Взаимодействие холинергических и пуринергических механизмов регуляции спонтанной квантовой секреции медиатора в нервно-мышечном соединении лягушки

Шакирзянова, Анастасия Вячеславовна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Взаимодействие холинергических и пуринергических механизмов регуляции спонтанной квантовой секреции медиатора в нервно-мышечном соединении лягушки
ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Взаимодействие холинергических и пуринергических механизмов регуляции спонтанной квантовой секреции медиатора в нервно-мышечном соединении лягушки"

На правах рукописи

Шакирзянова Анастасия Вячеславовна

ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ ХОЛИНЕРГИЧЕСКИХ И ПУРИНЕРГИЧЕСКИХ МЕХАНИЗМОВ РЕГУЛЯЦИИ СПОНТАННОЙ КВАНТОВОЙ СЕКРЕЦИИ МЕДИАТОРА В НЕРВНО-МЫШЕЧНОМ СОЕДИНЕНИИ ЛЯГУШКИ

03.00.13. - физиология

Афтореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Казань - 2005

Работа выполнена в Казанском институте биохимии и биофизики Казанского научного центра Российской Академии Наук

Научный руководитель - доктор медицинских наук,

профессор Никольский Евгений Евгеньевич,

Официальные оппоненты -доктор биологических наук,

профессор Гайнутдинов Халил Латыпович, доктор биологических наук, профессор Нигматуллина Разина Рамазановна

Ведущая организация - Санкт-Петербургская педиатрическая медицинская академия

Защита состоится "15" апреля 2005г. в "_" часов на заседании

диссертационного совета Д 212.078.02 по присуждению ученой степени кандидата биологических наук по специальности 03.00.13 - физиология при Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Казанский государственный педагогический университет» по адресу: 420021, г. Казань, ул. Межлаука, д. 1

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Казанского государственного педагогического университета по адресу: 420021, г. Казань, ул. Межлаука, д. 1

Афтореферат разослан " ... "марта 2005 г.

Ученый секретарь диссертационного совета доктор медицинских наук профессор

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность работы. Изменение интенсивности выделения медиатора из нервного окончания является эффективным способом обеспечения синаптической пластичности [Miller, 1998]. Один из конкретных механизмов, контролирующих нейросекрецию, связан с активацией пресинаптических рецепторов медиаторами и комедиаторами. В нервно-мышечном синапсе медиатор ацетилхолин (АХ), выделившийся в ходе предшествующей активности или в неквантовой форме, активирует пресинаптические холинорецепторы, а освобождающийся совместно с ним комедиатор АТФ - P2Y рецепторы нервной терминали [Giniatullin, Sokolova, 1998]. Известно, что как АХ, так и АТФ угнетают секрецию медиатора из двигательного нервного окончания [Van der Kloot, 1993,1997; Giniatullin, Sokolova, 1998; Sokolova et al., 2003]. Более того, аналогичным эффектом обладает и аденозин, который является продуктом деградации АТФ [Meriney, Grinnell, 1991; Redman, Silinsky, 1994; Sebastiao, Ribeiro, 2000; Silinsky, 2004]. Установление способности этих агонистов угнетать квантовую секрецию поднимает вопрос о том, какое влияние на выделение медиатора они оказывают при их совместном действии. Такая постановка вопроса оправдана тем, что в литературе есть указания на то, что пресинаптические пуриновые рецепторы в нервно-мышечном синапсе функционально связаны с ХР [Hamilton, Smith, 1991; Salgado et al., 2000; Oliveira et al., 2002]. Кроме того, показано, что агонисты холинорецепторов, активируя постсинаптическую мембрану, стимулируют освобождение аденозина из мышечного волокна [Pitchford et al., 1992]. Это дает основание предполагать, что пресинаптический эффект холиномиметиков может быть не прямым, а опосредованным через систему пуринорецепторов. Таким образом, решение вопроса о взаимодействии холинергической и пуринергической систем регуляции позволит, с одной стороны, ближе подойти к пониманию физиологической роли пресинаптических ауторецепторов, а с другой - более детально представить молекулярный механизм модуляции процесса выделения квантов медиатора.

Одним из подходов для решения вопроса о механизмах действия и возможной связи этих рецепторных систем является исследование влияния экзогенных холиномиметиков и пуринов на спонтанное квантовое освобождение медиатора. Спонтанная квантовая секреция АХ, отражающая работу ,нейросекреторного аппарата в покое, является достаточно удобной моделью для изучения регуляции нейросекреции, поскольку она не осложнена последствиями изменения электрогенеза нервной терминали при прохождении нервного импульса. Таким образом, исследование спонтанной квантовой секреции медиатора дает; возможность наблюдать изменение работы нейросекрёторного аппарата в присутствии ХМ и пуринов на практически интактном нервно-мышечном препарате. Это позволяет приблизиться, с одной стороны, к установлению процессов, участвующих в непосредственном осуществлении выброса квантов медиатора, а с другой - к выяснению способов регуляции функционального состояния нервного окончания.

Цель и задачи исследования. Целью данной работы явилось изучение молекулярного механизма модуляции процесса спонтанной квантовой секреции медиатора из двигательных нервных окончаний агентами, активирующими пресинаптические холино- и пуринорецепторы и исследование возможности взаимодействия этих рецепторных систем.

В соответствии с этой целью были поставлены следующие задачи:

1. Изучить зависимость степени угнетения спонтанной секреции медиатора экзогенными пуринами и аналогом ацетилхолина карбахолином от дозы агонистов.

2. Для выявления наличия синергизма или антагонизма эффектов карбахолина, АТФ и аденозина исследовать их влияние на спонтанную квантовую секрецию медиатора при их совместном действии.

3. Установить тип пресинаптических пуриновых и ацетилхолиновых рецепторов, контролирующих частоту МПКП и выяснить роль G-белков в реализации их угнетающих эффектов.

4. Используя специфические блокаторы пуриновых и холинорецепторов, проверить гипотезу о том, что снижение частоты МПКП под действием холиномиметиков является следствием выделения из мышечных волокон эндогенного аденозина.

5.Исследовать действие карбахолина и пуринов на вход Са2+ в нервное окончание и его внутриклеточный метаболизм.

Положения, выносимые на защиту.

1. Активация пресинаптических ацетилхолиновых и пуриновых рецепторов угнетает процесс спонтанной квантовой секреции медиатора из двигательных нервных окончаний. Совместное действие агонистов М2 холино- и А1 пуринорецепторов не приводит к развитию аддитивного эффекта. Предварительная активация аденозиновых рецепторов вызывает окклюзию метаболических путей, реализующих пресинаптический эффект холиномиметиков.

2. Угнетение спонтанной квантовой секреции медиатора в нервно-мышечных синапсах лягушки, реализуемое пресинаптическими А1 и М2 рецепторами, опосредовано активацией G-белков как чувствительных, так и нечувствительных к действию коклюшного токсина, не связано с изменением интенсивности входа кальция в нервное окончание, а является следствием снижения его эффективности в процессе экзоцитоза везикул.

Научная новизна. В работе впервые показана неаддитивность пресинаптического угнетающего действия агонистов пуриновых и АХ рецепторов аденозина и карбахолина на спонтанную секрецию медиатора в нервно-мышечном соединении лягушки. Выявлено, что оно не связано с действием агентов непосредственно на рецепторные структуры друг друга, как это в ряде случаев показано для ионотропных никотиновых холинорецепторов

и рецепторов АТФ [Searl, Silinsky, 1998], а также с активацией карбахолином выброса эндогенного аденозина. Показано, что карбахолин и аденозин оказывают угнетающий эффект, влияя на стадии экзоцитоза медиатора, следующие за входом Са2+ в нервную терминаль.

В экспериментах с подведением холиномиметиков непосредственно к двигательному нервному окончанию показано, что регуляция ими спонтанной квантовой секреции связана с активацией пресинаптических М2 холинорецепторов.

< Установлено, что в нервно-мышечном соединении лягушки, в отличие от синапсов теплокровных [Silinsky et al., 1989], угнетающие А1 рецепторы связаны с G-белками, как чувствительными, так и нечувствительными к токсину коклюша. Мускариновые М2 рецепторы также активируют как чувствительный, так и нечувствительный к. токсину механизм угнетения спонтанной секреции.

Научно-практическая ценность. Полученные данные позволяют более глубоко понять важную роль холинергической и пуринергической рецепторных систем в модуляции квантовой секреции медиатора из двигательного нервного окончания. Помимо выявления механизмов действия агонистов пресинаптических пуриновых и АХ рецепторов, данная работа свидетельствует об их взаимодействии в процессе регуляции спонтанной секреции. Это взаимодействие необходимо учитывать, при анализе физиологической роли ауторецепторов, поскольку в нервно-мышечном соединении обе исследуемые модуляторные системы функционируют одновременно.

Таким образом, данная работа помогает приблизиться к пониманию внутриклеточных механизмов модуляции квантовой секреции медиатора и расширить представления о функционировании периферического синапса позвоночных, где существует несколько путей регуляции секреции медиатора, что обеспечивает высокую пластичность синаптического аппарата in vivo.

Апробация работы. Основные результаты были доложены и обсуждены на Итоговых научных конференциях КИББ 'КазНЦ РАН (2003, 2004, 2005), Международной летней Школе-семинаре "Pharmacology of Synaptic Transmission in the Nervous System" (Киев, Украина, 2002), 7-й Финско-Российской Зимней Школе "Neuroscience: 3rom molecules to brain functions" (Финляндия, 2003), VII Пущинской Международной Школе-Конференции "Биология - наука 21-го века" (Пущино, Россия, 2003), 10-й Конференции Молодых Нейробиологов (Триест, Италия, 2003), Международном Симпозиуме "Neuron Differentiation and Plasticity-Regulation by Intercellular Signals" (Москва, Россия, 2003)' XI Всероссийской Конференции "Структура и Динамика Молекулярных Систем "Яльчик-2004" (Россия, 2004), 4-м FENS Форуме Европейских Нейронаук (Лиссабон, Португалия, 2004), Международной школе по Нейронаукам IBRO (Ялта, Украина, 2004),. Международной школе по Физиологии Клетки "Transport Mechanisms Across Cell Membranes: Channels and Pumps" (Санкт-Петербург, Россия, 2004).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 19 печатных работ, в том числе 5 статей в российских и зарубежных изданиях.

Структура и объем диссертации. Диссертация объемом 141 страница состоит из введения, обзора литературы, описания методики исследования, результатов исследования и их обсуждения, заключения, выводов и указателя цитируемой литературы. Список цитируемой литературы включает 351 источник, из них 344 зарубежных автора. Диссертация иллюстрирована 26 рисунками.

ОБЪЕКТ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Исследования проводили на портняжных мышцах лягушек Rana ridibunda в осенне-зимний период. Изолированную мышцу помещали в ванночку из органического стекла с рабочим объемом 3 мл и фиксировали на подложке из смолы Sylgard. В течение эксперимента через ванночку с находящимся в ней нервно-мышечным препаратом непрерывно перфузировали раствор Рингера для холоднокровных животных следующего состава (в ммоль/л): - 113,0; КС1 - 2,5; СаС12 - 1,8; NaHCOз - 3,0; рН раствора поддерживали на уровне 7,27,4. Эксперименты проводили при комнатной температуре (20±2°С).

Фармакологические агенты подавались к мышце либо с перфузионным раствором со скоростью 3 мл/мин, либо непосредственно к синаптической области с помощью стеклянной микропипетки с диаметром кончика 50-80 мкм. В последнем случае эффект исследуемых агентов развивался и стабилизировался гораздо быстрее, чем при подаче их с перфузионным раствором. Это позволяло апплицировать вещества в течение 10 мин, вместо обычных 30-40 мин. "Отмывка" препарата также происходила гораздо быстрее, чем в обычных условиях. При локальной аппликации активаторов секреции (КС1, иономицина или сахарозы) время их подачи составляло 1-2 мин. В экспериментах с аппликацией раствора с повышенным содержанием КС1 (20 ммоль/л), изоосмотичность раствора поддерживали соответствующим изменением концентрации

Внутриклеточное отведение электрических потенциалов от мышечных волокон осуществляли с помощью стеклянных микроэлектродов с сопротивлением 2-8 МП, заполненных 2,5 М раствором КС1. Критерием нахождения микроэлектрода в синаптической зоне являлось наличие миниатюрных потенциалов концевой пластинки (МПКП). Регистрацию и обработку МПКП осуществляли с помощью оригинальной программы, которая позволяла оценивать параметры МПКП, а также мембранный потенциал покоя (МПП) мышечного волокна. Об интенсивности спонтанной квантовой секреции судили по средней частоте МПКП, которую оценивали для каждых 100 или 50 сигналов (в зависимости от исходной частоты МПКП). При анализе частоты МПКП особое внимание уделяли соотношению амплитуды измеряемых сигналов и уровня шума. Критерием хорошего качества набора сигналов являлся нормальный характер распределения амплитуд МПКП. Во всех случаях

при дальнейшей обработке производился контроль на гомогенность популяции МПКП. С этой целью в каждом файле, содержащем 50-100 МПКП, проводился индивидуальный анализ 'Каждого сигнала, и производился пересчет средней частоты МПКП. Окончательный анализ параметров МПКП производили с помощью компьютерной программы Origin (версия 4.0). Для статистической обработки экспериментальных данных использовали параметрический t-критерий Стьюдента (t-тест), а также непараметрический тест Манна-Уитни, которые позволяют определить достоверность разности средних значений двух связанных или несвязанных совокупностей. Различие между двумя совокупностями считали достоверным, если Р<0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Угнетающее действие аденозина, АТФ и КХ на спонтанную квантовую

секрецию медиатора

Аденозин (АДЕ) оказывал доза-зависимое угнетающее действие на спонтанную квантовую секрецию медиатора. Концентрация МО"4 моль/л являлась насыщающей и использовалась для дальнейших экспериментов. Снижение частоты МПКП при действии 1-Ю"4 моль/л АДЕ составляло в среднем 62,5± 1,5% (п=30, Р<0,05). При локальной аппликации АДЕ (5-10"4 моль/л) к синаптической области снижение частоты МПКП составило 59,1±4,3%(п=4,Р<0,05).

АТФ в насыщающей концентрации 1-10"! моль/л [Giniatullin, Sokolova, 1998] снижала частоту МПКП на 52,1±3,2% (п=8, Р<0,05). Оба пурина не оказывали постсинаптического действия,

Карбахолин (КХ) оказывал доза-зависимое угнетающее действие как на частоту, так и на амплитуду МПКП. Для дальнейших экспериментов при подаче в ванночку нами использовалась концентрация КХ моль/л, при

действии которой частота МПКП снижалась достаточно выраженно, а соотношение сигнал/шум позволяло регистрировать МПКП без потерь их низкоамплитудной фракции. Угнетающий эффект на частоту МПКП при действии КХ в этой концентрации составлял 35,1±3,1 %, на амплитуду МПКП -47,8±7,2%. Деполяризация мембраны мышечного волокна составила 5,1±0,4 мВ (п=25, Р<0,05).

При локальной аппликации МО'5 моль/л КХ вызывал деполяризацию постсинаптической мембраны на 7,2±0,9 мВ, снижение частоты МПКП в среднем на 47,8±1,7%, а амплитуды МПКП - на 58,2±2,4% (п=7, Р<0,05).

Спонтанная секреция медиатора при совместном действии пуринов и

карбахолина

Поскольку пурины и КХ обладают однонаправленным пресинаптическим угнетающим действием на спонтанную секрецию, было важно определить, являются ли их эффекты аддитивными.

КХ подавали в ванночку на фоне развившегося действия АДЕ, когда частота МПКП достигала стабильного уровня. В этих условиях КХ не оказывал пресинаптического эффекта. Так, частота МПКП к ЗО-й мин действия КХ на фоне АДЕ составила 106,5±6,4% (п=6, Р<0,05) от ее исходных значений (рис. 1, А). То же наблюдалось при локальной аппликации КХ к синаптической области в присутствии АДЕ.

В экспериментах с обратной последовательностью подачи веществ, когда АДЕ вводился на фоне развившегося действия КХ эффект АДЕ составил 45,2±6,5% (п=6, Р<0,05), что достоверно меньше, чем в контроле (62,5± 1,5%, Р<0,05). То есть, общее снижение частоты МПКП при действии обоих агентов соответствовало эффекту одного АДЕ (рис. 1, Б). Таким образом, действие КХ и АДЕ было неаддитивно, что позволяет говорить о наличии взаимодействия механизмов, ответственных за контроль спонтанной секреции активированными холинорецепторами (ХР) и Р1 АДЕ рецепторами.

Рис. 1 Совместный эффект АДЕ и КХна частоту МПКП. Динамика частоты МПКП при действии КХ (5-106 моль/л) на фоне предварительногоугнетения секреции АДЕ(1-10-4 моль/л; А) и наоборот (Б).

При подаче АТФ (1-10-4 моль/л) на фоне предварительного угнетения частоты МПКП АДЕ (1-10-4 моль/л), наблюдалось дальнейшее ее снижение, составившее 48,8±1,6% (п=5, Р<0,05), то есть, пресинаптические эффекты АДЕ и АТФ на спонтанную секрецию были аддитивны, в отличие от АДЕ и КХ. Этот результат подтверждает выводы о том, АТФ и АДЕ в нервно-мышечном синапсе имеют различные механизмы угнетения секреции АХ [GmiatuЦm,

Sokolova, 1998; Sokolova et al., 2003] и говорит о том, что механизм, ответственный за снижение спонтанной секреции не "насыщен" АДЕ и способен реагировать на другие воздействия. То есть, КХ на фоне действия АДЕ действительно утрачивает способность угнетать интенсивность спонтанной квантовой секреции АХ.

При локальной аппликации КХ в присутствии АТФ (1-10-4 моль/л) в перфузионном растворе частота МПКП снижалась до 57,9+3,5% от ее исходных значений (п=3, Р<0,05), что указывает на то, что в нервно-мышечном соединении лягушки угнетение спонтанной секреции P2Y и ХР осуществляется по различным механизмам.

Исследование участия пресинаптических никотиновых и мускариновых рецепторов в действии карбахолина на спонтанную секрецию медиатора

Несмотря на длительное изучение модуляции квантовой, и в частности, спонтанной секреции холиномиметиками (ХМ), до сих пор не было однозначного ответа на вопрос о том, какие ХР за нее отвечают. В литературе имеются многочисленные противоречивые сведения об участии в этом процессе как никотиновых, так и мускариновых рецепторов [Duncan, Publicover, 1979; Arenson, 1989; Nikolsky et al., 1991; Van der Kloot et al., 1997].

Ранее в нашей лаборатории было обнаружено устранение угнетающего действия КХ на квантовый состав потенциалов концевой пластинки d-Тубокурарином (d-TC) [Никольский, Гиниатуллин, 1979; Nikolsky et al., 2004], однако в наших экспериментах эффект локально апплицированного КХ на частоту МПКП не изменялся в присутствии 3,5-5-10-7 моль/л d-TC.B этих условиях КХ снижал частоту МПКП до 47,9+5,3% от контрольного уровня (п=5,Р<0,05;рис.2,А).

При аппликации КХ на фоне неселективного мускаринового антагониста атропина (1-10-6 моль/л) угнетающего пресинаптического эффекта ХМ не наблюдалось. Частота МПКП при аппликации КХ на фоне атропина составила 96,4+5,2% от контрольных значений (п=4, Р>0,05; рис. 2, Б).

Ранее было показано, что угнетающий эффект мускарина в нервно-мышечном синапсе опосредуется активацией М2 рецепторов [Slutsky et al., 1999, 2001, 2002]. В наших экспериментах при аппликации КХ на фоне селективного М2 антагониста AFDX-116 (1-10-5 моль/л) снижения частоты МПКП также не происходило (99,5+1,6% от контроля; п=4, Р>0,05; рис. 2, Б).

Агонист М2 рецепторов оксотреморин-М (Оксо-М; 1-Ю'5 моль/л) [Caulfield, 1993] при локальной аппликации также снижал частоту МПКП, на 53,9+6,9% (п=6, Р<0,05) и этот эффект устранялся атропином.

Таким образом, полученные данные свидетельствуют о том, что угнетающее действие ХМ на спонтанную квантовую секрецию медиатора в нервно-мышечном синапсе лягушки обусловлено активацией мускариновых М2 рецепторов двигательного нервного окончания.

Рис. 2 Действие КХна спонтанную квантовую секрецию при блокировании холинорецепторов.

А - Эффект КХ (1-10-5 моль/л) на частоту МПКП при локальной аппликации в

контроле и в присутствии d-тубокурарина в среде. Б - Эффект КХ (1-10-5 моль/л) на частоту МПКП при локальной аппликации в контроле и в присутствии в среде атропина и AFDX-116.

Эффект никотина и оксотреморина-М на частоту МПКП на фоне действия аденозина

Поскольку КХ является агонистом как никотиновых, так и мускариновых ХР, нам представлялось важным ответить на вопрос, действительно ли неаддитивность эффектов АДЕ и КХ на спонтанную секрецию АХ связана с активацией мускариновых ХР?

Никотин (1-10-5 моль/л) при локальной аппликации на фоне развившегося эффекта АДЕ (1-10-4 моль/л) снижал частоту МПКП на 61,7±3,7% (п=4, Р<0,05), то есть, также, так и в отсутствии АДЕ (66,3±5,3%; п=6, Р<0,05)

Оксо-М (1-10-5 моль/л) не оказывал своего эффекта на частоту МПКП в присутствии АДЕ в среде (100,4±3,5% от исходных значений; п=4, Р<0,05).

Эти данные свидетельствуют о том, что в нервно-мышечном соединении лягушки неаддитивность действия АДЕ и КХ на спонтанную секрецию медиатора связана со взаимодействием внутриклеточных угнетающих механизмов, активированных А1 и М2 рецепторами нервного окончания.

Исследование взаимодействия холинергических и аденозиновых рецепторов в процессе угнетения спонтанной квантовой секреции

Известно, что пуриновые и АХ рецепторы в нервно-мышечном соединении способны взаимодействовать друг с другом [Searl, Silinsky, 1998; Salgado et al., 2000; Ribeiro et al., 2000; Oliveira et al., 2002]. В частности, показано, что агонисты одних рецепторов могут активировать другие, и наоборот, антагонисты одних препятствуют активации других рецепторов. Кроме того, обнаружено, что КХ может усиливать выброс эндогенного АДЕ из мышечного волокна [Pitchford et al., 1992], и, таким образом, он может опосредованно влиять на пресинаптичские Р1 рецепторы.

В наших экспериментах селективный антагонист угнетающих А1 рецепторов [Ribeiro et al., 1996; Silinsky, 1980] DPCPX в эффективной концентрации 1-Ю'6 моль/л не оказывал влияния на пресинаптический эффект КХ. Частота МПКП при локальной аппликации КХ на фоне DPCPX снижалась до 46,2±5,3% от контрольных значений (п=4, Р<0,05; Рис. 3, А). Для того, чтобы исключить вероятность связи действия КХ с какими-либо другими Р1 рецепторами, его апплицировали на фоне полного их блокирования неселективным антагонистом 8-Sulfophenyltheophylline (SPT). Эффект КХ при этом также полностью сохранялся (рис. 3, А).

Рис. 3 Действие КХ и АДЕ на спонтанную секрецию медиатора при блокировании Р1 и холинорецепторов

А - Частота МПКП при локальной аппликации КХ (1-Ю6 моль/л) в

присутствии антагонистов АДЕрецепторов Б - Частота МПКП под действием АДЕ (1-10-4 моль/л) в присутствии антагонистовхолинорецепторов в среде

Ни селективный М2 антагонист AFDX-116 (МО"5 моль/л), ни неселективный М-блокатор атропин (МО'6 моль/л) не влияли на эффект АДЕ на спонтанную секрецию. Блокатор никотиновых ХР d-TC (5-10-7 моль/л) также не устранял его (рис.3, Б).

В целом, эти данные свидетельствуют, во-первых, об отсутствии у КХ способности усиливать выброс в синаптическое пространство АДЕ в нервно-мышечном соединении лягушки, так как при этом наблюдалось бы снижение или устранение угнетающего эффекта КХ в присутствии Р1 блокаторов, а во-вторых, об отсутствии влияния АДЕ и КХ на пресинаптические рецепторы друг друга.

Это дает основание предполагать, что основным механизмом взаимодействия Р1 рецепторов и ХР в нервно-мышечном синапсе лягушки является влияние на общий внутриклеточный эффектор.

Изучение влияния ингибирования пресинаптических G-белков на

угнетающий эффект карбахолина и пуринов

Известно, что М2 рецепторы в ряде объектов связаны с Gi/Go-белками [Caulfeld, 1993; Felder, 1995; Caulfield, Birdsall, 1998], чувствительными к коклюшному токсину (pertussis toxin, РТх). Модуляция секреции PI [Silinsky et al, 1989; Hamilton, Smith, 1991; Schramm, Dudel, 2001] и P2Y [Ralevic, Bumstock, 1998; Filippov et al., 1998] рецепторами также связана с активацией РТх-чувствительных механизмов. Однако, однозначных данных по этому поводу для нервной терминали холоднокровных все еще не получено.

Для изучения особенностей функционирования Р1 и М2 рецепторов нервного окончания лягушки мы проводили эксперименты на препаратах, обработанных РТх. Для этого мышцы выдерживались в растворе, содержащем 1 мкг/мл РТх, 18-20 ч. при комнатной температуре (20-22°С), после чего "отмывались" в нормальном растворе.

КХ при локальной аппликации на препаратах, обработанных РТх, снижал частоту МПКП на 19,6±4,7% (п=6, Р<0,05), что было достоверно меньше, чем в контроле (47,1±2,2%).

Апплицированный локально АДЕ на препаратах, обработанных РТх, снижал частоту МПКП в среднем на 45,2±3,3% (п=4, Р<0,05), что также было достоверно меньше его действия в контроле (59,1±4,3%; п=4, Р<0,05).

Частичное снятие эффекта АДЕ и КХ на частоту МПКП после обработки РТх не являлось следствием недостаточного ингибирования Gi/Go белков, так как АТФ (1-10-4 моль/л), действие которой связано с РТх-чувствительными G-белками [Ralevic, Burnstock, 1998] не вызывала угнетения вызванной секреции на препаратах, инкубированных с РТх в тех же условиях.

Полученные данные дают основание считать, что в нервно-мышечном соединении лягушки модуляция спонтанной секреции М2 и А1 рецепторами связана с активацией как РТх-чувствительных, так и РТх-нечувствительных механизмов угнетения.

Исследование эффектов аденозина и карбахолина при увеличении

концентрации ионов кальция в нервной терминали

Известно, что сопряженные с метаботропными рецепторами G-белки могут модулировать работу Са2+ каналов нервного окончания [Catterell, 2000; Zamponi, 2001]. Таким образом, А1 и М2 рецепторы могут быть способны влиять на вход Са2+ через потенциалозависимые кальциевые каналы, как это показано для двигательного нервного окончания теплокровных [Hamilton, Smith, 1991]. АДЕ и КХ при этом могут модулировать спонтанную квантовую секрецию медиатора посредством связи их рецепторов с низкопороговыми Са2+ каналами, способными открываться при потенциале, близком к потенциалу покоя [Losavio, Muchnik, 1997; De Lorenzo et al., 2004; Zamponi, 2001], и приводить к уменьшению входа Са2+ в нервную терминалы С другой стороны, активированные А1 и М2 рецепторы могут, минуя Са2+ каналы, напрямую модулировать аппарат экзоцитоза везикул [Miller, 1998].

Для выявления механизмов действия АДЕ и КХ мы исследовали их эффект на увеличение спонтанной квантовой секреции медиатора, вызванное локальной аппликацией КС1 (20 ммоль/л), иономицина (5-10-6 моль/л) и сахарозы (100 ммоль/л). Эти вещества разными способами повышают концентрацию Са2+ в нервном окончании, позволяя разносторонне изучить механизмы функционирования и модуляции секреторного аппарата. Локальная аппликация этих растворов приводила к резкому повышению частоты МПКП, которая быстро выходила на стабильный уровень. После прекращения аппликации, в течение 10-20 мин происходило полное восстановление исходных параметров секреции. Повторная аппликация активаторов секреции (Тест 2) вызывала такой же рост частоты МПКП, какой наблюдался при первой подаче (Тест 1), что позволило на одном и том же синапсе сравнить степень повышения частоты МПКП в контроле и на фоне действия АДЕ и КХ (рис. 4, А).

Ионы К+ вызывают деполяризацию нервного окончания, активацию потенциалзависимых кальциевых каналов и вход Са2+ в терминаль. В этих экспериментах прирост секреции, вызванный КС1 в Тесте 2, в присутствии АДЕ в растворе был на 67,0±3,2% меньше, чем в Тесте 1 (п=7, Р<0,05). Частота МПКП в Тесте 2 при действии КХ также была на 28,3±3,7% (п=6, Р<0,05) меньше, чем в Тесте 1 (рис. 4, Б). Это говорит о том, что действие этих агентов на рост частоты МПКП под влиянием КС1 не связано с влиянием на вход Са2+ через потенциалозависимые Са2+ каналы, а угнетающий эффект на спонтанную секрецию, в данных условиях является следствием изменения его внутриклеточного метаболизма.

Физиологическая секреция медиатора вызывается не только входом Са2+ через кальциевые каналы, но и его поступлением из других источников [Silinsky, 1984]. Поэтому для исследования того, способны ли АДЕ и КХ изменять содержание Са2+ в цитоплазме, или их эффект связан с активируемыми им внутриклеточными процессами, мы проводили эксперименты с использованием Са2+ ионофора иономицина [Beeler et al., 1979],

чтобы ввести Са2+ в цитоплазму нервного окончания альтернативным способом, минуя деполяризацию и активацию Са2+-каналов.

В наших экспериментах АДЕ в Тесте 2 на 37,9±7,0% угнетал секреторный залп, вызванный иономицином (п=4, Р<0,05). Частота МПКП при аппликации иономицина в присутствии КХ также возрастала на 23,5±5,2% меньше, чем при первой, контрольной аппликации ионофора (п=3, Р<0,05; рис. 4, Б). То есть, в нервно-мышечном синапсе лягушки угнетающий эффект как АДЕ, так и КХ не связан как с влиянием на пресинаптические Са2+ каналы, так и с уменьшением содержания внутриклеточного Са2+.

Таким образом, полученные в этих сериях экспериментов данные свидетельствуют о том, что угнетение АДЕ и КХ спонтанной квантовой секреции АХ в нервно-мышечном синапсе лягушки связано с модификацией этапа экзоцитоза везикул, следующего за появлением Са2+ в двигательной нервной терминали.

В нервно-мышечном соединении спонтанная секреция медиатора также может быть увеличена повышением осмотичности окружающего раствора [Kashani et al., 2001]. Показано, что этот эффект не зависит от внеклеточного Са2+, то есть, увеличение секреции происходит за счет его освобождения из внутриклеточных запасов [Fatt, Katz, 1952; Shimony et al., 1977; Losavio, Mucfanik, 1997; Mochida et al., 1998; Kashani et al., 2001]. Кроме того, гипертонический раствор сахарозы повышает фракцию механизма "kiss and run" в экзоцитозе в синапсах гиппокампа [Stevens, Williams, 2000]. Возможно, что в нервно-мышечном соединении он также усиливает экзоцитоз путем воздействия на пул синаптических везикул, немедленно готовый к высвобождению (readily releasablepool, RRP), то есть, на праймированные синаптические везикулы

АДЕ подавлял увеличение спонтанной секреции АХ, вызванное раствором сахарозы, на 66,5±3,4% (п=5, Р<0,05). Аппликация сахарозы в присутствии КХ также вызывала меньшее увеличение частоты МПКП по сравнению с контрольной аппликацией, на 38,5±6,8% (п=4, Р<0,05; рис. 4, Б). Этот результат также указывает на то, что действие АДЕ и КХ не связано с изменением содержания внутриклеточного Са2+ в нервном окончании.

Поскольку сахароза активирует спонтанную секрецию АХ за счет влияния на RRP [Stevens, Sullivan, 1998; Huang et al., 2002], угнетение АДЕ и КХ секреции, вызванное ее аппликацией предполагает, что оба эти агента нарушают секрецию праймированных везикул. То есть, они влияют на заключительную стадию секреции медиатора, уменьшая чувствительность аппарата экзоцитоза к цитоплазматическому Са2+ и снижая, таким образом, количество квантов АХ, доступных для освобождения. Это может происходить, например, за счет нарушения связи белков экзоцитоза (SNARE комплекса) с Са2+ каналом, а также за счет нарушения чувствительности Са2+-сенсоров SNARE комплекса, в результате чего эффективность Са2+ в процессе секреции резко снижается.

Рис. 4 Действие АДЕ и КХна спонтанную секрецию при увеличении уровня внутриклеточного Са2+.

А - Динамика частоты МПКП в контрольном эксперименте с локальной аппликацией КС1 (20ммоль/л).

Б - Средние значения соотношения Теста 2 к Тесту 1 при локальной аппликации КС1 (20 ммоль/л), иономицина (5-106 моль/л) и сахарозы (100 ммоль/л) в контроле, и под действием АДЕ и КХ.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Данная работа посвящена изучению регуляции спонтанной квантовой секреции медиатора холинергической и пуринергической рецепторными системами, а также их взаимодействию в нервно-мышечном соединении лягушки. В ходе проведенных исследований было показано, что

холиномиметик карбахолин и пуриновый агонист аденозин, активируя пресинаптические М2 холино- и А1 пуринорецепторы, оказывают неаддитивное угнетающее действие на спонтанную квантовую секрецию медиатора. Угнетение секреции аденозином и АТФ, а также АТФ и карбахолином было аддитивно, что говорит об отличии внутриклеточных механизмов угнетения секреции при активации пресинаптичёских P2Y рецепторов от Р1 и холинорецепторов в нервно-мышечном синапсе лягушки.

Результаты работы позволяют заключить, что М2 и А1 рецепторы не образуют функционального комплекса на пресинаптической мембране, не имеют сайтов связывания для "противоположных" агонистов, и сопряжены с G-белками, как чувствительными, так и нечувствительными к коклюшному токсину. Механизмы регуляции спонтанной секреции активированными М2 и А1 рецепторами не вовлекают изменения интенсивности входа Са2+ в'нервную терминаль и конвергируют к конечным стадиям процесса секреции медиатора, ослабляя эффективность внутриклеточного Са2+ при инициации экзоцитоза везикул.

ВЫВОДЫ

1.В нервно-мышечных синапсах лягушки агонисты пуриновых рецепторов аденозин и АТФ, активируя пресинаптические пуриновые рецепторы, снижают интенсивность спонтанной квантовой секреции медиатора.

2. Агонист АХ рецепторов карбахолин угнетает спонтанную секрецию квантов медиатора, активируя пресинаптические мускариновые ХР. Снижение частоты МПКП в присутствии карбахрлина не опосредовано выбросом аденозина из мышечного волокна в ответ на активацию постсинаптической мембраны.

3. Действие карбахолина и аденозина на спонтанную секрецию неаддитивно, но величина угнетения частоты МПКП зависит от последовательности подачи агонистов: после развития пресинаптического эффекта аденозина карбахолин не проявлял активности, в то же время аденозин на фоне развившегося действия карбахолина снижал частоту МПКП, но этот эффект был достоверно меньше.

4. Действие аденозина и АТФ, а также карбахолина и АТФ на частоту МПКП аддитивно, что свидетельствует об активации различных механизмов угнетения спонтанной секреции.

5.М2 и А1 рецепторы не образуют функционального комплекса на пресинаптической мембране, поскольку антагонисты А1 рецепторов не предотвращают развитие пресинаптичёских эффектов карбахолина, а антагонисты холинорецепторов не влияют на эффект аденозина.

6. Блокирование G-белков коклюшным токсином снижает пресинаптический эффект агонистов АХ и пуриновых рецепторов нервного окончания, но не устраняет его.

7.Аденозин и карбахолин оказывают угнетающее действие на увеличение частоты МПКП, вызванное как усилением входа Са2+ в нервную терминалу так и путем его извлечения из внутриклеточных депо.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1.Grishin S., Shakirzyanova A., Giniatullin A., Afzalov R., Giniatullin R. Mechanisms of ATP action on motor nerve terminals at the frog neuromuscular junction // Eur. Journal ofNeuroscience, 2005, (в печати).

2.Шакирзянова А.В., Никольский Е.Е., Гиниатуллин Р.А. Исследование действия карбахолина и аденозина на секрецию медиатора, активированную хлоридом калия, иономицином и сахарозой // Бюлл. Экспер. Биол. Мед., 2005, Т.139, №2, с.160-163.

3.Шакирзянова А.В., Бухараева ЭА., Никольский Е.Е., Скоринкин А.И., Гиниатуллин Р. А. Влияние блокирования G-белков на действие аденозина и карбахолина на спонтанную секрецию медиатора в нервно-мышечном соединении лягушки // XI Всероссийская конференция "Структура и динамика молекулярных систем": Сборник статей, 2004, вып. XI, ч. И, с. 199-202.

4.Sokolova E., Grishin S., Shakirzyanova A., Talantova M., Giniatullin R. Different receptors and different transduction mechanisms for ATP and adenosine at the frog motor nerve ending // Eur. Journal ofNeuroscience-, 2003, Vol.18, pp. 12541264.

5.Shakirzyanova A.V. Giniatullin RA Interaction between cholinergic and purinergic control of transmitter release at the neuromuscular junction // Neurophysiology, 2002, V.34 (2/3), p.237.

6.Шакирзянова А.В., Никольский Е.Е., Гиниатуллин Р.А. Взаимодействие холинергической и пуринергической модуляции секреции медиатора в нервно-мышечном синапсе лягушки // Тезисы VI Всероссийского Симпозиума и школы-семинара молодых ученых и учителей "Растущий организм: адаптация к физической и умственной нагрузке", Казань, 2002, с.177-178.

7.Шакирзянова А.В., Никольский Е.Е., Гиниатуллин Р.А. Взаимодействие холинергической и пуринергической модулирующих систем в процессе секреции медиатора в нервно-мышечном синапсе // Тезисы III Съезда Всероссийского Общества Биохимиков, Санкт-Петербург, 2002, с. 383-384.

8.Шакирзянова А.В., Никольский Е.Е., Гиниатуллин Р.А. Связано ли действие карбахолина на спонтанную секрецию квантов из двигательных нервных окончаний с активацией пуриновых рецепторов эндогенным аденозином? // Вестник Российского Государственного Медицинского Университета, Москва, 2003, №2 (28), с. 220.

9.Шакирзянова А.В., Никольский Е.Е., Гиниатуллин Р.А. Исследование возможности влияния карбахолина на освобождение эндогенного аденозина в нервно-мышечном соединении лягушки // Тезисы VII Школы-

Конференции Молодых ученых "Биология-наука 21-го века", 14-18 апреля 2003, Пущино, с.102.

10.Шакирзянова А.В. Исследование механизмов угнетающего действия карбахолина на спонтанную секрецию в периферическом синапсе // Материалы международных чтений, посвященных 100-летию со дня рождения чл.-корр. АН СССР ЭА Асратяна, 2003, Москва, с.238-240.

ll.Sbakirzyanova A.V. Crosstalk between cholinergic and purinergic control of ACh release from the motor nerve ending // Abstracts of 10th Young Neuroscientists Meeting, Trieste, Italy, 2003, p. 39.

12.Shakirzyanova A., Nikolsky E., Giniatullin R. Converging action of cholinergic and purinergic agonists on transmitter release from motor nerve ending // Abstracts of the International Symposium "Neuron Differentiation and Plasticity-Regulation by Intercellular Signals", 6-9 July, 2003, Moscow, p. 70.

13.Галкин А.В., Омельяненко А.С., Шакирзянова А.В., Мухамедьяров М.А., Галеева Л.Х., Семенова Л.В. Два различных механизма регулирования аденозином мионевральной передачи // Тезисы VIII Международной Школы-Конференции "Биология-Наука XXI-го века", 17-21 мая 2004, Пущино, с. 105.

14.Shakirzyanova A.V., Nikolsky E.E., Bukharaeva E.A., Giniatullin R.A. Comparison of the presynaptic action of cholinergic and purinergic agonists on transmitter release triggered by potassium ions, ionomycin or sucrose // Abstracts of the International Symposium "Biological Motility", 23 May-1 June, 2004, Pushchino, p. 63-64.

15.Shakirzyanova A., Bukharaeva E., Nikolsky E., Giniatullin R. Negative cross-talk between presynaptic adenosine and acetylcholine but not between adenosine and ATP receptors. FENS Abstr., 2004, Lisbon, Portugal, vol.2, Al66.5.

16.Шакирзянова А., Бухараева Э., Никольский Е., Гиниатуллин Р. Действие аденозина и карбахолина на спонтанную квантовую секрецию ацетилхолина при повышении внутриклеточного кальция // Тезисы XIX Съезда Физиологов России, Российский Физиологический журнал им. И.М. Сеченова, 19-24 Сентября, 2004, Екатеринбург, Т. 90, № 8, С. 288.

17.Shakirzyanova A.V. Crosstalk between cholinergic and purinergic control of ACh release from the motor nerve endings // Abstr. Of IBRO Advanced School of Neurosci., 16-28 September, Yalta, Ukraine, 2004, P. 43.

18.Shakirzyanova A., Bukharaeva E., Nikolsky E., Giniatullin R. Negative crosstalk between presynaptic adenosine and acetylcholine receptors // Abstr. Of Intern. Workshop in Cell Physiol., 13-17 October 2004, St.Petersburg, Russia, P. 60.

19.Шакирзянова А.В., Бухараева Э.А., Науменко Н.В., Никольский Е.Е., Гиниатуллин Р.А. Мускариновые рецепторы участвуют в регуляции спонтанной секреции в нервно-мышечном соединении лягушки// Материалы III Всероссийской с междунар. уч. Школы-Конференции по физиологии мышц и мышечной деятельности, 1-4 февраля 2005, Москва, Россия, С. 34.

Отпечатано в 000« Печатный двор». г. Казань,ул. Журналистов, 1/16, оф.207 Тел.72-74-59,41- 76-41,41- 76-51. ЛицензияПД№>7-0215от 01.11.01 ВыданаПоволжскиммежрегиональным. территориальнымуправлением МПТРРФ. Подписано впечать14.03.2005г. Усл.п.л1,13. Заказ№К-2699. Тираж 100экз. Формат 60x841/16. Бумага офсетная. Печать -ризография.

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Шакирзянова, Анастасия Вячеславовна

1. ВВЕДЕНИЕ

1.1. Актуальность исследования.

1.2. Цель и задачи исследования.

1.3. Положения, выносимые на защиту:

1.4. Научная новизна.

1.5. Научно-практическая ценность.

1.6. Апробация работы.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

2.1. Метаболизм АТФ в синапсе

2.2. Гидролиз АТФ в синаптической щели

2.3. Классификация пуринергических рецепторов 1 б

2.3.1. Классификация Р1 рецепторов

2.3.2. Агонисты и антагонисты аденозиновых рецепторов

2.3.3. Характеристика вторичных посредников аденозиновых рецепторов

2.3.4. Физиологическая роль аденозиновых рецепторов

2.3.4.1. А1 рецепторы

2.3.4.2. А2а рецепторы

2.3.4.3. Взаимодействие между А1 и А2а рецепторами

2.3.4.4. А2Ь рецепторы

2.3.4.5. АЗ рецепторы

2.3.5. Р2 рецепторы

2.3.5.1. Агонисты и антагонисты Р2 рецепторов

2.3.5.2. Характеристика вторичных посредников Р2У рецепторов

2.4. Аддитивность эффектов АТФ и аденозина

2.5. Никотиновые холинорецепторы

2.5.1. Агонисты и антагонисты никотиновых холинорецепторов

2.5.2. Функциональная роль никотиновых холинорецепторов

2.6. Мускариновые холинорецепторы

2.6.1. Агонисты и антагонисты мускариновых холинорецепторов

2.6.2. Подтипы мускариновых холинорецепторов

2.6.3. Строение мускариновых холинорецепторов 35 2.6.3.1. Характеристика вторичных посредников мускариновых холинорецепторов

2.6.4. Физиологическая роль мускариновых холинорецепторов

2.6.5. Мускариновая регуляция секреции медиатора

2.7. Регуляция Са2+ проводимости нервной терминали как механизм модулирования квантовой секреции пуринами и холиномиметиками

2.7.1. Р1 рецепторы и пресинаптические кальциевые каналы

2.7.2. Р2У рецепторы и пресинаптические кальциевые каналы

2.7.3. Мускариновые рецепторы и пресинаптические кальциевые каналы

2.8. Взаимодействие ацетилхолиновых и пуриновых рецепторов

3. ОБЪЕКТ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

3.1. Объект исследования

3.2. Ванночка и система перфузии

3.3. Растворы 50 3.3.1. Система локальной аппликации растворов

3.4. Электрофизиологические методы исследования 51 3.4.1. Отведение синаптических потенциалов 52 3.4.2 Усиление и регистрация синаптических потенциалов

3.5. Статистическая обработка экспериментальных данных

4. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

4.1. Угнетающее действие аденозина, АТФ и карбахолина на спонтанную квантовую секрецию медиатора

4.2. Спонтанная секреция медиатора при совместном действии аденозина и карбахолина

4.3. Спонтанная секреция медиатора при совместном действии аденозина и АТФ

4.4. Спонтанная секреция медиатора при совместном действии АТФ и карбахолина

4.5. Исследование участия пресинаптических никотиновых холинорецепторов в модулирующем действии карбахолина на спонтанную секрецию медиатора

4.6. Исследование участия мускариновых холинорецепторов в регуляции спонтанной квантовой секреции

4.7. Эффект никотина и охотреморина-М на частоту МПКП на фоне действия аденозина

4.8. Исследование взаимодействия холинергических и аденозиновых рецепторов в процессе угнетения спонтанной квантовой секреции

4.8.1. Эффект карбахолина на спонтанную секрецию при блокировании Р1 рецепторов

4.8.2. Эффект аденозина на спонтанную секрецию при блокировании холинорецепторов

4.9. Изучение влияния ингибирования пресинаптических в-белков на угнетающий эффект карбахолина и пуринов

4.9.1. Влияние коклюшного токсина на угнетающий эффект карбахолина

4.9.2. Влияние коклюшного токсина на угнетающий эффект аденозина

4.10. Исследование эффектов аденозина и карбахолина при увеличении концентрации ионов кальция в нервной терминали 86 4.10.1. Эффект локальной аппликации ионов калия на частоту МПКП в присутствии аденозина и карбахолина

4.10.2. Эффект локальной аппликации иономицина на частоту МПКП в присутствии аденозина и карбахолина 89 4.10.3. Эффект локальной аппликации раствора сахарозы на частоту МПКП в присутствии аденозина и карбахолина

Введение Диссертация по биологии, на тему "Взаимодействие холинергических и пуринергических механизмов регуляции спонтанной квантовой секреции медиатора в нервно-мышечном соединении лягушки"

1.1. Актуальность исследования.

Изменение интенсивности выделения медиатора из нервного окончания является эффективным способом обеспечения синаптической пластичности [Miller, 1998]. Один из конкретных механизмов, контролирующих нейросекрецию, связан с активацией пресинаптических рецепторов медиаторами и комедиаторами. В нервно-мышечном синапсе медиатор ацетилхолин (АХ), выделяющийся в ходе предшествующей активности или в неквантовой форме, активирует пресинаптические холинорецепторы, а освобождающийся совместно с ним комедиатор АТФ - P2Y рецепторы нервной терминали [Giniatullin, Sokolova, 1998]. Известно, что как АХ, так и АТФ угнетают секрецию медиатора из двигательного нервного окончания [Van der Kloot, 1993,1997; Giniatullin, Sokolova, 1998; Sokolova et al., 2003, Ь]. Более того, аналогичным эффектом обладает и аденозин, являющийся продуктом деградации АТФ [Meriney, Grinnell, 1991; Redman, Silinsky, 1994; Sebastiao, Ribeiro, 2000; Silinsky, 2004]. Установление способности этих агонистов угнетать квантовую секрецию поднимает вопрос о том, какое влияние на выделение медиатора они оказывают при их совместном действии. Такая постановка вопроса оправдана тем, что в литературе есть указания на то, что пресинаптические пуриновые рецепторы в нервно-мышечном синапсе функционально связаны с холинорецепторами [Hamilton, Smith, 1991; Salgado et al., 2000; Oliveira et al., 2002], что проявляется в неадцитивном действии их агонистов на квантовую секрецию и даже в устранении эффектов агонистов одних рецепторов антагонистами других.

Кроме того, показано, что агонисты холинорецепторов, активируя постсинаптическую мембрану, стимулируют освобождение аденозина из мышечного волокна [Pitchford et al., 1992]. Это дает основание предполагать, что пресинаптический эффект холиномиметиков может быть не прямым, а опосредованным через систему пуринорецепторов. Таким образом, решение вопроса о взаимодействии холинергической и пуринергической систем регуляции позволит, с одной стороны, ближе подойти к пониманию физиологической роли пресинаптических ауторецепторов, а с другой, более детально представить молекулярный механизм модуляции процесса выделения квантов медиатора.

Заключение Диссертация по теме "Физиология", Шакирзянова, Анастасия Вячеславовна

выводы

Исходя из результатов работы, нами были сделаны следующие выводы:

1. В нервно-мышечных синапсах лягушки агонисты пуриновых рецепторов аденозин и АТФ, активируя пресинаптические пуриновые рецепторы, снижают интенсивность спонтанной квантовой секреции медиатора.

2. Холиномиметик карбахолин угнетает спонтанную секрецию квантов медиатора, активируя пресинаптические мускариновые рецепторы. Снижение частоты МПКП в присутствии карбахолина не опосредовано выбросом аденозина из мышечного волокна в ответ на активацию постсинаптической мембраны.

5. М2 и А1 рецепторы не образуют функционального комплекса на пресинаптической мембране, поскольку антагонисты А1 рецепторов не предотвращают развитие пресинаптических эффектов карбахолина, а антагонисты холинорецепторов не влияют на эффект аденозина.

6. Блокирование в-белков коклюшным токсином снижает пресинаптический эффект агонистов ацетилхолиновых и пуриновых рецепторов нервного окончания, но не устраняет его.

•

Аденозин и карбахолин оказывают угнетающее действие на увеличение частоты МПКП, вызванное как усилением входа Са2+ в нервную терминаль, так и путем его извлечения из внутриклеточных депо.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В нервно-мышечном соединении секретируемые совместно АХ и АТФ, а также АДЕ, образующийся при ферментативном разложении АТФ и выделяющийся из сокращающихся мышц [Восктап е1 а1., 1975; Восктап, МсКег1е, 1983; СипЬа, БеЬазйао, 1993; ЯЛеко е1 а1., 1996], являются активными аутоингибиторами секреции медиатора из двигательных нервных окончаний. Поэтому, правомерным было предположить, что пурины и АХ могут каким-то образом взаимодействовать в процессе модуляции квантовой секреции.

В ходе проведенных исследований, мы обнаружили, что эффекты АДЕ и негидролизуемого аналога АХ КХ на частоту МПКП, отражающую интенсивность спонтанной квантовой секреции, неаддитивны. В то же время, пресинаптический угнетающий эффект АТФ и КХ был аддитивен. В подтверждение полученных ранее данных [вшаШНт, 8око1оуа, 1998; БокоЬуа е1 а1., 2003, Ь] мы также наблюдали аддитивность эффектов АДЕ и АТФ на спонтанную секрецию. Вместе, эти данные, с одной стороны, предполагают отличие пресинаптических механизмов, активируемых АТФ от механизмов угнетения секреции, реализуемых АДЕ и КХ. С другой же стороны, они указывают на возможность взаимодействия ХР и АДЕ рецепторов, или на конвергенцию действия исследуемых агентов к одним и тем же этапам процесса экзоцитоза медиатора нервно-мышечном соединении лягушки.

Несмотря на длительное изучение модуляции квантовой секреции ХМ, до сих пор не было однозначного ответа на вопрос о том, какие в этом ХР участвуют. При помощи локальной аппликации КХ к синаптической области при блокировании соответствующих рецепторов, нами было показано, что угнетение ХМ спонтанной секреции в нервно-мышечном соединении лягушки опосредуется мускариновыми М2 рецепторами. Этот факт представляет особый интерес в связи с тем, что в реализации эффекта КХ на вызванную секрецию квантов медиатора, помимо МХР [Slutsky et al., 1999, 2001, 2002], было показано участие пресинаптических НХР [Nikolsky et al., 2004].

Кроме того, именно угнетающие спонтанную секрецию квантов АХ механизмы, активируемые М2 рецепторами вовлечены во взаимодействие исследуемых медиаторных систем.

В литературе имеется множество данных о тесном взаимодействии между ионотропными никотиновыми и Р2Х рецепторами в различных объектах [Searl, Silinsky, 1998], включая нервно-мышечное соединение теплокровных [Salgado et al., 2000]. Есть также данные о функциональной связи метаботропных мускариновых и Р1 рецепторов в нервно-мышечном соединении [Correa-de-Sa et al., 1991; Hamilton, Smith, 1991; Somogyi et al., 1994; Parkman et al., 1999; Oliveira et al., 2002].

Наши эксперименты показали, что неаддитивность эффектов КХ и АДЕ не связана с влиянием этих агентов непосредственно на пресинаптические рецепторы друг друга, так как ни один из антагонистов ХР не снимал эффект АДЕ на частоту МПКП, а Р1 антагонисты не влияли на угнетающий эффект КХ. Эти данные опровергают также и наше предположение о способности КХ усиливать выброс АДЕ из мышечного волокна, так как в этом случае угнетающий эффект КХ также должен был либо снижаться, либо исчезать в присутствии Р1 блокаторов.

Аутоингибирующие мускариновые и АДЕ рецепторы являются метаботропными и связаны с мембранными G-белками [Starke et al., 1989, Caulfield, 1993; Fredholm et al., 1994]. Существует несколько типов G-белков, по-разному представленных в различных объектах. В литературе есть данные о том, что в нервно-мышечном соединении теплокровных [Silinsky et al., 1989; Hamilton, Smith, 1991] блокатор Gi/Go белков коклюшный токсин (РТх) предотвращает угнетающее действие АДЕ на квантовую секрецию медиатора. В наших экспериментах, пресинаптический ингибиторный эффект АДЕ на спонтанную секрецию полностью не устранялся обработкой препаратов РТх. Эти данные говорят о том, что в отличие от теплокровных, в нервно-мышечном соединении лягушки угнетающие А1 рецепторы связаны как с РТх-чувствительными, так и РТх-нечувствительными в-белками. Более того, можно также предположить, что кроме хорошо известных А1 рецепторов, АДЕ активирует пресинаптические рецепторы, связанные с РТх-нечувствительными в-белками [Siguira, Ко, 2000]. Эти данные не были результатом неполного блокирования РТх-чувствительных в-белков, так как АТФ при тех же условиях инкубирования препаратов с токсином переставала оказывать угнетающее действие на секрецию АХ. Это, с одной стороны, подтверждает наши выводы о связи Р1 рецепторов с РТх-нечувствительными в-белками, а с другой стороны, еще раз говорит о разных внутриклеточных механизмах функционирования пресинаптических Р1 и Р2У рецепторов в нервно-мышечном соединении лягушки. Следует также заметить, что, несмотря на полное снятие РТх угнетающего действия АДЕ в нервно-мышечном соединении крысы, описанное Е. БШпзку с соавт. (1989), этим авторам также не удалось показать этого в нервно-мышечном соединении лягушки, что может быть объяснено видовыми различиями между теплокровными и холоднокровными животными.

Угнетающее действие КХ, в наших экспериментах, также полностью не снималось РТх, что подтверждает высказанные ранее предположения об активации М2 рецепторами двигательного нервного окончания лягушки двух механизмов, опосредованных О-белками, чувствительными и нечувствительными к РТх [БМзку е1 а1., 2002].

Как известно, ингибиторы секреции обычно действуют или путем закрытия Са , или открытия К+ каналов, или через изменение активности секреторного аппарата [\Уи, 8аи§аи, 1997; Ми11ег, 1998; Меи е! а1., 1999; Еп§е1шап, МасБегтой, 2004].

Для изучения механизмов аутоингибиторного действия АДЕ и КХ, мы исследовали

2+ их эффект на частоту МПКП при повышении содержания внутриклеточного Са за счет усиления его входа через потенциалозависимые Са2+ каналы, активируемые деполяризацией пресинаптической мембраны, через искусственные Са2+ каналы, образованные Са2+ ионофором нономицином, и при выбросе Са2+ из внутриклеточных запасов. Для этого мы апплицировали к синаптической области растворы, содержащие 20 ммоль/л КС1, ионофор иономицин и сахарозу. Сахароза, помимо увеличения содержания Са2+ в цитозоле, активирует спонтанную секрецию везикул, немедленно готовых с высвобождению [Stevens, Sullivan, 1998].

В этих экспериментах как АДЕ, так и КХ сохраняли свой эффект, то есть, увеличение частоты МПКП, вызванное аппликацией вышеуказанных активаторов секреции, в их присутствии было достоверно меньше контрольного.

Эти результаты указывают на то, что как АДЕ [Hunt, Silinsky, 1993; Silinsky, Solsona, 1992; Redman, Silinsky, 1995; Scholz, Miller, 1992], так и КХ не оказывает влияния на вход Са в нервную терминаль. Вероятно, общей мишенью для действия АДЕ и КХ в нервно-мышечном соединении амфибий является стратегическая часть секреторного аппарата, расположенная за мембранными ионными каналами и входом

Са2+ в нервное окончание. Это согласуется с данными других авторов о том, что у лягушки активация АДЕ А1 [Silinsky, 1981, 1984, 1986; Silinsky, Solsona, 1992; Redman, Silinsky, 1994, Miller, 1998; Robitaille et al., 1999; Huang et al., 2002] и мускариновых М2 [Slutskyet al., 1999, 2001; Blackmer et al., 2001] рецепторов угнетает конечную стадию экзоцитоза АХ, снижая способность Са активировать секрецию.

Одним из возможных механизмов действия АДЕ и КХ может быть уменьшение готового к высвобождению пула синаптических везикул (RRP), который может быть Са -независим [Wu, Betz, 1996]. Так, Searl, Silinsky (2003) показали, что АДЕ снижает число квантов медиатора, доступных для секреции из запаса везикул, немедленно готовых к высвобождению. Характеристики ингибирования секреции АХ АДЕ, предполагают, что угнетение имеет место на стадии прайминга везикул в процессе секреции [Redman, Silinsky, 1994; Silinsky et al., 2001]. Таким образом, вызванное АДЕ снижение количества квантов, доступных для освобождения, представляет собой изменение секретивной способности праймированных везикул посредством уменьшения аффинности к

Са этого количества доступных квантов [8еаг1, ЗШшку, 2003]. I. Б^Бку с соавт. (2001) предположили сходный механизм воздействия на аппарат слияния везикул с плазматической мембраной при активации М2 рецепторов.

Итак, в нашей работе было показано взаимодействие между метаботропными А1 и М2 рецепторами двигательного нервного окончания лягушки, которые не образуют функционального комплекса на пресинаптической мембране и, очевидно, не имеют сайтов связывания для «противоположных» агонистов. Они сопряжены как с РТх-чувствительными, так и РТх-нечувствительными в-белками, механизмы угнетения секреции при их активации не вовлекают угнетение входа Са2+ и конвергирует к конечным стадиям процесса экзоцитоза (Рис. 26).

Интересно, что пресинаптическое действие АТФ (в отличие от АДЕ и КХ), было

Л I

Са -зависимо, и устранялось РТх, что совпадает с нашими данными о том, что вторичные посредники, вовлеченные в действие АТФ, не участвуют в пресинаптическом действии л I

АДЕ [8око1оуа е1 а1., 2003, Ь]. Однако, мы обнаружили, что блок пресинаптических Са токов является только компонентом в более сложном пресинаптическом действии АТФ. Наши данные свидетельствуют о том, что АТФ имеет два механизма действия: на Са каналы [8око1оуа & а1., 2003, Ь] и уже после входа Са2+ - на сам секреторный аппарат (Рис. 26).

Таким образом, очевидно, что в нервно-мышечном соединении лягушки, также как во многих других системах, различные механизмы могут работать вместе, модулируя синаптическую передачу, и повышая надежность функционирования двигательной системы в целом.

Нервное окончание

Аденозин

Рис. 26 Схема механизмов угнетающего действия АХ и пуринов на спонтанную квантовую секрецию медиатора в нервно-мышечном соединении лягушки.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Шакирзянова, Анастасия Вячеславовна, Казань

1. Бухараева Э.А., Никольский Е.Е., Гиниатуллин Р.А. Эффект холинергических агентов на спонтанную квантовую секрецию медиатора в нервно-мышечном синапсе лягушки // Нейрофизиология. 1986. - Т. 18. - №5. - С. 586-593.

2. Гиниатуллин Р.А., Соколова Е.М. Модулирующая роль АТФ в нервно-мышечном синапсе // Рос. физиол. журнал, им. И.М. Сеченова 1998. -№ 10. -С. 1132-1138.

3. Зефиров А.Л., Халиуллина P.P., Анучин А.А. Эффекты экзогенного N0 на секрецию медиатора и ионные токи двигательного нервного окончания // Бюлл. Эксп. Биол. Мед. 1999а. - Т. 128. -№. 8. - С.144-147.

4. Никольский Е.Е., Гиниатуллин Р.А. Прекращение пресинаптического действия карбахолина тубокурарином // Бюлл. Экспер. Биол. Мед. 1979. - Т. 2. - С. 171-174.

5. Никольский Е.Е., Бухараева Э.А. Мускариновые агонисты не влияют на процесс спонтанной квантовой секреции медиатора из двигательного нервного окончания лягушки // Бюлл. Эксп. Биол. Мед. 1987. - Т. 103. - №2. - С. 183-185.

6. Скок В.И., Селянко А.А., Деркач В.А. Нейроиальные холинорецепторы. М.: Наука. -1987.-С. 343.

7. Abbracchio M.P. ATP in brain function // Purinergic approaches in experimental therapeutics // Ed. Jacobson K.A., Jarvis M.F. London: Wiley-Liss. Inc. - 1997. - P. 383-404.

8. Abbs E.T., Joseph D.N. The effects of atropine and oxotremorine on acetylcholine release in the rat phrenic nerve-diaphragm preparations // Br. J. Pharmacol. 1981. - Vol. 73. - P. 481483.

9. Adams P.R., Brown D.A., Constanti A. Pharmacological inhibition of the M-current // J. Physiol. 1982. - V. 332. - P. 223-262.

10. Allen T.G., Brown D.A. M2 muscarinic receptor-mediated inhibition of the Ca2+ current in rat magnocellular cholinergic basal forebrain neurones // J. Physiol. 1993. - Vol. 466. - P. 173-189.

11. Alves-do-Prado W., Prado W.A. Neuromuscular facilitation induced by muscarinic antagonists in the rat isolated diaphragm // Gen. Pharmacol. 1993. - Vol. 24. - P. 15011504.

12. Arenson M.S. Muscarinic inhibition of quantal transmitter release from the magnesium -paralysed frog sartorius muscle//Neuroscience. 1989. - Vol. 30. - P. 927-836.

13. Arnon A.M., David G., Hevron E., Yaari Y. Calcium currents in frog motor nerve terminals // Soc. for Neurosci. Abstr. 1988. - Vol. 14. - 31.4.

14. Augustine G.J. How does calcium trigger neurotransmitter release? // Curr. Opin. Neurobiol. -2001.-Vol. 11.-P. 320-326.

15. Barajas-Lopez C., Espinosa-Luna R., Zhu Y. Functional interaction between nicotinic and P2x channels in short-term cultures of guinea-pig submucosal neurons // J. Physiol. 1998. -Vol. 513.-P. 671-683.

16. Barlow R.B., Berry K.J., Glenton P.A.M., Nickolau N.M., Soh K.S. A comparison of affinity constants for muscarine-sensitive acetilcholine receptors in guinea-pig atrial pacemaker cells at 29°C and 37°C // Br. J. Pharmacol. 1976. - V. 58. - P. 613-620.

17. Barr E., Daniel L.C., Leslie S.W. Synaptosomal calcium uptake unaltered by adenosine and 2-chloroadenosine // Biochem. Pharmacol. 1985. - Vol. 34. -P. 713-715.

18. Beech D.J., Bemheim L., Hille B. Pertussis toxin and voltage dependence distinguish multiple pathways modulating calcium channels of rat sympathetic neurons // Neuron. -1992.-Vol. 8.-P. 97-106.

19. Beeler T.J., Jona I., Martonosi A. The effect of ionomycin on calcium fluxes in sarcoplasmic reticilum vesicles and liposomes // J. Biol. Chem. 1979. - Vol. 254. - P. 6229-6231.

20. Belardinelli L., Curtis A.B., Bertolet B. Binding of the novel nonxanthine A 2a adenosine receptor antagonist 3H.SCH58261 to coronary artery membranes // Circ. Res. 1996. - Vol. 79.-N6.-P. 1153-60.

21. Bellingham M.C., Berger A.J. Presynaptic depression of excitatory synaptic inputs to rat hypoglossal motoneurons by muscarinic M2 receptors // J. Neurophysiol. 1996. - Vol. 76. -P. 3758-3770.

22. Bennet M .R., H 0 S. P robabilistic s ecretion o f quanta from n erve t erminals in avian c iliary ganglia modulated by adenosine // J. Physiol. -1991. Vol. 440. - P. 513-527.

23. Beme R.M., Knabb R.M., Ely S.W., Rubio R. Adenosine in the local regulation of blood flow: a brief overview // Feder. Proceed. 1983. - Vol. 42. - P. 3136-3142.

24. Berridge M.J. Inositol triphosphate and diacylglycerol as second messenger //Biochem. J. -1984. V. 220. -N. 2. - P. 345-360.

25. Bernheim L., Beech D.J., Hille B. A diffusable second messenger mediates one of the pathways coupling receptors to calcium channels in rat sympathetic neurons // Neuron. -1991.-Vol. 6.-P. 859-867.

26. Blackmer T., Larsen E.C., Takahashi M., Martin T.F.U., Alford S., Hamm H.E. G protein Py subunit-mediated presynaptic inhibition: regulation of exocytotic fusion downstream of Ca2+ entry // Science. 2001. - Vol. 292. - P. 293-297.

27. BockmanE.L., Beme R.M., Rubio R. Release of adenosine and lack of release of ATP from contracting skeletal muscle // Pfluegers Arch. 1975. - Vol. 355. - P. 229-241.

28. Bockman E.L., McKenzie J.E. Tissue adenosine content in active soleus and gracilis muscles of cats // Am. J. Physiol. 1983. - Vol. 244. - H552-H559.

29. Bolton T.B., Kitamura K. Evidence that ionic channels associated with the muscarinic receptor of smooth muscle may admit calcium // Brit. J. Pharmacol. 1983. - V. 78. - N. 2. -P. 405-415.

30. Bonner T.I., Buckley N.J., Young A.C., Brann M.R. Identification of family of muscarinic acetylcholine receptor genes //Science. 1987. - V. 237. - N. 4814. - P. 527-532.

31. Borst J.G.G., Sakmann B. Calcium influx and transmitter release in a fast CNS synapse // Nature. 1996. - Vol. 383. - P. 431-434.

32. Boue-Grabot E., Barajas-Lopez C., Chakfe Y., Blais D., Belanger D., Emerit M. B., Seguela P. Intracellular crosstalk and physical interaction between two classes of neurotransmitter-gated channels // J. Neurosci. 2003. - Vol. 23. -N. 4. - P. 1246-1253.

33. Boue-Grabot E., Emerit M.B., Toulme E., Seguela P., Garret M. Cross-talk and co-trafficking between rhol/GABA receptors and ATP-gated channels // J. Biol. Chem. 2004. - Vol. 279. -N. 8.-P. 6967-6975.

34. Bourque M.J., Robitaille R. Endogenous peptidergic modulation of perisynaptic Schwann cells at the frog neuromuscular junction // J. Physiol. 1998. - Vol. 512. - P. 197-209.

35. Bowman W.C., Marshall I.G., Gibb A.J., Harborne A.J. Feedback control of transmitter release at the neuromuscular junction // Trends Pharmacol. Sci. 1988 - Vol. 9. - N. 1. — P. 16-20.

36. Boyer J.L., Downes C.P., Harden T.K. Kinetics of activation of phospholipase C by P2 purinergic receptor agonists and guanidine nucleotides // J. Biol. Chem. 1989. - Vol. 264. -P. 884-890.

37. Boyer J.L., Lazarowski E.R., Chen X-H, Harden T.K. Identification of P2Y-purinergic receptor that inhibits adenylyl cyclase but does not activate phospholipase C // J. Pharmacol. Exp. Ther. 1993. - Vol. 261.- P. 1140-1146.

38. Brading A.F., Sneddon P. Evidence for multiple sources of calcium for activation of the contractile mechanism of guinea-pig taenia coli on stimulation with carbachol // Brit. J. Pharmacol. 1980. - V. 70. - N. 2. - P. 229-240.

39. Brake A.J., Julius D. Signalling by extracellular nucleotides // Ann. Rev. Cell and Develop. Biol. 1996. - Vol. 12. - P. 19-41.

40. Brayan P.T., Marshall J.M. Adenosine receptor subtypes vasodilatation in rat skeletal muscle during systemic hypoxia: a role for A1 receptors // J. Physiol. 1999. - Vol. 514. - P. 151162.

41. Breitwiesser G., Szabo G. Uncoupling of cardiac muscarinic and beta-adrenergic receptors from ion channels by guanine nucleotide analogue // Nature. 1985. - V. 317. - N. 6037. -P. 530-540.• 110

42. Brown D.A., Adams P.R. Muscarinic suppression of a novel voltage-sensitive K+-current in a vertebrate neurone//Nature. 1980. - V. 283. - N. 5748. - P. 673-676.

43. Brown D.A., Forward A., Marsh S.J. Antagonist discrimination between ganglionic and ileal muscarinic receptors // Br. J. Pharmacol. 1980. - V. 71. - P. 362-364.

44. Brown J.H., Brown S.L. Agonists differentiate muscarinic receptors that inhibit cyclic AMP formation from those that stimulate phosphoinositide metabolism // J. Biol. Chem. 1984. -V. 259.-N. 6. -P. 3777-3781.

45. Brown S.J., James S., Reddington M., Richardson P.J. Both Ai and A2a purine receptors regulate striatal acetylcholine release // J. Neurochem. 1990. - Vol. 55. - P. 31-38.

46. Bruner G., Murphy S. UTP activates multiple second messenger systems in cultured rat astrocytes //Neurosci. Lett. 1993. - Vol. 162. - P. 105-108.

47. Bukharaeva E.A., Ipatova T., Nikolsky E.E., Vyskonil F. The effect of carbachol and a-bungarotoxin on the frequency of miniature endplate potentials at the frog neuromuscular junction // Exp. Physiol. 2000. - Vol. 85. - N. 2. - P. 125-131.

48. Burke S.P., Nadler J.V. Regulation of glutamate and aspartate release from slices of thehippocampal CA1 area: effects of adenosine and baclofen // J. Neurochem. 1988. - Vol. 51. -P. 1541-1551.

49. Capogna M., Ghwiler B.H., Thompson S.M. Presynaptic inhibition of calcium-dependent and -independent release elicited with ionomycin, gadolinium and a-latrotoxin in the hippocampus // J. Neurophysiol. 1996. - Vol. 75. - P. 2017-2028.

50. Carlson S.S., Wagner J.A., Kelly R.B. Purification of synaptic vesicles from Elasmobranch electric organ and the use of biophysical criteria to demonstrate purity // Biochem. 1978. -Vol. 17.-P. 1188-1199.

51. Carlson B J., Raftery M.A. Specific binding of ATP to extracellular sites of Torpedo acetylcholine receptor // Biochemistry. 1993. - Vol. 32. - P. 7329-7334.

52. Catterall W.A. Structure and regulation of voltage-gated Ca channels // Ann. Rev. Cell Dev. Biol. 2000. - Vol. 16. - P. 521-555.

53. Caulfield M.P. Muscarinic receptors-characterization, coupling and function // Pharmac. And Therap. -1993. Vol. 58. P. 319-379.

54. Caulfield M.P, Birdsall NJ. International union of pharmacology. XVII. Classification of muscarinic acetilcholine receptors // 1998. Pharmacol. Rev. - 1998. - Vol. 50. - N. 2. - P. 279-290.

55. Charest R., Blackmore P.F., Exton J.H. Characterization of responses of isolated rat hepatocytes to ATP and ADP // J. Biol. Chem. 1985. - Vol. 260. - P. 15789-15794.

56. Chen H., Singh Y.N., Dryden W.F. Transduction mechanism involving the presynaptic adenosine receptor at mouse motor nerve terminals // Neurosci. Lett. 1989. - Vol 96. - P. 318-322.

57. Chen G., van den Pol A.N. Adenosine modulation of calcium currents and presynaptic inhibition of GABA release in suprachiamatic and arcuate necleus neurons // J. Neurophysiol. 1997. - Vol. 77. - P. 3035-3047.

58. Chrishtofi F.L., Baidan L.V., Fertel R.H., Wood J.D. Adenosine A2 receptor-mediated excitation of a subset of AH/type 2 neurons and deviation of cAMP levels in myentric ganglia of guinea-pig ileum // Neurogastroenterol. 1994. - N. 6. -P. 67-78.

59. Clapp L.H., Vivauddou M.B., Walsh J.V. Acetylcholine increases voltage-activated Ca current in freshly dissociated smooth muscle cells // Proc. Nat. Acad. Sci. USA 1987. -Vol. 84. -N. 7. -P. 2092-2096.

60. Clarke P.B.; SchwartzR.D.; PaulS.M.; Pert C.B.; Pert A. Nicotinic binding in rat brain: autoradiographic comparison of 3H.acetylcholine, [3H]nicotine, and [125I]-alpha-bungarotoxin // J. Neurosci. 1985. - Vol. 5. - P. 1307-1315.

61. Collins A.C.; Evans C.B.; Miner L.L.; Marks M.J. Mecamylamine blockade of nicotine responses: evidence for two brain nicotinic receptors // Pharmacol. Biochem. Behav. 1986. -Vol. 24.-P. 1767-1773.

62. Correia-de-Sa P., Sebastiao A.M., Ribeiro J.A. Inhibitory and excitatory effects of adenosine receptor agonists on evoked transmitter release from phrenic nerve endings of the rat // Br. J. Pharmacol. -1991. Vol. 103. - P. 1614-1620.

63. Correia-de-Sa P., Timoteo M.A., Ribeiro J.A. Functional consequences of inhibition of adenosine uptake and metabolism at the rat neuromuscular junction // J. Neurochem. 1993. -Vol. 61.-S82B.

64. Correia-de-Sa P., Ribeiro J.A. Tonic A2a receptor activation modulates nicotinic autoreceptor function at the rat neuromuscular junction // Eur. J. Pharmacol. 1994. - Vol. 271. - P. 349355.

65. CunhaR.A., Johansson B., van der Ploeg I., S ebastiao A.M., Ribeiro J. A., Fredholm B .B. Evidence for functionally important adenosine A2a receptors in the rat hippocampus // Brain. Res. 1994a. - Vol. 649. - P. 208-216.

66. Currie K.P.M., Fox, A.P. ATP serves as a negative feedback inhibitor of voltage-gated Ca2+ channel currents in cultured bovine adrenal chromaffin cells // Neuron. 1996. - Vol. 16. - P. 1027-1036.

67. D'Agostino G., Kilbinger H., Chiari M.C., Grana F. Presynaptic inhibitory muscarinic receptors modulating H. acetylcholine release in the rat urinary bladder // J. Pharmacol. Exp. Therap. 1986. - Vol. 239. - P. 522-528.

68. Dale H.H. The action of certain esters and ethers of choline, and their relation to muscarine // J. Pharmacol. Exp. Ther. 1914. - Vol. 6. - P. 147-190.

69. Daly J.W., Butts-Lamb P., Padgett W. Subclones of adenosine receptors in the central nervous system: Interaction with caffeine and related methylxanthines // Cell. Mol. Neurobiol. 1983. -Vol. l.-P. 69-80.

70. Decker M.W., Rueter L.E., Bitner Nicotinic acetylcholine receptor agonists: a potential new class of analgesics//Neuropharmacology-2000. Vol. 39. - P. 2785-2791.

71. Del Castillo J., Katz B. The effect of magnesium on activity of motor nerve endings // J. Physiol. -1954. Vol. 124. - P. 553-559.

72. De Lorenzo S., Veggetti M., Muchnik S., Losavio A. Presynaptic inhibition of spontaneous acetylcholine release induced by adenosine at the mouse neuromuscular junction // Br. J. Pharmacol. 2004. - P. 1-12.

73. Devillers-Theiry A., Galzi J.L., Eisele J.L., Bertrand S., Bertrand J.P., Changeux J.P. Functional architecture of the nicotinic acetylcholine receptor: A prototype of ligand-gated channels // J. Membr. Biol. 1993. - Vol. 136. - P. 97-112.

74. Diaz-Hernandez M., Pintor J., Miras-Portugal M.T. Modulation of dinucleotide receptor present in rat midbrain synaptosomes by adenosine and ATP // Br. J. Pharmacol. 2000. -Vol. 130.-P. 434-440.

75. Dilorio P., Ballerini P., Cicarelli R., DiMuzio M., Traversa U., Caciagli F. Ai and A2 receptors involvement in controlling purine and acetylcholine release from rat hippocampalslices //Nucleos. Nucleot. -1991. -Vol. 10.-P. 1237-1238.

76. Dodge F.A., Rahamimoff R. Co-operative action a calcium ions in transmitter release at the neuromuscular junsction // J. Physiol. 1967. - Vol. 193. - P. 419-432.

77. Dolezal V., Tucek S. Presynaptic muscarine receptors and the release of acetylcholine from cortical prisms: roles of Ca2+ and K+ concentration // Naunyn-Schmiedeberg's Arch. Pharmac. 1993.-Vol. 348.-P. 228-233.

78. Dolphin A.C., Forda S.R., Scott R.H. Calcium-dependent currents in cultured rat dorsal root ganglion neurons are inhibited by an adenosine analogue // J. Physiol. 1986. - Vol. 373. - P. 47-61.

79. Dolphin A. Mechanisms of modulation of voltage-dependent calcium channels by G-proteins // J. Physiol. 1998. - Vol. 506. - P. 3-11.

80. Domet M.A., Webb C.E., Wilson D.F. Impact of alpha-bungarotoxin on transmitter release at theneuromuscularjunctionoftherat//Neurosci. Lett. 1995.-Vol. 199.-N. l.-P. 49-52.

81. Dowdall M.J., Boyne A.F., Whittaker V.P. Adenosine triphosphate: A consituant of cholinergic synaptic vesicles // Biochem. J. 1974. - Vol. 140. - P. 1-12.

82. Dubyak G.R., El-Moatassim C. Signal transduction via P2-purinergic receptors for extracellular ATP and other nucleotides // Am. J. Physiol. 1993. - Vol. 265. - P. 577-606.

83. Duncan C.J., Publicover S J. Inhibitory effects of cholinergic agents on the release of transmitter at the frog neuromuscular junction // J. Physiol. 1979. - Vol. 294. - P. 91-103.

84. Dunwiddie T.V. Interactions between the effects of adenosine and calcium on synaptic responces in rat hippocampus in vitro II J. Physiol. 1984. - Vol. 350. - P. 545-559.

85. Dunwiddie T.V. The physiological role of adenosine in the central nervous system // Int. Rev.

86. Neurobiol. 1985. - Vol. 27. - P. 63-139.

87. Dunwiddie T.V. Electrophysiological aspects of adenosine receptor function // Adenosine and adenosine receptors / Ed. Williams M. Clifton (NJ): Humana Press. - 1990. - P. 143-172.

88. Dunwiddie T.V., Fredholm. Adenosine neuromodulation // Purinergic approaches in experimental therapeutics // Ed. Jacobson K.A., Jarvis M.F. London: Willey-Liss. Inc. -1997.-P. 359-381.

89. Edwards F.A., Gibb A.J., Colquhoun D. ATP receptor-mediated synaptic currents in the central nervous system // Nature. 1992. - Vol. 359. - P. 144-147.

90. Engelman H.S., MacDermott A.B. Presynaptic ionotropic receptors and control of transmitter release // Nat. Rev. Neurosci. 2004. - Vol. 5. - P. 135-145.

91. Evans T., Smith M.M., Tanner L.I., Harden T.K. Muscarinic cholinergic receptors of two cell lines that regulate cyclic AMP metabolism by different molecular mechanism // Mol. Pharmacol. 1984,-V. 26.-N. 3.-P. 395-404.

92. Evans R.J., Derkach V., Surprenant A. ATP mediates fast synaptic transmission in mammalian neurons // Nature. 1992. - Vol. 357. - P. 503-505.

93. Evans R.J., Lewis C., Buell G., Valera S., Nirth R.A., Surprenant A. Pharmacological characterization of heterologously expressed ATP-gated cation channels (P2X purinoceptors) // Mol. Pharmacol. 1995. - Vol. 48. - P. 178-183.

94. Fatt P., Katz B. Spontaneous subthreshold activity at motor nerve endings // J. Physiol. -1952.-Vol. 117.-P. 109-128.

95. Felder C.C. Muscarinic acetylcholine receptors: Signal transduction through multiple effectors // FASEB J. 1995. - Vol. 9. - P. 619-625.

96. Feoktistov I., Biaggioni I. Adenosine A2b receptors evoke interleukin-8 secretion in human m ast c ells. An e nprofylline-sensitive m echanism w ith i mplications f or a sthma / /J. Clin. Invest. 1995. - Vol. 96. - P. 1979-1986.

97. Feoktistov I., Polosa R., Holgate S.T., Biaggioni I. Adenosine A2b receptors: a novel therapeutics target in asthma? // TiPS. 1998. - Vol. 19. - P. 148-153.

98. Fertuck H.C.; Salpeter M.M. Localization of acetylcholine receptor by 1251-labeled alpha-bungarotoxin binding at mouse motor endplates // Proc. Natl. Acad. Sci. (USA). -1974.-Vol. 71.-P. 1376-1378.

99. Fillipov A.K., Webb T.E., Brown D.A. P2Y2 nucleotide receptors expressed heterologously in sympathetic neurons inhibit N-type Ca and M-type K currents. // J. Neurosci. 1998. - Vol. 18. - P. 5170-5179.

100. Fredholm B .B., Hedqvist P. Adenosine a transsynaptic modulator of norephynephrine release ? // Catecholamines: basic and clinical frontiers / Ed. Usdin E., Kopin I.J., Barchas J.D. - New York: Pergamon Press. - 1979. - P. 1146-1148.

101. Fredholm B.B., Duner-Engstrom M., Fastbom J., Hu P.S., Van der Ploeg I. Role of G-proteins, cyclic AMP and ion channels in the inhibition of transmitter release by adenosine // Ann. NY Acad. Sci. 1990. - Vol. 604. - P. 276-288.

102. Fredholm B.B., Abbracchio M.P., Burnstock G., Daly A.W., Harden T.K., Jacobson K.A., Leff P., Williams M. Nomenclature and classification of purinoceptors // Parmacol. Rev. -1994.-Vol. 46.-P. 143-156.

103. Fu W-M. Potentiation by ATP of the postsynaptic acetylcholine response at the developing neuromuscular synapses in Xenopus cell culture // J. Physiol. 1994. — Vol. 477. —1. N. 3. -P. 449-457.

104. Fuder H., Brink A., Meincke M., Tauber U. Purinoceptor-mediated modulation by endogenous and exogenous agonists of stimulation evoked H.noradrenaline release on rat iris // Naun. Schm. Arch. Pharmacol. 1992. - Vol. 345. - P. 417-423.

105. Ganguly D.K., Das M. Effects of oxotremorine demonstrate presynaptic muscarinic and dopaminergic receptors on motor nerve terminals // Nature. 1979. - Vol. 278. - P. 623-625.

106. Gilman A.G. G-proteins and dual control of adenylate cyclase // Cell. 1984. - V. 36. -N.3.-P. 577-579.

107. Gilman A.G. G-proteins: transducers of receptor-generated signals // Annu. Rec. Biochem. 1987. -V. 56.-P. 615-649.

108. Giniatullin R.A., Sokolova E.M. ATP and adenosine inhibit transmitter release at the frog neuromuscular junction through distinct presynaptic receptors // Br. J. Pharmacol. 1998. -vol. 124.-P. 839-844.

109. Ginsborg B.L., Hirst G.D.S. The effects of adenosine on the release of transmitter from the phrenic nerve of the rat // J. Physiol. 1972. -Vol. 224. - P. 611-628.

110. Glowatski E., Ruppersberg J.P. Zenner H.P. Rusch A. Mechanically and ATP-induced currents of mouse outer hair cells are independent and differentially blocked by D-tubocurarine // Neuropharmacol. 1997. - Vol. 36. - P. 1269-1275.

111. Goldberg N.D., Haddox M.K. Cyclic GMP metabolism and involvement in biological regulation // Ann. Rev. Biochem. 1977. - V. 46. - P. 823-896.118

112. Goncalvez J., Queiroz G. Facilitatory and inhibitory modulation by endogenousadenosine of noradrenaline release in the epindymal portion of rat vas deferens // Naun. Schm. Arch. Pharmacol. 1993. - Vol. 348. - P. 367-371.

113. Greene R.W., Haas H.L. The elecrtophysiology of adenosine in the mammalian central nervous system //Prog. Neurobiol. -1991. Vol. 36. - P. 329-341.

114. Graves A.R., Lewin K.A., Lindgren K.A. Nitric oxide, cAMP and the biphasic muscarinic modulation of ACh release at the lizard neuromuscular junction // J. Physiol. -2004. Vol. 559. - N. 2. - P. 423-432.

115. Grinnell A.D., Pawson P.A. Dependence of spontaneous release at frog junctions on synaptic strength, external calcium and terminal length // J. Physiol. 1989. - Vol. 418. - P. 397-410.

116. Grishin S., Shakirzyanova A., Giniatullin A., Afzalov R., . Giniatullin R. Mechanisms of * ATP action on motor nerve terminals at the frog neuromuscular junction // Eur. J. Neurosci.-2005. в печати.

117. Haggblad J., Heilbronn E. Release of acetylcholine at the motor endplate of the rat -evidence against a muscarinic acetylcholine autoreceptor // Br. J. Pharmacol. 1983. - Vol. 80.-P. 471-476.

118. Hamilton B.R., Smith D.O. Autoreceptor-modulated purinergic and cholinergic inhibition of motor nerve terminal calcium currents in the rat // J. Physiol. 1991. - Vol. 432. - P. 327341.

119. Hammer R., Berrie C.P., Birsall N.J.M., Burgen A.S.V., Hulme E.C. Pirenzepine distinguishes between subclasses of muscarinic receptors // Nature. 1980. - V. 283. - P. 90-92.

120. Hardman J.G. Cyclic nucleotide and smooth muscle contraction: some conceptual and experimental consideration // Smooth muscles. London. Edward Arnold. -1981. P. 249262.

121. Hazeki O., Ui M. Modification by islet-activating proteins of receptor-mediated regulation of cyclic AMP accumulation in isolated rat hear cells // J. Biol. Chem. — 1981. — V. 256. N. 6. - P. 2856-2862.

122. Hille B. G-protein-coupled mechanisms and nervous signalling // Neuron. 1992. - Vol. 9.-P. 187-195.

123. Hille B. Modulation of ion-channel function by G-protein-coupled receptors // Trends Neurosci. 1994. - Vol.17. - P. 531-535.

124. Hirsh J.K., Searl T J., Silinsky E.M. Regulation by Rab3 A of an endogenous modulator of neurotransmitter release at mouse motor nerve endings // J. Physiol. 2002. - Vol. 545. - P. 337-343.

125. Hogg R.C., Raggenbass M., Bertrand D. Nicotinic acetylcholine receptors:from structure to brain function // Rev. Physiol. Biochem. Pharmacol. 2003. - Vol. 147. - P. 1 -46.

126. Hsu K.S., Huang C.C., Gean P.W. Muscarinic depression of excitatory synaptic transmission mediated by the presynaptic M3 receptors in the rat neostriatum // Neurosc. Letters. 1995. - Vol. 197. P. 141-144.

127. Huang S.-M., Kitamura A., Akita T., Narita K., Kuba K. Adenosine depresses a Ca2+-independent step in transmitter exocytosis at frog motor nerve terminals // Eur. J. Neurosci. — 2002.-Vol. 15.-P. 1291-1298.

128. Hubbard J.I., Jones S.F., Landau E.M. An examination of the effects of osmotic pressure changes upon transmitter release from mammalian motor nerve terminals // J. Physiol. (Lond).- 1968. Vol. 197. - P. 639-657.

129. Hume RI, Honig MG. Excitatory action of ATP on embryonic chick muscle // J. Neurosci.- 1986. Vol. 6. - N. 3. - P. 681-690.

130. Hunt J.M., Silinsky E.M. Ionomycin-induced acetylcholine release and its inhibition by adenosine at frog motor nerve endings // Br. J. Pharmacol. 1993. - Vol. 110. - P. 828-832.

131. Igusa Y. Adenosine 5Mriphosphate activates acetylcholine receptor channels in cultured Xenopus myotomalmuscle cells // J. Physiol. 1988. - Vol. 405. - P. 169-185.

132. Ikeda S. Voltage-dependent modulation of N-type calcium channels by G-protein py subunits // Nature. 1996. - Vol. 380. - P. 255-262.

133. Illes P., Klotz K.-N. Loshe M.J. Signalling by extracellular nucleotides and nucleosides // Naunyn-Schmiedeberg s Arch. Pharmcol. 2000. - Vol. 362. - P. 295-298.

134. Ilouz N., Branski L., Parnas H., Linial M. Depolarization affects the binding properties of muscarinic acetylcholine receptors and their interaction with proteins of the exocytic apparatus//J. Biol. Chem. 1999. - Vol. 274. - P. 29519-29528.

135. Israel M., Lesbats, Meunier F.M., Stinnakre J. Postsynaptic release of adenosine triphosphate induced by single impulse transmitter action // Proc. R. Soc. B. 1976. - Vol. 193.-P. 461-468.

136. Jacobson K.A., Kim H.O., Siddiqi S.M., Olah M.E., Stiles G., von Libitz D.K.J.E. A3 adenosine receptors: Design o f s elective 1 igands and therapeutics prospects / /Drugs of the Future. -1995. Vol. 20. - P. 689-699.

137. Jacobson K.A. Adenosine A3 receptors: novel ligands and paradoxical effects // TiPS. -1998.-Vol. 19. -P. 184-191.

138. Jarvis S.E., Magga J.M., Beedle A.M., Braun J.E.A., Zamponi G.W. G protein modulation of N-type calcium channels is facilitated by physical interactions between syntaxin 1A and GPy // J. Biol. Chem. 2000. - Vol. 275. - P. 6388-6394.

139. Jarvis S.E., Zamponi G.W. Interactions between presynaptic calcium channels, cytoplasmic messengers and proteins of the synaptic vesicle release complex // Trends Pharmacol Sci. 2001. - Vol. 22. - P. 519-525.

140. Joseph S.K., Thomas A.P., Williams R.J., Irvine R.F., Williamson J.R. Myoinositol 1,4,5-triphosphate, a second messenger for the hormonal mobilization of itracellular Ca2+ in liver // J. Bio. Chem. 1984. - V. 259. - N. 5 - P. 3077-3081.

141. Kashani A. H., Chen B-M., Grinnell A.D. Hypertonic enhancement of transmitter release from frog motor nerve terminals: Ca independence and role of integrins // J. Physiol. -2001. Vol. 530. - N. 2. - P. 243-252.

142. Katz B., Miledi R. The effect of calcium on acetylcholine release from motor nerve terminals // Proc. R. Soc. Lond. B. Biol. Sci. 1965. - Vol. 161. - P. 496-503.

143. Katz B. The release of neuronal transmitter substance // Springfield, IL:Thomas. 1969.

144. Katz B. Quantal mechanism of neural transmitter release // Science. 1971. — Vol. 173. — P.123-126.

145. Khakh B.S., Henderson G. Modulation of fast synaptic transmission by presynaptic ligand-gated cation channels // J Auton Nerv Sist. 2000 - Vol. 81. - N. 1-3. - P. 110-121.

146. Klapstein G.J., Colmers W.F. 4-Aminopiridine and low Ca2+ differentiate presynaptic inhibition mediated by neuropeptide Y, baclofen and 2-chloroadenosine in rat hippocampal CA1 in vitro II Br. J. Pharmacol. 1992. - Vol. 105. - P. 470-474.

147. Kohno Y.Ji.X., Mawhorter S.D., Koshiba M., Jacobson K.A. Activation of A3 adenosine receptors on human eosinophils elevates intracellular calcium // Blood. 1996. - Vol. 88. - P. 3569-3574.

148. Krnjevic K. Chemical nature of synaptic transmission in vertebrates // Physiol. Rev. -1974. V. 54. - N. 2. - P. 418-540.

149. Lee K.S., Reddington M. Autoradiographic evidence for multiple CNS binding sites for adenosine derivatives // J. Neurosci. 1986. - Vol. 19. -P. 535-549.

150. Li J.M., Fenton R.A., Brownell-Wheeler H., Powell C.C., Peyton B.D., Cutler B.S., Dobson J.G Adenosine A2A receptors increase endothelial cell nitric oxide // J. Surg. Res. -1998.-Vol. 80.-P. 357-364.

151. Linden J. Structure and function of Al adenosine receptors // FASEB. J. 1991. - Vol. 5. -P. 2668-2676.

152. Linden J. Cloned adenosine A3 receptors: pharmacological properties, species differences and receptor functions // TiPS. 1994. - Vol. 15. - P. 298-306.

153. Lindgren C.A., Laird M.V. Nitroprusside inhibits neurotransmitter release at the frog neuromuscular junction // NeuroReport. 1994. - Vol. 5. - P. 2205-2208.

154. Lindstrom J. Neuronal nicotinic acetylcholine receptors // Ion channels. 1996. - Vol. 4. -P. 377-450.

155. Linial M., Llouz N., Parnas H. Voltage-dependent interaction between the muscarinic ACh receptor and proteins of the exocytotic machinery // J. Physiol. 1997. - Vol. 504. - P. 251-258.

156. Liou J. C., FuW.M. Additive effect ofADP and CGRP in modulation of acetylcholine receptor channel in Xenopus embryonic myocytes // Br. J. Pharmacol. 1995. - Vol. 115. - N. 4.-P. 563-568.

157. Liu G-S, Downey J.M., Cohen M.V. Adenosine, ischemia and preconditioning // Cardiovasc. 1994. - Vol. 28. - P. 1057-1061.

158. Llinas R. Calcium and transmitter release in squid synapse // Soc. Neurosci. Symp. II. -1977.-P. 139-160.

159. Loffelholz K., Pappano A.J. The parasympathetic neuroeffector junction of the heart // Pharmacol. Rev. 1985. - V. 37. - N. 1. - P. 1-24.

160. Lopate G., Pestronk A. Autoimmune myasthenia gravis // Hosp. Prac. 1993. - Vol. 28. -P. 109-131.

161. Losavio A., Muchnik S. Spontaneous acetylcholine release in mammalian neuromuscular junctions // Am. J. Physiol. 1997. - Vol. 273. - C1835-C1841.

162. Lu Z., Smith D.O. Adenosine 5"1-triphosphate increases acetylcholine channel opening frequency in rat sceletal muscle // J. Physiol. 1991. - Vol. 436. - P. 45-56.

163. Lu B., Fu W.M. Regulation of postsynaptic responses by calcitonin gene related peptide and ATP at developing neuromuscular junction // Can. J. Physiol. Pharmacol. 1995. - Vol. 73.-N. 7.-P. 1050-1056.

164. MacDermott A.B., Role L.W., Siegelbaum S.A. Presynaptic ionotropic receptors and the control of transmitter release // Ann. Rev. Neurosci. 1999. - Vol. 22. - P. 443-485.

165. Magga J.M., Jarvis S.E., Arnot M.I., Zamponi G.W., Braun J.E.A. Cysteine string protein regulates G protein modulation of N-type calcium channels // Neuron. 2000. - Vol. 28. — P.195.204.

166. Man-Son-Hing H., Zoran M J., Lukowiak K., Haydon P.G. A neuromodulator of synaptic transmission acts on the secretory apparatus as well as on ion channels // Nature. 1989. — Vol. 341.-P. 237-239.

167. McGehee D., Heath M., Gelber S., Devay P., Role L.W. Nicotine enhancement of fast excitatory synaptic transmission in CNS by presynaptic receptors // Science 1995. - Vol. 269.-P. 1692-1697.

168. Mcintosh H.H., Blazynski C. Characterization and localization of adenosine A2 receptors in bovine rod outer segments // J. Neurochem. 1994. - Vol. 62. - P. 992-997.

169. McKinney M., Richelson E. The coupling of the neuronal muscarinic receptors responses // Ann. Rev. Pharmacol. Toxicol. 1984. - V. 24. - P. 121-146.

170. Meir A., Ginsburg S., Butkevich A., Kachalsky S.G., Kaiserman I., Ahdut R., Demirgoren S., Rahamimoff R. Ion channels in presynaptic nerve terminals and control of transmitter release // Physiol. Rev. 1999. - Vol. 79. - P. 1019-1088.

171. Meriney S.D., Grinnell A.D. Endogenous adenosine modulates stimulation induced depression at the frog neuromuscular junction // J. Physiol. -1991. Vol. 443. - P. 441-455.

172. Mery P.-F., Abi-Gerges N., Nandecasteele G., Jurevicius J., Eschenhagen T., Fischmeister R. Muscarinic regulation of the L-type calcium current in isolated cardiac myocytes // Life Sci. 1997. - Vol. 60. - P. 1113-1120.

173. Meunier F.M., Israel M., Lesbats B. Release of ATP from stimulated nerve electroplaque junctions // Nature. 1975. - 275.

174. Miller R.J. Receptor-mediated regulation of calcium channels and neurotransmitter release // FASEB J. Vol. 4. - P. 3291-3299.

175. Miller R.J. Presynaptic receptors // Ann. Rev. Pharmacol. Toxicol. 1 998. Vol. 3 8. P. 201-227.

176. Mirotznik R.R., Zheng X., Stanley E.F. G-protein types involved in calcium channel inhibition at a presynaptic nerve terminal // J. Neurosci. 2000. - Vol. 20. - P. 7614-7621.

177. Mogul D.J., Adams M.E., Fox A.P. Differential activation of adenosine receptors decreases N-type but potentiates P-type Ca current in hippocampal CA3 neurons // Neuron. -1993.-Vol. 10.-P. 327-334.

178. Morita K., North R.A., Tokimasa T. Muscarinic presynaptic inhibition of synaptic transmission in myenteric plexus of guinea-pig ileum // J. Physiol. 1982. - Vol. 333. - P. 141-149.

179. Mozrzymas J.W., Ruzzier F. ATP activates junctional and extrajunctional acetylcholine receptor channels in isolated adult rat muscle fibres // Neurosci. Lett. 1992. - Vol. 139. — P. 217-220.

180. Mulle C., Choquet D., Korn H., Changeux J.P. Calcium influx through nicotinic receptor in rat central neurons: its relevance to cellular regulation // Neuron. 1992. - Vol. 8. - N. 1. -P. 135-143.

181. Muller D., Loctin F., Dunant Y. Inhibition of evoked acetylcholine release: two different mechanisms in the Torpedo electric organ // Eur. J. Pharmacol. 1987. - Vol. 33. - P. 225234.

182. Mynlieff M., Beam K.G. Adenosine acting at an A1 receptor decreases N-type calcium current in mouse motoneurons // J. Neurosci. 1994. - Vol. 14. - P. 3628-3634.

183. Nakazawa K. ATP-activated current and its interaction with acetylcholine-activated current in rat sympathetic neurons // J. Neurosci. 1994. - Vol. 14. - P. 740-750.

184. Nakazawa K., Fujimori K., Takanaka A., Inoue K. Comparison of adenosine-triphosphate- and nicotine-activated inward currents in rat phaeochromocytoma cells // J. Physiol. 1991. - Vol. 434. - P. 647-660.

185. Nazarea M., Okajama F., Kondo Y. P2 purinergic activation of phosphoinositide turnover is potentiated by Ai receptor stimulation of thyroid cells // Eur. J. Pharmacol. 1991. - Vol. 206. - P. 47-52.

186. Neher E. Vesicle pools and Ca2+ microdomains: new tools for understanding their roles in neurotransmitter release II Neuron. 1998. - Vol. 20. - P. 389-399.

187. Nicholls D .G. Proteins, transmitters and synapses // B lackwell S ci. Publ. 1 994. - P. 186-199.

188. Nikolsky E.E., Bukharaeva E.A., Strunsky E.A., Vyskonil F. Depression of miniature endplate potential frequency by acetylcholine and its analogues in frog // Br. J. Pharmacol., -1991.-Vol. 104.-P. 1024-1032.

189. Nikolsky E.E., Vyskonil F., Bukharaeva E.A., Samigullin D., Magazanik L.G. Cholinergic regulation of the evoked quantal release at frog neuromuscular junction // J. Physiol. 2004. -Vol. 560. (Pt 1).-P. 77-88.

190. Noma A. GTP-binding proteins couple cardiac muscarinic receptor to potassium channels // Trends Neurosci. 1986. - V. 9. - N. 4. - P. 142-143.

191. North R.A., Barnard E.A. Nucleotide receptors // Curr. Opinion Neurobiol. 1997. - Vol. 7.-P. 346-357.

192. Offermanns S., Schultz G. Complex information processing by the transmembrane signalling system involving G proteins // Naun. Schm. Arch. Pharmacol. 1994. - Vol. 350. -P. 329-338.

193. Olah M.E., Stiles G.L. Adenosine receptor subtypes: Characterization and therapeutic regulation//Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol. 1995. - Vol. 35. - P. 581-606.

194. Oliveira L., Timoteo M.A., Correa-de-Sa P. Modulation by adenosine of both muscarinic Mi-facilitation and M2-inhibition of 3H.-acetylcholine release from the rat motor nerve terminals // Eur. J. Neurosci. 2002. - Vol. 15. - P. 1728-1736.

195. Onali P., Olianas M.C. Bimodal regulation of cyclic AMP by muscarinic receptors: Involvement of multiple G proteins and different forms of adenylyl cyclases // Life Sci. -1995.-V. 56.-P. 973-980.

196. Onge E.S., Otero D.A., Bottiglieri D.F., Meyer E.M. Effects of different s ecretagogues and intracellular messengers on the muscarinic modulation of H.-acetylcholine release // Neurochem. Res. 1986. - Vol. 11. - P. 1547-1556.

197. Palmer T.M., Stiles G.L. Review: Neurotransmitter receptors, VII. Adenosine receptors // Neuropharmacol. 1995. - Vol. 34. - P. 683-694.

198. Parkman H.P., Pagano A.P., Ryan J.P. Subtypes of muscarinic receptors regulating gallbladder cholinergic contraction // Am. J. Physiol. 1999. - Vol. 276. - P. 1243-1250.

199. Parnas H., Segel L., Dudel J., Parnas I. Autoreceptors, membrane potential and regulationof transmitter release // Trends Neurosci. 2000. - Vol. 23. - P. 60-68.

200. Paton W.D.M., Zaimis E.J. The methonium compounds //Pharmacol. Rev. 1952. - Vol. 4.-P. 219-253.

201. Patil P.G., de Leon M., Reed R.R., Dubel S., Snutch T.P., Yue D.T. Elementary events underlying voltage-dependent G-protein inhibition of N-type calcium channels // Biophys. J. -1996. Vol. 71. - P. 2509-2521.

202. Peakman M.C., Hill S.J. Adenosine A2b receptor-mediated cyclic AMP accumulation in primary rat astrocytes//Br. J. Pharmacol. 1994.-Vol. 111.-P. 191-198.

203. Peteris A., Ogren V.R. Interaction of forskolin with effect of atropine on 3H. acetylcholine secretion in guinea-pig ileum myenteric plexus // J. Physiol. 1988. - Vol. 395. p. 441-453.

204. Phillis J.W. The pharmacology of purines in the CNS: interactions with psychoactive agents // In Purines:Pharmacol. Physiol. Roles, ed. Stone T.W. (Lond. McMillan Press). -1985.-P. 45-56.

205. Phillis J.W., Wu P.H. Adenosine and adenosine triphosphate as neurotransmitter/neuromodulators in the brain: the evidence is mounting // Trends Aut. Pharmacol, ed. Kalsner S. Urban and Schwarzenberg, Baltimore, USA. 1982. - P. 237-261.

206. Pitchford S., West Day J., Gordon A., Mochly-Rosen D. Nicotinic acetylcholine receptor desensitization is regulated by activation-induced extracellular adenosine accumulation // J. Neurosci. 1992. - Vol. 12. - N. 11. - P. 4540-4544.

207. Post M.A., Kirsch G.E., Brown A.M. Kv2.1 and electrically silent Kv6.1 potassium channel subunits combine and express a novel current // FEBS Lett. 1996. - Vol. 9. N. 399(1-2).-P. 177-182.

208. Ralevic V., Burnstock G. Receptors for purines and pyrimidines // Pharmocological reviews. 1998. - Vol. 50. - P. 413-492.

209. Rasgado-Flores H., Sanchez-Armass S., Blaustein M.P., Nachshen D.A. Strontium, barium and manganese metabolism in isolated presynaptic nerve terminals // Am. J. Physiol. 1987. - Vol. 252. - C604-C610.

210. Rasmussen H., Barrett P.Q. Calcium messenger system: an integrated view//Physiol. Rev. 1984. - V. 64. - N. 3. - P. 938-984.

211. Redman R.S., Silinsky E.M. ATP released together with acetylcholine as the mediator of neuromuscular depression at the frog motor nerve endings // J. Physiol. 1994. - Vol. 477. -P. 117-127.

212. Redman R.S., Silinsky E.M. On the simultaneous electrophysiological measurements of neurotransmitter release and perineural calcium currents from frog motor nerve endings // J. Neurosci. Methods. 1995. - Vol. 57. - P. 151-159.

213. Reid C.A., Bekkers J.M., Clements J.D. N- and P/Q-type Ca2+ channels mediate transmitter release with a similar cooperativity at rat hippocampal autapses // J. Neurosci. -1998.-Vol. 18.-P. 2849-2855.

214. Ren J., Harty R.F. Presynaptic muscarinic receptors modulate acetylcholine release from rat antral mucosal/submucosal nerves // Digest. Dis. and Science. 1994. - Vol. 39. - P. 1099-1106.

215. Ribeiro J.A., Walker J. Action of adenosine triphosphate on endplate potentials recorded from muscle fibres of the rat-diaphragm and frog sartorius // Br. J. Pharmacol. 1973. - Vol. 49.-P. 724-725.

216. Ribeiro J. A., Walker J. The effects of adenosine triphosphate and adenosine diphosphate on transmission at the rat and frog neuromuscular junctions // Br. J. Pharmacol. 1975. -Vol. 54.-P. 213-218.

217. Ribeiro J.A., Sa-Almeida A.M., Namorado J.M. Adenosine and adenosine triphosphate decrease 45Ca uptake by synaptosomes stimulated by potassium // Biochem. Pharmacol. -1979. Vol. 28. - P. 1297-1300.

218. Ribeiro J.A., Sebastiao A.M. Adenosine receptors and calcium: basis for proposing a third (A3) type of adenosine receptor // Prog. Neurobiol. 1986. - Vol. 26. - P. 179-209.

219. Ribeiro J.A., Sebastiao A.M. On the role, inactivation and origin of endogenous adenosine at the frog neuromuscular junction // J. Physiol. 1987. - Vol. 384. - P. 571-585

220. Ribeiro A J., Cunha R.A., Correia-de-Sa P., Sebastiao A.M. Purinergic regulation of acetylcholine release // Prog. Brain Res. 1996. - Vol. 109. - P. 231-241.

221. Robitaille R. Purinergic receptors and their activation by endogenous purines at perisynaptic glial cells of the frog neuromuscular junction // J. Neurosci. 1995. - Vol. 15. -P. 7121-7131.

222. Robitaille R., Jahromi B.S., Charlton M.P. Muscarinic Ca2+ responces in perisynaptic Schwann cells unblocked by classical muscarinic antagonists // J. Physiol. 1997. - Vol. 504. -P. 337-347.

223. Robitaille R. Modulation of synaptic efficacy and synaptic depression by glial cells at the frog neuromuscular junction // Neuron. 1998. - Vol. 21. - P. 847-855.

224. Robitaille R., Thomas S., Charlton M.P. Effects of adenosine on Ca2+ entry in the nerve terminal of the frog neuromuscular junction // Can. J. Physiol. Pharmacol. 1999. - Vol. 77. -P. 707-714.

225. Roche J.P., Treistman S.N., Ca2+ channel P3 subunit enhances voltage-dependent relief of G-protein inhibition induced by muscarinic receptor activation and Gpy // J. Neurosci. 1998. -Vol. 18.-P. 4883-4890.

226. Rosemund C., Stevens C.F. Definition of the readily releasable pool of vesicles at hippocampal synapses // Neuron. 1996. - Vol. 16. - P. 1197-1207.

227. Rouse S.T., Levey A.I. Muscarinic acetylcholine receptor immunoreactivity afterhippicampal commissural/associational pathway lesions: evidence for multiple presynaptic receptor subtypes // J. Comp. Neurol. 1997. - Vol. 380. - P. 382-394.

228. Rouse S.T., Edmunds S.M., Yi H., Gilmor M.L., Levey A.I. Localization of M(2) muscarinic acetylcholine receptor protein in cholinergic and non-cholinergic terminals in rat hippocampus // Neurosci. Lett. 2000. - Vol. 284. - P. 182-186.

229. Sajjadi F.G., Takabayshi K., Foster A.C., Domingo R.C., Firestein G.S. Inhibition of TNF-a expression by adenosine // J. Immunol. 1996. - Vol. 156. - P. 3435-3442.

230. Salgado A.I. Cunha R.A., Ribeiro J.A. Facilitation by P2 receptor activation of acetylcholine r elease from r at m otor n erve t erminals: i nteraction w ith p resynaptic n icotinic receptors // Brain Res. 2000. - Vol. 977. - N. 2. - P. 245-250.

231. Scanziani M.^Capogna M., Gahwiler B.H., Thompson S.M. Presynaptic inihibition of miniature excitatory synaptic currents by baclofen and adenosien in the hippocampus // Neuron. 1992. - Vol. 9. - P. 919-927.

232. Scholz K.P., Miller R.J. Analysis of adenosine actions on Ca2+ currents and synaptic transmission in cultured rat hippocampalpyramidal neurones // J. Physiol. 1991. - Vol. 435. -P. 373-393.

233. Scholz K.P., Miller R.J.Inhibition of quantal transmitter release in the absence of calcium influx by a G protein-linked adenosine receptor in hippocampal synapses // Neuron. 1992. -Vol. 8.-P. 1139-1150.

234. Schrattenholz A., Roth U., Achunen A., Schager H.J., Godovac-Zimmerman J., Albuquerque E.X., Maelicke A. Identification of purine binding sites on Torpedo acetylcholine receptor // J. Recept. Res. 1994. - Vol. 14. - P. 197-208.

235. Schweitzer E. Coordinated release of ATP and ACh from cholinergic synaptosomes and its inhibition by calmodulin antagonists // J. Neurosci. 1987. - Vol. 7. - P. 2948-2956.

236. Searl T.J., Silinsky E.M. Cross-talk between apparently independent receptors // J. Physiol. 1998. - Vol. 513. -N. 3. - P. 629.

237. Searl T.J., Silinsky E.M. Phorbol esters and adenosine affect the readily releasable neurotransmitter pool by different mechanisms at amphibian motor nerve endings // J. Physiol. 2003. - Vol. 553. -N. 2. - P. 445-456.

238. Searl T.J., Redman R.S., Silinsky E.M. Mutual occlusion of P2X ATP receptors and nicotinic receptors on sympathetic neurons of the guinea-pig // J. Physiol. 1998. - Vol. 510. -P. 783-791.

239. Sebastiao A.M., Stone T.W., Ribeiro J.A. The inhibitory adenosine receptor at the neuromuscular junction and hippocampus of the rat: antagonism by 1,3,8-substituted xanthines // Br. J. Pharmacol. 1990. - Vol. 101. - P. 453-459.

240. Sebastiao A.M., Ribeiro J.A. Evidence for presence of excitatory A2 receptors adenosine receptors in the rat hippocampus // Neurosci. Lett. 1992. - Vol. 138. - P. 41-44.

241. Sebastiao A.M., Ribeiro J.A. Adenosine A2 receptor-mediated excitatory actions on the nervous system // Prog. Neurobiol. 1996. - Vol. 48. - P. 167-189.

242. Sebastiao A.M., Ribeiro J.A. Fine-tuning neuromodulation by adenosine // Trends Pharmacol. Sci. 2000. - Vol. 21. - N. 9. - P. 341-346.

243. Shahraki A, Stone T.W. Interactions between adenosine and metabotropic glutamate receptors in the rat hippocampal slice // Br. J. Pharmacol. 2003. - Vol. 138. - N. 6. - P. 1059-1068.

244. Shapiro M.S., Wollmuth L.P., Hille B. Modulation of Ca2+ channels by PTX-sensitive G-proteins is blocked by N-ethylmaleimide in rat sympathetic neurons // J. Neurosci. 1994. -Vol. 14. - P. 7109-7116.

245. Shimony Y., Alnaes E., Rahamimoff R. Is hyperosmotic neurosecretion from motor nerve endings a calcium-dependent process? // Nature. 1977. - Vol. 267. - P. 170-172.

246. Siguira Y., Ko Ch-P. PTX-sensitive and -insensitive synaptic modulation at the frog neuromuscular junction // Neuroreport. -2000. Vol. 11. - N. 13. -P. 3017-3021.

247. Silinsky E.M. On the association between transmitter secretion and release of adenine nucleotides from mammalian motor nerve terminals // J. Physiol. 1975. - Vol. 247. - P. 145162.

248. Silinsky E.M. Evidence for specific adenosine receptors at cholinergic nerve endings // Br. J. Pharmacol. 1980.-Vol. 71.-P. 191-194.

249. Silinsky E.M. On the calcium receptor that mediates depolarization-secretion coupling atcholinergic motor nerve terminals // Br. J. Pharmacol. -1981. Vol. 73. P. 413-429.

250. Silinsky E.M. On the mechanism by which adenosine receptor activation inhibits the release of acetylcholine from motor nerve endings // J. Physiol. 1984. - Vol. 346. - P. 243256.

251. Silinsky E.M. The biophysical pharmacology of calcium-dependent acetylcholine secretion//Pharmacol. Rev. 1985. - Vol. 37. - P. 81-132.

252. Silinsky E.M. Inhibition of transmitter release by adenosine: are Ca 2 +currents depressed or are the intracellular effects of Ca 2 +impaired? // Trends Pharmacol. Sci. 1986. - Vol. 7. -P. 180-185.

253. Silinsky E.M. Adenosine derivatives and neuronal function // Seminars Neurosci. 1989. -Vol. l.-P. 155-165.

254. Silinsky E.M. Adenosine decreases both presynaptic calcium currents and neurotransmitter release at the mouse neuromuscular junction // J. Physiol. 2004. -Vol. 558. N. 2.-P. 389-401.

255. Silinsky E.M., Gerzanich V. On the excitatory effects of ATP and its role as a neurotransmitter in coeliac neurons of the g uinea-pig // J. Physiol. -1993. Vol. 464. - P. 197-212.

256. Silinsky E.M., Gerzanich V., Vanner S.M. ATP mediates excitatory synaptic transmission in mammalian neurones // Br. J. Pharmacol. 1992. - Vol 106. - P. 762-763.

257. Silinsky E.M., Hubbard J.I. Release of ATP from rat motor nerve terminals // Nature. -1973. Vol. 243. - P. 404-405.

258. Silinsky E.M., Redman R.S. Synchronous release of ATP and neurotransmitter within milliseconds of a motor nerve impulse in the frog // J. Physiol. 1996. - Vol. 492. - N3. - P. 815-822.

259. Silinsky E.M., Searl T.J., Redman R.S., Hirsh J.K. Release and effects of ATP and its derivatives at cholinergic synapses // Drug. Dev. Res. 2001. — Vol. 52. - P. 22-33.

260. Sims S.M., Singer J.J., Walsh J.V. A mechanism of muscarinic excitation in dissociated smooth muscle cells // Trends Pharmacol. Sci. 1986. - V. 7. Suppl. - P. 28-32.

261. Skinner M.R., Marshall J.M. Studies on the roles of ATP, adenosine and nitric oxide in mediating muscle vasodilatation evoked in the rat acute systemic hypoxia // J. Physiol. -1996. Vol. 495. - P. 553-560.

262. Slutsky I., Parnas H., Parnas I. Presynaptic effects of muscarine on ACh release at the frog neuromuscular junction // J. Physiol. 1999. - Vol. 524. - N. 3. P. 769-782.

263. Slutsky I., Silman I., Parnas H., Parnas I. Presynaptic M2 muscarinic receptors are involved in controlling tyhe kinetics of ACh release at the frog neuromuscular junction // J/ Physiol. 2001. - Vol. 536. - N. 3. - P. 717-725.

264. Slutsky I., R ashkovan G., P arnas H., P arnas I. Ca2+-Independent feedback i nhibition o f acetylcholine release in frog neuromuscular junction // J. Neurosci. 2002. - Vol. 22. - N. 9. -P. 3426-3433.

265. Slutsky I., Wess J., Gomeza J., Dudel I., Parnas H., Parnas I. Use of knockout mice reveals involvement of M2-muscarinic receptors in control of the kinetics of acetylcholine release // J. Neurophysiol. 2003. - Vol. 89. - P. 1954-1967.

266. Smith D.O. Sources of adenosine released during neuromuscular transmission in the rat // J. Physiol. -1991. Vol. 432. - P. 343-354.

267. Smith D.O., Lu Z. Adenosine derives from hydrolysis of presynaptically released ATP inhibits neuromuscular transmission // Neurosci. Lett. 1991. - Vol. 122. — P. 171-173.

268. Sokolova E., Nistri A., Giniatullin R.The ATP-mediated fast current of rat dorsal root ganglion neurons is a novel effector for GABAb receptor activation // Neurosci. Lett. 2003. -Vol. 338.-N. 3.-P. 181-184a.

269. Sokolova E., Grishin S., Shakirzyanova A., Talantova M., Giniatullin R. Distinct receptors and different transduction mechanisms for ATP and adenosine at the frog motor nerve endings // Eur. J. Neurosci. 2003. - Vol. 18. - P. 1254-1264b.

270. Soliakov L.,Gallagher T., Wonnacott S. Anatoxin-a-evoked 3H .dopamine release from rat striatal synaptosomes // Neuropharmacology 1995. - Vol. 34. P. 1535 -1541.

271. Somlyo A.V., Bond M., Somlyo A.P., Scarpa A. Inositol triphosphate-induced calcium release and contraction in vascular smooth muscle // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1985. - V. 82.-N. 15.-P. 129-145.

272. Somogyi G.T., Tanowitz M., Groat W.C. Ml muscarinic receptor-mediated facilitation of acetylcholina release in the rat urinary bladder // J. Physiol. 1994. - Vol. 480. — N. 1. - P. 81-89.

273. Song W.J., Tkatch T., Surmeier D. Adenosine receptor expression and modulation of Ca2+ channels in rat striatal cholinergic interneurons // J. Neurophysiol. 2000. - Vol. 83. - P. 322332.

274. Spignoli G., Pedata F., Pepeu G. Ai and A2 adenosine receptors modulate acetylcholine release from brain slices // Eur. J. Pharmacol. 1984. - Vol. 97. - P. 341-342.

275. Stambaugh K., Jacobson K.A., Jiang J-L., Jiang B.T. A novel cardioprotective function of adenosine Ai and A3 receptors during prolonged simulated ischemia // Am. J. Physiol. -1997. Vol. 273. - H501-H505.

276. Starke K., Gothert M., Kilbinger H. Modulation of neurotransmitter release by presynaptic autoreceptors // Physiol. Rev. 1989. - Vol. 69. - P. 864-989.

277. Stevens C.F., Sullivan J.M. Regulation of the readily-releasable vesicle pool by protein kinase C // Neuron. 1998. - Vol. 21. - P. 885-893.

278. Stevens C.F., Williams J.H. "Kiss and run" exocytosis at hippocampal synapses // Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2000. - Vol. 97. - P. 12828-12833.

279. Stone T.W. Adenosine in the nervous system. San Diego: Academic Press, 1991.

280. Tashiro T., Stadler H. Chemical composition of cholinergic synaptic vesicles from Torpedo marmorata based on improved purification // J. Biochem. 1978. - Vol. 90. - P. 479-487.

281. Thomas S., Robitaille R. Differential frequency-dependent regulation of transmitter releaseby endogenous nitric oxide at the amphibian neuromuscular synapse // J. Neurosci. 2001. -Vol. 21.-N. 4.-P. 1087-1095.

282. Tian L., Prior C., Dempster J., Marshall I.G. Nicotinic antagonist-produced frecuency-dependent changes in acetylcholine release from rat motor nerve terminals // J. Physiol. -1994. Vol. 476. - N. 3. - P. 517-529.

283. Umemiya M., Berger A J. Activation of adenosine Ai and Aa receptors differentially modulates calcium channels and glycinergic synaptic transmission in rat brain stem // Neuron. -1994.-Vol. 13.-P. 1439-1446.

284. Van der Kloot W. Nicotinic agonists antagonize quantal size increases and evoked release at frog neuromuscular junction // J. Physiol. 1993. - Vol. 469. - P. 567-589.

285. Van der Kloot W., Molgo J. Quantal acetylcholine release at the vertebrate neuromuscular junction // Physiol. Rev. 1994. - Vol. 74. - P. 899-991.

286. Vannucchi M.G., Pepeu G. Muscarinic receptor modulation of acetylcholine release from rat cerebral cortex and hippocampus // Neurosci. Letters. 1995. - Vol. 190. - P. 53-56.

287. Wall P.D. Do nerve impulses penetrate terminal arborizations ? A pre-presynaptic control mechanism//TINS. 1995. - Vol. 18. - P. 99-103.

288. Ward J.M.; Cockcroft V.B.; Lunt G.G.; Smillie F.S. Wonnacott, S. Methyllycaconitine: a selective probe for alpha-bungarotoxin neuronal binding sites // FEBS Lett. 1990. - Vol. 270. - P. 45-48.

289. Wess J. Molecular basis of muscarinic acetylcholine receptor function // Trens Pharmacol. Sci. 1993. - V. 14. - P. 308-313.

290. Wessler I., Karl M., Mai M., Diener A. Muscarine receptors on the rat phrenic nerve, evidence for posotive and negative muscarinic feedback mechanisms // Naunyn-Schmiedeberg's Arch. Pharmac. 1987b. - Vol. 335. - P. 605-612.

291. Wessler I. Neurotransmission at the NMJ // Trends Pharmacol. Sci. 1988. - Vol. 9. - P. 125-126.

292. Wessler I. Control of transmitter release from the motor nerve by presynaptic nicotinic and muscarinic autoreceptors // Trends Pharmacol. Sci. 1989. - Vol. 10. - P. 110-114.

293. Wessler I. Acetylcholine at motor nerves: storage, release, and presynaptic modulation by autoreceptors and adrenoceptors // Int. Rev. Neurobiol. 1992. - Vol. 34. - P. 283-384

294. Wessler I., Apel C., Garmsen M., Klein A. Effects of nicotine receptor agonists on acetylcholine release from the isolated motor nerve, small intestine and trachea of rats andguinea-pigs // Clin. Investig. 1992. - Vol. 70. N. 3-4. - P. 182-189.

295. Wheeler D.B., Randall A., Tsien R.W. Roles of N-type and Q-type Ca2+ channels in supporting hippocampal synaptic transmission // Science. 1994. - Vol. 264. - P. 107-111.

296. White T.D., Macdonald W.F. Neural release of ATP and adenosine // In Biol. Act. Extrac. ATP. ed Dubyak G.R., Fedan J.S., N-Y Acad. Sci. 1990. - P. 287-299.

297. Whittaker V.P., Dowdall M.J., Boyne A.F.The storage and release of acetylcholine by cholinergic nerve terminals: recent results with non-mammalian preparations // Biochem. Soc. Symp. 1972. - Vol. 36. - P. 49-68.

298. Wickman K., Clapham D.E. Ion channel regulation by G proteins // Physiol. Rev. 1995. -Vol. 75.-P. 865-885.

299. Wonnacott S. Presynaptic nicotinic ACh receptors // Trends Neurosci. 1997. - Vol. 20. -P. 92-98.

300. Wu L.-G., Betz W.J. Nerve activity but not intracellular calcium determines the time course of endocytosis at the frog neuromuscular junction // Neuron. 1996. - Vol. 17. - P. 769-779.

301. Wu L.-G., Saggau P. Adenosine inhibits evoked synaptic transmission primarily by reducing presynaptic calcium influx in area CA1 of hippocampus // Neuron. 1994. - Vol. 12.-P. 1139-1148.

302. Wu L.-G., Saggau P. Presynaptic inhibition of elicited neurotransmitter release // Trends Neurosci. 1997. - Vol. 20. - P 204-212.

303. Yakel J.L., Warren R.A., Reppert S.M., North R.A. Functional expression of adenosine A2b receptor in Xenopus oocytes // Mol. Pharmacol. 1993. - Vol. 43. - P. 277-280.

304. Yamada M., Hamamori Y., Yokoyama M. P2-purinoceptor activation stimulates phosphoinositide hydrolysis and inhibits accumulation of c-AMP in cultured ventricular myocytes // Circ. Res. 1992. - Vol. 70. - P. 477-485.

305. Yao Y., Sei Y., Abbracchio M.P., Kim Y-C., Jacobson K.A. Adenosine A3 receptoragonists protect HL-60 and U-937 cells from apoptosis induced by A3 antagonists // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1997. - Vol. 232. - P. 317-322.

306. Yawo H., Chuhma N. Preferential inhibition of co-conotoxin-sensitive presynaptic Ca2+ channels by adenosien autoreceptors // Nature. 1993. — Vol. 365. - P. 256-258.

307. Zamponi G.W., Bounnet E., Nelson D., Nargeot J., Snutch T.P. Crasstalk between G-proteins and protein kinase C mediated by the calcium channel al subunit // Nature. 1997. -Vol. 385.-P. 442-446.

308. Zamponi G.W., Snutch T.P. Modulation of voltage-dependent calcium channels by G-proteins // Curr. Opin. Neurobiol. 1998. - Vol. 8. - P. 351-356.

309. Zamponi G.W. Determinants of G-protein inhibition of presynaptic calcium channels // Cell Biochem. Biophysics.-2001.-Vol. 34.-P. 79-94.

310. Zhang J.F., Ellinor P.T., Aldrich R.W., Tsien R.W. Multiple structural elements in voltage-dependent Ca channels support their inhibition by G-proteins // Neuron. 1996. - Vol. 17. -P. 991-1003.

311. Zimmermann H. S ignalling v ia A TP i n t he n ervous sy stem / / T rends N eurosci. -1994. — Vol. 17.-P. 420-426.

312. Ziganshin A.U., Hoyle C.H.V., Burnstock G. Ecto-enzymes and metabolism of extracellular ATP // Drug Dev. Res. 1994a. - Vol. 32. - P. 134-146.

313. Ziganshin A.U., Hoyle C.H.V., Lambrecht G., Mutscheler E., Baumert H.G., Burnstock G. Selective antagonism by PPADS at P2X -purinoceptors in rabbit isolated blood vessels // Br. J. Pharmacol. 1994b. - Vol. 111. - P. 923-929.

314. Zimmermann H. Extracellular metabolism of ATP and other nucleotides // Naunyn-Schmiedeberg s Arch. Pharmacol. 2000. - Vol. 362. - P. 299-309.

315. Zink A., ScherublH., HoflichM., Hescheler J., RaueF. Adenosine A1 receptors inhibitcAMP and Ca2+ mediated calcitonin secretion in C-cells // Horm. Metab. Res. 1995. - Vol. 27.-P. 408-414.

316. Zhou X., Galligan J.J. Non-additive interaction between nicotinic cholinergic and P2x purine receptors in guinea-pig enteric neurons in culture // J. Physiol. 1998. - Vol. 513. - P. 685697.

317. Zhu Y., Ikeda S.R. Adenosine modulates voltage-gated Ca2+ channels in adult rat sympathetic neurons // J. Neurophysiol. 1993. - Vol. 70. - P. 610-620.

318. Zucker R.S. Exocytosis: a molecular and physiological perspective // Neuron. 1996. -Vol. 17.-P. 1049-1055.

319. Автор выражает сердечную благодарность Гиниатуллину Рашиду Асхатовичу, а также Никольскому Евгению Евгеньевичу за прекрасное руководство работой, авторитетную помощь в ее выполнении и подготовке диссертации к защите.

320. Огромная благодарность всем сотрудникам лаборатории Биофизики синаптических процессов КИББ КазНЦ РАН и нормальной физиологии Казанского государственного медицинского университета за неоценимую помощь, постоянную активную поддержку и доброе отношение.

Информация о работе

Шакирзянова, Анастасия Вячеславовна
кандидата биологических наук
Казань, 2005
ВАК 03.00.13

Диссертация

Взаимодействие холинергических и пуринергических механизмов регуляции спонтанной квантовой секреции медиатора в нервно-мышечном соединении лягушки - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы