Выявление вируса простого герпеса и цитомегаловируса в мужских половых клетках при экспериментальной инфекции in vitro и в эякуляте мужчин с нарушениями фертильности

Науменко, Виктор Алексеевич

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Выявление вируса простого герпеса и цитомегаловируса в мужских половых клетках при экспериментальной инфекции in vitro и в эякуляте мужчин с нарушениями фертильности
ВАК РФ 03.00.06, Вирусология

Автореферат диссертации по теме "Выявление вируса простого герпеса и цитомегаловируса в мужских половых клетках при экспериментальной инфекции in vitro и в эякуляте мужчин с нарушениями фертильности"

На правах рукописи

003484017

НАУМЕНКО ВИКТОР АЛЕКСЕЕВИЧ

ВЫЯВЛЕНИЕ ВИРУСА ПРОСТОГО ГЕРПЕСА И ЦИТОМЕГАЛОВИРУСА В МУЖСКИХ ПОЛОВЫХ КЛЕТКАХ ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ИНФЕКЦИИ IN VITRO И В ЭЯКУЛЯТЕ МУЖЧИН С НАРУШЕНИЯМИ

ФЕРТИЛЬНОСТИ

03.00.06 - Вирусология

АВТОРЕФЕРАТ

ДИССЕРТАЦИИ НА СОИСКАНИЕ УЧЕНОЙ СТЕПЕНИ КАНДИДАТА МЕДИЦИНСКИХ НАУК

1 9 НОЯ

Москва - 2009 г.

003484017

Работа выполнена в НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского РАМН

Научный руководитель:

доктор биологических наук

Научный консультант:

доктор биологических наук, профессор

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук доктор биологических наук

Маныкин Анатолий Анатольевич

Кущ Алла Александровна

Диденко Любовь Васильевна Филатов Феликс Петрович

Ведущее учреждение:

НИИ полиомиелита и вирусных энцефалитов им. М.П. Чумакова РАМН

Защита диссертации состоится года в 12-00 часов

на заседании диссертационного совета (Д.00Г.020.01) НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского РАМН по адресу: 123098, Москва, ул. Гамалеи, д.16.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского РАМН

Автореферат разослан «_5~» ¿¿£>Л Ю-Я 2009 г.

Ученый секретарь диссертационного совета,

доктор медицинских наук Е.И. Бурцева

Актуальность проблемы

Вирус простого герпеса (ВПГ) и цитомегаловирус (ЦМВ) чрезвычайно широко распространены в популяции и вызывают широкий спектр патологии человека (Roizman В. et al., 2007; Mocarski Е. S. Jr. et al., 2007).

Предположение о присутствии ВПГ и ЦМВ в эякуляте было впервые высказано в начале 70-х годов прошлого века (Lang D.J. et al., 1972; Centifanto Y.M. et al., 1972). Проблема выявления вирусов в половых клетках на протяжении многих лет привлекает внимание исследователей по нескольким причинам.

Во-первых, выделение вируса с эякулятом вносит существенный вклад в его горизонтальное распространение в популяции (Ющук Н.Д. и др., 2009).

Во-вторых, в последние годы возрастает число исследований, свидетельствующих о том, что инфекции органов мочеполовой системы, в том числе вирусные, занимают важное место в структуре причин мужского бесплодия (Тер-Аванесов Г.В. и др., 2004; Dejucq N. et al., 2001; Bezold G. et al., 2007). Мнения исследователей относительно роли ВПГ и ЦМВ в этиологии нарушений фертильности у мужчин расходятся от полного отрицания влияния герпесвирусов на процесс созревания мужских половых клеток (Eggert-Kruse W. et al., 2008; Neofytou E. et al., 2008) до установления прямой корреляции между вирусным инфицированием эякулята и мужским бесплодием (Kapranos N. et al., 2003; Bezold G. et al., 2007; Ochsendorf F.R., 2008).

В-третьих, инфицирование половых клеток предполагает возможность вертикальной передачи вируса при оплодотворении яйцеклетки пораженной гаметой, что может стать причиной самопроизвольного аборта или внутриутробной инфекции плода (Бочарова E.H. и др., 2003, 2006). Особую актуальность проблема вирусного инфицирования сперматозоидов приобрела в связи с развитием вспомогательных репродуктивных технологий, поскольку искусственная селекция мужских гамет может нарушить естественные механизмы отбраковки инфицированных гамет и стать причиной заражения яйцеклетки.

Кроме того показано, что у лиц, выделяющих герпесвирусы с эякулятом, возрастает риск заражения другими инфекционными агентами, в частности ВИЧ (Detels R. et al., 1994).

Цель и задачи исследования

Цель настоящего исследования заключалась в оценке влияния ВПГ и ЦМВ на сперматогенез.

Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи:

1. Оценить частоту выявления ВПГ и ЦМВ в эякуляте пациентов с нарушением фертильности по сравнению со здоровыми мужчинами.

2. Изучить влияние ВПГ и ЦМВ на основные показатели качества спермы (концентрацию сперматозоидов, количество подвижных и морфологически нормальных форм сперматозоидов) и на созревание половых клеток.

3. Оценить возможность внутригаметной локализации герпесвирусов.

4. Разработать модель герпесвирусной инфекции (ГВИ) мужских гонад in vitro.

5. Оценить влияние острой ВПГ-инфекции (ВПГИ) на сперматогенный эпителий мыши.

6. Выявить половые и соматические клетки мужских гонад, чувствительные к герпесвирусам.

7. Изучить изменения структуры диплоидных фибробластов человека под действием ЦМВ при низкой множественности инфицирования (МИ).

Научная новизна и практическая значимость

1. Впервые показаны сезонные различия частоты выделения ВПГ и ЦМВ с эякулятом.

2. Установлена связь между присутствием ВПГ в эякуляте и первичным бесплодием у мужчин.

3. Выявление ВПГ и ЦМВ во фракции подвижных сперматозоидов (ПС) указывает на необходимость исследования эякулята на маркеры герпесвирусов перед осуществлением вспомогательных репродуктивных технологий, в ходе обследования кандидатов на донорство спермы, а также при планировани семьи.

4. Для изучения влияния герпесвирусов на сперматогенез разработана модель ГВИ мужских гонад in vitro.

5. Впервые вирусные капсиды типа С выявлены в ядрах сперматогоний и сперматоцитов.

6. Впервые на ультраструктурном уровне описана локализация сверхраннего белка 1Е-рр72 ЦМВ в околоядерном включении - предполагаемом сайте окончательной сборки вируса.

7. Выявление 1Е-рр72 ЦМВ в плотных тельцах (ПТ), обладающих способностью проникать в клетки, указывает на то, что выявление указанного белка в клетке без других маркеров инфекции может быть следствием пассивного переноса вирусных антигенов.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Показано, что у мужчин без клинических признаков инфекции мочеполового тракта частота выявления ВПГ с эякулятом составляет в среднем 27,3%, ЦМВ - 8,8%, с максимумом выделения герпесвирусов в зимние месяцы (ВПГ - 34%, ЦМВ - 15,7%).

2. Установлена прямая корреляция между инфицированностью эякулята ВПГ и первичным бесплодием.

3. Инфекционно-активный ВПГ и ЦМВ и ДНК герпесвирусов выявлены не только в цельном эякуляте (ЦЭ), но и во фракции ПС.

4. На ультраструктурном уровне выявлена способность ВПГ проникать в ядра клеток-предшественников сперматозоидов мыши, а также высокая чувствительность клеток интерстиция к ВПГ.

5. При заражении фибробластов ЦМВ с низкой МИ на поздних стадиях инфекции выявлено накопление сверхраннего белка 1Е-рр72 в околоядерном включении в составе ПТ.

Апробация работы

Основные положения работы были представлены на школе-семинаре «Горизонты современной микроскопии» (Пущино, 2007г.), ХП-й Российской конференции по электронной микроскопии (Черноголовка, 2008г.), Н-й ежегодной конференции молодых ученых НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского РАМН (Москва, 2009г.), П-м международном конкурсе молодых ученых в области нанотехнологий (Москва, 2009г.). В завершенном виде доклад по диссертационной работе прошел предварительную экспертизу на совместном заседании отдела молекулярной вирусологии, отдела прикладной вирусологии и иммунологии, лаборатории биохимии института экспериментальной ветеринарии и совета по предварительной экспертизе диссертационных работ НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского РАМН от 24 сентября 2009 г. Публикации

По материалам исследования опубликовано 6 работ, из них 3 - в журналах, рекомендуемых ВАК РФ. Структура и объем диссертации

Диссертация изложена на 182 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора данных литературы, описания материалов и методов исследования, результатов собственных исследований, обсуждения, выводов и списка литературы. Работа иллюстрирована 26 рисунками, содержит 14 таблиц. Список литературы включает 356 источников (39 отечественных и 317 зарубежных).

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Пациенты. За период с октября 2005 г. по сентябрь 2008 г. был исследован эякулят от 808 мужчин без клинических признаков инфекции урогенитального тракта. Из общего числа обследованных пациентов были выделены три группы: группу 1 (п=201) составили мужчины, обратившиеся по поводу первичного бесплодия в браке неясной этиологии; группу 2 (п=37) - мужчины, у жен которых в анамнезе был по крайней мере один случай невынашивания беременности неясной этиологии. В группу 3 (сравнения) вошли 54 из 121 практически здоровых мужчины, проходивших обследование для включения в группу доноров спермы, у которых показатели спермограммы соответствовали нормативам ВОЗ. Образцы от всех 808 мужчин, в том числе не вошедших в группы 1-3, были изучены на вирусные маркеры для определения частоты встречаемости герпесвирусов в популяции.

Клинический материал. Маркеры ВПГ и ЦМВ определяли в ЦЭ, а также во фракциях неподвижных сперматозоидов (НС) и ПС, полученных при градиентном центрифугировании.

Животные. Опыты проводили на мышах линии DBA, 5-6-месячных самцах с массой тела 18-22 г, полученных из Центрального питомника лабораторных животных «Крюково» РАМН.

Клеточные культуры. В работе использовали диплоидные фибробласты легкого эмбриона человека (ФЛЭЧ), полученные из Медико-генетического научного центра РАМН (Москва) и перевиваемую культуру клеток почек зеленой мартышки Vero, полученную из лаборатории культур тканей НИИ вирусологии им. Д. И. Ивановского РАМН. Для культивирования ФЛЭЧ и Vero использовали соответственно среды ДМЕМ и Игла MEM, содержащие 10% эмбриональной телячьей сыворотки (ЭТС), 2 мМ L-глутамина, 50 мкг/мл гентамицина.

Вирусы. В работе использовали референс штаммы ВПГ-1 F и ЦМВ AD 169, а также клинические изоляты ЦМВ, выделенные от пациентов с установленной ЦМВ-инфекцией (ЦМВИ). Вирусы поддерживали путем пассирования на культуре чувствительных клеток: ФЛЭЧ (ЦМВ) и Vero (ВПГ-1).

Определение инфекционной активности ВПГ-1 и ЦМВ. Инфекционный титр ВПГ-1 и ЦМВ, характеризующий активность вируса, определяли модифицированным методом бляшек на культуре чувствительных клеток. Для титрования готовили возрастающие десятикратные разведения вируса. Очаги инфицированных клеток (бляшки) выявляли иммуноцитохимическим методом с использованием смеси моноклональных антител (МКА): к сверхраннему и позднему белкам ВПГ; к

сверхраннему и раннему белкам ЦМВ. Титр вируса выражали в количестве бляшкообразующих единиц, содержащихся в 1 мл (БОЕ/мл).

Спермиологическое обследование проводили согласно Руководству ВОЗ (WHO, 1999). Оценивали основные параметры спермограммы: концентрацию и степень подвижности сперматозоидов, количество морфологически нормальных форм.

Количественное кариологическое исследование. Нативный эякулят обрабатывали гипотоническим раствором КС1 (0,55%) центрифугировали 10-15 мин при 1500 об/мин. Полученный клеточный осадок фиксировали в метаноле и ледяной уксусной кислоте, многократно пипетируя осадок в фиксаторе. Полученную суспензию клеточных ядер раскапывали на охлажденные влажные предметные стекла с высоты 25 см, по 4-5 капель на стекло. Препараты проносили над газовой горелкой и сушили на воздухе в течение 12-24 ч. Окраску ядер осуществляли по Романовскому-Гимза в течение 8 мин. Подсчитывали ядра клеток на разных стадиях их развития: предпахитенного этапа, пахитены, диплотены, метафазы I и И мейоза, вторичных сперматоцитов и сперматид, а также ядра дегенерирующих половых клеток (Х-клеток). Определяли долю незрелых половых клеток (НПК) каждой стадии от общего числа подсчитанных клеток. Отдельно выделяли группу сперматоцитов II и сперматид с нерасхождением соответственно в метафазе I и II мейоза. Индекс НПК определяли как содержание НПК в общем количестве половых клеток на препарате. Для каждого образца эякулята подсчитывали не менее 200300 НПК.

Быстрый культуральный метод (БКМ) выполняли в соответствии с Методическими рекомендациями, утвержденными Роспотребиадзором ,

Для выявления ВПГ в культуру клеток Vero вносили 0,2 мл образцов и инкубировали в течение 1 ч при температуре 37°С в атмосфере 5% СОг. Через 24 ч клетки фиксировали холодным ацетоном в течение 30 мин при 4°С и проводили детекцию белков ВПГ в реакции непрямой иммунофлюоресценции.

Для выявления ЦМВ в культуру клеток ФЛЭЧ вносили 0,2 мл исследуемых образцов, центрифугировали в течение 35 мин. при 2500 об./мин в цитоцентрифуге. Далее клетки отмывали, вносили среду поддержки и культивировали в течение 48 часов при температуре 37°С в атмосфере 5% СОг. Затем клетки фиксировали в охлажденном метаноле (-20° С) в течение 20 мин и проводили детекцию ЦМВ-инфицированных клеток методом иммунопероксидазного окрашивания.

Результаты выявления белков ВПГ и ЦМВ выражали в количестве окрашенных клеток на 2,5x105 клеток чувствительной культуры.

Реакция непрямой иммунофлюоресценции (нИФ). На фиксированные препараты в концентрации 0,025 мг/мл наносили МКА, полученные к общей антигенной детерминанте ВПГ 1-го и 2-го типа и охарактеризованные в НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского РАМН (Климова P.P. и др., 1999). Инкубировали в течение 1 часа во влажной камере при 37°С. Затем промывали проточной водой и наслаивали антивидовую сыворотку, меченную FITC, и инкубировали в течение 30 минут при 37°С.

Реакция иммунопероксидазного окрашивания. На фиксированные препараты в концентрации 0,02 мг/мл наносили МКА к белкам ЦМВ, полученные и охарактеризованные в НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского РАМН (Макарова Н.Е. и др., 1995). Инкубировали в течение 1 часа при 37°С. Затем трижды промывали фосфатно-солевым буфером и наносили кроличьи антимышиные иммуноглобулины, меченные пероксидазой. После инкубации в течение 1 часа при 37°С клетки промывали, как описано выше, и наносили субстрат, состоящий из 0,5мг/мл диаминобензидина в 0,05М TRIS-HCL, рН-8.0 с добавлением 3% раствора Н202.

Полимеразная цепная реакция (ПЦР). ДНК ВПГ и ЦМВ во фракции подвижных сперматозоидов определяли с помощью ПЦР, используя сертифицированные коммерческие наборы ФГУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора. Выделение вирусной ДНК ВПГ и ЦМВ производили с помощью наборов «ДНК-сорб-А-М», «ДНК-сорб-В». Для ПЦР-амплификации использовали комплект реагентов «АмлиСенс HSV 1,2 типов» для выявления ДНК ВПГ и «АмплиСенс ЦМВ» для обнаружения ДНК ЦМВ.

Полимеразная цепная реакции в реальном времени (ПЦР-рв). ПЦР в полуколичественном варианте с детекцией в режиме реального времени проводили с помощью сертифицированных коммерческих наборов ФГУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора «АмлиСенс HSV 1, 2 типов-FRT», «АмлиСенс ЦМВ FRT».

Получение органной культуры мужских половых желез. Половозрелых (5-6 месячных) самцов мышей линии DBA забивали путем дислокации шейного отдела позвоночника, после чего извлекали семенники и в стерильных условиях аккуратно разделяли их на фрагменты объемом 3 мм3. Биопсийный материал от 10 пациентов с азооспермией, которым в клинике проводили пункцию яичек для получения сперматозоидов, транспортировали в среде ДМЕМ, содержащей 300 мкг/мл гентамицина и, не позднее чем через 4 часа, в стерильных условиях разделяли на фрагменты объемом 3 мм3. Фрагменты органа культивировали в 6-луночных планшетах со вставками, содержащими полупроницаемую мембрану с диаметром пор 0,8 мкм. В каждую лунку планшета вносили по 2 мл обогащенной среды ДМЕМ, содержащей 10% ЭТС, 1 ммоль/л пирувата натрия, 4 ммоль/л глутамина, 100 нг/мл витамина А,

200 нг/мл витамина Е, 50 нг/мл витамина С, 10 мкг/мл инсулина, 5 мкг/мл трансферрина, 50 мкг/мл гентамицина. Культивирование производили при 37°С в атмосфере 5% СОг со сменой среды через каждые 2 дня.

Заражение органной культуры. Фрагменты семенника мыши заражали ВПГ-1. Биопсийный материал от 5 пациентов заражали ВПГ-1, другие 5 пунктатов - ЦМВ. Заражение органной культуры производили путем наслаивания 0,025 мл инокулята вируса на фрагмент органа с последующей инкубацией в течение 1ч при 37°С в атмосфере 5% С02. ИМ ВПГ-1 составляла 0,1-1 БОЕ/кл, ИМ ЦМВ - 0,001-0,01 БОЕ/кл. После промывки в 1 мл ДМЕМ фрагменты органа культивировали в течение 16 дней. В качестве контроля использовали незараженную органную культуру.

Выявление ДНК герпесвирусов и инфекционно-активного вируса в органной культуре семенника мыши проводили на 2-й, 4-й, 6-й, 8-й, 10-й, 12-й, 16-й дни инфекции ВПГ, в культуре яичка человека - на 4-й день после инфицирования ВПГ, на 6-й день при заражении ЦМВ. Для этого фрагменты органа гомогенизировали в 0,5 мл среды ДМЕМ. В полученном гомогенате определяли инфекционно-активный вирус БКМ, присутствие вирусной ДНК - методом ПЦР-рв. В каждой изученной точке анализировали по 2 зараженных и контрольных фрагмента.

Детекция вирусных белков в органной культуре. Для выявления вирусных белков готовили парафиновые срезы зараженных и контрольных фрагментов семенника мыши до заражения (в «нулевой» день), а также на 1-й, 2-й, 3-й, 4-й, 6-й, 8-й, 9-й, 10-й, 12-й, 16-й дни после инфицирования. Парафиновые срезы яичка человека готовили на 4-й день после заражения ВПГ и на 6-й день после заражения ЦМВ. После депарафинизации в нисходящем градиенте спиртов проводили детекцию антигенов в реакции нИФ с использованием МКА к ВПГ и ЦМВ, как описано выше.

Гистологический анализ органной культуры. Зараженные и контрольные фрагменты семенника мыши фиксировали в течение 24 часов в растворе Буэна, после чего промывали, проводили через восходящий градиент спиртов и заключали в парафин. Срезы толщиной 4 мкм помещали на стекла, депарафинизировали, окрашивали гематоксилином. Анализ срезов проводили до заражения ВПГ, а также на 1-й, 2-й, 3-й, 4-й, 6-й, 8-й, 9-й, 10-й, 12-й, 16-й дни после инфицирования. Подсчет клеток сперматогенеза проводили не менее чем на 3-х зараженных и 3-х контрольных стеклах в каждой точке фиксации, в 100 семенных канальцах на стекле. При анализе учитывали клеточный состав сперматогенного эпителия, для чего мужские половые клетки классифицировали по 4-м стадиям развития: сперматогонии, сперматоциты I-II, сперматиды, сперматозоиды. Для оценки сперматогенеза на различных стадиях

культивирования in vitro использовали индекс сперматогенеза (ИС), который рассчитывали следующим образом:

(кол-во канальцев с 4-мя стадиями х 4 + кол-во канальцев с 3-мя стадиями х 3 + кол-во канальцев с 2-мя стадиями х 2 + кол-во канальцев с 1-ой стадией х 1) / 100.

Количественное кариологическое исследование эякулята и гистологический анализ органной культуры выполнены совместно с ведущим научным сотрудником лаборатории генетики нарушений репродукции МГНЦ РАМН, кандидатом биологических наук JI.B. Шилейко (руководитель лаборатории - профессор Л.Ф. Курило).

Ультраструктурный анализ органной культуры. Электронную микроскопию зараженной и контрольной органной культуры семенника мыши проводили на 2-й, 4-й, 6-й, 8-й, 10-й, 12-й и 16-й дни инфекции. Для этого в каждой точке фиксации по 2 инфицированных и контрольных фрагмента органа помещали на 24 часа в 2,5% глютаровый альдегид с последующей 40-минутной фиксацией в 1% 0s04. После фиксации проводили дегидратацию в восходящем градиенте спиртов и заключали материал в Ероп-812. Ультратонкие срезы после окраски уранилацетатом и цитратом свинца изучали в электронном микроскопе.

Инфицирование клеток ФЛЭЧ. Клетки ФЛЭЧ в концентрации 250 тыс/мл высаживали во флаконы, а также на покровные стекла в 24-лупочные планшеты и культивировали при 37°С в атмосфере 5% СОг в течение 48 часов до получения монослоя. Заражение осуществляли путем инкубации клеток с лабораторным штамом AD169 или клиническим изолятом ЦМВ в течение 1 ч при 37°С с разной МИ: высокой (0,1-1 БОЕ/кл) и низкой (0,0025-0,005 БОЕ/кл). Незараженные клетки использовали в качестве отрицательного контроля. Инфицированные и контрольные ФЛЭЧ отмывали и культивировали в 24-луночных планшетах и во флаконах в ДМЕМ с 2% ЭТС при 37°С в атмосфере 5% СОг.

Иммунофлюоресцентная и конфокальная микроскопия ФЛЭЧ. Клетки, культивируемые на стеклах, промывали и фиксировали в ацетоне в течение 30 мин при температуре -20°С. Фиксацию проводили через каждые 24 ч (по 2 стекла зараженных и контрольных стекол на каждую точку фиксации) вплоть до развития 100%-го цитопатогенного действия. После фиксации проводили реакцию нИФ с использованием МКА к ЦМВ, как описано выше. Для проведения конфокальной микроскопии образцы дополнительно окрашивали флуоресцентным ядерным красителем Hoechst 33342. Препараты, заключенные в мовиол, анализировали в конфокальном микроскопе.

Ультраструктурный анализ ФЛЭЧ, зараженных с низкой МИ, проводили на 3-й, 5-й, 7-й дни инфекции. Для этого клетки, культивируемые во флаконах, снимали методом

трипсинизации, центрифугировали при 1500 об/мин. Полученный осадок фиксировали в 2,5% глютаровом альдегиде, затем в 1% OsC>4 и проводили просвечивающую электронную микроскопию, как описано выше.

Иммуноэлектронная микроскопия. На 3-й, 5-й и 7-й дни инфекции клетки ФЛЭЧ фиксировали в 0,1% глютаровом альдегиде и 4% параформальдегиде, обезвоживали и заключали в LR White. На ультратонкие срезы наносили МКА к белкам 1Е-рр72 или рр65 ЦМВ, затем антитела к иммуноглобулинам мыши, конъюгированные с частицами золота размером 10 нм. Для анализа накопления 1Е-рр72 ЦМВ в инфицированных клетках использовали МКА, полученными в НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского РАМН и коммерческие МКА к указанному белку. В качестве отрицательных контролей при иммуноцитохимическом окрашивании использовали неинфицированные ФЛЭЧ, а также препараты, приготовленные по описанной методике с исключением МКА.

Статистическая обработка. Для статистической обработки результатов использовали пакет прикладных компьютерных программ «STATJSTICA 6,0» и «BIOSTAT». Межгрупповые различия относительных показателей анализировали с помощью критерия хи-квадрат. Для сравнения непараметрических данных использовали критерий Манна-Уитни.

Степень личного участия автора: вирусологический анализ эякулята на ЦМВ; иммуноцитохимическое изучение белков ЦМВ в клетках ФЛЭЧ; получение модели ГВИ мужских гонад in vitro; вирусологический и иммуноцитохимический анализ культуры мужских гонад; электронная, конфокальная, флюоресцентная микроскопия; статистическая обработка материала.

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ОБСУЖДЕНИЕ 1. Влияние ВПГ и ЦМВ на фертильность мужчин

1.1. Частота обнаружения ВПГ и ЦМВ в эякуляте

Для оценки частоты выделения герпесвирусов с эякулятом исследовали материал от 675 мужчин на маркеры ВПГ, от 475 мужчин - на маркеры ЦМВ. Инфекционно-активный вирус и/или ДНК ВПГ выявили в эякуляте 184 человек (27,3%). Аналогичные маркеры ЦМВ обнаружены в эякуляте 42 мужчин (8,8%). Полученные результаты позволяют оценить частоту бессимптомного выделения герпесвирусов, поскольку ни у одного из пациентов, в эякуляте которых обнаружены ВПГ и/или ЦМВ, на момент обследования не выявлено клинических признаков инфекции.

При сравнении частоты выделения герпесвирусов с эякулятом в различные месяцы обнаружены различия в частоте выявления ВПГ зимой по сравнению с остальными месяцами года: 33,7% (68/202) и 24,5% (116/473) соответственно (р=0,019). Частота обнаружения ЦМВ зимой также оказалась выше: 15,7% (17/108) зимой против 6,8% (25/367) в остальное время года (р=0,007).

Сезонные колебания, возможно, связаны с изменениями температуры окружающей среды или же отражают зимнюю иммунодепрессию, вследствие чего происходит реактивация герпесвирусов. Другое объяснение может заключаться в том, что сам процесс созревания половых клеток подвержен сезонным колебаниям (Chen Ъ. et al., 2003; Yogev L. et al., 2004). Возможно, сезонные факторы (в частности, гормональные), регулирующие активность сперматогенеза, обусловливают реактивацию герпесвирусных инфекций в зимние месяцы.

1.2. Выявление ВПГ и ЦМВ в эякуляте мужчин с нарушениями фертилыюсти

Проводили сравнительный анализ частоты встречаемости ВПГ и ЦМВ в эякуляте мужчин 3-х исследуемых групп: пациентов с первичным бесплодием (группа 1); мужчин, жены которых имеют в анамнезе случаи привычного невынашивания беременности (группа 2) и практически здоровых лиц (группа 3). Данные приведены в Таблице 1.

Из Таблицы 1 видно, что инфекционно-активный ВПГ был выявлен БКМ чаще у пациентов с первичным бесплодием, чем в группе сравнения как в ЦЭ, так и во фракции ПС. Оценка выявляемое™ ВПГ по крайней мере в одной фракции эякулята позволила констатировать высокую (55%) суммарную инфицированность эякулята у обследованных лиц. Показатели инфицированности ВПГ различных фракций эякулята мужчин группы 2 не отличались от таковых в группе сравнения. Статистически значимых межгрупповых различий в частоте встречаемости ЦМВ не выявлено.

Тл'-™7 г .»'•

К-ЙяЙ .¿/¿»■и,- «V . % 4

А*МшВ9Тг '»¿Л. • - . "г •• >*' - '¿Г ..-V» • V- у

V . - : -

' , ■ „ % ■___:_,_—1_

К*,-../.'*- - "Л. «•■.

г4- . - "/ *

/ * • ' -X.

• _■ зоиы

-Г ' _" ' '"г' 1_

С ч>>, ><4'; • С

* • О' , ■ ,

■ ' - - ■ ■ *'

I л. ^

• - -я», .V ' -

.V» ,

• ».• I »г, * '!

» "Г* Л

' 7

« • ___

50ит

Рисунок 1. Гистологический анализ неинфицированного фрагмента семенника мыши до начала культивирования (А), на 3-й день культивирования (Б) и зараженного ВПГ фрагмента семенника на 3-й день культивирования (В); 1 - сперм атогонки; 2 - сперматоциты 1, II; 3 - сперматиды, 4 -сперматозоиды; 5 — вакуоли.

Рисунок 2. Ультраструктура сперматоцита из фрагмента семенника мыши в органной культуре. Капсиды ВПГуказаны стрелками. На вставке - капсид типа С.

в • % Л ^ * • | „ / « • о. 0.4ит

О О * * '«е.* / 7 • о • о е о • е о 1 ^ л**'-. ¿Ш1 -

-; # О о • о12 о ' 4 . '.А ¡4

* 4 - * Ал * • О; .58 - • о • ¿Ц V г 111 • •

) V« ■

Рисунок 3. Ультраструктура клетки интерстиция из фрагмента семенника мыши в органной культуре. Капсиды ВПГ указаны стрелками. На вставке - капсиды типа А и С.

Рисунок 4. Иммнофлюоресцентное окрашивание фибробластов антителами к 1Е-рр72 и конъюгатом с FITC на 3-й (А), 5-й (Б) и 7-й (В) дни инфекции. (Г-М) - конфокальная сканирующая микроскопия трех различных клеток с околоядерными включениями на 7-ой день инфекции: (Г, Ж, К) - IE-pp72 (FITC); (Д, 3, Л) - ДНК (Hoechst); (Е, И, М) -результаты наложения сигналов (FITC+ Hoechst). Стрелками указано накопление IE-рр72 в околоядерном включении.

Рисунок 5. Электронная микроскопия фибробластов на 5-й (А, Б) и 7-й (В-Е) дни инфекции. (Б) и (Г) - увеличенные фрагменты, выделенные на (А) и (Г) соответственно. (Д-Е) - иммуноэлектронная микроскопия плотных телец с использованием МКА к 1Е-рр72 (Д), рр65 (Е) и конъюгата с частицами золота диаметром 10 нм; Я - ядро; ОЯВ -околоядерное включение; ПТ- плотные тельца; К - капсиды.

Таблица 1

Частота выявления ннфекцнонно-активного ВПГ в различных фракциях эякулята мужчин быстрым культуральным методом и ДНК ВПГ методом ПЦР

Группы пациентов БКМ ПЦР

ЦЭ НС ПС По крайней мере в одной фракции ПС

группа 1 (первичное бесплодие) 63/201г (31%) 12/33 (36%) 10/33 п (30%) 18/33 (55%) 27/128 (21%)

группа 2 (привычное невынашивание беременности) 15/37 (21%) 5/22 (23%) 4/22 (18%) 5/22 (23%) 5/24 (21%)

группа 3 сравнения (практически здоровые) 9/54+ (17%) 9/48 (19%) 4/48" (8%) 13/48 (27%) 7/60 (11%)

Примечание: Жирным шрифтом выделены значения, между которыми выявлены статистически значимые различия: р=0,049; пр=0,016 (критерий хи-квадрат): ЦЭ - цельный эякулят, НС - фракция неподвижных сперматозоидов, ПС - фракция подвижных сперматозоидов

Обращает на себя внимание тот факт, что и ВПГ, и ЦМВ были обнаружены во фракции ПС. В 47% случаев после отмывки сперматозоидов методом градиентного центрифугирования вирусная нагрузка во фракции ПС не уменьшалась по сравнению с ЦЭ. Приведенные данные косвенно свидетельствует о возможности внутригаметной локализации герпесвирусов. Проблема вирусного инфицирования подвижных сперматозоидов представляется актуальной в свете развития вспомогательных репродуктивных методов и ставит вопрос о разработке стандартов диагностики ВПГ- и ЦМВ-инфекции половых клеток при планировании семьи. 1.3. Влияние ВПГ и ЦМВ на основные показатели спермограммы

Для оценки влияния ВПГ и ЦМВ на основные показатели качества спермы анализировали спермограммы обследованных мужчин вне зависимости от поставленного диагноза (Таблица 2). Было установлено, что у пациентов, в эякуляте которых выявлен инфекционно-активный ВПГ (ВПГ+), снижена доля ПС и относительное количество морфологически нормальных гамет по сравнению с мужчинами, у которых ВПГ не был обнаружен (ВПГ-). В то же время присутствие ЦМВ в эякуляте обследованных пациентов существенно не влияло на подвижность и морфологию сперматозоидов (Таблица 2).

Таблица 2

Влияние ВПГ и ЦМВ в эякуляте на основные показатели спермограммы обследованных мужчин

Показатели спермограммы Герпесвирусы в эякуляте обследованных пациентов

ВПГ+ (п=101) ВПГ-(п=214) ЦМВ+ (п=10) ЦМВ-(п=275)

Концентрация сперматозоидов (106/мл) норма >20х106 64' [0; 415] 60 [0; 504] 37 [0,35; 96] 62 [0; 504]

р=0,299" р=0.058

Подвижность сперматозоидов (а+Ь, %) норма >50% 21 [0; 86] 40 [0; 85,5] 23.5 [0; 72] 31 [0; 88]

р=0,0001 р=0.27

Количество морфологически нормальных форм (%) норма >30% 13 [0; 56] 19 [0; 67] 13 [0; 78] 15 [0; 78]

р=0,002 Р=0,7

Примечание: * - данные представлены в медианах [минимальное; максимальное значения] ** - различия статистически значимы при р<0,05 (критерий Манна-Уитни)

1.4. Влияние ВПГ и ЦМВ на состав популяции незрелых половых клеток в эякуляте мужчин с нарушениями фертилыюсти

Для оценки влияния ВПГ и ЦМВ на сперматогенез исследовали состав популяции НПК в эякуляте 128 пациентов с нарушениями фертильности (группа 1 и группа 2). При этом разделение пациентов на группы проводили в соответствии с результатами выявления вирусных маркеров (ДНК и/или инфекционно-активного вируса) в эякуляте: ВПГ-положительные (ВПГ+, п=89), ЦМВ-положительные (ЦМВ+, п=20) пациенты, а также мужчины с нарушениями фертильности, у которых герпесвирусы в эякуляте не были выявлены (ВПГ-/ЦМВ-, п=25).

Из Таблицы 3 видно, что у пациентов с ВПГ в эякуляте выявлено увеличение числа дегенерирующих половых клеток (Х-клеток) по сравнению с контрольной группой. Далее в отдельную группу выделили пациентов (п=19), у которых вирусная нагрузка в эякуляте составила более 5 вирусных частиц в мл. Сравнительный анализ этой группы с неинфицированными пациентами подтвердил повышение числа Х-клеток, а также позволил выявить снижение количества сперматоцитов II и сперматид в присутствии ВПГ.

Таблица 3

Состав популяции незрелых половых клеток у ВПГ-инфмцированных пациентов

Исследуемые группы До пахи-тены Пахи-тена Дипло-тена МЦ1* Сперма-тоциты-П, сперматиды В т.ч. нерасхождение X- клетки Индекс НПК

ВПГ-/ЦМВ-, п=25 3,3** 0 0,43 0 86,5т 24,5 7,6' п 8,28

ВПГ+, п=89 2,2 0 0 0 83,2 23 13,2Т 7,4

ВПГ+, высокая вир.нагрузка, п=19 1,6 0 0 0 80,9т 31,2 15,8" 6,3

Примечания:*М 1,11 - клетки в метафазе I и II мейоза; ** - данные представлены в медианах; жирным шрифтом выделены значения, между которыми выявлены статистически значимые различия:* р=0,006,^р=0,01,^р=0,02(критерий Манна-Уитни).

При сравнении популяции НПК в группах пациентов ЦМВ+ и ВПГ-/ЦМВ- также обнаружено повышение количества Х-клеток в присутствии ЦМВ. В группе пациентов с высоким содержанием ЦМВ в эякуляте (п=15) обнаружено повышение числа Х-клеток, а также снижение количества сперматоцитов II и сперматид (Таблица 4).

Таблица 4

Состав популяции незрелых половых клеток у ЦМВ-инфицированных пациентов

Исследуемые группы До пахи-тена Пахи-тена Дилло-тена М1Д1 Сперма-тоциты-П, сперматиды В т.ч. нерасхождение. X- клетки Индекс НПК

ВПГ-/ЦМВ-п=25 3,3 0 0,43 0 86,5т 24,5 7,6+ " 8,28

ЦМВ+, п=20 2,55 0 0 0 79,5 24,05 16,2+ 5,6

ЦМВ+, высокая вир.нагрузка, п=15 2,90 0 0 0 78,3+п 20 16,4П 5,9

Примечание: обозначения те же, что в Таблице 3:т р=0,04 , п р=0,047 , т р=0,03.

Таким образом, в ходе настоящего исследования было показано, что 1) ВПГ чаще встречается в эякуляте мужчин с нарушениями фертильности; 2) присутствие ВПГ в эякуляте коррелирует со снижением количества подвижных и морфологически нормальных форм сперматозоидов; 3) под воздействием ВПГ происходит нарушение

созревания мужских половых клеток. Приведенные данные позволяют предположить участие ВПГ в развитии бесплодия у мужчин.

Несмотря на то, что в эякуляте ЦМВ-инфированных мужчин также показано изменение состава популяции НПК, не было выявлено ни различий в частоте встречаемости ЦМВ в эякуляте пациентов с нарушениями фертильности и здоровых мужчин, ни влияния вируса на основные показатели спермограммы. Учитывая относительно низкую частоту выявления ЦМВ в эякуляте (0,5-5%), необходимо проведение более масштабных исследований для оценки участия ЦМВ в развитии бесплодия у мужчин.

2. Изучение герпеевнрусной инфекции мужских гонад in vitro 2.1. Изучение влияния ВПГ на сперматогенный эпителий in vitro

Для оценки влияния ВПГ на сперматогенез и исследования локализации вируса в клетках семенных канальцев была разработана модель ВПГИ мужских гонад in vitro. Для этого получали органную культуру семенника мыши по методике, предложенной Roulet V. et al. (2006), с модификациями. Заражение осуществляли с высокой МИ (0,1-1 БОЕ/кл.). В качестве отрицательного контроля использовали неинфицированную органную культуру. Эффективность заражения была подтверждена выявлением ДНК и антигенов ВПГ, а также инфекционно-активного вируса в зараженных фрагментах органа.

Проводили сравнительный гистологический анализ культуры семенника мыши на различных стадиях культивирования in vitro. Для количественной оценки влияния ВПГ на герминативный эпителий подсчитывали количество канальцев с раличным числом генераций половых клеток в контрольной и инфицированной культуре семенника мыши в динамике.

На Рисунке 1А показаны 4 генерации клеток сперматогенеза (сперматогонии, сперматоциты I-II, сперматиды, сперматоциты) на препарате, приготовленном до начала культивирования (в «нулевой» день). Уже на 3-й день культивирования в инфицированной культуре семенника (Рисунок 1В) наблюдали явление разрыхления и вакуолизации сперматогенного эпителия вдоль базальной мембраны и в зоне сперматоцитов I-II. В контрольной культуре на этом сроке также были отмечены изменения морфологии сперматогенного эпителия, которые были выражены в значительной меньшей степени (Рисунок 1Б).

Было установлено, что для канальцев с 3-мя генерациями половых клеток характерно отсутствие сперматоцитов I-II либо сперматид, в то время как сперматогонии и сперматозоиды содержались во всех таких канальцах. В 80% случаев канальца, содержащие 2 вида половых клеток, были представлены сперматогониями и

сперматозоидами, в 20% - сперматоцитами и сперматидами. Канальца, содержащие одну стадию развития половых клеток, в 80% случаев содержали сперматозоиды, в 20% -сперматогонии. Канальца, содержащие только клетки Сертоли (не содержащие половых клеток), характеризовали как канальца с запустением.

Результаты сравнительного гистологического анализа представлены в Таблице 5.

Таблица 5

Анализ числа канальцев с различным количеством генераций половых клеток в контрольной и в зараженной ВПГ органной культуре фрагментов семенника мыши

дни 4 стадии, % 3 стадии, % 2 стадии, % 1 стадия, % Запустение, %

К О К О К О К О К О

0 83* 83 17 17 0 0 0 0 0 0

2 46 20 54 67 0 11 0 1 0 1

р<0.001** р=0.061 р=0.002 Р=1 Р=1

3 39 | 8 54 | 46 7 | 43 0 | 2 0 1 1

р<0.001 р=0.258 р<0.001 р=0.477 Р=1

4 28 | 5 59 | 34 13 1 49 0 | 12 0 1 0

р<0.001 р<0.001 р<0.001 р=0.001 Р=1

6 9 | 0 47 | 27 38 | 55 6 1 17 0 1 2

р=0.012 р=0.003 р=0.023 р=0.027 р=0.477

9 0 | 0 10 | 7 69 | 63 21 | 29 0 | 1

Р=1 р=0.434 р=0.455 р=0.194 Р=1

10 0 1 0 10 | 2 77 | 51 13 | 38 0 | 9

Р=1 р=0.037 р<0.001 р<0.001 р=0.006

16 0 1 0 5 | 0 75 | 8 20 | 59 0 1 33

Р=1 р=0.07 р<0.001 р<0.001 pcO.OOl

Примечание: К - контроль, О - опыт;

* данные представлены в медианах; **критерий хи-квадрат.

Снижение количества канальцев с 3-мя стадиями (на 2-4 дни инфекции) и 4-мя стадиями сперматогенеза (на 2-6 дни инфекции) в инфицированной культуре по сравнению с контрольной свидетельствует о вирусиндуцированной гибели сперматоцитов I-II и сперматид. На 9-й день инфекции не было выявлено различий в составе половых клеток в канальцах инфицированной и контрольной культуры, что может быть связано с тем, что сперматоциты I-II и сперматиды в условиях культивирования in vitro не выживали до 9-го дня. Прогрессивное снижение числа канальцев, содержащих одну и две генерации половых клеток, а также увеличение количества запустевших канальцев в инфицированной культуре по сравнению с контрольной на 10-16 дни инфекции отражают гибель сперматогоний и сперматозоидов под воздействием ВПГ.

Представленные данные позволяют заключить, что все клетки сперматогеного эпителия чувствительны к ВПГ, при этом в первую очередь поражаются сперматоциты III и сперматиды.

2.2. Выявление ВПГ и ЦМВ в органной культуре мужских гонад

Для выяснения вопроса о локализации вируса был проведен ультраструктурный анализ зараженной культуры семенника мыши. В интерстициальном пространстве органа на всех сроках инфекции были выявлены капсиды икосаэдрической формы размером 200 нм, с оболочкой и без нее. С 4-го по 8-й день инфекции наблюдали вирусные капсиды в дегенерирующих сперматоцитах - клетках с выраженной вакуолизацией цитоплазмы и округлыми ядрами с деконденсированным хроматином. На Рисунке 2 в ядре сперматоцита видны капсиды с электронно-плотной сердцевиной - капсиды типа С. На 8-й день инфекции капсиды типа А и С обнаружены в клетках, прилежащих к базальной мембране, которые идентифицировали как сперматогонии. С 6-го по 10-й день выявляли большое количество дегенерирующих половых клеток и клеток интерстиция, содержащих вирусные частицы (Рисунок 3).

Выявление ВПГ в сперматогониях и сперматоцитах свидетельствуют о принципиальной возможности заражения половых клеток, находящихся на ранних стадиях цитодифференцировки. Следует отметить, что в клетках интерстициальной ткани семенника мыши выявлены большие скопления вирусных капсидов (более 100 частиц), в то время как в ядрах инфицированных половых клеток редко находили более 10 вирусных капсидов. Возможно относительно низкий уровень репликации ВПГ в герминативных клетках позволяет им завершить последующие этапы сперматогенеза, что объясняет присутствие маркеров ВПГ в сперматозоидах.

Изучение влияния ЦМВ на сперматогенез проводили на органной культуре яичка человека. Несмотря на присутствие ДНК и антигенов ЦМВ в гомогенатах фрагментов семенника при ультраструктурном анализе клеток вирус обнаружить не удалось. Возможно, это связано с относительно низкой скоростью репликации и, как следствие, невысокой вирусной нагрузкой в пораженных тканях. Изучение некоторых особенностей репликации ЦМВ при низкой МИ проводили на хорошо изученной модели фибробластов человека.

2.3. Изучение ЦМВИ фибробластов человека in vitro при заражении с низкой множественностью инфицирования.

На модели ЦМВИ фибробластов исследовали внутриклеточную локализацию IE-рр72 в динамике, поскольку, как было показано ранее (Greaves R. F. et al., 1998; Gawn J. M. et al., 2002), указанный белок играет важную роль в морфогенезе вируса при низкой МИ и не влияет на эффективность репликации ЦМВ при высокой МИ.

В настоящей работе при помощи комплекса иммуноцитохимических методов и ультраструктурного анализа показано, что при заражении клеток ЦМВ с

МИ=0,005 БОЕ/кл на ранних стадиях инфекционного процесса 1Е-рр72 локализован в ядрах инфицированных клеток (Рисунок 4А), однако с 5-го дня после заражения происходит накопление данного белка в цитоплазме (Рисунок 4Б-В). Интактность ядерной мембраны и отсутствие ДНК в цитоплазматических сайтах накопления 1Е-рр72 указывают на то, что их происхождение не связано с кариолизисом (Рисунок 4Г-М).

Морфологические характеристики структур (Рисунок 5Г), в которых локализован 1Е-рр72 (Рисунок 5Д), а также присутствие в них рр65 (Рисунок 5Е) позволяют идентифицировать эти структуры как ПТ - цитоплазматические образования, включающие более чем 30 вирусных белков (Кхмгтап В. е! а!., 2007). Учитывая способность ПТ формировать собственную оболочку и проникать в интактные клетки, следует иметь в виду, что выявление 1Е-рр72 может быть следствием его пассивного транспорта в клетку в составе ПТ.

Сопоставление данных электронномикроскопических и иммуноцитохимических исследований (Рисунок 4, рисунок 5 ) указывают на то, что накопление 1Е-рр72 в составе ПТ происходит в околоядерном включении (ОЯВ), которое, по современным представлениям является сайтом окончательного формирования тегумента и оболочки вируса.

Выявление нового сайта локализации 1Е-рр72 указывает на участие изученного сверхраннего белка в нарушении структуры инфицированной клетки и открывает перспективы выяснения роли данного белка в морфогенезе вируса, определения его функционального значения в патогенезе ЦМВИ и усовершенствования диагностики бессимптомных форм инфекции.

Выводы

1. У мужчин без клинических проявлений инфекции урогенитального тракта частота выявления маркеров ВПГ в эякуляте составляет 27,3%, ЦМВ - 8,8%. Выделение герпесвирусов с эякулятом возрастает в зимние месяцы.

2. ВПГ чаще встречается у мужчин с первичным бесплодием, при этом выявлена корреляция между присутствием ВПГ и ухудшением показателей качества спермы, а также нарушением процесса созревания мужских половых клеток. Этиологическая роль ЦМВ в развитии бесплодия не доказана.

3. ВПГ и ЦМВ выявлены как в цельном эякуляте, так и во фракции подвижных сперматозоидов.

4. ВПГ оказывает гаметотоксическое воздействие на герминативный эпителий.

5. Показана возможность заражения как соматических клеток семенника, так и половых клеток, находящихся на ранних этапах цитодифференцировки.

6. В фибробластах человека, зараженных ЦМВ с низкой множественностью, в околоядерном включении впервые обнаружен сверхранний белок 1Е-1 рр72, находящийся в составе ПТ.

7. Разработка и внедрение в практику алгоритмов исследования эякулята на присутствие герпесвирусов позволяет оценить значение герпесвирусов в этиологии бесплодия и использовать этиотропное лечение, что уменьшает вероятность вертикальной передачи ВПГ и ЦМВ.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Науменко В.А., Маныкин A.A. Локализация сверхраннего белка рр72 цитомегаловируса человека в околоядерном включении // Тезисы докладов XII Российской конференции по электронной микроскопии. - Черноголовка, 2008. - С. 300.

2. Науменко В.А., Маныкин A.A. Применение конфокальной микроскопии к исследованию морфогенеза вируса иммунодефицита человека I типа // Вопросы вирусологии. - 2008. - Т 53. - №3. - С. 4-8.

3. Науменко В.А., Гаджиева З.С., Цибизов A.C. Выявление вируса простого герпеса в клетках сперматогенного эпителия на модели инфекции семенника мыши in vitro // Материалы II-го международного конкурса молодых ученых в области нанотехнологий. - Москва, 2009. - С.792-794.

4. Науменко В.А., Климова P.P., Курило Л.Ф., Шилейко Л.В., Гаврилов Ю.А., Яковенко С.А. Выявление вируса простого герпеса в эякуляте мужчин с нарушениями фертильности // Современные проблемы инфекционной патологии человека: сб. научн. тр. - Минск, 2009. - С. 350-354.

5. Науменко В.А., Маныкин A.A., Гущина Е.А., Федорова Н.Е., Павлова М.В., Кущ A.A. Локализация сверхраннего белка IE-1 рр72 цитомегаловируса человека в околоядерном включении на поздней стадии инфекции // Вопросы вирусологии. -2009.-№6.-С. 33-37.

6. Климова P.P., Науменко В.А., Курило Л.Ф., Шилейко Л.В., Гаврилов Ю.А., Альховский C.B., Брагина Е.Е., Кущ A.A. Влияние вируса простого герпеса на сперматогенез мыши при экспериментальной инфекции органной культуры фрагмента семенника // Андрология и генитальная хирургия. - 2009. - №4. - С. 35-40.

ИСПОЛЬЗОВАННЫЕ СОКРАЩЕНИЯ БОЕ - бляшкообразующая единица БКМ - быстрый культуральный метод ВПГ(-1,-2) - вирус простого герпеса (1-го, 2-го типа) ВПГИ - ВПГ-инфекция ГВИ - герпесвирусная инфекция МИ - множетвенность инфекции МКА - моноклональные антитела нИФ - непрямая иммунофлюоресценция НПК - незрелые половые клетки НС - неподвижные сперматозоиды ОЯВ - околоядерное включение ПС - подвижные сперматозоиды ПТ - плотные тельца ПЦР - полимеразная цепная реакция ПЦР-рв - полимеразная цепная реакция в реальном времени ФЛЭЧ - фибробласты легкого эмбриона человека ЦМВ - цитомегаловирус ЦМВИ - ЦМВ-инфекция ЦЭ - цельный эякулят ЭТС - эмбриональная телячья сыворотка IE - immediately-early (сверхранний)

Заказ № 150-а/10/09 Подписано в печать 28.10.2009 Тираж 100 экз. Усл. п.л. 1,5

ООО "Цифровичок", тел. (495) 649-83-30 Ц^Н/ www.cfr.ru; е-таИ: info@cfr.ru

Содержание диссертации, кандидата медицинских наук, Науменко, Виктор Алексеевич

ИСПОЛЬЗОВАННЫЕ СОКРАЩЕНИЯ.

ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР ДАННЫХ ЛИТЕРАТУРЫ.

Глава 1. Современные представления о морфогенезе вируса простого герпеса и цитомегаловируса.

1.1. Общая характеристика герпесвирусов.

1.2. Структура вириона.

1.3. Морфогенез.

1.4. Роль сверхраннего белка 1Е-рр72 в морфогенезе цитомегаловируса.

Глава 2. Герпесвирусная инфекция: эпидемиологические и патогенетические аспекты.

2.1. Эпидемиология.

2.2. Клиническая патология.

Глава 3. Общие понятия о сперматогенезе.

3.1. Строение мужских гонад.

3.2. Митоз и мейоз в сперматогенезе.

3.3. Спермиогенез.

3.4. Созревание сперматозоидов в семявыводящих путях.

3.5. Морфология зрелых сперматозоидов.

Глава 4. Влияние вируса простого герпеса и цитомегаловируса на сперматогенез.

4.1. Бессимптомное выделение герпесвирусов с эякулятом.

4.2. Роль вируса простого герпеса и цитомегаловируса в развитии бесплодия у мужчин.

4.3. Внутригаметная локализация герпесвирусов.

4.4. Влияние внутригаметной герпесвирусной инфекции на течение беременности.

4.5. Изучение герпесвирусной инфекции мужских гонад.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Выявление вируса простого герпеса и цитомегаловируса в мужских половых клетках при экспериментальной инфекции in vitro и в эякуляте мужчин с нарушениями фертильности"

Актуальность проблемы

Вирус простого герпеса (ВПГ) и цитомегаловирус (ЦМВ) чрезвычайно широко распространены в популяции и вызывают широкий спектр патологии человека [237, 273]. Предположение о присутствии ВПГ и ЦМВ в эякуляте было впервые высказано в начале 70-х годов прошлого века [90, 180, 202]. Проблема выявления вирусов в половых клетках на протяжении многих лет привлекает внимание исследователей по нескольким причинам.

Во-первых, выделение вируса с эякулятом вносит существенный вклад в его горизонтальное распространение в популяции [21, 133].

Во-вторых, в последние годы возрастает число исследований, свидетельствующих о том, что инфекции органов мочеполовой системы, в том числе вирусные, занимают важное место в структуре причин мужского бесплодия [41, 72, 119, 177]. Мнения исследователей относительно роли ВПГ и ЦМВ в этиологии нарушений фертильности у мужчин расходятся от полного отрицания влияния герпесвирусов на процесс созревания мужских половых клеток [73, 128, 248] до установления прямой корреляции между вирусным инфицированием эякулята и мужским бесплодием [72, 183, 188, 250].

В-третьих, инфицирование половых клеток предполагает возможность вертикальной передачи вируса при оплодотворении яйцеклетки пораженной гаметой, что может стать причиной самопроизвольного аборта или внутриутробной инфекции плода [7, 10]. Особую актуальность проблема вирусного инфицирования сперматозоидов приобрела в связи с развитием вспомогательных репродуктивных технологий (ВРТ), поскольку искусственная селекция мужских гамет может нарушить естественные механизмы отбраковки инфицированных гамет и стать причиной заражения яйцеклетки.

Кроме того показано, что у лиц, выделяющих герпесвирусы с эякулятом, возрастает риск заражения другими инфекционными агентами, в частности ВИЧ [50, 120].

Цель и задачи исследования

Цель настоящего исследования заключалась в оценке влияния ВПГ и ЦМВ на сперматогенез.

Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи:

3. Оценить возможность внутригаметной локализации герпесвирусов.

4. Разработать модель герпесвирусной инфекции (ГВИ) мужских гонад in vitro.

5. Оценить влияние острой ВПГ-инфекции (ВПГИ) на сперматогенный эпителий мыши.

6. Выявить половые и соматические клетки мужских гонад, чувствительные к герпесвирусам.

Научная новизна и практическая значимость

1. Впервые показаны сезонные различия частоты выделения ВПГ и ЦМВ с эякулятом.

2. Установлена связь между наличием ВПГ в эякуляте и первичным бесплодием у мужчин.

3. Выявление ВПГ и ЦМВ во фракции подвижных сперматозоидов указывает на необходимость исследования эякулята на маркеры герпесвирусов перед осуществлением ВРТ, в ходе обследования кандидатов на донорство спермы, а также при планировани семьи.

4. Для изучения влияния герпесвирусов на сперматогенез разработана модель ГВИ мужских гонад in vitro.

5. Впервые вирусные капсиды типа С выявлены в ядрах сперматогоний и сперматоцитов.

6. Впервые на ультраструктурном уровне описана локализация сверхраннего белка 1Е-рр72 ЦМВ в околоядерном включении — предполагаемом сайте окончательной сборки вируса.

7. Выявление 1Е-рр72 ЦМВ в плотных тельцах, обладающих способностью проникать в клетки, указывает на то, что выявление указанного белка в клетке без других маркеров инфекции может быть следствием пассивного переноса вирусных антигенов.

Основные положения, выносимые на защиту

2. Установлена прямая корреляция между инфицированностью эякулята ВПГ и первичным бесплодием.

3. Инфекционно-активный ВПГ и ЦМВ и ДНК герпесвирусов выявлены не только в цельном эякуляте, но и во фракции подвижных сперматозоидов.

4. На ультраструктурном уровне выявлена способность ВПГ проникать в ядра клеток-предшественников сперматозоидов мьппи, а также высокая чувствительность клеток интерстиция к ВПГ.

5. При заражении фибробластов ЦМВ с низкой МИ на поздних стадиях инфекции выявлено накопление сверхраннего белка 1Е-рр72 в околоядерном включении в составе плотных телец.

ОБЗОР ДАННЫХ ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение Диссертация по теме "Вирусология", Науменко, Виктор Алексеевич

Выводы

1. У мужчин без клинических проявлений инфекции урогенитального тракта частота выявления маркеров ВПГ в эякуляте составляет 27,3%, ЦМВ -8,8%. Выделение герпесвирусов с эякулятом возрастает в зимние месяцы.

3. ВПГ и ЦМВ выявлены как в цельном эякуляте, так и во фракции подвижных сперматозоидов.

4. ВПГ оказывает гаметотоксическое воздействие на герминативный эпителий.

6. В фибробластах человека, зараженных ЦМВ с низкой множественностью, в околоядерном включении впервые обнаружен сверхранний белок IE-1 рр72, находящийся в составе ПТ.

7. Разработка и внедрение в практику алгоритмов исследования эякулята на присутствие герпесвирусов позволяет оцепить значение герпесвирусов в этиологии бесплодия и использовать этиотропное лечение, что уменьшает вероятность вертикальной передачи ВПГ и ЦМВ.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата медицинских наук, Науменко, Виктор Алексеевич, Москва

1. Абдулмеджидова А.Г., Курило Л.Ф., Шилейко Л.В. и др. Бессимптомная форма генитального герпеса и бесплодие у мужчин // Урология. 2007. - №3. - С.56-59.

2. Абдулмеджидова А.Г., Торганова И.Г., Витязева И.И. и др. Влияние бессимптомной формы герпесвирусной инфекции на результаты лечения бесплодия методами вспомогательных репродуктивных технологий // Акушерство и гинекология. 2009. - № 1. - С.45-48.

3. Барановская Е.И., Жаворонок С.В., Супрун Л.Я. и др. Особенности течения беременности и родов у больных с герпесвирусными инфекциями // Акушерство и гинекология. 2004. - №5. - С. 49-50.

4. Баринский И.Ф., Каспаров А.А., Лазаренко А.А. и др. Терапевтическое действие вакцины как средство иммунокоррекции при хронических вирусных инфекциях // Иммунология. 2003. — №6. - С. 356-359.

5. Баринский И.Ф., Шубладзе А.К., Каспаров А.А. и др. Герпес (этиология, диагностика, лечение). М.: Медицина, 1986. - 289 с.

6. Безнощенко Г.Б., Долгих Т.И., Кривчик Г.В. Внутриутробные инфекции (вопросы диагностики и врачебной тактики) // М.: Мед.книга; Н. Новгород: Изд-во НГМА; 2006. С. 41-52.

7. Бочарова Е.Н., Брагина Е.Н., Гусак Ю.К. и др. Спонтанное прерывание беременности, неудачи при использовании репродуктивных технологий и герпетическое инфицирование сперматозоидов // Андрол и генит хирургия. 2006. - № 1. - С. 5965.

8. Бочарова Е.Н. Климова P.P., Завалишина Л.Э. и др. Выявление ДНК вируса простого герпеса в сперматозоидах человека методом гибридизации in situ II Материалы Всерос "науч-практ конф «Медицинская микробиология XXI век»; Саратов, 2004. - С. 4445.

9. Бочарова Е.Н., Шилейко Л.В., Брагина Е. Е. и др. Нарушение сперматогенеза человека: количественное исследование состава незрелых половых клеток при инфицировании сперматозоидов вирусом простого герпеса // Проблемы репродукции. 2006. - №6. -С. 75-80.

10. Ю.Бочарова Е.Н., Абдумаликов Р.А., Брагина Е.Е. и др. Обнаружение белков и капсидов ВПГ в сперматозоидах человека // Докл Акад Наук (клеточная биология). 2003. - №6. - С. 836-841.

11. П.Бочарова Е.Н., Курило Л.Ф., Шилейко Л.В. и др. Анализ популяции половых клеток в эякуляте мужчин, инфицированных вирусом простого герпеса // Онтогенез. 2008. - №1. - С. 47-57.

12. Брагина Е.Е. Закономерности нарушений сперматогенеза человека при некоторых генетических и инфекционных заболеваниях. Автореф. дис . докт. биол.н.; М, 2001. 53 с.

13. Брагина Е.Е., Абдумаликов Р.А. Руководство по сперматологии. -М.: Сорек-ролиграфия, 2002. 108 с.

14. Брагина Е.Е., Абдумаликов Р.А., Курило Л.Ф. и др. Выявление сперматозоидов, инфицированных вирусом простого герпеса // Вестн дерм венер. 2000. - № 5. - С. 18-22.

15. Быстрый культуральный метод диагностики герпесвирусных инфекций // Методические рекомендации №02.030-08, Роспотребнадзор; М, 2008. С. 20.

16. Власова М.А., Островская О.В., Львов Н.Д. и др. Влияние бессимптомного генитального герпеса на течение и исход беременности //Вопр. вирусол. 1991. - №6. - С.501-503.

17. Врожденные, перинатальные и неонатальные инфекции: Пер. с англ. / Под общ. ред. А. Гриноу, Д. Осборн, Ш. Сазерленд. М.: Медицина, 2000. - 288 с.

18. Ершов Ф.И., Касьянова Н.В. Цитомегаловирусная инфекция (современные данные об эпидемиологии, клинике, диагностике и терапии) // Инфекции и антимикробная терапия. 2002. - №4. — С. 116-119.

19. Инфекционные болезни: национальное руководство / Под ред. Н.Д. Ющука, Ю.А. Венгерова. М.: ГЭОТАР-Медиа, 2009. - 1056 с.

20. Исаковский В.А. Герпесвирусные инфекции человека: Руководство для врачей / Под редакцией В.А. Исаковского, Е.И. Архиповой, Д.В. Исакова. СПб.: СпецЛит, 2006. - 303 с.

21. Исаковский В.А., Борисов В.В., Исаков Д.В. Герпес. Патогенез и лабораторная диагностика. СПб.: Лань, 1999. - 192 с.

22. Климова P.P., Масалова О.В., Атанадзе С.Н. и др. Получение и свойства моноклональных антител к вирусу простого герпеса 1 и 2 типа // Микробиология, эпидемиология и иммунология. 1999 -№. 5. - С. 99-103.

23. Коровина Н.А., Заплатников А.Л., Чебуркин А.В. и др. Цитомегаловирусная инфекция у детей раннего возраста: Руководство для врачей. 2-е изд., перераб. и доп. - М.: Медпрактика-М, 2001. - 64 с.

24. Королев Ю.Н., Курило Л.Ф. и др. Радиозащитное действие лазерного излучения на сперматогенез крыс и их потомства // Пробл репрод. 2007. - №1. - С. 34-37.

25. Кудашов Н.И. Клинико-диагностические аспекты внутриутробной герпесвирусной инфекции у новорожденных // Вестн. акуш. и гин. — 1993.-№1-2.-С. 5-12.

26. Курило Л.Ф., Дубинская В.П., Остроумова Т.В. и др. Оценка сперматогенеза по незрелым половым клеткам эякулята // Проблемы репродукции. 1995. - №3. - С. 33-38.

27. Курило Л.Ф., Любашевская И.А., Дубинская В.П. и др. Кариологический анализ состава незрелых половых клеток эякулата // Урол. и нефрол. 1993. - №2. - С. 45-47.

28. Лобзин Ю.В. Руководство по инфекционным болезням. СПб.: «Изд-во Фолиант», 2003. - 1040 с.

29. Макарова Н.Е., Кущ А.А., Иванова Л.А. и др. Получение моноклональных антител к сверхранним белкам цитомегаловируса человека и их применение для выявления инфицированных клеток // Вопр. вирусологии. 1996. - №1 - С. 28-32.

30. Марданлы С.Г., Кирпичникова Г.И., Неверов В.А. Герпетическая инфекция (простой герпес). Этиология, эпидемиология, патогенез, клиника, лабораторная диагностика, лечение. Электрогорск: Изд-во «Эколаб», 2005. — 48 с.

31. Марданлы С.Г., Кирпичникова Г.И., Неверов

32. B.А.Цитомегаловирусная инфекция. Этиология, эпидемиология, патогенез, клиника, лабораторная диагностика, лечение. -Электрогорск: Изд-во «Эколаб», 2005. 32 с.

33. Марченко Л.А., Лушкова И.П. Генитальный герпес и его влияние на репродуктивное здоровье женщины. / М.: Медицина, 2004.1. C.39-43.

34. Марченко Л.А., Лушкова И.П. Генитальный герпес: новые грани проблемы // Пробл репрод. 2006. - № 1. - С. 15-18.

35. Медицинская вирусология: руководство / под ред. Д. К. Львова. -М.: ООО «Медицинское информационное агентство», 2008. 656 с

36. Протоколы диагностики, лечения и профилактики внутриутробных инфекций у новорожденных детей. — 2-е изд., перераб. и доп. М.: ГОУ ВУНМЦ МЗ РФ, 2002. - 104 с.

37. Райцина С.С. Сперматогенез и структурные основы его регуляции. М.: Медицина, 1985. - 254с.

38. Русанова Н.Н., Теплова С.Н., Коченгина С.А. Цитомегаловирусная инфекция у детей. СПб.: Лань, 2001. - 136 с.

39. Ряскина С., Бояркин А., Быстревская В. Экспрессия вирусных антигенов в клетках, инфицированных эндотелиотропным или фибробластотропным штаммами цитомегаловируса человека // Вопросы вирусологии. 2006.- № 1.- С. 15-19.

40. Тер-Аванесов Г.В. Андрологические аспекты бесплодного брака //. Болезни репродуктивной системы. 2004. — №3. - С. 60-65.

41. Фризе К. Инфекционные заболевания беременных и новорожденных: Пер. с нем. / К.Фризе, В. Кахель. М.: Медицина, 2003.-424 с.

42. Харрисон Т.Р. Инфекционные болезни / Перевод с англ. Алиповой Н.Н., Тимофеевой Е.Р. М.: «Изд-во Практика», 2005. - 1508 с.

43. П1увалова Е.П. Инфекционные болезни. М, 1990. — 560 с.

44. Adler S.T., Nigro G., Pereira P. Recent advances in the prevention and treatment of congenital cytomegalovirus infections // Semin. Perinatol. -2007.-V. 31.-P. 10-18.

45. Ahn J.-H., Chiou C.-J., Hayward G. S. Evaluation and mapping of the DNA binding and oligomerization domains of the IE2 regulatory protein of human cytomegalovirus using yeast one and twohybrid interactionassays // Gene. 1998. - V. 210. - P. 25-36.

46. Ahn J.-H., Hayward G. S. The major immediate-early proteins IE1 and IE2 of human cytomegalovirus colocalize with and disrupt PML-associated nuclear bodies at very early times in infected permissive cells // J. Virol. 1997. - V. 71. - P. 4599-4613.

47. Aiman J., Brenner P.F., MacDonald P.C. Androgen and estrogen production in elderly men with gynecomastia and testicular atrophy after mumps orchitis// J. Clin. Endocrinol. Metab. 1980. - V. 50. - P. 380654.

48. Alexander H. Herpes simplex virus: a cause for concern // Am J Med Technol. — 1982.-V. 48.-P. 241-245.

49. Alexander NJ. Sexual transmission of human immunodeficiency virus: virus entry into the male and female genital tract // Fertil Steril. — 1990. -P. 54.-P. 1-18.

50. AH B.A., Huang Т.Н., Salem H.H. et al. Expression of hepatitis В virus genes in early embryonic cells originated from hamster ova and human spermatozoa transfected with the complete viral genome // Asian J Androl. 2006. - V. 8. - P. 273-279.

51. AH B.A., Huang Т.Н., Xie Q.D. Detection and expression of hepatitis В Virus X gene in one and two-cell embryos from golden hamster oocytes in vitro fertilized with human spermatozoa carrying HBV DNA // Mol Reprod Dev. 2005. - V. 70. - P. 30-36.

52. A1-Shawi R., Burke J., Wallace H. et al. The herpes simplex virus type 1 thymidine kinase is expressed in the testes of transgenic mice under the control of a cryptic promoter // Mol Cell Biol. 1991. - V. 11. - P. 4207-4216.

53. Anders D.G., Kacica M.A., Pari G. et al. Boundaries and structure of human cytomegalovirus orc'Lyt, a complex origin for lytic-phase DNA replication. // J. Virol. 1992. - V. 66. - P. 3373-3384.

54. Aynaud O., Bijaoui G., Ionesco M. et al. Genital herpes simplex vims infection among men screened for genital papillomavirus // Ann Dermatol Venereol. 1994. - V. 121. - P.376-381.

55. Aynaud O., Poveda J.D., Huynh B. et al. Frequency of herpes simplex virus, cytomegalovirus and human papillomavirus DNA in semen // Int J STD AIDS. 2002. - V. 13. - P. 547-550.

56. Bader C., Crumpacker C. S., Schnipper L. E. et al. The natural history of recurrent facial-oral infection with herpes simplex virus // J. Infect. Dis.- 1978.-V. 138.-P. 897-905.

57. BaIdick C. J., Shenk T. Proteins Associated with Purified Human Cytomegalovirus Particles // J.Virol. 1996. - V. 70. - P. 6097-6105.

58. Bantel-Schaal U., Neumann-Haefelin D., Schleferstein G. Cytomegalovirus is absent from semen of a population of men seeking fertility evaluation // J. Infect. Dis. 1993. - V. 168. - P. 518-519.

59. Barton S. E., Davis J. M., Moss V.W. et al. Asymptomatic shedding and subsequent transmission of genital herpes simplex virus // Genitourin.Med. 1987. - V. 63. - P. 102-105.

60. Barton S., Munday P., Patel R. Asymptomatic shedding of herpes simplex virus from the genital tract: uncertainty and its consequences for patient management. The herpes simplex virus advisory panel // Int. J. STD AIDS. 1996. - V.7. - P. 229-232.

61. Bascar J.F., Stanat S.C., Huang E-S. Cytomegalovirus infection of murine testicular interstitial Leydig Cells // Infection and Immunity. -1983. V. 40. - №2. - P. 726-732.

62. Baskar J.F., Furnari В., Huang E.S. Demonstration of developmental anomalies in mouse fetuses by transfer of murine cytomegalovirus DNA-injected eggs to surrogate mothers // J. Infect. Dis. 1993. - V. 167. - P. 1288-1295.

63. Baskar J.F., Stanat S.C., Huang E.S. Murine cytomegalovirus infection of mouse testis // J. Virol. 1986. - V. 57. - P. 1149-1154.

64. Baskar J.F., Stanat S.C., Sulik K.K. et al. Murine cytomegalovirus-induced congenital defects and fetal maldevelopment // J Infect Dis. -1983.-V. 148.-P. 836-843.

65. Baskin G. B. Disseminated cytomegalovirus infection in immunodeficient rhesus monkeys // Am. J. Pathol. 1987. - V. 129. - P. 345-352.

66. Bedford J., Hoskins D. The mammalian spermatozoan: morphology, biochemistry and physiology // In book: Lamming G. (ed.), Marshall's Physiology of Reproduction, 4th edn. Churchill Livingstone, London, 1990.-V.2.- P. 379-358.

67. Benco D.M., Gibson W. Primate cytomegalovirus glycoproteins lectin-binding properties and sensitivities to glycosidases // J. Virol. -1986.-V. 59.-P. 703-713.

68. Benson P.J., Smith C.S. Cytomegalovirus prostatitis // Urology 1992. -V. 40.-P. 165-167.

69. Bezold G., Politch J.A., Kiviat N.B. et al. Prevalence of sexually transmissible pathogens in semen from asymptomatic male infertility patients with and without leukocytospermia // Fertil Steril. 2007. - V. 87.-P. 1087-1097.

70. Bezold G., Schuster-Grusser A., Lange M. et al. Prevalence of human herpesvirus types 1-8 in the semen of infertility patients and correlation with semen parameters // Fertil. Steril. 2001. - Vol. 76. - P. 416-418.

71. Biggar R.J., Adersen H.K., Ebbesen P. et al. Seminal fluid excretion of cytomegalovirus related to immunosupression in homosexual men // Br. Med. J. 1983. - V. 286. - P. 2010-2012.

72. Boldogh I., Baskar J.F., Mar E.C. et al. Human cytomegalovirus and herpes simplex type 2 in normal and adenocanceromatous prostate glands // J. Natl. Cancer Inst. 1983. - V. 70. - P. 819-826.

73. Borst E.M., Messerle M. Analysis of human cytomegalovirus oriLyt sequence requirements in the context of the viral genome // J Virol. — 2005.-V. 79.-P. 3615-26.

74. Boue A., Loffredo V. Abortion caused by type II Herpesvirus. Isolation of virus from cultures of zygotic tissues // Presse Med. 1970. — V. 78. — P. 103-106.

75. Bowen R. On the acrosome of the animal sperm // Anat Rec. 1924. -V. 28. - P. 1-13.

76. Braun RE, Lo D, Pinkert CA, Widera G. et al. Infertility in male transgenic mice: disruption of sperm development by HSV-tk expression in postmeiotic germ cells // Biol Reprod. 1990. - V. 43. - P. 684-693.

77. Bresnahan W.A., Shenk T. UL82 virion protein activates expression of immediate early viral genes in human cytomegalovirusinfected cells. // Proc Natl Acad Sci USA. 2000.-V. 91.- P. 14506- 14511.

78. Bresson J.L., Clavequin M.C., Mazeron M.C. et al. Risk of cytomegalovirus transmission by cryopreserved semen: a study of 635 semen samples from 231 donors // Hum. Reprod. 2003. - V.18. - P. 1881-1886.

79. British Andrology Society guidelines for the screening of semen donors for donor insemination // Hum. Reprod. 1999. - V. 14. - P. 18231826.

80. Britt W., Boppana S. Human cytomegalovirus virion proteins // Hum Immunol. 2004. - V. 65. - P. 395-402.

81. Brooks A. Within- and between-subject variation in semen parameters in infertile men and normal semen donors // Fertil. Steril. — 2006. — V. 85.-P. 128-134.

82. Browne E.P., Shenk T. Human cytomegalovirus UL83-coded pp65 virion protein inhibits antiviral gene expression in infected cells // Proc Natl Acad Sci. 2003. - V. 100.- P. 11439-11444.

83. Caia L-Y., Katob Т., Nakayamaa M. et al. HSV type 1 thymidine kinase protein accumulation in round spermatids induces male infertility by spermatogenesis disruption and apoptotic loss of germ cells // Reprod. Tox.- 2009.-V. 27.-P. 14-21.

84. Castillio J. P., Kowalika T. F. Human cytomegalovirus immediate early proteins and cell growth control. // Gene. 2002. - V. 290. - P. 19-34.

85. Centifanto Y.M., Drylie D.M., Deardourff S.L. et al. Herpesvirus type 2 in the male genitourinary tract // Science. 178. - P. 318-319.

86. Charny C. W., Meranze D. R. Pathology of mumps orchitis // J. Urol. -1948.-V. 60.- P. 140.

87. Chee M. S., Bankier A.T., Beck S. et al. Analysis of the protein-coding content of the sequence of human cytomegalovirus strain AD 169. // Curr. Top. Microbiol. Immunol. 1990.- V. 154.- P. 125-170.

88. Chen D.H., Jiang H. et al. Threedimensional visualization of tegument/capsid interactions in the intact human cytomegalovirus // Virology 1999. - V. 260. - P. 10-17.

89. Chen Z., Toth Т., Godfrey-Bailey L. et al. Seasonal variation and age-related changes in human semen parameters // Journal of Andrology. — 2003.- V. 24.-P. 226-231.

90. Cherrington J. M., Mocarski E. S. Human cytomegalovirus iel transactivates the promoter-enhancer via an 18-base pair repeat element // J. Virol. 1989. - V. 63. - P. 1435-1440.

91. Cherrington J.M., Khoury E.L., Mocarski E.S. Human cytomegalovirus ie2 negatively regulates alpha gene expression via a short target sequence near the transcription start site. // J.Virol. 1991. - V.65. -P.887-896.

92. Chin K.C., Cresswell P. Virepin (cig5), an IFN-inducible antiviral protein protein directly induced by human cytomegalovirus // Proc. Natl. Acad. Sci.- 2001,- V. 98,- P.15125-15130.

93. Clermont Y. Kinetics of spermatogenesis in mammals: semineferous epithelium cycle and spermatogonia! renewal // Physiol Rev. 1972. -V. 52.-P. 198-236.

94. Clermont Y. The cycle of seminiferous epithelium in man // Am J Anat. 1963. -V. 112.-P. 35-42.

95. Clermont Y., Tang X. Glycoprotein synthesis in the Golgi apparatus of spermatids during spermiogenesis of the rat. Anat Rec. -1985.-V. 213.-P. 33-43.

96. Compton Т. An Immortalized human fibroblasts cell line is permissive for human cytomegalovirus infection // J.Virol. 1993. -V. 67. - P. 3644-3648.

97. Compton T. Receptors and immune sensors: the complex entry path of human cytomegalovirus // Trends Cell Biol. — 2004. — V. 14. — P. 5-8.

98. Cone R.W., Hobson A.C., Brown Z. et al. Frequent detection of genital herpes simplex virus DNA by polymerase chain reaction among pregnant women // JAMA. 1994. - V. 272. - P. 792-796.

99. Corey L., Wald A. // In book: Sexually Transmitted Diseases, ed. Holmes, K., Sparling, P., PA, M., Lemon, S., Stamm,W., Piot, P., Wasserheit, J. New York:McGraw-Hill, 1999.

100. Corey L., Wald A., Celum C. L. et al. The effects of herpes simplex virus-2 on HIV-1 acquisition and transmission: a review of two overlapping epidemics // J. Acquir. Immune Defic. Syndr. 2004. - V. 35.-P. 435-445.

101. Courtot A.M., Pallier C., Testart J. Viral transmission and medically assisted procreation: the Herpesviridae case // Gynecol Obstet Fertil. 2004. - V. 32. - P. 233-240.

102. Csata S., Kulcsar G. Virus-host studies in human seminal and mouse testicular cells // Acta Chir Hung. 1991. - V. 321. - P. 83-90.

103. Dalton A.D., Harcourt-Webster J.N. The hystopathology of the testis and epididymis in AIDS. A post-mortem study // J. Pathol. 1991. -V. 163.-P. 47-52.

104. Davidson A.J. Evolution of herpesviruses // Vet Microbiol. -2002.-V.86.-P. 69-88.

105. De Kretser D. Ultrastructural features of human spermiogenesis // Z Zelforsch. 1969. - V. 98. - P. 477-505.

106. De Kretser D., Kerr J. The cytology of the testis. // In book: The physiology of reproduction. Knobil E., Neill J. et al. (eds). Raven press, Ltd New York, 1988. P. 837-932.

107. De Paepe M. E., Waxman M. Testicular atrophy in AIDS: a study of 57 autopsy cases // Hum. Pathol. 1989. -V. 20. - P. 210-214.

108. De Paepe M.E., Guerrieri C., Waxman M. Opportunistic infections of the testis in the acquired immunodeficiency syndrome // Mt. Sinai J. Med. 1990. - V. 57. - P. 25-29.

109. Dejucq N., Jegou B. Viruses in the mammalian male genital tract and their effects on the reproductive system // Microbiol. Mol. Biol., 2001.-V. 65.-P. 208-231.

110. Detels R., Leach С. Т., Hennessey K. et al. Persistent cytomegalovirus infection of semen increases risk of AIDS // J. Infect. Dis. 1994. - V. 169.-P. 766-768.

111. Deture F.A., Drylie D.M., Kaufman H.E. et al. Herpesvirus type 2: isolation of seminal vesicle and testes // Urol. 1976. - V.7. - P. 541544.

112. Deture F.A., Drylie D.M., Kaufman H.E. Herpesvirus type 2: study of semen in male subjects with recurrent infections // J Urol. — 1978.-V. 120.-P. 449-451.

113. Dohle G. R., Colpi G. M., Hargreave Т. B. et al. Eau guidelines on male infertility // Eur Urol. 2005. - V.48. - P. 703-711.

114. Drew W. L., Bates M. P. Cytomegalovirus infection. In: Holmes KK, Mardh P-A, Sparling PF, Lemon SM, Stamm WE, Piot P, et al., eds. Sexually transmitted diseases, 3rd ed. New York: McGraw-Hill, 1999. -P. 313-326.

115. Dussaix E., Guetard D., Dauguet C. Spermatozoa as potentional carriers of HIV // Res. Virol. 1993. - V. 6. - P. 12-14.

116. Dutko F. J., Oldstone M. B. Murine cytomegalovirus infects spermatogenic cells // Proc. Natl. Acad. Sci. 1979. - V. 76. - P. 29882991.

117. Ellison A.R, Bishop J.O. Herpesvirus thymidine kinase transgenes that do not cause male sterility are aberrantly transcribed and translated in the testis // Biochim Biophys Acta. 1998. - V. 1442. - P. 28-38.

118. Ellison A.R, Bishop J.O. Initiation of herpes simplex virus thymidine kinase polypeptides // Nucleic Acids Res. 1996. - V.24.1. Р.2073-2079.

119. Ellison AR, Wallace H, Al-Shawi R. et al. Different transmission rates of herpesvirus thymidine kinase reporter transgenes from founder male parents and male parents of subsequent generations // Mol Reprod Dev.- 1995.-V. 41. -P. 425-434.

120. Emery V.C. Cytomegalovirus Infection. Lond.: Current Medicine Group Ltd, 2006. - 63 p.

121. Enders G., Risse В., Zauke M. et al. Seroprevalence study of herpes simplex virus type 2 among pregnant women in Germany using a type-specific enzyme immunoassay // Eur. J. Clin. Microbiol.Infect. Dis. 1998. - V. 17. - P. 870-872.

122. Erles K., Rohde V., Thaele M. DNA of adeno-associated virus (AAV) in testicular tissue and in abnormal semen samples // Hum Reprod. 2001. - V.16. -P.2333-2337.

123. Fawcett D.W., Phillips D. The fine structure and development of the neck region of the mammalian spermatozoon // Anat Rec. 1969. -V.165. — P. 153-184.

124. Fawcett W. The mamallian spermatozoon. 1975. — V. 44. - P. 394-436.

125. Fortunato E. A., Spector D. H. Regulation of human cytomegalovirus gene expression // Adv Virus Res. 1999. - V. 54. -P. 61-128.

126. Freeman R., Hambling M. H. Serological studies on 40 cases of mumps virus infection // J. Clin. Pathol. 1980. - V. 33. - P. 28-32.

127. Gall A.E. The histopathology of acute mumps orchitis // Am. J. Pathol. 1940. - V. 23. - P. 637-642.

128. Garcia A.G. Maternal herpes-simplex infection causing abortion. Histopathologic study of the placenta // Hospital (Rio J). 1970. - V. 78. -P. 1267-1274.

129. Gawn J. M., Greaves R. F. Absence of IE1 p72 protein function during low-multiplicity infection by human cytomegalovirus results in a broad block to viral delayed-early gene expression // J. Virol. 2002. — V. 76.-P. 4441-4455.

130. Gerna G, Percivalle E., Baldanti F. et al. Human cytomegalovirus replicates abortively in polymorphonuclear leukocytes after transfer from infected endothelial cells via transient microfusion events // J.Virol. -2000. V.74. - P.5629-5638.

131. Gershon A. A., Sherman D. L. et al. Intracellular transport of newly synthesized varicella-zoster virus: final envelopment in the trans-Golgi network // J. Virol. 1994. - V. 68. - P. 6372-6390.

132. Gibbons I. Cilia and flagella of eukariotes // J Cell Biol. 1981. -V. 91.-P. 107-113.

133. Gibson W. Assembly and maturation of the capsid. In book: Cytomegaloviruses: Pathogenesis, Molecular Biology, and Infection Control. Ed. By Reddehase M.J. Norfolk, United Kingdom: Caister Scientific Press; 2006. - P. 231-244.

134. Gibson W. Structure and assembly of the virion // Intervirology. -1996. V. 39.-P. 389-400.

135. Golan R., Cooper T. et al. Changes in chromatin condensation of human spermatozoa during epipidymal transit as determined by flow cytometry//Hum Reprod. 1996.-V. 11.-P. 1457-1462.

136. Gold E., Nankervis G.A. Cytomegalovirus // In book: Viral Infections of Humans: Epidemiology and Control. A. S. Evans, ed., pp.143.161. New York: Plenum Press, 1976.

137. Grangeot-Keros L., Simon В., Audibert F., Vial M. Should we routinely screen for cytomegalovirus antibody during pregnancy? // Intervirology.- 1998.- V. 41.-P. 158-162.

138. Granzow H., Weiland F. et al. Ultrastructural analysis of the replication cycle of pseudorabies virus in cell culture: a reassessment // J. Virol. 1997. - V. 71. - P. 2072-2082.

139. Greaves R. F., Mocarski E. S. Defective growth correlates with reduced accumulation of a viral DNA replication protein after low-multiplicity infection by a human cytomegalovirus iel mutant // J. Virol. 1998. — Vol. 72. - P.366-379.

140. Gretch D.R., Gehrz R.C., Stinski M.F. Characterization of a human cytomegalovirus glycoprotein complex (gcll) // J. Virol. 1988. -V. 69.- P. 1205-1215.

141. Gribencha S.V., Bragina E.E., Abdumalikov R.A et al. Detection of type 2 herpes simplex virus in cells of spermatogenic epithelium in infected testis of guinea pigs // Bull. Exp. Biol. Med. 2007. - V. 144. -P. 73-76.

142. Hadchouel M., Scotto J., Huret J. L., Molinie C., Villa E., Degos F., Brechot C. Presence of HBV DNA in spermatozoa: a possible vertical transmission of HBV via the germ line // J. Med. Virol. 1985. - V. 16. -P. 61-66.

143. Hagemeier C., Walker S.M., Sissons P.J. et al. The 72K IE1 and 80K IE2 proteins of human cytomegalovirus independently trans-activate the c-fos, c-myc and hsp70 promoters via basal promoter elements // J. Gen. Virol. 1992. - V. 73. - P. 2385-2393.

144. Halioua В., Malkin J. Epidemiology of genital herpes — recent advances // Eur. J. Dermatol. 1999. - V. 9. - P. 177-184.

145. Hammitt D.G., Aschenbrenner D. W., Williamson R. A. Cultureof cytomegalovirus from frozen-thawed semen // Fertil. Steril. — 1988. — V. 49. -P. 557.

146. Hamzeh F.M., Lietman P.S., Gibson W. et al. Identification of the lytic origin of DNA replication in human cytomegalovirus by a novel approach utilizing ganciclovir-induced chain termination. // J Virol. — 1990.- V. 64,- P. 6184-6195.

147. Handsfield H.H., Chandler S.H., Caine V.A. et al. Cytomegalovirus infection in sex partners: evidence for sexual transmission// J. Infect. Dis. 1985.-V. 151.-P. 344-348.

148. Hayhurst G. P., Bryant L. A., Caswell R. C. et al. CCAAT box-dependent activation of the TATA-less human DNA polymerase alpha promoter by the humancytomegalovirus 72-kilodaltonmajorimmediate-early protein // J. Virol. 1995. - V. 69. - P. 182-188.

149. Heggie A.D., Gaddis L. Effects of viral exposure of the two-cell mouse embryo on cleavage and blastocyst formation in vitro // Pediatr. Res. 1979.-V. 13.-P. 937-941.

150. Heider J. A., Bresnahan W. A., Shenk Т. E. Construction of a rationally designed human cytomegalovirus variant encoding a temperature-sensitive immediate-early 2 protein // Proc. Natl Acad. Sci. USA 2002. - V. 99. - P. 3141-3146.

151. Heller C., Heller G. Human spermatogenesis: an estimate of duration of each cell association and each cell type // In: Gual C. (ed) Progress in endocrinology. Experta Medica Foundation, Amsterdam, Int. Congress Series, 1969.-V. 184.-P. 1012-1018.

152. Hirose T. Alpha-herpes vims infection male genital herpes // Nippon Rinsho. - 2000. - V. 58. - P.877-882.

153. Homman-Loudiyi M., Hultenby K. Envelopment of Human Cytomegalovirus Occurs by Budding into Golgi-Derived Vacuole Compartments Positive for gB, Rab 3,Trans-Golgi Network 46, and Mannosidase // J.Virol 2003. - V. 77. - P. 3191-3203.

154. Honess R.W., Roizman В. Regulation of herpesvirus macromolecular synthesis. I. Cascade regulation of the synthesis of three groups of virus proteins. // J. Virol. 1974. — V. 14. - P. 8-19.

155. Huang E. S., Davis M. G., Baskar J. F. et al. Molecular epidemiology and oncogenicity of human cytomegalovirus / In Harris C.C Biochemical and molecular epidemiology of cancer; New York; 1986.-P. 323-344.

156. Hunninghake G. W., Monks B. G., Geist L. J. et al. The functional importance of a cap site-proximal region of the human prointerleukin l|3gene is defined by viral protein trans-activation // J. Mol. Cell. Biol. 1992. -V. 12. - P. 3439-3448.

157. Huttner К. M., Pudney J., Milstone D. S. et al. Flagellar and acrosomal abnormalities associated with testicular HSV-tk expression in the mouse // Biol Reprod. 1993. - V. 49. - P. 251-261.

158. Ida K., Tokuda H., Kanaoka T. et al. Epstein-Barr virus activating principle in husbands'semen of cervical cancer patient // Am. J. Reprod. Immunol. 1991. -V. 26. - P. 89-92.

159. Ishov A. M., Stenberg R. M., Maul G. G. Human cytomegalovirus immediate early interaction with host nuclear structures: definition of animmediate transcript environment // J. Cell Biol. 1997,-V. 138.-P. 5-16.

160. Ito Y., Tokuda H., Morigaki T. et al. Epstein-Barr virus-activating principle in human semen // Cancer Lett. 1984. -V. 23. - P. 129-134.

161. Jakob M., Muhle C., Park J. et al. No evidence for germ-line transmission following prenatal and early postnatal AAV-mediated gene delivery // J Gene Med. 2005. - V. 7. - P. 630-637.

162. Jault M. F., Jault J.-M., Ruchti F. et al. Cytomegalovirus infection induces high levels of cyclins, phosphorylated Rb and p53, leading to cell cycle arrest. // J. Virol. 1995. - V. 69 - P. 6697-6704.

163. Johnson L, Blanchard T. L., Varner D. D. et al. Factors affecting spermatogenesis in the stallion // Theriogenology. 1997. - V. 48. — P. 1199-216.

164. Johnson L., Varner D. Effect of daily spermatozoan production but not age on transit time of spermatozoa through the human epididymis //Biol Reprod. 1988.-V. 39.-P. 812-817.

165. Jones F., Grose C. Role of cytoplasmic vacuoles in varicellazoster virus glycoprotein trafficking and virion envelopment // J. Virol. 1988. -V. 62.-P. 2701-2711

166. Jordan M. C., Rousseau W. E., Noble G. R. et al. Association of cervical cytomegaloviruses with venereal disease // N. Engl. J. Med. -1973.-V. 288.-P. 932-934.

167. Kalejta R. F., Bechtel J.T., Shenk Т., Mutations that abolish the ability of HCMV pp71 protein to induce DNA synthesis in quiescent cell do not affect its ability to accelerate G1 phase cell cycle progression. //JVirol. 2003.-V.77.- P.3451-3459.

168. Kanich R.E., Craighead J.E. Human cytomegalovirus infection of cultured fibroblasts. II. Viral replicative sequence of a wild and an adapted strain. // Lab. Invest. 1972. - V.27. - P.237-282.

169. Kapranos N., Petrakou E., Anastasiadou C. et al. Detection of herpes simplex virus, cytomegalovirus, and Epstein-Barr virus in the semen of men attending an infertility clinic // Fertil Steril. 2003. - V. 79: Suppl 3.-P. 1566-1570.

170. Kari В., Gertz R. Characterization of cytomegalovirus glycoproteins in a family of complexes designated gC-II with murine monoclonal antibodies // Arch. Virol. 1990. - V. 112. - P. 55-65.

171. Kimura M., Maekura S., Satou T. et al. Cytomegaloviral inclusions detected in the seminal vesicle, ductus deferens and lungs in an autopsy case of lung cancer // Rinsho Byori. 1993. - V. 41. - P. 1059-1062.

172. Kolettis P.N. Evaluation of subfertile man I I Am Fam Physician.- 2003.-V. 67-P. 2165-2172.

173. Koment R.W., Poor P.M. Infection by human cytomegalovirus associated with chronic hematospermia // Urology. 1983. - V. 22. - P. 617-621.

174. Kotronias, D., Kapranos N. Detection of herpes simplex virus DNA in human spermatozoa by in situ hybridization technique // In Vivo. 1998. - V. 12. - P. 391-394.

175. Koutsky L.A., Stevens C.E., Holmes K.K. et al. Underdiagnosis of genital herpes by current clinical and viral-isolation procedures // N. Engl. J. Med. 1992. -V. 326. - P. 1533-1539.

176. Krause W., Herbstreit F., Slenzka W. Are viral infections the cause of leukocytospermia // Andrologia. 2002. - Vol. 34. - P. 87-90.

177. Krieger, J. N., Coombs R. W., Collier A. C. et al. Fertility parameters in men infected with human immunodeficiency virus // J. Infect. Dis. 1991. - V. 164 - P. 464-469.

178. Kulcsar G., Csata S., Nasz I. Investigations into virus carriership in human semen and mouse testicular cells // Acta Microbiol Hung. -1991.-V. 38. P. 127-132.

179. Kundsin R. В., Falk L., Hertig A.T. et al. Acyclovir treatment of twelve unexplained infertile couples // Int. J. Fertil. 1987. - V. 32. - P. 200-204.

180. Kyo S., Inoue M., Koyama M. et al. Detection of high-risk human papillomavirus in the cervix and semen of sex partners // J. Infect. Dis. -1994.-V. 170.-P. 682-685.

181. LaDuca J. R., Love J. L., Abbott L. Z. et al. Detection of human herpesvirus 8 DNA sequences in tissues and bedily fluids // J Infect Dis.- 1998.-V. 178.-P. 1610-1615.

182. Laech C.T., Cherry J.D., English P.A. et al. The relationship between T cells level and CMV infection in asymptomatic HIV-1 antibody positive homosexual men // J. AIDS. 1993. - V. 6. - P. 407413.

183. Lafferty W. E., Downey L., Celum C. et al. Herpessimplex virus type 1 as a cause of genital herpes: impact on surveillance and prevention // J. Infect. Dis. 2000. - V. 181. - P. 1454-1457.

184. Lai Y. M., Yang F. P., Pao С. C. Human papillomavirus deoxyribonucleic acid and ribonucleic acid in seminal plasma and sperm cells // Fertil. Steril. 1996. - V. 65. - P. 1026-1030.

185. Lai Y.M., Lee J.F., Huang H.Y. et al. The effect of human papillomavirus infection on sperm cell motility // Fertil. Steril. 1997. -V. 67.-P. 1152-1155.

186. Landini M. P., Severi В., Badiali L. et al. Structural components of human cytomegalovirus: in situ localization of the major glycoprotein // Intervirology. — 1987. V. 27. - P. 154-160.

187. Landolfo S, Gariglio M., Gribaudo G. et al. The human cytomegalovirus // Pharmacology and therapeutics. 2003. - V. 98. -P. 269-297.

188. Lang D.J., Kummer J.F. Demonstration of cytomegalovirus in semen // N. Engl. J. Med. 1972. - V. 287. - P. 756-758.

189. Lang D.J., Kummer J.F., Hartley D.P. Cytomegalovirus in semen //N. Engl. J. Med. 1974.-V. 291.-P. 121-123.

190. Lang D.J., Kummer, J.F. Cytomegalovirus in semen: observations in selected populations // J. Infect. Dis. 1975. - V. 132. - P. 472-743.

191. Lang, D. J. 1975. The epidemiology of cytomegalovirus infections: interpretation of recent observations, In G. A. Krugman S (ed.), Infections of the fetus and the newborn infant., V. 3. Alan R. Liss, Inc., New York, N.Y. P. 35-45.

192. Lee J.Y., Irmiere A., Gibson W. Primate cytomegalovirus assembly: evidence that DNA packaging occures subsequent to B-capsid assembly // Virology. 1988. - V. 167. - P. 87-96.

193. Levy R., Najioullah F., Keppi B. et al. Detection of cytomegalovirus in semen from a population of men seeking infertility evaluation // Fertil. Steril. 1997. - V.68. - P. 820-825.

194. Liesnard C., Strebelle E., Englert Y. Is the British Andrology Society recommendation to recruit cytomegalovirus negative donors only, a reasonable one? // Hum. Reprod. 2001. - V. 16. - P. 17891791.

195. Ling P.D., Lednicky J.A., Keitel W.A. et al. The dynamics of herpesvirus and polyomavirus reactivation and shedding in healthy adults: a 14-month longitudinal study //J Infect Dis. 2003. - V. 187. -P. 1571-1580

196. Liu Z.G., Hsu H., Goeddel D.V. et al. Dissection of TNF receptor 1 effector functions: JNK activation is not linked to apoptosis while NF-kappaB activation prevents cell death // Cell. 1996. - V. 87. - P. 565576.

197. Loskutoff N.M., Huyser C., Singh R. et al. Use of a novel washing method combining multiple density gradients and trypsin for removing human immunodeficiency virus-1 and hepatitis С virus from semen// Fertil Steril. -2005. V. 84.-P. 1001-1010.

198. Lowhagen G. В., Bonde E., Eriksson B. et al. Self-reported herpes labialis in a Swedish population // Scand. J. Infect. Dis. 2002. -V. 34.-P. 664—667.

199. Lukac D. M., Harel N. Y., Tanese N. et al. TAFlike functions of human cytomegalovirus immediate-early proteins // J. Virol. 1997. -V.71.-P. 7227-7239.

200. Macasaet F.F., Holler K.E., Smith T.F. et al. Cytomegalovirus studies of autopsy tissue. Incidence of inclusion bodies and related pathologic data // Am. J. Clin. Pathol. 1975. - V. 63. - P. 859.

201. MacCarthy J.M., McLoughlin M.G., Shackleton C.R. et al: Cytomegalovirus epididymitis following renal transplantation // J. Urol. 1991.-V. 146.-P. 417-419.

202. MacGowan M.P., Haye K., Kovacs G.T. et al. Prevalence of cytomegalovirus and herpes simplex virus in human sperm // Int. J. Androl. 1983. - V. 6. - P. 331-336.

203. Mach M., Kropff В., Dal Monte P. et al. Complex formation by human cytomegalovirus glycoproteins M (gpULlOO) and N (gpUL73) // J Virol. 2000. - V. 74. - P. 11881 -11892.

204. Maeda-Takekoshi F., Takekoshi M., Tanaka S. Expression of the immediate early antigens of human cytomegalovirus is responsible for virus proliferation; an intracellular immunization approach. // Tokai. J. Exp. Clin. Med. 1992. - V. 17. - P. 75-83.

205. Malkin J. E., Morand P., Malvy D. et al. Seroprevalence of HSV-1 and HSV-2 infection in the general French population // Sex. Transm. Infect. 2002. - V. 78. - P. 201-203.

206. Mansat A., Mengelle C., Chalet M. et al. Cytomegalovirus detection in cryopreserved semen samples collected for therapeutic donor insemination // Hum. Reprod. 1997. - V. 12. - P.1663-1666.

207. Marchini A., Liu H., Ahu H. Human cytomegalovirus with IE-2 (UL122) deleted fails to express early lytic genes // J.Virol. 2001. - V. 75.-P. 1870-1878.

208. Margolis M.J., Pajovic S., Wong E.L. et al. Interaction of the 72-kilodalton human cytomegalovirus IE1 gene product with E2F1 coincides with E2F-dependent activation of dihydrofolate reductase transcription// J Virol. 1995. - V. 69. - P. 7759-7767.

209. Marina S., Marina F., Alcolea R. et al. Human immunodeficiency virus type 1—serodiscordant couples can bear healthy children after undergoing intrauterine insemination // Fertil. Steril. 1998. - V. 70. -P. 35-39.

210. Marina S., Marina F., Alcolea R. et al. Pregnancy following intracytoplasmic sperm injection from an HIV-1 seropositive man // Hum. Reprod. 1998. - V. 13. - P. 3247-3249.

211. Mascola L., Guinan, M. E. Screening to reduce transmission of sexually transmitted diseases in semen used for artificial insemination // N. Engl. J. Med. 1986. - V. 314. - P. 354-359.

212. Masse M.J., Messerle M., Mocarski E.S. The location and sequence composition of the murine cytomegalovirus replicator (orz'Lyt). // Virology. 1997. - V. 230. - P. 350-360.

213. Mastroianni A., Coronado O., Manfredi R. et al. Acute cytomegalovirus prostatitis in AIDS // Genitourin. Med. 1996. - V. 72. p. 447-448.

214. McLaughlin, E.A. Recruitment of only cytomegalovirus (CMV) negative semen donors // Hum. Reprod. 2000. - V. 15. - P. 2247-2249.

215. Mercan К., Urman В., Alatas С. et al. Outcome of testicular sperm retrieval procedures in non-obstructive azoospermia: percutaneous aspiration versus open biopsy // Hum. Reprod. 2000. - V. 15. - P. 1548-1551.

216. Mertz G. J., Rosenthal S. L., Stanberry L. R. Is herpes simplex virus type 1 (HSV-1) now more common than HSV-2 in first episodes of genital herpes? // Sex. Transm. Dis. 2003. - V. 30. - P. 801-802.

217. Mertz G., Benedetti J., Asbley R. et al. Risk factors for the sexual transmission of genital herpes // Ann. Intern. Med. 1992. - V. 116. - P. 197-202.

218. Meyer J.D., Ljungman P., Fisher L.D. Cytomegalovirus excretion as a predictor of cytomegalovirus disease after marrow transplantation: importance of cytomegalovirus viremia //J. Infect. Dis. — 1990.— V. 162,- P. 373-380.

219. Mizuta K., Abiko C., Aoki Y. et al. Analysis of monthly isolation of respiratory viruses from children by cell culture using a microplate method: a two-year study from 2004 to 2005 in Yamagata, Japan // Jpn. J. Infect. Dis.-2008.-V. 61.-P. 196-201.

220. Mocarski E. S. Jr., Shenk Т., Pass R.F. Cytomegaloviruses. In book: Fields Virology, 5th Ed. by D. Knipe, P. Howley. Philadelphia: Lippincott, Williams & Wilkins, 2007. - P. 2702-2772.

221. Molloy S.S., Anderson E.D. et al. Bi-cycling the furin pathway: from TGN localization to pathogen activation and embryogenesis // Trends Cell Biol. 1999. -V. 9. - P. 28-35.

222. Moore D., Campero C., Odeon A. et al. Humoral immune rasponse to infectious agents in aborted bovine fetuses in Argentina // Rev. Argent. Microbiol. 2003. - V. 35. P. 143-148.

223. Moore D.E., Ashley R.L., Zarutskie P.W. et al. Transmission of genital herpes by donor insemination // JAMA. 1989. - V. 261. - P.3441-3443.

224. Moore H. The epididymis // In book: Chisholm G., Fair W. (eds.). Scientific foundation in Urology, 1990. Heinemann Medical, Oxford.-P. 399-410.

225. Mostad S.B., Kreiss J.K., Ryncarz A. et al. Cervical shedding of herpes simplex virus and cytomegalovirus throughout the menstrual cycle in women infected with human immunodeficiency virus type 1 // Am J Obstet Gynecol. 2000. - V. 183. - P. 948-955.

226. Muciaccia В., Uccini S., Filippini A. et al. Presence and cellular distribution of HIV in the testes of seropositive subjects: an evaluation by in situ PCR hybridization//FASEB J.- 1998.-V. 12.-P. 151-163.

227. Muller S., Dejean, A. Viral immediate-early proteins abrogate themodification by SUMO-1 of PML and SplOO proteins, correlating with nuclear body disruption // J. Virol. 1999. - V. 73. - P. 5137-5143.

228. Nagano T. The crystalloid of Lubarsch in the human spermatogonium//Z Zellforsch.- 1969.-V. 97.-P. 491-504.

229. Neighbour P.A., Fraser L.R. Murine cytomegalovirus and fertility: potentional sexual transmission and effect of this virus on fertilization in vitro // Fertil. Steril. 1978. - V. 20. - P. 216-222.

230. Neofytou E., Sourvinos G., Asmarianaki M. et al. Prevalence of human herpes virus types 1-7 in the semen of men attending an infertility clinic and correlation with semen parameters // Fertil. Steril. -2009. — V. 91.-P. 2487-2494.

231. Nuovo G. J., Becker J., Simsir A. et al. HTV-1 nucleic acids localize to the spermatogonia and their progeny. A study by polymerase chain reaction in situ hybridization //Am. J. Pathol. 1994. - V. 144. -P. 1142-1148.

232. Ochsendorf F.R. Sexually transmitted infections: impact on male fertility // Andrologia. 2008. - V. 40. - P. 72-75.

233. Oliver R. T. Atrophy, hormones, genes and viruses in aetiology germ cell tumours // Cancer Surv. 1990. - V. 9. - P. 263-286.

234. Pagano J.S. Diseases and mechanisms of persistent DNA virus infection: latency and cellular transformation // J. lnfec. Dis. 1975. - V. 132.-P. 209.

235. Pajovic S., Wong E.L., Black A.R. et al. Identification of a viral kinase that phosphorylates specific E2Fs and pocket proteins.Mol // Cell. Biol. 1997. - V. 17. - P. 6459-6464.

236. Pallier C. Tebourbi L., Chopineau-Proust S. et al. Herpesvirus, cytomegalovirus, human sperm and assisted fertilization // Hum Reprod.- 2002,-V. 17.-P. 1281-1287.

237. Pampou S. Yu., Gnedoy S. N., Bystrevskaya V. B. et al. Cytomegalovirus genome and the immediate-early antigen in cells of different layers of human aorta // J. Virchows Arch 2000. - V. 436. -P. 539-552.

238. Patel R., Snydman D.R., Rubin R.N. et al. Cytomegalovirus prophylaxis in solid organ transplant recipients // Transplantation. -1996.- V.61.- №9. P. 1279-1289.

239. Paulus C., Krauss S., Nevels M. A human cytomegalovirus antagonist of type I IFN-dependent signal transducer and activator of transcription signaling // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2006. - V. 103.- P. 3840-3845.

240. Penta M., Lukic A., Conte M. et al. Infectious agents in tissues from spontaneous abortions in the first trimester of pregnancy // New Microbiol. 2003. - V. 26. - P. 329-337.

241. Perdue, M. L., Cohen, J. C., Randall et al. Biochemical studies of the maturation of herpesvirus nucleocapsid species // Virology. 1976. -V. 74.-P. 34-38.

242. Perozzo R, Jelesarov I, Bosshard HR et al. Compulsory order of substrate binding to herpes simplex virus type 1 thymidine kinase. A calorimetric study // J Biol Chem. 2000. - V. 275. - P. 16139-16145.

243. Pignatelli S., Monte D., Zini N. et. al. Immunoelectron microscopy analysis of HCMV gp UL73 (gN) localization // Arch. Virol. 2002.- V. 147.- P.1247-1256.

244. Piomboni P., Baccetti B. Spermatozoon as a vehicle for HIV-1 and other viruses: a review // Mol Reprod Develop. 2000. - V. 56. - P. 238-242.

245. Politch J.A., Xu C., Tucker L. et al. Separation of human immunodeficiency virus type 1 from motile sperm by the double tube gradient method versus other methods // Fertil Steril. 2004. - V. 81. -P. 440-447.

246. Prichard M.N., Duke G.M., Mocarski E.S. Human cytomegalovirus uracil DNA glycosylase is required for the normal temporal regulation of both DNA synthesis and viral replication // J Virol.- 1996.- V.70. P. 3018-3025.

247. Prichard M.N., Jairath S., Penfold M.E. et al. Identification of persistent RNA-DNA hybrid structures within the origin of replication of human cytomegalovirus // J Virol. 1998. - V. 72. - P. 6997-7004.

248. Prior J.R., Moroll D.R., Birks A.G. et al. The screening for cytomegalovirus antibody in semen of donors and recipients within a donor insemination programme // Hum. Reprod. 1994. - V. 9. - P. 2076-2078.

249. Rappersberger K. Infection with herpes simplex virus and varicella zoster virus in pregnancy: clinical manifettations in mother, fetus and new-born-therapeutic options // Hautarzt. 1999. - V.50. - P. 706-714.

250. Rasmussen L., Morris S., Hamed K. et al. Human cytomegalovirus DNA is present in CD45+ cells in semen from human immunodeficiency virus-infected patients // J. Infect. Dis. 1995. - V. 171.-P. 432-436.

251. Rinaldo C.R. Jr,. Kingsley L.A., Lyter D.W. et al. Excretion of cytomegalovirus in semen associated with HTLV-III seropositivity in asymptomatic homosexual men // J. Med.Virol. 1986. - V. 20. - P. 1722.

252. Roby C., Gibson W. Characterization of phosphoptoreins and protein kinase activity of virions, noninfectious enveloped particles and dense bodies of human cytomegalovirus // J. Virol. 1986. - V. 59. — P. 714-727.

253. Roizman В., Knipe D.M., Whitley R.J. Herpes Simplex Viruses. // In book: Fields Virology, 5th Ed. by D. Knipe, P. Howley.

254. Philadelphia: Lippincott, Williams & Wilkins. 2007. - P. 2502-2601.

255. Roizman В., Sear A.E. Herpes simplex viruses and their replication. In book: Virology, Ed. by Fielda B.N., Knipe D.M., Chanock R.M., Hirsch M.S., Melnick J.L., Monath T.P., New York. 1990.- P.1795-1841.

256. Ross J.D.C., Smith I.W., Elton R. A. The epidemiology of herpes simplex types 1 and 2 infection of the genital tract in Edinburgh 19781991 //Genitourin. Med. 1993.-V. 69. - P. 381-383.

257. Roulet V., Denis H., Staub C. et al. Human testis in organotypic culture: application for basic or clinical research // Hum. Reprod. -2006.- V.21. P. 1564-75.

258. Roulet V., Satie A.-P., Ruffault A. et al. Susceptibility of Human Testis to Human Immunodeficiency Virus-1 Infection in Situ and in Vitro // Am. J. Path. 2006. - V. 169. - P. 2094-2103.

259. Rowley M.,. Berlin J. et al. The ultrastructure of four types of human spermatogonia // Z Zellforsch. Mikrosk. Anat. 1971. - V. 112. -P. 139-146.

260. Salomon B, Maury S, Loubiere L. et al. A truncated herpes simplex virus thymidine kinase phosphorylates thymidine and nucleoside analogs and does not cause sterility in transgenic mice // Mol Cell Biol. — 1995.-V. 15.-P. 5322-5328

261. Salvant B.S., Fortunato E.A., Spector D.H. Cell cycle dysregulation by human cytomegalovirus: influence of the cell cycle phase at the time of infection and effects on cyclin transcription // J. Virol. 1998. - V. 70. - P. 7867-7877.

262. Sambucetti, L. С., Cherrington J. M., Wilkinson G. W. G. et al. NF-кВ activation of the cytomegalovirus enhancer is mediated by a viral transactivator and by T cell stimulation // J. EMBO. 1989. - V. 8. - P. 4251-4258.

263. Sauer M.V. Sperm washing techniques address the fertility needs of HIV-seropositive men: a clinical review // Reprod Biomed Online. -2005.-V. 10.-P. 135-140.

264. Schultz-Larsen J. The morphology of human sperm // Acta Pathol. Microbiol. Scand. 1958. -V. 128. - P. 1-121.

265. Scott D. A., Coulter W. A., Lamey P. J. Oral shedding of herpes simplex virus type 1: a review // J. Oral Pathol. Med. 1997. - V. 26. -p. 441-447.

266. Severi В., Landini M. P. et al. Human cytomegalovirus nuclear and cytoplasmic dense bodies // J. Arch. Virol. 1992. - V. 123. -P. 193-207.

267. Severi В., Landini M. P., Govoni E. Human cytomegalovirus morphogenesis: an ultrastructural study of the late cytoplasmic phases // Arch.Virol. 1988. - V. 98.-P. 51-64.

268. Sharpe R. M. Regulation of spermatogenesis // In book: Knobil E., Neil J., eds. The Physiology of reproduction, 2nd edn. Raven Press, New York, 1994.-P. 1363-1434.

269. Shen С., Chang S., Yang S. et al. Cytomegalovirus is present from semen of a population of men seeking fertility evaluation // J. Infect. Dis. 1994. - V. 169. - P. 222-223.

270. Sherman J.K., Morgan P.N. Effect of human semen on herpes-simplex virus-2 // Fertil Steril. 1989. -V. 51. - P. 186-189.

271. Shevchuk M. M., Nuovo G. J., Khalife G. HIV in testis: quantitative histology and HIV localization in germ cells // J. Reprod. Immunol. 1998.-V. 41.-P. 69-79.

272. Sifakis S., Koumantakis E., Koffa M. et al. Detection of herpes simplex virus in aborted material using the polymerase chain reaction technique // Gynecol. Obstet. Invest. 1998. - V.45. - P. 109-115.

273. Simmen K., Singh J., Mattias B. et. al. Global modulation of cellular transcription by human cytomegalovirus is initiated by viral glycoprotein В // PNAS.-2001. V. 98. - P. 7140-7145.

274. Singh J., Compton, T. The IE1 protein of human cytomegalovirus is a key component of host innate immune repression. 29th International Herpesvirus Workshop, Reno, Nevada, 2004.

275. Skakkaebaek N.E., Giwereman A., de Kretser D. Pathogenesis and management of male infertility // Lancet. 1994. - V. 343. - P. 1473-1479.

276. Smith J. S., Herrero R., Munoz N. et al. Prevalence and risk factors for herpes simplex virus type 2 infection among middle-age women in Brazil and the Philippines // Sex. Transm. Dis. 2001. - V. 28.-P. 187-194.

277. Spano L., Vargas P., Ribeiro F. et al. Cytomegalovirus in human abortion in Espirito Santo, Brazil // J. Clin. Virol. 2002. - V.25. - P. 173-178.

278. Spector S.A., Hirata K.K., Newman, T. Identification of multiple cytomegalovirus strains in homosexual men with acquired immunodeficiency syndrome // J. Infect. Dis. 1984. - V. 150. - P. 953175

279. Spengler M. L., Kurapatwinski К., Black A. R. et al. SUMO-1 modification of human cytomegalovirus IE1/IE72 // J. Virol. — 2002. — V. 76. P. 2990-2996.

280. Stagno S. Cytomegalovirus // In book: Infectious Diseases of the Fetus and Newborn Infant, 5th edn. J. S. Remington and J. O. Klein, eds., Philadelphia:W.B. Saunders, 2001. P. 389^124.

281. Stagno S., Ireland K.R. Congenital cytomegalovirus infection // Clinical management of Herpes Viruses / S.L. Sacks, S.E. Straus. IOS Press, 1995.-P. 329-340.

282. Stanberry L.R. Asymptomatic herpes simplex virus shedding and Russian roulet // Clin. Infect.Dis. 2000. - V. 30. - P. 268-269.

283. Stephanopoulus D.E., Myers M.G., Berstein D.I. Genital infections due to herpes simplex virus type 2 in the male guinea pigs // J. Infect. Dis. 1989. - V. 159. - P. 89-95.

284. Steven A. C., Spear P. G. Herpesvirus capsid assembly and envelopment. In Structural Biology of Viruses, ed.W. Chiu, R.M. Burnett, R. L. Garcea, NewYork: Oxford University Press. 1997. — P. 312-351.

285. Tabrizi S.N., Skov S., Chandeying V. et al. Prevalence of sexually transmitted infections among clients of female commercial sex workers in Thailand // Sex. Trans. Dis. 2000. - V. 21. - P. 358-362.

286. Tachet A., Dulioust E., Salmon D. et al. Detection and quantification of HIV-1 in semen: identification of a subpopulation of men at high potential risk of viral sexual transmission // AIDS. 1999. -V. 13.-P. 823-831.

287. Tang Q., Maul, G. G. Mouse cytomegalovirus immediate-early protein 1 binds with host cell repressors to relieve suppressive effects on viral transcription and replication during lytic infection // J. Virol.2003.-V. 77.-P. 1357-1367.

288. Tebourbi L., Courtot A.M., Duchateau R. et al. Experimental inoculation of male mice with murine cytomegalovirus and effect on offspring // Hum. Reprod. 2001. - V. 16. - P. 2041 -2049.

289. Tebourbi L., Testart J., Cerutti I. et al. Failure to infect embryos after virus injection in mouse zygotes // Hum. Reprod. — 2002. V. 17. -P. 760-764.

290. Theiler R. N., Compton T. Characterization of the signal peptide processing and membrane association of human cytomegalovirus glycoprotein O. // J Biol Chem. 2001. - V. 276. - P. 39226- 39231.

291. Tjiam K.H., van Heijst B.Y., Polak-Vogelzang A.A. et al. Sexually communicable micro-organisms in human semen samples to be used for artificial insemination by donor // Genitourin Med. — 1987. — V. 63.-P. 116-118.

292. Tooze J., Hollinshead M., Reis B. et al. Progeny vaccinia and human cytomegalovirus particles utilize early endosomal cisternae for their envelopes // Eur. J. Cell Biol. 1993. - V. 60. - P. 163-178.

293. Torino G., Bizzarro A., Castello G. et al. Cytomegalovirus and male infertility // Ann. Biol. Clin. V. 45. - P. 440-443.

294. Trus B. L., Booy F. P., Newcomb W. W. et al. The herpes simplex virus procapsid: structure, conformational changes uponmaturation, and roles of the triplex proteins VP 19c and VP23 in assembly // J.Mol. Biol. 1996. - V. 263. - P. 447-462.

295. Trus B.L. Gibson W. et al. Capsid structure of simian cytomegalovirus from cryoelectron microscopy: evidence for tegument attachment sites // J Virol. 1999. - V. 73. - P. 2181-2186.

296. Turkington R., Majumder G. Gene activation during spermatogenesis // J Cell Physiol. 1975. - V.85. - P. 495-508.

297. Urry R. Laboratory diagnosis of male infertility // Clin Lab Med.1985. — V. 5.-P. 355-365.

298. Uzal F.A., Woods L., Stillian M. et al. Abortion and ulcerative posthitis associated with caprine herpesvirus-1 infection in goats in California // J Vet Diagn Invest. 2004. - V. 16. - P. 478-484.

299. Vanroose G., Nauwynck A., Van Soom E. Susceptibility of zona-intact and zona-free in vitro-produced bovine embryos at different stages of development to infection with bovine herpesvirus-1 // Theriogenology. 1997. - V. 47. - P. 1389-1402.

300. Varela J. A., Garcia-Corbeira P., Aguanell M. V. et al. Herpes simplex vims type 2 seroepidemiology in Spain: prevalence and seroconversion rate among sexually transmitted disease clinic attendees // Sex. Transm. Dis. 2001. - V. 28. - P. 47-50.

301. Vamum S.M., Streblow D.N. et al. Identification of Proteins in Human Cytomegalovims (HCMV) Particles: the HCMV Proteome // J. Virol.- 1994.-V. 78.-P. 10960-10966

302. Vey M., Schafer W. Proteolytic processing of human cytomegalovims glycoprotein В (gpUL55) is mediated by the human endoprotease furin // Virology. 1995. - V. 206. - P. 746-749.

303. Vyse A. J., Gay N. J., Slomka M. J. The burden of infection withHSV-landHSV-2in Englandand Wales: implications for the changing epidemiology of genital herpes // Sex. Transm. Infect. 2000. -V. 76.-P. 183-187.

304. Wade M., Kowalik T. F., Mudryj M. et al. E2F mediates dihydrofolate reductase promoter activation and multiprotein complex formation in human cytomegalovims infection // Mol. Cell. Biol. — 1992.- V. 12.-P. 4364-4374.

305. Wald A., Corey L., Cone R. et al. Frequent genital herpes simplex vims 2 shedding in immunocompetent women: effect of acyclovir treatment // J. Clin. Investig. 1997. - V. 99. - P. 1092-1097.

306. Wald A., Langenberg A., Link K. et al. Effect of condoms on reducing the transmission of herpes simplex virus type 2 from men to women// J. Am. Med. Assoc. -2001. -V. 285. P. 3100-3106.

307. Wald A., Matson P., Ryncarz A. et al. Detection of herpes simplex virus DNA in semen of men with genital HSV-2 infection // Sex Transm Dis. 1999. - V. 26. - P. 1 -3.

308. Wald A., Zeh J. E., Selke S. A. et al. Genital shedding of herpes simplex virus among men // J. Infect. Dis. 2002. - V. 186. (Suppl. 1) -P.34-39.

309. Wan L., Molloy S.S. PACS-1 defines a novel gene family of cytosolic sorting proteins required for trans-Golgi network localization // Cell. 1998.-V. 94.-P. 205-216.

310. Weiss H., Buve A., Robinson N. et al. The epidemiology of HSV-2 infection and its association with HIV infection in four urban African populations. AIDS. 2001. - V. 15 (suppl. 4). - P. 97-108.

311. Whealy M.E., Card J.P. Effect of brefeldin A on alphaherpesvirus membrane protein glycosylation and virus egress // J. Virol. — 1991. V. 65.-P. 1066-1081.

312. Whitley R. J., Roizman B. Herpes simplex viruses // Lancet. -2001.-V. 357.-P. 1513-1518.

313. Whitley R., Corey L., Arvin A. et al. Changing presentation of herpes simplex virus infection in neonates // J. Infect. Dis. — 1998. V. 158.-P. 109-116.

314. WHO laboratory manual for the examination of human semen• tViand sperm-cervical mucus interaction // 4 ed., Cambridge University Press. 1999.-P. 128.

315. Wiebusch L., Asmar J., Uecker R. et al. Human cytomegalovirus immediate-early protein 2 (IE2)-mediated activation of cyclin E is cell-cycle-independent and forces S-phase entry in IE2-arrested cells // J Gen Virol. 2003.-V. 84.-P. 51-60.

316. Wiebusch L., Hagemeier C. The human cytomegalovirus immediate early 2 protein dissociates cellular DNA synthesis from cyclin-dependent kinase activation // EMBO J. 2001. - V. 20. - P. 1086-1098.

317. Wilkinson G. W., Kelly C., Sinclair J. H. et al. Disruption of PML-associated nuclear bodies mediated by the human cytomegalovirus major immediate early gene product // J. Gen. Virol. — 1998. V. 79. — P. 1233-1245.

318. Willison K., Ashworth A. Mammalian spermatogenesic gene expression // Trends Genet. 1987. - V. 3. - P. 351-355.

319. Winkler M., Siepen D., Stamminger T. Functional interaction between pleiotropic transcativator pUL69 of human cytomegalovirus and the human homology of yeast chromatin regulatory protein SPT6. // J. Virol. 2000. - V. 74. - P. 8053-8064.

320. Witz C.A., Duan Y., Burns W.N. et al. Is a risk of cytomegalovirus transmission during in vitro fertilization with donated oocytes?//Fertil. Steril. 1999.-V. 71.-P. 302-307.

321. Wrathall A.E., Simmons H.A., Van Soom A. Evaluation of risks of viral transmission to recipients of bovine embryos arising from fertilisation with virus-infected semen // Theriogenology. 2006. — V. 65. - P. 247-274.

322. Wright E., Bain M., Teague L. et al. Ets-2 repressor factor recruits hi stone deacetylase to silence human cytomegalovirus immediate-early gene expression in non-permissive cells // J Gen Virol. 2005. - V. 86. - P. 535-544.

323. Wu K.H., Zhou Q.K., Huang J.H. et al. Infection of cytomegalovirus and herpes simplex vims and morphology of the infected spermatogenic cells in infertile men // Zhonghua Nan Ke Xue. -2007.-Vol. 13.-P. 1075-1079.

324. Xu F., Schillinger J. A., Sternberg M.R. et al. Seroprevalence and coinfection with herpes simplex virus type 1 and type 2 in the United States, 1988-1994//J. Infect. Dis.-2002.- V. 185.-P. 1019-1024.

325. Xu Y., Cei S.A. Human cytomegalovirus DNA replication requires transcriptional activation via an IE2- and UL84-responsive bidirectional promoter element within oriLyt // J Virol. 2004. - V. 78. -P. 11664-77.

326. Yanagimachi R. Mammalian fertilization // In book: Knobil E., Neil J., eds. The Physiology of reproduction, 2nd edn. Raven Press, New York, 1994.-P. 189-317.

327. Yang Y.S., Ho H.N., Chen H.F. et al. Cytomegalovirus infection and viral shedding in the genital tract of infertile couples // J. Med. Virol. 1995.-V. 45.-P. 179-182.

328. Yasazumi G. Spermatogenesis in animals as revealed by electron microscopy // J Biophys Biochem Cytol. 1956. - V. 2. - P. 445-449.

329. Yogev L., Kleiman S., Shabtai E. et al. Seasonal variations in pre-and post-thaw donor sperm quality // Human Reproduction 2004. -V.19. - P. 880-885.

330. Yoshikawa, Y., Truong L. D., Fraire A. E. et al. The spectrum of histopathology of the testis in acquired immunodeficiency syndrome // Mod. Pathol. 1989. - V. 2. - P. 233-238.

331. Yu X., Trang P., Shah S. et al. Dissecting human cytomegalovirus gene function and capsid maturation by ribozyme targeting and electron cryomicroscopy // Proc. Natl Acad. Sci. USA. 2005. - V.102. - P. 7103-7108.

332. Yueh Y., Yaworsky P., Kappen C. Herpes simplex virus transcriptional activator VP 16 is detrimental to preimplantation development in mice // Molec. Repr. Developm. 1999. - V. 55. - P. 37-46.

333. Zhu Z., Gershon M.D. et al. Envelopment of varicella-zoster virus: targeting of viral glycoproteins to the trans-Golgi network // J. Virol. 1995.-V. 69.-P. 7951-7959.

Информация о работе

Науменко, Виктор Алексеевич
кандидата медицинских наук
Москва, 2009
ВАК 03.00.06

Диссертация

Выявление вируса простого герпеса и цитомегаловируса в мужских половых клетках при экспериментальной инфекции in vitro и в эякуляте мужчин с нарушениями фертильности - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы