Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Выделение и изучение функциональных характеристик глутаматного рецептора из нервно-мышечных синапсов креветок Palaemon superbus

ВАК РФ 03.00.02, Биофизика

Автореферат диссертации по теме "Выделение и изучение функциональных характеристик глутаматного рецептора из нервно-мышечных синапсов креветок Palaemon superbus"

АКАДЕМИЯ НАУК РЕСПУБЛИКИ УЗБЕКИСТАН ИНСТИТУТ ФИЗИОЛОГИИ И БИОФИЗИКИ

На правах рукописи

Л ИМ Татьяна Михайловна

УДК 577.352

ВЫДЕЛЕНИЕ И ИЗУЧЕНИЕ ФУНКЦИОНАЛЬНЫХ ХАРАКТЕРИСТИК ГЛУТАМАТНОГО РЕЦЕПТОРА ИЗ НЕРВНО-МЫШЕЧНЫХ СИНАПСОВ КРЕВЕТОК РАЬАЕЛ^ 5иРЕ1*Ви5

03.00.02 — биофизика

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации па соискание ученой степени кандидата биологических наук

ТАШКЕНТ — 1904

Работа выполнена в Институте физиологии и биофизики АН РУз.

Научный руководитель:

доктор биологических наук, академик АН РУз ТАШМУХАМЕДОВ Б. А.

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук МИРХОДЖАЕВ У. 3., кандидат биологических наук ТЕРНОВСКИЙ В. И.

Защита состоится < > . ^ИРН^т 1994 года в /У. чг

Ведущая организация — Институт биоорганической химии.

13С0В

на заседании Специализированного Совета Д 015.01.21 по защите диссертаций на соискание ученой степени доктора наук при Институте физиологии и биофизики АН РУз по адресу: 700095, Ташкент, ул. Ниязова, 1.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института физиологии и биофизики АН РУз.

Ученыб секретарь Специализированного Совета, д. б. в., профессор

МАХМУДОВ Э. С

- О -

• Актуальность темы. Хорошо известные метаболиты нервной ткани - 1--глуташновая и 1.-аспарагиновая кислоты - в последнее время привлекли к себе внимание нейробиологов равного профиля в роли возбуждавших нейромедкаторов, функционирующихв большинстве синапсов центральной нервной системы млекопитающих, включая человека и нервно;мышечных синапсов беспозвоночных. Многочисленные данные свидетельствуют о том,, "что возбуждающие аминокислоты и ик рецепторы принимают участие в формировании таких фундаментальных процессов нервной деятельности, как си-наптическая пластичность, длительная потейцшш, лежащая в основе нейрональной памяти, регуляция мышечного тонуса, чувствительность центральной нервной системы к гипоксии и гипогликемии. В этом же ряду стоят проблемы изучения патогенеза таких болезней как шизофрения, эпиллепсия, паркинсонизм, болезнь Алъцгеймера и др.

В изучении проблемы возбуждающих аминокислот наметилось несколько направлений: 1) нейробнохимическая организация процессов, обеспечивающих синаптическую передачу - пути биосинтеза глутамата,• их взаимодействие с рецептором и т.д.; 2) моле-кулярно-бнологическое на учет« рецептороь, их структуры, молекулярной организации механиы/ов сопряжения с ионными каналами; 3) патофизиологическое; 4) Фармакологическое - поиск и изучение специфических лигаидо» рецепторов. Вместе с тем, все эти направления объединяются при исследовании структуры и функций рецепторов. '' . •

Несмотря на множество дыншх, накопленных в литературе ва последние году, структура глутаматного рецептора остается все еще невыясненной. В настоящее время установлено несколько типов глутаматного рецептора; но и это разделение несколько условно, Проблема изучения функционирования глутаматного ре-Цедтора свявана • с выделением его в гомогенном виде,,' Следует отметить, ' что.эта проблема сопряжена с выбором системы, адек-вгпной естественной мембране, в пределах которой можно было бы изучав Функции выделенного рецептора.

V Для этих целей, одним из возможных методов исследования является - реконструкция; его'.в модельных системах, использование специфических природных:: ©локаторов.--Г качестве аффиины* зондов или лигандсв при исследоыаит рецепторов - одно- иа.современных направлений нейробиолопш. В ■последние годы уптпноые>ю, чтс( •для 'глутаматнйх рецепторов позьоноЧдых и беспозроночн'цк' такими ©локаторами 'являются яды пауков семейства АгапеЫае. Шйрою-кисческие комгюиеитн яда,паука Лг£(оре )оь,чса ив-этого семейства успешно приценяются при йндел<*иии глутаматных рецепторов, а также■ в-эксперимента« по.'изучению их структуры и функций.

- 4 -■■.

Цель пътт исследовамия:

Основной целью данной работы является выделениетлутамат-ных рецепторов креветок Palaemon superbus при помоши аффинной хроматографии с использованием не йротоксически;; фракций яда ; паука Argiope lobata в качестве аффинного лиганда и изучение функциональных характеристик при встраивании в бисдойную ли-нидную мембрану. :

В ходе исследований решались следующие задачи:

1. Выделение Глутаматных рецепторов . иэ нервно-мышечных синапсов креветок;при помощи аффинной хроматографии;

2. Встраивание выделенного белка в БЛМ и исследование действия глутамата и аспартата на модифицированную рецепторным белком мембрану;

3. Исследование действия нейротоксической фракции яда паука Л. Iota' а на глутаматиндуцируемую проводимость ВЛМ;

4. Исследование влияния двухвалентных катионов (магния, \ цинка,' кальция) на Функционирование рецелторного белка, встроенного в БЛМ, •

5. Исследование действия конкановалина А и SH-реагентов-; на проводимость Мембраны,, модифицированной рецепторным белком.

научная новизна и практическая значимость результатов исследования. В реэультаге проведенной работы при. помощи аффинной хроматографии с использованием нейротоксичеоких Фракций . Иэ яда паука Árglope lobata был выделен.постсинаптическии глу-. таматный рецептор Из креветок Palaemori sliperbus. А также, были исследованы функциональные характеристики данного ре'цепторного белка при встраивании в БЛМ. Показано, что проводимость БЛМ, модифицированной этим рецепторным белком, возрастает только в присутствии глутамата. Ответы на глутамат были двухфазными. Аепартат не вызывал никаких изменений в проводимости ВЛМ, что указывает на отсутствие NMDA-типов рецепторов в нервно-мышечных синапсах креветок. Ионы магния и'.цинка не' блокировали' глутаматиндуцируемую проводимость глутаматного. рецептора креветок. Это также подтверждает тот/факт, что NMDA-тин рецепторов не встречается у креветок. В противоположность этому, проводимость БЛМ увеличибалась при действии,аспартата на глугаматный рецептор из моэга крыс. Ионы магния и цинка вызывали блокирование как глутаматинду цируемой, так и аспартатиндуцируемой проводимости БЛМ, модифицированной данным рецептором.

Нейротоксическая фракция из яда паука блокировка глуга-... матиндуцируемую проводимость рецептора иэ нервно-мышечных синапсов креветок. На основании этого сделан вывод, что выделен постсинсштический глутамагный рецептор,'.,', возможно, квисквалат-' ного типа.

Ныло обнаружено, что состояние овяйен и п'Л'Ь м.»,. на для проявления функционалышх характеристик ротаторного белка.

Результаты данной работы по&волйт углубить &наиия о структуре и Функционировании глутвмптных рецепт»!*», В этом м* ряду сТоят проблемы изучений патогенева таких болезней как шизофрения, эпиллепсия, паркинсонизм,'болевнь-Альцгейме'рь и др. Использование природных бл'окаторов глутамат^ых рецепторов будет способствовать поиску инсектицидов Се&ьр<*д«мх для подоночных . ;

Апробация работы. Материалы дцсертации докладывались на ;«есо»»Н1)й конференции "Исследование, глутамнтергичс ских си-^ ;:шеов" (Ленинград, 198?).; на У. Советско-Швейцарском еимюьиу-' е. "Биологические мембран«, структура и функции" • (Гига, 1066)51 ta конференции "Современные проблемы o6ikefi физиологии и Спь-ри-:¡ikh", посвященной (Ю-детмо Академии наук Республики Уабекис» ан (Ташкент. а такле на объединенных семинарах лыбура-

•орий Института физиологии и'М|г4иа»к>Г'АЙ'-К'У.

Публикации результатов * исследовании. < « no¡smii- иолоам-ния' ясс&ртации нажжены в 0 печатных работах.

Объем работа. Диссертаций изложена на 116 страницах мили-' описного текста и.состоит из введения, обаора литературы, писания методой исследования, изложения результатов соОстнен-а экспериментов и их обс/лденка, заключения, выьодов и 1иска цитированной литературы íiái источников). Дисо-'-ртгщия. .¡дермит В таблиц и 18 рисунков.

Материалы и квтоди исследований, ООгестши" исследований служили пресноводные креветки ilaemon superbus размером 6-6 см и ьесом tíOO-l&OO мг, а т&кхе4 «си. линии W.istar, полово&релые, самцы весом l&íMÜO rp.

Разделение цельного яда проводил«4 ност&дийной хроматогра-ей по описанной раннее методике Усм&новэ и др.¡ 1963. Лиофи-воьанный яд наука А г g tope lobaia получали-из Алма-Атинского окомбината. Нейротоксичноеть . выделенных фракций тестирова-еь электрофиэиологичоекмйи методой на нервно-мышечных пре-ратах тергококсальнои . мышцы 12СГпо номенкизтуре Онодграеса

nodgrass, 19Я9) саранчи Locustamigratoria к.б. и. Каликуло-< Д.

■Прш'отоь'л^ние аЫчшного сорбента. Аф.мтный сорбент готовили & несколько стадий. На первой стадии получали порюшкообрмь.чый полиамид, кото-1 является, инертным носителем. Во второй стадии к ппяученно-носитйлю присоединяли бифуйкшюнамный агент - глутарм«#_

- г) -

альдегид. При этом часть глутаропого альдегид?» реагирует с Со-кошм аминогруппами носителя с о&разоршшем щнффога основания. Третья стадия - присоединение лмганда. шейротоксическо.' фракции яда паука А, ¡оЬа1а) к суспензии кч>дифиш'рснчнного полиамида. Четвертая стадия - блокирование «.-иоболных аяьдёгрдиых групп 'сорбент* моноатаноламинем.

Полученный таким о0р.4ром н0 5и*г»<н!двы!| сг^ент уеподъэокчпн , г» качестве носителя для а^иннои х)югтогр**1*ш.

иг' мозги___и к реке ток.

птот >!??гд аналогичен описанному Ташмукамедоьш и др;, и имеет некоторые модИч'кчиии.

При гшелении фракция синоптических мембран из нервно-мн-гдаярнч препаратов ракообраоШ'Х ис'лъ&о^адись чьтщш, «надопи-ним мотоду выделения еинаптосом из мпага кеч»:'.. '.V} от хмтиноеыч ооодо^ек -яышця Орм?га псчеш:шгь т< рш-'^родеин/к' среду выделения. 1'. качестве ер!-;;-« «-ш^пети мспияьисвл&и моди-Фйцлроеннный . фиаилляг'ич рпстьор Х>жл.ч для колодндерорит. содержащий О. 1Ц4. М Нс<Л.;' О.ШО п «аИ:гР04 х ¡¡.'НаО; О.ООо М КС1 г о.оо4 м кнсоз; о.оста м ■КгЗгОз-

СолюЗилпгпроегшле суспекану но окркчашш прем-гни инкубации оввучийяпи в течение.«; »«ин «н У^ДН-! при Гц. ■ о^учениу? . мембранные препараты ободинял» с ЫФштнм полиамидным еорОен-тсм и инкубировали в течение -Ш 'ччсс>ь при 4':с на магнитной мешалке, рН руствсра соетг«-..»)« й.О. Иеемзпгешюн с еоК-ентг« белок отмывали Ю мМ трио/№.Ч р!! в.У.чтем сутчи<ий ставили на инкубации с раствором 20 и;М грИо/ЖЛ • 10 гМ ЭДТА ¡'И

Подученный после иккуОацми Оедок обессоливали на колс'Н.че (1x30 см) с сефадексом в-25. Злюируищи Оу/к-р - 10 мМ трис/ни] рН 7.4. Спорость элшчя - 4 мл/чао. Разделите - преоернди вп Зрееогс! 11У У|3. . .

Количество Оелкч определяли по м-:году -Ьом-у <>1. а!.. •

Для пострсеиня. калибровочной кртшой мспоя»?г»*аяи бычий сыьсро* точ.чый аяьбумин.

0Р£_А " ' 1 М 1 1 ' I II Ч I Г 1 Г ч I и толу.

ош* ' ^ м i i i • ) и и тд i i i ( ! н 1 | i 1 ис-по," 1« дли и i 1 1 1 i i н ( i и ) ! с > i '

I ( ч^ I 21 1 ' п 111 м I м! 1 1 м

ч 1 1 I м » (

II ► 1 1 л ^ ► } / 1, ] I I нчо-ну Л^Ч ! ч 1 I и I Ц я [ 14 КОД И-лас о Чч 4 Ч 31 1гнь 1 и I 1 и и о \ 1 ипидоб

ИВ С Г 0 11 I \ П » (У 1И 1 I I и

» >,'( 1 I , п I I ы ^ I | I намет-

ром 0.06 см. Тефяоноьая ячейка фиксировалась- р с-к-мянои ю<в,-тг. К.н г'-ту имеет* с ячейкой заполнили рабочим растг-.ором, СОДгр-жоднм ■ Ю мМ трис/Ж!) + 100 им МаЛ1 рН ','.4. сгекшт пштн фиксировалась на магнитной мешалке, рггистранию яш-егргоыюго 'ГС-Г.<1 КрСЙЙРСДИДН.ПрИ П0М01ДИ ХЛОрС»? рйбрЯНШ электродов lMJ.it КЦ-О/ с агироьыми мостиками, еаполиенними 3 М К01.

йссдодоваиие интегральной проводимости проводили по методу Либермана,19?0. ' ' . .

О^аопные результаты и их обсуждения.

Часть 1. ' Внделеш»; глу'таматсья^ьаюиуго бе^цсн пги- помощи зд<|шней хроматографии'.

1!риготовлрние гЦ^.инны'о сорбента. Иопользовсшие «ей^отокеиче'ских Фракций яда 'пауки А1 ¿-1 оро 1оЬага в качестве инструмента при выделений глутама'К-вязыьшце-го белка методами 'а#'инйой.хроматографа было описано раннее-1абЬв:иКГ.а1й-<1оу е1 з1., 1987; 1&8У; Таамухамедсъь;м и др.. .19841 1У8б; 1989. •

. Значительной число работ, ' проведенных 'рядом авторе* (изиапоу ее а!., 1935; Кеггу е». а1., 1068; Ато.аоу а1. ,1989;. 'смапоа и др.,. 1ЙВЗ; Гришин и др., .1&86;. Ыагааанйк и др., 1991) гахн&ио, что яд пьука 'Аг£1ор«> 1оЬ-:Ла яглнетеа естественным. ¡докатерш гсуг&матергических синапсов насекомых, ракообразных' I цгй'гр&гьисй нервной системы мдекьпитыоцих.. • Фракционирование'• • •эльлего яда позволило более детально' изучить • мейротоксическйо » войотеа отдельных компонентов,. составлявши* яд. Было ус.таной-; •2НО, «ИО ЗТИ С'раКЦЦН ОТЛИЧ'чВТСЛ Шг*ДУ собой ПО структуре, МО-.; «куллрней массе, а также по .сасйетеш: специфичности деистикн,: эратимоети блокирований глутаматерричеекях сиааясов. В р^уль-г г»те разделения вдентйз-ицвровааоеь. XI ¡1 Фракций. Эти фракции ..' гличались по своим характеристически») максимумам в спектрах 'я'дощення. -Сл-эдуст отметить, • чти все исследуемые фракции об-'; ¡дани блокируют»« действием - при электрофиэиологическсм тести-. )йании на нервно-шаечныя синадс&х саршчи.

Оказадссь, что белек, -алюнруеши с полиамидного аффинного ••• >рбе.чта, аффишшм лиг&ндт котсрего' служат более шссковолеку-фйые н^йро-гоксйче-ск»? фракции, ьикодящл* 1У-У111 пиком, не' 'МсНЯЛ ПРОЙОДИМОСТЙ ВЛЫ относительно уровня КОНТРОЛЕ. Некие 'Саьленкд глуталата ннодгдыюоь незначительное; унеличение про- , дикости бисаойпой мембраны.-

В протиьоиодсяность этому, белок,• зкмруемый_с сорб^па с -КШ фракциями, уьсдича^ал пршюдииомь до 10-,-104 неа/еи"' еле евааываииа с Г дут; «атом при ьел-р-амании в БЛМ.

Иэрес-тна, что аргиолобазин и сходки? ио спектрам поглоще--:] Фракция 1Х-Х1П необратимо блокируй гяутатергическиг

- в -..'".

синапсы саранчи. Эти компоненты, обратимо подавляли МНЮ1, 1ШП лягушки и необратимо МШС11,. В1М1 Я МКЛ саранчи. .Фрикции, аналогична фракциям обратимо подавляли МЫ! м. ВЛь'П и глутаматннз ответы саранчи (изтяп«у<?1. ,а1., 1ЯйЗ: Шоднева. 1990).

. Поэтому, для получения бо.ч^е уктиьного, т.е. измените го чроводимость КЧМ, ослка испопъвоьали боле« ниекомол^кулярные Франции при приготовлении ОДиниого сорбента. По-видимому, .такие раяличии в активности белков могут быть связаны с различия-ми в действии нейротоксических фракций на глутаматергические

ОИННПСЫ. ',

Вмделение глутам^тных рецепторов из моага крно и Нервно-мышечных син.чпоов КревеГОК.

В«аным МОМЕНТОМ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИИ ^.КТЩНОГО При ЬОТраИЬЫНШ) г БЛМ Селка яеляетси метод шда-.чення еннгттпеомалгной.фракции. .

Исходи и? того, что к нячыг/ исследования выделении." синаи-' тосом из нервно-мышечных синапсов ракообразных сняло посвящено незначительное число работ (ЗотЫарШа! е» а1..( Тагамуха-

мел.оР и др., 1085), то использовался модифицированный метод выделения : синяптосоч из-мезга крыс. В качеств«! с ре дм выделения испольровали• модифицированный Физиологический раствор Хойла для холоднокровны*, как наиболее .еоответетвукадий объекту исследования.

« ' ■ Определение молекулярной идеен '

рилеленных болковйх Фракций.

Ущектрофйгиологическое разделение -глутаматного рецептора иа нервно-мышечных синапсов креветок, получаемого в результате аффинной хроматографии, при использовании градиента пористости-подиакриламидного геля от 3 до \2Х позволило определить для БКр следующие наиболее характерны« • полосы, соответствуют»* •. 64+4 (п-10); сЗ+З. (п-1с); 14¿г.' (п-У .г кДа. Иногда проявлялись , полоса о молекулярным ресом 150+10 кДя (п-4),- где п - частота встречаемости данной.белковой полосы из 1"' экспериментов.

Как уже отмечалось рсшнее, белок с молекулярной массой 14 кДа, возможно.'■ является протеолитическим Фрагментом более крупной белковой молекулы, входящей в состав глутоматного рецептора. Вместе с тем, в литературе также обсуждался вопрос об ответственности данного' Фрагмента за глутаматсвязыгамщ'ы активность (Гетманова и др., 1901; ДамОинот..а и др.. 1992).

Необходимо подчеркнуть, что белок с молекулярной массой 64+4 )<Па, соответствует предполагаемой молекулярной массе квисквалатного типа глутаматного рецептора (ДамОинова и др., Ж'с).

- Q - ■

• Лрими^ш» с гради^нтш пористости иолиакра-

ламнаа позволило полу чип ел-дувшие молекулиршк- массы Оелков, ьыдс-лишш иа моага «и« (ЕШ) - 6í>6. £»>4. 14+2 «Да. Лли них также характерна наличие оелка с Солее высокой молекулярной массой - ir-íjtgo кДа.

Для глушкшшх рецепторов, выделенных из мозга крыс и на нервно-мышъчиш! оииаисов; креветок, можно 'выделить наличие сходных белковых' полос. Раннее ь работе Дамбиновой и. др. 19Э8 ¿'•ало пока&ако, что белок с молекулярной массой 68 кДа имеет сходны« ат-игешше детерминанта лнакогичных белком.« Фракций иа ыоага быка, крыс ti т лигушки.

Часть П. Исследование меь<браноактивных сьсисть глут-шатного

рецгптора в модельных системах при реконструкции. i- aai.

3}с-йсгьив гдутаиата___и аолартата'на petrntiTor-H иа моя;-':, ^рыс

ILíííршо-уьццечаш '•• ин-чнеон краток.

Иеиользо.вани* молельнях систем принято считать нниболе* /добним методом при исследован,ш функциональных характеристик ещедеинын Оекковых фракций. В работах Таашухамедова к др. igti6.lí<67 п изхыудовой и др., . 1389 была продемонстрирован* pc¡-шнетрукцил в ВЛЫ глутаматиых рецепторов из мозга крыс, кряйоь, тракшшв.

Ключевым моментом ь определении различий екглкошх Фракций, наделенных ии нервно-мышечных 'синапсов креветок (Í¡Kp) и из и. ь-•ц крыс (.Uiüí) 4 ■ ярляетсд сг. чифичнекль по отношении к дейетьак. •дутамата и аспартата. К настоящему моменту nstn-гтно, что г-ау-•аматние рецепторы ив мозга крыс рбладают ьуеокой сьаяыдеедей :нк L-гдутпдот, .так и L-аспар'хат актиькостш (U*o*ic2 et ai . 980; Jaiir et al., 1SSO; Klecfcner b Uifigiedine, 19&1). В проп. оположиоеть 'этому, для рецепторов ракообразны» характерна пи скач спеилфичнсгсть по отисаению л 13й)-1.-глут«ма*у;

. При исследовании интегральной проводимости мембраны,. моди-нцировааной БКр, было покавано, что. он иа («.менял лроьйди-ость.ВЛЛ относительно уровня контроля (4-у ы'^Лнг). h npn-утствии глутамата (конечная концентрация JOO мкШ панели-ость воер&етапа до lcr-m4 нСм/см". ojwu после д«.г>лрггни.: яутамтгь чаще всего носили дьухфньный каракчч-р: i .yu?:- -острое увеличение проводимости и li jasa - спид ъ ivu^huv ?ршх 10-16 минут и -выход иа плато (рис. ja). Аналогична w. нрактеру, ни с иными временными гиками, дьухф*:"ть.-

tt»6TU на&м>зд»к;ь п работах Тапу et. al.. 1989, Ю01; мнр'н-л-э,. 1691. Как отмечала* раннее, гласно данным М.ц>»сш-.;>. 391-, кбйскыш&т.активируемый токи для йейринои ttu(-.*.í-,..::,

- ю -

кбч«?стг.евао сходны с глуг^таэт'геедунаэ»! токами и кмеди .два компонента - времязависимкй я стацилнарннй. Ряд авторе? сочленяет этот эффект 'развивающейся сутрой дгеенситивац^гй или и^актиьацке'й рецепторов • квисквалата (Dudol et а!., Trussoll ftt al., 1988; Tang et al. ,• 1989, 1991).

ílpii действии глут&мата на мембрану, модифицированную белком на мозга крыс наблюдали сходное уменьшение по времени про-' всдимсстк БЛМ (уло. 10).

йгмг-нение интегральней протвмссти ЕЯЦ свяеано с открыванием казазов, которое ст* чаруется : уд i- присутствии втора (рис.. ,5). ,

ДоО&ел<?нйе аспартята увеличивая«.» .npoecyy'wvTi- Ш, модифицированной белком яэ мозга крыс. В очлйчиу oí- эюг«, аопмр.ти не вызывал .какдаК1ибо изменений в проводи»* зети .^кгч^чк.яри «страивании БКр. •

Проводимость .EJ1M при ьстраигиняи мзре^пкг как. г присутствии аспартата, тек к глутамата, что согласуется с то-гочиолекяыми' • данники п^еоикив Л!т<-рнтуре.'- В' от'личке от saco,

а> . Яг

(SOCiO

5

01

•»co-

fia 05-

' Ir" UTrfK.-1 и 5 > Л 1

о с. мр CTfe i j > г а) ° г' i (

' ' v IT) е/к t, л у п t i

t! " I < ч < ч I Ч 1Í ! ' l ' г -!r >

-S-Ф-

г

■Ш

I О ~ I Ь l < > С И'ЙЦКрО-vhhi ; ' i >■») s " *кн ¡от. i г , ! t ! ) ккМ.);

|И i ^ 1 (1 i <

у ¡ 11 i i

«¿суь- г

í II Í и с -

ПУЛ * . 1) t О íl I

присутствии r.ivj ,.н."л'::1.

т с i г

•т

) ■

x

i o j i i J n i ^

L ¡ 1 < с ^

i г I .

i 1 i

ciwancc r t г

Lo.., Г *,J d i: i ..j:

t j '.;•,{,. < 'I '--Vi CTÍ.HÍ- OT-

I к ('ранг.;-'.:;;»; ь бисдои Lfú М>!;;д mi р^цепто-•* И5ЬееТЛО, что длл ■* 1 i /.' lio наличие-IT , Í ь, откч^ях ке до-

чн крал и;

-s t t i

ЛЛЗ— i > ¡

iancofí кг

глутыагных

I i I, Ii Hl

г «ood 1Q85 Т т «t ■> рованном бетке u ч^егральнср г ! t i as i нк t' öf ijv

in H—H ¡ i

f i f Ado et e i ! ' ¡ з ованчыч tr

еГшвмухауедов и др., 1^5).

Ир« действии кокканлг л мая проводимость мембраны t и оставахг-.сь неизменной .?), Чаще всего в' приеуто-; , *

Ct-j м

■i i

<<.!•-< i . , i i ч И 1 ч f , 1 X, » I

чноьалин А í í X аниг.\; I 197Ô; ентах Hiï и i уве. .1. . Г1 кон-I с 10 ус-чхароь -.'ix на ' сть

Е

у ч

I

Ó

. i с

5050 • 3000 •

«Ф

к

V—5—Í

! .

' Ь 1 ,

1' H i J 1 V-

r«, -.

H ] 'M 'Kl/ lifHiH 11 / I I K H' "Si 1 " t T 1 i

J 1

'0'

i >,'!> ¡ i.-í VfíáohH ■>.

t i 1 ri ut ГО.ЧЦ'-НТр-! ^

- w -

личоние проводимости фазы плато в среднем на ItñZ • при увеличении амплитуды максимального ответа до 4vax, т.е. э'Н-ект снятия деа-иситизации характеризуется обдам увеличением у|«>вил глута-матиндуиируемой проводимости, следует отметить, что урк-кт конкчпвиалина А проявлялись в течение Z часов, если он нвносился после глутамата. год* кт конканрвзлина А характерен как для М'р, так и для БМК.- Взаимодействие с конкэиовалином А ука-г*УШ?т на наличие амнносахаров в структуре белка, т.е. что №р 8Ы1Я0ТСЯ гликопротеИдом.

Ж'ЙОТРИР ИИ»ЦГТ<чуичускои jl'i-акмии. яла navi-'a

Д. U-'-.<

Пс-колм-у иещ-ои'кецчеекне ■ фракции и ил т<чу! i A<í:k-pe h-bata яьшчся 0ao>taTOf!,uHi мутнм-зг»<ргич»иснх сим-iwofc сиг-ад»1 чй, лягушк«, . ТО И!'ТРр«.-бНО (4WO Г.р'Ч.-рШЬ . их

Аекпн!" нп (Я-лек и? неррно-ш-еечпнх си-

наасов Kpet'fTOit.

В раоотв Тшимухам^лева и др., !':>№ Oiwo показано, что пред варит ель над инкубация рен£ торного о^лкч, ьчн'-леннсго и: тараканов Fvriplxietа да»г.к\'ч>а, с ндом.A.lohtfa течение 40 «кнут ди ьни^ния ь ячейку н" шдвдялл никаких ис-мин-ш'« глу-таматйндуцируемой проводимости. • • ;

Так'как при iiiHiroTopÁvHim »Мтчтсго сорбента иемоль:*'**-лксь ÍX - XIИ иейрогоксич»ские Франции, сходнне т.» своим 'спектрам поглощения, - 'то нроьерйлась л-анн'чя группа токсшюь например Фракции X. Как покарано-«а рис. фракция X обладала

Рее. У, Ккиетищ нг.мб№ння

!!!-Ч -ДКС ЬлМ. М

рсьиинг-н F!'p, при деиствин Н'ЧЧч. ггг'-и'..- '•!.-•»! фракции X иа -яда паука A. -lobata. О грелками укыздш момент добавки: 1-Оедка (. конечная KOKllv нтрацик 1У МКГ'МЛ1; :>Г»ГТ':лМчТа <К>:*1еЧ№М кон-цен грация 100 mi-íí ) ; о-фр?.К-нм. X (. К.-чечнн.» ксн-Ц*ЯТРЛЦИЛ í мкМк

Bbh t/"í'4 '>■» HtjVi. 1 1 t r 11 ' I 4 M ¡ o-

jbimI с м (i» К^Ч ч i t* < 11 ч:-

тИ r i- a i t "v. t < ei t t v. t , H-

.3X1 i i 4 i >. ч 1 ¡ ' 1 i 1 ¡

JVW

*

o x«a-é

ksc-

. \ t i г

ID1

- 13 - ■

СДГЛОРЛТРДН'.О, Я.1 И »-го ЙСЯрОТОКСИЧёсЛИ* ФрПКЬЧЧ!

опосоС'НМ ингиРпроьагь глутаматня.чуц>ч>угмую ироводсмоеть енде-» ленннх и вотроенинх в ЬЛЧ Оелког-ых .1'рпгментов• н?ргм0-*н9е4нмх соединений нясекомых и рякос-Суаьннх. Крене того, блоиирупянй с«И«?кт фришин X иол -П'ее'л чет поетоинантичрскув иримчпу Силков, выделенных из нервно-м^чит имздоов. креветок.

Исследование ^лш.чп» /гру>:^»л*чтшх катионов И

Исходя и» многочиеленнух »теперимчйт«». иосьнщеиинх иьуие-

ида аФ|ектог< ионов магнии Сылр покапано, что эМектимю !игиеч!рояал связывание Г"',1и-Ь-глутам.пга . В то я<? вр«?мя Ы(.С"' 'влй»тсч ол'жатсром нм» 1а-актйи«'у*мих канапов' ив морг« р.руч Л:»Ь«г Я Мсжак, (.'ЫЧзМпе & > !>••!. 1У-Ю; Кк-оКп^г ¡V

•1-: '•! Г'" , ¡У;>1|. , '

В данной раСоте проверялось действие г-еа?х• катионов, кац ччпч1, ЦНКК И КаЛМТКЙ. '

Иослелсс-эике интегральной проводимости РНК, ЕиД*?лент.то ^"'.({•¡чи'.роватп-м ч-тодом при помост »М-иЦиоЛ урс-мчтегр^-вп, •жагч-и» сходное о.пгкиру*действие ионч»-«« ме.гчи>» к« г.пута-атшшушч'Уемой, так и аепартатиндушчУ^мой преводимооти. Про-".'Зимоеть уменьшалась при ун^личечи^ ксвиентрииии И"Ков о с ем о кад+о?1: ло после до<У-(гдечиа К*\ч:Ч МнСП^ и-йс.

Рис. . Кинетика и-^ененкя П11ОЕО-:инсоТИ Е'ХМ, •• модкфкадю-. ранней БМН («') и ¡.«), пр« действии иовов магния.- Стрел-.и-ага? укасан -мем-нт всСавки:, 1-0елка (конечная •концентрация ч ».<нт,'мл (»> с !•*' мкг/мд >.**; г-17»'таучта (конечная, вянцент- ' рагил 100 •, г«-?^,« вечная концентрация чО мкШ; 4- '.'р;. ■ I о (коне чнал конце н г рация ИХ) мкМЬ

' Гл'о.че ионс-п м&гиин • «»холмя* Сл> ечрукош действием с&глзэдгг

1 ■<•, «ч» •»•- л (. и..1 ,>, «., - » , ь !ц.'И 1»;ю>чит1учш« в б"о-') 1'!» В" с "< и?- ч - I .; ¿-¡¡ткни ионов пинка, гак и ио-? улгн^д .п.

; ¡- т " -,:>*»"аг " »1 | \ I ч^^тнудуциру^^'ур

и -:

npif встраивании а Сиелеы £Кр сслздшш вшгкьлмщд.- Кони кхи-Ш«; как C0K33«KQ па оно. о, ослздали cT4^tr,aHipyww л*кзгё»г•

..........f.'-DliSä

. " О í 1 t i;

i -i 11 : U fr ! м1 i i .>- <f

L Г I (. " II SOS ¿

< .¡~ г 1 V ti I t 4Î?

> ¡ n (.V t i <- <" « ir- 'zCDOO,

, > i ! I. L ~> 4 i >

$&4nm КСИЦЙ!Грс*ЦИЗ JO MrÜ);

¿j _ i V »II i :л

luO ч С 4 L „(-i i iü J 1 ' ,ti

-••'• -V

V . * . .. . ] j', m U,l 1 ~ ч П' ъ К

r . >' ¡i » Cp. ' .ill, V , i.' ¡ [ ! V » í O », > > Укг 4

i и ис и)» i i, и- ь > / уь- «w i. ieipvJii.

ар ..од. л -»i s j îv. л i »■ i h j r <, «. i , \j cii

. Й С * .4 i - '" .fili ft 1 , t1 /■ ТЮ

).« ¡ r.*j.. 'ut.ti.0 . r¡.t¡ j il r- i t

7 .WÏ4/0 tw pv«, hCpy í li I ' I M ¡ * , с

• 'tMse.HCH/Cil»

PKC. 6. Кинетика иш»ей?л í.p0i-0íWH0ciH PJ.;!, "

р'л»щ;:СЛ FKp при д-;k;í>í'¡¡ коаоь кйльшя. стрмкнми va укеаак . • кокб№ -доОигкв: Í-Ойлгй (5 UKT/fcC); ¿-r.5,V'lä-

íCa bváí);

м'йицнг'рм'кд U'O Í.'J*,); ico

P'X) мл-1). .. Среда еодешвл:» Ю ьй' r/ü'Vr/bíDtJ ¡vi ЬмЛ ¡И '/.i.

i-C «f'-ft-1

-o-e-ol

h¡ it * il.^ и .¡с «i»/ st ,1 , u¡ Псду-if >>Hv n и a реультс

I W :,г|Л1"".и, , ......... J 1* .'-•iU li-fwi, 414 NMDA-ЧЧ

Kl, • 1С; IL'.t^'i fc fi. fi -.u-ÏU.-ч. -Itlhv t il . M. -.« t,i'tf"l'OK.

¿'.«Üi-J'lSli!:' - 'i К.

, » If.i I P '<■„> . ml.,, 'Î/hí-Ч I, » I .' ч ' v'K';'!

1

1г:

гист'1'k

одной ¿' Поэтому ной и е

эй и

' tfftV к отреито п показан'.. кого се еообкдл том, что о но пару чем на'-..,.

-> 1

( Л V

стано;? ! Г у i

<~ ло il } 1 р n t ЯП

эр Г,

в

!5ной структуры, ПС« 3-3 сгягк.: \;гкс;> ? с-'исл-г.*!-'оз на 3-3 с:-.'. -

= 0:7

О

H 1 Б t Off

:и наибол'

l 1 о 1

уты-.с внескс;! сте

/ри 1 р е

j >• дейст&ля «чти-с !!■! )!? vosrs крк".: ' < f ai ддй 'Wî^-raî-

' И ДЙГКОТр*йТОЛй 1 ) 9.

I г-.иа* п с Ч.ЧСТЙ'Н w/ ПСДСОСТОлйИЯ^Г',

','.■!■.••'? относ}

! 1 сикели

/лн",!д!:№* сбя5

.! И-мс-рпаптоги д та кадач^ко, rasao. ле-йствук if периодов i. ;!»ььм с.'Ин-хрсшзаЦйй-; Опираясь на дшпшг с тем, что целостность днеульфпдннн связ?й ейдиз для актигк^сти рецептсра Омя чрсв^кы зкекерк-мекты» когда дитиотреитол - всестч'юе.ии-л»- с в?, s-

добавлялся в процессе i ■чдел^н.чя бедка йэ Фракции гкн&птосом пд различных этапах пыде.п^н;:.'. Установлено.' ч;о; если дятисгр^я-тая добавлялся . в • !;сяи?ггряции i 'мМ' на- bcçx зггшах мкгде'мгс, кроме этапа связквак;»;! с аффинным сорбентом, то еьделялс-я сделок; который по сзскч клналофоряерньк свойствам ire от белка, получаемого добавление дкткотревтояа.- .

•В то же время, йглок не 'проявлял ючкой-либо «ктивностк я&я .«учении интеграл кой проводимости, f г t"~> » ? U шя ' озвученных (Лшактссом'-е »1ф!ни г- « , г» * » юбавкой 1 мм ьйткстреитола. По-видй ^ г тс.» Д ^ 1 ' .'ых.свяэей.вално. у*» на этапе соедикг • ч ' >v\ с i i ter '««том. Возможо, это тела? мояно 'сс^ < об tTb с д*- т

(То связывание глутамата полностью к г суре1» tr "Ь " гг

:убации протролипосом и? мозга крыс с -1 т «•> „■> « т»

<удь?атр которой нарушалась интахд'! ш , ^ 1 Bro.se е1 'а1'., 1989). '

Креме дитиотреитола в работе' ч 1 •• I ¡постановленного и окисленного ка гц 1 1 УМ, модифицированной БКр.-;

Литературные данные относитесь I

•осстаноклённогб и окисле»ного на г 1 |

•ически отсутствуют. Б культур* ней;с (.М' " I грыс было показано , что уьедкчгние ви а с с

¡нзванное добавлением в среду Щ)д г, г" жйслениоЛ' Формой глутатйоиа, но не I •• <• ЮМ (ви^ть а1. , 1991). Авторы п " 1 Г ч ^ жисленясго глутатиоиа шосредоваяво г г ^ г -1ия' онр,3Д?'."р'?.1Сго участка рнцептерне

в

т « j

i !

¡:ст; ' !

• - Ii' -

. 0 киле иеслидоьгиша было покапано.что глутатиоп ьоос-га-ИОВЛсННЫК, AOOilbJtt-itüüí) b íiuHUt!l¡T|.oUlíH. О. 1 МКМ, fcUMitíSU Н«Й»И-

ч.пс-шюс увеличение интегральной нровчцимоит»!, • виАУшН'уеп<..й г.ЕУтаыатом. ' в ьксиерим^тх, ириьйДеннм ь таких условных, но о ;ii»ítii.9«tiHcM глуттисша в окшуюыюй форме, интигрын и а» «роводшость максиммьного ответа уиеш .шалаеь до у-»0%' • (рис.

íí3<b

i«¡№

640

Рис.?. Кинетика измене-. цш проводимости Б,Щ, мо- ' ДНф'гЩйр0В:ШН0Й ЬКр, ti i-i-I действии глутатнона

окисленного. Стрелками указав момент добавки: „1-белки (конечная концент-pa¡u« 15 мкг/ыл); 2-глугама? (конечная концентрации ЮО мкЩ; . З-глутатион окисленный . (0.1 икМ); 4-гдгутамат (1Ш икЫ).

» а

.Этот -результат хорошо согласуется-о опытами с добешлением дитиотреитола. Так,. дитнотреитол восстанавливал диоулнеднс)* ■евлаи до SM- групп. &ю'• сопровождалось увеличением проводимости ВЛМ, модифицированной ВКр, . .тогда как глутатион окисленнни, ьоэмслна, окислял SH-rpynnu аминокислот ¡р структуре рецептора,-что, соответственно, сопровождалось уменьшением проводимости.

Заключения. Внастоящее время принято считать, что нниро-токсины из яда'.паука Argiope lobata явлаютоя .. блокатораш» ваотсинаптнческих глутаматергичеоких синапсов. .Вместе с т-ем известно, чад они блокируй преимущественно кввсквалатнпй тип Г'дутшатних рецепторов беспозвоночных. Поэтому.ооновивайсь н>» давнык,- получениях' в результате проведении* зкснериментов, можно скапать,■ что белковые Фракции! выделяемые иа нерьао-ми-мйЧПНХ синапсов креветок Palaeffiori superbus в результате аффин-liOK хроматографии с исподдоь&Аием не'йротокеичееких. (¡фракций ь качестве афФикноги лиганда, щадч-ыдниг собой, постсинаптичее-. Kjfe глугачатиш рецепторы, по-видимому, ¡шюквалатнсго типа.

, Глутамат • увеличивая проводимость встроенного в бислой ВКр. ftpit действий аспартата не наблюдалось никаких изменений в i'.it-•ii'VpyJittio.i проводимости ВКр\ что подтверд-дас-т данные ко oie-ftawm НМЙА типов глутаматких 'рецепторов. в нервно-мнаечних

- г.' -

синапсах ракообразных я васеромнх. Гводитмнмгя )t"ee»entn3n--дня в ответах на глутамат устранялась при-действии комканора--лина А - известного дектина-,' fcmim?(xi«ero ле'севоиги:-<аш"1г> глутч-матиых рецепторов кмс и алектреМеиодогичиских'- экоп*рим*нтах, так и при рекоиструкищ в F..HM глу г-.гматиых рецепторов, д^т-тт"« конкановалина А на глутаматиые реишгорн/' креветок аналогично действию на нерено-ммдачныч синапсы' саранчи, глутаматнче. цепторн крабов и из моргч крнс. ввяимодействйе конакнбвалина а указывает на гликоиротеидну» .природу БКр. '

Полк кяльции выбывают увеличение интегральной r.iyfatfaiwt-дуцируемой проводимости Н'р, встроенного п РЛМ. пледу«т Отметить, что они окагнвеют стабилиеирлчдий -^Мект на модифицированную мембрану, Йонн мчгннч и цинка не имел»"никаких э-М-ек-тов. Следует отметить, что они вызывали ум^нырнше г-лутаматин-дуцируемсй проводимости мембрэдн, модифицированной' ЯМК. Этот факт подтверждает получение раннее данные других авторов.

.При исследовании дейетрия нейротоксичеокей фракции еда паука д. loba».а было продемонстрировано ум^ммиепие глутедагчнду-иируемой интегральной проводимости при встраивании р бислой БКр, что 'также подтверждает принадлежнсчлгь выделенного белка к. постсиипптичегким глутаматннм рецепторам.

Для!, сохранения активности выделенных белковых фракций -необходимо поддержание целостности дйсулг-филных свяеей.. Ь'ыло показано..; что , если дитиотреитол «сбавлялся ин этапе сдотогё&пмя Фракции синаптосом с афринным сорбентом, /то рмде.чяемый белок, не обладал колкой-либо активностью при встраивании в ВЛМ.

Необходимость сохранения S-S .связей и §Н-групп в структуре белка подтверждается тагане "экспериментами по.изучении влияния глутатиона восстановленного и окисленного. Как оказалось, глу-татион восстановленный незначительно увеличивая глутаматинпу-пируемую интегральную лровопймфгь ВШ,.. модифицированную ВКр," Б противоположность атому, глутатисн окисленный снижал уровень-, глутаматиндуцируемой интегральной ¡проводимости бислойиой мембраны. . .. ' '■ Молекулярная масса выделенного БКр, определенная при потоки электрофореза в градиенте пористости лсушакриламияа» показала наличие трех характерны* полое с массами, соответствуй®!-ai 64¿4; 14^2 кДа. На основании полученных результатов ■южно также предположить, что выделенный.бело« принадлежит к свиеквалзтному типу глутчмятных рецепторов..

Основные ныволм: "

1. Выделен белок из нервно-мышечных синапсов крееетмг ^alaemcn superbus, который при встраивании в Оис.чоймую лнпид-¡ую мембрану, увеличивает ее. интеп-алькую проводимость ь

■ - 18 -

,1; I JtLU.II 'I »1, 1 it I h I 1 I Ц lie JIMct-T It-HKUX-JIKOO офр-КТОг b П» i VI ' tl to . <4 II t V >11 ИрОьаКНС'Й 5niiir.i бёЛКим;

л i i и ii . Id i и bit на };яа блокируек'Я нейр»-u f Ui l ^ U 41 -Wi и J a J i * jolata, Ччо уг.агчшает на ! чЛ »ИИ! U 1 tr* l| 1, !. il 1. 1 11 МО С&дг.л;

a i nuciii Нц li«, Jim w 11 Jt / (¡масть 1>Ш,' ыоди>1иШ(п:шншЛ i(U liiqiu ( 1 и не tic(f t ) 11 11 Шах еппапссф ггрч-ьнок, не

f fa, 1 tt 1 r i) h J flu it 1 i 1 lli«t - 1".ЗЬ1-0'1:и:м;1 ОлчКьТир&йЯ

" tf e t, t! i \ u n i j 1

i h it аь^ьая,!, A < [| u i if(-eucnn:c'cuu!ti тгро^ой'^моота' t й I i Jt i t I k ¡11 f; Ifl ieotKOM iVfl tie pi яо-ьи№1)ьы>! 011-inaip'O 1 ь t ti yi 1 к 1 ,ie r.ay■гама'лтп.уцкруег.юи np.o-, i;• Uiк

.6. Уетедоая&йо," что дягиозронтэл увоян'-шлет кр<ж>дин«пг' f>S4, мпаЦИффоьаанбй рг-ц-ет'оррыы оадком, : тогда ркнздсчмой ¡¡.щлш • глутатйона,- ооотьететгеьно, еыцюмдавсса проьодойоеги Ш1М, .что eiuyirwu отеуы-т' о' важной- роли состойtii-iit S-S оеан.ей и Sli-групн ь структура белковой- ыолс-■ iv/AW 'для проигшжпД (¡7ьк'ХгЮЯОстй ренепторипго ' tfcjwa. ;•'.'• ; ■ .

- .Описбн оаурднхамаииих рабоу: •

i. TasiKUlTiaiiieaov- t^.A., ."' Maimudovti E.M., Kazakov- ('., КШ izov A 6., Ilia Т.Н. iteocrist itut Ion or glutiwate receptors into planar bl layers'./ USS!<-Vtest Berlin synposuiw "Receptoro end ion channels".,- Tashker,c,- 19«6..- P.i'b. .

. I:, "faiitiiiiuhtisiredov • Б.А., 'wafcimwava'. f:.M.kazakov. ¡,, bWJsov А.В., Li in 'J.¡4. foooast ituUon or' - glutawate' r-ecept ors into planar Mlayers./. Receptors and ion Channels.-. Eeilin * « « Г (t - v. liter da Gryyter- & Co,- ¡387.- P. li?-1?:6.

d \ lint ihhafttadov Б. А. , МжптЫоуа E:.M. , Uj»'T.|t;, Khaplzov i> и h"J irjufi mi I ivCOn-31 ПтЮа or gluUiwate recepiors./ V ,itv r syiiipoislaiii: fiiologU-a! nwititu-ctfies,- structure aa 1 Гака ion-- ki^a.- ltfea. p. u .;.

4 it «J'« »«-iftcb.B. A,, «акмудсъа 'Э.И., Kaaiu?oi> И., Xaiiiiibcui i !'.■, ты T.M' -•{•¿НййатГ'УкЬш на Оислойных диаидных мембранах j .pi'x рецепторов моага iq-.ыо.// «-ивйологкл и йиохвкия \ , I л'цч .»1 lecKi« сешьпсон.- Л : - Наука. - -1&89. - t'. ьй-9-5.

и it а me S.M.,:' Лш f.a., Ыидаь ft.r,, 'Гшмухамелов i ft, Дс» л ifOB-Fw В структуре глу^амашнк редеаторон. // Дога. » > > < t - 1уЬЗ. - N3, - С. 55-6?. • j. 1 И. Выделение и изучение .функциональных Хорактерис-ч i > . i4hx р^цеиторой из ковра крыс в кръвьтсж Pftlbefwn -I м ill «'ht-rpoiU-aHMh i, В.!Ы.//Л-ло1. ЛЯ .У&СО?. Jieti. b У&1ШТИ

- 13 -

or 17.08, о;; к !Л'г: i

7. Лпм T.M, Лейл где колкакавалина А й SH-r^nrcHTo» НЧ ф7ШЧШ<ЧГ.1Л1ае О cOCTWtJW» ГДуТамаГНОГО рРЦ9»Гор« Kpf-T-f ток Peîaemon vnteil^;-; при ГОГрЗГйаНИИ В КЙМ.// ЛОКЛ. ('!? У у. ПС Г. ■ Длп. в УаШП.Ч от Г',Св.03 !/ 1Р«0-У5?ЙЗ.' . '

H. ,i»ÎM Т.Н. bwneí«!'" г.яутлоагног'.; р'ЧК'ЧТОра ИЗ F'alr.v ч«еп «yreiV-u-ü И изучение ого Футшоналыш-* xapaK'ïOi:4CT4'î При WTpW'-MHlB- В I.7!M. /<"Г"». ДОКЛ. !'."ЛУ'-'Ч. KOHfep. '"Coí'i (?Mi»HHt!4 npoJurou оО::>?й физиологии и бкоЮаикк"- Таш?нт~. ' - U.Vb

ХуЛоса

т.ч. л-ч ' ■ -.".,■■

¡'¡атетка Ра!а<а«оп l«t*?-w;>r нерв-мускул стшеидан-i::î;m;.w:.vï р*ие»1тс|.ч?йи адраил .олиа та •l-укпйисна«. *арактернс1чц-., ft rан;п!. ,

. Т-:MiKH'íoг чалчласила п ' • - :>.а P.alavrrjn ,а>'рег Sa.is-i¡H4r iapa-Mj-скул сшшпсиячн п«рн^иб олннгал <ч;оил rçym ^»«мм лшл:?5 "'нар-т^га i.'yyjR) И'каеилгамча глутаеат wbcitj иич yr?w<r «итер-■ал уголлурчаплиги ешираднгчни атч-;ч«чли. ; Аопартпт лук-игн.зд •о.ч'момГр'.у-и утка^ч'чан/анааш ^агармае.ин и амкдомоди. • ftApwrifti •¡varan о'уо'таннг ЬОуЬЧга тшнгмри Д. ургимчак рауяритчп-

("йротоксик к,И'змм билян туондади. Ру а*рапю о.ишган «у.-иднкчг густомкмтик табингид/ш даря»: Зеради. va 7>>;-f р'-иепторла-:;i f-MïÀ-ткп^^ринит* мокчум т^еумиднги, рецептор онеил ргкл -илган ОДЗНнииг уткаеуочааллгот! гяуттнт штирокидм £¡»rf»pwra-а татснр ци£м.эйл,н. Иочгсн'тадия а, крл1<ет»?я • м»фй-мускул еч-«пеияан. а*.рат!?э оля.ю'ач р"И»птор ецоил келтррнО чикаралига!} îy;!M утка^увчанлигн дееенс»гл!?а?мзоинн áJ^oTiif), глутаеат ча,>$и-.. адчггт ? i клаузам;»";»» пгдаига owt>. чздзд»., Рецоатор oîjejM

ткааилган H'v^ уткагуьчаялигтш ди'»ч.:ггр*итол окшрён, глутатч-ннкнг окочллаиган гирмнеи укн ка«аитирйим лнг^лангам; ру pe-v ептор- ефилнчиг Функциеназ вгичсрч^арини бала/.Ч'ши ' учуй -s-бсрляр 5Н грухлар нечеглик муцим ?кдачпгиии 't$'j;çaT?wj.: ,

Зимчягу : .

[.И. Lift .

k'ola'-ioa аоЛ «л.у.Рпч; op íuoo» icoal ci v'raci.eri olios of i" íj-ni''vate reo'-'p'f.er f t on nerv^-mnacla syriapfe;: o( so! Irp

In our r>.'-'ve.ai <"b the ¡Toteiri l'tc'ü nerve-n-.u^olf« pynapsei; of. »rjm[i F'aia"!i:on :MJpfrh»i.? l.-.olai This protejo июгеане«! ini'a'raî '"onrtiii'tíincH or bt}ayer I lp-И 'тгЯт&н» (M.MJ in

U¡e. piöSfehüc dï gUitaniatê . (\s.pai t ;it(< bat no any «l'T'ml'.s on Ui^ conductance ol the BLM modified Oy this protein. Tn« aoJ-iuii of this reo^ptor. protein on BtM was blocked by- a neurotoxic fraction tvom the .spitter venom Arglope tobata. It indicates the postsynaptic nature of the isolated protein. Mg and ?.n Ions - well known antagonists of the NMD.4 receptor typo - dut not have, any Influence on tto glutamate induced conduct .anco or' 6LM, modified by ; the receptor '? protein, isolated from fiörve-niiisoie synapses of shrimp. Conkanava'l In A t« titnlnat&d the <1б!';ег«И lzat.ion of BLM conductanoe, induced by tr.* receptor's protein of .shrimp increasing Glutamat* indoo«) conductanee. it was established that dnhiotnit-iiol inoreased Ню Pl.M conductance modified by ' this protein, w hure as tne action or glut hat Ion oxidized acoarpanbd by decreasing the ; Ы.М conduct алее, This indicates the ;з1ёп1Г leant rol« of. the S-S link's'state and the Sit-groups in piotein noieoule sí. ruoturv for th^ release of the functional activity 'of ' receptor piotbln.