Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Патогенетическое и клиническое значение стероидсвязывающих белков при раке молочной железы

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Патогенетическое и клиническое значение стероидсвязывающих белков при раке молочной железы"

На правах рукописи

Безрукавникова Наталья Владимировна

ПАТОГЕНЕТИЧЕСКОЕ И КЛИНИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ СТЕРОИДСВЯЗЫВАЮЩИХ БЕЛКОВ ПРИ РАКЕ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ

03.00.04 - Биохимия 14.00.14 - Онкология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

.з х ^ЗбО

Москва-2007

003173960

Работа выполнена в ГОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Научные руководители:

Кандидат медицинских наук, доцент Доктор медицинских наук, профессо

Официальные оппоненты:

Доктор медицинских наук, профессор

Доктор медицинских наук, профессор, заслуженный деятель науки РФ

Никулина Дина Максимовна Берштейн Лев Михайлович

Ивков Николай Николаевич,

ГОУ ВПО РГМУ Росздрава

Комов Дмитрий Владимирович

РОНЦ им. Н.Н.Блохина

Ведущая организация:

ФГУ «Научно-Исследовательский Институт Физико-Химической Медицины Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию».

Защита диссертации состоится «___»_2007 г. в 14:00 часов на

заседании диссертационного совета Д 208.072.01 при ГОУ ВПО РГМУ Росздрава (117997, г. Москва, ул. Островитянова, д.1)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке РГМУ по адресу: 117997, Москва, ул. Островитянова, д.1

Автореферат разослан « »_2007 г.

Ученый секретарь диссертационного совета,

доктор медицинских наук, профессор

П.Х.Джанашия

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

Аг - антиген Ас - антисыворотка АФП - альфа-фетопротеин БОФ - белки острой фазы

ГСПС - глобулин, связывающий половые стероиды Е2 - эстрадиол

ИДА - иммунодиффузионный анализ ИМТ - индекс массы тела ИФ А - иммуноферментный анализ Кр - кортизол

РМЖ - рак молочной железы

СБАГ - связанный, с беременностью альфаг-гликопротеин СРБ - С-реактивный белок

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность исследования. Предупреждение и лечение злокачественных новообразований - одна из важнейших медицинских проблем Бе актуальность определяется постоянным ростом заболеваемости раком населения многих стран, трудностью своевременной диагностики, значительной стоимостью и сложностью лечения, высоким уровнем инвалидизации и летальности больных

Злокачественные новообразования вместе с болезнями сердечнососудистой системы определяют уровень здоровья популяции, поскольку обусловливают 15% всех случаев смерти и 25% инвалидизации населения (Шалимов С А и соавт, 2000) В нашей стране, как и в целом ряде других стран, заболеваемость злокачественными новообразованиями стоит на П месте после сердечно - сосудистых заболеваний

Возникновение гормонально-обусловленных опухолей связано в немалой степени с неэффективной реализацией репродуктивной функции (аборты, поздние первые роды, гипо- и гиперлактация), пребыванием в состоянии длительного стресса, а также с нарастанием в популяции частоты нарушений нейроэндок-ринных и обменных процессов (Филиппов О С, 2005)

В значительной мере указанные обстоятельства относятся к раку молочной железы (РМЖ), который нередко развивается на фоне длительно существующих пролиферативных форм мастопатии с атипией (Яшбо I аг а1, 1996), своевременно не выявленных и не леченных. Следовательно, у клиницистов имеется реальный временной резерв для профилактики злокачественных заболеваний молочных желез на этапе дисгормональных гиперплазии молочных желез (Семиглазов В Ф, 1997, Летягин В П, 2004)

Профилактика РМЖ представляет собой, несомненно, как важную стадиальную проблему, так и медико-биологическую, и заключается в выявлении и лечении различных форм доброкачественных опухолей молочных желёз и дисгормональных процессов, а также в лечении тех заболеваний, от которых зависят эти процессы в молочных железах, в частности нарушений функций эндок-

ринной системы, функции печени и заболеваний половой сферы (Макаренко Н П, 1996) Между тем, с учетом высокой распространенности РМЖ даже незначительные достижения в изучении патогенеза и совершенствовании лечения этого заболевания способны принести реальную помощь многим людям

Функционирование молочной железы зависит от целого ряда локальных характеристик ткани этого органа, среди которых важную роль играет рецеп-торный статус и состояние внутриклеточного аппарата, отвечающего за деление клетки Функциональный статус молочной железы регулируют минимум 15 гормонов Характер и интенсивность ответа маммарного эпителия на действие гормонов обеспечиваются совокупностью внешних и внутренних факторов, которые вместе составляют так называемую «эндокринную регуляторную единицу» (Кушлинский Н Е исоавт, 2005)

Процесс биосинтеза и распада гормонов, выполнивших свою функцию в организме, напрямую связан с транспортными белками Описано несколько стероидсвязывающих белков, которые разделяются на группы с основной функцией связывания стероидов (это, в частности, глобулин, связывающий половые стероиды, или ГСПС, переносящий тестостерон и эстрогены, а также транскортин, или кортикостероидсвязывающий глобулин, который переносит прогестерон и кортикосгероиды) и белков с второстепенной стероидсвязываю-щей функцией (данная группа представлена связанным с беременностью а?-глтсопротеином, или СБАГ, и альфа-фетопротеином, или АФП) (Балаболкин МИ, 1998, Серов В Н и соавт, 2002, Jungblut P.W, 1980, Nista S At aL, 1991) Транспортные белки выполняют также протективную функцию в отношении гормонов и их депонирования Гормон, связанный с белками, находится в постоянном равновесии со свободной биологически активной формой и по мере снижения уровня свободного гормона последний высвобождается из связанной с белками формы (Балаболкин М К, 1998, Ноте С H.W at al, 1979)

С учетом изложенного большой интерес представляет изучение в патогенетическом механизме опухолевого роста роли упомянутых стероидсвязывающих белков (транскортина, ГСПС, СБАГ' и АФП), а также осуществление шагов

в сторону возможного диагностического применения методов их определения при заболеваниях молочной железы путем разработки соответствующих тест-систем

Цель исследования. Получить новые данные о свойствах и динамике уровня стероидсвязывающих белков в зависимости от морфофункционального состояния молочной железы у здоровых женщин и больных РМЖ, а также о диагностическом значении этих белков, в первую очередь, на основе разработанных тест-систем для клинико-лабораторного анализа

Задачи исследования: 1 Уточнить физико-химические свойства стероидсвязывающих белков (транскортина и ГСПС) и разработать методы их выделения из биоматериала.

2 Разработать иммунодиффузионные тест-системы на транскортин и ГСПС

3 Определить уровень транскортина и ГСПС в крови больных РМЖ (в исследуемых группах), а также здоровых женщин соответствующих возрастных групп

4 Определить уровень АФП и СБАГ в крови здоровых женщин и больных РМЖ

5 Провести клинический анализ групп обследуемых больных по следующим критериям гистологическое строение опухоли, стадия заболевания, менструальный статус женщины, индекс массы тела (ИМТ), возраст и сопоставить эти данные с основными результатами исследования

6 Провести сравнительный анализ содержания ГСПС, транскортина, АФП и СБАГ в разных группах обследованных

7 Определить возможность использования тест-систем на стероидсвязы-вающие белки в мониторинге и оценке эффективности лечения РМЖ

Научная новизна работы: Усовершенствованы методы выделения и очистки ГСПС и транскортина, самостоятельно разработаны и апробированы тест-системы на стероидсвязывакмцие белки. Впервые на большом материале получены данные о зависимости уровня ГСПС и транскортина в крови от ха-

рактера и стадии развития опухоли молочной железы Установлена взаимосвязь между специфическими и неспецифическими стероидсвязывающими белками На основании полученных оригинальных данных разработаны рекомендации по использованию новых критериев в клинической практике для уточняющей диагностики РМЖ и в цепях оценки эффективности проводимого лечения

Практическая значимость работы: Результаты исследования и предложенные рекомендации по оценке гормонально-метаболического статуса больных РМЖ могут быть использованы в клинико-лабораторной диагностике заболеваний молочных желез и при анализе эффективности применяемого лечения как в онкодиспансерах, так и в других лечебно-профилактических учреждениях, работающих с онкологическими больными (участковые, хирургические, гинекологические, эндокринологические службы поликлиник)

Материалы работы используются при обучении студентов, клинических интернов, клинических ординаторов и аспирантов кафедры биохимии с курсом клинической лабораторной диагностики и кафедры онкологии с курсом лучевой диагностики и лучевой терапии ГОУ ВПО Астраханской государственной медицинской академии Росздрава.

Внедрение результатов работы: Рекомендации, предложенные на основании проведенного исследования, применены для оценки эффективности проводимого лечения в ГУЗ Астраханском областном онкологическом диспансере, а также используются при обучении студентов, интернов, ординаторов, аспирантов и слушателей кафедры биохимии с курсом КЛД и кафедры онкологии с курсом лучевой диагностики и лучевой терапии ГОУ ВПО АГМА Росздрава.

Разработанные иммунохимические тест-системы использованы при профилактических обследованиях для контроля гормонального статуса женщин, как компонент в системе мер для предупреждения возникновения РМЖ

Основные положения диссертации, выносимые на защиту:

• Особенности физико-химических свойств ГСПС и транскортина служат

основой для разработки схемы их выделения и очистки и создания диагностических тест-систем

• Концентрация ГСПС и транскортина в сыворотке крови больных РМЖ изменяется в зависимости от состояния менструальной функции, возраста больных, ИМТ и стадии заболевания, отличая группу больных от группы здоровых женщин

• Уровень ГСПС и транскортина увеличивается на различных этапах лечения, прежде всего, на фоне проводимой у-терапии

Публикация и апробация работы: Материалы диссертации доложены на заседании кафедры биологической химии с курсом клинической, лабораторной диагностики ГОУ ВПО АГМА, на межвузовских конференциях и конференциях ГОУ ВПО АГМА, на проблемных комиссиях ГОУ ВПО АГМА, на федеральных научных конференциях молодых ученых с международным участием «Белки - маркеры патологических состояний» (Астрахань - Москва, 2001, 2003 гг ), на научной конференции с международным участием "Дни иммунологии в Санкт-Петербурге 2001", на научно-практической конференции «Научные исследования молодых ученых по социально-экономическому развитию Астраханской области» - 2002г, на научно-практической конференции молодых учёных с международным участием «Современные достижения фундаментальных наук в решении актуальных проблем медицины» (Астрахань-Москва, 2004г), на научно-практической конференции с международным участием «Достижения фундаментальных наук в решении актуальных проблем медицины» (Астрахань-Волгоград-Москва, 2006)

Результаты работы опубликованы в материалах 2 и 3 школы-семинара и научной конференции молодых ученых с международным участием «Белки -маркеры патологических состояний» Астрахань-Москва 2001, 2003, в материалах научно-практической конференции и школы-семинара для молодых ученых с международным участием «Современные достижения фундаментальных наук в решении актуальных проблем медицины» Астрахань-Москва 2004, в материалах пятой научной конференции с международным участием "Дни иммуно-

логии в Санкт-Петербурге 2001", в материалах XXIX ISOBM MEETING International Society for Oncodevelopmental Biology and Medicine - УШ International Symposium "Biology and Clinical Usefulness of Tumor Markers", Barcelona, Spain, 2001, в материалах in съезда биохимического общества РАН (Санкт-Петербург, 2002г), в сборнике тезисов научно-практической конференции «Научные исследования молодых ученых по социально-экономическому развитию Астраханской области» Астрахань, 2002г, в материалах 1, 2, 3 и 4 международной ежегодной онкологической конференции «Проблемы диагностики и лечения рака молочной железы» Санкт-Петербург, 2004-2007гг, в трудах Астраханской Государственной Медицинской Академии «Актуальные вопросы современной медицины» - 2006г, а также в журнале «Вопросы онкологии», входящем в список журналов, рекомендованных ВАК для публикации результатов, полученных при выполнении диссертаций на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Результаты исследования используются в научной и лечебной работе кафедры биохимии с курсом КДЦ и кафедры онкологии с курсом лучевой диагностики и лучевой терапии ГОУ ВПО АГМА.

По теме диссертации опубликовано 16 научных работ

Объем и структура диссертации: Диссертация содержит 124 страницы машинописного текста, 28 таблиц, 24 рисунка, состоит из введения, четырех глав, обсуждения, выводов, практических рекомендаций, библиографического указателя, включающего в себя 235 литературных источника, из которых 120 отечественных и 115 иностранных

Диссертационная работа выполнена на базе кафедры биохимии с курсом КДЦ и кафедры онкологии с курсом лучевой диагностики и лучевой терапии ГОУ ВПО ««Астраханская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» в соответствии с планом научных исследований в рамках внутривузовской научной проблемы «Диагностика, клиника, хирургическое и комплексное лечение злокачественных опухолей» (код ГАСНТИ 76 29 49)

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материал и методы исследование. Клинический материал представлен 223 больными РМЖ, находившимися на разных стадиях и этапах лечения заболевания в ГУЗ Астраханском областном онкологическом диспансере с 2001 по 2005гг, а также 180 {фактически здоровыми женщинами (донорами). Все больные обследованы в соответствии с принятыми в онкологии стандартами, включая клинико-инструм ентальные и лабораторные методы

Диагноз устанавливали в соответствии с МКБ 10-го пересмотра Учитывали рост и вес больных, по которым определяли ИМГ Для распределения больных по возрасту применялась классификация, предложенная В Ф Семиглазовым (1989) В соответствии с ней среди патогенетических форм заболевания выделяют 1 тиреоидную (протекает с гипо-, эу- или гипертирео-зом у пациенток преимущественно молодого возраста - до 35 лет), 2 яичниковую (преобладает патология женских половых органов, 36-49 лет), 3 надпочеч-никовую (дородные женщины «без талии», с признаками гиперкортицизма, гипертоническим компонентом, болезнями печени, преимущественно в возрасте 50-59 лет) и 4 инволютивную (как правило, у женщин в менопаузе, 60 лет и старше) Однако две первые формы мы объединили в одну группу больных до 49 лет из-за малой выборки в каждой группе По возрасту больные были распределены следующим образом (табл 1)

Таблица 1

Распределение больных по возрасту

РМЖ стадии I Па ПЪ Ша ПГЬ IV Всего Группа сравнения

До 49 лет И 18 9 15 И 5 69 74

50-59 лет 10 11 12 15 8 10 66 63

>60 лег 7 14 11 19 16 21 88 43

Всего 28 43 32 49 35 36 223 180

Классификация стадий рака молочной железы основывалась на тех же принципах, что и для опухолей других локализаций по 5-й версии Международной классификации (1999), с учетом степени распространения процесса (Т-Щпгог), состояния регионарных лимфатических узлов рЧ-по&Лиз) и наличия от-

даленных метастазов (M-metastasis). По стадиям РМЖ больные распределились следующим образом (рис 1).

Рис. 1 Распределение больных по стадиям

ИМТ вычисляется в результате деления величины массы тела в килограммах на показатель роста в метрах, возведенный в квадрат, то есть:

ростам)

Идеальное значение ИМТ составляет 18,5-24,9. Общим признаком всех форм ожирения является избыточная масса тела. При I степени фактическая масса тела превышает идеальную не более чем на 29,9%, при П - избыток составляет 30-39,9%, при Ш степени - 40 и более. По величине ИМТ больные распределились на отдельные группы следующим образом (рис. 2).

Число вольных.. .......34"

'////// -'////У/ ■ ГУ//*/* -■ '/////* • '/////< у/ууууу ■ " '/////* ■ '////// "

Г//////

'//У/// /////// '//////-У///УУУ г//////■ //////у

г//////" г//////

'////'У '/////У

У/УУУУУ '///У/у

'///у// '///■V/

г////// г У//у/у -

'////// '////// '/////* Г/////* '////// '/////У //////у '/////У

-ЭО--

777777?

//////У' '///У/У' У/УУУУУ ' У//УУУУ '

'/////У '

Рис. 2. Распределение больных РМЖ по ИМТ

Нормальный ИМТ

I степень ожирения

II степень ожирения

III степень ожирения

Наблюдавшиеся нами больные РМЖ имели следующий окончательный морфологический диагноз (табл. 2), что позволило разделить их на соответствующие группы согласно гистологической классификации.

Таблица 2

Распределение больных РМЖ по гистологическому варианту опухоли

Гистологический вариант: Число больных

Инфильтративно-протоковый (интрадуктальный) рак 91

Инфилътративно-дольковый (лобулярный) рак 105

Тубулярный рак 27

Всего 223

Выбор лечебной тактики зависел от возраста, общего состояния больных

РМЖ, гистологической структуры опухолей молочной железы, степени их дифференцировки и, естественно, от распространенности опухолевого процесса. Использовали комбинированный и комплексный методы лечения

Объектом лабораторного исследования явились образцы сыворотки крови больных РМЖ и здоровых женщин (табл 3)

Для определения ГСПС и транскортина использовали только самостоятельно смоделированные тест-системы, для выявления СБАГ моноспецифические антисыворотки (Ас) из банка тест-систем кафедры биохимии с курсом клинической лабораторной диагностики ATM А, а для выявления АФП - коммерческие реагенты НВО «Иммунотек» (Москва)

Таблица 3

Перечень и объем использованного в работе клинического материала

№п/п Биологический материал Число образцов

1 Сыворотка крови практически здоровых 180

2 Сыворотка крови больных РМЖ при поступлении 223

3 Сыворотка крови больных РМЖ в динамике лечения 378

Всего образцов: 558

В работе использовали иммунохимические и биохимические методы исследований (солевое осаждение, ионообменная, гель-проникающая и аффинной хроматография, иммунизация лабораторных животных и моделирование тест-систем, различные виды иммуноэлектрофореза и тд.), а также клинические и статистические методы (обработка клинических данных и тестирование биологического материала от обследуемых групп с последующим статистическим анализом полученных результатов)

Приготовление антигенов (Аг) и получение Ас для создания моноспецифических тест-систем на ГСПС, транскортин, равно как и их конструирование, составило существенную часть самостоятельных исследований

В качестве Аг использовали белковые препараты, полученные из разных биологических образцов (сыворотки крови беременных, экстрактов абортивного материала и печени человека) сочетанием методов высаливания, ионообменной, гель-проникающей и аффинной хроматографии Идентификацию Аг про-

водили классическими иммунохимическими методами иммунодиффузионным (ИДА) и иммуноферментным (ИФА) анализом

Процесс получения Ас состоял из следующих этапов приготовление иммунизирующего Аг (иммуногена), иммунизации животного, оценки полученной Ас, обработки Ас, включая при необходимости адсорбцию

Полученные результаты исследований обработаны с помощью пакета статистического анализа Statistica 6, SPSS V 10 0 5, программ «STATLAND», «EXCEL-97», «Basic Statistic» с учетом стандартных методик вариационной статистики, включая вычисление критерия t Стьюдента для оценки достоверности различий Данные представлены в виде М±ш, различия считались статистически достоверными при р=< 0,02

Результаты исследования и их обсуждение: В соответствии с задачами одного из основных разделов исследования были изучены иммунохимические и физико-химические свойства стероидсвязывающих белков из разных биологических образцов, а также разработаны оптимальные способы выделения и очистки ГСПС и транскортина и получения моноспецифических Ас с последующим формированием тест-систем на ГСПС и транскортин

Как предполагалось в начале работы, ГСПС и транскортин, как гликопро-теины могли оказаться устойчивыми к денатурирующим осаждающим агентам Информация об этом отражена в разрозненных литературных источниках и требовала дополнительного изучения Результаты исследования поведения фракций ГСПС и транскортина при использовании различных осаждающих агентов представлены в таблице 4

ГСПС и транскортин связываются с ДЕАЕ-сефадексом и ДЕАЕ-целлюлозой при низкой ионной силе (0,02 М) стартового буфера в диапазоне рН 5 - 9 Нами изучен характер элюции фракций, адсорбирующих эстрадиол (Ег) или кортизол (Кр) с этих анионообменников в зависимости от значения рН буферных систем (табл 4)

Таблица 4

Сравнительный анализ физико-химических свойств фракций, связывающих стероидные гормоны

№№ Осаждающий реагент Свойства фракции

ГСПС Транскортин

1 Этанол при 0°С,рН 6,0 1=0,1 Осаждается обратимо Осаждается обратимо

2 Ацетон при 0°С, рН 6,5 1=0,1 Диапазон осаждения Осаждается обратимо 30-45% ацетона Осаждается обратимо 45-60% ацетона

3 50% р-р сернокислого аммония Диапазон осаждения Осаждается обратимо 30-50% Осаждается обратимо 20-55%

4 10%ШГ-6000 Диапазон осаждения Осаждается обратимо 10-15% ПЭГ Осаждается обратимо 8-15% ПЭГ

5 0,5% р-р риванола Осаждается обратимо Осаждается обратимо

6 10% трихлоруксусная к-та Осаждается необратимо Осаждается необратимо

7 20% сульфосалициловая к-та Осаждается необратимо Осаждается необратимо

& Отношение к температуре Термолабилен (неустойчив при 80° —100° С) Термолабилен (неустойчив при 65» —100' С)

9 0,6М хлорная кислота Осаждается необратимо Осаждается необратимо

Основные этапы выделения препарата ГСПС и количественные характеристики процесса представлены в таблице 5

Таблица 5

Этапы выделения ГСПС

Основные этапы выделения Общий белок, мкг/мл Кол-во продукта, мкг Целевой продукт, % Степень очистки ГСПС Выход ГСПС

Исходный материал 54000 810 0,15 1 100%

Обработка бутанолом 43500 780 0,18 1,2 96%

Гель-фильтраиия 3220 390 1,2 8 48%

Солевое осаждение 2590 380 1,5 10 47%

Анионообменная хроматография 190 55 2,9 19 6,8%

ПЭГ-осавдение 120 45 3,8 25 5,6%

Аффинная хроматография 21 21 100 667 2,6%

На основании полученных данных по фракционированию стероидсвязы-вающих белков было сделано заключение, что наиболее целесообразным для выделения ГСПС и транскортина является сочетание методов предварительного фракционного осаждения обработанной бутанолом сыворотки крови беременных с последующей препаративной хроматографией на ионообменных и аффинных гелях Обнаруженные различия в физико-химических характеристиках ГСПС и транскортина легли в основу разработанного нами способа выделения этих белков

Несмотря на многоэтапность, разработанная схема выделения препаратов

обладает сравнительно высокими суммарными количественными показателями, в частности коэффициентом извлечения и итоговым выходом конечного продукта. Эти показатели обеспечиваются высокими количественными характеристиками каждого отдельного технологического этапа.

Как видно из таблицы б, наибольшая степень очистки транскортина достигается на стадиях ионообменной и гидрофобной хроматографии, а негативная аффинная хроматография на заключительном этапе очистки транскортина, также как и при очистке ГСПС, нужна в случае необходимости получения препарата в особо чистой форме. Это требуется, в частности, когда препарат используется в качестве иммуногена для получения специфических поликлональ-ных антител (Ат).

Таблица 6

Этапы выделения транскортина

Основные этапы выделения Общий белок, мкг/мл Кол-во продукта, мкг Целевой продукт, % Степень очистки транскортина Выход транскорггина

Исходный материал 54000 450 0,08 1 100%

Обработка бутанолом 43500 430 0,10 1,2 96%

Солевое осаждение 20000 270 0,14 1,8 60%

Анионообменная хроматография 1280 185 1,5 19 41%

Гидрофобная хроматография 320 149 47 583 33%

Аффинная хроматография 95 72 76 950 16%

Для выявления связывающей активности в сыворотке крови беременных женщин с помощью гель-проникающей хроматографии на колонках с сефадек-сом 0-200 и С-150 были получены белковые фракции, которые в аффинном ИЭФ с Кр и Е2 тестировались по изменению Эф подвижности белков (рис. 3).

Рис. 3 Двумерный аффинный

иммуноэлектрофорез

В геле - 2%-ная коммерческая поливалентная антисыворотка против белков плазмы человека

В траншее справа - эстроген (эстрадиол)

Специфическую активность промежуточных и конечного продуктов определяли иммунохимически при помощи стандартной тест-системы для твердофазного иммуноферментного анализа SHBG ШМА TEST (Оу Medix Biochemica АВ, Финляндия). Очищенные препараты ГСПС и транскортина использовали для иммунизации кроликов и получения иммуносорбентов.

Методом аффинной хроматографии на иммобилизованных гормонсвязы-вающих белках из Ас против белков плазмы человека получены Ат и сформированы моноспецифические иммунохимические тест-системы для количественного определения ГСПС и транскортина. Параллельно с этим чистые препараты ГСПС и транскортина использовали для получения моновалентной Ас к указанным стероидсвязывающим белкам (рис. 4).

В этой связи Ас дополнительно истощали от балластных Ат методами негативной и позитивной иммуноаффинной сорбции. Ат к ГСПС и транскортину, полученные иммунизацией кроликов, сопоставляли методом радиальной имму-нодиффузии на идентичность с Ат коммерческих поливалентных и моноспецифических Ас.

Чувствительность обеих разработанных иммуноферментных тест-систем (на ГСПС и транскортин) была равна 50-60 нг/мл. После апробации тест-систем параллельно с анализом других показателей было проведено изучение содержания упомянутых стероидсвязывающих белков в сыворотке крови больных

транскортин альбумин

Рис. 4. Изменение белкового спектра фракции и процессе очистки транскортина

1 - сыворотка беременных

2-3 - препарат транскортина на промежуточных стадиях очистки

4 - очищенный транскортин

2 3 4

РМЖ.

Согласно задачам исследования, для целевой оценки гомеостаза больных РМЖ помимо белков, у которых транспортная функция переноса гормонов является основной (ГСПС и транскортин), были выбраны и те, у которых эта функция является второстепенной К таким белкам, как было сказано ранее, относятся СБАГ и АФП

СБАГ, по данным многих авторов, прежде всего, относится к белкам острой фазы (БОФ) Поэтому для сравнения острофазовой активности СБАГ исследовали уровень классического БОФ - С - реактивного белка (СРБ) Концентрацию СРБ в исследуемых образцах определяли ИДА С этой целью использовали коммерческие реагенты (НИИВС им И И Мечникова)

Проведенные исследования показали, что у больных РМЖ в крови повышен уровень белков, отвечающих за транспорт эстрогенов и тестостерона, а уровень транскортина, отвечающего за транспорт прогестерона и кортикосте-роидов, снижен (табл 7)

Таблица 7

Частота выявления в концентрация сгероидсвязывакмцих белков в сыворотке крови доноров и больных РМЖ при поступлении

Показатели и физиологический статус обследованных Концентрация ГСПС и транскортина в сыворотке крови, мг/л

Больные РМЖ, 11=223 Доноры, п=180 Референтные значения:

ГСПС, (М±т) | мг/л 12,8*0,13 7,1±0,07 3-15

% 49,3 38 До 5

СБАГ, (М±т) мг/л 7,Шв,22|" 4,1±0,17

Транскортин, (№а) мг/л 9.2*0,251» 15,5±0,31 14,9-22,9

Примечание' * - вероятность случайного различия по отношению к контролю, Р<0,01

| - повышенный уровень, 4 - сниженный уровень, % - частота выявления

Иными словами, был выявлен феномен «ножниц», который проявлялся тем, что уровень ГСПС у больных РМЖ в возрасте до 59 лет был повышен, а уровень транскортина - снижен Формально, эти сдвиги могли бы сочетаться со снижением в крови концентрации свободного Е2 и тестостерона и с повышением - свободной фракции Кр Однако факт отсутствия повышения уровня ГСПС у больных в возрасте 60 лет и старше, свидетельствует о том, что в этой довольно большой и важной подгруппе женщин, страдающих РМЖ, может проявляться одновременное воздействие на организма избытка эстрогенов и глю-

кокортикоидов, благоприятствующее развитию опухолевого процесса в молочной железе.

Помимо этого, не исключено, что повышение уровня ГСПС и СБАГ у части больных связано с существованием своеобразной компенсаторной реакции, направленной на ограничение действия свободных форм переносимых этими протеинами стероидов. Вдобавок догма «о примате свободных фракций стероидов» в реализации биологического действия стероидных гормонов, в течение длительного времени господствующая в эндокринологии, иногда стала ставиться под сомнение (К1юз1а Б., 2006). Соответственно не исключено, что ГСПС может обладать двойной (и разнонаправленной) функцией.

Все вышесказанное подтверждают и полученные результаты по увеличению уровня СБАГ и уменьшению уровня транскортина (рис. 5) в зависимости от увеличения ИМТ, а также по увеличению уровня СБАГ параллельно с увеличением стадии РМЖ (рис 6).

Рис. 5 Изменение уровня транскортина у больных РМЖ в зависимости ИМТ

III степень ожирения

Уровень СБАГ прямо пропорционально коррелирует со стадией заболевания, причем такой корреляции концентрации ГСПС и транскортина от стадии заболевания не выявлено.

Рис. 6. Изменение уровня СБАГ на различных стадиях РМЖ

Полученные данные могут свидетельствовать об активности опухолевого процесса, так как большое количество опухолевых клеток в молочной железе есть нередко результат усиленной эстрогенной стимуляции, а соответственно, и изменения концентрации транспортирующих их белков.

Наблюдаемое постепенное нарастание уровня транскортина (табл. 8) и СБАГ у больных РМЖ на фоне лечения возможно ассоциировано с увеличением уровня кортикостероидов после проведенного оперативного лечения и может приводить к модификации клеточного иммунитета (табл. 8).

Таблица 8

Концентрация ГСП С и транскортина в сыворотке крови доноров и больных РМЖ в динамике

Этапы лечения Лабораторные показатели в сыворотке крови ИФА, мг/л, (М±ш)

ГСПС Траносортин

При поступлении, п= 223 128*0,13 93025'"

После операции, п= 155 8,3±0,17 7,25±0,17Г

По окончании курсов лучевой терапии, п= 147 23,5S±0,47f 9,1±0,32|«

По завершении химио-гормонотерапии, п= 99 13,7±0,69 15,1±0,76

Доноры п=180 7,1 ±0,07 15,540,31

Референтные значения 3-15 14,9-22,9

Примечание: * - вероятность случайного различия по отношению к контролю, Р<0,01. | - повышенный уровень, 1 - сниженный уровень

Повышение уровня ГСПС транскортина после проведенного лучевого лечения у больных РМЖ, может быть обусловлено не только локальным, но и системным эффектом от •у-терапии (рис. 7).

25 20 -15 10 5 О

ИЙТ

Рис. 7. Изменение уровня ГСПС и транскортина у больных РМЖ в динамике

При поступлении После операции По окончании По завершении курсов лучевой химиотерапии гормонотерапии

Из таблицы 9 видно, что концентрация СБАГ имеет тенденцию к повышению на фоне оперативного лечения, а затем к снижению его до референтных значений после проведенной лучевой и химио-гормональной терапии. Для

сравнения, уровень СРБ постепенно нарастает после операции и лучевого лечения, что, не исключено, связано с наличием признаков цитокинопосредован-ного воспаления на фоне подобной терапии. Изменение уровня СБАГ после операции, сходное с динамикой СРБ, возможно, обусловлено и острофазовой активностью СБАГ (рис. 8).

Таблица 9

Частота обнаружения и концентрация СБАГ и СРБ в сыворотке крови доноров и больных РМЖ в динамике

Этапы лечения больных РМЖ Лабораторные показатели в сыворотке крови методом ИДА, мг/л

СРБ СБАГ

% (М±ш) % (№т)

При поступлении, п= 223 22,8 8,5*0,43Г 49,3 7±0,22Г

После операции, п= 155 56 10,7±0,54Г 48 7,5±0,12Т*

По окончании курсов лучевой терапии, п= 147 33,3 13,3±0,67Г 44,4 6,25±0,22Г

По завершении химио-гормонотерапии, п= 99 26,7 8,8±0,44Т* 33,3 5±0,13

Доноры п=180 - - 38 4,1±0,]7

Референтные значения до 5 до 5

Примечание: * - вероятность случайного различия по отношению к контролю, Р<0,02; | - повышенный уровень; % - частота выявления

Нормализация исследуемых показателей после проведенного комплексного лечения может быть следствием удаления из организма или разрушения опухолевых клеток, которые сами по себе, как указывалось выше, могут влиять на изменение уровня гормонов и соответствующих белков.

При поступпмм После операции

Поасожш«« курсов лучевой

тврвгии

По завершении

хииио-горионстервпни

Рис. 8. Изменение уровня СРБ и СБАГ у больных РМЖ в динамике

Исследование содержания стероидсвязывающих белков при различных гистологических вариантах опухолей молочной железы выявило наибольшие изменения уровня этих белков у больных лобулярным (дольковым) вариантом

РМЖ Вероятно, эти различия в уровне исследуемых показателей могут отражать особенности функционирования измененных клеток обусловленные природой их тканевого происхождения

АФП выявлялся в сыворотке крови больных РМЖ в единичных случаях, что подтверждает сведения, накопленные ранее, но нуждается в дальнейшем изучении из-за способности этого связывающего белка модифицировать эффекты стероидных гормонов, в первую очередь эстрогенов

В итоге, результаты работы позволяют позитивно охарактеризовать лабораторные системы, разработанные в целях очистки и определения стероидсвя-зывающих белков, и прийти к заключению о том, что уровень данных белков в крови больных РМЖ отличается от такового у здоровых женщин и что определением этих параметров должна быть дополнена оценка гормонально-метаболического статуса больных как репродуктивного, так и постменопау-зального возраста Подобные исследования целесообразно проводить не только до начала лечения больных РМЖ, но и на отдельных его этапах

ВЫВОДЫ:

1 Исследованы характеристики транскортина и глобулина, связывающего половые стероиды (ГСПС), при использовании различных вариантов сочетания биохимических и иммунохимических методов, направленных на сохранение физико-химических свойств и иммуногенности этих соединений, а также разработаны оригинальные схемы выделения и очистки обоих стероидсвязывающих белков без потери их физиологической активности 2. С помощью самостоятельно смоделированных иммунохимических тест-систем на ГСПС, транскортин и связанный с беременностью аг гликопротеин (СБАГ), а также коммерческой системы на а-фетопротеин (АФП) изучены закономерности динамики уровня в крови стероидсвязывающих белков у 223 больных раком молочной железы (РМЖ) Установлено, что их концентрация изменяется в зависимости от состояния менструальной функции, возраста больных и стадии

заболевания

3 У больных РМЖ в возрасте до 59 лег выявлен феномен разнонаправленного изменения уровня ГСПС (повышается в 2 раза по сравнению с уровнем его у здоровых женщин и транскортина (снижается в 2 раза по сравнению с уровнем его у доноров)

4 Установлено, что при различных гистологических вариантах опухолей молочной железы наибольшие изменения уровня стероидсвязываю-щих белков наблюдается у больных лобулярным (дольковым) вариантом РМЖ (уровень ГСПС увеличивается в 2,3 раза, СБАГ в 2 раза, а концентрация транскортина уменьшается в 3,1 раза по сравнению с уровнем этих белков у доноров) Выявлена прямо пропорциональная корреляция между стадией РМЖ и уровнем СБАГ в отличие от концентрации ГСПС и транскортина, где подобная закономерность не наблюдалась

5 Обнаружена обратно пропорциональная корреляция уровня транскортина и прямая корреляция уровня ГСПС и СБАГ с продукцией эстрогенов (разные фазы менструального цикла, менопауза) у больных РМЖ

6 Установлено увеличение уровня СБАГ и уменьшение уровня транскортина, ассоциированное с увеличением индекса массы тела, возможно связанное с существованием своеобразной компенсаторной реакции, направленной на ограничение действия свободных форм стероидов, переносимых этими протеинами

7 Выявлены выраженные изменения уровней ГСПС, транскортина, СБАГ на фоне проводимого лечения у больных РМЖ (постепенное нарастание на фоне лечения, особенно после проведенной лучевой терапии)

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ:

• С учетом недостаточной информативности традиционных клинико-лабораторных данных в уточняющей диагностике РМЖ следует использовать иммунохимические тесты на стероидсвязывающие белки. Полученные результаты позволяют расширить спектр иммунохимических исследований в лабораторной практике онкологических, гинекологических клиник и отделений

• Динамическое определение концентрации стероидсвязывающих белков в сыворотке крови в качестве опосредованных маркеров гормонального гомеостаза при РМЖ вносит существенный вклад в контроль эффективности лечения

• Для прогноза состояния больных при РМЖ и предупреждения прогрессировать) в план обследования больных с РМЖ рекомендуется включать разработанный иммунохимический способ определения ГСПС, транскортина и СБАГ в качестве неспецифических маркеров ввиду ряда достоинств этого метода информативность результатов, простота постановки, доступность, экономичность

РАБОТЫ, ОПУБЛИКОВАННЫЕ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ:

1 Безрукавннкова Н.В., Коханов А В, Метеякин И А Цирроз печени у мужчин как модель для иммунохимического исследования предраковых и раковых заболеваний // Материалы конференции молодых ученых с международным участием «Белки-маркеры патологических состояний» - Астрахань-Москва - 2001 С 107-109

2 Безрукавннкова Н.В., Коханов А В, Никулина ДМ, Григорьева ТА Иммунохимические маркеры в клинической оценке дисгормональных заболеваний и гормонзависимых опухолей //Материалы пятой научной конференции с международным участием «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге 2001» - Медицинская иммунология - С-Пб - 2001 - ТЗ -№2, С 263-264

3 Безрукавникова Н.В., Филиппова О М Иммунные комплексы и аутоантитела к тканевым антигенам при заболеваниях молочных желез // Материалы Ш съезда биохимического общества РАН. С-Пб - 26 июня 1 июля 2002 С 138

4 Bezrukavnikova N.V., Nikulina D М, Kokhanov А V, Gngoneva Т A Immunochemical markers in clinical appraisal of dyshormonal diseases and hormone-dependent tumors of mammary gland. XXIX ISOBM MEETING International Society for Oncodevelopmental Biology and Medicine - VIII International Symposium "Biology and Cluneal Usefulness of Tumor Markers"

5 Безрукавникова H.B. Иммунные комплексы и аутоантитела к тканевым антигенам при заболеваниях молочных желез // Материалы 83-й итоговой студенческой научной конференции - Астрахань - 2002

6 Безрукавникова Н.В. Иммунохимические маркеры в клинической оценке заболеваний, сопровождающихся гиперэстрогенэмией // Сборник тезисов научно-практической конференции «Научные исследования молодых ученых - социально-экономическому развитию Астраханской области» -Астрахань. - 2002 - С.39 -42,

7 Безрукавникова HLB., Гречухин С Н , Коханов А В Транспортные белки в комплексном мониторинге гормонзависимых опухолей // Материалы 3 научной конференции и школы-семинара для молодых ученых "Белки-маркеры патологических состояний" - Астрахань-Москва - 2003 - С 7681

8 Безрукавникова Н.В., Коханов А В, Гречухин С К Иммунохимический анализ транспортной функции сывороточных белков // Материалы научно-практической конференции и школы-семинара для молодых ученых с международным участием «Современные достижения фундаментальных наук в решении актуальных проблем медицины» - Астрахань-Москва. -2004 - с 77

9 Безрукавникова Н.В., Никулина Д М Патогинетическая и клиническая роль белков острой фазы при раке молочной железы // Материалы первой

международной ежегодной онкологической конференции «Проблемы диагностики и лечения рака молочной железы», Санкт-Петербург, 2004, С 98

10 Безрукавникова Н.В., Никулина ДМ, Бисалиева РА Исследование уровня связанного с беременностью альфа2-гликопротеина при раке молочной железы // Материалы П международной ежегодной конференции «Проблемы диагностики и лечения рака молочной железы» С -Пб -2005 -С 109

11 Безрукавникова Н.В., Никулина Д М, Кривенцев Ю А, Кутуков В В Определение связанного с беременностью альфаг-гликопротеина при раке молочной железы // Материалы 83-й итоговой научно-практической конференции сотрудаиков академии, врачей города и области - Астрахань -2005 -Т31 -С 164-166

12 Безрукавникова Н.В., Коханов AB, Гречухин С Н , Никулина ДМ) Получение препаратов сгероидсвязывающих белков и разработка имму-нохимической тест-системы на эти белки // Материалы научно-практической конференции с международным участием «Достижения фундаментальных наук в решении актуальных проблем медицины» - Астрахань-Волгоград-Москва - 2006. - С 32-34.

13 Безрукавникова Н.В., Коханов А В, Никулина Д М, Кутуков В В Связанный с беременностью альфа2-гликопротеин при различных вариантах рака молочной железы // Материалы Ш международной ежегодной конференции «Проблемы диагностики и лечения рака молочной железы», С -Пб, 2006, с 56-57

14 Безрукавникова Н.В., Коханов AB Связанный с беременностью аль-фа2-гликопротеид у больных раком молочной железы // Труды Астраханской Государственной Медицинской Академии, том 33 (LVII) Актуальные вопросы современной медицины - Астрахань 2006

15 Безрукавникова Н.В., Коханов AB, Кривенцев Ю А, Никулина ДМ, Берштейн JIМ, Кутуков В В Стероидсвязываюгцие белки у больных ра-

ком молочной железы // Вопросы онкологии - 2007 - Т 53 - № 4 - С 409413

16 Безрукавннкова Н.В., Никулина ДМ., Кугуков В.В Стероидсвязы-вающие белки при морфологических вариантах рака молочной железы // Материалы IV международной ежегоднорй конференции «Проблемы диагностики и лечения рака молочной железы».- С -Пб - 2007.- С 51-52.

Принято к исполнению 9.10.2007 г

Исполнено 9.10.2007 г. Формат 60/84/16. Бумага Бу^оСору Объем 1 п.л. Заказ № 22. Тираж 100 экз. Отпечатано в информационно-издательском центре ФГУ «НИИ по изучению лепры Росздрава»

г. Астрахань, пр. Н. Островского, 3 Лицензия сер. ЛР № 021291 от 15.06.98 г.

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Безрукавникова, Наталья Владимировна

ВВЕДЕНИЕ. б

ГЛАВА 1 Белки крови, связывающие половые стероиды, и их клиникодиагностическое значение при раке молочной железы (обзор литературы).

1.1. Биологическая роль и клинико-диагностическое значение белков крови, связывающих половые стероиды.

- глобулин, связывающий половые стероиды.

- транскортин.

- альфа-фетопротеин.

- связанный с беременностью альфа2-гликопротеин.

1.2. Зависимость морфо-функционального состояния молочной железы от гормонального статуса.

1.2.2. Морфо-функциональное состояние молочной железы в репродуктивном периоде.

1.2.3. Морфо-функциональное состояние молочной железы в период угасания репродуктивной функции.

1.2.4. Гормональный статус женщин при развитии опухолей молочной железы.

1.3. Стероидсвязывающие белки при раке молочной железы.

ГЛАВА 2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Общая характеристика обследованных больных.

2.2. Объем и характеристика материала лабораторного исследова

2.3. Иммунохимические и биохимические методы исследований.

2.4. Методы статистического анализа.

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

ГЛАВА 3 Изучение иммунохимических и физико-химических свойств стероидсвязывающих белков.

3.1. Разработка способов выделения глобулина, связывающего половые стероиды и транскортина из сывороток крови беремен- 63 ных, экстрактов абортивного материала и печени человека.

3.2. Разработка и сравнительная оценка иммунодиффузионных тест-систем на глобулин, связывающий половые стероиды и 81 транскортин.

ГЛАВА 4 Патогенетическое и клиническое значение стероидсвязывающих белков в сыворотке крови больных РМЖ.

4.1. Уровень ГСПС и транскортина в сыворотке крови больных

4.1.2. Распределение уровня ГСПС и транскортина в зависимости от физиологического статуса больных РМЖ.

4.1.3. Изучение уровня ГСПС и транскортина в сыворотке крови больных РМЖ в зависимости от клинико-морфологических 88 особенностей опухоли.

4.1.4. Определение уровня ГСПС и транскортина в сыворотке крови больных РМЖ в зависимости от этапа лечения.

4.2. Уровень АФП и СБАГ в сыворотке крови больных РМЖ.

4.2.1. Распределение уровня СБАГ в зависимости от физиологического статуса больных РМЖ.

4.2.2. Изучение уровня СБАГ в сыворотке крови больных РМЖ в зависимости от клинико-морфологических особенностей опухо- 95 ли.

4.2.3. Определение уровня СБАГ в сыворотке крови больных РМЖ в зависимости от этапа лечения.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Патогенетическое и клиническое значение стероидсвязывающих белков при раке молочной железы"

Актуальность работы. Предупреждение и лечение злокачественных новообразований - одна из важнейших медицинских проблем, актуальность которой определяется постоянным ростом заболеваемости раком населения многих стран, трудностью своевременной диагностики, высокой стоимостью и сложностью лечения, высоким уровнем инвалидизации и летальности больных.

Злокачественные новообразования вместе с болезнями сердечнососудистой системы определяют уровень здоровья популяции, поскольку обусловливают 15% всех случаев смерти и 25% инвалидизации населения [94]. В России заболеваемость злокачественными новообразованиями стоит на II месте после сердечно - сосудистых заболеваний.

За период 1997-2005гг. в Астраханской области показатели заболеваемости раком молочной железы (РМЖ) значительно выросли. В структуре заболеваемости онкопатологией и смертности РМЖ занимает третье ранговое место после раковых поражений легочной системы, желудка. У женщин в структуре заболеваний РМЖ занимает второе ранговое место.

За последние годы клиницистами и эпидемиологами было убедительно показано, что росту онкологических заболеваний органов репродуктивной системы способствует нарастание в популяции частоты эндокринно-обменных нарушений [28]. Высокая заболеваемость гормонально обусловленными опухолями молочной железы, тела матки связана с недостаточной реализацией репродуктивной функции (аборты, поздние первые роды, пребывание в состоянии длительного стресса, нарастание в популяции нарушений нейроэндок-ринных и обменных процессов) [114].

В значительной мере указанные обстоятельства относятся к РМЖ, который нередко развивается на фоне длительно существующих пролиферативных форм мастопатии с атипией [208], своевременно не выявленных и не леченых. Следовательно, у клиницистов имеется реальный временной резерв для профилактики злокачественных заболеваний молочных желез на этапе дисгормо-нальных гиперплазий молочных желез [81].

Профилактика РМЖ относится как к социальной проблеме, так и к медико-биологической и заключается в выявлении и лечении различных форм доброкачественных опухолей молочных желёз и дисгормональных процессов, а также в лечении тех заболеваний, от которых зависят эти процессы в молочных железах, в частности нарушений функций эндокринной системы, функции печени и заболеваний половой сферы [47].

С учетом высокой распространенности РМЖ даже незначительные достижения в совершенствовании лечения дают возможность спасти многих. Залогом успешного лечения была и будет ранняя диагностика. Основное лечение при РМЖ направлено на изменение того гормонального статуса, который вызвал данное заболевание. Разработка и реализация программ ранней диагностики вместе с первичной и вторичной профилактикой - главное направление в борьбе за снижение смертности от РМЖ.

Более 20 лет назад рядом авторов [57] были проведены первые исследования по изучению роли так называемых «белков острой фазы» (БОФ) при опухолевых процессах. В настоящее время известно, что многие из этих белков связаны с реактивностью организма и с его ответом на ряд патологических состояний. Классический БОФ — С-реактивный белок (СРБ) — связан с системой комплемента [53]. Так называемый связанный с беременностью альфа2-гликопротеин (СБАГ) обладает иммуносупрессивными свойствами, кроме того, СБАГ обладает тропностью к эстрогенам (Эг) [37; 57; 121; 126].

Функционирование молочной железы зависит от целого ряда локальных обстоятельств, среди которых важную роль играет рецепторный статус и состояние внутриклеточного аппарата, отвечающего за деление клетки. Ее функциональный статус как органа регулируют минимум 15 гормонов. Характер и интенсивность ответа клетки на действие гормонов обеспечиваются совокупностью ее внешних и внутренних факторов, которые вместе составляют «эндокринную регуляторную единицу» [64].

Процесс биосинтеза и распада выполнивших свою функцию гормонов в организме напрямую связан с транспортными белками. Это могут быть как белки - переносчики гормонов (транскортины, специфические гормонсвязы-вающие белки), так и неспецифические транспортные системы крови (эритроциты, альбумины, альфа-фетопротеин - АФП, СБАГ и др.).

В крови Эг и прогестагены (Пг) связываются с глобулинами, переносящими стероиды: Эг — с глобулином, связывающим половые гормоны (ГСПС), он же — секс-стероидсвязывающий глобулин, Пг - с кортизолсвязывающим белком - транскортином [84]. Транспортные белки, помимо своей специфической функции переноса гормона к месту его действия, выполняют функцию депонирования гормона в кровообращении, кроме того, протективную функцию в отношении гормонов. Гормон, связанный с белками, находится в постоянном равновесии со свободной биологически активной формой гормона и по мере снижения уровня свободного гормона последний высвобождается из связанной с белками формы, поддерживая, таким образом, постоянную концентрацию свободной фракции в периферической крови. Кроме того, транспортные белки влияют на скорость клиренса гормона, который осуществляется в печени и почках [7].

Изучение гормонального статуса у больных с РМЖ до настоящего времени проводится определением уровня гормонов в сыворотке крови, а также рецепторов к гормонам в опухоли молочной железы. Как известно, в «эндокринную регуляторную единицу» входят стероидсвязывающие белки. Значение нарушений этого звена молекулярных процессов при РМЖ является наименее изученным, с точки зрения биохимического и онкологического аспектов проблемы.

С учетом изложенного большой интерес представляет определение в патогенетическом механизме опухолевого роста роли так называемых стероид-связывающих белков (транскортина, ГСПС, СБАГ и АФП), а также осуществление шагов в сторону их возможного диагностического применения при леваниях молочной железы путем разработки соответствующих тест-систем.

Цель исследования:

Получить новые данные о свойствах и динамике уровня стероидсвязы-вающих белков в зависимости от морфофункционального состояния молочной железы у здоровых женщин и больных РМЖ, а также о диагностическом значении определения этих белков, в первую очередь, на основе разработанных тест-систем для клинико-лабораторного анализа.

Задачи исследования:

1. Уточнить физико-химические свойства стероидсвязывающих белков (транскортина и ГСПС) и разработать методы их выделения из биоматериала.

2. Разработать иммунодиффузионные тест-системы на транскортин и ГСПС.

3. Определить уровень транскортина и ГСПС в крови больных РМЖ (в исследуемых группах), а также здоровых женщин соответствующих возрастных групп.

4. Определить уровень АФП и СБАГ в крови здоровых женщин и больных РМЖ.

5. Провести клинический анализ групп обследуемых больных по следующим критериям: гистологическое строение опухоли, стадия заболевания, менструальный статус женщины, индекс массы тела (ИМТ), возраст и сопоставить эти данные с основными результатами исследования.

6. Провести сравнительный анализ содержания ГСПС, транскортина, АФП и СБАГ в разных группах обследованных.

7. Определить возможность использования тест-систем на стероидсвязы-вающие белки в мониторинге и оценке эффективности лечения РМЖ.

Новизна исследования:

Усовершенствованы методы выделения и очистки ГСПС и транскортина, самостоятельно разработаны и апробированы тест-системы на стероидсвязы-вающие белки. Впервые на большом материале получены данные о зависимости уровня ГСПС и транскортина в крови от характера и стадии развития опухоли молочной железы. Установлена взаимосвязь между специфическими и неспецифическими стероидсвязывающими белками. На основании полученных оригинальных данных разработаны рекомендации по использованию новых критериев в клинической практике для уточняющей диагностики РМЖ и в целях оценки эффективности проводимого лечения.

Научно-практическая значимость:

Результаты исследования и предложенные рекомендации по оценке гормонально-метаболического статуса больных РМЖ могут быть использованы в клинико-лабораторной диагностике заболеваний молочных желез и при анализе эффективности применяемого лечения как в онкодиспансерах, так и в других лечебно-профилактических учреждениях, работающих с онкологическими больными (участковые, хирургические, гинекологические, эндокринологические службы поликлиник).

Материалы работы используются при обучении студентов, клинических интернов, клинических ординаторов и аспирантов кафедры биохимии с курсом клинической лабораторной диагностики и кафедры онкологии с курсом лучевой диагностики и лучевой терапии ГОУ ВПО Астраханской государственной медицинской академии Росздрава.

Внедрение результатов работы в практику:

Рекомендации, предложенные на основании проведенного исследования, применены для оценки эффективности проводимого лечения в ГУЗ Астраханском областном онкологическом диспансере, а также используются при обучении студентов, интернов, ординаторов, аспирантов и слушателей кафедры биохимии с курсом КЛД и кафедры онкологии с курсом лучевой диагностики и лучевой терапии ГОУ ВПО АГМА Росздрава.

Разработанные иммунохимические тест-системы использованы при профилактических обследованиях для контроля гормонального статуса женщин как компонент в системе мер для предупреждения возникновения РМЖ.

Апробация работы:

Материалы диссертации доложены на заседании кафедры биологической химии с курсом клинической лабораторной диагностики ГОУ ВПО АГМА, на межвузовских конференциях и конференциях ГОУ ВПО АГМА, на проблемных комиссиях ГОУ ВПО АГМА, на федеральных научных конференциях молодых ученых с международным участием «Белки - маркеры патологических состояний» (Астрахань - Москва, 2001, 2003), на научной конференции с международным участием «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге 2001», на научно-практической конференции «Научные исследования молодых ученых по социально-экономическому развитию Астраханской области», 2002, на научно-практической конференции молодых учёных с международным участием «Современные достижения фундаментальных наук в решении актуальных проблем медицины» (Астрахань-Москва, 2004), на научно-практической конференции с международным участием «Достижения фундаментальных наук в решении актуальных проблем медицины» (Астрахань-Волгоград-Москва, 2006).

Результаты работы опубликованы: в материалах 2 и 3 школы-семинара и научной конференции молодых ученых с международным участием «Белки -маркеры патологических состояний» Астрахань-Москва, 2001, 2003; в материалах научно-практической конференции и школы-семинара для молодых ученых с международным участием «Современные достижения фундаментальных наук в решении актуальных проблем медицины», Астрахань-Москва, 2004, в материалах пятой научной конференции с международным участием "Дни иммунологии в Санкт-Петербурге 2001", в материалах XXIX ISOBM MEETING International Society for Oncodevelopmental Biology and Medicine - VIII International Symposium "Biology and Clinical Usefulness of Tumor Markers", Barcelona, Spain, 2001, в материалах III съезда биохимического общества РАН (Санкт-Петербург, 2002), в сборнике тезисов научно-практической конференции «Научные исследования молодых ученых по социально-экономическому развитию Астраханской области», Астрахань, 2002, в материалах 1, 2, 3 и 4 международной ежегодной онкологической конференции «Проблемы диагностики и лечения рака молочной железы» Санкт-Петербург, 2004-2007гг., в трудах Астраханской государственной медицинской академии «Актуальные вопросы современной медицины», 2006, а также в журнале «Вопросы онкологии», входящем в список журналов, рекомендованных ВАК для публикации результатов, полученных при выполнении диссертаций на соискание ученой степени кандидата медицинских наук.

Результаты исследования используются в научной и лечебной работе кафедры биохимии с курсом КЛД и кафедры онкологии с курсом лучевой диагностики и лучевой терапии ГОУ ВПО АГМА.

По теме диссертации опубликовано 16 научных работ.

Диссертация изложена на 124 страницах, состоит из введения, обзора литературы, главы «Материалы и методы исследования», главы «Собственные исследования», обсуждения полученных результатов, выводов, практических рекомендаций, списка литературы.

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Безрукавникова, Наталья Владимировна

ВЫВОДЫ

1. Исследованы характеристики транскортина и глобулина, связывающего половые стероиды (ГСПС), при использовании различных вариантов сочетания биохимических и иммунохимических методов, направленных на сохранение физико-химических свойств и иммуногенности этих соединений, а также разработаны оригинальные схемы выделения и очистки обоих стероидсвязывающих белков без потери их физиологической активности.

2. С помощью самостоятельно смоделированных иммунохимических тест-систем на ГСПС, транскортин и связанный с беременностью а2-гликопротеин (СБАГ), а также коммерческой системы на а-фетопротеин (АФП) изучены закономерности динамики уровня в крови стероидсвязывающих белков у 223 больных раком молочной железы (РМЖ). Установлено, что их концентрация изменяется в зависимости от состояния менструальной функции, возраста больных и стадии заболевания.

3. У больных РМЖ в возрасте до 59 лет выявлен феномен разнонаправленного изменения уровня ГСПС (повышается в 2 раза по сравнению с уровнем его у здоровых женщин) и транскортина (снижается в 2 раза по сравнению с уровнем его у доноров).

4. Установлено, что при различных гистологических вариантах опухолей молочной железы наибольшие изменения уровня стероидсвязывающих белков наблюдается у больных лобулярным (дольковым) вариантом РМЖ (уровень ГСПС увеличивается в 2,3 раза, СБАГ в 2 раза, а концентрация транскортина уменьшается в 3,1 раза по сравнению с уровнем этих белков у доноров). Выявлена прямо пропорциональная корреляция между стадией РМЖ и уровнем СБАГ в отличие от концентрации ГСПС и транскортина, где подобная закономерность не наблюдалась.

5. Обнаружена обратно пропорциональная корреляция уровня транскор-тина и прямая корреляция уровня ГСПС и СБАГ с продукцией эстрогенов (разные фазы менструального цикла, менопауза) у больных РМЖ.

6. Установлено увеличение уровня СБАГ и уменьшение уровня транс-кортина, ассоциированное с увеличением индекса массы тела, возможно, связанное с существованием своеобразной компенсаторной реакции, направленной на ограничение действия свободных форм стероидов, переносимых этими протеинами.

7. Выявлены выраженные изменения уровней ГСПС, транскортина, СБАГ на фоне проводимого лечения у больных РМЖ (постепенное нарастание на фоне лечения, особенно после проведенной лучевой терапии).

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. С учетом недостаточной информативности традиционных клинико-лабораторных данных в уточняющей диагностике РМЖ следует использовать иммунохимические тесты на стероидсвязывающие белки. Полученные результаты, основанные на разработке самостоятельно смоделированных тест-систем, позволяют расширить спектр иммунохимических исследований в лабораторной практике онкологических и гинекологических клиник и отделений.

2. Динамическое определение концентрации стероидсвязывающих белков в сыворотке крови в качестве опосредованных маркеров гормонального гомеостаза при РМЖ вносит существенный вклад в контроль эффективности лечения.

3. Для прогноза состояния больных и предупреждения прогрессирования в план обследования больных РМЖ рекомендуется включать разработанный иммунохимический способ определения ГСПС, транскортина и СБАГ в качестве неспецифических маркеров ввиду таких достоинств этого метода, как информативность результатов, простота постановки, доступность, экономичность.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Безрукавникова, Наталья Владимировна, Москва

1. А. отечественные:

2. Абелев Г.И.- Альфа-фетопротеин: биологические и клинические аспекты // Вопр. иммунологии: Материалы симпозиума по общей иммунологии.- Москва.- 1974.- С. 3-9.

3. Аввакумов Г.В., Сурвило Л.И., Стрельченок O.A. Взаимодействие секс-стероидсвязывающего глобулина крови с мембранами клеток дециду-ального эндометрия человека // Биохимия.- 1985.- N. 7.- С. 1155-1161.

4. Агранат В. 3., Балюра А. В., Никогосян Г. А. Исследование уровня некоторых гормонов гипофиза у больных раком молочной железы // Мед. радиол.- 1981.-№3.- С. 3-8.

5. Адольф Г.Е Мастопатия // Справочник ортомолекулярная медицина.-Минск.- Беларусь.- 2005.- 50 с.

6. Афанасьева A.B., Никулина Д.М., Старичкова Л.П., Парфенова Л.Ф. Изучение динамики сывороточных белков "зоны беременности" и С-реактивного белка в послеоперационном периоде у беременных и гинекологических больных// Акуш. и гинек,- 1976.- № 8.- С. 63-64.

7. Африкян М. Н. Функциональная активность щитовидной железы у онкологических больных// Автореф. дис. канд. мед. наук.- М.- 1977.- 22 с.

8. Балаболкин М.И. Эндокринология.- Москва.- «Универсум паблишинг».-1998,- 584 с.

9. Бассалык Л. С., Муравьева Я. И., Смирнова К. Д. и др. Прогностическое значение определения рецепторов стероидных гормонов в опухолях молочной железы. Вопр. онкол.- 1982.- N5.- С. 82-88.

10. Бем Э. Электроиммунный анализ по Лоуреллю /ракетный иммуно-электрофорез // Иммунологические методы. Под ред. Х.Фримеля. М.-Мир.- 1979.-С. 58-63.

11. Берштейн Л.М. Онкоэндокринология.- Санкт-Петербург,- «Наука».-2004.- 344 с.

12. Боген Г. Современная биология.- М.- Мир.- 1970.

13. Богуш Т.Г., Меснянкина Н.В., Никулина Д.М. Иммунохимическоие исследования так называемых белков беременности в сыворотке крови при беременности // Тезисы Международного конгресса акушеров-гинекологов.- М.- 1973.

14. Бондарь Г.В., Яремчук А.Я., Диденко И.К., Литвинюк В.А., Коляденко В.Г., Чешук В.Е., Миронюк С.И., Гривкова Л.В., Шевченко В.В., Зайчук В.В., Кулик И.В., Семенчук А.Г. Справочник онколога.- Москва «МЕД-прессинформ».- 2003.- 400 с.

15. Борисов В.И. Эволюция гормонотерапии рака молочной железы // Материалы третьей ежегодной Российской онкологической конференции.- Санкт-Петербург.- 1999.

16. Брин В.Б., Гель Л.З. Физиология выделения эндокринной системы и1.lгормональная регуляция физиологических функций.- Владикавказ.-1992.- С. 50-51.

17. Васильева З.Ф., Шляхтенко Т.Н., Аничкова С.И., Григорьева В.В., Ка-милова М.Я., Федоренко А.Ф. Гуморальные иммунорегуляторные факторы при нормальной и осложненной беременности // Вестник АМН СССР.- 1987.- № 1.- С. 17-22.

18. Веремеенко К.Н., Митченко И.К., Гонтарь A.M. Изучение прекалликре-ин-калликреиновой системы плазмы крови при вирусном гепатите // Врачебное дело,- 1975.-№ 10.-С. 132-134.

19. Верещагина Г. В. Функциональное состояние щитовидной железы у онкологических больных // Вопр. онкол.- 1980,- № 8.- с. 70-79.

20. Вилли К. Биология (биологические законы и процессы).- М.- Мир.-1974.- 822 с.

21. Витола Г.Я., Фанченко Н.Д. Определение 17Р-эстрадиола в плазме крови методом конкурентного связывания с тестостерон-эстрадиолсвязывающим ß-глобулином // Проблемы эндокринологии.-1970.-№3.-С. 55-57.

22. Возный Э.К. Эндокринная терапия рака молочной железы.- Москва 1999.- 80 с.

23. Герштейн Е.С., Кушлинский Н.Е. Тканевые маркеры как факторы прогноза при раке молочной железы // Практическая онкология.- 2002,-Т.З.- №1.- С. 38-44.

24. Гинекология. Новейший справочник. / под редакцией Суслопарова Л.А.- «ЭКСМО».- из-во «Сова».- 2003г.- 688 с.

25. Голиков П. П. Рецепторные механизмы глюкокортикоидного эффекта.-М.: Медицина.- 1988.- 288 с.

26. Грин Н., Стаут У., Тейлор Д. Биология: в 3-х томах.- Т. 3 / пер. с англ. под ред. Р.Сопера.- М.- Мир.- 1990.- 376 с.

27. Двенадцатова О.И. Влияние гормональной терапии на состояние молочных желез в циклах индукции овуляции у женщин с бесплодием.-обусловленным СПКЯ // Автореф. дис. канд. мед. наук. М.- 2003.- 20 с.

28. Девени Т., Гергей Я. Аминокислоты, пептиды и белки.- М.: Мир.- 1976.366 с.

29. Дильман В.М. Эндокринологическая онкология.- Ленинград «Медицина».- 1983.-С. 407.

30. Дымарский Л. Ю., Семиглазов В. Ф. Патогенетические факторы и формирование групп повышенного риска рака молочной железы // Сов. мед.- 1976.- № 6.- с. 77-82.

31. Дрижак B.I. Гормони i рак молочно!' залози.- Терношль.- Укрмедкнига.2002,- 171 с.

32. Зорин H.A., Жабин С.Г., Белогорлова Т.И., Архипова C.B. Сравнительное изучение альфа2-макроглобулина и ассоциированного с беременностью альфа2-гликопротеина как возможных аналогов // Вопр. мед. хим.-1991.- №37(3).- С. 48-50.

33. Зорин H.A., Зорина P.M. Неспецифический маркер рака ассоциированный с беременностью альфа2-гликопротеин // Вопр. онкол.- 1988.- № 6.-С. 651-655.

34. Зорин H.A., Зорина P.M., Горин B.C. Ассоциированный с беременностью альфа-2-гликопротеин и его значение в репродуктивной функции. // Акуш. Гинекол.- 1986.- № 6.- С. 6-9.

35. Зорин H.A., Козлов Д.В. Возможная роль семейства макроглобулинов при раке. //Вопр. онкологии,- 1994.- Т.40,- № 1-3.- С. 18-24.

36. Зорин H.A., Мальцева Н.В., Зорина P.M., Жабин С.Г., Гарин B.C. Имму-ноферментный метод определения ассоциированного с беременностью альфа2-гликопротеина // Лаб. дело.- 1991.-№11.- С. 55.

37. Ильин А.Б., Бескровный C.B. Молочная железа как орган репродуктивной системы женщины // Акуш. и женск.- бол. 2000; №2,- С. 51-52.

38. Клаус Б., Куак X., Хофман Р., Страубе В. Взаимосвязь между белком «зоны беременности» и фетоплацентарным комплексом // Тезисы межд. конгр. акушеров-гинекологов.- М.- 1973.-С. 276.

39. Ковалев И.Е., Полевая О.Ю. Биохимические основы иммунитета к низкомолекулярным химическим соединениям//М.«Наука».- 1985.- С. 34.

40. Комисаренко В.П., Микоша A.C., Кравченко В.И. Содержание транс-кортина в плазме крыс.- получавших кортикостероиды // Проблемы эндокринологии 1967.- №5.- С. 54-58.

41. Кочетов Т.А Практическое руководство по эндокринологии // М.-«Высшая школа».- 1980,- 272 с.

42. Кравец Е.Б., Слонимская Е.М., Столярова В.А., Трынчекова H.H. Роль тиреоидной патологии в развитии дисгормональных заболеваний молочной железы // Бюллетень сибирской медицины.- №4.- 2005.- С. 84-91.

43. Кураласов А.К., Лазарев Н.И. О физиологической природе механизмов канцерогенного, антиканцерогенного и канцеролитического действия гомонов // Вопросы онкологии.- 1981.- № 3.- С. 14-25.

44. Куроедова И.А., Багданова Ю.П., Размадзе Т.Г. К вопросу о сродстве некоторых стероидов к тестостерон-эстрадиолсвязывающему глобулину //Проблемы эндокринологии.- 1972.- №5.- С. 103-109.

45. Лазарев Н.И. Теоретические основы профилактики и терапии дисгормональных опухолей // М. «Медицина».- 1963.- С. 40-55.

46. Левченко И.А., Фадеев В.В. Субклинический гипотиреоз: Обзор литературы // Проблемы эндокринологии.- 2002.- № 2.- С. 13-22.

47. Лейбсон Л.Г. Эстрогены, их образование, обмен, методы определения и содержания в организме // Проблемы эндокринологии и гормонотерапии.- 1957.- Том III.- №2.- С. 91-100.

48. Макаренко Н.П. Предопухолевые заболевания и опухоли молочной железы // Справочник по онкологии. Москва.- 1996,- С. 198-199.

49. Мальцева Н.В., Гарин B.C., Жабин С.Г., Зорин H.A. Сравнительное изучение иммуносупрессивных свойств ассоциированного с беременностью протеина А и альфаг-гликопротеина, а также альфа2макроглобулина 11 Акуш. и гинек.- 1991.- № 5.- С. 27-29.

50. Манухин И.Б., Тумилович Л.Г., Геворкян М.А. Клинические лекции по гинекологической эндокринологии.- «МИА».- Москва.- 2001.- 250 с.

51. Меснянкина Н.В., Татаринов Ю.С. Иммунохимическое определение альфа2-Г-глобулина в сыворотке крови здоровых женщин в различные возрастные периоды // Лабор. дело.- 1973.- № 9.- С. 568.

52. Мирошниченко О.И., Народницкий Б.С., Хилько С.Н., Платонова Т.И, Груберг И.М., Тихоненко Т.И. Использование методов аффинной хроматографии для очистки специфических эндонуклеаз // Биохимия.-1982.- Т.47.- №4.- С. 686-693.

53. Назаренко Г.И., Кишкун A.A. Клиническая оценка результатов лабораторных исследований.- М.- «Медицина».- 2000.- С. 433.

54. Назаров П. Г. Реактанты острой фазы воспаления. // С-Пб. Наука.-2001,- 401 с.

55. Никогосян Г. А. Исследование тиреоидного профиля у больных раком молочной железы // Вопросы экспериментальной и клинической онкологии. М.- 1981.- С. 102-103.

56. Николаев A.A., Афанасьева A.B., Никулина Д.М. Острофазовые протеины в диагностике опухолей предстательной железы.// Лабораторное дело,- 1981.- № 4,- С. 230-232.

57. Никулина Д.М. Иммунохимия.- физико-химическое и клиническое изучение бета.-глобулина «зоны беременности»// Автореф. дисс. канд. мед. Наук.- Астрахань,- 1977.

58. Никулина Д.М. Практическое освоение иммунохимических методов // Метод, рекомендации.- Астрахань.- 1991.- 36 с.

59. Никулина Д.М., Воробьева Т.Б., Костина Л.А., Шульгина А.П. Теоретические и практические аспекты изучения альфа2-глобулина, связанного с беременностью.// Тезисы V Всесоюзного биохимического съезда.- М.-1986.- Т.2.- С. 288-289.

60. Олиня А. Я., Витола Г. Я. Эндокринные аспекты рака молочной железы / Под ред. Э. А. Гранта.- Рига.- Зинатне.- 1981.- 255 с.

61. Паллади Г.А., Метакса Я.В., Марку Г.А. Некоторые особенности гомео-стаза матери и плода // Кишинев,- 1980.- 224 с.

62. Первичные опухоли молочной железы / под редакцией В.П. Летягина.-Москва.- 2004,- 332 с.

63. Потин В.В., Юхлова H.A., Бескровный С.В. Патология щитовидной железы и репродуктивная система женщины // Проблемы эндокринологии.- 1989.-№ 1.- С. 44-48.

64. Рак молочной железы / под ред. Н.Е. Кушлинского, С.М. Портного, К.П.

65. Лактионова.- Изд. РАМН,- Москва.- 2005.- 480 с.

66. Репродуктивная эндокринология: В 2 томах / Пер. с англ. Под ред. C.C.K. Йена.- Р.Б. Джаффе.- М.: Медицина.- 1998.- С. 704.

67. Розен В.Б., Завардский П.С. О роли печени и плазмы крови в образовании кортикостероидсвязывающего глобулина (транскортина) // Пробл. эндокрин № 3.- 1969.- С. 66-71.

68. Розен В.Б., Риекстиня Г.Я. О влиянии тиреоидных гормонов на взаимодействие гидрокортизона с транскортином у человека и у морской свинки // Проблемы эндокринологии 1970.- №5.- С. 75-81.

69. Розен В.Б. Взаимодействие стероидных гормонов с белками плазмы крови// Проблемы эндокринологии,- 1964.-№5.- 107 с.

70. Розен В.Б. Основы эндокринологии.- М.: Изд-во МГУ.- 1994.- 384 с.

71. Розен В.Б., Антоничев A.B. Пробл. эндокринол.- 1956.- №6.- С. 77.

72. Романов Ю. А., Таболин В.А. Биологические ритмы гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковой системы у животных и человека в норме и при патологии.- М.: Медицина.- 1975.- С. 128.

73. Руководство по климактерию// под ред. Сметник В.П., Кулакова В.И.-МИА.- Москва,- 2001,- 622 с.

74. Руководство по эндокринной гинекологии / под редакцией Е.М. Вих-ляевой.- МИА.- Москва,- 2002.- 768 с.

75. Саидова P.A. Нарушение менструального цикла в период полового созревания // Русский медицинский журнал.- 2000.- Т.9.- № 10.- С. 127-138.

76. Самуджан Е.М. Особенности гормональных нарушений у больных дис-гормональными гиперплазиями и раком молочной железы // Вопросы онкологии.- Киев.- 1981.- № 3.- С. 57-64.

77. Самунджан Е.М., Горевая А.Н., Картавова Н.С., Некрасов П.Я. Стероидный баланс у больных раком молочной железы различной гистост-руктуры // Вопр. онкологии.- 1980.- 26.- № 9 С. 37-41.

78. Самунджан Н.М., Горевая А.Н., Картавова Н.С. и др. Дисгормональные гиперплазии молочной железы.- Киев; Наук.- «Думка».- 1979.- 158 с.

79. Семиглазов В.Ф., Айламазян Э.К., Байлюк E.H. Профилактика рака молочной железы у больных пролиферативными процессами репродуктивной системы // Вопросы онкологии.- 2006.- Т.52.- №3,- С. 247-257

80. Семиглазов В.Ф., Бит-Сава Е.М., Соколенко А.П., Имянитов E.H. Клинические и генетические аспекты наследственного рака молочной железы //Медицинский академический журнал.- 2006.- Т.6.- №1.- С. 95-101.

81. Семиглазов В.Ф. Разработка новых подходов к лечению рака молочной железы // Вопросы онкологии.- 1997.- №1.- С. 2226.

82. Семиглазов В.Ф., Семиглазов В.В., Иванов В.Г., Берштейн Л.М., Цырлина Е.В., Жильцова Е.К., Арзуманов A.C., Нургазиев К.Ш. Новое в терапии рака молочной железы: неоадъювантная гормонотерапия // Современная онкология.- 2001.- Т. 3. № 1.- С. 23-26.

83. Семиглазов В.Ф., Семиглазов В.В. Рак молочной железы у пожилыхженщин // Клиническая геронтология.- 2003.- Т.9.- № 8.- С. 51 68.

84. Серов В.Н., Никитин C.B. Новые возможности лечебного действия комбинированных оральных контрацептивов // Гинекология.- 2002.- Т.2.-№6.-С. 180-183.

85. Сидоренко JI.H. Гормонотерапия предрака и рака молочной железы.-Ленинград.- «Медицина».- 1986,- 224 с.

86. Сидоренко Л.Н. Молочная железа. Как уберечь себя от рака.- 1998.- 704 с.

87. Симонова Л.И., Короп А.Г., Лукашова О.П. Состояние некоторых неспецифических защитных реакций на раннем этапе острой лучевой болезни у крыс после введения альфа2-макроглобулина // Эксперим. и клинич. радиология.- 1974.- вып. 10.- С. 17-20.

88. Скоупс Р. Методы очистки белков // М.- «Мир».- 1985.- С. 385

89. Слюсарев A.A. Биология с общей генетикой.- М.- Медицина.- 1978.- 472 с.

90. Сметник В.П. Климактерий и постменопауза.- Москва.- 1991.- №1.-С. 5-9.

91. Сметник В.П., Тумилович Л.Г. Неоперативная гинекология.- Москва.-2001; С. 556-575.

92. Смирнов А.Н., Смирнова О.В., Розен В.Б. Идентификация эстрогенсвя-зывающих белков в печени человека// Биохимия.- 1977.- №3.- С. 560-571.

93. Соснова Е.А., Ларичева И.П. Гормональные взаимоотношения в гипофи-зарно-яичниковой системе у больных гипотиреозом и диффузно-токсическим зобом // Акушерство и гинекология.- 1990.- № 4.- С. 38-42.

94. Справочник по онкологии / под редакцией Шалимова С.А., Гриневича Ю.А., Мясоедова Д.В.- Киев «Здоровье».- 2000.- 558 с.

95. Стенина М.Б. Гормонотерапия диссеминированного рака молочной железы // Практическая онкология.- №2,- 2000.- С. 12-18.

96. Страбе В., Куанк X., Хофман Р., Клаус Б. Выявление и свойства белков, типичных для беременности, в сыворотке материнской, ретроплацен-тарной и пуповинной крови // Тезисы Межд. конгр. акушеров-гинекологов.- М.- 1974.- С. 245.

97. Тарутинов В.И. Вопросы и перспективы гормонотерапии больных раком молочной железы // Онкология.- 2005.- Т. 7.- №2,- С. 1-4.

98. Татаринов Ю.С. Иммунохимическое исследование сывороточных белков человека // Диссертация на соискание ученой степени доктора медицинских наук.- Астрахань.- 1964.- 520 с.

99. Татаринов Ю.С., Масюкевич В.Н., Меснянкина Н.В., Парфенова Л.Ф.

100. Иммунохимическая идентификация нового альфа2-глобулина в сыворотке крови беременных женщин // Акушерство и гинекология.- 1970.-№ 9.- С. 25-28.

101. Татаринов Ю.С., Масюкевич В.Н., Никулина Д.М. Сравнительное имму-нохимическое изучение альфа2- и бета!-глобулинов сыворотки крови беременных женщин // Акушерство и Гинекология.- 1971.- № 10.- С. 35-38.

102. Татаринов Ю.С. Прошлое и будущее онкофетальных белков // Лекция к актовому дню института.- М.- 1988.- С. 23-25.

103. Татарчук Т.Ф., Ефименко O.A., Рось Н.В. Дисгормональные заболевания молочных желез в практике гинеколога-эндокринолога // Эндокринная гинекология.- Киев,- «Заповгг».- 2003.- С. 147-180.

104. Татарчук Т.Ф., Косой Н.В., Исламова А.О. Тиреодный гомеостаз и дисгормональные нарушения репродуктивной системы женщины // Эндокринная гинекология.- Киев.- «Заповгг».- 2003.- С. 147-180

105. Терентьев A.A. Стероидсвязывающие онкофетальные белки человека (идентификация, выделение, характеристика, клинические аспекты)// Диссертация на соискание ученой степени доктора медицинских наук.-Москва.- 1990.- 327 с.

106. Терентьев A.A., Молдогазиева Н.Т., Тагирова А.К., Татаринов Ю.С. Аффинная хроматография альфа-фетопротеина человека на иммобилизиро-ванных эстрогенах // Бюллетень эксп.биол.мед.- 1988.- №4.- С. 422-442.

107. Терентьев A.A., Молдогазиева Н.Т., Татаринов Ю.С. Конкурентная аффинная хроматография альфа-фетопротеина человека на иммобилизованном диэтилстильбэстроле // Бюллетень эксп. биол. мед.- 1990.- №.5.-С. 438-440.

108. Трубников Г.А., Афанасьева A.B., Никулина Д.М. Сравнительное изучение острофазовых белков в сыворотке крови больных со злокачественными и неопухолевыми заболеваниями легких// Сборник «Маркеры опухолей».- Саратов.- 1981.- С. 64-71.

109. Трубников Г.А., Балашов В.И., Никулина Д.М. Роль иммунохимических проб на альфа2-глобулин и гамма-фрагмент фибриногена в диагностике вялотекущего ревматизма // Тезисы Всероссийской научной конференции в Иванове.- 1972.- С. 44.

110. Трубников Г.А., Никулина Д.М., Балашов В.И., Рагозин Ю.Е., Кривоносое С.К. Клинико-иммунохимические исследования некоторых острофазовых протеинов при ревматизме // Тер. архив.- 1975.- №11.- С. 55-56.

111. Трубников Г.А., Никулина Д.М. Оценка иммунохимического теста на альфа2-глобулин при ревматизме // Тезисы 55-й научной сессии АГМИ.-Астрахань.- 1973.- С. 152-153.

112. ТурковаЯ. Аффинная хроматография.- М.«Мир».~ 1978.- 432 с.

113. ПЗ.Тюляндин С.А., Моисеенко В.М. Практическая онкология, избранныелекции.- СПб.: Центр ТОММ.- 2004.- 784 с.

114. Физиология и патология молочных желез в практике акушера-гинеколога, руководство для врачей / под редакцией Филиппова О.С.1. Москва.- 2005.- 45 с.

115. Храмкова Н.И. Клиническая ценность иммунологической реакции на гонадотропин при нормальной и некоторых формах патологической беременности // Канд. дисс.- Киев.- 1972.

116. Храмкова Н.И., Абелев Г.И. Пределы чувствительности метода преципитации в агаре//Бюлл. эксп. биол.- 1961.-№ 12.- С. 107-109.

117. Цапок П.И., Дроздов В.Н. Околоплодные воды в системе "мать-плацента-плод".- Кемерово.- 1986.- 103 с.

118. Чешук В.Е., Яремчук А.Я., Ковальчук Е.В., Захарцева Л.М., Дроздов В.М., Спивак С.И., Винничук Ю.Д., Козленке А.В., Бережная Н.М. Разработка подходов к выбору гормонотерапии при раке молочной железы // Онкология.- Т. 4.- №2.- 2002,- С. 99-102.

119. Чистяков С.С. Рак молочной железы.- Москва.- 2003.- 28 с.

120. Шабад Л.М. Эволюция концепций бластомогенеза.- М.- «Медицина».-1979.1. Б. Зарубежные:

121. Afonso I.F., Dc Alvarez R.R., Farnham N.G., Thompson E., Widerkehr B. The pregnancy zone protein destined from transcortin thyroxin binding protein, ceruloplasmin and oxytocinases // Amer. J. Obstet. Gynec.- 1964.- V. 89,-P. 204.

122. Allegro J., Lippman M., Thompson E. et al. Distribution, frequency and quantitative analysis of estrogen, progesterone, androgen and glucocorticoid receptors in human breast cancer // Cancer Res.- 1979.- V. 39.- P. 14471454.

123. Atiomo W.U., Pearson S., Shaw S. Ultrasound criteria in the diagnosis of polycystic ovary syndrome // Ultrasound Med Biol.- 2000.- V. 26.- № 7.- P. 977-980.

124. Aussel C., Masseyeff R. Human alpha- fetoprotein -felly acid interaction // Biochem. Biophys. Res. Commun.- 1983.- V. 115.- №1.- P. 38-48

125. Barret A.J., Starcey B.M., Mun E.A. The unique nature of the interactrion of a2-macroglobulin with proteinases // Bayer-Simp. V. "Proteinase Inhibitors".- Berlin.- 1974,- P. 72-77.

126. Bayer H., Kadach D., Vergleichende Serumei- weissuntersuchungen bei Muttern und Neugeborenen. 3 Mitt. Das Verhalten eines Schwangerschaftsab-hangigen Protein bei gestorter Schwangerschaft // Zbl. Gunak.- 1970.- Bd. 92,- 1264 p.

127. Belembaogo E., Feillel V., Chollet P et al. Neoadjuvant chemotherapy in 126 operable breast cancer // Eur J Cancer 1992; 28A.- P. 896-900.

128. Benson E., Holdaway G. M. Regulation of insulin binding to human mammary carcinoma // Cancer. Res.- 1982.- V. 42.- P. 1137-1141.

129. Berne B.H. Alpha2-pregnoglobulin a unigue macroglobulin in pregnancy, contraception and cancer // Fed. Proc.- 1973.- V. 32/3.- 677 p.

130. Bersinger N.A., Rageth G.C. A comparison between pregnancy-associatedalpha2-glycoprotem, carcino-embryonic antigen, CA-125 and CA 15-3 as tumor markers in breast cancer // Eur. J. Gynaecol-Oncol.- 1990.- V. 11.- P. 135-144.

131. Bohn H. Detection, characterisation and diagnostic significance of human pregnancy-associated glycoproteins // Blut.- 1973.- Bd. 36.- 205 p.

132. Bohn H. Nachweis und Charakterisierung fon Schwangerschafts proteinen in der manschlichen Placenta sowie ihre guantitative immunologische Bestimmung in Serum schwangeren Frauen // Arch. Gynak.- 1971.- V. 210.- № 4.440 p.

133. Bohn H., Winder W. Isolation and characterization of pregnancy-associated a2-glycoprotein // Blut.- 1976.- V.33.- P. 377-388.

134. Bundschuh G. Uber die Häufigkeit eines wahrend der Schwangerschaft nachweisboren a2-globulin //Zbl. Gynak.- 1967.-Bd. 89.- S. 348.

135. Catalano M.G., Frairia R., Boccuzzi G., Fortunati N. Sex hormone-binding globulin antagonizes the anti-apoptotic effect of estradiol in breast cancer cells // Mol Cell Endocrinol.- 2005.- P. 31-37.

136. Chowdhury R.S., Under A., Panayi G.S. The Production of Pregnancy-associated a-glycoprotein frim human peripheral blood mononuclear cells // Clin. Rheumatol.- 1987.- V.6.- P. 417- 422.

137. Clinton S.R., Beason K.L., Bryant S., Johnson J.T., Jackson M., Wilson C., Holifield K., Vincent C., Hall M. A comparative study of four serological tumor markers for the detection of breast cancer // Biomed Sei Instrum.-2003.-P. 408-414.

138. Cohen N., Hilf R. Effect of estrogen treatment on DMBA-induced mammary tumor growth and biochemistry in intact and diabetic rats // Proc. Soc. Exp. Biol. Med.- 1980.- v. 148.- P. 339-343.

139. De Moor P., Heirwegb K., Heremans J. P. J clin. Invest.- 1962,- V.41.-P.816.

140. Doe R.P., Fernandez R., Seal U. J. clin. Endoer.- 1964.- V.24.- P. 1029.

141. Doe R. P., Lohrenz F., River G. et al. Vitamin B-12 (cobalamin) defficiency a heretofore undeserved control mechanism for plasma corticosteroid-binding globulin concentration in man // J. clin. Endoer.- 1982.- V. 54.- P. 381-385.

142. Dufau M.L. et al J.clin. Endocr.-1970.- V. 30,- P. 351

143. Ehara Y. Effects of large dose of estrogens on prolactin and growth hormone release //Am. J. Obstet. Gynec.- 1976.- V. 125.- P. 455-458.

144. Fazekas A., McFarlane I. Macromolecular binding of glucocorticoids in human mammary carcinoma // Cancer Ros.- 1977.- v. 37.- P. 640-645.

145. Florini I.R., Tonelli G., Brewer C.B., Coppola G., Ringler I., Bell P.H. Characterisation and biological effect of purofiead placental proteins // Endocro-nology.- 1966.- V.79.- 692 p.

146. Fortunati N. Sex hormone-binding globulin: not only a transport protein. What news is around the corner? // J Endocrinol Invest 1999 - №22(3) - P. 223-234.

147. Fortunati N., Catalano M.G. Sex hormone-binding globulin (SHBG) and estradiol cross-talk in breast cancer cells // Horm Metab Res- 2006- №38(4).-P. 236-240.

148. Galili N., Qalili U., Klein E., Rosenthal L. Human T-lymphocytes become glucocorticoid-sensitive upon immune activation // Cell. Immunol.- 1980.-Vol. 50,- P. 440-444.

149. Garret P.E., Kurtz S.R. Clinical Utility of Oncofetal Proteins and Hormones as Tumor Markers // Med. Clin. N. Amer.- 1986.- V.70.- №6.- P. 1295-1297.

150. Glasser H. R., McCormack S. A. Cellular and molecular aspects of deciduali-sation and implantation // H. M. Beier.- P. Karlson (Eds). Proteins and Steroids in Early Pregnancy.- Berlin etc: Springer.- 1982.- P. 245-310.

151. Gerhard I., Betteridge J., Holder R. et al. Thyroid and ovarian function in infertile women // Hum. Reprod.- 1991.- № 6.- 338 p.

152. Grattarola R., Secreto G., Recchione C. Androgens in breast cancer recurrences years mastectomy and increased androgenic activity // Am. J. Obstet. Gynec.- 1975.-V. 121.-P. 169-172.

153. Harris A., Smith I., Dowsett M. et al. Sex hormone binding globulin levels and prognosis in early breast cancer.- Lancet.- 1981.- № 8214.- P. 279-280.

154. Hedley A., Jones S., Spiegelhalter D. et al. Breast cancer in thyroid disease: fact of fallacy.-Lancet.- 1981.-N 8212.-P. 131-133.

155. Hertz R. Steroid-induced, steroid-producing and steroid-responsive tumors. // Steroid hormone action and cancer.- N. Y.: London.- 1976,- P. 1-14.

156. Hofmann R., Friemel H., Behm E.3. Analytic schwangerschaftstypischer Antigene // Arch. Gynak.- 1970.- Bd.208.- №3.- P. 255.

157. Hofmann R., Friemel H., Behm E. Immunochemische Untersuchungen zum Problem der "Pregnancy zone". 1. Antischwangeren-Immunoserum // Arch. Gynak.- 1969.- Bd. 208.- №2.- P. 178-180.

158. Hofmann R., Friemel H.,- Behm E. Immunochemische Untersuchungen zum Problem der "Pregnancy zone". 2. Antiplazenta-Immunoserum // Arch. Gynak.- 1969.-Bd. 208.-№2.-P. 187-188.

159. Holdway J., Skinner S. Predicting treatment response in breast cancer using urinary discriminant ratio and receptor assay // Eur. J. CancEr.- 1981.- V. 17.-№ 12.-P. 1295 -1300.

160. Home C.H.W., Armstrong S.S., Thomson A.W.,Thomson W.D. Detection of pregnancy-associated a2-macroglobulin, an immunosupressive agent, in IgA producing plasma cells and body secretions // Clin.Exp. Immunol.- 1983.- V. 51.-P. 634-638.

161. Home C.H.W., Gerrie L., Sormstrong S. Defficiency of serum "Pregnancy-associated" the a2-glycoprotein: association with disease // J. Clin. Pathol.-1986.- V. 39.- P. 195-198.

162. Home C.H.W., Gerrie L.M., Armstrong S.S., Brunt P.W., Nowat N., Sinclair T.S. Deficiency of serum "Pregnancy-associated" a2- glucoprotein association with desease // J. Clin. Pathol.- 1986.- V. 39.- №2,- P. 195-198.

163. Home C.H.W., Nisbet A.D. Pregnancy proteins // Invest. Cell. Pathol.-1979.-V. 2.-№3.-P. 217-231.

164. James R. (X2-macroglobulin and its possible role in immunosystems // Trend. Bull. Sci.- 1980.- V. 5.- P. 43-47.

165. Jungblut P.W. Steroid receptors in the genital tract and the monitoring of steroid hormonal action // H. M. Beier, P. Karlson (Eds). Proteins and Steroids in Early pregnancy.- Berlin etc: Springer.- 1982.- P. 147-56.

166. Kadach D. Identifizierung eines schwanger- schaftsabhangigen a2-globulin // Zbl. Gynak.- 1970.- Bd. 92.- S. 1321-1327.

167. Kasukawa R., Ohara M., Joshida H., Joshida T. Pregnancy-associated a2-glucoprotein in rheumatic arthritis // Intern. Arch. Aller. Appl. Immun.-1979,- V. 58.-P. 67-74.

168. Key T.J., Verkasalo P.K. Endogenous hormones and the aetiology of breast cancer // Journal List.- Breast Cancer Res.- 1999.- V. 1(1).

169. Khosla S. Editorial: Sex hormone binding globulin: inhibitor or facilitator (or both) of sex steroid action? // J. Clin. Endocrinol. Metabol. 2006. Vol. 91(12).-P.5029-5037

170. Kuczynsky I.W. Badania immunochemiscene pod bialkien ciazowym // Prase Komis. Med. Doswiadcz. Rosn. Towazzi. Przyiac. Naur.- 1969.- V. 39.-P.165.

171. Lamarque J. L. An Atlas of the Breast: Clinical Radiodiagnosis. London.-1984.

172. Laurell C.B. Electroimmunoassay // Scand. J. clin. Lab. Invest.- 1972.- V. 29.- Suppl. 124.-P. 21-37

173. Le-Gaillard F., Racadot A., Aubert J.P., Dautrevaux M. Modification of human transcortin by tetranitromethane. Evidence for the implication of a tyrosine residue in Cortisol binding // Biochimie. 1982; P. 153-158

174. Lowry H.O., Rosebrouch T.N., Farr A.L., Randall R.J. Protein measurement with Folin phenol reagent//Biol. Chem.- 1951.- V. 193,-P.265-269

175. Mac Laren J.A., Reid D.E., Konugres A.A., Allen F.H. Pa 1A new ingerited a2-globulin of human serum // Vox Sang.- 1966.-V. 11.- P. 553.

176. Marcolis I., Kenrick K.G. «Pregnancy Protein» in poliacrylamide gradient gel electrophoresis // Austr. J. Exp. Biol. Med. Sci.- 1969.- V.47.- P. 637.

177. Miller W., Dixon M Antiaromatase agent: preclinical data and neoadjuvant therapy // Clinical Breast Cancer 2000.- 1 (Suppl).- P. 9-14.

178. Miller W., Santen R (eds.) Aromatase inhibition and breast cancer // New York 2001; P. 309.

179. Mittra J., Hay ward J., McNeilly A. Hypothalamic-pituitary-prolactin axis in breast cancer // Lancet.- 1974.- v. 1.- N 7863.- P. 889-891.

180. Munck-Petersen C., Christiansen B.S., Heicen- Dorf L., Ingerslev I. Synthesis and secretion of a2-macroglobulin by human hepatocytes in culture // Eur. J. Clin. Invest.- 1988.- V.18.- P. 543-548.

181. Murayama Y., Utsunomiya J., Takahashi I., Kitamura M. Sex Hormone Binding Globulin as a Reliable Indicator of Hormone Dependence in Human Breast Cancer // J. Ann. Surg.- 1979.- P. 133-138.

182. Murfy B., Patee C. J clin.Endocrin.- 1963.- v.23.- 459 p.

183. Nikulina D.M., Nikolaev AA., Volodin M.A. Reproductive system antigen in the diagnosis of cancer // Abstract book XVIIth Meeting of the International Society for Oncodevelopmental Biology and Medicine. Freiburg.- 1989.

184. Nishi S., Matsue H., Youshida H., Yamamoto R., Sakai M. Localization ofestrogen-binding site of alfa-fetoprotein in chemeric human-rat proteins // Proc. Natl.Acad.Sci. USA.- 1991.- № 88.- P. 3102-3105.

185. Nishi S., Shahbazzadeh D., Azuma M., Sakai M. Estrogen binding site of rat AFP//Tumor Biol.- 1993.-V. 14,-P. 234.

186. Ochoa G.L. Hydrophobic (interaction) chromatography // Biochemie.- 1978.-V.60.-N1.-P. 1-15

187. Osborne C. K., Monako M., Lippman M. et al. Correlation among insulin binding, degradation and biological activity in human breast cancer cells in long-term tissue culture // Cancer Res.- 1978.- V. 38.- P. 94-102.

188. Ouchterlony O. Diffiision-in-gel methods for immunological analysis // Progress in Allergy.- 1958.- v. 5.- P. 1-15.

189. Oudin G. Method d'analyse immunochimigue par precipitación specifigue en milien gelifie // Compt. Rend. Acad. Sci.- 1946.-V. 222.- P. 195.

190. Paul F., Brenner V.D. The Menopausal Syndrome // J Obstet Et Gynaecology 1988.-P. 68-118.

191. Peterson RE. Adrenocortical steroid metabolism and adrenal cortical function in liver disease // J Clin Invest.- I960,- V. 39.- №2.- P. 320-331.

192. Philip A., Bostedt L., Stigbrand T., O'Connor-McCourt M.D. Binding of transforming growth factor-beta to pregnancy zone protein // Eur. J. Bio-chem.- 1994.- V. 221.- P. 687-693.

193. Russo J., Russo I.H. Role of hormones in human breast development: the menopausal breast. Menopause Biology and Palobiology / Ed by Lobo R.A. et al. New York.- 1996.-P. 184-193.

194. Sandberg A.A., Slaunwhrte W. R. // J clin. invest.- 1969.- V. 42.- P. 51.

195. Santen R., Yue W., Naftolin F et al. The potential of aromatase inhibitors in breast cancer prevention // Endoer Relat Cancer 1999.- №.- 6P. 235-243.

196. Schoultz B., Stigbrand T. Characterization of the "Pregnancy zone" protein in relation to other a2-globulin of pregnancy // Biochem. Biophys. Acta.-1974.- V. 359,- №2.- P. 303-304.

197. Schoultz B., Stigbrand T. Purification of the "Pregnancy zone" protein // Acta. Obstet. Gynecol.- Scand.- 1973.- V. 52.- №1.- p. 51-57.

198. Shaltiet S. Hidrophobic interaction chromatography of protein on neutral adsorbents //Methods Enzymol.- 1974.- v.34.- P. 126-140.

199. Shin R. Prolactin, pituitary hormones and breast cancer // In: Horm. a. breast Cancer.- Cold Spring Harbor. N. Y.- 1981.- P. 185-196.

200. Smithies O.U. Zone electrophoresis in starch gels and its applications to studies of serum proteins // Adv. Prot. Press. N. I. Chem. Acad.- 1959.- V. 14,-P. 65-66.

201. Stimson W.H., Fubank Scitt L. The isolation and partial characterisation of a new oc2-macroglobulin from human pregnancy serum // FEBS Lett.- 1972.-V. 23,-P. 293.

202. Straube W., Hofmann R., Klausch B., Broch I. Immunochemischer Nachweis schwangerschaftstymischer und retroplazentarserum // Wiss. Ischr. Friedrich-Schiller-Unn. Iena.- Math-Mat. R.- 1972,- Bd. 21.- №4,- P. 787.

203. Straube W., Rohde W., Hofmann R., Klausch B. Untersuchungen zur frage der Identität schwangerschaftstymischer Proteine mit HCG und LH // Zbl. Gynak.- 1973.- Bd.95.- S. 552.

204. Szego C. Mechanisms of hormone action: Parallels in receptor mediated signal propagation for steroid and peptide effectors // Life Sei.- 1984.- V. 35.-P. 2383-2396.

205. Tatarinov Yu.S., Terentiev A.A., Moldogazieva N.T., Tagirova A.K. Human alpha-fetoprotein and its purification by chromatography on immobilized estrogens//Tumor Biology.- 1991.-№12.-P. 125-130.

206. Ternynck T., Avrameas S. Poliacrylamide-Protein immimosorbents prepared with glutaraldehyde // FEBS Lett.- 1972.- v. 23.- N 1.- P. 24-28.

207. Than G.N., Szaba I.F., Karg N.I., Czaba D.G., Novak P.F. Pregnancy-associated a2-glycoprotein // Invest. Cell. Pathol.- 1980,- №3.- P. 295-309.

208. Thijssen J. H. Androgenes in human postmenopausal breast cancer // Hormone Res.- 1975.- V. 6.- P. 304-306.

209. Thomson A.W., Hörne C.H.W. Biological and clinical significance of pregnancy-associated a2-glycoprotein // Invest. Cell. Kathol.- 1980.- №3.-P. 295-309.

210. Tubiana M. The scientific bases of c'aiicer management: at the interface between fundamental research and clinical practice // J Cancer Res Clin Oncol 1991; P. 117-275.

211. Uriel J., Bouillon D., Dupiers M. Effinity hromatografi of human, rat and mouse a-phetoprotein on estradiol-sepharose adsorbent// FEBS Lett.- 1975.-V.53.- №3.- P. 305-308.

212. Vakharia D., Mizejewski G.J. Human alfa-fetoprotein peptides bind estrogen receptor and estradiol and suppress breast cancer.//Breast Cancer Res. Treat.- 2000.- V.63.- P. 41-52.

213. Vangerov M., Mckee R. Metabolism of glucose, lactate and alamine by Ehrlich ascites carcinoma cells from normal and alloxan diabetic mice // Fed. proa.- 1955.- v. 14.- P. 296-298.

214. Versey J. Quantitative immunoelectrophoresis. In: Ivor Smit (ed.). Chromatographic and Electrophoretic Techniques.- 1976.- Vol. II.- P. 347-336 (London: Heinemann).

215. Wagner N.A., Jangblat R.W. Differentiation between steroid-hormone receptors, CBG and SHBG in human target organ extracts by a singlestep-assay // Molec. Coll. Endocrinol.- 1976.- V. 4.- P. 13-24.

216. Wang D.- Goodwin P.- Bullbrook R. et al. Plasma FSH and LH in postmenopausal women with breast cancer // Europ. J. Cancer.- 1976.- V. 12.- №4,-P. 305-311.

217. Wilken H. Die sogenannte "Pregnancy zone" ein neuer serumfaktor bei Schwangeren // Arch. Gynak.- 1963.- Bd. 199,- P. 243.

218. Zakt K., El-Kharadly M., El-Faras A. et al. Urinary oestrogens and pregnandiol in breast cancer patients // Endocrinologie.- 1982.- V. 79.- P. 49 56.