Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Влияние антипрогестина RU486 на биохимические показатели репродуктивнойфункции женщин

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Влияние антипрогестина RU486 на биохимические показатели репродуктивнойфункции женщин"

РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ МЕДИЦИНСКИХ НАУК

ЭНДОКРИНОЛОГИЧЕСКИЙ НАУЧНЫЙ ЦЕНТР

(директор - академик РАМП проф. Дедов И.И.)

ИНСТИТУТ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ЭНДОКРИНОЛОГИИ (директор - академик РАМН, проф. Акмаев И.Г.)

На правах рукописи УДК б 15.357:577.175.859].015.4:612.627.8).07

ВЛИЯНИЕ АНТИПРОГЕСТИНА1Ш486

НА БИОХИМИЧЕСКИЕ ПОКАЗАТЕЛИ РЕПРОДУКТИВНОЙ ФУНКЦИИ ЖЕНЩИН

03.00.04 - биохимия

АВТОРЕФЕРАГ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

ЗАЙЦЕВА Татьяна Сергеевна

Научшй руководитель: академик РАМН, проф. Ю.А. Панков

Москва !996

Работа выполнена в Эндокринологическом Научном Центре РАМН

Директор - академик РАМН, профессор И.И. Дедов

Научный руководитель: академик РАМН, профессор ЮЛ. Панков

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук В.Н. Прозоровский

доктор биологических наук О.В. Смирнова

Ведущее учреждение - кафедра акушерства и гинекологии лечебного ф-та РГМУ им.. Пирогова

к- 1996 г. ь-У/чи&.-З&^Ш*.

защита диссертации состоится на заседании Диссертационного совета (Д 00i.10.0t) при ИБМХ РАМН (Москва, ул. Погодинская, 10 ).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ИБМХ РАМН.

чЯо

Автореферат разослан ' 1996 г.

Ученый секретарь Диссертационного совета ' В1С. Былинкина

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Одним из важных направлений современной эндокринологии является изучение эндокринной регуляции репродуктивной функции женщин. Интенсивное развитие исследований в этой области обусловлено социальной значимостью проблем, связанных с регуляцией рождаемости. К числу этих проблем относится доступность эффективных небезопасных абортивных средств. Прерывание беременности хирургическим путем нередко приводит к серьезным осложнениям, поэтому ведете« усиленный поиск терапевтических методов регуляции рождаемости. Наиболее широкое применение в качестве абортивных средств получили простагландины и синтетический аитипрогестин {<1)486. Последний имеет несомненное преимущество перед лростагландинами, практически не вызывая побочных эффектов, но не всегда приводит к полному аборту, а иногда вызывает сильное кровотечение. В связи с этим продолжается активный поиск оптимальных схем. его зрименения н интенсивное изучение механизма его действия. Установлено, что 1Ш486 гвязьшается с рецепторами прогестерона и блокирует его эффекты. Однако детально механизм абортивного действия 1*11486 не изучен. • частности, обнаружено, что по <екоторым параметрам он может быть агоннстом прогестерона.

При изучении механизма действия абортивных средств большое место отводится (ецидуальной ткани. В течение многих лег в лаборатории молекулярной эндокринологии жститута в рамках расширенной программы ВОЗ по регуляции рождаемости изучается Ьункционаяьная активность децидуальной ткани, в частности, такие ее параметры, как вровень рецепторов прогестерона и Эстрогенов и содержание простагландинов и цАМФ. Зыбор этих показателей обусловлен тем, что рецепторы половых гормонов определяют |увствительность ткани к их действию, цАМФ является универсальным регулятором 1нутриклеточных процессов, а простагландины играют важную роль в регуляции функциональной активности репродуктивной системы. При нарушении нормального хода 1еременностн в децидуальной ткани происходят характерные изменения. Для сохранения ¡временности необходимо поддержание в децидуальной тканм определенных уровней «цепторов прогестерона и эстрадиола и стабильного соотношения между ними, а также охранение высокой концентрации цАМФ и низкого содержания простагландинов. При амопроизвольном и индуцированном лростагландинами аборте наблюдается снижение ровня рецепторов прогестерона, изменение соотношения рецепторов про[естерона и строгснов в пользу рецепторов эстрогенов, повышение содержания простагландннов и нижение концентрации цАМФ. Изменение этих показателей было обнаружено на авершающей стадии аборта - в момент отторжения плода, поэтому их динамика и ричинно-следственпые связи остаются неясными, в связи с чем особый интерес редетавляет исследование ранних стадий развития аборта.

Цель и задачи исследования. Цель работы - изучение влияния антипрогестина 1)486 на функциональную активность децидуальной ткани в процессе прерывания временности. В задачи исследования входило определение содержания в децидуальной

ткан» рецепторов прогестерона и эстрогенов, а также уровня простагландинов (ПГ) Е2 и 17>а, а п\МФ, и концентрации метаболита ПГГ-'тд (МПГРг,*) в плазме крови через

определенные промежутки времени после введения разных доз 1Ш486.

РаГ^>та проводилась в рамках Расширенной Программы ВОЗ по репродукции человека совместно с ВНИД ОЗМиР, проект № 86026.

Научная новизна работы. В результате проведенной работы получены цовые данные о действии 1Ш486 на децидуальную ткань женщин в ранние'сроки беременности. Результаты исследования показали, что это действие №486 включает снижение уровня рецепторов прогестерона, повышение уровня рецепторов эстрогенов и связанное с этим ' изменение соотношения между рецепторами прогестерона и эстрадиола в пользу последних, а также повышение содержания простагландинов. Эти изменения предшествовали завершающей стадии аборта,. поэтому можно предположить, что они участвуют в механизме абортивного действия 1Ш486.

Научно-практическая ценность работы. Полученные данные представляют интерес с точки зрения изучения механизма действия антагонистов стероидных гормонов и могут быть использованы для разработки оптимальных схем их применения, а также в исследовании механизма самопроизвольного аборта и в поиске средств его предотвращения.

Апробация" работы. Материалы диссертации доложены и обсуждены на 9-м Международном конгрессе по эндокринологии (Ницца, 1992); на 75-м Собрании Эндокринологического Общества США (Лас Вегас, 1993); на конференции по биохимии гормонов (Москва, 1993).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 5 работ.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 106 страницах машинописного текста; состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части, включающей материалы и методы исследования, результаты исследования и их обсуждение, выводов и списка цитируемой литературы.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Характеристика группы обследованных женщин. В исследование было включено 149 женщин, обратившихся в клинику ВНИЦ ОЗМиР с целью прерывания ранней беременности (аменорея до 49 дней). Клиническая часть исследования проводились в отделении физиологии и патологии репродуктивной системы ВНИЦ ОЗМиР доктором Астаховой Т.М. Беременность подтверждали ультразвуковым обследованием н данными анализа крови на содержание 0-субъединицы хорионического гонадотропика. Включенные в исследование женщины удовлетворяли следующим критериям: возраст 1835 лет, наличие регулярных 25-35-дневных менструальных циклов, нормальное развитие внутриыаточной беременности, подтвержденное ультразвуковым обследованием. Женщины принимали 1Ш486 в виде таблеток, после чего через определенные интервалы времени у них прерывали беременность методом вакуум-аспирации. Во всех случаях

вакуум-аспкрация проводилась до появления признаков отторжения плода. Контрольные группы составляли женщины, принимавшие плацебо.

В зависимости от дозы 1Ш486 и времени между приемом таблетки и проведением вакуум-аспирации женщины были распределены по 6 группам методом случайной выборки (таблица 1).

-----В труппах 1-4 у женщин к моменту вакуум-аспирации не было отмечено каких-либо

изменений в соматическом или клиническом статусе. В группе 5 у 9 женщин из 26 и в группе 6 у 12 женщин нз 26 наблюдались кровянистые выделения, но ни у одной из обследованных женщин аборт не наступил. Вакуум-аспирацию проводили под общим наркозом.

Таблица 1. Распределение обследуемых по группам.

Группа Количество обследуемых Доза 1Ш486 (мг) Время введения 1Ш486 (в час. до проведения вакуум-аспирацин)

1 28 плацебо 12

2 22 25 12

3 22 600 12

4 24 плацебо 36

5 26 25 "х 3 (с интервалом 12. час) 36

6 26 • 600 36

1олучение экспериментального материала. Извлеченную нри вакуум-аспирации ецидуальную ткань промывали в охлажденном физиологическом растворе, слегка одсушивали на фильтровальной бумаге и немедленно замораживали в жидком азоте. °ровь для анализа метаболита ПГИ^ получали перед приемом таблеток, а также

епосредственно перед вакуумаспирацией; ее собирали в пробирки, содержавшие ЭДТА и ндометацин, и сразу центрифугировали.

Образцы децидуальной ткани, полученные при вакуум-аспирации, промывали в злодном физиологическом растворе, подсушивали на фильтровальной бумаге и ¡медленно замораживали в жидком азоте, в котором они хранились до проведения пределеиия (не более 3 недель): в этих условиях потери рецепторов не наблюдается, лаппорЫоэ и Ти1сЫтку, 1979).

пределенне содержания рецепторов прогестерона и эстрадиола.

еред..опытом оттаявшую ткань освобождали от видимых кровеносных сосулия и мельчали. Впоследствии все процедуры проводили при 0-4°С. Содержание рецепторов и

цитозоле определяли по методу Байарда (Bayard ei al.. 197В), а в ядрах - по методу Андерсена (Andersen et al., 1972) с некоторыми модификациями. Для определения рецептор!'В эарогенов использовали ^Н-эстрадиол (^НЕ^, а для определения рецепторов прогестерона - синтетический прогестин 3HR -5020. Перед измерением рецепторов прогестерона в цитозоле, для удаления свободного RU486, который мог мешать их определению, проводили сорбцию цитозоля на угле, покрытом декстраном. Специфическое связывание определяли по разнице между суммарным связыванием лнганда и его неспецифическим связыванием в присутствии избытка одноименного немеченого гормона. Свободный гормон удаляли путем адсорбции на угле, покрытом декстраном. Содержание рецепторов выражали в фмоль/мг ДНК.

Определение содержания простагландинов. Содержание ПГЕ2 и ШТ^ в ткани и MIirF2a в плазме определяли радиоиммунологическим методом после экстракции и

' хроматографии на колонках с кремневой кислотой (JafTe, Behrman, 1974) с учетом потерь в процессе обработки. Для измерения ГНТ^ использовали наборы для РИА,

выпускаемые Институтом Изотопов Венгерской Академии Наук, для определения HfEj • антисыворотку, производимую в Институте Пастера (Франция) и ^Н-ПГЕ2 фирмы "Amenham". Для определения МПГр2а использовали антисыворотку, производимую в Институте Пастера (Франция) и ^Н-МПГР^ фирмы "АтепЬага"(Аиглия). Определение содержания цАМФ. Содержание цАМФ определяли . методом конкурентного спзывания с белком (Oilman, 1970) с помощью наборов фирмы "Amenham".

Расчет количества ПГ и цАМФ проводили' путем logil-log преобразования (Rodbard, Lewald, 1970) на программируемом калькуляторе Hewlett-Packard.

Статистическая обработка результатов проводилась с помощью непараметрического теста Wilcoxon-Mann-Witney.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

I- Содержание рецепторов npoicciq>'Ha н M'ipyi ÇiK'B В .КИИ»оа-'1Ы1УЙ_гкаШ1 женшш1_ша< введении RU486.

Результаты определения кониенграции рецепторов прогестерона в децидуальной ткани представлены в таблице I. Как следуе! hi полученных данных, однократное введение 600 мг R1J486 вызывало через 12 часов значительное снижение (р<0.01 ) концентрации рецепторов прогестерона, как в ядрах, так и в цитозоле. Через 36 часов после введения 600 мг RIM36, конценграция рецепторов прогестерона и в ядрах и в цитозоле также была значительно ниже, чем • контроле. Через 12 часов после -однократного введения 25 мг RU486 концентрации рецепторов прогестерона в цитозоле и ядрах достоверно не отличались от контрольных величин, хотя содержание рецепторов прогестерона в цитозоле указывало на явную тенденцию к снижению зтой величины. Через 36 часов после начала трехкратного (с 12-часовыми интервалами) введения 2S мг RU486 наблюдалось достоверное (р<0,01) снижение содержания рецепторов прогестерона

л мнтоэоле и их суммарной концентрации в цитозоле и ядре. Таким образом, трехкратное введение низкой дозы 1Ш486 вызывало изменение содержания рецепторов прогестерона только в цитозоле, тогда как однократное введение высокой дозы вызывало изменение концентрации рецепторов и в цитозоле и в ядре. Следует отметить, что содержание рецепторов прогестерона в цитозоле через 12 ч. после однократного введения и через 36 ч. при трехкратном введении 25 мг ГШ486 было одинаковым. Однако, во втором случае контрольные величины были выше, и снижение было статистически достоверным. Само По себе различие между двумя группами с плацебо не было статистически значимым, ио сказывалось на результатах сопоставления каждой пары контрольных и экспернмептадьиых групп. Поскольку трудно объяснить прнчнну различия между двумя группами с плацебо, мы сочли возможным сравнить значение, полученное через 12 ч. после введения 25 мг, со средним значением величин,

Таблица 1. Содержание рецепторов прогестерона (М±т) в денидуальной ткани женщин .

Рецепторы прогестерона, фмоль/мг ДНК.

Группа Ядра Цитозоль Суммарное количество

Плацебо, 12 ч »=26 741,5 ±78,7 538,2 ±84,2 1276,6 ±117.1

25 мг1Ш486,12ч л~22 691.0 + 65,5 313,2 ±40,1 1014,1 ±68,3

600 мг 1Ш486, 12ч л=22 405,0 ± 42,9 р<0.01 198.9 ±23,3 р<0.01 603.9 + 44,6 р<0.01

Плацебо, 36 ч п=24 611,1 ±54,7 684,9 + 71,1 1296,0 + 81,1

3 х 25 мг 1Ш486 36 ч л=25 622.8 ± 57,9 310,4 ±52,7 р<0.01 920.7 + 72,7 р<0.01

600 п^ 1Ш486, . 36 ч п=26 476,6 ± 44,7 . р<0.05 313,4 ±49,8 р<0.05 790,0 + 77,8 р<0.05

Примечания: р - достоверность по отношению к соответствующей группе плацебо по критерию Манна-Вилькоксона-Уитни.

полученных через 12 и 36 ч. после приема плацебо. При таком сравнении снижение содержания рецепторов прогестерона в цитозоле через 12 ч. после введения 25 мг эказывастся статистически достоверным. Правомерность такого расчет;; вызывает

некоторые сомнения, но это сравнение позволяет считать, что содержание рецепторов прогестерона в цитозоле начинает снижаться уже через 12 ч. после введения 25 мг 1Ш436.

Таблица 2. Содержание рецепторов эстрогенов (М+т) с децидуальной ткани женщин.

Группа Рецепторы эстрогенов, фмоль/мг ДНК.

' Ядра .. Цитозоль Суммарное количество

Плацебо, 12 ч л=25 84,5± 11,3 108.5 + 16,3 193,0+17,8

25 мг RU486, 12 ч л=21 106,9 ±14,4 114,1+24,5 221.0 + 26,1

600 мг RU486, 12 ч л=21 88.4 ± 12,1 102,1 ± 16,7 190.5 + 28,7

Плацебо, 36 ч л=21 69,0 ± 16,8 86,0 ± 16,3 155,0 + 19,5

3 х 25 мг RU486, 36 ч я=24 106,9 + 10,2 р<0.05 164,6 + 24,4 р<0.01 271.2 ±25,5 р<0.01

600 мг RU486, 36 ч л=25 115.7 ±17,1 р<0.05 137.8 ±28,3 253.7 ± 29,3 р<0.05

Примечания: р - достоверность по отношению к соответствующей группе плацебо по критерию Манна-Вилькоксона^Уитни.

Результаты определения концентрации рецепторов эстрогенов, приведенные в таблице 2, показывают, что при однократном введении RU486 в дозах 25 и 600 мг уровень рецепторов эстрогенов в ядрах и цитозоле через 12 часов не менялся, а через .36 часов после введения 600 мг и 3-кратного введения по 25 мг их концентрация в ядрах и суммарная концентрация в цитозоле и ядрах достоверно повышалась. Содержание рецепторов эстрогенов в цитозоле увеличивалось только после трехкратного введения 25 мг RU486.

Следует отметить, что во всех группах наблюдалась значительная вариабельность содержания рецепторов прогестерона и эстрогенов, что отмечалось и в ранее проведенных исследованиях (Bayard et al., 1978; Hill et al., 1990).' Существует .предположение, что этот разброс обусловлен индивидуальными различиями в концентрации половых гормонов в крови (Kletzky et al., 1975).

Разнонаправленные изменения концентрации рецепторов прогестерона и зстрядйола через 36 часов после введения RU486 привели к значительному изменению соотношения общего числа рецепторов прогестерона и эстрогенов по сравнению с контролем. В контрольной группе это соотношение равнялось 9,4+1,0 а при введении 600 Mr RU436 и 3 х 25 мг RU486 3,6+0,6 и 4,3+0,5, соответственно, р<0.01.

Пол ученные результаты показывают, что RU486 вызывает снижение уровня рецепторов прогестерона в децидуальной ткани уже через 12 часов после его введения, т.е. задолго до аборта, который обычно наступает через 48-72 ч. после введения RU486. В работе Хилда с сотр. (Hill et al., 1990) снижение уровня рецепторов прогестеронов децидуальной ткани под действием RU486 было обнаружено сразу после отторжения плодного яйца, и авторы предположили, что оно может быть результатом повреждения клеток. Однако имеются данные о том, что первые морфологические изменения в децидуал«,ной ttaim обнаруживаются только через 24 ч после однократного введения RU486 (Schindler et al., 1985), поэтому изменение содержания рецепторов, наблюдаемые через 12 ч после введения RU486, вряд ли можно считать следствием повреждения клеток, тем более, что дальнейшего снижения уровня рецепторов прогестерона через 36 ч не наблюдалось. Вероятнее всего, снижение уровня рецепторов прогестерона является фактором,-играющим определенную роль в сложной цеп» процессов, обусловливающих наступление аборта, а не следствием деградации ткани.

Сходное действие RU486 на уровень рецепторов прогестерона наблюдали в эндометрии женщин в постменопаузе (Röbel et al., 1S85) и в культуре клеток опухоли молочной железы (Read et al., 1983, El-Ashry et al., 15S9). Снижение уровня рецепторов прогестерона под действием RU486 трудно объяснить, исходя только из антагонистических свойств RU4S6. Известно, что прогестерон и его аганисты вызывая-г уменьшение количества собственных рецепторов, поэтому можно было бы ожидать, что под действием RU486 число этих рецепторов увеличится. Следовательно, снижение /ровня рецепторов прогестерона под действием RU486 можно отнести к числу не антагонистических, а атомистических эффектов.

До последнего времени случая антагонистического действия RU486 не находили Лъясненма. Однако, данные последних лет позволили отчасти прояснить гротиворечнвость действия RU486. Как уже упоминалось, рецептор прогестерона »держит два автономно функционирующих участка, ответственных за активацию гранежрипцт. Первый ыз них расположен в N-концевой части молекулы и является ■конститутивно" активным, т.е. работает независимо от присутствия лиганда. Второй "часток расположен в гормон-связыватошеы центре рецептора, и его активность зависит >т присоединения гормона. В комплексах агонист-рецептор активны оба участка, но в »колах« рецептора с RU486 гормон-завненмий участок не функционирует (Meyer et at., 990). Очевидно, присоединение антипрогесгина изменяет конформацию рецептора таким фразам, • го горион-зависнмый участок не функционирует, тогда как активность нерпою частка сохраняется и обусловливает агонистическое поведение RU486 (M-*yer et al.. 1990,

* :

Baulieu, 199!). Эти данные подтверждают предположение о том, что снижение конценгр;щии рецепторов прогестерона под влиянием RU486 может быть вызвано подавлением синтеза рецепторов на уровне транскрипции.

Известно, что прогестерон дозозаоисимо снижает число собственных рецепторов за счет увеличения скорости деградации рецепторов и подавления их синтеза на уровне транскрипции (Nardulli and Katzer.ellenbogen, 1988; Alexander et al., 1989). Наши данные свидетельствуют о том, что влияние RU486 на уровень рецепторов прогестерона также зависит от дозы вводимого препарата (введение низкой дозы RU486 вызывало изменение содержания рецепторов прогестерона только в цитозоле, тогда как иведение высокой дозы RU486 вызывало изменение концентрации рецепторов и в цитозоле и в ядре). То, что введение низкой дозы RU486 вызывает изменение концентрации только цитозольных рецепторов, можно объяснить следующим образом. Согласно существующим представлениям, к "цитозольным" относятся рецепторы, непрочно удерживаемые в ядре и выходящие из него в процессе гомогенизации, а также вновь синтезированные рецепторы. Можно предположить, что рецепторы, непрочно удерживаемые в ядре и выходящие из него в процессе гомогенизации, быстрее подвергаются деградации. Одновременное подавление синтеза рецепторов на уровне транскрипции снижает число вновь синтезированных рецепторов. Таким образом, уровень рецепторов в цитозоле, возможно, более чувствителен к воздействию гормона, поэтому низкая доза RU486 снижает число цитозольных рецепторов, не влияя при этом на концентрацию рецепторов в ядре.

Какова роль снижения уровня рецепторов прогестерона в механизме абортивного действия RU486, пока неясно. Показано, однако, что уровень рецепторов прогестерона падает при самопроизвольном и при индуцированном абортах (Асрнбекова с соавт., 1985). Более того, имеются данные о том, что у крыс RU486 вызывает аборт только на той стадии беременности (10 дней), на которой он может снижать концентрацию рецепторов прогестерона (Suzuki, Saito' and Hiroi, 1987). Все эти данные вместе с нашими результатами позволяют предположить, что изменение уровня рецепторов прогестерона играет важную роль в механизме аборта.

Наряду с уменьшением числа рецепторов прогестерона, наблюдалось увеличение концентрация рецепторов эстрадиола через 36 часов после введения 600 мг или трехкратного введения 25 мг RU486. Следует сказать, что Хилл с остр. (Hill et al.; 1990) не обнаружили изменения уровня рецепторов эстрадиола в децидуаЯьной ткани, полученной в момент выкидыша при аборте, индуцированном RU486. Но такое различие результатов, возможно, объясняется разными временными интервалами от введения RU486 до момента взятия ткани. Повышение уровня рецепторов эстрадиола под действием ÄU486 может быть связано с тем, что он блокирует ингибнрующее действие прогестерона на синтез рецепторов эстрадиола. В опытах иа животных показано, что прогестины снижают содержание рецепторов эстрадиола и подавляют их увеличение при введении эстрадиола (Brenner et al., 1979; Leavitt et al., 1983). С другой стороны, имеются данные о том, что у крыс RU486 блокирует ингибнрующее действие прогестерона на уровень ядерных рецепторов эстрадиола (Oculicz, 1987, Fuentealba et al., 1988a, 1988b).

<

Следует отметить, что повышение уровня рецепторов эстрадно на в цитозоле децидуальной ткани женщин наблюдали также при самопроизвольном аборте (Асрибгкова М.К. с со авт., 1985), и в сочетании со снижением общего числа рецепторов прогестерона это приводило к значительному изменению соотношения числа рецепторов прогестерона к э «радиола в пользу последних. Соотношение числа рецепторов эстрогенов и прогестерона увеличивалось тахже и при аборте, индуцированном простаглаидннамн, поэтому можно предположить, что это увеличение играет важну« роль в механизме прерывания беременности.

Таким образом, полученные результаты показывают, что абортивное действие 5Ш486, наряду с прямой блокадой действия прогестерона, включает снижение концентрации рецепторов прогестерона и изменение соотношения числа рецепторов прогестерона и эстрогенов в пользу последних.

2. Содержаниепростягяаняинов ПГЕ2 и ПГРрд в децидуальной ткани и метаболита П1 1-т а в плазме крови женщин при введении ЯЦ486.

Как Следует из данных, представленных в таблице 3, через 12 часов после приема 600 мг 1Ш486 содержание ПГТтц в децидуальной ткани женщин было на 76% выше, чем у

женщин, получавших плацебо. Через 36 часов после приема 600 мг 1Ш486 содержание ПГр2а в децидуальной ткани увеличивалось еще больше и в два раза превышало

контрольные величины. После трехкратного приема 1Ш486 в дозе 25 мг повышение содержания ГОТ2а было недостоверным, а через 12 ч после введения 25 мг 1Ш486 этого

эффекта не наблюдали. Достоверных изменений уровня ПГЕ2 не обнаружено.

Таблица 3. Содержание простагландинов в децидуальной тканн (М+т).

Группа Содержание простагландина пг/мг белка Содержание простагландина Е2, пг/мг белка

Плацебо, 12 ч 75,9+15,2 53,8 ± 20,0

л 12 7

25 мг 1Ш486,12 ч 65,1 ±15,5 45,9 ± 16,7

п 8 6

600 мг1Ш486, 12 ч 131,6 + 24,5* 83,6 ± 19,8

п 11 12

Плацебо, 36 ч 118,0+11,3 86,5± 13,1

л 10 8

3 х 25 мг 1Ш486, 36 ч 145,2 + 22,6 ' 63,1 ± 15,7

п 15 15

600 мг 1Ш486, 36 ч 271,1 ±58,6* 79,1 ± 17,1

л 11 11

Примечания: * - р<0,05 достоверность по отношению к соответствующей группе плацебо по критерию Манна-Вилькоксона-Уитаи. •

Полученные нами данные свидетельствуют о том, что в условиях in vivo под воздействием RU486 в децидуальной ткани женщин резко увеличивается содержание ПГР2а, причем выброс ПГ предшествует наступлению аборта. Аналогичные данные были

получены недавно английскими исследователями (Norman et al., 1991), которые наблюдали повышение содержания ПГТта в децидуальной ткани женщин через 24 часа

после приема 600 мг RU486. Увеличение синтеза ПГ под действием RU486 было обнаружено также в изолированных клетках, эндометрия (Kelly et al., 1986) и децидуальной ткани женщин (Smith, Kelly, 1987).

Повышение содержания ПГ в децидуальной ткАни под влиянием RU486 является, вероятно, следствием блокады действия прогестерона, который, как известно, ингибирует образование ПГ (Abel, Baird, 1980; Tsang, Ooi, 1982). П<з,всей видимости этот эффект RU486 в значительной мере обусловлен тем, что он блокирует угнетающее действие прогестерона на высвобождение арахндоновой кислоты из фосфолипидов. Показано, что прогестерон подавляет высвобождение арахндоновой кислоты в стимулированных клетках эндометрия (Wilson et al., 1986), по-видимому, за счет угнетения фосфолипаз А2 и С и диацил- и моноацилглицераз (Casey et al., 1985). Известно также, что прогестерон снижает активность циклооксигеназы - ключевого фермента в синтезе ПГ. Можно допустить, что повышение синтеза ПГ под действием RU486 связано и с повышением активности циклооксигеназы. На такую возможность указывают*данные о том, что RU486 и в присутствии экзогенной арахндоновой кислоты стимулирует секрецию ПГИ^

железистыми клетками эндометрия человека (Smith, Kelly, 1987) и уменьшает угнетающее действие прогестерона на синт«з простаноидов в матке крысы (Jeremy, Dandona, 1986).

Влияние RU486 на образование ПГ, вероятно, связано как с блокадой рецепторов прогестерона, так и с уменьшением их количества, а также с увеличением числа рецепторов эстрогенов.

Повышение содержания ПГ в децидуальной ткани под действием RU486 может быть связано и с подавлением их метаболизма. Показано, что RU486 подавляет метаболизм ПГр2а в децидуальной ткани ив миометрии морских свинок (Kelly, Buckman,

1990), а также в железистых клетках эндометрия человека (Smith, Kelly, 1987). По всей видимости, этот эффект осуществляется на уровне 15-оксипростагландиндегидрогеназы, катализирующей превращение ПГ в неактивный 15-кетометаболит. Имеются данные о гом, -что у кроликов при введении прогестерона повышается активность 15-оксипростагландин-дегидрогеназы в легких (Bedwani, Marley, 1975; Flower, 1977).

Повышение концентрации ПГРзц ® плазме крови матери во время родов сопровождается увеличением уровня основного метаболита nrFja - 15-кето-13,14>-дшидро-ПГР2а (MnrF2a) (Dray, Fryd.nan, »976; Chodgaonkar, 1979). Содержание МПГРтд в плазме отражает скорость синтеза ПГР^ в организме более точно, чем содержание самого Г1П;2а, т.к., в отличие от последнего, он не образуется в крови

(Karim, Amy, 1975). Как видно из данных, представленных в таблице 4, мы не нашли повышения уровня' МП!Т2а в плазме под действием RU4S6. По всей видимости,

увеличение содержания ПГ в дгцидуальной ткани под действием Е114г<6 может быть недостаточно вглнхо, чтобы вызывать заметные изменения концечгр.^г и; мстдболита в крови.

Таблица Л. Содержание метаболита ПГР^ в плазме крови (М±ш).

Группа Содержание МПГр2а, пг/мл плазмы

до введения препарата после введения препарата, перед вакуум-аспирацией

Плацебо, 12 ч п 43,8+16,1 7 54,1+9,7 12

25 мг RU486, 12 ч п 75,7+35,5 б 55,1+17,1 9

600 мг RU486, 12ч п 49,8+15,9 7 53,9+10,5 11

Плацебо, 36 ч п 41,7±10,2 8 51,0+6,8 8

3 х 25 мг RU486, 36 ч л 37,3+9,3 7 . 23,9+5,0 8

600 мг RU486, 36 Ч п 46,8+7,7 16 60,1+17,1 16

По современным представлениям, ПГ играют ключевую роль в инициации родов и в механизме самопроизвольного прерывания беременности (Морозов« М.С. с соавт., 1994, Casey, MacDonald, 1990). Обнаружено, что у крыс абортивное действие RU486 блокируется ингибиторами биосинтеза ПГ(СаЬго1 et al., 1991). На фоне действия RU486 внутримышечная инъекция ПГ в дозах, которые сами по себе не вызываю! эффекта, резко увеличивает тонус матки, частоту и амплитуду сокращений, при этом эффективность прерывания беременности возрастает с 76,5% до 95% (Swahn et al., 1985). Этот факт может свидетельствовать как о том, что RU486 повышает образование ПГ так и о том, что он увеличивает чувствительность матки к ПГ. Эти данные позволяю) предположить, что повышение концентрации ПГ является, обязательным звеном в механизме абортивного действия RU486. Однако, нельзя с уверенностью сказать, что абортивное действие RU486 осуществляет«« только за счет повышения содержания П1. По всей видимости, механизм абортивного действия RU486 является более сложным, но пока этот вопрос остается открытым, поскольку не изучен до конца механизм действия самого прогестерона.

Возникает также вопрос о том, каким образом увеличение концентрации Ш к децидуальной ткани может влиять на сокращение матки. Возможно, увеличение содержания ПГ идет параллельно в децидуальной ткани и в миометрии, но до счх пор

этот вопрос не исследовался в связи с трудностью получения ткани миометрия. Можно, однако, допустить, что содержание ПГ увеличивается только в децидуалыюй ткани, а оттуда ПГ поступают в миометрий, вызывая его сокращение.

Наконец, повышение концентрации ПГ в децидуалыюй тканн само по себе может играть важную и даже решающую роль в отторжении плодного яйца, в частности за счет нарушения кровоснабжения плода.

3. Содержание цАМФ в деиидуальной ткани женщин при введении RU486.

Содержание цАМФ в децидуальной ткани (таблица 5) при введении RU486 не менялось, и только через 36 часов после введения 600 мг наблюдалась тенденция к его снижению.

Ранее в нашей лаборатории было показано, что в децидуальной ткани концентрация цАМФ в несколько раз выше, чем в эндометрии вне беременности (Гончарова В.Н. с соавт., 1987), и она постепенно возрастает в процессе беременности (Морозова М.С. с соавт., 1988; Hart et al., 1985). С другой стороны, при аборте, вызванном сульпростоном, и при самопроизвольном аборте содержание цАМФ в децидуальной ткани резко уменьшается (Разина Л.Г. с соавт., 1982, Морозова М.С. с соавт., 1988,). Вряд ли можно считать это снижение результатом отторжения децидуальной ткани, поскольку при введении низких доз простагландинов, вызывающих расширение шейки матки, еще не сопровождающееся отторжением 'децидуальной ткани, также происходит падение уровня цАМФ, но менее значительное, чем при аборте, вызванном простагландинами в те же сроки беременности (Разина Л.Г. с соавт., '1982, Асрибекова М.К. с соавт., 1983).

Таблица 5. Содержание цАМФ в децидуальной ткани женщин (М±т).

Группа Содержание цАМФ, пг/мг белка

Плацебо, 12 ч 442,2 ±59,3

л 25

25 MrRU486, 12 ч 431,5 + 70,6

п 18

600 мг RU486, 12 ч 337,1 ±46,2

п 23

Плацебо, 36 ч 429,7 ±43,2

п 20

3 х 25 мг RU486, 36 ч 426,4 ±42,1

л 18

600 мг RU486, 36 ч 317,7 ±44,5

л 22

Следует отметить, что при самопроизвольном аборте уровень простагландннов в децидуальной ткани бьп значительно выше, чем после введения RU486. При аборте, нглмшровлшом введением синтетических ПГ, как группы (Л- Г. Разина с соавт.,

1982), так н группы Е2 (М. С. Морозова с соавт., 1988), их концентрация в ткани также, по-видимому, намного превышает тот уровень, который мы обнаружили при введении 1*11486. Возможно, что именно это повышение и приводит к снижению уровня цЛМФ, поскольку для ПГ группы Е2 показано, что при их продолжительном массированном воздействии они подавляют образование цАМФ за счет десенситнзацин аденилатииклазы (Гончарова В. Н. с соавт., 1989, воиггаи « «I., 1990). А при введении 1Ш486 з децидуальной ткани,' извлеченной зя 12-24 часа до начала выкидыша уровень ПГ был, очевидно, еще недостаточно высок, чтобы вызвать заметное снижение концентрации цАМФ.

Процессы «борта и родов представляют собой сложный комплекс биохимических и физиологических реакций. До сих пор зти процессы мало изучены. Возможно, что аборгы разной этиологии инициируются различными факторами, однако не исключено, ню определенные стадии этого процесса могут быть универсальными. Очевидно, что определенную роль в индукции преждевременных родов могут играть изменения функциональной активности децидуальной ткани, поскольку именно ■ ней происходит развитее оплодотворенной' яйцеклетки и функционирует фето-плацентарная система.

Есть основания считать, что • механизме прерывания беременности ключевую роль играют ПГ. так как введение женщинам ПГ прн любом сроке беременности, вызывает аборт и стимулирует нормальные роды, а ингибиторы биосинтеза ПГ задерживают преждевременные роды. Ранее мы показали, что при самопроизвольном аборте в децидуальной ткани резко повышается концентрация ПГ и одновременно снижаются концентрация рецепторов прогестерона и содержание цАМФ. При ПГ-индуцированном ■борге также наблюдается снижение концентрации рецепторов прогестерона и уровня цАМФ. Тот факт, что аналогичные изменения происходят при разного типа абортах, позволяет предположить, что они являются важными звеньями в механизме развития аборта. Вместе с тем остается неясным, какова последовательность и причинная взаимозависимость этих изменений, поскольку исследовали децидуальную ткань, полученную во время отторжения плода. В настоящей работе мы определяли содержание рецепторов прогестерона и эстрогенов, а также концентрацию простагландинов Е2 и Р2а.

и уровня цАМФ в децидуальной ткани, полученной за 24 часа до начала выкидыша, что давало возможность выявить изменения, предшествующие наступлению аборта.

Результаты исследования показали, что при введении 111)486 в децидуальной ткани задолго до наступления аборта снижается содержание рецепторов прогестерона и повышается уровень рецепторов эстрогенов и концентрация ПГ. Эти данные позволяют предположить, что действие 1*11486 в децидуальной ткани развивается следующим образом. Блокада под действием 1*1)486 рецепторов про!есгерона и уменьшение их числа снимает тормозящий эффект прогестерона на образование ПГ, и их содержание повышается. Повышению уровня ПГ, возможно, способствует и изменение соотношения

4.

числа рецепторов эстрогенов и прогестерона в пользу первых, так как эстрогены стимулируют синтез ПГ. Увеличение содержания ПГ, вероятно, вызывает снижение концентрации цАМФ, но это снижение происходит на более поздних стадиях. В результате указанных изменений нарушается кровообращение в децидуальной ткани и трофобласте, что ведет к необратимым изменениям, вызывающим отторжение децидуальной ткани и плода. Кроме того, ПГ, образовавшиеся в децидуальной ткани, могут поступать через местный кровоток в .прилежащий миометрий и стимулировать его сократительную активность, что повлечет за собой изгнание плода из полости матки.

Таким образом, результаты нашего исследования свидетельствуют о том, что в процессе развития аборта, задолго до начала выкидыша, под действием 1Ш486 в децидуальной ткани происходит снижение числа рецепторов прогестерона и повышение уровня ПГ, и начинает уменьшаться содержание цАМФ. Этот факт позволяет предполагать, что и в случае самопроизвольного аборта упомянутые изменения являются не следствием выкидыша, а факторами, играющими важную роль в его развитии. Более детальное изучение изменений функциональной активности децидуальной ткани в динамике при самопроизвольном аборте и при различных видах терапевтического аборта должно способствовать выяснению механизма самопроизвольного аборта и родовой деятельности вообще, а также поиску путей предотвращения преждевременных родов.

Важным результатом настоящего исследования является обнаружение агонистических свойств у препарата, который используется как. гейльный антагонист прогестерона. Вероятно, нельзя исключить наличия и других, еще не идентифицированных, проявлений агонистического влияния 1Ш486, которые могут выражаться в регуляции экспрессии прогестерон-зависимых белков. Очевидно, эти свойства 1Ш486 требуют дальнейшего изучения, тем более что в настоящее время он широко применяется в мире для прерывания беременности ранних сроков.

ВЫВОДЫ.

1. После введения женщинам 1Ш486 общее содержание рецепторов прогестерона в децидуальной ткани снижается, причем характер его снижения зависит от схемы введения препарата. В дозе 600 мг Я11486 уже через 12 часов вызывает уменьшение концентрации ядерных и цитозольных рецепторов, и через 36 часов концентрация рецепторов остается сниженной. Через 36 часов после трехкратного введения 1Ш486 в дозе 25 мг с 12-часовыми интервалами наблюдается уменьшение числа цитозольных рецепторов прогестерона, число ядерных рецепторов не меняется.

2. Общее содержание рецепторов эстрогенов в децидуальной ткани повышается через 36 часов после однократного введения 600 мг 1Ш486 и трехкратного введения 25 мг, и не отличается от контроля через 12 часов после введения 600 мг 1Ш486.

3. Рри однократном введении 600 мг К11486 содержание ПГЯ2а в децидуальной ткани

увеличивается через 12 часов п продолжает повышаться ' через 36 часов; после трс\кпат|Юго введения 25 мг 1Ш486 с 12-часовыми интервалами содержание ПГр2а не

изменяете». Поаь.шекмг содержания nrFja в децидуальной ткани ив сопровождается увеличением концентрация его метаболита в плазме.

4. При ксслецовчнных схемах явсдсиия RU486 концентрацияПГЕ2 в децидуальной ткани не меняется.

5. Уровень цАМФ в децидуальной ткани не претерпевает существенных изменений после введения RU436.

6. Полученные даккые показывают, что «бортивное действие RU486 в децидуальной ткани связано не только с блокадой действия прогестерона на уровне рецепторов, но и с уменьшением числа рецепторов прогестерона, изменением соотношения рецепторов прогестерона и эстрогенов в сторону относительного увеличения рецепторов эстрогенов и повышением содержания простагландннов.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. T.S. Zaytseva, V.N. Goncharova, M.S. Morozova, T.M. Astakhova, I.A. Manuilova, Yu.A. Pankov. Influence of RU486 on the level of progesterone and. estrogen receptors in decidual tissue of women//Intern. Congr. of Endocr., 9-th: Abstracts. - France, 1992. - P. 474.

2. T.S. Zaytseva, V.N. Goncharova, M.S. Morozova, T.M. Astakhova, I.A. Manuilova, Yu.A. Pankov. The effect of RU486 on progesterone and estrogen receptor concentration in human decidua on early pregnancy//Human Reprod. - 1993,-Vol. 8.-P. 1288-1293.

3. Yu.A. Pankov, T.S. Zaytseva, V.N. Goncharova, M.S. Morozova, T.M. Astakhova, I.A. Manuilova. The effect of RU486 on PG and cAMP levels in early pregnancy // Endocrine Society. Annual Meeting, 75-th: Program and Abstracts.'- Las Vegas, Nevada, 1993. - P. 319.

4. T.C. Зайцева, B.H. Гончарова, M.C. Морозова, M.K. Асрибекова, С.К. Карпова, T.M. Астахова, JI.E. Мурашко. Роль рецепторов половых гормонов, простагландннов и цАМФ в функциональной активности матки // Вестник Российской Академии Медицинских Наук. - 1994. - № 12. - С. 13-16.

5. Т.С. Зайцева, В.Н. Гончарова, М.С. Морозова, Т.М. Астахова, И.А. Мануйлова, Ю.А.

Панков. Влияние антапрогестина RU486 на содержание простагландннов и цАМФ в децидуальной ткани и уровень в плазме метаболита простагландина Fja У жентнн на

раннйх сроках беременности. Акушерство и Гинекология, в печати.

Участок множительной техники ОНЦ РАМН Подп.к печати Ш. 96 , Заказ 2 7 . Тираж { 00 ■