Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Минорный белок сыворотки крови - связанный с беременностью альфа-глипопротеин: теоретические и практические аспекты
ВАК РФ 03.00.04, Биохимия
Автореферат диссертации по теме "Минорный белок сыворотки крови - связанный с беременностью альфа-глипопротеин: теоретические и практические аспекты"
На правах рукопись
003463407
Никулина Дина Максимовна
МИНОРНЫЙ БЕЛОК СЫВОРОТКИ КРОВИ -СВЯЗАННЫЙ С БЕРЕМЕННОСТЬЮ АЛЬФА2-ГЛИКОПРОТЕИН: ТЕОРЕТИЧЕСКИЕ И ПРАКТИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ
03.00.04. - Биохимия
АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук
Москва 2009
003463407
Работа выполнена в государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Астраханская государственная медицинская академия» Росздрава
Научный консультант:
Заслуженный деятель науки, Лауреат Государственной Премии СССР, доктор медицинских наук, профессор
Официальные оппоненты:
доктор медицинских наук, профессор академик РАМН ФГУ «ГНЦ ССП» Росздрава
доктор медицинских наук, профессор ГОУ ВПО «РГМУ» Росздрава
доктор медицинских наук, профессор НИИ скорой помощи имени Н.В .Схлифосовского
Ведущее учреждение:
ФГУ «Научно-исследовательский институт физико-химической медицины» Росздрава. Адрес: 119992, Адрес: Москва, ул. Малая Пироговская, д. 1а.
Защита состоится «_» _2009 г. в_часов на заседании диссертационного совета Д.208.072.01 ГОУ ВПО «Российского государственного университета министерства здравоохранения Российской Федерации» по адресу: 117997, Москва, ул. Островитянова, д.1
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО РГМУ по адресу: 117997, Москва, ул. Островитянова, д. 1
Автореферат разослан «_»_2009 г.
Татаринов Юрий Семенович
Чехонин Владимир Павлович Ивков Николай Николаевич
Хватов Валерий Борисович
Ученый секретарь диссертационного совета доктор медицинских наук, профессор
П.Х.Джанашия
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность проблемы
На современном этапе развития науки геномика, протеомика и биоинформатика определяют высокую скорость накопления данных о нуклеиновых кислотах и белках, обеспечивающих основные функции живой материи. Причем, на первое место выходит протеомика, поскольку именно через белки, как структуры матричного синтеза, реализуются генетически обусловленные мор-фо-функциональные и физиологические особенности биологического вида вообще и отличительные особенности каждого индивида. В связи с этим изучение белков становится стратегическим направлением в биологии, биотехнологии, медицине и фармакологии [А.И. Арчаков, 2000; Л.Л. Кисилев, 2000; 18. А1Ьа1а, 2001; Р. Агщепепс^ гл. а!., 2004; О-Эгешэ аХ а!., 2002-2005; А. во^, 2003; N. Таш-ЕисЫ, 2008].
Теоретически все белки организма могут быть маркерами развития того или иного состояния и, в первую очередь, болезни. Определение патогенетического и диагностического значения продукции индивидуальных белков крови и разработка на их основе диагностикумов представляет одну из важных проблем медицины [Г.И. Абелев, 2001; Л.А. Алексеева, 2003; Е.Ю. Лысюк, 2004; А.М. Сапожников, 2003; В.А. Фунт, 2005; Л.С. Еремина, 2006; П.Г.Прокопенко и со-авт., 2002; В.П. Чехонин и соавт., 2003; 1.5о1а$о1 ах а1., 2005; А. БиШаг а1 а1., 2007; М. 81шЬаш ал а!., 2007; О. Торокап, 2007].
По количественным и качественным характеристикам белки плазмы крови подразделяются на мажорные (основные) и минорные. Основные белки присутствуют в большой концентрации и выполняют постоянную выраженную функцию (альбумин, гемоглобин, альфа2-макроглобулин, фибриноген и т.д.) Минорные же присутствуют в крови в малых количествах, а по функциональным свойствам, чаще всего, относятся к регуляторным молекулам или реактан-там. К этой группе относятся также некоторые межорганные и органоспецифи-ческие тканевые белки. В некоторых случаях - это продукты патологической генетической модификации.
В норме синтез многих минорных белков репрессирован, во при особых физиологических состояниях (беременность) или патологических - (воспаление, опухоль) их продукция резко возрастает, не в разы, а на порядки, и подобный феномен может быть использован в качестве диагностического критерия. Например, классический маркер воспаления - СРБ [В.А. Алешкин,1988; П.Г. Назаров, Л.К. Берестовая, 1995; П.Г. Назаров, 2001; A.B. Полевщиков, 2001; М.В.Буракова, 2006; М.А. Гуревич и соавт, 2006]. Минорные белки крови остаются наименее изученными, что долгое время было обусловлено недостаточным уровнем чувствительности применяемых методов.
Наряду с новыми методами, не способными решить всех задач изучения белков, чрезвычайно востребованными остаются иммунохимические методы [А.Д. Дмитриев, 2003; В.В. Dzantiev at al., 1993; D.N.Ermolenko at al., 2002]. Именно их развитие позволило идентифицировать на молекулярном уровне ряд не известных ранее белков, что сразу раздвинуло горизонты представления о мозаике белков в биологических жидкостях и тканях организма человека.
Среди белков сыворотки крови уже более 30 лет пристальное внимание ученых и врачей привлекают так называемые белки беременности. Для диагностики состояния матери и плода важными являются специфические белки беременности, имеющие плодовое и плацентарное происхождение. К ним относятся альфа-фетопротеин (АФП), хорионический гонадотропин, плацентарный лактоген, плацентарная щелочная, фосфатаза, трофобластический бета-глобулин (ТБГ) и другие [Ю.С.Татаринов, 2003; Л.В. Посисеева и соавт., 2004; А.А.Терентьев, 2006; Duc-Goiran at al., 2006; R.F.Harrison, S.Biswas, 1980].
He менее интересными с позиций биологической роли и диагностического значения при беременности являются белки материнского происхождения, секретируемые в кровь. К этой группе белков относится, прежде всего, минорный белок сыворотки крови - связанный с беременностью альфа2-гликопротеин (СБАГ) [Ю.С. Татаринов и соавт., 1971; Н. Bohn, 1972; W.H. Stimson, 1973; G.N. Than, I.F. Csaba, D.G. Szabo, 1974].
Белки беременности с момента их обнаружения и описания многими ав-
торами в конце 60-х - начале 70-х годов прошлого века остаются в центре внимания медиков, биологов, химиков, так как до настоящего времени сведения об их структуре и свойствах остаются неполными и многие вопросы нуждаются в уточнении.
Анализ накопившихся литературных данных о СБАГ нередко свидетельствует об их разноречивом характере, что не позволяет сделать окончательного вывода о месте синтеза, биологической роли и клинической значимости этого белка [A.B. Афанасьева и соавт., 1976; К. Bauer, 1986; G. Birkenmeier at al, 1989; S.M. Petersen at al, 1990; P. Marynen at al, 1993; C.H. Nielsen at al, 1993; R.F. Ar-belaez at al, 4993; A. Philip at al, 1994; K. Guruprasad at al, 1996; B.F. Jr. Bebo, G.S. Dveksler, 2005]. С позиций вышеизложенного уточнение ряда свойств и формирование целостного представления об этом белке является целесообразным и своевременным.
Цель исследования. Научно обосновать теоретические положения о свойствах и биологической роли минорного белка сыворотки крови - связанного с беременностью альфа2-гликопротеина, а также его клиническое применение в качестве диагностического теста для улучшения оценки течения беременности и воспалительного процесса.
Задачи исследования:
1. Определить и уточнить физико-химические свойства СБАГ.
2. Выявить наличие и выраженность возможных межмолекулярных взаимодействий СБАГ с некоторыми белками сыворотки крови.
3. Провести сравнительный анализ аминокислотного состава СБАГ и белков крови, участвующих в межмолекулярных взаимодействиях.
4. Разработать на основе результатов изучения физико-химических свойств новые подходы к получению высокоочищенных препаратов СБАГ для экспериментальных исследований и приготовления компонентов иммунохимиче-ских тест-систем.
5. Определить локализацию и возможное место синтеза СБАГ методом имму-нофлюоресцентного анализа тканей различных органов и выявить изменение
накопления СБАГ в малигнизированных тканях.
6. Изучить распределение СБАГ в биологических жидкостях организма человека и обезьян.
7. Провести параллельное изучение иммуномодулирующей активности СБАГ , и других белков, ассоциированных с беременностью, в эксперименте in vivo.
8. Установить уровень СБАГ в крови здоровых лиц и зависимость его продукции от возраста и пола.
9. Оценить клиническое значение иммунохимического теста на СБАГ при физиологически протекающей и осложненной беременности.
I ((.Установить диагностический диапазон применения теста на СБАГ при вос-
палительных и онкологических заболеваниях.
II .Сравнить продукцию СБАГ с другими молекулами, обеспечивающими физиологические и патогенетические процессы в клетке и организме при бере-
. менности и воспалении.
Научная повизна и теоретическая значимость исследования
Исследование в значительной степени носило поисковый характер, что определило закономерную научную новизну в получении оригинальных данных по физико-химическим свойствам, определении подходов к установлению места локализации или синтеза, установлении патогенетического значения и диагностического диапазона продукции минорного альфа2-гликопротеина, связанного с беременностью.
Впервые выявлены и обоснованы межмолекулярные взаимодействия СБАГ с другими белками сыворотки крови, что, вероятно, связано с его функциональным предназначением, и отмечено изменение физико-химических характеристик нативного белка, обусловленное этими взаимодействиями.
Впервые получены результаты сравнительного анализа аминокислотного состава и последовательности СБАГ и МГ, позволяющие предположительно указать радикалы, обеспечивающие межмолекулярные взаимодействия СБАГ.
Впервые иммунофлюоресцентными исследованиями показано повышение концентрации СБАГ в тканях эндометрия и толстого кишечника при ма-
лигнизации.
Впервые проведена сравнительная оценка иммуносупрсссивных свойств СБАГ с другими белками беременности (ТБГ и АФП) и показана зависимость концентрации СБАГ в сыворотке крови матери не только от сроков и характера течения беременности, но и от уровня ТБГ, также обладающего иммуносупрес-сивным действием.
Установлены параллели в продукции СБАГ и некоторых биологически активных компонентов гомеостаза, а именно: иммуноглобулинов, интерлейки-нов, маркера апоптоза.
Впервые показано изменение продукции СБАГ в зависимости от характера и степени выраженности воспалительного процесса при разных локализациях.
Практическая ценность и внедрение результатов исследования
Предложен рациональный метод одновременного выделения СБАГ и двух других белков, имеющих с ним межмолекулярные связи (МГ и ТБГ). Этот метод позволяет экономить исходный биоматериал, реактивы, временные и финансовые ресурсы. Полученные белковые препараты могут быть использованы для научных исследований и практического применения.
Разработан метод иммуноферментного определения уровня СБАГ в биологических жидкостях организма с формированием опытного образца набора ИФА на СБАГ на производственной линии. Составлена инструкция по применению сформированного набора реагентов для ИФА-СБАГ.
Обоснованы практические рекомендации по .применению иммунохими-ческого теста на СБАГ, которые могут быть направлены на улучшение диагностики течения беременности и воспалительного процесса.
Разработаны способы определения воспалительного заболевания и оценки течения беременности, рассчитан коэффициент иммунологической адаптации системы мать-плод-плацента, основанный на взаимозависимости уровня двух белков беременности, обладающих идентичной иммуномодулирующей активностью, и позволяющий в динамике оценивать характер протекающей бе-
g
ременности. Разработки защищены патентами РФ.
Результаты исследований внедрены в практику МУЗ «Клинический родильный дом» г. Астрахани, а также используются в научной и практической работе кафедр теоретического и клинического профиля ГОУ ВПО АГМА: биохимии с курсом клинической лабораторной диагностики, медицинской биологии и генетики, акушерства и гинекологии, педиатрии, госпитальной терапии с курсом функциональной диагностики, пропедевтики внутренних болезней с курсом ревматологии, хирургии, урологии.
Внедрение практических результатов диссертации может быть распространено на все лечебные учреждения акушерско-гинекологического, педиатрического и терапевтического профиля на федеральном уровне.
В 2007 и 2008 годах новые способы и иммунохимические тест-системы для лабораторной диагностики воспаления, течения беременности и оценки состояния новорожденных, включавшие результаты данного исследования, были удостоены 2 золотых медалей на VII и VIII Московских международных салонах инноваций и инвестиций. В 2007 году инвестиционный проект «Новые иммунохимические тест-системы для лабораторной диагностики осложненного течения беременности, гипоксии и деструктивных процессов» был представлен на выставке: «Инновационные достижения России» XI Петербургского международного экономического форума.
Основные положения, выносимые на защиту
1. СБАГ, имеющий аналогу обезьян, является не строго гравидарньш, а минорным сывороточным белком, частота выявления и уровень в крови доноров и здоровых детей которого зависит от пола, возраста и группы крови. Продукция СБАГ возрастает не только при беременности, но и при целом ряде патологических состояний: воспалении, опухолях, системных заболеваниях у взрослых и детей. Причем, в некоторых случаях (ревматизм, гломерулонефрит, бронхиальная астма и другие) уровень СБАГ достигает величин, сопоставимых с уровнем этого белка при беременности (до 100 и более мг/л).
2. СБАГ участвует в поддержании иммуногоместаза матери и плода, а
также больных воспалительными, аутоиммунными и опухолевыми заболеваниями, что подтверждено полученными результатами эксперимента in vivo по иммуносупрессивному эффекту СБАГ, связи его продукции с другими биологически активными компонентами гомеостаза, а именно: с иммуноглобулинами, интерлейкинами, маркером апоптоза.
3. Сывороточный СБАГ, обладая высокой молекулярной массой, практически не выявляется в других биологических жидкостях. Обнаруженная имму-нофлюоресцентным методом его локализация на лимфоцитах и в тканях некоторых органов с увеличением содержания СБАГ в плаценте и малигнизирован-ных клетках позволяет предположить наличие факторов, активирующих синтез СБАГ для реализизации его иммуномодулирующих свойств, наиболее выраженных при беременности и опухолях.
4. При выделении и очистке СБАГ из сыворотки крови следует учитывать возможность его межмолекулярных взаимодействий с некоторыми другими белками крови, например, с МГ, приводящих к изменению распределения этих белков на разделительных средах (эти взаимодействия снимаются воздействием детергентов), а также сродство СБАГ к гормональным компонентам сорбентов, содержащим эстрогены.
5. Использование теста на СБАГ в оценке течения беременности основано на достоверных изменениях концентрации СБАГ в зависимости от сроков нормально протекающей беременности и развития осложнений беременности. Его диагностическая значимость возрастает при одновременном определении СБАГ с ТБГ, так как синтез этих белков, обладающих идентичной иммуномо-дулирующей активностью, взаимозависим.
6. Применение иммунохимического теста на СБАГ позволяет выявлять воспаление, в том числе скрытые формы, вне зависимости от локализации и на всем протяжении процесса. Особенно полезен тест в оценке эффективности лечения при многих нозологических формах воспалительных заболеваний сердца, легких, почек и других органов.
Апробация работы
Материалы диссертации были доложены на тематических и итоговых научно-практических конференциях сотрудников ГОУ ВПО АГМА и врачей Астраханской области, а также на российских и международных форумах: V Всесоюзном биохимическом съезде (Москва, 1986); конференции «Биохимия - медицине /молекулярные механизмы формирования патологических состояний/» (Ленинград, 1988); Всесоюзном симпозиуме с международным участием «Патогенез хронического воспаления» (Новосибирск, 1991); Всероссийской научной конференции «Современные проблемы диагностики и лечения хронических неспецифических заболеваний легких у детей» (Москва-Нальчик, 1991); 1st International Conference on Immunoreabilitation (Sochi, 1992); 1-м съезде иммунологов России (Новосибирск, 1992); of the Meetings FEBS (Federation of European Biochemical Societies) -1993 (Stockholm), 1995 (Basel); of the Meetings ISOBM (International Sotiety for Oncodevelopmentitae Biology and Medicine) -1989 (Freiburg), 1990 (Moscow), 1998 (Umea, Sweden), 2000 (Munich), 2004 (Helsinki), 2005 (Greece); 5-й научной конференции с международным участием «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге, 2001»; Европейском конгрессе по астме и IV съезде клинических иммунологов и аллергологов СНГ (Москва, 2001); 3-rd Central European Conference on Human Tumor Markers. - Cechtuma (Praga, 2001); Международной научно-практической школе-конференции «Цитокины. Воспаление. Иммунитет» (C-II6. - 23-26 июня 2002); 3-й научной конференции и школе-семинаре для молодых ученых «Белки-маркеры патологических состояний» (Астрахань-Москва, 2003); XVII Всемирном конгрессе по астме и V съезде иммунологов и аллергологов СНГ (С.-Пб., 2003); II Европейском конгрессе по Астме и I Международном конгресс «Здоровье и лекарство» (Тбилиси, Грузия, 2004); научно-практических конференциях и школах-семинарах для молодых учёных с международным участием «Современные достижения фундаментальных наук в решении актуальных проблем медицины» (Астрахань-Москва, 2004, 2006); VI съезде иммунологов и аллергологов СНГ (Москва, 2006); II и IV международных ежегодных конференциях «Проблемы диагно-
стики и лечения рака молочной железы» (С.-Пб. - 2005, 2007); IV съезде Российского общества биохимиков и молекулярных биологов (Новосибирск, 2008).
Публикации. По теме диссертации опубликована 91 научная работа, из них 16 в рекомендуемых ВАК изданиях, 2 патента.
Объем и структура диссертации
Диссертация изложена на 253 страницах компьютерного текста, состоит из оглавления, введения, обзора литературы, шести глав собственных исследований, обсуждения, выводов, практических рекомендаций, 2 приложений, библиографического указателя, включающего в себя 302 литературных источника: 105 отечественных и 197 иностранных. Иллюстративный материал представлен 29 таблицами, 36 рисунками.
Личное участие автора в получении научных результатов заключается в формировании идеи исследования, планировании и выполнении основного объема экспериментальной! части работы, в разработке плана изучения клинического материала и тестировании большей части коллекций образцов биологического материала обследуемых лиц, статистической обработке, анализе и интерпретации полученных результатов.
В работу вошли результаты исследований, проведенных совместно с представителями клинических кафедр и научных лабораторий АГМА, РГМУ, других учебных и научных учреждений. Автор выражает благодарность всем коллегам, в соавторстве с которыми были опубликованы работы.
Работа выполнена на кафедре биологической химии с курсом клинической лабораторной диагностики и на базе учебно-научно-диагностического центра ГОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия» Росздрава. Отдельные фрагменты работы были поддержаны грантами ФЦП «Интеграция науки и высшего образования России», Фонда содействия развитию малых форм предприятий в научно-технической сфере РФ и Губернатора АО.
СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материалы и методы исследования
Для теоретического и клинического изучения СБАГ использовали биологические жидкости и ткани лиц здоровых и страдающих воспалительными, онкологическими и другими заболеваниями, заведомо или предположительно содержащими объект исследования.
Поскольку этим объектом являлся сывороточный белок крови беременных женщин, то, прежде всего, изучению были подвергнуты образцы сыворотки крови женщин различных сроков беременности, рожениц, родильниц, плодов и новорожденных, женщин, страдающих онкологическими и нераковыми гинекологическими заболеваниями, доноров - мужчин и женщин. Исследовали и другие биологические жидкости организма человека: мочу беременных и небеременных женщин, амниотическую жидкость, ликвор, плевральный и пери-кардиальный экссудат, маточные смывы, а также различные тканевые экстракты взрослых людей и плодов (табл 1).
Кроме того, при изучении видового распределения СБАГ тестировали сыворотку крови обезьян Macaca Rhesus, Macaca Cynomolgus, Macaca Fascicu-laris (резус, яванская, лапундер).
В качестве исходного материала при выделении и очистке СБАГ использовали кровь женщин с поздними сроками беременности (36-40 недель развития), рожениц и ретроплацентарную кровь.
Группы обследованных формировали из беременных женщин, рожениц и родильниц, находившихся в МУЗ «Клинический родильный дом» г. Астрахани, больных специализированных терапевтических и хирургических отделений клинических больниц г. Астрахани, включая областную и городскую детские клиники. В качестве контроля использовали образцы сыворотки крови доноров, полученные со станции переливания крови, и здоровых детей.
Образцы биологического материала, при необходимости, хранили до исследования при температуре не выше -18°С.
Количественная характеристика исследованного материала
Материал исследования Количество образцов
Сыворотка крови:
доноров-мужчин и женщин 1586
здоровых детей 243
беременных женщин рожениц и родильниц 1697
плодов и новорожденных 226
гинекологических больных 195
онкологических больных 608
больных другими заболеваниями, включая детей 2526
практически здоровых лиц 1475
Ретроплацснтарная кровь 182
Экстракты:
плаценты 95
различных тканей плодов 16
различных тканей взрослых людей 39
моча здоровых и больных лиц 124
моча беременных женщин: здоровых и с гестозами 3428
Маточный смыв 139
Молоко матери 78
Амниотическая жидкость 63
Экссудат:
плевральный 27
перикардиальный 9
Бронхиальный секрет 128
Желчь 23
Ликвор 104
Образцы тканей для морфологических
исследований 175
Всего 13186
Для определения места локализации и предполагаемого синтеза использовали гистологические препараты из тканей здоровых (аутопсийный материал от лиц, погибших в результате случайных причин) и патологически измененных тканей (операционный материал), полученных в патологоанатомическом бюро областного онкологического диспансера города Астрахани, ГНЦ коло-
проктологии РФ, МНИОИ им. Герцена. Образцы ткани плаценты получали в клиническом родильном доме и родильном отделении Астраханской областной Александро-Мариинской больницы, (табл 2). Полученный материал обрабатывали в лабораториях Астраханской государственной медицинской академии и Центральной научно-исследовательской лаборатории Российского государственного медицинского университета.
Таблица 2
Характеристика материала для морфологических исследований
№ Исследуемый материал Количество образцов Возрастная группа Пол
20-29 30-39 40-49 50 и > М Ж
1 Эндометрий 30 5 8 10 7 - 30
2 Плацента 20 18 9 3 - - 30
3 Толстый кишечник 20 7 6 2 5 13 7
И Аппендикс 10 5 4 1 - 8 2
! 5 Печень 12 4 6 1 1 4 8
6 Рак и атипичная гиперплазия эндометрия 53 — 3 12 38 — 53
п 1 Рак толстого кишечника 30 - - 3 27 18 12
Всего 175
В ходе работы по экспериментальному и клиническому направлениям исследования были использованы биохимические, иммунохимические, в том числе гистохимические, и статистические методы.
Биохимические методы применяли для выделения и очистки белков: реакции осаждения, диализ, аналитический и препаративный электрофорез в агаре, агарозе и в полиакриламидном геле (ПААГ), гельпроникающая, ионообменная и аффинная хроматография, спектрофотометрия, лиофилизация.
Иммунохимические методы: варианты иммунодиффузионного анализа в геле, иммуноэлектрофорез, иммуноферментный анализ (ИФА) и реакция имму-нофлюоресценции (РИФ). В работе были использованы иммунохимические тест-системы на связанный с беременностью альфа2-гликопротеин, трофобла-стический бета-глобулин, альфа2-макроглобулин, С-реактивный белок, цито-
кины и маркер апоптоза DR5.
Моделирование иммунодиффузионных тест-систем на СБАГ, ТБГ и МГ осуществляли из самостоятельно полученных реагентов в лабораториях АГМА, лабораторные образцы ИФА наборов на СБАГ формировали в АГМА и НТО «Иммунотек», г. Москва. В других случаях были использованы коммерческие антисыворотки.
Методом ИФА на аппаратуре фирмы BioTechnics определяли макрофа-гальный белок воспаления (MIP-1(3), IL4 и TNFa (Cytimmune); DR5 (Biosource International); СРБ (диагностические наборы отечественного и импортного производства). Часть образцов тестировали на СРБ также иммунодиффузионным методом с коммерческой антисывороткой. Уровень СБАГ, МГ, ТБГ в исследуемых образцах экспериментального и клинического материала определяли имунодиффузионным титрованием со стандартной тест-системой.
Антисыворотки к СБАГ и белкам сравнения получали на кроликах породы шиншил весом 2-3 кг. Иммунизацию проводили по модифицированной схеме с использованием адъювантов. Антигенами были выделенные из крови беременных женщин методами высаливания, препаративного электрофореза, ионообменной и гельпроникающей хроматографии препараты СБАГ, ТБГ, МГ, в качестве дополнителей - адъювант Фрейнда и ланолин-вазелиновая смесь.
В первый день вводили смесь антигенного материала с полным адъюван-том Фрейнда (0,4 мл раствора антигена, 3,2 мл адъюванта, 0,4 мл 0,15М раствора NaCl) подкожно в несколько мест (до 8), реже в лимфузлы подколенных ямок. После трехдневного перерыва инъекции возобновляли и вводили антиген с равным объемом 2,5% раствора алюмокалиевых квасцов через день в возрастающих дозах внутримышечно. Каждую дозу вводили дважды. Всего 10 подкожных и внутримышечных введений. Заключительную инъекцию проводили внутривенно или внутрибрюшинно чистым антигеном. Общее количество белка, вводимого животному за весь цикл иммунизации, составляло 150-200 мг. Для получения антисывороток с высоким уровнем антител через 2-3 месяца проводили реиммунизацию введением 100-120 мг белка тремя инъекциями:
подкожной, внутримышечной и внутривенной с интервалами в 90-120 мин. Забор крови осуществляли из краевой вены уха кролика в количестве 40-50 мл на 7-9 день после заключительного введения антигена. Полученные антисыворотки проверяли на специфичность сопоставлением со стандартной тест-системой на исследуемый белок. Поливалентные антисыворотки дополнительно истощали лиофилизированной плазмой донора.
Экспериментальную часть по изучению биологической роли СБАГ проводили по двум направлениям: оценки иммуномодулирующей активности белка на лабораторных мышах и определению его сродства к стероидным гормонам методом аффинной хроматографии. Иммуномодулирующая активность белка была изучена методом локального гемолиза (Jeme, Nordin) по первичному иммунному ответу на эритроциты барана (ЭБ) у здоровых половозрелых мышей линии СВА, иммунизированных внутрибрюшинно и антигеном - ЭБ - в количестве 5х108 клеток (0,5 мл 5%), и белком, введенным животным через 48 часов. Па 5-е сутки после иммунизации подсчитывали число антителообразующих клеток (АОК) селезенки и измеряли ее массу. В опытах было использовано 180 мышей, так как параллельно со СБАГ в качестве объекта сравнения были изучены препараты ТБГ, а2-МГ, АФП.
Для проведения морфологических исследований образцы нормальных и малигнизированных тканей размерами от 0,5до 1см помещали в фиксатор - абсолютный спирт для дальнейшего получения парафиновых блоков, либо замораживали при минус15-20°С и изготавливали криостатные срезы. В проведении реакции иммунофлюоресценции использовали антикроличьи диагностические иммуноглобулины, меченные флуоресцеин-5-изотиоцианатом (ФИПД) из НИИЭМ им. Н.Ф.Гамалея.
Статистическую обработку полученных результатов проводили с помощью пакета статистического анализа Statistica 6.0, SPSS 7.0 for Windows и Microsoft Office Excel 2003 с учетом стандартных методик вариационной статистики и критерия t Стьюдента для оценки достоверности различий.
Результаты исследований и их обсуждение
При изучении физико-химических свойств СБАГ в нативных условиях использовали биохимические методы в сочетании с иммунохимическими для идентификации изучаемого белка в исходном материале и на разных этапах достижения конечного результата (табл. 3). СБАГ является гликопротеином -наличие углеводного компонента было подтверждено специфическим окрашиванием его линий преципитации в агаре на высушенной иммуноэлектрофоре-грамме. Определение относительной электрофоретической подвижности проводили в агаре «Дифко», в агарозе «Са1Ыос'пет» и полиакриламидном геле (ПААГ).
Таблица 3
Основные физико-химические свойства СБАГ
Свойства Метод, среда, носитель Результат
Относительная электрофоретическая подвижность В агаре, агарозе, ПААГ 0,76, зона гамма-глобулинов
Коэффициент диффузии В агарозе 3,48 (х10-7см2/сек)
Молекулярная масса Тонкослойная хроматография, гель-фильтрация 280-365 кДа
Наличие небелковых компонентов Окраска по методу Шифф-йодная кислота Сложный белок - глико-протеин
Отношение к осаждающим агентам Сульфат аммония, риванол, спирты, полиэтиленгликоль, и другие. Выпадает в осадок в широком диапазоне Основная часть - во фракции тяжелых белков
Распределение на молекулярных ситах Сефадекс G-50 - 200, и Toyopearl-65 Элюция сразу за свободным объемом с МГ
Распределение на ионообменных носителях DEAE-сефадекс, DEAE -SS- и СМ-целлюлоза, DEAE-servacelle, SC- гидроксиапатит, фе-нилсефароза и другие. Хорошо выделяется на ашюнитах.
Электрофоретическая подвижность относительно альбумина в агаре составила 0,76 ± 0,035, коэффициент диффузии в агарозе - 3,48±0,45х10"7 см2/сек. При электрофоретическом разделении в ПААГ изучаемый белок обнаруживали
в зоне гамма-глобулинов.
Молекулярную массу СБАГ определяли в двух вариантах распределительной гель-хроматографии. При гель-фильтрации сыворотки крови беременных женщин в колонке с сефадексом -200 в фосфатном буфере пик СБАГ выходил в соотношении 1,14 объема элюции к свободному объему, что соответствует молекулярной массе 350-380 кДа. Среднее значение составило 365,8±34,1 кДа. Методом тонкослойной хроматографии, имеющей ряд преимуществ перед колоночным вариантом (малое количество исследуемого вещества и быстрота определения) молекулярную массу СБАГ установили равной 279±1.77 кДа.
Сульфатом аммония СБАГ из сыворотки крови беременных осаждался полностью в диапазоне 35-40% насыщения раствора. При риваноловом фракционировании того же исходного материала СБАГ полностью выходил в осадок.
Было замечено, что электрофоретическая подвижность в геле и объем элюции при гель-хроматографии на сефадексе, отношение к осаждающим агентам СБАГ не соответствуют молекулярной массе этого белка. Особенно наглядно эти несоответствия проявлялись при распределении белков сыворотки крови беременных в хроматографической колонке при гель-филътрации на сефадексе 0-200 (рис. 1).
25
—мг
—СБАГ • Л---ТБГ |
0 Ьбтб-гСгЫУ,—!—I—
13 5 7
7 9 11 13 15 17 19 номера фракций
Рис. 1; Элюция СБАГ, МГ и ТБГ на сефадексе С-200
Присутствие СБАГ выявляли во фракциях «тяжелых белков»: его объем элюции совпадал с пиком выхода альфа2-макроглобулина, молекулярная масса которого превышает таковую по СБАГ более чем в два раза. Кроме того, в объеме выхода СБАГ и МГ присутствовала часть первой фракции ТБГ.
Ранее при изучении физико-химических свойств и выделении белков сыворотки крови человека нами было показано, что некоторые из них, в частности ТБГ и иммуноглобулины класса О (1977), изменяют свои параметры подвижности в геле, отношение к осаждающим реагентам, вероятно, за счет межмолекулярных взаимодействий. Предположение о том, что СБАГ в нативных условиях проявляет способность к межмолекулярным взаимодействиям, косвенно было подтверждено применением детергентов (оптимальным оказался раствор 0,5М мочевины) при разделении белков сыворотки крови беременных (рис. 2).
1 3 5 7 9 11 13 15 17 19 номера фракций
Рис. 2. Элюция СБАГ, МГ и ТБГ на сефадексе 0-200 с 0,5М мочевиной
Полученные факты, а также появившиеся работы об участии неполярных радикалов в связывании протомеров сложных белков определили задачу следующего этапа работы по проведению сравнительного качественного анализа гидрофобных радикалов (ГР) в первичной структуре СБАГ и МГ.
Исходным материалом для исследования послужили данные по структуре белков из международной базы данных ЗуЛзбРго):. Белок беременности, по мнению некоторых авторов, является димером, а более изученный МГ, однозначно,
тетрамером. Мономер СБАГ содержит 1482 аминокислотных остатка, а МГ -1474, то есть разница в их количестве составляет всего 8 аминокислот.
Сравнительный анализ аминокислотной последовательности указанных белков показал, что процентное содержание неполярных аминокислот (НПА) составляет для МГ 46% (578), а для СБАГ 39% (684). Процентное отношение каждой НПА к их общему количеству составляет для МГ: вал 20% (139), про 11% (73), лей 32% (221), илей 11% (73), ала 14% (96), гли 12% (86); для СБАГ: вал 23% (135), про 14% (79), лей 24% (137), илей 9% (53), ала 16% (91), гли 14% (83). То есть, количество каждой из НПА в этих белках различается на 2-3% (за исключением лейцина, для которого разница составляет 8%).
Анализ расположения в полипептидной цепи одиночных и сгруппированных по 2 и более ГР (для МГ это 251 и 327, а для СБАГ- 250 и 464 соответственно) позволяет выявить аналогичные звенья ГР, которые вероятно участвуют в формировании пространственной конформации белка, и отдельно расположенные ГР, которые могут оставаться на поверхности уже сформировавшейся третичной структуры белка и участвовать в обеспечении межмолекуляр-иых взаимодействий или эффекта прилипания. Такие связи, несмотря на малый уровень энергии (0,1 кДж), при образовании их в большом количестве, по-видимому, могут обеспечивать достаточную прочность, которая приводит к значительным трудностям при разделении белков с помощью гель-фильтрации и даже электрофореза.
Для разработки оптимального метода выделения и очистки СБАГ были учтены результаты поисковых экспериментов с использованием многих носителей для ионообменной, распределительной и аффинной хроматографии. С учетом того, что СБАГ является гликопротеином, изучали его поведение в колонке с гепарин-С'МВг-сефарозой и в растворе под воздействием полиэтиленг-ликоля молекулярной массы от 300 до 40000 и различного процентного содержания.
Для получения чистых препаратов очень важно было отделить СБАГ от МГ. Наибольшего внимания заслуживают два варианта, позволяющих разде-
лять СБАГ и МГ методами аффинной хроматографии на гепарин-СМВг-сефарозе или эстрадиол-сефарозе с триазиновой вставкой (Е2-81). Результаты эксперимента показали, что МГ обладает значительно меньшим сродством к гепарину и гормональному компонентам аффинного сорбента, чем СБАГ и ТБГ.
Неожиданно интересные данные были получены при разделении методом гидрофобной колоночной хроматографии на фенилсефарозе СЬ-4В белков фракции крови беременных (осадок после воздействия 40% раствора сульфата аммония), содержащей СБАГ, а также МГ и ТБГ (рис 3).
Рис. 3. Элюция СБАГ, МГ и ТБГ на фенилсефарозе 4В в градиенте 1М раствора (ЫБЦ^С^ 1-5 - фракции несорбировавшихся белков
Значительная часть МГ выходила в объеме несорбировавшихся белков, что, на первый взгляд, мало согласуется с наличием в МГ 46% неполярных аминокислот (в СБАГ - 39%). Вероятным объяснением может быть участие большей части гидрофобных радикалов в образовании связей между протоме-рами и снижение вследствие этого гидрофобных свойств четвертичной структуры. Для разделения СБАГ и ТБГ было отработано несколько вариантов
Наиболее рациональной оказалась схема выделения с последовательным использованием методов, указанных в таблице 4.
Таблица 4
Очистка СБАГ из сыворотки крови беременных женщин поздних сроков
Этап очистки Концентрация белка, мг Кратность Выход
общий СБАГ очистки (%)
Исходный материал 31200 28,8 1 100
(№14)28 04 (35-40%), осадок 6736 28,8 4,63 100
фенилсефароза СЬ-4В 194,7 12,45 34,6 43,23
8с-гидроксилапатиг 18,9 7,5 10,3 26,04
Сефадекс-0200 2,85 2,25 6,63 7,81
На последнем этапе можно использовать разделение на сефакриле. При указанном алгоритме очистки был получен препарат высокой степени чистоты (рис 4).
1 - разделение на фенилсефарозе СХ-4В: фракции, содержащие МГ, СБАГ, ТБГ и небольшое количество примесных белков;
2 - разделение на 8с-гидроксилапатите: фракции, содержащие преимущественно МГ;
3 - разделение на 8с-гидроксилапатите: фракции, содержащие преимущественно СБАГ
1 2 3
Рис 4. ПААГ электрофореграмма белков фракций основных этапов очистки
Еще одним эффективным способом выделения и очистки СБАГ оказалась последовательность применения следующих методов: осаждение 40% раствором (№14)2804, диализ, ионообменная хроматография на сефадексе ВЕАЕ-50 (или 8еп'асе11е ОЕАЕ-52), распределительная хроматография на Тоуореаг1-65 (или сефадексе в 200 + детергент), аффинная хроматография на эстрадиол-сефарозе с триазиновой вставкой.
Распределение СБАГ в биологических жидкостях. С учетом того, что СБАГ впервые был выявлен в крови беременных женщин, ранее нами были
предприняты поиски его в таких биологических объектах, как сыворотка крови плодов и новорожденных, амниотическая жидкость, моча беременных и молоко матерей (Д.М.Никулина и соавт,1976), табл.5.
Таблица 5
Выявление СБАГ в биологических жидкостях беременных женщин и плодов
Биологическая Всего Частота выявления Уровень СБАГ в мг/л.
жидкость п п % М±т Мт - шах
Сыворотка крови: - беременных женщин 121 121 100 38,4±20,7 10- 128
- рожениц 163 163 100 95,07±17,1 40-320
- плодов 22 -
новорожденных 167 2 1,2 следы
Амниотическая
жидкость * 51 5 9,8 6,0±2,24 5-10
Моча беременных 113 -
Молоко матерей -
2-10 день после родов 78 -
*' пробы концентрировались до 1/4 - 1/5 исходного объема
Позднее поиски были расширены и СБАГ определяли в других биологических жидкостях организма здорового человека и больных с воспалительными и опухолевыми заболеваниями (табл 6). При онкологических заболеваниях независимо от локализации процесса продукция СБАГ значительно увеличивается, однако высокий уровень этого белка не может быть специфическим показателем опухолевого процесса.
Таблица б
Выявление СБАГ в биологических жидкостях организма человека
Биологическая жидкость Всего образцов Наличие СБАГ в биологической жидкости
здоровых лиц при беременности при воспалении при опухолях
Сыворотка крови >3000 + д. + +
Моча 186 - - - -
Спинномозг. жидкость 104 н/опр н/опр - -
Бронхиальный секрет 128 - + +
желчь 23 - н/опр - -
Маточный смыв 139 н/опр н/опр +
Наиболее интересным представляется факт обнаружения СБАГ в маточных смывах при патологии эндометрия. Всего было исследовано 139 образцов лаважной жидкости: 52 больных раком тела матки; 19 - атипичной железистой гиперплазией эндометрия; 51 - миомой матки; 17 - женщин без опухолевых изменений эндометрия на фоне гормонотерапии. СБАГ выявлен, соответственно, в 86,54; 47,37; 23,53 и 13,73% случаев без существенной разницы в концентрации этого белка, хотя отмечена некоторая зависимость уровня СБАГ от количества экзогенных эстрогенов в случаях гормонотерапии.
Методом иммунодиффузионного титрования со стандартной тест-системой (чувствительность 5 мг/л.) СБАГ был выявлен у здоровых лиц только в сыворотке крови при концентрации 5-10 мг/л в среднем при 20-30% случаев (табл 7), крайне редко - в крови новорожденных, в околоплодных водах при тяжелых формах позднего гестоза.
Таблица 7
Частота выявления СБАГ иммунодиффузионным методом в сыворотке крови здоровых лиц в различные возрастные периоды и в зависимости от пола
Обследуемая Число Частота выявления а2-РАО
группа обследованных при концентрации:
< 5 мг/л > 5 мг/л
Дети в возрасте: п % п %
До 1 года 22 3 13,6 ■ 1 4,5
1 - 3 года 45 10 22,2 2 4,4
4-6 лет 44 9 20,4 3 6,8
7- 10 лет 68 15 22,0 6 8,8
11-14 лет 64 13 20,3 5 7,3
Всего 243 50 20,6 17 7,0
из них:
мальчиков 152 33 21,7 4 2,6
девочек 91 17 18,7 13 14,3
здоровые лица 18 -40 лет
мужчины 67 14 20,9 2 2,98
женщины 64 13 20,3 4 6,3
Всего: 131 27 20,6 6 4,6 г
За весь период работы целенаправленно или в качестве контроля изучено
более 3000 образцов крови здоровых лиц разных возрастов, в том числе 243 детей, 269 студентов и 643 доноров. Частота выявления этого белка колебалась в разных группах у здоровых мужчин от 18 до 30%, а у женщин от 20 до 45%.
Частота выявления СБАГ выше не только у женщин в 1,5-2 раза, чем у мужчин, но и у девочек по сравнению с мальчиками.
Самая высокая частота обнаружения СБАГ отмечена у лиц с I группой крови (рис 5).
I II III IV
группы крови
Рис 5. Частота выявления СБАГ в сыворотке крови доноров в зависимости от групп крови
Поиск аналогов белков у животных, как правило, преследует цель определить эволюционные изменения первичной структуры белков, находящих отражение в соответствующих изменениях их антигенной специфичности. Имму-нодиффузионный анализ является незаменимым в этих целях> по сравнению с другими иммунохимическими методами, особенно подходят оранжировки анализа в штампах «четверка» и «семерка».
В таблице 8 приведены полученные результаты иммунохимической идентификации СБАГ параллельно с другими индивидуальными белками человека у обезьян Macaca: Rhesus, Cynomolgus, Fascicularis. В качестве объектов были выбраны белки, имеющие разное происхождение: материнское, плодовое и
плацентарное.
Идентификация аналогов СБАГ и других белков, синтез которых усиливается при беременности, в крови обезьян Старого Света
Белки человека Наличие Характеристика идентичности
аналога у Неполная с числом общих
обезьян Полная детерминант
высоким низким
Сывороточные: СБАГ + +
МГ + +
Плацентарные: ТБГ + +
ПЛЧ + +
Плодовые: АФП + +
Установлено, что полной идентичностью обладают СБАГ (рис 6) и МГ, неполной — АФП, очень низкой - ТБГ, ПЛЧ.
А - антисыворотка на СБАГ
1 - пул сыворотки крови беременных женщин
2 - пул сыворотки крови беременных обезьян
Рис. 6. Идентификация СБАГ в сыворотке крови беременных обезьян
СБАГ был выявлен во всех исследуемых образцах крови беременных обезьян и в 70% случаев небеременных самок (та б л 9).
Таблица 9
Количественное определение СБАГ в сыворотке крови обезьян
Сыворотка крови Число Концентрация СБАГ (мг/л)
обезьян образцов Мт - тах М±т Р
небеременных 9 10-20 15,55±1,66
беременных 6 20 -80 64,0±13,94 <0,001
кормящих 3 5-10 8,33 ±1,98
Итого: 18 5-80
Высокие значения частоты выявления и концентрации (5-20 мг/л) СБАГ у небеременных особей могут служить основой для обсуждения эволюционных изменений иммунореактивности организма, так как у человека этот белок в концентрации >10 мг/л присутствует только при беременности, воспалении, опухолях. Установленный факт можно предположительно объяснить с разных позиций: во-первых, не исключено, что он является филогенетически древним (распространенным) и его основная функция активнее востребована у животных, стоящих на более низких ступенях эволюционной лестницы, а у человека заменена другими структурами и этот белок становится дополнительным звеном защиты; во-вторых, более прозаическая причина может заключаться в том, что практически все обезьяны имеют хронические воспалительные заболевания, которые и вызывают усиленную продукцию СБАГ.
Полученные результаты позволяют предположить, что структурные гены СБАГ и МГ являются наиболее стабильными в течение эволюционного времени, а с позиций филогенетической дивергенции самыми молодыми из изученных белков являются ТБГ и ПЛЧ, обладающие слабо выраженной неполной антигенной идентичностью с их аналогами у обезьян.
Клеточная локализация СБАГ. Наиболее убедительными являются литературные данные о том, что местом синтеза сывороточного СБАГ являются плазматические клетки. Отсутствие его в других биологических жидкостях логично объясняется большой молекулярной массой. Выявление СБАГ в маточных смывах при патологии эндометрия побудило к проведению сравнительного иммуногистохимического изучения СБАГ в 43 образцах дефинитивных и патологически измененных тканей эндометрия в сопоставлении с тканью плаценты, толстого кишечника, аппендикса и печени.
Методом непрямого иммунофлюоресцентного анализа выявлено, что СБАГ содержится в тканях нормального и патологически измененного эндометрия (гиперплазия, дифференцированный рак), рис 7. Интенсивность свечения колебалась в различных образцах от умеренной до высокой. Флюоресцен-
цию наблюдали в апикальных отделах железистого эпителия и в крупных клетках стромы. расположенных ближе к базальному отделу железистого эндометрия, а также в просветах железистых образований. При атипичной гиперплазии СБАГ выявляли в 100% случаев, при умеренно дифференцированном раке лишь в 56,5%.
При изучении плаценты отмечена интенсивная флюоресценция в клетках крови матери - сегментоядерных лейкоцитах и лимфоцитах (рис. 8), что позволяет предположить функционально обусловленную (за счет соответствующих рецепторов) локализацию на этих клетках белков беременности (аналогичная картина была и для ТБГ) или их синтез клетками крови.
Рис 7. Выявление СБАГ в тканях высокодифференциро-ванного рака и
пролиферирующего эндометрия
Рис 8. Локализация СБАГ в клетках крови:
сегментоядерных лейкоцитах и средних лимфоцитах
Установлено, что в тканях толстого кишечника и эндометрия концентрация СБАГ существенно возрастает при малигнизации (рис 9, 10). Влияние аде-нокарциноматоза на содержание СБАГ в органе и, соответственно, на его синтез проявляется в зависимости от органа в различной степени. Так, максимальное увеличение концентрации СБАГ более чем в 4 раза отметили в малигнизи-рованном кишечнике. Увеличение содержания СБАГ в малигнизированном эндометрии выражено меньше. Полученные результаты о достоверном увеличении уровня СБАГ при злокачественных опухолях подтверждают ранее высказанные предположения о возможности включения его в группу неспецифических сывороточных маркеров рака.
а) б)
Рис 9. Иммунофлюоресцентный анализ СБАГ в нормальном (а) и малигнизированном (б) эндометрии
Вероятно, при канцерогенезе в клетке увеличивается содержание факторов, играющих роль индукторов дерепрессии структурного гена СБАГ.
а) б)
Рис 10. Иммунофлюоресцентный анализ СБАГ в нормальном (а) и малигнизированном (б) толстом кишечнике
Вслед за выявлением корреляции между уровнем СБАГ и иммуноглобулинов классов А и G было проведено изучение иммуномодули-рующего действия белковых препаратов СБАГ и ТБГ in vivo.
На первом этапе мы не стремились полностью очистить исследуемые белки от основных белковых компонентов сыворотки крови для максимального сохранения нативных свойств исследуемых объектов, включая заряд, конформацию и межмолекулярные взаимодействия, и вводили мышам полуочищенные препараты СБАГ и ТБГ после препаративного электрофореза в агаре и диализа. Были получены предварительные результаты по иммуносупрессивному дейст-
вию обоих белков, более выраженному у ТБГ.
На втором этапе исследования использовали высокоочищенные препараты белков беременности и двух сывороточных белков в качестве объекта сравнения (табл 10, 11). При расчете дозы препарата исходили из удельной физиологической концентрации исследуемых белков.
Таблица 10
Сравнительное определение влияния белковых препаратов на количество антителообразующих клеток в селезенках мышей при первичном иммунном ответе
Белковые препараты 0,1%-0,5 мл п Доза мг/кг АОК, М±т % ОТ контроля Степень достовер ности
ТБГ 1 мг/мл 15 25 27395±3850,3 40,79 р<0,001
СБАГ 1 мг/мл 21 25 59429±2552,8 88,49 р<0,05
ссг-МГ 1 мг/мл 16 25 62860+3241,2 93,60 р>0,05
АФП 0,5 мг/мл 15 12,5 70000+3228,8 104,24 р>0,05
АФП 1 мг/мл 14 25 86643±4005,0 129,01 р<0,02
АФП 3 мг/мл 17 75 163714±4851,2 243,78 р<0,001
Контроль 37 - 67155±2904,8 . 100,0 -
Полученные данные полностью подтверждают сложившееся представление об иммуносупрессивном влиянии ТБГ и СБАГ на систему иммунитета, а также о дозазависимом иммуностимулирующем эффекте АФП.
Число АОК в селезенках опытных мышей на пике иммунного ответа составило от аналогичных показателей в контрольной группе животных в 2 раза большее для ТБГ, чем для СБАГ, значение, то есть, ТБГ отличается более выраженным эффектом иммуносупрессии. Такое распределение иммунотропного влияния, очевидно, имеет глубокий биологический смысл, так как ТБГ, эволю-ционно более молодой, является специфическим белком беременности, синтезируемым синцитиотрофобластом, а СБАГ - сывороточным минорным компонентом, реагирующим не только на беременность, но и на воспаление.
Возможно, что СБАГ является полифункциональным белком и оказывает опосредованное регулирующее воздействие на иммунные реакции.
Таблица 11
Сравнительное определение влияния белковых препаратов на массу селезенки мышей при первичном иммунном ответе на ЭБ
Белковые препараты Доза мг/кг Число п Масса селезенки, мг, М±ш % от контроля Степень достоверности
СБАГ. 25 21 150±3,1 86,75 р<0,001
ТБГ 25 15 158±4,6 91,33 р<0,05
а2-МГ 25 16 174,3+5,2 100,8 р>0,05
АФП 0,25мг 12,5 15 252,8+3,7 146,21 р<0,001
АФП 0,5 мг 25 ■ 14 314,6+5,1 181,95 р<0,001
АФП 1,5 мг 75 17 372,4±9,3 215,38 р<0,001
Контроль - 37 172,9±4,4 100,0 -
Изучение тропности СБАГ к половым гормонам (эстрадиолу, эстриолу, тестостерону) методом аффинной хроматографии показало максимально выраженное сродство к эстрадиолу и минимальное - к мужскому половому гормону.
При анализе более 1 ООО случаев была отмечена закономерность в динамике продукции материнского (СБАГ) и плацентарного (ТБГ) белков на протяжении всей беременности (рис 11).
Рис 11. Динамика концентрации белков беременности материнского, плацентарного и плодового происхождения
При физиологически протекающей беременности уровень материнского белка, как правило, выше плацентарного только в начале беременности. Во второй половине беременности ТБГ «обгоняет» СБАГ, то есть плацента за счет увеличения объема берет на себя большую часть функции поддержания имму-нотолерантности в системе мать-плод-плацента. Следовательно, иммуносу-прессивная активность указанных белков в норме сбалансирована и имеет важное значение для благоприятного течения беременности и благополучного исхода родов. По всей вероятности, огромное значение в препятствии отторжению фетоплацентарного комплекса организмом матери играет суммарный им-муносупрессивный эффект белков беременности.
В практических целях для оценки течения беременности был проведен математический расчет отношения материнского белка к плацентарному. Этот показатель назван коэффициентом иммунологической адаптации (КИА). Выход коэффициента за пределы физиологического диапазона может свидетельствовать о наличии осложнений беременности.
Контрольное обследование 446 женщин с патологически протекающей беременностью показало достоверное изменение КИА при поздних гестозах, плацентарной недостаточности, внутриутробном инфицировании плода и пролонгированной беременности (табл 12). В зависимости от тяжести гестоза КИА заметно повышается за счет снижения концентрации ТБГ (деструктивные изменения в плаценте) и повышения уровня СБАГ. При перенашивании плода изменяется динамика обоих белков, их уровень снижается, но быстрее падает уровень ТБГ. Таким образом, выход коэффициента за пределы физиологического диапазона может свидетельствовать о наличии осложнений беременности.
Результаты исследований, подтвержденные другими авторами, показали, что продукция СБАГ возрастает при целом ряде патологических состоянии, не связанных с беременностью: воспалении, опухолях, системных заболеваниях, как у взрослых, так и у детей. Его максимальные концентрации были отмечены при активном ревматизме, при туберкулезном бронхоадените, при гломеруло-нефрите, инфекционно-аллергическом миокардите (табл 13).
Характеристика материала клинических испытаний
Характер патологии беременности п СБАГ ТБГ КИА
Поздние гестозы 103 N-38 (36,9%) >N-51 (49,5%) <N-14(13,6%) N-31 (30,1%) >N-24 (23,3%) <N-48 (46,6%) N-35 (34,0%) >N-47 (45,6%) <N-21 (20,4%)
Фетоплацентарная недостаточность 27 N-15 (55,6%) >Ы- 2 (7,4%) <N-10 (37,0%) N-11 (40,7%) >N-11 (40,7%) <№■ 5 (18,5%) И- 3(11,1%) 7(25,9%) <N-17 (63,0%)
Внутриутробное инфицирование плода 79 N-23 (29,1%) >N-42 (53,2%) <N-14 (17,7%) N-38 (48,1%) >N-32 (40,5%) <Ы- 9(14,4%) N. 3 (3,8%) >N-13.(16,7%) <N-63 (79,5%)
Эндоцервикоз 14 N. 5 (35,7%) >№• 8(57,1%) 1 (7,2%) № 2 (14,3%) >N-10(71,4%) <№ 2(14,3%) N. 0 Ж- 3 (24,4%) <N-11 (78,6%)
Угроза отслойки плаценты 41 Ы- 18 (43,9%) >N-15 (36,6%) <Ы- 8(19,5%) N-6 (14,6%) >N-32 (78,0%) <№ 3 (7,4%) N. 0 Ж- 5(12,2%) <N-36 (87,8%)
Переношенная беременность 75 № 1 (1,3%) Ж- 0 <N-74 (98,7%) N-35 (46,7%) >Ы- 0 <N-40 (53,3%) N-35 (46,7%) >N-13.(17,3%) <N-27 (36,0%)
На основании выявления этого белка при воспалительном процессе различной нозологии можно считать СБАГ неспецифическим маркером воспаления. При определении СБАГ параллельно с другими БОФ была выявлена иная, чем, например у СРБ, динамика его синтеза в течение развития и разрешения воспалительного процесса. Он выявляется на всем протяжении воспаления, что позволяет отнести СБАГ к индикаторам и латентных форм воспаления. При динамическом наблюдении снижение уровня СБАГ всегда совпадало с улучшением самочувствия и функциональных показателей.
Тест на СБАГ предпочтительнее других лабораторных показателей для оценки эффективности лечения и диспансерного наблюдения за больными. Сравнение теста на СБАГ с традиционными лабораторными показателями воспаления выявило его преимущество в оценке эффективности лечения и диспансерном наблюдении при различных формах заболеваний с выраженным аутоиммунным компонентом.
Определение СБАГ в сыворотке крови больных воспалительными и невоспалительными заболеваниями в концентрации
Заболевания п Выявление СБАГ при концентрации < 5
Частота М, мг/л | Диапазон
Сердца
Ревмокардит I 105 0.85 9.88 5-20
Ревмокардит П-Ш 73 0.98 17.50 10-80
Инфаркт миокарда 103 0.51 9.14 5-20
Кардиопатия 40 0.15 5.83 5-10
инфекционно-аллер-гический миокардит 54 0,76 20,98 5-80
Ревматоидный полиартрит 63 0,68 17,36 5-40
Легких
Острая пневмония 83 0.71 15.84 5-40
Хронический бронхит 133 0.67 12.69 5-40
Бронхиальная астма 124 0.68 16.19 5-40
Туберкулез
-вираж туберк. проб 84 0.65 18.28 5-40
-бронхоаденит 118 0.73 20.34 5-80
-инфильтрат, форма 72 0.73 22.29 10-80
-диссеминир. форма 45 0.80 19.86 5-80
-фиброзно-каверноз. 32 0.84 24.07 10 -120
Пневмокониозы 49 0.67 10.45 5-20
Почек
Гломерулонефрит 20 0.75 14.33 5-80
Пиелонефрит 51 0.66 13.52 5-40
Ки шечника
Хронический колит: -язвенный 36 0,58 12,14 5-40
- постдизентерийный 43 0,60 9,80 5-20
- эндогенный 33 0,36 7,91 5-20
Всего 1361
В таблице 14 приведена часть результатов изучения клинической значимости иммунохимического теста на СБАГ в онкологической практике.
Выявление СБАГ в сыворотке крови больных в зависимости от вида и локализации опухолей
Локализация Количество образцов Частота Концентрация,
всего / позитивных выявления, мг/л
общее муж жен %
Злокачественные опухоли:
Тела матки - 46/41 89,13 82,67±9,4
Шейки матки 10/9 90 37,77±б,13
Яичников 24/22 91,25 21,78±3,51
Молочной железы 43/39 90,7 32,52±5,23
Простаты 39/33 84,61 23,24±3,27
Бронхолегочной системы 48/43 22/22 16/16 100 55,34±8,13
Пищевода и 5/5 3/3 2/2 100 17,52±2,48
желудка
Прочие 17/15 5/4 12/11 88,23 29,83±3,84
Доброкачественные опухоли:
Матки 39/34 87,20 19,61±2,38
Простаты 48/31 64,58 7,65±0,85
Прочие 12/10 4/3 8/7 83,33 15,27±0,30
Показатели СБАГ в крови больных со злокачественными новообразованиями достоверно превышают таковые при доброкачественных опухолях, что позволяет рекомендовать тест на СБАГ в качестве дополнительного лабораторного критерия диагностики, а, главное, оценки эффективности лечения онкологических заболеваний.
Для расширения диагностического диапазона СБАГ и технического упрощения практического использования теста получены предварительные результаты по разработке набора реагентов для иммуноферментного анализа, который может быть использован не только в клинических, но и поликлинических условиях при скрининг-обследовании населения с целью выявления латентного воспаления.
СБАГ был отнесен к белкам острой фазы (БОФ) с момента его обнаружения (Ю.С. Татаринов, 1971). Именно поэтому представляется логичным его изучение параллельно с классическим острофазовым белком - СРБ. Был прове-
ден сравнительный анализ результатов определения обоих белков и показателей клеточного и гуморального иммунитета у 93 больных с различными соматическими заболеваниями (табл 15).
Таблица 15
Показатели иммунограммы в группах БОФ-позитивных и БОФ-негативных
обследованных лиц
Показатели Единицы измерений Значения показателей иммунограммы в группах: Р
БОФ-позитивных (п=42) БОФ-негативных (п=51)
М±ш т1п - тах М±гп пип - тах
Возраст лет 34,50 ± 3,58 1,00-71,00 30,23±2,60 1,00 - 64,00
Лейкоциты 109/л 5,79 + 0,35 4,20-11,20 5,82+0,28 3,00-11,60
Эозинофилы % 3,00 ±0,58 1,00-18,00 2,49+0,34 1,00-14,00
Нейтрофилы п/я % 1,69 ±0,16 1,00-5,00 1,88±0,21 1,00-10,00
Нейтрофилы с/я % 52,20 ±2,21, 16,00-82,00 46,70±2,04 ь 19,00-79,00
Лимфоциты % 40,59 ±1,84 23,00-71,00 46,37±2,09 15,00-78,00 0,04
Моноциты % 2,38 ±0,18 1,00-6,00 3,17±0,25 1,00-8,00 0,01
Т-лимфоциты % 60,02 ±2,46 29,00-90,00 64,72±1,77 37,00-91,00
Т-лимфоциты Юэ/л 1,57 ±0,16 0,45-5,04 1,81±0,13 0,37-5,99
Т-лимфоциты акт. % 57,80 ±2,44 19,00-90,00 64,96±1,85 26,00-90,00 0,02
В-лимфоциты % 18,61 ±1,67 5,00 - 52,00 19,12±1,58 7,00-53,00
В-лимфоциты 109/Л . 0,47 ±0,06 0,08-2,65 0,54±0,06 0,05-1;89
Фагоцитарный индекс % 60,07+2,24 30,00-90,00 65,82±1,77 30,00-88,00 0,04
Фагоцитарное число 5,46+0,27 2,00-10,50 6,32±0,24 8,20-12,00 0,02
Количество активных фагоцитов 1,80±0,12 0,56-4,10 1,84±0,15 0,58-6,92
Циркулирующие иммунные комплексы у.е. 32,20±3,08 2,00-80,00 31,2±2,61 2,80-82,00
1д А г/л 1,13±0,10 0,19-4,46 1,07±0,05 0,11-2,22
г/л 12,9±0,53 4,26-23,60 11,55±0,58 5,61-25,32
|дМ г/п 1,03+0,08 0,23-3,58 1,17±0,08 0,34-3,92
В БОФ-положительных образцах достоверно ниже значения по числу лимфоцитов, моноцитов, активированных Т-лимфоцитов и показателей фагоцитоза. Полученные результаты свидетельствуют о том, что БОФ объективно отражают снижение активности иммунитета и могут быть использованы на первом этапе профилактического обследования.
Результаты исследования СБАГ параллельно с маркером апоптоза - БЯ 5 и двумя маркерами воспаления - макрофагальным белком воспаления М1Р-1(3 и СРБ в 91 образце сыворотки крови детей больных воспалительными заболеваниями почек и легких (гломерулонефрит, пиелонефрит, тубулоинтерстициаль-ный нефрит, липоидный нефроз, хроническая почечная недостаточность, инфекция мочевых путей, цистит, обструктивный бронхит, бронхиальная астма средней и тяжелой степеней тяжести) свидетельствуют о том, что все белки острой фазы связаны с разными патогенетическими звеньями и могут иметь значение взаимно дополняющих диагностических факторов. МПМ|5 и СБАГ имеют наибольшую прямую корреляционную связь, а СБАГ и Б115 - наибольшую обратную корреляцию, что может быть связано с регуляцией иммунного ответа, так как СБАГ обладает иммуномодулирующими свойствами.
ВЫВОДЫ
Г. Установлено, что электрофоретическая подвижность в геле и объем элю-ции при гель-хроматографии на сефадексе, отношение к осаждающим агентам СБАГ не соответствуют молекулярной массе этого белка (365 кДа): его присутствие выявляется во фракциях «тяжелых белков». Получены прямые доказательства межмолекулярных взаимодействий СБАГ с МГ и ТБГ по достоверному (р<0,05) изменению скорости распределения указанных белков в носителях после воздействия детергенгов на нативную смесь.
2. При анализе аминокислотной последовательности полипептидных цепей СБАГ и МГ показаны высокий процент неполярных аминокислот (39 и • 46% соответственно) и наличие аналогичных звеньев гидрофобных радикалов (ГР), вероятно участвующих в формировании пространственной кон-формации белка, а также отдельно расположенных ГР, которые могут обеспечивать межмолекулярные взаимодействия или эффект прилипания на поверхности молекулы.
3. Разработан новый рациональный способ выделения и очистки СБАГ из исходного биоматериала с использованием раствора мочевины для устранения межмолекулярных взаимодействий СБАГ с МГ и ТБГ, а также аффинной хроматографии на эстрадиол-сефарозе с триазиновой вставкой.
4. Выявлено, что иммунофлюоресцентным методом СБАГ обнаруживается в зрелой плаценте в симпласте ворсин хориона, в толстом кишечнике в эпителии крипт, в аппендиксе в области базальной мембраны, в печени в прослойках междольковой соединительной ткани, в тканях нормального и патологически измененного эндометрия. Аденокарциноматоз существенно влияет на содержание СБАГ в органе и, соответственно, на его синтез в зависимости от органа и различной степени малигнизации. Вероятно, при канцерогенезе в клетке увеличивается содержание факторов, выполняющих роль индукторов дерепрессии структурного гена СБАГ.
5. Показано, что СБАГ в редких случаях может быть выявлен в амниотиче-ской жидкости, а при воспалении и опухолях в бронхиальном секрете и в маточном смыве. Разница в частоте выявления СБАГ в крови по полу более выражена в детском возрасте: у женщин выше в 1,5-2 раза, чем у мужчин, а у девочек раннего возраста в 4 - 7 раз по сравнению с мальчиками.
6. Установлено, что СБАГ имеет в крови обезьян полностью идентичный белок, а ТБГ - аналог с низким числом общих детерминант. Уровень СБАГ в некоторых образцах небеременных самок, сопоставимый с концентрацией его у беременных обезьян (20 мг/л), может быть основой для обсуждения эволюционных изменений иммунореактивности организма: ТБГ является более молодым белком в филогенетическом смысле, чем СБАГ, выполняющим важную биологическую роль при вынашивании материнским организмом плода.
7. Выявлена корреляция между уровнем СБАГ и иммуноглобулинами классов А и G, а также экспериментально доказан иммуносупрессивный эффект СБАГ in vivo на формирование первичного иммунного ответа у мышей, иммунизированных внутрибрюшинно эритроцитами барана. В дозе 25
мг/кг ТБГ снижает число АОК на 59,21 %, СБАГ-на 11,51%. Установлено также, что СБАГ имеет однонаправленные изменения с противовоспалительными цитокинами и разнонаправленные с провоспалительными цито-кинами и маркером готовности к апоптозу.
8. Выявлено сродство СБАГ к гормональным компонентам сорбентов, содержащим эстрогены, и зависимость уровня СБАГ в крови больных с он-когинекологическими заболеваниями от гормонотерапии. Феномен сродства СБАГ к стероидам может быть использован при выделении и очистке белков беременности.
9. Установлено, что СБАГ является минорным белком сыворотки крови, продукция которого возрастает при ряде физиологических и патологических состояний: воспалении, опухолях, системных заболеваниях у взрослых и детей. Причем, в некоторых случаях (ревматизм, гломерулонефрит и т. д.) его уровень повышается на один-два порядка по сравнению с концентрацией в крови здоровых лиц и достигает величин, сопоставимых с уровнем этого белка при беременности.
СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ
1.Трубников Г.А., Никулина Д.М., В.И.Балашов и др. Роль иммунохимических проб на альфа2-глобулин и гамма-фрагмент фибриногена в диагностике вялотекущего ревматизма // Тезисы Всероссийской научной конференции. - Иваново,
1972. - С.44.
2. Трубников Г.А., Никулина Д.М. Оценка иммунохимического теста на альфа2-глобулин при ревматизме // Тезисы 55-й научной сессии АГМИ. - Астрахань,
1973. - С.152-153.
3. Трубников Г.А., Никулина Д.М., Балашов В.И. и др. Кпинико-иммунохими-ческие исследования некоторых острофазовых протеинов при ревматизме // Терапевтический архив. - 1975. №11. - С.55-61.
4. Трубников Г.А., Никулина Д.М., Кучерова Т.П. и др. Значение некоторых клинических, биохимических и иммунохимических показателей активности ревматического процесса // Ишемическая болезнь сердца и ревматизм: Сборник работ. -Волгоград, 1975.-С.120-132.
5. Л.М.Лунева, В.В.Бочановский, Д.М Никулина и др. Активносекретируемые тканевые антигены в сыворотке крови больных лепрой // Ученые записки института по изучению лепры. - Астрахань,1976.-9 (14). - С. 197-200.
6. Прошина П.П., Никулина Д.М. К вопросу об изучении острофазовых белков и иммуноглобулинов у больных хроническим колитом // Труды 2-го Всесоюзного
съезда гастроэнтерологов, Л., 1978. - Т.2. - С.430-431.
7. Трубников Г.А., Грачева Л.Н., Никулина Д.М. и др. Тканевая антигенемия и вопросы диагностики активности ревматического процесса // Сборник тезисов докладов 60-й Юбилейной научной сессии АГМИ. - Астрахань, 1978. - С.36.
8. Афанасьева A.B., Грачева Л.Н., Никулина Д.М. и др. Канцероплацентарные антигены при патологии беременности. // Энзимология новообразований: Сборник работ. - Саратов, 1981. - С.81-88.
9. Никулина Д.М., Трубников Г.А., Афанасьева A.B. и др. Сравнительное изучение острофазовых белков в сыворотке крови больных со злокачественными и неопухолевыми заболеваниями легких // Сборник «Маркеры опухолей». - Саратов, 1981. - С.64-71.
10. Николаев A.A., Никулина Д.М. Антонов Н.М. Острофазовые протеины в диагностике опухолей предстательной железы // Лабораторное дело. - 1981.-4. -С.230-232.
11. Никулина Д.М., Костина Л.А., Вереина Т.Л. и др. К вопросу о биологической роли трофобластического бета-1-глобулина и клиническом значении теста на этот белок. // Краткие тезисы докладов к 64-й итоговой научной сессии АГМИ. Астрахань, 1983. - С.41.
12. Трубников Г.А., Никулина Д.М., Балашов В.И. Значение иммунохимических тестов на острофазовые белки в оценке эффективности лечения больных с неспецифическими заболеваниями легких // Новые методы диагностики и реабилитации
: больных НЗЛ: Тезисы к Республиканской конференции. - М.-Барнаул, 1985 - т.1. -С.163-164.
13. Никулина Д.М. Иммунохимический тест на связанный с беременностью альфа2-гликопротеин в лабораторной практике // Медицинские проблемы биохимии: Тезисы докладов к научной конференции. - Кемерово, 1985. - С.9-11.
14. Никулина Д.М. Воробьева Т.Б., Костина Л.А., Шульгина А.П. Теоретические и практические аспекты изучения альфа2-глобулина, связанного с беременностью // Тезисы V Всесоюзного биохимического съезда. - М, 1986. - Т2.- С.288-289.
15. Жучкова Л.И., Никулина Д.М. Значение иммунохимического определения некоторых белков сыворотки крови при туберкулезе у детей II Тезисы докладов X Всесоюзного съезда фтизиатров. - Киев, 1986. - С.80.
16. Никулина Д.М., Г.А.Трубников, Л.И.Жучкова. Связанный с беременностью альфа2-гликопротеин сыворотки крови как один из показателей реактивности организма у больных с заболеваниями легких // Реактивность организма и антиген. ность соединительной ткани при туберкулезе и нетуберкулезных заболеваниях
легких: Сборник научных трудов. - Саратов, 1986. - С.86-91.
17. Дербенева Л.И., Никулина Д.М. Клиническая оценка иммунохимического теста на связанный с беременностью альфа2-гликопротеин как показателя острой фазы ревматизма у детей II Вопросы охраны материнства и детства. - 1986. - №12. -С.28-31.
18. Жучкова Л.И., Никулина Д.М. Винник Л.А., Трубников Г.А. Концентрация связанного с беременностью альфа2-гликопротеина сыворотки крови у больных с различными заболеваниями легких // Проблемы туберкулеза. - 1987. - №3. - С.57-59.
19. А.Е.Сухарев, Г.А.Трубников, H.A., Талукдер Н.В., Никулина Д.М. и др. Имму-
нохимическое изучение сывороточных острофазовых белков и тканевых протеинов в мокроте при специфической и неспецифической легочной патологии // VI Всероссийский съезд фтизиатров: Тезисы докладов. - Кемерово, 1987. - С.160-161.
20. Никулина Д.М. Подходы к выделению и очистке связанного с беременностью альфа2-гликопротеина // Тезисы докладов 68-й итоговой научной сессии сотрудников АГМИ и областной научно-практической конференции врачей. - Астрахань, 1987. - С.201-202.
21. Белопасова H.A., Никулина Д.М. Клиническое значение связанного с беременностью альфа2-гликопротеина при заболеваниях легких у детей. // Профилактика, диагностика, лечение бронхолегочных заболеваний у детей: Сборник научных работ. - Саратов, 1987. - С.25-28.
22. Макаревич А.Я., Прошина П.П., Никулина Д.М. Острофазовые белки и иммуноглобулины у больных хроническим колитом Н Хронические болезни кишечника: Республиканский сборник научных трудов / Под ред. проф. А.Р.Златкиной. -М., 1987. - С.56-64.
23. Трубников Г.А., Никулина Д.М., Грачева JI.H., Николаева H.H. Клиническое значение иммунохимического исследования сывороточных и тканевых белков в мокроте при легочной патологии // Терапевтический архив. - 1988. - 12. - С.66-70.
24. Никулина Д.М., А.П.Шульгина, Ю.Е.Рагозин и др. Определение биологической роли связанного с беременностью альфа2-гликопротеина // Тезисы докладов итоговой научной сессии сотрудников АГМА и областной научно-практической конференции врачей. - Астрахань, 1988. - С.181-182.
25. Никулина Д.М. Колебания уровня связанного с беременностью альфа2-гликопротеина сыворотки крови при воспалительных заболеваниях // Биохимия -медицине (молекулярные механизмы формирования патологических состояний): Тезисы докладов итоговой научной конференции. - Ленинград, 1988. - С.147-148.
26. Никулина Д.М., Аншакова Н.И., Белопасова H.A., Малометов A.B. Сравнительное изучение острофазовых белков в сыворотке крови детей, проживающих в особо контролируемой зоне Астраханского газового комплекса // Экологические проблемы Волги: Тезисы региональной конференции. - Саратов, 1989. -С.81.
27. Nikulina D.M., Nikolaev АА., Volodin М.А. Reproductive system antigen in the diagnosis of cancer // XVlI-th Meeting of the International Society for Oncodevelopmental Biology and Medicine: Abstract book. - Freiburg, 1989. - P.79.
28. Nikulina D.M., Shvarev E.G., Vorobyeva T.B. The defection of pregnancy-associated alpha2-glycoprotein in oncologic patient's body fluids // XVIII-th Meeting of the International Society for Oncodevelopmental Biology and Medicine: Abstract book. -Moscow, 1990.-P.261-263.
29. Никулина Д.М., Рагозин Ю.Е., Кривенцев Ю.А. Иммунохимическая характеристика фракции «тяжелых» глобулинов сыворотки крови беременных женщин // Тезисы докладов областной научно-практической конференции сотрудников Мединститута и врачей Астраханской обл. - Астрахань, 1990. - С.261-263.
30. Никулина Д.М., Шульгина А.П., Аншакова Н.И., П.А.Иванов. Иммунохимиче-ское изучение некоторых компонентов крови у лиц, работающих на Астраханском газовом комплексе. Тезисы докладов областной научно-практической конференции сотрудников Мединститута и врачей Астраханской обл. - Астрахань, 1990. - С. 271-272.
31. Nikulina D.M., Trubnikov G.A., Derbeneva L.A. Diagnostic and pathogenetic role of pregnancy-associated alpha2-glycoprotein /а-2-PAG/ in inflammation // Interscience World conference on inflammation: Abstract book. - Geneva, 1991, P. 106..
32. Белопасова H.A., Д.М.Никулина, Касаткина Т.И. Диагностическая ценность связанного с беременностью альфа2-гликопротеина как показателя активности воспалительного процесса при рецидивирующих и хронических заболеваниях легких у детей // Современные проблемы диагностики и лечения хронических неспецифических заболеваний легких у детей: Тезисы докладов Всероссийской научной конференции. - М.-Нальчик, 1991. С. 9-10.
33. Никулина Д.М. Иммунохимические тесты в диагностике и оценке эффективности лечения воспалительных заболеваний // Патогенез хронического воспаления: Тезисы докладов Всесоюзного симпозиума с международным участием. - Новосибирск, 1991 - С. 175-176.
34. Никулина Д.М, Белопасова Н.А., Аншакова Н.И.и др, Значение ряда иммуно-химических тестов в формировании групп риска по воспалительной патологии // Лабораторное дело. -1991. - №1,- С. 23-27.
35. Никулина Д.М. Изучение сывороточных иммуноглобулинов и ОФБ у практически здоровых мужчин // Тезисы докладов 1 съезда иммунологов России. - Новосибирск, 1992. - С. 334-335.
36. Nikulina D.M., Trubnikov G.A., Vorobyeva Т.В. Diagnostic range of pregnancy-associated alpha2-glycoprotein /a2-PAG/ immunochemical test // 1-st International Conference on Immunoreabilitation: Abstract book. - Sochi, 1992. - P. 54.
37. Nikulina D.M., Vorobjeva T.B., Ivanov P.A. Pregnancy-associated alpha2-glycoprotein /a2-PAG/ is the humoral immunity component. // Abstracts book of the 22-rd Meeting of the Federation of European Biochemical Societies (FEBS.). - Stockholm, 1993.-№304/809.
38. Никулина Д.М., Гайнуллина Л.Х., Сахарова T.B., Степанов Б.Г. Изучение белков беременности приматов // Тезисы докладов юбилейной научно-практической конференции сотрудников АГМИ и врачей Астраханской области. - Астрахань, 1993.-С. 52.
39. Nikulina D.M., Gainullina L.Ch., Sakharova Т.В. at al. Analogues of human fetoplacental and pregnancy proteins in primates. // Interscience world conference on inflammation, India, Deli: Book of abstracts. - Deli, 1993. - P.45.
40. Nikulina D.M., Korovina N.A., Lepekhina L.A. at al. Kallikrein-kinin System and photolytic enzyme inhibitors in children with tubulointerstitiel nephritis. // 5th Interscience world conference on inflammation: Abstract book. - Geneva. - 1993.
41. Nikulina D.M., IvanovP.A., Stepanov B.G., Vorobyeva T.B., Elaboration of optimal laboratory parameter complex in body reactivity evaluation under mass health examinations. //International J. oflmmunorehabilitation. - 1994. -№1-Suppl. P.147-148.
42. Stepanov B.G., Nikulina D.M., Kriventsev Yu.A.at al. Getting antibody to pregnancy associated alpha2-glycoprotein. //Abstract book of the 23-rd Meeting of the Federation of European Biochemical Societies (FEBS Lett.), Basel, 1995. - P. 138.
43. Nikulina D.M., Vereina T.L., Kriventsev Yu.A. at al. Pregnancy associated blood sérum protein immunosuppressive properties. Getting antibody to pregnancy associated alpha2-glycoprotein //Abstract book of the 23-rd Meeting of the Federation of European Biochemical Societies (FEBS Lett.), Basel.-1995. - P. 267.
44. Никулина Д.М. Изучение белков, ассоциированных с репродуктивной функцией и реактивностью организма // Основные научные направления: Труды АГМА. -T.I (XXV). - Астрахань, 1996. - С. 27-34.
45. Никулина Д.М., Мамиев О.Б., Воробьева Т.Б. и др. Диагностика осложненного течения беременности и прогнозирование исхода родов. // Intern. J. of Immunorehabilitation. - 1996. - № 2. - P. 309.
46. Никулина Д.М., Трубников Г.А., Дербенева Л.И., Белопасова H.A. Новый способ диагностики воспаления // Областная научно-практич. конференция, посвященная 120-летию Александро-Мариинской ОКБ №1: Тезисы докладов. - Астрахань,1996. - С. 54-55.
47. Никулина Д.М., Трубников Г.А., Белопасова H.A., Николаев A.A. Иммунохи-мические тесты в диагностике и оценке эффективности лечения воспалительных заболеваний // Тезисы докл. I Международного конгресса по интегративной медицине. - Пафос, Кипр, 1997. - С. 118-119.
48. Ржечйцкий B.C., Панова Т.Н., Никулина Д.М. Иммунохимическое изучение белков «острой фазы» для дифференциальной диагностики больных с сердечнососудистой патологией. // Реабилитация больных с сердечно-сосудистыми заболеваниями: Материалы II Всероссийской конференции.- Москва, 1997. - С. 183.
49. Nikulina D.M., Rzhechitsky V.N., Agapova A.B. Differetial diagnosis and evaluation of efficacy in rheumatism treatment // International journal on immunorehabilitation.- July Sept. 1998. - № 9. - P. 19.
50. Nikulina D.M., Kriventsev Y.A., Lepekhina LA., Vorobyeva T.B. Functional and physico-chemical parallels of pregnancy proteins. // Tumor Biology. (J.of the In-tern.Soc.for Oncodevel. Biol.and Medicine): Abstract book of the ISOBM Meeting, Umea, Sweden. - Tumor Biologi J. -1998. - P. 35.
51. Никулина Д.М., Агапова А.Б., Шабанов Д.И. Изучение связи между синтезом белков беременности, вынашиванием плода и солнечной активностью // Труды Астраханской государственной медицинской академии (Том XXXVIII). Астрахань: АГМА, 1999. - С.130-135.
52. Никулина Д.М., Иванов П.А., Бабаева Е.Е. Корреляция уровня белков острой фазы и некоторых показателей иммунитета // International journal on immunorehabilitation. -1999. - № 12. - P. 133.
53. Панова Т.Н., Никулина Д.М., Савельева Л.Н. Иммунохимические тесты в диагностике поражений миокарда // Материалы VI Всероссийского съезда кардиологов.-Москва, 1999.-С. 141.
54. Nikulina D.M.- Volodin М.А., Vorobyeva T.B. at al. Alpha2-pregnancy associated glycoprotein localization in placental and endometrial tissues // Tumof Biology. - 2000. -21 (suppl. 1). - P.153.
55. Никулина Д.М,, Кривенцев Ю.А., Дячина М.Н. Иммунохимические тест-системы для диагностики и оценки эффективности лечения воспалительного процесса. //International journal on immünorehabilitation. - 2000 - V.2. - №2. - P. 12.
56. Володин М.А., Никулина Д.М., Коханов A.B., Сухарев А.Е. Иммуногистохи-мическое определение локализации фетоплацентарных и других белков в эмбриональных тканях и в организме взрослого человека // Структурные преобразования органов и тканей на этапах онтогенеза в норме и при воздействии антропогенных факторов. Экология и здоровье населения: Материалы международной конферен-
НИИ-Астрахань,2000.- С.205-206.
57. Лепехина JI.A., Никулина Д.М., Сальникова Г.Г. Изучение диагностической значимости иммунохимических тестов на белки острой фазы в оценке эффективности иммунокоррекции // Труды Астраханской Государственной Медицинской Академии, Том 20 (XLIV): Материалы 77-й итоговой научно-практической конференции сотрудников АГМА. -Астрахань, 2001. - С.150-154.
58. Кривенцев Ю.А., Дячина М.Н., Никулина Д.М. Разработка высокочувствительного метода определения связанного с беременностью альфа2-гликопротеина И Труды Астраханской Государственной Медицинской Академии, Том 20 (XLIV): Материалы 77-й итоговой научно-практической конференции сотрудников АГМА. Астрахань, 2001. - С. 155-159.
59. Безрукавникова Н.В., Коханов A.B., Никулина Д.М., Григорьева Т.А Иммуно-химические маркеры в клинической оценке дисгормональных заболеваний и гор, монзависимых опухолей // Дни иммунологии в Санкт-Петербурге 2001: Материалы пятой научной конференции с международным участием. - Медицинская иммунология - С-ГО., 2001. - Т.З. - №2. - С. 263-264.
60. Лепехина Л.А., Никулина Д.М., Кривенцев Ю.А. Изучение иммуномодули-рующей активности канцероэмбриональных белков in vivo. // Дни иммунологии в Санкт-Петербурге 2001: Материалы пятой научной конференции с международным участием. - Медицинская иммунология - С-Пб. - 2001. - Т.З. - №2.
61. Никулина Д.М. Биологическая роль и диагностический диапазон белков бере-менноста // Белки-маркеры патологических состояний: Материалы конференции молодых ученых с международным участием. - Астрахань-Москва, 2001. - С. 89101.
62. Nikulina D.M., Volodin М.А., Kostina J., Ostroverchova I. Pregnancy proteins localization in placental and endometrial tissues. // CECHTUMA 2001: 3-rd Central European Conference on Human Tumor Markers. - Czech Republic, Karlovy Vary, 2001, 22th-25th February. - Biomarkers and Environment. - 2001. - P.68.
63. Lepechina L.A., Nikulina D.M., Kostina J.M. Study of immunological properties of canceroembryonic proteins in vivo // CECHTUMA 2001.3-rd Central European Conference on Human Tumor Markers. - Czech Republic, Karlovy Vary, 2001,22th-25th February. - Biomarkers and Environment. - 2001. - P.40.
64. Агапова А.Б., Никулина Д.М., Ржечицкий B.H. и др. Диагностическое значение продукции минорного альфаг-гликопротеина крови при ревматизме.// Цитокины. Воспаление. Иммунитет: Материалы международной научно-практической школы-конференции. - С-Пб., 23-26 июня 2002. - С.157-158.
65. Кузнецов В.П., Беляев Д.Л., Никулина Д.М. и др. Системные и местные воспалительные реакции как показатель депрессии иммунитета и их коррекции: комплексом цитокинов первой фазы иммунного ответа // Цитокины. Воспаление. Иммунитет: Материалы международной научно-практической школы-конференции. -С-Пб., 23-26 июня 2002. - С.35.
. 66. Иванов П.А., Никулина Д.М., Островерхова И.О., Куликов В.В. Изучение корреляции между уровнем белков острой фазы воспаления и показателями иммуно-граммы // Цитокины. Воспаление. Иммунитет: Материалы международной научно-практической школы-конференции. - С-Пб., 23-26 июня 2002. - С. 160. 67. Никулина Д.М., Воробьева Т.Е., Мамиев О.Б., Л.А.Лепехина. Роль белков бе-
ременности как компонентов гуморального иммунитета в вынашивании плода и исходе родов // Цитокины. Воспаление. Иммунитет: Материалы международной научно-практической школы-конференции. - С-Пб., 23-26 июня 2002. - С. 163.
68. Кчибеков Э.А., Никулина Д.М., Коханов A.B., Кутуков В.Е. Острофазовые белки в диагностике острого холецистита // Сборник трудов Астраханской государственной медицинской академии. - Астрахань, 2002. - Т.24. - С.70-74.
69. Мамиев О.Б., Никулина Д.М. К вопросу о биохимических маркерах адаптации плода к родовому стрессу // Охрана здоровья матери и ребенка 2002: Материалы 4 Российского научного форума. - М., «Авиаиздат», 2002. - С. 232-233.
70. Никулина Д.М., Лепехина Л.А., Славянская Т.А.. Исследование иммуномоду-лирующей активности белков беременности in vivo И Аллергология и иммунология. - 2003. - №2,- т.4. - С.155.
71. Воробьева Ю.А., Никулина Д.М., Иванов П.А., Белопасова H.A. Изучение маркера апоптоза у детей с воспалительными заболеваниями И Белки-маркеры патологических состояний: Материалы 3 научной конференции и школы-семинара для молодых ученых. - Астрахань-Москва. - 2003. - С.85-88.
72. Кчибеков Э.А., Никулина Д.М., Коханов A.B., Кутуков В.Е. Иммунохимиче-ские показатели в дифференциальной диагностике скрытых форм холециститов // Белки-маркеры патологических состояний: Материалы 3 научной конференции и школы-семинара для молодых ученых. - Астрахань-Москва. - 2003. - С.117-120.
73. Разработка иммунохимических тест-систем для выявления и оценки гипокси-ческих состояний и деструкции тканей в организме человека: Отчет о НИР по гранту Федерального Фонда содействия развитию малых форм предприятий в на-учио-технической сфере (заключительный) / МНПЦ «ТЕСТ»; Рук. Д.М. Никулина; Исполн.: Сентюрова Л.Г., Кривенцев Ю.А, Агапова А.Б., Дьякова О.Н. Инв. № 02.2.Ö0403489 в Национальном информац. фонде РФ. Астрахань, 2004. -61 с.
74. Никулина Д.М., Воробьева Ю.А. Воробьева Т.Б. Продукция белков воспаления и рецептора апоптоза при некоторых аутоиммунных заболеваниях Материалы научно-практической конференции и школы-семинара для молодых учёных с меж' дународным участием «Современные достижения фундаментальных наук в решении актуальных проблем медицины». - Астрахань-Москва. - 2004. С. 118-123.
75. Кчибеков Э.А., Никулина Д.М., Кутуков В.Е. и др. Мониторинг острофазовых белков при холециститах // Современные достижения фундаментальных наук в решении актуальных проблем медицины: Материалы научно-практ. конференции и школы-семинара для молодых учёных с междунар. участием. - Астрахань-Москва, 2004. - С. 106-109.
76. Сентюрова Л.Г., Куликов Никулина Д.М., Кривенцев'Ю.А. Иммуноги-стохимическое определение локалазации белка беременности в структурах нормального эндометрия и при опухолях // Современные достижения фундаментальных наук в решении актуальных проблем медицины: Материалы научно-практ. конференции и школы-семинара для молодых учёных с междунар. участием. - Астрахань-Москва, 2004. - С. 229-233.
77. Nikulina D.M., Vorobjeva J.A., Ivanov P.A., Belopasova N.A. Comparative analysis of acute-phase protein apoptosis levels in patient blood // Abstracts book of the XXXII Meeting of the International Society for Oncodevelopmental Biology and Medicine (ISOBM). Helsinki (Finland), 19-23 June 2004. - P.94.
78. Безрукавникова Н.В., Никулина Д.М. Патогенетическая и клиническая роль белков острой фазы при раке молочной железы // Проблемы диагностики и лечения рака молочной железы: Материалы первой международной ежегодной онкологической конференции. - С.-Пб, 2004. - С. 98.
79. Безрукавникова Н.В., Никулина Д.М., Бисалиева P.A. Исследование уровня связанного с беременностью альфа2-гликопротеина при раке молочной железы И Проблемы диагностики и лечения рака молочной железы: Материалы первой международной ежегодной онкологической конференции. - С.-Пб, 2005. - С. 109.
80. Nikulina D, Miroshnikov V, Ivanov Р, Seidov К. Comparative analysis of some humoral components of reactivity in prostate diseases // Abstracts book of the ХХХШ Meeting of the ISOBM. - Rhodos, Greece, 2005. - P.55.
81. Безрукавникова H.B., Никулина Д.М., Кривенцев Ю.А., Кутуков В.В. Определение связанного с беременностью альфа2-гликопротеина при раке молочной железы // Материалы 83-й итоговой научно-практич. конференции сотрудников академии, врачей города и области. - Астрахань, 2005. - Т.31. - С.164-166.
82. Безрукавникова Н.В., Коханов A.B., Никулина Д.М., Кутуков В.В. Связанный с беременностью альфа2-гликопротеин при различных вариантах рака молочной железы // Проблемы диагностики и лечения рака молочной железы: Материалы III международной ежегодной конференции. - С.-Пб., 2006. - С. 56-57.
83. Воробьева Ю.А., Никулина Д.М., Воробьева Т.Б., Иванов П.А. Сравнительный анализ продукции белков воспаления и рецептора апоптоза при некоторых аутоиммунных заболеваниях у детей // Известия высших учебных заведений СевероКавказский регион «Актуальные проблемы диагностики и лечения иммуноопосре-дованных и аллергических заболеваний». - Естественные науки.-2006.-С.14-17.
84. Савенков М.С., Мустафин Д.Г., Никулина Д.М. Особенности деструктивных форм обтурационного холецистита у пожилых И Актуальные вопросы геронтологии и гериатрии: Сборник трудов юбилейной научно-практич. конференции. -СПб., 2006. - С. 266-268.
85. Никулина Д.М. Постгеномный этап изучения диагностически значимых белков // Достижения фундаментальных наук в решении актуальных проблем медицины: Материалы научно-практической конференции с международным участием. - Астрах анъ-Волгогр ад-Москва, 2006. - С.17-19.
86. Савенков М.С., Петрова О.В., Бисалиева P.A., Никулина Д.М. Комплексная лабораторная оценка выраженности воспалительных изменений при обструктивном холецистите // Бюллетень Волгогр. Центра РАМН и администрации Волгогр. области. - 2006. -N°2. - С. 51.
87. Никулина Д.М., Мнрошников В.М., Воробьева Ю.А. и др. Иммунохимические маркеры при воспалительных, аутоиммунных и опухолевых заболеваниях // Достижения фундаментальных наук в решении актуальных проблем медицины: Материалы научно-практической конференции с международным участием. - Астрахань-Волгоград-Москва, 2006. - С.19-21.
88. Сенпорова Л.Г., Куликов В.В., Никулина Д.М. Сравнительное иммуногисто-химическое исследование содержания общего белка и белка беременности в организме человека. // Естественные науки. - 2007. - №1 (18). -С.78-83.
89. Безрукавникова Н.В., Никулина Д.М., Кутуков В.В. Стероидсвязываюгцие белки при морфологических вариантах рака молочной железы // Проблемы диагно-
стики и лечения рака молочной железы: Материалы IV международной ежегодной конференции.- С.-Пб, 2007. - С.63.
90. Безрукавникова Н.В., Коханов A.B., Кривенцев Ю.А., Никулина Д.М., Бер-штейн JI.M., Кутуков В.В. Стероидсвязывающие белки у больных раком молочной железы // Вопросы онкологии. - 2007.- Т.- 53,- N4. - С.409-413.
91. Никулина Д.М., Воробьева Т.Е., Кривенцев Ю.А. Стадиоспецифические белки как маркеры развития плода и состояния новорожденного // Материалы IV съезда Российского общества биохимиков и молекулярных биологов. - Новосибирск, 2008. - С. 474.
Патенты
92. Никулина Д.М., Ю.С.Татаринов, Г.А.Трубников, Л.И.Дербенева, А.П.Шульгина. Способ определения воспалительного заболевания. Авторское свидетельство на изобретение № 1527589 от 8 августа 1989, патент РФ №1527589 от 25.06.1993.
93. Никулина Д.М., Мамиев О.Б., Воробьёва Т.Б., Степанов Б.Г. Способ диагностики осложнений беременности и прогнозирования состояния плода и новорожденного. Пачент РФ №2120636 на изобретение от 20.10.1998.
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
АФП - альфа-фетопротеин
АОК - антителообразующие клетки
БОФ - белки острой фазы
ГР - гидрофобные радикалы
ИДА - иммунодиффузионный анализ
ИФА - иммуноферментный анализ
МГ - альфа2-макроглобулин
ПААГ - полиакриламидный гель
ПЛЧ - плацентарный лактоген человека
РИФ - реакция иммунофлюоресценции
СБАГ - связанный с беременностью альфа2-гликопротеин (он же
a2-PAG - alfa2-pregnancy associated glycoprotein)
СРВ - С-реактивный белок
ТБГ - трофобластический бета-глобулин (он же TSG -
трофобластспецифический бета-гликопротеин)
ЭБ - эритроциты барана
Никулина Дина Максимовна
МИНОРНЫЙ БЕЛОК СЫВОРОТКИ КРОВИ -СВЯЗАННЫЙ С БЕРЕМЕННОСТЬЮ АЛЬФА2-ГЛИКОПРОТЕИН: ТЕОРЕТИЧЕСКИЕ И ПРАКТИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ
Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук
Тираж 100 экз. Подписано в печать 2б.02.09г. Заказ № 2545
Издательство ГОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия Росздрава», 414000, г. Астрахань, ул. Бакинская, 121
Содержание диссертации, доктора медицинских наук, Никулина, Дина Максимовна
ВВЕДЕНИЕ.
ГЛАВА 1 Постгеномный этап изучения белков (обзор литературы).
1.1. Современные стратегические направления изучеиия белков в биологии и медицине.
1.2. Новые технологии определения белков клеток и биологических жидкостей.
1.3. Значение и перспективы использования иммунохимических методов в исследовании белков.
1.4. Общая характеристика и классификация минорных белков сыворотки крови человека, ассоциированных с беременностью
1.5. Связанный с беременностью альфа2-гликопротеин.
ГЛАВА 2 . Материалы и методы исследования.
2.1. Характеристика и объем материалов исследований.
2.2. Методы исследований.:.
2.2.1. Биохимические методы исследований.
2.2.2. Иммунохимические методы исследований.
2.2.3. Иммунологический метод.
РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
ГЛАВА 3 Биохимическое изучение связанного с беременностью альфа2-гликопротеина (СБАГ).
3.1. Физико-химические свойства СБАГ.
3.1.1. Характеристические окраски.
3.1.2. Отношение к денатурирующим агентам.
3.1.3. Электрофоретическая подвижность в геле.
3.1.4. Коэффициент диффузии в геле.
3.2. Определение молекулярной массы СБАГ.
3.3. Изучение межмолекулярпых взаимодействий СБАГ с други- 85 ми белками сыворотки крови.
3.4. Анализ аминокислотной последовательности СБАГ и МГ.
ГЛАВА 4 Подходы к рациональным способам выделения и очистки
СБАГ.
4.1. Фракционирование осаждающими агентами.
4.2. Гидрофобная хроматография.
4.3. Ионообменная хроматография.
4.4. Гельпроникающая хроматография.
4.5. Аффинная хроматография.
ГЛАВА 5 Иммунохимическое изучение связанного с беременностью альфа2-гликопротеина.
5.1. Иммунохимическая характеристика СБАГ.
5.2. Разработка иммунохимических способов идентификации . СБАГ.
5.2.1. Моделирование иммунодиффузионной тест-системы па СБАГ.
5.2.2. Разработка метода иммуноферментиого анализа СБАГ.
ГЛАВА 6 Распределение СБАГ в биологических жидкостях и тканях.
6.1. Иммунохимическое выявление СБАГ в биологических жидкостях человека.
6.2. Выявление СБАГ в крови здоровых лиц в различные возрастные периоды и в зависимости от пола.
6.3. Иммуногистохимическое изучение клеточной локализации СБАГ в нормальных и патологически измененных тканях человека тканях человека.:.
6.4. Идентификация аналогов СБАГ и других ассоциированных с беременностью белков у обезьян Старого Света.
ГЛАВА 7 Изучение биологической роли СБАГ.
7.1. Определение иммуномодулирующей активности СБАГ!.
7.2. Возможная связь СБАГ с факторами апоптоза и интерлейки-пами.
7.3. Зависимость продукции СБАГ от уровня гормонов.!.
ГЛАВА 8 Клиническое изучение иммунохимического теста на СБАГ.
8.1. Определение содержания СБАГ в крови женщин при физиологически протекающей и осложненной беременности
8.2. Изменение уровня СБАГ при воспалительных заболеваниях
8.3. Изменение уровня СБАГ при заболеваниях сердца.
8.4. Изменение уровня СБАГ в крови при опухолях.
8.5. Изменение уровня СБАГ при хирургических заболеваниях.
Введение Диссертация по биологии, на тему "Минорный белок сыворотки крови - связанный с беременностью альфа-глипопротеин: теоретические и практические аспекты"
XXI век международным научным сообществом объявлен веком биологии и информатики в связи с тем, что использование инновационных технологий привело к получению новых объемных данных о главных макромолекулах живого организма. На современном этапе развития науки гепомика, протеомика и биоинформатика определяют высокую скорость накопления данных о нуклеиновых кислотах и белках, обеспечивающих основные функции живой материи - саморегуляцию и самовоспроизведение. Причем, на первое место выходит протеомика, поскольку именно через белки, как структуры матричного синтеза, реализуются генетически обусловленные морфо-функциональные и физиологические особенности биологического вида вообще и отличительные особенности каждого индивида. В связи с этим изучение белков становится стратегическим направлением в биологии, биотехнологии, медицине и фармакологии [А.И. Арчаков, 2000; Л.Л. Киселев, 2000; JS. Albala, 2001; P. Angenendt at al., 2004; O.Drews at al., 2002-2005; A. Gorg, 2003; N. Taniguchi, 2008].
Новые сведения породили, в свою очередь, обоснованные прогнозы и, одновременно, неоправданную эйфорию по поводу быстрой расшифровки молекулярного патогенеза, диагностики и лечения всех болезней. Теоретически все белки организма могут быть маркерами развития того или иного состояния и, в первую очередь, болезни.1 Определение патогенетического и диагностического значения продукции индивидуальных белков крови и разработка на их основе диагностикумов представляет одну из важных проблем медицины [Г.И. Абелев, 2001; Л.А. Алексеева, 2003; Е.С. Герштейи, 2002; Л.С. Еремина, 2006; Е.Ю. Лысюк, 2004; А. В. Максимова, 2006; А.М. Сапожников, 2003; В.А. Фунт, 2005; П.Г. Прокопенко и соавт., 2002; В.П. Чехоиин и соавт., 1999, 2003; L.P.Hale, 2001, 2002; J.C. Antoine, 2000; J.Solasol at al., 2005; A. Sutnar at al., 2007; M. Shabani at al., 2007; O. Topolcan, 2007].
По количественным и качественным характеристикам белки плазмы крови подразделяются па мажорные (основные) и минориые. Основные белки присутствуют в большой концентрации и выполняют постоянную выраженную функцию (например, гемоглобин, альфа2-макроглобулип, фибриноген и т.д.) Минориые же присутствуют в крови в малых количествах, а по функциональным свойствам, чаще всего, относятся к регуляторным молекулам или реактаптам. К этой группе относятся также некоторые межорганиые и органоспецифические тканевые белки. В некоторых случаях - это продукты патологической генетической модификации
В норме синтез многих минорных белков репрессирован, по при особых физиологических состояниях (например, беременность) или патологических - (воспаление, опухоль) продукция этих белков резко возрастает, не в разы, а на порядки и подобный феномен может быть использован в качестве диагностического критерия. Например, классический маркер воспаления -СРБ [В.А. Алешкии,1988; П.Г. Назаров, 1986, 2001; П.Г. Назаров, 2001; A.B. Полевщиков, 2001; М.В. Буракова, 2006; А. Koj, 1984; М.А. Zen Q., 1997]. Минорные белки крови остаются наименее изученными, что долгое время было обусловлено недостаточным уровнем чувствительности применяемых методов.
Наряду с новыми методами, не способными решить всех задач изучения белков, чрезвычайно востребованными остаются иммунохимические методы [А.Д. Дмитриев, 2003; B.B. Dzantiev at al., 1993; D.N.Ermolenko at al., 2002]. Именно их развитие позволило идентифицировать на молекулярном уровне ряд не известных ранее белков, что сразу раздвинуло горизонты представления о мозаике белков в биологических жидкостях и тканях организма человека.
Среди белков сыворотки крови уже более 30 лет пристальное внимание ученых и врачей привлекают так называемые белки беременности. Для диагностики состояния матери и плода важными являются специфические белки беременности, имеющие плодовое и плацентарное происхождение. К ним относятся альфа-фетопротеин (АФП), хорионический гонадотропии, плацентарный лактоген, плацентарная щелочная фосфатаза, трофобластический бе-та-глобулии (ТБГ) и другие [Н.Т. Молдогазиева, 2006; М.Б. Ницветов, 2003; Д.Д. Петруиин,1988; Ю.С.Татаринов, 1988-2003; Л.В. Посисеева и соавт., 2004; А.А.Терентьев, 1990, 2006; Duc-Goiran at al., 2006; R.F.I-Iarrison, S.Biswas, 1980].
He менее интересными с позиций биологической роли и диагностического значения при беременности являются белки материнского происхождения, секретируемые в кровь. К этой группе белков относится, прежде всего, минорный белок сыворотки крови - связанный с беременностью альфа2-гликопротеин (СБАГ) [Ю.С. Татаринов и соавт., 1970; II. Bohn, 1972; R. Iiof-mann at all., 1972; W.H. Stimson, 1972; W. G.N. Straube, 1972; Than, I.F. Csaba, D.G. Szabo, 1974].
В 1960 году Hirschfeld и Soderberg описали два самостоятельных антигена в дополнительной фракции, выявленной Smithis еще в 1959 г. при элек-трофоретическом разделении крови беременных женщин и названной им ч «зоной беременности». Этими антигенами оказались связанный с беременностью альфа2-гликопротеин или alfa2-pregnancy associated glycoprotein (СБАГ или a2-PAG) и трофобластический бета-глобулин, он же trophoblastspecific beta-glycoprotein (ТБГ или TSG).
Белки беременности с момента их обнаружения и описаиия многими авторами в конце 60-х — начале 70-х годов прошлого века остаются в центре внимания медиков, биологов, химиков, так как до настоящего времени сведения об их структуре и свойствах остаются неполными и многие вопросы нуждаются в уточнении.
Анализ накопившихся литературных данных о СБАГ нередко свидетельствует об их разноречивом характере, что не позволяет сделать окончательного вывода о месте синтеза, биологической роли и клинической значимости этого белка [A.B. Афанасьева и соавт., 1976; Л.Г. Баженова, 1987; К. Bauer, 1986; G. Birkenmeier at al, 1989; S.M. Petersen at al, 1990; P. Marynen at al, 1993; C.H. Nielsen at al, 1993; R.F. Arbelaez at al, 1993; Hofmann, R., 1972, A. Philip at al, 1994; K. Guruprasad at al, 1996; B.F. Jr. Bebo, G.S. Dveksler, 2005]. Однако несомненно то, что СБАГ является очень важным звеном в формировании биологических взаимодействий в системе мать-плод-плацепта и реакции организма на воспаление [12, 13, 30, 88, 135].
С позиций вышеизложенного уточнение ряда свойств и формирование целостного представления об этом белке является целесообразным и своевременным.
Цель исследования. Научно обосновать теоретические положения о свойствах и биологической роли минорного белка сыворотки крови - связанного с беременностью альфаг-гликопротеина, а также его клиническое применение в качестве диагностического теста для улучшения оценки течения беременности и воспалительного процесса.
Для достижения цели были поставлены следующие задачи:
1. Определить и уточнить физико-химические свойства СБАГ.
2. Выявить наличие и выраженность возможных межмолекулярных взаимодействий СБАГ с некоторыми белками сыворотки крови. ,
3. Провести сравнительный анализ аминокислотного состава СБАГ и белков крови, участвующих в межмолекулярных взаимодействиях.
4. Разработать на основе результатов изучения физико-химических свойств новые подходы к получению высокоочищеппых препаратов СБАГ для экспериментальных исследований и приготовления компонентов иммунохимических тест-систем.
5. Определить локализацию и возможное место синтеза СБАГ методом иммунофлюоресцентного анализа тканей различных органов и выявить изменение накопления СБАГ в малигнизированпых тканях.
6. Изучить распределение СБАГ в биологических жидкостях организма человека и обезьян.
7. Провести параллельное изучение иммуномодулирующей активности
СБАГ и других белков, ассоциированных с беременностью, в эксперименте in vivo.
8. Установить уровень СБАГ в крови здоровых лиц и зависимость его продукции от возраста и пола.
9. Оценить клиническое значение иммупохимического теста на СБАГ при физиологически протекающей и осложненной беременности.
10.Установить диагностический диапазон применения теста на СБАГ при воспалительных и онкологических заболеваниях.
11.Сравнить продукцию СБАГ с другими молекулами, обеспечивающими физиологические и патогенетические процессы в клетке и организме при беременности и воспалении.
Научная новизна и теоретическая значимость исследования
Исследование в значительной степени носило поисковый характер, что определило закономерную научную новизну в получении оригинальных данных по физико-химическим свойствам, определении подходов к установлению места локализации или синтеза, установлении патогенетического значения и диагностического диапазона продукции минорного альфа2-гликопротеина, связанного с беременностью.
Впервые выявлены и обоснованы межмолекулярные взаимодействия СБАГ с другими белками сыворотки крови, что, вероятно, связано с его функциональным предназначением, и отмечено изменение физико-химических характеристик нативного белка, обусловленное этими взаимодействиями.
Впервые получены результаты сравнительного анализа аминокислотного состава и последовательности СБАГ и МГ, позволяющие предположительно указать радикалы, обеспечивающие межмолекулярпые взаимодействия СБАГ.
Впервые иммунофлюоресцентными исследованиями показано повышение концентрации СБАГ в тканях эндометрия и толстого кишечника при малигнизации.
Проведена сравнительная оценка иммупосупрессивиых свойств СБАГ с другими белками беременности (ТБГ и АФП) и показана зависимость концентрации СБАГ в сыворотке крови матери не только от сроков и характера течения беременности, но и от уровня ТБГ, также обладающего иммупосу-прессивиым действием.
Установлены параллели в продукции СБАГ и некоторых биологически активных компонентов гомеостаза, а именно: иммуноглобулинов, иитерлей-кинов, маркера апоптоза.
Показано изменение продукции СБАГ в зависимости от характера и степени выраженности воспалительного процесса при разных локализациях.
Практическая ценность и внедрение результатов исследования
Предложен рациональный метод одновременного выделения СБАГ и двух других белков, имеющих с ним межмолекулярные связи (МГ и ТБГ). Этот метод позволяет экономить исходный биоматериал, реактивы, временные и финансовые ресурсы. Полученные белковые препараты могут быть использованы для научных исследований и практического применения.
Разработан метод иммупоферментного определения уровня СБАГ в биологических жидкостях организма с формированием опытного образца па-бора ИФА на СБАГ на производственной линии. Составлена инструкция по применению сформированного набора реагентов для ИФА-СБАГ.
Обоснованы практические рекомендации по применению иммупохи-мического теста на СБАГ, которые могут быть направлены на улучшение диагностики течения беременности и воспалительного процесса.
Разработаны способы определения воспалительного заболевания и оценки течения беременности, рассчитан коэффициент иммунологической адаптации системы мать-плод-плацента, основанный па взаимозависимости уровня двух белков беременности, обладающих идентичной иммупомодули-рующей активностью, и позволяющий в динамике оценивать характер протекающей беременности. Разработки защищены патентами РФ.
Результаты исследований внедрены в практику МУЗ «Клинический родильный дом» г. Астрахани, а также используются в научной и практической работе кафедр теоретического и клинического профиля ГОУ ВПО АГМА: биохимии с курсом клинической лабораторной диагностики, медицинской биологии и генетики, акушерства и гинекологии, педиатрии, госпитальной терапии с курсом функциональной диагностики, пропедевтики внутренних болезней с курсом ревматологии, хирургии, урологии.
Внедрение практических результатов диссертации может быть распространено на все лечебные учреждения акушерско-гипекологического, педиатрического и терапевтического профиля на федеральном уровне.
В 2007 и 2008 годах новые способы и иммунохимические тест-системы для лабораторной диагностики воспаления, течения беременности и оценки состояния новорожденных, включавшие результаты данного исследования, были удостоены 2 золотых медалей на VII и VIII Московских международных салонах инноваций и инвестиций. В 2007 году инвестиционный проект «Новые иммунохимические тест-системы для лабораторной диагностики осложненного течения беремеииости, гипоксии и деструктивных процессов» был представлен на выставке: «Инновационные достижения России» XI Петербургского международного экономического форума.
Основные положения, выносимые на защиту
1. СБАГ, имеющий аналог у обезьян, является не строго гравидарным, а минорным сывороточным белком, частота выявления и уровень в крови доноров и здоровых детей которого зависит от пола, возраста и группы крови. Продукция СБАГ возрастает не только при беремеииости, но и при целом ряде патологических состояний: воспалении, опухолях, системных заболеваниях у взрослых и детей. Причем, в некоторых случаях (ревматизм, гломеру-лонефрит, бронхиальная астма и другие) уровень СБАГ достигает величин, сопоставимых с уровнем этого белка при беременности (до 100 и более мг/л).
2. СБАГ участвует в поддержании иммуногомеостаза матери и плода, а также больных воспалительными, аутоиммунными и опухолевыми заболеваниями, что подтверждено полученными результатами эксперимента in vivo по иммуносупрессивпому эффекту СБАГ, связи его продукции с другими биологически активиыми компонентами гомеостаза, а именно: с иммуноглобулинами, интерлейкинами, маркером апоптоза.
3. Сывороточный СБАГ, обладая высокой молекулярной массой, практически не выявляется в других биологических жидкостях. Обнаруженная иммунофлюоресцентным методом его локализация па лимфоцитах и в тканях некоторых органов с увеличением содержания СБАГ в плаценте и малигии-зироваиных клетках позволяет предположить наличие факторов, активирующих синтез СБАГ для реализизации его иммуномодулирующих свойств, наиболее выраженных при беременности и опухолях.
4. При выделении и очистке СБАГ из сыворотки крови следует учитывать возможность его межмолекулярных взаимодействий с некоторыми другими белками крови, например, с МГ, приводящих к изменению распределения этих белков на разделительных средах (эти взаимодействия снимаются воздействием детергентов), а также сродство СБАГ к гормональным компонентам сорбентов, содержащим эстрогены.
5. Использование теста на СБАГ в оценке течения беременности основано на достоверных изменениях концентрации СБАГ в зависимости от сроков нормально протекающей беременности и развития осложнений беременности. Его диагностическая значимость возрастает при одновременном определении СБАГ с ТБГ, так как синтез этих белков, обладающих идентичной иммуномодулирующей активностью, взаимозависим.
6. Применение иммунохимического теста на СБАГ позволяет выявлять воспаление, в том числе скрытые формы, вне зависимости от локализации и на всем протяжении процесса. Особенно полезен тест в оценке эффективности лечения при многих нозологических формах воспалительных заболеваний сердца, легких, почек и других органов.
Апробация работы
Материалы диссертации были доложены на тематических и итоговых научно-практических конференциях сотрудников ГОУ ВПО АГМА и врачей Астраханской области, а также па российских и международных форумах: V Всесоюзном биохимическом съезде (Москва, 1986); конференции «Биохимия - медицине /молекулярные механизмы формирования патологических состояний/» (Ленинград, 1988); Всесоюзном симпозиуме с международным участием «Патогенез хронического воспаления» (Новосибирск, 1991); Всероссийской научной конференции «Современные проблемы диагностики и лечения хронических неспецифических заболеваний легких у детей» (Москва-Нальчик, 1991); 1-st International Conference on Immunoreabilitation (Sochi, 1992); 1-м съезде иммунологов России (Новосибирск, 1992); of the Meetings FEBS (Federation of European Biochemical Societies) -1993 (Stockholm), 1995 (Basel); of the Meetings ISOBM (International Society for Oncodevelopmental Biology and Medicine) - 1989 (Freiburg), 1990 (Moscow), 1998 (Umea, Sweden), 2000 (Munich), 2004 (Helsinki), 2005 (Greece); 5-й научной конференции с международным участием «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге, 2001»; Европейском конгрессе по астме и IV съезде клинических иммунологов и аллергологов СНГ (Москва, 2001); 3-rd Central European Conference on Human Tumor Markers. - Cechtuma (Praga, 2001); Международной научно-практической школе-конференции «Цитокипы. Воспаление. Иммунитет» (СПб. - 23-26 июня 2002); 3-й научной конференции и школе-семииаре для молодых ученых «Белки-маркеры патологических состояний» (Астрахань-Москва, 2003); XVII Всемирном конгрессе по астме и V съезде иммунологов и аллергологов СНГ (С.-Пб., 2003); II Европейском конгрессе по Астме и I Международном конгресс «Здоровье и лекарство» (Тбилиси, Грузия, 2004); научно-практических конференциях и школах-семинарах для молодых учёных с международным участием «Современные достижения фундаментальных наук в решении актуальных проблем медицины» (Астрахань-Москва, 2004, 2006); VI съезде иммунологов и аллергологов СНГ (Москва, 2006); II и IV международных ежегодных конференциях «Проблемы диагностики и лечения рака молочной железы» (С.-Пб. - 2005, 2007); IV съезде Российского общества биохимиков и молекулярных биологов (Новосибирск, 2008).
Публикации. По теме диссертации опубликована 91 научная работа, из них 16 в рекомендуемых ВАК изданиях, 2 патента.
Объем и структура диссертации
Диссертация изложена на 253 страницах компьютерного текста, состоит из оглавления, введения, обзора литературы, шести глав собственных исследований, обсуждения, выводов, практических рекомендаций, 2 приложений, библиографического указателя, включающего в себя 302 литературных источника: 105 отечественных и 197 иностранных. Иллюстративный материал представлен 29 таблицами, 36 рисунками.
Личное участие автора в получении научных результатов заключается в формировании идеи исследования, планировании и выполнении основного объема экспериментальной части работы, в разработке плана изучения клинического материала и тестировании большей части коллекций образцов биологического материала обследуемых лиц, статистической обработке, анализе и интерпретации полученных результатов.
В работу вошли результаты исследований, проведенных совместно с представителями клинических кафедр и научных лабораторий АГМА, РГМУ, других учебных и научных учреждений. Автор выражает благодарность всем коллегам, в соавторстве с которыми были опубликованы работы.
Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Никулина, Дина Максимовна
ВЫВОДЫ
1. Установлено, что электрофоретическая подвижность в геле и объем элюции при гель-хроматографии на сефадексе, отношение к осаждающим агентам СБАГ не соответствуют молекулярной массе этого белка (365 кДа): его присутствие выявляется во фракциях «тяжелых белков». Получены прямые доказательства межмолекулярных взаимодействий СБАГ с МГ и ТБГ по достоверному (р<0,05) изменению скорости распределения указанных белков в носителях после воздействия детергентов на нативную смесь.
2. При анализе аминокислотной последовательности полипептидпых цепей СБАГ и МГ показаны высокий процент неполярных аминокислот (39 и 46% соответственно) и наличие аналогичных звеньев гидрофобных радикалов (ГР), вероятно участвующих в формировании пространственной конформации белка, а также отдельно расположенных ГР, которые могут обеспечивать межмолекулярные взаимодействия или эффект прилипания на поверхности молекулы.
3. Разработан новый рациональный способ выделения и очистки СБАГ из исходного биоматериала с использованием раствора мочевины для устранения межмолекулярных взаимодействий СБАГ с МГ и ТБГ, а также аффинной хроматографии на эстрадиол-сефарозе с триазиновой вставкой.
4. Выявлено, что иммунофлюоресцентным методом СБАГ обнаруживается в зрелой плаценте в симпласте ворсин хориона, в толстом кишечнике в эпителии крипт, в аппендиксе в области базальной мембраны, в печени в прослойках междолысовой соединительной ткани, в тканях нормального и патологически измененного эндометрия. Аденокарциноматоз существенно влияет на содержание СБАГ в органе и, соответственно, на его синтез в зависимости от органа и различной степени малигнизации. Вероятно, при канцерогенезе в клетке увеличивается содержание факторов, выполняющих роль индукторов дерепрессии структурного гена СБАГ.
5. Показано, что СБАГ в редких случаях может быть выявлен в амниотиче-ской жидкости, а при воспалении и опухолях в бронхиальном секрете и в маточном смыве. Разница в частоте выявления СБАГ в крови по полу более выражена в детском возрасте: у женщин выше в 1,5-2 раза, чем у мужчин, а у девочек раннего возраста в 4 — 7 раз по сравнению с мальчиками.
6. Установлено, что СБАГ имеет в крови обезьян полностью идентичный белок, а ТБГ - аналог с низким числом общих детерминант. Уровень СБАГ в некоторых образцах небеременных самок, сопоставимый с концентрацией его у беременных обезьян (20 мг/л), может быть основой для обсуждения эволюционных изменений иммунореактивности организма: ТБГ является более молодым белком в филогенетическом смысле, чем СБАГ, выполняющим важную биологическую роль при вынашивании материнским организмом плода.
7. Выявлена корреляция между уровнем СБАГ и иммуноглобулинами классов А и G, а также экспериментально доказан иммуносупрессивный эффект СБАГ in vivo на формирование первичного иммунного ответа у мышей, иммунизированных внутрибрюшинно эритроцитами барана. В дозе 25 мг/кг ТБГ снижает число АОК на 59,21 %, СБАГ - на 11,51%. Установлено также, что СБАГ имеет однонаправленные изменения с противовоспалительными цитокинами и разнонаправленные с провоспа-лительными цитокинами и маркером готовности к апоптозу.
8. Выявлено сродство СБАГ к гормональным компонентам сорбентов, содержащим эстрогены, и зависимость уровня СБАГ в крови больных с онкогинекологическими заболеваниями от гормонотерапии. Феномен сродства СБАГ к стероидам может быть использован при выделении и очистке белков беременности.
9. Установлено, что СБАГ является минорным белком сыворотки крови, продукция которого возрастает при ряде физиологических и патологических состояний: беременности, воспалении, опухолях, системных заболеваниях у взрослых и детей. Причем, в некоторых случаях (ревматизм, гломерулонефрит и т. д.) его уровень повышается на один-два порядка по сравнению с концентрацией в крови здоровых лиц и достигает величин, сопоставимых с уровнем этого белка при беременности.
Практические рекомендации
Разработанный способ одновременного выделения СБАГ и двух других белков, имеющих с ним межмолекулярные связи (МГ и ТБГ), позволяет экономить исходный биоматериал, реактивы, прочие ресурсы, и может быть использован в научных исследованиях и опытно-конструкторских работах для получения белковых препаратов.
Метод иммуноферментного определения СБАГ в биологических жидкостях организма (сформирован опытный образец набора ИФА на СБАГ на производственной линии) в перспективе планируется к широкому внедрению в практическую медицину как допонительный лабораторный показатель беременности и воспаления.
Способ оценки течения беременности с учетом предложенного коэффициента иммунологической адаптации системы мать-плод-плацента, основанного на взаимозависимости уровня двух белков беременности, обладающих идентичной иммуномодулирующей активностью, рекомендуется использовать для мониторинга протекающей беременности и прогнозирования состояния плода.
Иммунохимический тест на СБАГ является дополнительным лабораторным показателем воспаления вне зависимости от локализации. Особенно он полезен в оценке эффективности лечения воспалительных заболеваний.
Внедрение практических результатов диссертации может быть распространено на все лечебные учреждения акушерско-гинекологического, педиатрического и терапевтического профиля на федеральном уровне.
190
Библиография Диссертация по биологии, доктора медицинских наук, Никулина, Дина Максимовна, Москва
1. Абелев, Г.И. Альфа-фетопротеин: биологические и клинические аспекты / Г.И. Абелев // Вопр. иммунологии: Материалы симпозиума по общей иммунологии. М., 1974. - С.3-9.
2. Абелев, Г.И. 50 лет в иммунохимии опухолей / Г.И. Абелев. М.: РОНЦ им. Блохина РАМН, 2001.- 192 с.
3. Азявчик, А.В. Состав сывороточных белков крови у женщин с физиологической беременностью и при поздних токсикозах (иммунологическое и электрофоретическое исследование) / A.B. Азявчик, И.П. Иванов // Акуш. и гинек. 1969. - № 2. - С.10.
4. Алексеева, Л. А. Значение белков и пептидов цереброспинальной жидкости в клинической лабораторной диагностике- и патогенезе нейроин-фекционных заболеваний у детей : дис. . д-ра биол. наук / Алексеева Лидия Аркадьевна. Санкт-Петербург, 2003. - 225 с.
5. Алешкин, В.А. Белки острой фазы и их значение в клинической онкологии / В.А. Алешкин, Л.А. Вашакмадзе, Т.Н. Алешкина // Сов. медицина. 1988. - №7. - С.51-55.
6. Алешкин, В.А. Белки острой фазы и их клиническое значение / В.А. Алешкин, Л.И. Новикова, А.Г. Лютов, Т.Н. Алешкина // Клин, медицина. 1988. - Т.66. - 8. - С.39-48.
7. Антитела. Методы. В 2-х кн.: Кн. 1: Пер. с англ. / Под ред. Д. Кэтти. -М.: Изд-во «Мир», 1991.-287 с.
8. Антитела. Методы. В 2-х кн. Кн. 2: Пер. с англ. / Под ред. Д. Кэтти. -М.: Изд-во «Мир», 1991. 384 с.
9. Арчаков, А.И. Биоинформатика, геномика и протеомика науки о жизни XXI столетия / А.И. Арчаков // Вопр. мед. химии. - 2000. - Т. 46. - № 4. - С. 4-7.
10. Ю.Афанасьева, А. В. К характеристике сывороточных глобулинов «зоны беременности» при поздних токсикозах /А.В.Афанасьева, Н.В. Меснянкина, Л.Ф. Парфенова, Д.М. Никулина // Вопр. охраны материнства и детства. 1976. - №3. - С. 78-80.
11. П.Афанасьева, A.B. Продукция бета 1-глобулина в условиях нормального развития беременности и при поздних токсикозах / A.B. Афанасьева, М.А. Володин, Д.М. Никулина и др. // Акуш.и гинек. 1976.- № 6.-С.22-25.
12. Баженова, Л.Г. Сывороточные иммуноглобулины и белки беременности у беременных-носительниц патогенной и условно-патогенной микрофлоры. / Л.Г. Баженова, H.A. Краюшкина, А.Т. Путилова и др. // Акуш. и гинек. 1987. - № 8. - С. 47-49.
13. Н.Банникова, Г.Е. Лигандообменная хроматография бактериальной эндо-нуклеазы Serratia marcescens / Г.Е. Банникова, Г.Н. Тимофеева, С.А. Лопатин и др. // Биотехнология. 1988. - Т. 4. - №2. - С. 231 - 234.
14. Баранов, O.K. Иммунохимический анализ эволюции белков / O.K. Баранов // Успехи совр. биол. 1972. - Т. 74. - В. 3. - №6. - С. 420 - 438.
15. Барановский, П.В. Клиническое значение С-реактивного белка / П.В. Барановский, Н.Ф. Куцин // Врачебное дело. 1988. - №10. - С. 75-77.
16. Белопасова, H.A. Клинико-диагностическое значение обнаружения аль-фа2-Г-гликопротеина при заболеваниях органов дыхания у детей : Дис. . канд. мед. наук / Белопасова Наталья Аркадьевна. Астрахань, 1997 — 149 с.
17. Белоцкий С.М., Авталион P.P. Воспаление и иммунный ответ в таблицах и рисунках / С.М. Белоцкий, P.P. Авталион. — М.: Гончаръ, 2006. 64 с.
18. Бережная, Н.М. Система интерлейкинов и рак / Н.М. Бережная, В.Ф. Чехун Киев: Изд-во «ДИА», 2000. - 224 с.
19. Биология маркеров рака и беременности / Киев : Наук. Думка, 1990. — 252 с.
20. Буракова, М.В. Модификация двухмерного электрофореза, применимая для изучения скрытых минорных белков / М.В. Буракова // Вестник РГМУ, 2006, №2 /49/ : Тезисы докладов секции «Медико-биологические проблемы». 2006. - С.349.
21. Веремеенко, К.Н. Альфа2-макроглобулин: структура, свойства и физиологическая роль / К.Н. Веремеенко, О.С. Семенюта, А.И. Кизим // Украин. биохим. журнал.-1983.-Т.55. №2. - с. 218-227.
22. Воробьева Т.Б. Иммунохимические тесты на эмбриоспецифические и плацентарные белки в скрининге и мониторинге переношенной беременности: Дис. . канд. мед. наук / Воробьева Татьяна Борисовна. -Астрахань, 1991. 146 с.
23. Гааль, Э. Электрофорез в разделении биологических макромолекул / Э. Гааль, Г. Медьеши, Л.Верецки. Пер. с англ. // М.: Мир, 1982. 448 с.
24. Гайнуллина, J1.X. Сравнительное иммунохимическое и физико-химическое изучение фетоплацентарных, сывороточных и тканевых белков человека и обезьян : Дис. . канд. мед. наук / Гайнуллина Людмила Халиуловна. Астрахань, 2000. - 154 с.
25. Герштейн, Е.С. Тканевые маркеры как факторы прогноза при раке молочной железы / Е.С. Герштейн, Н.Е. Кушлинский // Практическая онкология. Т. 3, №1. - 2002, С. 38-44.
26. Говалло В.И. Иммунология репродукции / В.И. Говалло. М.: Медицина, 1987. - 304 с.
27. Головистиков, И.Н. Иммунохимическое взаимодействие белков беременности человека с иммуноглобулинами животных. / И.Н. Головисти-ков, H.A. Зорин, С.К. Кривоносов и др. Иммунология. 1987. - 6. - С. 79-80.
28. Горин, B.C. Ассоциированный с беременностью а2-гликопротеин в диагностике послеродовых гнойно-септических заболеваний / B.C. Горин, H.A. Зорин, И.Н. Головистиков и др. // Советская медицина. -1990.- 3.-С. 29-32.
29. Горлина, Н.К., Головистиков И.Н. Татаринов Ю.С., Стенина М.А. Плацентарные белки как регуляторы иммунологических реакций при беременности / Н.К. Горлина, И.Н. Головистиков, Ю.С. Татаринов, М.А. Стенина // Онтогенез. 1983. - Т. 14. - №1 - С.205-208.
30. Дербенева, Л.И. Клинико-диагностическое значение изучения альфа-2-гликопротеина при заболеваниях сердца у детей / Дисс. канд. мед. наук, Астрахань, 1991. 156 с.
31. Детерман, Г. Гель-хроматография / Г. Детерман М.: Изд-во «Мир», 1970.- 144 с.
32. Дмитриев, А. Д. Механизмы образования и антигенсвязывающие свойства бифункциональных моноклональных антител : Дис. . д-ра биол. наук / Дмитриев Александр Дмитриевич. М., 2003. - 176 с.
33. Доценко, B.JI. Белки плазмы крови, их функция и диагностическое значение. Учеб. пособие / B.JI. Доценко, Г.А. Яровая. М.: ЦОЛИУВ, 1983. - 32 с.
34. Еремина, JI.C. Поиск новых диагностических маркеров рака предстательной железы. / JI.C. Еремина // Вестник РГМУ, 2006, №2 /49/ Тезисы докладов секции «Медико-биологические проблемы» 2006. - С. 351.
35. Жабин, С.Г. Белки беременности при аномалиях и внутриутробной задержке развития плода у женщин с первично низким расположением плаценты / С.Г. Жабин, О.Б. Дубленников, H.A. Краюшкина // В кн.
36. Прогнозирование и профилактика нарушений здоровья матери и ребенка». -М, 1988.-С. 126-129.38.3аварзин, A.A. Труды по теории параллелизма и эволюционной динамике тканей / A.A. Заварзин. - JL: Изд-во Наука, 1986. - 196 с.
37. Зорин, H.A. Проблемы эволюции семейства макроглобулинов человека и животных / H.A. Зорин, С.Г. Жабин, О.Ф. Лыкова и соавт. // Журнал эволюц. биох. и физиол. 1992. -Т.28. - №4. - С.441-446.
38. Зорин, H.A. Роль белков семейства макроглобулинов в регуляции опухолевого роста / H.A. Зорин, В.Н. Зорина, P.M. Зорина // Онтогенез. -2006.-Т. 37.-С. 12-19.
39. Иммунологические методы / Под ред. Г. Фримеля, пер. с нем. А.П. Тарасова. М.: Медицина, 1987. - 472 с.
40. Иммунология (в трех томах) / Под ред. У. Пола. М.: Изд-во «Мир», 1987.- 1988. -Т. 1.-476 с.
41. Иммунология (в трех томах) / Под ред. У. Пола. М.: Изд-во «Мир», 1987.- 1989.-Т. 3.- 360 с.
42. Иммуноферментный анализ / Пер. с англ. под ред Т. Нго и Г. Ленхоф-фера. -М.: Изд-во «Мир», 1988. 446 с.
43. Киселев, JI.JI. Молекулярная биология от 1970 до 2000 и дальше / JT.JI. Киселев // Биоорганическая химия. 2000. - Т. 26. - № 10. С. 767-771.
44. Крепец, В.В. Предсказание связывающей способности белок-лигандных комплексов при помощи нелинейных моделей /В.В. Кре-пец, Н.В. Белкина, B.C. Скворцов, A.C. Иванов // Вопр. мед. химии. -№5.-2000.-С. 58 -63.
45. Кирпичников, B.C. Биохимический полиморфизм и проблема так называемой эволюции / B.C. Кирпичников // Усп. совр. биол. 1972. - Т. 74. -В. 2. -№5. -С. 231-246.
46. Коханов, A.B. Влияние альфа-фетопротеина человека и некоторых животных на реакции клеточного и гуморального иммунитета: Дис. . канд. мед. наук / Коханов Александр Владимирович. М., 1987. -148 с.
47. Кривенцев, Ю.А. Изучение физико-химических свойств и межмолекулярных взаимодействий сывороточных белков беременности : Дис. . канд. мед. наук / Кривенцев Юрий Алексеевич Астрахань, 1999.- 141 с.
48. Кривоносое, С.К. Иммунохимическое изучение взаимодействия тро-фобластического В-гликопротеина человека со стероидными половыми гормонами./ С.К. Кривоносов, H.A. Зорин, Н.К. Иоиова и др. // Онтогенез. 1991. - Т.22. - №3. - С.300-303.
49. Куликов, В. В. Определение локализации белков беременности в тканях человека : Дис. . канд. мед. наук / Куликов Вячеслав Валерьевич -Астрахань, 2008. 116 с.
50. Кухта, В.К. Белки плазмы крови: справочник / В.К. Кухта, Э.И. Олец-кий, А.П. Стожаров. Минск, Беларусь, 1986. - 80с.
51. Лепехина, JI.A. Изучение иммуномодулирующей активности белков беременности и возможности использования тестов па них для оценки иммунокоррекции : Дис. . канд. мед. наук / Лепехина Лариса Анатольевна Астрахань, 2001. - 167 с.
52. Лийвранд, В.Э. О сдвигах белков сыворотки крови при нормальной беременности и родах / В.Э. Лийвранд // Уч. Зап. Тартуского унив-та,1958. Т. 57. - С145-148.
53. Лопатин, С.А. Лигандообменная хроматография белков и ферментов / С.А. Лопатин, В.П. Варламов, В.А. Даванков // Биоорг. химия. 1990. -Т. 16. - № 6. - С. 726 - 750.
54. Лысюк, Е. Ю. Экспрессия белков, регулирующих апоптоз, на лейкоз-ных клетках разных этапов B-клеточной дифференцировки : Дис. . канд. биол. наук / Лысюк Елена Юрьевна. М., 2004. - 114 с.
55. Мальцева, Н.В. Сравнительное изучение иммуносупрессивных свойств ассоциированного с беременностью протеина А и альфа2-гликопротеина, а также альфа2-макроглобулина / Н.В. Мальцева, B.C. Гарин, С.Г. Жабин, H.A. Зорин //Акуш. и гинек. 1991.- № 5.-С.27-29.
56. Максимова, А. В. Растворимые формы мембранных белков клеток иммунной системы при бронхиальной астме у детей : Дис. . канд. биол. наук / Максимова Анна Владимировна. Н. Новгород, 2006.
57. Медицинская лабораторная диагностика (программы и алгоритмы) Справочник / Под ред проф А.И.Карпищенко. С-Пет., Интермедика, 1997, 304 с.
58. Меснянкина, Н.В. Иммунохимическое определение альфа2-Г-глобулина в сыворотке крови здоровых женщин в различные возрастные периоды / Н.В.Меснянкина, Ю.С. Татаринов // Лабор. дело. -1973. № 9. - С.568.
59. Моноклональные антитела. Гибридомы: новый уровень биологического анализа /Пер. с англ., под ред. Р.Г. Кеннета, Т. Дж. Мак-Керна, К.Б. Бехтол. М.: Медицина, 1983. - 416с.
60. Молдогазиева, Н.Т. Альфа-фетопротеин и факторы роста. Структурно-функциональные взаимоотношения и аналогии / Н.Т. Молдогазиева, A.A. Терентьев // Успехи биолог, химии. 2006. - Т. 4. - С. 99-148.
61. Мингалев, H.B. О диагностической ценности альфа-2-гликопротеина в качестве опухолевого маркера у больных раком гортани / Н.В. Минга-лев, Г.В. Вержбицкий, О.Ф. Лыкова // Вестн. отоларингологии. 1993. № 1. с. 1416.
62. Мусатов, М.И. Влияние ассоциированного с беременностью протеипа А на первичную аллогенную смешанную культуру лимфоцитов человека / Мусатов М.И., Жабип С.Г., Протопопов Б.В. и др. // Иммунология. 1992.-3.-С. 59-60.
63. Назаров, П.Г. Реактанты острой фазы воспаления / Назаров П.Г. С-Пет. : «Наука», 2001.-424 с.
64. Назаров, П.Г. С-реактивный белок в системе иммунорегуляции (обзор) / П.Г. Назаров, Б.Н. Сафронов // Иммунология. 1986. -№4. - С. 12-18.
65. Никулина, Д.М. Идентификация белков «зоны беремеииости» в биологических жидкостях матери и плода при нормально развивающейся беременности / Д.М. Никулина, A.B. Афанасьева, Л.Ф. Парфенова // Акушерство и гинекология. 1976. -№10. - С.58-61.
66. Никулина, Д.М. Иммунохимическое, физико-химическое и клиническое изучение бета1-глобулина «зоны беременности» : Дис. . канд. мед. наук / Никулина Дииа Максимовна. Астрахань.- 1977. 144 с.
67. Петров, P.B. Оценка иммунного статуса человека. Методические рекомендации МЗ СССР / Р.В. Петров, Ю.М. Лопухин, А.Н. Чередеев // М., 1984.-36с.
68. Петров, Р.В. Оценка состояния здоровья практически здоровых лиц с помощью иммунологических показателей / Р.В. Петров, A.A. Михай-ленко // Иммунология. 1990. - №1. - С.60-64.
69. Петрунин, Д.Д. Сравнительное изучение четырех белков плаценты человека в процессе развития беременности. / Д.Д. Петрунин, Ю.С. Тата-ринов, В.В. Калашников и др. // Акуш. и гинек. 1988. - №1. - С.50-51.
70. Полевщиков, A.B. Иммуноцитотропные эффекты С-реактивного белка / A.B. Полевщиков, П.Г. Назаров // Иммунология. 1993. - 4. - С.6-9.
71. Прокопенко, П.Г. Идентификация и характеристика белка сыворотки крови больных раком яичников / П.Г. Прокопенко, С.А. Борисенко, A.B. Соколов, A.A. Терентьев // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2002 . - Т. - 133. - С.186-191.
72. Посисеева, Л.В. Трофобласт-специфический бета-гликопротеин в акушерстве и гинекологии / Л.В. Посисеева, С.Б. Назаров, Ю.С. Татари-нов. Иваново: ОАО «Издательство «Иваново», 2004. - 240 с.
73. Розен, В.Б. Взаимодействие стероидных гормонов с белками плазмы крови / В.Б. Розен // Проблемы эндокринологии 1964. - №5. - 107 с.
74. Самунджан, Е. М. Стероидный баланс у больных раком молочной железы различной гистоструктуры / Е. М.Самунджан, А. Н. Горевая, Н. С. Картавова, П. Я. Некрасов // Вопр. Онкологии. — 1980. 26, № 9. - С. 37-41.
75. Сапожников, А. М. Функции белков теплового шока в популяциях лимфоидных клеток: Дис. . д-ра биол. наук / Сапожников Александр Михайлович. -М., 2003. -224 с.
76. Сепиашвили Р.И., Шубич М.Г., Колесникова Н.В. и др. Апоптоз в иммунологических процессах // Аллергология и иммунология. 2000.-Т.1. -№1.-С. 15-23.
77. Сепиашвили Р.И. Основы физиологии иммунной системы. -М.: Медицина-Здоровье, 2003. 240с.
78. Скоупс, Р. Методы очистки белков / Р. Скоупс.; пер с англ. М., «Мир», 1985. - 385 с.
79. Сотникова, Л.Г. Белки сыворотки крови при нормальной и патологической беременности по данным электрофореза на бумаге / Сотникова, Л.Г. // Казан.мед.журнал. 1959. - Т. - 40. - №6. - С. 79-81.
80. Татаринов, Ю.С. Сравнительное иммунохимическое изучение альфа2-и бетагглобулинов сыворотки крови беременных женщин / Ю.С. Татаринов, В.Н. Масюкевич, Э.К. Емельянчик и др. // Акушерство и гинекология. 1971. - №10. - С.35-38.
81. Татаринов, Ю.С. Иммунохимическое определение (31-глобулина «зоны беременности» в сыворотке крови больных пузырным заносом и хорионэпителиомой / Ю.С.Татаринов, Д.М. Никулина, Н.В. Меснянкина // Бюлл. экспер. биологии и медицины. - 1974.-С.9-12.
82. Татаринов, Ю.С. Прошлое и будущее онко-фетальных белков / Ю.С. Татаринов. М: ПО «Чертановская типография», 1998. - 24с.
83. Тейлор, Д.Ф. Выделение белков / Д.Ф. Тейлор // В кн. «Белки» (под ред. Нейрот и Бейли).- М.: И.Д.- 1967.- 1056.- Т.1.- С.67-69.
84. Терентьев, A.A. Стероидсвязывающие онкофетальные белки человека (идентификация, выделение, характеристика, клинические аспекты): Дис. . д-ра биол. наук /Терентьев Александр Александрович. Москва, 1990.-327 с.
85. Терентьев, A.A. Аффинная хроматография альфа-фетопротеина человека на иммобилизированных эстрогенах / А.А.Терентьев, Н.Т. Молдо-газиева, А.К. Тагирова, Ю.С. Татаринов // Бюлл. эксп. биол. мед. -1988.-№4.-С. 422-442.
86. Терентьев, A.A. Конкурентная аффинная хроматография альфа-фетопротеина человека на иммобилизованном диэтилстильбэстроле / А.А.Терентьев, Н.Т. Молдогазиева, Ю.С. Татаринов // Бюлл. экспер. биол. и мед. 1990. - №.5. - С. 438-440.
87. Туркова, Я. Аффинная хроматография / Я.Туркова. М.: Изд-во «Мир». - 1978.-432 с.
88. Уголев, А. М. Принципы организации и эволюции биологических систем / А. М. Уголев // Эволюц. биохим. и физиол. 1989. - Т. 25. - №2. -С. 215 -234.
89. Фунт, В. А. Особенности синтеза стресс белков и антиоксидантной системы в лимфоцитах крови больных ревматоидным артритом : Дис. . канд. биол. наук / Фунт Вячеслав Алексеевич. Пущино, 2005. - 109 с.
90. Хаитов, P.M. Геномика HLA: новые возможности молекулярной генетики человека в диагностике и терапии / P.M. Хаитов, Л.П. Алексеев // Молекулярная медицина. 2003. - № 1. - С. 17-31.
91. Чехонин, В.П. Иммунохимический анализ нейроспецифических антигенов / В.П. Чехонин, Т.Б. Дмитриева, Ю.А. Жирков М: Медицина, 1999.-416 с.
92. Ширшев, С.В. Белки фетоплацентарного комплекса в регуляции иммунных реакций / С.В. Ширшев // Усп. совр. биол. 1993. - 113 (2). - С.: 230-246.
93. Afonso, J.F. Studies of a new е 1 ektrophoretic zone in labor and the puer-perium and in newborn infants / J.F. Afonso, N.G. Farnham // Amer.J.Obstet. Gynec. 1962. - V.84. - P. 199.
94. Afonso, J.F. Further stark gel fractionation of new protein zones in pregnancy / J.F.Afonso, R.R. De Alvarez // Amer. J. Obstet. Gynec. 1963. -V.86.-P.815.
95. Ahmed, A.I. Studies on the half-life on schwangerschaftsprotein / A.I. Ahmed, A. Klapper // Brit. J. Obstet.Gynaecol. 1983. - V.90. - № 10. - P. 904-907.
96. Albala, JS. Array-based proteomics: the latest chip challenge / J.S. Albala // Expert Rev Mol Diag. 2001 Jul; 1(2). - P. 145-52.
97. Alvarez, R.R. Serum protein fractionation in toxemia of pregnancy / R.R. Alvarez, J.F. Afonso // Amer. J. Obstet. Gynec. 1964/ - V.88. - P.774.
98. Anderson, L., Seihamer J. // Electrophoresis. 1997. - 18. - P. 533-537. (цитируется по А.И. Арчакову, см. список)
99. Angenendt, P. Cell-Free Protein Expression and Functional Assay in Nanowell Chip Format / P. Angenendt, L. Nyarsik, W. Szaflarskiat at al. // Anal Chem. -2004. 76. - P.l844-1849.
100. Antoine, J.C. Anti-neuronal antibodies and central nervous system diseases: contribution to diagnosis and pathophysiology / J.C. Antoine, J. Hon-norat // Rev Neuron, Paris, 2000. Jan; 156 (1). - P. 23-33.
101. Arbelaez, R.F. Probing different contromational testes of pregnancy zone protein / R.F. Arbelaez, P.E. Jensen, V.P. Shanbhag, T. Stigbrand // Eur. J. Biochem. 1993.-218. - №2. - P.651-657.
102. Arbelaez, L. Interaction of Matrix Metalloproteinases-2 and -9 with Pregnancy Zone Pritein and a2-Macroglobulin / L. Arbelaez, U. Bergmann, A. Tuuttila at al. // Archives of Biochemistry and Biophysics. 1997. - V.347. — №.1.-P. 62-68.
103. Bauer, K. Vergleichende Seruimeibunteruchungen bei Mutter und Neugeborenen. III. Mitt. Das Verhalten eines schwangerschafts abhangigen Protein bei gestörter Schwangerschaft / H. Bayer, D. Kadach // Zbl. Gynak. 1970. - 92.-S. 1264.
104. Baumann, H. Interleukin-1 regulates the hepatic expression of the same plasma protein genes as interleukin-6 / H. Baumann, P. Schendel // J. Biol. Chem. 1991. Vol.266.P.20424- 20427.
105. Bayer, H. Die Bedeutung der Serumproteinveranderungen in der normalen und pathologischen Schwangerchaft. II Mitteilung. Auftreten und Häufigkeit von schwengerschaftbedingten Serumfaktoren / H. Bayer // Z.Geburtsh. Gynak. 1966. - Bd 165. - S. 155.
106. Bayer, H. Die Bedeutung der Sorumproteinveranderungen in der normalen und pathologischen Schwangerschaft. III Mitteilung. Das Serumproteinbild in der 1. Hälfte der normalen Schwangerschaft / H. Bayer // Z. Geburtsh. Gynak. 1966. Bd. - 165. - S. 300.
107. Bock, C. Photoaptamer arrays applied to multiplexed proteomic analysis / C. Bock, M. Coleman, B. Collins at all. // Proteomics 2004. 4.- P. 609618.
108. Bebo, B.F. Jr. Evidence that pregnancy specific glycoproteins regulate T-Cell function and inflammatory autoimmune disease during pregnancy / B.F. Jr. Bebo, G.S. Dveksler // Curr. Drug Targets Inflamm. Allergy. 2005 - V. 4.-P. 231-247.
109. Beckman, L. Induction of the "pregnancy zone" protein by oral contraceptives / L. Beckman, B. Schoultz, T. Stigbrand // Acta Obstet. Gynec. Scand. 1971.-50. - P. 369.
110. Berne, B. H. Alpha2 pregnoglobulin (pregnancy zone protein) a unique macroglobulin in pregnancy, contraception and cancer / B. H. Berne // Fed. Proc.- 1973.-32/3. P. 677.
111. Berne, B. H. Standardization of nomenclature for pregnancy associated al-pha2-glycoprotein / B. H. Berne, R. Hofmann, B. Klausch, at al. // Lancet. -1975.-N7930. -P. 367.
112. Bersinger, N.A. A comparison between pregnancy-associated alpha2-glycoprotein, cercino-embryonic antigen, CA-125, and CA 15-3 as tumor markers in breast cancer / N.A. Bersinger, G.C. Rageth // Eur. J. Gynaecol-Oncol. 1990. - V.l 1. - P. 135-144.
113. Bini, L. Two-dimensional electrophoretic patterns of acute-phase human serum proteins in the course of bacterial and viral diseases / L. Bini, B. Magi, B. Marzocchi at al. // Electrophoresis.-1996. V. 17. - №3.- P. 612616.
114. Black, J.L Serologic survey of adult patients with OCD for neuron-specific and other autoantibodies / J.L. Black, G.T. Lamke, J.E. Walikonis // Psychiatry Res. 1998, Dec 81. - P. 371- 380.
115. Blackstock, W.P. // Proteomics: A Trends Guide. 2000. P. 12-17. (цитируется по А.И. Арчакову, см. список).
116. Bohn, H. Kristallisation und Hochtreinigung des humanen Plazenta Lak-togens / H. Bohn // Specialia. - 1970, Bd. 15. - S. 10.
117. Bohn, H. Nachweis und Charakterisierung von Schwangerschaftsprotein-nen in der menshlichen Placenta sowie ihre quantitative immunologische Bestimmung in Serum schwangeren Frauen / H. Bohn // Arch. Gynak. -1971.- Bd. 210, 4.-S. 440.
118. Bohn H. Isolierung und Charakterisierung des schwangerschaf spezifischen beta-1 -Glykoproteins / H. Bohn // Blut. 1972. - Bd. 24. - S. 292.
119. Bohn, H. Charakterisierung der schwangerschaftsassoziierten Glykopro-teine als akute Phase-Proteine / H. Bohn // Arch. Gynäk. 1972. 54. - P. 213-215.
120. Bohn H. Detection, characterization and diagnostic significance of human pregnancy-associated glycoproteins / H. Bohn // Blut. 1973. - Bd. 26. -P.205.
121. Bohn, H. Isolierung, Charakterisierung des schwangerschaftsspezifischen Alpha2-glycoproteins (Alpha2PAG) / H. Bohn, W. Winckler // Blut. 1976. - 33.-P. 377-388.
122. Bohn H., Winder W. Isolation and characterization of four new placental tissue proteins (PP18, PP19, PP20, PP21) / H. Bohn, W. Winder // Arch. Gynec. 1985 ; 236. - P. 235-242.
123. Bouwman, K. Microarrays of tumor cell derived proteins uncover a distinct pattern of prostate cancer serum immunoreactivity / K. Bouwman, J. Qiu, H. Zhou at al. // Proteomics 2003 3:2200-7
124. Briese, V. Serum concentrations of pregnancy-associated a2-glycoprotein in diabetic pregnancy complicated by nonfulminant and fulminant proliferative retinopathy / V. Briese, W. Straube, E. Glockner // Zbl. Gynak. 1991. -Bd. 113. - S. 1042-1045.
125. Bundschuh, G. Xh ein genetisch determiniertes alpha2-globulin / G. Bundschuh// Acta. Biol. Med. Germ. - 1966. - Bd. 117. - S. 349.
126. Bundschuh, G. Uber die Häufigkeit eines wahrend der Schwangerschaft nachweisbaren alpha-2-Globulin / G. Bundschuh // Zbl. Gynak. — 1967. -Bd. 89. S. 348.
127. Carlsson, L. Antigenic determinance of pregnency-associated alpha2-glycoprotein and alpha2-macroglobulin by poly- and monoclonal antibodies / L. Carlsson, I. Folcersen, T. Stigbrand // Mol. Immunol. 1985. - V.22. -P.1073-1080.
128. Carlsson-Bostedt, L. Effects of oestrogen and human growth hormone on pregnancy-associated plasma proteins in the rat / L. Carlsson-Bostedt, R. Frohlander, S. Eden, B. Schoultz // Acta, endocrinol. 1987. -V.116. - P. 229-304.
129. Carlsson-Bostedt, L. Three different conformational states of pregnancy zone protein identified by monoclonal antibodies / L. Carlsson-Bostedt, S.K. Moestrup, J. Gliemann at al. // J. Biol. Chem. 1988. May 15. - V.263. - P. 6738-6779.
130. Castell, J.V. Acute-phase response of human hepatocytes: regulation of acute-phase protein synthesis by interleukin-6 / J.V.Castell, M.J. Gomez-Lechon, M. David at all. // Hepatology.-1990.-V.12. №5,- P. 1179 -1186.
131. Cerwenka, A. Fas- and activation-inducer apoptosis are reduced in human T cells preactivated in the presence of TGF-beta 1 / A. Cerwenka, H. Kovar, O. Majdic, W. Holter // J. Immunol. Vol.156. - P. 459-464.
132. Chappara, G. Evaluation of apoptosis of eosiniphils, macrophages, and T lymphocytes in mucosal biopsy speciments of patients with asthma and chronic bronchitis / G. Chappara et al. // J.Allergy Clin. Immunol. 1999. — Vol.103.-P. 563-573.
133. Chowdhury, R.S. The production of pregnancy-associated a-glycoprotein frim human peripheral blood mononuclear cells / R.S. Chowdhury, A. Under, G.S. Panayi // Clin. Rheumatol. 1987. - V.6. - P. 417- 422.
134. Christensen, U. Pregnancy zone protein, a proteinase-binding macroglobu-lin. Interactions with proteinases and methylamine / U. Christensen, M. Si-monsen, N. Harrit, L. Sottrup-Jensen // Biochemistry. 1989. - Now 28. -V.28. - P. 9324-9355.
135. Christensen, U. Kinetic and mechanism of proteinase-binding of pregnancy zone protein / U. Christensen, L. Sottrup-Jensen, M. Simonsen // J. Enzym. Inhib. 1992. - V.5. - P. 269-348.
136. Cormican, L. IFN-gamma but not IL-4 T cells of the asthmatic bronchial wall show increased incidence of apoptosis / L. Cormican, S. O'Sullivan, C.M. Burke, L.W. Poulter // J. Clin. Exp. Allergy. 2001. - Vol.31. - P. 731-739.
137. Delehanty, J.B. Method for printing functional protein microarrays / J.B. Delehanty, F.S. Ligler // Biotechniques 2003. 34. - P. 380-385.
138. Delehanty, J. B. Printing functional protein microarrays using piezoelectric capillaries / J.B. Delehanty // Methods Mol/ Biol. 2004. - 278. - P. 135-44.
139. Devriendt, K. Opposite effects of growth hormone and estrogens on the pregnancy zone protein serum levels in children and addlescents / K. Devriendt, G. Massa, F. de Zegher at al. // Acta Endocrinol. 1993. - Vol. 128,N4.-P. 334-338.
140. Dong, Q. Expression of C-reactive protein by alveolar macrophages / Q. Dong, J.R. Wright // J.Immunol.-1996.-V. 156. -,№ 12. P. 4815-4820.
141. Drews, O. High pressure effects step-wise altered protein expression in Lactobacillus sanfranciscensis / O. Drews, W. Weiss, G. Reil, H. Parlar, R. Wait, A. Gorg. // Proteomics. 2002 Jun; 2(6). - P. 765-74.
142. Drews, O. Setting up standards and a reference map for the alkaline pro-teome of the Gram-positive bacterium Lactococcus lactis / O. Drews, G. Reil, A. Gorg // Proteomics. 2004 May; 4(5). - P. 1293-1304.
143. Drews, O. DynaProt 2D: an advanced proteomic database for dynamic online access to proteomes and two-dimensional electrophoresis gels. / O. Drews, A. Gorg // Nucleic Acids Res. 2005 Jan; 33: - D583-D587
144. Du, W. Biochip as a potential platform of serological interferon alpha2b antibody assay / W. Du, Z. Xu, X. Ma at al. // J Biotechnol. 2003. - 106. -P. 87-100.
145. Duc-Goiran, P. Expression and localization of alpha-fetoprotein mRNA and protein in human early villous trophoblasts / P. Duc-Goiran, T.M. Mignot, B. Robert at al. // Placenta. 2006 - V.27 - P. 812-821.
146. Dunker, N. TGF-b is required for programed cell death in interdigital webs of the developing mouse limb / N. Dunker, K. Schmitta, K. Kriegl-steina // Mech. Dev. 2002. - Vol. 113. - P. 111 -120.
147. Dunston, G. M. Further studies of Xh. A serum protein antigen in man / G.M. Dunston, H. Gershowitz // Vox Sang. 1973. - V.24. - P. 343.
148. Dunston, G. M. A hormonally influenced human serum globulin: elevated of Xh by estrogen / G.M.Dunston, H. Gershowitz // J. Lab. Clin. Med. -1974. 84,2.- P.187.
149. Erin, L. Pregnancy zone protein is a carrier and modulator of placental protein-14 in T-cell growth and cytokine production / L. Erin, N. Kiyatkinab, M.Weberb // Cellular Immunology. 2004 - V. 232, Issues 1-2, P. 144-156.
150. Ermolenko, D.N. Anti-peroxidase antibodies enhance refolding of horseradish peroxidase / D.N. Ermolenko, A.V. Zherdev, B.B. Dzantiev, V.O. Popov // Biochemical & Biophysical Research Communications. — 2002. -V. 291, N4.-P. 959-965.
151. Farr, A.G. Immunogistochemistry with enzyme labeled antibodies: a brief review / A.G. Farr, P.K. Nardhe // J. Immunol. Meth. 1981.- 47. - №2. - P. 129-144.
152. Feng, Y. Parallel detection of autoantibodies with microarrays in rheumatoid diseases / Y. Feng, X. Ke, R. Ma at al. // Clin. Chem. 2004. - 50. - P. 416-22.
153. Futcher, B. et al. // Mol. Cell Biol. 1999. -19. - P. 7357-7368. (цитируется по А.И.Арчакову, см. список).
154. Garret, P.E. Clinical Utility of Oncofetal proteins and Hormones as Tumor Markers / P.E. Garret, S.R. Kurtz // Med. Clin. N. Amer. 1986. - V.70. -№6.-P. 1295-1297.
155. Gerrie, L.M. Serum concentrations of pregnancy specific and pregnancy-associated proteins in early gestation / L.M. Gerrie, G. Luke, A. Klopper, N.A. Bersinger// Arch. Gynekol. 1986. - V.237. - №4.-P.221-228.
156. Gettins, P. NMR and ESP studies on human pregnancy zone protein. Comparison with human alpha2-macroglobulin / P. Gettins, L. Sottrup-Jensen // J. Biol. Chem. 1990. May 5. - Y 265. - P.7268-299.
157. Gilbert, I. Double chip protein arrays using recombinant single-chain Fv antibody fragments / I. Gilbert, S. Schiffmann, S. Rubenwolf at al. // Proteomics. 2004: 4.
158. Gliemann, G. Evidense for binding of human pregnancy zone proteinase complex to alpha2-macroglobulin receptors / G. Gliemann, S. Moestrup, P. Henning-Jensen, L. Sottrup-Jensen at al. // Biochim. Biophys. Acta. 1986. Oct 1.-Y.883.-P.400-406.
159. Grabar, P. Methode permettant tetude conjugate des propriétés electripho-retigues et immunichimigues d un melange de proteines. Application au serum sanguine / P. Grabar, C.P. Williams // Biochim. Biophus. Acta. 1953. -Y.10.-P. 193.
160. Grant, G.H. Gel immunofiltration. A new technique for the qualitative analysis of serum proteins / Grant G.H., Elerall P.H. // J. Clint. Path.-1965. -V.18. P. 654.
161. Guschin, D. A Manual manufacturing of oligonucleotide, DNA, and protein microchips / D. Guschin, G. Yershov, A. Zaslavsky at al. // Anal Bio-chem. 199. -7250. - P. 203-211.
162. Hall, P.K. Physical and chemical properities of human plasma a2-macroglobulin / P.K. Hall, R.C. Roberts // Biochem. J. 1978. - 173. - №1. -P. 27-38.
163. Hale, L.P. Zinc {alpha}-2-glycoprotein Regulates Melanin Production by Normal and Malignant Melanocytes / L. P. Hale // J. Invest. Dermatol. August 1, 2002. - 119(2). - P. 464 - 470.
164. Harrison, R.F. Maternal plasma human placental lactogen, a-fetoprotein, prolactin and growith hormone in early pregnancy / R.F. Harrison, S. Biswas // Int. J. Obstet. Gyanecol. 1980. - V.17.-№5. - P.474-476.
165. Hirschfeld, I. Immuno-electrophoretic demonstration of precipitating components in sera from pregnant women / I. Hirschfeld, V. Soderberg // Nature. 1960. - V.187. - P. 333-335.
166. Hofmann, R. Immunochemische Untersuchungen zum problem der "pregnancy zone". I. Antischwangeren-Immunoserum / R. Hofmann, H. Friemel, E. Behm //Arch. Gynak. 1969. - Bd.208.-№2. - S.178-180.
167. Hofmann, R. Immunochemische Untersuchungen zum problem der "pregnancy zone". II. Antiplazenta-Immunoserum / R. Hofmann, H. Friemel, E. Behm // Arch. Gynak. 1969. - Bd.208.- №2.- S. 187-188.
168. Hofmann, R. III. Analytic schwangerschaftstypischer Antigene / R. Hofmann, H. Friemel, E. Behm // Arch. Gynak. 1970. - Bd. 208. - N.3. - S. 255.
169. Hofmann, R. Immunochemische Untersuchungen zum problem der "pregnancy zone". 6. Identifizierung und Nachweis des Schwangerschaftstypischen Proteins des Schwangerschaftszone / R. Hofmann, W. Straube, B. Klausch // Arch. Gynak. 1972. - Bd. 212.- S. 246.
170. Hörne, C. H. W. Serum a-macroglobulins in renal disease and preeclampsia / C. H. W. Hörne, J. O. Briggs, P. W. Howie, A. C. Kennedy // J. Clin. Path. 1972. - Vol. 25. - P. 590-593.
171. Horne, C.H.W. Studies on pregnancy-associated globulin / C. H. W. Home, A.L.C. Mc Lay, H.B. Tavada, at al. // Clin. Exp. Immunol., 1973. V.15. -P.603
172. Horne, C.H.W. Pregnancy-proteins / C.H.W. Home, A.D. Nisbet // Invest. Cell. Pathol.- 1979.-V.2.- №3,- P. 217-231.
173. Horne, C.H.W. Deficiency of serum «pregnancy-associated» a2-glycoprotein association with diseases / C.H.W. Home, L.M. Gerrie, S.S. at al. Hi. Clin. Pathol. 1986. -V.39. - №2. - P.195-198.
174. Huang, R. Enhanced protein profiling arrays with ELISA-based amplification for high-throughput molecular changes of tumor patients' plasma / R. Huang, Y. Lin, Q. Shi at al. // Clin Cancer Res. 2004. 10. - P. 598-609.
175. Huppertz, B. The apoptosis cascade morfological and immunohisto-chemical methods for its visualisation // Huppertz B., Frank H.-G., Kauff-man P. Anat. Embryol. - 1999. - Vol. 200. - P. 1-18.
176. Jacobsen, L. Molecular Characterisation of a Novel Human Hybrid-type Receptor That Binds the a2-Macroglobulin Receptor-associated Protein / L. Jacobsen, P. Madsen, S. Moestrup // The Journal of Biological chemistry. -1996.-V.271.-49.- P.31379.
177. Jung, G.Y. Stephanopoulos G A functional protein chip for pathway optimization and in vitro metabolic engineering / G.Y. Jung, G. A Stephanopoulos // Science. 2004. - 304.- P. 428-431.
178. Kadach, D.- Identifizierung eines schwangerschaftsabhangigen a2-globulin / D. Kadach // Zbl. Gynak. 1970. - Bd.92. - S. 1321-1327.
179. Kasukawa, R. An inherited and pregnancy associated alpha2-globulin in Japanese sera / R. Kasukawa, H. Joshida, T. Joshida // Int. Arch. Allergy. -1973.- V.44.-P.302.
180. Kasukawa, R. Pregnancy-associated a2-glycoproteinin rheumatais arthritis / R. Kasukawa, M. Ohara, H. Joshida, T. Joshida // Intern. Arch. Aller. Appl. Immun. 1979. - V.58. - P. 67-74.
181. Kawahashi, Y. In vitro protein microarrays for detecting protein-protein interactions: application of a new method for fluorescence labeling of proteins / Y. Kawahashi, N. Doi, H. Takashimaat all. // Proteomics. 2003. - 3. - P.1236-1243.
182. Klausch, В. Взаимосвязь между белком «зоны беременности» и фето-плацентарным комплексом / В. Klausch, W. Kyank, R. Hufmann, W. Straube // Тезисы Международного конгресса акушеров-гинекологов. -М., 1973.-Р. 276.
183. Koj A. Metabolic studies of acute-phase proteins / A.Koj. In book: Pathophysiol. Plasma Protein Metab. New York-London, 1984. - P.221-248.
184. Koopmann, J.O. High affinity capture surface for matrix-assisted laser desorption/ionisation compatible protein microarrays / J.O. Koopmann, J. Blackburn // Rapid Commun. Mass Spectrom. 2003. - 17. - P. 455-462.
185. Kotby, A.A. Antineuronal antibodies in reumatic chorea / A.A. Kotby, N.E1. Badawy, S.E1. Sokkary at al. // Clinical and diagnostic laboratory. -1998. V.5. - № 6. - P. 836-839.
186. Krantz, D.A. First-trimester Down syndrome screening: free beta-human chorionic gonadotrophin and pregnancy-associated plasma protein A / D.A. Krantz, J.W. Larsen, P.D. Buchanan, J.N. Macri // Am. J. Obstet. Gynecol. 1996.- 174.-P. 612-616.
187. Kuczynski, J.W. Badania immunochemiczne nad bialkien ciazowym / J.W. Kuczynski // Prace Komis. Med. Doswiadcz. Pozn. Towarzy. Przyiac. Nauk. 1969. - 39. - 165.
188. Kurecki, T. Purification of human plasma a2-macroglobulin and al-proteinase inhibitor using zinc chelate chromatography / T. Kurecki, L.F. Kress, M.S. Laskowski // Anal.Biochem. -1979. V. 99. - № 2. - P. 415-420.
189. Kueppers F. Studies on the Xh antigen in human serum Humangenetic / F. Kueppers //1969. V.7. - P. 98.
190. Laurino, G.P. An immunoassay for antineuronal antibodies associated with involuntary repetitive movement disorders / G.P. Laurino, J. Hallet, L.S. Kiessling at al. // An. Clin. Lab. Sci. 1997. - May-Jun; 27(3). - P. 230-235.
191. Lee,Y. ProteoChip: a highly sensitive protein microarray prepared by a novel method of protein immobilization for application of protein-protein interaction studies / Y. Lee, E.K. Lee, Y.W. Cho at all. // Proteomics. 2003. -3.-2289-2304.
192. Lin, T-M. Three pregnancy-associated human plasma proteins: purification, monospecific antisera and immulogical identification / T-M. Lin, S.P. Halbert, D. Kiefer, W.N. Spellacy // Int. Arch. Allergy. 1974. - V.47. -P.35-47.
193. Lin, T.M. Characterisation of four human pregnancy-associated plasma proteins / T.M. Lin, S.P. Halbert, W.N. Spellacy, S. Gall // Amer. J. Obstet. Gynec. 1974.- V.118. - №2.- P.223-227.
194. Lueking, A. DynaProt 2D: an advanced proteomic database for dynamic online access to proteomes and two-dimensional electrophoresis gels / A. Lueking, A. Possling, O. Drews, A. Gorg // Nucleic Acids Res. 2005, Jan. -33.-D583-D587.
195. Lueking, A. A non-redundant human protein chip for antibody screening and serum profiling / A. Lueking, A. Possling, O. Huber at all. // Mol. Cell Proteomics. 2003., Sep. P. 29.
196. Luke, G. Comparison of the concentration of schwangerschaftsprotein 1 in the serum and urine of pregnant cancer / G. Luke, A. Klopper, N. Bersingen // Int. J. Cancer. 1983. - V.32. - №2. - P. 205-209.
197. Mac Laren, J.A. A new inherited alpha-2-globylin of human serum / J.A. Mac Laren, D.E. Reid, A.A. Konugres, F.H. Allen // Vox Sang. -1966. -V.ll.- P. 553.
198. Marcolis, J. «Pregnancy protein» in poliacrylamide gradient gel electrophoresis / J. Marcolis, K.G. Kenrick // Austr. J. Exp. Biol. Med. Sci. 1969. -V. 47. -P.637.
199. Mendenhall, H.W. Serum protein concentration in pregnancy. Concentration in maternal serum / Mendenhall H.W. // Amer. J. Obstet. Gynec. — 1970. V.106. - P.338.
200. Mendoza, L.G. Pligh-throughput microarray-based enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) / L.G. Mendoza, P. McQuary, A. Mongan at al. // Biotechniques. 1999. - 27. - P. 778-788.
201. Mody, N.J. Rivanol precipitation technique for the detection of aipha-feto-protein / N.J. Mody, C.L. Vogel, I.R. Patel and K.R.Mc. Intirc // J. Lab. Clin. Med. 1972. - V. 80. - N. 1. - P.125.
202. Mooney, J.F. Patterning of functional antibodies and other proteins by photolithography of silane monolayers / J.F. Mooney, A.J. Hunt, J.R. Mcintosh at al. // Proc Natl Acad Sci USA. 1996. - 93. -12287-12291.
203. Morgan, E. Cytometric bead array: a multiplexed assay platform with applications in various areas of biology / E. Morgan, R. Varro, H. Scpulveda at al. // Clin Immunol. 2004. 110. - P. 252-266.
204. Mosmann, T. Cytokines and immune regulation Clinical immunology: Princuples and practice / T. Mosmann // Ed. by R.Rich - Vol.1. - St.Luis: Mosby, 1996.-P. 217-230.
205. Nagata, S. Apoptosis by death factor / Nagata S. // Cell. 1997. - Vol. 88. -P. 355-363.
206. O'Farrell, P.H. // Journal Biol. Chem. 1975. - 250. - P. 4007 - 4021.
207. Oberdorfer, A. Zur Regulation der Protein biosyntheses durch Sexualhormone: Die Wirkungen von Ostradiolbenzoat und von Testosteronpropi-onat auf die Konzentration von Serumproteinen / A. Oberdorfer // Acta. En-docr. (Kbh) Suppl. 1970. - P. 143.
208. Petersen, S.M. Human hepatocytes exhibit receptors for a2-macroglobulin and pregnancy zone protein-proteinase complexes / S.M. Petersen, B.S. Christiansen, P.H. Jensen at all. // Eur. J. Clin. Invest. 1988. - V. 18. - P. 184-190.
209. Petersen, S.M. a2-macroglobulin and pregnancy zone protein. Serum levels, a2-macroglobulin receptors, cellular syntesis and aspects of function in relation to immunology / S.M. Petersen // Dan. Med. Bull. 1993. - V.40. -P. 409-446.
210. Philip, A. Binding of transforming growth factor-beta to pregnancy zone protein / A. Philip, L. Bostedt, T. Stigbrand, M.D. O'Connor-McCourt // Eur. J. Biochem. 1994. - V.221. - P. 687-693.
211. Pongcharoen, S. Placental Fas and Fas ligand expression in normaly early, term, and molar pregnancy // S. Pongcharoen, R. F. Searle, J. N. Bulmer // Placenta. 2004. - Vol. 25. - P. 321-330.
212. Powrie, F. A critical role for transforming growth factor-betta but not IL4 in the suppression of T helper type 1-mediated colitis by CD45RB (low) CD4+ cells / F. Powrie, J. Carlino, Leach M. et al. // J. Exp. Med. -1996. Vol. 183. - P. 2669-2674.
213. Rychlewski, L. Target specificity analysis of the Abl kinase using peptide microarray data / L. Rychlewski, M. Kschischo, L. Dong, at al. // J. Mol. Biol. 2004. - 336. - P. 307-311.
214. Richards C.D., Brawn T.J., Shouab V. Ft al. Recombinant oncostatin M stimulates the prodaction of acute phase proteins in Hep G 2 cell and primary rat hepatocytes in vitro // J.Immunol. 1992. Vol. 148.P. 1731 1736.
215. Rittner, CH. Serologischimmunologische Unersuchungen zum Vergeich der Reaktionsweise von Anti-Xh und sogenannten Anti-Schwangerenseren von Ziege und Kaninchtn / C.H. Rittner, H. Bayer, G. Geserich // ZB1. Gy-nak. 1967. - Bd. 89. - S. 1225.
216. Robinson, J.C. Observations on the origin of pregnancy associated plasma proteins / J.C. Robinson, W.T. London, J.E. Pierce // Amer. J. Obstet. Gy-nec.-1966.-V. 96.-P. 226.
217. Rowe, C.A. An array immunosensor for simultaneous detection of clinical analytes / C.A. Rowe, S.B. Scruggs, M.J. Feldsteinat at al. // Anal. Chem.- 1999. 71.-P. 433-439.
218. Rowe, C.A. Array biosensor for simultaneous identification of bacterial, viral, and protein analytes. Anal Chem 1999. -71. P. 3846-3852.
219. Sanchez, L. M. Identification of the major protein components in breast secretions from women with benign and malignant breast diseases / L. M. Sanchez, F. Vizoso, I. Diez-Itza, C. Lopez-Otin // Cancer Res.- 1992. 32. -P. 95-100.
220. Schlagetter, K. Immunchemische Untersuchungen der Serumproteine von Schwangeren / K. Schlagetter, G. Schwicki // Z.Geburtsh. Gynak.- 1963. -Bd. 157.-S. 225.
221. Schoultz, B. Purification of the «pregnancy zone» protein / B. Schoultz, T. Stigbrand // Acta. Obstet. Gynec. Scand. 1973. - V.52. - P. 51-54.
222. Schoultz, B. Characterization of the «pregnancy zone» protein in relation to other a2-globulin of pregnancy / B. Schoultz, T. Stigbrand // Biochem. Bio-phys. Acta. 1974. - V.359. - №2. - P. 303-304.
223. Schweitzer, B. Immunoassays with rolling circle DNA amplification: a versatile platform for ultrasensitive antigen detection / B. Schweitzer, S. Wiltshire, J. Lambert at al. // Proc. Natl. Acad. Sci.,„ USA. 2000. - 97. -10113-10119.
224. Shanbhag, V. The contact zones in human the a2-Macroglobulin / V. Shanbhag, T. Stigbrand, P. Jensen // Eur. J. Biochem. (FEBS). 1997. -V.244.-P. 694-699.
225. Smith, N.M. Immunohistochemical definition of antigenic determinants of pregnancy-associated a2-glycoprotein using monoclonal antibodies / N.M. Smith, C.N. Home, F.H. Carpenter at al. // J. Pathol. 1988. - V.154. - P. 329-334.
226. Smithies, O.U. Zone electrophoresis in starck gels and its application to studies of se rum proteins / O.U.Smithies // Adv. in Prot. Press. N.Y. Chem. Acad. 1959. - V.14. - P. 65-66.
227. Somerset, D.A. Normal human pregnancy is associated with an elevation in the immune suppressive CD4+CD25+ regulatory T-cell subset // D.A. Somerset, Y. Zheng M.D. Kilby et al. // Immunology. 2004. - Vol.112, №1.-P. 38-43.
228. Song, M.K. Large scale purification of a2-macroglobulin from human plasma / M.K. Song, N.F. Adham, H. Rindercknecht // Biochem. Med. -1975,- V.14. №2. - P. 162-169.
229. Spinozzi, F. Difective expression of Fas-messenger RNA and fas receptor om pulmonary T cells from patients with asthma // Spinozzi F., Fizotti M., Agea F. et al. Ann. Intern. Med. 1998. -Vol. 128. - P. 1-40.
230. Stimson, W.H. The isolation and partial characterisation of a new a2-macroglobulin from human pregnancy serum / W.H. Stimson, L. Fubank Scitt // FEBS Lett. 1972. - V.23. - P. 293.
231. Stimson, W. H. Quantitiation of a new serum a-macroglobulin in pregnant, preeclampic and contraceptive steroid treated subjects / W. H., Stimson // IRCS Med. Sci. 1973. - V. 73, N 3. - P. 171-173.
232. Strater, J. TRAIL and its receptors in the colonic epithelium: a putative role in the defense of viral infections. / J. Strater, H. Walczak, T. Pukrop at al. // Gastroenterology. 2002. 122. - P. 659- 666.
233. Straube, W. Immunochemischer Nachweis schwangerschaftstypischer und retroplazentarserum / W. Straube, R. Hofmann, B. Klausch, J. Broch // Wiss. Zschr. Friedrich-Schiller-Univ. Iena, Math-Mat. R. 1972. - Bd.21.-№4.- S. 787.
234. Straube, W. Untersuchungen zur frage der Identität schwangerschaftstypischer proteine mit HCG und LH / W. Straube, W. Rohde, R. Hofmann, B. Klausch // Zbl. Gynak. 1973. - Bd. 95. - S. 552.
235. Straube, W. Isolation of «pregnancy-zone» proteins using immunoabsor-bents and study of possible enzyme activities / W. Straube, R. Hofmann, B. Klausch // Zentralbl. Gynakol. 1975. 97 (4). - P. 200-210.
236. Taniguchi, N. Human Disease Glycomics/Proteome Initiative (HGPI) / N. Taniguchi // Mol. Cell. Proteomics, March 1, 2008; 7(3). P. 626 - 627.
237. Tatarinov Y. S. Human alpha-fetoprotein: 30 Years from Basic Research to Clinical Application. /Yuri S. Tatariniv. Russian State Medical University, Moscou: Printed in Russia by publisher house «RMA». - 1994. - 90 p.
238. Than, G.N. An antigen associated with pregnancy / G.N. Than, I.F. Csabo, D.G. Szabo//Lancet. 1974. V.II. - P. 1578-1580.
239. Than G., Csaba I., Karg N. Oralis fogamzasgalot szedok alfa2-globulin in «pregnancy protein-2» szintjenek vizsgala radialis immundiffusioval / G. Than, I. Csaba, N. Karg //Nagy. Noorv. Lapja. 1974. - V.37, N.4. - P.297.
240. Than, G.N. Pregnancy-associated a2-glycoprotein / G.N. Than, I.F. Szabo, N. I. Karg, D.G. Czaba, P.F. Novak // Invest. Cell. Pathol. 1980. - № 3. -P. 295-309.
241. Tannapfel, A. Identification of novel proteins associated with hepatocellular carcinomas using protein microarrays / A. Tannapfel, K. Anhalt, P. Hausermann II J Pathol. 2003. 201. - P. 238-249.
242. Tatra G. Behavior of the serum concentration of pregnancy associated al-pha2-glycoprotein (alpha 2-PAG) in gynecologic carcinomas / G. Tatra // Strahlentherapie. 1981. - Jul; 157(7). - P. 464-467.
243. Tayade, C. Differential gene expression in endometrium, endometrial lymphocytes, and trophoblasts during successful and abortive embryo implantation / C. Tayade , G. Black, Y. Fang , B.A. Croy // The Journal of Immunology. 2006-V. 176-P. 148-156.
244. Thomson, A.W. Biological and clinical significanse of pregnancy-associated a2-glycoprotein / A.W. Thomson, C.H.W. Home // Invest. Cell. Kathol. 1980. - №3. - P.295-309.
245. Topolcan, O. / He 4 pilot stady / O. Topolcan, M. Casova, Z. Novotny at. all. // Astrakhan medical j. 2008. - V. 3. - N 3 (supplement). - P. 7-8.
246. Towler, C.M. A serial study of pregnancy proteins in primigravidae / C.M. Towler, V. Jandial, C.H.W. Home, H. Bohn // Br. J. Obstet. Gynaecol. -1976.-83.-P. 368.
247. Unger A. Disease activity and pregnancy associated alpha2-glycoprotein in rheumatoid arthritis during pregnancy / A. Unger, A. Kay, A.J. Griffin, G.S. Panayi // Br. Med. J. 1983. - 286: - P. 750-752.
248. Uriel, J., Chuiton, S. In: Methods in immunology and immunochemistry /
249. C.A. Williams, V. W. Chase, eds. // New York-London: Academic press, 1965.-Vol.-P. 304.
250. Varnum, S.M. A protein microarray ELISA for screening biological fluids / S.M. Varnum, R.L. Woodbury, R.C. Zangar // Methods Mol Biol. 2004. -278. P.161-172.
251. Voll, R.E. Immunosuppressive effects of apoptotic cells / R.E. Voll, M. Hermann, E.A. Roth at al. //Nature. 1997. V. 390. - P. 350-351.
252. Wang, C.C. Innate immune response by ficolin binding in apoptotic placenta as associated with the clinical syndrome of preeclampsia / C.C. Wang, K.W. Yim, T.C.W. Poon // Clin. Chemistry. 2007. - V. 53. - № 1. - P. 4245.
253. Wenstrom, K.D. a-Fetoprotein, free P-human chorionic gonadotrophin, and dimeric inhibinA produce the best results in a three-analyte, multiple-marker screening test for fetal Down syndrome / K.D. Wenstrom, J. Owen,
254. D.C. Chu, L. Boots // Am J Obstet Gynecol 1997; 177: 987-991.
255. Wilken, H. Die sogenannte "pregnancy zone" ein neuer Serumfaktor bei Schwangeren / H. Wilken // Arch. Gynak. 1963. - Bd. 199. - S. 243.
256. Zen, Q. Binding site on human C-reactive protein (CRP) recognized by the leukocyte CRP-receptor / Q. Zen, W. Zhong, Mortensen R.F. // J.Cell. Biochem.-1997.-V. 64,№ l.-p.l40-151.
257. Zhu, H. Analysis of yeast protein kinases using protein chips / H. Zhu, J.F. Klemic, S. Chang at al. // Nature Genet. 2000. 26. - P. 283-289.
-
Никулина, Дина Максимовна
-
доктора медицинских наук
-
Москва, 2009
-
ВАК 03.00.04
- Биохимические аспекты регуляции фетоплацентарной системы у женщин с гипофункцией яичников различного генеза
- Патогенетическое и клиническое значение стероидсвязывающих белков при раке молочной железы
- Особенности окислительного статуса и регуляции транскриптома в процессе беременности
- СРАВНИТЕЛЬНОЕ ИЗУЧЕНИЕ ОРГАНОСПЕЦИФИЧЕСКИХ И МЕЖОРГАННЫХ БЕЛКОВ МОЗГА И ИХ ЗНАЧЕНИЕ В ПРОГНОЗИРОВАНИИ ОСЛОЖНЕНИЙ ЧЕРЕПНО-МОЗГОВОЙ ТРАВМЫ
- Белок-белковые взаимодействия альфа-2-макроглобулина человека и их функциональные последствия
