Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Взаимодействие миелопероксидазы с ключевыми опсонинами плазмы крови-фибронектином и иммуноглобулином G

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Леонова, Наталья Викторовна

Список сокращений, принятых в тексте.

1. Введение.

1.1. Актуальность проблемы.

1.2. Цель и задачи исследования.

1.3. Основные положения, выносимые на защиту.

1.4. Научная новизна.

1.5. Теоретическое и практическое значение работ.

1.6. Структура и объем диссертации.

1.7. Апробация работы.,.

2. Обзор литературы.

2.1. Нейтрофилы. Метаболический статус и биохимические особенности.

2.2. Два типа антимикробных факторов,,. .V.,

2.3. Кислород-зависимая система нейтрофила. Биологические эффекты.

2.3.1. Ог и его генератор НАДФН-оксидаза.

2.3.2. Другие активированные формы кислорода. Оценка их биоцидности.

2.4. Миелопероксидаза-Н202-галид система нейтрофила.

2.4.1. Миелопероксидаза в ряду пероксидаз. Формирование миелопероксидаза-НгОг-галид системы нейтрофила.

2.4.2. Физико-химические свойства миелопероксидазы.

2.4.3. Каталитическая активность миелопероксидазы.

2.4.4. Токсические продукты и характер деструктивных процессов при активации миелопероксидаза-НгОг-галид системы.

2.4.5. Регуляция деятельности миелопероксидазы супероксидным радикалом.

2.5. Феномен резорбтивной резистентности.

2.6. Фибронектин и иммуноглобулин G - ключевые белки системы опсонической кооперации.

-33. Экспериментальная часть

3.1. Методы очистки белков.

3.1.1. Выделение и очистка миелопероксидазы.

3.1.2. Метод очистки фибронектин и плазминогена.

3.1.3. Выделение и очистка иммуноглобулина G.

3.2. Иммунологические методы.

3.2.1. Метод радиальной иммунодиффузии.

3.2.2. Метод ракетного иммуноэлектрофореза.

3.2.3. Реакция непрямой гемагглютинации.

3.2.3.1. Адаптация метода реакции непрямой гемагглютинации для определения связывающей способности поливалентных лиганд-связавающих белков.

3.3. Аналитические методы.

3.3.1. Получение термоагрегированного иммуноглобулина G.

3.3.2. Определение концентрации белков.

3.3.3. Определение активности миелопероксидазы.

3.3.4. Электрофорез в полиакриламидном геле.

3.4. Методы приготовления аффинных сорбентов.

3.4.1. Иммобилизация желатины наBrCN-активированной агарозе.

3.4.2. Иммобилизация миелопероксидазы и иммуноглобулина G и белка А зо-лотостого стафилококка.

3.4.3. Иммобилизация L-лизина.

3.4.4. Иммобилизация фибронектина и плазминогена.

3.4.5. Иммобилизация фибронектина на желатин-агарозе.

3.4.6. Получение антисыворотки к фибронектину.

3.5. Определение параметров комплексообразования.

4. Результаты работы

4.1. Очистка белков.

4.1.1. Выделение и очистка миелопероксидазы.

-44.1.2. Получение фибронектина и плазминогена.

4.1.3. Получение иммуноглобулина G (с элементами модификации).

4.2. Получение аффинных и биоспецифических сорбентов.

4.3. Определение взаимодействия фибронектина и миелопероксидазы методом геммагглютинации.

4.4. Кинетические параметры комплексообразования миелопероксидазы с опсоническими белками.

5. Обсуждение результатов.

6. Выводы.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Взаимодействие миелопероксидазы с ключевыми опсонинами плазмы крови-фибронектином и иммуноглобулином G"

1.1. Актуальность проблемы.

Фагоцитоз, как реакция захвата и поглощения частиц клеткой является первичным способом получения пищи одноклеточными организмами. В процессе эволюции этот процесс превратился в высокоэффективный способ защиты внутренней среды организма от чужеродных макромолекул и клеток у всех видов животных.

Изучение фагоцитоза берет начало от исследований И.И.Мечникова, разработавшего в 1883г. фагоцитарную теорию иммунитета, явившуюся основой учения о клеточном иммунитете.

У млекопитающих фагоцитоз, как реакцию защиты от инфицирующих агентов, осуществляют две специализированные системы клеток - гранулоциты и макрофаги. Две трети всех гранулоцитов в крови человека составляют нейтрофилы (НФ). В зоне поражения они накапливаются ранее других типов защитных клеток. Биоцидный потенциал НФ чрезвычайно высок. Доминирующую роль в нем играют специализированные генераторы активных форм кислорода (АФК): НАДФН-оксидаза и миелопероксидаза (МПО). Кроме того, последняя может секретироваться во внеклеточное пространство вместе с рядом протеолитических ферментов, белков и пептидов специфически нацеленных на уничтожение патогена.

Для максимальной эффективности фагоцитарной реакции фагоциты кооперируют с компонентами плазмы крови, в первую очередь, с белками-опсонинами.

Среди белков-опсонинов, маркирующих патоген в качестве объекта фагоцитоза, ключевая роль принадлежит фибронектину (ФН) (в неспецифической фазе воспаления) и иммуноглобулинам (IgG, в первую очередь, при иммунном ответе). Участвуя в формировании надмолекулярной структуры иммунного комплекса, опсонины стимулируют его поглощение и ликвидацию объекта фагоцитоза лейкоцитами.

Сложная система регуляторных связей с гуморальными факторами крови и опсоническими белками является гарантом эффективности микробоцидной функции как НФ, так и других защитных клеток, участвующих в неспецифической фазе иммунного ответа.

Наряду с внутриклеточным уничтожением инфицирующих микроорганизмов, нейтрофилы способны поражать микробные клетки и в экстрацеллюлярном пространстве. Это достигается путем секреции во внеклеточную среду биоцидных факторов. Причем, они могут вторично поглощаться другими клетками, например макрофагами, и усиливать их собственный цитотоксический потенциал. Это явление известно как феномен резорбтивной резистентности фагоцитов [23]. Такие факты установлены, в частности, для лактоферрина, эластазы и миелопероксидазы. Но, если для первых двух белков существуют рецепторы на поверхности макрофагов, то таковых не имеется для МПО, а белки-переносчики не известны. Поэтому нами был предпринят поиск потенциальных белков-переносчиков фермента. Причем, мы ограничились опсонинами плазмы крови. В качестве первоочередных объектов были выбраны белки, играющие заметную роль в реализации фагоцитарной реакции: ФН и IgG.

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Леонова, Наталья Викторовна

выводы

1. Разработан комбинированный метод совместной очистки фибронекти-на и плазминогена, обеспечивающий получение наиболее стабильных препаратов гомогенного ФН.

2. Усовершенствован метод очистки гомогенных препаратов IgG, не содержащих электрофоретически нерегистрируемые примеси антииммуноглобулинов. Полученные образцы не содержат электрофоретически нерегистрируемые примеси антииммуноглобулинов.

3. Разработан метод получения иммобилизованного фибронектина на BrCN-активированной агарозе, а также метод получения иммобилизованного фибронектина на твердофазной матрице, содержащей лиганд этого белка. Метод обеспечивает единообразную ориентацию молекул иммобилизованного фибронектина.

4. Реакция непрямой геммагглютинации впервые была использована для оценки взаимодействия белков, обладающих двумя центрами связывания.

5 Ключевые опеонины плазмы крови (фибронектин и IgG) и миелоперок-сидаза образуют специфические комплексы. Взаимодействие жидкофазной МПО с иммобилизованными ФН и IgG, а также иммобилизованной МПО с жидкофазными ФН и термоагрегированным IgG (но не нативным) характеризуется следующими константами диссоциации: 2,4 и 3,4мкМ; 0,9 и 2,1мкМ, соответственно.

6. Комплексообразование МПО и ФН является экзергоническим процессом (-34,1кДж/моль). Реакция характеризуется положительным изменением энтальпии (+45,5кДж/моль), а сам процесс определяется энтропийной составляющей свободной энергии: -79,5кДж/моль. Взаимодействие ФН с термоагрегированным IgG ведет к образованию нового

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Леонова, Наталья Викторовна, Санкт-Петербург

1. Белова JT.A. Биохимия процессов воспаления и поражения сосудов. Роль нейтрофилов // Ж. Биохимия. 1987. - Т.62. - Вып.6. - С.659-668.

2. Брок Й. Получение препаратов иммуноглобулинов // Иммунологические методы / Под ред.Г.Фримеля. М.:Медицина, 1987. - С.390-413.

3. Бэм Э. Иммунодиффузия // Иммунологические методы / Под ред. Г.Фримеля. М.Медицина, 1987. - С.73-102.

4. Варфоломеев С. Д., Зайцев С.В. Кинетические методы в биохимических исследованиях. М. .МГУ, 1982. - 345с.

5. Вееке Б. Ракетный иммуноэлектрофорез // Руководство по количественному иммуноэлектрофорезу / Под ред. Н.Асельсена и др. М.Мир, 1977.-С.43-45

6. Вейсман И.Л., Худ JI.E., Вуд У.Б. Введение в иммунологию. М. Высшая, шк., 1983. - 160с.

7. Вершигора А.Е. Общая иммунология: Учебное пособие. Киев: Выща шк., 1989. - 736с.

8. Журавлев А.И. Спонтанная биохемилюминисценция животных и тканей // Биохемилюминесценция. М.: Наука, 1989. - С.3-30.

9. Зенков Н.К., Меныцикова Е.Б. Активированные кислородные метаболиты в биологических системах // Усп, соврем, биологии. 1993. - Т. 113. - Вып.З - С.286-296.

10. Зенков Н.К., Меньшикова Е.Б. Окислительный стресс при воспалении // Успехи соврем, биологии. 1997. -т.117,вып.2,- С. 155- 170.11 .Кантор Ч., Шиммел П. Биофизическая химия. Т.З. М:Мир. 1985. - 536с.

11. Каруш Ф. Сродство антител: пределы, изменчивость, роль поливалентности // Иммуноглобулины / Под ред. Г.Литмана, Р.Гуда. М.:Мир, 1981. - С. 121163.

12. Киход Дж. Структурные основы биологических свойств иммуноглобулинов // Иммуноглобулины под ред. Г.Литмана, Р.Гуда. М.:Мир, 1981. - 495с.

13. Н.Краева JI.H. Эластаза и катепсин G из нейтрофилов свиньи: выделение, очистка, физико-химические и бактерицидные свойства: Автореф. дисс. канд. Л.: ЛГУ, - 1989.

14. Крутицкая Л.Н. Аутоантитела к сывороточным белкам при иммунизации и гипериммунизации и их значение для экспериментальной и диагностической практики: Автореф. дисс. канд. С.-Пб: НИИЭМ им.Пастера - 1993.

15. Мальберг К. Реакция геммаглютинации // Иммунологические методы / Под ред. Г. Фримеля. М.: Медицина, 1987. - С.211-219.

16. Маянский А.Н., Маянский Д.Н. Очерки о нейтрофиле и макрофаге. -Новосибирск: Наука, 1989. 344с.

17. Метелица Д.Н. Активация кислорода ферментными системами. М.: Наука, 1982.- <{20е.

18. Мечников И.И. Невосприимчивость к инфекционным болезням. М.: Изд.АМН СССР, 1946. - 314с.

19. Осипов А.Н., Азизова О.А., Владимиров Ю.А. Активированные формы кислорода и их роль в организме. // Успехи биол. химии. 1990. - Т.31. -С. 180-208.

20. Русаков В.М., Скобелев Л.Н. Фракционирование белков плазмы в производстве препаратов крови. М. :Медицина, 1983. - 224с.

21. Скулачев В.П. О биохимических механизмах эволюции и роли кислорода// Биохимия. 1998. -т.63,вып.11,- С. 1570-1579.

22. Туркова Я. Аффинная хроматогрофия. М.Д980.

23. Угарова Н.Н. Стабилизация ферментов // Введение в прикладную энзимологию // Под ред. И.В.Березина, К.Мартинека. М.:МГУ,1982. -С.156-179.

24. Шафран М.Г., Лызлова С.Н. Очистка и некоторые свойства миелопероксидазы белых мышей // Вопросы мед. химии. 1975 . - № 21. -Вып.6. - С.629-633.

25. Шафран М.Г. Выделение и некоторые свойства миелопероксидазы костного мозга человека // Вопросы мед. химии. 1979. - Вып.25. - № 2. - С.149-153.

26. Янковский О.Ю., Довнар Т.Е. К механизму антимикробного действия миелопероксидазы. Адсорбция фермента на поверхности E.coli // ДАН СССР. 1978. - Т.242. - №6. - С.1445-1446.

27. Янковский О.Ю. Физико-химические и антибиотические свойства миелопероксидазы лейкоцитов коровы // Автореф. дисс. на соискание уч. степени кандидата биол. наук, 1979, JI., Изд.ЛГУ.

28. Янковский О.Ю., Довнар Т.Д., Ткаченко А.А. К механизму антимикробного действия миелопероксидазы. Роль адсорбции фермента на поверхности клетки-мишени // Ж. микробиол., эпидем., иммунологии. 1981. - № 6.1. С.58-61.

29. Янковский О.Ю. Образование возбужденных форм кислорода в ферментативных системах (миелопероксидаза) //1 Всес. Биофиз. съезд: Тез.докл. М., 1982.-С.127.

30. Янковский О.Ю. Кооперативные взаимодействия миелопероксидазы лейкоцитов и опсонинов плазмы крови в системах антимикробной и антиокси-дантной защиты//Автореф.дисс.докт. СПбГУ - 1997.

31. Янковский О.Ю., Говорова Н.Ю., Шаронов Б.П., Лызлова С.Н. Выделение и очистка миелопероксидазы из лейкоцитов периферической крови и костного мозга // Вестник ЛГУ. 1988. - Сер.З. - Вып.1. - №.3. - С.71-76.

32. Янковский О.Ю., Хилажетдинова Л.Р. Кокряков В.Н. и др. Термодинамические параметры комплексообразования фибронектина плазмы крови и миелопероксидазы // Биохимия. 1995. - Т.60. - №8. -С.1217-1220.

33. Янковский О.Ю., Яблуновская Н.А., Кокряков В.Н. и др. Образование комплекса между миелопероксидазой и опсонинами плазмы крови человека // Бюлл. эксп. биол. и мед. 1995. - Т.СХХ,№.9. - С.320-322.

34. Янковский О.Ю., Яблуновская Н.А., Кокряков В.Н. и др. Комплексообразование миелопероксидазы и фибронектина и его модуляция лигандами фибронектина // Вопросы мед. химии. 1996. - Т.42. - Вып.2.1. С.137-140.

35. Ager A., Gordon J.L. Differential effects of hydrogen peroxide on indices of en-dotelial cell function // J.Exp.Med. 1984. - V.159. - P.592-603.

36. Aruoma 0.1., Halliwell В., Gajewski E., Dizdaroglu M. Demage to the bases en DNA induced by hydrogen peroxide and ferric-ion chelates // J.Biol.Chem. 1989. -№264.-P. 20509-20512

37. Barja G. Mitochondrial free radical production and aginin mammals and birds // Ann. N.Y. Acad.Sci. -1998. V.854. - P.224-238.

38. Campbel E.J. Human leukocyte elastase, cathepsin G and lactoferrin: family of neutrophil granule glycoproteins that bind to an alveolar macrophage receptors // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1982. - V.79. - P.6941-6945.

39. Chance B. Enzyme-substrate compounds // Adv. Enzymol. -1951. V.12. - P.153-190.

40. Chibber B.A.X., Deutsch D.A., Mertz E.T. Plasminogen // Meth. Enzymol. 1974.- V.34. P.424-432.

41. Clark R.A., Leidal K.G., Pearson D.W., Na useef W.M. NADPH-oxidase of human neutrophyls. Subsellular localization and characterization of an arachidonate-activatable superoxide-generating system // J.Biol.Chem. 1987. - V.262, №9. -P.4065-4074

42. Clark R.A., Stone S., Calore J.D., Franzlau C. Myeloperoxidase-catalyzed inacti-vation of ai-protease inhibitor by human neutrophils // J. Biol. Chem. 1981. -V.256. - P.3348-3353

43. Clark R.A., Stone S., VenkatasubramanianK., SchiffinanE. Chemotactic factor inactivation by myeloperoxidase-mediated oxidation of methionine // J. Immunol. -1980. V.124. - P.2020-2026

44. Desser R.D., Himmelhach S.R., Evans W.H., Janyska M., Hage H., Shelton E. Guinea pig heterophil and eosinophil peroxidase // Arch.Biochem.Biophys. 1972.- V.148. № 2. - P. 152-465

45. Dunford П.В., Stillman T.S. On the function and mechanism action of peroxidases // Coord.Chem.Rev. -1976. V.19. - P. 187-251

46. Eaton J.W., Kolpin G.F., Swofford H.S. Chlorinated urban water: a cause of dialysis hemolytic anemia// Science. 1973. - V. 181. - P.463-464

47. Farr S.B., Tonati D., Kogoma T. Effects of oxygen stress on membrane functions in Escherichia coli: role of HPI catalase // J. Bacterid. 1988. - V.170. - P. 18371842

48. Foot Ch.S., Goyne Т.Е., Lehret R. Assessment of chlorination by human neutrophils//Nature. 1982. - V.301. -P.715-716

49. Fridovich I. Biological effects of the superoxide radical // Arch. Biophys. 1986, №247. - P.l-11

50. Furie M., Rifkin D.B. Proteolytically derived fragments of human plasma fibronec-tin and their localisation within the intact molecule // J. Biiol. Chem. 1980. -V.255. - P.3134-3140.

51. Gardner P.R., Fridovich I. Superoxide sensitivity of the Escherichia coli aconitase // J.Biol.Chem. 1991, №266. - P.19328-19333

52. Gamaley I.A.,Kljubin I.V. Roles of reactive oxygen species: signaling and regulation of cellular functions// Internal Rev. of Cytology 1999. - V.188. P.203-255

53. Grisham M.B., Jefferson M.M., Melton D.F., Thomas E.L. Chlorination of endogenous amines by isolated neutrophils. Ammonia-dependent bactericidal, cytotoxic and cytolytic activities of the chloramines // J. Biol. Chem. 1984. - V.259. -P.10404-10413.

54. Grisham M.B., Jefferson M.M., Thomas E.L. Pole of monochloramine in the oxidation of the erythrocyte hemoglobin by stimulated neutrophils // J. Biol. Chem. -1984.-V.259.-P.6757-6765.

55. Hayashi Y., Yamasake I. The oxidation-reduction potentials of Compound I / Compound II and Compound П / Ferric couples of horseradish peroxidases A2 ans С // J.Biol.Chem. 1979. - V.254, № 18. - P.9101-9106.

56. Heifets L., Imai K., Goren M.B. Expression of peroxidase dependent iodination by macrophages ingesting neutrophil debris // RES J. Reticuloendothel. Soc. - 1980. - V.26. - №4. - P.391-404

57. Hurst N.P. Molecular basis of activation and regulation of the respiratory burst // Annals Rheum. Diseases. 1987. - V.46, №1. - P.265-272.

58. Hussaini I.M., Srikumar K., Quesenberry P.J., Gonias S.L. Colony-stimulating factor-1 madulates а-2-macroglobulin receptor expression on murine bone marrow macrophages // J. Biol. Chem. -1990. V.265 . - №32. - P.19441-19446.

59. Hynes R.O., Yamada K.M. Fibronectins: Multifunctional Modular Glycoproteins // J. Cell. Biol. V.95. -P.369-377.

60. Ingham K.C., Brew S.A., Isaac B.S. Interaction of fibronectin and its gelatin-binding domains with of fluorescent-labeled chains of type I collagen // J. Biol. Chem. 1988. - V.263,№.10. - P.4624-4628.

61. Jones O.T.G., Jones S.A., Hancock J.T., Topley N. Composition and organization of the NADH-oxidase of phagocytes and other cells // Biochem. Soc. Transact. -1993. V.21. - P.343-346.

62. Kanofsky J.R., Wright J., Miles-Richardson G.E., Tauber A.I. Biochemical requirement for singlet oxygen production by purified human myeloperoxidase // J. Clin. Invest. 1984. - V.74. - P. 1489-1495.

63. Klebanoff S.J. Citocidal mechanism of Phagocitic Cells. In: Immunol' 80,4 th. Int Congr. Jmmunol., London, 1980, P.720-736.

64. KlebanoffS.J. Myeloperoxidase-halide-hydrogen peroxide antibacterial system //J.Bacteriol. 1968. - V.95. - P.2131-2138.

65. Klebanoff S J. Oxygen metabolites from phagocytes // Inflammation: Basic Principles and Clinical Correlates. Second Edition / Edt. by J.I.Gallin e.a. № 4: Raven Press Ltd., 1992. - P.541-588

66. Mc Donald J.A., Kelley D.G. Degradation of fibronectin by human leucocyte elas-tase. Release of biologically active fragments // J. Biol. Chem. 1980. - V.255. -№18.-P.8848-8858.

67. Moser T.L., Enghild J .J., Pizzo S.V., Stack M.S. The extracellular matrix protein laminin and fibronectin contain binding domains for human plasminogen and tissue plasminogen activator//J. Biol. Chem. 1993. - V.268,№25. - P. 18917-18923.

68. Paul K.G. Peroxidases // The Enzymes. 1963. - V.8. - P.227-274.

69. Piaff J., O'Brien P.J. Singlet oxygen formation by a peroxidase, H202 and halide system // Eur. J. Biochem. 1979. - V.93. - №2. - P.323-332.

70. Radi R., Beckman J.S., Bush K.M., et al. Peroxynitrite oxidation of sulfhydryls. The cytotoxic potential of superoxide and nirtic oxide // J.Biol.Chem. 1990, № 266. - P. 4244-4250.

71. Repine J.E., Johansen K.S., Berger E.M. Hydroxyl radical scavengers produce similar decreases in the chemiluminescence responses and bactericidal activities of neutrophils // Infect, and hrnnun. -1984. V.43. - P.435-437.

72. Roots R., Okada S. Estimation of life times and diffusion distances of radicals in-voled in X-ray-induced DNA strand breaks or killing of mammalian cells // Radiat. Res. 1975. - V.64. - P.306-320.

73. Rowley D.A., Halliwell B. DNA demage by superoxide-generating systems in relation to the mechanism of action of the antitumor antibiotic adriamycin // Biochem. Biophys. Acta. 1983, №761. - P.86-93.

74. Rubin R., Farber J.L. Mechanism of the killing of cultured hepatoeytes by hydrogen peroxide //Arch. Biochem. andBioophys. 1984. - V.228. - P.450-459.

75. Ruoslahti E. Fibronectin and its receptors // Ann. Rev. Biochem. 1988. - V.57. -P.375-413.

76. Ruoslahti E., Hauman G., Perchecher M., Engvall E. Fibronectin: purification, immunochemical properties and biological activities // Meth. Enzymol. 1982. - Y.82, part 1.-P.803-831.

77. Saba T.M., Jaffe E. Plasma fibronectin (opsonic glycoprotein): its syntesis by endothelial cells and role in cardiopulmonary integrity after trauma as related to reticuloendothelial function // Ann. J. Med. 1980. - V.68. P.577-594.-101

78. Salonen E.-M., Saksela O., Vartio Т., Vaheri A., Nilsen L.S., Zeuthen J. Plasminogen and tissu-type plasminogen activator bind to immobilized fibronectin // J. Biol. Chem. 1985. - V.260,№.22. -P12302-12307.

79. Salvarrey M., Rostagno A. Affinity of fibronectin for polyclonal IgG // Clin.Exp.Immunol. 1989. - V.76. - №1. - P.92-96.

80. Saran M.M.C., Bors W. Reaction of NO* with O2*. Implications for the action of endothelium-derived relaxing factor // Free Radical Res. Commun. 1989, №10. -P.221-226.

81. Sasaki M. Kininogens as inhibitor for calpains: characteristics and biological implications of the reaction // Agents and Actions. 1992. - V.38,Suppl.(pt.l). - P.267-276.

82. Sawai Т., Asada M., KatayamaK. Translocation of cytosolic NADPH oxidase component to membrane in a cell-free system // Frontiers of Reactive Oxygen Species in Biol, and Med. / Ed. by K.Asada, T.Yoshikawa. Amsterdam e.a., 1994. -P.15-46.

83. Schultz J., Kanynker K. Myeloperoxidase of the leukocyte of normal human blood. I. Content and localization // Arch.Biochem.Biophs. 1962. - V.96. - №3. - P.465-467.

84. Selvaraj R.J., Zgliczynski J.M., Paul B.B., Sbarra A J. Chlorination of reduced nicotinamide adenine dinucleotides by myeloperoxidase: a novel bactericidal mechanism // J. Reticuloendothel. Soc. 1980. - V.27. - P.31-38.

85. Shami T.A., Rothstein A., Ramjeesing M. Stabilization of biologically active proteins // ТЮТЕСН. 1989. - V.7. -186-190.- 102

86. Steinbeck M.J., Khan A.U., Karnovsky M.J. Intracellular singlet oxygen generation by phagocytosing neutrophils in response to particles coated with chemical trap // J.Biol. Chem. 1992. - V.267. - №19. - P. 13425-13433.

87. Stelmaszynska T. Formation of HCN by human phagocytosing neutrophils. 1. Chlorination of Staphylococcus epidermidis as a source of HCN // Int. J. Biochem.- 1985. V.17.-P.373-379.

88. Suzuki Y.J., Forman H.J., Sevanian A. Oxidants as stimulators of signal transduction// Free Radical Biol. 1997. - V.22. - P.269-285.

89. Suzuki K., Ota H., Sasagawas S., Fujikura T. Assay method for myeloperoxidase in human polymorphonuclers leukocytes // Anal.Biochen. 1983. - V.132 №2.- P.345-352.

90. Test S.T., Lampert M.B., Ossanna P.J., Thoene J.G., Weiss S.J. Generation of nitrogen-chlorine oxidants by human phagocytes // J.Clin.Invest. 1984. - V.74, №4. - P.1341-1349.

91. Wang A.-C. Molecular, basis for cryoprecipitation // Springer Semin. Immu-nopathol. 1988. - V.10,№.1. - P.21-33. 5. Jgnacco L.J. Regulation of lysosomal enzyme secretion: role in inflammation // Agents and Actions. - 1974. - V.4, №4. -P.241-258.

92. Weiss S.J. Tissue destruction by neutrophils // New Engl. J. Med. 1989. -V.320. - P.366-367.

93. Weiss S.J., Peppin G., Ortiz X., Ragsdale G., Test S.T. Oxidative autoactivation of latent collagenase by human neutrophils // Science. 1985. - V.227. - P.747-749.

94. Wu N.C., Schultz J. The protetic group of myeloperoxidase // FEBS Lett. -1975.-V.60.-№1.-P.141-144.

95. Yankovsky O.Yu., Zhebrum A.B., Borovkova Y.A. An affinity chromatograghy based modified and combinted method for separation of purified fibronectin // Med.Biotechnol., Immunixation and ADDS. Intern.Confer.June 12-18, Leningrad. -1991.-P.6-7.-103

96. Yokota K.-N., Yamasaki I. Analysis and computer simulation of aerobic oxidation of reduced nicotinamide adenine dinucleotide catalyzed by horseradish peroxidase // Biochemistry. 1977. - Y.16, № 9. - P. 1913-1920.

97. Zgliczynski J.M., Stelmaczynska J., Ostrowski W., Maskalski J., Snajd T. Myeloperoxidase of human leukaemic leukocytes. Oxidation of amino acide in presence of hydrogen peroxide. Eur. J. Biochem., 1968,4, № 4. P.447-450.

98. Zgliczynski J.M., Stelmaczynska T. Chlorinating afility of human phagocytosing leucocytes // Eur. J. Biochem. 1975. V.56. - P.157-162. 71.