Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Метаболические и гинетически детерминированные признаки неразвивающейся беременности

ВАК РФ 03.01.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Метаболические и гинетически детерминированные признаки неразвивающейся беременности"

На правах рукописи 005004953

МЕЛЕШКИНА Ольга Игоревна

МЕТАБОЛИЧЕСКИЕ И ГЕНЕТИЧЕСКИ ДЕТЕРМИНИРОВАННЫЕ ПРИЗНАКИ НЕРАЗВИВАЮЩЕЙСЯ

БЕРЕМЕННОСТИ

03.01.04 - Биохимия 14.01.01 - Акушерство и гинекология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

- 8 ДЕК 2011

Уфа 2011

005004953

Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Самарский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации

Научные руководители: Заслуженный деятель науки РФ,

доктор медицинских наук, профессор

Гильмиярова Фрида Насыровна;

доктор медицинских наук

Спиридонова Наталья Владимировна

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор

Гильманов Александр Жанович

доктор медицинских наук, профессор

Брюхина Елена Владимировна

Ведущая организация - Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Омская государственная медицинская академия» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации

Защита состоится «_» _2011 г. в_часов на

заседании диссертационного совета Д 208.006.03 при Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Башкирский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации (450000, г. Уфа, ул. Ленина, 3).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Башкирский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации.

Автореферат разослан «_»_2011 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

доктор медицинских наук, профессор Г.Х. Мирсаева

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. Проблема сохранения репродуктивного здоровья выходит за рамки биомедицинской, этической и носит общегосударственный характер, так как сопряжена с решением демографической проблемы, психосоматическим здоровьем населения. Патология репродуктивной системы, имеющая мультифакториальную природу, затрудняет адресную раннюю диагностику, возможность использования превентивных мероприятий. В условиях неблагоприятной демографической ситуации, когда каждые пять лет на 20% уменьшается число женщин, способных родить ребенка, особенно актуально сохранение и развитие беременности у супружеских пар, желающих иметь детей (Радзинский В.Е. с соавт., 2008). С 2000-2001года в активную фазу репродукции вступила популяция женщин, имеющих серьезные проблемы с репродуктивным здоровьем (Ушакова Г.А. с соавт., 2006). По данным коллегии МЗ РФ (2010), ежегодно в нашей стране каждая пятая желанная беременность оканчивается потерей. Неразвивающаяся беременность является одной из ключевых причин невынашивания. Удельный вес неразвивающейся беременности в структуре репродуктивных потерь довольно высок и составляет 10-20% (Доброхотова Ю.Э., Савченко Т.Н., 2002; Доброхотова Ю.Э., 2008). Более того, установлено, что в I триместре беременности неразвивающаяся беременность является причиной репродуктивных потерь в 45-88,6% случаев (Газазян М.Г. с соавт., 2000; Салов, И.А., 2000; Сметник, В.П., 2001; Доброхотова, Ю.Э., 2002; Баранов, И.И., 2005; Кулаков, В.И., 2005; Несяева Е.В., 2005; Радзинский В.Е., 2005; Стрижаков А.Н., Игнатко И.В., 2007; (Згаиов! в-С. а!., 2005; ЗойпасНв А. & а1., 2005).

Задержка погибшего эмбриона в матке негативно влияет на эмоциональное и физическое состояние женщины, угрожает не только" её здоровью, но и жизни за счёт возможных гемостазиологических и инфекционных осложнений (Винницкий О.И., 1986; Марченко Л.А., 1997; Сафронова М.М., 1997). Перенесенная неразвивающаяся беременность отрицательно сказывается на репродуктивной функции

женщин: у 27,4% из них формируется привычное невынашивание беременности (Ю.Э. Доброхохотова, 2002, В.А. Линде, 2009).

В настоящее время изучается наличие хромосомных аберраций у супругов с выкидышами в анамнезе, у абортусов, особенности аллельного полиморфизма генов, контролирующих важнейшие для сохранения беременности метаболические процессы: гены системы детоксикации (GSTM1, GSTT1, GSTP1); фолатного обмена (MTHFR, MTRR); гены факторов свертывания крови (Fl, FII, FV); а также HLA-системы (DQA1, DQB1, DRB1, HLA-G); фактора роста (VEGF) (Хамадьянов У.Р., 2006; Мутовин Г.Р., 1997; Сидельникова В.М., 2005; Иващенко Т.Э. и др., 2006; Притчард Д. Дж. и др., 2009).

Несмотря на то, что эта проблема привлекает достаточное внимание исследователей, в первую очередь акушеров - гинекологов, причины, предпосылки развития замершей беременности однозначно не выяснены, а зачастую и спорны. Актуальным является проведение цитогенетических исследований, раскрывающих генетическую составляющую этой многофакторной патологии.

Исследований, изучающих ассоциированность такого генетически детерминированного фактора, как ABO группа крови с частотой и причинами неразвивающейся беременности, хромосомными аберрациями эмбрионов, остановившихся в развитии, клеточным составом крови, форменные элементы которой обладают широким спектром биологического действия, а также с гемостазиологическими и метаболическими параметрами не проводилось.

Настоящее исследование выполнено в рамках Федеральной программы научно-исследовательских работ: «Новые возможности индивидуализации донозологической диагностики и оптимизации лечебных мероприятий с учетом молекулярно-генетических особенностей организма и алиментарных факторов» (номер госрегистрации 0120.0809697).

Цель исследования: оценить ответную реакцию организма женщины на неразвивающуюся беременность при различных вариантах патологического кариотипа эмбрионов

Задачи:

1 .Провести анализ распределения неразвивающейся беременности в структуре невынашивания беременности у женщин городского округа Тольятти.

2.Проанализировать анамнестические данные женщин с настоящей и повторной неразвивающимися беременностями для выявления значимых причин, сопряженных с невынашиванием.

3 .Используя цитогенетический метод исследования, изучить распределение нормального и патологического кариотипов эмбрионов среди женщин с 0(1)-АВ(1У) группами крови и неразвивающейся беременностью.

4.Выяснить характер патологии хромосомного набора эмбрионов, остановившихся в развитии, у женщин с различными группами крови.

5.Сопоставить клеточный состав крови, гемостазиологические и биохимические показатели у женщин при неразвивающейся беременности с различными видами хромосомных аберраций эмбрионов.

Научная новизна. Получены новые данные, дополняющие спектр факторов, сопряженных с неразвивающейся беременностью. Установлено, что риск развития эмбриона с хромосомной патологией при неразвивающейся беременности увеличивается с возрастом женщины: после тридцати лет частота встречаемости и тяжесть хромосомных аберраций достоверно возрастает. Негативным этиологическим фактором неразвивающейся беременности является повторная беременность, при которой в 2,7 раза чаще происходит остановка развития эмбриона. Получены новые данные, свидетельствующие об ассоциированности хромосомной патологии эмбриона, остановившегося в развитии, с А(П) группой крови. При наличии В-антигенных детерминант регистрация

хромосомных аберраций у женщин с В(Ш) группой крови - минимальна. Цитогенетическое исследование ворсин хориона и плаценты при неразвивающейся беременности позволило выявить характерные тенденции распределения патологического кариотипа эмбрионов при неразвивающейся беременности в связи с различной групповой принадлежностью крови матери. Наиболее часто встречающаяся аутосомная трисомия преобладает у женщин В(Ш) группой крови, триплоидия чаще встречается у женщин с АВ(1У) группой крови, Новыми данными являются результаты оценки ответной реакции организма женщины на замершие эмбрионы с патологическим кариотипом. В организме женщин с неразвивающейся беременностью выявлены ранние косвенные доклинические признаки эмбриона с патологическим кариотипом, заключающиеся в лимфоцитозе и нейтропении. При остановке развития эмбриона с нормальным кариотипом эти сдвиги не определяются. Характерна также достоверная активация аспартатаминотрансферазы - показателя катаболической направленности метаболизма и инверсии в использовании субстратов белковой природы в качестве энергетических предшественников вместо углеводных ресурсов.

Научно-практическая значимость. Полученный комплекс данных раскрывает закономерность формирования неразвивающейся беременности среди женщин с различными группами крови. Выявление лимфоцитоза и нейтропении, активация аспартатаминотрансферазы у женщин без соматической патологии при неразвивающейся беременности может служить косвенным признаком патологии хромосомного набора эмбриона, что подтверждено проведением цитогенетических исследований. Установление кариотипа эмбриона дополняют сведения о генетическом полиморфизме, частоте и спектре хромосомного дисбаланса в накоплении знаний о неразвивающейся беременности. Полученные данные могут способствовать более точной оценке риска формирования у плода пороков развития, способствовать анализу мутационного процесса,

разработке алгоритмов и организации мероприятий, направленных на снижение репродуктивных потерь.

ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ:

1.Ключевое положение неразвивающейся беременности в структуре невынашивания. Доля этой патологии составляет 32,3% среди репродуктивных потерь I триместра беременности. Преобладающей причиной у женщин без соматической патологии являются хромосомные аберрации эмбриона.

2.Распределение нормального и патологического кариотипа эмбрионов, у женщин с различной ABO групповой принадлежностью при неразвивающейся беременности.

3.Частота встречаемости кариотипически аберратных эмбрионов у женщин с неразвивающейся беременностью и 0(I)-AB(IV) труппами крови.

4.Комплекс признаков неразвивающейся беременности: анамнестических, цитогенетических, гематологических, гемостазиологических, метаболических, ассоциированность с ABO группами крови. -

ВНЕДРЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ В ПРАКТИКУ. Теоретические положения и практические рекомендации диссертации используются в работе межрайонного перинатального центра муниципального учреждения здравоохранения клинической больницы №5 г.о. Тольятти, а также в учебном процессе на кафедрах фундаментальной и клинической биохимии с лабораторной диагностикой, акушерства и гинекологии института последипломного образования Самарского государственного медицинского университета.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ. Результаты диссертационной работы представлены на «Аспирантских чтёниях» (Самара, 2009), научно-практической конференции «Тольяттинская осень - 2010. Неотложные состояния в практике многопрофильного стационара» (Тольятти, 2010), Национальных днях лабораторной медицины России - 2010, «Лабораторная наука - практике: первое

десятилетие XXI века», (Москва, 2010), Тольяттинском медицинском консилиуме «Современные перинатальные технологии» (Тольятти, 2011), Рос-сийской научно-практической конференции «Медицинская биохимия и клиническая лабораторная диагностика в аспекте модернизации системы научных исследований» (Омск, 2011), Национальных днях лабораторной медицины России - 2011, «Обеспечение доступности современных клинических лабораторных исследований: аналитические возможности, клинические потребности, организационно-экономические, условия» (Москва, 2011), на совместном заседании кафедр фундаментальной и клинической биохимии с лабораторной диагностикой, акушерства и гинекологии института последипломного образования Самарского государственного медицинского университета, Самарского регионального отделения Всероссийского общества молекулярных биологов и биохимиков, Ассоциации специалистов по клинико-лабораторной диагностике Самарской области (Самара, 2011).

ПУБЛИКАЦИИ. По материалам диссертации опубликовано 8 работ, из них 4 - в журналах, рекомендованных ВАК Министерства образования и науки РФ, имеется 1 патент.

ОБЪЕМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, главы, посвященной объекту и методам исследования, трех глав собственных данных, заключения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы. Работа изложена на 152 страницах, иллюстрирована 18 рисунками, содержит 25 таблиц. В работе использовано 203 литературных источников, из них 130 отечественных и 73 зарубежных авторов.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования.

Исследования проводились на базе муниципального учреждения здравоохранения клинической больницы №5 городского округа Тольятти Самарской области (главный врач к.м.н. H.A. Ренц), кафедрах фундаментальной и клинической биохимии с лабораторной диагностикой,

акушерства и гинекологии ИПО СамГМУ. Работа проводилась в соответствии со следующим дизайном (рис.1).

102 женщины с физиологической беременностью

328 женщин с неразвивающейся беременностью

Характеристика показателей клеточного состава и метаболизма у женщин с физиологическим течением и неразвивающейся беременностью

Клинико-анамнестические данные и показатели периферической крови у женщин с 0(1)-АВ(1У) группами крови

Из них 88 женщин с неразвивающейся беременносгью с известным кариотипом эмбриона :

1

Основные показатели хромосомной патологии, выявленной при кариотипировании эмбрионов, остановившихся в развитии

У

Ассоциированность кариотипов эмбрионов при неразвивающейся

беременности с генетически детерминированным признаком -0(1)-АП(1У ) группами крови матери

Рис.1 Дизайн исследования

Оценка влияния

клинико-анамнестических данных на частоту хромосомных аномалий при неразвивающихся беременностях

Клинико-анамнестические данные и показатели периферической крови у женщин с

0(1)-АВ(1У) группами крови в I и II триместре Ярпрмрннпгти

Частота встречаемости неразвивающейся беременности у женщин с 0(1)-АВ(1У) группами крови

Ассоциированность патологических кариотипов эмбрионов при неразвивающейся беременности с данными анамнеза, гематологическими и биохимическими показателями крови женщин с неразвивающейся беременностью

Обследовано 328 женщин с диагнозом неразвивающаяся беременность. Критериями отбора послужили: наличие данных, подтверждающих остановку развития плода, возраст от 19 до 40 (в среднем 30,34±0,34) лет,

срок гестации от 3 до 22 недель. Критериями исключения были: клинические проявления начавшегося выкидыша, присоединения вторичной инфекции, наличие соматической и гормональной патологии, привычное невынашивание беременности (3 и более потери беременности в анамнезе). У 88 женщин был установлен кариотип эмбриона, остановившегося в развитии. Группу контроля составили 102 соматически здоровые женщины с прогрессирующей беременностью по возрасту и срокам гестации совпадающие с опытной группой. Материалом для исследования служила капиллярная и венозная кровь женщины, ворсины хориона и плаценты абортусов.

Определение групп крови системы ABO проводили методами прямой и перекрестной агглютинации на плоскости, моноклональными антителами анти-А, анти-В. Резус- принадлежность - методом реакции агглютинации на плоскости с помощью анти-D супер антител.

Оценку количества эритроцитов, лейкоцитов, тромбоцитов, содержание гемоглобина, показатель гематокрита проводили на автоматическом гематологическом анализаторе «Sysmex КХ - 21» (Япония) с помощью реактивов фирмы «Roch- Diagnostics» (Япония). Дифференцированный подсчет развернутой лейкоцитарной формулы проводили в окрашенных препаратах крови с помощью светового микроскопа «Olympus» (Япония). Скорость оседания эритроцитов определяли по унифицированной методике Панченкова.

Определение концентрации общего белка, креатинина, активность аспартатаминотрансферазы, аланинаминотрасферазы, уровень мочевины, глюкозы, общего и прямого билирубина, фибриногена, АЧТВ производилось на автоматическом биохимическом анализаторе «Hitachi -902» фирмы «Roche» (Япония) с помощью коммерческого набора реактивов фирмы «Roche» (Швейцария). Контроль качества при выполнении исследований осуществляли с использованием контрольной сыворотки «Precinorm», «Precipat» фирмы «Roche» (Швейцария).

Исследование уровня гормонов: пролактина, ЛГ, ФСГ, тестостерона, кортизола, ДГЭА, 17- оксипрогестерона, прогестерона, эстрадиола, ТТГ, хорионического гонадотропина определяли электрохемилюминесцентным методом на автоматическом анализаторе «Elexys 2010» («Roche», Япония) с помощью коммерческого набора реактивов фирмы «Roche» (Германия), твердофазным двухступенчатым «sandwich» - вариантом проведения анализа.

Исследование уровня антител классов Ми G к хламидиозу проводилось методом иммуноферментного анализа реагентами «БХМ» (Германия) с использованием «sandwich» - варианта одноступенчатого твердофазного ИФА на планшетах на иммуноферментном анализаторе «Униплан» (Россия) с применением термостатируемого шейкера Elmi (Литва) и автоматического промывающего устройства «Проплан» (Россия). Определение наличия возбудителей в материале, половых органов проводилось полимеразной цепной реакцией на термоциклере «Perkin Elmer» (Индонезия), с помощью реагентов «Литех» и НИИ эпидемиологии (Россия), с использованием электрофоретической детекции. "*

«г

Препараты для цитогенетического исследования получали по унифицированной методике - ускоренным "прямым" методом (B.C. Баранов с соавт., 1990), идентификацию хромосом осуществляли после рутинного и дифференцированного окрашивания (R-метод, С-метод, G-метод, Q-метод, (Н.Б. Рубцов, 2004; B.C. Баранов с соавт., 1990)).

Статистический анализ данных проводили в среде статистического пакета SPSS 11.5 и Microsoft Excel. Среди описательных статистик приведены среднее арифметическое и его ошибка (М±ш), медиана для количественных показателей; абсолютные и относительные частоты (проценты) для номинальных признаков. Критическое значение уровня значимости принимали равным 0,05.Сравнения количественных показателей в двух групп проводили с помощью критерия t Стьюдента и с помощью критерия Манна-Уитни-

Вилкоксона. Закон распределения большинства изученных показателей соответствовал нормальному закону, при наличии отклонений, применяли параметрические и непараметрические методы. Сравнения в более чем двух группах выполняли с помощью однофакторного дисперсионного анализа с проведением апостериорных тестов по методу наименьшей значимой разности. Исследование взаимосвязей выполняли с помощью корреляционного анализа Кендалла. Для признаков, измеренных в номинальной шкале, выполняли анализ таблиц сопряженности с расчётом критерия у2. Для таблиц сопряженности размерностью 2x2 статистическую значимость оценивали с помощью точного метода Фишера. Для оценки силы влияния групповой принадлежности крови на клинические исходы рассчитывали относительный риск и его доверительный интервал (95% ДИ) (Morris J.A, Gardner М. J., 1988; Реброва О.Ю., 2002; Петри А., 2010).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Анализ исходов беременности у женщин показал, что доля невынашивания составляет 18,8%. Вес неразвивающейся беременности среди них составляет 32,3% (рис.1). То есть у пятой части женщин беременность заканчивается фатально - потерей плода, у трети из них диагностируется неразвивающаяся беременность, характерно, что эту группу репродуктивных потерь составляют молодые женщины в возрасте 30,34±0,34 лет.

?зНевынашивани беременности

: Неразви ва ющ аяся беременность

Рис.1. Доля неразвивающейся беременности в структуре невынашивания

В результате проведения цитогенетического анализа ворсин хориона и плаценты эмбрионов, остановившихся в развитии, нами было установлено, что 61,4% из них были с патологическим набором хромосом. Анализируя клинико-анамнестические данные женщин с неразвивающейся беременностью, было отмечено, что медиана в группе лиц с кариотипически нормальными эмбрионами составила 30,00 лет, а в группе лиц с патологическим кариотипом эмбриона - 32,00 года (рис.2).

■ патологический кариотип эмбриона Ш нормальный кариотип эмбриона

Рис.2. Частота встречаемости патологического кариотипа эмбриона при неразвивающейся беременности

Среди обследованных нами лиц остановка развития плода происходила во время второй и последующих беременностях в 2,7 раза чаще, чем во время первой беременности (рис.3). Высокий процент эмбрионов с патологическим кариотипом (65,3%) при первой беременности, говорит в пользу спорадической хромосомной мутации, точковом воздействии неблагоприятных факторов на гаметы большинства семейных пар и отсутствии у женщин данной группы нарушений, связанных с фактом беременности. Во время второй и последующей беременности сократилось количество аберратных эмбрионов (59,7%), а частота встречаемости эмбрионов с нормальным кариотипом возросла до 40,3%. Это свидетельствует о кумуляции этиологических факторов, способствующих развитию репродуктивных потерь по мере роста числа

беременностей, а также о том, что не во всех случаях хромосомная патологии плода изолировано, приводит к прекращению его развития.

65,3

первая беременность

72,9

I 59,7

вторая и последующая беременность

количество случаев

неразвивающейся

беременности,%

количество

эмбрионов с

нормальным

кариотипом,%

количество

эмбрионов с

патологическим

кариотипом,%

Рис.З. Частота встречаемости эмбрионов с хромосомными аномалиями при первой и последующих беременностях

При анализе особенностей распределения данных цитогенетического исследования в зависимости от генетически детерминированного признака - групп крови (рис.4), было отмечено, что в 0(1) и AB(IV) группах крови распределение однотипное, с преобладанием кариотипически патологических эмбрионов (61,3% и 62,5% соответственно).

У лиц с А(П) группой крови было зарегистрировано максимальное количество патологических эмбрионов (70,8%). Относительный риск возникновения хромосомной аномалии эмбриона у женщин с А(П) группой кровл лиц составил 1,23, при 95% доверительном, интервале 0,88-1,71. У обладательниц В(Ш) группы было

выявлено максимальное число эмбрионов с нормальным кариотипом (48,0%). Относительный риск для данной категории лиц составил 0,8, при 95% доверительном интервале 0,53-1,21. Прослеживается явная тенденция к снижению количества эмбрионов с хромосомными аномалиями у женщин с В(Ш) группой крови.

70,8

Oí i) A(ll) B(lll) AB(IV) группа группа группа группа крови крови крови крови

нормальный кариотип эмбриона

■ патологический кариотип эмбриона

Рис.4. Распределение кариотипов эмбрионов, остановившихся в развитии, у женщин с 0(I)-AB(IV) группой крови

Согласно классификации основных типов хромосомных аномалий (Дыбан А.П. с соавт., 1978; Фогель Ф. с соавт., 1989; Бочков Н.П., 2004), мы выделили пять групп патологий кариотипа эмбрионов, остановившихся в развитии: первую составили моносомии по X-хромосоме; вторую - аутосомные трисомии; третью - триплоидии; четвертую - тетраплоидии и пятую - другие (полисомии) и проанализировали частоту встречаемости. Как видно из рис.5, наибольшую численную группу составили аутосомные трисомии, которые встретились в 59,3% случаев, на втором месте - триплоидии -14,8%, на третьем - моносомии Х-хромосомы и полиплоидии (11,1% и 11,1% соответственно), наименее численная - тетраплоидии - 3,7%.

Таким образом, по частоте встречаемости аутосомная трисомия преобладает над другими видами патологии кариотипа эмбриона, остановившегося в развитии в 4-16 раз.

Мы произвели оценку распределения эмбрионов,

имеющих хромосомную патологию,

полиплоидии; моносомии X;

тетраплоидии; 3,7 НД ИД

триплоидии;

• > . -\

аутосомные трисомии; 59,3

Рис.5. Частота встречаемости различной патологии эмбрионов, остановившихся в развитии

в зависимости от групповой принадлежности крови матери (табл.1). У женщин с 0(1) группой крови встретились все виды хромосомной патологии, основную массу которых составили аутосомные трисомии.

Таблица 1. Распределение кариотипически патологических эмбрионов у женщин с 0(1) - AB(IV) группой крови

Вид аномалии Группа крови

0(1) А (II) В (III) АВ (IV)

Моносомия X 10,5% 17,6% 7,7% 0,0%

Аутосомная трисомия 63,2% 47,1% 76,9% 40,0%

Триплоидия 15,8% 11,8% 15,4% 20,0%

Тетраплоидия 5,3% 5,9% 0,0% 0,0%

Полисомии 5,3% 17,6% 0,0% 40,0%

У женщин с А(Н) группой крови чаще регистрировались моносомия X и полисомии, остальная патология распределилась равномерно. У лиц с В(Ш) группой крови - аутосомные трисомии, триплоидии, а для женщин с АВ(ГУ) - триплоидии, полисомии.

Оценивая клинико-анамнестические данные, гематологические, гемо-стазиологические и метаболические показатели женщин с неразвивающейся беременностью, нам удалось провести анализ в двух направлениях: первое - сравнить параметры женщин, эмбрионы которых имели хромосомный дисбаланс с данными женщин с кариотипически нормальными эмбрионами. Второе - индивидуализировать параметры женщин с патологическими эмбрионами в рамках тяжести хромосомной патологии эмбрионов, остановившихся в развитии, и механизмов их формирования (табл.2).

Таблица 2. Ассоциированность анамнестических данных, гематологических и метаболических показателей с различными видами хромосомной патологии эмбрионов, остановившихся в

развитии

Кариотип эмбриона

Показатели Норма Моно-сомии X Ауто- сомные трисомии Три-плоидии Тетра-плоидии Поли-сомии

Возраст, г 30,56 ±0,76 33,50±2,72 32,84±1,04 26,75 ±1,06*#- 29,00±3,00 33,33 ±2,75

N Бер-тей 2,62 ±0,29 4,17±1,25 2,75±0,37 2,00±0,50 2,50±0,50 2,83 ±0,91

N Абортов 0,82 ±0,22 2,33±1,05 0,59±0,22 0,38±0,26 0,00±0,00 0,83 ±0,83

N Родов 0,50 ±0,10 0,67±0,33 0,63±0,14 0,25±0,25 0,50±0,50 0,17 ±0,17

N Вн/бер 0,03 ±0,03 0,00±0,00 0,03±0,03 0,00±0,00 0,50±0,50 0,00 ±0,00

Срок НБ, нед. 9,32 ±0,57 9,33±1,08 8,44±0,40 6,75±0,59# 6,00±1,50 7,67 ±1,60

явс. х10 /л 4,23 ±0,11 4,05±0,06 4,22±0,05 4,03±0,17 4,12±0,19 4,14 ±0,14

НЬ, г/л 122,67± 3,07 126,60 ±2,01 124,95 ± 1,48 123,33 ±5,73 127,00 ±2.8 127,00 ±4,00

№, % 36,39 ±0,90 38,23 ±2,42 36,35 ±0,57 36,05 ±0,95 37,07 ±0.85 40,35 ±0,65

Ье, х109/л 7,13 ±0,43 8,58±0,91 7,28±0,32 7,53±0,79 7,30 ±0,35 8,90 ±2,70

Ж1Л п/я, % 2,05 ±0,30 2,40±0,68 2,84±0,39 1,83±0,31 1,00 ±0,21 3,50 ±0,50

КЕЬ'Т с/я, % 64,26 ±2,37 69,40 ± 2,94- 62,60 ±1,62 63,67 ±2,29 56,00 ±1,45 52,50 ±7,50

ЬУМ, % 26,89± 2,33 22,60± 1,81- 27,35±1,7 8 26,50±2,9 9 37,00±3, 88 38,00 ±7,00

ЫЕиТ эоз, % 1,63 ±0,36 1,40±0,40 1,95±0,46 0,67±0,49 1,00 ±0,33 1,50 ±0,50

ЫЕиТ баз, % 0,00 ±0,00 0,40 ±0,40* 0,35 ±0,15* 0,17 ±0,17 0,00 ±0,00 0,00 ±0,00

Шит мон, % 5,16 ±0,51 3,80 ±0,58 5,05 ±0,56 7,17 ±1,30 5,00 ±0,50 4,50 ±0,50

СОЭ, мм/ч 14,71 ±1,88 20,80 ±4,87 13,47 ±1,52 12,67 ±1,82 12,75 ±1,72 7,50 ±2,50

РЬТ, х109/л 220,41 ±7,48 248,20 ± 34,73 222,44 ± 11,42 203,60 ± 7,44» 274,00 ±6,92 222,50 ±6,50

Фибриноген, г/л 3,92 ±0,34 3,72±0,35 3,58±0,31 5,37±1,38 3,10 ±0,37 5,55 ±1,41

АЧТВ, сек 32,19 ±1,33 34,25± 2,95 32,08 ±0,94 34,27 ±0,29 33,09 ±1,22 34,10 ±0,84

Общий белок, г/л 69,56 ±1,87 67,60 ±6,60 70,63 ±0,74 72,50 ±3,50 63,55 ±3,57 71,70 ±0,68

Мочевина, ммоль/л 3,56 ±0,31 3,89±1,02 3,84±0,48 2,96±0,36 3,58±0,4 3 2,53 ±0,98

Креатинин, ммоль/л 69,56 ±1,53 65,00 ±6,00 65,75 ±6,42 59,00 ±7,00 72,00 ±2,60 67,75 ±5,12

Общий билирубин, мкмоль/л 9,59 ±1,68 15,35 ±5,15 10,64 ±1,61 8,90±1,80 8,60 ±1,70 8,70 ±1,22

Прямой билирубин 1,84 ±0,83 1,50±0,10 1,64±0,80 2,21±0,15 2,32 ±0,12 2,40 ±0,61

АлАТ, Е\л 23,38 ±5,99 13,75±0,25 24,20±5,80 18,50±6,50 25,50±4,10 11,00 ±3,50

АсАТ, Е\л 17,07 ±1,61 14,90±4,90 19,40±1,40 18,00±4,00 22,50 ±1,22* 23,00 ±1,21*

Глюкоза, ммоль/л 5,85 ±0,66 3,55±0,15 4,59±0,34 4,34±0,77 4,86±0,17 4,87 ±0,71

*р < 0,05 в сравнении с кариотипически нормальными эмбрионами; # р<0,05 в сравнении с хромосомной патологией эмбриона, возникшей вследствие ошибки мейоза; • р < 0,05 в сравнении с более летальной хромосомной патологией эмбриона (например, полисомией).

При анализе данных, полученных при обследовании женщин с неразвивающейся беременностью в зависимости от механизма образования хромосомного дисбаланса, найдено достоверное отличие, свидетельствующее о возрасте более 30 лет, как об отрицательным факторе, сопряженном с развитием патологии кариотипа эмбриона, в основе которой лежит неравномерное расхождение хромосом во время мейоза ооцита. Характерно, что для самого молодого возраста характерно образование патологии кариотипа эмбриона, в основе которого лежит ошибка оплодотворения. Короткий период гестации наблюдается при триплоидии, при моносомных кариотипах отмечен наиболее продолжительный. По гематологическим показателям существенных различий по основным видам хромосомной патологии эмбрионов, остановившихся в развитии, относительно данных при нормальном кариотипе не выявлено. Однако обращает внимание, что при моносомии Х-хромосомы характеризуется отчетливой тенденцией сдвигов в крови женщины: лейкоцитозом, увеличением в крови сегментоядерных нейтрофилов, лимфопенией, ускоренной скоростью оседания эритроцитов. Установлена положительная коррелятивная связь между содержанием базофилов (р=0,049) в крови женщин с патологическим кариотипом эмбрионов. Выявленный комплекс отклонений гематологических показателей отражает формирование готовности организма женщины к отторжению эмбриона с патологическим

набором хромосом.

Об этом свидетельствует изменение баланса клеток, продуцентов биологически активных веществ, биорегуляторов, компонентов иммунной системы, гемостаза. Активация аспартатаминотрансферазы в крови женщин с кариотипически неполноценными эмбрионами служит показателем катаболической направленности обмена, использованием для пополнения энергетических ресурсов продуктов обмена аминокислот (Рослый И.М., Водолажская М.Г., 2010).

Подтверждением негативного значения возрастного фактора являются данные о выявленных отличиях в клеточном составе при полиплоидии, когда в хромосомном наборе эмбриона обнаруживается две и более добавочные хромосомы. Установлено, что в сравнении с моносомией X-хромосомы, менее летальной хромосомной патологией эмбриона, найдены достоверные отличия в крови женщин: наблюдается более выраженный лейкоцитоз за счет увеличения палочкоядерных нейтрофилов и лимфоцитоза (р<0,05), снижение уровня сегментоядерных нейтрофилов (р=0,049), что свидетельствует об иммунологической перестройке в организме. У них отмечается наиболее низкое содержание мочевины при высокой активности трансаминирования с участием аспартатаминотрансферазы. Высокий уровень фибриногена, одного из острофазных белков плазмы крови, и достоверно большее количество тромбоцитов (р=0,044) в сравнении с менее летальной патологией служит показателем готовности организма к элиминации эмбриона с патологией хромосомного набора.

Анализ оценки результатов гематологических, гемостазиологических и метаболических показателей у женщин с остановкой развития кариотипически нормальных и патологических эмбрионов выявил определенные закономерности. Установлено, что при замершей беременности с патологическим кариотипом эмбриона наблюдается обратная корреляция срока настоящей беременности (г= -0,326; р=0,004), доказывающая, что чем более летальна патология эмбриона, тем меньше срок гестации. Выявлена прямая

корреляция с лимфоцитозом (г = 0,275; р = 0,045) и обратная - с количеством сегментоядерных лейкоцитов (г = -0,333; р = 0,016), а также прямая корреляция с активностью аспартатаминотрансферазы (г = 0,643; р = 0,031), свидетельствующие о перестройке организма женщины, направленной на освобождение от дефектного эмбриона.

ВЫВОДЫ

1 .Установлено, что в городскбм округе Тольятти доля невынашивания беременности составляет 18,8%. Удельный вес неразвивающейся беременности среди этих женщин равен 32,3%. Частота встречаемости остановки развития эмбриона возрастает при повторной беременности, ее доля при впервые наступившей беременности составляет 27%, при повторной - 73%. Удельный вес хромосомной патологии у соматически здоровых женщин при неразвивающейся беременности составил 64,1%. Отрицательным фактором, сопряженным с неразвивающейся беременностью является возраст женщин: старше тридцати лет вероятность развития хромосомных аберраций эмбриона увеличивается.

2.Выявлено, что у женщин А(П) группы крови ведущей причиной неразвивающейся беременности является хромосомная патология эмбриона. У носителей В(Ш) группы крови отмечена тенденция к минимальной встречаемости эмбрионов, остановившихся в развитии, с патологическим кариотипом. Для женщин 0(1) и AB(IV) групп крови с неразвивающейся беременностью характерно идентичное распределение патологических и нормальных кариотипов эмбрионов.

3.Показана специфическая тенденция распределения хромосомных аберраций эмбрионов при неразвивающейся беременности у женщин с различной групповой принадлежностью крови. Наиболее часто в обследованном контингенте встречается аутосомная трисомия, превышающая другие виды аномалий в 4-16 раз. Преобладает данная патология у эмбрионов женщин В(Ш) группы крови, минимальна - при AB(IV). Ей уступает по частоте триплоидия,

чаще наблюдаемая у эмбрионов женщин с AB(IV) группой крови.

4.Установлено, что из всех видов нарушений кариотипа при моносоми Х-хромосомы наблюдаются более выраженные изменения клеточног состава крови, метаболические отклонения, что очевидно, связано наиболее длительным периодом гестации, характером взаимоотношени кариотипически патологического эмбриона с организмом матери.

5.В организме женщины существуют механизмы элиминации генетическ неполноценных эмбрионов, включающиеся на разных уровня реализации генетической программы. При беременности эмбрионом патологическим кариотипом выявлена прямая корреляция лимфоцитозом (г = 0,275; р = 0,045) и обратная - с количество! сегментоядерных лейкоцитов (г = -0,333; р = 0,016), а также пряма корреляция с активностью аспартатаминотрансферазы (г = 0,643; р :

0.031), отражающая катаболическую направленность метаболизма, что способствует более ранней элиминации эмбриона.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1 .Целесообразно учитывать групповую принадлежность крови при составлении алгоритма обследования женщин в предгравидарный период, выделяя женщин в возрасте старше 30 лет.

2.Рекомендовано проведение цитогенетического исследования ворсин хориона или плаценты уже при первой неразвивающейся беременности. Информативность полученных результатов позволяет целенаправленно проводить профилактику невынашивания, направленную на предотвращение действия причин нехромосомного характера.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ

1.Бабичев, A.B. Оценка адекватности использования референтных величин клеточного состава капиллярной крови в интерпретации результатов веной крови / A.B. Бабичев, Е.А. Гамзова, O.A. Кизирова, Е.Е.

Воронкова, Т.Ю. Тороповская, О.И. Мелешкина и др. // Клиническая лабораторная диагностика. - 2010. - № 9. - С. 43.

2.Мелешкина, О.И. Пренатальная диагностика хромосомной патологии плода / О.И. Мелешкина, М.В. Буданова, Н.В. Спиридонова, A.A. Епифанова // Клиническая лабораторная диагностика. - 2011.- №10 - С16.

3.Спиридонова, Н.В. Метаболические аспекты невынашивания беременности у женщин с синдромом потери плода / Н.В. Спиридонова, М.В. Буданова, O.A.' Гусякова, О.И. Мелешкина, Е.В. Мел^дзе // Астраханский медицинский журнал. - 2011. -Т.6, № 3 - С. 248-250.

4.Гусякова, O.A. Метаболические аспекты невынашивания беременности, взаимосвязь с групповой принадлежностью крови по системе ABO / O.A. Гусякова, Н.В. Спиридонова, М.В. Буданова, О.И. Мелешкина // Практическая медицина. - 2011. - №6 - С. 45-46.

5.Мелешкина, О.И. Актуальность создания цитогенетической лаборатории в структуре перинатального центра / О.И. Мелешкина, И.А. Токарева // Материалы Российской научно-практической конференции «Медицинская биохимия и клиническая лабораторная диагностика в аспекте модернизации системы научных исследований» - Омск, - 2011. -С. 187.

6.Хуторская, H.H. Оценка эффективности организационной модели «Перинатальный центр» / H.H. Хуторская, И.А. Токарева, E.H. Лаврушина, О.И. Мелешкина// Материалы научно-практической конференции «Тольяттинская осень - 2010. Неотложные состояния в практике многопрофильного стационара» - Тольятти, - 2010. - С. 157-159.

7.Мелешкина, О.И. Оценка клинической потребности и эффективности цитогенетических исследований в рамках организационной модели «Перинатальный центр» / О.И. Мелешкина, H.H. Хуторская, И.А. Токарева, // Тольяттинский медицинский консилиум «Современные перинатальные технологии». - 2011.- № 1 -2 - С. 84-86.

8.Мурский, С.И. Программа для импорта данных, полученных с биохимического анализатора COBAS INTEGRA 400 Plus. / С.И. Мурский,

O.A. Гусякова, Зубова И.А., Воронкова Е.Е., Липатова Е.С., Рыськина Е.А., Евсеева Т.Ю., Габрильчак А.И., Бортникова H.A., Мелешкина О.И. и др. Свидетельство о государственной регистрации программы для ЭВМ №2010611397 от 17 февраля 2010 г.

МЕЛЕШКИНА ОЛЬГА ИГОРЕВНА

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Подписано в печать: 18.11.2011 Формат:60х84 1/16. Печать оперативная. Объем: 1,6 усл. печ. л. Тираж: 100 экз. Заказ № 132 Отпечатано в типографии «Комбриг» 445044, г. Тольятти, ул. Офицерская 15, офис 6.

Текст научной работыДиссертация по биологии, кандидата медицинских наук, Мелешкина, Ольга Игоревна, Уфа

Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Самарский государственный

медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития

Российской Федерации

Ольга Игоревна

МЕТАБОЛИЧЕСКИЕ И ГЕНЕТИЧЕСКИ ДЕТЕРМИНИРОВАННЫЕ ПРИЗНАКИ НЕРАЗВИВАЮЩЕЙСЯ БЕРЕМЕННОСТИ

03.01.04 — Биохимия

14.01.01 — Акушерство и гинекология

04201251961

На правах рукописи

МЕЛЕШКИНА

Диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Научные руководители: заслуженный деятель науки РФ, доктор медицинских наук, профессор Ф.Н. Гильмиярова

доктор медицинских наук, Н.В. Спиридонова

Самара 2011

СОДЕРЖАНИЕ

ВВЕДЕНИЕ 5

Глава первая. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 12

1.1. Этиологические факторы неразвивающейся беременности 15

1.1.1. Хромосомные аберрации и генные мутации 15

1.1.2. Эндокринные факторы 20

1.1.3. Иммунные факторы „ 23

1.1.4. Патология системы гемостаза 27

1.1.5. Инфекционные факторы 3 о

1.1.6. Прочие факторы 32

1.2. Диагностика неразвивающейся беременности 33 Глава вторая. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ 39

2.1. Характеристика обследуемого контингента 39

2.2. Общеклинические, биохимические и гемостазиологические ме- 40 тоды исследования

2.3. Исследование гормонального и инфекционного профиля 47

2.4. Цитогенетические методы исследований 47

2.5. Статистическая обработка результатов исследований 53

Глава третья. АНАМНЕСТИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ И 54 МЕТАБОЛИЧЕСКИЕ ПОКАЗАТЕЛИ У ЖЕНЩИН С НЕРАЗВИВАЮЩЕЙСЯ БЕРЕМЕННОСТЬЮ

3.1. Характеристика показателей клеточного состава и метаболизма у женщин с физиологическим течением и неразвивающейся беременностью 54

3.2. Клинико-анамнестические данные и показатели периферической крови у женщин с 0(1)-АВ(1У) группами крови при неразвивающейся беременности 58

3.3. Клинико-анамнестические данные и показатели периферической крови у женщин с 0(1)-АВ(1У) группами крови при неразвивающейся беременности в Г и II триместре 65

Глава четвертая. ХАРАКТЕРИСТИКА ХРОМОСОМНОГО 78

НАБОРА ЭМБРИОНА ПРИ НЕРАЗВИВАЮЩЕЙСЯ БЕРЕМЕННОСТИ

4.1. Оценка влияния клинико-анамнестических данных на частоту хромосомных аномалий эмбриона при неразвивающихся беременностях 78

4.2. Частота встречаемости неразвивающиеся беременности у женщин с 0(1)-АВ(1У) группами крови 81

4.3. Основные показатели хромосомной патологии, выявленной при кариотипировании эмбрионов, остановившихся в развитии 82

Глава пятая. АССОЦИИРОВАННОСТЬ ПАТОЛОГИЧЕСКИХ 97 КАРИОТИПОВ ЭМБРИОНОВ С НАРУШЕНИЯМИ ГЕМАТОЛОГИЧЕСКИХ, ГЕМОСТАЗИОЛОГИЧЕСКИХ, МЕТАБОЛИЧЕСКИХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ У ЖЕНЩИН С НЕРАЗВИВАЮЩЕЙСЯ БЕРЕМЕННОСТЬЮ

5.1. Характеристика клинико-анамнестических данных, гематологических, гемостазиологических и метаболических показателей женщин при нормальном и патологическом кариотипе эмбрионов, остановившихся в развитии 97

5.2. Ассоциированность кариотипов эмбрионов, при неразвивающейся беременности с генетически детерминированным признаком

- 0(1)-АВ(1У) группами крови матери 100

5.3. Ассоциированность патологических кариотипов эмбрионов; при неразвивающейся беременности с данными анамнеза, гематологги-ческими и биохимическими показателями крови женщин с неразви-

вающейся беременностью 1 ^А

ЗАКЛЮЧЕНИЕ 113

ВЫВОДЫ 126

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ 128

СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ 129

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ 152

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. Проблема сохранения-репродуктивного здоровья выходит за рамки биомедицинской, этической и носит общегосударственный характер, так как сопряжена с решением демографической проблемы, психосоматическим здоровьем населения. Патология репродуктивной системы, имеющая мультифакториальную природу, затрудняет адресную раннюю диагностику, возможность использования превентивных мероприятий. В условиях неблагоприятной демографической ситуации, когда каждые пять лет на 20% уменьшается число женщин, способных родить ребенка, особенно актуально сохранение и развитие беременности у супружеских пар, желающих иметь детей (Радзинский В.Е. с соавт., 2008). С 2000-2001 года в активную фазу репродукции вступила популяция женщин, имеющих серьезные проблемы с репродуктивным здоровьем (Ушакова Г.А. с соавт., 2006). По данным коллегии МЗ РФ (2006), ежегодно*в нашей стране каждая пятая желанная беременность оканчивается потерей. Неразвивающаяся беременность является одной из трех ключевых причин невынашивания. Удельный вес неразвивающейся беременности в структуре репродуктивных потерь довольно высок и составляет 10-20% (Доброхотова Ю.Э., Савченко Т.Н., 2002; Доброхотова Ю.Э., 2008). По данным других авторов - до 45%-88,6% случаев (Га-зазян М.Г. с соавт., 2000; Салов, И.А., 2000; Сметник, В.П., 2001; Баранов, И.И., 2005; Кулаков, В.И., 2005; Несяева Е.В., 2005; Радзинский, В.Е., 2005; Кулавский В.А., 2010; Стрижаков А.Н., Игнатко И.В., 2007; Ога2Ю81 О.С. е1

а1., 2005; ЗойпаШв А. е1 а1., 2005).

В настоящее время изучается наличие хромосомных аббераций у супругов с выкидышами в анамнезе, у абортусов, особенности аллельного полиморфизма генов, контролирующих важнейшие для сохранения беременности метаболические процессы: гены системы детоксикации (ОБТМ!, СБТТ!, СБТР1)\ фолатного обмена (МТНГЯ, МТШ)\ гены факторов свертывания

крови (Fl, FII, FV); а также HLA-системы (DQA1, DQB1, DRB1, HLA-G'); фактора роста (VEGF) (Хамадьянов У.P., 2006; Мутовин Г.Р., 1997; Сидель-никова В.М., 2005; Иващенко Т.Э. и др., 2006; Притчард Д. Дж. И др., 2009).

Несмотря на то, что эта проблема привлекает достаточное внимание исследователей, в первую очередь акушеров — гинекологов, причины, предпосылки развития замершей беременности однозначно не выяснены, а зачастую и спорны. В связи с этим представляет интерес оценка базисных метаболических процессов в организме женщин в ответ на замерший плод с патологическим и нормальным кариотипом эмбриона. Актуальным является проведение биохимических, гематологических, гемостазиологических, цитогене-тических исследований, изучающих ассоциированность такого генетически детерминированного фактора, как ABO группа крови с частотой и причинами неразвивающейся беременности, хромосомными аберрациями эмбрионов, остановившихся в развитии, клеточным составом крови, форменные элементы которой обладают широким спектром биологического действия, а также с гемостазиологическими и метаболическими параметрами.

Настоящее исследование выполнено в рамках Федеральной программы научно-исследовательских работ: «Новые возможности индивидуализации донозологической диагностики и оптимизации лечебных мероприятий с учетом молекулярно-генетических особенностей организма и алиментарных факторов» (номер госрегистрации 0120.0809697).

Цель исследования: оценить ответную реакцию организма женщины на неразвивающуюся беременность при различных вариантах патологического кариотипа эмбрионов. ЗАДАЧИ:

1. Провести анализ распределения неразвивающейся беременности в структуре невынашивания беременности у женщин городского округа Тольятти. Проанализировать анамнестические данные женщин с на-

стоящей и повторной неразвивающейся беременностями для выявления значимых причин, сопряженных с невынашиванием.

2. Оценить показатели углеводного, азотистого обмена, гормональный профиль женщин с неразвивающейся беременностью с учетом групповой принадлежности крови в системе ABO.

3. Изучить распределение нормального и отологического кариотипов эмбрионов среди женщин с 0(I)-AB(IV) группами крови при неразвивающейся беременности и выяснить характер патологии хромосомного набора эмбрионов, остановившихся в развитии, у женщин с различными группами крови.

4. Охарактеризовать метаболические и гемостазиологические показатели, особенности клеточного состава крови женщин при неразвивающейся беременности с различными видами хромосомных аберраций эмбрионов.

5. Проанализировать выявленные метаболические, иммунологические, гематологические нарушения для оценки динамики ответа организма женщины с эмбрионом, остановившимся в развитии.

Научная новизна. Получены новые данные при изучении метаболического профиля, показавшие, что у женщин В(Ш) группы крови по сравнению с носителями А(П) группы отмечается более высокий метаболический ресурс и* защитный потенциал организма. Содержание гемоглобина, альбуминов, магния активность ферментов обмена аминокислот, липолиза выше, что обеспечивает интенсивность метаболических процессов. Низкое содержание СРБ служит показателем чистоты внутренней среды, меньшая концентрация мочевой кислоты может расцениваться как механизм сохранения фонда пуриновых нуклеотидов, а активация креатинфосфокиназы - для обеспечения формирования энергетического потенциала. Выявлены характерные тенденции распределения патологического кариотипа эмбрионов при

неразвивающейся беременности в связи с различной групповой принадлежностью крови матери.

Новыми являются сведения об ассоциированности хромосомной патологии эмбриона, остановившегося в развитии, с генетически детерминированным признаком - группой крови. Отмечено, что в 0(1) и АВ(ГУ) группах крови распределение однотипное с преобладанием кариотипически патологических эмбрионов«(61,3% и 62,5% соответственно).

У лиц с А(П) группой крови было зарегистрировано максимальное количество патологических эмбрионов» (70,8%). Относительный риск возникновения хромосомной аномалии эмбриона- у женщин с А(П) группой крови составил 1,23. У обладательниц В(Ш) группы было выявлено максимальное число эмбрионов с нормальным кариотипом (48,0%). Относительный риск для данной категории лиц-составил 0;8. Наиболее часто встречающаяся ауто-сомная трисомия преобладает у женщин В(Ш) группой крови, триплоидия чаще встречается у женщин с АВ(1У) группой крови.

Новыми данными являются результаты оценки ответной .реакции организма женщины на эмбрионы с патологическим-кариотипом. В организме женщин с неразвивающейся беременностью выявлены ранние доклинические признаки эмбриона с патологическим кариотипом, заключающиеся в лимфо-цитозе и нейтропении. При остановке развития эмбриона с нормальным кариотипом эти сдвиги не определяются. Характерна также достоверная активация аспартатаминотрансферазы — показателя катаболической направленности метаболизма и инверсии в использовании субстратов белковой природы в качестве энергетических предшественников вместо углеводных ресурсов.

Научно-практическая значимость. Полученный комплекс данных раскрывает закономерность формирования неразвивающейся беременности среди женщин с различными группами крови. Выявление лимфоцитоза и нейтропении, активация аспартатаминотрансферазы у женщин без соматической патологии при неразвивающейся беременности может служить призна-

ком патологии хромосомного набора эмбриона, что подтверждено проведением цитогенетических исследований. Установление кариотрпа эмбриона дополняет сведения о генетическом полиморфизме, частоте и спектре хромосомного дисбаланса в накоплении знаний о неразвивающейся беременности. Полученные данные могут способствовать более точной оценке риска формирования у плода пороков развития, способствовать анализу мутационного процесса, разработке алгоритмов и организации мероприятий, направленных на снижение репродуктивных потерь.

ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ

1. Ключевое положение неразвивающейся беременности в.структуре невынашивания. Доля этой патологии составляет 32,3% среди репродуктивных потерь I триместра беременности. Преобладающей причиной у женщин без соматической патологии являются хромосомные аберрации эмбриона.

2. Комплекс метаболических, гематологических, гемостазиологических признаков, ассоциированных с группами крови, характеризующих ответную реакцию организма, женщин на наличие эмбриона, остановившегося в развитии с патологическим и нормальным кариотипом.

3. Патогенетически значимые отклонения гормонального епектра, метаболические, гематологические, гемостазиологические изменения при неразвивающейся беременности, предпосылки к элиминации плода с аберратным набором хромосом.

4. Распределение нормального и патологического кариотипа эмбрионов, у женщин с различной АВО групповой принадлежностью при неразвивающейся беременности. Частота встречаемости кариотипически абер-ратных эмбрионов у женщин с 0(1)-АВ(1У) группами крови при неразвивающейся беременности.

ВНЕДРЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ В ПРАКТИКУ. Теоретические положения и практические рекомендации диссертации используются в работе межрайонного перинатального центра муниципального учреждения здравоохранения клинической больницы №5 г.О; Тольятти, а также в учебном процессе на кафедрах фундаментальной и клинической биохимии с лабораторной диагностикой, акушерства и гинекологии: НПО Самарского государственного медицинского; университета:

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ;, Результаты диссертационной работы представлены на «Аспирантских чтениях» (Самара, 2009);. научно-практической конференции «Тольяттинекая осень - 2010- Неотложные состояния в практике: многопрофильного стационара» (Тольятти, .2010);, Национальных днях лабораторной медицины России — 2010, «Лабораторная наука — практике: первое5 десятилетие XXI века», (Москва, 2010), Тольяттинском медицинском консилиуме «Современные перинатальные технологии» (Тольятти, 2011), Российской, научно-практической конференции. «Медицинская биохимия и клиническая лабораторная» диагностика в^ аспекте модернизации системы научных исследований» (Омск, 2011), Национальных;днях лабораторной медицины России — 20Г1, «Обеспечение доступности современных клинических лабораторных исследований: аналитические возможности, клинические потребности, организационно-экономические условия» (Москва, 2011), на совместном заседании кафедр фундаментальной и клинической? биохимии с лабораторной диагностикой, акушерства, и гинекологии института последипломного образования Самарского государственного медицинского университета, Самарского регионального отделения Всероссийского общества молекулярных биологов и биохимиков, Ассоциации специалистов по клинико-лабораторной диагностике Самарской области (Самара, 2011):.

ПУБЛИКАЦИИ. По материалам диссертации опубликовано 8 _ работ, из них 4 - в журналах, рекомендованных ВАК Министерства образования и науки РФ, имеется 1 патент.

ОБЪЕМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, главы, посвященной объекту и методам исследования, трех глав собственных данных, заключения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы. Работа изложена на 152 страницах, иллюстрирована 18 рисунками, содержит 25 таблиц. В работе использовано 203 литературных источников, из них 129 отечественных и 74 зарубежных авторов.

Глава первая ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Вопросы охраны материнства и детства являются одними из приоритетных направлений современной медицины (Тетруашвили Н. К., Сидельни-кова В. М, Верясов В. Н., с соавт., 1999; Beer А.Е., Kwak J., 2000). Демографическая ситуация в нашей стране характеризуется большим процентом потерь желаемых беременностей, что обусловливает не только медицинскую, но и социальную значимость данной проблемы (Мещерякова A.B., 2000, Ко-робкова Е.С., 2002).

Население Европы и России в частности достаточно быстро стареет. К 2015 г. 46% женщин будут старше 45 лет (Баранов И.И., Серов В.Н., 2005; Салов И.А., Маринушкин Д.И., 2000; Салов И.А., 1998;). При этом, если в высокоразвитых странах возрастная разница между средней продолжительностью жизни мужчин и женщин составляет 4-5 лет, то в России по разным данным - 12-14 лет (Сметник В.П., 2001).

В настоящее время, по официальным данным, в России женщины составляют 53% населения. Из них только 45,7% (36 млн.) находятся в репродуктивном возрасте. Причем, реальное число женщин, находящихся в активном репродуктивном возрасте (19-35 лет), значительно меньше, так как под репродуктивным статистики понимают возрастной диапазон от 15 до 49 лет (Кулаков В.И., с соавт., 2005). По данным Министерства здравоохранения и социального развития РФ в настоящее время нормальные роды составляют лишь 31,2% (Радзинский В.Е., с соавт., 2005). С 2000-2001года в активную фазу репродукции вступила популяция женщин, имеющая серьезные проблемы с репродуктивным здоровьем (Ушакова Г.А., Елгина С.И., Назаренко М.Ю., 2006).

Влияние социальных и биологических факторов распространяется не только на исход родов, но и на исход беременности, увеличивая количество репродуктивных потерь. К репродуктивным потерям относятся потери, связанные с гестационным процессом и его завершением (Щеглова, И.Ю, 1991; Фролова, О.Г., 2003; Ходжаева, З.С, Давтян E.JL, Сидельникова В.М., 2003). Так по данным различных авторов, частота невынашивания беременности колеблется от 2% в популяции до 15-55% в различных группах (Салов, И.А., 2000; Несяева Е.В., 2005; Баранов, И.И., 2005; Кулаков, В.И., 2005; Радзин-ский, В.Е., 2005; Стрижаков А.Н., Игнатко И.В., 2007; Graziosi G.C. et al., 2005, 2