Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Определение локализации белков беременности в тканях человека

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Определение локализации белков беременности в тканях человека"

На правах рукописи

Куликов Вячеслав Валерьевич

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЛОКАЛИЗАЦИИ БЕЛКОВ БЕРЕМЕННОСТИ В ТКАНЯХ ЧЕЛОВЕКА

03.00.04 - Биохимия 03.00.25 - Гистология, эмбриология и клеточная биология

Автореферат диссертации на соискание учёной степени кандидата медицинских наук

Москва 2

Работа выполнена в государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Астраханская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Научные руководители:

доктор медицинских наук,

профессор Сентюрова Людмила Георгиевна

кандидат медицинских наук,

профессор АГМА Никулина Дина Максимовна

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Ивков Николай Николаевич ГОУ ВПО РГМУ

доктор медицинских наук, профессор Федорова Надежда Николаевна ГОУ ВПО АГТУ

Ведущая организация:

ФГУ «Научно-Исследовательский Институт Физико-Химической Медицины Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию».

Защита состоится «_»__2008 г. в -14 с~ часов

на заседании диссертационного совета Д 208.072.01 при Российском государственном медицинском университете (117997, г. Москва, ул. Островитянова, д. 1)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке РГМУ по адресу: 117997, Москва, ул. Островитянова, д. 1

Автореферат разослан « 2- 0 »

2008 года

Ученый секретарь диссертационного совета,

доктор медицинских наук, профессор

П.Х.Джанашия

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

АГ - антиген

АТ - антитело

АФП - альфа-фетопротеин

АХ - аффинная хроматография

БОФ - белки острой фазы

НЬ - гаптоглобин

ИХ - ионообменная хроматография

ИФА - иммуноферментный анализ

ИФО - иммуноферментное определение

ИЭФ - иммуноэлектрофорез

МГ - альфа2-макроглобулин

ПААГ - полиакриламидный гель

ПИЭФ - перекрестный иммуноэлектрофорез

ПЛ - плацентарный лактоген

РИД - радиальная иммунодиффузия

РИФ - реакция иммунофлюоресценции

СБАГ - связанный с беременностью альфа2-гликопротеин

ТБГ - трофобластический бета-глобулин

ТФ - трансферрин

ХГ - хорионический гонадотропин

ЦП - церулоплазмин

ЭФ - электрофорез

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ДИССЕРТАЦИИ

Актуальность исследования

Одной из главных целей реализации приоритетного национального проекта Российской Федерации в сфере здравоохранения является формирование предпосылок демографического роста в стране Министерством здравоохранения РФ для реализации поставленной цели определены следующие основные задачи улучшение репродуктивного здоровья населения и охрана здоровья матери и ребенка

Среди важнейших методов диагностики, как самой беременности, так и ряда патологических процессов, возникающих в период беременности, следует отметить количественный и качественный анализ маркеров беременности К таким исследованиям относится определение гормонов и специфических белков беременности, а именно таких белков-маркеров как альфа-фетопротеин (АФП), связанный с беременностью альфа2-гликопротеин (СБАГ), трофобласти-ческий бета-глобулин (ТБГ). Эти белки беременности продолжают оставаться пристальным объектом научных исследований Несмотря на их внедрение в практику как диагностикумов, что связано, прежде всего, с появлением новых методических подходов, позволяющих проводить тонкие исследования поведения и функции белковых молекул в организме (Татаринов Ю С , 1970, Никулина Д М , 1998, Те-рентьев А А , 2003, Denro С W, 1981, Ноше С Н W , 1986)

Следует отметить, что в лабораторной диагностике используются также и постоянные белковые компоненты сыворотки крови, уровень которых повышается при беременности альфа2-макроглобулин (МГ), трансферрин (ТФ), церулоплазмин (ЦП), гаптоглобин (ГГ) и другие Все перечисленные белки крови относятся к белкам острой фазы

Концентрация практически всех названных белков в биологических жидкостях характерно изменяется не только при физиологически протекающей беременности, но и при многих патологических состояниях, сопровождающих беременность, таких как ранние и поздние гестозы (Никулина Д М , 1977, Зорин Н.А , 1987, Воробьева ТБ , 1991), нефротический синдром (Valnichkova L , 1996), сахарный диабет (Веремеенко КН, 1979, Smith N.M, et al, 1988, Straube W, 1983), резус-несовместимость (Straube W, 1983), эклампсия, спон-

танные и индуцированные аборты и внутриутробная гибель плода (Васильева ЗФ, 1987, Wagner V, 1977, Straube W, 1983) Уровень этих белков может служить косвенным ориентиром состояния плода (Воробьева ТБ , 1991) Изменение сывороточных концентраций белков-маркеров беременности может служить диагностическим подспорьем при многоплодии (Васильева 3 Ф., 1987, Воробьева ТБ, 1991) и переношенной беременности (Воробьева Т Б , 1991, Dunn J Т , 1967)

Следует отметить, что белки первой группы (АФП, СБАГ и ТБГ) являются маркерами не только беременности (Азявчик А В, 1969, Bundschuh G , 1967, Bersinger N А , 1990), но и ряда онкологических заболеваний (Татаринов ЮС, 1970, Никулина ДМ, 1977, Васильев МЮ., 1985, Зорин НА, 1991) Кроме того, большинство вышеуказанных белков характерно изменяют свой уровень при многих воспалительных заболеваниях (Никулина ДМ, 1977, Мощич ПС, 1980, Зорин НА, 2006) Доказана иммуносупрессивная и им-муномодулирующая активность АФП, СБАГ и ТБГ (Трубников Г А , 1975, Bohn H , 1972, Lupu F , 1994)

Все вышеизложенное доказывает огромную физиологическую и патогенетическую роль белков, ассоциированных с беременностью Вместе с тем, многие вопросы их места синтеза и локализации в нормальных и малигнизированных тканях остаются не до конца изученными, несмотря на пристальное внимание исследователей к белкам беременности (Татаринов Ю С , 1988)

Поэтому приобретает важное не только теоретическое, но и клиническое значение знание места локализации и синтеза наиболее значимых белков беременности для последующего использования их в диагностике и оценке эффективности лечения Иными словами, для обоснованной корректировки гомеостаза организма

В настоящее время ведущими методами в исследовании белков являются иммунохимические Среди них известны иммуногистохи-мические методы, позволяющие выявить места локализации исследуемого белка в конкретной структуре органа или ткани С помощью иммуногистохимии можно проводить скрининг-исследования в условиях поликлинической лаборатории для оценки состояния организма в случае определения белков беременности - плода и матери

Наиболее полно и достоверно определено место синтеза, локализации и накопления в субклеточных структурах при физиологиче-

ском и патологическом течении беременности ТБГ (Bohn Н., 1971; Chard Т, 1979) Установлено, что этот белок продуцируется и секре-тируется в кровь матери для выполнения своей основной функции -иммуносупрессивной Сведения же по гистотопографии СБАГ отличаются большой разноречивостью, как при беременности, так и при развитии заболеваний, сопровождающихся усилением синтеза этого белка

Таким образом, совершенно закономерным и актуальным представляется более детальное изучение белков беременности, в частности, СБАГ в органах и тканях в условиях нормы и патологии

Цель работы: Уточнение представлений о молекулярных механизмах в условиях нормы и при канцерогенезе, а также улучшение диагностики опухолей путем определения локализации и места синтеза белков беременности в тканях человека

Задачи исследования:

1 Определить гистотопографию и количество общего (суммарного) белка в экзокриноцитах исследуемых тканей в норме

2 Сравнить гистотопографию и количество общего (суммарного) белка в малигнизированных экзокриноцитах толстого кишечника и эндометрия

3 Изучить гистотопографию белков беременности в тканях (печень, толстый кишечник, эндометрий) человека (мужчин и небеременных женщин) в норме, и в тканях рожениц (плацента)

4 Изучить гистотопографию белков беременности в тканях человека при канцерогенезе

5 Сравнить гистотопографию белков беременности в нормальных и малигнизировованных тканях

6 Разработать принципы практического использования полученных результатов в лечении заболеваний женской половой сферы.

Научная новизна

В ходе исследования впервые были получены новые данные о топографии суммарного белка с одновременным определением локализации белков беременности (СБАГ) в тех же тканях человека в физиологических условиях нормы и при онкопатологии.

Также впервые были получены количественные характеристики суммарного белка и СБАГ в норме и при канцерогенезе в некоторых тканях с помощью программно-аппаратного комплекса «Морфолог»

Полученные новые данные о динамике содержания и распределения как суммарного белка в тканях, так и иммуногистохимического исследования СБАГ в аналогичных участках организма позволят сделать рекомендации для практического здравоохранения с целью наиболее ранней диагностики предболезни

Практическая значимость результатов исследования

На основе результатов исследования сформированы рекомендации для практического здравоохранения по иммунофлюоресцентному анализу опухолевых тканей эндометрия и толстого кишечника по выявлению определенного антигена Полученные результаты позволяют рекомендовать этот метод как лабораторный тест для ранней диагностики опухолей

Внедрение результатов исследования

Результаты диссертации используются в лекционном курсе кафедр биологической химии с курсом клинической лабораторной диагностики и медицинской биологии лечебного факультета Астраханской государственной медицинской академии для курсантов ФПО и студентов

Выявление СБАГ в гистологических препаратах может быть использовано для диагностики в гинекологической практике для оценки состояния эндометрия и проктологии в качестве дополнительного критерия степени малигнизации исследуемых тканей

Апробация работы

Материалы работы были доложены на научных региональных и международных форумах.

Материалы диссертации доложены на заседаниях кафедры биологической химии с курсом клинической лабораторной диагностики и конференциях ГОУ ВПО АГМА, на международных научных конференциях молодых ученых «Белки - маркеры патологических состояний» (Астрахань - Москва, 1999, 2003гг), на научно-практической конференции молодых ученых с международным участием «Современные достижения фундаментальных наук в решении актуальных проблем медицины» (Астрахань-Москва, 2004г), были представлены на XXVIII Meeting of the international society for oncodevelopmental biology and medicine (ISOBM) (Мюнхен, Германия, 2000 и Хельсинки)

По теме диссертации опубликовано 7 научных статей, 2 из них в изданиях рекомендованных ВАК изданиях

Структура и объем работы

Диссертация изложена на 114 страницах, состоит из введения, обзора литературы, глав «Материалы и методы исследования», «Собственные исследования», «Обсуждение полученных результатов», выводов, практических рекомендаций, списка литературы Библиография включает в себя 65 отечественных и 190 зарубежных авторов

Иллюстративный материал представлен 18 таблицами и 24 рисунками

Работа выполнена по плану НИР ГОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия» на базе кафедр биологической химии с курсом клинической лабораторной диагностики, медицинской биологии и генетики ГОУ ВПО АГМА и Центральной научно-исследовательской лаборатории Российского государственного медицинского университета г Москвы при поддержке грантов ФЦП «Интеграция науки высшего образования России», 2000 - 2004 гг

Положения выносимые на защиту

Содержание общего белка в неизмененных тканях эндометрия, толстого кишечника, плаценты, аппендикса и печени по данным углубленных цитофотометрических исследований существенно различается

В малигнизированных тканях эндометрия и толстого кишечника количество общего белка существенно возрастает соответственно с 231,23 в норме до 314,02 уел ед при аденокарциноме эндометрия, для толстого кишечника с 174,07 в норме до 347,05 уел ед при аденокарциноме

Наибольшие концентрации СБАГ в различных тканях по степени убывания выявляются в малигнизированных тканях толстого кишечника, эндометрия и в нормальной плаценте рожениц

Выявленное увеличение содержания СБАГ в плаценте рожениц и малигнизированных тканях, вероятно, связано с разной степенью дерепрессии структурного гена СБАГ, реализующего иммуносупрес-сивную активность в большей степени при беременности и опухолях

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы

Объектом исследования являлся аутопсийный материал, полученный от людей, погибших в результате случайных причин, а также операционный материал, полученный в патологоанатомическом бюро областного онкологического диспансера города Астрахани, ГНЦ ко-лопроктологии РФ, МНИОИ им Герценаторода Москвы с 2001 года по 2007 год Кроме того, для исследований брались плаценты рожениц в Астраханском родильном доме №2, родильном отделении Астраханской областной Александро - Мариинской больницы Всего было изучено 132 пробы (табл 1)

Таблица 1

Характеристика исследуемого материала

№ Исследуемый материал Кол-во проб Возрастная группа Пол

20-29 30-39 40-49 50 и > М Ж

1 Эндометрий 20 3 5 10 2 - 20

2 Плацента 10 6 3 1 - - 10

3 Толстый кишечник 20 7 6 2 5 13 7

4 Аппендикс 10 5 4 1 - 8 2

5 Печень 12 4 6 1 1 4 8

6 Рак эндометрия 30 - - 6 24 - 30

7 Рак толстого кишечника 30 - - 3 27 18 12

Полученный материал обрабатывался на кафедрах медицинской биологии и биологической химии Астраханской государственной медицинской академии и Центральной научно-исследовательской лаборатории Российского государственного медицинского университета г Москвы

Пробы тканей эндометрия, плаценты, толстого кишечника, аппендикса, печени в норме и при малигнизации размерами не более 0,5-1см помещали в фиксатор - абсолютный спирт для дальнейшего получения парафиновых блоков, либо замораживались при минус -15-20°С и изготавливали криостатные срезы

Кровь для приготовления сыворотки брали пункцией кубиталь-ной вены в количестве 10,0 мл или из пальца у взрослых людей натощак, у новорожденных - из пуповины сразу после ее рассечения Ретроплацентарную кровь получали при родах в последовом периоде Сыворотку отделяли от форменных элементов крови методом центрифугирования, консервировали 1% раствором азида натрия и хранили при температуре -18° С.

Гистологические методы

В работе использованы как парафиновые срезы, так и срезы, полученные на криостате Приготовление парафиновых срезов осуществлялось на микротоме санного типа по стандартной методике Толщина парафиновых срезов составляла 4-5 мкм, и 5-7 мкм для криостатных срезов

Всего для гистологических и иммуногистохимических исследований образцов тканей было использовано 6 методов окраски гематоксилин-эозином, по Ван-Гизону, альциановым синим, прочным зеленым на общий белок, на гликоген по Бесту, иммунофлюоресцентное окрашивание (табл 2)

Ведущим методом в исследовании белков являлся иммуноги-стохимический. Именно он позволяет выявить места локализации белка в конкретной структуре органа или ткани Помимо локализации этот метод позволяет определить, какие именно структуры являются продуцентами этого белка Для непрямого иммунофлюоресцентного анализа срез вначале обрабатывали антителами, не связанными с флюорохромом Затем последние, выступающие уже в роли антигена, соединялись с мечеными антителами специфической антисыворотки

Для проведения реакции иммунофлюоресценции использовали антикроличьи диагностические иммуноглобулины, меченные флуо-ресцин-5-изотиоцианатом (ФИТЦ) из НИИЭМ им Н Ф Гамалея. Специфические антисыворотки были получены самостоятельно

Таблица 2

Использованные гистологические и иммуногистохимические методы при исследовании различных тканей

№ Исследуемый материал Метод исследования

Общие гистологические Окраска альциа-новым синим Окраска на гликоген по Бесту Выявление общего белка Метод иммуноф-люорес-ценции

1 Эндометрий + + - + +

2 Плацента + + + + +

3 Толстый кишечник + + - + +

4 Аппендикс + + + + +

5 Печень + + + + +

6 Рак эндометрия + + + + +

7 Рак толстого кишечника + + + + +

Биохимические и иммунохимические методы

Процесс получения антисывороток к СБАГ и ТБГ состоял из следующих этапов приготовление иммунизирующего Аг (иммуноге-на), иммунизации животного, оценки полученной Ас, обработки Ас, включая при необходимости адсорбцию лиофилизированной плазмой доноров Приготовление АГ и получение антисывороток составило первую часть собственных исследований

Исходным биоматериалом для выделения и очистки исследуемых белков-антигенов служила сыворотка крови женщин с поздними сроками беременности В работе использовали сочетание методов высаливания, ионообменной, гель-проникающей хроматографии и препаративного иммуноэлектрофореза Идентификацию Аг в препаратах с каждого этапа очистки проводили классическими иммунохи-мическими методами иммунодиффузионным титрованием и аналитическим иммуноэлектрофорезом При иммунизации использовали в качестве лабораторных животных кроликов, которым в течение месяца вводили антиген дробными дозами

Результаты исследований и их обсуждение

В работе проведено сравнительное исследование общего (суммарного) белка (ОБ), выявляемого в экзокриноцитах печени, плаценты, эндометрия и толстого кишечника в норме и при канцерогенезе Именно его количество характеризует степень напряженности метаболических процессов Большинство же имеющихся работ описывают изменения белка либо в гомогенатах печени, либо в периферической крови по результатам исследований с помощью биохимических реакций При этом можно только косвенно судить о функциональном состоянии органа. Сведения о содержании и распределении общего (суммарного) белка, выявляемого гистохимически в плаценте, эндометрии и толстом кишечнике в литературе практически отсутствуют ОБ выступает в качестве количественного критерия, характеризующего степень напряженности метаболических процессов в норме и при патологии в этих органах С другой стороны, иммуногистохими-ческие исследования позволяют определить место синтеза того или иного белка

Одним из наиболее значимых в диагностическом плане является связанный с беременностью альфа2-гликопротеин (СБАГ) Известно, что его количество увеличивается во много раз при беременности, а в крови небеременных женщин и мужчин присутствует в низкой концентрации Кроме того, значительным повышением в крови концентрации этого белка также сопровождается воспаление, заболевания крови, опухоли Однако сведения о содержании и распределении этого функционально важного белка в структурах органов неоднозначны и недостаточны

Поскольку большинство белков плазмы крови синтезируется в печени, то на какой - то период они присутствуют в гепатоцитах Естественным было предположить, что печень является одним из основных мест синтеза и СБАГ. Но, учитывая, что он впервые был выявлен при беременности, то вероятным местом синтеза может являться и плацента Также вероятен синтез СБАГ и другими экзок-риноцитами, например, эндометрия (эстрогензависимыми) или толстого кишечника. Есть данные о синтезе СБАГ в плазматических клетках

Впервые было проведено параллельное исследование гистохимическими методами общего (ОБ) и специфического белка (СБАГ) в клетках и тканях отдельных органов человека, а именно печени, тол-

стого кишечника, эндометрия, плаценты. Кроме того, было проведено исследование общего белка (ОБ) и СБАГ в эндометрии и толстом кишечнике при аденокарциноме. Были использованы как взаимодополняющие методы выявления ОБ в эндокриноцитах и иммуногисто-химическое определение с помощью специфической тест-системы мест предполагаемого синтеза СБАГ.

Было установлено, что ОБ во всех изученных органах имеет сходную локализацию и распределен в цитоплазме экзокриноцитов чаше диффузно (рис 1).

Рис ] - Окраска прочным зеленым: эндометрий норма (а) и малигнизированная ткань (б)

Исключением является печень, где общий белок представлен множественными глыбками, сливающимися в гепатоцитах друг с другом. Поэтому даже при визуальном наблюдении можно отметить его увеличенное содержание. Далее, в ряду по степени концентрации ОБ, располагаются столбчатые экзокриноциты аппендикса, затем симпластотрофобласт плаценты, экзокриноциты желез эндометрия и столбчатые экзокриноциты толстого кишечника (рис 2).

Рис.2 - Окраска прочным зеленым: толстый кишечник норма (а) и малигнизированная ткань(б)

Концентрация ОБ в разных органах колеблется от 174,07 до 752,28 усл.ед., то есть изученные органы характеризуются высокой гетерогенностью функциональной активности. По-видимому, это способствует оптимальной адаптации к выполняемым функциям.

Было проведено количественное определение общего белка в клетках печени, аппендикса, плаценты, эндометрия и толстого кишечника. Данные цитофотометрического исследования приведены на гистограмме (Рис. 3).

Рис. 3 Цитофотметрическое исследование общего белка в органах человека

усп.ед.

800 700 : 600 500 400 300: 200 100 0-1-

г

:

;

—

12 3 4 1 - печень; 2 - аппендикс;

- плацента; 4 - эндометрий;

5 - толстый кишечник

Наличие большого количества белка в гепатоцитах согласуется с выполнением печенью большого объема метаболических реакций, здесь идут наиболее напряженные метаболические процессы. Учитывая, что аппендикс является элементом защитной системы организма, выработка достаточно большого количества белка столбчатыми эк-зокриноцитами вполне оправдана. Часть этих белков вырабатывается иммунокомпетентными клетками общей иммунной системы слизистых оболочек желудочно-кишечного тракта и поступает в столбчатые экзокриноциты для борьбы с вредоносным агентом. Наличие высоких значений показателя также может объясняться тем, что здесь идут интенсивные иммунные процессы, где задействованы иммуноглобулины А. В плаценте уменьшение данного показателя может быть обусловлено тем, что синтезируемый здесь секрет очень быстро поступает в кровь, не успевая накапливаться в самой ткани. Изучение общего белка в малигнизированных тканях позволило констатировать, что локализация общего белка сохраняется, но существенно ме-

няется количественное содержание (Рис 4.). Так, при аденокарциноме толстого кишечника количество общего белка в клетках эпителия увеличивается в 2 раза, при аденокарциноме в эндометрии в полтора раза.

Рис. 4 Цитофотометрическое исследование общего белка в нормальных и малигнизированных тканях

400 | ____________________!

350 300 250

усл.ед. 200

150 100 50 0

1- эндометрий (норма); 2 - эндометрий (аденокарцинома), 3 - толстый кишечник (норма); 4 - толстый кишечник (аденокарцинома)

Исследование площади этих же клеток показывает сходные результаты, но площадь малигнизированных клеток эндометрия больше в 1,4 раза. В то же время площадь столбчатых эпителиоцитов толстого кишечника, напротив, уменьшается при малигнизации тканей, что возможно связано с усилением выделения секрета в просвет кишечника (Рис. 5).

| ..........

Рис. 5 Площадь эпителиальных клеток эндометрия и толстого кишечника

усл.ед.

1 - эндометрий (норма); 2 - эндометрий (аденокарцинома); 3 - толстый кишечник (норма); 4 -толстый кишечник (аденокарцинома)

Ещё одним показателем функционального состояния органа может быть полусумма максимального и минимального диаметров ядра клетки (рис. 6).

Рис. 6 Формализованная характеристика ядер толстого кишечника и эндометрия

12 3 4

1 - толстый кишечник (норма); 2 - толстый кишечник (рак); 3 -эндометрий (норма); 4 - эндометрий (рак)

Полученные в работе данные позволяют предположить по формализованному показателю увеличения размеров ядер железистых эпителиоцитов эндометрия с 21,48 ± 1,8 до 25,86 ± 1,9 условных единиц, при несущественном снижении размеров ядер толстого кишечника с 23,3 ± 1,8 до 22,51 ± 2,0 условных единиц о влиянии на орган гормональной составляющей.

Таким образом, полученные данные свидетельствуют об особенностях обмена белка, как в нормальных, так и малигнизированных клетках и тканях (рис 1, 2). Вместе с тем, представляется важным знать динамические характеристики отдельных биологически важных компонентов клетки, а именно специфических белков, таких как СБАГ.

Поскольку обычными гистохимическими методами этот белок в клетках не выявляется, был применен метод иммунофлюоресцентно-го анализа со специфической антисывороткой или реакция иммуноф-люоресценции (РИФ), позволяющий визуально идентифицировать исследуемый белок в качестве индивидуального антигена.

Ранее было установлено, что СБАГ в норме синтезируется в печени, моноцитах и плазматических клетках. Кроме того, этот белок могут синтезировать лейкоциты и моноциты матери. Присутствие его в других органах не описано.

Анализ полученных результатов РИФ позволяет констатировать, что СБАГ выявляется во всех исследованных органах: толстом кишечнике, аппендиксе, эндометрии, печени и плаценте.

С целью объективизации данных РИФ на СБАГ были использованы формализованные показатели. На первом этапе проводилось фотографирование РИФ каждого исследуемого органа: печени, аппендикса, толстого кишечника, эндометрия и плаценты. На втором этапе микрофотографии оценивали с помощью программно-аппаратного комплекса «Морфолог» и по оптической плотности РИФ определяли концентрацию СБАГ в тканях в условных единицах. Таким образом, при анализе изображения были получены инвертированные данные. То есть, чем ниже оптическая плотность исследуемого образца, тем выше содержание белка в тканях.

Впервые установлено, что в тканях толстого кишечника и эндометрия концентрация СБАГ существенно возрастает при малигни-зации (рис 7, 8, 9).

Рис 7. Иммунофлюоресцентное исследование на СБАГ в нормальном (а) и малигнизированном эндометрии (б)

В эндометрии местом локализации СБАГ определены столбчатые эпителиоциты. В толстом кишечнике и аппендиксе это были эк-зокриноциты желез эндометрия. В печени, предположительно, - фиб-робласты соединительной ткани, что согласуется с данными литературы. Сами гепатоциты не дали положительной реакции на СБАГ.

Проведенными исследованиями установлено, что аденокарци-номатоз существенно влияет на содержание СБАГ в органе и соответственно на его синтез, но влияние проявляет в зависимости от органа в различной степени малигнизации.

) К .' шб)

Рис.8. Рез\ льтаты иммунофлюоресцентного анализа на СБА!' в нормальном (а) и ма.пп визированном (б) толстом кишечнике

Так, максимальное увеличение концентрации СБАГ (иммуноф-люоресценции) более чем в 4 раза наблюдается в малигнизированном кишечнике (Рис. 8). Менее значительное увеличение содержания СБАГ было отмечено в малигнизированном эндометрии (Рис. 9).

Рис. 9 Цитофотометрия реакции иммунофлюоресценции на СБАГ

2500^'"

1 2 3 4 5 6

1 - эндометрий (норма). 2 - эндометрий (аденокарцинома). 3 - толстый кишечник (норма) 4 -толстый кишечник (аденокарционома): 5 - печень. 6 -аппендикс

Ранее на основании исследований крови априори этот белок относили к группе неспецифических маркеров рака в сыворотке, так как его уровень достоверно увеличивается при злокачественных опухолях. Результаты данного исследования подтверждают это положение.

С другой стороны, полученные данные подтверждают, что в печени синтезиру ется СБАГ в небольшом количестве в нормальной

ткани, но больше в соединительнотканной строме органа, предположительно, фибробластами

Таким образом, полученные данные позволяют утверждать, что местом усиленного синтеза СБАГ является малигнизированная ткань, в наибольшей степени эпителиальная ткань толстого кишечника Это может объясняться тем, что именно кишечник синтезирует большое количество иммуноглобулина А, по литературным данным функционально тесно связанного со СБАГ

С учетом литературных данных об иммуносупрессивных свойствах СБАГ, полученные данные свидетельствуют о дерепрессии гена, регулирующего синтез данного белка при злокачественных новообразованиях, что ведет к увеличению содержания СБАГ в ткани

Вероятно, при канцерогенезе в клетке увеличивается содержание факторов, выполняющих роль индукторов дерепрессии структурного гена СБАГ

ВЫВОДЫ

1 Гистохимическое исследование нормальных тканей печени, толстого кишечника, аппендикса, эндометрия, плаценты позволило выявить содержание и топографию общего белка Так, для печени среднее значение интегральной оптической плотности составило 752,28, аппендикса 400,48, плаценты 329,77, эндометрия 231,23, толстого кишечника 174,07 уел ед

2 Выявлено, что в нормальных тканях печени, толстого кишечника, аппендикса, эндометрия, плаценты СБАГ определяется практически везде, но интенсивность свечения тканей различна Наибольшая концентрация СБАГ по среднему значению интегральной плотности определяется в плаценте рожениц 1369,7 уел ед

3 Аденокарцинома толстого кишечника характеризуется увеличением среднего значения интегральной плотности белка по сравнению с нормальной тканью соответственно 347,05 и 174,07 уел ед

4 Среднее значение интегральной плотности аденокарциномы эндометрия превышает таковое нормальной ткани - 314,02 и 231,23 уел ед соответственно

5 Сравнительный анализ гистотопографии СБАГ в различных тканях показал, что наибольшие концентрации данного белка в ряду по степени убывания выявляются в малигнизиро-ванных тканях толстого кишечника, эндометрия и в нормальной плаценте рожениц

6 Неидентичное увеличение содержания СБАГ в плаценте и малигнизированных тканях, вероятно, связано с разной степенью дерепрессии структурного гена СБАГ, реализующего иммуносупрессивную активность в большей степени при беременности и опухолях

Практические рекомендации

1 Полученные показатели суммарного белка в нормальных и малигнизированных тканях позволят расширить спектр ранних диагностических тестов состояния предбо-лезни, так как характеризуются простотой постановки, доступностью, экономичностью и необходимой информативностью

2 Результаты иммуногистохимических исследований могут быть использованы в практике научно - исследовательских учреждений

3 Материалы работы рекомендуется использовать в учебном процессе на кафедрах биохимии, биологии, гистологии

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1 DM Nikulina - MA Volodin, T В Vorobyeva, Yu Kostina, S.Kulikov. - Alpha2-pregnancy associated glycoprotein localization m placental and endometrial tissues //Tumor Biology, 21(suppl 1) 2000 -P.153

2 Воробьева Ю A , Куликов B.B., Костина Ю Иммунофлюорес-центное изучение локализации белков беременности в тканях эндометрия и плаценты // Материалы 81-й итоговой научной конференции «Биология и медицина на рубеже веков» Астрахань 2001 - С 212-216

3 ПА Иванов, М Ю Темчук, В.В.Куликов. - Показатели гомеоста-за у больных с хронической алкогольной и наркотической интоксикацией // Материалы III съезда биохимического общества РАН С-Пб -26 июня 1 июля 2002 С 161-162

4. П А Иванов, Д.М Никулина, И О Островерхова, В.В.Куликов -Изучение корреляции между уровнем белков острой фазы воспаления и показателями иммунограммы // Материалы международной научно-практической школы-конференции "Цитокины Воспаление Иммунитет" - С-Пб - 23-26 июня 2002 - С 160

5 Сентюрова Л Г , Куликов В.В., Кривенцев Ю А , Островерхова И О Иммуногистохимическое определение локализации белков беременности в нормальных тканях человека // Материалы 3 научной конференции и школы-семинара для молодых ученых "Белки-маркеры патологических состояний". - Астрахань-Москва - 2003.- С 145-148

6 Сентюрова Л Г, Куликов В.В., Никулина Д М, Кривенцев Ю.А Иммуногистохимическое определение локализации белка беременности в структурах нормального эндометрия и при опухолях // Материалы научно-практической конференции и школы-семинара для молодых ученых с международным участием "Современные достижения фундаментальных наук в решении актуальных проблем медицины" - Астрахань-Москва - 2004 -С.229-233

7 Сентюрова Л Г , Куликов В.В., Никулина Д М Сравнительное иммуногистохимическое исследование содержания общего белка и белка беременности в организме человека // Естественные науки - 2007 -№1 (18)-С 78-83

Заказ № 547. Объем 1 п.л. Тираж 100 Ж1,

Отпечатано в ООО «Петроруш». I. Москва, ул. Палиха-2а, тел. 250-92-06 www.postator.ru

Содержание диссертации, кандидата медицинских наук, Куликов, Вячеслав Валерьевич

ВВЕДЕН] '4Е

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Биологическая роль белков беременности (ББ).

1.1.1. Продукция ББ при физиологически протекающей беременности

1.1.2. Продукция ББ при патологии беременности

1.2. Современные представления о мишенях белков беременности.

1.3. Белки беременности как диагностические тесты при заболеваниях человека.

1.4. Современные представления о локализации и месте синтеза ББ.

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Характеристика и объем материала исследований.

2.2. Методы исследований

2.2.1 Методы очистки антигенов и получения антисывороток.

2.2.2 Гистологические и гистохимические методы

2.2.3 Метод иммунофлюоресценции

2.2.4 Методы,статистической обработки данных

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

Глава 3. Изучение общего белка и белков беременности в различных тканях человека в условии нормы и при патологии

3.1 Выделение и очистка СБАГ и ТБГ для последующего получения к ним антисывороток

3.2 Изучение общего белка и белков беременности в тканях плаценты человека

3.2.1. Морфология нормальной плаценты рожениц

3.2.2. Иммунофлюоресцентное исследование СБАГ в плаценте

3.2.3. Иммунофлюоресцентное исследование ТБГ в плаценте

3.3. Изучение общего белка и белка беременности в печени

3.3.1. Морфология печени

3.3.2. Иммунофлюоресцентное исследование СБАГ в печени

3.4. Изучение общего белка и белка беременности в аппендиксе

3.4.1. Морфологиячервеобразного отростка

3.4.2. Иммунофлюоресцентное исследование СБАГ в аппендиксе

3.5. Изучение общего белка и белков беременности в эндометрии

3.5.1. Морфология эндометрия в норме

3.5.2. Морфология малигнизированного эндометрия

3.5.3. Иммунофлюоресцентное исследование СБАГ в нормальном и малигнизированнном эндометрии

3.6. Изучение общего белка и белка беременности в толстом кишечнике

3.6.1. Морфология толстого кишечника в норме

3.6.2. Морфология малигнизированного толстого кишечника

3.6.3. Иммунофлюоресцентное исследование СБАГ в нормальном и малигнизированном толстом кишечнике

Введение Диссертация по биологии, на тему "Определение локализации белков беременности в тканях человека"

Актуальность работы.

Одной из главных целей реализации приоритетного национального проекта Российской Федерации в сфере здравоохранения является формирование предпосылок демографического роста в стране. Министерством здравоохранения РФ для реализации поставленной цели определены следующие основные задачи: улучшение репродуктивного здоровья населения и охрана здоровья матери и ребенка.

Среди важнейших методов диагностики как самой беременности, так и ряда патологических процессов, возникающих в период беременности, следует отметить количественный и качественный анализ маркеров беременности. К таким исследованиям относится определение гормонов и специфических белков беременности, а именно таких белков-маркеров как альфа-фетопрогеин (АФП), связанный с беременностью альфа2-гликопротеин (СБАГ), трофобла-стический бета-глобулин (ТБГ). Эти белки беременности продолжают оставаться пристальным объектом научных исследовании, несмотря на их внедрение в практику как диагностикумов, что связано, прежде всего, с появлением новых методических подходов, позволяющих проводить тонкие исследования поведения и функции белковых молекул в организме [75; 77; 111].

Следует отметить, что в лабораторной диагностике используются также и постоянные белковые компоненты сыворотки крови, уровень которых повышается при беременности: альфа2-макроглобулин (МГ), трансферрин (ТФ), церу-лоплазмин (ЦП), гаптоглобин (ГГ) и другие. Все перечисленные белки крови относятся к белкам острой фазы.

Концентрация практически всех названных белков в биологических жидкостях характерно изменяется не только при физиологически протекающей беременности, но и при многих патологических состояниях, сопровождающих беременность, таких как ранние и поздние гестозы [17; 22; 36; 247], нефротиче-ский синдром [247], сахарный диабет [11; 206; 232], резус-несовместимость

232], эклампсия, спонтанные и индуцированные аборты и внутриутробная гибель плода [10; 232; 247]. Изменение сывороточных концентраций белков-маркеров беременности может служить диагностическим подспорьем при многоплодии [10; 17] и переношенной беременности [17; 113]. Кроме того, уровень этих белков может служить косвенным ориентиром состояния плода [17].

Следует отметить, что белки первой группы (АФП, СБАГ и ТБГ) являются маркерами не только беременности [2; 86; 97; 141; 143], но и ряда онкологических заболеваний [9; 23; 36; 67; 85]. Кроме того, большинство вышеуказанных белков характерно изменяют свой уровень при многих воспалительных заболеваниях [35; 42; 100; 247; 221]. Доказана иммуносупрессивная и иммуно-модулирующая активность вышеуказанных белков [58; 91; 175].

Все вышеизложенное доказывает огромную физиологическую и патогенетическую роль белков, ассоциированных с беременностью. Вместе с тем многие вопросы их места синтеза и локализации в нормальных и малигнизиро-ванных тканях остаются не до конца изученными, несмотря на пристальное внимание исследователей к белкам беременности [49].

Поэтому приобретает важное не только теоретическое, но и клиническое значение знание места локализации и> синтеза наиболее значимых белков беременности с целью последующего использования их в диагностике и оценке эффективности лечения. Иными словами, для обоснованной корректировки го-меостаза организма.

В настоящее время ведущими методами в исследовании белков являются иммунохимические. Среди них известны иммуногистохимические методы, позволяющие выявить места локализации исследуемого белка в конкретной структуре органа или ткани. С помощью иммуногистохимии можно проводить скрининг-исследования в условиях поликлинической лаборатории для оценки состояния организма: в случае определения белков беременности - плода и матери.

Наиболее полно и достоверно определено место синтеза, локализации и накопления в субклеточных структурах при физиологическом и патодогиче7 ском течении беременности ТБГ [96; 103]. Установлено, что этот белок продуцируется и секретируется в кровь матери для выполнения своей основной функции - иммуносупрессивной. Сведения же по гистотопографии СБАГ отличаются большой разноречивостью как при беременности, так и при развитии заболеваний, сопровождащихся усилением синтеза этого белка.

Таким образом, совершенно закономерным и актуальным представляется детальное изучение белков беременности в органах и тканях в условиях нормы и патологии.

Цель исследования: Определение локализации и места синтеза белков беременности в тканях человека для уточнения представлений о молекулярных механизмах в условиях нормы и при канцерогенезе, а также для улучшения диагностики опухолей.

Задачи исследования:

1. Определить гистотопографию и количество общего белка в экзокриноци-тах исследуемых тканей в норме.

2. Сравнить гистотопографию и количество общего белка в малигнизирован-ных экзокриноцитах толстого кишечника и эндометрия.

3. Изучить гистотопографию белков беременности в тканях (печень, толстый кишечник, эндометрий) человека (мужчин и небеременных женщин) в норме, и в тканях рожениц (плацента).

4. Изучить гистотопографию белков беременности в тканях человека при канцерогенезе.

5. Сравнить гистотопографию белков беременности в нормальных и малиг-низировованных тканях.

6. Разработать принципы практического использования полученных результатов в лечении заболеваний женской половой сферы.

Научная новизна.

В ходе исследования впервые были получены новые данные о топографии суммарного белка с одновременным определением локализации белков беременности (СБАГ) в тех же тканях человека в физиологических условиях нормы и при онкопатологии.

Также впервые были получены количественные характеристики суммарного белка и СБАГ в норме и при канцерогенезе в некоторых тканях с помощью программно-аппаратного комплекса «Морфолог».

Полученные новые данные о динамике содержания и распределения как суммарного белка в тканях, так и иммуногистохимического исследования СБАГ в аналогичных участках организма позволят сделать рекомендации для практического здравоохранения с целью наиболее ранней диагностики предбо-лезни.

Научно-практическая значимость работы

На основе результатов исследования сформированы рекомендации для практического здравоохранения по иммунофлюоресцентному анализу опухолевых тканей эндометрия и толстого кишечника по выявлению определенного антигена. Полученные результаты позволяют рекомендовать этот анализ как лабораторный тест для ранней диагностики опухолей.

Выносимые на защиту положения

1. Содержание общего белка в неизмененных тканях эндометрия, толстого кишечника, плаценты, аппендикса и печени по данным углубленных цитофотометрических исследований существенно различается.

2. В малигнизированных тканях эндометрия и толстого кишечника его количество существенно возрастает соответственно для эндометрия 231,23 в норме и 314,02 усл.ед. при аденокарциноме; для толстого кишечника 174,07 в норме и 347,05 усл.ед при аденокарциноме.

3. Наибольшие концентрации СБАГ в различных тканях по степени убывания выявляются в малигнизированных тканях толстого кишечника, эндометрия и в нормальной плаценте рожениц.

4. Выявленное увеличение содержания СБАГ в плаценте и малигнизированных тканях, вероятно, связано с разной степенью дерепрес-сии структурного гена СБАГ, реализующего иммуносупрессивную активность в большей степени при беременности и опухолях.

Внедрение результатов в практику

Выявление СБАГ в гистологических препаратах может быть использовано для диагностики в гинекологической практике для оценки состояния эндометрия и проктологии в качестве дополнительного критерия степени малигни-зации исследуемых тканей.

Материалы работы были доложены на научных региональных и международных форумах.

Материалы диссертации доложены на заседаниях кафедры биологической химии с курсом клинической лабораторной диагностики и конференциях ГОУ ВПО АГМА, на международных научных конференциях молодых ученых «Белки - маркеры патологических состояний» (Астрахань - Москва, 1999, 2003гг.), на научно-практической конференции молодых учёных с международным участием «Современные достижения фундаментальных наук в решении актуальных проблем медицины» (Астрахань-Москва, 2004г.), были представлены на XXVIII Meeting of the international society for oncodevelopmental biology and medicine (ISOBM) (Мюнхен, Германия, 2000 и Хельсинки).

По теме диссертации опубликовано 7 научных статей, 2 из них в изданиях рекомендованных ВАК изданиях.

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Куликов, Вячеслав Валерьевич

ВЫВОДЫ

1. Гистохимическое исследование нормальных тканей печени, толстого кишечника, аппендикса, эндометрия, плаценты позволило выявить содержание и топографию общего белка. Так, для печени среднее значение составило 752,28, аппендикса 400,48, плаценты 329,77, эндометрия 231,23, толстого кишечника 174,07 усл.ед.

2. Выявлено, что в нормальных тканях печени, толстого кишечника, аппендикса, эндометрия, плаценты СБАГ определяется практически везде, но интенсивность свечения тканей различна. Наибольшая концентрация СБАГ по среднему значению интегральной плотности определяется в плаценте рожениц 1369,7 усл.ед.

3. Аденокарцинома толстого кишечника характеризуется увеличением содержания белка по сравнению с нормальной тканью соответственно 347,05 и 174,07 усл.ед.

4. Среднее значение для аденокарциномы эндометрия превышает таковое для нормальной ткани - 314,02 и 231,23 усл.ед. соответственно.

5. Сравнительный анализ гистотопографии СБАГ в различных тканях показал, что наибольшие концентрации данного белка в ряду по степени убывания выявляются в малигнизированных тканях толстого кишечника, эндометрия и в нормальной плаценте рожениц.

6. Неидентичное увеличение содержания СБАГ в плаценте и малигнизированных тканях, вероятно, связано с разной степенью дерепрессии структурного гена СБАГ, реализующего иммуносупрессивную активность в большей степени при беременности и опухолях.

Практические рекомендации

1. Полученные показатели содержания суммарного белка в нормальных и малигнизированных тканях позволят расширить спектр ранних диагностических тестов состояния предболезни, так как характеризуются простотой постановки, доступностью, экономичностью и необходимой информативностью.

2. Результаты иммуногистохимических исследований могут быть использованы в практике научно - исследовательских учреждений

3. Материалы работы рекомендуется использовать в учебном процессе на кафедрах биохимии, биологии, гистологии.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата медицинских наук, Куликов, Вячеслав Валерьевич, Москва

1. Абелев Г.И. Альфа-фетопротеин: биологические и клинические аспекты // Вопр. иммунологии: Материалы симпозиума по общей иммунологии. -М. 1974.- С.3-9.

2. Азявчик А.В., Иванов И.П. Состав сывороточных белков крови у женщин с физиологической беременностью и при поздних токсикозах (иммунологическое и электрофоретическое исследование) // Акуш. и гинек. -1969.-№2.-СЛО.

3. Азявчик А.В. Новые электрофоретические зоны сывороточных белков при беременности (электрофоретическое и иммунологическое исследование) // Акуш. и гинек. 1967.- № 3. - С.9.

4. Афанасьева А.В., Володин М.А., Никулина Д.М., Меснянкина Н.В., Парфенова Л.Ф. Продукция бета 1-глобулинов в условиях нормального развития беременности и при поздних токсикозах // Акуш.и гинек. 1976,- № 6,- С.22-25.

5. Афанасьева А.В., Никулина Д.М., Старичкова Л.П., Парфенова Л.Ф. Изучение динамики сывороточных белков "зоны беременности" и С-реактивного белка в послеоперационном периоде у беременных и гинекологических больных // Акуш.и гинек. 1976.- № 8.- С.63-64.

6. Баженова Л. Г., Краюшкина Н. А., Путилова А. Т., Зорин Н. А., Чередеев А. Н. Сывороточные иммуноглобулины и белки беременности у беременных носительниц патогенной и условно-патогенной микрофлоры // Акуш. Гинек. - 1987. - № 8. - С. 47-49.

7. Бахарева Е.М. Белковые фракции сыворотки крови при токсикозе 2-й половины белеменности // Тр. Куйбышевского мед. инта. 1965. - №25. -С.81-84.

8. Белидер В.А., Ходорова E.JL, Смехова Е.А. Об альфа2-глобулине сыворотки крови, модифицирующем активность трипсина. Докл. АН СССР. -1967.- № 3.- С.723-726.

9. Васильев М.Ю., Авдеев Г.И. Количественное иммуноферментативное определение лактоферрина и альфа-лактальбумина в сыворотке крови онкологических больных // Экспериментальная онкология. Киев. 1985.- Т.7.-№ 5.- С.56-60.

10. Ю.Васильева З.Ф., Шляхтенко Т.Н., Аничкова С.И., Григорьева В.В., Ками-лова М.Я., Федоренко А.Ф. Гуморальные иммунорегуляторные факторы при нормальной и осложненной беременности // Вестник АМН СССР. -1987.-№ 1.- С. 17-22.

11. ГВеремеенко К.Н., Боднар П.Н., Волохонская Л.И. Содержание альфа2-макроглобулина в сыворотке крови больных сахарным диабетом // Пробл. эндокринологии. 1979.- Т. 16.- № 6.-С. 11 -14.

12. Веремеенко К.Н., Волохонская Л.И. Определение альфа2-макроглобулина в сыворотке крови человека и его клиническое значение // Лаб. дело.1969.- № 7.- С.394-397.

13. Веремеенко К.Н., Голобородько О.П., Кизим А.И. Протеолиз в норме и при патологии // Киев. 1988.

14. Веремеенко К.Н., Кизим А.И. Исследование сывороточных ингибиторов протеиназ. В кн.: Проблемы медицинской энзимологии. М.: Медицина.1970.- С.287-297.

15. Веремеенко К.Н., Кизим А.И. О наличии двух видов ингибиторов трипсина в сыворотке крови. Биохимия. - 1964,- Т.29.-вып. 1.- С. 132-137.

16. Власова Л. И., Смекуна Ф. А., Зак И. Р., Куликова Н. Н. Изменение белков острой фазы у родильниц с гнойно-септическими заболеваниями // Вопр. Охр. Мат. Детства. 1988. - № 8. с. 58-60.

17. П.Воробьева Т.Б. Иммунохимические тесты на эмбриоспецифические и плацентарные белки в скрининге и мониторинге переношенной беременности // Автореф. дисс. канд. мед. наук, Астрахань. 1991.91

18. Воробьева Ю.А. Клинико-патогенетическое и диагностическое значение белков острой фазы и маркера апоптоза при заболеваниях почек и брон-холегочной системы у детей // Автореф. дис. канд. мед. наук. 2007 -24с.

19. Говалло В.И. Иммунология репродукции. М. Медицина. 1987.- С.304.

20. Евсюкова И. И., Кошелева Н. Г. Сахарный диабет: беременные и новорожденные // Санкт-Петербург: Спец. Литература, 1996. 270 с.

21. Жержов А.И. Некоторые биохимические показатели функционального состояния печени у беременных, рожениц и родильниц и их изменения под влиянием пищевых режимов и лекарственных средств // Канд. дисс., Днепропетровск. 1962.

22. Зорин Н.А., Жабин С.Г., Белогорлова Т.И., Архипова С.В. Сравнительное изучение альфа2-макроглобулина и ассоциированного с беременностью альфа2-гликопротеина как возможных аналогов // Вопр. мед. хим. 1991 .-№37(3).- С.48-50.

23. Зорин Н.А., Зорина В.Н., Зорина P.M. Роль белков семейства макроглобулинов в регуляции воспаления. // Биомед. Химия 2006 - Т. 52. - С. 229238

24. Зорин Н.А., Зорина В.Н., Зорина P.M. Роль белков семейства макроглобулинов в регуляции опухолевого роста // Онтогенез. 2006 - Т. 37 - С. 1219.

25. Зорин Н.А., Зорина P.M. Неспецифический маркер рака ассоциированный с беременностью альфа2-гликопротеин // Вопр. онкол. - 1988.- № 6.-С.651-655.

26. Камбарова О.И., Сильд И.Я., Шубик Ю.Г., Репина Г.В. Иммунологический метод определения ранних сроков беременности // Вопр. прикл. иммунологии. 1967.-Т.З.- С. 135.

27. Кривенцев Ю.А. Изучение физико-химических свойств и межмолекулярных взаимодействий сывороточных белков беременности // Автореф дис. канд. мед.наук. 1999. - С. 39.

28. Лийвранд В.В. О сдвигах белков сыворотки крови при нормальной беременности и родах // Уч. зап. Тартукского университета. 1958.- Т.57.-С.145.

29. Мальцева Н.В., Гарин B.C., Жабин С.Г., Зорин Н.А. Сравнительное изучение иммуносупрессивных свойств ассоциированного с беременностью протеина А и альфа2-гликопротеина, а также альфа2-макроглобулина // Акуш. и гинек. 1991.- № 5.-С.27-29.

30. Меснянкина Н.В., Татаринов Ю.С. Иммунохимическое определение альфа2-Г-глобулина в сыворотке крови здоровых женщин в различные возрастные периоды // Лабор. дело. 1973.-№ 9.- С.568.

31. Мощич П.С., Веремеенко К.Н., Крамарев С.А. Исследование компонентов кининовой системы при вирусном гепатите у детей // Педиатрия. -1980.-№ 9-10.-С.5-9.

32. Никулина Д.М. Иммунохимия, физико-химическое и клиническое изучение бета 1-глобулина "зоны беременности" // Автореф. дисс. канд. мед. наук. Астрахань.- 1977.

33. Никулина Д.М. Практическое освоение иммунохимических методов. //Метод.рекомендации. Астрахань, - 1991. - 36 с.

34. Никулина Д.М., Афанасьева А.В., Парфенова Л.Ф. Идентификация белков "зоны беременности" в биологических жидкостях матери и плода при нормально развивающейся беременности // Акуш. и гинек.- 1976.- №10.-С.58-61.

35. Никулина Д.М., Татаринов Ю.С., Круглов Е.Н., Меснянкина Н.В. Имму-нохимическое определение бета 1-глобулина в сыворотке крови как серологический тест для диагностики беременности // Тезисы 55-й научной сессии АГМИ. Астрахань, - 1973.-С.106-107.

36. Паллади Г.А., Метакса Я.В., Марку Г.А. Некоторые особенности гомео-стаза матери и плода // Кишинев. 1980.- С.224.

37. Пасхина Т.С., Штрайбер М.И., Яровая Г.А. Роль кининовой системы в патогенезе ожоговой болезни человека // Вопр. мед. химии. 1972.- Т. 17.-№2.- С. 137-144.

38. Посисеева Л.В., Городков В.Н., Головкова Н.А., Кривоносов С.К., Татаринов Ю.С. Определение трофобласт-специфического бета-гликопротеина у женщин с риском развития гипоксии плода // Акуш. и гинек. 1987.- № 1.- С. 47- 49.

39. Симонова Л.И., Шантырь В.И. К механизму терапевтического действия альфа2-макроглобулина на систему кроветворения в облученном организме // Радиобиология. 1979.- Т.19.-№ 3.- С.425-429.94

40. Симонова Л.И.ДСороп А.Г., ЛукашоваА О.П. Состояние некоторых неспецифических защитных реакций на раннем этапе острой лучевой болезни у крыс после введения альфа2-макроглобулина // В кн.: Эксперим. и клинич. радиология. 1974.- вып. 10.- С. 17-20.

41. Сотникова Л.Г. Белки сыворотки крови при нормальной беременности и поздних токсикозах по данным электрофореза на бумаге // Канд. дисс. -Уфа. 1961.

42. Сотникова Л.Г. Белки сыворотки крови при нормальной и патологической беременности по данным электрофореза на бумаге // Казанский мед. журн. 1959.- № 6.- С.79-81.

43. Стрижова Н.В., Гвоздева Г.А., Зайцева Е.П. Опыт применения иммунологического метода для определения готовности организма женщины к родам // Акуш. и гинек. 1984.- № 7,- С.26-28.

44. Татаринов Ю.С. Прошлое и будущее онкофетальных белков // Лекция к актовому дню института. М. - 1988.- С.23-25.

45. Татаринов Ю.С., Масюкевич В.Н. Иммунологическая идентификация нового бета 1-глобулина в сыворотке крови беременных женщин // Бюлл. экспер. биол. и мед. 1970.- Т.69.- № 6.-С.66-67.

46. Татаринов Ю.С., Масюкевич В.Н. Иммунохимическая характеристика нового бета 1-глобулина в сыворотке крови беременных женщин // Бюлл. экспер. биол. 1970.- № 6.- С.66.

47. Татаринов Ю.С., Масюкевич В.Н., Емельянчик Э.К., Круглов Е.Н., Мес-нянкина Н.В., Никулина Д.М., Парфенова Л.Ф. Сравнительное иммуно-химическое изучение альфа2 и бета 1-глобулинов сыворотки крови беременных женщин // Акуш. и гинек. 1971.- №10.- С.35.

48. Татаринов Ю.С., Масюкевич В.Н., Меснянкина Н.В., Парфенова Л.Ф. Иммунохимическая идентификация нового альфа2-глобулина в сыворотке крови беременных женщин // Акуш. и гинек. 1970.- вып.9.- С.25-27.

49. Татаринов Ю.С., Масюкевич В.Н., Меснянкина Н.В., Парфенова Л.Ф. Иммунохимическая идентификация нового альфа2-глобулина в сыворотке крови беременных женщин // Акуш. и гинек. 1970.- № 9.- С.25-28.

50. Татаринов Ю.С., Масюкевич В.Н., Меснянкина Н.В., Парфенова Л.Ф. Иммунохимическая идентификация нового бета 1-глобулина в сыворотке крови беременных женщин // Бюлл. экспер. биол. 1970.- Т.69.- № 6.-С.66-68.

51. Татаринов Ю.С., Меснянкина Н.В., Никулина Д.М. Иммунохимическая идентификация а2-глобулина "зоны беременности" в сыворотке крови больных пузырным заносом и хорионэпителиомой //Акушерство и гинекология. 1974. - С.5.

52. Татаринов Ю.С., Никулина Д.М., Меснянкина Н.В. Иммунохимическое определение pi-глобулина "зоны беременности" в сыворотке крови больных пузырным заносом и хорионэпителиомой // Бюлл. экспер. био-. логии и медицины. 1974.-С.9.

53. Трубников Г.А., Никулина Д.М., Балашов В.И., Рагозин Ю.Е., Кривоно-сов С.К. Клинико-иммунохимические исследования некоторых острофазовых протеинов при ревматизме // Тер. архив. 1975.- №11.- С.55-56.

54. Федорова М.В., Калашникова Е.П. Плацента и ее роль в беременности // М.: Медицина. 1986.- С.253.

55. Ходорова Е.Л., Веремеенко К.Н., Антонян А.А. Разделение сывороточных ингибиторов трипсина // Укр. биохим. журн. 1964.-36,- № 6.- С.643-653.

56. Ходорова Е.Л., Веремеенко К.Н., Белицер В.А. Исследование антитрип-сина-альфа2-макроглобулина сыворотки крови // Вопр. мед. химии. -1969,- Т. 15.- № 1.- С.10-15.

57. Храмкова Н.И. Клиническая ценность иммунологической реакции на го-надотропин при нормальной и некоторых формах патологической беременности // Канд. дисс. Киев. - 1972.

58. Цапок П.И., Дроздов В.Н. Околоплодные воды в системе "мать-плацента-плод" // Кемерово. 1986.- С. 103.

59. Чаговец Е.М., Хипко С.Е., Паскевич И.Ф. Влияние альфа2-макроглобулина на биосинтез ядерных белков в органах сублетально облученных животных // Радиобиология. 1976.-Т.16.- № 6.- С.903-910.

60. Юнкеров В.И. Основы математико-статистического моделирования и применения вычислительной техники в научных исследованиях. СПб -Изд-во ВМедА. - 2000. - 140с.б) иностранная литература

61. Abilgaard U. The role of alpha2-macroglobulin as an ingibitor of coagulation // In: The physiol. ingibit. of coagul. and fibrinol. Elsevier, biochem. Press. -1979.- P.239-241.

62. Accers J.K. Biochemistry. 1964.- V.3.- P.723.

63. Adham N.F., Song M.K., Rinderknecht H. Binding of zinc to alpha2-macroglobulin and its role in enzume binding activity // Biochim. et biophus. acta. 1977.- 495.- №2.- P.212-219.

64. Adlin R.J., Gander M.J., Soanes W.A. Alternations of alpha2-macroglobulin and the clinical response in patients with prostatic cancer following cryothera-pie //Oncology. 1975.- 32.- №2.-P. 127-144.

65. Afonso I.F., Dc Alvarez R.R., Farnham N.G., Thompson E.,Widerkehr B. The pregnansy zone protein distined from transcortin thyroxin binding protein, ce-ruloplasmin and oxytocinases // Amer. J. Obstet. Gynec. 1964.- V89.- P.204.

66. Afonso J.F., Alvarez R.R., Farnham N.G. New elektrophoretic protein zone in pregnancy // Amer. J. Obsted. Gynec. 1964. - V.89. - P.204.

67. Ahmed A.I., Klapper A. Serumm concentration of placental in Non-Pregnant and pregnant Subjects //Arch. Gynecol. 1985.-V.237. - №1. - P.41-49.

68. Ahmed A.I., Klapper A. Studies on the holf-lifeon schwangerschaftsprotein // Brit. J. Obstet.Gynaecol. 1983. - V.90.-№10. - P.904-907.

69. Arbelaez L., Bergmann U., Tuuttila A., Shanbhag V., Stigbrand T. Interaction of Matrix Metalloproteinases-2 and-9 with Pregnancy Zone Pritein and a2-Macroglobulin // Archives of Biochemistry and Biophysics. 1997. — V.347. -No.l.-P62-68.

70. Arbelaez R.F., Jensen P.E., Shanbhag V.P., Stigbrand T. Probing different con-tromational testes of pregnancy zone protein // Eur. J. Biochem. 1993.-218. -№2. - P.651-657.

71. Barret A.I., Starcey P.M. The interaction of a2-macroglobulin with proteinases // Biochem. J. 1973.-133. - №4.-P.709-724.

72. Barret A.J., Brown M.A., Sayers C.A. The electro- phoreticalli "slow" and "fast" forms of the a2-macroglobulin molecule // Biochem. J. 1979. - 181. -№2. - P.401-418.

73. Barret A.J., Starcey B.M., Mun E.A. The unigue nature of the interaction of a2-macroglobulin with proteinases // In: Bayer-Simp. V. "Proteinase Inhibitors", Berlin. 1974. - P.72-77.

74. Bauer K. Antigenic structure of four human plasma proteins, retinol-binding protein, 9,5S-alphal-glicoprotein,alpha2-pregnancy-assotiated glycopro-tein and histidine-rich alpha2-glycoprotein // Exp. Clin. Immunogenet. 1986. -V.3. - P.230-234.

75. Baur M.P., Bellman O., Tebbe I., Land N. Concentrations of placental proteins in maternal serum throughout normal pregnancy // Arch. Gynecol. 1982. -V.231. - №2.- P.153-158.

76. Bayer H. Die Bedeutung der Serumproteinferanderungen in der normalen und pathologischen Schwangerschaft. 3 Muttelung. Das Serumproteinbild in der 1 Halfte der normalen Schwangerschaft // Z. Geburtch. Gynalc. 1966. - Bd. 165.- S.300.

77. Bayer H. und Kadach D. Vergleichende Serumei- weissuntersuchungen bei Muttern und Neugeborenen. 3 Mitt. Das Verhalten eines Schwangerschaftsab-hangigen Protein bei gestorter Schwangerschaft // Zbl. Gunak. 1970. - Bd.92.- S.1264.

78. Bayer H. Vergleichende Untersuchungen der Serum-Proteine bei Muttern und Neugeborenen. 1 Mitteilung. Papierelectrophorese bei Fruhgeburten, Termino-geburten und Ubertragungen // Zbl. Gynak. 1962. - Bd.31. - S.l 195.

79. Bebo BF Jr, Dveksler GS. Evidence that pregnancy specific glycoproteins regulate T-Cell function and inflammatory autoimmune disease during pregnancy. // Curr. Drug Targets Inflamm. Allergy. 2005 - V. 4. - P. 231-247.

80. Beckam L., Schoulz B. & Stigbrand F. Induction of the "pregnancy zone" protein by oral contraceptives // Acta. Obstet. Gynec. Scand. 1971. - V.50. -P.369.

81. Berne B.H. Alpha2-pregnoglobulin a unique macroglobulin in pregnancy, contraception and cancer // Fed. Proc. 1973. - V.32/3.-P.677.

82. Bersinger N.A., Luke G., Klopper A. Comparison of the serum and urine of pregnant women // Gynecol. Obstet. Invest. 1986. - V.21. - P.l 13-116.

83. Bersinger N.A., Rageth G.C. A comparison between pregnancy-associated al-pha2-glycoprotein, cercino-embryonic antigen, CA-125, and CA 15-3 as tumor markers in breast cancer // Eur. J. Gynaecol-Oncol. 1990. - V.LI. - P. 135144.

84. Blatrix C. Plasma clearanse of human antiproteinase- proteinase cimplexes // J. Israel, R. Aurdan et. al.-In: Bayer-Symp. V "Proteinase Inhibitors". Berlin. -1974.-P.106-108.

85. Blatrix C., Amouch P., Drouet J., Steinbuch M. Study on the plasmatic elimination of the a2-macroglobulin proteinase complexes // Pathol. Biol. 1973. -V.21. - P.l 1-14.

86. Bohn H. Biochemistry of Placental Proteins // Proteins of the placenta: 5th In-tern.Congress of Placental Proteins. Annecy. Basel. - 1985. - P. 1-25.

87. Bohn H. Charakteriserung der schwanger- schaftsassociierten Glycoproteine als acute Phase-Proteine // Arch. Gynak. 1972. - Bd.213. - S.54.

88. Bohn H. Detektion, charakterisation and diagnostic signatificance of human pregnancy-associated glycoproteins // Blut. 1973. - Bd.36. - P.205.

89. Bohn H. Isolierung und Charakterisierung des schwangerschaftspezifischen beta 1 -glykoproteins //Blut. 1972.-Bd.24. - S.292.

90. Bohn H. Nachweis und Charakteristerung fon Schwangerschaftsproteinen in der manschlichen Placenta sowie ihre guantitative immunologische Bestim-mung in Serum schwangeren Frauen // Arch. Gynak. 1971. - Bg.210. - 4. -S.440.

91. Bohn H., Winder W. Isolation and characterization of pregnancy-associated oc2-glycoprotein //Nblutt. 1976. - V.33.- P.377-388.

92. Briese V., Straube W., Glockner E. Serum concentrations of pregnancy-associated a2-glycoprotein in diabetic pregnancy complicated by nonfulminant and fulminant proliferative retinopathy // Zbl. Gynak. 1991. - Bd. 113. - S. 1042-1045.

93. Bundschuh G. Uber die Haufigkeit eines wahrend der Schwangerschaft nachweisboren a2-globulin // Ibl. Gynak. 1967.-Bd.89. - S.348.

94. Carlsson L., Folcersen I., Stigbrand T. Antigenic determinance of pregnency-associated alpha2-glycoprotein and alpha2-macroglobulin by poly- and monoclonal antibodies // Mol. Immunol. 1985. - V.22. - P. 1073-1080.

95. Carlsson-Bosted L., Moestrup S.K., Gliemann J., Sottrup-Jensen L., Stigbrand T. Three different conformational states of pregnancy zone protein identified by monoclonal antibodies // J. Biol. Chem. 1988. May 15. - V.263. - P.6738-6779.

96. Carlsson-Bostedt L., Frohlander R., Eden S., Schoultz B. Effects of oestrogen and human growth hormone on pregnancy-associated plasma proteins in the rat //Acta, endocrinol. 1987.-V.116. - P.229-304.

97. Chard T. Placental protein 5 in severe pre-eclampsia and eclampsia // Brit. J. Obstet. Gynaecol. 1979. - V.86. - №11. - P.888-890.100

98. Chowdhury R.S., Under A., Panayi G.S. The production of pregnancy-associated a-glycoprotein frim human periferal blood mononuclear cells // Clin. Rheumatol. 1987. - V.6. - P.417- 422.

99. Christensen U., Simonsen M., Harrit N., Sottrup-Jensen L. Pregnancy zone protein, a proteinase-binding macroglobulin. Interactions with proteinases and methylamine // Biochemistry. 1989. - Now 28. - V.28. - P.9324-9355.

100. Christensen U., Sottrup-Jensen L., Harrit N. Pregnancy zone protein, a proteinase binding alpha-macroglobulin. Stopped flow kinetic studies of its interaction with chymotrypsin // Biochim. Biophys. Acta. 1991. Jan.8.-1076. -P.91-97.

101. Christensen U., Sottrup-Jensen L., Simonsen M. Kinetic and mechanism of proteinase-binding of pregnancy zone protein // J. Enzym. Inhib. -1992. V.5. - P.269-348.

102. Damber M. G., von Schoultz В., Stigbrand Т., Carlstrom K., Furuhjelm M. Basic levels of the immuno suppressive serum protein P2 in women-influence of age, parity, gonadotrophins and estrogens // Acta Obstet. Gynecol. Scand. -1977.-Vol. 56.-P. 95-96.

103. Devriendt К., Van-Der-Berdhe H., Cassiman J.J., Maeynen P. Primary structure of pregnancy zone protein. Molecular cloning of a full-length PZP cDNA clone by the polymerase chain reaction // Biochim. Biophys. Acta. 1991. Jan.l7.-1088. - P.95-103.

104. Dunn J.T., Sriro R.G. The a2-macroglobulin of human plasma // J. Biol. Chem. 1967. - 242. - №23. - P.5549-5563.

105. Erin L., Kiyatkinab N., Weberb M. Pregnancy zone protein is a carrier and modulator of placental protein-14 in T-cell growth and cytokine production. // Cellular Immunology. 2004 - V. 232, Issues 1-2, P. 144-156.

106. Farr A.G., Nardhe P.K. Immunogistochemistry with enzyme labeled antibodies: a brief review// J. Immunol. Meth. 1981. - 47.-№2. - P. 129-144.

107. Fialova L., Malboran I., Fuchs V. Hladiny SP1 v seru zen v prubebu fysi-ologickeno tehitenstvi es // Gynecol. 1984. - V.49. - №2.-P.87-91.

108. Frenoy J.P., Bourrillon R. Human a2-macroglobulin: time dependent degradation under denaturating conditions // Biochimie. 1980. - 62. - №7,- P.497-507.

109. Frenoy J.P., Bourrillon R. Subunit structure of human a2-macroglobulin with respect to its interaction with trypsin // Biochimie. 1977. - 59.- №4,- P.351-354.

110. Frenoy J.P., Razafimahaleo E., Bourrillon R. Etudes sur la structure de 1 a2-macroglobuline humain // Biochim. Biophys. Acta. 1972. - 257. - №1.-P.l 11-121.

111. Galliano M., Toulza E., Gallinaro He., Jonca N., Yamamoto A. A Novel Protease inhibitor of the a2-macroglobulin family expressed in the human epidermis. // The Journal of Biol. Chemistry. 2006 - V.281 - P.5780-5789

112. Ganrot P. Studies of serum protease inhibitirs withspecial referense to a2-macroglobulin // Acta. univ. lund. 1967. - section 2 - №2. - P. 1-36.

113. Garret P.E., Kurtz S.R. Clinical Utility of Oncofetal proteins and Hormones as Tumor Markers // Med. Clin. N. Amer. 1986. - V.70.-№6. - P. 1295-1297.

114. Gerrie L.M., Armstrong S.S., Home C.H.W. Pregnancy-associated a2-glycoprotein development of a sensitive enzyme-linked immunoassay and comparison • of serum concentrations in early gestation // Arch. Gynecol. -1986. V.237. - №4. - P.221-228.

115. Gerrie L.M., Luke G., Klopper A., Bersinger N.A. Serum concentrations of pregnancy specific and pregnancy-associated proteins in early gestation // Arch. Gynekol. 1986. - V.237. - №4.-P.221-228.

116. Gettins P:, Sottrup-Jensen L. NMR and ESP studoes on human pregnancy zone protein. Comparoson with human alpha2-macroglobulin // J. Biol. Chem. 1990. May 5. - Y265. - P.7268-299.

117. Ggarrattini E., Margilis I., Heimer E., Felix A., Udenfirend S. Human placental alboline phosphatase in liver and interstine // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. -1985. V.82. - №18. - P.6080-6084.

118. Gliemann I., Moestrup S., Jensen P.H., Grudsinskas G.I. Evidense vor binding of human pregnancy-zone protein-proteinase complex to 2-2 m. receptors // Biochim. Biophys. Acta. 1986. - V.883.-P.400-406.

119. Grabar P., Williams C.P. Methode permettant tetude cunjuguse des proprietes electriphoretigues et immunichimigues d un melange de proteines. Application au serum sanguin//Biochim. Biophus. Acta. 1953. - V. 10. - P. 193.

120. Hall P.K., Roberts R.C. Physical and chemical properities of human plasma a2-macroglobulin //Biochem. J. 1978. - 173. - №l.-P.27-38.

121. Hanna M.G., Nettesheim P., Fisher W.D., Peters L.C. Serum a2-globulin fraction:survival and reciveri effect in irradiates mice // Science. 1967. -V.157. - №3793-3796.- P.1458-1461.

122. Harpel P.C. Human plasma a2-macroglobulin. An inhibitir of plasma kallik-rein// J. Exp. Med. 1970.-132. - P.329-351.

123. Harpel P.C. Studies on human plasmaa2-macroglobulin-enzyme interaction // J. Exp. Med. 1973.-138. - №3. - P.508-521.

124. Harpel P.S. Human a2-macroglobulin // Ed. L. Lorand. New York. - Acad. Press. - 1975.-45.-P.639-653.

125. Harrison R.F., Biswas S. Maternal plasma human placental lactogen, a-fetoprotein, prolactin and growith hormone in early pregnancy // Int. J. Obstet. Gyanecol. 1980. - V. 17.-№5. - P.474-476.

126. Havel R. J. Chylomicron remnants: hepatic receptors and metabolism // Curr. Opin. Lipidol. 1995. - Vol. 6. P. 312-316.

127. Heimsurger N. Biichemistry of proteinase inhibitors from human plasma // Bayer-Symp.-V."Proteinase inhibitors". Berlin. - 1974. - P. 14-22.

128. Hendry G.B. Todd-Sonford-Davidnohn Clinical Diagnosis and Management by Laboratory Methods, 16 th ed. // Philadelphia. W.B. Saunders Co. 1979.

129. Hill J., Melling G., Johnson P. Immunohistochemical studies of human uteroplacental tissues from first-trimester spontaneous abortion. // Am. J. Obstet. Gynecol. 1995 - V. 173 - P. 90-96.

130. Hirschfeld I., Soderberg V. Immuno-electrophoretic demonstration of precipitating components in sera from pregnant women // Nature. I960.- V.187.-P.333-335.

131. Hofmann R., Friemel H., Behm E. Analytic schwangerschaftstypischer Anti-gene // Arch. Gynak. 1970. - Bd.208.-№3. - S.255.

132. Hofmann R., Friemel H., Behm E. Immunochemische Untersuchungen zum problem der "pregnancy zone". 1. Antischwangeren-Immunoserum // Arch. Gynak. 1969. -Bd.208.-№2. - S.178-180.

133. Hofmann R., Friemel H., Behm E. Immunochemische Untersuchungen zum problem der "pregnancy zone". 2. Antiplazenta-Immunoserum // Arch. Gynak. 1969,- Bd.208.- №2.- S.187-188.

134. Hofmann R., Kyank W., Straube W., Klausch В. Появление, характеристика и идентификация белковых фракций зоны беременности // Тезисы международного конгресса акушеров-гинекологов. М. 1973.

135. Home С. H. W., Briggs J. O., Howie P. W., Kennedy A. C. Serum a-macroglobulins in renal disease and preeclampsia // J. Clin Path. 1972. - Vol. 25.-P. 590-593.

136. Home C.H.W., Armstrong S.S., Thomson A.W.,Thomson W.D. Detection of pregnancy-associated a2-macroglobulin, an immunosupressive agent, in IgA producing plasma cells and bodi secretions // Clin.Exp. Immunol. 1983. -V.51. - P.634-638.

137. Horne C.H.W., Gerrie L., Sormstrong S. Defficiency of serum "pregnancy-assotiated" the a2-glycoprotein: assotiation with disease // J. Clin. Pathol. -1986. V.39. -P.195-198.

138. Home C.H.W., Gerrie L.M., Armstrong S.S., Brunt P.W., Nowat N., Sinclair T.S. Deficiency of serum "pregnancy-associated" a2-glucoprotein association with desease // J. Clin. Pathol. 1986.-V.39. - №2. - P.195-198.

139. Horne C.H.W., Nisbet A.D. Pregnancy-proteins // Invest. Cell. Pathol. 1979.- V.2.-№3.-P.217-231.

140. Jacobsen L., Madsen P., Moestrup S. Molecular Characterisation of a Novel Human Hybrid-type Receptor That Binds the a2-Macroglobulin Receptor-associated Protein // The Journal of Biological chemistry. 1996. - V.271. -49.-P.31379-31383.

141. James K. a2-macroglobulin and its possible importanse in immune systems // Trends Byochem. Sci. 1980. - V.5. - №2. - P.43-47.

142. Jensen P., Bostedt L., Stigbrand T. Binding of tranrporming growth factor (3 to pregnancy zone protein // Eur. J. Biochem. (FEBS) 1994. -V.221. - P.687-693.

143. Jensen P., Stigbrand T. Differences in the proteinase inhibition mechanism of human alpha2-macroglobulin and pregnancy zone protein // Eur. J. Biochem. (FEBS). 1992.-V.210.-P. 1071-1077.

144. Jensen P.E., Stigbrand T. Differences in the proteinase inhibition mechanism of human a2-macroglobulin and pregnancy zone protein // Eur. J. Biochem. -1992. Dec 15. 210. - P.1071-1078.

145. Klausch В., Kyank H., Hofmann R., Straube W. Взаимосвязь между белком "зоны беременности" и фетоплацентарным комплексом // Тезисы межд. конгр. ак-гинекологов. М. 1973.-С.276.

146. Kuczynsky I.W. Badania immunochemiscene pod biallcien ciazowym // Prase Komis. Med. Doswiadcz. Rosn. Towazzi. Przyiac. Naur. 1969. - 39. - P. 165.

147. Kurecki Т., Kress L.F., Laskowski M.S. Purification of human plasma a2-macroglobulin and a 1-proteinase inhibitor using zinc chelate chromatography // Anal.Biochem. 1979. - V.99. - №2.-P.415-420.

148. Kvasnicka J., Bendl J., Zivny J., Umlaufova A., Maslowska B. Changes in hemostasis and fibrinolysis in gestational diabetes // Cas. Lek. Cesk. 1996. -Vol. 135.-P. 106-110.

149. Lagerstrom M., Bremme K., Eneroth P. Maternal Serum Levels of Estriol, Prolactin, Human Placental Lactogen and Chorionic Gonadotropin Related to Fetal Sex in Normal and Abnormal Pregnancies // Gynecol. Obstet. Invest. -1990. V.30.- №4.- P.198-203.

150. Lauer D, Miiller R, Cott C, Otto A, Naumann M., Birkenmeier G. Modulation of growth factor binding properties of alpha2-macroglobulin by enzyme therapy. // Cancer Chemother Pharmacol. 2001 - V. 47 - Suppl. 1. - P. 4-9.

151. Lewis D.A. Endogenous anti-inflommatory proteins // Pharmacol. - 1977.-V.26.- P.693-698.

152. Li H. H. Estimation of proteins in blood with pregnancy induced hypertension // Chung Hua Fu Chan Ко Tsa Chin. 1993. - Vol. 28, N. 6. - P. 378-380.

153. Lin T.M., Halbert S.P., ICiefer D., Spellacy W.N. Threer pregnancy-associated human plasma proteins // Int. Arch. Allergy. - 1974.- V.47.- P.35-37.

154. Lin T.M., Halbert S.P., Spellacy W.N., Gall S. Characte- risation of four human pregnancy-associated plasma proteins // Amer. J. Obstet. Gynec. -1974,- V.l 18. - №2,- P.223-227.

155. Longsworth L.G., Curtis R.M., Rembrike R.H. The electrophoretic analysis of maternal and fetal plasmas and sera // J. Clin. Invest. - 1945.- V.24.- P.46.

156. Luke G., Klopper A., Bersingen N. Comparison of the concentration of schwangerschaftsprotein 1 in the serum and urine of pregnant cancer // Int. J. Cancer. - 1983,- V.32.- №2.- P.205-209.

157. Lupu F., I-Ieim D., Bachmann F., Kruithof E. K. Expression of LDL receptor-related protein/a2-macroglobulin receptor in human normal and atherosclerosis arteries // Arteriosclerosis and Thrombosis. 1994. - Vol. 14, N 9. - P. 14381444.

158. Mac Connel D.I. Inhibitirs of kallikrein in human plasma // J. Clin. Invest. -1972.- V.51.- №7.- P. 1611-1623.

159. Mac Gilliray Y., Money I.E. A study of the serum protein Changes in pregnancy and toxaemia, using paper strip electrophoresis // J. Obstet. Gynec. Brit. 1957.-V.64.-P.361.

160. Mac Laren J.A., Reid D.E., Konugres A.A., Allen F.FI. Pa 1A new ingerited a2-globulin of human serum// Vox Sang. 1966.-V.I 1. - P.553.

161. Mac Laren S.A., Thornes R.D., Roby C.C., Reid D.E. An immunologic characteristic of the serum of normal pregnansy // Amer. J. Obstet. Gynec. 1959.-V.18.- P.939-940.

162. Marcolis I., Kenrick K.G. "Pregnancy protein" in poliacrylamide gradient gel elektriphoresis // Austr. J. Exp. Biol. Med. Sci. 1969. - V.47. - P.637.

163. Mehl I.W., O'Connel W.: De Groot J. Macroglobulin from human plasma which forms an enzymatically active compound with trypsin // Science. 1964.- V.145.-№3634.-P.821-826.

164. Mullertz S. Role of a2-macroglobulin as an inhibitor of fibronolysis // Physiol. Inhibit. Blood Coagul. Proc. Round-Table Conf. Amsterdam. - 1979.- P.243-245.

165. Munck Petersen C. a2-Macroglobulin and pregnancy zone protein. Serum levels, a2-macroglobulin receptors, cellular synthesis and aspects of function in relation to immunology // Danish Med. Bull. 1993. - Vol. 40, N 4. - P. 409-446.

166. Munck-Petersen C., Christiansen B.S., Heickendorff L., Ingerslev I. Syntesis and secretion of a2-macroglobulin by human hepatocytes in culture // Eur. J. Clin. Invest. 1988. - V.18.-P.543-551.

167. Muramatsu S. Shortening of the peroid of primary immuneresponse by the prior injection of Freunde's adjuvants // Nature. 1964. - V.201. - №4924. -P.l 141.

168. Nachman R., Harpel P.S. Platelet a2-macroglobulin and a 1-antitrypsin // J. Biol. Chem. 1975. - 251. - №15. - P.4514-4520.

169. Pan G.T., Munkherrie A.K., Horowitcz P.M., Elbein A.D. The interaction of a2-macroglobulin with trypsin releases a soluble glycopeptide // Biochem and Biophys. Res. Communs. 1980. - V.92.-№2. - P.703-709.

170. Petersen S.M. a2-macroglobulin and pregnancy zone protein. Serum levels, a2-macroglobulin receptors, cellular syntesis and aspects of function in relation to immunology //Dan. Med. Bull. 1993. - V.40. - P.409-446.

171. Philip A., Bostedt L., Stigbrand Т., O'Connor-McCourt M.D. Binding of transforming growth factor-beta to pregnancy zone protein // Eur. J. Biochem. -1994. V.221. - P.687-693.

172. Pochon F., Favandon V., Tourbez-Perrin M. Localisation of the two protease binding sites in human a2-macroglobulin // J. Biol. Chem. 198Г: - V.256. -№2.- P.547-550.

173. Poller W., Willnow Т. E., Hilpert J., Herz J. Dufferential recognition of al-antitrypsin-elastase and al-antichymotrypsin-cathepsin G complexes by the low density lipoprotein receptor-related protein // J. Biol. Chem. 1985. - Vol. 270.-P. 2841-2845.

174. Riely G., Rachmilewitz J., Koo P. a2-Macroglobulin modulates the im-munoregulatory function of the lipocalin placental protein 14. // Biochem. J. -2000 V.351 - V.503-508

175. Roberts R.C., Riesen W.A., Hall R.K. Studies on the guaternary structure of human serum a2-macroglobulin // In: Bayer. Symp. V "Proteinase Inhibitors", Berlin. 1974.-P.63-71.

176. Robinson I.C., London W.T., Bierce I.E. Observations on the origin of pregnancy-associated plasma proteins // Amer. J. Obstet. Gynec. 1966. - V.96. -P.226.

177. Rodriquez C.A., Castillo H.P.C., Moza L.R.J., Nunez C.J. a2-macroglobulin en la diabetes mellitus // Rev. Clin. Esp. 1979.-V.155. - №1. - P.23-25.

178. Rosen S.W., Colbert I., Lei N., Bohn H., Popadopulos N., Osborne I.C. Oligimetrization of pregnancy specific (31-glycoprotein at physiologic pH and ionic strength / Clin. Chim. Acta. 1986. - V.157.-№1. - P.65-71.

179. Roszkowski I., Iwanska I., Myszkowski L. Bialka osocza krwi trzecim okre-sie produ // Ginec. Pol. I960.- V.31.- P.367-369.

180. Salvesen G.S., Barret A.J. Covalent binding of proteinases in thieir reaction with a2-macroglobulin // Biochem. J. 1980.- V. 187.- №3p.695-701.

181. Sapin R., Demangeat C., Meyer P., Chambron I., Eberst В., Gandar R. La (31-glycoproteine son interet dans les surveillances de menace davortment // Gynecol. Obstet. 1983.- V.78.- №1.- P.35-40.

182. Sargent, I., Germain S., Sacks G., Kumar S. Trophoblast deportation and the maternal inflammatory response in pre-eclampsia. // J. Reprod. Immunol. -2003 -V.59-P.153-160.

183. Schaefer U., Brucker В., Elbers A., Neugebauer E. The capacity of al-pha2-macroglobulin to inhibit an exogenous protease is significantly increased in critically ill and septic patients // Shock. 2004 - V. 22 - №1 - P. 16-22.

184. Schonenberger M., Schmidtberger R., Schultze H.E. Ubed das a2-macroglobulin // Z. Naturforsch. B. 1958. - V.13. - P.761-772.

185. Schoultz В., Stigbrand T. Characterization of the "pregnancy zone" protein in relation to other a2-globulin of pregnancy // Biochem. Biophys. Acta. 1974. -V.359. - №2. - P.303-304.

186. Schoultz В., Stigbrand T. Purification of the "pregnancy zone" protein // Acta. Obstet. Gynecol., Scand. 1973. - V.52. - №l.-P.51-57.

187. Schoultz В., Stigbrand T. Purification of the "pregnancy zone" protein // Acta. Obstet. Gynec. Scand. 1973. - V.52. - P.51-54.

188. Shanbhag V., Stigbrand Т., Jensen P. The contact zones in human the a2-Macroglobulin // Eur. J. Biochem. (FEBS). 1997. - V.244. - P. 694-699.

189. Smith N.M., Home C.N., Carpenter F.H., Stigbrand Т., Carlsson-Bosted L. Immunohistochemical definition of antigenic determinants of pregnancyassociated a2-glycoprotein using monoclonal antibodies // J. Pathol. 1988. -V.154. - P.329-334.

190. Smithies O.U. Zone electrophoresis in starck gels and its applications to studies of serum proteins // Adv. Prot. Press. N. I. Chem. Acad. 1959. - V.14. -P.65-66.

191. Song M.K., Adham N.F., Rindercknecht H. Large scale purification of a2-macroglobulin from human plasma // Biochem. Med. 1975. - V.14. - №2.-P.162-169.

192. Sottrup-Jensen L., Lonblad P.P., Stepanik T.M. Primary structure of the "bait" region for proteinases in a2-macroglobulin // FEBS Lett. 1981.-V.127.- №2.- P.167-173.

193. Sottrup-Jensen L., Stepanik T.M., Jones C.M. The physiological inhibitors of blood coagulation and fibrinolysis // Collen D. et al. eds. Amsterdam.-N.Y. Elsevier., North-Holland. 1979. - P.255-271.

194. Sottrup-Jensen L., Stepanik T.M., Lombland P. Primary structure of a2-macroglobulin // Thromb. and Haemost. 1981,- V.46.-№ 1. - P.87-92.

195. Spenser K., Aitken D.A., Crossley J.A., Mc Caw G., Berry E., Anderson R., Connor J.M., Macri J.N. First trimester biochemical screening for trisomy 21 // Ann. Clin. Biochem. 1994. - V.31. - P.447-454.

196. Starkey P. Binding and inhibition of cathepsin Bi by a2-macroglobulin // Biochem. Soc. Trans. 1973. - V.l. - №2. - P.381-382.

197. Steinbuch M. Regulation of proteinases activity // Coll. Ges. Biol. Chem. -1979. V.30. -P.207-222.

198. Stimson W. H. Quantitiation of a new serum a-macroglobulin in pregnant, preeclampic and contraceptive steroid treated subjects // IRCS Med. Sci. -1973.-Vol. 73,N3.-P. 171-173

199. Straube W. Qwantitative behavier of pregnancy spesific of beta glycoproteins in the antifluid in normal and pathologic pregnancyes // Lentrabl. Gynacol. -1983. V.105. - №5.- P.270-278.

200. Straube W., Hofmann R., Klausch В., Broch I. Immunochemischer Nachweis schwangerschaftstymischer und retroplazentarserum // Wiss. Ischr. Friedrich-Schiller-Unn. Iena, Math-Mat. R. 1972.- Bd.21.- №4.- S.787.

201. Straube W., Kyank H., Hofmann R., Klausch В. Выявление и свойства белков, типичных для беременности, в сыворотке материнской, ретрол-лацентарной и пуповинной крови // Тезисы Межд. конгр. ак-гипекологов., М. 1974.-С.245.

202. Straube W., Rohde W., Hofmann R., Klausch B. Untersuchungen zur frage der Identitat schwangerschaftstypischer proteine mit HCG und LH // Ibl. Gy-nak. 1973.-Bd.95.-S.552.

203. Sutscliffe R.G., Kukulska-Langland B.M., Cogging J.R. Studies of human pregnancy-associated plasma protein A. Purification by affinity chromatography and structural comparisons with a2-macroglobulin // Biochem. J. 1980.-V.191.- №3.- P.799-809.

204. Tayade C, Black G., Fang Y, Croy BA. Differential gene expression in endometrium, endometrial lymphocytes, and trophoblasts during successfuland abortive embryo implantation. // The Journal of Immunology. 2006 -V.176-P. 148-156.

205. Tayade C, Esadeg S, Fang Y, Croy BA. Functions of alpha 2 macroglobulins in pregnancy // Molecular and Cellular Endocrinology. 2005 - V. 245, - P. 60-66.

206. Than G.N., Szaba I.F., Karg N.I., Czaba D.G., Novak P.F. Pregnancy-associated a2-glycoprotein // Invest. Cell. Pathol. 1980.-№3. - P.295-309.

207. Thompson S.M. Whatman advanced ion exchange celluloses // Laboratory manual, W.R. Ralston. 1972.

208. Thomson A.W., Home C.H.W. Biological and clinical significanse of pregnancy-associated a2-glycoprotein // Invest. Cell. Kathol. 1980. - №3. - P.295-309.

209. Tietz N.W., Blackburn R.H. Reference values and General Information // Lexing-ton, Ky., Clinical Laboratories, A.B. Chandler Medical center, U., of Kentucky. 1981.

210. Toki N., Iishihara H., Camura T. Prevention of plasmin autodigestion by human plasma cc2~macroglobulin // Scand. J. Haemotol. 1977. - V.19.- №3.-P.281-286.

211. Tunstall A.M., James K. Preliminary studies on the synthesis a2-macroglobulin by human lymphocytes in vitro // Clin. Exp. Immunol. 1974. -V.17.- №4.- P.679-683.

212. Wagner V., Wagnerowa M. Significance of immuno- reactive oc2-macroglobulin in health and disease // Cas. Lec. Ces. 1977.- V.116.- №19.-P.580-583.

213. Weremeenko K.N., Belizer W. Protaminspaltung durch Trypsin in gegenwart eines Serum-Inhibitirs und bestimmung des Trypsin im Blut bei parenteraler Applikation//Acta. Biol. Med. Ger. 1963.- Bd.l 1,- №4,- S.451-462.

214. Weston P.D., Avrameas S. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1971. -V.45.- P. 1574.

215. Wilken H. Die sogenannte "pregnancy zone" ein neuer serumfaktor bei Schwangeren//Arch. Gynak. 1963.- Bd.199.- S.243.

216. Wilken H., Schwebke R. Langsschnitt-Untersuchungen der Serum-Proteine in der normalen Schwangerschaft // Ibl. Gynak. 1968.- Bd.90.- S.757.

217. Zangemeister R W. Untersuchungen uber die Blutbeschaffenheit und die Hornsekretion bei Eklampsia // Z. Geburtsch. 1903. - Bd.50.- S.385.