Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

ВЫЯВЛЕНИЕ И НЕКОТОРЫЕ ОСОБЕННОСТИ ПРОТЕОЛИТИЧЕСКОГО КОМПЛЕКСА АКТИНОМИЦЕТОВ

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "ВЫЯВЛЕНИЕ И НЕКОТОРЫЕ ОСОБЕННОСТИ ПРОТЕОЛИТИЧЕСКОГО КОМПЛЕКСА АКТИНОМИЦЕТОВ"

АКАДЕМИЯ НАУК СССР

ИНСТИТУТ МИКРОБИОЛОГИИ

л На правах рукописи

11АР0НЯН Аракси Хачатуровеа

ВЫЯВЛЕНИЕ И НЕКОТОРЫЕ ОСОБЕННОСТИ ПРОТЕОЛИТИЧЕСКОГО КОМПЛЕКСА АКТИНОМИЦЕТОВ

МИКРОБИОЛОГИЯ — 03.00.07 (ДИССЕРТАЦИЯ НАПИСАНА НА РУССКОМ ЯЗЫКЕ)

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

I

Москва — 1974

J-K1-ъЬкотщг!^

А К А Д1НВЯ В 4 ХК С С С Р

внетгиишкрсБисиопш

На правах рувоиож

па ювян ;

Араке» Хачатуровыа

ШШ И ШКОТОВ« ОССБКНЮСМ ПРОГВО-лнтичкаога КШПЕКСА МТННСШЩЕТСШ

Иакробяоаогяа - О5.ОО»07 :0„ ;■,;■ : ( Даооермдия ввпноааа на руасксм яаяха)

А в* о р а ф а р а *

джсоеряавда на оаяовввм учаноЯ отапеня . ; кавдвда*а биологичеокжх «ау*

Мооива - 197*

■ ^¡йз&зг ¿'л;

Работа внпсднява 9 Институте микробиологии АН СССР

Научна! руководитель - чдвв-»оррв оп оцдв иг АН СССР Щ.АЛСРАСЦДЬШЩ

Официальные сяшонавтн:

доктор биологических наук( профессор Д .Г .ДОГИШВА доктор биологических нал1» профеосор Н.С .УГОРОВ

Диссертация направлена ва официальная отшв в Институт по нвыоканню новых антибиотиков Академам Медицинских наук СССР.

Автореферат разослан

Защита диссертации оостоитоя ■ г,

в чао.^З о мин.на заседаний Ученого Совета Института микробиологии АН СССР ( Москва, В-312, Профсоюзная улица , 7 коря.2).

С диссертацией »окно ознакомиться в библиотеке Иноти -тута микробиологии АН СССР.

Учений секретарь совета от.науч.оотр.,в.б.н.

/Л.К.Оошщкая/

. Ферментативная деятельность микроорганизмов, в т<ш .чиола актиншицеюг, вызывает неослабевающий интерес исследователе 2 как в отечественной, так и зарубежной биологической науке.

Особое вникание отводится групп? протеопитичаеких фар -ментов, шашка Я исклвчитально важное значение в клеточной метаболизме. ; "'. -

Эти фэрианты нграюг важнейшую ре гуляторную роль в координации ' кругооборота ( распад «—- синтез ¿в ¿<лго .) белка и цуклесдротеадов, в особенности в процессах спорообразования у микроорганизмов,. ■ .

Известно, чю протеолитцчаокив коиплаксн актившицатов состоят из большого набора фариеитов о различной специфично - 1 стью и поэтову представляют собой ценные сарьавав источники для получения и асследования отдельных протеаа ( йаварэнава, ?ассулин, 1964; Зянйксова, Петрова, 1965; Цнпврович, Гудака/ 1966; Расеулин и др.1968, 1972; Логинова» Негру-Вске, 1969*, Кощо^, ^яиваюа в^ а!^,196б I Мог1Ьага, -

ТвигиЫ, ;Х968( веПЛвГ', Тгор, 1971( ЮаЫйаеЪвД.., 1971

и др.)« \"V '■-.

рикой из особенностей протеолитического коиплакоа акти-ношщетов является способность свертнвать молоко,.;

Следует особо упомянуть об этой способности актинашце-тов как диагностическом признаке в 'систематике лучистых гриб г ков. Однако до сих пор окончательно не установлена такоонсми ческая значимость этого признака, что, возможно, объясняется .'..' несовершенством применяемой методики*

Обадрннятий метод определения способности свертывать/ молоко в пробирках в процессе роста культур при 27 °(оптимальной температуре для:мезофильнык актиншицетов) не разграничи-. вает молокоовертнвающую активность штаммов от их пешг свизирую-""' щей способности и даже иногда совсем их не выявляем, при этой температуре. . ■

ПоэтомупрадотаБДйлооьцалаоообразвыыразработатьбы-: струп стандартную методику определения молокосвертнващей ; активности на плотных средах. Детальное изучение эмйактив -

ности,как одного из возможных дополнительных признаков при дифференциации некоторых таксонов лучистых грабков,прадотав -хает значительный теоретический интерес./;

Нареку о внвеукззаннын вта проблема иовет.имвтьи прав** тическое значение*

В пооаедвеевремя нала страна испытывает потребность я ончухнсад фермевте или реннине, вызывавшем створаживание молока и применяемом в сыроделии.' Обычно его получат из о ли -: застой оболочки желудка телят и ягнят молочного возраста*

Из заменителей ревнива более всего известен пепсин; П | также животного пронсхозЕдашш.В овяэи с этим перед отечем:-'; вениоа микробиологией стоит задача изыскания наиболее 'доступ-/' пнх и девевах источников »«деления указанного фермента. Опра- ; деленный иите ре о.п ред от авлявт гаке ши а лире нвина микробного v • происхакдегоя, Обюирные исследованияв атом направлении ведутся о грибами и бактериями; сведения о возможней, практическом. : использовании ахтиноынцетов как,продуцентов молокосвертывахк пего ферментного комплекса весьма малочисленны и изучение их.в «ом отношении представляется' своевременным.;'/■

Настоящая работа и посвящена лзучеви» накотормх осо- . ' бенностей протеолитического комплексе актиномицетов.

"В задачи исследование входило:-. • " : • ¡ ■■

I. Выявление'опоообности-актинанипетЬв ввертывать ыо -■■ локо; разработка експре со-мат ода определения молокооверты , -■ ваюцой активности на плотных средах* .

. 2. Сравштельное'изучение протеолитйчесвого феравнт' кого комплекса о молакосвартываювай способностьюу предста -вые лей различных систематических групп лучистых грибков; таксономическая.значимость »того комплекса* •'

3. Исследование влияния некоторых коыпонввтовсрвды^; • на молохоовертавающую активность вктивомшитов. ':."/ !:

4.И8учеш1е^8етиБяоотипрот?олитдчвокогокомплексау;^

не когорт аиоиазиругщахся культур' актиноиицвтов.V,";

. Двеоертация оостоит из двух частей: обзора литература, и собственных экспериментальна* исследований. •;•

Б обзора литературных данных обсуждается вопрос о свертывании и пепюнизациц нолока как диагиоотичаскоы признака .в .систематике актаношщетов. Кроме того, приводится описание раннана и пепсина - кислых пратваз со специфической мовокосвертываю -.: щей активностью, а также заменителеи 'равнинамикробного про - -исхоздания я их биосинтез* Paocuатривактоя. д анШе -, о прота олй-тичаских ферментах актияоыицетов, их роли в автоматических процессах 7 лучистых грибков. . ,

ЭКШВШМБНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

''" -Материалы я матояы

Материалом исследования слушали 482 культура, представ- ■ яяювде различные систематические трушшнорядка Actinonyce -tales : меэофШЕьнне культуры, полученныа из коллекция отдела ..' взаимодействия . микроорганизмов Института иийробиологии АН СССР,, группа термофильных актиноиидетов, добезяо предоставленная канд.бион.наук Н.С.Агра, - а также культуры актинаиицетов из Неж- . дународной коллекции. Изученные культуры представлаинв та<3л.2. , . Коллекция иазофильных актансмицетов поядервивала' на .сред» СР-1о глшоэоа.(иодификацин'срады Чапвкз-Кра сальников ,1950); -териофильнад - на пептЬнно-кукурузнш агара ( IKA), в которой глюкоза запенена кра'хмалои(Раутенттайн, 1957)♦ Для изучения:г ; п рот а олят ича ск ого комплекса' актином идет ов все культуры,п ре д'стяЫ ленные в табл.2,-выращивали повэрхноотныи.способои в.течение/:^ 6 суток на следящих средах; ыезофалыша актиноыацвти.^на'л^.;, : мучном агара - ,'2А (Красилышнов,1960) при 27°; -

терцофиданыё антинсыицеты на 1Щпра 55°; : ''.iv ";

«дкобактериа - на сусло-вгвра (Cft) при 27°;

: V кикококка - на иясо-поптонн«магаре(1Ш)при 27°* ;

■ ::: Для разработка акспресс-метода выявления иолокосвариь* v - ваящеПактивности актиноыицетов аа плотных лабораторных средах объектом исследованияпервоначальноолужилиоле дующие 7 куль- , :iyp: Actinomyces toticue штампы 5бб, 363/ 374,^40$,

.....¿ Viotinoffljcee'ep.; итаым J3x, выделеаннв из клубнаг картофеля, пораженных парной, а твадсе Act.sp. штамм 4ч. выделен* ныв кэ черноземной почвв Воронежской области. :

- Последние две актияоаицета, изученные на средах а по методам, спясэнншг в сборнике "Биология отдельных групп актк? воиицееов" (Краснльшвов, I960),были идентифвдировзны нами sas Act.bygro.scopletts тад*епЬуегие (Хлебарова,1973; John- : son^Sietz, 1971). ■■'';■

Исследование -влияния компонентов среды на образование дротеолатического ксашлекса о молакосввртнвающвй активностью .. . провопили на двух культурах: Act.bygroseoplcue1 ' ЗЗХ и JLot*

. tœclcua 366» '. "-■'■- ■'".■_-"■.

Автолитические процессы изучала по известному wat оду ? Красилвникова а Кореняко (X93S) на следующих сеникультурах: ' Act.hygi-osoopicus ""л" пхшию ЗЗх, 4 я HAot.twd.cus штамма -366, 568, 374, 405« 443..

" На плотных средах процесс автолиза отмечали шзуально ,■■ и подтверждали наблюдением изменений строения.мицелия в све- . ■ тоодтическом микроскопе. ; .'■■.'■:'■■''.■

S глубинной культуре авт оли з хара ктв риз овали п о паде-: : га» веса сухого мицелия к измене нив токкогостроеная гяФ на ' агектрокноивкроокопичаских препаратах,-, контрастировавши 2 -ным раотворда ф о сфорно-водьфрамов оЯ кислоты, рН 7,0. ■:,':.,■

Для определения протволитичэсноа активности изучаемых культур использовали количественный метод ¿неона ( ¿пяоа, 1938) о на значительными модификациями, а также^ общепринята качественные катоды: разжижение столбиков желатины и сверти -ваше ti пептовизащш молока в пробирках в процессе роста ак-тияоиицвтов при 27°.' г ;-■■'■■'■■ ' "' . ..".' "v"

Мслокосвертывавиулактиввоотьактиноиидвтовапрадвляли количественно в условных единицах по формуле. Юлиус а и Тиняко-i воя (1966): s о IOO/т j либо во Формуле Типографа и Овтинои ;;

(1966): а в УОг^О8 , где s - молакосвертвваювдя актив -

' ' . Т

ность, усл.ед/мя; Т - время (мин.), .в течение ко«орого превращается в плотный cry от он 10 мх молока при добавлении I .«л.

культуралъноа жидкости-иди раствора фермента при 37°; 40 -среднее время (мин), в течение хоторого происходят образ о ваша сгустка (в сыроделш}; К - коэффициент- разведекан» .

ИсХОЧВИКаЫИ фвривЯТОВ СЯУМЛИЬ . • •

а. агаровые блока 6 суточных культурt варавдттах не разных питательных о родах (диаметр блока - 8 мм); ; -; .

6« водные ала солевые. .')'

агарязованных культур;

■ в. фильтраты культуралышх жядкоствй'4-5 оуточного возраота;. Л ... .

/ г.''в вачвства;*отанддртшос'фвриентов использовала ÜtZ% растворы раянина ( препарат, полученнва из;ВШИ молочной про-* мыилвнноста). я трипсин .(фирыа ^ифко*»'-.СШ4)в -5 ^в« '

. удежьную активность молокоовзртивавшх фв|ывя1ннх , препаратов ила культуральных жидкостей: рассчитывали по коли -честву условнах единиц, приходящахоя на количество бе лка »шра-' , деленного яо методу Лоура ( в некоторых ояучаях - по оптячео-кому поглощению при 280 ни) яа I мд ореды. ' :

; Влияяиа^коцпоаантовпитвтвяьвой среда на молокосваргй-вающуи активность^' ; актаншицетов изучала яра кулмавиро- .■ ;; ваниа их. глубинным -способоив колбах Эрланмейера.объемом! у\. ■250 мд, оодармвдх 60 мл среды, при 28° яв качалке (220 об/Ьин),

. -. Засев среды производила суспензией спор,а вегетативно- ■ " ! го мацелая (2 ил ва колбу); приготовленной из•культур 10 суточЧ яого возраста па CP-I о глякозоИ. Культивирование штамма ЗЗх •.'••• проводили в течение 5 суток, ■■ штамма 566т iv."

. Исследуемые компоненты (источника углерода; азота'и'$007 . вора) ввозили в к оличе от вэх, эквавале нтннх их.с ода рк аняю: в ■ ;срадеСР-1;или некоторых комплексных средах.-прииейяемад: для v;' . выравдвания актияомицетов . - ГОА, UA; . ч..;.-' V'v "='■'

В процессе культивирования определяли: рН - потендио - '■" метрически;, биомассу --высушванвеи мидедяя при 106° до у" . ^постоянного веса и учитывала в «г веса оухого ыиделияна 1мл культуральяоХ жидкости.

; :\,..Пр0дуктявность; образования фарыентногакоюшкеао

- '8' ' -

молокосввртывающев активностью рассчитывали по количеств; условных единиц» приходящихся на I иг веса сухого ыицелия. Подученные результаты представляют средние значения из дан -них опытов в 3-5 повторностях.

Предварительную очистку молокоовертывапще'го ферментного комплекса проводила по общепринятому методу ионообмен -вой колоночной хроиатографпи на ЙЕАЕ - целлюлозе (Реьегаоп, ВоЪег, 19бг>.

. ИтаюгЗЗх внравдЬали глубинным способом при 28° на среде СМ^в кмороа кио^ заменила пептоном (5 г/л). Из хуяыуральной жидкости ферментная кшгглако осаждала либо сульфатом аммония ( 95 % насыщения), либо 3 объемами ацетона при 5°. Осадок дпаяазовала 18 часов при 5° против 0,002 II фосфатного буфера. На колонку (50 х 5 см), заполненнув ДЕЙЕ--целлюлозоЯ я уравновешенную 0,002 II фосфатный буфером (рН 7,0), наносила 1,66 г ( в 40 ил буфера) препарата-сырца* Посла прошваная колонка 0,008 II фосфатным буфером (рН 7,0) следовала .градиентная элюцня НаС1: в указанной буфере -(О- 1*011) СО ОКОрОСТЬЮ 50-60 мл/час.'

Результат» я ид обсуждение

■ Ординальный авспресо-метод определения молокосваоты-васшаЯ активности актиншвдетов на плотных лабораторных ере -

ш_ ■■'■.■-.■ ,

Одной аз основных задач нашего исследования была раз -' работка стандартного экспресс - метода - определения молоко -свертывавшей активности микроорганизмов на плотных средах. Этот вопрос ¿озаак .в результате изучения опособноота актино-иицатов свертывать молоко яри лшоца общепринятого качественного метода выявления. : ■ ■■..■

Цы использовала в данном случае казеиновые, плотные ~ ореды, нраготовляеине следующим образом* • -.¿./V

- А Навеску $ г казеина ( по Гаммарствву, без стерилизации) растворяли в 150 мл ОД Н Наш . пра тщательном перамвиавания и нейтрализовали до рН 7,0 о по -

мощ&в о,? В QOÍ . Затеи доводила объем до 300 ия соответству-вадша буферными растворами о цевью получения 2 $-ного кааеино -вого раствора: •

для получения рН 5,2-0,2 U ацетатным буфвром.рН 5,2; . дяя рН 7,2-0,2 Ы фосфатным буфером, рН 7,2; дяя рН 8,5-0^ ц ipao- HOI буферов, рН8,5(та*ив зва -ченая рН были предложены ранаа - Калакуцкий, 1970). ".

В рдаогштовкприготовланвоиу указа Енымвыие способом субстрату добавляла 0,001 и Са012« 2 H¿0 f так как иэваст-но, что в присутствии ионов Са активность ранни ta усаливается.

'Для приготовления плохшх сред снесаВ8ли 2 раствор

казеинового субстрата о З ^шм ведши расплавленным агаршв, : соотношении IïIj толщина олоя-3

: Ва агаровва пластинки а казеином ибо раскладывали агаровые блоки" кулиур, либо вносил* в лунки по 0,1 мл асследув -' mía растворы.

: Чашка о субстратами выда развали в термостата 12-18 чесов при хвипара1урзх 27, 37 и 55°, посла Чаго одну сарис плаотинсв заливала раствором 5 5&-вой тригдорукоуоной киолотн (НУ) для осаждениявегиДродазованного казанов, другую серию - на подвергали обработкам ■ ■-. 'г- '.■;.'■,

Реэультатаучитивали или по размерам воя просватав наа ; (прозрачяаязона), ила по зонам преципитация казеина в вгара (белая зона). Обычно учитывали диаметры зон в ми длине трах. V

Как известно, актив омицети првЕиугаотванно образуют внеклеточные нейтрально-вдлочноИ ксатлввовротеолатачасках фвривнтсз,п<>-ввдш1овд,:*рш10Иноповобногозаравтара.УЕазаЕ-; наап рота а знба строва являют оя на плотном вагвявовш субот- -paie при рН 7,2 к 8,5 ( по методу Касаткиной « соавт.,1969)«

Нами впарвие : установлено, что плотная! I J6 казеиновая -, ■ t среда при рН 5,2 пригодна для выявления молокоовартавающах -. фериензов.аипа ревнива, на основания чаго вбыд разработан метод быстрого отбора автаномицетов, свертнва&цих молоко. . -

: При внесении растворов ренна&а, трипояаа, а ханже фильтратов культуракьных видкоствйазтиношщатов в лу'нга на

казенного« " субстрате" о различны« значением рН (температура 37°) наблюдали следующее (рис. I):

■ I. Ферментативная активность препарата равнина- ( г условиях данного ошата) проявляется только при рН 5,2. нолокосвер-тывающая активность проте олит ич е с ког о комплекса актиномицато® также проявляется преимущественно при рН 5,2 (наряду с манн -мальвой лрота слнтиче ской активностью).

2. ферментативная активность препарата трипсина проявляется яра рН 8,5. .■■ -

Каэе аполитическая активность ферментного комплекса ак - ■ тиномицетов также проявляется преимущественно пря рВ 8,5 (наряду о минимальной м олокоовзртывэющей активностью) ,

5. При рН 7,2 автнвнооть трипсина уменьшается по сравна- . . нвю с рН 8,5»

Протоолитическяй комплекс актиномицетов проявляет как каэеиволитичеокую, так а модокосвертнвающзР» активность. Однако сдвиг значений: рН в кислую оторону уоиливал нолокосвартывающую активность, вщелочную-кагеинолиткчесную./ .

Во данным ; ряда авторов ( Весе лов к др.1%5; iwaeakl et ai, 1967 и др.), молокосвертываюиие фармвнтн микробного проиеход -дения имеют не только более широкие интервале оптимума рН (от, ,. 5 Д до 7,0) по сравнению о рэвнннои, но.тааеа более высокий температурный оптимум (55-65°). л: . л Г -

Установлено, что протеаэы всех типов ферментного комплекса актиномицетов различаются по температурному оптимуму действия, вследствие чего предлагается проводить определение активности пря температурах 27, 37 , 55 п 70°. ' , .

Размеры зов преципитации казеина агаровых пластинках коррелируют а копачеогвда изучаемого фермента в определенных пределах» В табл. I п рад ставлены денные поза висим ости размера белых зон о« концентрации решшна, вносимого в лунки суб-■^-отрата.

/-

-/•■и

Рис. I Проявление аиивнооти ренянна (А), трипсина(Б) и протвовитичвокого комплекс« йкмяоиадвтов (В) на плотных казеиновых оуботратах при различных значениях рН я температуру 57й/""* I. Белая зона специфической 1/оиокосвартывающей активности;

: Зона просветления казаиновогооубстрата (казеинолитнческая активность); 3. Агаровый блок или лунка. ' .; ' " V

Зависимое»„размера беинх вон ревнива от ого кощентрадии ( на I ^-нсвгказвиновои еубетрзт® рн 5,2)'*

Концентрация : Размер белах : Время свартн- ' ренннна* : зон, мм „< : ванвя молена» мг/мд х/ : ■ *** : мин ш/

О (раохвор, . 5 >-но! Ва01 )

0,09

0,18 • :

0,56

0,75

" 1.5

з,о ;

■г-' , \

* о 10(0) . 13(0) 16(0) 19(0) I 21(±) 24(12)

на свартываат

140 45 20

х/ В лунку вносили по 0,1 ило оотве т отвуеща г о раствора. зх/ В- настоящее таблице, как и во всех последующих,

щфры озиачают размер белах 'зон нолокосвартнваввзй : активности (мм).

Цифре в скобках - зоне просветления казеинового субетрата (1ш), образованиа которах овнаано о протао-. лжтическоа активность!) препарату иаш фермавгного комплекса.

ггг/ Время вабшдання до 180 нив-. : ( ; " ;,* 1 - введя активности. ..

По этим данных,примерно до 24- ми диаметр зоны преципитация казеина вокруг лунки изменялся пропорционально концентра-, ции диффундирующего в агар раствора рванина. Однако дальнее -аего увеличения размера зон при повышении концентрация равнина не наблюдала (или наблюдали в незначительной степени), что, возможно, объясняется пределами раствора«ости препарата.

При определении . активности киолых протезз в культура Л1г-ннх жидкостях и агаровых блоках выявляли зоны преципитация казеина размерам до 54 ш. Это свидетельствует о таи, что ферменты, содержащиеся в культуральиых жидкостях актив омицетов, обладали несколько иными свойствами диффундировать в вгар,чем раствор рвннина. ;■■■.■■"■

Крше того, свертывание молока начиналось о концентрации р81шаяа, соответствующей зоне преципитация казеина размером 19 мм, в случае ка культуральных жидкостей ( ила агаровых блоков) - 22-2+ ми.

Поэтому при использовании описанного метода диффузии в агар до не имеем достаточно оснований пересчитывать молоко -свертывающую активность культуральных жидкостей или агаровых блоков в «кг реннина.

Однако яри проведения сравнительного исследования боль шего количества проб в стандартных условиях опыта разработанный цетод диффузии в агар можно применять с достаточной тот -ностью. : 4 - '

Этот, метод характеризуется:. . I* Быстротой (: экспресс - метод), он позволяет с ;относатель -но высокой скоростью анализировать большое количество образцов, что трудпее сделать другими методами. 'А.'.---

2. Возможностью разграничения молокосвертывающей активности. .:;. ферментного комплекса от зго не ионизирующей способности.'-/;,-

3. Высокой концентрационной чувствительностью. Как показывают ' данные табл.1, нязкяв концентрации фермента (0,09-0,36 мг/мл), не определяемые количественным методом по времени.свертывания молока, монно выявить предлагаемым способом. , -

Таким образш, разработанный вами экспрасс-матод мо -ает задавить об непринятий метод опредв пения способности актиномицетов свертывать а пептонизвровать полоно'в пробирках в процессе выращивания культур при 27°.

Кроме того, он пригоден для отбора продуцентов молоко-свертнваещвго фараевтвого кошшкса С о минимально* и pota о ли-« тической активностью).

Сравнительная характеристика протеолитического Фетзиевт-ного комплекса с молокосвертввадтвдй, способностью у представите дай различных систематических.групп .лучи -отщ грибков:,.таксономическая; значимость „этого комплексу

В стандартных условиях проведения опытов били проверены 462 культур» различных представителей порядка Aetincwy^ cetaleг.

Необходима.отметить, что штаммы рода Actinomrcee ( streittomycee ) исследовали по группам, описанным Н.А.Кра-оильникош» (1970) согласно их пигмагаации. В каждое из них имеется свой'набор видов, однако, эти группа определенного таксономического статуса не сиест.

Результат проведенных опытов обобщены в сводной габл.2, где представлены данные об активности кислых протеаз у представителей раздачдах групп исследованных культур.

Активными штаммами считали те культура, агароше блоки которых, до данвнм экспресо-ыетсда, выявляли зоны. преципитации казеина при рН 5,2 размерам та мевее 23 мм, a у термофилов - не менее 25 мм (учитнвая хранение га Фоне богатой среды Ш).

Как следует из табл. 2, тпигмеятированныо культура активомицатов были намного активнее, чем цементированные. Так, виды, относящиеся в синай, Фиолетовой и желтой группам рода Actinomycee не проявкяза молокосвёртывавщвЙ~ активност и.

Наибольшей активностью прот а слвтича сз ог о фарцентного комплекса обладала термофильные актиномицетн (41,4 % активных штаммов), затеи культура из глоби спори новой (25 Jí),6e-

Сравнительная характеристика протаолатйчаского. фарлентного комплекса у различных представителей порядка Ас<;1потусеtal.ee .

Исследованные пред от а- ; Количество :{5 активных витали порядка -:—:—---4штаммов аа ка-

АсЪ1пощтсв1а1в8 * : видов ютамио«®^™0"

___, _ _ „____ _ ____1"____*_____ Ьо.а -___

Группы род а АсЫдощусва

Синяя - Сое11со1ог 17 27' 0

Фиолетовая" - 8 30 0

Красно-орзнгввая- ЕаЬго -

ахшапЫаоив . II 37 , 5,+

Желтая 71атоа 13 31 0

Зеленая - Т1г1й1а 18 44 2,3

Белая л беловатая-

А1Ьиз и д1Ъ1ймз 12 13 . 15,3

ГлоЗвспоравовая - 01оЫз -

рогиэ , ' " 10 32 " ." 25

Серая - (ИМаетев ; 56 49 12,2

Лавандовая - 1лтепйи1пв 6 18 5.5

Розовая - РгаД1ав ^ : 13 7,7,

Бурая СЬгоаоеепеа 16 21 ' 9»5

Ктльттш Накяунаводной

коллекции : 53 53 ' 7,5

Твшофильдае эктиномиавты 29 41,4

ВеияентиФшхироваяные акта-

коиияеты ■ ** 32 3,1

Род Ц?соЪа«-Ьвг1ша'

а) Розовая, группа 3 35 0

б) Бесцветная ' - . 14 7,1

Рол Цтсососсиз г \ 4 0

ВСЕГО

227 432 8,5

лой и Сздоватой (15,3#) и серой (12,2 Jt) групп.

Исследованное культуры из родов lircobaotexium г Мусо-coccus не проявляли протеолитичаскои активности (или - в очень слабой степени для бесцветных втамиов минобактерии).

Известно, что при классификации лучистых грибков фиаио -логические признаки, в тон числе протеокитичеокуп активность, обычно использую® для диагностики ВИДОВ. " ' *:

Результаты ваших исследований показали, что при наличии некоторых колебаний в иолокоосертывающей активности у ютаи -.лов одного вида многие из изученных видов характеризовались какими-либо определенными особенностями в проявлении атаЯ активности, предотавляювдш ценность для видовой дифференциации культур. 8» особенности следующие:

, а*. Обций уровень, ферментативной активности.

2 овомяо говаким ' уровнем ц олок оов е рты вающе й активности обладали следующие веди: Act,ctreptoK7«tQÍ;Act.megacporuo,Act. arneim«"'" » средним уровнем - вида Act. rectivloiacexis, JUt.taxiQftu, Act. aureoverticlllatue, Act.vtridobruaaeusj -низким уровнем - -виды Act.grisetia, Act.laveadula^Act, virl-Aot.malacàiticus H Др.

Некоторые из перечаоленных видов включали относительно большое количество штаммов, поэтому различия между тремя уроа-. яянн ективноотей проверяли с помощью статистической обработки результатов (табл.з).

Таким-обрезок, среднее арифазтиче ское рази ера зон преципитации казеина у Act.Streptomycin!: -с Достоверность» 0,90 вым. среднего арифметического размера зон других видов,кроме Act.langiaatmna , который занимает промежуточное поксаение между ними.

Достоверность проверяли о помощь» критерия Стьвдента-фи -sepa; волоке кие видов с низким уровнем активности определяли по критерию знаков (Вольф,1966). •

б. Температурный оптимум действия ферментного комплекса*

- - Установлено, что молокосвергавзювдя активность ряда мезо-фильвых актияамхцехов усиливалась при пошиении температу.-

Таблица 3

Стахистича сная обработка данных по протволия-чаокой активности различных видов актинсыицвтов ( по данный экспресс - метода)

в и я н :Кол-во

ь и д н :втаы-__,____,

ц : ил : -мв : ш *'Х ар.

: Ха*. б" ; х ар.

АсЪв^ерЬо - 8 22,5' 18+26 22,13 3,182 12,132

.: иус1а1

Ю 21 »5 17*24 20,6 2,91 ± 1,687

шиз

АсЪ;гв(Л1у1о- II 20 18* 21 19,82 1,168 ± 0,655 1асеиз

Ас*.<хяАсиа 14 19,5 17*22 19,Зб 2,845 ±1,346

Лл-иаигеотег- ^ 19,0 ' 16*20 18,33 Х,50 ±1,233

: Условные обозначения: Ив г медиана;

доверительпва интервал! X ар.- среднее арифметическое | ■ (Г- квадратичное отклонение.

ра проведения опыта до 55°(30 % видов ). У некоторых видов эта . активность ироявжнлась, главным оброздш, при 37° {например, .*'.-; Ас^Ьуегозсаз^сиа, -лайховваа- в др.). Для некоторых терио филов температурным оптимумом являлась температура 70° ;. (26 $ видов). : ■

в. Оптимальное значение рН для проявления активности Фермента.

; Показано^ что молокосвертывающио фермент» активоми-.:.-цетов,7как и.подобные ферменты других микроорганизмов, имели более широкие шперввяы-оттшума рй (5,2-7,2).: Следы активности проявлялась даге при рЯ 8,5. . .. ; у -ч'.\

Таким образом, яа ваш взгляд, при изучении лучистых грибков способность активно свертывать молоко монет битв диф-Ференцируювдм показателем, используемым как дополнительный систематический признак. В сочетании с ведущими признаками (Красильников, I93S, 1970; Shirling, Gottlieb, 1970) он моает характеризовать специфику видов и подвидов, а такна битв полезен при группировке культур рода Actinomyces.

Отбор наиболее активных пводудентов молокоевадтв-зающаго Фешеваного комплекса

В результате исследований по сравнительной характеристике проте ояитического ферментного комплекса различных представителей порядка Actixiomycetaiea нами был отобран ряд наиболее активных продуцентов: Act.hyEeoscopicas var» eaüyg-rus ЗЗх, Act.albus ' (Eossi - Dorla ) Gasp. 82, Act. etreptofflycini 52-13, Act. eporostellatua 2871 Act. psöiido-■laveadolao 3613, Act. globisporolactia 221, Act. turne — maceraos 1^42, Act« ep. 251, Act; tccdcus 366, Thermo -actinomyces albus 171, Aettiiobiflda dichotomlca 114, 127, Act* thermovulgarla 1915» Sbeiraoac-fcinwnyces vulgaris subsp. calvum 164, ■ Act. tíiermoriolaecus subsp. -apingens I&48, 2541; ThernioactiJiomyces vulgaris 136, 2681.

Следует отметить, что из 18 указанных отаммов 9 отно- ^

сятся к термофильное группе актиноыицетов.

По нашему мнении, наиболее перспективными для возможного- практического использования следует рассматривать втаммы с наименьшеВ протеолвтической активностью при pH 7,2 и 8,5 на Фоне высокой молокосвертывавщай способности при pH 5,2 (например, AcUglobisporolactis 221, Act.albuje ( Rossi - . Dorla ) Giep. 82, Act. bygroscoplcus var.enbjgma 3jx и др,)#

Отбор наиболее активввх продуцентов-длитедьвая и трудоемкая, но совершенно обязательная часть исследований, без которой невозможно проводить работа по выделении ферментов микробного происхождения.

Практическое *е использование актиномицетов' предусматривает на только высокую молокосвертывающую способность штаммов, но и изучение некоторых технологических сторон это-• го вопроса: .

а) качества образуемого сгустка молока .;

б) отсутствия его дальнейшего гидролиза,, в результате чего могут образоваться горькие пептиды; и др.

9

Однако решение этих специальных вопросов не входило в задачи нашей работы.

' Из перечисленных продуцентов для дальнейших исследования по влиянию некоторых условий.культивирования па актив -ность молокосвертывающяго ферментного комплекса были взяты две культуры: Act.hygroscoplcua штамм ЗЗх и Act.toxlons штамм 366. '

. Влияние некоторых комдоневтов .среды на молоко^ свертывают» активность культур Actitoreoacopl-<тз ЗЗх и Act, toadena _■

: л Сведения о влияний компонентов питательной.оредн .на иодокосвертываюпег» активность актиномицетов в литература отсутствуют, однако, данные такого рода наобходимы для \ характеристики биосинтеза изучаемого фермента.. --. *

Именно поэтому нами была предпринята пошлва.в определенной степени восполнить существующий пробел. •

.....Опыты проводили на указанных двух культу рах.Отиатим, ■;: -:

что.температурный, оптимум проявления активности для Act. hyg-roscoplcua 33Z-37°.a ДЛЯ Act. toxlcus 366-55°, './.

' Наряду с этим-культуры различались динамикой накопления . проте олатического комплекса при выращивании их на не - -которых средах. - ...

Влияние источников, углерода, азота, фосфора и других :веществ на молокосвертывающую активность■ отобранных акта -

номицетов изучали на фоке снететв^асксВ питательной среды ' CP-I, используя разработанный ваш экспресс-метод.

йсследс&аннае в работе соединения и основные резуяь -тэты опытов представлены в табл.4, где указаны средние значения из подученных данных. - "

Во всех вариантах опытов колебание рН было незначительный - в пределах 7,8-8,0; за исклпчением среды о (М^ЕРО^, . где значение рН было 5,2. .

При рассмотрении результатов прежде всего следует отметить, что внесение в Контрольную среду таких органических источников азотного питания как пептон (5 г/л), казаин{основ -ной белок молока) а поровоа сухого молока резко стимулировали и мслокосвертавающую активность, в образование биомассы изучаемых культур. Так, пептон увеличивал размер белых зон и о лоно -свертывающей активности в I,5-2,0 раза, а образование биомассы в 2,5-4,5 раза. ,

Отметим, что увеличение количества биомассы не всегда повышает ферментативную активность культур, о чем наглядно.свидетельствуют варианты опытов о влиянием зо^я

особенно на рост культура Act.bTgroscopious ЗЗх (почти а 2 .раза бслыаа биомасса, а активность на уровне коят -роля).

Из числа исследованных источников углерода только растворимый крахмал стимулировал как биосинтез фарентного комплекса ( в 1,9 раза), так и рост культур, особенно для штпмз Act, .toxicas 366 С в з раза больше бисыассв).

Из источников фосфорного питания эффективный стимулятором усиления молокосвартываювдй актнвнооти С в 1,2-1,6 раза). изучает« акчившадатов оказалась такая органическая Форма фосфора как фитин, увеличивавши биомассу по сравнению a контролем в 1,5 раза для шгаима ¿os. ^ygroscopicus ' ззг и 2,5 раза для штамма Act.tceices 366.

Расчеты продуктивности мицелия ажтав^мидетов в отно -шении молокосвертыващей активности ( табл.5) подтвердила,..: что наиболее активным был мицелий на средах о пептоном, казеином и фитином по сравнению с контрольной средой CP-I. В последнем случае культурзльные хидкости обоих штаммов

Вяяяянв коиповевтов среды иа молокоовертываюшую активность актиномицвтов Ас1г.)щЕгоевор1лив ЗЗХ и* Аоь,*оос1сив 366 ( по данный экспреос-метода)

Компоненты среда

;Ковдент-; Штамм ЗЗх '

:Биомаоса:1>азивр:Еи(шаоса:Р8змвр

Штамм 366

¡КОМПО" «и Г/ил I венков; ■ •.ит/иа : т/ж

; бе лих :зон,мм

мг/ил

-.белых I зон,мм

Контрольна я среда си.мет о- : 1,0» 14(0)" 1,12 , 19(0)

Лактоза - 20 • 0,77 16(0) 0,98 Л 23(14) ♦

" Наннвт. ;■; -Я.' '■ 0,74 15(0) : 0,81 17(0)

..■Сахароза . о.зз 13(0) 0,50 16(0) ,

Крахмал раствора- 2,17 22(0)

, ..МНЯ-. - 3,22 27(15)

1»0 2,34 14(0) 2,10 : 17(0) ;

ь-аспарагян V ■ _ Паптоа х' 0,5 ■ 0,82 17(0) 1,80 23(0)

0,5 . . 1,53 19(0). 1,30 . 22(0).

Пептон ■.-.* 5,0 2,69 29(17): 4,55 28(17)

;Назван по:Гаммар- .--■: .: '■ ■'■"'.' - ' г.' 26(14)

-. стену ;'. Казеая . " 2,0 2,СО 3,85 25(13)

1,86 25(14) 4,57 27(17).

' ' Сухоемолоко 7 2,00 ' 24(15) 2,36 > 25(1<?) ;

0,5 0,93 :; 14(0) 1,50 22(0) -

2,0 2,10 14(0) 1,70 21(0)

Ф я т я я у-";;-: и «1111 V Инозит х'. . . ИНОЗИТ *кн;>р&. хл 1,0 1,24 . 22(0). ; 1,75 20(+)

1,65 23(12) 2,65 23(12) ,

0,011 0,74 Г?(0) 1,07. 18(0)" ч

0,011+ .'■г:'-.7 ■■■■■'я,

■ 'г.-,:. -- * ^ +0^5 .;' Х,М, 17(0) 0,84 17(0)

Г лице рофосфат' Сухяв. дрокям . Л 0,5 • 1,44 "(О) 1,26 19(0)

. 0,05 • 1,27 15(0) 1,30 20(0)

-х/Нафонавоехномпояентов'Л контрольное среды.

Продунтивнооть'мищ)ЛйяАсъ.1щг(5гозсор1сиэ552 и

£ох!сив 566 в отношении ыо лекоове рт ывающе А ак- . тиваостн на вреде СР-1 о различными компонентами ,

Компоненты-/, среди ' Штаммы гБвсыао- :са. :иг/мл • * • • ^ . : Время ;свертывания ¡молока, :мин, • ¡Молоко- ¡Продукт ИВ-1 : свертывав-! ноств,уол.' :щая актив-:ед/ыг :ность, :веоа сухо-¡усд.ад/мл : го «ице- . : :лия

-.. Контрольная : среда СРтХ , С ГЛЮКОЗОЙ .У ЗЗх 365 : 1,14 ; 1,15 . не сверти 0 вает хх/ о - 0 0

Крахмал' рзот- ЗЗх 2,31 . '130 3,0 1,3. •

ВОрЦМНЦ • 366 . 3,43 35 11,4 3,3

. Пептон . ■ ЗЗх • 366 2,24 4,5 .. 7 5 57 ео 25 , 17,7 .

. Казеин ЗЗх 366 * , 3,26 4,9 5 10' 80 ' 40 . 24,5 8,1

фдоин ЗЗх Х,6 20 20 12,5

366 2,3 70 5,7 2,4

Концентрация компонентов среда та хе , что и в ,

таба. 4; пептон вноовли в количестве 5 г/л.

Время наблюдения до 180 мяв.:

Вносили на фоне всех компонентов контрольной

Сред».

.

ххх/

вообще не свертывалимолоко в указанных условиях опыта» -

Йетальвае изучение динамики накопления биомассы и ыо-, вокосвертывающего ферментного кошшекса у изучаемых'Культур ' проводили на среде CP-I о пептонам (5, г/л).

■■ ■ Характер развития обоих культур на этой среде несколько различался ( рис. 2, 8).

Накопление Саша осы достигало максимума на 4-е сутки как для" Actibygroscopicus ЗЗх, так и для ActitoxLeua Збб . .-'Л.' .."...■.-■';'

Однако максимальное количество ферментного комплекса

.для первого штамма наблюдала на 5-е -сутки роста = при переходе мицелия в стадию автолиза, в"то время как протеолатичео -кий комплекс штамма Збб продуцировался активно растучаИ культурой,достигая максимума в конце логарифмической фазы развития. ' i ; . У ■ ' . Обе культуры за время ферментации подщелачивали среду. ; Значение' pH изменилось при культивировании штамма ЗЗх с 6,7 /до 8,0,- а прА культивировании штамма Збб в 6,3 да 7,6.

>■-■■ Таким образам,-рассматривая результаты исоледованиВ-в целом "по влиянию некоторых компонентов среды на молокосверты-,вающую. активность отобранных актиноиицетов, следует откатить, ■что образуемый ферывнтный комплекс,, по-видимому,относится к -индуцированным ферментам. ■ ■ ' ■-.- '• : "л-.у

; : "•. Результаты опытов также подтверждают; что подысканием. ,. V наиболее эффективных, компонентов питательной среды можно по -:высить биосинтез молокосвертнвающего фе рц ё нт ного; к ошш кса.. v; в несколько раз. ■ 1 ■..'..'■

. V Предварительву» очистку ферментного ксмплекоа из .штамма-Act.Tiyetoscopicya'' ЗЗх, выращенного ва наиболее продуктивной-. среде Ср-1 о пептоном (5 г/л), проводили на ДЕАЯ-целлюлозэ'по* •ранее описанной методике. '. ;. .-л

В результате хроматографии подучили три белковых комт-. :-понент.а, однако, не удалось разделить иолокоовертывающу»- ,■ активность от протеодитпческой в исследуемой фериентном камп-лексе и получить гомогенное ведаотво. :'.'"'."v': f 'у.'

- Препарат, полученный в результате хроматография из '..-.

Фракций первого пика активности, быв активнее исходного препарата - сырца почти в 3 раза.

Изучение активности протаолитнческого комплекса ■ у некоторых автолиэиртшихоя культур актияомц-петов . ■ ' ■ ■,.

. Многие исследователи отмечает, что протеолитическае ферменты являются обязательным компонентом литичеоких комплексов, обусловливающих автолитвческоа растворение клеток ыикроорга -визмов, в той числе и еятиношщетов. . .

Для семи культур лучистых грибков ( Act.breroscopicue штаммы ЗЗх, Vi - и Aet»toxicas штаммы 366, 368, 374, 405, f 443), первоначально отобранных для разработка описанного экспресс-метода, было характерно проявление автолиза при переносе молодых (2-з-сут очшх)культур в условия повышенной там -пературы (55-65°) как неплотных оредах, так и в погруженном ооотоянии.

В работа приводится описание типичной картины автолиза некоторых антиномицетов. Ва плотнвх оредах этот процеоо. часто ^начинался вце игральной частя колонии и постепенно переходил , напа рифе рви. Колонии антинешицетов становились -плоои^'А;"^ -ми и мягкими, воздушный мицелий полностью исчезал. Некоторые'-";-; колонии'не толькораэмягчались,~иои ослизнялись. ¿h&^vCj1.-..;В.глубинной культуре автолитическиа процессы характераэо- ; вались по падению веса оухого мицелия и поианонвниютонкого отроения гиф на элвктронномакроскспаческих препаратах.; При л" атом наблюдали как остатки мицелия в вида "теней-, i8K;¿;He';:¿'; однородную зервиотую массу по ходу гиф ( в этом оду чае клеточгл ная стешш отсутотвовалфг . ; . г'

Автолитическив йроцесся иэучали как ва богатых комшико-*<: них средах (МПА, KA,UA)', так и ва Фоне синтетической ореды Cp-I¿ Ира изучении влияния на автолиз различных источников угле-„'рода, азота, фосфора, микроэлементов а др.вещеотв было уотанов -лево, что гидр<шзат казеина,-1-аспарагин. (Ве&грия), глицин, HH^HOj, MsCl2 t CoOi2 V а также добавлений в ореду вместо источшИЕа углерода автоклавирсванного двухоуточного мицелия

,(SJ сирого веса)иэучаемнх ектаномицетов вы г ■

аывало полный или частичный лизис этих культур.-

Разрушение убитого автоклавированаем мицелия подтверждало наличие у'й^аёмызосудьтур 'активной ферментативной деятельности. Ч

Показано также , .что частота и степа кь. автолиза при супг . раоптямальвои температуре (55?) зависят от резкой «гены аэрэ-ч дии и влажности в процессе варащяваная:культур.

. . Наиболее чувст витальными оказалась. и ододые (2-3 суточ ные) кудьхурв в начальной ¿тадаи образования воздушного мицелия и спорообразования. ^ -Ч^Ч,-

Изучаевнекуиътуры была протеолатически активными при ' использовании всех известных методов определения. :

При заявлении соотношения кислых, нейтральных и щелоч -вых протеаз, образуемых зтиии штаммами, по данным экспресс --метода, установлено, что наряду с нейхральво-щэдочнын фар - 7 мвнтшш ноиплекооы-эти актансыицеты: оказались активными-..про-г дуцевтами кислых протеаз о модокосвертывашяй активность!) :.' . (табл. б).'ч АЯч^}';ч ч ,-U'■':■■.чч{^ 4-.V-,-; - Ив данных хабя.6 видно,' что у всех пяти втаиыов Час^'ч toxicas мояокосвврхывавцая активность заметно усиливалась . при 55° (температура проведения автолиза). Аналогичные результаты былй-получены и:о водно-солевыми'(5JS-иый HaCl ) вытях -вами агаровых культур антивоиицетов. . '^.ЧЧ^/Ч^Ч

Таким образом, возможно, что возникновение слоеного лро-хеоянхического фериенхного комплекса,^образуемого изучаемыми , актинонвцетаин, в некоторых случаях совпадало о. процессами; ■ автолиза ЭТИХ'культур.'. /;.ЧЧЧ; Ч-/>Ч V4p-4 ,:„.

Следует отметить, что авхолнтяческие.процессы взблюда-'Ч лиоь довольно часто у некоторых представителей терюфильныхЧч акхиномицехов (например, ИшпаоасИповусвз аИпш Г?!» fflwmo-; aotlnoagrcee vulgaris 136,;; •• • • & др.), образу сох актив -■-' - дай прозеолятачаский комплекс как о молохосва рты вавдэ J1так..; Ч" а о ¿азекнояитичвсхой активностями.* . -.ЧЧЧЧЧ

■='...' ';Таблица 6

Протеолитичаская активность культур Aet^hyeposcopicus a AAt.tojd.cus (среда-картофельные агар). ■

; » : • ; й | I ¡Ииыи казеиновый субстрат . , '*"*•.

■ В й * Н ■ ■ DHS.2 : он 7.2 ■■■"■■ -1. РН 8.5

V _ _ _ _ _ _ _:_37°_ i £7° j._55°J_ ¿7^ _55°_

Act¿ hyerosco- i.... "■■■' " 1 " - * " ■

■ ' 33x Щ17\ 0 17í±)~ ° : 20(17)17(15)

V 26(16) O , I5(±) • O 19(16) 16(14)

' ' .,:. Aot.Wlcus • 366 18(15) 24(12) 15(12) 19(16) 25(22) 26(24)

• . 368 19(12) 24(14) ♦ ; I6(i) 24(20) 25(22) V

V- 374 18(14) 19(12) 17(13) 20(16) 24(21) 25(22) ■■■". 4

. i 405 16(13) 20(12) i 15(12) 15(13) 17(15)

' ; , 443 18(14) 19(12) I5(±); 17(12) .20(18$ 21(19)_

::'■'■..' ,'

Сравнительное изучение протоолатичеекого'ферыентного,' ■ коыплчкоа о иолокосввртываючай способностью, у 482 представатв-- два раэлдчннхсистеиагнческих групп порздка ,Actinoaycetalea . \/.'. показало: ^ ....... 1, .;."'.■; '

. ;. ' а. непигментированние культуры актиноиедетов ванного ' «._... активнее, леи пигментированные; " ; ;.

. б. наибольвев активность».обладали термофильные актано-:,.. мацаты,.а также культуры из - глобиспориновой, белой и серой"'" . " групп!рода Actlnocycoss . ■ ■ . - .:.) 'гД'," ^-

; " - : ; в. исследованные культуры аз родов Urcobacteriu»; ' v-.r и Цусососсиз • не проявляли прот'еолатичэ ск оз актаввостн

: (или она была выражена' в очань слабой степени)^. -.. .■■>"■

• : ''. г. при наличии некоторых колебания в протволитиче ско2 ; активности у штамповодного вида мвогиеив изученных видов

характеризовалась тема или ишши определенными особенностями, предсхавляющими ценность для видовой дифференциации нузгьтур, а именно: общи уровнем фериевтативнои аятиваосза,способность^ сохранять активность при икогоявтнзм хранении, кевлара ту разы оптимумом деисхвия* фермента» оптимумом действия рВ.

2. ймрвне установлено» что плотная I 5&-ная казеиновая орада при рН5,2*пригодна для выявления молокосвертываошх ферментов хила реннина.-.

Ва основашиэтого раэработанпростой методбвстрого отбора актиноаицатов, свартывавиЕщ волоко, на плотных средах о казеином.

Предлагаемы!! метод более эффективен обадпринятого из-хода определения способности культур свертывать и пептонизя -ровать молоко в пробирках, в связи о чеы полез быть рекомендован для использования в систематике лучистых грибков..

3. На основании данных »вепреоо-ивтода отобран ряд наиболее активных актияомадетов -продуцентов нолокосвартывавщего ферментного комплекса.

Установлено, что для повышениямолокосвертнвающвй активности некоторых антиномицетов наиболее эффективными: являютсятаниаоргандческаа источники азотного питания как пептон а вазеив.И» источников углеродного питания наилучшие результаты пожучены о растворимым крахмален. Из иоточвиков фосфорного питания аффективно® оказалась такая органическая Форма фосфора как фитин. :.ч-"'--';

5. Показано, что культуре актиноидоетоз, характеризую - -щиеся наличием автолитиче еких процесоов, обладают повышен -нов активностью протеодитического комплекса.

- Спи о он работ, опубликованных ро теме ди оса ру алии;

1. Куимова Т.Ф., Паронян А.Х., Красильнанов н. А..1973.

Первичные отбор актинотщетов, свертывающих молоко, - . ва плотных лабораторных средах-' Прикладная биохи-. ; мая я микробиология,4,599. ;

2. Куимова Т.Ф., Паронян АЛ. 1973. Свертывание и поатовиза-

. ция молока как диагностический признак уактине -• • мицвтов. Микробиология, £2, б, ШО..

3. Куимова;;Т.Ф.;Паровин АЛ. 1974. Процесс' автолиза некого -- . рыхактиноиицетов,. выделенных из клубней карго - .

феля, поракенных паршой. В сб. "Проблема глубоких г .. .:.. микозов", вип.2, 78, "Медицина* II. . .-;

4. Паронян А.х.,Куимова Т.Ф.,1974. Влияние кшповентов среда ; ; ' ••_'.'' на молокосвартывающу» активнооть векоторых актя - :".

•;. номицетов. Прикладная биохимия и микробиология, "г-- печати; .,.■

5. Куимова ТЖ, Паронян А Л. .1974Лихаческие процессы у -

•, члучистых грибков. Успехи мккробиологиаДСТв.печати.

: Г:-.'■.■■.-'

■■"■ - ; * . ^»""РН"» СССР