Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Вязкоупругие характеристики монокристалов и аморфных пленок глобулярных белков и их изменение под влиянием физико-химических факторов

ВАК РФ 03.00.02, Биофизика

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Морозова, Тамара Яковлевна

Список основных обозначений и сокращений.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА I. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР.II

1.1. История развития представлений о механических свойствах глобулярных белков.II

1.2. Трудности теоретического и экспериментального исследования механических свойств глобулярных белков.

1.2.а) Теоретические расчеты и исследования в растворе 16 1.2.6) Измерения на твердых образцах. Основной

Принцип предлагаемого метода.

1.3. Монокристаллы белков как объект исследования механических свойств глобулярных белков.

1.3.а) Преимущества монокристаллов как объектов исследования.

1.3.6) Сравнение структуры и свойств белков-ферментов в растворе и в кристалле.

1.3.в) Влияние иммобилизации глутаровым альдегидом.

1.3.г) Лизоцим - основной объект исследования.

ГЛАВА П. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1. Микрометод измерения механических свойств твердых образцов.

2Л.а) Способы описания вязкоупругих свойств.

2.1.6) Принцип метода измерения.

2.1.в) Аппаратура и измерение.

2.1. г) Проверка микрометода.

3 Стр.

2.1.д) Точность измерения Е ит9>.

2.2. Материалы. Подготовка образцов.

2.2.а) Выращивание и фиксация глутаровым альдегидом кристаллов белков.

2.2.6) Изготовление и фиксация аморфных пленок.

2.2.в) Подготовка образцов к измерению.

2.2.г) Условия проведения экспериментов.

ГЛАВА Ш. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

3.1. Механические свойства монокристаллов белков. Влияние неспецифических физико-химических факторов.

3.1.а) Зависимость Е и $ от частоты.

3.1.б) Влияние фиксации глутаровым альдегидом.

3,1.в) Зависимость от влажности.

3.1.г) Зависимость от температура.

ЗЛ.д) Влияние денатурации.

ЗЛ.е) Зависимость от рН и ионной силы.

3.2. Свойства молекулы глобулярного белка как однородного материала.

3.3. Механические свойства кристаллов лизоцима.

Влияние аналогов субстрата.

3.3.а) Влияние TV^-ацет ил-D-глюкозамина на механические свойства триклинных кристаллов.

3.3.б) Исследование эффекта аналогов субстрата на различных твердых образцах лизоцима.

3.3.в) Концентрационная зависимость эффекта JV^ ацетил-])-глюкозамина.

3.4. Молекула лизоцима как механическая конструкция.

Заключительные замечания.

ВЫВОДЫ.

СПИСОК ЛИТЕРАТУШ.

СПИСОК ОСНОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ И СОКРАЩЕНИЙ

Е- - модуль Юнга (модуль одноосного растяжения-сжатия) О - модуль сдвига К - модуль всестороннего сжатия fas ~ упругая постоянная пружины (жесткость на растяжение-сжатие)

S-£ - податливость образца (характеристика материала)

- податливость "молекулярная" (податливость эквивалентной пружины)

К— 4т ~ сжимаемость J Q^ ih - логарифмический декремент затухания j[i - коэффициент Пуассона

- собственная резонансная частота (основная гармоника) поперечных колебаний образца

А - относительная влажность воздуха в % f - сила

Р - площадь поперечного сечения образца J - момент инерции I - ионная сила ГА - глутаровый альдегид Jf-ATA- JV-ацетил-и-глюкозамин (- трисахарид ^ацетил-]} -глюкозамина v^-JlMK " Ж-ацетилмурамовая кислота

Единицы измерения модуля Юнга ГН-м"2 = Ю9 Н-м"2 = Ю10 дн* см""2 = 1,0193-Ю4 кГ-см""2.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Вязкоупругие характеристики монокристалов и аморфных пленок глобулярных белков и их изменение под влиянием физико-химических факторов"

Актуальность темы. Выяснение роли внутримолекулярной подвижности в функционировании белков является одной из фундаментальных задач современной молекулярной биофизики /6,10,23,71, 124,165,199/. Усилиями многих исследователей разными методами показано, что в молекулах биополимеров могут осуществляться саше разные движения, отличающиеся частотами, амплитудами и массами, вовлекаемыми в это движение /23,35,91,101,116,161/. Наряду с движением отдельных атомов и небольших групп, в белковых молекулах возможны движения, связанные с синхронным перемещением большого числа атомов, - коллективные движения, к которым относятся длинноволновые фононы в фибриллярных структурах, деформационные колебания глобулы как целого ("дыхательные движения") и относительные перемещения отдельных частей глобулы. Такие коллективные движения являются по своей сути механическими и допускают описание в рамках классической механики. Для подобного описания требуется знание механических характеристик глобулярных белков. По величине этих характеристик, можно судить о том/ в каком агрегатном состоянии "твердоподобном" или "жидкоподобном" находится белковая глобула, какова природа ее упругости. Изучая анизотропию и внутреннюю неоднородность вязкоупругих свойств глобулы, изменение этих свойств и формы молекулы при функционировании, при связывании различных специфических лигандов, можно выяснить, есть ли у глобулы четко выраженные жесткие домены, способные двигаться как целое, и гибкие участки, играющие роль сочленений, т.е., можно ли рассматривать глобулу белка как специальным образом устроенный механизм с выделенными степенями свободы, какова кинематика движений такого механизма, какова роль этих движений в процессе превращения субстрата в продукт и т.д.

Однако до сих пор механические свойства глобулярных белков были изучены крайне мало. Отсутствуют не только достаточно достоверные количественные характеристики, но и единое качественное представление о том, что собой представляет глобулярный белок с точки зрения механики.

Среди многочисленных гипотез об основных принципах работы ферментов существуют как основанные на цредставлении о молекуле белка как об упругом твердом теле, специальным образом устроенной конструкции, машине /6,9,10,54,57,120,133/, так и предполагающие, что белок - это капля масла, мицелла с гидрофобным жидким ядром /8,95,119,197,199/. Описание внутримолекулярных движений в белках также производится либо по аналогии с движением в жидкостях, либо в представлении о глобуле как о твердом теле /1,55,56,81,96,139,154/. Сделать выбор среди подобных гипотез и моделей можно лишь располагая экспериментальными данными о механических свойствах глобулярных белков.

В связи со сказанным, целью настоящей работы является исследование вязкоупругих характеристик молекул глобулярных белков и зависимости этих характеристик от функционального состояния белка.

Для решения поставленной задачи нельзя применить известные физические методы исследования глобулярных белков в растворе, так как, согласно имеющимся теоретическим оценкам /137,138,161/, коллективные движения в глобуле в такой вязкой среде, как вода, затухают апериодически и имеют характер ограниченной диффузии.

Поэтов возбудить такие коллективные движения на собственных частотах в растворе невозможно. Различными физическими методами можно лишь зарегистрировать наличие такой внутримолекулярной подвижности, но нельзя измерить упругие характеристики исследуемой степени свободы. Более подробно эти вопросы обсуждаются в разделе 1.2.

В.Н.Морозов предложил для исследования механических характеристик глобулярных белков использовать механические методы исследования иммобилизованных твердых ориентированных образцов белков, лучшими из которых являются монокристаллы белков /28/. Такой подход позволяет механически, с помощью внешней силы возбуждать исследуемые степени свободы на частотах, существенно меньших, чем собственные, и тем самым в значительной степени исключить влияние вязкого трения. В сочетании с данными рентгено-структурного анализа о структуре молекул и упаковке их в кристалле, такой подход,в принципе,дает возможность исследовать внутримолекулярную анизотопию механических свойств молекул белков как элементов конструкции кристалла.

Для решения поставленной задачи потребовалось:

1. Разработать методы изготовления из монокристаллов белков образцов, пригодных для проведения механических измерений микрометодом В.Н.Морозова.

2. Цровести изучение влияния разных факторов на механические свойства кристаллов белков с целью установления связи между макрохарактеристиками кристалла и характеристиками молекул белка.

3. Определить величину и общий характер упругости белковой глобулы и сравнить их с известными из литературы аналогичными характеристиками других материалов.

4. Исследовать изменения механических свойств белков - ферментов при связывании специфических лигандов в активном центре.

В соответствии с поставленной задачей в качестве основного объекта исследования был выбран лизоцим белка куриных яиц, так как этот белок легко доступен, хорошо кристаллизуется, хорошо изучен различными методами, известна структура и упаковка его молекул в различных кристаллических модификациях. Были исследованы вязкоупругие характеристики 4-х различных кристаллических модификаций лизоцима, фиксированных глутаровым альдегидом (ГА), и одной - без фиксации.Ряд исследований был выполнен на кристаллах миоглобина кашалота, гемоглобина лошади, алкогольдегидроге-назы печени лошади, фиксированных и нефиксированных ГА аморфных пленках лизоцима, яичного альбумина, бычьего сывороточного альбумина, oC-химотрипсина. Исследовано влияние на измеряемые характеристики кристаллов частоты измерения, фиксации глутаровым альдегидом, температуры, степени гидратации, рН, ионной силы, связывания специфических агентов, денатурации. Измерены константы связывания jV^a^Tiui-D -глюкозамина лизоцимом в 2-х кристаллических модификациях. Значения констант хорошо совпадают с известными для лизоцима в растворе.

Научная новизна.

1. Впервые измерены вязкоупругие свойства монокристаллов глобулярных белков.

2. Обнаружено, что механические свойства кристаллов значительно меняются при различного рода изменениях как внутри-, так и межмолекулярных взаимодействий. Показано, что при определенных условиях вклады этих взаимодействий можно разделить и, исследуя характеристики кристаллов, можно получить сведения о вязкоупругих свойствах молекул, как элементов конструкции кристалла.

3. По результатам исследования 7-ми различных глобулярных белков установлено, что нативная глобула находится в твердом агО регатном состоянии с модулем Юнга Е = 2-10 ГН*м и что основной вклад в упругость глобулы вносит потенциальная энергия невалентных взаимодействий атомов в молекуле, а не изменение энтропии, как в случае каучуков /II/.

4. В результате денатурации химическими реагентами белок испытывает качественное изменение механических свойств, подобное тоцу, которое сопровождает переход полимеров из стеклообразного в высокоэластическое состояние. Модуль Юнга падает по в 1000 раз и упругость приобретает энтропийный характер, типичный для каучуков.

5. Экспериментально показано, что молекулу лизоцима следует рассматривать как конструкцию, состоящую из двух жестких доменов, соединенных упругой связью. Сделана оценка жесткости такой конструкции на растяжение 5,5-14 и на изгиб то р т

ЗС= (0,5-1,5)*10 эрг*рад .моль' . (Для сравнения, упругая постоянная водородной связи 15-30 Н*м~* /42,161/).

6. Показано, что механические свойства такой конструкции значительно меняются при функционировании. При связывании аналогов субстратов податливость глобулы лизоцима уменьшается на >40-50%.

Практическая ценность. Обнаруженная способность твердых иммобилизованных образцов глобулярных белков менять свои механические свойства под влиянием различных физико-химических факторов может служить в качестве основы для создания цринципиаль-но новых технологических устройств.

Заключение Диссертация по теме "Биофизика", Морозова, Тамара Яковлевна

125 ВЫВОДЫ

1. Впервые измерены вязкоупругие характеристики монокристаллов и аморфных пленок 7-ми различных глобулярных белков. Исследована зависимость этих свойств от температуры, влажности, рН и ионной силы, от действия денатурирующих агентов и специфических лигандов.

2. Обнаружено, что механические свойства кристаллов значительно меняются при различных изменениях внутри- и межмолекулярных взаимодействий. Показано, что при определенных условиях вклады внутри- и межмолекулярных взаимодействия можно разделить. При исследовании характеристик кристаллов удается получить сведения о вязкоупругих свойствах молекул, их составляющих.

3. Для нативных белковых глобул 7-ми исследованных белков модуль Юнга находится в пределах 2-10 ГН/м2. Упругость глобул имеет неэнтропийную природу. Основной вклад в упругость вносит потенциальная энергия невалентных взаимодействий атомов в молекуле. Нативная белковая глобула - твердое тело,близкое по свойствам к молекулярным кристаллам и полимерам в стеклообразном состоянии.

4. В результате денатурации химическими реагентами белок испытывает качественное изменение механических свойств: упругость приобретает энтропийную природу, модуль Юнга падает п> в 1000 раз. По величине модуля Юнга и характеру упругости денатурированная молекула бежа подобна полимерам в высокоэластическом состоянии.

5. На примере лизоцима показано, что механические свойства фермента могут изменяться в каталитическом цикле. Связывание аналога субстрата Jf-ацетил- D -глюкозамина сопровождается 40-50$ уменьшением податливости глобулы лизоцима.

6. Молекула белка-фермента может обладать внутренней анизотропией механических свойств, связанной с ее структурной неоднородностью. Экспериментально показано, что молекулу лизоцима следует рассматривать как конструкцию, состоящую из 2-х жестких доменов, соединенных упругой связью. Впервые сделана экспериментальная оценка изгибной жесткости такой конструкции уо р Т

X = (0,5-1,5)*Ю эрг*рад .моль , хорошо совпадающая с известным из литературы расчетным значением. С использованием этой величины рассчитаны среднеквадратичные амплитуды теплового движения доменов.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Морозова, Тамара Яковлевна, Пущино

1. Александер Р. Биомеханика. М.: Мир, 1970, 339 е., с.78.

2. Бергман Л. Ультразвук и его применение в науке и технике. М.: Ин.лит., 1956, 726 с.

3. Бирштейн Т.М., Птицын О.Б. Конформации макромолекул. М.: Наука, 1964, 392 е., с.177.

4. Бландел Т., Джонсон Л. Кристаллография белка. М.: Мир, 1979, 620 е., с.577-579.

5. Блюменфельд Л.А. Проблемы биологической физики. М.: Наука, гл.ред.физ.-мат.лит., 1974, с.336.

6. Бурштейн Э.А. Изучение быстрой подвижности белковых структур методами собственной флуоресценции. В кн.: Равновесная динамика нативной структуры белка. - Пущино.: НЦБИ АН СССР, 1977, с.60-83.

7. Волькенштейн М.В. Ферменты и биофизика. В кн.: Молекулярная биология. -М.: Наука, 1964, с.172-181.

8. Волькенштейн М.В. Электронно-конформационные взаимодействияв биологических системах. Изв.АН СССР, 1971, сер.биол., № 6, с.805-818.

9. Волькенштейн М.В. Молекулярная биофизика. М.: Наука, гл.ред. физ.-мат.лит., 1975, с.616.11. 1Уль В.Е., Кулезнев В.Н. Структура и механические свойства полимеров. М.: Высш.школа, 1972, 320 е., с.38-56.

10. Иванов Ю.П., Антипин М.Ю., Перцин А.И. Тепловое расширение некоторых органических кристаллов. Кристаллография, 1982, т.27, № 3, с.627-629.

11. Иммобилизованные ферменты. Современное состояние и перспективы. /Березин И.В., Антонов В.К., Мартинек К. М.: Изд.Московск. Универс., 1976, т.1, 296 е., с.207-211.

12. Китайгородский А.И. Молекулярные кристаллы. М.: Наука, гл. ред.физ.-мат.лит., 1971, 424 с.

13. Кожин В.М. Изменение плотности, средних межмолекулярных расстояний и коэфф.упаковки молекул некоторых ароматических соединений в широком интервале температур. Ж.Структурн.хим., 1968, т.9, № 4, с.671-674.

14. Ландау Л.Д., Лифшиц Е.М. Механика. М.: Наука, гл.ред.физ.--мат.лит., 1965, 204 е., с.101.

15. Ландау Л.Д., Лифшиц Е.М. Теория упругости. М.: Наука, гл. ред.физ.-мат.лит., 1965, с.203.

16. Ландау Л.Д., Лифшиц Е.М. Статистическая физика. М.: Наука, гл.ред.физ.-мат.лит., 1976, ч.1, 584 е., с.431-435.

17. Ленинджер А. Биохимия. М.: Мир, 1974, 958 е., с.680.

18. Литовец Т., Дэвис К. Структурная и сдвиговая релаксация в жидкостях. В кн.: Физическая акустика /ред.Мэзон У., т.2,ч.А, Свойства газов, жидкостей и растворов. - М.: Мир, 1968,с.298-370.

19. Лихтенштейн Г.И. Метод спиновых меток в молекулярной биологии. -М.: Наука, 1974, 256 с.

20. Лихтенштейн Г.И. Роль внутримолекулярной динамики белков в ферментативном катализе. В кн.: Успехи биол.хим. - М.: Наука, 1982, т.23, с.3-23.

21. Макаров А.А., Мгеладзе Г.Н., Монаселидзе Д.Р., Боянов А.И., Платонов А.Л., Куранова И.П., Гребенко А.И., Есипова Н.Г. Тепловая денатурация леггемоглобина в кристалле и в растворе. -Биофизика, 1979, т.24, № б, с.977-984.

22. Марвин Р., Мак-Кинни Дж. Объемная релаксация в аморфных полимерах. Физическая акустика /ред.Мэзон У., т.2, ч.Б: Свойства полимеров и нелинейная акустика. - М.: Мир, 1969,с.193-265.

23. Маршелл Э. Биофизическая химия. М.: Мир, 1981, т.1, 358 е., с.81-95.

24. Машинская Г.П. Органоволокниты. В кн.: Пластики конструкционного назначения. - М.: Химия, 1974, с.266-801.

25. Морозов В.Н. Исследование механохимических взаимодействий в ферментах. Теоретические и экспериментальные подходы. Дисс. канд.физ.-мат.наук. - Пущино, 1976, - 122 с.

26. Морозов В.Н., Морозова Т.Я. Акустический метод исследования механических свойств белковых монокристаллов.-В кн.: Симпозиум: Ультразвук в биологии и в медицине УБИОМБД-У. (8-II сент. 1981г): Тез.докл. Пущино, 1981; с.20-21.

27. Морозов В.Н., Морозова Т.Я. Механохимические свойства кристаллов белков. В кн.: I Всесоюзный биофизический съезд: Тез.плен.лекц.и симпоз.докл.-М., 1982, с.26.

28. Морозова Т.Я., Морозов В.Н. Как измерить жесткость белковой глобулы. В кн.: I Всесоюзный биофизический съезд: Тез.докл. стенд.сообщ.-М., 1982, т.1, с.121.

29. Панков С.П. Студнеобразное состояние полимеров. М.: Химия, 1974, с.127-167.

30. Пасынский А.Г. 0 степени деформируемости белковых молекул в растворах. Биофизика, 1956, т.1, № I, с.9-15.

31. Перепечко И.И., Старцева Л.Т. Вязкоупругое поведение и релаксационные процессы в системе полимерный композит-вода. Высоко-молекул.соедин., 1982, т.24, № 12, с.2616-2620.

32. Равновесная динамика нативной структуры белка./Отв.ред.Бур-штейн Э.А. Пущино: НЦБИ АН СССР, 1977, 156 с.

33. Рапли Дж.А. Сравнение структуры бежа в кристалле и в растворе.-В кн.: Структура и стабильность биологических макромолекул. -М.: Мир, 1973, с.255-319.

34. Робинсон Р., Стоке Р. Растворы электролитов. М.: Ин.лит., 1963, с.552, с.595.

35. Рысюк Б.Д., Носов М.П. Механическая анизотропия полимеров. -Киев: Наукова Думка, 1978, с.232.

36. Сарвазян А.П., Харакоз Д.П. Акустические исследования конфор-мационных состояний белков в водных растворах. В кн.: Молекулярная и клеточная биофизика /ред.Г.М.Франк.- М.;Наука, 1977, с.93-106.

37. Светлицкий В.А. Механика гибких стержней и нитей. М.: Машиностроение, 1978, 222 е., с.136-140.

38. Сиротин Ю.И., Шаскольская М.П. Основы кристаллофизики. М.: Наука, гл.ред.физ.-мат.лит., 1975, с.680.

39. Скот Э. Давыдовские солитоны в оС -спиральных белковых молекулах. В кн.: Современные проблемы физики твердого тела и биофизики.: Сб.науч.труд. - Киев: Наукова думка, 1982,с.176-179.

40. Слонимский Г.Л., Аскадский А.А., Китайгородский А.И. Об упаковке макромолекул в полимерах,- Высокомол.соедин. Серия А, 1970, т.12, №3, с.494-512.

41. Справочник химика/ред.Никольский Б.П.-М.-Л.: Химия, 1966, 1071 е., с.568-571.

42. Таблицы физических величин. Справочник/ред.Кикоин И.К.-М.: Атомиздат, 1976, 1008 е., с.53.

43. Тимченко А.А., Птицын О.Б., Сердюк И.Н., Федоров Б.А., Кравченко Н.А. Структура лизоцима и его комплекса с ингибитором в растворе, сравнение со структурами в кристалле.- ДАН СССР, т.230, №2, с.458-461.

44. Ферри Дж. Вязкоупругие свойства полимеров.- М.: йн.лит.,1963, 535 с.

45. Фершт Э. Структура и механизм действия ферментов.- М.: Мир, 1980, 432 е., с.395-399.

46. Френкель Я.И. Кинетическая теория жидкостей.- Л. :Наука, Ли-нинград.отд., 1975, с.592.

47. Фробишер М. Основы микробиологии.- М.: Мир, 1965, 678 е.,с.17.

48. Хачатурян А.Г. О фазовых превращениях в кристаллах, составленных из макромолекул.-Ж.Э.Т.Ф., 1977, т.72, $3, с.1149-1156.

49. Худсон Д. Статистика для физиков.- М.: Мир, 1967, 242 е., с.82-86.

50. Чернавский Д.С., Хургин Ю.И., Шноль С.Э. Об упругих деформациях белка-фермента.-Молекул.биол.,1967, т.1, №3, с.419-425.

51. Шайтан К.В., Рубин А.Б. Теория эффекта Мёссбауэра в белках.- Биофизика, 1980, г.25, № 5, с.796-802.

52. Шайтан К.В., Рубин А.Б. Уравнение движения для конформона и простейшие молекулярные машины для электронного (ионного) транспорта в биологических системах. Молекул, биол., 1982, т.16, Ш 5, с.I004-I0I8.

53. Шноль С.Э. Конформзционные колебания макромолекул. В кн.: Колебательные процессы в биологических и химических системах.: Тр. Всесоюзн.симп.по колебат.процессам (Пущино, 21-26 март. 1966). - М.: Наука, 1967, т.1, с.22-41.

54. Штрауб Ф.Б., Сэбольчи Г. О динамических аспектах структуры ферментов. В кн.: Молекулярная биология. - М.: Наука, 1964, с.182-187.

55. Энгельгард В.А., Любимова М.Н., Мейтина Р.А. Химизм и механика мышцы по опытам на миозиновой нити. ДАН СССР, 1941, т.30, № 7, с.639-641.

56. Энгельгард В.А., Любимова М.Н. К механохимии мышцы. Биохимия, 1942, т.7, вып. 5/6, с.205-231.

57. Энциклопедия полимеров /гл.ред. Каргин В.А. М.: Советск. Энциклопедия, 1972, т.1, 1224 е., с.1003.

58. Энциклопедия полимеров /гл.ред. Кабанов В.А. М.: Советск. Энциклопедия, 1977, т.З, 1150 е., с.598.

59. Aaron В.В., Gosiinе J.M. Elastin as a random-network elastomer: a mechanical and optical analysis of single elastin fibers. Biopolymers, 1981, v.20, N 6, p.1247-1260.

60. Alderton G., Fevold J. Direct crystallization of lysozyme from egg white and some crystalline salts of lysozyme. -J. Biol. Chem., 1946, v.164, bl 1, p.1-5.

61. Anderson C.M., Zucker F.H., Steitz T.A. Space-filling models of kinase clefts and conformation changes. Science, 1979, v.204, N 4391, p.375-380*

62. Artymiuk P.J., Blake C.C.F., Grace D.E.P., Oatley S.J., Phillips D.C., Sternberg M.J.E. Crystallographic studies of the dynamic properties of lysozyme. Nature, 1979, v.280, Я 5723, p.563-568.

63. Bignetti E., Rossi G.L., Zeppezauer E. Microspectrophoto-metric measurements on single crystals of coenzyme containing complexes of horse liver alcohol dehydrogenase. FEBS Lett., 1979, v.100, N 1, p.17-22.

64. Bishop W.H., Richards P.M. Rates of diffusion of some solutes in cross-linked crystals of j^-lactoglobulin. J. Mol. Biol., 1968, v.38, Iff 3, p.315-328.

65. Blake C.C.F., Koenig D.F., Mair G.A., North A.C.T., Phillips D.C., Sarma V.R. Structure of hen egg-white lysoozyme. A three-dimensional Fourier synthesis at 2 A resolution. "Nature, 1965, v.206, I\f 4986, p.757-761.

66. Blake 0.0.1?., Johnson L.1T., Mair G.A., North A.C.T., Phillips D.C., Sarma V.R. Crystallographic studies of the activity of hen egg-white lysozyme. Proc. Roy. Soc. London. Ser. B, 1967, v.167, N 1009, p.378-388.

67. Blow D.M. Hard facts on structure: hot air about mobility. Nature, 1982, v.297, If 5866, p.454-455.

68. Boyne S.J., Ottesen M. Enzymatically active, cross-linked pig heart lactat dehydrogenase crystals. Carlsberg. Res. Commun., 1976, v.41, N 4, p.211-216.

69. Bradbury J.H., Chapman B.E., Crompton M.W., Norton R.S., Teh. J.S. Hydrogen-deuterium exchange of the C-2 protons of histidine and histidine peptides and proteins. J, Chem. Soc. Perkins. Transactions, 1980, Part 2, U 4, p.693-699.

70. Branner-Yorgensen S. On the mechanism of protein cross-linking with glutaraldehyde. In: TCnzym. Eng. /Ed. Brown G.B., Manecke G., Wingard L.B. - N.Y., L.: Plenum Press, 1978, v.4, p.393-394.

71. Bull H.B., Briese K. Temperature dependence of partial volumes of proteins. Biopolymers, 1973, v.12, IT 10, p. 23512358.

72. Butler L.G., Rupley J.A. The binding of saccharide to crystalline and soluble lysozyme measured directly and through solubility studies. J. Biol. Chem., 1967, v.242, N 5,p. Ю77-Ю78.

73. Campbell I.D., Dobson C.M., Williams R.J.P. Structures and energetics of proteins and their active sites. Adv. Chem. Phys., 1978, v.39, p.55-107.

74. Careri G., Easella P., Gratton E. Statistical time events in enzymes: a physical assessment. C.R.C.Critical Rev. Biochem., 1975, v.3, IT 2, p.141-164.

75. Careri G., Gratton E., Yang P.H., Rupley J.A. Correlation of JR spectroscopic, heat capacity, diamagnetic susceptibility and enzymatic measurements on lysozyme powder. Nature, 1980, v.284, N 5756, p.572-573.

76. Carr P.W., Bowers L.D. Immobilized enzymes in analytical and clinical chemistry: Fundamental and applications. -N.Y. : Wiley, 1980, p.460.

77. Chernavskii D.S., Frolov E.N., Goldanskii V.T., Kononenko A.A., Rubin A.B. Electron tunneling process and the segment mobility of macromolecules. Proc. Natl. Acad. Sci. USA,1980, v. 77, N 12, p.7218-7221.

78. Chipman D.M., Sharon N. Mechanism of lysozyme action. -Science, 1969, v.165, N 3892, p.454-465.

79. Chou K.C. Low-frequency vibrations of helical structures in protein molecules. Biochem. J., 1983, v.209, II 3, p.573-580.

80. Cohn E.J., Edsall J.T. Proteins, amino acids and peptides.- N.Y. : Reinhold Publishing Corp., 1943, p.370-381.

81. Cooper A. Thermodynamic fluctuations in protein molecules.- Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1976, v.73, N 8, p.2740-2741.

82. Cusack S., Miller A. Determination of the elastic constants of collagen by Brillouin light scattering. J. Mol. Biol., 1979, v.135, N 1, p.39-51.

83. Drablcin D.L. The crystallographic and optical properties of the hemoglobin of man in comparison with those of other species. J. Biol. Chem., 1946, v.164, N 2, p.703-723.

84. Durschlag H., Jaemcke R. Partial specific volume changes of proteins densimetric studies. Biochem. Biophys. Res. Comm., 1982, v. 108, N 3, p.Ю74-Ю79.

85. Einstein J.R., Low B.W. Insulin. Some shrinkage stage of sulfate and citrate crystals. Acta Crystallogr., 1962, v.15, N 1, p.32-34.

86. Engelhardt V.A., Lubimova M.N. Myosin and adenosine triphosphatase. Nature, 1939, v.144, N 3650, p.668-669.

87. Englander S.W. Internal motions in proteins and nucleic acids and their hydrogen exchange properties. Comments. Mol. Cell. Biophys., 1980, v.1, N 1, p.15-28.

88. Panconi В., Peticolas W.L. Simplified force field calculations of the low-frequence motions of the JL-helix. Bio-polymers, 1971, v. 10, U 11, p.2223-2229.

89. Perry J.D. Dynamic viscoelastic properties of macromolecules in dilute solution. J. Polymer. Sci., 1966, part C, IT 15, p.307-316.

90. Plory P.J., Spurr O.K. Melting equilibrium for collagen fibers under stress. Elasticity in the amorphous state. -J. Amer. Chem. Soc., 1961, v.83, N 6, p.1308-1316.

91. Pranks P., Eagland D. The role of solvent interactions in protein conformation. C.R.C. Crit. Rev. Biochem., 1975, v.3, IT 2, p.165-219.

92. Prauenfelder H., Petsko G.A., Tsernoglou D. Temperature-dependent X-ray diffraction as a probe of protein structural dynamics. Hature, 1979, v.280, H 5723, p.558-563.

93. Fujita Y., IToda Y. Effect of hydration on the thermal dena-turation of lysozyme as measured, by differential scanning calorimetry. Bull. Chem. Soc. Japan, 1978, v.51, IT 5,p.1567-1568.

94. Gavish В., Gratton E., Hardy C.J. Adiabatic compressibility of globular proteins. Proc. Hatl. Acad. Sci. USA, 1983, v.80, U 3, p.750-754.

95. Gekko K., Hoguchi II. Compressibility of globular proteins in water at 25°C. J. Phys. Chem., 1979, v.83, ЗУ 21,p.2706-2714.

96. Godfrey J.E., Eisenberg H. The flexibility of low molecular weight double stranded DHA as a function of length. -Biophys. Chem., 1976, v.5, IT 3, p. 285-318.

97. Gurd F.R.N., Rothgeb T,M. Motions in proteins. In: Advan. Protein. Chem. /Eds. Anfinsen C.B., Edsall J.Т., Richards P.M. - N.Y., L.: Acad. Press, 1979, v.33, p.73-165.

98. Haas D.J. Preliminary studies of the denaturation of cross-linked lysozyme crystals. Biophys. J., 1968, v.8, U 5,p.549-555.

99. Harley R., James D., Miller A., White J.M. Phonons and the elastic moduli of collagen and muscle. ilature, 1977,v.267, N 5608, p.285-287.

100. Huber R. Conformational flexibility in protein molecules. nature, 1979, v.280, N 5723, p.538-539.

101. Hurley J., Osei-Gyimah P., Archer S., Sholes C.P., Lerman L.S. Torsional motion and elasticity of deoxyribonucleic acid double helix and its nucleosomal complexes. Biochemistry, 1982, v.21, Ж 20, p.4999-5009.

102. Ю7. Huxley H.E., Kendrew J.C. Discontinuous lattice changes in haemoglobin crystals. Acta Crystallogr., 1953, v.6, И 1, p.76-80.

103. Hvidt S., Hestler F.H.H., Greaser 15.L., Perry J.D. Flexibility of myosin rod determined from dilute solution visco-elastic measurements. Biochemistry, 1982, v.21, Ж 17,p.4064-4073.

104. Ikeda K., Hamaguchi K. The binding of Ж-acetyl-D-glucos-amine to lysozyme. Studies on circular dichroism. J. Biochem., 1969, v.66, Ж 4, p.513-520.

105. Ikeda K., Hamaguchi K. Binding of substrate analogues to subsites D,E and F of hen egg-white lysozyme. J. Biochem. 1976, v.79, Ж 2, p.237-247.

106. Imoto Т., Johnson Ь.Ж., Жог^ А.С.Т., Phillips D.C., Rupley J.A. Vertebrate lysozyme. In: The Enzymes. /Ed. Boyer P.D., 3-d ed. - L.: Acad. Press, 1972, v.7, p.665-868.

107. Imoto Т., Fukuda K., Jagishita K. A study of the native-denatured (Ж^Б) transition in lysozyme. II. Kinetic analysis of protein digestion . J. Biochem., 1976, v.80, Ж 6, p.1313-1324.

108. Itoh Iv., Schimanouchi T. Vibrational frequences and modes of -helix. Biopolymers, 1970, v.9, Ж 4, p.383-399.

109. Jacobson B. On the theory of mechanical vibrations of mac-romolecules; their relation to radiospectra. Arkiv for mat'ematik, Astronomi och fysik, 1947, Bd. 34A, Ж 25, 1. 1-9.

110. Jacobson B. On the adiabatic compressibility of aqueous solutions. Arkiv for kemi, 1950, Bd. 2, Ж 11, 1. 177-210.

111. Karplus M.,McCammon J.A. The internal dynamics of globular proteins, C.R.C. Critical Rev.Biochem., 1981, v.9, Js. 4, p.293-349.

112. Karuch F. Heterogeneity of the binding sites of bovine serum albumin. J. Amer. Chem. Soc., 1950, v.72, If 6, p.2705-2713.

113. Kasvinsky P.J., Madsen Ы.В. Activity of Glycogen phospho-rylase in the crystalline state. J. Biol. Chem., 1976, v.251, N 21, p.6852-6859.

114. Kauzmann W. Some factors in the interpretation of protein denaturation. In: Advan. Protein Chem. /Eds. Anfinsen C.B., Anson M.L., Bailey K., Edsall J.T. - II.Y., L.: Acad. Press, 1959, v.14, p.1-63.

115. Kell D.B. Enzymes as energy "funnels"? ) Trends in Biochem. Sci., 1982, v.7, N 10, p.349.

116. Kelly J. A., Sielecki A.R., Sykes B.D., James IJ.U.G., Phillips D.C. X-ray crystallography of the binding of the bacterial cell wall trisaccharide NAM-bTAG-HAII to lysozyme. Nature, 1979, v.282, N 5741, p.875-878.

117. Kendrew J.C., Rarrich. R.G. The crystal structure of myoglobin. Ill Sperm-whale myoglobin. Proc. Roy. Soc. London. Ser. A., 1957, v.238, II 1214, p.305-324.

118. Klapper M.H. On the nature of the protein interior. Bio-chim. Biophys. Acta, 1971, v.229, N 3, p.557-566.

119. Koshland D.E.Jr. Role of flexibility in the specificity, control and evalution of enzymes. FEBS Lett., 1976,v.62 (Suppl.), p.E47-E52.

120. Kossiakoff A.A., Spenser S.A. Dynamical properties of proteins by hydrogen exchange and neutron diffraction. Acta Crystallogr., Section A, 1981, v.37 (Suppl.), p.C-51.

121. Kotoda S., Takagi K., Uematsu Y., Uematsu I. Viscoelastic properties of poly Of-benzyl-glutamate). III. The film cast in magnetic field. Reports Progr. Polym. Phys. Japan, 1972, v.15, И 6, p.629-632.

122. Kuntz I.D., Kauzmann W. Hydration of proteins and polypeptides. In: Advan. Prot. Ghem. /Eds. Anfinsen C.B., Edsall J.Т., Richards P.M. - 1T.Y., L. : Acad. Press, 1974, v.28, p.239-345.

123. Kurachi K., Sieker L.C., Jensen L.H. Structures of tricli-nic mono- and di-ltf-acetylglucosamine : lysozyme complexes- a crystallographic study. J. Mol. Biol., 1976, v.101, N 1, p.11-24.

124. Linderstr'om-Land K.U., Schellman J.A. Protein structure and enzyme activity. In: The Enzymes /Ed. Boyer P.D.- N.Y.: Acad. Press, 1959, v.1, p.444-510.

125. Levy R.M., Karplus M. Vibrational approach to the dinamics of an <?C-helix. Biopolymers, 1979, v.18, N 10, p.2465-2495.

126. Levy R.M., Parahia D., Karplus M. Molecular dynamics of an 06-helical polypeptide: temperature dependence and deviation from harmonic behavior. Proc. Uatl. Acad. Sci. USA, 1982, v.79, И 4, p.1346-1350.

127. Lumry R. Some aspects of the thermodynamics and mechanism of enzymic catalysis. In: The Enzymes /Ed. Boyer P.D.1..Y.: Acad. Press, 1959, v.1, p.157-232.

128. Makarov A.A., Monaselidze D.R., Esipova 1T.G. Intermolecular interactions of globular proteins in the crystal state. -Int. J. Quantum. Chem., 1979, v.16, N 6, p.437-444.

129. Mason P. The viscoelasticity and structure of fibrous proteins. Kolloid. Zs. and Zs. Polymers, 1967, bd. 218, II 1, 1. 46-52.

130. Matsushima IT., Hikichi K., Tsutsumi А., Кале ко И. X-ray scattering of synthetic poly (cC-amino acid)s in the solidоstate. II. Temperature dependence of the 1.5 A meridional reflection of the -helix. - Polym. J., 1976, v.8, IT 1, p.88-95.

131. Mc Caramon J.A., Gelin B.R., Karplus M., Wolynes P.G. The hinge-bending mode in lysozyme. ITature, 1976, v.262, N 5566, p.325-326.

132. McCaramon J.A., Wolynes P.G. Nonsteady hydrodynamics of biopolymers motions. J, Chem. Phys., 1977, v.66, Ж 4, p.1452-1456.

133. McCammon J.A., Wolynes P.G., Karplus M. Picosecond dynamics of tyrosine side chains in proteins. Biochemistry, 1979, v. 18, IT 6, p.927-942.

134. McCammon J.A., Karplus M. Simulation of protein dynamics. Annual Rev. Phys. Chem., 1980, v.31, p.29-45.

135. McMeekin T.L., Marshall K. Specific volumes of proteins and the relationship to their amino acid contents. Science, 1952, v• 116, IT 2, p.142-143.

136. Millar D.P., Robbins R.J., Zewail A.H. Direct observation of the torsional dynamics of DITA and RITA by picosecond spectroscopy. Proc. ITatl. Acad. Sci. USA, 1980. v.77,1. 10, p.5593-5597.

137. Mizushima-Sugano J., Maeda Т., Miki-IToumura T. Flexural rigidity of singlet microtubules estimated from statistical analysis of their contour lengths and end-to-end distances. Biochim. Biophys. Acta (G), 1983, v.755, N 2, p.257-262.

138. Morozov V.N., Morozova T.Ya. Viscoelastic properties of protein crystals: triclinic crystals of hen egg white lysozyme in different conditions. Biopolymers, 1981, v.20,1. 3, p.451-467.

139. Morozova T.Ya., Morozov V.N. Viscoelasticity of protein crystal as a probe of the mechanical properties of a protein molecules. Hen egg white lysozyme. J. Mol. Biol., 1982, v.157, N 1, p.173-179.

140. Moult J., Yonath A., Traub \Y., Smilansky A., Podjarny A., Rabinovich D., Saya A. The structure of triclinic lysozyme at 2.5 A resolution. J. Mol. Biol., 1976, v. 100, IT 1,p.179-195.

141. Mozzarelli A., Ottonello S., Rossi G.L., Fasella P. Catalytic activity of aspartate aminotransferase in the crystal. Equilibrium and kinetic analysis. Eur. J. Biochem., 1979, v.98, IT 1, p. 173-179.

142. Nagayama K. Two-dimensional ITMR spectroscopy: an application to the study of flexibility of protein molecules. In: Advan. Biophys. / Ed. Kotoni M. - Tokyo: Japan Sci. Soc. Press, Baltimore: Univ. Park Press, 1981, v.14, p.139-204.

143. Nolle A.W. Methods for measuring dynamical mechanical properties of rubber-like materials. J. Applied Physics, 1948, v.19, IT 8, p.753-774.

144. Odajama A., Maeda Т. Calculation of the elastic constants and the lattice energy of polyethylen crystal. J. Polym. Sci., 1966, part С, N 15, p.55-74.

145. Ookubo N., Kamatsubara M., Nakajima H., Wada Y. Infinity dilution viscoelastic properties of poly Qf-benzyl-b-glu-tamate) in m-cresol. Biopolymers, 1976, v. 15, IT 5,p.929-947.

146. Pace C.N., McGrath T. Substrate stabilization of lysozyme to thermal and quanidine hydrochloride denaturation.

147. J. Biol. Chem., 1980, v.255, N 9, p.3862-3865.

148. Parak P., Frolov E.N., Mossbauer R.L., Goldanskii V.I. Dynamics of Metmyoglobin crystals investigated by Nuclear Gamma Resonance Absorption. J. Ivlol. Biol., 1981, v. 145, N 4, p.825-833.

149. Parak F., Knapp E.W., Kucheida D. Protein dynamics. Mossbauer spectroscopy on deoxymyoglobin crystals. J. Mol. Biol., 1982, v. 161, IT 1, p. 177-194.

150. Perkins S.J., Johnson L.N., Machin P.A., Phillips D.C. Crystal structures of hen egg-white lysozyme complexes with Gadolinium (III) and Gadolinium (III)-N-acetyl-D-glucosamine. Biochem. J., 1979, v.181, N 1,p.21-36.

151. Perkins S.J., Johnson L.N., Phillips D.C., Dwek R.A. Thesimultaneous binding of Lanthanide and N-acetylglucosamineinhibitors to hen egg-white lysozyme in solution by H and 1 3

152. С nuclear magnetic resonance. Biochem. J., 1981, v.193, H 2, p.573-588.

153. Perkins S.J., Johnson L.N., Phillips D.C., Dwek R.A. The binding of monosaccharide inhibitors to hen egg-white lysozyme by proton magnetic resonance at 270 MHz and analysis by ring-current calculations. Biochem. J., 1981, v.193,1. N 2, p.553-572.

154. Perutz M.P. The composition and swelling properties of haemoglobin crystals. Trans. Faraday Soc., 1946,v. B42, N 1, p.187-195.

155. Perutz M.P. Structure and function of haemoglobin.

156. A tentative atomic model of horse oxyhaemoglobin. -J. Mol. Biol., 1965, v.13, H 3, p.646-668.

157. Peticolas W.L. Low frequency vibrations and the dynamics of proteins and polypeptides. In: Methods in Enzymology /Eds. Hirs C.H.W., Timasheff S.N. - N.Y., L. : - Acad. Press, 1979, v.61, p.425-458.

158. Peticolas W.L. Mean-square amplitudes of the longitudical vibrations of helical polymers. Biopolymers, 1979,v. 18, IT 4, p.747-755.

159. Praissman Ы., Rupley J.A. Comparison of protein structure in the crystal and in solution. II. Tritium hydrogen exchange of zinc-free and zinc insulin. Biochemistry, 1968, v.7, N 6, p.2431-2445.

160. Praissman M., Rupley J.A. Comparison of protein structure in the crystal and in solution. III. Tritium hydrogen exchange of lysozyme and lysozyme-saccharide complex. -Biochemistry, 1968, v. 7, N 6, p.2446-2450.

161. Ptitsyn O.B. Inter-domain mobility in proteins and its probable functional role. FEBS Lett., 1978, v.93, N 1, p.1-4.

162. Quiocho F.A., Richards P.M. Intermolecular crosslinking of a protein on the crystalline state: carboxypeptidase A.- Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1964, v.52, N 3, p.833-839.

163. Quiocho F.A. Insolubilized single protein crystals. In: Insolubilized enzymes /Eds. Salmona M., Saronio C., Garattini S. - N.Y.: Raven Press, 1974, p.113-122.

164. Richards P.M. The interpretation of protein structures: total volume, group volume, distribution and packing density. J. Mol. Biol., 1974, v.82, II 1, p.1-14.

165. Robinson D.W. An apparatus for the measurement of dynamic mechanical properties of polymers over a wide temperature range. J. Scientif. Instrum., 1955, v.32, II 1, p.2-6.

166. Rossi G.L., Bernhard S.A. Are the structure and function of an enzyme the same in aqueous solution and in the wet crystal? J. Mol. Biol., 1970, v.49, N 1, p.85-91.

167. Rossman M.G., Liljas A. Recognition of structural domains, in globular proteins. J. Mol. Biol., 1974, v.85, H 1, p.177-181.

168. Rupley J.A. Comparison of protein structure in the crystal and in solution. IV. Protein solubility. J. Mol. Biol., 1968, v.35, И 3, p.455-476.

169. Rupley J.A., Gratton E., Careri G. Water and globular proteins. Trends in Biochem. Sci., 1983, v.8, N 1, p.18-22.

170. Sakurada J., Ito Т., Nakamae K. Elastic moduli of the crystal lattices of polymers. J. Polymer. Sci., 1966, part C, 21 15, p.75-91.

171. Shindo II., Cohen J.S., Rupley J.A. Self-association of hen egg-white lysozyme as studies Ъу nuclear magnetic resonance. Biochemistry, 1977, v. 16, IT 17, p.3879-3S92.

172. Sluyterman L.A.E., De Graf M.J.M, The activity of papain in the crystalline state. Biochim, Biophys. Acta, 1969, v.171, IT 2, p.277-287.

173. Steinrauf L.K. Preliminary X-ray data for some new crystalline forms of J5-lactoglobulin and hen egg-white lysozyme. Acta Crystallogr., 1959, v. 12, IT 1, p.77-79.

174. Stuhrman II.B. Comparison of the three basic scattering functions of myoglobin in solution with those from the known structure in crystalline state. J. Mol. Biol.* 1973, v.77, IT 3, p.363-369.

175. Suezaki Y., Go IT. Breathing mode of conformational fluctuations in globular proteins. Int. J. Peptide Protein Res., 1975, v.7, IT 4, p.333-334.

176. Suezaki Y., GoIT. Fluctuations and mechanical strength of cC-helixes of polyglycine and poly (L-alanine). Biopoly-mers, 1976, v.15, IT 11, p.2137-2153.

177. Svedberg Т., Rinde H. The ultracentrifuge, a new instrument for the determination of size and distribution of sizeof particle in a microscopic colloids. J. Amer. Chem. Soc., 1924, v.46, N 11, p.2677-2693.

178. ТакеЬауазМ Т., Horita Y., Oosawa F. Electronmicroscopic investigation of the flexibility of F-actin. Biochim. Biophys. Acta, 1977, v.492, Ы 2, p.357-363.

179. Takizawa Т., Miyoshi Y., Saito H. Molecular motion in crystalline lysozyme. Polymer. J., 1974, v.6, N 2, p.85-93.

180. Tasumi M., Takeuchi H., Ataka S., Dwivedi A.M., Krimm S. Normal vibrations of protein: glucagon. Biopolymers, 1982, v.21, N 3, p.711-714.

181. Timchenko A.A., Denesyuk A.J., Fedorov B.A., Dolgikh D.A., Ptitsin O.B. Comparison of globular protein structure in crystal and in solution by X-ray diffuse scattering. -Stud. Biophys., 1980, v.79, p.141-142.

182. Trevan M.D. Immobilized enzymes: an introd. and applicat. in biothechnology. Chichester ets.: Wiley, 1980, 138 p.

183. Tsuboi M., Hakanishi M. Overall and localised fluctuation in the structure of a protein molecule. In: Advan. Biophys. /Ed. PCotani M. - Tokyo: Japan Sci. Soc. Press, Baltimore: Univer. Park Press, 1979, v.12, p.101-130.

184. Tuchsen E., Ottesen M. Kinetic properties of subtilisin type Carlsberg in the crystalline state. Carlsberg Res. Commun., 1977, v.42, N 5, p.407-420.

185. Utiyama H., Sakato K., Ikehara K., Setsuiye T., Kurata M. Flexibility of tropocollagen from sedimentation and viscosity. Biopolymers, 1973, v. 12, IT 1, p. 53-64.

186. Vencentelli J., Looze V., Leonis J. A comparative study of the termal denaturation parameters of lysozyme in the dissolved and crystalline states. Biochim. Biophys. Acta, 1976, v.427, IT 1, p.38-43.

187. Wagner G., Wiithrich K, Sequential resonance assignments in-jprotein IT nuclear magnetic resonance spectra. Basic pancreatic tripsin inhibitor. J. Mol. Biol., 1982, v. 155, N 3, p.347-366.

188. Watermaxm H.A. The effect of crystallization and orientation on the dynamical mechanical properties of some polymers. Kolloid Zs. and Zs. fur Polym., 1964, Bd. 196,1. 1, 1. 18-27.

189. Weber G. Energetic of ligand binding to proteins. In: Advan. Protein Chem. /Eds. Anfinsen C.B., Edsall J.T., Richards F.M. - IT.Y. etc.: Acad. Press, 1975, -v.29,p.1-83.

190. Weber H.G., Schildknecht J., Lutz R.A., Kesselring P. Determination of binding parameters from Scatchard plots. Theoretical and practical considerations. Eur. J. Biochem., 1974, v. 42, IT 2, p.475-481.

191. Welch G.R., Somogyi В., Damjanovich S. The role of protein fluctuations in enzyme action: a review. Progr. Biophys. Mol. Biol., 1982, v.39, IT 2, p. 109-146.

192. Wodak Sh.J., Janin J. Location of structural domains in proteins. Biochemistry, 1981, v.20, IT 23, p.6544-6552.

193. Woodward C., Simo I., Tuchsen E. Hydrogen exchange andthe dynamic structure of proteins. Mol. Cellul. Biochem., 1982, v.48, IT 3, p.135-160.

194. Yonath A., Podjarny A., Honig В., Sielecki A., Traub W. Crystallographic studies of protein denaturation and re-naturation. 2. Sodium dodecyl sulfate induced structural changes in triclinic lysozyme. Biochemistry, 1977, v.16, IT 7, p.1418-1424.

195. Yonetani Т., Theorell H. Crystallization of binary and ternary complexes of horse liver alcohol dehydrogenase with DP1TH and DP1TH and isobutyramide. Arch. Biochem. Biophys., 1963, v. 100, IT 3, p.554-556.

196. Хочу с благодарностью отметить атмосферу теплоты и доброжелательности в лаборатории, которая существенно способствовала успешному выполнению работы.