительные кокки, а также лакто- и бифидобактерии.

В процессе исследований цервикалыгого канала беременных и родильниц выявлялась аэробная и анаэробная микрофлора. В обеих группах женщин выделялись анаэробы и грамположительные аэробные кокки. У беременных женщин в посевах преобладали палочки рода Lactobacillus spp. - 98,3%, у родильниц чаще высевались бактероиды - 53,0%. Исследования микробиоты ротоглотки, носа и грудного молока родильниц на третьи сутки после родов показали преобладание КОС во всех локусах. Обнаружена прямая корреляционная связь между показателями частоты встречаемости анаэробной и аэробной микрофлоры, выделенной го цервикалыгого канала женщин до родов и в послеродовом периоде (г=0,56; р<0,01) (табл.5).

Таблица 5

Характеристика микрофлоры цервикалыгого канала беременных и родильниц

Микроорганизмы Беременные женщины (n=60) Родильницы (n=34)

% M ±m, lgKOE/мл % M±m, lgKOE/мл

S. warneri 15,0±4,6 3,4±0,14 41,2±8,4* 3,6±0,36

S. haemolyticus 8,3±3,5 3,4±0,14 _

S.epidermidis 5,0±2,8 3,4±0,14 14,7±6,0 3.6±0,36

Е. faecalis 13,3±4,3 3,55±0,33 .

Е. coli с нормальной ферментативной активностью 13,3±4,3 3,4±0,33 8,8±4,8 3,6±0,36

Candida spp. 16,7±4,8 5,5±0,2 20.6±6,9 3,2±0,18

Lactobacillus spp. 98,3±1,6* 7,15±0,13 41,2±8,1 7,0±0,2

Bacteroides spp. 5,0±2,8 3,3±0,3 53,0±8,5* 3,4±0,12

Bifidobacterium spp. 35,0±6,1 5,4±0,4 26,4±7,5 4,7±0,5

C. xerosis 3,3±2,3 3,0±0 _

1'eptostreptococcus spp. 5,9 3,0±0,3

Примечание:* - статистически значимая разница между показателями удельного

микроорганизмов, р < 0.05

Спектр микроорганизмов, выделенных с ООС, был представлен в основном грампо-ложительными кокками. КОС преимущественно выделялись с медицинского оборудования - 30,9%, специализированной одежды - 38,2%, предметов обихода - 37,6%. Энтерококки чаще выделялись со специализированной одежды персонала - 8,8%. Обнаружена прямая корреляционная связь между частотой высеваемости энтерококков из различных локусов новорожденных обоих отделений и ООС (г=1,0; р<0,001); между частотой высеваемости КОС от женщин и от новорожденных (г=0,68; р<0,001); между частотой выделения КОС из подмышечных впадин детей и КОС из ООС (г=0,8; р<0,01); между частотой выделения КОС при исследовании пупочного остатка новорожденных и КОС из ООС (г=0,9; р<0,01).

Важным критерием при анализе эпидемиологической ситуации при ВБИ служит резистентность микроорганизмов. Нами было проведено сравнение антибиотикограмм микроорганизмов, выделенных от новорожденных, от женщин и ООС. Резистентность КОС определяли к оксациллину, амикацину, ванкомицину, цефтазидину, эритромицину и меропенему. Из рода стафилококков исследовали часто встречающиеся штаммы S. warneri, S. epidermidis, S. haemolyticus. Сравнение резистентности к антибактериальным препаратам данных штаммов, выделенных от новорожденных ОРИТ и ДО, проводили по отдельным локусам. Установлено, что возбудители, выделенные с ООС, по уровню ре-зистентости не отличались от таковых из биологических материалов. В структуре КОС, выделенных из биотопов беременных и родильниц, чаще резистентностью отличались штаммы родильниц (73,4%). В микробиоценозах биотопов новорожденных обоих отделений, женщин и ООС преобладали грамположительные кокки - S. warneri и E.faecalis. Во всех группах высевались штаммы S. warneri, обладавшие полирезистентностью, 17 из которых были использованы в серии экспериментальных исследований.

Опыт 1: КОС + лактобактерии

При изучении влияния лактобактерий на антибиотикорезистентные свойства штаммов S. warneri in vitro использовалась среда Мюллера-Хинтона с биологически активной добавкой. Контролем служила среда Мюллера-Хинтона без добавки. Зоны подавления роста с использованием ДДМ к ванкомицину увеличились с 18,3±2,6 мм на контрольных чашках до 19,0±1,6 мм на чашках с добавкой. К меропенему чувствительность выросла с 14,5±7,5 мм до 20,8±3,6 мм (р<0,05), к амикацину с 21,9±8,7 мм до 27,6±4,4 мм (р<0,01). Зоны подавления роста для оксациллина, эритромицина и цефтазидима остались без особых изменений (Рис. 1).

Обнаружены изменения МПК90 ванкомицина с 2 мг/л до 1 мг/л, меропенема с 16 до 8 мг/л, амикацина с 2 до 0,5мг/л. МПК оксациллина, эритромицина и цефтазидима составили 8 мг /л, 16 мг/л и 16 мг/л соответственно и в этой серии экспериментов не изменялись.

Be добавкой

Рис. I. Изменение значений диаметров зон подавления роста (мм) под воздействием лактобактерий

Примечание: * - статистически значимая разница между зонами подавления роста до и после применения лактобактерий при р<0,05; '

** - статистически значимая разница между зонами подавления роста до и после применения лак-тобактерии при р<0,01

Опыт 2: КОС + аэрононы

В результате данного эксперимента через 60 и 90 минут воздействия аэроионами „а засеянные культуры 5. warnen изменений антибиотикорезистентности не выявлено Микробное число на экспериментальных и на контрольных чашках при этих экспозициях было одинаково и составляло 9 Ig (10') КОЕ. Через 120 минут воздействия аэроионами микробное число снизилось до 6 lg (10") КОЕ в 89% случаев. В течение эксперимента определяли антибиотикорезистентность анализируемых штаммов. Чувствительность к

одним и тем же препаратам не отличалась в контроле и в результате воздействия потоком аэроионов.

Опыт 3: КОС + лактобактерий + аэроионы

Добавление в среду Мюллера-Хинтона взвеси лактобактерий с воздействием потока ОАИ в течение 90 и 120 минут вызывало незначительное снижение антибиотикорезистентности S. warneri. Однако наиболее существенные изменения антибиотикочув-ствительности штаммов warnen были получены при обработке потоком аэроионов - течение 180 мин. При данных условиях штаммы изменяли свою чувствительность к ;яду антибиотиков: зона подавления роста вокруг диска с ванкомицином увеличилась с 18,3±2,6 мм до 22,7±3,0 мм (р<0,01), к меропенему с 14,5±7.5 мм до 27,0±3,3 мм (р<0 01) :: амикацину с 21.9±8.7 до 27, ША мм Гр<0.01). к оксациллину с 16.5±2.5 до 19 5±5 I мм (?<0.05) (Рис. 2).

■ контроль

В с добавкой и аэроионамъи

/ / /

Рис. 2. Изменение значений диаметров зон подавления роста (мм) под воздействием аэроионов и лактобактерий

Примечание: *- статистически значимая разница между зонами подавления роста до и после применения ОАИ и лактобактерий при р<0,05;

** - статистически значимая разница между зонами подавления роста до и после применения ОАИ

и лактобактерий при р<0,01.

Под влиянием потока отрицательно заряженных ионов с добавлением лактобактерий в питательный агар, штаммы S. warnen изменяли свою антибиотикорезистентность: зоны подавления роста увеличивались, МПКад уменьшались. Обнаружены изменения МПК9„ ванкомицина с 2 мг/л до 0,5 мг/л; меропенема с 16 мг/л до 4 мг/л; амикацина с 2 мг/л до 0,5 мг/л; оксациллина с 8 мг/л до 4 мг/л; МПК^ эритромицина и цефтазидима осталась без изменений (Табл. 6).

Вероятно, свойство антибиотикорезистентности, связанное большей частью с внехро-мосомными генами бактерий, снижается вследствие возникновения изменений в структурных единицах бактериальных плазмид или кодируемых ими ферментативных групп. Поэтому увеличение зон подавления роста выделенных штаммов S. warnen антибактериальными средствами под влиянием потока аэроионов отрицательной полярности (ОАИ) при участии лактобактерий, возможно, происходит по механизму квантовой реакции на фоне воздействия продуктов жизнедеятельности молочнокислых бактерий, обладающих природным антагонизмом в отношении стафилококков.

Изменение антибиотикорезистентности штаммов S. warnen

Таблицаб

Антибиотики

Ванкомицин

Меропенем

Амикацин

Оксациллин

Контроль МПК% (мг/л)

Эритромицин

Цефтазидим

Опыт 1: + лактобактерии

Опыт 2: + ОАИ + лактобактериии

0,5

Опыт 3: + ОАИ

0,5

Таким образом, под влиянием потока отрицательно заряженных ионов и с добавлением лактобактерии в питательный агар штаммы и-отел изменяли антибиотикорези-етентные свойства: увеличивались зоны подавления роста при ДДМ, МПК,Л снижалась в 92,2% проб. Безопасность и эффективность отрицательно заряженных аэроионов их физиологичность и безусловное значение в деятельности живых организмов в соединении с облигатными симбионтами создают широкое поле возможностей их использования в профилактике внутрибольничного инфицирования, в первую очередь, рожениц, родильниц и новорожденных, при подготовке женщин к родам, в ОРИТ и ДО, особенно при условии применения антибактериальной терапии, возможно, и в других современных лечебно-профилактических учреждениях, где широко применяются химиотерапия и дезинфекция.

С целью нормализации микробиоты половых путей назначался бактериалыю-фер-

ментный пробиотик «Наринэ-ф-баланс» по 5 мл 2 раза в день через рот, вагинально по 2

мл 2 раза в день орошением из шприца в течение 10 дней, затем пробиотик «Биовестин-

гакто» вагинально орошением из шприца по 2 мл 1 раз в день в течение 7 дней. Микро-

игоценоз половых путей женщин, получивших комплексную терапию, значительно из-1енился (Табл.7).

Таблица 7

Микрофлора цервикального канала женщин в поздний послеродовый период

Микроорганизмы До коррекции, n=30 В результате коррекции, п-30

абс % абс %

S. warneri 11 36,7±8,9 8 27,6±8,1

S. epidermidis 16 53,3±9,1 26 89,7±5,5*

Е. coli 9 30,0±8,3 1 3,4±3,3*

Candida spp. 30 100,0 4 13,8±6,2*

Lactobacillus spp. 2 6,7±4,5 28 96,5±3,3*

Bifidobacterium spp. - - 14 48,3±9,1*

Bacteroides spp. 4 13,3±6,1 8 27,6±8,1

Примечание: * - статистически значимая разница между содержанием микроорганизмов до и после применения пробиотиков, р < 0,05.

Таким образом, исследования симбионтов микробных ассоциаций новорожденных, беременных и родильниц, изучение влияния аэроионов и пробиотиков на их биологические свойства позволили расширить научные знания, разработать новые перспективные методы профилактики в условиях акушерско-гинекологического стационара. Изучив закономерности становления микробиоценозов новорожденных ДО и ОРИТ, их взаимосвязь с ми-кробиотой матери и бактериальной обсемененностью ООС, стало возможным определить влияние на антибиотикорезистентность выделенных микроорганизмов отрицательнозаря-женных аэроионов в присутствии лактобактерий, разработать метод коррекции микробио-ты половых путей родильниц.

выводы

Микробиоценоз организма новорожденных начинает формироваться с ротоглоточного биотопа с первых суток жизни у детей ДО и третьих суток у новорожденных ОРИТ. У новорожденных ОРИТ к десятым суткам жизни определяются микробные ассоциации во всех биотопах, преобладают штаммы warneri (26,2%) ц IL faecal is (32,16%) отсутствуют бифидо- и лактобактерии. У детей ДО к пятым суткам жизни происходит ассоциативное заселение всех биотопов с участием бифидо- и лактобактерий.

Микробиоценозы половых путей беременных женщин и родильниц совпадают по видовому составу микроорганизмов, до родов в два раза чаще встречаются микробные ассоциации и преобладают лактобактерии (93,3% проб). В цервикалыюм канале родильниц значительно чаще встречаются бактериоиды (53,0% проб), в других биотопах преобладают грамположительные кокки.

Наиболее контаминированными объектами окружающей среды в ОРИТ, ДО и родовом блоке являются руки медицинского персонала (47,8%) и специализированная одежда (39,2%). Среди выделе.шых штаммов преобладают грамположительные кокковидные бактерии, среди них в трети случаев обнаруживается S. warneri.

В различных биотопах новорожденных, беременных, родильниц и ООС преобладают грамположительные кокки - 5 warneri, S. epidermidis. S. haemolyticus, E.faecalis устойчивые к большинству применяемых в ОРИТ антибактериальных средств. Наибольшее коли-тество выделено из биотопов родильниц (73,4%).

Антибиотикорезистентность штаммов £ warneri, выделе.шых от новорожденных, родиль-ШЦ и ООС, в присутствии лактобактерий Lactobacillus acidophilus N. V.Ep. 317/402 к ряду анти-.иотиков (ванкомицин, меропенем, амикащш) снижается в среднем в два раза, чувствитель-юсть £ warneri к оксациллину, эритромицину, цефотакснму остается без изменений

Воздействие потока отрицательных аэроионов при экспозиции 120 минут приводит к нижению плотности популяции £ warneri с 8 1g (5x10s) КОЕ до 6 lg (5x10s) в 89% проб Антибиотикорезистентность штаммов Л', warneri при обработке потоком аэроионов с тече-ие 180 минут в смеси с лактобактериями Lactobacillus acidophilus N. V.Ep. 317/402 снижа-тся в среднем в четыре раза в 92,2% проб.

Комплексный метод коррекции микрофлоры половых путей родильниц имеет высо-ую эффективность (96,7%), безопасен и физиологичен, поскольку позволяет большин-гву женщин нормализовать микрофлору половых путей, способствуя ее восстановлению осле родов и благоприятному воздействию на формирующуюся микробиоту организма эворожденных.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Для управления механизмом развития процесса формирования микробиоценоза новоценных необходимо учитывать сроки стабилизации микробиоты ротоглотки и других 1кусов у детей ОРИТ.

Отрицательнозаряжепные аэроиопы в присутствии лактобактерии могут быть применены с целью снижения антибиотикорезистентных свойств микроорганизмов в условиях

акушерско-гинекологического стационара.

Метод воздействия отрицательно заряженных аэроионов в комплексе с применением лактобактерии могут быть использован с целью снижения аптибиотикорезистентных свойств микроорганизмов в условиях акушерско-гинекологического стационара.

Возможно применение с целью неспецифической профилактики внутригоспиталь-ных инфекций новорожденных и родильниц отрицательных аэроионов и пробиотических средств. С целью неспецифической профилактики внутригоспитальных инфекций новорожденных и родильниц может быть рекомендован к применению метод воздействия на оппортунистические микроорганизмы потока отрицательных аэроионов на фоне применения пробиотических средств.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ: Шевчук Е.А. Анализ цитологических показателей и бактериальной колонизации секрета носоглотки при перинатальных повреждениях ЦНС у новорожденных / Е.А. Шевчук, Т.Д. Примак, Н.С. Туранова // Естествознание и гуманизм. - 2006. - Т.З, № 3. - С.49.

Оценка инфекционной бактериолактии в раннем и позднем послеродовом периодах / C.B. Калинина, Т.Д. Примак, Е.А. Шевчук // Естествознание и гуманизм. - 2006. - Т.З, № 4.-С. 81-82.

Оценка микрофлоры организма здоровых женщин в дородовом и послеродовом периоде / C.B. Калинина, B.C. Эрдынеева, Е.А. Шевчук, Т.Д. Примак // Сборник материалов международной научно-практической конференции: Третьи Тульские педиатрические чтения. - Тула, 2007. - С. 65-68.

Шевчук Е.А. Цитологические и бактериальные показатели носоглотки детей / Е.А. Шевчук, Т.Д. Примак, Б.С. Эрдынеева // Материалы IX съезда Всероссийского научно-практического общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов. - Москва, 2007.

- Т.2 . - С.315-316.

Шевчук Е.А. Характеристика микробного биоценоза новорожденных и объектов окру жающей среды / Е.А. Шевчук, Т.Д. Примак, Н.В. Кривошеева// Успехи современного есте

ствознания. - 2007. - №4. - С. 96.

Шевчук Е.А. Микробиологическое мониторирование в акушерском стационаре, ка: важный этап в организации эпидемиологического наблюдения / Е.А. Шевчук, Н.В. Криво шеева, И.Е. Мирхаева // Сборник статей, посвященный 85-летию санитарно-эпидемиоло гической службы Российской Федерации. - Чита, 2007. - С.171-172.

Шевчук Е.А. Анализ данных эпидемиологического мониторинга в перинатальном цен тре / Е.А.Шевчук, Н.В. Кривошеева// Вестник российской военно-медицинской академш

- 2008. - № 2. - С.479.

Шевчук Е.А. Действие аэроионов отрицательной полярности на микроорганизмы

Е.А. Шевчук, B.C. Эрдынеева// Вестник Российского государственного медицинского университет* материалы III Международной (XII Всероссийской) Пироговской студенческой научной медицинской конференции. - Москва, 2008. - № 2. - С.348-349.

A new method of treating staphylococcus carrier states / T.D. Primak, B.S. Erdyneeva, Eu.A. Shevchuk, S.V. Kalinina // European journal of natural history. - 2008. - № 1. - P.94-95.

10. Структурные и микробиологические изменения слизистой входных ворот инфекции при стафилококковом бактерионосительстве ., нх коррекция / Т.Д. Примак

Б.С. Эрдынеева, Е.А. Шевчук, С.В. Калинина //Дальневосточный медицинский журнал. - 2008. - № 4. - С. 21-23.

11. Шевчук Е.А. Сравнительная характеристика микрофлоры половых путей беременных и родильниц / Е.А. Шевчук, Т.Д. Примак // Материалы Всероссийской научно-практической конференции, посвященной 55-летию читинской государственной медицинской академии. - Чита, 2008. - С. 93-94.

12. Способ лечения вульвовагинального кандидоза / Т.Д. Примак, Е.А. Шевчук // Пат. №2354368 Рос Федерация: заявка № 2008103407, заявл. 29.01.2008; зарег. 10.05.2009.

13. Микробиоценоз половых путей женщин в послеродовый период / Т.Д. Примак Е А Шевчук, С.В. Калинина, Б.С. Эрдынеева // Материалы VIII конгресса детских инфекцио-шетов России. - Москва, 2009. - С. 109.

14. Значение ряда иммунологических факторов в развитии инфекционной бактериолак-

ИИ У №рМЯЩИХ женщи» 1 Т-Д- Примак, Б.С. Эрдынеева, С.В. Калинина, Е.А. Шевчук // Забайкальский медицинский вестник. - 2009. - №3, С. 12-14.

15. Микробиоценоз биотонов поворошенных в условиях отделения реанимации и штенсивиой терапии / Т.Д. Примак, Е.А. Шевчук, Н.В. Кривошее.», С.В. Калинина, ».С. Эрдынеева //Детские инфекции. - 2010. - Т. 9. - № 1. - С. - 66-68.

16. Change in the biological properties of staphylococci under the action of the clean flow of те aeroions of negative polarity with staphylococcal presence of bacteria / Primak Т., Erdyneeva I., Shevchuk E„ Kalinina S. // 14th International Congress on Infectious Diseases: mater. 14th 2ID (on March 9-12, 2010, in Miami). - Miami, 2010. - P.2050.

17. Стафилококковое бактерионосительство / Т.Д. Примак, Б.С. Эрдынеева, С.В. Кали-ина, Е.А. Шевчук. - Чита: ИИЦ ЧГМА, 2010. - 74 с.

18. Примак Т.Д. Микробиоценозы новорожденных: закономерности формирования

ути коррекции / Т.Д. Примак, Е.А. Шевчук. - LAP LAMBERT Academic Publishing, 2011 154 р.

19. Оценка микрофлоры грудного молока кормящих женщин/ С.В. Калинина, Е.А. 1евчук // Сибирский медицинский журнал (Иркутск). - 2011. - № И. - С. 77-79.

20. Изменение биологических свойств условно-патогенного стафилококка под тяпнем отринательных аэропопов/ Т.Д. Примак, Е.А. Шевчук, С.Л. Мельникова // юл. ВСНЦ СО РАМИ. - 2012. - Л» 5. - С. 293-295.

СПИСОК СОКРАЩЕНИИ

ВБИ — внутрибольничные инфекции; ВДП - верхние дыхательные пути ГОБ - грамотрицательные бактерии ГСИ - гнойно-септические инфекции ДДМ - диско-диффузионный метод ДО - детское отделение ЖКТ - желудочно-кишечный тракт ЖСА - желточно-солевой агар

КАБА - кровяно-анаэробный бактериальный агар

КОЕ - колониеобразующие единицы

КОС - коагулазоотрицательные стафилококки

МПК - минимальная подавляющая концентрация

МРСА - метицилинрезистентные стафилококки

ОАИ — отрицательные аэроионы

ОМЧ - общее микробное число

ООС - объекты окружающей среды

ОРИТ - отделение реанимации и интенсивной терапии;

ПЦ — перинатальный центр

РДС - респираторный дистресс-синдром

СКС - среда контроля стерильности

УПМ - условно-патогенная микрофлора

ШОП - шейный отдел позвоночника

Подписано в печать 20.12.2012 Формат 60x84 1/16. Бумага Xerox. Гарнитура «Times New Roman» М;л. п. л. 1.3. Тираж 70 экз. Отпечатано в типографии «Профи»

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Шевчук, Евгения Александровна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1 Особенности микробиоты организма новорожденного в современных условиях.

1.2 Микрофлора урогенитального тракта женщин детородного возраста.

1.3 Микробиота среды в условиях акушерского стационара.

1.4 Значение аэроионов для микробиоценоза организма и окружающей среды.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1 Объем исследования.

2.2 Методы исследований.

ГЛАВ АЗ .ХАРАКТЕРИСТИКА МИКРОБОЦЕНОЗОВ НОВОРОЖДЕННЫХ.

3.1 Состав микрофлоры зева.

3.2 Микробный пейзаж пупочного остатка.

3.3 Микрофлора подмышечных впадин.

3.4Исследование интестинальной микрофлоры.

ГЛАВА 4. ХАРАКТЕРИСТИКА МИКРОБИОЦЕНОЗОВ БЕРЕМЕННЫХ, РОДИЛЬНИЦ НА ФОНЕ МИКРОБНОГО ПЕЙЗАЖА ОБЪЕКТОВ ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ В ПЕРИНАТАЛЬНОМ ЦЕНТРЕ.

4.1. Исследование микробиоты беременных и родильниц.

4.2. Структура и распространенность УПМ в отделениях перинатального центра.

ГЛАВА5.

СРАВНИТЕЛЬНАЯ ОЦЕНКА АНТИБИОТИКОЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ МИКРООРГАНИЗМОВ, ВЫДЕЛЕННЫХ ОТ НОВОРОЖДЕННЫХ, РОДИЛЬНИЦ И ОБЪЕКТОВ ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ

ПЕРИНАТАЛЬНОГО ЦЕНТРА.

ГЛАВА 6. ФОРМИРОВАНИЕ МИКРОБИОТЫ ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ И РЕПРОДУКТИВНОГО ТРАКТА РОДИЛЬНИЦ В УСЛОВИЯХ ВОЗДЕЙСТВИЯ АЭРОИОНОВ И ПРОБИОТИКОВ.

6.1. Влияние отрицательных аэроионов на рост и антибиотикорезистентность КОС.

6.2. Коррекция микробиоты половых путей родильниц с помощью пробиотических средств.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Закономерности формирования микробоценозов и биологические свойства симбионтов у новорожденных в условиях акушерско-гинекологического стационара"

Актуальность проблемы. В последние годы во всех странах мира отмечается увеличение частоты госпитальных инфекций у новорожденных, особенно детей, находящихся в отделениях реанимации и интенсивной терапии (ОРИТ), где концентрируются наиболее тяжелые больные с перинатальной патологией (Володин Н.Н.,2004; Дементьева Г.М. и соавт.,2007; Brito A.S.J.,2002; Nagata Е.,2002; Stroll В J., 2011). Показатель частоты внутрибольничных инфекций (ВБИ) у новорожденных согласно данным официальной статистики составляет в среднем 0,6 - 1%, однако, по результатам выборочных исследований ВБИ регистрируются у 15-18% новорожденных (Ковалева Е.П., Семина Н.А., 2002; Касихина С.А. и соавт., 2004; Kreymann K.G et al, 2007).

Первыми микроорганизмами, с которыми контактирует плод, являются бактерии, присутствующие в материнском организме. Идентичность условно-патогенной микрофлоры (УПМ) родовых путей матери и новорожденного доказана многими исследователями (Минасян B.C. и соавт., 2006; Беляева И.А. и соавт., 2007; Савченко Т.Н., 2011). Одновременно колонизация детей условно-патогенными микроорганизмами происходит при контакте с медицинским персоналом через руки, предметы и воздух родильного помещения (Коршунова Г.С., 2004; Егоричева С.Д. и соавт., 2005; Абаев Ю.К., 2006; Dellinger R.P. et al., 2004; Bellid L.L., Ohning B.L., 2006).

В этиологической структуре госпитальной инфекции новорожденных грамположительная флора составляет от 17 до 40% и представлена стафилококками и стрептококками. Причем роль S. aureus несколько снизилась, преобладают коагулазоотрицательные стафилококки (КОС) - S. epidermidis, S. warneri, а также Enterococcus faecalis и Enterococcus faecium. Грамотрицательная флора представлена Е. coli, бактериями родов Klebsiella,

Enterobacter, Proteus. Кроме того, наблюдается увеличение частоты инфекции новорожденных, обусловленной грибами рода Candida (Акимкин В.Г., 2003; Егоричева С.Д. и соавт., 2005; Самсыгина Г.А. и соавт., 2007; Любимова A.B. и соавт., 2010). Следовательно, условия отделений акушерско-гинекологического стационара, где находятся новорожденные, необходимо рассматривать с позиций специфической экологической системы.

В условиях экологического и социального неблагополучия, изменившейся иммунологической резистентности организма человека, нерационального использования значительного арсенала антибактериальных препаратов и антисептических средств наблюдается изменение этиологической структуры возбудителей современных гнойно-септических инфекций (ГСИ) (Воробьев A.A., 2002; Володин H.H., 2008; Oston S. et al., 2004). Профилактика ГСИ включает комплекс дезинфекционных мероприятий, направленных на уничтожение патогенных и условно-патогенных микроорганизмов на объектах в окружении пациента, при этом недостаточно учитывается специфика, закономерности бактериальной контаминации и перманентного реинфицирования новорожденных (Сидоренко C.B., 2003; Белобородов В.Б., 2005; Кафарская Л.И. и др., 2007; Донских Е.Е., 2010).

В свою очередь, представители нормальной микрофлоры составляют систему биологической защиты организма. Облигатная микрофлора и УПМ в составе различных биотопов в форме нормобиоценоза являются основополагающими компонентами саморегуляции, иммунологических реакций и неспецифической защиты организма (Грачева Н.М., Бондаренко В.М., 2009; Нилова Л.Ю., 2009; Kaibni M.N. et al., 2009).

В большинстве лечебных учреждений общее количество микроорганизмов в 1 м3 воздуха превышает существующие нормы (Милева

О.И. и соавт., 2004). Оздоровительный эффект чистого природного воздуха состоит не только в отсутствии пыли, как главного источника микробов и бактерий. Воздух оздоравливается атмосферным электричеством, точнее его носителями — отрицательными аэроионами (ОАИ) (Чижевский A.JI., 1976, 1989, 1995; Партылов B.C., 2001; Колотова О.В., 2002; Ryushi Т., 1998; Nakane Н. Et al., 2002).

Цель: изучить закономерности становления микробиоценозов новорожденных во взаимосвязи с микробиотой матери и бактериальной обсемененностью объектов окружающей среды (ООС) в условиях акушерско-гинекологического стационара и определить влияние на выделенную микрофлору аэроионов в присутствии лактобактерий.

Для выполнения указанной цели поставлены следующие задачи: 1. Изучить закономерности формирования, качественный и количественный состав микробиоценозов новорожденных в динамике в условиях детского отделения (ДО) и ОРИТ с оценкой антибиотикорезистентных свойств микроорганизмов.

2. Исследовать микробные ассоциации цервикального канала беременных женщин, родильниц, объектов окружающей среды с определением антибиотикорезистентности выделенных штаммов микроорганизмов.

3. Изучить влияние аэроионов в присутствии лактобактерий на антибиотикорезистентность условно-патогенных микроорганизмов, выделенных в условиях акушерско-гинекологического стационара.

4. Разработать способ коррекции микроэкологических нарушений репродуктивного тракта женщин с применением аэроионов и пробиотических микроорганизмов.

Научная новизна и теоретическая значимость

Показаны закономерности формирования микробиоценозов новорожденных по биотопам и дням жизни, характеризующиеся у детей ОРИТ в отличие от ДО постепенным заселением микробиологических локусов к 10-му дню жизни преимущественно грамположительными кокками с отставанием процесса контаминации биолокусов бифидобактериями и лактобактериями.

Впервые установлено изменение антибиотикорезистентности в виде увеличения зон подавления роста выделенных штаммов 5. \varneri антибактериальными средствами под влиянием потока ОАИ при участии лактобактерий, возможно, по механизму квантовой реакции, когда свободные электроны, присутствующие на молекулах кислорода, поглощаются молекулами антагонистических микробных клеток, и по принципу когерентности происходит распределение энергии в наиболее чувствительные структуры клеток (плазмиды, реактивные центры ферментных групп).

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Установлены закономерности формирования микробиоценозов новорожденных ДО преимущественно первые трое суток, у детей ОРИТ постепенно к десятым суткам жизни. Состав микробных ассоциаций у новорожденных в ОРИТ в сравнении с группой детей ДО отличается преобладанием энтерококков и КОС, отсутствием в микробном пейзаже бифидобактерий и лактобактерий в связи с применением с первых часов жизни лечебно-диагностических манипуляций, химиотерапевтических средств и искусственного вскармливания.

2. Микробиоценоз половых путей женщин в третьем триместре беременности, представленный преимущественно лактобактериями и грамположительными кокками, в ранний послеродовый период характеризуется увеличением количества анаэробов, в других биотопах родильниц преобладают грамположительные кокковидные бактерии.

3. Обнаружено, что биотопы новорожденных, женщин и ООС содержат преимущественно КОС и энтерококки, значительная часть которых отличается антибиотикорезистентными свойствами, у родильниц достигая двух третей от числа выделенных грамположительных кокков.

4. Получены новые научные сведения о действии отрицательно заряженных аэроионов в присутствии лактобактерий in vitro с подавлением роста и размножения Swarneri, снижением антибиотикорезистентности микроба к ряду антибиотиков в два и более раз.

5. Предлагаемый комплексный метод коррекции микрофлоры половых путей родильниц имеет высокую эффективность (96,7%), безопасен и физиологичен, позволяет большинству женщин нормализовать микрофлору половых путей, способствует ее восстановлению после родов.

Личный вклад автора

Личное участие автора осуществлялось на всех этапах работы и заключалось в отборе и посеве биологического материала от новорожденных, женщин и ООС, выделении, идентификации и оценке чувствительности к антибактериальным препаратам всех выделенных микроорганизмов, статистической обработке результатов, анализе полученных данных, в обобщении и оформлении результатов.

Апробация результатов исследования

Основные положения работы и материалы исследований были доложены и обсуждены на:

IX съезде Всероссийского научно-практического общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов «Итоги и перспективы обеспечения эпидемиологического благополучия населения РФ» (Москва, 2007);

IX Тихоокеанской конференции «Актуальные проблемы экспериментальной, профилактической и клинической медицины» (Владивосток, 2008);

- V Scientific Conference «Present-day problems of experimental and clinical medicine» (Thailand, 2008);

- 14л International Congress on Infectious diseases (Miami, 2010);

- Межрегиональном семинаре «Научные и практические аспекты дисбиозов» (Иркутск, 2011).

Практическая значимость работы

Полученные результаты по влиянию отрицательных аэроионов при участии лактобактерий на культуральные и биологические свойства микроорганизмов, включая их антибиотикочувствительность, позволили предложить аэроионы в сочетании с лактобактериями ввиду их безопасности в ряд мер профилактики внутрибольничного инфицирования.

Материалы диссертации использованы при:

- внедрении в практику работы ООО «Читинская медицинская компания» (Акт внедрения результатов НИР о(т 11.05.2009);

- внедрении в практику работы Перинатального центра ГУЗ «Краевая клиническая больница» Забайкальского края (Акт о внедрении результатов НИР от 12.09.2010 г); организации и проведении учебного процесса на кафедре микробиологии с вирусологией и иммунологией ГОУ ВПО «Читинская государственная медицинская академия» (Акт о внедрении результатов НИР от 11.09.2009).

Публикации

Структура и объем диссертации

Диссертация изложена на 154 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, собственных результатов, общего заключения и выводов, включает 42 таблицы, 35 рисунков и список литературы, содержащий 187 источников, в том числе 134 отечественных и 53 зарубежных.

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Шевчук, Евгения Александровна

Выводы:

1. Микробиоценоз организма новорожденных начинает формироваться с ротоглоточного биотопа с первых суток жизни у детей ДО и третьих суток у новорожденных ОРИТ. У новорожденных ОРИТ к десятым суткам жизни определяются микробные ассоциации во всех биотопах, преобладают штаммы & \varneri (26,2%) и Е. /аесаИя (32,16%), отсутствуют бифидо- и лактобактерии. У детей ДО к пятым суткам жизни происходит ассоциативное заселение всех биотопов с участием бифидо- и лактобактерий.

2. Микробиоценозы половых путей беременных женщин и родильниц совпадают по видовому составу микроорганизмов, до родов в два раза чаще встречаются микробные ассоциации и преобладают лактобактерии (93,3% проб). В цервикальном канале родильниц значительно чаще встречаются бактероиды (53,0%), в других биотопах преобладают грамположительные кокки.

3. Наиболее контаминированными объектами окружающей среды в ОРИТ, ДО и родовом блоке являются руки медицинского персонала (47,8%) и специализированная одежда (39,2%). Среди выделенных штаммов преобладают грамположительные кокковидные бактерии, среди них в трети случаев обнаруживается & \varneri.

4. В различных биотопах новорожденных, беременных, родильниц и ООС преобладают грамположительные кокки - 5. \varneri, Б. epidermidis, 5. Наето1уИсш, Е. /аесаШ, устойчивые к большинству применяемых в ОРИТ антибактериальных средств. Наибольшее количество резистентных штаммов выделено из биотопов родильниц (73,4%).

5. Антибиотикорезистентность штаммов S. warneri, выделенных от новорожденных, женщин и ООС, в присутствии лактобактерий Lactobacillus acidophilus N.V.Ep. 317/402 к ряду антибиотиков (ванкомицин, меропенем, амикацин) снижается в среднем в два раза.

6. Воздействие потока отрицательных аэроионов при экспозиции 120 минут приводит к снижению плотности популяции S. warneri с 8 lg (5x108) КОЕ до 6 lg (5x106) в 89% проб. Антибиотикорезистентность штаммов S. warneri при обработке потоком аэроионов с течение 180 минут в смеси с лактобактериями Lactobacillus acidophilus N.V.Ep. 317/402 снижается в среднем в четыре раза в 92,2% проб.

7. Комплексный метод коррекции микрофлоры половых путей родильниц имеет высокую эффективность (96,7%), безопасен и физиологичен, позволяет большинству женщин нормализовать микрофлору половых путей, способствует ее восстановлению после родов.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Всего за период 2006-2010 гг. было исследовано 630 проб от новорожденных ОРИТ, 250 проб от новорожденных ДО, 60 проб от беременных женщин, 102 от родильниц, 3125 из объектов внешней среды. У новорожденных исследовались ротоглотка — 1, 3 и 7 сутки, кожа подмышечных впадин и пупочная ранка - на 3 и 5 сутки, кал на УПМ - 5 и 10 сутки. Материалом для микробиологических исследований беременных и родильниц являлось отделяемое цервикального канала. Из числа объектов внешней среды изучали контаминацию ООС - предметов ухода, обихода, медицинского оборудования и инструментария, рук медицинского персонала, специализированной одежды и обсеменение воздуха.

В исследуемую группу вошли дети из ОРИТ с различными диагнозами (церебральная ишемия, врожденная аномалия развития, натальная травма шейного отдела позвоночника, родовой дистресс-синдром, нарушение кровообращения на уровне шейного отдела позвоночника), различного родоразрешения и массы тела при рождении. На предварительном этапе исследований было выяснено, что микробное заселение локусов новорожденных ОРИТ не имело значительных различий в зависимости от перечисленных обстоятельств. Исходя из этого факта, для дальнейшего анализа использовался биоматериал новорожденных, находящихся в ОРИТ, независимо от диагноза, способа родоразрешения и веса при рождении.

Формирование микробиоценоза новорожденных ОРИТ и ДО имело ряд важных различий. Заселение ротоглотки новорожденных в 1 сутки жизни определялось как свободное от микроорганизмов в 82,8 % в ОРИТ и в 50% случаев в ДО. К 3 суткам жизни новорожденных в ОРИТ отсутствие роста отмечалось у 34,2% , в ДО в 100% случаев зев детей был контаминирован. К 7 суткам жизни детей ОРИТ отсутствие роста на слизистой ротоглотки сократилось до 18,5%. Заселение микрофлорой пупочного остатка новорожденных ОРИТ на 3 сутки наблюдалось в 34,3% случаев, в ДО - в 94%. При исследовании подмышечных впадин в ОРИТ на 3 сутки отсутствие роста наблюдалось в 72,9%, стерильность биотопа в ДО определялось только в 4% случаев. При исследования капа новорожденных отсутствие роста выявлено не было. Установлено, что основные характеристики биотопов новорожденных положительно коррелировали между собой.

Изучение формирования микробного пейзажа ротоглотки новорожденных ОРИТ в динамике показало, что S. mitis, Е. faecalis, S. haemolyticus, S. warneri присутствовали в зеве с рождения и на протяжении всего периода наблюдения с 1 до 7 суток. Наибольшая частота встречаемости в большинстве проб наблюдалась у штаммов S. haemolyticus (от 2,8 до 41,4%) и Е. faecalis (от 4,3 до 17,1 %). На 3 и 7 сутки высевались Candida spp. (4-7%) и в единичных случаях энтеробактерии - К. pneumoniae и Е. coli. Ассоциации микробов наблюдались с момента рождения, однако их количество возрастало с 2,8% на 1 сутки до 24,3% на 7 сутки.

Микроорганизмы, присутствующие в ротоглотке новорожденных ДО с рождения (от 1 до 3 суток), с возрастом высевались чаще, а именно S. mitis (от 30 до 76%) и Lactobacillus spp. (от 16 до 36%) соответственно дням жизни. На 1 сутки высевались Candida spp. - 16%. Штаммы S. haemolyticus определялись на 3 сутки и их число составляло 16%. Монокультур к 3 суткам становилось больше в 2 раза по сравнению с 1 сутками (от 34% до 72%). Ассоциации микробов наблюдались с момента рождения, однако их количество возрастало от 16% в 1 сутки до 30% на 3 сутки. В микрофлоре зева новорожденных преобладали грамположительные бактерии 93,8%, из них КОС - 51,6±16,9%, энтерококков - 43,8±17,1% (от числа выделенных культур). Доля грамотрицательных микроорганизмов составляла в среднем 4,6±1,2% и увеличения её в динамике не отмечено.

В микробиоценозе пупочного остатка новорожденных ОРИТ и ДО обнаруживались S. haemolyticus и S. warneri. В ОРИТ редко встречались штаммы S. haemolyticus - 12,5% случаев. В ДО высевались S. haemolyticus и S. epidermidis — соответственно 74,5 и 6,4% от числа всех выделенных культур. Штаммы Е. faecalis и Е. faecium встречались только в ОРИТ - 53% и 13,7% соответственно. Присутствие S. warneri отмечено сравнительно на одном уровне: ОРИТ -20,8% и ДО - 19,1% проб.

В микробиоценозе подмышечных впадин новорожденных ОРИТ и ДО на 1 сутки высевались S. warneri: в ОРИТ - 14,3%, в ДО - 92% случаев. В ОРИТ на 3 сутки преобладали грамположительные кокки. Наибольший процент занимали штаммы S. warneri - 52,6%; на долю Е. faecalis, S. haemolyticus и S. epidermidis приходилось по 5,3%, 5,3% и 36,8 % от всех выделенных культур. В ДО наибольшее количество приходилось на штаммы S. warneri - 85,2% от всех выделенных культур, в единичных случаях отмечались S. epidermidis - 3,7%. Высевались грамотрицательные палочки - К. pneumoniae, К. ozaenae, Е. coli -5,5%, 1,8% и 3,7% соответственно.

Микробный пейзаж кишечника детей обоих отделений по аэробному спектру совпадал. В микробиоценозе кишечника новорожденных ОРИТ и ДО выделялись Enterococcus spp., причем большее количество приходилось на Е. faecalis и Е. faecium - 58,8% и 44,1% соответственно. Высевались КОС, в основном это S. haemolyticus (13,7% в ОРИТ и 20,6% в ДО) и S. warneri по 5,9%. Имели место штаммы Е. coli, Candida spp., их количество было практически одинаковым в обоих отделениях и составляло около 10%. Анаэробная микрофлора в виде Bifidobacterium spp. и Lactobacillus spp. высевалась только из испражнений новорожденных ДО и составляла 5,9% и 3,9% соответственно.

Формирование нормальной микрофлоры новорожденного начинается сразу после рождения [59]. Исследованные локусы новорожденных, находящихся в ОРИТ, контаминировались микрофлорой окружающей среды, преимущественно грамположительными кокками, заселение происходило постепенно к 10-м суткам жизни. Локусы детей ДО с первых дней жизни заселялись в основном микрофлорой матерей. Наиболее разнообразный микробный пейзаж наблюдался в локусах новорожденных ОРИТ после 3 суток жизни. У детей ДО микробный фон формировался уже к 5-7-м суткам и имел более стабильные показатели.

Известно, что адгезивная активность резидентных анаэробов, кандид и грамположительных кокков выше, чем у транзиторных микроорганизмов. Формирование различных биотопов ребенка находится в тесной взаимосвязи между собой, поэтому основные закономерности ассоциативных связей у детей ОРИТ и ДО идентичны в разных биолокусах. Преобладающие в обеих группах детей грамположительные кокки быстрее и эффективнее адгезируются на эпителиальных клетках пищеварительного тракта, в первую очередь, ротоглотки.

В процессе исследований цервикального канала у беременных и родильниц микробный пейзаж был представлен аэробной и анаэробной микрофлорой. В микробиоценозе женского репродуктивного тракта лактобациллы играют наиболее важную роль, на их долю приходится 95-98% всей микрофлоры влагалища [38]. В двух группах женщин выделялись анаэробы и грамположительные аэробные кокки. У беременных женщин в посевах преобладали палочки рода Lactobacillus spp. - 98,3%, тогда как у родильниц чаще высевались бактероиды - 53,0%. Из аэробной микрофлоры цервикальных каналов женщин двух групп выделялись КОС - S. warneri (15,0% и 41,2%), S. epidermidis (5,0% и 14,7%), энтеробактерии, Е. coli (13,3% и 8,8%) и Candida spp. по (16,7% и 20,6%), реже высевались микроорганизмы из рода Corynebacterium spp. - 3,3 %.

Вагинальная микрофлора в генитальном тракте во время беременности становилась более однородной, этот факт соответствует литературным данным.

Создаются благоприятные условия для жизнедеятельности лактобактерий, количество которых во влагалище беременных женщин значительно превышают таковые во влагалище у небеременных женщин [38, 90]. В то же время уменьшаются количества бактероидов и других неспорообразующих строгих анаэробов, а также аэробных грамположительных кокковидных и грамотрицательных палочковидных бактерий. Эти изменения достигают пика в III триместре беременности, что в последующем снижает вероятность контаминации плода условно-патогенными микроорганизмами при его прохождении через родовые пути [95, 119].

После родов в микрофлоре влагалища происходят существенные изменения - как качественные, так и количественные. В послеродовом периоде существенно увеличиваются количества неспорообразующих грамотрицательных строгих анаэробов - Bacteroides spp. и грамотрицательных факультативно-анаэробных бактерий - Е. coli и происходит снижение содержания лакто - и бифидумбактерий. Во время родов происходит первичная контаминация организма ребенка [128].

Исследования микробиоты ротоглотки, носа и грудного молока родильниц на третьи сутки после родов показали преобладание КОС во всех локусах. В ротоглотке отмечался широкий спектр зеленящих стрептококков. Со слизистой носа в единичных случаях выделялись палочки рода Corynebacterium и грибы рода Candida по 2,9%. Степень обсеменения ротоглотки составила 4,4±0,13 lg КОЕ/мл, грудного молока - 3,l±0,071g КОЕ/мл и носа - 3,l±0,21g КОЕ/мл. Все приведенные локусы были контаминированы облигатной и транзиторной микрофлорой.

Современными исследованиями достоверно показано, что дисбиоз организма матери является патогенетически значимым механизмом неправильной закладки микроэкосистемы новорожденных, их дезадаптации и соответственно снижения общей резистентности организма.

Спектр микроорганизмов, выделенных с ООС, был представлен в основном грамположительными кокками. Во всех исследуемых отделениях преобладали КОС (S. warnerii, S. haemolyticus, S. epidermidis, S. saprophyticus) -от 19 до 32,6%. В ОРИТ и ДО высевались E.faecalis и E.facium в 6-9% случаев. Во всех отделениях в единичных случаях были выделены Е. coli (1%), Е. aerogenes (2%) и S. aureus (2-2,5%). КОС преимущественно выделялись с медицинского оборудования - 30,9%, специализированной одежды - 38,2%, предметов обихода - 37,6%. Энтерококки чаще выделялись со специализированной одежды персонала - 8,8% проб.

Микробиологическое исследование смывов с рук медицинского персонала с целью выявления носительства потенциальных возбудителей ВБИ проводились до и после гигиенической обработки рук кожными антисептиками. Руки персонала до гигиенической обработки были контаминированы в 40% случаях наблюдения бактериями группы КОС: S. warnerii - 32%, S. haemolyticus — 6%, S. epidermidis -2%. После обработки рук кожными антисептиками во всех смывах роста микроорганизмов не отмечалось. Приведенные результаты подтверждают литературные данные о том, что современные безводные кожные антисептики при адекватном соблюдении медперсоналом акушерских стационаров правил гигиены рук позволяют снизить микробную обсемененность кожи рук и предотвратить перенос потенциальных возбудителей ВБИ [53].

Обнаружена положительная корреляционная связь между показателями микробной обсемененности биотопов новорожденных ОРИТ и ДО с одной стороны и ООС с другой.

Важным критерием при анализе эпидемической ситуации ВБИ служит резистентность микроорганизмов [5]. Нами было проведено сравнение антибиотикограмм микроорганизмов, выделенных от новорожденных, от женщин и с объектов внешней среды. Из рода стафилококков исследовали часто встречающиеся штаммы S. warneri, S. epidermidis, S. haemolyticus.

Сравнение резистентности к антибактериальным препаратам данных штаммов, выделенных от новорожденных ОРИТ и ДО, проводили по отдельным локусам и во все сроки исследования. Установлено, что возбудители, выделенные с объектов окружающей среды, по уровню резистентости не отличались от таковых из биологических материалов. В структуре КОС, выделенных из биотопов беременных и родильниц, наибольшей резистентностью отличались штаммы родильниц.

Выявлены положительные корреляционные связи между показателями антибиотикорезистентности штаммов, выделенных от новорожденных обоих отделений, женщин и ООС.

Проводили экспериментальные исследования с микроорганизмами S. warneri, выделенными от новорожденных, и обладающими выраженной антибиотикорезистентностью. Штаммы S. warneri были исследованы в смеси с бактериями рода Lactobacillus spp., а также подвергались воздействию аэроионов. Под влиянием потока отрицательно заряженных ионов и с добавлением лактобактерий в питательный агар штаммы S. warneri изменяли антибиотикорезистентные свойства: увеличивались зоны подавления роста при ДДМ, МПК9о снижалась в 92,2% проб.

Согласно современным научным данным чистый поток отрицательно заряженных аэроионов представляет собой молекулы кислорода с осевшим на них электроном. Такая форма молекулы не вызывает в клетках активации биохимических реакций радикального типа, а действует, испуская свободные электроны [96]. Следовательно, в микробной клетке происходят квантовые реакции, поток энергии перераспределяется по принципу когерентности (согласованности волновых процессов во времени), возбуждение идет в виде волны, которая одновременно проходит по различным молекулам, автоматически останавливаясь на самом эффективном месте - реактивном центре [149. 150,169,170].

Известно, что метаболиты резидентной микробиоты всегда отличаются выраженным антагонистическим действием в отношении условно-патогенных представителей микрофлоры тела человека. Несомненно присутствие лактобактерий имеет решающее значение в проведенном эксперименте, однако и воздействие аэроионов сказывается на структурах микробной клетки, имеющих высокую мутационную активность, или реактивных центрах молекул бактериальных ферментов. В данном исследовании использовались безплазмидные штаммы лактобактерий Lactobacillus acidophilus N. V.Ep. 317/402. Возможно, поток ОАИ воздействует преимущественно на плазмиды стафилококков, и/или активизирует ферментные системы лактобактерий, что в итоге приводит к снижению роста и размножения стафилококков и повышает их чувствительность к антибактериальным средствам.

Проводимая коррекция микробиоты половых путей родильниц способствует поддержанию эубиоза половых путей женщин, что положительно сказывается на течении послеродового периода, с другой стороны оказывая благоприятное воздействие на формирующуюся микробиоту новорожденного ребенка и соответственно его адаптивные возможности.

Таким образом, полученные в данном исследовании результаты дают основание расценивать микробиологический мониторинг как ключевой момент в профилактике нарушений формирования микроэкосистемы новорожденных в условиях акушерско-гинекологического стационара. Исследование процессов формирования микробиоты новорожденных по дням жизни, по отдельным локусам в зависимости от микрофлоры окружающей среды и материнских штаммов микроорганизмов позволяет разрабатывать меры предупреждения дезадаптации новорожденных ОРИТ, тесно связанной с микробным дисбалансом организма ребенка. Применение безопасных и физиологичных методов профилактики является передовым в современных медицинских технологиях. Отрицательные аэроионы и пробиотики отличает безопасность для человека, включая новорожденных, доступность в применении и возможность их использования, как с лечебной, так и профилактической целью.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Шевчук, Евгения Александровна, Иркутск

1. Абаев Ю.К. Госпитальная инфекция у новорожденных / Ю.К. Абаев // Детская хирургия. 2006. - № 5. - С. 36-41.

2. Агаева М.И. Прогнозирование функционального состояния новорожденных на этапе перинатальной диагностики / М.И. Агаева, З.А. Агаева // Современные проблемы науки и образования. 2011. - №6. — С. 9.

3. Акимкин В.Г. Группы внутрибольничных инфекций и системный подход и их профилактике в многопрофильном стационаре / В.Г. Акимкин // Эпидемиология и инфекционные болезни. 2003. - №5. - С. 15-19.

4. Акимкин В.Г. Система профилактики внутрибольничных инфекций в России / В.Г. Акимкин // Эпидемиология и инфекционные болезни. -2005. №1. - С.4-8.

5. Аксенова C.B. Влияние аэроионов кислорода на некоторые показатели гемостаза в норме и при патологии: Автореф. дис. . канд. мед. наук / C.B. Аксенова; МордГУ. Саранск, 1995. - 20 с.

6. Акушерство, гинекология и здоровье женщины: научное издание / Ф. Kapp, X. Рициотти, К. Фройнд, С. Кахан; ред. В.Н. Прилепская; пер. с англ. Р.В. Парменов. М.: МЕДпресс-информ, 2005. - 174 с.

7. Анкирская A.C. Особенности нормальной микрофлоры влагалища у девочек дошкольного возраста / A.C. Анкирская, В.В. Муравьева // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. 2004. - № 4. -С. 54-59.

8. Анкирская, A.C. Бактериальный вагиноз / A.C. Анкирская // акушерство и гинекология. 2005. - № 3. - С. 10

9. Антонов А.Г. Новый метод респираторной поддержки недоношенных детей / А.Г. Антонов, E.H. Байбарина, Л.Ю. Рындин // Рос. вестник педиатрии и перинатологии. 2006. - № 4. - С. 12-14.

10. Ахмадеева Э.Н. Особенности микробного пейзажа новорожденных в зависимости от способа родоразрешения / Э.Н. Ахмадеева, В.Р. Амирова, O.A. Брюханова // Рос. Вестник перинатологии и педиатрии. 2006. - № 5.-С. 19-22.

11. Аширов Р.З. Влияние аэроионов на перекисное окисление липидов и агрегацию тромбоцитов при некоторых заболеваниях гепатопанкреатодуоденальной системы: Автореф. дисс. . канд. мед. наук / Р.З. Аширов; МордГУ. Саранск, 1995. - 18 с.

12. Ашиткова Н.В. Эффективность препарата рекомбинантного интерлейкина 2 человека в терапии неонатального сепсиса и тяжелых неонатальных инфекций / Н.В. Ашиткова, H.H. Володин, М.В. Дегтярева и др. // Педиатрия. 2009. - № 88(3). - С. 80-86.

13. Аэроионотерапия в лечении больных с бронхолегочной патологией / Григорьев С.П. и др. // Российский медицинский журнал. 2000. - № 6. — С. 44-46.

14. Аэроионотерапия в профилактике острых респираторных заболеваний у детей / М.А. Хан, И.П. Бобровницкий, A.B. Червинская и др. // Вопросы курортологии, физиотерапии и лечебной физической культуры. 2006. -№6.-С. 19-21.

15. Базеев Э.Г. Влияние некоторых антиоксидантов и отрицательных аэроионов кислорода на процессы гемостаза при гиподинамии: Автореф. дис. канд. мед. наук / Э.Г. Базеев; МордГУ. Саранск, 2001. - 26 с.

16. Белокрысенко С.С. Случай длительного носительства Pseudomonas aeruginosae на коже рук медицинской сестры отделения реанимацииноворожденных / С.С. Белокрысенко, Н.Г. Кочергин, П.П. Куксюк // Клиническая лабораторная диагностика. 2003. - № 7. — С. 52-53.

17. Беляева И.А. Функциональное состояние основных систем жизнедеятельности организма новорожденных / И.А. Беляева, Г.В. Яцык и др. // Рос. педиатрический журнал. 2007. - № 3. — С. 49-55.

18. Богдашкина О.Н. Влияние ЛБК-149 и отрицательных аэроионов кислорода на некоторые показатели эндотоксикоза при экспериментальной неоплазии: Автореф. дис. . канд. мед. наук / О.Н. Богдашкина; МордГУ. Саранск, 2002. - 26 с.

19. Бондаренко В.М. Прикладные аспекты молекулярной биологии бифидобактерий и лактобактерий / В.М. Бондаренко // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. 2006. - № 2. - С. 8997.

20. Бориспок Р.В. Влияние аэроионотерапии на состояние лунки после удаления зуба / Р.В. Бориспок, Т.Т. Фаизов, М.П. Шулаева // Казанский медицинский журнал. 2007. - Т. ЬХХХУІІІ, № 6. - С. 584-587.

21. Борисюк Р.В. Аэроионотерапия при лечении альвеолита в амбулаторной практике при лечении альвеолита в амбулаторной практике хирургической стоматологии: Автореф. дис. . к-та мед. наук / Р.В. Борисюк, Казан, мед. ун-т. Казань, 2008. - 19 с.

22. Бочков И.А. Сравнительная характеристика микрофлоры влагалища рожениц носителей стрептококка группы В и свободных от носительства / И.А. Бочков и др. // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. - 2006. - № 5. - С. 89-92.

23. Браун Я.А. Физика и технология источников ионов / Я.А. Браун. М.: Мир, 1998.-495 с.

24. Буданов П.В. Клиническое и патогенетическое обоснование выбора метода лечения бактериального вагиноза у беременных / П.В. Буданов, А.Г. Асланов // Вопросы гинекологии, акушерства и перинатологии. — 2006.-№ 6.-С. 23-28.

25. Буданов П.В. Нарушения микроценоза влагалища / П.В. Буданов, О.Р. Баев, В.М. Пашков // Вопросы гинекологии, акушерства и перинатологии. — 2005. — № 2. С.78-80.

26. Буданов П.В. Новое в терапии нарушений микроценоза влагалища / П.В. Буданов, М.А. Стрижакова // Вопросы гинекологии, акушерства и перинатологии. 2006. - Т. 5, № 1. - С. 104-108.

27. Буланов P.JI. Особенности клинико-микробиологической адаптации новорожденных при оперативном родоразрешении: дис. . канд. мед. наук / P.JI. Буланов; АГМА. Архангельск, 2008. - 114 с.

28. Буштырев В.А Бальная оценка состояния здоровья недоношенных новорожденных с перинатальными инфекциями / В.А. Буштырев, Н.Б. Лаура // Рос. вестник перинатологии и педиатрии. 2006. - № 3. - С.11-15.

29. Васильев Л.Л. Влияние аэроионов на устойчивость организма к действию патогенных агентов / Л.Л. Васильев // Мат. Всесоюзной конференции по аэроионизации и гидроаэроионизации. Ташкент, 1962. -С. 174-176.

30. Веселов A.B. Эмпирическая терапия инвазивного кандидоза в отделениях реанимации и интенсивной терапии: современное состояние проблемы / A.B. Веселов // Клин, микробиология. Антимикробная терапия.-2011.-№ 13(1).-С. 4-18.

31. Влияние ионизированной воздушной среды на гормональные спектры организма человека / Тигринян Р.Я. и др. // Космическая биология и авиакосмическая медицина. 1980. - № 6. — С. 8.

32. Воейков B.JI. Возможные физико-химические механизмы биологического действия аэроионов Чижевского (супероксида) / В.Л. Воейков // Космос и мировая история: Мат. Междунар. конф. — М.: Гелиос, 2002. С. 211-214.

33. Володин H.H. Актуальность проблемы нозокомиальных инфекций в неонатологии / H.H. Володин, С.А. Касихина // Вопросы гинекологии, акушерства и перинатологии. 2004. - Т. 3, № 1. - С. 74-79.

34. Володин H.H. Проблемы фармакотерапии в неонатологии / H.H. Володин // Педиатрия. 2005. - № 1. - С. 18-22.

35. Герсалия Т.М. Сравнительная оценка микробной колонизации новорожденных в зависимости от системы работы родильных домов / Т.М. Герсалия, Д.П. Чиквиладзе, К.П. Немсадзе // Georg. Med. News. -2005. -№ Ю. -С. 53-57.

36. Глушанова H.A. Биологические свойства лактобацилл / H.A. Глушанова // Бюлл. сиб. медицины. 2003. - Т. 2, № 4. - С. 50-57.

37. Гольдштейн Н.И. Биофизические аспекты физиологического действия экзогенного кислорода на животных: Автореф. дис. . докт. биол. наук / Н.И. Гольдштейн; МГУ. М., 2000. - 36 с.

38. ГОСТ 12.1.005-076. Воздух рабочей зоны. Общие санитарно-гигиенические требования.

39. Готовский Ю.В. Дисбактериоз. Диагностика и терапия / Ю.В. Готовский, Л.Б. Косарева, Н.М. Кемпе. -М.: ИМЕДИС, 2004. 64 с.

40. Гриценко Л.З. Особенности микробного пейзажа пациенток с кандидозной инфекцией / Л.З. Гриценко, H.A. Резниченко // Репродуктивное здоровье женщины. 2006. - № 3. - С. 161.

41. Грищенко О.В. Клинические и прогностические аспекты лечения вагинитов смешанной этиологии. / О.В. Грищенко и др. // Репродуктивное здоровье женщины. 2006. - № 3. - С. 126.

42. Губернский Ю.Д. Гигиенические аспекты химического загрязнения окружающей среды крупных городов / Ю.Д. Губернский, Е.А. Можаев. -М.: Обзор, инфо., 1985. С. 8.

43. Гуменюк Е.Г. Акушерство: физиология беременности / Е.Г. Гуменюк, О.К. Погодин, Т.А. Власова. Петрозаводск: ИнтелТек, 2004. - 170 с.

44. Гусева Т.С. Иммунологическое обоснование дифференцированного подхода к проведению иммунокоррекции у новорожденных с внутриутробной инфекцией / Т.С. Гусева, О.В. Паршина // Ж. аллергология и иммунология в педиатрии. 2008. - № 3. - С. 40.

45. Данилова О.П. Микробиоценоз женских гениталий / О.П. Данилова, В.А. Пономаренко. С-Петербург, 2007. - 79 с.

46. Дементьева Г.М. Комплексное лечение бактериальной инфекции у новорожденных / Г.М. Дементьева и др. // Рос. вестник перинатологии и педиатрии. 2007. - №1. - С. 9-16.

47. Демьянова Т.Г. Анализ смертности глубоко недоношенных детей на первом году жизни / Т.Г. Демьянова, А.Г. Румянцева, Т.Г. Авдеева и др. // Рос. педиатрический журнал. 2005. - № 2. - С.22-26.

48. Дикова О.В. Ультраструктура кожи, метаболические и иммунологические показатели у больных псориазом на фоне применения димсфосфона и аэроионов кислорода: Автореф. дис. . канд. мед. наук / О.В. Дикова; МордГУ. Саранск, 1997. - 19 с.

49. Донских Е.Е. Молекулярный и микробиологический мониторинг становления микрофлоры кишечника новорожденных: Автореф. дис. . канд. мед. наук / Е.Е. Донских; РГМУ. Москва, 2010. - 29 с.

50. Егоричева С.Д. Внутрибольничные инфекции в родовспомогательных учреждениях: этиология, эпидемиология и профилактика / С.Д. Егоричева, A.B. Овчинников и др. // Эфферентная терапия. 2005. - №1. -С. 63-69.

51. Есина М. В. Исследование антиатерогенного действия вамина и отрицательных аэроионов кислорода в условиях экспериментальной гиперхолестеринемии: Автореф. дис. . канд. мед. наук / М. В. Есина; МордГУ. Саранск, 2002. - 19 с.

52. Жирнов В.А. Управляемая аэроионотерапия в оздоровлении часто болеющих детей / В.А. Жирнов, В.А. Калихман, A.A. Гаспарова // Известия Самарского науч. центра РАН. 2009. - Т. 11, № 1 (5). - С. 854856.

53. Зайцева О.Ю. Оптимизация аэроионотерапии в лечении больных хроническим обструктивным бронхиром: Автореф. дис. . канд. мед. наук / О. Ю. Зайцева; МГУ. М., 1996. - 21 с.

54. Зорькина A.B. Влияние атмосферного электричества на гемостаз при длительном ограничении подвижности / A.B. Зорькина, В.П. Скипетров // Атеротромбоз проблема современности. - М.: Мед., 1999. - 246 с.

55. Зуева JI. П., Яфаев Р. X. Эпидемиология: Учебник. — СПб: ООО «Издательство ФОЛИАНТ», 2005. — 752 с.

56. Иванова В.В. Микрофлора: роль, нарушения, коррекция. Становление микрофлоры у детей первого года жизни / В.В. Иванова. Новосибирск: Вектор-БиАльгам, 2005. - 38 с.

57. Инчина В.И. Влияние аэроионов кислорода на гемостаз и развитие атеросклероза при гиподинамии / В.И. Инчина, В.П. Скипетров, A.B.

58. Зорькина, B.B. Мартынова // Патологическая физиология и экспериментальная терапия. 1996. - № 2. — С. 32-35.

59. Исамухамедова М.Т. Сочетанное применение виферона и полиоксидония у детей раннего возраста с внутриутробными инфекциями / М.Т. Исамухамедова, М.К. Шарипова // Цитокины и воспаление. 2010. - Т.9, № 1. - С. 39-44.

60. Йозефсон С.А. Бактериальный вагиноз / С.А. Йозефсон. Чита: ИИЦ ЧГМА, 2003.-37 с.

61. Камилова Н.М. Значение оценки течения беременности и родов в улучшении перинатальных исходов / Н.М. Камилова // Рос. вестник перинатологии и педиатрии. 2006. - № 1. — С. 14-20.

62. Кан Н.Е. Современные представления о внутриутробной инфекции / Н.Е. Кан, Н.В. Орджоникидзе // Акушерство и гинекология. 2004. - № 6.-С. 3-5.

63. Касихина С.А. Частота развития госпитальной инфекции у новорожденных педиатрических клиник / С.А. Касихина, О.И. Милева, E.H. Морозова // Педиатрия. 2004. - № 3. - С. 66-69.

64. Кафарская Л.И. Особенности становления микрофлоры у детей раннего возраста / Л.И. Кафарская, Б.А. Ефимов, Е.А.Постников // Детские инфекции. 2006. - Т. 5, № 1. - С. 6-11.

65. Кафарская Л.И. Локальный иммунитет кишечника / Л.И. Кафарская, H.H. Володин, Б.А. Ефимов и др. // Вопросы практической педиатприи. -2007. Т.2, № 4. с. 46-50.

66. Кира К.Ф. Инфекции и репродуктивное здоровье (часть II). Биохимические и биологические свойства влагалищной жидкости // Журнал акушерства и женских болезней. 2004. - № 3. - С. 15-19.

67. Клиническая оценка жидкого концентрата «Наринэ-Ф-баланс» при дисбиозе толстой кишки / Т.И. Рябиченко, А.Г. Хачатрян, А.И.

68. Калмыкова, М.Ю. Денисов // Гастоэнтерология Санкт-Петербурга. -2006. -№ 1-2.-С. 132.

69. Коваленок Г.А. Регуляция микроэкологических нарушений кишечника у новорожденных детей пробиотиками с бифидо- и лактобактериями / Г.А. Коваленок // Сибирский медицинский журнал (Иркутск). 2004. - Т.19, № 1.-С. 53-55.

70. Козлов P.C. Современные тенденции антибиотикорезистентности возбудителей нозокомиальных инфекций в ОРИТ России / P.C. Козлов, О.У. Стецюк, И.В. Андреева // Интенсивная терапия. 2007. - № 4. - С. 10-15.

71. Кондрашова М. Н. Отрицательные аэроионы и активные формы кислорода / М. Н. Кондрашова // Биохимия. 1999. - Т. 64, № 3. - С. 5456.

72. Корнева М.Ю. Состояние здоровья внутриутробноинфицированных детей / М.Ю. Корнева и др. // Рос. вестник педиатрии и перинатологии. -2005.-№2.-С. 48-53.

73. Кругликов В.Д. Возможности коррекции дисбиотических состояний биотопов влагалища и цервикального канала у беременных групп риска / В.Д. Кругликов, Е.Ю. Лебеденко, И.О. Крыжановская и др. // Русский медицинский журнал. 2006. - № 1. - С. 27-31.

74. Крыжановская И.О. Комплексное лечение перинатальных инфекций у недоношенных новорожденных / И.О. Крыжановская, В.А. Буштырев, И.Б. Лаура // Российский вестник педиатрии и перинатологии. 2006. -№ 2. - С. 24-27.

75. Кулаков В.И. Плацентарная недостаточность и инфекция. М.: Медицина. - 2004. - 494с.

76. Кулаков В.И. Проблемы и перспективы выхаживания детей с экстремально низкой массой тела на современном этапе / В.И. Кулаков,

77. А.Г. Антонов, E.H. Байбарина // Рос. вестник перинатологии и педиатрии. 2006. - № 4. - С.8-12.

78. Лабинская A.C. Частная медицинская микробиология с техникой микробиологических исследований / A.C. Лабинская. — М.: Медицина, 2005.-600 с.

79. Ливанова Л.М. Коррекция вегетативных нарушений у человека отрицательно-заряженными аэроионами / Л.М. Ливанова и др. // Журнал высшей нервной деятельности. — 1996. Т. 49, № 5. - С. 23-24.

80. Ливанова Л.М. Профилактическое влияние отрицательно заряженных аэроионов при остром стрессе у крыс с различными типологическими особенностями поведения / Л.М. Ливанова и др. // Журнал высшей нервной деятельности. 1996. - Т. 46, № 3. - С. 16-18.

81. Лившиц М. Н. Аэроионификация. Практическое применение / М. Н. Лившиц. -М.: Стройиздат, 1990. 168 с.

82. Любимова A.B. Основные компоненты инфекционного контроля в отделении реанимации и интенсивной терапии новорожденных / A.B. Любимова, Л.П. Зуева, А.М. Пулин, Ю.С. Александрович // Эфферентная терапия. 2010. - Т.16, № 3. - С. 91-97.

83. Мадаев В.В. Применение аэроионотерапии в комплексном лечении больных хроническим обструктивным бронхитом: Автореф. дисс. . канд. мед. наук. М., 1992. - 23 с.

84. Мархулия Х.М. Этиологическая характеристика нозокомиальных пневмоний у недоношенных детей и стратегия антибактериальной терапии: автореф. дис. . канд. мед. наук / Х.М. Мархулия. М., 2005. -22 с.

85. Мизун Ю.Г. Космос и здоровье / Ю.Г. Мизун, П.Г. Мизун // Знание. -2004. -144 с.

86. Микробиологические аспекты дисбактериоза кишечника у амбулаторных больных различных возрастных групп г. Москвы / М.Ю. Чернуха, Г.В. Алексеева, JI.P. Аветисян и др. // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2005. - № 4. - С. 69-73.

87. Милованов А.П. Микроокружение эмбриона человека / А.П. Милованов, М.М. Мустафа, С.Н. Серебряков // Материалы I Междунар. конф. «Ранние сроки беременности: проблемы, пути решения, перспективы». -М.,2004.-С. 50-54.

88. Милованов А.П. Роль микроокружения в жизнеобеспечении эмбриона человека / А.П. Милованов, В.Е. Радзинский, М.Н. Болтовская и др. // Акушерство и гинекология. 2004. - № 4. - С. 15.

89. Минасян B.C. Биоценоз наружных слуховых проходов у здоровых новорожденных / B.C. Минасян, Г.А. Самсыгина, О.Б.Ламбург // Педиатрия. 2007. - № 1. - С. 29-33.

90. Минх A.A. Ионизация воздуха и ее значение / A.A. Минх, Ю.Д. Губернский, М.Т. Дмитриев и др. // Вестн. АМН СССР. 1973. - № 10. -С. 3-10.

91. Мирзабалаева А.К. Кандидоз гениталий и бактериальный вагиноз в практике акушера-гинеколога / А.К. Мирзабалаева, Ю.В. Долгосабурова // Пробл. мед. микологии. 2004. - Т.6, № 3. - С. 18-24.

92. Неретина А.Ф. Микрофлора ротоглотки при респираторных заболеваниях у детей / А.Ф. Неретина, Е.К. Сычева, JI.B. Ульянова // Детские инфекции. 2007. - Т. 6, № 1. - С. 22-25.

93. Нечипуренко О.Н. Люстра Чижевского домашний витаминный завод / О.Н. Нечипуренко // Провизор. - 1999. - № 3. - С. 23-25.

94. Никонов А.П. Инфекции в акушерстве и гинекологии: Практическое руководство по диагностике и антимикробной химиотерапии / А.П. Никонов. 2003. - 55 с.

95. Норман Г.Э. Активные формы кислорода и люстра Чижевского / Г.Э. Норманн // Биохимия. 2001. - Т. 66, № 1. - С. 123-126.

96. Пожалостина JI.B. Ионификация воздуха / Л.В. Пожалостина, И.Ю. Мартюкова // Техника для бизнеса. Экспертиза и тесты. 2003. ■ № 3. -С. 21-25.

97. Покровский В.И Инфекционные болезни и эпидемиология / В.И. Покровский. Учебник. - 2007. - 816 с.

98. Полянская Р.Т. Инфекции у беременных и родильниц / Р.Т. Полянская, В.П. Цхай, М.Я. Домрачева и др. Феникс Ростов н/Д, 2007. -91 с.

99. Ранние сроки беременности; под ред. проф. В.Е. Радзинского и A.A. Оразмурадова. М., 2005. - 448 с.

100. Рождественский JI.M. Краткий обзор основных аспектов применения аэроионизации и аэроионотерапии / Л. М. Рождественский. -М.: "МИС-РТ", 1998.-25 с.

101. Роль оппортунистических инфекций у лиц с акушерско-гинекологической патологией / A.A. Асратян, Е.Д. Даниленко, С.М. Казарян и др. // Мат. 9-ого съезда ВНПОЭМП. Москва, 2007. - С.8-9.

102. Рябчук Ф.Н. Клинико-лабораторная эффективность применения жидких пробиотиков «Наринэ-фортэ» и «Наринэ-Ф-баланс» / Ф.Н. Рябчук, З.И. Пирогова // Гастроэнтерология Санкт-Петербурга. 2006. -№ 1-2.-С. 133.

103. Савельева Г.М. Интранатальная охрана здоровья плода. Достижения и перспективы / Г.М. Савельева, М.А. Курцер, П.А. Клименко и др. // Акушерство и гинекология. 2005. - № 3. - С. 3-6.

104. Савельева Г.М. Пренатальный период и его значение в развитии плода и новорожденного / Г.М. Савельева, О.Б. Панина, Л.Г. Сичинава и др. // Акушерство и гинекология. 2004. - № 2. - С. 60-63.

105. Самодова О.В. Распространенность ВБИ в многопрофильной детской больнице / О.В. Самодова, А. Хайду, Л.В. Титова и др. // Детские инфекции. 2007. - Т. 6, № 1. - С. 25-28.

106. Самойлова A.B. Внутриутробная инфекция в структуре заболеваемости и смертности новорожденных / A.B. Самойлова, М.В. Краснов, И.В. Виноградова и др. // Мат. Второго регионального научного форума «Мать и дитя». Сочи, 2008. - С. 252-253.

107. Самсыгина Г.А. Колонизация новорожденных детей микроорганизмами урогенитального тракта женщин / Г.А. Самсыгина, Д.Б. Лаврова, A.B. Михайлов и др. // Конгресс педиатров России «Здоровый ребенок», 5-й: Материалы. М.: Мед., 2006. - С. 459-460.

108. Самсыгина Г.А. Инфекции респираторного тракта у детей раннего возраста / Г.А. Самсыгина. Москва: Миклош, - 2006. - 279 с.

109. Самсыгина Г.А. Эпидемиология инфекционно-воспалительных заболеваний и роль грибов рода Candida у новорожденных детей / Г.А. Самсыгина, Г.Н. Буслаева. М.: ГЭОТАР - Медиа, 2008. - 112 с.

110. Самсыгина Г.А. Современные подходы к лечению сепсиса новорожденных / Г.А. Самсыгина // Педиатрия. 2010. - Т. 89, № 1. - С. 109-115.

111. Санитарно-гигиенические нормы допустимых уровней ионизации воздуха производственных и общественных помещений. / СанПин 2.2.4.1294-03. -М., 2004. 10 с.

112. Семина H.A. Особенности эпидемиологии и эпидемиологического надзора за ВБИ / H.A. Семина, В.Г. Ковалева, В.Г. Акимкин // Эпидемиология и инфекционные болезни. 2006. - № 4. - С. 22-25.

113. Сидорова И.С. Профилактика внутриутробной инфекции по триместрам развития беременности / И.С. Сидорова, И.О. Макаров, H.A. Матвиенко // Вопросы гинекологии, акушерства и перинатологии. -2006. № 2. - С. 53-58.

114. Скипетров В.П. Аэроионы и жизнь / В.П. Скипетров. Саранск: Тип. "Красный Октябрь", 2005. - 136 с.

115. Скипетров В.П. Феномен «живого» воздуха / В.П. Скипетров, H.H. Беспалов, A.B. Зорькина. Саранск: СВМО, 2003. - 165 с.

116. Стецюк О.У. Безопасность и переносимость антибиотиков в амбулаторной практике / О.У. Стецюк, И.В. Андреева, A.B. Колосов, P.C. Козлов // Клин, микробиол. Антимикроб, химиотер. 2011. - Т. 13 (1). -С. 67-84.

117. Уварова Е.В. Влагалище как микросистема в норме и при воспалительных процессах различной этиологии / Е.В. Уварова, Ф.Ш. Султанова // Репродуктивное здоровье детей и подростков. 2005. - № 2. - С. 26-39.

118. Федоренко Т.П. Особенности внутриутробной энтеровирусной инфекции у новорожденных / Т.П. Федоренко, Н.П. Гелашвили // Сб. науч. тр. «Фундаментальные науки и практика». Томск, 2010. - Т.1, № 4.-С. 54-56.

119. Червинская A.B. Галотерапия современное развитие метода спелеотерапии / A.B. Червинская // Курортные ведомости. - 2004. - № 1(22).-С. 40-41.

120. Черкасов C.B. Бактериальные механизмы колонизационной резистентности репродуктивного тракта женщин / C.B. Черкасов //

121. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. 2006. - № 4. — С. 62-64.

122. Чижевский A.JI. Аэроионификация в народном хозяйстве / A.JI. Чижевский. -М.: Стройиздат, 1989.-488 с.

123. Чижевский A.JI. Земля в объятиях Солнца / А.Л. Чижевский. — М.: Изд-во Эксмо, 2004. 416 с.

124. Чиркова Э.Н. Современная гелиобиология / Э.Н. Чиркова. М.: Гелиос, 2005.-218 с.

125. Шеина А.Н. Галотерапия в профилактике и восстановительном лечении болезней органов дыхания / А.Н. Шеина, Н.И. Лизунова, Е.В. Касимцева // Кремлевская медицина. Клинические вести. 1999. - № 3. -С. 20-21.

126. Щербо А.П. Больничная гигиена: Руководство для врачей. СПб.: СПбМАПО, 2000. - 33 с.

127. Ямашкина Е.И. Экспериментальное исследование антиульцерогенного действия мексидола, отрицательных аэроионов кислорода и их комбинации: Автореф. дисс. . канд. мед. наук / Е.И. Ямашкина; Морд ГУ. Саранск, 2002. - 21 с.

128. Alberti С. et al. Epidemiology of sepsis and infection in ICU patients from an international multicentre cohort study / Alberti C., Brun-Buisson C., Burchardi H. et al I/ Intensive Care Med. 2003. - Vol. 28. - P. 108-121.

129. Barlett J.G. Management of Respiratory Tract Infections / J.G. Barlett. -Philadelfia, 2006. P. 142-165.

130. Behrman R.E. Textbook of pediatrics / R.E. Behrman, V.C. Vandak. M.: Мед., 2007. - 504 с.

131. Bellid L.L. Neonatal sepsis / L.L. Bellid, B.L. Ohning // Medicine: Neonatology Com. Inc. 2006. - P. 351-369.

132. Bohlin K. Surfactant metabolism in the newborn: the impact of ventilation strategy and lung disease / K. Bohlin. Stockholm, Karolinska University, 2005. - 124 p.

133. Bower J.A. The role of integrims in reproduction / J.A. Bower // Proc. Soc. Exp. Biol. Med. -2006. -N 223 (4). P. 331-343.

134. Buch A. Growing up lung disease: the lung in transition to adult life / A. Buch, R. Carlsen et al. // ERSM. 2004. - P. 189-213.

135. Cohen B. Factors associated with hand hygiene practices in two neonatal intensive care units / B. Cohen, L. Saiman, J. Cimiotti et al. // Pediatr. Infect. Dis. J. 2003. - Vol.22. - P. 494-498.

136. Crowley T. Antibiotic prophylaxis to prevent postabortal upper genital tract infection in women with bacterial vaginosis: randomized controlled trial / T. Crowley et al. // BJOG. 2005. - Vol. 108(4). - P. 396-402.

137. Dal B.F. Increased complexity of the species composition of lactic acid bacteria in human feces revealed by alternative incubation condition / B.F. Dal, J. Walter, W. Hammes, C. Hertel // Microbal. Ecol. 2003. - Vol. 45, N 4.-P. 455-463.

138. Dellinger R.P. Surviving sepsis campaign guidelines for management of severe sepsis and septic shock / R.P. Dellinger, J.M. Carlet, H. Masur et al. // Crit. Care Med. 2004. - Vol. 32(3). - P. 858-873.

139. Dudley C.A. Stress and physiological, behavioral and performance pattern under varied air ion levels / C.A. Dudley, R.L. Moss // Neuroscience. -1999.-Vol. 91.-P. 1549-1556.

140. Edmond M.B. Vancomycin-resistant Staphylococcus aureus: perspectives on measures needed for control / M.B. Edmond, R.P. Wenzel et al. // Ann. Intern. Med. 2006. - Vol. 24. - P. 29-34.

141. Environment-assisted quantum walks in photosynthetic energy transfer / Mohseni M., Rebentrost P., Lloyd S., Aspuru-Guzik A. // J. Chem. Phys. -2008.-Vol. 129.-P. 174106.

142. Evidence for wavelike energy transfer through quantum coherence in photosynthetic systems / Engel G.S., Calhoun T.R., Read E.L. et al. // Nature. 2007. - Vol. 446. - P. 782-786.

143. Finnegan M.J. Indoor air / M.J. Finnegan, A.C. Pickering. Berlin, 1987. -270 s.

144. Fletcher L.A. Bactericidal action of positive and negative ions in air / L.A. Fletcher, L.F. Gaunt, C.B. Beggs et al. // BMC Microbiology. 2007. -Vol. 7.-N1.-P. 32.

145. Garmek K.G. Monitoring CA-MRSA infections in Slovenia / K. J. Garmek, A. Garmek, A. Kraigher, G.A Hocevar and al. // Eurosurveillance. 2005. -Vol. 10. - N 7-9. - P. 205-206.

146. Georgijevic A. Bacterial vaginosis. Epidemiology and risk factors / A. Georgijevic // Srp. Arh. Celok. Lok. 2006. Vol. 128(1-2). - P. 29-33.

147. Goldstein N. Is atmospheric superoxide vitally necessary? Accelerated death of animals in a quasi-neutral electric atmosphere / N. Goldstein, T. Arshavskaya // Z. Naturfosch. 1997. - Vol. 54. - P. 396-404.

148. Gordon S.B. Macrophage defences against respiratory tract infections / S.B. Gordon, R.C. Read // Brit. Med. Bull. 2004. -N 61. - P. 45-61.

149. Hale L.P. Bacteria associated with bacterial vaginosis / L.P. Hale // N. Engl. O. Med. -2006. Vol. 354 (2). - P. 202-203.

150. Hawkins L.H. Effect of air ions / L.H. Hawkins, T. Barker // Ergonomics. 1978. - N 21. - P. 273-278.

151. Hidayat L.K. High-dose vancomycin therapy for methicillin resistant Staphylococcus aureus infections / L.K. Hidayat, D.I. Hsu, R. Quist, K.A. Shriner, A. Wong-Beringer // A. Arch. Intern. Med. - 2008. - Vol. 166(19). -P. 2138-2144.

152. Hillier S.L. Role of bacterial vaginosis associated microorganisms in endometritis / S.L. Hillier // Amer. J. Obstet. Gynecol. - 2008. - Vol. 175 (2). -P. 435-441.

153. Huffnagle G.B. Role of fungal virulence factors in evasion of host defenses / G.B. Huffnagle, A.C. Herring, T.R. Traynor // ARBC: Ann. Rev. Biomed. Sci. 2006. - N. 2. - P. 77-90.

154. Jaskowsky J. Effect of air ions on healing of wounds of rat skin / J. Jaskowsky, A. Mysliwski // Exp. Pathol. 1986. - Vol. 29, N 2. - P. 218-223.

155. Jegatheesan P. Early variable positive airway pressure in infant's < 1000 grams at birth / P. Jegatheesan // J. Perinatol. 2006. - N 26. - P. 189-196.

156. Jeldovich B.Y. Impedance and parametric excilation of oscillators / B.Y. Jeldovich//UFN.-2008.-Vol. 178, N5.-P. 1844-1848.

157. Kahana A. Antibacterial activity of human cervical mucers / A. Kahana, H. Zuckerman, S. Carmel // Gynecol. Invest. 2008. - Vol. 6. - P. 265-271.

158. Kaibni M.H. Community-acquired methicillin-resistance Staphylococcus aureus in Palestine / M.H. Kaibni, M.A. Farraj, K. Adwan, T.A. Essawi // J. Med. Microbiol. 2009. - Vol. 58. - p. 644-647.

159. Karaca M. Comparison of clinical diagnosis and microbiological test results in vaginal infections / M. Karaca // Clin. Exp. Obstet. Gynecol. 2005. - Vol. 32(3).-P. 172-174.

160. Kreymann K.G. Use polyclonal immunoglobulins as adjuctive therapy for sepsis or septic shock / K.G. Kreymann, G. deHeer, A. Nierhaus et al. // Crit. Care Med. 2007. - Vol. 35(12). - P. 2677-2685.

161. Lee H. Coherence dynamics in photosynthesis: protein protection of excitonic coherence / H. Lee, Y.C. Cheng, G.R. Fleming // Science. 2007. -Vol. 316.-P. 1462-1465.

162. Long-lived quantum coherence in photosynthetic complexes at physiological temperature / G. Panitchayangkoon, D. Hayes, K.A. Fransted et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. Vol. 107. - P. 12766-12770.

163. Marrazzo J.M. Risk Factor for Cervicitis among Women with Bacterial Vaginosis / J.M. Marrazzo // O. Infect. Dis. 2006. - Vol. 193. - N (56)6. - P. 617-624.

164. Moreno F. Current use of parenteral nutrition in a pediatric hospital. Comparison to the practice 8 years ago / F. Moreno et al // Nutr. Hosp. 2005. -Vol. 20. -N 1. - P. 2345-2349.

165. Morison J.E. Fetal and Neonatal Pathology / J.E. Morison. 3rd Ed. of London, Butter-worths. - 2007. - P. 1056-1060.

166. Muhlemann K. Prevalence of nosocomial infections in Swiss children's hospitals / K. Muhlemann et al. // Infect. Control Hosp. Epidemiol. 2004. -N 25(9). - P.765-771.

167. Nagata E. Nosocomial infection in neonatal intensive care unit incidence and risk factor / E. Nagata, A.S.J. Brito, T. Matsuo et al.11 Am. O. Infection control. 2006. - Vol. 30. - N 1. - P. 26-31.

168. Nakane H. Air ions: physiological aspects / Nakane H., Asami O., Yamada Y., Ohira H. // Int. J. Psychophysiol. — 2002. — Vol. 46. — P. 85.

169. Novak F.R. Methicillin-resistant Staphylococcus aureus in human milk / F.R. Novak, J.A. Almeida, M.B. Warnken and al. // Mem. Inst. Oswaldo Cruz. -2005.-N95.-P. 29-33.

170. Ryushi Т. The effect of exposure to negative air ions on the recovery of physiological responses after moderate endurance exercise / T. Ryushi // Int. J. Biometeorol. 1998. - Vol. 41. - P. 1332-1336.

171. Sadeharji K. Material antibodies in breast milk protect the child from Enterovirus infections / K. Sadeharji // Pediatrics. 2007. - Vol. 119. - N 5. -P. 941-946.

172. Sandiumenge A. Therapy of ventilator-associated pneumonia. A patient-based approach based on the ten rules of "The Tarragona Strategy" / A. Sandiumenge, E. Diaz, M. Bodi et al. // Intensive Care Med 2003. N. 29. - P. 876-883.

173. Scov R. MRSA infections increasing in the Nordic countries / R. Scov, E. Kolmos, R. Peltonen and al. // Eurosurveillance. - 2005. - Vol.11. - N 7-9. - P. 202-203.

174. Shargawi J.M. The effects of air ionization / J.M. Shargawi, E.D. Theaker, D. B. Drucker // J. Appl. Microbiol. 1999. - Vol. 87. - P. 889-897.

175. Stroll B.J. The global Impact of Neonatal Infection / B.J. Stroll // Clinic in Perinatology. 2011. - Vol. 21. - N1. - P. 1-21.

176. Walker W.A. Роль микрофлоры в развитии защитных функций кишечника / W. A. Walker // Педиатрия. 2005. - №1. - С.85-91.

Информация о работе

Шевчук, Евгения Александровна
кандидата биологических наук
Иркутск, 2013
ВАК 03.02.03

Диссертация

Закономерности формирования микробоценозов и биологические свойства симбионтов у новорожденных в условиях акушерско-гинекологического стационара - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы