Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Взаимосвязь аллельных вариантов генов АРОА1, АРОВ, АРОС1, атерогенных дислипопротеидемий и осложненного течения инфаркта миокарда

ВАК РФ 03.00.15, Генетика

Автореферат диссертации по теме "Взаимосвязь аллельных вариантов генов АРОА1, АРОВ, АРОС1, атерогенных дислипопротеидемий и осложненного течения инфаркта миокарда"

РГБ ОД

- 6 СЕН 1333

МАСЛЕННИКОВ Аркадий Борисович

ВЗАИМОСВЯЗЬ АЛЛЕЛЬНЫХ ВАРИАНТОВ ГЕНОВ АРОА1, АРОВ, АРОС1, АТЕРОГЕННЫХ ДИСЛИПОПРОТЕИДЕМИЙ И ОСЛОЖНЕННОГО ТЕЧЕНИЯ ИНФАРКТА МИОКАРДА

03.00.15 - генетика

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Томск - 1999

Работа выполнена в лаборатории генно-инженерных методов исследования ГУ НИИ молекулярной биологии и биофизики Сибирского отделения РАМН и областной научно-практической лаборатории ДНК-диагностики Государственного Новосибирского областного диагностического центра

Научные руководители:

Доктор биологических наук, профессор Мертвецов Николай Павлович

Кандидат биологических наук Коваленко Сергей Петрович

Научный консультант:

Доктор медицинских наук Отева Эльвира Александровна

Официальные оппоненты:

Доктор медицинских наук Душкин Михаил Иванович

Кандидат биологических наук Степанов Вадим Анатольевич

Ведущее учреждение:

Научно-исследовательский институт экспериментальной медицины РАМН (197376, Санкт-Петербург, ул. Академика Павлова, 12)

Защита диссертации состоится " Л. " июня 1999 г. в /о час.___мин.

на заседании диссертационного Совета К.001.49.01 при НИИ медицинской генетики ТНЦ СО РАМН по адресу: 634050, г. Томск, Набережная р. Ушайки, 10.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке НИИ медицинской генетики ТНЦ СО РАМН, г. Томск.

Автореферат разослан " ■'»7 " мая 1999 г.

Ученый секретарь диссертационного Совета ^

Кандидат биологических наук Л.К.Крюкова

РуюШ УГ"- Ъ, о

Общая характеристика работы Актуальность исследования. Сердечно-сосудистые заболевания (ССЗ) на почве атеросклероза остаются одной из наиболее распространенных форм хронической патологии человека и являются основной причиной смертности населения России и других стран (Чазов E.H., 1998; Оганов Р.Г., 1999; Assmann G., 1995).

Накопленные знания об этиопатогенезе атеросклероза подтверждают его сложную мультифакториальную природу, детерминируемую совокупностью сре-довых и генетических факторов риска (ФР), приводящих к накоплению холестерина в сосудистой стенке, что обусловливает развитие и прогрессирование заболевания. Существенный вклад наследственности в патогенез атеросклероза под-твержают данные эпидемиологических, семейных и близнецовых исследований (Дзизинский A.A., Пузырев В.П., 1977; Ильинский Б.В., Клюева С.К., 1978, 1985, 1986; Давиденкова Е.Ф. и соавт., 1986; Berg К., 1979, 1983). Однако, конкретные молекулярно-генетические основы заболевания остаются неясными и список кан-дидатных генов атеросклероза, предположительно детерминирующих развитие болезни, сегодня обширен (McKusick V.A., 1999).

Исследователями определен наследуемый тип метаболизма липопротеидов (ЛП), коррелирующий с ранним началом, скоростью развития и тяжестью течения атеросклероза, и характеризующийся преобладанием богатых холестерином (ХС) и триглицеридами (ТГ) подфракций ЛПНП и ЛПОНП, пониженным уровнем ЛПВП, изменением содержания и функциональной активности аполипопро-теинов (Климов А.Н., 1987, 1989, 1995; Assman G., 1982, 1995; Lusis A.J., 1988). При этом, высокие уровни ОХС, ХСЛПНП, ТГ, АпоВ, низкий уровень ХСЛПВП в плазме крови признаны ведущими индивидуальными ФР (Томпсон Г.Р., 1990).

Генетические аспекты регуляции метаболизма липидов оказались в центре пристального внимания исследователей и именно в этой области достигнуты значительные успехи. Установлены молекулярные основы семейной гиперхолестери-немии(ГХС) и некоторых других форм атерогенных дислипопротеидемий (ДЛП), была показана ассоциация аллельных вариантов ряда генов с семейными формами атеросклероза, ИБС, инфаркта миокарда (ИМ) и вариабельностью уровней липидных фракций крови (Кучинский А.П. и соавт., 1992; Breslovv J.L., 1985,1987; Humphries S.E., 1988; Goldstein J.L., Brown M.S., 1989; McKusick V.A., 1999).

Учитывая распространенность в регионе ИБС и ИМ среди мужчин и женщин молодого возраста (Гафаров В.В., 1991, 1993, Отева Э.А., 1998), остро стоит вопрос о действенной первичной профилактике. Признано, что действенность профилактики атеросклероза, эффективность лечения его клинических форм могут быть достигнуты только при осуществлении стратегии "высокого риска", основанной на точном знании региональных особенностей этиопатогенеза атеросклероза; достоверной оценке патогенетической значимости ФР, степени выраженности и направленности имеющихся ассоциаций; учитывающей реальные молекулярные механизмы и маркеры наследственной предрасположенности (Николаева A.A., 1983; Жуковский Г.С. и соавт., 1996; Калинина A.M. и соавт., 1996; Prevention of Coronary Heart Disease in Clinical Practice, 1994).

Общепринятым подходом к изучению вклада наследственности в проявление мультифакториального заболевания, является исследование полиморфных генетических маркеров в локусах кандидатных генов с целью выявления ассоциаций, свидетельствующих о связи аллельного варианта гена с заболеванием или о сцеплении маркера с близлежащим локусом, участвующим в формировании наследственной предрасположенности к болезни (Бочков Н.П., Гинтер Е.К., 1981; Фогель Ф., Мотульски А., 1990). Проведенные в Сибирском регионе специальные молекулярно-генетические исследования (Степанов В.А. и соавт., 1995, 1997, 1998; Пузырев К.В., 1997; Воевода М.И. и соавт., 1998; Спиридонова М.Г. и соавт., 1998), затронули лишь несколько кандидатных генов и не дают полной картины генетической гетерогенности атеросклероза и его региональных особенностей.

Таким образом, установление причинно-следственных взаимосвязей между ранним атеросклерозом, уровнем основных фракций липидов плазмы крови, типом липидного обмена и аллельными вариантами генов, ответственных за синтез белков, обеспечивающих метаболизм ЛП, представляется весьма актуальной.

Из группы кандидатных генов, наряду с геном аполипопротеина В (АРОВ), для исследования были выбраны гены аполипопротеина AI (АРОА1) и аполипопротеина CI (АРОС1), данные об ассоциации аллельных вариантов которых с атеросклерозом и изменчивостью уровня липидов плазмы крови в Российской популяции отсутствуют.

Цель исследования - поиск ассоциаций между аллельными вариантами генов АРОА1, АРОВ, АРОС1, вариабельностью уровней основных липидных фракций плазмы крови, атерогенными ДЛП и осложненным течением инфаркта миокарда у мужчин в возрасте до 50 лет.

Задачи исследования:

1. Описать диаллельный МэрЬПДРФ области промотора гена АРОА1, ХЬаЬПДРФ в структуре 26 экзона гена АРОВ, НраЬПДРФ области промотора гена АРОС1 в контрольной группе и среди мужчин, перенесших в возрасте до 50 лет крупноочаговый или трансмуральный ИМ.

2. Охарактеризовать во взаимосвязи с вариантами течения ИМ вариабельность уровней основных фракций липидов плазмы крови (ОХС, ХСЛПВП, ХСЛПНП, ТГ, АпоВ), особенности распределения атерогенных ДЛП и оценить характер имеющихся ассоциаций.

3. Проанализировать и охарактеризовать возможные ассоциации аллелей и генотипов ПДРФ в локусах генов АРОА1, АРОВ, АРОС1 с уровнем основных фракций липидов плазмы крови, атерогенными ДЛП, ИМ и вариантами его течения.

4. Исследовать возможность прогнозирования варианта течения ИМ и фе-нотипической изменчивости уровней липидных фракций крови на основе учета комбинации генетических маркеров.

Научная новизна. Впервые получены данные об ассоциации аллелей и генотипов МзрЬПДРФ области промотора гена АРОА1 и Нра1-ПДРФ области промотора гена АРОС1 с ИМ и вариантами его течения, уровнем основных показателей липидного обмена и атерогенными ДЛП у мужчин в возрасте до 50 лет. Причем диаллельный ПДРФ локусов генов АРОА1, АРОС1 описан впервые для представителей Российской популяции. Частоты аллелей и генотипов ХЬа1-ПДРФ 26 экзона гена АРОВ определены впервые для жителей г.Новосибирска. Обнаружена ассоциация генетически детерминированных атерогенных ДЛП с неблагоприятным осложненным течением трансмурального и крупноочагового ИМ у мужчин в возрасте до 50 лет. Доказана информативность и перспективность использования трехлокусных генотипов аллельных вариантов генов АРОА1, АРОВ, АРОС1 при прогнозировании возможного варианта течения ИМ.

Полученные результаты значительно расширяют и дополняют информацию о межпопуляционных различиях ПДРФ в локусах кандидатных генов атеросклероза, степени их вовлеченности в патогенез заболевания; конкретизируют патогенетическую значимость и роль индивидуальных ФР атеросклероза в развитии его ранних, осложненных и семейных форм. Результаты могут быть основой для дальнейшего поиска информативных генетических маркеров оценки индивидуальной предрасположенности к ССЗ.

Практическая значимость работы. Полученные данные о взаимосвязи между аллельными вариантами генов АРОА1, АРОВ, АРОС1, вариабельностью уровней основных фракций липидов плазмы крови, атерогенными ДЛП и особенностями течения трансмурального и крупноочагового ИМ у мужчин в возрасте до 50 лет могут быть использованы при формировании групп высокого риска по раннему развитию атеросклероза, прогнозировании его осложнений и при осуществлении программ первичной семейной профилактики. Результаты работы представляют интерес в плане выявления генетической гетерогенности факторов, вовлеченных в детерминацию нарушений липидного обмена и могут использоваться для сравнительных популяционно-генетических исследований. Использованные технологии и методы внедрены в работу Государственного Новосибирского областного диагностического центра и областной медико-генетической службы, что позволяет использовать их при проведении специализированного консультирования и обследования семей, отягощенных по атерогенным ДЛП и раннему атеросклерозу. Апробация диссертации. Основные результаты исследования доложены и обсуждены на Региональной конференции "Актуальные проблемы клинической кардиологии" (Томск, 1990); Втором Всесоюзном съезде медицинских генетиков (Алма-Ата, 1990); Четвертом Всесоюзном съезде специалистов по клинической лабораторной диагностике (Москва, 1991); Региональной конференции "Актуальные проблемы кардиологии Севера и Сибири" (Красноярск, 1991); Симпозиуме стран СНГ по проблемам патогенеза артериальной гипертонии и атеросклероза (Новосибирск, 1992 г.); Региональной Ассамблее "Здоровье населения Сибири" (Новосибирск, 1994); выступлениях на отчетных сессиях КДЦ СО РАН 1993, 1994, 1995 гг.; V Российском съезде специалистов по лабораторной диагностике (Москва, 1995); семинарах НИБХ СО РАН (Апрель 1996, Февраль 1997);

Региональной научно-практической конференции "Актуальные проблемы современной медицины" (Новосибирск, 1996); Региональной конференции "Актуальные проблемы кардиологии" (Томск, 1997); межлабораторном семинаре НИИ молекулярной биологии и биофизики СО РАМН (Апрель 1999).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 18 печатных работ.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 104 страницах машинописного текста, содержит 19 таблиц и 9 рисунков, состоит из введения, трех глав, выводов, библиографического списка литературы, включающего 232 работы.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Аллельные варианты генов АРОА1 и АРОС1 существенным образом вовлечены в патогенез ИМ и семейных форм атерогенных ДЛП, причем носитель-ство определенных генотипов ассоциировано с различными вариантами течения ИМ и различным индивидуальным уровнем основных липидных фракций плазмы крови.

2. Использование трехлокусных генотипов аллельных вариантов генов АРОА1, АРОВ, АРОС1, перспективно при прогнозировании возможного варианта течения ИМ.

3. Для мужчин в возрасте до 50 лет с трансмуральным или крупноочаговым ИМ характерна необычайно высокая распространенность различных типов атерогенных ДЛП, наличие семейных форм которых, ассоциировано с неблагоприятным осложненным течением ИМ.

4. Диаллельный ПДРФ локусов генов АРОА1, АРОВ, АРОС1 в обследованной выборке по частоте аллелей, уровню гетерозиготности, показателю PIC близок к картине, характерной для европеоидных популяций.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Характеристика обследованных групп. Группу исследования составили 129 мужчин, жителей г.Новосибирска, не являвшихся кровными родственниками и перенесших в возрасте до 50 лет трансмуральный (72 человека) или крупноочаговый (57 человек) ИМ. Пациенты с сахарным диабетом, лица находившиеся на специальной диете или получавшие комплексную антигиперлипидемическую терапию (до или в период биохимического исследования липидов плазмы крови) в обследование не

включались. Пробанды и члены их семей наблюдались кардиологом д.м.н. с.н.с. Э.А.Отевой и были обследованы в рамках программы КДЦ СО РАН по первичной семейной профилактике раннего атеросклероза (Отева Э.А., 1998). При анализе родословных, семейная отягощенность по ССЗ прослеживалась у 43,4% обследованных.

По итогам диспансерного наблюдения и в зависимости от наличия осложнений в остром, постинфарктном или реабилитационном периоде пациенты были разделены на две группы: первая - 63 пробанда с неосложненным благоприятным течением (НТИМ) и вторая - 66 человек с осложненным неблагоприятным течением (ОТИМ).

Группу сравнения составили 114 мужчин в возрасте 35-50 лет, не состоящих в кровном родстве, родившихся в г.Новосибирске, отобранных по признаку отсутствия в анамнезе достоверно перенесенного ИМ и отсутствия факта лечения по поводу ССЗ.

Методы биохимических исследований в группе пациентов с ИМ. Кровь для биохимических исследований забирали утром натощак, после 12-16 часового голодания. Содержание ОХС, ТГ и ХСЛПВП в плазме крови определяли в лаборатории клинической биохимии НИИ терапии СО РАМН стандартизованными методиками на автоанализаторе "Техникон AA-II". Уровни ХСЛПНП и ХСЛПОНП расчитаны по формулам B.Rifkind (1970), а холестериновый индекс атерогенности (ИА) - по А.Н.Климову (1980). Содержание аполипопротеина Вюо (АпоВ) определяли методом РИД (Томпсон Г.Р., 1990).

При оценке показателей липидного обмена и типировании атерогенных ДЛП, за ГХС принимали значение ОХС > 260 мг/дл, за ГиперВХС - уровень ХСЛПНП более 195 мг/дл, за ГТГ - значение ТГ > 200 мг/дл, ГипоАХС расценивали как значение ХСЛПВП ниже 35 мг/дл, а содержание в плазме крови АпоВ более 130 мг/дл оценивали как превышающее нормальные величины (Профилактика ИБС, 1983; Филимонова Т.А., 1989; Парфенова Н.С., Шестов Д.Б., 1995).

Генотипирование ПДРФ в локусах генов АРОА1, АРОВ, АРОС1.Геномную ДНК выделяли по модифицированной методике, основанной на стандартных методах экстракции нуклеиновых кислот из ядросодержащих клеток периферической крови (Miller S.A. etal., 1988; Signer Е. etal., 1988). Фрагменты генов

АР0А1, АРОВ, APOC1, содержащие полиморфные сайты рестрикции для специфичных эндонуклеаз, амплифицированы методом ПЦР. ПЦР проводили в 20 мкл реакционной смеси 67 мМ Трис-HCl pH 8,8, 16,6 мМ (NH^îSOî, 1,5 мМ MgCh, 0,01% Твин-20, содержащей 0,2 мМ dNTP, 2,5 пкМ каждого праймера, 150-200 нг геномной ДНК и 0,7 ед термофильной Taq ДНК полимеразы (ООО "Лаборатория МЕДИГЕН", Россия). В каждой серии экспериментов использовалась система "нулевых" и "положительных" контролен. Гидролиз продуктов ПЦР осуществляли ферментами Mspl, Xbal, BstHPI (изошизомер Hpal) в условиях рекомендованных фирмой-производителем (АО "СибЭнзим", Россия). Для типирования аллелей, реакционную смесь анализировали методом электрофореза с последующей визуализацией результатов на системе UV-GelDocl000 (Bio-Rad, США).

По каждому из полиморфных локусов идентифицировано два аллеля: "-" -отсутствие сайта рестрикции и "+" - наличие сайта рестрикции. Аллели обозначены соотвественно М+ и М- для MspI-ПДРФ АРОА1, Х+ и Х- для XbaI-ПДРФ АРОВ, Н+ и Н- для HpaI-ПДРФ АРОС1.

Методы статистического анализа результатов. Соответствие распределения аллелей и генотипов равновесию Харди-Вайнберга проверяли по критерию у} (Животовский Л.А., 1991). Информативность рестрикционного ДНК-полиморфизма оценивали с помощью общепринятого показателя информационного содержания полиморфизма - PIC (Botstein D. et al., 1980). Наличие ассоциации ал-лельных вариантов или генотипов полиморфных генетических маркеров с заболеванием, качественными признаками тестировали по критерию у} и коэффициенту тетрахорической ассоциативной связи (Минцер О.П. и соавт., 1982).

Для вычисления и сравнения средних величин, при оценке достоверности полученных результатов пользовались общепринятыми формулами вариационной статистики и критерием Стьюдента. Уровень липидов крови перед статистической обработкой был скорректирован по возрасту методом регрессии.

Для выяснения характера внутренних взаимоотношений и оценки взаимосвязи уровней липидных показателей плазмы крови, варианта течения ИМ, аллелей и генотипов использовали методы корреляционного и однофакторного дисперсионного анализа (Лакин Г.Ф., 1973; Животовский Л.А., 1991). Достоверность коэффициентов корреляций оценивали по специальной таблице критичес-

ких значений. Для всех статистических тестов в качестве критерия достоверности рассматривался уровень значимости более 95%. Статистический анализ выполнен с использованием программ Microsoft Excel 97 и Statistica 4,2.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ ПДРФ локусов генов АРОА1, АРОВ, АРОС1, ассоциация с ИМ и осложненным его течением. В результате проведенного иследования для MspI-ПДРФ области промотора гена АРОА1, XbaI-ПДРФ в структуре 26 экзона экзона гена АРОВ и HpaI-ПДРФ области промотора гена АРОС1 типированы по три возможных генотипа (табл.1).

Таблица 1

Характеристика ПДРФ локусов генов АРОА1, АРОВ, АРОС1

в контрольной выборке и группе пациентов с ИМ

MspI-ПДРФ A PO Al XbaI-ПДРФ АРОВ HpaI-ПДРФ АРОС1

контроль ИМ контроль ИМ контроль ИМ

п= 114 129 114 129 114 129

Генотипы

-/- 4 13 38 35 71 70

-/+ 28 38 56 70 39 47

+/+ 82 78 20 24 4 12

Аллели

- 0,158 0,248 0,579 0,543 0,794 0,725

+ 0,842 0,752 0,421 0,457 0,206 0,275

s.e. 0,033 0,027 0,011 0,006 0,031 0,025

I2* 0,6652 5,7092 0,007 1,121 0,2335 0,9695

Р >0,05 <0,05 >0,05 >0,05 >0,05 >0,05

H 0,246 0,295 0,491 0,543 0,342 0,364

PIC 0,231 0,303 0,369 0,373 0,274 0,319

Примечание: * - оценка соответствия распределения генотипов ожидаемому при равновесии Харди-Вайнберга

В контрольной выборке ни по одному из полиморфных диаллельных ре стрикционных маркеров существенных отклонений в распределении генотипов О' ожидаемого при равновесии Харди-Вайнберга не выявлено. Аналогичная ситуа ция наблюдалась и среди пациентов с ИМ для генотипов ХЬаЬПДРФ АРОВ Нра1-ПДРФ АРОС1. Однако, в группе ИМ распределение генотипов МэрЬПДРФ

АР0А1 не согласуется с ожидаемым при равновесии Харди-Вайнберга. Поскольку группа ИМ является селективной выборкой из популяции по конкретному признаку, то нарушение равновесия может свидетельствовать о вероятной взаимосвязи одного из аллельных вариантов АРОА1 с заболеванием. Значимое отклонение в распределение связано с высокой частотой генотипа М-М-.

Величина показателя PIC в контрольной выборке для MspI-ПДРФ области промотора гена АРОА1 была наиболее низкая - 0,231, что указывает на относительно малую информативность маркера для популяционных и семейных молеку-лярно-генетических исследований. Два других диаллельных рестрикционных маркера - XbaI-ПДРФ АРОВ и HpaI-ПДРФ АРОС1, можно отнести к разряду умеренно информативных. Примечательно, что в группе пациентов с ИМ величина PIC и уровень наблюдаемой гетерозиготности оказались выше по всем трем исследованным ПДРФ. При этом, показатель PIC для MspI-ПДРФ АРОА1 превысил нижний порог 0,25, установленный для умеренно информативных генетических маркеров.

Исследование MspI-ПДРФ области промотора гена АРОА1 и HpaI-ПДРФ области промотора гена АРОС1 среди представителей российской популяции проведено впервые. Сравнение полученных частотных характеристик распределения аллелей и генотипов по мужской выборке жителей г.Новосибирска с популяциями других стран затруднено единичностью работ по анализу данного полиморфизма. Для MspI-ПДРФ АРОА1 и HpaI-ПДРФ АРОС1 редкими аллелями в обследованной нами группе мужчин являются М- (частота 0,158) и Н+(0,206), а редкими генотипами - М-М- (0,035) и Н+Н+ (0,035), соответственно. Подобная картина была описана для европеоидной выборки (Smit M. et al., 1988; Nillesen W.M. et al., 1990; Smith J.D. et al., 1992). Наблюдаемая гетерозиготность генетических маркеров, также мало отличается от приведенных в этих работах величин.

XbaI-ПДРФ в структуре 26 экзона гена АРОВ является наиболее изученным не только в различных популяциях мира, но и в Сибирском регионе. Учитывая, что основу выборки составили представители славянских национальностей, следует констатировать, что полученные результаты практически идентичны картине, недавно описанной для популяционной выборки г.Томска (Степанов В.А. и соавт., 1997). Частота а ллеля Х- и уровень гетерозиготности в Новосибирске

близки цифрам, полученным для населения европейской части России и crpai Европы, где варьирование этих показателей находится в пределах 0,43-0,56 и 0,45 0,55 соответственно (Шевцов С.П. и соавт., 1994; Berg К., 1985; Law A. et al., 1986 Myant N.B. et al., 1989; Genest J.J. et al., 1990; Paulweber В. et al, 1990).

В табл.2 отражены данные сравнительного анализа и статистической оценки особенностей распределения аллелей и генотипов диаллельных рестрикцион-ных маркеров у больных с ИМ и в группе контроля.

Таблица 2

Частоты аллелей и генотипов рестрикционных маркеров

у пациентов с инфарктом миокарда и в группе сравнения

Аллели и генотипы Частота Разность частот (%) У? (d.f.=l)

группа ИМ (п— 129) контроль (п= 114)

MspI-ПДРФ АРОА1

М- 0,248 0,158 9,0 5,99**

М-М- 0,1 0,035 6,5 3,953*

М+М- 0,295 0,246 4,9 0,734

М+М+ 0,605 0,719 -11,4 3,497

XbaI-ПДРФ АРОВ

X- 0,543 0,579 -3,6 0,637

Х-Х- 0,271 0,334 -6,3 1,143

Х+Х- 0,543 0,491 5,2 0,656

Х+Х+ 0,186 0,175 1,1 0,049

HpaI-ПДРФ АРОС1

Н- 0,725 0,794 -6,9 3,136

Н-Н- 0,543 0,623 -8,0 1,591

Н+Н- 0,364 0,342 2,2 0,128

Н+Н+ 0,093 0,035 5,8 3,31

Примечание: * - уровень значимости р<0,05, ** - уровень значимости р<0,025.

У пациентов, по сравнению с контрольной выборкой мужчин аналогичного возраста, достоверно чаще встречается аллель М- MspI-ПДРФ АРОА1. Аналогичный характер распределения частоты аллелей был недавно отмечен у больных ИБС, имевших семейную отягощенность по ГипоАХС (Carmena-Ramon R.F. et al., 1998). Анализ распределения генотипов этого маркера указывает на значимое преобладание генотипа М-М- в группе пробандов. Среди здоровых мужчин

достоверно чаще встречались носители аллеля М+, однако статистически значимой разницы по распределению генотипов М+М+ и М+М- не зафиксировано.

Для аллельных вариантов HpaI-ПДРФ АРОС1 можно отметить приближающееся к границе статистической достоверности преобладание среди пробан-дов аллеля Н+ и генотипа Н+Н+ по сравнению с выборкой здоровых мужчин.

Что же касается гена АРОВ, то какой-либо разницы между контрольной группой и группой ИМ по частотам генотипов и аллелй XbaI-ПДРФ нами не обнаружено. Данный генетический маркер в популяциях мира проявляет различную степень ассоциации с ССЗ - от наличия достоверной связи по Х- или Х+ аллелям, до полного ее отсутствия (Кучинский А.П. и соавт., 1992; Степанов В.А. и соавт., 1995; Genest J.J. etal., 1990; Law А. et al., 1986; Paulweber В. et al, 1990).

Особенности частотного распределения аллелей и генотипов MspI-ПДРФ АРОА1, XbaI-ПДРФ АРОВ, HpaI-ПДРФ АРОС1, в зависимости от варианта течения ИМ у пробандов, приведены в табл.3.

ТаблицаЗ

Частоты аллелей и генотипов рестрпкционных маркеров

в группах пациентов с различным течением инфаркта миокарда

Аллели и генотипы Частота Разность частот (%) X2 d.f.=l)

группа НТИМ (п= 63) группа ОТИМ (п= 66)

MspI-ПДРФ АРОА1

М- 0,302 0,197 10,5 3,808

М-М- 0,175 0,031 14,4 7,34*

М+М- 0,254 0,333 -7,9 0,968

М+М+ 0,571 0,636 -6,5 0,569

XbaI-ПДРФ АРОВ

X- 0,587 0,5 8,7 1,966

х-х- 0,333 0,212 12,1 2,388

х+х- 0,508 0,576 -6,8 0,606

Х+Х+ 0,159 0,212 -6,3 0,598

HpaI-ПДРФ АРОС1

Н- 0,778 0,674 10,4 3,496

Н-Н- 0,571 0,515 5,6 0.407

Н+Н- 0,413 0,318 9,5 1,256

Н+Н+ 0,016 0,167 -15,1 8,691*

Примечание: * - уровень значимости р<0,01.

Кроме того, на основе расчета тетрахорического показателя связи, была проведена оценка направленности и достоверности индивидуальной ассоциации аллельных вариантов изучаемых генов с осложненным ИМ (табл.4).

Таблица 4

Коэффициент ассоциации, критерий достоверности и уровень значимости взаимосвязи между аллельными вариантами генов АРОА1, АРОВ, АРОС1 и осложненным течением инфаркта миокарда

Аллели и генотипы Коэффициент ассоциации ИА Критерий достоверности 1 X2 Р

МэрЬПДРФ АРОА1

М- -0,121 1,959 3,78 н.д.

М-М- -0,240 2,803 7,406 <0,01

М+М- -0,087 0,992 0,977 н.д.

М+М+ 0,066 0,756 0,568 н.д.

ХЬаЬПДРФ АРОВ

X- -0,088 1,412 1,979 н.д.

Х-Х- -0,136 1,562 2,395 н.д.

х+х- 0,068 0,775 0,597 н.д.

Х+Х+ 0,069 0,781 0,607 н.д.

Нра1-ПДРФ АРОС1

н+ 0,116 1,87 3,465 н.д.

н-н- -0,057 0,642 0,411 Н.д.

н+н- -0,98 1,121 1,243 н.д.

Н+Н+ 0,259 3,052 8,687 <0,01

ХЬаЬПДРФ АРОВ не проявляет сколько-нибудь значимой ассоциативной связи с вариантным течением ИМ. Единственной тенденцией для него является относительное и недостоверное увеличение частоты генотипов Х-Х- и аллеля X-в группе НТИМ. Неожиданной находкой явилась ассоциация генотипа М-М-МврЬПДРФ АРОА1 с благоприятным течением ИМ у его носителей. У носителей же генотипа Н+Н+ НраЬПДРФ АРОС1 достоверно чаще развивались осложнения в остром инфарктном, постинфарктном периоде или на этапе реабилитации. Аллель Н- чаще встречается у мужчин из группы НТИМ, но имеющаяся разница частот не достигает статистически достоверного характера.

Резюме. Для мужской выборки жителей г.Новосибирска, исследованный ПДРФ в локусах генов АРОА1, АРОВ, АРОС1, по частотному распределению аллелей и генотипов близок к характеристикам европеоидных популяций и обладает достаточной информативностью для молекулярно-генетических семейных, популяционных и клинических исследований. Имеется тенденция к увеличению частоты среди инфарктных больных лиц, являющихся носителями аллеля Н+ и генотипа Н+Н+ НраЬПДРФ АРОС1. Ассоциацию с ИМ обнаруживают лишь аллели и генотипы МБрЬПДРФ АРОА1. Это свидетельствует о возможном вкладе в этиопатогенез атеросклероза структурно измененных вариантов гена АРОА1, маркируемых полиморфным сайтом МБрГ Однако, генотип М-М- у пациентов ассоциирован с более благоприятным течением ИМ, тогда как генотип Н+Н+ НраЬПДРФ АРОС1 ассоциирован с осложненным ИМ.

Уровень основных фракций липидов крови, атерогенные ДЛП и осложненное течение ИМ. Средние величины уровней фракций липидов плазмы крови в группах пациентов и результаты их сравнения с нормативами и для неорганизованной популяционной мужской выборки г.Новосибирска приведены в табл.5.

Группа ИМ характеризуется широким диапазоном разброса индивидуальных величин и достоверно более высокими, нежели популяционные нормативы, уровнями ОХС, ХСЛПНП, ХС ЛПОНП, ТГ и значительно сниженным уровнем ХСЛПВП. На преобладание атерогенных фракций ХС и ЛП указывает и значительное увеличение ИА, средняя величина которого составила 6,42. Следует отметить, что по критериям ВОЗ и методическим рекомендациям КНЦ МЗ РФ стабильная величина ИА превышающая 4,0 указывает на высокую степень предрасположенности индивида к развитию ранних осложненных форм атеросклероза (Превентивная кардиология, 1987). Таким образом, характеристики обследуемой выборки в данном аспекте согласуются с общепризнанной концепцией липидного дисметаболизма, наиболее характерного для пациентов, страдающих ССЗ.

Результаты сравнительного анализа групп НТИМ и ОТИМ указывают на более выраженные сдвиги в липидном обмене атерогенного характера у пациентов с отягощенным течением ИМ. Из всех показателей, достоверная разница отсутствует лишь по уровню ХСЛПВП. В целом же, основные количественные показатели липидного обмена в группе НТИМ близки к средним популяционным

Таблица 5

Средние величины основных показателей липидного спектра плазмы крови в обследованных группах пациентов

Показатель Неорганизованная популяция г.Новосибирска (мужчины) * Группа пациентов с ИМ (в целом) Группа НТИМ Группа ОТИМ

Возраст (лет) 44,4 ±0,18 (п= 460) 44,1 ±0,42 (п= 129) 45 ± 0,55 (п= 63) 43,3 ±0,62 (п= 66)

1 = 0,739 н.д. 1 = 2,044 р <0,05

ОХС (мг/дл) 223 ±2,1 (п= 460) 255 ± 5,42 (п= 129) 230 ±6,51 (п= 63) 279 ± 7,52 (п= 66)

1 = 6,539 р <0,001 1 = 4,907 р <0,001

ХСЛПВП (мг/дл) 49 ±0,6 (п= 438) 36,8 ±0,93 (п= 129) 37,8 ± 1,45 (п= 63) 35,9± 1,18 (п= 66)

1=10,036 р <0,001 1 = 1,021 н.д.

ХСЛПНП (мг/дл) 150 ±2,0 (п= 423) 182,9 ±4,84 (п= 123) 162,9 ±5,72 (п= 63) 04 ± 6,97 (п= 60)

1 = 7,257 р <0,001 1 = 4,579 р <0,001

ХСЛПОНП (мг/дл) 23 ± 0,6 (п= 445) 32,7 ± 1,44 (п— 123) 29,2 ± 1,84 (п= 63) 36,3 ±2,15 (п= 60)

1 = 7,037 р <0,001 1 = 2,517 р <0,02

ТГ (мг/дл) 118 ±3,0 (п= 460) 179 ±9,42 (п= 129) 146 + 9,21 (п= 63) 211 ± 15,3 (п= 66)

1 = 8,086 р <0,001 1 = 3,599 р <0,001

ИА 3,8 ±0,08 (п= 438) 6,42 ± 0,22 (п= 129) 5,54 ±0,28 (п= 63) 7,25 ±0,31 (п= 66)

1=13,818 р <0,001 ( = 4,082 р <0,001

АпоВ (мг/дл) 94,0 ± 1,6 (п= 115) 135 ±3,15 (п= 129) 116 ±3,34 (п= 63) 153 ±4,22 (п= 66)

1 = 11,193 р <0,001 1 = 6,835 р <0,001

Примечания: 1. * - результаты популяционных исследований (Филимонова Т.А., 1989);

2. I- критерий Стьюдента, р - уровень значимости отличий;

3. п - число обследованных лиц.

величинам для мужчин аналогичного возраста, что свидетельствует о менее выраженном дисбалансе в обмене ЛП и характерно для меньшей генетической отя-

гощенности по семейным формам ДЛП и вариабельным клиническим формам атеросклероза. Это косвенно подтверждается и достоверно более старшим возрастом на момент развития ИМ у пациентов группы НТИМ по сравнению с ОТИМ, ведь именно раннее проявление осложненных форм атеросклероза свидетельствует о значительно более высокой роли наследственных факторов в патогенезе этого мультифакториального заболевания (Дзизинский A.A., Пузырев В.П., 1977; Оганов Р.Г., 1990; Томпсон Г.Р., 1990; AssmanG., 1995).

Характер и направленность внутренних взаимоотношений липидных фракций плазмы крови у пробандов, их связь с вариантами течения ИМ были оценены при помощи корреляционного анализа. У пациентов с ИМ наблюдались типичные, разно направленные корреляционные взаимосвязи между уровнями липидов различных фракций. Так, концентрации в плазме крови ОХС, ТГ, ХСЛПНП, АпоВ положительно и значимо коррелируют между собой и величиной ИА. Уровень же ХСЛПВП находится в закономерно отрицательной связи с величиной ИА и положительной с ОХС, что отражает имеющийся в организме метаболический баланс ЛП различных классов, обеспечивающих в организме катаболизма ХС.

Показательной является высоко значимая (р<0,01) положительная корреляционная связь (Rxy=0,384-0,515) между уровнями ОХС, ХСЛПНП, АпоВ и осложненным течением ИМ. Данный факт сооответствует литературным данным о том, что именно эти фракции липидов плазмы крови, входящие в состав ЛПНП, играют ключевую роль в патогенезе атеросклероза, а их повышенное содержание является одним из ведущих ФР ССЗ. Имеющаяся отрицательная корреляция между концентрацией ХСЛПВП в плазме крови и осложненным вариантом течения ИМ не носит статистически значимого характера.

Ассоциации, прослеживающиеся при анализе средних величин липидных показателей в целом по выборке ИМ и её подгруппам, хорошо согласуются с частотой и особенностями распределения количественных липидных ФР атеросклероза (табл.6). Только 24 человека из всей выборки мужчин, перенесших трансму-ральный или крупноочаговый ИМ, имели концентрацию липидов в плазме крови, укладывающуюся в разброс региональных нормативов. В группе НТИМ их доля составила 31,8% (20 пробандов), а в группе ОТИМ - лишь 6,1% (4 человека).

Распространенность среди обследованных пациентов ГХС, ГипоАХС, Ги-перВХС и ГиперАпоВ оказалось выше, чем в популяции жителей г.Новосибирска, где их частота варьирует в пределах 0,094-0,12 (Фейзуханова Д.В., 1988; Филимонова Т.А., 1989; Гафаров В.В. и соавт., 1993; Линейцева И.С., 1993). Данные ФР атеросклероза преобладают в группе ОТИМ и значимо ассоциируют с осложненным течением ИМ у пробандов.Имевшаяся в распоряжении автора информация по результатам проведенного унифицированного обследования членов семей пробандов (Отева Э.А., 1998) и ретроспективный анализ медицинской документации их родственников, позволили при типировани ДЛИ выявить однотипный семейный характер нарушений при ГХС и ГиперВХС у 39, при ГТГ у 22, при ГипоАХС у 34 пациентов с ИМ (табл.6).

Таблица 6

Частоты и характер атерогенных гиперлипндемий в сравниваемых группах пациентов с инфарктом миокарда

ДЛП Частота X2

Группа ИМ в целом (п= 129) Группа НТИМ (п= 63) Группа ОТИМ (п= 66)

ГХС 0,411 0,206 0,606** 21,309

ГипоАХС 0,411 0,365 0,455 1,078

ГиперВХС 0,403 0,190 0,606** 23,188

ГТГ 0,333 0,222 0,439* 6,833

ГиперАпоВ 0,481 0,190 0,758** 41,659

Всего имеют ДЛП 105 (81,4%) 43 (68,2%) 62** (93,9 %) 14,031

Семейные формы ДЛП 68 (64,8 %) 18 (41,8%) 50** (80,7 %) 16,837

Примечание: * - уровень значимости р<0,01, ** - уровень значимости р<0,001.

Абсолютное преобладание этих форм ДЛП оказалось характерным для группы ОТИМ. При этом подавляющее большинство обследованных мужчин с семейными формами атерогенных ДЛП имели не только тяжелое клиническое течение ИМ и различные осложнения в реабилитационном периоде, но именно у этих пробандов, при анализе родословных, была отмечена и семейная отягощен-ность по ССЗ. Таким образом, полученные результаты соответствуют данным

о глубокой этиопатогенетической взаимосвязи первичных ДЛП с предрасположенностью к раннему проявлению вариабельных форм атеросклероза и осложненному его течению (Дзизинскиий А.А., Пузырев В.П., 1977; Перова Н.В., 1985; Оганов Р.Г., 1990; Климов А.Н., Никульчева Н.Г., 1995).

Резюме. Обследованная группа ИМ характеризуется высоким уровнем семейной отягощенности по различным формам атерогенных ДЛП и наследственной предрасположенности к раннему развитию ССЗ, что указывает на сложность патогенетического механизма дисметаболизма липидов, с вовлечением большого круга различных генетических факторов. Наличие ГХС, ГиперВХС, ГиперАпоВ и ГТГ ассоциирует с ранним возникновением и осложненным течением ИМ.

Ассоциации аллельных вариантов генов АРОА1, АРОВ, АРОС1 с уровнем основных фракций липидов крови и атерогенными ДЛП. Результаты статистической обработки экспериментальных данных с целью выявления ассоциации аллельных вариантов генов АРОА1, АРОВ, АРОС1 с уровнем основных фракций липидов плазмы крови приведены в табл.7-8.

Среди всех обследованных пациентов с ИМ наименьшая концентрация АпоВ в плазме крови зафиксирована у мужчин с генотипом М-М- MspI-ПДРФ области промотора АРОА1. При этом у них же отмечен наименьший уровень ОХС, ХСЛПНП, ХСЛПОНП и максимальная средняя величина ХСЛПВП. Про-банды же с генотипом М+М- наоборот обладали наименьшим средним уровнем ХСЛПВП. Холестериновый ИА соответствует имеющимся различиям в спектре липидов в подгруппах. Результаты дисперсионного анализа подтверждают досто верность и выраженность имеющихся различий и ассоциаций у носителей различ ных генотипов. Не удалось выявить строгой взаимосвязи аллельных вариантов гена АРОА1 с ГипоАХС на что указывает ряд авторов (Smith J.D. et al., 1992; Kamboh M.I. et al., 1996; Carmena-Ramon R.F. et al., 1998), основывающихся на результатах обследования европеоидных популяций и выборок пациентов с ИБС

При сравнении средних величин липидных показателей и по результатам однофакторного дисперсионного анализа аллельные варианты гена АРОВ, маркируемые при помощи XbaI-ПДРФ в структуре 26 экзона, не демонстрируют статистически достоверной связи с концентрацией в плазме крови ОХС, ХСЛПВП, ХСЛПНП, ХСЛПОНП,ТГ, АпоВ. Можно лишь отметить слабую тен-

Таблица 7

Средние значения уровней основных фракций липидов плазмы крови в зависимости от генотипов диаллельных рестрикционных маркеров

Генотип п ОХС ХС ЛПВП ХС лпнп ХС ЛПОНП ТГ ИА АпоВ

мг/дл мг/дл мг/дл мг/дл мг/дл мг/дл

АРОА1

М-М' 246±8,5 35,9±1,7 175+7,1 30,3+2,3 173+16,5 6,6+0,3 138±3,3

М+М1 258±5,7 36,4±0,9 186+5,1 33,7+1,5 179±9,2 6,5±0,4 131±5,0

м-м- 13 231+16,6 40,5+3,8 150+10,6 22,7±2,3 182±47 5,1 ±0,5 *112±8,9

м+м- 38 251±9,8 *34,3±1,8 182±8,3 32,5±2,9 170+15,6 7±0,46 138±5,6

М+М+ 78 261 ±6,9 37,4±1,1 188+6,5 34,2+1,8 183+11,3 6,3±0,3 137±4,1

АРОВ

Х-Х1 253±5,8 36,7+1,0 182±5,3 32,2+1,5 178±10,5 6,4±0,3 134±3,5

Х+Х' 254±6,6 37±1,1 181 ±5,9 32,4±1,7 181 dh 11,8 6,3±0,3 136±3,8

Х-Х- 35 256±9,2 36,2±1,9 187±8,2 33,5+2,6 175±14,6 6,7±0,5 132±5,6

Х+Х- 70 251±7,4 37±1,2 179±6,7 31,6±1,8 179+14 6,2+0,3 136±4,4

Х+Х+ 24 264+14,1 37,2+2,4 188+11,8 34,7±4,1 184+22,1 6,6±0,5 138±7,7

АРОС1

Н-Н1 251±5,4 36,9+0,9 181+4,7 31,5+1,5 170±9,7 6,3±0,3 133±3,2

Н+Н1 253±8,4 35,7+1,3 181+7,4 33,7+2,2 181+12,7 6,5±0,3 131+4,9

н-н- 70 257±7,1 37,8+1,3 184±6,4 31,9+1,9 177+13,7 6,4±0,3 139±3,9

н+н- 47 **243±8,1 35,5±1,5 175±6,9 30,9±2,4 160±12,9 6,3+0,3 *125±5,1

Н+Н+ 12 *292±23,6 36,3+2,5 211+25,6 **46,5±3,6 **265±26 7,1±0,4 151±12,6

Примечание: * уровень значимости р<0,05, ** - уровень значимости р<0,01, 1 - любой аллель.

денцию к ассоциации генотипа Х+Х+ с ГТГ у пациентов, которая, однако, не является статистически значимой. В противоположность этому, в литературе имеются указания на наличие выраженной ассоциативной связи аллеля Х+ этого генетического маркера с ГХС и ГТГ (Berg К., 1983, 1985, 1986; Law A. et al., 1986; Myant N.B. et al., 1989; Genest J.J. et al., 1990; Paulweber В. et al., 1990). Механизм возможного влияния при этом не ясен, поскольку нуклеотидная замена в структу

ре 26 экзона гена АРОВ, приводящая к возникновению сайта ХЬа1, не приводит к аминокислотной замене.

Таблица 8

Показатели ассоциации между аллельными вариантами генов АРОА1, АРОВ, АРОС1 и атерогенными ДЛП

Генотип ГХС ГипоАХС ГТГ

ЯА Л X2 ЯА г X2 Яа 1 X2

АРОА1

М-М- -0,071 0,799 0,636 -0,018 0,202 0,041 -0,128 1,459 2,096

М+М- 0,048 0,545 0,297 0,118 1,339 1,769 0,120 1,376 1,865

М+М+ -0,002 0,017 0,003 -0,098 1,121 1,243 -0,033 0,382 0,146

АРОВ

Х-Х- -0,049 0,556 0,308 0,057 0,653 0,425 -0,025 0,280 0,078

х+х- -0,056 0,633 0,399 -0,056 0,633 0,399 -0,077 0,877 0,765

Х+Х+ 0,127 1,456 2,085 0,006 0,064 0,004 0,127 1,452 2,073

АРОС1

Н-Н- -0,024 0,273 0,075 -0,151 1,729 2,923 -0,044 0,500 0,249

н+н- -0,215** 2,504 5,978 0,121 1,382 1,883 -0,125 1,434 2,025

Н+Н+ 0,167 1,918 3,577 0,058 0,660 0,434 0,283*** 3,352 10,336

Примечания: *-уровень значимости р<0,05, **-уровень значимости р<0,02, *-уровень значимости р<0,001; Я а - коэффициент ассоциации, I - критерий достоверности.

У пробандов с генотипом Н+Н+ НраЬПДРФ области промотора АРОС1 средние показатели ОХС, ТГ, ХСЛПОНП, АпоВ, оказались достоверно выше, чем у лиц с генотипами Н-Н- и Н+Н-. Различия уровней липидов плазмы крови у носителей различных генотипов наглядно подтверждают результаты однофак-торного дисперсионного анализа (Р= 4,857, 9,052 и 8,596 соответственно при р<0,025). Для генотипа Н+Н- присуща ассоциация с более низкими концентрациями ОХС и АпоВ в плазме крови.

В доступной литературе имеются данные об ассоциации аллельных вариантов гена АРОС1, несущих Н+ аллель, с повышенным уровнем ТГ плазмы крови и об ассоциации маркера с семейной формой ГТГ (БтЬ М. е1 а!., 1988). Авторы предлагают использовать НраЬПДРФ в качестве высокоинформативного маркера семейной предрасположенности к ИБС и ИМ. В обследованной выборке пробандов, генотип Н+Н+ также ассоциирует с уровнем ОХС, триглицеридов и се-

мейными ГТГ. Следует подчеркнуть, что это наиболее достоверная и выраженная ассоциация между аллельными вариантами генов, атерогенными ДЛП и уровнем основных липидных фракций крови, которую удалось обнаружить в группе про-бандов с ранним ИМ.

Резюме. У носителей различных аллельных вариантов генов АРОА1 и АРОС1 имеются значимые различия по уровню липидов плазмы крови, свидетельствующие о существенном вкладе этиих генов в детерминацию липидного дисметаболизма. Прослеживается четкая ассоциативная связь между уровнем ОХС, триглицеридов, ГТГ и носительством генотипа Н+Н+ по НраЬПДРФ области промотора гена АРОС1.

Перспективность использования трехлокусных генотипов для прогнозирования варианта течения инфаркта миокарда. Исходя из значимости и направленности выявленных в группе пробандов ассоциаций аллельных вариантов генов АРОА1, АРОВ, АРОС1 с уровнем липидов плазмы крови, атерогенными ДЛП и осложненным течением ИМ, были спрогнозированы теоретически "благоприятный" (М-М-/Х-Х*/Н+Н-) и "неблагоприятный" (Н+Н+/М+М*/Х+Х+) трехло-кусные генотипы. Была высказана гипотеза, что у обследованных пациентов "благоприятный" генотип должен ассоциировать, как минимум с наиболее низкими величинами концентрации ОХС, ХСЛПНП, ТГ, АпоВ в плазме крови и не-осложненным течением ИМ. В свою очередь, "неблагоприятный" трехлокусный генотип по ПДРФ генов АРОА1, АРОВ, АРОС1 должен быть характерен для крайне противоположной группы пациентов.

По заданным параметрам трехлокусных генотипов, среди обследованных мужчин перенесших ИМ были выявлены пять человек с "благоприятным" и четыре пробанда с "неблагоприятным" генотипами (табл.9).

Все мужчины с генотипом М-М-/Х-Х*/Н+Н- оказались представителями подгруппы НТИМ, у которых ИМ развился в относительно более старшем возрасте. Средние величины концентрации основных фракций липидов в плазме крови у этих пациентов практически полностью соответствуют популяционной норме (табл.5). По соотношению же ОХС, ХСЛПВП и ХСЛПНП носители этого генотипа разительно отличаются не только от группы мужчин с "неблагоприятным" генотипом, но и от группы пациентов с ИМ в целом.

Таблица 9

Средние величины основных показателей липндного спектра плазмы крови

у пациентов с теоретически "благоприятным" и "неблагоприятным" генотипами

Показатель Генотип М-М-/Х-Х*/Н+Н-(п=5) Генотип Н+Н+/М+М*/Х+Х+ (п=4)

Возраст (лет) 47,2 ± 1,7 44,8 ± 2,5

( =0,83 н.д.

ОХС (мг/дл) 210 ± 21,6 296 ± 20,8

1 = 2,809 р <0,05

ХСЛПВП (мг/дл) 43,4 ±7,0 39 ±5,74

1 = 0,468 н.д.

ХСЛПНП (мг/дл) 141,3± 18,5 184 ± 11,9

1=1,633 н.д.

ХСЛПОНП (мг/дл) 25,7 ± 3,7 58 ±3,3

1 = 5,879 р <0,02

ТГ (мг/дл) 129 ± 18,7 324 + 35,5

(=5,171 р <0,02

ИА 4,24 ±0,71 6,96 ±0,9

( = 2,411 р <0,05

АпоВ (мг/дл) 95,6 ±4,7 133 ± 13,1

1 = 2,945 р <0,05

Примечания: 1.1- критерий Стьюдента, р - уровень значимости отличий; 2. п - число выявленных пациентов.

Среди носителей "неблагоприятного" генотипа оказались лишь пробанды с осложненным течением ИМ. Абсолютно для всех них было характерно наличие ДЛП атерогенного характера со значительным увеличением уровней ОХС и ТГ. Величины ОХС, ТГ показателей превысили средние цифры по группе ОТИМ.

Анализ выборки здоровых мужчин показал, что носителем "благоприятного" генотипа является всего лишь один человек, а "неблагоприятный" не встретился ни у одного (за счет отсутствия двухлокусного генотипа Н+Н+/Х+Х+).

Резюме. Использование генетических маркеров, таких как диаллельный ПДРФ в локусах АРОА1, АРОС1, АРОВ, перспективно при специализированном

консультировании отягощенных по раннему атеросклерозу семей, при выявлении лиц из группы высокого генетического риска и при прогнозировании вариантов течения ИМ.

ВЫВОДЫ

1. Среди обследованных пациентов с трансмуральным или крупноочаговым ИМ обнаружена достоверно более высокая, нежели в контрольной выборке, частота аллеля М- и генотипа М-М- по MspI-ПДРФ области промотора АРОА1. При этом впервые показано, что генотип М-М- ассоциирован с неосложненным благоприятным течением ИМ.

2. Генотип Н+Н+ по HpaI-ПДРФ области промотора АРОС1 ассоциирован с повышенным уровнем ОХС, триглицеридов, семейной ГТГ и неблагоприятным осложненным течением ИМ. При этом в группах лиц с различными генотипами ПДРФ генов АРОА1 и АРОС1 обнаружены значимые отличия по уровню липи-дов плазмы крови, свидетельствующие о существенном вкладе этих генов в детерминацию липидного дисметаболизма.

3. Использование трехлокусных генотипов аллельных вариантов генов АРОА1, АРОВ, АРОС1, в силу их существенной информативности, перспективно при прогнозировании возможного варианта течения ИМ.

4. Диаллельный ПДРФ локусов АРОА1, АРОВ, АРОС1 в обследованной выборке по частоте аллелей, уровню гетерозиготности, показателю PIC близок к картине, характерной для большинства описанных европеоидных популяций и относится к генетическим маркерам умеренно информативным для молекулярно-генетических семейных, популяционных и клинических исследований. Частоты редких аллелей составили: 0,158 (М- для MspI-ПДРФ АРОА1), 0, 421 (Х+ для XbaI-ПДРФ АРОВ) и 0,206 (Н+ для HpaI-ПДРФ АРОС1).

5. Для обследованных пациентов с трансмуральным или крупно-очаговым ИМ характерна необычайно высокая распространенность различных типов ате-рогенных ДЛП (суммарная частота 0,814).

6. Неблагоприятное осложненное течение ИМ достоверно ассоциировано у обследованных мужчин с семейными формами ГХС, ГиперВХС, ГТГ, ГиперАпоВ и с семейной отягощенностью по сердечно-сосудистым заболеваниям.

Перечень работ, опубликованых по теме диссертации.

1. Масленников А.Б., Отева Э.А., Коваленко С.П. и др. Полиморфизм длин ре-стрикционных фрагментов ДНК содержащих ген аполипопротеина AI - вероятный маркер генетической предрасположенности к развитию атеросклероза // Тез.докл.конф. "Актуальные проблемы клинической кардиологии",- Томск, 1990.- С.245-246.

2. Масленников А.Б., Отева Э.А., Коваленко С.П. и др. Полиморфизм длин ре-стрикционных фрагментов ДНК в районе гена аполипопротеина AI // Тез. докл. II Всесоюзного съезда медицинских генетиков.- М., 1990.- С.286-287.

3. Отева Э.А., Николаева A.A., Масленников А.Б. и др. Факторы риска и некоторые клинико-биохимические показатели у мужчин, перенесших инфаркт миокарда в молодом возрасте // Тез. докл. конф. "Актуальные проблемы кардиологии Севера и Сибири",- Красноярск, 1991.- С.87-88.

4. Масленников А.Б., Леонова Т.Я., Отева Э.А. и др. Аполипопротеин В и сердечно-сосудистые заболевания // Тез. докл. IV Всесоюзн. Съезда специалистов по клинической лабораторной диагностике.- М., 1991.- С. 118.

5. Масленников А.Б., Коваленко С.П., Отева Э.а. и др. Полиморфизм длин ре-стрикционных фрагментов гена аполипопротеина A-I среди жителей г.Новосибирска//Генетика,- 1991,-№ 12,-С.2152-2156.

6. Отева Э.А., Николаева A.A., Масленников А.Б. и др. Особенности липидно-гормональных взаимосвязей в семьях пробандов с ранним развитием инфаркта миокарда//Сов. Медицина,- 1991.-№ 12.-С.6-10.

7. Коваленко С.П., Масленников А.Б., Котляров С.Э. и др. Полиморфизм генов аполипопротеинов и сердечно-сосудистые заболевания // Патофизиологический анализ факторов риска артериальной гипертензии и атеросклероза.- Новосибирск, 1992.- С.45-46.

8. Масленников А.Б., Отева Э.А., Ростовцева В.М. и др. Корреляционные отно-ношения уровня аполипопротеина В и других факторов риска при инфаркте миокарда // Роль наследственности и других ФР в развитии сердечно-сосудистой патологии. С.-Петербург, 1992.- С.44-46.

9. Мейманалиев Т.С., Отева Э.А., ..Масленников А.Б. и др. Распространенность основных факторов риска среди пробандов, перенесших инфаркт миокарда в

молодом возрасте, и их родственников (по материалам семейных регистров в Бишкеке и Новосибирске)//Тер.архив.-1993,-№ 1,- С.28-30.

10. Масленников А.Б., Леонова Т.Я., Курилович С.А. и др. Аполипопротеин В-100 и ДЛП у жителей г.Новосибирска // Актуальные вопросы патологии внутренних органов. Нучн.тр.НОТКЗМИ.- Новосибирск, 1993.-Т. 142,-С.18-21.

11. Коваленко С.П., Масленников А.Б., Отева Э.А. и др. ПДРФ гена аполипопро-теина A-I и инфаркт миокарда // Там же. - С.21-24.

12. Отева Э.А., Масленников А.Б., Николаева A.A. Ускоренное развитие атеросклероза // Врач,- 1994,- № 3,- С.50-52.

13. Воевода М.И., Бенюх Т.Л.,... Масленников А.Б. и др. Современные биохимические и молекулярно-генетические показатели в диагностике нарушений ли-пидного обмена // Тез.докл. V Российск. Съезда специалистов по лабораторной диагностике,- М., 1995.- С.54-55.

14. Масленников А.Б., Леонова Т.Я., Отева Э.А. и др. Генетические маркеры предрасположенности к развитию атеросклероза //Там же,- С. 173-174.

15. Масленников А.Б. Молекулярные технологии - новый этап в развитии лабораторной диагностики заболеваний // Тез.докл.конф. "Актуальные проблемы современной медицины".- Новосибирск, 1996.- С.411-413.

16. Николаева A.A., Отева Э.А., Масленников А.Б. и др. Основные факторы риска в семьях с положительным анамнезом по ИБС и пути подхода к семейной профилактике// Тез.докл.конф."Актуальные проблемы кардиологии",- Томск, 1997,- С.42-43.

17. Отева Э.А., Масленников А.Б., Николаева A.A. Проблемы патогенеза атеросклероза, региональные аспекты // Тер.архив.- 1997.- №1.- С.20-22.

18. Масленников А.Б., Оробей А.М. Возможности молекулярно-генетических технологий при диагностике моногенных и мультифакториальных заболеваний в отягощенных семьях // Современные диагностические технологии здравоохранению: Сб. науч. тр. / Под ред. Г.Я.Хаита.- Ставрополь, 1999.- С.303-305.