Морфофункциональные особенности децидуальной ткани при неразвивающейся беременности у женщин, включенных в программу ЭКО

Попов, Григорий Дмитриевич

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Морфофункциональные особенности децидуальной ткани при неразвивающейся беременности у женщин, включенных в программу ЭКО
ВАК РФ 03.00.25, Гистология, цитология, клеточная биология

Автореферат диссертации по теме "Морфофункциональные особенности децидуальной ткани при неразвивающейся беременности у женщин, включенных в программу ЭКО"

На правах рукописи

Попов Григорий Дмитриевич

МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ОСОБЕННОСТИ ДЕЦИДУАЛЬНОЙ ТКАНИ ПРИ НЕРАЗВИВАЮЩЕЙСЯ БЕРЕМЕННОСТИ У ЖЕНЩИН, ВКЛЮЧЕННЫХ В ПРОГРАММУ ЭКО

Специальности 03.00.25 - гистология, цитология, клеточная биология 14.00.01 - акушерство и гинекология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени

кандидата медицинских наук

Москва - 200

Работа выполнена в Клинике планирования семьи Московской Медицинской Академии им. ИМ.Сеченова

Научные руководители:

Член-корреспондент РАМН,

Доктор медицинских наук, профессор СЛ. Кузнецов Доктор медицинских наук, профессор Т.А. Старостина

Официальные оппоненты:

Доктор медицинских наук, профессор Т.Г. Боровая Доктор медицинских наук, профессор И.М. Ордиянц

Ведущее учреждение:

Московский медико-стоматологический университет.

Защита состоится «_»_2004 г. в_часов

на заседании Диссертационного Совета Д 212.203.08 в Российском университете дружбы народов по адресу: 117198, Москва, ул. Миклухо-Маклая, д.8.

С диссертацией можно ознакомиться в Научной библиотеке Российского университета дружбы народов по адресу: 117198, Москва, ул. Миклухо-Маклая, д.6.

Автореферат разослан «_»_2004 г.

Ученый секретарь Диссертационного Совета, кандидат биологических наук

О.Б. Савровя

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Одной из форм невынашивания беременности является замершая, или неразвивающаяся, беременность (НБ), при которой погибший эмбрион задерживается в полости матки, что связано с отсутствием ее сократительной деятельности. У 68,6 % женщин невынашивание по типу НБ наблюдается в первом триместре беременности, периоде, в котором происходят закладка органов плода и его плацентация, что обусловливает необходимость его детального изучения.

Из-за неблагоприятной демографической ситуации в нашей стране проблемы диагностики и лечения неразвивающейся беременности приобретают не только медицинскую, но и социальную значимость (Здановский, Аншина, 1994; Леонов, 1994; Кузьмичев и др., 2001; Кулаков, 2001). Частота этой патологии остается стабильной и достаточно высокой: от 2% в популяции до 15-55% в различных группах больных (Садов, 1998; Мещерякова, 2000; Сидельникова, 1986; Корсак, 1999).

До настоящего времени в научной литературе крайне мало публикаций о морфологических особенностях децидуальной ткани матки при неразвивающейся беременности. Известны только единичные работы, посвященные изучению неразвивающейся беременности у женщин после проведения экстракорпорального оплодотворения (ЭКО), хотя течение беременности, наступившей после ЭКО, значительно чаще, чем в популяции, сопровождается серьезными осложнениями, ведущими к существенному ухудшению конечных результатов лечения. Частота НБ при ЭКО достигает 12,4%, что намного превышает соответствующие популяционные показатели (Аржанова и др., 1999; Колчин, 1997; Корсак и др., 1997; Корсак, 1999; Международный регистр, 1998; BuИetti et в1., 1996).

-национальная!

БИБЛИОТЕКА I

и иммунологических исследований, в то время как особенности морфологии репродуктивной системы при применении МВР остаются невыясненными.

Эндометрий матки человека представляет собой сложную многокомпонентную тканевую систему, состоящую из покровного, железистого эпителия, стромы, образованной соединительной тканью, кровеносных сосудов и нервных окончаний. Строма гравидарного эндометрия мало изучена по сравнению с эпителием, хотя ее клетки играют важную роль в определении реакции эндометрия на различные воздействия во время беременности.

Достоверным признаком неразвивающейся беременности являются регрессивные изменения децидуальной оболочки. Представляется необходимой разработка гистологических критериев оценки децидуальной оболочки при неразвивающейся беременности после ЭКО, а также изучение различных видов клеток и их роли в процессе имплантации и эмбриогенеза. Это позволит более целенаправленно применять гормональную и иммунную коррекцию беременности в клинической практике.

Значительный теоретический и практический интерес представляет изучение биологически активных белков, ассоциированных с беременностью (гравидарных белков) и обладающих свойствами биологически активных веществ (Побединский и др.,1983; Посисеева и др.,1997; Винницкий, 1998; Болтовская, 2001; Петрунин и др., 1976, 1982, 1983). Особенно важным является то, что гравидарные белки являются одновременно эмбриоспецифическими антигенами, позволяющими объективно оценить изменения иммунного статуса при беременности, и определение их уровня является одним из достоверных методов, характеризующих последующую функцию плаценты и протекание беременности (Салов. 1998\ Синтез

большинства гравидарных белков (ТБГ, ПАМГ, АФП) максимален во II - III триместре беременности, в отличие от АМГФ, наивысший уровень которого достигается в I триместре. В связи с этим АМГФ можно рассматривать как наиболее ранний маркер функционального состояния эндометрия в период начала беременности. Эту задачу облегчает использование иммуногистохимических методов с применением антител - маркеров различных видов клеток.

Цель и задачи исследования. Целью исследования явилось изучение морфофункциональных особенностей децидуальной оболочки и динамики клеточного состава при неразвивающейся беременности в первом триместре у женщин с нормально развивающейся беременностью, а также пациенток с неразвивающейся беременностью, как не включенных в программу ЭКО, так и женщин после экстракорпорального оплодотворения.

Для достижения вышеуказанной цели в настоящей работе были определены следующие задачи:

1. Исследовать особенности морфологии гравидарного эндометрия в I триместре беременности у женщин с нормально протекающей и неразвивающейся беременностью, включенных и не включенных в программу ЭКО.

2. Оценить общую синтетическую активность клеток гравидарного эндометрия, анализируя концентрацию РНК в цитоплазме клеток эндометрия женщин с нормально развивающейся и неразвивающейся беременностью.

3. Изучить локализацию и динамику АМГФ-положительных клеток в гравидарном эндометрии при физиологической и неразвивающейся беременности.

4. Определить локализацию и исследовать динамику NK-клеток (CD56+ клеток) в децидуальной ткани женщин с развивающейся и неразвивающейся беременностью.

5. Провести анализ взаимосвязей исследуемых характеристик и их зависимость от гормонального статуса и возраста женщин.

6. Провести корреляционный анализ исследуемых морфологических критериев.

Научная новизна. Впервые изучена динамика синтетической активности клеточных элементов гравидарного эндометрия. Выявлена локализация и дана количественная оценка АМГФ-синтезирующих клеток и естественных киллеров при неразвивающейся беременности у пациенток ЭКО. Получены новые сведения о нарушении межклеточных взаимодействий при неразвивающейся беременности после естественного зачатия и неразвивающейся беременности, наступившей после ЭКО.

Научно-практическая значимость. Полученные сведения о морфологии децидуальной оболочки при неразвивающейся беременности у женщин, включенных в программу ЭКО, могут служить косвенным критерием оценки адекватности гормонотерапии при МВР.

Помимо чисто научного и практического интереса, обусловленного перспективой возможной оптимизации проведения лечения бесплодия методом ЭКО, эту информацию, вероятно, будет целесообразно использовать для разработки дополнительных критериев исхода проводимого лечения.

Результаты исследования динамики клеток в децидуальной ткани и их синтетической активности могут послужить основой для продолжения исследований морфофункциональных особенностей гравидарного эндометрия с целью разработки критериев ранней диагностики неразвивающейся беременности.

Апробация работы. Настоящее исследование проводилось в соответствии с планами научно-исследовательских работ кафедры гистологии ММА им. И.М.Сеченова и Клиники Планирования семьи кафедры акушерства и гинекологии ММА им. И.М.Сеченова.

Материалы диссертации доложены и обсуждены на семинаре «Лечение бесплодия: нерешенные проблемы» (Саратов, сентябрь 2001 года). На Международной научной конференции «Экология и здоровье человека в XXI веке» (Ульяновск, октябрь 2001 года) и семинаре «Проблемы имплантации»

фирмы «Органон» (Москва, 25 апреля 2002 года). На семинаре «Современные подходы к лечению бесплодия» (Екатеринбург, 3-6 сентября 2002 года).

Публикации. По теме диссертационной работы опубликовано 7 статей.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 113 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания методов исследования, результатов собственных исследований и их обсуждения, заключения, выводов и списка использованной литературы.

Работа иллюстрирована 17 таблицами и 31 рисунком. Список использованной литературы содержит 76 отечественных и 183 иностранных источника.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МАТЕРИАЛОВ И МЕТОДОВ ИССЛЕДОВАНИЯ

Клинический материал. Группу женщин с ЭКО составляли пациентки с первичным и вторичным бесплодием. Проводимая методика ЭКО включала: стимуляцию суперовуляции, аспирацию преовуляторных фолликулов, получение спермы и ее подготовка к инсеминации in vitro, культивирование яйцеклеток и эмбрионов, перенос эмбрионов в полость матки, поддержку лютеиновой фазы лечебного менструального цикла, диагностику беременности, ее ведение в первом триместре.

Во всех случаях стимуляция суперовуляции проводилась с использованием аналогов гонадолиберина. «Короткий» протокол проводился со 2-3 го дня менструального цикла, одновременно вводились препараты аналога гонадолиберина для ежедневного применения-- Декапептил-дейли 0.1 мг. (Ферринг, Германия) и препараты ФСГ. При проведении стимуляции, по так называемому, «длинному» протоколу Декапептил-депо 3,75 мг. (Ферринг, Германия) вводился на 20-21 день менструального цикла, через 14-16 дней после введения депо, контролировали уровень эстрадиола в крови. При снижении ниже188 пМоль/л (50мкг/мл), начинали введение человеческого

менопаузального гонадотропина Пергонал и Метродин (Сероно, Швейцария), или рекомбинантных препаратов ФСГ - Пурегон (Органон, Голландия) и Гонал-Ф (Сероно, Швейцария). Доза препаратов подбиралась индивидуально. Стимуляция проводилась 10-12 дней, рост фолликулов контролировался по данным ультразвукового исследования. При достижении лидирующего фолликула диаметра 20 мм назначалась овуляторная доза хорионического гонадотропина (ХГ) Профази (Сероно, Швейцария) 10000 МБ, и через 36 часов проводилась трансвагинальная пункция фолликулов. ЭКО проводилось по стандартной методике. Перенос эмбрионов в полость матки производился через 48 часов культивирования, катетером Gynetics (Бельгия), T.D.T. Labaratoire С.С.D.(Франция). Поддержка лютеиновой фазы проводилась введением ХГ Прегнил (Органон, Голландия) 1500 ME - одна инъекция в 3 дня и прогестероном - Утрожестан (Базен, Франция) в дозе 600-800мг в сутки. Через 21 день после переноса эмбрионов проводилось контрольное УЗИ для уточнения локализации плодного яйца, и определялся уровень ХГ в крови.

Наступившие маточные беременности вели в соответствии с общепринятыми принципами современного акушерства.

Для постановки диагноза неразвивающейся беременности проводилось УЗИ-исследование, регистрировалось отсутствие сердцебиения плода, и соответствие срока беременности и размера плода.

Методы морфологического исследования. Были изучены соскобы из полости матки, полученные у 82 женщин в возрасте от 16 до 42 лет, включенных в исследование.

Контрольную группу (нормальные децидуальные ткани) составили 34 практически здоровых женщины в возрасте от 16 до 41 года с искусственно прерванной беременностью в Клинике акушерства и гинекологии ММА в апреле-июле 2001 года на сроках 4 - 11,5 недель. В группу женщин с неразвивающейся беременностью было включено 24 пациентки в возрасте от 20 до 42 лет, соскобы были получены из полости матки в сроки 4 - 8,5 недель. Основную группу женщин с неразвивающейся беременностью, включенных в

программу ЭКО, составили 24 пациентки возрастом от 34 до 41 года, соскобы были получены на сроках 4,5 - 8,0 недель.

Гестационный возраст был определен по данным последнего менструального цикла, по дате взятия ооцитов (ЭКО). Все женщины были обследованы в Клинике планирования семьи Московской' медицинской академии им. И.М.Сеченова.

Материал фиксировали в 10% нейтральном формалине на фосфатно-солевом буфере, проводили через спирты возрастающей плотности, заливали в парафин, изготавливали срезы толщиной 7-10 мкм и окрашивали их гематоксилин-эозином и азурП-эозином.

Для исследования клеточного состава эндометрия подсчитывали количество клеток в 20 полях зрения, разделенных на следующие классы: 1 -децидуальные клетки (ДЕЦ), 2 - эпителиальные клетки желез матки (ЖЕЛ), 3 -большие гранулярные лимфоциты (БГЛ), или лимфоциты CD56+ (естественные киллеры), 4 - прочие клетки. Определяли процент содержания каждого класса клеток от общего количества всех клеток эндометрия. Морфометрические подсчеты производили на изображениях, введенных в компьютер, с помощью программы Scion Image 3.2.

Для оценки морфофункционального состояния клеток эндометрия использовали ряд количественных параметров.

Для изучения синтетической активности децидуальных и железистых клеток проводили гистохимическое определение концентрации РНК на соскобах эндометрия, окрашенных галлоцианином, с последующей цитофотометрией препаратов.

Для иммуногистохимического исследования материал заливали в среду для замораживания Tissue-Tek (Miles Inc., USA) и готовили криостатные срезы толщиной 5 мкм, которые затем фиксировали 4% параформальдегидом (10 мин) с дофиксацией метанолом (10 мин). Визуализацию АМГФ проводили методом непрямого иммунопероксидазного окрашивания (Поллак, Ван Норден, 1997) с помощью оригинальных моноклональных антител, полученных в лаборатории

клеточной иммунопатологии и биотехнологии НИИ Морфологии Человека РАМН (Болтовская и др., 1997) и любезно предоставленных д.б.н. М.Н.Болтовской. В качестве хромогена использовали 3,3-диаминобензидин тетрагидрохлорид (Sigma, USA).

Для визуализации естественных киллеров использовали моноклональные антитела к CD56 (ООО «Сорбент», Москва). Блокирование эндогенной пероксидазы проводили в 3% растворе перекиси водорода в метиловом спирте в течение 10 мин. После промывания в PBS на срезы наносили поликлональные антитела, меченные пероксидазой хрена, которую проявляли диаминобензидином под контролем микроскопа с последующим заключением срезов в канадский бальзам.

Подсчет клеток с хорошо выраженной положительной реакцией на АМГФ и антиген CD56 проводили в процентах от общего количество каждого вида клеток.

Статистическая обработка. Результаты подвергали статистической обработке с помощью программ Excel 2000 и Sigma Plot 2.0. С помощью теста Колмогорова-Смирнова определяли нормальность распределения данных. В зависимости от результатов теста для сравнения использовали параметрические (t-критерий Стьюдента, дисперсионный анализ, корреляционный анализ Пирсона) или непараметрические методы (критерии медианы, непараметрический дисперсионный анализ с применением критериев Краскала-Уоллиса и Манна-Уитни, ранговая корреляция Спирмена, тесты Данна и Тьюки), а также анализ таблиц сопряженности. Критическое значение уровня значимости принималось равным 5%.

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ОБСУЖДЕНИЕ

Морфологические особенности децидуальных клеток при развивающейся и неразвивающейся беременности. Разработка гистологических критериев неразвивающейся беременности после ЭКО имеет несомненную теоретическую и практическую ценность, так как позволит более

целенаправленно применять гормональную и иммунную коррекцию. Патоморфологические признаки НБ разнообразны, поскольку этиология невынашивания беременности зависит от сочетанного действия многих факторов. Так, в разных случаях неразвивающейся беременности без ЭКО варьируют количество и размеры децидуальных клеток и их ядер, а также выраженность лейкоцитарно - макрофагальной инфильтрации в децидуальной ткани. Часто можно было видеть стратификацию секреторного эпителия желез, увеличение эпителиоцитов, ядра которых сильно различались по размерам. По данным литературы, железистая и железисто-кистозная гиперплазия эпителия маточных желез, наблюдаемые нами, могут быть обусловлены нарушением соотношения Э и ПРГ в крови вследствие относительной гипопрогестеронемией и гипофункции желтого тела, нередкой при данной патологии (СгйсЫеу, Healy, 1998). Деструктивные изменения эпителия желез в норме начинающиеся на сроке 7-8 недель, при НБ выражены значительно сильнее, причем они происходят неравномерно в различных участках слизистой оболочки, так же, как в процессе обратного развития эндометрия при нарушенной беременности (Топчиева и др., 1978).

Рис. 1. Морфометрическая характеристика децидуальных клеток. По оси абсцисс - срок беременности (в неделях), по оси ординат - площадь среза клетки.

К8.МКМ

600,00'

до 7,5 7,5-8,5 бол» ЭКО до ЭКО 7,5 НБдо НБ 7,58,5 7,5 - 8,5 7,5 8.5

Особенно ярко морфологические изменения были выражены в группе НБ ЭКО. Если в группе естественной беременности размеры децидуальной клетки и ее ядра (площадь среза) составляют в среднем 270 мкм2 и 35 мкм2 и соответствуют данным литературы (Herr et al., 1987), то в группе НБ ЭКО на сроке 7,5 - 8,5 недель размеры ДЕЦ увеличены почти вдвое по сравнению с группой НБ и контролем, в то время как размеры ядер увеличиваются в среднем на 25% (Рис. 1). Увеличение ядра может свидетельствовать как о его набухании, так и продолжении процессов полишюидизации, характерной для ДЕЦ человека в первом триместре беременности (Михайлов и др., 1992). Цитоплазма ДЕЦ зернистая, контуры клеток неровные. Часто наблюдали образование пузыревидных выпячиваний и почковидных структур, характерных для активно функционирующих ДЕЦ (Mikhailov, 2003). Поскольку децидуализация может быть вызвана препаратами ПРГ и ФСГ (Топчиева и др., 1978; Tang, Gurpide, 1993), гормональные воздействия при ЭКО могут вызвать ускоренное созревание ДЕЦ, увеличение размеров децидуальных клеток, что может являться ответом на неадекватную гормональную стимуляцию в случае нарушенной функции яичников у пациенток ЭКО.

Динамика РНК в клетках гравидарного эндометрия отражает общую синтетическую активность отдельных клеток. Известно, что клетки железистого эпителия продуцируют АМГФ, ПАМГ, лактроферрин, компоненты внеклеточного вещества. Децидуальные клетки продуцируют ПАМГ, пролактин, релаксин, ренин, утероглобин, факторы роста, компоненты внеклеточного матрикса, ферменты, интегрины и многие другие биологически активные вещества (Loke, King, 1995; Lalitkumar et al., 1998; Ren, Braunstein, 1990).

При физиологической беременности синтетическая активность децидуальных и железистых клеток возрастает к 7,5-8,5 неделям на 75% и 26% соответственно (Рис. 2.). Вероятно, это связано с тем, что на ранних стадиях беременности происходит значительная стимуляция синтеза цитокинов,

хемокинов, факторов роста и других биологически активных веществ в децидуализированных клетках стромы (Кондриков, 1999; Светлаков и др., 2000). С их помощью осуществляются паракринные взаимоотношения между стромой и другими эндогенными и транзиторными клеточными популяциями эндометрия во время ранней беременности (Кондриков, 1999; Светлаков и др., 2000); (Schatz et al., 1994; Sawai et ah, 1997).

Рис. 2. Концентрация РНК в клетках гравидарного эндометрия на разных сроках беременности.

Если принять концентрацию РНК при физиологической беременности на сроке до 7,5 недель за контрольную, то в группе НБ без ЭКО синтетическая активность ДЕЦ составляет 67%, а ЖЕЛ - 71% от контроля. В группе НБ ЭКО эти показатели равны соответственно 93% и 62%.

Таким образом, при неразвивающейся беременности общий уровень синтеза РНК падает. Децидуальные клетки в группе НБ ЭКО проявляют более высокую синтетическую активность по сравнению с группой НБ, вероятно, вследствие более высокого уровня дифференцировки. В то же время лучшая сохранность эпителия желез в группе НБ обусловливает достоверное превышение концентрации РНК в этих клетках по сравнению с эпителиоцитами группы НБ ЭКО.

О ДЕЦ □ЖЕЛЕЗ

Динамика АМГФ в клетках гравидарного эндометрия. Одним из

основных секреторных белков эндометрия является альфа-2-микроглобулин фертильности (АМГФ). В первом триместре беременности концентрация АМГФ в крови резко возрастает.

Многочисленные данные свидетельствуют об иммунопротективной роли АМГФ в регуляции беременности (Okamoto et al., 1991; Clark et al., 1996; Rachmilewitz et al., 1999). Исследование М.Н.Болтовской, проведенное совместно с нами (Болтовская и др., 2000), выявило пониженную концентрацию АМГФ в сыворотке крови женщин при НБ.

Данные, полученные рядом авторов и нами (Болтовская и др., 2000; Batista et al., 1993; Check et al., 1993; Seppala et al., 1991), указывают на значителыгую индивидуальную вариабельность концентрации АМГФ в периферической крови. Это не позволяют рассматривать ее как надежный критерий оценки степени созревания эндометрия, вероятности наступления беременности и прогнозирования ее течения. В связи с этим представляло интерес исследовать динамику синтеза АМГФ клетками децидуальной оболочки более информативными методами иммуногистохимии, отражающими функциональное состояние эндометрия более точно, чем сывороточная концентрация.

Децидуальпые клетки. Если принять за контрольное количество АМГФ-положительных клеток на сроке до 7,5 недель физиологической беременности (6,11%), то к 7,5 - 8,5 неделям оно значимо возрастает на 335%, а после 8,5 недель снижается до 76% от контрольного количества (Рис. 3). В группе НБ и НБ ЭКО количество синтезирующих АМГФ клеток возросло на 110% от контрольного количества.

Железистый эпителий. Количество АМГФ-положительных клеток в группе нормально протекающей беременности достоверно возрастает к 7,5 - 8,5 неделям на 84%, по сравнению с контролем (35%), но последующее уменьшение на 57% недостоверно. Количество синтезирующих АМГФ клеток при НБ и НБ ЭКО возрастает на 8%.

70-SOSO-

до7,5нед 7,5-8,5 от 8,5 нед < всего нед HepaiB

Рис. 3. Количество АМГФ-синтезирующих клеток эндометрия (в процентах) на разных сроках беременности (в неделях).

Соотношение уровня синтеза АМГФ в децидуальных и железистых клетках, наблюдаемое нами, соответствует данными литературы (Ren, Braunstein, 1990).

Динамика CD56+ клеток в гравидарном эндометрии. Натуральные киллеры (NK-клетки) гравидарного эндометрия по фенотипу (CD56+, CD16-, mCD3-) отличаются от NK-клеток периферической крови (CD56-, CD 16+, mCD3+) (Быков, 2001; Loke, King, 1985). CD56+ клетки эндометрия пролиферируют, продуцируют цитокины ТХ2 (интерферон-гамма, интерлейкины-18 и интерлейкин-27) и терминально дифференцируются в БГЛ. Интерферон-гамма играет существенную роль в изменении спиральных артерий матки при беременности, а также регулирует функционирование децидуальных клеток и гибель CD56+ клеток (Tsuda et al., 2001; Сгоу et al., 2003).

Считается, что NK-клетки играют важную роль в обеспечении локального иммунного гомеостаза. Популяция CD56+ NK-клеток, продуцируя цитокины ТХ2 в области инвазии, в совокупности с Т-лимфоцитами и макрофагами эндометрия обусловливает доминирование ТХ2 при

беременности. Поэтому изменение численности популяции CD56+ клеток в эндометрии может нарушить нормальный баланс секретируемых цитокинов и изменить соотношение ТХ1/ТХ2 в пользу ТХ1, вызывающих лизис трофобласта и нарушения беременности, что может привести к блокированию имплантации и прерыванию беременности (King et al., 2000; Saito, 2000; Hill et al., 2000).

По данным литературы, количество NK-клеток в децидуальной оболочке при нормальной беременности снижается к 8-9 неделе- беременности, а при спонтанных абортах с нормальным хромосомным набором - достоверно увеличивается (Kodama et al., 1998; Quack et al., 2001; Yamada et al., 2001).

Иммуноморфологическое исследование количества клеток, дающих положительную иммуногистохимическую реакцию на антиген CD56, показало, что в обеих исследованных группах неразвивающейся беременности (НБ и НБ ЭКО) количество CD56+ клеток достоверно увеличивается по сравнению с контролем - на 54% при неразвивающейся беременности и на 58% при неразвивающейся беременности в группе ЭКО (Рис. 4). Группа НБ ЭКО значимо не отличалась по этому показателю от группы НБ.

Рис. 4. Количество CD56+ клеток эндометрия на различных сроках беременности.

Корреляционный анализ исследуемых морфологических критериев.

Для осуществления нормального эмбриогенеза необходим непосредственный контакт децидуальных, лимфоидных клеток и эпителиоцитов желез, благодаря чему осуществляются паракринные взаимоотношения между стромой и другими эндогенными и транзиторными клеточными популяциями эндометрия во. время ранней беременности (Кондриков, 1999; Светлаков и др., 2000; Schatz et al., 1994; Haynes et al., 1997; Sawai et al., 1997). Следовательно, количественное соотношение ДЕЦ, ЖЕЛ и БГЛ может косвенно свидетельствовать о состоянии межклеточных взаимодействий.

Абсолютное и относительное количество децидуальных клеток, эпителиоцитов желез матки и БГЛ в эндометрии при нормально развивающейся беременности на сроках 4-12 недель постоянно и составляет в среднем 16,37 и 14%. При НБ достоверно возрастает доля БГЛ, при НБ ЭКО - доля ДЕЦ.

В группе физиологической беременности количество окрашенных на АМГФ децидуальных клеток положительно коррелировало с количеством железистых (R=0,73). При НБ корреляция была менее выражена (R=0,60). Возможно, синтез АМГФ в децидуальных и железистых клетках регулируется одними и теми же факторами, действие которых постепенно и длительно ослабевает при остаточном функционировании плаценты после гибели эмбриона при НБ. В группе НБ ЭКО % ДЕЦ был выше на 101%, % ЖЕЛ уменьшился на 31%.

Существует положительная корреляция между количеством децидуальных клеток и количеством БГЛ при нормально развивающейся беременности и при НБ ЭКО. Эта корреляционная связь отсутствует при НБ, что можно объяснить увеличением количества БГЛ при усилении лейкоцитарной инфильтрации в этой группе. По этой же причине при НБ не отмечена отрицательная корреляционная связь между количеством клеток железистого эпителия и БГЛ, выявленная при нормально протекающей

беременности. В группе НБ ЭКО эта связь также отсутствует, скорее всего, в связи с атрофией железистого эпителия. Число корреляционных связей резко уменьшается в группах неразвивающейся беременности, что свидетельствует о разрегуляции межклеточных взаимодействий при НБ.

Во всех группах не было обнаружено зависимости клеточного состава от срока замирания беременности, что свидетельствует о постоянстве этих параметров в исследованном периоде эмбриогенеза.

Изменение соотношений типов клеток и уменьшение корреляционных связей между их количеством свидетельствует о нарушении межклеточных взаимодействий и дисбалансе регуляторных механизмов при неразвивающейся беременности.

Показано, что выработка цитокинов естественными киллерами находится под воздействием ПРГ, осуществляющего таким образом контроль иммунологических аспектов имплантации (Johnson et al., 1999). Поскольку рецепторы ПРГ на NK-клетках отсутствуют, возможно, этот эффект осуществляется путем взаимодействия со стромальными клетками (King et al., 1999; Emmer, Steegers, 2002). Снижение уровня ПРГ при НБ и НБ ЭКО, изменение соотношений клеток, выявленное нами в условиях этой патологии, и нарушение межклеточных взаимодействий могут также повлиять на соотношение цитокинов в эндометрии. Тот же эффект может оказать и уменьшения уровня синтеза АМГФ при НБ, поскольку гликоделин обладает иммуносупрессивными свойствами, дозозависимо увеличивая продукцию ИЛ-6, цитокина группы ТХ2, секреторными клетками эндометрия и ингибируя активность NK (Okamoto et al., 1991), так как есть доказательства того, что для активации БГЛ необходимы цитокины, что гормоны и плацентарные белки могут регулировать деятельность БГЛ, и что трофобласт, вырабатывая специфические HLA антигены, таким образом обеспечивает защиту от действия БГЛ.

Зависимость морфологических показателей эндометрия от клинических характеристик. С помощью корреляциошюго анализа была

выявлены достоверные положительные связи между сроком развития (замирания) беременности и фоновыми значениями ЛГ и ФСГ.

Взаимосвязи морфологических характеристик с возрастом пациенток обнаружено не было, за исключением секреторной активности клеток железистого эпителия при НБ без ЭКО. Можно заключить, что возраст исследованных женщин фактически не оказывал влияния на исследованные параметры.

В этом случае, как известно, следует принимать во внимание функциональное состояние яичников, надежным показателем которого является базальная концентрация ФСГ в плазме крови. Прогрессирующее возрастание концентрации служит сигналом истощения фолликулярного аппарата яичников, несмотря на продолжающиеся регулярные менструации (Витязева, 1999), то есть фактический возраст, определяемый базальным уровнем ФСГ в крови (Buyalos et al., 1997; Martinez et al., 1992; Batista et al., 1995; Hansenetal, 1996).

Полученные нами данные также позволяют рассматривать как значимый фактор, влияющий на успех ЭКО, фактический, а не хронологический возраст.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Результаты морфологического исследования свидетельствуют о том, что морфология децидуальной оболочки при НБ и НБ ЭКО отличается от контрольной. Особенно сильно изменяется фенотип и размеры ДЕЦ в группе НБЭКО.

Общая синтетическая активность как ДЕЦ, так и ЖЕЛ при физиологической беременности возрастает к 7,5 - 8,5 неделям. В группах НБ и НБ ЭКО возрастание менее выражено. ДЕЦ в группе НБ ЭКО проявляют более высокую синтетическую активность, чем в группе НБ, а синтез РНК в ЖЕЛ, напротив, в группе НБ.

Как показали проведенные нами исследования, к морфофункциональным признакам неразвивающейся беременности можно отнести уменьшение общей синтетической активности децидуальных и железистых клеток гравидарного

эндометрия. Уменьшается также количество АМГФ-синтезирующих клеток. Эти изменения указывают на снижение уровня синтеза АМГФ эндометрием и, следовательно, на нарушение метаболической координации между эпителиальным и стромальным компонентами эндометрия. Усиливается инфильтрация децидуальной - ткани БГЛ, что в условиях гормонального дисбаланса и нарушенных межклеточных взаимоотношений, может быть одной из причин нарушения беременности при НБ.

Динамика изменения количества АМГФ-сицтезирующих клеток эндометрия подтверждает данные о понижении содержании АМГФ - в сыворотке крови при привычном невынашивании и неполной трансформации эндометрия ^Шкипеп et а1., 1985; Joshi et а1., 1986; Bishoff, 1989) и НБ ЭКО (Калинина и др., 1999). Установлено, что ПРГ регулирует синтез АМГФ в эндометрии (Seppala et а1., 1998). Так как НБ и НБ ЭКО часто сопровождается гипопрогестеронемией, вследствие гипофункции желтого тела или нарушения рецепции ПРГ клетками-мишенями эндометрия (Бодяжина и др., 1990; Салов, 1998; Яворовская, 1998; Побединский и др., 2000; Кузьмичев и др., 2001). Опосредованное этим уменьшение числа АМГФ-синтезирующих клеток может, в свою очередь, снизить уровень иммуносупрессии материнского организма и привести к нарушеням беременности.

Наблюдаемые нами изменения соотношений ДЕЦ, ЖЕЛ и БГЛ свидетельствуют о локальном иммунологическом дисбалансе и нарушении механизмов защиты плода.

Полученные нами результаты об изменениях соотношений и синтетической активности клеток эндометрия могут послужить основой для продолжения иммуноморфологических исследований неразвивающейся беременности с целью разработки критериев ее ранней диагностики.

выводы

1. Концентрация РНК децидуальных и железистых клеток при нормально развивающейся беременности возрастает к 7,5-8,5 неделям. При неразвивающейся беременности и неразвивающейся беременности, наступившей после экстракорпорального оплодотворения, концентрация РНК децидуальных клеток составляет соответственно 67% и 93% от контрольного уровня, а эпителиоцитов желез - 71 % и 62%.

2. Методами иммуногистохимии с использованием моноклональных антител установлено, что при неразвивающейся беременности и неразвивающейся беременности после экстракорпорального оплодотворения количество альфа-2-микроглобулин фертильности • - - синтезирующих клеток достоверно снижается по сравнению с нормально развивающейся беременностью.

3. Количество CD56+ клеток (натуральных киллеров) увеличивается - на 54% при неразвивающейся беременности и на 58% при неразвивающейся беременности после экстракорпорального оплодотворения.

4. Изменения соотношений децидуальных клеток, эпителиоцитов желез матки и больших гранулярных лимфоцитов (БГЛ), а также уменьшение числа корреляционных связей между ними является показателем нарушений межклеточных взаимодействий и дисбаланса регуляторных механизмов при неразвивающейся беременности и неразвивающейся беременности у женщин включенных в программу экстракорпорального оплодотворения.

5. Наблюдается отсутствие взаимосвязи, изучаемых морфологических характеристик с хронологическим возрастом женщин, а также существование корреляционных связей между базальной концентрацией фолликулостимулирующего и лютеинезирующего гормонов и сроком прекращения развития беременности.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

СБ56+ - клетки, положительные на антиген СБ56+

АМГФ (гликоделин) - альфа-2-микроглобулин фертильности

БГЛ - большие гранулярные лимфоциты

ДЕЦ - децидуальные клетки

ЖЕЛ - эпителиальные клетки желез матки

МВР - методы вспомогательной репродукции

НБ - неразвивающаяся беременность

НБ ЭКО - неразвивающаяся беременность у женщин, включенных в

программу ЭКО

ПРГ - прогестерон

УЗИ - ультразвуковое исследование

ФСГ - фолликулостимулирующий гормон

ЛГ - лютеинизирующий гормон

ХГ - хорионический гонадотропин

Э-эстрадиол

ЭКО - экстракорпоральное оплодотворение

Список работ, опубликованных по теме диссертации.

1. Калинина Е.А., Лукин В.А., Калинина И.И., Торганова И.Г., Широкова Д.В., Попов Г.Д., Коренев В.И., Маршицкая М.И., Болтовская М.Н., Старостина Т.А. а.2-микроглобулин фертильности (АМГФ) как ранний критерий имплантации после ЭКО.// Пробл. репродукции. - 1999. - Т.5, №6. - С.47-50.

2. Болтовская М.Н., Попов Г.Д., Калинина Е.А., Старостина Т.А. а2-микроглобулин фертильности (гликоделин) как маркер функциональной активности эндометрия (обзор литературы).// Пробл. репродукции. - 2000. -Т.6,№6.-С.6-11.

3. Попов Г.Д., Кузнецов С.Л., Калинина Е.А., Калинина И.И., Старостина Т.А. Морфофункциональные особенности децидуальных клеток при неразвивающейся беременности в циклах ЭКО./ Лечение бесплодия: нерешенные проблемы. // Сборник научных трудов. - Саратов, 2001. - С. 125 — 126.

4. Кузнецов С.Л., Гарсуткова Л.Г., Попов Г.Д. Влияние плацентарного протеина (РР14), продуцирующегося в эндометрии, на исход беременности в циклах ЭКО (экстракорпорального оплодотворения). //Сборник материалов научной конференции «Экология и здоровье человека в XXI веке». - Ульяновск, 2001. -С.87-88.

5. Попов Г.Д., Кузнецов С.Л., Старостина ТА, Широкова Д.В. Некоторые аспекты неразвивающейся беременности после ЭКО. / Современные подходы к лечению бесплодия // Сборник научных трудов. - Екатеринбург. 2002. - С. 142 -143.

6. Болтовская М.Н., Калинина И.И., Попов Г.Д. Экспрессия эндометриальных белков в маточных железах при физиологической и неразвивающейся беременности. // Арх. патол. - 2002. - № 5. С. 25 - 28

7. Старостина Т.А., Кузнецов С.Л., Попов Г.Д., Калинина И.И.. Морфофункциональные характеристики децидуальной ткани при неразвивающейся беременности. / Актуальные вопросы морфогенеза в норме и патологии // Годичная сессия НИИ морфологии человека РАМН 2002 г. Сборник статей. -М.: 2002. - С. 101-102.

Попов Григорий Дмитриевич (Россия)

Морфофункциональные особенности децидуальной ткани при неразвивающейся беременности у женщин, включенных в программу ЭКО.

Исследованы особенности морфологии и функции гравидарного эндометрия при нормально протекающей беременности и при неразвивающейся беременности у женщин, включенных и не включенных в программу ЭКО. Оценена общая синтетическая активность клеток гравидарного эндометрия, с помощью анализа концентрации РНК в цитоплазме клеток эндометрия женщин с нормально развивающейся и неразвивающейся беременностью. Изучена локализация и динамика АМГФ-положительных клеток в гравидарном. эндометрии при физиологической и неразвивающейся беременности. Методом корреляционного анализа исследованы взаимосвязи морфологических характеристик эндометрия и их зависимость от гормонального статуса и возраста женщин. Полученные нами результаты позволяют отнести к морфофункциональным признакам неразвивающейся беременности уменьшение общей синтетической активности клеток гравидарного эндометрия и нарушение межклеточных взаимоотношений компонентов эндометрия. Наблюдаемые нами изменения соотношений клеточных элементов эндометрия свидетельствуют о локальном иммунологическом дисбалансе и нарушении механизмов защиты плода. Это может быть одной из причин возникновения неразвивающейся беременности.

Morphofunctlonal features of the decidual tissue in the women with non-developing pregnancy, which are included in the program IVF (/л Vitro Fertilization)

The aim of the investigation was to study the morphological and functional features of the endometrium gravidarum in normally proceeding pregnancy and in non-developing pregnancy in the women who were included or were not included in the IVF-program. General synthetic activity of endometrium gravidarum' cells was estimated by the analysis of the RNA-concentration in their cytoplasm. Localization and dynamics of glycodeline-positive cells in endometrium gravidarum were studied in the state of physiological and non-developing pregnancy. Interrelations between morphological characteristics of endometrium and their dependence from the hormonal status and the age were investigated by the method of correlation analysis. The obtained data allow to conclude that the decreasing of general synthetic activity of endometrium gravidarum' cells and abnormality of interrelation of cellular components of endometrium are morpho-functional signs of non-developing pregnancy. Observable changing in correlation of endometrlal cellular elements testify to local immunologic disbalance and failure of mechanisms of fetus protection that can be one of the reasons of non developing pregnancy appearance.

Издательство ООО "МАКС Пресс". Лицензия ИД № 00510 от 01.12.99 г. Подписано к печати 07.05.2004 г. Формат 60x90 1/16. Усл.печ л. 1,5. Тираж 100 экз. Заказ 588. Тел. 939-3890,939-3891,928-1042. Тел./факс 939-3891. 119992, ГСП-2, Москва, Ленинские горы, МГУ им. М.В.Ломоносова.

*И31 6 7

Содержание диссертации, кандидата медицинских наук, Попов, Григорий Дмитриевич

Глава 1 . ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Морфологические особенности эндометрия

1.2. Причины и морфологические особенности неразвивающейся беременности

1.3. Метод ЭКО. Особенности протекания беременности

1.4. Прогнозирование неразвивающейся беременности

1.5. АМГФ как прогностический критерий беременности

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. Клинический материал

2.2. Методы морфологического исследования

Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

3.1. Морфологические особенности эндометрия при развивающейся и неразвивающейся беременности

3.2. Динамика клеточного состава эндометрия при развивающейся и неразвивающейся беременности

3.3. Динамика РНК в децидуальных клетках эндометрия при развивающейся и неразвивающейся беременности

3.4. Динамика АМГФ в децидуальных клетках эндометрия при развивающейся и неразвивающейся беременности

3.5. Динамика CD56+Kлеток в эндометрии при развивающейся и неразвивающейся беременности

3.6. Зависимость морфологических показателей эндометрия от клинических характеристик

Введение Диссертация по биологии, на тему "Морфофункциональные особенности децидуальной ткани при неразвивающейся беременности у женщин, включенных в программу ЭКО"

Актуальность. Одной из форм невынашивания беременности является замершая, или неразвивающаяся, беременность (НБ), при которой погибший эмбрион задерживается в полости матки в связи с отсутствием ее сократительной деятельности. У 68,6 % женщин невынашивание по типу НБ наблюдается в первом триместре, периоде беременности, в котором происходят закладка органов и плацентация, что обусловливает необходимость его детального изучения.

До настоящего времени в научной литературе крайне мало публикаций о неразвивающейся беременности, хотя частота этой патологии остается стабильной и достаточно высокой: от 2% в популяции до 15-55% в различных группах больных (Салов, 1998; Мещерякова, 2000; Сидельникова, 1986; Корсак, 1999). Известны только единичные работы по изучению неразвивающейся беременности у женщин после проведения экстракорпорального оплодотворения (ЭКО), хотя течение беременности, наступившей после ЭКО, значительно чаще, чем в популяции, сопровождается серьезными осложнениями, ведущими к существенному ухудшению конечных результатов лечения. Частота НБ при ЭКО достигает 12,4%, намного превышая соответствующие популяционные показатели (Аржанова и др., 1999; Колчин, 1997; Корсак и др., 1997; Корсак, 1999; Международный регистр, 1998; Ви11еШ е1 а1., 1996).

Для повышения эффективности метода ЭКО необходимо дальнейшее более глубокое и всестороннее изучение механизмов репродукции. Большинство публикаций по этой теме посвящены результатам биохимических и иммунологических исследований, в то время как особенности морфологии репродуктивной системы при применении методов МВР остаются невыясненными.

Эндометрий человека представляет собой сложную многокомпонентную систему, состоящую из покровного и железистого эпителия, стромы, основного вещества, кровеносных сосудов и нервных клеток. Строма эндометрия сравнительно мало изучена по сравнению с эпителием, хотя она играет важную роль в определении реакции эндометрия на различные воздействия.

Успешное развитие беременности обусловлено комплексом взаимодействий между клеточными элементами эндометрия, трофобластом и иммунокомпетентными клетками материнского организма, которые практически не были исследованы у пациенток ЭКО. Эту задачу облегчает использование иммуногистохимических методов с применением антител -маркеров различных видов клеток.

Достоверным признаком неразвивающейся беременности являются регрессивные изменения децидуальной оболочки. Представляется необходимой разработка гистологических критериев неразвивающейся беременности при ЭКО, а также изучение различных видов клеток и их роли в процессе имплантации и эмбриогенеза, которая позволит более целенаправленно применять гормональную и иммунную коррекцию.

Значительный теоретический и практический интерес представляет изучение белков биологически активных, ассоциированных с беременностью (гравидарных белков) и обладающих свойствами (Побединский и др., 1983; Посисеева и др., 1997; Винницкий, 1998; Болтовская, 2001; Петрунин и др., 1976, 1982, 1983). Особенно важным является то, что гравидарные белки являются одновременно эмбриоспецифическими антигенами, позволяющими объективно оценить изменения иммунного статуса при беременности, и определение их уровня является одним из достоверных методов, характеризующих функцию плаценты и протекание беременности (Салов, 1998). Синтез большинства гравидарных белков (ТБГ, ПАМГ, АФП) максимален во II - III триместре беременности, в отличие от АМГФ, наивысший уровень которого достигается в I триместре. В связи с этим АМГФ можно рассматривать как наиболее адекватный маркер функционального состояния эндометрия в период ранней беременности.

Цель исследования. В связи с вышеизложенным целью исследования явилось изучение динамики морфофункциональных изменений клеточных элементов децидуальной оболочки при неразвивающейся беременности в первом триместре у женщин, не включенных в программу ЭКО и женщин с экстракорпоральным оплодотворением.

Для достижения вышеуказанной цели в настоящей работе были определены следующие задачи:

1. Разработать гистологические критерии неразвивающейся беременности у пациенток ЭКО.

2. Исследовать морфологию клеточного состава эндометрия и ее динамику у женщин с нормально развивающейся и неразвивающейся беременностью.

3. Провести анализ общей синтетической активности клеток эндометрия, анализируя концентрацию РНК в цитоплазме клеток эндометрия женщин с нормально развивающейся и неразвивающейся беременностью.

4. Охарактеризовать динамику синтеза альфа-2-микроглобулина фертильности (АМГФ) по локализации и количеству АМГФ-положительных клеток,

5. Выявить особенности иммунных реакций в децидуальной ткани женщин с развивающейся и неразвивающейся беременностью по локализации и количеству естественных киллеров (СБ56+ клеток).

6. Провести анализ взаимосвязей исследуемых характеристик и их зависимость от гормонального статуса и возраста женщин.

Научная новизна.

Впервые изучена динамика синтетической активности клеточных элементов эндометрия, количество и локализация АМГФ-синтезирующих клеток и естественных киллеров при неразвивающейся беременности у пациенток ЭКО. Получены новые сведения о нарушении межклеточных взаимодействий при неразвивающейся беременности и неразвивающейся беременности с ЭКО.

Научно-практическое значение. Полученные сведения о морфологии децидуальной оболочки при неразвивающейся беременности у женщин, включенных в программу ЭКО, могут служить косвенным критерием оценки адекватности гормонотерапии при МБР.

Помимо чисто научного и практического интереса, обусловленного перспективой возможности оптимизации проведения лечения бесплодия методом ЭКО, эту информацию, вероятно, будет целесообразно использовать для разработки дополнительных критериев исхода проводимого лечения.

Результаты о динамике синтетической активности эндометрия могут послужить основой для продолжения исследований морфофункциональных характеристик неразвивающейся беременности с целью разработки критериев ее ранней диагностики.

Реализация работы и апробация диссертационного материала. Работа выполнена на кафедре гистологии ММА им. И.М.Сеченова (заведующий - академик РАЕН профессор С.Л.Кузнецов) и в Клинике Планирования семьи кафедры акушерства и гинекологии ММА им. И.М.Сеченова (директор - профессор Т.А.Старостина).

Материалы диссертации доложены и обсуждены на семинаре «Лечение бесплодия: нерешенные проблемы» (Саратов, сентябрь 2001 года), Международной научной конференции «Экология и здоровье человека в XXI веке» (Ульяновск, октябрь 2001 года), семинаре «Проблемы имплантации» фирмы «Органон» (Москва, 25 апреля 2002 года), на семинаре «Современные подходы к лечению бесплодия» (Екатеринбург, 3-6 сентября 2002 года). Публикации

По теме диссертационной работы опубликовано 7 статей. матки, заполняется кровью и продуктами разрушения ткани слизистой оболочки матки. В последующем дефект слизистой оболочки покрывается регенерирующим эпителием. Инвазия трофобласта может продолжаться до трех недель.

Плацентация. Во время имплантации трофобласт дифференцируется на два листка: внутренний состоит из крупных мононуклеарных клеток цитотрофобласта, наружный - многоядерный синцитиотрофобласт, который теряет способность к синтезу ДНК и митотическому делению.

Морфогенез ворсин плаценты начинается на 10—13 день развития. Щели и лакуны в трофобластической массе разделены колоннами синцитиотрофобласта, которые называются первичными ворсинами. Межворсинчатое пространство образуется в результате слияния лакун. В конце второй недели развития в проксимальные отделы первичных ворсин врастает экстраэмбриональная мезенхима. Ворсины, состоящие уже из двух тканей, — трофобласта и мезенхимы, носят название вторичных ворсин. Позднее вторичные ворсины васкуляризуются и превращаются в сосудистые, или третичные, ворсины .

На 5-6 неделе гестации клетки цитотрофобласта появляются в просвете спиральных артерий, в составе интерстиция появляются гигантские многоядерные клетки. В капиллярах преобладают эритробласты, в течение 6 недели среди них появляются эритроциты и другие форменные элементы крови. На 8 неделе наблюдается ранняя эндоваскулярная инвазия эндометриальных сегментов спиральных артерий вплоть до образования цитотрофобластических "пробок". (Милованов, 1999).

Развитие децидуальной оболочки. На 13-14 день после овуляции наблюдается выраженная децидуальная реакция: трансформация клеток стромы, специфические преобразования эндометрия, врастание спиральных артерий матки в его функциональный слой. Процесс децидуализации затрагивает все клетки слизистой оболочки матки.

Заключение Диссертация по теме "Гистология, цитология, клеточная биология", Попов, Григорий Дмитриевич

ВЫВОДЫ

2. Методами иммуногистохимии с использованием моноклональных антител установлено, что при неразвивающейся беременности и неразвивающейся беременности после экстракорпорального оплодотворения количество альфа-2-микроглобулин фертильности - синтезирующих клеток достоверно снижается по сравнению с нормально развивающейся беременностью.

3. Количество С056+ клеток (натуральных киллеров) увеличивается — на 54% при неразвивающейся беременности и на 58% при неразвивающейся беременности после экстракорпорального оплодотворения.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Патоморфологические признаки НБ разнообразны, поскольку этиология невынашивания беременности зависит от сочетанного действия многих факторов. Из медицинских факторов невынашивания беременности выделяют генетические, эндокринные, инфекционные, иммунологические, пороки развития гениталий, генитальные инфекции, опухоли матки, экстрагенитальные заболевания.

Разработка гистологических критериев неразвивающейся беременности при ЭКО имеет несомненную теоретическую и практическую ценность, так как позволит более целенаправленно применять гормональную и иммунную коррекцию.

Результаты нашего исследования подтверждают данные литературы, согласно которым для неразвивающейся беременности наблюдается нарушение васкуляризации ворсин плаценты. В разных случаях НБ без ЭКО размеры и степень зрелости децидуальных клеток, а также выраженность лейкоцитарно-макрофагальной инфильтрации варьируют вследствие того, что НБ может быть обусловлена различными факторами и/или их сочетанием. Для этой группы патологии более характерны вариабельность размеров децидуальных клеток и их ядер и гиперпластические изменения секреторного эпителия желез, свидетельствующие о нарушениях гормонального фона (гипопрогестеронемии и гипофункции желтого тела). Клетки эндометрия нередко вакуолизированы, но предстоит выяснить, связана ли вакуолизация с гиперсекрецией, как утверждают некоторые авторы, или является одним из признаков дегенерации.

Нами впервые описаны типичные изменения децидуальных клеток в группе НБ ЭКО. Размеры клеток резко увеличены почти вдвое по сравнению с нормой, хотя размеры ядер увеличиваются в среднем на 25%. Цитоплазма зернистая, контуры клеток неровные, что можно трактовать как сморщивание в начале апоптоза. Часто встречаются децидуальные клетки с выраженными признаками апоптоза (фрагментация цитоплазмы, серповидная конденсация хроматина), апоптозные тельца. Поскольку децидуализация может быть вызвана препаратами прогестерона (Топчиева и др., 1978; Tang, Gurpide, 1993), гормональные воздействия при ЭКО могут вызвать ускоренное созревание и гибель ДЕЦ. По-видимому, апоптоз децидуальных клеток является ответом на неадекватную гормональную стимуляцию в случае нарушенной функции яичников пациенток ЭКО.

Эндометрий человека представляет собой сложную многокомпонентную систему, состоящую из покровного и железистого эпителия, стромы, основного вещества, кровеносных сосудов и нервных клеток. Эпителиальный компонент включает поверхностный эпителий и эпителий желез матки. Строма эндометрия сравнительно мало изучена по сравнению с эпителием, хотя она играет важную роль в определении эндометриального ответа на различные воздействия. Десинхронизация процессов дифференцировки эндометрия и эмбриогенеза приводят к отсутствию или дефекту имплантации, что, в свою очередь, обусловливает бесплодие или раннюю потерю беременности (Rosenwaks, 1987).

Наибольший интерес для изучений событий раннего эмбриогенеза представляют децидуальные клетки, эпителий желез и NK-клетки.

Для осуществления успешной имплантации и плацентации, а также перестройки эндометрия необходимо взаимодействие между клетками различных типов децидуальной оболочки. Для этого необходима координация межклеточных взаимодействий между компонентами эндометрия и эмбрионом, что осуществляется через эффекторные молекулы, факторы роста и цитокины, осуществляющие паракринную, аутокринную и интракринную регуляцию (Светлаков и др., 2000).

В период ранней беременности предецидуальные и децидуальные клетки прямо контактируют с эпителиальными клетками через цитоплазматические отростки (Wolf, Quigley, 1984; Wynn, 1979). Хотя во время беременности рецепторы к Э и ПРГ не выявляются в ядрах эпителия желез матки, развитие секреторного эндометрия, необходимого для поддержания успешного протекания имплантации и беременности, происходит под влиянием эстрогена и nPr(Garcia et al., 1988; Amso et al., 1994). Так как в стромальных клетках, клетках эндотелия и медии спиральных артерий присутствуют рецепторы к ПРГ (Wang et al., 1992; Perrot-Aplanat et al., 1994), гормональный контроль секреторного эпителия осуществляется посредством межклеточных взаимодействий со стромальными клетками и лимфоцитами.

Функции стероидных гормонов в раннем эмбриогенезе многообразны (Critchley, Healy, 1998; Baird, 1998). В частности, ПРГ тормозит фолликулогенез, индуцирует секреторную трансформацию эндометрия и децидуальную реакцию. Э стимулирует синтез ДНК и пролиферацию (Tseng, 1979) и является пермиссивным агентом, регулирующим прямое действие цитокинов, молекул адгезии и факторов роста (Kauma, 2000). Эстрогены одновременно с пролиферацией клеток эпителия стимулируют развитие секреторного аппарата клетки и синтез рецепторов к Э и ПРГ, посредством взаимодействий с которыми осуществляется многоплановое действие гормонов на клетки (Tessier et al., 2000). Э и ПРГ, видимо, играют роль в регуляции иммунотолерантности матери к плоду путем индуцирования экспрессии проапоптозного цитокина, FasL на NK-клетках, а также опосредуют апоптоз клеток эндометрия, регулируя инвазию трофобласта (Selam et al., 2002). Таким образом, становятся более понятными механизмы, с помощью которых плацента избегает отторжения материнским организмом, а также иммунологические основы нарушения беременности.

Представляло интерес выяснить, вызывают ли различия в интенсивности воспалительной инфильтрации и уровне клеточной гибели между исследованными группами в изменении соотношения различных типов клеток эндометрия, что в свою очередь, не может не сказаться на функции децидуальной оболочки, обусловленной межклеточными взаимодействиями.

Абсолютное и относительное количество децидуальных клеток, эпителиоцитов желез матки и БГЛ в эндометрии при нормально развивающейся беременности на сроках 4-12 недель постоянно. При НБ достоверно возрастает доля БГЛ, при НБ ЭКО достоверно возрастает доля децидуальных клеток.

Изменение соотношений типов клеток и уменьшение корреляционных связей между их количеством косвенно свидетельствует о нарушении межклеточных взаимодействий и дисбалансе регуляторных механизмов при неразвивающейся беременности.

Для более точной оценки динамики БГЛ было проведено иммуноморфологическое исследование количества клеток, дающих положительную иммуноморфологическую реакцию на антиген CD56, являющийся маркером естественных киллеров.

Считается, что NK-клетки играют важную роль в обеспечении локального иммунного гомеостаза. По данным литературы, количество NK-клеток в децидуальной оболочке при нормальной беременности снижается к 8-9 неделе беременности, а при спонтанных абортах с нормальным хромосомным набором - достоверно увеличивается (Kodama et al., 1998; Quack et al., 2001; Yamada et al., 2001). Нам известна только одна работа, посвященная изменению количества NK-клеток в эндометрии при НБ, согласно которой изменения их количества происходят разнотипно в различных исследованных подгруппах (Мещерякова, 2000).

Исследование групповых средних показало, что в обеих исследованных группах неразвивающейся беременности количество CD56+ клеток достоверно увеличивается по сравнению с контролем. Группа НБ ЭКО значимо не отличалась по этому показателю от группы НБ без ЭКО (Рис.27, 28, Табл. 10).

Популяция CD56+ NK-клеток, продуцируя цитокины ТХ2 в области инвазии трофобласта (Tsuda et al., 2001), в совокупности с Т-лимфоцитами и макрофагами эндометрия обусловливает доминирование ТХ2 при беременности. Поэтому изменение численности популяции CD56+ клеток в эндометрии может нарушить нормальный баланс секретируемых цитокинов и изменить соотношение ТХ1/ТХ2 в пользу ТХ1, вызывающих лизис трофобласта и нарушения беременности, что может привести к блокированию имплантации и прерыванию беременности (King et al., 2000; Saito, 2000; Hill et al., 2000).

Таким образом, выявленное нами увеличение численности CD56-положительных клеток в условиях гормонального дисбаланса и нарушенных межклеточных взаимоотношений может быть одной из причин нарушения беременности при НБ.

Количество БГЛ в поле зрения было достоверно ниже, если наличии в эндометрии женщин с неразвивающейся беременностью, включенных в программу ЭКО, присутствовали апоптозные клетки (Р<0,001). Результаты t-теста свидетельствуют о том, что наличие апоптоза не зависело от срока замирания беременности (Р=0,87). ). По-видимому, NK-клетки не связаны с регуляцией апоптоза при нарушениях беременности, так как при спонтанных абортах в тех случаях, когда увеличивается количество апоптозных клеток, не изменяется количество NK-клеток, и наоборот (Kokawa et al., 1998; Vadillo et al., 2000).

Динамика РНК отражает общую синтетическую активность отдельных клеток эндометрия. Известно, что клетки эндометрия синтезируют широкий спектр биологически активных веществ. Так, клетки железистого эпителия продуцируют АМГФ, ПАМГ, лактроферрин, компоненты внеклеточного вещества: фибронектин, гликозаминогликаны, гликопротеины, муцины, антигены гистосовместимости, субъединицы молекул адгезии - интегринов и др. Децидуальные клетки продуцируют ПАМГ, пролактин, релаксин, ренин, утероглобин, факторы роста, интегрины, компоненты внеклеточного вещества: ламинин, фибронектин, коллагены I, II, III типов и АМГФ - но последний гораздо в меньших количествах, чем железистый эпителий (Loke, King, 1995; Lalitkumar et al., 1998; Ren, Braunstein, 1990).

При физиологической беременности синтетическая активность децидуальных и железистых клеток возрастает к 7-8 неделям. При неразвивающейся беременности общий уровень синтеза РНК падает и утрачивается координация между эпителиальным и стромальным компонентами эндометрия. Значительная стимуляция синтеза цитокинов, хемокинов, факторов роста, модуляторов апоптоза и их рецепторов в децидуализированных клетках стромы играют основную роль в паракринных взаимоотношениях между стромой и другими эндогенными и транзиторными клеточными популяциями эндометрия во время ранней беременности

Вследствие более высокого уровня дифференцировки децидуальных клеток в группе НБ ЭКО они проявляют более высокую синтетическая активность, чем незрелые децидуальные клетки, преобладающие в группе НБ. В то же время лучшая сохранность эпителия желез в группе НБ обусловливает достоверное превышение концентрации РНК в этих клетках по сравнению с эпителиоцитами группы НБ ЭКО

Значительный теоретический и практический интерес представляет изучение белков, ассоциированных с беременностью (гравидарных белков) и обладающих свойствами биологически активных (Побединский и др., 1983;

Посисеева и др., 1997; Винницкий, 1998; Болтовская, 2001; Петрунин и др., 1976, 1982, 1983). Особенно важным является то, что гравидарные белки являются одновременно эмбриоспецифическими антигенами, позволяющими объективно оценить изменения иммунного статуса при беременности, и определение их уровня является одним из достоверных методов, характеризующих функцию плаценты и протекание беременности (Салов,

1998). Синтез большинства гравидарных белков (ТБГ, ПАМГ, АФП) максимален во II - III триместре беременности, в отличие от АМГФ, наивысший уровень которого достигается в I триместре. В связи с этим АМГФ можно рассматривать как наиболее адекватный маркер функционального состояния эндометрия в период ранней беременности.

Следует отметить, что значительная индивидуальная вариабельность концентрации АМГФ в периферической крови не позволяют рассматривать ее как надежный критерий оценки степени созревания эндометрия, вероятности наступления беременности и прогнозирования ее течения (Batista et al., 1993; Check et al., 1993; Seppalá et al., 1991), поэтому для дальнейшего изучения локализации АМГФ-продуцирующих клеток и динамики АМГФ при неразвивающейся беременности необходимо использование более информативных методов иммуногистохимии.

Учитывая данные об иммунопротективной роли АМГФ в регуляции беременности (Okamoto et al., 1991; Clark et al., 1996; Rachmilewitz et al.,

1999) и его пониженной концентрации в сыворотке крови женщин при НБ (Калинина и др., 1999), представляло интерес исследовать динамику синтеза АМГФ клетками децидуальной оболочки, отражающую функциональное состояние эндометрия более точно, чем сывороточная концентрация.

Дисперсионный анализ средних по группам показал, что в группе нормальной беременности количество АМГФ-положительных децидуальных клеток достоверно возрастает к 7,5 — 8,5 неделям, затем достоверно снижается. При неразвивающейся беременности количество синтезирующих АМГФ клеток было достоверно ниже, чем в контрольной подгруппе 7,5-8,5 недель.

Количество АМГФ-положительных клеток железистого эпителия в группе нормальной беременности также достоверно возрастает к 7,5 - 8,5 неделям, но последующее уменьшение недостоверно. Количество синтезирующих АМГФ клеток при неразвивающейся беременности значимо ниже, чем в контроле в подгруппе 7,5-8,5 недель (Табл. 8, Рис. 25, 26).

Соотношение уровня синтеза АМГФ в децидуальных и железистых клетках соответствует данными литературы (Ren, Braunstein, 1990).

Наблюдаемая динамика изменения количества АМГФ-синтезирующих клеток эндометрия подтверждает данные о понижении содержании АМГФ в сыворотке крови при привычном невынашивании и неполной трансформации эндометрия (Julkunen et al., 1985; Joshi et al., 1986; Bishoff, 1989) и НБ ЭКО (Калинина и др., 1999). Установлено, что ПРГ регулирует синтез АМГФ в эндометрии (Seppälä et al., 1998). Так как НБ и НБ ЭКО часто сопровождается гипопрогестеронемией вследствие гипофункции желтого тела или нарушения рецепции ПРГ клетками-мишенями эндометрия (Бодяжина и др., 1990; Салов, 1998; Яворовская, 1998; Побединский и др., 2000; Кузьмичев и др., 2001), опосредованное этим уменьшение числа АМГФ-синтезирующих клеток может, в свою очередь, снизить уровень иммуносупрессии материнского организма и привести к нарушеням беременности.

Количество окрашенных на АМГФ децидуальных клеток положительно коррелировало с количеством железистых (R=0,60, р=0,02). В группе нормальной беременности эта корреляция была еще сильнее (R=0,73). Возможно, синтез АМГФ в децидуальных и железистых клетках регулируется одними и теми же факторами, действие которых постепенно и длительно ослабевает при остаточном функционировании плаценты после гибели эмбриона при НБ.

С помощью корреляционного анализа была выявлены достоверные положительные связи между сроком развития (замирания) беременности и фоновыми значениями ЛГ и ФСГ.

Взаимосвязи морфологических характеристик с возрастом обнаружено не было, за исключением концентрации РНК в клетках железистого эпителия при НБ без ЭКО. Можно заключить, что возраст исследованных женщин фактически не оказывал влияния на исследованные параметры.

По-видимому, следует принимать во внимание функциональное состояние яичников, надежным показателем которого является базальная концентрация ФСГ в плазме крови, прогрессирующее возрастание которой служит сигналом об истощении фолликулярного аппарата яичников, несмотря на продолжающиеся регулярные менструации (Витязева, 1999), то есть фактический возраст, определяемый уровнем ФСГ в крови (Buyalos et al.,1997; Martinez et al., 1992; Batista et al., 1995; Hansen et al., 1996).

Таким образом, к морфофункциональным признакам неразвивающейся беременности можно отнести уменьшение общей синтетической активности децидуальных и железистых клеток эндометрия, уменьшение количества АМГФ-синтезирующих децидуальных и железистых клеток, что свидетельствует о понижении уровня синтеза АМГФ эндометрием, а также усиление инфильтрации БГЛ. Эти изменения свидетельствуют о локальном иммунологическом дисбалансе и нарушении механизмов защиты плода.

Полученные нами результаты о динамике синтетической активности эндометрия могут послужить основой для продолжения иммуноморфологических исследований неразвивающейся беременности с целью разработки критериев ее ранней диагностики.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата медицинских наук, Попов, Григорий Дмитриевич, Москва

1. Автандилов Г.Г. Медицинская морфометрия. М.: Медицина. - 1990. - 384 с.

2. Автандилов Г.Г. Компьютерная микротелефотометрия в диагностической цитопатологии. М.:РМАПО. - 1996. -256 с.

3. Баграмян Э.Р. О гормональной регуляции гестационного процесса//Акуш. и гин.- 1984.-№4.-С.8-11.

4. Березовский Ю. С. Иммунокомпетентные клетки в децидуальной ткани при нормальной беременности и раннем невынашивании. Архив патологии. 2001. - №1. -С. 44.

5. Бодяжина В.И., Сметник В.П., Тумилович Л.Г. Неоперативная гинекология. //М.: "Медицина". 1990.

6. Болтовская М.Н., Попов Г.Д., Калинина Е.А., Старостина Т.А. а2-микроглобулин фертильности (гликоделин) как маркер функциональной активности эндометрия (обзор литературы).// Пробл. репродукции. 2000. - Т.6, № 6. - С. 6-11.

7. Болтовская М.Н. Роль эндометриальных белков и клеток-продуцентов в репродукции человека. Автореф. дисс. докт биол. наук. М.: 2001. 41 С.

8. Боярский К.Ю. Старение репродуктивной системы и результативность вспомогательных репродуктивных технологий. // Пробл. репрод. 1996. -N 4. - С.57-62.

9. Брамберга Б.М., Зитаре И.Я., Плегере Д.П., Смилтниекс Э.Х. Терминологический словарь морфологических признаков клетки для автоматизации цитологической диагностики и оценки эффективности лечения. Рига. -1970.-160 с.

10. Быков B.JI. Функциональная морфология больших гранулярных лимфоцитов эндометрия человека// Морфология. 2001. - Т. 119. - № 2. - С.70-76.

11. Винницкий О.И. Эхографическая картина и гормональная функция плаценты у женщин с неразвивающейся беременностью //Акуш. и гин.- 1986.- № 10.- С.49-52.

12. Винницкий О.И. Неразвивающаяся беременность: диагностика, профилактика осложнений //Акуш. и гин.-1988.-№ 10.- С.69-73

13. Витязева И.И. Течение, ведение и исход беременности после лечения бесплодия методами вспомогательной репродукции. // Дисс. . канд. мед. наук. М.: 1999. 178 С.

14. Говалло В.И. Иммунология репродукции.- М.: Медицина, 1987.-303 с.

15. Городков В.Н., Посисеева Л.В., Лобанова Л.В. Современные методы диагностики и прогнозирования невынашивания беременности //Невынашивание и недонашивание беременности: Респ. сборник научных трудов.-М., 1984.-С. 115-121.

16. Глуховец Б.И., Глуховец Н.Г., Тарасов В.Н., Мезин В.Я., Мезин Е.В. Патоморфологические и гормональные критерии в диагностике причин самопоизвольных выкидышей. 2001. Арх. патол. - Т. 63. - № 5. - С. 31-36.

17. И. И. Гузов. Введение в медицину репродукции. Зачатие у человека. //М.: 1984.

18. Гьюдайс Линда С. Имплантирующаяся оплодотворенная яйцеклетка и материнский организм. // Пробл. эндокринол. -1999.-Т. 5.-С. 30-32.

19. Дедов И.И., Дедов В.И., Демина H.A. Коррекция ановуляторного цикла ЛГ-рилизинг гормоном и кломифеном. // Изв. АН СССР, Сер. Биол. 1979. - N4. -С.607-609.

20. Здановский В.М., Аншина М.Б. Если вам нужен ребенок. /Руководство для врачей и больных. // М.: 1994. 27 С.

21. Здановский В.М., Шевченко В.В., Макаров О.В. и др. Прогностическое значение количественного определения а2-микроглобулина фертильности (АМГФ) в сперме и сыворотке крови пациентов, включенных в программу ЭКО. // Пробл. репрод. 1996. - N3. - С. 18-22.

22. Клечан М.М. Эндогенные механизмы замершей беременности (клинико-диагностическое исследование): Автореф. дис. канд. мед. наук.- Волгоград, 1995.- 23 с.

23. Колчин A.B. Осложнения беременностей, наступивших в результате ЭКО: многоплодие, эктопическая беременность, спонтанный аборт (Обзор литературы) // Пробл. репродукции. 1997. - Т.З. - №1. - С. 16-19.

24. Кондриков Н.И. Структурно-функциональные изменения эндометрия под воздействием стероидных гормонов. 1999. -Практическая гинекология. Т.1. - № 1.

25. Корсак B.C., Исакова Э.В., Воробьева O.A. и др. Применение золадекса (гозерелина) в схеме суперовуляции в программе ЭКО. // Пробл. репрод. -1996.-№ 3.-С.23-27.

26. Корсак В.С, Аржанова О.Н., Жаворонкова Н.В., Пайкачева Ю.М. Проблемы вынашивания беременности после ЭКО // Вестник Российск. Ассоц. акушеров-гинекологов. 1997. -№3. - С. 52-56.

27. Корсак B.C. Экстракорпоральное оплодотворение в терапии бесплодия : Автореф. дисс. : д-ра мед. наук. СПб. - 1999. -31 с.

28. Кудрявцева М.В., Штейн Г.И., Шашков Б.В., Кудрявцев Б.Н. Цитофотометрическое исследование содержания РНК и гликогена в гепатоцитах человека на различных стадиях развития травмы.// Цитология. 1992. - Т.34. - №10. - С.78-83.

29. Кузьмичев Л.Н., Кулаков В.И., Леонов Б.В. Экстракорпоральное оплодотворение. Отбор, подготовка и тактика ведения больных. М.: Мир. - 2001 - 165 С.

30. Кулаков В.И., Г.Т. Сухих, Р.Г. Гатаулина. Апоптоз в клинике гинекологических заболеваний (обзор литературы) Проблемы репродукции, №2, 1999.

31. Кулаков В.И. Новые технологии и научные приоритеты в акушерстве и гинекологии. Симпозиум «Охрана материнства и детства». Коллегия Минздрава РФ по итогам деятельности за 2001 год. Тезисы докладов.

32. Кустаров В.Н., Боярский К.Ю. Влияние возраста на частоту наступления беременности в программе ЭКО. Проблемы репродукции № 1 1999.

33. Леонов Б.В. Разработка альтернативного метода лечения бесплодия -эктракорпорального оплодотворения и переноса эмбрионов. // Акуш. и гинекол. 1994. -N 4. - С.63-64.

34. Международный регистр результатов лечения методами вспомогательной репродукции// Пробл. репрод. 1998. - Т. 1.-С. 26-37.

35. Мещерякова A.B. Иммуноморфологические аспекты неразвивающейся беременности первого триместра. Дис. . канд.мед.наук. -М., 2000. - 137 С.

36. Милованов А.П.// Патология системы мать плацента — плод. - М.: Медицина. - 1999. - 446 С.

37. Михайлов В.М., Лебедева Г.С., Штейн Г.И. Изменение количества и синтеза ДНК в ядрах больших децидуальных клеток крыс в ходе их дифференицровки. Цитология. -1989. Т. 31. - № 6. - С. 677-684.

38. Никитин А.И. О допустимости возможного. // Пробл. репрод. 1996. - № 3. -С. 9-10.

39. Никитин А.И. Пренатальные потери в программах вспомогательной репродукции. // Пробл. репрод. 1996. -N4. - С.49-56.

40. Пестрикова Т.Ю. Невынашивание беременности: самопроизвольный аборт, преждевременные роды, неразвивающаяся беременность //Ведение беременности и родов высокого риска,- М., 1994.- с.36-71.

41. Петрунин Д.Д., Грязнова И.М., Петрунина Ю.П., Татаринов Ю.С. // Иммунохимическая идентификация органоспецифического аг-глобулина плаценты человека и его содержание в амниотической жидкости. Бюлл. экспер. биол. -1976.- Т.7. -С.803-804.

42. Петрунин Д.Д., Олефиренко Г.А., Цагараева Т.М., Шевченко О.П. Синтез плацентарного а2-микроглобулина в децидуальной ткани при внематочной беременности. // Акуш. игин. 1982.- №7.- С. 23-25.

43. Петрунин Д.Д., Пшеничникова Т.Я., Шевченко О.П., Пиганова Н.Л. Иммунохимическое исследование а2-микроглобулина фертильности в эндометрии. // Акуш. и гин. 1983. - №9.- С. 27-28.

44. Пирс Э. Гистохимия теоретическая и прикладная.// М., Издательство иностранной литературы. 1956. - 488 С.

45. Побединский Н.М., Орлова В.Г., Зацепина Л.П. и др. О неразвивающейся беременности. // Акуш, и гинекол. 1983. - № 12. - С.22-25.

46. Побединский Н.М., Балтуцкая О.И., Омельяненко А.И. Стероидные рецепторы нормального эндометрия. // Акуш. и гин. 2000. - Т. 3. - С. 5-8.

47. Посисеева Л.В., Бойко Е.Л., Борзова Н.Ю. и др. Реабилитация репродуктивного здоровья. // Вест. Рос. Ассоц. акуш-гинекол. 1995. - Т.1, № 4. -С. 42-48.

48. Посисеева JI.B., Бойко Е.Л, Дружинин А.В.и др. Влияние отдельных плацентарных белков на иммунорегуляторные клетки у женщин с нормально протекающей и осложненной невынашиванием беременностью / //Акуш. и гин.- 1992.- № 8-12.- С.48-49.

49. Программированная клеточная гибель. / Под ред.

50. B.С.Новикова. // Ст-Петербург: Наука. 1996. - с.77.

51. Пшеничникова Т.Я. Бесплодие в браке. М.: Медицина, 1991. - 318С.

52. Раисова А.Т., Орлова ВТ. Гиперандрогения в клинике невынашивания беременности //Профилактика, диагностика и лечение женщин с невынашиванием беременности и оказание помощи их детям: Сб. научн. трудов /Под ред.В.М.Сидельниковой.- М., 1990,- С.35-39.

53. Салов И. А. Диагностическое значение некоторых эндокринных сдвигов при несостоявшемся аборте //Акуш. и гин.- 1985.-№9.- С.68-69.

54. Салов И.А. Неразвивающаяся беременность (патогенез, клиника, диагностика и лечение). Дисс. . докт. мед. наук. Саратов. —1998.

55. Светлаков А.В., Яманова М.В., Егорова А.Б., Михуткина

56. C.B. Молекуярно-биологические аспекты имплантации у человека и животных. // Пробл. репродукции. 2000. - № 2. - С. 16 -28.

57. Серов В.Н., Стрижаков А.Н., Маркин С.А. Руководство по практическому акушерству.-М.:МИА, 1997.-435 с.

58. Сидельникова В.М. Невынашивание беременности. / М.: "Медицина".- 1986.

59. Серова О.Ф. Опыт применения Дюфастона для лечения женщин с угрожающим прерыванием беременности в I триместре Вестник Российской ассоциации акушеров-гинекологов, 2000, №3, с. 1-2.

60. Старостина Т.А., Н.И. Размахнина, И.Г. Торганова И.Г. Планирование семьи. М., - "Медицина"., - 1996. - 78 с.

61. Сухих Г.Т., Ванько Л.В., Кулаков В.И. Иммунитет и генитальный герпес. // 1997. С. 220.

62. Тарасов В.Н., Новикова A.B. Вирильный синдром у женщин. Метод, пособие. Рязань.: 2000.

63. Тарасов В.Н.,. Мезин Е.В, Куликов Е.П., Мезин В .Я. Концентрация половых стероидов и белков зоны беременности в сыворотке крови женщин группы риска развития трофобластической болезни. "Паллиативная медицина и реабилитация" № 1 -2001.

64. Татаринов Ю.С., Посисеева Л.В., Петрунин Д.Д. Специфический альфа2-микроглобулин (гликоделин) репродуктивной системы человека: 20 лет от фундаментальных исследований до внедрения в клиническую практику. /М. Иваново. - 1998.

65. Татарова H.A., Линде В.А. Пути оптимизации ведения беременных с угрозой невынашивания в первом триместре. СПб.: СПбГМА, 2001. - 25 с.

66. Тимошенко Л.В., Клигерман М.М. Принципы исследования и лечения при несостоявшемся аборте, несостоявшихся родах//Акуш. и гин.- 1983.- № 1.- С.56-57.

67. Топчиева О.И., Прянишников В.А., Жемкова З.И. Биопсия эндометрия. М.: Медицина. - 1978. - 232 С.

68. Топчиева О.И. Значение атипических изменений эндометрия (реакция Ариас-Стеллы) для диагностики нарушений внематочной беременности. // Акуш. и гинек. -1963.-№4. -С. 19.

69. Трубчанинова Л.Г. Состояние фетоплацентарного комплекса в зависимости от локализации плаценты в полости матки у женщин с невынашиванием беременности//Физиология и патология репродуктивной функции женщин,- Харьков, 1986.- 115 с.

70. Уткин В.М., Глуховец В.И., Ухов Ю.И., Лушников В.Х., Букин Б.И. Морфологические характеристики клеточной иммунной реакции в эндометрии при спонтанном аборте. Акуш. гин. 1989. - 6: 30-33

71. Шевченко О.П., Петрунин Д.Д., Пшеничникова Т.Я., Белян Д.Д. Иммунохимическое изучение альфа2-микроглобулина фертильности при различных формах бесплодия у женщин. //Акуш. и гин. 1982. - № 8. - С. 18-20.

72. Яворовская К.А. Структура эндокринных нарушений у супружеских пар программы экстракорпорального оплодотворения и переноса эмбрионов в полость матки. // Акуш. и гинекол. 1998. - № 1. - С.11-14.

73. Al-Sebai MA, Kingsland CR, Diver M, Hipkin L, McFadyen IR. The role of a single progesterone measurement in thediagnosis of early pregnancy failure and the prognosis of fetal viability. Br J Obstet Gynaecol. 1996 Apr;103(4):391.

74. Anthony F.W., Smith E.M., Gaad S.C., Masson G.M. Placental protein 14 secretion during in vitro fertilization cycles with and without human chorionic gonadotropin for luteal support. // Fertil. Steril. 1993. - Vol. 59. - No. 1. - P. 187-191.

75. Arias-Stella J. Atypical endometrial changes associated wuth presence of chorionic tissue. // Arch. Path. 1954. - Vol. 58. - P. 112.

76. Asch R., Verez J., Haran E. et al. IW does not increase the risk on chromosomal abnormalities in spontaneous abortion. // Hum. Reprod. 1996. - Vol.11. -(Suppl.).- P.124-124.

77. Baird T.B. Feedback mechanisms. In: Estrogens and Progesterons in Clinical Practice. Ed. by I.S.Fraser, R.P.S.Jansen, R.A.Lobo, M.I.Whitehead. Churchill Livingstone, 1998, London-Edinburgh-New York- Philadelphia San Francisco - Sydney. P.95-103.

78. Balen A., McDougall J. The influence of the number of embryos transferred in 1060 in vitro fertilization pregnancies on miscarriage rates and pregnancy outcome. // Hum. Reprod. -1993. Vol.8, N8. - P. 1324 - 1328.

79. Batista M.C. et al. (1993) Serum levels of placental protein 14 do not accurately reflect histologic maturation of the endometrium. Obstet. Gynecol., 81:439-443

80. Batista MC, Cartledge TP, Zellmer AW, Merino MJ, Axiotis C, Bremner WJ, Nieman LK.Effects of aging on menstrual cyclehormones and endometrial maturation.Fertil Steril 1995 Sep;64(3):492-499.

81. Bell S.C., Hales M.W., Patel S., Kiwan P.H. Protein synthesis and secretion by the human endometrium and decidua during early pregnancy. // Br. J. Obstet. Gynaecol. 1985. - Vol. 92. -P. 793-803.

82. Bick R.L., Madden J.,. Heller K.B, Toofanian A. Recurrent miscarriage: causes, evaluation, and treatment.Medscape Womens Health. 1998 May;3(3):2.

83. Bishoff P. Three pregnancy proteins (PP12, PP14 and PAPP-A): their biological and clinical relevance. // Am. J. Perinatol. -1982.- Vol.6. No. 2.- P. 110-116.

84. Bell S.C., Patel S., Hales M.W. Immunochemical detection and characterization of pregnancy-associated endometrial alpha-globulins secreted by the human endometrium. // J.Reprod. Fertil. 1985.- Vol.74. - P. 261.

85. Bodey AS. Spontaneous abortions and terminations of pregnancy: histological differences. Med J Aust 1979 Dec 29;2(13):709-10

86. Bohn H., Kraus W. Isolierung und Charakterizierung eines neuen plazentaspezifischen Proteins. // Arch. Gynaecol. — 1980. Vol. 229. - S. 279.

87. Bolton A.E., Clough K.J., Stoker R.J., Pockley A.G. Identification of placental protein 14 as an immunosuppressive factor in human reproduction. // Lancet. 1987. - Vol.1. -No.8533. - P. 593-595.

88. Borini A., Violini F. Obstetric outcome of 43 pregnances obtained in post-menopausal women after oocyte donation. // Hum. Reprod. 1996. - Vol.11. -P.26S.

89. Borlum K.G., Maiggard S. Transvaginal oocyte aspiration and pelvic infection (letter). // Lancet. 1989. - N2. - P. 53-54.

90. Braun D, Ding J, Shen J, Rana N, Fernandez B, Dmowski W. Relationship between apoptosis and the number of macrophages in eutopic endometrium from women with and without endometriosis. Fertil. Steril. 2002 0ct;78(4):830.

91. Brown S.E. et al. (2000) Endometrial glycodelin-A expression in the luteal phase of stimulated ovarian cycles. Fertil. Steril., 74:130-133.

92. Bulla R, de Guarrini F, Pausa M, Fischetti F, Meroni PL, De Seta F, Guaschino S, Tedesco F. Inhibition of trophoblast adhesion to endothelial cells by the sera of women with recurrent spontaneous abortions. Am J Reprod Immunol 1999 Aug;42(2): 116-23

93. Bulletti C., Flamigni C., Giacomucci B. Reproductive failure due to spontaneous abortion and recurrent miscarriage // Hum. Reprod. Update. 1996. - V.2, №2. - P. 118-136.

94. Burrows TD, King A, Loke YW. Expression of adhesion molecules by human decidual large granular lymphocytes. Cell Immunol 1993 Mar;147(l):81- 94.

95. Burton GJ, Watson AL, Hempstock J, Skepper JN, Jauniaux E. Uterine glands provide histiotrophic nutrition for the humanfetus during the first trimester of pregnancy. J Clin Endocrinol Metab 2002 Jun;87(6):2954-9

96. Buyalos R., Daneshmand S., Brzechffa P.R. Basal estradiol and FSH predict fecundity in women of advanced reproductive age undergoing ovulation induction therapy. Fertil.Steril. 1997. 68:272-277.

97. Cameron S.T., Critchley H.O., Buckley C.H., Kelly R.W. Effect of two antiprogestins (mifepristone and onapristone) on endometrial factors of potential importance for implantation. // Fertil.Steril. 1997.- Vol.67. - P. 1046-1053.

98. Check J.H., Vaze M.M., Vetter B. Measurement of placental protein 14 (PP14) not helpful in predicting infertility or spontaneous abortion. // Int. J. Fertil. 1993. - Vol. 38. - No.l. - P. 34-36.

99. Childs G.V., Ellison D.G., Unabia G. Functional differentiation of gonadotropes and thyrotropes. // Glycoprotein hormones. / Ed. W.W.Chin, I.Boime. Serono Symposia, USA. - 1990. - P. 1-10.

100. Clark G.F. et al. (1996) A role for glycoconjugates in human development: the human feto-embryonic defence system hypothesis.Hum. Reprod., 11:467-473.

101. Clark DA.Signaling at the fetomaternal interface. J Reprod Immunol 1999 Mar;41(3): 169-73;

102. Clifford K., Flanagan AM, Regan L. Endometrial CD56+ natural killer cells in women with recurrent miscarriage: ahistomorphometric study. Hum. Reprod 1999 Nov; 14 (ll):2727-30

103. Cole L.A., Lavy G. HCG free beta-subunut an early marker of outcome of IVF clinical pregnancies. // J. Clin. Endocr. Metab. - 1987. - Vol.64, N6. - P. 1328 -1330.

104. Cove H. The Arias-Stella reaction occurring in the endocervix in pregnancy: recognition and comparison with an adenocarcinoma of the endocervix. // Am J Surg Pathol. 1979. -Vol. 3.-P.567-568.

105. Critchley H.O., Chard T., Oladjide F. Role the ovary in the synthesis of placental protein 14. // J. Clin. Endocrinol. Metab. -1992.- Vol.75. No.l. - P. 97-100.

106. Critchley H.O., Healy D.L., Chard T. Is ovarian relaxin a stimulus to placental protein 14 secretion in pregnancy? // J. Endocrinol. 1994. - Vol. 142. - No.2. - P. 375-378.

107. Dalton C.F. et al. (1998) Endometrial protein PP14 and CA-125 in recurrent miscarriage patients; correlation with pregnancy outcome.Hum. Reprod., 13:3197-3202

108. Dell A., Morris H.R., Easton R.L. Structural analysis of the oligosaccharides derived from glycoprotein with potent immunosuppressive and contraceptive activities. // J. Biol. Chem.- 1995.- Vol.270. No. 41.- P. 24116-24125.

109. Emmer PM, Steegers EA, Kerstens HM, Bulten J, Nelen WL, Boer K, Joosten I. Altered phenotype of HLA-G expressingtrophoblast and decidual natural kHJIler cells in pathological pregnancies. Hum Reprod 2002 Apr; 17(4): 1072-1080.

110. Fazleabas A.T., Strakova Z. Endometrial function: cell specific changes in the uterine environment. Mol Cell Endocrinol. -2002.- V. 186.-N2.-P. 143-147.

111. Fedorcsak P., Sziller L., Paulson R. et al. Chlamidia assosiated pelvic inflammatory disease among infertile patients with and without occlusion the fallopian tubes. // Hum.Reprod. 1996. -Vol.11. -(Suppl.). - P. 133 - 133.

112. Finn C. A., Porter D. G. The Uterus (Handbooks in Reproductive Biology) London: Elek Science, 1975.

113. Fox H., Herd M.E., Harilal K.R. Morphological changes in the placenta and decidua after induction of abortion by extra-amniotic prostaglandin. // Histopathology. 1978. - Vol. 2. -No.2. -P.145-151.

114. Galan A, O'Connor JE, Valbuena D, Herrer R, Remohi J, Pampfer S, Pellicer A, Simon C. The human blastocyst regulates endometrial epithelial apoptosis in embryonic adhesion. Biol Reprod 2001 Apr;64(4):1283.

115. Glasser H. R., McCormack S. A role of stromal cells function diversity in altering endometrial cell responses. In: Progress in Reproductive Biology 1980;7:102-14.

116. Gorczynski RM, Hadidi S, Yu G, Clark DA. The same immunoregulatory molecules contribute to successful pregnancy and transplantation. Am J Reprod Immunol 2002 Jul;48(l): 18-26.

117. Gu Y, Jow GM, Moulton BC, Lee C, Sensibar JA, Park-Sarge OK, Chen TJ, Gibori G. Apoptosis in decidual tissue regression and reorganization. // Endocrinology. 1994. - Vol.135. - N3. -P.1272-1279.

118. Gu Y, Srivastava RK, Clarke DL, Linzer DI, Gibori G. The decidual prolactin receptor and its regulation by decidua-derived factors. Endocrinology. 1996. - V. 137. - N 11. — P. 4878-85.

119. Hansen L.M., Batzer F.R., Gutmann J.N., Corson S.L., Kelly M.P., Gocial B. Evaluation ovarian reserve: FSH and E2 variability during cycle days 2-5. Hum.Reprod. 1996. 11-3: 486-489.

120. Haynes MK, Wapner RL, Jackson LG, Smith JB.Phenotypic analysis of adhesion molecules in first-trimester decidual tissue from chorion villus samples.Am J Reprod Immunol 1997 Dec;38(6):423-30

121. Hernandez E.R. Embryo implantation and GnRH antagonists. Part 1: Embryo implantation: the Rubicon for GnRH antagonists. // Hum. Reprod. 2000. - Vol. 15. - No. 6 - P. 1211-1216.

122. Hill G.A., Freeman M., Bastias M.C. et al. The influence of oocyte maturity and embryo quality on pregnancy rate in a program for in vitro fertilization-embryo transfer. // Fertil. Steril. 1989. - Vol.2, N5. - P.801-806.

123. Hill JA, Choi BC. Maternal immunological aspects of pregnancy success and failure. J Reprod Fertil Suppl 2000;55:91-7.

124. Ho HN, Chao KH, Chen HF, Chen SU, Wu MY, Yang YS. Distribution of Thl and Th2 cell populations in human peripheral and decidual T cells from normal and anembryonic pregnancies. Fertil Steril 2001 Oct;76 (4):797-803

125. Homan G, Brown S, Moran J, Homan S, Kerin J. Human chorionic gonadotropin as a predictor of outcome in assisted reproductive technology pregnancies. Fertil Steril 2000 Feb;73(2):270-4.

126. Huhtala M.L., Seppala M., Narvanen A., Palomaki P. Amino acid sequence homology between human placental protein 14 and p-lactoglobulin from various species. // Endocrinology. -1987. Vol. 120. - P. 2620-2622.

127. Hull M.G.R. Experience with FSH treatment alone in an IVF programme. // J. Assist. Reprod. Genet. 1995. - Vol.12, N3. -(Suppl.). - P.20S.

128. Hustin J., Jauniaux E. The earliest placenta: the yolk sac. // Hum.Reprod. -1996.-Vol.ll.-P.19S.

129. Janeway C.A., Jines B., Hayday A. Specifity and function of T cells bearing y receptors.- 1998. Immunology today. - Vol.9. -P.73-76.

130. Jeschke U, Briese V, Richter D, Kunkel S. Stimulation trials of trophoblast cells in vitro using PP14 Z Geburtshilfe Neonatol 1996 Sep-0ct;200(5): 199-201.

131. Johnson P.M., Christmas S.E., Vince G.S. Immunological aspects of implantation and implantation failure. // Hum. Reprod. 1999. - Vol. 14. - No. 2 - P. 26-36.

132. Jones W. Immunological factors in infertility. // Cervix. Ed. Joseph A. Jordan and A. Singer. - London; Philadelphia., -1976.-184 P.

133. Joshi S.G., Ebert K.M., Swartz D.R. Detection and synthesis of a progestogen-dependent protein in human endometrium. // J.Reprod. Fertil. 1980. - Vol. 59. - P. 273.

134. Joshi S.G. et al. (1982) Serum levels of a progestagen-associated endometrial protein during the menstrual cycle and pregnancy .J. Clin. Endocrinol. Metab., 55:642-648.

135. Julkinen M., Wahlstrom T., Seppala M. Detection and localization of placental protein 14-like proteins in human seminal plasma and in male genital tract. // Arch. Androl. -1984. Vol. 12 (Suppl). - P. 59-67.

136. Julkunen M., Rutanen E.M., Koskimies A., Ranta T. Distribution of placental protein 14 in tissue and body fluids during pregnancy. // Br. J. Obstet. Gynecol. 1985. - Vol. 92. -P. 1145-1151.

137. Julkinen M., Koistinen R., Sjoberg J. Secretory endometrium synthesizes placental protein 14. // Endocrinology. 1986. -Vol. 118.- No. 5.- P. 1782-1786.

138. Kamarainen M. et al. (1999) Expression of glycodelin in human breast and breast cancer.Int. J. Cancer, 83:738-742.

139. Kanamaru H., Akino H., Suzuki Y., Noriki S., Okada K. Prognostic value of nuclear area index in combination with the World Health Organization grading system for patients with renal cell carcinoma. // Urology. 2001. - Vol. 57. - N2. -P.257-261.

140. Kauma S.W. Cytokines in implantation. // J. Reprod. Fertil. -2000. Vol. 55. - Suppl. - P. 31-42.

141. Kiess W., Brian Gallaher B. Hormonal control of programmed cell death/apoptosis.European Journal of Endocrinology. -1998. May; 138(5):482-91

142. Kim J.J., Jaffe R.C, and Fazleabas A.T. Blastocyst invasion and the stromal response in primates.// Hum. Reprod. 1999. -Vol.14.-P.45-55.

143. King A., Loke Y.W. On the nature and function of human uterine granular lymphocytes. 1991. Immunology today. - 12: 432- 435.

144. King A., Burrows T., Verma S., Hiby S., Loke Y.W. Human uterine lymphocytes.// Hum. Reprod. Update 1998 - Vol. 4. -No. 5.-P. 480-485.

145. King A., Gardner L., Loke Y.W. Co-stimulation of human decidual natural killer cells by interkeukin-2 and stromal cells. 1999. Hum. Reprod. - Vol. 14. - No.3. - P.656-663.

146. King A, Allan DS, Bowen M, Powis SJ, Joseph S, Verma S, Hiby SE, McMichael AJ, Loke YW, Braud VM. HLA-E is expressed on trophoblast and interacts with CD94/NKG2 receptors on decidual NK cells.Eur J Immunol 2000 Jun;30(6): 1623-31

147. King A., Hiby S.E., Gardner L., Joseph S., Bowen J.M., Verma S., Burrows T.D., Loke Y.W. Recognition of trophoblast HLA class I molecules by decidual NK cell receptors a review.// Placenta. - 2000.- 21 Suppl A.-P.81-85.

148. Klentzeris L.D., Bulmer J.N., Seppala M., Li T.C. Placental protein 14 in cycles with normal and retarded endometrial differentiation.//Hum. Reprod. 1994.- Vol.9. - No.3. - P. 394-398.

149. Klentzeris L.D. The role of endometrium in implantation. // Hum. Reprod. 1997. - Vol. 12. - P. 170 - 175.

150. Klentzeris L.D., Bulmer J.N., Li T.C., Morrison L. Periimplantation phase lectin-binding in the endometrium of women with unexplained infertility. // Fertil. Steril. 1991. - Vol. 56. -P. 660-667.

151. Kodama T, Hara T, Okamoto E, Kusunoki Y, Ohama K. Characteristic changes of large granular lymphocytes that strongly express CD56 in endometrium during the menstrual cycle and early pregnancy. // Hum Reprod. 1998 . - Vol.13. -N4. - P.1036-1043.

152. Kokawa K, Shikone T, Nakano R. Apoptosis in human chorionic villi and decidua during normal embryonic development and spontaneous abortion in the first trimester. // Placenta. 1998. - Vol.19. - No. 1. - P.21-26.

153. Kronqvist P., Kuopio T., Collan Y. Morphometric grading of invasive ductal breast cancer. I. Thresholds for nuclear grade. // Br J Cancer. 1998. - Vol.78. - N6. - P.800-805.

154. Lancaster P., Shafir E. High incidence of neural tube defects after assisted conception. //Hum. Reprod. 1996. - Vol.11. -(Suppl.). - P.39-39.

155. Lancauster P.A. In vitro fertilization pregnancies in Australia and New Zealand. // Med. J. Aust. 1988.- Vol.148, N3.-P.429-436.

156. Leroy F. Receptivite nidatoire de l'endometre. // Revue medicale de Bruxelles. 1982. - Vol. 3. -N 4. - P.301-304.

157. Li T.C., Dockery P., Rogers A.W., Cooke J.D. A quantitative study of endometrial development in the luteal phase: comparison between woman with unexplained infertility and normal fertility. // Br. J. Obstet. Gynecol. 1990. - Vol.97. - P. 576-582.

158. Li T.C. et al. The variation of endometrial protein PP14 in different parts of the human endometrium. //Int. J. Gynaecol. Obstet. 1991. - Vol. 34. - P.257-260.

159. Li T.C. et al. An analysis of the variation of plasma concentrations of placental proteins in artificial cycles.// Fertil. Steril. 1992. - Vol. 57. - P.776-782.

160. Lockwood C.J., Krikun G., Schatz F. The decidua regulates hemostasis in human endometrium. // Semin. Reprod. Endocrinol. 1999. - Vol.17. - No. 1. -P.45-51.

161. Loke Y.W., King A. Human implantation. Cell biology and immunology. / Cambridge University Press. 1995. - 299 P.

162. Marcus S., Marcus N., Williams G. et al. Does the frequency of vanishing fetuses after IVF and embryo transfer increas with rise of maternal age? // Hum. Reprod. 1996. -Vol.11. -(Suppl.). -P.69-79.

163. Makino T., Hara T., Oka C. et al. Survey of 1120 Japanese women with a history ofreccurent spontaneous abortion. // Em. J. Obstet. Gynecol. Reprod. Biol. 1992.-Vol.44, N2.- P. 123130.

164. Malinovsky A., Wilcinski J., Szpakovski M. Clinical and immunological prognostic factors in the evaluation of alloimmunization efficiency in recurrent spontaneous abortion women. // Hum. Reprod. 1996. - Vol.11. - P.26-26.

165. Martinez F., Coroleu B., Llueca A., Aran B., Barri PN. Valor predictivo de los niveles de FSH en dia 3 del ciclo para la respuesta a la estimulación ovarica en ciclos de FIV. // Prog.Obstet.Ginec. 1992. - Vol. 35. -P.502-506.

166. Marx L, Arck P, Kapp M, Kieslich C, Dietl J. Leukocyte populations, hormone receptors and apoptosis in eutopic and ectopic first trimester human pregnancies. Hum Reprod 1999 Apr;14(4):llll-7

167. Mincheva-Nilsson L., Baranov V., Yeung M.M.-W, Hammarstrom S., Hammarstrom M.-L. Immunologic studies ofhuman decidua-associated lymphoid cells in normal early pregnancy. 1994. - J. Immunol., 152: 2020-2032.

168. Moore K. L. The developing human. Clinically oriented embryology. 3-d ed. Philadelphia etc.: Saunders 1982.

169. Morris H.R., Dell A., Easton R.L. Gender-specific glycosilation of human glycodelin affects its contraceptive activity. // J. Biol. Chem.- 1996.- Vol.271. No. 50. - P. 32159-32167.

170. Narula R.J., Hajjar G., Dec W. Apoptosis in the failing heart.//Cardiology Clinics. 1998. - V.16. - No.4. - P.691-710.

171. Navot D., Laufer N., Kopolovic J. Artificially induced endometrial cycles and establishment of prefnancies in the absence of ovaries. // N. E. J. Medicine. 1986. - Vol. 314. - P. 806-811.

172. Nylund L., Gustafson O., Lindblom B., Pousett A., Seppala M. Placental protein 14 on human in vitro fertilization early pregnancies. // Hum. Reprod. 1992. - Vol. 7. - No.l. - P. 128-130.

173. Oehninger S. et al. (1995) Factors affecting fertilization: endometrial placental protein 14 reduces the capacity of human spermatozoa to bind to the human zona pellucida.Fertil. Steril., 63:377-383

174. Okamoto N. et al. (1991) Suppression by human placental protein 14 of natural killer cell activity. Am. J. Reprod. Immunol., 26:137

175. Olajide F., Chard T. Biologocal and clinical significance of the endometrial protein PP14 in reproductive endocrinology. // Obstet. Gynecol. Survey. 1992. - Vol. 47. - No.4. - P. 252257.

176. Oliver C., Cowdrey N., Abadia-Molina A.C., Olivares E.G. Antigen phenotype of cultured decidual stromal cells of human term decidua. // J. Reprod. Immunol. 1999. Vol.4. - No.l. -P.19-30.

177. Onguru O., Celasun B., Gunhan O. Comparison of DNA ploidy and nuclear morphometric parameters with the conventional prognostic factors in transitional cell carcinomas. // Tohoku J Exp Med. 2003. - V.199. - N3. - P. 141-148.

178. Ozenci C.C., Korgun ET, Demir R. Immunohistochemical detection of CD45+, CD56+, and CD 14+ cells in human decidua during early pregnancy. Early Pregnancy 2001 Jul;5(3): 164-75

179. Pace D., Longfellow M., Bulmer J.N. Characterization of intraepithelial lymphocytes in human endometrium. 1991. - J. Reprod. Fertil., 91: 165-174.

180. Pearce EJ. et al. Downregulation of Thl cytokine production accompanies induction of Th2 responses by a parasitic helminth, Schistosoma mansoni. J. Exp. Med. 1991. - V. 173. -P.159-166.

181. Peleg S. The modulation of decidual cells proliferation and differentiation by progesterone and prostaglandins. J Steroid Biochem. 1983. - V.19. - N1 A. - P.283-289.

182. Pellester F. Frequency and distribution of aneuploidy in human female gametes. // Hum. genet. 1991. - Vol.86, N3.- P. 283283.

183. Petrunin D., Scherbacova L., Tatarinov Yu. Fertility alpha-2, microglobulin as tumar marker. / Updating on tumor markers in tissue and in biologocal fluids. 1993. - Torino. - P. 619-928.

184. Petrunina Yu.A., Petrunin D.D., Strigova N.V., Novitskaya S.P. Determination of fertility alpha-2 microglobulin (FAMG) in menstrual blood and its diagnostic significance. // Immunology of reproduction. Abst. Inter. Symp. - Kiev: 1996. - P. 20.

185. Pierro E., Minici F., Alesiani O. et al. Stromal-epithelial interactions modulate estrogen responsiveness in normal human endometrium. // Biol. Reprod. 2001. - Vol. 64. - P. 831-838.

186. Pijnenborg R. (1990) Trophoblast invasion and placentation in the human-morphological aspects. Troph Res 4:33-47.

187. Pittaway D., Wentz A., Maxson W.S. et al. The efficacy of early pregnancy monitoring with serial chorionic gonadotropine determination and real-time sonography in an infertility population. //Fértil. Steril. 1985. - Vol.44, N2. -P. 190-194.

188. Poland B., Miller J.R., Jones D.C. Reproductive counselling in patients who have a spontaneous abortion. // Am. J. Obstet. Gynecol. -1977. Vol.127. - No.7. - P. 685-691.

189. Polgar K, Hill JA. Identification of the white blood cell populations responsible for Thl immunity to trophoblast and the timing of the response in women with recurrent pregnancy loss. Gynecol Obstet Invest 2002;53(l):59-64

190. Proll J, Blaschitz A, Hartmann M, Thalhamer J, Dohr G. Human first-trimester placenta intra-arterial trophoblast cells express the neural cell adhesion molecule. Early Pregnancy 1996 Dec;2(4):271-5

191. Quack K.C., Vassiliadou N., Pudney J., Anderson D J., Hill J.A. Leukocyte activation in the decidua of chromosomally normal and abnormal fetuses from women with recurrent abortion. // Hum. Reprod. 2001. - Vol.16. - No.5. -P.949-955.

192. Quenby S., Bates M, Doig T, Brewster J, Lewis-Jones DI, Johnson PM, Vince G. Pre-implantation endometrial leukocytes in women with recurrent miscarriage.Hum Reprod 1999 Sep;14(9):2386-91

193. Qumsiyeh M.B., Kim K.R., Ahmed M.N., Bradford W. Cytogenetics and mechanisms of spontaneous abortions: increased apoptosis and decreased cell proliferation in chromosomally abnormal villi. // Cell. Genet.- 2000. Vol.88. -No. 3-4.-P. 230-235.

194. Rachmilewitz J. et al. (1999) Placental protein 14 functions as a direct T-cell inhibitor.Cell. Immunol., 191:26-33.

195. Ren S.G., Braunstein G.D. Progesterone and human chorionic gonadotropin do not stimulate placental proteins 12 and 14 or prolactin production by human decidual tissue in vitro. // J. Clin. Endocrinol. Metab. 1990. - Vol.70. -No.4.

196. Riittinen L. et al. (1989) Time-resolved immunofluorometric assay for placental protein 14.Clin. Chim. Acta, 183:115-124

197. Rosenwaks Z. Donor eggs: their application in modern reproductive technologies. // Fértil. Steril. 1987. - Vol. 47. -P. 895-909.

198. Saito S. Cytokine network at the feto-maternal interface.// J. Reprod. Immunol. 2000. - Vol. 47. - No 2. - P. 87-103.

199. Sakahira, H; Enari, M; Nagata, S. Cleavage of CAD inhibitor in CAD activation and DNA degradation during apoptosis. NATURE, 391: (6662) 96-99 JAN 1 1998.

200. Selam B, Kayisli U. A., N Mulayim N, Arici A. Regulation of Fas Ligand Expression by Estradiol and Progesterone in Human Endometrium. J Clin Endocrinol Metab 2002 Aug;87(8):3921-3927.

201. Seppala M, Ruoslahti E.Alpha-fetoprotein.Contrib Gynecol Obstet 1976;2:143-86

202. Seppala M., Alfthan H., Vartianen E., Stenman U.H. The postmenopausal uterus: the effect of hormone replacement therapy on the serum levels of secretory endometrial protein PP14/p-lactoglobulin homologue. // Hum. Reprod. 1987. -Vol. 2. - P. 742-743.

203. Seppala M., Wahlstrom T., Julkunen M., Vartiainen E. Endometrial proteins as indicators of endometrial function. / Placental and endometrial proteins: basic and clinical aspects. -1988. Sci. Press. - P. 35-42.

204. Seppala M. et al. (1989) Suppression of prolactin secretion during ovarian hyperstimulation is followed by elevated serum levels of endometrial protein PP14 in the late luteal phase.Hum. Reprod., 4:389-391

205. Seppala M., Andervo M., Koistinen R., Riittinen L. Human endometrial protein secretion relative to implantation. // Bailliere's Clin. Obstet. Gynaecol. 1991. - Vol. 5. - No.l. -P. 61-72.

206. Seppala M., Koistinen H., Koistinen R. Glycodelins. / Trends in Endocrinology and Metabolism // 2001. Vol. 12 - P.l 11-117.

207. Seppala M, Taylor RN, Koistinen H, Koistinen R, Milgrom E. Glycodelin: a major lipocalin protein of the reproductive axis with diverse actions in cell recognition and differentiation. Endocr Rev 2002 Aug;23(4):401-30

208. Shrago SS. The Arias-Stella reaction. A case report of a cytologic presentation. // Acta Cytol. 1977. - Vol. 21. - P. 310-313.

209. Silverberg K., O'Dea L., Banks K. et al. Highly purified FSH comparative results in IVF from endometriosis, tubal disease and idiopathic infertility. // J. Assist. Reprod. Genet. 1995. -Vol.12, N3. - (Suppl.). - P.54S.

210. Simpson J. Further evidence that infection an infrequent cause of first trimester spontaneous abortion. // Hum. Reprod. 1996. - Vol.1 l,No.9.-P.2058-2059.

211. Shanis B.S., Nazari A., Check J.H. et al. Culture and treatment of mycoplasma/ureaplasma infections not found helpful to improve pregnancy rates following IVF. // J. Assist. Reprod. Genet. 1995. - Vol.12, N3. - (Suppl.). -P.190S.

212. Smitz J, Devroey P, Van Steirteghem AC. Endocrinology in luteal phase and implantation. Br Med Bull 1990 Jul;46(3):709-719.

213. Stephenson M. Frequency of factors associated with habitual abortion in 197 couples. // Fertil. Steril. 1996. - Vol.66, N1. -P.24-29.

214. Stewart DR, Overstreet JW, Celniker AC, Hess DL, Cragun JR, Boyers SP, Lasley BL. The relationship between hCG and relaxin secretion in normal pregnancies vs peri-implantation spontaneous abortions. Clin Endocrinol (Oxf) 1993 Apr;38(4):3 79-85.

215. Stewart D.R. et al. (1997) The role of relaxin in glycodelin secretion.J. Clin. Endocrinol. Metab., 82:839-846

216. Stray-Pedersen B., Stray-Pedersen S. Etiologic factors and subseqent reproductive perfomance in 195 couples with a prior history of habitual abortion. // Am. J. Obstet Gynecol. 1984. -Vol.148, N2. -P.140-146.

217. Sugantha SE, Webster S, Sundar E, Lenton EA. Predictive value of plasma human chorionic gonadotrophin following assisted conception treatment. Hum Reprod 2000 Feb;15(2):469-73

218. Sunder S., Lenton E.A. Endocrinology of the peri-implantation period Baillieres Best Pract Res Clin Obstet Gynaecol 2000 0ct;14(5):789-800.

219. Sutchcliff R.G., Joshi S.C., Patterson W.F. Serological identity between human alpha-uterine protein and human progestogen-dependent endometrial protein. //J. Reprod. Fertil. 1982. -Vol. 65. - P. 207.

220. Tang B, Gurpide E. Direct effect of gonadotropins on decidualization of human endometrial stroma cells. J Steroid BiochemMol Biol 1993 Dec;47(l-6):115-21.

221. Templenton A., Morris J., Parslow W. Factors that affect outcome of IVF treatment. Lancet 1996; 348: 1402-1406.

222. Toner J.P., Flood J.T. Fertility after the age of 40. // Obstet. Gynec. North Am. 1993. -No. 20. - P. 261-272.

223. Tseng L. (1979) Physiologic changes in binding and metabolism of estradiol and progesterone in human endometrium during the menstrual cycle. Obstet Gynecol Ann 8:1-17

224. Tsuda H., Sakai M, Michimata T, Tanebe K, Hayakawa S, Saito S. Characterization of NKT cells in human peripheral blood and decidual lymphocytes. Am J Reprod Immunol 2001 May;45(5):295-302

225. Tulppala M., Palosuo T., Ramsay T. et al. A prospective study of 63 couples with a history of reccurent spontaneous abortion. // Hum. Reprod. 1993. - Vol.8, N5. - P.764-770.

226. Tulppala M., Julkunen M., Tiittinen A., Stenman U.H. Habitual abortion is accompanied by low serum levels of placental protein 14 in the luteal phase of the fertile cycle. // Fertil. Sreril. 1995.- Vol. 63.-No.4.- P. 792-795.

227. Vadillo OF, Avila Vergara MA, Hernandez Guerrero C, Arechavaleta Velasco F, Beltran Montoya J.Apoptosis in trophoblast of patients with recurrent spontaneous abortion of unidentified cause. Ginecol Obstet Mex 2000 Mar;68:122-31

228. Van der Westerlaken L., Broes L.K. An investigation of contribution of IVF results for women aged > 40 years in the total IVF population. // Hum. Reprod. 1996. - Vol.11. - P. 138139.

229. Waites G.T., Wood P.L., Walker R.A., Bell S.C. Immunohistological localization of human secretory "pregnancy-associated endometrial alpha-2 globulin" (alpha-2 PEG) during menstrual cycle. // J. Reprod. Fertil. 1988. -Vol. 82. - P. 665-672.

230. Wathen N.C., D.J. Campbell, M.J. Kitau et al. // Alfafetoprotein levels in amniotic fluid from 8 to 18 weeks of pregnancy Brit. J. Obstet. Gynaec. 1993. - V. 100, N4. - P.380.

231. West J. A genetically defined animal model of anembryotic pregnancy. // Hum. Reprod. 1993. - Vol.8, N8. - P.1316-1323.

232. Wolczynski S., Dimitrs J., Kulikowski M. The outcome of an IW programme in women aged > 40 years. // Hum.Reprod. -1996. -Vol.11, P.218-218.

233. Wynn R. M. Morphology of endometrium. B kh.: F. K. Beller, G. F. B. Schumacher (Eds). The Biology of the Fluids of the Female Genital Tract. New York etc.: Elsevier, 1979, p. 37-58

234. Yasui Y, Yamaguchi M, Jikihara H, Yamamoto T, Kanzaki T, Murata Y. Expression of prolactin-releasing peptide in human placenta and decidua Endoer J 2001 Jun;48(3):397-401.

235. Yovich J.L., Yovich J.M., Edirisinghe W. The relative chance of pregnancy following tubal or uterine transfer procedures. // Fertil. Steril. 1988. - Vol.49. - No. 5. - P.858-864.

Информация о работе

Попов, Григорий Дмитриевич
кандидата медицинских наук
Москва, 2004
ВАК 03.00.25

Диссертация

Морфофункциональные особенности децидуальной ткани при неразвивающейся беременности у женщин, включенных в программу ЭКО - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Морфофункциональные особенности децидуальной ткани при неразвивающейся беременности у женщин, включенных в программу ЭКО - тема автореферата по биологии, скачайте бесплатно автореферат диссертации

Похожие работы