Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Взаимосвязь биохимических и иммунохимических процессов с синтезом трофобластического β-1 гликопротеина при физиологической и патологической беременности

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Взаимосвязь биохимических и иммунохимических процессов с синтезом трофобластического β-1 гликопротеина при физиологической и патологической беременности"

На правах рукописи

Богданович Раиса Нурисламовна

ВЗАИМОСВЯЗЬ БИОХИМИЧЕСКИХ И ИММУНОХИМИЧЕСКИХ ПРОЦЕССОВ С СИНТЕЗОМ ТРОФОБЛАСТИЧЕСКОГО р-1 ГЛИКОПРОТЕИНА ПРИ ФИЗИОЛОГИЧЕСКОЙ И ПАТОЛОГИЧЕСКОЙ БЕРЕМЕННОСТИ

03.00.04 - биохимия

Автореферат Диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

Владивосток - 2005г.

Работа выполнена в Тихоокеанском институте биоорганической химии и Медицинском объединении Дальневосточного отделения РАН

Официальные оппоненты: доктор биологических наук,

профессор Костецкий Э.Я.

доктор химических наук, профессор Каплун А.П.

доктор биологических наук, с.н.с. Чудновский В.М.

Ведущая организация: Владивостокский государственный

медицинский университет

Защита состоится 27 октября 2005 г. в Ю00 часов на заседании диссертационного Совета Д.005.005.01 в Тихоокеанском институте биоорганической химии ДВО РАН по адресу: 690022, г. Владивосток, проспект 100-летия Владивостоку, 159, ТИБОХ ДВО РАН. Факс: (4232)314-050, e-mail: science@piboc.dvo.ru. С диссертацией можно ознакомиться в филиале Центральной научной библиотеки ДВО РАН (Владивосток-22, проспект 100-летия Владивостоку, 159, ТИБОХ ДВО РАН).

Автореферат разослан 12 сентября 2005 г.

Ученый секретарь диссертационного совета кандидат химических наук старший научный сотрудник

Прокопенко Г.И.

¿mta.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ В настоящее время в рэссии значительно возросла патология репродуктивной системы женщин. Г, оцент нормальных родов снижается, что влечет за собой развитие не^п 1ГОПриятных тенденций в состоянии здоровья новорожденных детей (Кулаков В.И., 2003). В Приморском крае из всех беременных женщин 36% страдают анемией, 35% поздними гестозами, число нормагп чых родов едва достигает 28% (Гельцер и др., 2004). До 80% самопроизвольных прерываний беременности приходится на первый триместр (Сидельникова, 2001). Решающая роль в комплексе мероприятий по профилактике различных заболеваний принадлежит пренатальной диагностике, предусматривающей регулярное наблюдение за женщинами в течение всей беременности и включающей обязательное определение содержания в крови беременных женщин специфических маркеров беременности.

Трофобласт - специфический Р-1 гликопротеин является одним из представителей онкофетальных антигенов. Он обнаруживается при нормальной беременности и ее патологиях, в том числе и при патологиях злокачественного характера. С читается, что на протяжении нормально протекающей беременности ТБГ* в достаточной степени отражает процессы становления и функционирования ФПС*, что позволяет использовать этот маркер для контроля за течением гестационного процесса.

Впервые ТБГ был выделен из сыворотки крови беременных женщин (Татаринов и др., 1970). В настоящее время достаточно полно описаны физико-химические и иммунохимические свойства этого гликоиротеина (Bohn, 1976; Engval, 1980; Мороз, 1986; Павленко, 1989; Chan et al., 1991; Plouzek et al., 1991; Brophy et al., 1992; Chen et al., 1992).

*Сокращения, используемые в тексте: АВР - активированное время рекальцификации (каолиновое время), а-ГФДГ - а-глицерофосфатдегидрогеназа, AT-III

- антитромбиновое время, АФП - а-фетопротеин, АФС - антифосфолипидный синдром, АЧТВ - активированное частичное тромбопластиновое время, ВА - волчаночный антикоагулянт, ДВС - диссеминированное внутрисосудистое свертывание, ДЭА -дегидроэпиандростерон, ИЛ - интерлейкин, ИФА - иммуноферментный анализ, 17-КС -17-кетостероиды, КЛ - кардиолипин, ЛПС - липополисахариды, 17-ОКС - 17-оксикортикостероиды, ПИ - протромбиновый индекс, ПЛ - плацентарный лактоген, ПЭ

- перенос эмбриона в полость матки, РФМК - растворимые фибринмономерные комплексы, СДГ - сукцинатдегидрогеназа, ТТГ - тиреотропный гормон, ТВ - тромбиновое время, ТБГ-тест - определение уровня ТБГ, ТБГ - трофобластический р-1 гликопротеин, УНБ - угроза невынашивания беременности, ФБ - физиологическая беременность, ФЛ -фосфолиииды, ФНО - фактор некроза опухоли, ФПС - фетоплацеитарная система, ФС -фосфатидилсерин, ФХ - фосфатидилхолин, ФЭ фосфатидилэтаноламин, ХГ -хорионический гонадотропин, ЦИК - циркулирующие иммунные комплексы, ЩФ -щелочная фосфатаза, ЭКО - экстракорпоральное оплодотворение яйцеклетки, CD -маркеры лимфоцитов, CGL - лектин из мидии Crenomytilus grayanus, Ig -иммуноглобулин.

В зависимости от локализации ТБГ способен выполнять различные биологические функции в организме: усиливать пролиферацию клеток (Гудима, 1993), участвовать в процессах межклеточного узнавания, контролировать процесс развития и дифференцирования клеток (Bersinger et al., 1987; Watanabe et al.,1988; Khan et al., 1989; Wu et al., 1999), активировать или угнетать иммунологические реакции (Головистиков и др., 1987; Snyder et al., 2001; Сухих и др., 2003; Шмагель и др., 2003), связываться со стероидными гормонами (Татаринов, 1983; Кривоносов и др., 1991), обладать фосфатазной активностью (Мороз, 1992), но, тем не менее, биологическое значение присутствия ТБГ при беременности и в опухолях трофобласта до конца не изучено.

В литературе значительное внимание уделяется практическим аспектам использования ТБГ в клинической практике (Посисеева, 1986; Богданович и др., 1990; Побединский и др., 1991; Александрова и др., 1994; Шмагель, 1995). ТБГ начинает продуцироваться на 3-4-й день после оплодотворения яйцеклетки, появляясь в крово оке матери на 3-й неделе беременности, его концентрация постоянно увеличивается в течение гестационного процесса и достигает максимального уровня к 35-37-й неделе. Имеются литературные данные, свидетельствующие о нарушении синтеза ТБГ при плацентарной недостаточности (Мамедалиева, 1991), гестозе (Кулаков и др., 1999), внутриутробной патологии и гипоксии плода (Ismail et al., 1992; Qin et al., 1997; Gardner et al., 1997), а также при онкопатологии грофобласта (Татаринов и др., 1976; Калашников и др., 1979). Практически отсутствуют работы, отражающие влияние биохимических и иммунохимических процессов на синтез ТБГ. Вместе с тем, значение этого гликопротеина для развития гестационного процесса ни у кого не вызывает сомнений, поэтому дальнейшее исследование роли ТБГ может существенно расширить границы его использования в диагностике и прогнозировании успешного завершения беременности.

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ИССЛЕЛОВАНИЙ Цель работы - изучить взаимосвязь биохимических и иммунохимических процессов с синтезом ТБГ при нормально протекающей и осложненной беременности, а также провести комплексное исследование уровня секреции ТБГ в сравнении с гемостазиологическими, биохимическими, иммунологическими

параметрами беременных женщин, проживающих в Приморском крае.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

- провести клинические испытания разработанного ТБГ-теста* в сыворотке крови при физиологической и осложненной беременности, а также при онкопатологии трофобласта;

- изучить динамику уровня ТБГ, показателей гемостаза, гормонов, метаболизма и иммунитета при ФБ* и УНБ* первой половины гестационного срока;

- исследовать"урорень T6F у женщин после проведения ЭКО* и ПЭ*;

- установить закономерности успешного наступления беременности в зависимости от содержания ТБГ в бластоцистах и семенной жидкое га;

- определить пределы физиологических колебаний биохимических, гемостазиологических, иммунных параметров крови и мочи беременных женщин Приморского края. Найти корреляционную зависимость ме:-.ду ТБГ и этими показателями;

- изучить реактивность иммунокомпетентных клеток небеременных здоровых женщин, женщин с ФБ и УНБ;

- изучить влияние ТБГ, хитозана, каррагинана на свертывающую и антисвертывающую системы в тестах in vitro;

- провести апробацию разработанной тест-системы на основе лектинов для дифференциальной диагностики беременности и онкопатологии;

- установить основные закономерности влияния проводимой терапии на продукцию ТБГ.

НА УЧНАЯ НОВИЗНА РАБОТЫ

Разработан ТБГ-тест, универсальный и информативный анализ для выявления изменений, происходящих в плаценте.

Впервые проведен сравнительный анализ уровня секреции ТБГ с гемостазиологическими, биохимическими, иммунологическими

параметрами у женщин с физиологической и патологической беременностью. Показано преимущество ТБГ-теста как наиболее объективного критерия клинической и доклинической оценки эмбрио- и канцерогенеза.

Установлены пределы физиологических колебаний биохимических (гормоны, ферменты, ТБГ), гемостазиологических (тромбоцитарный, плазменный, фибринолитический), иммунологических (клеточный, гуморальный) параметров здоровых беременных женщин и женщин с УНБ, проживающих в Приморском крае.

Выявлена положительная корреляционная связь между уровнем ТБГ и стероидными половыми гормонами. Показано сродство ТБГ к прогестерону, тестостерону, эстрадиолу и эстриолу, рассчитаны их константы связывания с ТБГ.

Впервые показана корреляционная зависимость между нарушениями в системе гемостаза и снижением уровня секреции ТБГ.

Доказано, что ТБГ может служить одним из дополнительных критериев иммунной несостоятельности системы мать-плод, обеспечивающей оптимальный уровень активации или супрессии иммунной системы. Иммуногенность ТБГ в группе женщин с УНБ более выражена, чем при ФБ.

Показано, что при патологическом развитии трофобласта функциональное состояние иммунокомпетентных клеток снижено, но их способность синтезировать цитокины усиливается в ответ на индуктор -ЛПС.

Выявлены изменения синтеза ТБГ при наличии аутоантител у беременных женщин.

Впервые в России были исследованы на содержание ТБГ бластоцисты женщин, вошедших в программу ЭКО, а также проведен анализ его синтеза у женщин со 2-й по 20-ю неделю беременности после ПЭ.

Впервые определен уровень ТБГ в семенной плазме мужчин и показана его диагностическая значимость при обследовании мужчин из групп семейных пар, стоящих на учете по невынашиванию беременности.

Впервые показано использования тест-системы на основе лектина CGL* в дифференциальной диагностике патологий трофобласта. Выявлены достоверные различия в строении углеводных цепей ТБГ, секретируемого как при ФБ, так и при УНБ, в том числе при онкопатологии трофобласта.

Выявлено дозозависимое влияние ТБГ, хитозана, каррагинана на сосудисто-тромбоцитарный, коагуляционный гемостаз и антикоагулянты in vitro, впервые показана эффективность применения биологически активных добавок при подготовке женщин к планируемой беременности.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ Доказана практическая значимость и перспективность применения разработанного иммуноферментного микрометода определения уровня ТБГ в крови пациентов. Уровень ТБГ хорошо коррелирует с гесгационным сроком беременности и имеет прогностическую ценность при УНБ. При динамическом контроле отсутствие прироста уровня ТБГ или снижение его продукции является неблагоприятным прогностическим признаком даже при отсутствии клинических данных. ТБГ может "быть использован: как маркер завершения имплантации, течения маточной и внематочной беременности, как показатель эффективности хирургического, медикаментозного аборта и прогноза воспалительных осложнений в послеабортном периоде. ТБГ-тест является универсальным и достаточно информативным анализом для оценки эффективности проводимого лечения. Повышенный уровень ТБГ в сперме может быть использован как один из индикаторов патологии мужской репродуктивной сферы.

Многолетний опыт работы с разработанным микрометодом определения ТБГ для диагностики различных нарушений в плаценте позволил вовремя выявить эти изменения, снизить число репродуктивных потерь и сохранить беременность у 93,5% женщин.

Определение уровня ТБГ может быть использовано для диагностики остаточного роста трофобласта, для дифференциальной диагностики пузырного заноса и контроля за эффективностью проводимого лечения.

Внедрена научно-техническая разработка метода определения ТБГ в концерне по производству диагностических наборов ЗАО «Вектор-Бест» г. Новосибирска и налажено их промышленное производство. Рекламные материалы по использованию ТБГ-теста переданы в медицинские учреждения.

Разработаны и переданы в практическое здравоохранение г. Владивостока и Приморского края методические пособия: «Клиническое применение иммуноферментного определения ТБГ в сыворотке крови», и «Иммунотерапия при невынашивании беременности».

НА ЗАЩИТУ ВЫНОСЯТСЯ СЛЕДУЮЩИЕ ПОЛОЖЕНИЯ

1. Применение модифицированного ТБГ-теста в клинической практике.

2. Анализ влияния показателей гемостаза, гормонов, метаболизма, иммунитета на уровень секреции ТБГ при физиологической и патологической беременности. Определение корреляционнт гх связей между этими показателями.

3. Прогностическая значимость ТБГ-теста для дифференциальной диагностики остаточного роста трофобластической опухоли и определение эффективности проводимой терапии. Исследование соотношения нормального и онкотрансформированного антигена с помощью лектинов для раннего выявления онкопатологии трофобласта.

4. Использование ТБГ-теста в программе ЭКО и ПЭ.

5. Применение ТБГ-теста, как наиболее объективного и точного диагностического критерия эффективности лечебных и профилактических мероприятий при УНБ.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ Результаты работы были представлены на: I Всесоюзном симпозиуме «Иммунобиотехнология-87» (Таллин, 1987); 1 Immunological Congress of Latvia (Riga, 1991), V Российском съезде специалистов по лабораторной диагностике (Москва, 1995); Региональной Ассамблее «Здоровье населения Дальнего Востока» (Владивосток, 1996); International Symposium Immunology of Reproduction (Kiev, 1996); Региональной Ассамблее «Актуальные проблемы репродуктивного здоровья женщин» (Владивосток, 1999); Международном съезде «Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения» (Санкт-Петербург, 2001, 2003); III Международном Тихоокеанском конгрессе rio традиционной медицине (Владивосток, 2001); Конференции «Фундаментальные науки - медицине» (Москва 2003, 2004); Объединенном иммунологическом форуме (Москва, 2004); сателлитном симпозиуме «Новые технологии в диагностике и лечении заболеваний человека» (Владивосток, 2004); VIII Международном съезде «Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения» (Миккели, Финляндия, 2004); XIV международной конференции «Репродуктивные технологии сегодня и завтра» (Москва, 2004).

ПУБЛИКАЦИИ По материалам диссертации опубликовано 37 работ. СТРУКТУРА И ОБЪЕМ Диссертация изложена на 244 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов и обсуждения, заключения, выводов, списка цитируемой литературы и приложения. Работа содержит 18 рисунков и 22 таблицы. Список литературы содержит 432 источника.

Автор выражает свою искреннюю признательность руководителю Отдела молекулярной иммунологии ТИБОХ ДВО РАН, члену -корреспонденту РАН, д.б.н. Васьковскому В.Е., заведующему лабораторией химии неинфекционного иммунитета (ЛХНИ) ТИБОХ ДВО РАН, д.х.н.

Лукьянову П.А, старшему научному сотруднику ЛХНИ ТИБОХ ДВО РАН, к.х.н. Чикаловец И.В. и главному врачу медицинского объединения ДВО РАН, к.м.н. Крыжановскому С.П. за всестороннюю помощь в работе. Автор благодарит за участие в работе сотрудников ЛХНИ ТИБОХ ДВО РАН, врачей-гинекологов медицинского центра ЭКО, Краевого центра охраны материнства и детства, Медицинского объединения ДВО РАН, Краевого онкологического диспансера, Краевой клинической больницы, родильных домов №1 и №3 г. Владивостока.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

MA ТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Для выполнения поставленных задач было обследовано в динамике 1264 женщины в возрасте 22-35 лет: 120 здоровых небеременных, 200 с ФБ, 534 с УНБ, 64 с эктопической беременностью, 158 вступивших в программу ЭКО, 54 с прервавшейся беременностью, 78 после медицинского аборта, 30 после медикаментозно! о аборта, 21 с пузырным заносом, 5 с хорионэпителиомой и предимплантационные эмбрионы 58 женщин на стадии морулы/бластоцисты различного качества. В группе женщин с УНБ 89% женщин имели в анамнезе 2 и более самопроизвольных выкидышей или преждевременных родов, 58% имели гормональные нарушения в системе гипоталамус-гипофиз-щитовидная железа-надпочечники еще до наступления беременности, бесплодие, нарушения менструального цикла и т.д. Критерием отбора в ipynny с УНБ служили клинические и клинико-лабораторные данные. Клинические методы исследования включали: тщательный сбор и анализ анамнестических данных, общий осмотр, гинекологическое бимануальное исследование. Для анализа использовали сыворотку венозной и капиллярной крови, гепаринизированную и цитратную плазму, суточную порцию мочи женщин. Для контрольной группы здоровых беременных женщин использовали следующие критерии: отсутствие клинических и субклинических признаков угрозы выкидыша, анамнестические данные и отсутствие отклонений в клинико-лабораторных исследованиях. Проведен анализ на наличие ТБГ в 50 эякулятах мужчин (в возрасте 26-45 лет) с признаками патологии семенной плазмы из групп семейных пар, состоящих на учете по невынашиванию беременности, и в 40 эякулятах - без патологии.

Для выполнения поставленных в работе задач наряду с общеклиническими использовались следующие методы:

Уровень ТБГ определяли иммуноферменгным микрометодом в сыворотке капиллярной крови (Богданович, 1994). Реагенты для проведения анализа были получены в ЛХНИ ТИБОХ ДВО РАН. Для дифференциальной диагностики нормы от патологии использовали разработанный твердофазный лектин ферментный анализ (ТЛФА). С этой целью в ЛХНИ ТИБОХ ДВО РАН были выделены лектины и получены коньюгаты лектинов с пероксидазной меткой. Определяли ТБГ методами ИФА* и

ТЛФА. Рассчитывали реактивный индекс (РИ) - отношение уровня ТБГ, определенного ТЛФА, к уровню ТБГ, определенного в ИФА.

Определение уровня антител к ХГ*, ФЛ* (КЛ*, ФС*, ФЭ* и ФХ*) проводили методом ИФА. Реагенты для систем были любезно предоставлены лабораторией иммунологии Научного центра акушерства, гинекологии и перинатологии РАМН г. Москвы. Антитела к тиреоглобулинам человека определяли методом пассивной гемагглютинации наборами «Аутотир» (НПК «Препарат»),

Определение ВА* и исследование системы гемостаза (агрегации тромбоцитов, АЧТВ*, АВР*, ПИ*, фибриногена, ТВ*, AT-ÏÏI*, эуглобулинового лизиса, РФМК*) проводили наборами фирмы «Технология

- стандарт».

Исследование гормонального профиля включало определение ХГ, эстрадиола, эстриола, прогестерона, кортизола, ПЛ*, ТТГ*, тироксина и трийодтиронина. В эту группу отнесли и гликопротеин - АФП*. Определяли перечисленные показатели методом ИФА с использованием стандартных коммерческих наборов («Алкор БИО» г. Санкт-Петербург, «Вектор - Бест» г. Новосибирск и «International» США). Метаболиты гормонов - 17-КС*, 17

- ОКС* определяли в суточной порции мочи унифицированными методами (Меньшиков, 1987); прегнандиол, эстрогены, ДЭА* - методом тонкослойной хроматографии (Чевари и др., 1982, 1983).

Определение связывания гормонов с ТБГ проводили методом флуоресцентной спектроскопии на спектрофлуориметре Hitachi 850 (Japan). Константы связывания рассчитывали с использованием теории Чипмана по специфическому изменению флуоресценции остатков триптофана ТБГ в момент связывания с гормонами (Shoshan et al., 1987). Для эксперимента использовали ТБГ, полученный из сыворотки ретроплацентарной крови в ЛХНИ ТИБОХ ДВО РАН, стандартные растворы гормонов и холестерина -препараты фирмы «Serva».

Иммунофенотипирование лимфоцитов периферической крови. Количество лейкоцитов, абсолютное и относительное число лимфоцитов в периферической крови и Т-лимфоциты (E-РОК) определяли в реакции спонтанного розеткообразования с эритроцитами барана по Гондалу (Меньшиков, 1987), В-лимфоциты (ЕАС-РОК) - с помощью комплементарного розеткообразования по методу Менденса (Меньшиков, 1987), а также с помощью моноклональных антител к CD3, CD4, CD8, CD16 и CD22 антигенам тест-системами, разработанными Витебским медицинским университетом.

Содержание сывороточных иммуноглобулинов (Ig) G. M, А определяли методом радиальной иммунодиффузии по Манчини (Mancini et al., 1965).

Определение ЦИК* проводили методом преципитации в растворе полиэтиленгликоля (3,6%) с мол. массой 6000Da.

Анализ содержания ТБГ в составе ЦИК. ЦИК выделяли из сыворотки крови повторным осаждением 2,5% и 2% полиэтиленгликолем по общепринятой методике (Digeon , Î9RÏÏ) Определяли ТБГ в сыворотке крови

и ТБГ в составе ЦИК методом ИФА. Рассчитывали МО - отношение суммы свободно циркулирующего ТБГ и ТБГ в составе ЦИК к ТБГ в составе ЦИК.

Реактивность иммунокомпетентных клеток оценивали по уровню синтеза ФНО-а* Определяли базальную и стимулированную ЛПС* выработку цитокина в первичной культуре клеток, полученной из цельной крови методом Исаченко (Исаченко, 2003). ИЛ*-ф, ИЛ-6, ИЛ-8, ИЛ-10, ФНО-а измеряли методом твердофазного ИФА с применением наборов фирм «Cytimmune», «Цитокин», «РгоСоп», «R&D Systems».

Иммунологическую реактивность организма женщин определяли с помощью реакции подавления прилипания лейкоцитов, используя пробирочный метод в модификации Л.М. Фроловой и В.И. Говало (Говало, 1983), в котором подсчитывали количество неадгезированных клеток. Эмбриональный антиген получали из абортированных плодов человека 8-10 недельного возраста и стандартизировали по белку.

Получение лейковзвеси для иммуноцитотерапии Выделение аллогенных лимфоцитов осуществляли в асептических условиях по методу И.И Говало (Говало, 1992).

Цитохимические методы исследования Дегидрогеназную активность определяли методом Нахласа с соавт. в модификации Р.П. Нарциссова (Нарциссов, 1969). Фосфатазы определяли методом азосочетания по Кеплоу в модификации М.Г. Шубина (Меньшиков, 1986).

Морфологическое исследование абортного материала и образцов послеродовых плацент проводили в гистологической лаборатории МО ДВО РАН.

Ультразвуковое исследование проводили на аппарате «Siemens Sonoline» (Германия), с использованием трансабдоминального и эндовагинапьных конвексных датчиков.

Статистическую обработку результатов исследований проводили общепринятыми методами (ГОСТ 8.207-76,1981).

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

Микрометод ИФА для определения ТБГ и его использование в клинической практике

Разработан микрометод ИФА для определения ТБГ в сыворотке крови, не уступающий по точности, специфичности и чувствительности ранее предложенному стандартному методу ИФА, но позволяющий сократить расход реагентов, время проведения анализа и заменить венозную кровь капиллярной. Метод имеет следующие характеристики: чувствительность определения - 1 нг/мл; область определения - 1-100 нг/мл; объем пробы для анализа - 100 мкл.

Микрометодом ИФА ТБГ обнаруживали со 2-3-й недели беременности у 55% женщин, с 3-4-й недели у 82% и с 4-5-й недели у 100%. В ранний период беременности уровень ТБГ невысок. По мере увеличения

срока беременности содержание ТБГ в сыворотке капиллярной крови резко возрастало (табл.1) и к 20 недели составляло 53,8 мкг/мл, что позволило судить не только о наличии беременности, но и косвенно - о её сроке. Установлены показатели нормы и их границы в 95% доверительном интервале для каждой недели гестации (табл. 1) Полученные данные в группе с ФБ несколько отличались от норм, предложенных другими авторами (Посисеева, 1986; Мамедалиева, 1991; Побединский, 1991). Это объясняется использованием в ТБГ-тесте препарата ТБГ со степенью чистоты 99%. Как показано в таблице 1, с прогрессированием беременности отмечался еженедельный динамический рост уровня ТБГ.

Таблица 1. Концентрация ТБГ, доверительный интервал и еженедельный % его прироста со 2-3-й недели по 19-20 неделю ФБ (п-200)_____

Срок беременности (недели) Среднестатистический уровень ТБГ (мкг/мл) Вариация уровня ТБГ (мкг/мл) Еженедельный прирост ТБГ(%)*

2-3 0,24 + 0,08 0,025-0,45

3-4 1,29 + 0,30 0,35 - 3,75 81,4

4-5 3,39 + 0,42 2,80-4,80 61,9

5-6 4,61 + 0,57 3,90-6,50 26,4

6-7 6,00 + 1,16 4,80-8,50 23,1

7-8 7,60+1,04 5,70-12,8 23,0

8-9 9,96 + 1,34 6,90-14,3 21,6

9-10 12,7+1,59 9,80-20,4 21,5

10-11 16,2 + 1,64 12,3-26,2 21,6

11-12 20,6 + 1,96 16,2-30,6 21,3

12-13 26,0 ± 2,40 19,5-39,4 20,7

13-14 31,3 + 2,76 23,1-42,9 16,9

14-15 36,6 + 2,88 28,6 - 45,6 14,4

15-16 42,6 + 2,32 33,4-48,8 14,0

16-17 46,1 + 2,96 37,2 - 50,9 7,59

17-18 48,9 + 3,60 31,1 - 54,8 5,72

18-19 51,6 + 5,40 43,5 - 58,5 5,23

19-20 53,8 + 5.71 45,3 - 68,2 4,08

* - процент еженедельного прироста уровня ТБГ (мкг/мл) от среднестатистического уровня ТБГ (мкг/мл) при данном сроке беременности

Наиболее интенсивный еженедельный прирост его наблюдался в период до 5-6-й недели. После 16-й недели, когда практически плацента уже сформировалась, прирост ТБГ происходил уже не так энергично, но динамический рост его, тем не менее, продолжался. Прогрессивное повышение ТБГ в ранние сроки беременности можно объяснить активной пролиферацией трофобласта и активным синтезом синцития по мере «созревания» плаценты.

В группе женщин с УНБ также отмечалось увеличение уровня ТБГ, но у женщин с положительным прогнозом уровень ТБГ был снижен на 18-48% (рис. 1, ряд 2). У женщин с неблагоприятным прогнозом не наблюдалось заметного роста концентрации ТБГ, и уровень его значительно снижался

(сначала на 37-48% рис. 1, ряд 3; а далее, у 54% женщин, на 62-86%; рис. 1, ряд 5, 6, 7) по сравнению с нормой для данного срока. В этой группе беременность прогрессировала только у 46% женщин, замершая беременность обнаруживалась в период 8-й, 12-й, 16-й недели. В 86% случаев отмечалось нарушение функции трофобласта: начинающееся отслоение, дистрофические и дегенеративные изменения, подтвержденные УЗИ.

При УНБ возможно как понижение (рис. 1), так и повышение ТБГ в материнской крови по сравнению с уровнем, характерным для данного срока ФБ Различные уровни ТБГ, по-видимому, отражали компенсаторные возможности синцитиотрофобласта в различные фазы патологического процесса. В диагностическом плане при УНБ, особенно в первой её половине, большую значимость имели низкие показатели концентрации ТБГ, поэтому долгое время мы уделяли большое внимание группе женщин с пониженным содержанием ТБГ.

60

50

I 40

"Е *

* 30 |_Г }£ 20

10 о

5-6 8-9 10-11 13-14 15-16 19-20 недели беременности

Рис. 1. Изменение концентрации ТБГ в сыворотке беременных женщин при ФБ и УНБ; ряд 1 - ФБ; ряд 2 - УНБ с благоприятным прогнозом; ряд 3 - УНБ с неблагоприятным прогнозом; ряд 5, 6, 7 - замершая беременное! ь; ряд 4-е цитомегаловирусной инфекцией

Повышенные концентрации ТБГ счшались более благоприятными в диагностическом плане, тем не менее, у 16% пациенток группы с УНБ в I триместре была выявлена корреляционная зависимость между повышенной концентрацией ТБГ и появлением в дальнейшем острой плацентарной недостаточности. Стремительное увеличение концентрации ТБГ, свидетельствующее об активном усилении компенсаторно-приспособительных процессов в ФПС, в последующем приводило к декомпенсации и падению уровня ТБГ. Повышенный уровень ТБГ был отнесен к показателям группы риска с угрозой развития острой плацентарной недостаточности.

Результаты показали, что уровень ТБГ хорошо коррелировал с геетационным сроком беременности и имел прогностическую ценность при УНБ. Учитывая высокую вариабельность уровня ТБГ, диагностически более значимо исследование его уровня в динамике. Отсутствие прироста уровня ТБГ или снижение его продуцирования являлось неблагоприятным прогностическим признаком. Сравнение ТБГ-теста с другими диагностическими характеристиками показало, что он имеет более высокую точность прогноза. Показатель ошибочного прогноза от числа патологий, с использованием ТБГ как маркера, составил 0,9%, в то время как для гормонов этот показатель составлял 2,5% и более

Исследование содержания ТБГ у женщин, страдающих первичным бесплодием, показало, что при наступлении беременности он обнаруживался в сыворотке крови на 5-10 дней позже и уровень его в I триместре достоверно был снижен по сравнению с его содержанием при ФБ. Статистически достоверное снижение концентрации ТБГ в сыворотке материнской крови отмечалось при патологических изменениях эндометрия (морфологических, рецепторных). Процесс имплантации контролируется сложнейшим взаимодействием множества сигнальных и эффекторных соединений, вырабатываемых эндометрием, иммунокомпетентными клетками матери и эмбриона, принимающими активное участие в последовательном каскаде событий. Задержку появления ТБГ и низкий его уровер?ь в сыворотке крови в данном случае можно объяснить более поздней имплантацией эмбриона.

При бактериальной инфекции (хламидиоз, микоплазмоз, гарднереллез) отмечены пониженные уровни ТБГ (в 1,2 - 1,4 раза) по сравнению с показателями при ФБ. При вирусной инфекции, например, цитомегаловирусной (рис.1, ряд 4), уже в ранние сроки беременности уровень ТБГ был снижен в 4 - 8 раз и сохранялся на низком уровне при прогрессировании беременности (1,5 + 0,9 и 15,8 + 3,6 мкг/мл на 5-й и 20-й неделях беременности), но чаще беременность прерывалась до 12-й недели. Снижение уровня ТБГ при инфекции может быть связано с частичной гибелью трофобласта; видимо, ткань трофобласта, являясь сильно пролиферирующей и обладающей фагоцитарной активностью, служит мишенью для репликации вируса. Размножение же вируса приводило к гибели клеток трофобласта, а, следовательно, и к снижению его основных функций.

Прогрессирующую внематочную беременность в ранние сроки диагностировать крайне сложно, так как в этом случае в организме женщины возникают изменения, свойственные нормально протекающей беременности. Определение уровня ТБГ было использовано как вспомогательный тест в сочетании с данными УЗИ для диагностики эктопической беременности. Уровень антигена в данном случае на порядок, а то и два ниже соответствующих значений для нормально развивающейся беременности. Так, к 5-6-й неделе прогрессирующей внематочной беременности уровень ТБГ составлял всего 0.3 + 0.2 мкг/мл Г увеличением

срока эктопической беременности уровень его повышался, но он все же был существенно ниже соответствующих значений для нормально протекающей беременности. Низкое значение уровня ТБГ 0,015-0,050 мкг/мл, а в некоторых случаях отрицательная реакция, наблюдались при «старой» форме внематочной беременности с наличием обширных некрозов трофобласта. Если при обследовании больной показатели ТБГ превышали 0,012 мкг/мл, анализ повторяли через 6 дней. В том случае, когда содержание антигена увеличивалось, обнаруживали появление в организме трофобластической ткани, продуцирующей ТБГ.

ТБГ можно использовать в прогнозе воспалительных осложнений в послеабортном периоде у женщин после искусственных абортов и после внебольничного выкидыша. У 88,5% (69 чел.) женщин после медицинского аборта послеабортный период протекал благоприятно и уровень ТБГ на 7-е сутки был в пределах нормы. В группе с прервавшейся беременностью у 92,5% (50 чел.) женщин вровень ТБГ был значительным, но ниже на 70-90% (в 2-х случаях ниже на 50 и 53%), чем при соответствующем сроке беременности, что свидетельствовало о начавшемся аборте. У женщин, имевших неосложненное течение послеабортного периода, к 3-м суткам уровень ТБГ в 27% случаев варьировал от 0,025 до 0,58 мкг/мл, и на 7-с сутки его концентрация не превышала нормативных значений. В группе женщин, имевших воспалительные осложнения в послеабортном периоде, уровень ТБГ к 3-м суткам обнаруживался у 84,'5% женщин и был достаточно высок - от 0,35 мкг/мл до 1,8 мкг/мл. К 7-м суткам у 31,5% женщин уровень ТБГ колебался от 0,05 до 0,65мкг/мл. И только к 20-м суткам, после комплексного лечения, концентрация ТБГ приближалась к физиологической норме. Длительное присутствие ТБГ в крови свидетельствовало о задержке в полости матки незначительных, часто не выявляемых на УЗИ, частей трофобласта, что само по себе являлось причиной возникновения воспалительного процесса.

С внедрением метода медикаментозного прерывания беременности были определены уровни ТБГ через одну и две недели после приема препаратов. В первую неделю у 53,3 % женщин уровень ТБГ резко падал и практически не обнаруживался в крови на 7-й день, что свидетельствовало о полном выкидыше, у 33,3% женщин уровень ТБГ составлял от 0,012 до 0,096 мкг/мл, но он не превышал 0,01мкг/мл к концу второй недели. У 3,3% женщин метод оказался неэффективным, так как уровень ТБГ был высоким, что свидетельствовало о прогрессировании беременности. У 10% женщин после приема препарата отмечался динамический спад уровня ТБГ, но через две> недели наблюдался его пролонгированный синтез в различных концентрациях, от 0,025 до 0,35 мкг/мл, что свидетельствовало о наличии небольших остатков плодного яйца. Таким образом, ТБГ-тест являлся не только информативным маркером беременности, но и эффективным индикатором прогноза воспалительных осложнений в послеабортном периоде.

В последние годы, в связи с активным применением вспомогательных репродуктивных технологий, интенсивно разрабатываются методы определения функционального состояния сперматозоидов. В эякулятах без патологии в 92,5% случаях уровень ТБГ был низким и достигал концентрации 6,81 нг/мл, и только в 7,5% обнаруживался повышенный уровень ТБГ (7,8-11,1 нг/мл). В группе мужчин с патологическими из енениями семенной плазмы повышенный уровень ТБГ в эякулятах выявлялся у 48% (7,6-20,9 нг/мл). Полученные результаты показали прогностическую значимость определения ТБГ при мужском бесплодии и, не исключено, что отклонение от нормативных значений может являться одним из звеньев нарушения эмбриогенеза.

Таким образом, показано, что ТБГ может быть использован не только как маркер завершения имплантации, течения беременности и её патологии, но и как показатель эффективности медицинских и медикаментозных абортов и их осложнений, а также как один из критериев диагноза патологии мужской репродуктивной сферы.

Сравнительный анализ определения ТБГ и хорионического гонадотропина

Для подтверждения значимости ТБГ в первой половине беременности проведен сравнительный анализ уровней ТБГ и ХГ в сыворотке крови в динамике до 20-й недели беременности Определение уровня ХГ уже давно и широко используется в клинической практике, а в последние годы каждая женщина самостоятельно может определить наличие беременности с помощью разовых тест-полосок. Определение уровня ТБГ имеет ряд преимуществ перед определением содержания ХГ:

- ХГ имеет в организме аналог - лютеинизирующий гормон, что может приводить к ложноположительным результатам на ранних сроках беременности, в то время как ТБГ с гормонами (фолликулостимулирующим, лютеинизирующим) не дает перекрестных иммунохимических реакций.

- при использовании ХГ как лечебного препарата тест на ТБГ является единственным объективным критерием функции трофобласта;

- процессы, вызывающие физиологическое снижение уровня ХГ в кровотоке, не влияют на динамический рост концентрации ТБГ. После 10-й недели ФБ, когда уровень ХГ резко снижался, концентрация ТБГ динамично росла и более точно отражала состояние трофобласта при ФБ и УНБ (рис. 2). Определение уровня ХГ имеет единственное преимущество перед определением уровня ТБГ - более раннее появление его в сыворотке крови женщин, хотя известно (01ткпас1ои, 1992), что ТБГ начинает синтезироваться на 3-4-й день после оплодотворения яйцеклетки, опережая даже начало синтеза ХГ.

Рис. 2. Динамика ТБГ и ХГ в крови в первой половине ФБ

Таким образом, ТБГ-тест с 4-5-й недели является наиболее информативным маркером функции трофобласта, так как его уровень стабильно повышается с ростом беременности.

Диагностическая ценность теста ТБГ прй патологии трофобласта

Факт присутствия ТБГ в опухолях до сих пор остается мало изученным Пузырный занос (заболевание, сопровождающееся перерождением эмбриональных клеток в злокачественные) в клинической практике весьма сложно отличить от ФБ, особенно в ранние сроки беременности. Для определенного срока уровень ТБГ был как относительно низкий (5 недель - 1,5 мкг/мл), так и высокий (5 недель - 10 мкг/мл); в то же время он мог соответствовать сроку беременности (14 недель - 38,8 мкг/мл). Разброс уровня ТБГ при пузырном заносе можно объяснить, во-первых, сроком беременности, во-вторых, степенью пролиферативной активности трофобласта. Как показано на рис. 3, после удаления пузырного заноса особое внимание следовало уделять динамике секреции ТБГ. Увеличение содержания уровня ТБГ в сыворотке крови пациенток служило признаком прогрессирования болезни. Изменение количественного содержание ТБ1 после удаления пузырного заноса (рис. 3) происходило неравномерно По динамике снижения уровня ТБГ у больной Д. можно говорить о хорошем прогнозе течения заболевания. В то время как у больной К. отмечалась более длительная секреция ТБ1, даже после второй хирургической операции и 4-х курсов химиотерапии, что свидетельствовало о неблагоприятном течении процесса. Использование ТБГ-теста в процессе лечения и позже дало 100% положительный эффект для всей группы обследуемых женщин с пузырным заносом.

- пациентка К

- пациентка Д

Рис. 3. Динамика ТБГ пациенток с диагнозом - пузырный занос с пролиферацией;

1 - при поступлении; 2 - после 1-го выскабливания; 3 - после 2-го выскабливания; 4 - после 1-го курса химжнерапии (ХТ); 5 - после 2-ю курса ХТ; 6 - через месяц после

2 курса ХТ; 7,8 - после 3 и 4 курса ХТ

При хорионэлителиоме матки уровень ТБГ в трех случаях (1 - после родов, 2 - после абортов) достигал 1,8 ± 0,8 мкг/мл. В двух случаях он составлял 12 мкг/мл и 60 мкг/мл (в срок 13-15 недель беременности) и коррелировал с размером трофобластической опухоли и степенью ее инвазии.

Рис. 4. Динамика ТБГ больной И., диагноз - Хорионэпигелиома матки; 1 - при поступлении; 2 - после проведения экстирпации матки с придатками и назначения химиотерапии; 3 - через месяц после начала лечения; 4 - через 2 месяца после начала лечения; 5 - рецидив (через 3 месяца после операции) с последующим проведением химиотерапии (6,7)

На рис. 4 показана динамика снижения уровня ТБГ больной И., концентрация которого при поступлении больной в стационар составляла 12 мкг/мл. После оперативного вмешательства и проведения химиотерапии

наблюдалось снижение уровня ТБГ до 1,8 мкг/мл через месяц и до 0,03 мкг/мл через два месяца. Но через 3 месяца был отмечен рецидив, проведение повторной химиотерапии дало положительный результат, и уровень ТБГ не отличался от нормальных значений (0,008мкг/мл). Присутствие ТБГ в сыворотке больных, как правило, свидетельствовало о неблагоприятном прогнозе, а, учитывая необходимость ТБГ для успешного развития плода, можно говорить о ТБГ при хорионэпителиоме, как о факторе, потенцирующем адаптацию антигенов в организме хозяина. Полученные данные показали, что ТБГ является достаточно информативным маркером осгаточного роста трофобласта при его онкопатологии.

Злокачественное перерождение тканей сопровождается изменениями в биосинтезе клеточных и секретируемых антигенов. Идентификация в крови и на поверхности опухолевых клеток антигенов, ассоциированных с опухолями, является важной экспериментальной задачей, связанной с развитием методов ранней диашосгики раковых заболеваний. Поверхность раковых клеток имеет различия в составе и строении углеводных цепей мембранных гликоконъюгатов в сравнении с нормальными клетками. Используя лектины с различной специфичностью, полученные в ЛХНИ ТИБОХ ДВО РАН из морских беспозвоночных, удалось выявить тонкие различия в строении углеводных цепей ТБГ, секретируемого как при ФБ, так и УНБ, в том числе при злокачественных новообразованиях.

Для разработки лектин-ферментного метода были получены конъюгаты пероксидазы хрена с лектинами СвЬ*, ОТЬ-А - гепарин-связывающий лектин и ЭТЬ - 01сЫАс-связывающий лектин из асцидии ОШетпит 1егпа1апит. На их основе разработаны методы твердофазного лектин-ферментного анализа. Апробация полученных тест-систем с сыворотками доноров, больных с различным типом патологий, включая онкологических больных, а также с сыворотками беременных женщин показала, что наиболее информативные результаты были получены при использовании ТБГ-теста и одного из лектинов - СОЦ специфичною к углеводным цепям муцинового типа. В группе женщин с ФБ и в группе женщин с пузырным заносом ИР был меньше 1 в 95% и 97 % случаев, соответственно, в то время как при УНБ ИР в 87,5% случаев был больше 1 При появлении первых признаков патологического процесса можно на ранних стадиях дифференцировать УНБ, обусловленную плацентарной недостаточностью, от начинающегося опухолевого процесса, что является крайне важным при постановке первичного диагноза.

Таким образом, ТБГ является достаточно информативным маркером остаточного роста трофобласта. Исследование соотношения нормального и онкотрансформированного антигена с помощью лектинов может явиться информативным показателем в оценке патологии трофобласта и эффективности проводимого лечения.

ТБГ в программе экстракорпорального оплодотворения

С внедрением метода ЭКО в нашем регионе появилась возможность исследования оплодотворенной яйцеклетки до переноса её р полост матки, контроля этапов имплантации и плацентации с помощью опрг 'еления уровня ТБГ.

Низкие концентрации ТБГ были выявлены в преимплантационных эмбрионах человека на стадии морулы/бластоцисты (2, 4, 8 бластомеров). Эмбрионы были получены после культивирования in vitro оплодотворенных яйцеклеток и исследованы через 72 часа с момента выделения ооцитов из фолликулов. Исследованы эмбрионы различного качества, уровень ТБГ составлял от 0 до 0,01 мкг/мл. Была выявлена положительная корреляция между концентрацией ТБГ и количеством клеток бластоцист. Наличие ТБГ в бластоцистах свидетельствовало о начале его синтеза на этой стадии развития эмбриона. Отсутствие ТБГ в бластоцистах свидетельствовало о нарушении синтеза этого гликопротеина, что часто приводило к остановке развития эмбриона до наступления стадии гаструляции. Взаимоотношения между эндометрием и растущим трофобластом регулировало процесс инвазии эмбриона в эндометрий и контролировало пролиферацию последнего. Одной из функций ТБГ является его влияние на процесс приживления трофобласта, поэтому по его уровню в бластоцистах можно косвенно судить о возможностях эмбриона при имплантации. ТБГ-тест можно использовать для отбора бластоцист с высоким клеточным числом, что может гарантировать высокую вероятность беременности. Криоконсервированные эмбрионы человека в стадии бластоцисты только в 10% давали положительный результат на ТБГ, у остальных ТБГ отсутствовал. Отсутствие ТБГ свидетельствовало о том, что эмбрионы после криоконсервации и оттаивания утратили способность продуцировать ТБГ и, возможно, нежизнеспособны.

Полученные ранее результаты после ЭКО и ПЭ показали, что у большинства женщин ТБГ появлялся в кровотоке в небольшом количестве (0,012-0,100 мкг/мл) на 21-й день после переноса эмбриона. Более позднее появление антигена и нарушение его биосинтеза может быть связано с поздней имплантацией эмбриона, нарушением в системе мать-эмбрион, а также с недостаточностью гормональной, иммунной и метаболической систем, несмотря на их коррекцию при подготовке женщин к ЭКО. Последние данные показывают, что немаловажным фактором успешной имплантации и прогрессирования беременности являются препараты, применяемые при подготовке в программе ЭКО Использование в последнее время схем стимуляции суперовуляции с применением агонистов рилизинг-гормонов (декапептил и другие), а также комбинации гонадотропинов (ФСГ, ЛГ), рекомбинантных аналогов ФСГ (пурегон, гонадол) показали, что после имплантации перенесенного эмбриона в полость матки возрастание уровня ТБГ в сыворотке крови женщин было значительно выше, и его концентрация составляла на 21-25-й день 0,045-0,580 мкг/мл. При

прогрессирующей беременности наблюдалось быстрое увеличение содержания ТБГ, и к 5-6-й неделе уровень его достигал 0,5-2,8 мкг/мл, а при многоплодной беременности - до 5 мкг/мл. Прогрессивное нарастание уровня ТБГ к 8-12-й неделе беременности приводило к нормализации показателей, характерных для ФБ, и отражало большие компенсаторные возможности плацентарной ткани в результате усиления пролиферации трофобласта. При эктопической беременности, анаэмбрионии уровень ТБГ был низким, и не наблюдалось значительного прироста, характерного для ФБ. Клиническая беременность после ЭКО наступила у 38% женщин. С помощью ТБГ-теста в этой группе своевременно был выставлен диагноз: УНБ у 62%; замершей у 8,2%, внематочной у 1,65%, анаэмбриония у 0,55% женщин.

Таким образом, наличие ТБГ в бластоцистах свидетельствовало о начале его синтеза на этой стадии развития эмбриона и являлось отражением имплантационного потенциала бластоцист и гарантией их приживления. Определение уровня ТБГ в сыворотке крови женщин с 21-го дня после переноса эмбриона позволило диагностировать наступление беременности (маточной, внематочной, анаэмбрионии). Ранняя диагностика с помощью ТБГ-теста позволила своевременно провести профилактику и лечение патологических изменений ФПС, что способствовало сохранению и

прогрессированию беременности после ЭКО и ПЭ.

»

Физиологическая роль ТБГ в системе гемостаза при беременности

Изучены изменения отдельных звеньев гемостаза при физиологической и осложненной беременностях, а также возможность прогнозировать тромбогеморрагические осложнения и их влияние на уровень ТБГ на основании специальных тестов.

В организме женщин с ростом беременности происходило повышение общего коагуляционного потенциала, функциональной активности тромбоцитов при некотором снижении их количества, снижение активности АТ-Ш и протеина-С, что приводило в итоге к относительной гиперкоагуляции к 20-ой неделе беременности Эти особенности носили компенсаторно-приспособительный характер для ФБ.

При обследовании группы женщин с УНБ отмечена широкая вариабельность показателей системы гемостаза, что связано с большой неоднородностью обследуемой группы больных по исходу патологического процесса. Показатели системы гемостаза женщин с УНБ были условно разделены на 3 типа: гипо, гипер и изокоагуляцию, сочетанную в некоторых случаях с отклонением единичных тестов от нормы.

У женщин с низким содержанием ТБГ на ранних этапах формирования плацентарной недостаточности в 64% случаев по анализу параметров гемостазиограмм выявлены нарушения микроциркуляции крови. Показателем развития плацентарной недостаточности и пренатальной патологии являлись низкие уровни секреции ТБГ (в 2-6 раз ниже по

сравнению с ФБ) и отсутствие тенденции к его активному нарастанию, в большинстве случаев связанные со снижением или потерей компенсаторных возможностей системы свертывания крови. Резкому снижению уровня ТБГ часто предшествовало развитие локальных тромбофилических ре :кций. Низкий уровень ТБГ был как причиной, так и следствием нар>пг<,яий в системе 5 емостаза.

Было изучено изменение концентрации ТБГ (рис 5) и гемостаза при неразвивающейся беременности в зависимости от време!:^ 1 задержки плодного яйца в матке. У 28,5% женщин после удаления плоднг-.-о яйца на 57-е сутки обнаружено присутствие ТБГ в сыворотке крови, что свидетельствовало о наличии остатков плодного яйца. У женщин с полным удалением плодного яйца к 5-7-м суткам ТБГ практически исчезал. Пролонгированный синтез ТБГ после гибели эмбриона свидетельствовал о продолжении его продукции трофобластом, что и препятствовало отторжению плодного яйца и наступлению выкидыша.

60 50 40

ТБГ, мкг/мл 30 20 10 0

5-12 12-20

недели беременности

{■ Ряд1

I Ряд2 а РядЗ □ Ряд4 ■ Ряд5 ■ Рядб

Рис. 5. Изменение концентрации ТБГ при неразвивающейся беременности; 1, 2 ряд - задержка плодного яйца в матке менее 10 дней; 3, 4 ряд - ФБ; 5, 6 ряд - задержка плодного яйца более 10 дней

Отмечены значительные нарушения в гемостазе, проявляющиеся в различных формах синдрома ДВС и различающиеся по течению. При морфологическом исследовании" плацент 8 женщин с беременностью, замершей в срок 8-12-й недели, с ранее выявленными по дострой формой синдрома ДВС и низкими показателями уровня ТБГ (0,20-1,80 мкг/мл), в плацентах и децидуальной ткани были обнаружены участки фибриноидных ворсин, выявлена их дегенерация, потеря клеткой структуры, уменьшение васкуляции хориона. Острые циркуляторные расстройства, ведущие к ухудшению маточно-плацентарного кровообращения, приводили к нарушению энергетических процессов, ослаблению функциональной деятельности синцития и снижению продуцирования ТБГ. Причиной прерывания беременности, вероятно, являлось неадекватное образование фибрина, геморрагии в область прикрепления эмбриона и нарушение

процесса имплантации при дефектах свертывания, либо децидуальная и плацентарная несостоятельность из-за тромботической тенденции. Определение в динамике уровня ТБГ и показателей системы гемостаза может явиться дополнительным критерием диагностики и прогноза неразвивающейся беременности и возможных коагулопатических осложнений.

Изучено влияние ТБГ in vitro на показатели системы гемостаза. Показано, что активация плазмы крови с ТБГ в течение 40 минут достоверно изменяло показатели агрегации тромбоцитов и AT-III, что свидетельствовало о влиянии ТБГ на свойства тромбоцитов и первичный физиологический антикоагулянт - ингибитор тромбина и фактора Ха. Таким образом, резкое падение уровня ТБГ у беременных женщин приводило к повышению агрегационной способности тромбоцитов, усилению активности тромбина за счет снижения активности AT-III в плазме крови и, как следствие, вызывало повышенное тромбообразование.

Полученные результаты свидетельствуют о взаимосвязи между системой гемостаза и бслоксинтетической функцией трофобласта. Нарушения в системе гемостаза матери приводили к тромбозу сосудов плаценты, что в свою очередь вело к нарушению процесса имплантации и плацентации Определение уровня ТБГ дополнительно с показателями гемостаза позволили уже в ранних сроках беременности оценить косвенно состояние плода и прогнозировать течение беременности. Разумеется, нельзя объяснить полученные результаты только взаимосвязью гемостаза и продукцией ТБГ, так как процесс развития гиперкоагуляции и ингибирования фибринолиза значительно сложнее. При УНБ возникает гормональный дисбаланс, усиливается продукция гормонов, ускоряющих свертывание крови и угнетающих фибринолиз. Одновременно происходят изменения в иммунном статусе. И, тем не менее, сравнительный анализ системы гемостаза и выявления корреляционных связей с уровнем ТБГ показал, что резкое снижение его уровня приводило к гиперкоагуляции, что может быть связно с гиперагрегацией тромбоцитов и со снижением активности физиологического антикоа1улянта АТ-Ш. Не исключено, чго именно ТБГ, ассоциированный с беременностью, является одним из участников запуска механизма активации антисвертывающей системы крови беременных женщин.

Влияние аутоиммунных нарушений на показатели гемостаза и уровень

ТБГ

Одним из частных проявлений иммунологической агрессии на сосудисто-тромбоцитарное звено гемостаза является АФС, связанный с циркуляцией ВА. Антифосфолипидные антитела могут напрямую взаимодействовать с синцитиотрофобластом и ингибировать межклеточное слияние клеток трофобласта, поэтому в данной главе рассмотрено состояние

звеньев системы гемостаза и синтеза ТБГ у женщин с выявленными аутоиммунными нарушениями.

В первой половине ФБ отмечена незначительная продукция антител класса ^М к ФЛ (табл. 2), которая обусловлена подъемом уровня ФЛ крови и повышенной секрецией ФЛ плацентой

Таблица 2. Уровень антифосфолипидных антител у женщин с ФБ и УНБ

ФЛ Группа женщин с ФБ (п=200), усл. ед. Группа женщин с УНБ (п=184), усл. ед.

1ЕМ ДО до лечения (1) после лечения (2)

ДО ДО

КЛ 132,4+10,6 112,2+9,4 378,6+28,4 Рк < 0,05 284,8+19,8 Рк < 0,05 241,1+16,4 Рк < 0,05 Р,-Р2 < 0,01 142,1+11,7 Рк < 0,05 Р1-Р2 < 0,05

ФС 126,1+9,5 109,4+10,3 298,3+20,8 Рк < 0,05 223,9+22,4 Рк < 0,05 165,4+13,9 Рк < 0,01 Р,-Р2 < 0,01 99,3+10,6 Рк < 0,01 РГР2 < 0,05

ФЭ 142,0+11,9 111,6+11,4 266,4+23,3 Рк < 0,01 232,1+21,9 Рк < 0,05 155,2+12,4 Рк < 0,01 Р,-Р2 < 0,05 88,2+9,9 Рк < 0,05 Р,-Р2 < 0,05

ФХ 130,2+9,8 121,3+10,8 320,5+26,9 Рк < 0,05 207,2+20,3 Рк < 0,05 168,6+13,2 Рк < 0,01 Р,-Р2 < 0,05 135,4+10,8 Рк < 0,05 Р,-Р2 < 0,05

Рк - достоверное 11. различий с контролем (ФБ), РгР2 - достоверность различий до и после лечения

Уровень антител класса к ФЛ не повышался с прогрессированием беременности и оставался практически неизменным для всех ФЛ. При УНБ у 72 (39,1%) беременных женщин значительно повышался уровень антител к одному или нескольким ФЛ класса !§М и/или у 38 (20,65%) женщин были выявлены двукратно положительные пробы на ВА. Выявлена обратная корреляционная зависимость между уровнями антител к ФЛ и ТБГ: чем выше концентрация антител, тем ниже уровень ТБГ. Антитела к ФЛ определенной специфичности встречались с различной частотой, наиболее часто выявлялись к КЛ, ФС и ФЭ, а также ^О к КЛ и ФС. В группе женщин с УНБ при наличии антител к ФЛ у 25,5% женщин выявлены антитела к ТГ (из них: у 17% в титре 1:640, у 32% - 1:320 и у 51% - 1:160, при норме 1:80), что явилось дополнительным неблагоприятным фактором для осложненного течения беременности.

На фоне проводимой комплексной терапии с использованием глюкокортикоидных и противотромботических препаратов в группе женщин с благоприятным прогнозом отмечалось снижение уровня антител к ФЛ (табл. 2), а также положительная динамика уровня ТБГ.

В таблице 3 представлены показатели аутоиммунных нарушений и уровень ТБГ ВА-позитивных пациенток до и в процессе лечения. Выявлены изменения гемостаза при АФС у беременных женщин (гиперфункция

тромбоцитов, гиперкоагуляция, присутствие маркеров ДВС). Частота встречаемости инфекции в этой группе составляла 58%. Как видно из таблицы 3, при аутоиммунных нарушениях у большинства женщин отмечены изменения в системе гемостаза, нарушен синтез ТЕГ, что свидетельствовало о морфофункциональных изменениях в трофобласте.

Таблица 3. Аутоиммунные нарушения и синтез ТБГ у женщин с УНБ и АФС (п=38)

Показатели Число женщин Число женщин после

до лечения (%) лечения (%)

ВА - отрицательная реакция 0 38,7

ВА - резко положительная 26,4 9,6

реакция

ВА - положительная реакция 44,7 19,4

ВА - слабо положительная 28,9 32,3

реакция

Антитела к ФЛ 68,4 -

Анштела к ХГ за 5,2

Антитела к ТГ 263 -

Нарушения гемостаза 81,5 39,5

Нарушение синтеза ТБГ 92,1 42,1

В первой половине ФБ уровень ТБГ увеличивался при наличии невысокого титра антител к ХГ (^в -94 + 8 ед., ^М - 130 + 16 ед.). Отмечалось незначительное увеличение уровня антител к ХГ к 11-12-й неделе беременности (рис. 6), хотя другие авторы обнаруживали максимальное значение к 12-14-й неделе (Кирющенков, 2003).

60000

10-11 11-12 14-16 недели беременности

17-18

-а/тХГ де

- а/тХГ 1дМ Д ХГ-

-ТБГ

Рис. 6. Изменение уровней ТБГ, ХГ и антител к ХГ при ФБ

Как видно из рисунка 6, колебания уровней ^М и менее выражены по сравнению с колебаниями кривой роста гормона, и их подъем повторялся с задержкой на неделю по сравнению с подъемом уровня ХГ.

При УНБ у 38 % женщин уровень антител к ХГ был увеличен (IgG - 298 + 34 ед., IgM -318 + 42 ед.). При умеренном повышении IgG к ХГ уровень ТБГ находился в пределах нижней физиологической нормы или был снижен до 20%, хотя у 2,1% пациенток высокий уровень IgG к ХГ сочетался с _ чень низкими значениями ТБГ и значительными изменениями в гемостазе.

Присутствие повышенных концентраций IgM неблагоприятно влияло на секрецию ТБГ, а наличие высоких уровней обоих иммуноглобулинов являлось тревожным сигналом, так как коррелировало с низкими уровнями ТБГ (снижение на 30-70%) и изменениями в гемостазе. Следует отметить, что повышенные уровни IgM к ХГ встречались гораздо чаще, чем IgG к ХГ. Степень выраженности нарушений в гемостазе и уровень ТБГ зависели от уровня антител и длительности их циркуляции в организме женщины. Изменения в системе гемостаза были характерны для хронической формы синдрома ДВС. Низкий уровень ТБГ, присутствие высоких концентраций антител к ХГ, нарушения в системе гемостаза свидетельствовали о повышенном риске прерывания беременности.

После проведенного курса комплексной терапии к 20-й неделе беременности у большинства пациенток наблюдалась постепенная нормализация иммунного процесса: отмечалась положительная динамика уровня ТБГ, улучшение показателей гемостаза и снижение уровня антител.

Таким образом, при аутоиммунных нарушениях отмечалось снижение синтеза ТБГ, после лечения стабилизация уровня ТБГ происходила постепенно и в большинстве случаев оставалась на нижних границах физиологической нормы, что свидетельствовало о некотором снижении синтеза и транспорта белка, связанных с частичным повреждением синцития и неполностью восстановленном маточно-плацентарном кровообращении.

Взаимосвязь гормональной активности и уровня ТБГ при физиологической беременности

Гормоны играют важную роль на протяжении всей беременности. После оплодотворения судьба зародыша зависит от эндокринной системы матери, функции которой начинает выполнять плацента после своего формирования.

Как видно из таблицы 4, с прогрессированием ФБ увеличивалось количество гормонов: ПЛ, эстриола, эстрадиола, кортизола, прогестерона, АФП и секретируемого ТБГ. Между ними выявлена высокая корреляционная связь в первой половине беременности. При ФБ прирост кортизола отмечается в период плацентации. Такое накопление кортизола, видимо, связано с необходимостью обеспечения гомеостаза матери и с созданием оптимальных условий для развития плода. В то же время обнаружена отрицательная корреляционная связь между содержанием ТБГ-ХГ и гормонами-ХГ после 10-11-й недели (г = - 0,70, р < 0,02), что связано со снижением концентрации XI после 10-11-й недели беременности (ХГ в

10-11 недель - 52120,6 ± 4260,4 МЕ/л). Но падение уровня ХГ не влияет на интенсивную секрецию ТБГ и гормонов; имеющегося количества ХГ достаточно для их роста. В ранние сроки беременности проницаемость фетоплацентарного барьера увеличена и создаются все условия для интенсивного повышения концентрации ТБГ в крови. Наиболее высокая положительная корреляционная связь ТБГ выявлена с ПЛ и стероидными половыми гормонами: пределы гТБ1.11Л= 0,8-0,96; г тбг-эстрадиол, эстриол ~ 0,76 - 0,96; г тбг-прогестерон = 0>71 - 0,95; г тбг-кортизол = 0,67 - 0,93; г ТБГ. ЛФП= 0,59-0,91.

Таблица 4. Динамика величин гормонов у здоровых беременных женщин в сыворотке крови до 20 недели беременности (М + гп)___

Гестационный возраст (недели) XI (МЕ/л) ПЛ (нмоль/л) Прогестерон (нмоль/л) Кортизол (нмоль/л)

5-6 19500,8 + 6912,5 2,4 + 0,42 60 + 4,65 620 + 42,9

7-8 30112,2 + 4573,1 5,8 + 1,12 65 + 3,99 639 + 39,8

9-10 36180,5 + 8534,6 15,2 +18,4 70 + 4,63 690 + 36,3

11-12 45120,6 + 6320,4 36,4 + 4,81 74 + 2,68 700 + 29,7

13-14 35528,4 + 4122,6 70,9 + 8,9 91+8,3 785 ± 26,4

15-16 28289,6 + 3995,3 95,0 + 9,22 94 + 10,6 828 + 58,9

17-18 14122,8 + 3316,4 131,1 + 11,4 98 + 11,7 818 + 58,9

19-20 22120,7 + 3919,5 154,2 + 14,8 128 + 12,3 780 + 40,3

Гестационный возраст (недели) Эстрадиол (нмоль/л) Эстриол (нмоль/л) АФП (МЕ/л) ТБГ (мкг/мл)

5-6 2,81 + 0,42 1,48 + 0,21 15,9 ±4,8 4,61 + 0,57

7-8 6,38 + 0,88 1,51 + 0,16 20,5 + 4,2 7,50 + 1,04

9-10 7,39 + 0,92 1,84 + 0,21 20,3 ± 5,4 12,7 + 1,59

11-12 10,9 +1,44 2,85 + 0,33 25,7 + 6,8 20,6 + 1,96

13-14 15-16 25,8 + 2,99 8,59 + 1,23 40,4 + 18,4 313 + 2,72

29,5 + 3,27 10,9 ±1,48 48,1+4,79 42,6 + 3,32

17-18 36,4 +4,13 12,8 +1,73 53,4 +15,2 48,9 + 3,60

19-20 38,8 ±3,91 14,6 + 1,88 61,5 +20,6 53,8 + 5,71

Абсолютные величины коэффициентов корреляции близки к единице, что и указывало на высокую вероятность взаимосвязи между ними, а пределы корреляции узкие, что свидетельствовало о достаточной надежности полученных значений коэффициента корреляции во всех случаях, за исключением ХГ.

Ранее методом иммуноэлектрофореза была показана способность ТБГ сыворотки крови связываться с некоторыми стероидными гормонами, и сделано предположение, что ТБГ может являться переносчиком гормонов (ВоЬп е1 а1., 1973; Терентьев, 1980; Коптева, 1990). Для подтверждения данного факта и количественной оценки его способности связывать гормоны использован метод флуоресцентной спектроскопии. ТБГ содержит

в своей полипептидной цепи 8 остатков триптофана (Shupert, 1991), флуоресценция которых при связывании с гормонами снижается в дозозависимой манере в связи с конформационными перестройками молекулы ТБГ в момент связывания. На рис 7. приведены кривые насыщения связывания эстрадиола, эстриола и прогестерона с ТБГ, которые показали изменение флуоресценции ТБГ (dF) при добавлении различных концентраций гормонов (С). Константы связывания рассчитаны с использованием теории Чипмана по аналогии с описанным ранее методом (Ray S et al„ 2003).

Рис. 7. Кривые насыщения связывания эстрадиола, эстриола, прогестерона с ТБГ

Рис. 8. График Чипмана для расчета константы связывания эстрадиола, эстриола, тестостерона, прогестерона с ТБГ

Графики Чипмана для расчета констант связывания, полученные при взаимодействии ТБГ с гормонами, представлены на рис. 8, а полученные константы связывания - в таблице 5.

Таблица 5. Константы связывания (Кс), полученные при взаимодействии ТБГ с гормонами и холестерином

Наименование Кс 10 7 М 1 -/+

Эстриол 1,86 0,04

Эстрадиол 1,77 0,03

Тестостерон 3,46 0,05

Прогестерон 6,01 0,06

Холестерин 2,43 0,04

Показано, что ТБГ в большей или меньшей степени связывался со всеми стероидными половыми гормонами и их предшественником -холестерином. Не исключено, что одной из функций ТБГ может быть транспорт гормонов.

Функционирование щитовидной железы оказывает большое влияние на состояние репродуктивной системы, поэтому некоторые незначительные сбои в её работе (дисфункция) могут привести к нарушениям в репродуктивной системе. Между ТБГ и тиреотропным гормоном отмечалась слабая степень положительной корреляционной связи (г = + 0,084, р < 0,05). Уровень свободной фракции трийодтиронина изменялся незначительно от 4,08 + 0,32 до 4,16 + 0,38 пкмоль/л с 5-й до 20-й недели беременности. При ФБ в процессе гсстации отмечено увеличение коэффициентов: трийодтиронин/тироксин и свободной фракции трийодтиронина/свободной фракции тироксина, что свидетельствовало об активации периферического метаболизма йодтиронинов. Это, по-видимому, направлено на компенсацию эндогенного дефицита йода при беременности. С большой уверенностью можно констатировать, что значительное влияние на гипофизарно-тиреоидную систему в первой половине беременности оказывали гормоны ФПС, но, тем не менее, выявление пациентов с нарушениями репродуктивной функции, обусловленной тирсоидной патологией, чрезвычайно важно в целях сохранения беременности и своевременного назначения адекватной йодной профилактики.

Исследование корреляционной зависимости между увеличением ТБГ и уровнем метаболитов гормонов (17-КС, ДЭА, 17-ОКС, эстрогенами, прегнандиолом) с 5-й по 20-ю неделю беременности показали прямую корреляцию между ними (за исключением ХГ), которая составляла для г тбг-прегнандиол = + 0,69; г тбг-эстрогены = + 0,67; г тбг-п-окс ~ + 0,54; г ТЬГ-дэа = + 0,4; г ТБГ_ ]7-кс = + 0,2; г тбг-хг = - 0,12.

Таким образом, корреляционные связи между содержанием стероидных гормонов в процессе гестации отражали комплексные взаимообусловленные изменения эндокринного статуса женщины, которые приводили к морфологической и гормональной перестройке материнского организма, направленной на создание оптимальных условий для белоксинтетической функции синцития и развития плода. Соответствие уровней ТБГ, гормонов и их метаболитов гестационному сроку

обеспечивало сохранение и развитие эмбриона. Отклонение этих показателей или одного из них являлось признаком нарушения биохимических, иммунных и других процессов, в итоге приводящих к угрозе выкидыша. Корректировать эти процессы в организме беременной женщины надо очень осторожно, так как на определенной стадии эмбриогенеза вмешательство в гормональную регуляцию может привести к изменению половой дифференцировки плода.

Динамика гормональной активности при патологической беременности и их корреляционная связь с ТБГ

Изучение гормональной и белоксинтетической функции ФПС у женщин с УНБ показало, что нарушения имели место в 86% случаев. Динамика уровня ТБГ и I ормонов у этих женщин имели разнонаправленный характер и зависели от многих экзогенных и эндогенных факторов.

При определении содержания общего кортизола было установлено, что, хотя его концентрация в среднем при УНБ не выходила за рамки колебаний физиологической нормы, у 49% женщин отмечено превышение его уровня в 1,2-1,4 раза и у 33% женщин снижение его количества в 1,3-1,5 раз. При определении 17-ОКС в суточной моче у женщин с УНБ обнаружен динамический, незначительный его прирост, независимо от того, был ли повышен или понижен уровень кортизола в крови. Установлено, что даже при незначительном снижении уровня кортизола, отмечалось снижение синтеза ТБГ, как свидетельство начала развития плацентарной недостаточности. Таким образом, снижение уровня кортизола, маркера антистрессовой устойчивости, приводило к снижению адаптационно-компенсаторных возможностей организма и развитию плацентарной недостаточности.

У женщин с вирильным синдромом отмечены низкие показатели уровня ГБГ (от 3,4 + 0,4 до 42,3 + 1,9 мкмоль/сутки в сроки с 5-й до 20-й недели, соответственно), что подтверждает связь между биосинтезом стероидных гормонов и продукцией ТБГ. Такая связь наиболее выражена именно при нарушении метаболизма стероидов в яичниках.

При УНБ в группе риска наибольший интерес представляла динамика изменения концентрации прогестерона и эстрадиола. У 68 % пациенток этой группы преобладал низкий уровень прогестерона в крови, у 46% женщин был снижен уровень эстрогенов, в наибольшей степени выражено снижение эстриола. Экскреция прегнандиола у женщин была снижена на 19 + 4 %, эстрогенов - на 17 + 3 %. Снижение уровня прогестерона и прегнандиола было связано не только с недостаточностью функции желтого тела. В большинстве случаев это являлось отражением нарушения функции трофобласта, так как у 89 % пациенток этой группы отмечались низкие показатели уровня ТБГ (в 1,5-1,8 раза ниже нормы). Снижение продукции ТБГ можно объяснить эндокринной недостаточностью трофобласта Видимо, в этом случае не стимулировалось должное продуцирование

прогестерона в желтом теле, вследствие чего уровень прогестерона в крови и прегнандиола в моче снижался. При УНБ отмечалось нарушение корреляционных взаимосвязей между прогестероном и эстрадиолом как в крови, так и в моче.

Уровень ПЛ при УНБ снижался в крови у женщин в зависимости от функционального состояния синцитиотрофобласта и имел высокую положительную корреляционную зависимость с уровнем ТБГ. Установлено, что снижение концентрации ПЛ и ТБГ, более чем в 2 раза по сравнению с показателями ФБ, приводило к прерыванию беременности.

При УНБ наблюдалось снижение концентрации ХГ как в крови, так и в моче, а также смещение максимума его продукции. Отмечен наибольший уровень ХГ на 7-9-й неделе у 15% женщин, на 11-13-й неделе - у 8% и не выявлялся вообще у 3%. Все это свидегельствовало о нарушении функции синцитиотрофобласта и желтого тела, поддерживаемого хориогонином.

Клинический анализ показал, что у всех женщин с отклонениям!.' уровня АФП в сыворотке крови, включая пациенток с предельным уровнем, беременность протекала с различными осложнениями. При изучении белоксинтетической функции ФПС у женщин этой группы было установлено, что средний уровень ТБГ у 86% женщин был снижен в 2-4 раза, по сравнению с ФБ, и отмечалось медленное нарастание ТБГ в процессе развития беременности. У остальных был обнаружен повышенный уровень ТБГ. Повышение АФП и Понижение ТБГ отражали неблагоприятную ситуацию: угрозу прерывания беременности и спонтанного аборта, патологию плаценты, гипотрофию плода. Не исключено, что основной причиной изменения уровня АФП могло быть нарушение проницаемости плаценты. Был выявлен только один случай врожденной аномалии плода.

В группе женщин с УНБ у 282 женщин были выявлены различные отклонения в гормональных показателях щитовидной железы. У 57,4% женщин отмечалось увеличение содержания т иреотропного гормона (4,6 + 1,8 мЕД/л при норме 1,38 + 0,08 мЕД/л). Из них у 136 женщин было выявлено снижение свободной формы тироксина (8,98 + 2,1 нмоль/л), и у 26 женщин нормальные его показатели 12,8 + 0,62 нмоль/л). Все это свидетельствовало о преобладании в данной группе женщин с нетяжелым или субклиническим гипотиреозом. У 91 женщины были выявлены признаки гипертиреоза, т.е. обнаружено угнетение секреции гирсотропного гормона (0,34 + 0,14 мкЕд/л) и увеличение показателей свободного тироксина (20,4 + 4,2 нмоль/л). При этом у всех перечисленных групп уровень тиреотропных гормонов оставался в пределах физиологической й&рмы (тироксин 149,9 + 3,19 нмоль/л, трийодтиронин 2,73 ± 0,12 нмоль/л), и только у 8 женщин с гипертиреозом содержание этих гормонов незначительно превышало норму. У 2,1% женщин в группе с УНБ был обнаружен сочетанный трийодтиронин-тироксин тиреотоксикоз (трийодтиронин до 4,2 + 0,1 нмоль/л; тироксин до 240,2 + 15,3 нмоль/л) при сниженном уровне тиреотропного гормона (1,18 + 0,04 мЕд/л), что

характерно для диффузнотоксического зоба. У 103 пациенток в группе с УНБ изменения щитовидной железы сопровождались повышением уровня антител к тиреоглобулину - выше 67 Ед/мл. В 16 случаях были обнаружены только повышенные уровни антител, гормоны щитовидной железы находились в пределах физиологической нормы, что позволило отнести этих пациентов в группу высокого риска по развитию в дальнейшем аутоиммунного тиреоидита. Как было показано ранее, беременность связана с гормональными перестройками, а УНБ часто связана с дисбалансом гормонов ФПС, что, естественно, отражалось и на гипофиз-тиреоидной функции. Низкие показатели уровня ТБГ в группе женщин с нарушениями в щитовидной железе, скорее всего, связаны с нарушениями стероидогенеза.

Таким образом, при патологическом течении беременности отмечается снижение содержания стероидных половых гормонов и уровня ТБГ, хотя концентрация их растет в процессе гестации, но этого уровня, видимо, недостаточно для нормального развития беременности. Следует отметить, что в группе с УНБ корреляционные связи между концентрациями различных гормонов и ТБГ более выражены, чем при ФБ. Высокая вероятность связи отмечается между уровнями ТБГ - ПЛ, эстриола, эстрадиола и прогестерона. Величины и направление корреляционных связей между отдельными гормонами или гормонами и ТБГ определялись их значимостью для роста и развития плода на каждом этапе беременности. Нарушение данных взаимоотношений может быть следствием различных патологических процессов, приводящих к дисфункции различных систем организма, в том числе и эндокринной. Варьирование концентрации гормонов гипофизарно-тиреоидной системы было менее выражено по сравнению с уровнями гормонов ФПС, но, тем не менее, физиологические изменения функциональной активности щитовидной железы происходят под действием как гипофизарных, так и плацентарных регуляторов Как было показано, система гормон-ТБГ характеризуется сущестйенными изменениями, как в их продукции, так и реализации. Учитывая тесную взаимосвязь эндокринной и иммунной систем (Кеворков и др., 1993), можно предположить, что количественные изменения в блоке гормон-ТБГ оказывают влияние не только друг на друга, но и на изменения в иммунной системе.

Изучение иммунологической значимости ТБГ

Важной проблемой взаимоотношений мать-плод является вопрос сохранения фетоплацентарной системы как аллотрансплантанта в материнском организме. Решающую роль в равновесии иммунологических реакций между матерью и плодом играет трофобласт. Поэтому было необходимо выяснить роль ТБГ, как маркера трофобласта, в этих процессах.

При ФБ отмечалось формирование полноценного иммунного ответа на антигены плода на фоне перестройки эндокринной системы женщины. Наблюдалась депрессия реакций клеточного иммунитета, что проявлялось в

перераспределении субпопуляций лимфоцитов, выраженной неспецифической Т-клеточной супрессии и динамическом росте уровня ТБГ. При УПБ в большинстве случаев отмечалось снижение Т-клеточной супрессии, отсутствие блокирующих свойств сыворотки крови в реакции подавления прилипания лейкоцитов и снижение уровня ТБГ. При неразвивающейся беременности выявлена значительно выраженная неспецифическая Т-клеточная супрессия на фоне пониженного или отсутствующего синтеза ТБГ. Ингибирующее действие ТБГ на иммунную систему, направленное на защиту плода, начинало действовать отрицательно на защитные реакции организма женщин после прерывания беременности. Пролонгированный синтез ТБГ свидетельствовал об активности трофобласта и включении ТБГ в иммунный процесс воспалительной реакции, что важно при диагностике осложнений после абортов. Изменение супрессорной доминанты при УНБ позволило высказать предположение, что нарушение секреции ТБГ играет важную роль в прерывании беременности в первой её половине. Показано, что в наиболее ранние сроки беременности, несмотря на понижение уровня ТБГ, его концентрации хватает для осуществления контроля за Т-клеточными популяциями. В таких случаях наибольшую информацию об иммунном состоянии давали блокирующие факторы. При УНБ выявлялись отклонения в динамике содержания иммуноглобулинов. Между и 1ЩК были обнаружены различные соотношения, что зависело от сопутствующего заболевания и фазы иммунного ответа организма женщин на данное заболевание. При значительно сниженном уровне ТБГ содержание ЦИК увеличилось в 1,5 -2,5 раза. Низкие уровни ТБГ в таких случаях можно объяснить связыванием ТБГ с и включением их в ЦИК, так как после проведенного лечения у женщин этой группы отмечался рост уровня ТБГ, снижение уровня ЦИК, достоверное повышение уровня и уменьшение уровня В тех же случаях, когда уровень ТБГ после проведенного

лечения повышался, но оставался в пределах нижних нормативных значений, уровень повышался, но был ниже нормы для данного срока ФБ, в то время как уровень 1§М оставался повышенным. Снижение уровня ЦИК можно расценивать как разблокирование моноцитарно-макрофагалыгей системы, а неравномерный уровень повышения ТБГ можно объяснить различным выходом его связанной формы из ЦИК. Иммуногенность ТБГ оценивали по способности к образованию ЦИК. В группе женщин с УНБ она более выражена, чем у женщин с ФБ, что свидетельствовало о наличии патологического процесса

В оценке характера осложнений беременности важное диагностическое значение имело определение уровня цитокинов: ИЛ-1(3, ИЛ-6, ИЛ-8, ФНО-а - как медиаторов воспаления, и ИЛ-10, обладающего протективными свойствами. Прослеживалась обратная корреляционная зависимость между содержанием ИЛ 1Р, ИЛ-6, ИЛ-8 и ТБГ. Между ИЛ-10 и ТБГ отмечена прямая корреляционная связь. Уровень ФНО имел разнонаправленный характер, что, видимо, связано с широким

распространением экспрессии гена ФНО в различных типах клеток, кроме клеток гемапоэтической природы. Высокий уровень чаще коррелировал с очень низким уровнем ТБГ и выраженным воспалительным процессом.

Иммуномодулирующие процессы при развитии беременности связаны, с одной стороны, с иммуносупрессией, необходимой для предохранения плода от отторжения организмом матери, а с другой стороны, с возможной активацией иммунной системы при различных отклонениях протекания беременности. С этой целью было проведено исследование активности иммунокомпетентных клеток в ответ на стимуляцию ЛПС, универсальным индуктором цитокинов различного профиля. Для этого был исследован уровень ФНО-а в тестах in vitro до и после стимуляции ЛПС клеток периферической крови у здоровых небеременных женщин, а также женщин с ФБ и при УНБ с повышенным и пониженным уровнем ТБГ в 5-10 недель.

Как видно из таблицы 6 при ФБ способность иммунокомпетентных клеток продуцировать ФНО-а до и после стимуляции ЛПС выше, чем у здоровых небеременных женщин. Это свидетельствовало о том, что при ФБ иммунокомпетентные клетки находились в функционально активном состоянии. Невынашивание беременности сопровождалось снижением спонтанной продукции ФНО-а: при повышенном уровне ТБГ в сыворотке крови на 7%, при пониженном - на 61% по сравнению с группой женщин с ФБ. Для характеристики резервной способности клеток к продукции цитокинов рассчитан индекс стимуляции цитокиновой продукции, который учитывал изменение реактивности иммунокомпетентных клеток под действием ЛПС.

Таблица 6. Спонтанный и ЛПС-стимулированный синтез ФНО-а

Группы женщин Нестимулированные ИКК, % Стимулированные ИКК ЛПС (10 мкг/мл), % Индекс стимуляции

Небеременные женщины 100* 113 1,00**

ФБ 113 139 1,06

УНБ, уровень ТБГ повышен 106 156 1,26

УНБ, уровень ТБГ понижен 52 94 1,55

*.за 100% приняты значения уровня ФНО у небеременных здоровых женщин ** за 1.00 принят индекс стимуляции ЛПС клеток небеременных здоровых женщин

Данные таблицы показали, что при невынашивании беременности отмечался более высокий индекс, причем при пониженном синтезе ТБГ он самый высокий. Дисбаланс иммунорегуляторных процессов при нарушении синтеза ТБГ проявлялся снижением синтеза ФНО-а - -и--более высоким уровнем индекса стимуляции. Это г '^^¿¡(¡^^¡^¡^^^^ татологическом

СПетербург О» 800 «т ^ ^

развитии трофобласта способность иммунокомпетентных клеток усиливать синтез цитокинов в ответ на индуктор значительно увеличивалась, несмотря на снижение их базового функционального состояния.

Таким образом, наличие низких концентраций ТБГ может служить одним из дополнительных критериев иммунологической несостоятельности системы взаимоотношений мать-плод, поскольку в разные периоды, наряду с изменением уровня других плацентарных белков, он может обеспечивать оптимальный уровень активации или супрессии иммунной системы. Иммуногенность ТБГ (способность индуцировать антитела к ТБГ) при УНБ более выражена. Пониженный уровень ТБГ может быть показателем для проведения соответствующей иммунокоррегирующей терапии. Но не следует забывать, что ТБГ - это маркер трофобластического роста, который характеризует состояние и перспективу развития трофобласта. По его уровню можно только косвенно судить о состоянии развития плода. Низкие уровни ТБГ свидет^ чествуют об аномальном функционировании трофобласта и, следовательно, о снижении его защитных свойств от иммунной агрессии организма матери, что приводит к нарушению развития плода.

Влияние метаболических процессов на продукцию ТБГ

Неполноценное формирование и функционирование трофобласта в организме женщин связано с ферментативной активностью дегидрогеназ и гидролаз, действие которых направлено на поддержание высокой метаболической активности плаценты. О ранних метаболических изменениях судили по средним значениям активности ферментов: СДГ -ключевого фермента цикла Кребса, а-ГФДГ, характеризующей обмен фосфолипидов и синхронность в процессах гликолиза и биологического окисления, ЩФ - индикатора гормональной функции яичников и интенсивности фагоцитарных реакций.

При ФБ в 1-й половине отмечалась устойчивость и лабильность ферментативного статуса лейкоцитов (табл. 7), и динамический рост уровня ТБГ. Несмотря на то, что идет истощение биоэнергетических ресурсов беременных женщин после естественных метаболических нагрузок, связанных с оплодотворением яйцеклетки, имплантацией эмбриона и прогрессированием беременности в норме, организм женщин самостоятельно компенсирует все затраты.

Показано, что при УНБ на фоне низких показателей ТБГ отмечено снижение активности СДГ на 18% и а-ГФДГ на 15% в лимфоцитах Выявлено понижение активности щелочной фосфатазы нейтрофилов на 19% у 88% женщин. Это свидетельствовало не только о гормональной недостаточности, но и о нарушении энергопродукции, так как известно, что ЩФ является поставщиком метаболитов для гликолитических реакций. У женщин с наличие^ бактериальной инфекции выявлена высокая активность

* N4 • ' - .<4- .1 ,

щелочной фосфатазы (табл.7). В группе женщин с УНБ (неблагоприятный прогноз), отмечалось резкое снижение активности всех ферментов.

Таблица 7. Активность ферментов лимфоцитов и нейтрофилов крови женщин при ФБ и УНБ__

ФБ УНБ

Фермент 4-5 8-10 14-16 18-20 4-5 8-10 14-16 18-20

нед. нед. нед. нед. нед. нед. нед. нед.

СДГ 19,4 20,8 20,4 204 16,2 16,8 17,0 16,8

гр/лф ±1,2 ±1,4 ±1,4 ±1,6 ±1,4* ±1,2* ±1,3* ±1,5*

а-ГФДГ 12,6 13,8 14,0 14Д 10,8 11,8 12,0 12,2

гр/лф ±0,6 ±0,8 ±0,7 ±0,8 ±0,4* ±0.6** ±0,7** ±0,8**

ЩФ 80,5 86,0 89,5 92,5 67,7 68,0 72,5 73,1

Усл.ед. ±2,5 ±2,4 ±3,9 ±3,1 ±1,8* ±2,0* ±2,9* ±4,0*

Щф*** - - 96 109 120 119

Усл.ед. ±2,7* ±3,6* ±4,2* ±5,5*

* - р < 0,05 ** - р < 0,01 по сравнению с группой ФБ, ЩФ*** - группа женщин с бактериальной инфекцией

При УНБ отмечена инверсия соотношения а-ГФДГ к СДГ. Обнаружено, что, при соотношении более или равном 0,7 (при норме 0.50.7), у 15% женщин уровень ТБГ находился в пределах нижней границы нормы, у 42% был снижен в 1,5-2 раза и у 43% - более чем в 3-5 раз. Чем выше был уровень соотношения, тем ниже был уровень ТБГ, что свидетельствовало о тканевой гипоксии, связанной с нарушением каскада реакций аэробного гликолиза у женщин с УНБ. При уровне ТБГ, соответствующем нижнему нормативному значению, через неделю проводили повторное его определение, поскольку данный уровень чаще всего являлся сигналом начинающихся метаболических отклонений в организме матери и надежным прогностическим критерием развития гипоксии плода. Полученные результаты показали, что неполноценное формирование и функционирование трофобласта в организме матери может быть связано с разбалансировкой ферментативной активности дегидрогеназ и гидролаз, действие которых направлено на поддержание высокой активности плаценты. Уровень ТБГ в данном случае являлся эффективным критерием, характеризующим нарушения трофической и синтетической функции цито- и синцитиотрофобласта и показывал глубину нарушения метаболических процессов. Выявлена прямая корреляционная связь между уровнем ТБГ и величинами активности ферментов лимфоцитов и нейтрофилов: г Сдг = + 0,69 (р < 0,05); г Щф = + 0,73 (р < 0,05), г 0 ГФДГ = + 0,71 (р < 0,05); что указывает на высокую вероятность связи между этими показателями.

Таким образом, низкий уровень ТБГ может быть сигналом начавшихся метаболических отклонений в организме матери и является достаточно надежным прогностическим показателем развития гипоксии плода.

ТБГ - как индикатор эффективности лечения

Многолетний опыт клинического применения ТБГ как маркера беременности показал, что уровень ТБГ можно успешно применять как чувствительный индикатор эффективности проводимого лечения, поскольку он наиболее точно отражает состояние ФПС, быстро реагирует на различные нарушения в организме.

Показано, что предложенный упрощенный вариант метаболической терапии, так же как и стандартный (Сидельникова. 2000), стабилизировал компенсаторно-метаболические процессы в тканях матери, способствовал созданию благоприятных условий для функционирования метаболической системы мать-плацента-плод (рис. 9). Это проявлялось в достоверном повышении активности лейкоцитарных ферментов и уровня ТБГ, между изменениями которых существовала положительная корреляционная связь.

ТБГ, мкг/мл

3 4 5 6 группы женщин

В 5-6 нед. ■ 8-9 нед. □ 13-14 нед. □ 19-20 нед

Рис. 9. Влияние метаболической терапии на динамику уровня ТБГ; 1 - ФБ; 2 -УНБ; 3 - УНБ с неблагоприятным прогнозом; 4, 5 - стандартная схема лечения в 2, 3 группе 6, 7 - упрощенная схема лечения во 2, 3 группе; 8 - реабилитационная группа

Проведение реабилитационных мероприятий до наступления беременности, а также регулярное применение метаболической терапии во время беременности, нормализовало окислительно-восстановительные процессы в организме матери, оптимизировало белоксинтезирующую функцию плаценты и приводило к благоприятному течению гестационного процесса. Это проявлялось в адекватном повышении уровня ТБГ (рис. 9). Отклонение от уровня ТБГ при ФБ в данном случае являлось с одной стороны тестом для прогнозирования плацентарной недостаточности, с другой стороны - индикатором эффективности проводимой терапии.

В упрощенном варианте использование коферментов в сочетании с витаминами и минералами позволило активировать многие биохимические

процессы, способствующие стабилизации уровня ТБГ. При снижении ТБГ до лечения более чем на 50% эффективнее использовать стандартный мегод, так как он действует поэтапно: сначала восстанавливает реакции цикла Кребса, а затем нормализует окислительно-восстановительные прои - -ы в клетке.

Одной из важных причин дисбаланса репродуктивной d ункции ж-" щин в последнее время является увеличение частоты заболеваний половых органов. При обследовании групп женщин с пониженными показателями ТБГ было выявлено, что при посеве из цервикального канала из бактериальных возбудителей на первое место вышли грамотрицательные бактерии Е coli (18%). Уровень ТБГ в этой группе женщин был снижен в 1,2-1,5раза, что, видимо, зависело от течения воспалительного процесса. При подготовке женщин к беременности с обнаруженной Е coli использовали полисахарид - хитозан, обладающий высокими энтеросорбционными и бактерицидными свойствами, а также «ДНКа С» и «Тинростим +», которые обладают высокой иммуностимулирующей активностью.

В зависимости от длительности течения воспалительного процесса (времени инкубации клеток с поступающим из кишечника эндотоксином грамотрицательных бактерий) были выявлены различные изменения в гемостазиограмме. Применение хитозана, являющегося протектором рецепторов мембран тромбоцитов (Ермак И.М, 1994) стабилизировало их функцию. В эксперименте in vitro было подтверждено, что хитозан являлся не только хорошим адсорбентом, но и индуктором агрегации тромбоцитов (рис. 10), что и было использовано для повышения эффективности лечения.

Влияние хитозана на гемостаз.

0 донор □ хитозан 10

■ хитозан 1 □ хитозан 100

сек.

Влияние каррагинана на гемостаз

1 2 3 4 5 6 Показатели гемостаза

В донор ■ каррагинан 10 П каппагинзн If! п мппагцгаи 1(10

Рис. 10. Влияние in vitro хитозана и каррагинана на leMOcrai; 1 - агрегация тромбоцитов, 2 - АЧТВ, 3 - АВР, 4 - ТВ, 5 - AT-III, б - ПВ

Предложенная схема применения хихозана, «Тинростима +», «ДНКа С» и метаболической терапии в комплексе с лечением выявленной бактериемии вне беременности, была эффективной и оказывала положительное влияние на трофобласт при наступлении беременности (рис. 11). Таким образом, показана возможность коррекции БАДами морского происхождения выявленных нарушений у женщин с привычным невынашиванием для подготовки организма женщины к предстоящей беременности.

ТБГ, мкг/мл

2 3

группы женщин

Н 5-6 нед

9-10 нед П 13-14 нед

Рис. И. Динамика уровня ТБГ при ФБ (1), УНБ (2), после традиционного метода лечения (3), после комплексного лечения с хиточаном (4)

В эксперименте был изучен другой полисахарид - каррагинан, обладающий протективным эффектом против эндотоксинов грамотрицательных бактерий и влияющий не только на тромбоцитарный гемостаз, но и на плазменный, и первичные физиологические антикоагулянты (рис. 10). Учитывая, что при наступлении беременности все эти факторы влияют на синтез и транспорт ТБГ, работа в данном направлении продолжается.

Антигены, способные приостановить иммунные реакции, направленные на элиминацию трофобластических клеток, и вызвать образование блокирующих антител, были обнаружены Говало (Говало, 1985) в лейкоцитах. При УНБ практически всегда имеются расстройства иммунорегуляции. Они выражаются преимущественно в ослаблении местной иммуносупрессии, играющей значительную роль в защите плода. Важную роль в локальной супрессии играет плацента. Для ее полноценного развития необходимы иммунорегуляторные сигналы, в частности, -материнские антитела против антигена мужа. Стимуляция этого звена при УНБ достигается введением аллоантигенных клеток в обход репродуктивного тракта. Данный метод иммунотерапии используется в лаборатории МО ДВО РАН с 1991 года.

На рис. 12 приведены результаты динамики ТБГ после проведения иммунотерапии. Иммунизацию, в основном, проводили с 5-ой недели беременности, поскольку иммунологические механизмы включаются лишь после того, как трофобласт вступил в тесный контакт с кровеносной системой матери.

1 2 3 4 5 6

группы женщин

Рис. 12. Динамика уровня ТБГ после проведения иммунотерапии женщинам с УНБ в 5 недель беременности; 1 - ФБ, 2 - иммунотерапия лимфоцитами мужа, 3 -иммуннотерапия лимфоцитами доноров, 4 - неэффективная иммунизация, 5 -комплексная терапия, 6 - иммунотерапия эффективна, но срок действия её низкий

Механизм лечебного эффекта связан со следующими процессами: с появлением дополнительного антигенного стимула и повышением блокирующих антител; образованием антител, реагирующих с антигенами трофобласта, и ростом уровня ТБГ; активацией продукции цитокинов; блокадой цитотоксических и усилением супрессорных локальных иммунных механизмов; нормализацией уровня гормонов, а также с увеличением активности лимфоцитарных дегидрогеназ до физиологического уровня. Иммунокоррегирующий эффект иммунизации продолжался в течение 1-1,5 месяцев.

Проведение иммунотерапии в системе комплексного патогенетического лечения УНБ является эффективным методом профилактики выкидыша. Как? видно на рис. 12 ТБГ оказался информативным показателем эффекта иммунотерапии. Применение иммунотерапии при подготовке к планируемой беременности стабилизировало уровень ТБГ с ранних сроков беременности.

Показано, что:

* При гиперандрогении иммунотерапия оказывала негативное влияние, приводя к избыточной продукции стероидных гормонов. Иммунизация в этих случаях показана, только после нормализации уровня ДЭА (17-КС).

* При сохранении беременности у женщин с хроническим эндометритом

необходима иммунизация лимфоцитами для синтеза недостающих защитных антител.

* Иммунизация женщин с цитомегаловирусной инфекцией приводила к благоприятному течению беременности. Это, видимо, связано с активацией иммунной системы, приостановлением на какое-то время размножения вируса, который приводит к частичной гибели трофобласта и снижению продукции ТБГ. После иммунизации, несмотря на увеличение уровня ТБГ до 39,8 + 3,2 мкг/мл к 20-й неделе беременности, среднее его значение оставалось низким, но, тем не менее, беременность прогрессировала.

* Отсутствие эффекта от иммунотерапии наблюдалось у группы женщин с положительной реакцией на ВА. Снижение ТБГ при ВА объясняется тем, что фосфолипиды как компоненты клеточной мембраны, принимают участие в процессах адгезии при формировании синцитиотрофобласта. Антитела к фосфолипидам способны нарушать процесс образования синцития из трофобласта, что приводит к задержке синцитиолизации цитотрофобласта. Женщинам с положительной реакцией на ВА противопоказана иммунизация, так как усиление процессов антигенного распознавания может привес!и к обострению аутоиммунного процесса и к ухудшению течения беременности.

С целью повышения эффективности лечения УНБ дополнительно применялась микроиглотерапия путем длительного воздействия (от 7 до 14 дней) в корпоральные биологические точки (^ЗЛ 0-08, У26, У25-ПЯ, У24, У23-08). Применение микроиглотерапии с ранних сроков беременности нормализовало маточно-плацентарное кровообращение, гормональную и белоксинтезирующую функции плаценты, что проявлялось в достоверном повышении уровня ТБГ уже после 4-6-ти сеансов и увеличении содержания прогестерона (прегнандиола) после 8-12-ти сеансов. После проведения курса лечения отмечена стабилизация показателей уровня ТБГ, что свидетельствовало о восстановлении на данном этапе продуцирующей функции плаценты. Эффект был стойким в течение 3-4-х недель.

Известно, что пороки развития плода, низкая масса при рождении и последующее отставание физического и психического развития ребенка обусловлены воздейсшием алкоголя. Свободные радикалы и другие продукты метаболизма этанола способствуют запуску массивных радикальных, лиио- и гликолитических реакций, а также перекисного окисления липидов, что приводит к поражению печени (Кушнерова, 1992). Изучена возможность профилактики растительным комплексом метаболических нарушений у женщин с диагнозом «привычное невынашивание», злоупотребляющих алкоголем. Для коррекции метаболических нарушений и подготовки ФПС организма к предстоящей беременности использовали растительный комплекс олигомерных проантоцианидинов, выделенных из калины (КОПЦ), в сочетании с витаминно-минеральными комплексами.

Как показано в таблице 8, при анализе гормональной функции ФПС на 9-10-й неделе беременности у женщин 2-й группы отмечалось выраженное её угнетение Развитие тканевой гипоксии подтверждалось достоверным

снижением СДГ и а-ГФДГ. Увеличение активности ЩФ свидетельствовало об усилении проницаемости лизосомальных мембран к выходу литических ферментов в кровь в ответ на алкогольную интоксикацию, а, возможно, имело компенсаторный характер, обусловленный наличием бактериальной инфекции. На 20-й неделе у женщин 2-й группы сохранились сниженные величины исследуемых биохимических параметров.

Таблица 8. Динамика показателей гормонов и ферментов лейкоцитов и нейтрофилов в крови беременных женщин, злоупотребляющих алкоголем (М±м) _' _____

Биохимически е парамет ры Срок беременности (недели) 1-я группа контроль (интактные) 2-я группа беременность (алкоголь) 3-я группа беременность (алкоголь) +терапия +КОПЦ

ХГ 9-10 36181±8535 24945+4489* 26732±3112*

(МЕ/л) 19-20 22121+3920 13166±3488* 1875±2746

ПГ 9-10 70±4,63 62,3+3,6* 65,4±3,2*

(нмоль/л) 19-20 128±12,1 98,8±9,9* 116±10,0

Е2 (нмоль/л) 9-10 19-20 7,39±0,89 38,8+3,91 5,8+1,2* 25,4±2,1* 6,2±0,73* 32,0+2,2

ПЛ 9-10 15,2±1,84 11,8+1,1** 12,0±0,87**

(нмоль/л) 19-20 154,2±14,8 П9,8±12,4* 142+123

ТБГ 9-10 12,7±1,6 8,5±1,9 * 8,9+1,5*

(мкг/мл) 19-20 53,8±5,7 32±4,2* 47,4+3,7

СДГ 9-10 19,4+1,2 14,9+1,3** 15,8±1,1**

(гр/лф) 19-20 20,4+1,4 16,4±1,4** 18,6±0,83

а-ГФДГ 9-10 12,6±0,6 8,2±0,5** 8,9±0,4**

(гр/лф) 19-20 14,5±0,8 93±0,4** 12,60+0,6

ЩФ 9-10 80,5±2,5 83,2+9,2* 81,6+2,1

(усл.ед.) 19-20 91,9±3,6 96,1+12,1* 90,3±1,7

Достоверные различия от контроля: * -р < 0,05;** -р < 0,01

Проведенная профилактика КОПЦ в комплексной терапии восстановила физиологические процессы в тканях матери и способствовала созданию благоприятных условий для функционирования системы мать-плацента-плод, о чем свидетельствовало повышение уровней ТБГ, гормонов (табл. 8, 3-я группа), а также ферментов: СДГ, а-ГФДГ и ЩФ.

Результаты, приведенные в данной главе, показывают, что тест на ТБГ является достаточно информативным индикатором оценки эффективности проводимого лечения.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Многие исследователи стремятся найти диагностические критерии для выявления патологии плода и осложнения течения беременности, особенно в ранний период беременности. Одним из представителей биохимических маркеров беременности является ТБГ Модифицированная и ядяптирппянняя

к новым условиям предложенная нами тест-система определения уровня ТБГ получила широкое практическое применение в клинической практике.

Анализ литературных данных и наших результатов показал, что ТБГ может быть использован не только как маркер завершения имплантации, течения маточной беременности и её патологии, но и как показатель эффективности медицинских и медикаментозных абортов и их осложнений, а также как один из критериев патологии мужской репродуктивной сферы. В сочетании с УЗИ определение ТБГ позволяет выявить эктопическую беременность. В то же время ТБГ является достаточно информативным индикатором остаточного роста при онкопатологии трофобласта Исследование соотношения нормального и онкотрансформированного антигена с помощью лектинов может дагь дополнительную информацию для диагностики патологии трофобласта и оценки эффективности проводимого лечения.

Экспериментальный анализ пссазал, что к снижению синтеза и транспорта ТБГ' приводят:

- морфологические и рецепторные изменения в эндометрии;

- наличие вирусной и бактериальной инфекции;

- недостаток и дисбаланс гормонов;

- нарушение микроциркуляции и тромбообразования;

- наличие аутоиммунных нарушений;

- изменения в иммунных процессах;

- нарушение в метаболических процессах.

Мы рассмотрели отдельно каждый фактор, влияющий на уровень ТБГ, чтобы лучше понять влияние биохимических и иммунохимических процессов на синцитий, но в организме они взаимодействуют в комплексе и эти отношения носят более сложный характер. При относительной недостаточности одного из необходимых факторов нарушается, прежде всего, синхронная деятельность органоидов синцитиотрофобласта. Действующие в это время компенсаторные реакции в виде усиления активности отдельных факторов (например, гормонов, ферментов, плазменных факторов и т.д.) не обеспечивают функциональной активности трофобласта, вследствие чего снижается его способность к синтезу ТБГ. Чем более выражено действие перечисленных факторов, тем более выражены морфофункциональные изменения в трофобласте, приводящие к нарушению его функций: синтетической, транспортной, трофической, эндокринной и метаболической. Проведенные патоморфологические исследования абортного материала и образцов послеродовых плацент подтвердило тесную взаимосвязь между низким уровнем ТБГ и плацентарной недостаточностью.

Многолетний опыт клинической работы с применением ТБГ как маркера беременности показал, что определение уровня ТБГ можно успешно применять как чувствительный индикатор эффективности лечения, поскольку он наиболее точно отражает состояние ФПС, быстро реагирует на биохимические и иммунохимические изменения в организме. Путем

динамического исследования уровня ТБГ можно диагностировать угрозу выкидыша даже при отсутствии клинических симптомов, начиная с 4-5-й недели беременности Сравнение ТБГ-теста с другими диагностическими характеристиками показало, что он имеет высокую точность прогноза, а использование его в сочетании с другими лабораторными показателями значительно повышает его ценность (см. алгоритм обследования женщин).

В работе рассмотрены различные виды терапии, оказывающие положительное влияние на синтез ТБГ и его транспорт:

- Гормональная терапия (при гиперандрогении - глюкокортикоидные

препараты; при низком уровне секреции эстрадиола или появлении кровянистых выделений - эстрогенные препараты; при низком приросте сывороточного прогестерона - утрожестан, дюфастон).

- Иммунотерапия лимфоцитами мужа или донора (введенные лимфоциты играют роль дополнительного антигенного стимулятора, который усиливает распознавание матерью отцовских антигенов и способствует прогективным механизмам беременности).

- Микроиглотерапия (для восстановления материнско-плацентарного кровообращения, транспорта питательных веществ и газообмена в плаценте).

- Метаболическая терапия (восстановление окислительно-восстановительных процессов и энергетики клетки).

- Применение препаратов, стабилизирующих фибринолиз, тромбоцитарное и плазменное звено гемостаза.

- Использование биологически активных добавок - хитозана, «Тинростима +», «ДНКа С» (при подготовке к беременности в группе риска по плацентарной недостаточности).

Обобщая вышесказанное, следует отметить, что каждый вид терапии стимулирует определенное звено биохимического и иммунного процесса для включения общего механизма сохранения ФПС. Определение уровня ТБГ в динамике позволяет получить более полную информацию о состоянии плаценты матери и эффективности проводимого лечения, так как выявленная взаимосвязь биохимических и иммунохимических процессов с синтезом ТБГ показала его высокую специфичность для оценки функции ФПС. Диагностические и лечебно-профилактические мероприятия позволили добиться рождения жизнеспособного потомства у 93,5% женщин.

Экспериментальные данные дают основание по-новому подойти к решению многих практических вопросов при эмбриогенезе, лучше понять биологическую роль ТБГ в биохимических и иммунологических процессах.

ВЫВОДЫ

1. Разработана и внедрена в производство и клиническую практику тест-

система иммуноферментного определения ТБГ. Показана практическая

значимость и перспективность применения ТБГ-теста, а так же

преимущество ТБГ как объективного критерия клинической и доклинической оценки эмбрио- и канцерогенеза.

2. Установлены пределы физиологических колебаний биохимических (гормоны, ферменты, ТБГ)> гемостазиологичсских (тромбоцитарный, плазменный, фибринолитический), иммунологических (клеточный, гуморальный, цитокины) параметров здоровых беременных женщин и женщин с УНБ, проживающих в Приморском крае.

3. Выявлена положительная корреляционная связь между уровнем ТБГ и стероидными половыми гормонами. Методом флуоресцентной спектроскопии показано сродство ТБГ с прогестероном, тестостероном, эстрадиолом, эстриолом и холестерином, рассчитаны константы их связывания с ТБГ.

4. Доказана корреляционная зависимость между нарушениями в системе гемостаза и нарушением синтеза и/или транспорта ТБГ. Экспериментально показано, что ТБГ, влияет на тромбоцитарный гемостаз и антисвертывающую систему крови беременных женщин.

5. Впервые определен уровень ТБГ в бластоцистах и сыворотке крови женщин после ЭКО, а так же в семенной плазме мужчин. Показана диагностическая значимость ТБГ при имплантации и патологии мужской репродуктивной сферы.

6. Определена значимость уровня ТБГ при аутоиммунных процессах, связанных с частичным повреждением 'синцития и не полностью восстановленном маточно-плацентарном кровообращении.

7. Доказано, что ТБГ может служить одним из дополнительных критериев иммунной несостоятельности системы мать-плацента-плод. Установлено, что иммуногенность ТБГ в группе женщин с УНБ более выражена, чем при ФБ, что свидетельствует о патогенности процесса.

8. Показано, что при патологическом развитии трофобласта функциональное состояние иммунокомпетентных клеток снижено, но их способность синтезировать цитокины усиливается в ответ на индуктор — ЛПС.

9. Показано, что тест на ТБГ является уникальным и наиболее информативным для оценки эффективности проводимых лечебных мероприятий: иммунотерапии лимфоцитами мужа или донора, гормональной, метаболической, микроиглотерапии, а также препаратов, стабилизирующих гемостаз и позволяющих своевременно провести коррекцию и способствовать развитию плода: хитозана, «Тинростима +», «ДНКа С», растительного комплекса олигомерных проантоцианидов.

10.Показана перспективность использования тест-системы на основе лектина СвЬ для дифференциальной диагностике УНБ от начинающегося опухолевого процесса.

11 .Предложен алгоритм обследования женщин с УНБ.

Алгоритм обследования женщин с УНБ. 4-6 недель

10-12 недель

15-21 недель

29-30 недель

Контроль функции плаценты после окончания ее роста

'повторное обследование I при необходимости

Список публикаций

В реферируемых журналах:

1. Богданович Р.Н., Берестовая Т.А. Клиническое значение иммуноферментного анализа трофобластического бста-1 гликопротеина // Лабораторное дело. 1990. X» 9. С. 43-45.

2. Богданович Р.Н., Чикаловец И.В. Трофобластический бета-1 гликопротеин и система гемостаза у беременных с антифосфолипидным с ндромом //Бюл. экспер. биол. и мед. 2002. Т. 134, № 10. С. 460-462.

3. Богданович Р.Н., Чикаловец И.В. ТБГ в клинической практике (обзор) // Клин. лаб. диагн. 2004. № 2. С. 3-8.

4. Богданович Р.Н., Чикаловец И.В., Берестовая Т.А. Система гемостаза и трофобластическй бета-1 гликопротеин при невынашивании беременности // Биомед химия. 2004. Т. 50, № 2. С. 198-203.

5. Богданович P.II., Чикаловец И.В. Значение трофобластического ß-1 гликопротеина в иммунологии репродукции // Русский журнал иммунологии. 2004. Т. 9, № 1. С. 4.

6. Богданович Р.Н., Беликов В.А., Бересшвая Т.А., Лебедева Е.Е. Трофобластический бета-1 гликопротеин в программе ЭКО // Проб, репрод. 2004 №. 5. С. 108.

7. Богданович Р.Н., Чикаловец И.В., Беликова О.В., Лушникова З.А. Определение трофобластического ß-1 гликопротеина у женщин во время беременности, в послеабортный период, а также в семенной плазме мужчин //Акуш. и гинек. 2005. № 1.- С 22-25.

8. Богданович Р.Н., Кушнерова Н.Ф., Берестовая Т.А. Взаимосвязь гормональной активности с трофобластическим ß-1 гликопротеином при физиологической беременности // Физиология человека. 2005. № 2. С. 163-167.

9. Богданович P.II., Чикаловец И.В. Методические подходы к определению трофобластического ß-1 гликопротеина // Клин. лаб. диагн. 2005. №3. С. 9-11.

Ю.Богданович Р.Н., Чикаловец И.В., Бандур H.H. Синтез трофобластического ß-1 гликопротеина при наличии аутоантител у беременных женщин // Мед. иммун. 2005. Т. 7, № 1, С. 85-88.

11 .Bogdanovich R.N., Kushnerova N.F., Berestovaya Т.А. Relationship between hormonal activity and trophoblastic [beta]-1 Glycoprotein in normal pregnancy //Human Physiology. 2005. Vol 31, № 2. P. 210-313.

12MoIchanova V., Chikalovets L, Li Wei, Kobelev S, Kozyrevskaya S., Bogdanovich R., Belogortseva N. New GlcNAc/GalNAc-specific lectin from ascidian Didemnum ternatanum // Biochim Biophys. Acta. 2005. Vol. 17, № 23. C. 82-90.

13.Богданович P.H., Чикаловец И.В., Черников O.B., Лукьянов П.А. Трофобластический бета-1 гликопротеин - маркер эмбрио- и канцерогенеза // Бюллетень Восточно-Сибирского Научного Центра СО РАН. 2005. №4. С. 30-34

14.Ермак И.М., Барабанова А.О., Кукарских Т.А., Соловьева Т.Ф., Богданович Р.Н., Полякова A.M., Астрина О.П., Малеев В.В. Природный полисахарид каррагинан, как ингибитор токсического действия эндотоксинов грамотрицательных бактерий // Бюл. экспер. биол. и мед. 2005. Т. 140

15.Богданович Р.Н., Берестовая Т. А., Лукьянов П. А. Значение определения гормонов фетоплацентарной системы и трофобластического (3-1 гликопротеина у беременных женщин для диагностики плацентарной недостаточности // Рос. вест. акут, и гин. 2005. № 6. С. 4-6

Методические рекомендации

16.Богданович Р.Н., Мороз С.В. Клиническое применение иммуноферментного определения трофобластического бета-1 гликопротеина в сыворотке крови // Методические рекомендации. Владивосток: Дальнаука, 2000 - 15 с.

17.Богданович Р.Н., Чикаловец И.В., Берестовая Т.А. Иммунотерапия при невынашивании беременности // Методические рекомендации. Владивосток: Дальнаука, 2000 - 12 с.

Публикации в других изданиях:

18.Bikova Е., Gerula N., Bogdanovich R. The indexes of the immunity in case of Cytomegalovirus infection (CMV) // Cong. «1-st Immunological Congress of Latvia»: Abstrs. - Riga, 1991. P. 5.

19.Bogdanovich R., Chikalovets I., Moros C. Trophoblastic [3-1 -glycoprotein (SP1) in diagnostics and monitoring of pregnancy and monitoring of pregnancy and oncopatology // Intern Soc. Oncodevelopment Biol. Med.-Abstract - Netherlands, 1994. P. 273.

20.Богданович P.H., Берестовая T.A. Некоторые аспекты обследования и лечения беременных женщин с угрозой выкидыша в ранние сроки беременности // V Российский Съезд специалистов по лабораторной диагностике: сб. тез. докл. - Москва, 1995. С. 36-37.

21.Богданович Р.Н., Чикаловец И.В. Микрометод иммуноферментного определения трофобластического В-1 гликопротеина // V Российский Съезд специалистов по лабораторной диагностике: сб. тез. докл. -Москва, 1995. С. 37

22.Bogdanovich R, Berestdvaya Т., Chicalovets I. Efficacy of immunotherapy at spontaneous abortion //Int. Symp. Immunol, of Reprod.: Abstract-Kiev, 1996. P. 83.

23.Lukianov H., Bogdanovich R. Examination and treatment of pregnant woman with threatened abortion in early pregnancy //Int. Symp. Immunol, of Reprod.: Abstract - Kiev, 1996. P. 88.

24.Богданович P.H., Рябова H.H. Лабораторная диагностика привычного невынашивания // Материалы докладов Межд. научно-практ. конф / «Этика, деонтология в медицине на современном этапе»: сб. расш. тез. - Владивосток, 1998. С-406-408.

25.Богданович Р.Н., Берестовая Т.А. Иммунотерапия беременных женщин с привычным невынашиванием беременности. //Материалы докладов Межд. научно-практ. конф. «Этика, деонтология в медицине на современном этапе» »: сб. расш. тез. - Владивосток, 1998. С.438-440.

26.Богданович Р.Н., Чикаловец И.В., Берестовая Т.А. Трофобласт-специфический бета-1 гликопротеин в диагностике и мониторинге беременности // Актуальные проблемы репродуктивного здоровья: сб. научн.тр. / под ,~>ед. JT.A. Кайгородовой. - Владивосток: Дальневосточный университет, 1999. С. 231-240.

27.Богданович Р.Н., Берестовая Т.А. Метаболическая терапия и её влияние на содержание грофобластического бета-1 гликопротеина у женщин с привычным невынашиванием // Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения: Материалы V Международного съезда, 3-7 июля 2001 г., Санкт-Петербург: [сб. докл.] Санкт-Петербург, 2001. С. 190192.

28.Богданович Р.Н., Беликов В.А., Берестовая Т.А, Лебедева Е.Е. Гемостаз при подготовке к программе ЭКО // Лечение бесплодия-нерешенные проблемы: сб. науч. тр. / ред.Л.Ф. Алехнович - Саратов: АРЧ. 2001. С. 6.

29.Богданович Р.Н., Беликова О.В., Шапневская М.В. Трофобластический бета-1 гликопротеин в бластоцистах человека // Лечение бесплодия: нерешенные проблемы: сб. науч. тр. / ред.Л.Ф. Алехнович - Саратов: АРЧ. 2001. С. 6-7.

30.Богданович Р.Н., Трофимова Н. М. Микроиглотерапия и её влияние на ТБГ женщин с привычным невынашиванием беременности // Ма1ериалы III Международного Тихоокеанского конгресса по традиционной медицине: сб. расш. тез. докл. - Владивосток, 2001 С. 15-16.

31.Богданович P.II., Кушнерова Н.Ф. Влияние биологически активных добавок из отходов от переработки морских организмов на состояние фетоплацентарной системы у женщин // Нетрадиционные природные ресурсы, инновационные технологии и продукты: сб. науч. тр. / Российская академия естественных наук. Москва, 2003. вып. 10. С. 82-87.

32. Богданович Р.Н., Кушнерова Н.Ф. Роль витамино-минеральных комплексов, как компонентов вспомогательной терапии, при невынашивании беременности // Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения: Материалы VII Международного съезда, 3-5 июля 2003 г., Санкт-Петербург: [сб. докл.] Санкт-Петербург, 2003. С. 138-141.

33. Бандур H.H., Любавская Т.Я., Богданович Р.Н, Павлова Н.С. Аутоиммунные процессы в клинике невынашивания беременности и их влияние на фетоплацентарную систему // Современные аспекты

детской хирургии и педиатрии на Дальнем востоке: Материалы регионально-практической конференции, Владивосток: [сб. докл.] Владивосток: ДВНЦ СО РАМН, 2003. С. 90-94.

34.Васьковский В Е, Белогорцева Н.И., Чикаловец И.В., Молчанова В.И., Богданович Р.Н. Использование углевод - распознающих белков (лектинов) в дифференциальной диагностике заболеваний // Исследования в области физико-химической биологии и биотехнологии: Тез. докл. Региональной научной конференции, 16-18 ноября 2004 г , Владивосток: [сб докл.]. Владивосток, 2004. С 106.

35.Богданович Р.Н., Чикаловец И.В., Мороз С.В., Юркина Э.А. Трофобластический бета-1 гликопротеин в пренатальной диагностике и онкологии // Диагностическая значимость выявления маркеров фетоплацентарного комплекса в контроле развития беременности и онкозаболеваний- Научи - метод, сб. Кольцово, 2004. С. 48-65.

36 Богданоьич Р.Н, Кушнерова Н.Ф. Профилактика невынашивания беременности комплексом растительных олигомерных проантоцианидов у злоупотребляющих алкоголем женщин // Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения: Материалы VIII Международного съезда, 21-23 июня 2004 г., Миккели: [сб. докл.]. Миккели Финляндия, 2004. С. 535-537.

37.Васьковский В.Е., Белогорцева Н.И., Чикаловец И.В., Молчанова В И., Вострикова В.Г., Поргнягина О.Ю., Хоменко В А., Новикова О.Д., Исаева М.П., Гузев К.В., Богданович Р.Н., Рябова H.H. Разработка и внедрение в практическое здравоохранение серии тест -систем для диагностики ряда заболеваний и патологических процессов в организме человека // «Фундаментальные науки -медицине» Конференция, 3-6 декабря 2004., Москва: [сб. докл ], Москва. С. 73-75.

Раиса Нурисламовна БОГДАНОВИЧ

ВЗАИМОСВЯЗЬ БИОХИМИЧЕСКИХ И ИММУНОХИМИЧЕСКИХ ПРОЦЕССОВ С СИНТЕЗОМ ТРОФОБЛАСТИЧЕСКОГО Р-1 ГЛИКОПРОТЕИНА ПРИ ФИЗИОЛОГИЧЕСКОЙ И ПАТОЛОГИЧЕСКОЙ

БЕРЕМЕННОСТИ

Автореферат

Подписано в печать 02.09.2005 Тираж 100 экз. Заказ №1069

Отпечатано в типографии ООО «Анастасия-Принт» Владивосток, ул. Бородинская, 20, к.8 тел.: (4232) 32-77-43, 243-254

#166 96

РНБ Русский фонд

2006-4 13557

Содержание диссертации, доктора биологических наук, Богданович, Раиса Нурисламовна

ВВЕДЕНИЕ

1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР 8 СВОЙСТВА И КЛИНИЧЕСКОЕ ПРИМЕНЕНИЕ ТБГ,

ФАКТОРЫ ВЛИЯЮЩИЕ НА ПРОТЕКАНИЕ ЭМБРИО -И КАНЦЕРОГЕНЕЗА

1.1. Выделение ТБГ

1.2. Структура ТБГ и его физико-химические свойства

1.3. ТБГ - подобные соединения

1.4. Аналоги ТБГ у животных

1.5. Синтез, локализация и биологические функции ТБГ

1.6. Роль ТБГ при физиологической беременности

1.7. Диагностическое значение ТБГ при невынашивании беременности

1.8. Функционирование системы гемостаза, антифосфолипидный синдром 29 1.9 Роль гормонов в процессе беременности их связь с ТБГ

1.10. Особенности ферментативной активности лейкоцитов у женщин с привычным невынашиванием

1.11. Влияние ТБГ на иммунную систему беременных женщин

1.12. Новое направление в лечении бесплодия-экстракорпоральное оплодотворение и перенос эмбрионов в полость матки

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Отбор и формирование групп

2.2. Методы исследования

3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

3.1. Микрометод ИФА ТБГ и использование его в клинической практике

3.2. Сравнительный анализ определения ТБГ и ХГ

3.3. Диагностическая ценность ТБГ при патологии трофобласта

3.4. ТБГ в программе экстракорпорального оплодотворения

3.5. Физиологическая роль ТБГ в системе гемостаза при беременности

3.6. Влияние аутоиммунных нарушений на показатели гемостаза и уровень ТБГ

3.7. Взаимосвязь гормональной активности и уровня ТБГ при физиологической беременности

3.8. Динамика гормональной активности при патологии беременности и их корреляционная связь с ТБГ

3.9. Изучение иммунологической значимости ТБГ

3.10. Влияние метаболических процессов на продукцию ТБГ

3.11. ТБГ - как индикатор эффективности лечения

Введение Диссертация по биологии, на тему "Взаимосвязь биохимических и иммунохимических процессов с синтезом трофобластического β-1 гликопротеина при физиологической и патологической беременности"

Известно, что малигнизация клеток сопровождается появлением специфических веществ, отличающихся от компонентов нормальных клеток. Некоторые из этих соединений используются в практической онкологии как маркеры, т.к. они могут секретироваться из опухолевой ткани в кровоток и обнаруживаться различными иммунохимическими методами. При дальнейшем исследовании этих опухолевых маркеров выяснилось, что они во многом родственны эмбриональным, поэтому их отнесли к семейству онкофетальных антигенов (ОФА). Изучение их строения и свойств представляет значительный интерес не только для понимания молекулярных механизмов перерождения нормальной клетки в злокачественную, но и для решения практических целей. А именно - диагностики беременности и рака, дифференциальной диагностики злокачественных и доброкачественных новообразований, наблюдением за гестационным процессом, течением трофических заболеваний и эффективностью лечения, а также для выявления онкозаболеваний среди больших групп населения с повышенным риском заболевания (Татаринов и др., 1987; Винницкий и др., 1990; ВоЬп, 1983; Косяков и др. 1985; иЫепс!гиск, 1986). Важность изучения ОФА определяется их гликопротеиновой природой, так как показано, что имеются существенные различия в углеводосодержащих антигенах нормальных и неопластических клеток (Уатас1а ^ а1., 1979; Ре1гу 1985). Вероятно, именно антигены этого вида дадут возможность понять процессы малигнизации и существенно улучшить диагностику и терапию онкозаболеваний.

В настоящее время в России значительно возросла патология репродуктивной системы женщин. Процент нормальных родов снижается, что влечет за собой развитие неблагоприятных тенденций в состоянии здоровья новорожденных детей (Кулаков, 2002, 2003). В Приморском крае из всех беременных 36% страдают анемией, 35% поздними гестозами. Число нормальных родов едва достигает 17-28% (Гельцер и др., 2004) Решающая роль в комплексе мероприятий по профилактике различных заболеваний принадлежит пренатальной диагностике, предусматривающей регулярное наблюдение за женщинами в течение всей беременности и включающей обязательное определение содержания в крови беременных женщин специфических маркеров беременности.

Трофобласт - специфический бета 1 - гликопротеин (ТБГ) является одним из представителей онкофетальных антигенов. Он обнаруживается при беременности и при патологиях трофобласта злокачественного характера (Татаринов и др., 1970; Bohn, 1971; Tatarinov et al., 1974). Считается, что на протяжении нормально протекающей беременности ТБГ в достаточной степени отражает процессы становления и функционирования фетопрлацентарной системы (ФПС), что и позволяет использовать этот маркер для контроля за гестационным процессом.

В настоящее время достаточно полно описаны физико-химические и иммунохимические свойства этого гликопротеина (Bohn et al., 1976; Engval, 1980; Heinkinhemo et al., 1983; Rosen et al., 1986; Мороз, 1986; Павленко, 1989; Chan et al., 1991; Plouzec et al., 1991; Brophy et al., 1992; Chen et al., 1992), но биологическое значение синтеза ТБГ при беременности и в опухолях до конца не изучено. В литературе значительное внимание уделяется практическим аспектам использования ТБГ в клинической практике (Посисеева, 1986; Богданович и др., 1990; Побединский и др., 1991; Александрова и др., 1994; Шмагель, 1995). Имеются литературные данные, свидетельствующие о нарушении синтеза ТБГ при плацентарной недостаточности (Мамедалиева, 1991), гестозе (Кулаков и др., 1999), внутриутробной патологии и гипоксии плода (Ismail et al., 1992; Qin et al., 1997; Gardner et al., 1997), y онкологических больных (Татаринов и др., 1976; Калашников и др., 1979). Практически отсутствуют работы, отражающие влияние биохимических и иммунохимических процессов на синтез ТБГ. Вместе с тем, значение этого гликопротеина для развития гестациониого процесса ни у кого не вызывает сомнений, поэтому дальнейшее исследование роли ТБГ может существенно расширить границы его использования в диагностике и прогнозировании успешного завершения беременности.

Исходя из вышесказанного, цель настоящей работы состояла в изучении взаимосвязи биохимических и иммунохимических процессов с синтезом ТБГ при нормально протекающей и осложненной беременности, а также проведении комплексного исследования уровня секреции ТБГ в сравнении с гемостазиологическими, биохимическими, иммунологическими параметрами беременных женщин, проживающих в Приморском крае. Исследования проводились в первой половине беременности, т.к. около 80% реподуктивных потерь происходит в 1 триместре беременности (Сиделышкова, 2001).

В задачу исследований входило:

1. Провести клинические испытания разработанной тест-системы определения концентрации ТБГ (ТБГ-тест) при физиологической и осложненной беременности, а также при онкопатологии трофобласта.

2. Изучить динамику уровня ТБГ, показателей гемостаза, гормонов, метаболизма и иммунитета при физиологической беременности (ФБ) и угрозе невнашивания беременности (УНБ) первой половины гестационного срока, а также у группы женщин, вступивших в программу ЭКО.

3. Установить закономерности успешного наступления беременности в зависимости от содержания ТБГ в бластоцистах и семенной жидкости.

4. Определить пределы физиологических колебаний биохимических, гемостазиологических, иммунных параметров крови и мочи беременных женщин.

Найти корреляционную зависимость между ТБГ и биохимическими, гемостазиологическими, иммунными параметрами крови и мочи беременных женщин.

5. Изучить реактивность иммуиокомпетентных клеток не беременных здоровых женщин, женщин с ФБ и УНБ.

6. Изучить влияние ТБГ, хитозана, каррагинапа на свертывающую и антисвертывающую системы in vitro.

7. Установить основные закономерности влияния проводимой терапии на продукцию ТБГ.

8. Провести апробацию разработанной тест-системы па основе лектинов для дифференциальной диагностики беременности и онкопатологии.

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов и обсуждения, заключения, выводов и списка цитируемой литературы. Работа содержит 18 рисунков и 22 таблицы; диссертационный материал изложен на 244 страницах. Список литературы содержит 432 источника.

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Богданович, Раиса Нурисламовна

5. ВЫВОДЫ

1. Разработана и внедрена в производство и клиническую практику тест-система иммуноферментпого определения ТБГ. Показана практическая значимость и перспективность применения ТБГ-геста, а также преимущество ТБГ как объективного критерия клинической и доклинической оценки эмбрио - и канцерогенеза.

2. Впервые определен уровень ТБГ в бластоцистах женщин, вошедших в программу ЭКО и в семенной плазме мужчин. Показана диагностическая значимость ТБГ при патологии мужской репродуктивной сферы.

3. Установлены пределы физиологических колебаний биохимических (гормоны, ферменты, ТБГ), гемостазиологических (тромбоцитарпый, плазменный, фибринолитический), иммунологических (клеточный, гуморальный, цнтокнпы) параметров здоровых беременных женщин и женщин с УНБ.

4. Выявлена положительная корреляционная связь между уровнем ТБГ и стероидными половыми гормонами. Методом флуоресцентной спектроскопии показано сродство ТБГ с прогестероном, тестостероном, эстрадиолом, эстриолом и холестерином, рассчитаны константы их связывания с ТБГ.

5. Доказана корреляционная зависимость между нарушениями в системе гемостаза и нарушением синтеза и/или транспорта ТБГ. Экспериментально показано, что ТБГ, ассоциированный с беременностью, влияет на тромбоцитарпый гемостаз и аптисвертывающую систему крови беременных женщин.

6. Определена значимость уровня ТБГ при аутоиммунных процессах, связанных с частичным повреждением синцития и не полностью восстановленном маточпо-плацептарпом кровообращении.

7. Доказано, что ТБГ может служить одним из дополнительных критериев иммунной несостоятельности системы мать-плод. Установлено, что иммуногенность ТБГ в группе женщин с УНБ более выражена, чем при ФБ, что свидетельствует о натогенностн процесса.

8. Показано, что при патологическом развитии грофобласта функциональное состояние иммунокомпетептных клеток снижено, по их способность синтезировать цитокины усиливается в ответ на индуктор.

9. Показано, что тест па ТБГ является уникальным и наиболее информативным для оценки эффективности проводимых лечебных мероприятий: иммунотерапии лимфоцитами мужа или донора, гормональной, метаболической, микроиглотерапии, а также препаратов, стабилизирующих гемостаз и позволяющих своевременно провести коррекцию и способствовать развитию плода: хитозана, «Тииростима», «ДНКа-С», растительного комплекса олигомерпых проантоцианидов.

10. Показана перспективность использования тест-системы па основе лсктпна 1)ТЬ-А. Выявлены достоверные различия в строении углеводных цепей ТБГ', секретируемого при ФБ, и ТБГ, ассоциированного с патологической беременностью, в том числе и с онкопатологией трофобласта.

11. Предложен алгоритм обследования женщин во время беременности.

Алгоритм пбслс/швапия жсншип по ппсмн бспсмснносгн 4-6 недель

10-12 педель

15-21 недель

29-30 педель

Контроль функции плаценты после окончания ее роста

34-36 педель повторпое обследование I при необходимости

4. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Многие исследователи стремятся найти диагностические критерии для выявления патологии плода и осложнения течения беременности, особенно в ранний период беременности. Одним из представителей биохимических маркеров беременности является ТБГ. Модифицированная и адаптированная к новым условиям предложенная тест-система получила широкое практическое применение в клинической практике.

Анализ литературных данных и наших результатов показал, что ГБГ" может быть использован не только как маркер завершения имплантации, течения маточной беременности и её патологии, но и как показатель эффективности медицинских и медикаментозных абортов и их осложнении, а также как один из критериев патологии мужской репродуктивной сферы. В сочетании с УЗИ определение ТБГ позволило выявить эктопическую беременность. В то же время ТБГ явился достаточно информативным индикатором остаточного роста трофобласта. Исследование соотношения нормального и онкотрапсформироваппого антигена с помощью лектинов явилось эффективным показателем в диагностике патологии трофобласта и для оценки эффективности проводимого лечения.

Экспериментальный анализ показал, что к снижению синтеза и транспорта ТБГ приводили: морфологические и рецепторпыс изменения в эндометрии; наличие вирусной и бактериальной инфекции; недостаток и дисбаланс гормонов; нарушение микроциркуляции и тромбообразовапия; наличие аутоиммунных нарушений; изменения в иммунных процессах; нарушение в метаболических процессах.

Мы рассмотрели отдельно каждый фактор, влияющий па уровень ТБГ, чтобы лучше понять влияние их па синцитий, по в организме они взаимодействовали в комплексе и эти отношения носили более сложный характер. При относительной недостаточности одного из необходимых факторов нарушалась, прежде всего, синхронная деятельность органоидов сиицитиотрофобласта. Действующие в это время компенсаторные реакции в виде усиления активности отдельных факторов (например, гормонов, ферментов, плазменных факторов и т.д.) не обеспечивали функциональной активности трофобласта, вследствие чего снижалась его способность к синтезу ТБГ. Чем более выраженное действие перечисленных факторов, тем более выражены морфофункциональмые изменения в трофобласте приводящие к нарушению его функций: синтетической, транспортной, трофической, эндокринной и метаболической.

На основании многолетних наблюдений был разработан алгоритм обследования беременных женщин, позволяющий оценить и контролировать процессы формирования плаценты. Выявление вирусной и бактериальной инфекций, поражающих плаценту в первой половине беременности, а затем и плод, является одним из лидирующих факторов в невынашивании. Гормональные нарушения занимают второе место после инфекций. Значительное внимание уделяется нарушениям в тромбоцнтарпом, плазменном гемостазе, расстройствах в иммунной системе, выявлению аутоиммунных нарушений. Как показано и алгоритме особое место в пренатальпой диагностике занимают эмбрионспецифические белки. Повышенный уровень РАРР-А уже в 10 педель беременности в 70% случаев позволяет выявить синдром Дауна. Па 15-21-й неделе беременности высокие концентрации ТБГ и АФП при нормальном содержании ХГ свидетельствуют о наличии дефектов заращивания нервной трубки. При угрозе прерывания беременности, патологии плаценты, гипотрофии плода отмечается снижение ТБГ, ХГ и повышение АФП. Низкий уровень ТБГ па фоне высоких концентраций АФП и ХГ отмечается при внутриматочной инфекции. Для синдрома Дауна характерны низкие уровни ТБГ, АФП при повышенном значении ХГ и ипгибнпа-А. Таким образом, данные маркеры в комплексе позволяют оцепить степень риска врожденных пороков развития плода и отразить состояние плаценты. Снижение концентрации ТБГ в материнской крови и отсутствие его прироста в большинстве случаев обусловлено проявлением трофобластической недостаточности.

Многолетний опыт клинической работы с применением ТБГ как маркера беременности показал, что определение уровня ТБГ можно успешно применять как-чувствительный индикатор эффективности лечения, поскольку оп наиболее точно отражает состояние фетоплацептарной системы, быстро реагирует на различные изменения в организме. Путем динамического исследования уровня ТБГ можно диагностировать угрозу выкидыша даже при отсутствии клинических симптомов, начиная с 4-5-й педели беременности. Сравнение ТБГ-теста с другими диагностическими характеристиками показало, что он имеет высокую точность прогноза. И, тем пе менее, использование его в сочетании с другими лабораторными показателями значительно повышает его ценность.

В работе рассмотрены различные виды терапии, оказывающие положительное влияние на синтез ТБГ и его транспорт:

- Гормональная терапия (при гиперапдрогении глюкокортикоидпые препараты; при низком уровне секреции эстрадиола или появлении кровянистых выделений эстрогенпые препараты; при низком приросте сывороточного прогестерона утрожестап. дюфастон).

- Иммунотерапия лимфоцитами мужа или донора (введенные лимфоциты играют роль дополнительного антигенного стимулятора, который усиливает распознавание матерью отцовских антигенов и способствует протективпым механизмам беременности).

- Микроиглотерапия (для восстановления материпско-плацентарного кровообращения, транспорта питательных веществ и газообмена в планете).

- Метаболическая терапия (восстановление окислительно-восстановительных процессов и энергетики клетки).

- Применение препаратов, стабилизирующих фнбринолиз, тромбоцитарпое и плазменное звено гемостаза.

- Использование биологически активных добавок - хитозапа, «Тинростима», «ДНК-а С» (при подготовке к беременности в группе риска по плацентарной недостаточности.

Каждый вид терапии стимулирует определенное звено для включения общего механизма сохранения ФПС. Определение уровня ТБГ в динамике дает наиболее точную информацию о состоянии ФПС и эффективности проводимого лечения.

Экспериментальные данные дают основание по-новому подойти к решению многих практических вопросов при эмбрио- и канцерогенезе, лучше попять биологическую роль ТБГ в гормональных, иммунологических, гемостазиологических процессах.

Библиография Диссертация по биологии, доктора биологических наук, Богданович, Раиса Нурисламовна, Владивосток

1. Абаси X., Мищенко A.J1. Рецидивирующий тромбоз у беременных с волчапочным антикоагулянтом // Акуш. и гин. 1996. № 6. С. 17-20.

2. Абдурахманов Ф.М. Циркуляторная адаптация системы гемостаза к гестациониому процессу // Акуш. и гин. 1989. № 11. С. 6-8.

3. Абелев Г.И. Альфа-фетопротеип взгляд в биологическое развитие и природу опухолей // Соровский образовательный журнал. Биология. 1998. •№> 9. С. 8-13.

4. Абелев Г.И. Принципы иммунодиагностики опухолей // Иммунология. 1982. № 4. С. 5-12.

5. Абрамова Л.А. Сравнительная оценка иммунохимического теста для ранней диагностики беременности // Лабор. дело. 1978. № 5. С. 289-300.

6. Агаджанова A.A. Основные подходы к комплексной терапии антифосфолипидного синдрома в клинике невынашивания беременности // Акуш; и гин. 1999. №3. С. 6-8.

7. Аляутдина О.С., Смирнова Л.С., Брагина С.Г. Значение исследования системы гемостаза при неосложненном течении беременности и прогнозировании тромбогеморогических осложнений // Акуш. и гин. № 2. 1999. С. 18-23.

8. Антипенко E.H., Антипенко А.Е., Ковешпикова И.В. Лызмова JI.B. Участие тиреоидных гормонов в системах клеточной защиты // Успехи совр. биол. 1994. Т. 114. Вып. 5. С. 558-572.

9. Арсеньев М.Г. Кольпогистологическое исследования в диагностике и терапии эндокринных гинекологических заболеваний. М.: Медицина. 1987. 368 с.

10. A.c. 925346 СССР, Способ профилактики самопроизвольных выкидышей / Говало В.И. 1992, Бюл. №17.

11. Атапизова 1Ц.А., Матвеева Н.К., Курбатов А.Б., Абдиров Ч.А., Пономарева И.В. Характеристика иммунной системы у беременных женщин, проживающих в экстремальных условиях Приаралья // Акуш. и гип. 1995. № 1. С. 26-28.

12. Афанасьева A.B., Володин М.А., Никулина Д.А. н др. Продукция бета-1 глобулина в условиях нормально развивающейся беременности п при поздних токсикозах //Акуш. и гип. 1976. № 6. С. 22-25.

13. Баграмяп Э.Р. О гормональной регуляции гестационпого процесса // Акуш. и гин. 1884. №4. С. 8-12.

14. Баграмяп Э.Р. Особенности гормональных изменений в системе мать-плацепта-плод : автореф. дис. д-ра мед. наук. М, 1980. - 41 с.

15. Баграмян Э.Р., Бурдипа Л.И., Волобуев А.И. Гормоны и маммогеиез // Акуш. и гип. 1990. №12. С 3-6.

16. Баграмян Э.Р., Фапчепко Н.Д., Колодько В.Г. Содержание стероидных гормонов плаценты в плазме крови при физиологической беременности // Пробл. эндокр. 1986. №6. С. 33-36.

17. Баграмян Э.Р., Фапчепко Н.Д., Малышева В.А. Содержание кортикостероидных и> тирсотроппых гормонов в плазме крови при физиологической беременности // Акуш. и гип. 1987. № 2. С. 29-32.

18. Балуда В.П., Балуда М.В., Дуянов H.H., Тлепшуков И.К. Физиология системы гемостаза. М.: Медицина 1995. 243 с.

19. Балуда З.П., Баркаган З.С., Гольбсрг Е.Д., Кузннк Б.И., Лакип K.M. Лабораторные методы исследования системы гемостаза. Томск: 1980. 224 с.

20. Баркаган З.С. Геморрагические заболевания и синдромы. М.: 1988. 528 с.

21. Баркаган З.С., Момот А.П. Основы диагностики и нарушений гемостаза. М.: Ныодиамед- АО 1999. 224 с. - ISNB 5-88107-024-0.

22. Белогорцева Н.И., Мороз C.B., Безиаев Л.Н., Павленко Л.Ф. Характеристика и роль углеводных цепей трофобластического бега глнкопротеипа : сб. науч. тр. /

23. Всесоюз. конф. по химии и биох. углеводов. Пущено, 1987. С.234-235.

24. Бслокрицкая Т.Е., Витковский Ю.Л. Цитокипы в системе мать- плод при синдроме задержке развития // Акуш. и гин. 1999. № 5. С. 15-17.

25. Бепстя Т.С. Роль плаценты в обмене стероидных гормонов между матерыо и плодом // Физиология гипофизарпо-адрепаловой системы: тезисы докл. / Межд. симпоз. Л., 1990. 160 с.

26. Беспалова В.А. Эндокринные аспекты перинатологии // Гормональный статус беременной плода и новорожденного в норме и при патологии. М. : 2 - ой

27. МОЛГМИ им. Пирогова, 1985. 136 с.

28. Биология маркеров рака и беременности В.Б. Вппицкий, М.Д. Моисеснко. М.В. Глинский и др. : Под ред. В.Б. Винницкого : АН УССР, Ип-т пробл. Онкологии им. P.E. Кавецкого;. Киев . «Наукова думка», 1990. - 252 с. -ISBN 5-12-0017908.

29. Богданович Р.Н. Трофобластическнй ß-1 гликопротеип в диагностике и мониторинге беременности : автореф. дне. . капд. биол. наук. Владивосток, 1994.-24 с.

30. Брагипа О.Б. Диагностическое и прогностическое значение определения ^ специфических белков беременности при токсикозах беременных : автореф. днеканд. мед. наук M., 1987 - 23 с.

31. Бунатян А.Ф., Бажанова Л.П., Носова A.A., Герасимова Ц.И. Содержание прогестерона и его производных в крови во время нормальной беременности // Акуш. и гин. 1983. № 8. С. 14-15.

32. Быстрицкая Т.С. Гестозы беременных. Профилактика тяжелых форм.

33. Благовещенск : Благов, roc мед. академия, 1995 128 с.

34. Вархаловский В.Г., Горбунова В.Н., Кащесва Т.К. Исследование АФП в ^ сыворотке беременных, как критерий врожденных пороков развития плода // ф Акуш. и гин. 1995. № 4. С. 22-24.

35. Васильева З.Ф., Шабалин В.Н. Иммуннологические основы акушерской патологии. М.: Медицина. 1984. 200 с.

36. Великолуг К.А., Шацова E.H. Динамика содержания эстриола, плацентарного лактогена, и териоидных гормонов у беременных женщин с тиреопатиями в условиях Европейского Севера // Акуш. и гин. 1997. № 4. С. 47-49.

37. Вознесенская Н.В., Трубников B.C. Динамика изменений концентрации ПЛ при физиологической беременности и нормальных родах // Здравоохр. Таджик. 1988.• №3. С. 41-43.

38. Вундер П.А. Значение основных типов взаимосвязей в регуляции систем свертывания крови, противосвертывания и фибринолиза // Успехи совр. биол. Т. И 7.-Вып. 4. С. 420-431.

39. Гафуров Ю.М. Эпзиматические свойства трофобласт специфического гликопротеина. // Дезоксирибонуклеазы, методы исследования и.свойства. -Владивосток.: Дальнаука, 1999. С. 210-222.

40. Гладкова А.И. Физиологическая роль андрогенов в женском организме // Гормональная регуляция в норме и патологии : тез. докл. / Облает, юбил паучн -практ. копф. Харьков, 1989. С. 17-18.

41. Говало В.И. Иммунология репродукции. М.: Медицина, 1987. - 304 с.

42. Говало В.И., Быкова Е.Я., Камке И.С. Сравнительный анализ методов иммунотерапии самопроизвольных выкидышей // Акуш. и гин . 1985. № 3.1. С. 41-43.

43. Головистиков И.Н.,Горлина Н.К.Датаринов Ю.С., Шевченко О.П. Усиление генерации супрессорпых клеток конкавалина А в присутствии трофобластического бета 1-гликопротеипа // Иммунология. 1985. № 2. С. 82-83.

44. Головистиков И.Т., Тимофеев В.Т., Кривоносов С.К. Джанашвили А.И., Таташвили Н.И. Иммунный статусу больных ревматическими пороками сердца и иммунокоррсгирующие свойства// Иммунология. 1987. № 7. С. 76-78.

45. Гончаров Н.П. Гормональный анализ в диагностике заболеваний щитовидной железы // Пробл. эндокр. 1995. Т.41, № 3. С. 31-35.

46. Гончаров Н.П. Андрогены // Побл. эндокр. 1996. Т. 42, № 4. С. 28-31.

47. Горин B.C., Серов В.И., Жабин С.Г., Шин А.П. Ассоциированный с беременностью протеин А в диагностике синдрома Дауна и других нарушений перинатального периода // Акуш. и гин. 2000. № 2. С. 3-6.

48. Горлипа Н.К., Головистиков И.Н., Ашурова P.A. и др. Сопоставления действия сыворотки беременных женщин и трофобластического гликопротеина в ряде иммунологических тестов // Онтогенез. 1983. Т. 14, № 6. С. 607-611.

49. Горлипа Н.К., Головистиков И.Н., Татаринов Ю.С., Стенина М.А. Плацентарные белки как регуляторы иммунологических реакций при беременности // Онтогенез.

50. V 1983. Т. 14, № 2. С. 205-208.

51. Григорова Т.М. Трофобластическая болезнь. М.: Медицина, 1985. - 159 с.И

52. Гудима 0.0. Ляхов В.В., Терехов О.П., Сухих Г.Т., Венгеров IO.IO. Трофобластический Бета 1-гликопротеин (ТБГ) человека // Иммунология. 1993. Т. 1.С. 11-14.

53. Гулянский Л.Н., Петрунин Д.Д., Федоров Г.Н., Татарииов Ю.С. Сравнительное изучение иммуносупрессивных свойств Трофобластического бета-1 гликопротеина и плацентарного альфа-2 микроглобулина in vitro // Бюл. эксп. мед. 1987. Т. 104, № 1. С. 65-67.

54. Димитров Д.Я. Хориопический гонадотропин человека. М. : Медицина, 1979. -143 с.

55. Ермак И.В., Горбач В.И., Полякова A.M., Астрипа О.С., Лукьянов П.А., Соловьева Т.Ф., Малеев В.П., Оводов Ю.С. Водорастворимый комплекс ЛПС хитозаи и его влияние па агрегацию тромбоцитов // Биол. мембраны. 1994. Т. 11, № 5. С. 496-500.

56. Зайцева И.В., Салов H.A. Диагностическое значение белковосинтетической функции плаценты при неразвивающейся беременностью // Акуш. и гин. 1989. № 3. С. 61-62.

57. Захарова О.И. Система гипофиз-кора надпочечников матери и плода при беременности и в родах // Акуш. и гин. 1986. № 1. С. 6-10.

58. Захарова О.И. Функциональное состояние коры надпочечников в динамике беременности, преждевременных, своевременных и запоздалых родов // Вопр. охр. мат. и дет. 1988. № 3. С. 50-52.

59. Зорин H.A., Горин B.C., Зорина М.Р., Митрофанов Н.М., Жабип С.Г., Дубленников О.Б., Мальцева Н.В. Белки беременности у небеременпых, беременных, рожениц и родильниц // Акуш. и гин. 1990. № 3. С. 65-67.4V

60. Зорина P.M., Зорин М.А., Головистиков И.Н. Обнаружение феномена связывания ^ белков беременности с иммуноглобулинами иммунохимическими методами // ф Иммунология. 1985. № 2. С. 82-83.

61. Иванов Е.П. Диагностика нарушений гемостаза. Минск. 1983. 246 с.

62. Иванова JI.B. Особенности течения гнойно-септических осложнений инфицированного аборта с учетом изменений иммунной системы : автореф. дис. . канд. мед. наук. M., 1986. - 26 с.

63. Иммунологические методы / Под ред. Фриля. M : Медицина. 1987. 321 с.Г

64. Иммуноферментный анализ. / Под ред. Т. Нго, Г. Лепхофа. М. : Мир. 1988. 446 с.

65. Инструкции по применению унифицированных клинических лабораторных ф методов исследования / Составители: Меньшиков В.В. и др. М. : Медицина 1986.185 с.

66. Исаченко Е.Г., Виткипа Т.И., Геронипа С.А., Потапов В.Н., Бердышев Е.В. Спонтанный и липонолисахари индуцированный синтез цитокинов клетками крови человека в норме и при аллергопатологиях // Иммунология. 1999. № 5. С. 37-39.

67. Исследование системы крови в клинической практике под редакцией Г.И. Козинца и В.А. Макарова. М.: Триада-Х. 1997. С. 343-475.

68. Исследование факторов свертывания крови // Метод, рском. / Составители: Федорова 3. Д. и др. Ленинград. 1971.60 с.

69. Кавкасидзе Г.В. Медико-биологическая роль фактора ранней беременности // Акуш. и гин. 1986. № 12. С. 6-8.

70. Казаченко A.B. Биологическое значение глобулина, связывающего половые стероиды, при нормальной функции и патологии репродуктивной системы // Акуш. и гин. 1994. № 4. С. 13-16.

71. Калашников В.В., Соколов A.B., Фалалеева Д.М., Якобидзе В.Э. Использование ^ Wheat Germ Lectin-Sefarose для выделения специфического белка беременности // ф Бюлл. эксп. бнол. мед. 1983. № 12. С. 118-120.

72. Калашников В.В., Фалалиева Д.М., Татаринов Ю.С. Количественный иммуноферментный метод в оценке специфичности теста на бета 1-глобулин при трофобластических опухолях // Бюлл. эксп. биол. мед. 1979. Т. 87, № 5. С. 444446.

73. Кап М.Ф., Алейникова М.В., Кривоносов С.К. и др. Иммунохимическая характеристика и иммупорегуляториая активность бета-1-глобулина крыс, специфического при беременности // Иммунология. 1987. № 2. С. 49-51.it

74. Каримова Ш.Ф., Салахова Н.С. Гипофизарпо тиреоидпая система женщины в период беременности и лактации // сб. научн. тр. / 3-ий съезд акуш. - гип. Узбекистана. Ташкент, 1990. С. 93-95.

75. Карлсон Б. Основы эмбриологии по Пэттену. М. Мир, 1983. Т.1 .356 с.

76. Касаткина Е.П. Йододефицит заболевания у детей и подростков // Пробл. эндокр. 1997. Т. 4, №3. С. 3-7.

77. Каширипа Т.Н., Макацария А.Д., Мищенко А.Л. и др. Некоторые показатели тромбоцитарного гемостаза // Вопр. охр. мат. и дет. 1982. № 6. С. 61-63.

78. Кеворков H.H., Шилов Ю.И., Ширшев С.В., Черешпев В.А. Гормоны репродукции в регуляции процессов иммунитета. Екатеринбург. УИФ. Наука,1993.172 с.

79. Кирющенков П.А. Динамическое изучение функциональной активности тромбоцитов как основа применения антиагрегантов при плацентарной недостаточности // Акуш. и гин. 1989. № 1. С. 30-35.

80. Кирющенков П.А. Сосотояние репродуктивной функции и тактика ведения женщин с аутосеисибилизацией к хорионическому гонадотропину человека : автореф. дис. д-ра мед. паук. М., 2001. - 46 с.

81. Кирющенков П.А., Сухих Г.Т., Ванько J1.B., Пономарева И.В. Клинико -иммунологическое значение аутоантител к хорионическому гонадотропину при невынашивании // Акуш. и гин. 1996. № 4. С. 14-16.

82. Киселева О.Ю., Посисеева JI.B., Кривоносов С.К. Возможности использования теста на ТБГ в доклинической диагностике воспалительных осложнений после внеболышчпых выкидышей в различные сроки беременности // Акуш. и гин. 1989. №4. С. 56-63.

83. Князев Ю.А., Беспалова В.А. Проблемы перинатальной эндокринологии // Педиатрия. 1987. № 4. С. 59-64.

84. Кобозева И.В., Гуркин Ю.А. Перинатальная эндокринология. JI. : Медицина, 1986.-312 с.

85. Колб В.Г., Камышников B.C. Справочник по клинической биохимии. Минск. : Беларусь, 1982. 312 с.

86. Коптева И.И. Способы выделения ТБГ и его физико-химические н иммуиохимическая характеристика : автореф. дис. . канд. мед. паук М., 1990. -20 с.

87. Коптева И.И., Кривоносов С.К., Татаринов Ю.С. Сравнительная физико-химическая характеристика препаратов трофобластического бета 1гликонротеипа, выделенных из ретроплацентарной крови // Бюлл. эксиер. биол. мед. 1990. Т. 110, № 9. С. 265-267.

88. Кост E.A. Справочник по лабораторным методам исследования. М. : Медицина. 1975.57 с.

89. Костюк Э.В., Дубинина И.Г, Баранов Л.Н. Значение базовых уровней АФП, ХГ и неконьюгированного эстриола в сыворотке крови у беременных в зависимости от гестационного срока // Вопр. охр. мат. и дет. 1991. №. 6 С. 48-49.

90. Косяков П.Н., Косякова Н.П. Антигены опухолей человека. М . Медицина, 1985. 172 с.

91. Котляровская Е.И. Иммунологические методы определения ХГ в моче и его диагностическое значение в акушерстве системы : автореф. дис. . канд. мед. наук.-М., 1986.-24 с.

92. Ш 92. Кривопосов С.К., Петрупин Д.Д., Иванова Л.А. Иммунохимическое изучениеспецифического белка беременности в онкогенезе млекопитающих // Онтогенез. 1978. Т. 9, №5. С. 481-486.

93. Кривоносое С.К., Михайлов А.Т., Татаринов Ю.С. Биосинтез и продукция специфического бета-1 глобулина при беременности у крыс // Бюл. эксп. биол.кмед. 1979. №7. С. 51-53.

94. Кривопосов С.К., Зорин H.A., Ионова II.К. и др. Взаимодействие белков беременности с фитогемаглютипипом Р и конканавалином А (Кон-А) // Бюл. экспер. биол. 1985. Т. 99, № 5. С. 568-573.

95. Кривопосов С.К., Зорин H.A., Ионова Н.К., Погорелова Т.Ю., Татаринов Ю.С. Иммунохимический анализ и рецепторы к лектипам в структуре ТБГ и ассоциированного с беременностью алфа-2 гликопротеина // Онтогенез. 1987. Т. 18, №4. С. 394-398.

96. Кривопосов С.К., Зорин H.A., Ионова И.К. Иммунохимическое изучение взаимодействия человеческого трофобластического бета-гликопротеина соа стероидными и половыми гормонами // Онтогенез. 1991. Т. 22, № 3. С. 300-303.

97. Кривоносое С.К., Зорин H.A., Попова Н.К. Иммуиохимическое изучение ^ взаимодействия человеческого трофобластического бета гликопротеина со ф стероидными и половыми гормонами // Онтогенез. 1993. Т. 22, № 3. С.300-303.

98. Кузмичев Л.Н., Кулаков И.И., Леонов Б.В. Экстракорпоральное оплодотворение. Отбор, подготовка и тактика ведения больных. М. : Мир, 2001. 165 с.

99. Кузнецова C.B. Гормональный статус женщин при физиологической беременности в условиях г. Хабаровска : автореф. дне. . канд. мед. паук. -Хабаровск, 1998-23 с.

100. Кузьмина И.Ю., Череватова С.Х. Динамика гормональной активности при физиологической беременности // Актуальп. вопр. физиол. и патол. репрод. ф-ции женщин. Харьков. 1989. № 4 С. 76-77.

101. Кузпик Б.И., Васильев Н.Р., Цибиков H.H. Иммуногенез, гемостаз и песпецифичеекая резистентность организма. М.: Медицина, 1989. 320 с.

102. Кулаков В.И., Ходова С.И., Мурашко Л.С., Городпичева Ж.А., Ванько Л.В., Сухих Г.Т. Плацентарные белки в диагностике и оценке эффективности иммупоцитотерапии у беременных е гестозом // Акуш. и гии. 1999. № 3. С. 16-19.

103. Кулаков В.И. Репродуктивное здоровье населения России //Акуш. и гнн. 2002. № 2.С. 4-7.

104. Кулаков В.И. Вспомогательная репродукция: настоящее и будущее // Акуш. и гииек. 2003. № 1.С. 3-7.

105. Кулиев A.M., Дубинина И.Т., Гречанина Е.Ф. Базовые уровни АФП в ^ зависимости от срока беременности // Вопр. охр. матер, детст. 1990. Т. 35, № 9. С. ф. 34-38.

106. Куликова И.К., Кадырова A.A. Диспансеризация женщин с риском развития раннего токсикоза при плацентарной недостаточности // Методические рекомендации. Ташкент. 1989. 19 с.

107. Лабораторные методы исследования в клинике // Справочник. / Под ред. Меньшикова В.В. М. : Медицина. 1987. 368с.

108. Ларичева И.П., Витушко С.А. Гормональная диагностика нарушений адаптации плода у беременных с экстрагенитальной патологией и принципы их коррекции //• Акуш. и гин. 1990. № 12. С. 22-25.

109. Ледина A.B., Гршценко C.B., Моргунова К.В. Особенности иммунитета женщин с привычным невынашиванием беременности // Акуш. и гин. 1996. № 4. С. 24-27.

110. Ленипджер А. Биохимия. М. : МИР. 1985. 731 с.

111. Линников В.И. Состояние системы гемостаза при физиологически протекающемгестациоипом процессе : дис. . канд. мед. паук. М., 1982.-26 с.

112. Лопатчепко О.И. Прогностическое значение содержания ПЛ и эстрнола в крови беременных//Акуш. и гин. 1981. № 5. С. 32-36.

113. Ляшко Е.Е. Клииико-патогепетические особенности гестационного периода у женщин с гиперандрогенией различного генеза : автореф. дис. . д-ра. мед. паук. -М.,-2000-41 с.

114. Макаров И.А., Соловьева М.С., Фриго Н.В., Макаренко К.И. О функциональном состоянии гипофизарно надпочечпиковой системы при нормально протекающей беременности // Акуш. и гин. 1981. № 5. С. 30-31.

115. Макацария А.Д., Просвирякова И.Г. Врожденными наследственные дефектыгемостаза, предрасполагающие к рецидивным тромбозам и беременность // Акуш.оф игин. 1989. № 11. С. 6-11.

116. Макацария А.Д., Бицадзе В.О. Вопросы патогенеза тромбофелин и тромбозов у больных с антифосфолипидным синдромом // Акуш. и гин. 1992. № 2. С. 62-67.

117. Макацария А.Д., Раскуражев А.Б., Мищенко А.Л., Табакова Е.В. Вопросы патогенеза диагностики и терапии осложнений беременности, связанной с циркуляцией ВА // Акуш. и гин. 1993. № 3. С. 6-9.

118. Макацария А.Д., Мищенко А.Л. Вопросы циркуляторной адаптации системе гемостаза при физиологической беременности и синдром ДВС // Акуш. и гин.• 1997. № 1.С. 38-41.

119. Макацария А.Д., Бицадзе В.О., Генисвская М.Г. Долгушева II.B., Мищенко А.Л. Аптифосфолипидный синдром в акушерской практике. М.:Руссо, 2000. 344 с. -ISNB 5-88721-169-5.

120. Мамедалиева U.M., Калафати Т.И., Мошин Ю.Н. Содержание ТБГ у беременных группы риска развития плацентарной недостаточности // Иммунология репродукции : сб. научи, тр. / 4-ый Всесоюзный симпозиум. Киев, 1990. С. 174.

121. Мамедалиева Н.М., Шищенко В.И., Фурсова З.К., Сиделышкова В.М., Левантовская И.Н. Особенности ферментативной активности лейкоцитов уженщин с привычным невынашиванием в анамнезе // Акуш. и гин. 1991. № 12. С.16.19.

122. Мамедалиева Т.И., Калафати Т.И., Сиделышкова В.М., Сухих Г/Г. Значение определения ТБГ для ранней диагностики и прогнозирования плацентарной недостаточности у беременных с привычным невынашиванием // Акуш. и гин.1. М 1991. № 11. С. 21-24.

123. Манушарова P.A., Славнов D.H., Демченко В.H. Уровень кортикотропина, кортнзола, ПЛ, гонадотропннов и половых стероидов в крови женщин с нормально протекающей беременностью // Врач. дело. 1988. № 1. С. 62-64.

124. Мельниченко Г.А, Мурашко Л.Е., Клименченко Н.И., Малясова С.А. Заболевание щитовидной железы и беременность // РМЖ. 1999. № 3. С.34-36

125. Мельниченко Г.А., Лесникова С. В.Особенности функционирования щитовидной железы // Акт. вопр. гин. 1999. Т. 1, № 2. С. 49-51.

126. Мельниченко Г.А., Лесникова C.B. Особенности функционирования щитовидной железы во время беременности // Акт. вопр. гин. 1999. Т. 1, № 2. С .49-51.

127. Меньшиков В.В. Методы клинической биохимии и медиаторов. М.: Медицина. 1973. ч. 1.162 с.

128. Мипкина А.И., Рымашевская Э.П., Курганова Л.С., Полыцикова Л. А. Гормональные аспекты физиологической беременности. Ростов-на-Дону : Рост, универ., 1987.- 128 с.

129. Михайленко Е.Т., Мацидонская Г.Ф. Взаимосвязь между функцией щитовидной железы и ФПС у беременных // Акуш. и гин. 1989. № 8. С. 3-5.

130. Мищенко А.Л. Состояние системы гемостаза у матерей плодов и новорожденных при своевременных и преждевременных родах: автореф. дне. . канд. мед. наук. -М., 1983 24 с.

131. Мороз C.B. Выделение, физико-химическая характеристика и иммунохимические свойства трофобласт специфического бета 1-гликопротсина : автореф. дне. . канд. хим. наук Владивосток, 1986 - 26 с.

132. Мороз C.B., Глазунов В.П., Одиноков С.Е., Оводов Ю.С. Исследование взаимосвязи пространственной структуры и антигенной активности трофобластического бета-1-гликопротсина// Биоорг. хим. 1987. Т. 13, С. 519-527.vf

133. Мороз C.C., Глазунов В.П., Вакорнна Т.И. Исследование взаимосвязи пространственной структуры и антигенной активности ТБГ // Биоорг. хим. 1986. Т. 13, №4. С. 519-527.

134. Мужнай Д. Антигенный состав плаценты человека : автореф. дис . кан. мед. наук -М., 1983-25 с.

135. Мясникова В.В., Пономарев В.В. Коагуляционные нарушения при гестозе и легочные механизмы их компенсации // Бюл. экспер. биол. мед. 2001. Т. 132, № 12. С. 669-671.

136. Нарцисов Р.П. Применение п-нитротетразолия фиолетового для количественной цитохимии дегидрогеиаз лимфоцитов человека // Архив анатомии. 1969. № 5. С. 85-91.

137. Насонов E.JI. Антифосфолипидный синдром: клиническая и иммунологическая характеристика// Клин. мед. 1989. № 1. С. 5-13.

138. Невынашивание беременности: этиопатогенез, диагностика, клиника и лечение : учеб. пособие / Н.Г. Кошелева, О.Н. Аржанова, Т.А. Плужникова и др.. Санкт-Петербург : Изд. H-JI., 2002. - 59 с.

139. Оганесян А.К. Состояние фетоплацентарной системы с угрозой прерывания беременности : автореф. дис. канд. мед. наук. М., 1989. - 22 с.

140. Очан Т.Б., Макацария А.Д. Изменения в системе гемостаза в различные периоды гестационного процесса // Акуш. и гин. 1981. № U.C. 29-32.

141. Павленко А.Ф, Мороз C.B., Глазунов В.П., Безнаев А.Н. Иммунохимическая и физико-химическая характеристика гликопротеина из ретронлацентарной крови // Биоорг. химия. 1987. Т. 13, № 11. С. 1530-1534.

142. Павленко А.Ф. Строение и свойства онкофетальных антигенов : автореф. дис. . д-ра хим. наук Владивосток, 1989 - 45 с.

143. Павленко А.Ф., Белогорцева Н.И., Мороз C.B., Безнаев А.Н., Оводов Ю.С. Характеристика углеводного компонента Трофобластичеекого бета-1 гликопротеина//Биоорган, химия. 1987 Т. 13, №6. С. 810-813.

144. Павленко А.Ф., Мороз C.B., Глазунов В.П., Вакорииа Т.Н., Одиноков С.Е., Оводов Ю.С. Локализация антигенных детерминант на молекуле ТСГ // Биоорг. хим. 1987. Т. 13, № U.C. 1535-1541.

145. Палади Г.А., Политкорь М.Г., Мукуцэ Э.В. Глюкокортикоиды в системе мать -плацеита-плод. Кишенев : 1978. 136 с.

146. Паллади Г.А., Штемберг М.И., Ткаченко В.Т., Политкорь М.Г. Соотношение белковых и стероидных гормонов плодово-плацептарпого комплекса при нормальной беременпомти // Здравоохранение. 1985. № 3. С. 7-10.

147. Панкратова Т.С. Актуальность проблемы внутриутробной инфекции и ИФА диагностика // Новое в ИФА диагностике : еб. научи, тр. / III конференция «ДИАплюс». Суздаль, 1992. С. 17-24.

148. Пат. Российская Федерация. Средство для лечения аутоиммунных заболеваний с иммунодефицитом супрессоров и способ лечения аутоиммунных заболеваний / Головистиков И.II.и др.. № H (А61 37.02) 97/000943.

149. Первова Т.В. Состояние тромбоцитарного звена системы гемостаза // Акуш. и у гин. № 10. С. 67-70.

150. Петров Р.В., Сотников Н.Ю., Кривоносов С.К., Бабакова Л.А. Регуляция трофобластическим бета-1 гликопротеипом выработки фактора, ипгибирующего

151. Петрупин Д.Д., Татаринов Ю.С., Калашников В.В. Сравнительное изучение четырёх белков плаценты в процессе развития беременности // Акуш. и гииек. 1988. № 1.С. 50-52.

152. Победипский Н.М., Размахипа Н.И., Александров JI.C., Вепгеров Ю.Ю., Старовойтова Т.А. Содержание трофобластического бета-1-гликонротеипа и альфа фетопротеина в сыворотке крови при физиологической беременности // Акуш. и гин. 1991. №7. С. 16-18.

153. Победипский U.M., Сулеймаиова U.C., Ляшко Е.Е., Волощук C.B., Насимова C.B., Ковгаиго П.А. Исследование плацентарных белков в 111 триместре беременности у женщин с хронической внутриутробной гипоксией плода // Акуш. и гин. 1999. №4. С. 15-19.

154. Положенкова Л.А., Шехтман М.М. Гормональные изменения во время беременности // Сов. мед. 1983. № 11. С. 43-48.

155. Полякова A.M. Роль тромбоцитарного звена гемостаза в гепезе гемокоагуляциопных нарушений у больных бактериальными инфекциями : автореф дис. д-ра мед. наук. М., 2000. -41с.

156. Пономарева И.В., Городпичева Ж.А., Вапько Л.В., Ходова С.И., Юсупова Л.Н., Мурашко Л.Е. Нарушение в системе гемомтаза у беременных с патологическим уровнем антифосфолипидпых антител при гестозе // Акуш. и гин. 2000. № 2. С. 12-15.

157. Пономарева И.В., Сухих Г.Т., Кирющеиков П.А. Аутоантитела к хорионическому ^ гоиадотропииу у женщин с привычным невынашиванием // Иммунологические ф аспекты репродуктивного здоровья: Симпозиум РАМН, 17-18 июня 1995г.,

158. Москва : сб. докл. под ред. П.Д. Гриффип, Г.Т. Сухих, 1995. С. 120-127.

159. Посисеева JI.B. Клиническое изучение теста на ТБГ при ранней диагностике невынашивания беременности : автореф. дис . канд. мед. наук. М., 1980 -26 с.

160. Посисеева JI.B. Специфический трофобластический бета-1-глткопротеип в акушерской практике // Акуш. и гин. 1986. № 10. С. 6-8.Г

161. Прудникова J1.3., Сайковская Т.В. Волчапочпый антикоагулянт, методические подходы к определению //Лаб. дело. 1988. № 8. С. 38-40.

162. Ф 164. Репина М.А., Благословенский Г.С., Гиилевская З.У., Иванова Л.В. Влияниеспецифического ТБГ на изменение клеточного звена иммунитета при инфицированном аборте // Акуш. и гин. 1989. № 12. С. 47-57.

163. Роткипа Е.И., Зорина P.M., Зорин H.A. Белки беременности при ие осложненном течении гестационпого процесса и резус конфликте // Акуш. и гин. 1984. № 3. С. 35-37.

164. Руководство по эндокринной гинекологии; под редакцией Вихляевой. М. : Мед. ииформац. Агепство, 1997. - 786 с.

165. Савельева Г.М., Дживилегова Т.Д., Шалина U.C., Фирсов H.H. Геморогия в акушерстве. М.: Медицина, 1986. 222 с.

166. Савельева Г.М., Федорова М.В., Клименко П.А., Сичинава Л.Г. Плацентарная недостаточность. М. : Медицина, 1991. - 272 с.

167. Савченко О.И., Стрельцова H.A. Корреляционные соотношения между содержанием ХГ, прогестерона, эстриолом при нормальной беременности // Пробл. эндокр. 1975. Т. 21, № 2. С. 38-41.t>

168. Сапииа Г.Е. Мищенко A.Jl. Клиническое значение раннего выявления ^ аптикоагулянтов волчаночпого типа и противотромботическая терапия у ф беременных с потерями плода в анамнезе // Акуш. и гин. 1999. № 1. С. 30-33.

169. Саркисов Д.С. Очерки истории общей патологии. М.: Медицина. 1988. 333с.

170. Сергеев П.В., Жуханип И.С., Губанова Ф.Р. Ранние этапы в механизме действия глюкокортнкоидов на тромбоциты человека: влияние гидрокортизона па внутреннее содержание ц АМФ и Ca 2+ // Бюл. эксп. биол. мед. 1997. Т. 123., № 6. С. 663-665.

171. Серов В.П., Макацария А.Д. Тромботические и геморрагические осложнения в акушерстве. М.: Медицина, 1987. 224 с.

172. Серов В.Н., Стрижаков А.Н., Маркин С.А. Руководство по практическому акушерству. М.: МИА. 1987. С. 34-37.

173. Сиделышкова В.М. Актуальные проблемы невынашивания беременности. М.: Медицина, 2001. 170 с.

174. Сиделышкова В.М. Невынашивание беременности. М. : Медицина, 1986. - 176 с.

175. Сидельникова В.М., Кирющенков П.А. Оценка состояния фетоплацентарпой системы у беременных с аутоиммунным генезом привычного невынашивания // Акуш. и гии. 1996. №4. С. 16-18.

176. Сидоров Р.Б., Кривоногое С.К., Головистиков H.H. и др. Влияние трофобластического бета 1-гликопротеина на состояние клеточных форм и популяций тучных клеток // Онтогенез. 1988. Т. 19, № 2. С. 213-216.

177. Смолянский А.Я., Детинкина Г.Н., Дынкина И.М. Определение адгезивности (ретенции) тромбоцитов с применением стеклянных шариков // Лабор. дело. 1985 .№ 2. С. 90-94.

178. Соколов A.B., Козляева Г.А., Меснякина Н.В., Татаринов Ю.С. Выделение и ф очистка специфического бета 1-глобулина // Вопр. мед. химии. 1978. № 2. С. 220224.

179. Сотникова НЛО., Бабакова A.A., Петров В.В. Рецепторы лимфоцитов к трофобластическому бета 1-гликопротеипу // Бюл. экспер. биол. мед; 1985. Т. 99. № 3. С. 326-327.

180. Сотникова НЛО., Цветков Т.А., Бабакова Л.А. и др. Выявление рецепторов к трофобластическому бета1- гликопротеину на поверхности иммуиокомпетентиых клеток // Иммунология. 1987. Т. 2. С. 81-84.

181. Способ получения ТБГ из отходов ретроплацентарпой крови при производстве * гамма глобулина. : а. с. 3817463/13 СССР / C.B. Мороз и др. №1341736/87;2109.85.

182. Степанова Р.Н. Беременность и аутоиммунные нарушения // Акуш. и гин. 1996. № 1.С. 6-8.

183. Сулимова М.А. Исследование лизиса эуглобулинов в различные сроки беременности // Здравоохр. Казахстана. 1986. № 11. С. 38-40.

184. Сухих Г.Т, Ванько Л.В иммунология беременности. М. : Изд. РАМН, 2003. 400 с.

185. Сухих Г.Т, Дадальян Л.Г., Ванько Т.И. и др. Диагностическая и прогностическая ^ ценность специфического иммунного ответа к вирусу цитомегалии у беременных ф женщин с привычным невынашивании беременности // Акуш. и гин. 1992. № 3 С.30.35.

186. Татаринов Ю.С. Трофобластический бета 1 -гликопротеин // Успехи совр. биол. 1983. Т. 95, .№ 1.С. 57-63.

187. Татаринов Ю.С., Головистиков И.Н., Горлица Н.К. Влияние трофобластического бета 1 гликопротеина на пролиферацию лимфоцитов в культуре // Онтогенез.фу1988. Т. 99, №2. С. 213-216.

188. Татаринов Ю.С., Масюкевич В.Н. Иммунохимическая идентификация нового ф бета 1-глобулина в сыворотках крови беременных женщин // Бюлл. экспср. биол.и мед. 1970. №6. С. 66-68.

189. Татаринов Ю.С., Петрунин Д.Д. Белковый фактор фертилыюсти // Акуш. и гин. 1987. №8. С. 10.

190. Татаринов Ю.С., Петрунин Д.Д., Шевченко О.П. Иммунохимическое изучение ТБГ человека и его аналогов у животных // Бюл. экспер. биол. 1980. Т. 94, № 3. С. 294-295.

191. Теппермен Джю, Теппермен X. Физиология обмена веществ и эндокринная система / Перевод с англ. М.: Мир, 1989. - 296 с.

192. Терешин П.И., Стеианянц H.A., Ломовских В.А. Диагностика состояния плода у беременных с поздним токсикозом // Акуш. и гин. 1986. № 4. С. 47-49.

193. Ткачева Г.А., Балоболкин М.И., Ларичева И.П. Радиоиммунохимические методы исследования М.: Медицина. 1983. 192 с.

194. Фанчспко Н.Д., Баграмян Р.Д.,Плешкова Т.В., Афанасьева В.М. Содержание ^ белковых гормонов плаценты в крови при физиологической беременности // Ä Акуш. и гин. 1986. № 6. С. 72-75.

195. Хыоз Р. Гликопротеины. М. Мир, 1985. - 140 с.

196. Цильмер К.Я., Калликорм А.П., Паю А.Ю. Изучение функционального состояния гипофизарно-тиреоидпой и н/п систем при физиологической беременности и позднем токсикозе // Пробл. эндокр. 1985. Т. 31, № 6. С. 16-21.

197. Цирельников Н.И. Иммунологические отношения в системе мать-плацепта-плод при нормальной беременности // Акуш. и гин. 1979. № 8. С. 5-7.

198. Чевари С., Чаба И. Метод определения содержания прегнапдиола в моче // Лаб. дело. 1982. №3. С. 156-1-58.

199. Чевари С., Чаба И. Определение содержания эстрогенов и их фракций в моче % пебеременпых женщин // Лаб. дело. 1982. № 1. С. 8-11.