Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

Возрастная динамика микробиоценоза желудочно-кишечного тракта цыплят на фоне применения растительного энтеросорбента ЭБК-2

ВАК РФ 06.02.02, Кормление сельскохозяйственных животных и технология кормов

Автореферат диссертации по теме "Возрастная динамика микробиоценоза желудочно-кишечного тракта цыплят на фоне применения растительного энтеросорбента ЭБК-2"

На правах рукописи

СЧИСЛЕНКО СВЕТЛАНА АНАТОЛЬЕВНА

ВОЗРАСТНАЯ ДИНАМИКА МИКРОБИОЦЕНОЗА ЖЕЛУДОЧНО-КИШЕЧНОГО ТРАКТА ЦЫПЛЯТ НА ФОНЕ ПРИМЕНЕНИЯ РАСТИТЕЛЬНОГО ЭНТЕРОСОРБЕНТА ЭБК-2

06.02.02 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ

на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

г ч м^я 2013

Омск-2013

005540465

005540465

Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Красноярский государственный аграрный университет»

Научный руководитель

Ковальчук Наталья Михайловна,

доктор ветеринарных наук, профессор

Официальные оппоненты:

Плешакова Валентина Ивановна,

доктор ветеринарных наук, профессор, заведующая кафедрой ветеринарной микробиологии, инфекционных и инвазионных болезней ФГБОУ ВПО ОмГАУ им. П.А.Столыпина

Гнездилова Лариса Александровна,

доктор ветеринарных наук, профессор, профессор кафедры диагностики болезней и терапии животных МГАВМиБ им. К.И. Скрябина

Ведущая организация:

ФГБОУ ВПО «Пермская государственная сельскохозяйственная академия им. Д.Н. Прянишникова»

Защита диссертации состоится «19» декабря 2013 года в 13-00 часов на заседании диссертационного совета Д 220.050.03 при ФГБОУ ВПО ОмГАУ им. П.А.Столыпина по адресу: 644008 г. Омск, Институтская площадь, 2, тел. (3812) 24-15-35, факс (3812) 24-39-63, e-mail: lescheva@list.ru

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБОУ ВПО ОмГАУ им. П.А.Столыпина.

Автореферат разослан

« (Ьу>

ноября 2013 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, канд. ветеринар, наук, доцент

Н.А. Лещёва

1 ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. За последние два десятилетия в промышленном птицеводстве приобрели актуальность проблемы, связанные со снижением колонизационной резистентности слизистой оболочки кишечника и факторов естественной резистентности, ответственных за под держание физиологического статуса организма птицы. Широкое применение антибиотиков, несбалансированное кормление и технологический стресс обуславливают нарушение сложившегося микробного равновесия и провоцируют развитие дисбактериоза кишечника (Выдрин А.Н., 1998; Бовкун Г.Ф., 2003; Берсенева А.Б., Чупахина Е.В., 2004; Деблик А.Г., 2005; Field М„ 1979; Roberfroid М.В., 2000).

Степень разработанности. Одним из перспективных направлений в решении проблемы лечения и профилактики желудочно-кишечных инфекций, коррекции микробиоценоза желудочно-кишечного тракта и повышения сохранности молодняка сельскохозяйственных животных и птицы является применение энтеросорбентов и кормовых добавок, использование которых повышает уровень колонизационной резистентности слизистой оболочки кишечника за счет стимуляции размножения молочнокислых бактерий и бифидобактерий (Хаитов P.M., Пинегин Б.В., 2000; Субботин В.В., Сидоров М.А., 2000; Митрохин С.Д., 2004; Субботин В.В., 2009; Панин А.Н., Малик Н.И., 2009, 2011; Плешакова В.И., Шмидт Г.О., 2012; Panda А.К., Morkunas М„ 2001).

Во всем мире, в том числе и России, проводится активная разработка и внедрение безопасных эффективных энтеросорбентов и пробиотических препаратов, как альтернативы антибиотикам (A.M. Степанова, 2011). Роль энтеросорбентов сводится к детоксикации организма и способности сорбировать в кишечнике токсические вещества, продукты жизнедеятельности микробов и выведению их из организма, при этом сами сорбенты не содержат компоненты, которые бы всасывались в кишечнике и метаболизировались. Природные растительные сорбенты, обладающие уникальными ионообменными и сорбционными свойствами, являются объектами современных исследований и актуальны для внедрения в ветеринарную практику (Мащенко И.С., 1983; Давыдов В.И., Белякова H.A., 1991; Коптев В.Ю. и др. 1998; Раицкая В.И., 2002; Гунько В.М. и др., Донкова Н.В., 2004; Веприкова Е.В., Щипко М.Л., Кузнецова С.А, Кузнецов Б.Н., 2005; Тараканов Б.В., 2005,2007)

Основой пробиотиков служат либо микроорганизмы, представляющие нормальную микрофлору, либо нехарактерные для нормофлоры сапрофиты, способные вытеснять патогенные микроорганизмы из просвета кишечника (Сидоров М.А. с соавт., 2000; Шевелева С.А. с соавт., 2002; Павлова Н.В., Лебедева И.А., 2007; Ноздрин Г.А., Соколов В.Д., Андреева H.J1. и др., 2009;

Малик Н.И. и др. 2011, Клетикова Л.В., 2012; Kushal et al., 2000; O'Sullivan D.J., 2001; Oggioni M.R., 2003; Ouwehand A.C., 2003; Bernardeau M., 2009).

Цель исследований установить этапы формирования микробиоценоза кишечника цыплят и определить естественную резистентность птицы на фоне применения растительного энтеросорбента ЭБК-2 в комплексе с пробиотиком Наринэ.

Для достижения цели были поставлены задачи:

1. изучить этиологическую структуру острых кишечных инфекций у цыплят в условиях птицеводческих хозяйств;

2. изучить биологические свойства выделенных возбудителей микроорганизмов;

3. установить структуру микробиоценоза кишечника цыплят с диарейным симптомокомплексом и лечебно-профилактическую эффективность применения растительного энтеросорбента ЭБК-2 и пробиотика Наринэ;

4. оценить морфологический состав крови, установить динамику биологических показателей естественной резистентности организма цыплят (общий белок, БАСК, ЛАСК) и определить сохранность цыплят на фоне комплексного применения растительного энтеросорбента ЭБК-2 и Наринэ.

Научная новизна. Изучены этиологически значимые ассоциации микроорганизмов семейства Enterobacteriaceae, определена роль острых желудочно-кишечных инфекций в общей бактериальной патологии птиц.

Изучено формирование и становление микробиоценоза кишечника цыплят при воздействии растительного энтеросорбента ЭБК-2 и пробиотика Наринэ.

Определен видовой состав и серологический профиль этиологически значимых условно-патогенных бактерий у птиц.

Установлена коррекция показателей естественной резистентности организма птиц на фоне применения растительного энтеросорбента ЭБК-2 и пробиотика Наринэ.

Теоретическая и практическая значимость работы. Полученные данные дополняют сведения по научному обоснованию применения растительных энтеросорбентов для профилактики и лечения острых желудочно-кишечных инфекций.

Доказана эффективность использования растительного энтеросорбента ЭБК-2 в комплексе с пробиотиком Наринэ при коррекции микробиоценоза кишечника цыплят, повышения уровня естественной резистентности организма и увеличения сохранности птицепоголовья.

Апробирована и предложена схема коррекции микрофлоры желудочно-кишечного тракта цыплят с диарейным симптомокомплексом при использовани растительного энтеросорбента ЭБК-2 и пробиотика Наринэ и обосновано повышение сохранности птиц при ассоциированных желудочно-кишечных инфекциях.

Разработаны научно-практические рекомендации «Пути повышения сохранности птиц при ассоциированных желудочно-кишечных инфекциях» (утв. на научно-техническом совете КрасГАУ, протокол № 1 от 11.12.2012).

Методология и методы исследований. Работа выполнена в период с 2007 по 2012 гг. на кафедре эпизоотологии, микробиологии, паразитологии и ветеринарно-санитарной экспертизы ИПБиВМ, лаборатории НИИЦ ФГБОУ ВПО КрасГАУ. Экспериментальные исследования по определению профилактической эффективности растительного энтеросорбента ЭБК-2 и пробиотика Наринэ проведены на базе птицефабрики СПХ ЗАО «Владимировское» Назаровского района Красноярского края.

При изучении эпизоотической ситуации по острым кишечным инфекциям птицепоголовья в птицеводческих хозяйствах Красноярского края проанализированы отчетные документы КГКУ «Красноярская ветеринарная лаборатория» за период с 2000 по 2011 гг., а так же результаты собственных исследований.

Объектом исследований являлись цыплята кросса «Родонит-2» различных возрастных групп с момента вывода до 30-ти сут. возраста. В экспериментах использовали цыплят, подобранных по принципу аналогов, содержащихся в равных условиях.

Для коррекции микробиоценоза кишечника цыплят, повышения продуктивных качеств и сохранности птицепоголовья в раннем постнатальном онтогенезе использовали растительный энтеросорбент ЭБК-2 (Патент RU 2389498, 2009) и пробиотик Наринэ (бактерий Lactobacillus acidophilus штамм ЕР 317/402).

При проведении экспериментальной части работы по изучению растительного энтеросорбента ЭБК-2 были сформированы три группы по 100 голов. Схема исследований представлена в таблице 1.

Таблица 1 - Схема исследований

Группа (кол-во голов) Рацион

Контрольная (100) Основной

1 опытная (100) Основной + ЭБК-2 в дозе 0,2 г/кг живой массы один раз в сут. в течение 30-ти суток

2 опытная (100) Основной + ЭБК-2 в дозе 0,2 г/кг + Наринэ в дозе 0,1 г/кг живой массы один раз в сут. в течение 30-ти суток

Материалом исследований служили пробы фекалий цыплят опытных и контрольной групп, качественный состав микроорганизмов кишечника птицы определяли лабораторными методами. Количество микроорганизмов в 1 г рассчитывали путем высева 0,1 мл различных разведений исследуемого материала на чашки Петри с плотными дифференциально-диагностическими

питательными средами. Материал для исследований получали в утренние часы до кормления.

На основании морфологических, культуральных и биохимических свойств микроорганизмов определяли их видовую принадлежность, используя «Определитель бактерий Берджи» (1997) и «Определитель зоопатогенных микроорганизмов» (Сидоров М. А. и др., 1995).

Для изучения вирулентных свойств выделенных микроорганизмов проводили заражение белых мышей массой 15-20 г путем внутрибрюшинного введения 0,5 мл микробной взвеси в дозе 0,5х109 м.т./мл.

Проведено бактериологическое исследование растительных кормов (п=1010) на соответствие санитарным нормам, допустимым при кормлении животных и птиц, а так же кормов растительного производства (п=35)

Возрастную динамику становления микробиоценоза желудочно-кишечного тракта цыплят изучали на 1-, 5-, 10-, 15-, 20-, 25-, 30-е сут., используя методические указания «Выделение и идентификация условно-патогенных энтеробактерий и сальмонелл при острых кишечных заболеваниях молодняка сельскохозяйственных животных» (Блохина И. Н., Воронин Е. С. и др. - 1991); «Диагностика колибактериоза животных и птицы» (1991), «Диагностика смешанной кишечной инфекции», (1991) с использованием коммерческих сред и тест-систем СИБ производства ФГУП «НПО Микроген» МЗ РФ, по методическим указаниям, разработанным Л.С.Коврук с соавторами «Ускоренная индикация морганелл, сальмонелл и энтеропатогенных эшерихий с адгезивными антигенами в патологическом материале, кормах, объектах внешней среды в реакции коагглютинации» (2001).

Для изучения действия растительного энтеросорбента ЭБК-2 и пробиотика Наринэ на физиологические показатели роста и развития цыплят в динамике, проводили взвешивание, определяли среднесуточный прирост и скорость роста (Броди, 1945).

Для исследования морфологических и биохимических показателей кровь получали при диагностическом убое цыплят опытных и контрольной групп. Все манипуляции с птицей производили согласно Европейской конвенции о защите позвоночных животных, используемых для экспериментов или иных научных целей (2003)

Морфологические исследования крови включали определение количества эритроцитов (1х1012/л) и лейкоцитов (1х109/л) с использованием камеры Горяева гемоглобин определяли по метод}' Сали, общий белок крови рефрактометрическим методом по Филипповичу Ю.В. (1975).

Иммунологические исследования включали определение лизоцимной активности сыворотки крови (Дорофейчук А.Г., 1968). Бактерицидную активность сыворотки крови определяли по Смирновой О. В. и Кузьминой А. Т. (1966) в модификации Максимюк Н. Н., Телешевской JI. Я. (1995).

Статистическую обработку результатов, полученных в ходе экспериментов и наблюдений, проводили при помощи компьютерной программы Microsoft Excel 2003 и пакета программ Statistica.

Выражаем большую благодарность сотрудникам КГКУ «Красноярская ветеринарная лаборатория» за любезно предоставленные архивные документы, за консультативную помощь в проведении исследований сотрудникам кафедры эпизоотологии, микробиологии, паразитологии и ветеринарно-санитарной экспертизы и НИИЦ КрасГАУ.

Основные положения, выносимые на защиту:

•этиологическая струюура острых кишечных инфекций у цыплят в условиях птицеводческих хозяйств Красноярского края;

• коррекция микробиоценоза кишечника цыплят с диарейным симптомкомплексом при использовани растительного энтеросорбента ЭБК-2 и пробиотика Наринэ

•показатели морфологического состава крови, динамика иммунологических показателей естественной резистентности организма и сохранность цыплят на фоне применения растительного энтеросорбента ЭБК-2 и пробиотика Наринэ.

Степепь достоверности и апробация полученных результатов. Данные проведенных исследований являются частью комплексных исследований в рамках программы фундаментальных и приоритетных направлений НИР кафедры эпизоотологии, микробиологии, паразитологии и ветеринарно-санитарной экспертиза ИПБиВМ ФГБОУ ВПО КрасГАУ: «Оценка лечебно-профилактической эффективности препаратов при массовых болезнях продуктивных животных и птиц», что предусматривает изыскание и испытание эффективных экологически безопасных препаратов для лечения и профилактики массовых инфекционных болезней животных и птиц.

Материалы диссертационной работы используются в учебном процессе кафедр: эпизоотологии, микробиологии, паразитологии и ветеринарно-санитарной экспертизы; физиологии и зоогигиены животных; разведения, генетики и биотехнологии с.-х. животных ИПБиВМ ФГБОУ ВПО КрасГАУ; морфологии и физиологии животных ФГБОУ ВПО ХГУ им. Н.Ф. Катанова; ветеринарной микробиологии, инфекционных и инвазионных болезней ФГБОУ ВПО им. П.А. Столыпина.

Результаты исследований внедрены в практическую работу ветеринарной службы СПХ ЗАО птицефабрики «Владимировская» Назаровского района Красноярского края.

Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на научных конференциях: Всероссийской очно-заочной научно-практической и методической конференции с Мезвдународным участием «Инновации в научно практической деятельности» (Красноярск, 2010); VIII Международной научно-практической конференции «Актуальные и новые направления

сельскохозяйственной науки, посвященной 75-летию со дня рождения ученого-микробиолога и агроэколога А.Т. Фарниева. (Владикавказ, 2012), III Всероссийской научно-практической конференции с Международным участием «Современные тенденции развития агропромышленного комплекса Сибири» (Абакан, 2012); 10-ой Международной телеконференции: Актуальные проблемы современной науки (Томск, 2013); Международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы научной и практической ветеринарной медицины: посвященные памяти заслуженного деятеля науки РФ, доктора ветеринарых наук, профессора Сивкова Геннадия Сергеевича» (Тюмень, 2013).

Публикации результатов исследования. По теме диссертации опубликовано 12 работ, в том числе три в изданиях, регламентированных ВАК Министерства образования и науки РФ, научно-практические рекомендации - 1.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 131 странице компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения, выводов, практических предложений, списка литературы и приложения. Работа иллюстрирована 26 рисунками и 12 таблицами. Список использованной литературы включает 226 наименований, в том числе 53 иностранных авторов.

2 ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ 2.1 Этиологическая структура возбудителей острых желудочно-

кишечных инфекций цыплят в условиях птицеводческих хозяйств Красноярского края

На основе архивных документов КГКУ «Красноярская ветеринарная лаборатория» и результатов собственных исследований проведен анализ регистрации острых желудочно-кишечных инфекций птиц в птицеводческих хозяйствах Красноярского края за 2000-2011 гг. Изучена этиологическая структура острых кишечных инфекций циркулирующих среди птицепоголовья, микробиологическая оценка кормов, используемых на птицефабриках.

Птицеводческая отрасль является быстро развивающейся индустрией, с высокой тенденцией увеличения поголовья птиц на птицефабриках Красноярского края, на территории которого функционирует 10 птицеводческих хозяйств с общим поголовьем 7920000 птицы, из них 6 птицефабрик яичного направления. Продуктивность яичных пород кур составляет 320-330 яиц на среднюю несушку в год.

Все поголовье птицефабрик края благополучно по острым зооантропонозным болезням птиц. Сохранность составляет 96%. В каждом хозяйстве разработана и строго соблюдается схема вакцинопротифилактики против: болезни Марека, болезни Гамборо, ИБК, НБ, ИЛТ, ССЯ-76, реовирусного теносиновита, микоплазмоза, сальмонеллеза с учетом

эпизоотической ситуации. Специфическая профилактика инфекционных болезней осуществляется с применением вакцин как отечественного производства, так и импортного. В обследованных птицеводческих хозяйствах желудочно-кишечные болезни бактериальной этиологии охватывают от 50 до 90% поголовья цыплят в возрасте от 1 до 5 суток.

При определении частоты регистрации энтеропатогенных бактерий среди штаммов, выделенных на птицефабриках, наиболее значимыми оказались следующих микроорганизмы: Escherichia coli (64,8%), Salmonella spp. (26,1%), Klebsiella pneumonia (3,8%), Citrobacter freundii (2,1%), Staphylococcus aureus (1,9%), Proteus vulgaris (0,8%,) Pseudomonas aeruginosa (0,5%), их ассоциации: Escherihia coli + Proteus vulgaris+ Pseudomonas aeruginosa (35,4%), Escherihia coli + Staphylococcus aureus (29,2%), Escherihia coli + Klebsiella pneumonia (25,6%), Escherihia coli + Citrobacter freundii (9,8%).

При патологоанатомическом вскрытии трупов цыплят наблюдали точечные кровоизлияния под эпикардом и эндокарде, клапанах сердца, инъекцию сосудов головного мозга, красную гепатизацию легких, гиперемию слизистых оболочек тонкого и толстого кишечника, набухшие с кровоизлияниями лимфатические узлы.

Бактериологическому исследованию подвергнуты все биоматериалы, полученные от павших цыплят и отходов инкубации. При бактериологическом исследовании внутренних органов выделены 263 культуры микроорганизмов.

Ведущее место по частоте встречаемости возбудителей занимают патогенные культуры E.coli, которые являются одним из серьезных факторов, сдерживающих максимальное проявление потенциальных резервов отрасли, снижают резистентность организма и являются основной причиной массовой гибели цыплят.

При бактериологическом исследовании патологического материала процентное содержание E.coli в трупах птицы распределилось следующим образом: в слепых отростках - 51,8%; селезенке - 20,3%; головном мозге -15,1%; костном мозге - 9,2% и печени - 3,6%. Вскрытие отходов инкубации показало, что имеют место: закупорка клоаки - 48%; подкожные отеки в области брюшной полости - 19%; бедер - 10%; почек - 8,3%; печени - 7,7%; легких - 6,5% и на поверхности кожи 3,5%.

При бактериологическом исследовании трупов цыплят выделяли энтеропатогенные серотипы Ecoli, которые в процентном соотношении располагались следующим образом: 01- 29,41%; 078 - 14,23%; 02 - 10,58%; 04 -9,66%; 08 - 8,67%; 055 - 4,6%; 0119 - 3,24%; 0111 - 1,49%. Из патологического материала отходов инкубации содержание E.coli незначительно отличалось: Ol - 39,86%; 02 - 13,14%; 04 - 11,43%; 078 - 9,86%; 0111 - 8,29%; 08 - 7,0%.

Среди энтеропатогенных штаммов эшерихий в 2009 году был выделен серотип 0157:Н7, который в настоящее время отнесен к энтерогемморагической группе диареегенных эшерихий.

У вьщеленных культур микроорганизмов установлена высокая антибиотикоустойчивость к пенициллину, линкомицину, неомицину, мономицину и левомицетину, слабая к тетрациклину, эритромицину и полимиксину.

При бактериолопгческом исследовании кормов растительного и животного происхождения получены следующие результаты: из 1010 проб корма растительного происхождения по показателю КМАФАнМ не соответствовало нормативным показателям - 378 проб, в данных пробах выделены патогенные культуры кишечной палочки, энтерококков, протея, сальмонелл, синегнойной палочки и анаэробы, что составило 37,4 % от исследованных проб. Из 324 проб кормов животного происхождения по показателю КМАФАнМ не соответствовало нормам - 35 проб (10,8 %), в которых были выделены патогенные культуры.

2.2 Коррекция микробиоцеиоза кишечника цыплят с диарейным симптомкомплексом при использовани растительного энтеросорбепта ЭБК-2 и пробиотика Наринэ

Из проб фекалий птиц с диарейным симптомокомплексом были выделены следующие культуры: Staphylococcus aureus, Enterococcus faecalis, Proteus vulgaris, Klebsiella pneumonia, Citrobacterfreundii, E. coli.

Из шести выделенных культур микроорганизмов были патогенными для белых мышей в дозе 0,5x109 м.т./мл E.coli, Klebsiella pneumonia, Citrobacter freundii. Среди ассоциированных культур высокопатогенными оказались Escherihia coli и Citrobacter freundii, которые вызывали гибель белых мышей (50%).

Для проведения экспериментальных исследований было сформировано три группы цыплят с клиническими признаками диарейного симптомокомплекса.

Первая опытная группа получала дополнительно к основному рациону растительный энтеросорбент ЭБК-2 в дозе 0,2 г/кг живой массы один раз в сутки, начиная с трех сут. возраста. Цыплята второй опытной группы получали основной рацион с добавлением растительного энтеросорбента ЭБК-2 в дозе 0,2 г/кг в комплексе с пробиотиком Наринэ в дозе 0,1 г/кг живой массы один раз в сут., начиная с трех сут. возраста. Контрольная группа получала основной рацион.

При диарейном симптомокомплексе формирование микрофлоры кишечного тракта цыплят начиналось с обильного заселения БГКП (5,06 log КОЕ/г) количество которых нарастало с возрастом на фоне снижения бифидо- с 6,92 до

5,05 log КОЕ/г и молочнокислых бактерий с 5,06 до 4,97 log КОЕ/г соответственно.

При введении в рацион растительного энтеросорбента ЭБК-2 цыплятам первой опытной группе отмечали, что количество молочнокислых бактерий (5,13 log КОЕ/г) и бифидобактерий (7,82 log КОЕ/г) увеличилось до 5,48 log КОЕ/г и 7,97 log КОЕ/г соответственно.

При введении в рацион растительного энтеросорбента ЭБК-2 и пробиотика Наринэ наблюдали увеличение молочнокислых бактерий (5,59 log КОЕ/г) и бифидобактерий (8,15 log КОЕ/г) на фоне снижения количества условно-патогенных микроорганизмов в кишечнике цыплят.

В контрольной группе на 30-е сут. отмечали рост БГКП, который продолжал увеличиваться, при этом выделяли патогенные культуры E.coli (8,41 log КОЕ/г), Citrobacter fretmdii (4,87 log КОЕ/г).

В ходе эксперимента у цыплят опытных групп 15 сут. возраста и старше с диарейным симптомокомплексом, в рацион которым вводили растительный энтеросорбент ЭБК-2 и пробиотик Наринэ, отмечали постепенное улучшение состава микробиоценоза, а к 30-ти сут. возрасту - количественные и качественные показатели микрофлоры кишечника приблизились к данным клинически здоровых птиц.

2.3 Физиологические показатели цыплят при внесении в рацион растительного энтеросорбента ЭБК-2 и пробнотика Наринэ

В период проведения экспериментальных исследований учитывали морфологические показатели крови цыплят в 15-, 30- сут. возрасте, а так же некоторые показатели естественной резистентости (общий белок, ЛАСК, БАСК) которые представлены в таблице 3.

Морфологические исследования проб крови цыплят, проведенные в 15-ти и 30-ти сут. возрасте, свидетельствуют о том, что введение в рацион растительного энтеросорбента ЭБК-2 и пробиотика Наринэ оказывает положительное влияние на показатели крови.

Наиболее интенсивным было увеличение у цыплят опытных групп количества эритроцитов и гемоглобина по сравнению с контролем, которые были выше в среднем на 11,5 и 14,1 % соответственно.

Количество лейкоцитов в крови цыплят опытных групп находилось в пределах максимальных физиологических параметров. На 30-е сут. этот показатель оставался стабильно высоким в опытных группах.

Таблица 3 - Морфологические показатели крови цыплят

Показатели Группа

1-ая опытная Растительный энтеросорбент ЭБК-2 2-ая опытная Растительный энтеросорбент ЭБК-2 + пробиотик Наринэ Контрольная

(М±ш) (М±т) (М±т)

15-сут.

Гемоглобин, г/л 94,98±0,78* 102,09±053* 89,88±0,88

Эритроциты, 10|2/л 3,01 ±0,05 3,27±0,02* 2,91±0,06

Лейкоциты, 109/л 29,95±0,30 30,94±0,12 29,14±0,32

Общий белок, г/л 51,23±0,32** 52,78±0,25* 48,43±0,28

ЛАСК, % 7,12 7,64 5,93

БАСК, % 28,16 37,4 26,4

30-сут.

Гемоглобин, г/л 102,53±0,53* 115,49±0,83* 96,88±0,49

Эритроциты, 10|2/л 3,37±0,03* 3,55±0,03* 3,13±0,04

Лейкоциты, 107л 30,56±0,13 30,98±0,12 29,77±0,27

Общин белок, г/л 54,62±0,36 57,93±0,36* 53,42±0,41

ЛАСК, % 7,98 8,09 6,23

БАСК, % 30,8 39,8 29,8

Уровень достоверности по отношению к контролю: *Р<0,01, **Р<0,05

Биохимические показатели крови цыплят опытных групп, получавших растительный энтерсорбент ЭБК-2 и пробиотик Наринэ, характеризовались увеличением содержания общего белка (57,93 г/л.) в среднем на 8,5% по отношению к контролю, что свидетельствовало об активизации неспецифических факторов резистентности.

Увеличение показателей в сыворотке крови ЛАСК, БАСК свидетельствует о повышении неспецифических гуморальных факторов иммунитета. Введение в рацион цыплятам 2-ой опытной группы растительного энтеросорбента ЭБК-2 и пробиотика Наринэ способствовало максимальному повышению показателей БАСК - 39,8% и ЛАСК - 8,09% на 30-е сут., тогда как в контрольной группе эти показатели составили 29,8% и 6,23% соответственно.

2.4 Интенсивность роста и сохранность цыплят при применении растительного энтеросорбента ЭБК-2 и пробиотика Наринэ

С целью определения производственных показателей проводили взвешивание птицы один раз в 15 суток, в период проведения эксперимента учитывали сохранность птицепоголовья. По окончании опыта рассчитали среднесуточный абсолютный и относительный привес цыплят.

Результаты исследований по изучению интенсивности роста и сохранности цыплят при коррекции растительным энтеросорбентом ЭБК-2 и пробиотиком Наринэ представлены в таблице 4.

Таблица 4 - Влияние растительного энтеросорбента ЭБК-2 и пробиотика Наринэ на производственные показатели, (п=300)_

Группа

Масса цыплят, г возраст, сут. 1-ая опытная Растительный энтеросорбент ЭБК-2 2-ая опытная Растительный энтеросорбент ЭБК-2 + пробиотик Наринэ контрольная

1 33,57±0,26 33,61±0,25 33,41±0,24

15 134,81±0,38* 136,31±0,39* 129,15±0,30

30 315,65±1,05* 321,48±1,35* 288,12±1,87

Среднесуточный абсолютный 9,73 9,93 8,78

привес, г

Среднесуточный относительный 6,6 5,4 5,28

привес, %

% сохранности 97% 98% 96%

Уровень достоверности по отношению к контролю: *Р<0,01

Изменение живой массы цыплят на 15-е сут. по сравнению с контролем увеличилось на 5,4%, на 30-е сут. данный показатель превысил контроль на 10,4%. Увеличение живой массы цыплят в ходе эксперимента в опытной группе составило 89,5%, тогда как в контроле этот показатель увеличился на 73,9%.

Максимальная сохранность - 98% была получена во второй опытной группе, где в рацион включали растительный энтеросорбент ЭБК-2 и пробиотик Наринэ, тогда как в контроле она составила — 96%.

3 ВЫВОДЫ

1. Этиологическая структура острых кишечных инфекций у птиц в условиях птицеводческих хозяйств Красноярского края представлена следующими микроорганизмами: Escherichia coli (64,8%), Salmonella spp.

(26,1%), Klebsiella pneumonia (3,8%), Citrobacter freundii (2,1%), Staphylococcus aureus (1,9%), Proteus vulgaris (0,8%), Pseudomonas aeruginosa (0,5%), их ассоциации: Escherihia coli + Proteus vulgaris+ Pseudomonas aeruginosa (35,4%), Escherihia coli + Staphylococcus aureus (29,2%), Escherihia coli + Klebsiella pneumonia (25,6%), Escherihia coli + Citrobacter freundii (9,8%).

2. Антигенная вариабельность Ecoli представлена серотипами, выделенными от трупов цыплят: 01- 29,41%; 078 - 14,23%; 02 - 10,58%; 04 -9,66%; 08 - 8,67%; 055 - 4,6%; 0119 - 3,24%; Olli - 1,49%. В патологическом материале отходов инкубации содержание Ecoli незначительно отличалось: серотип Ol составил 39,86%; 02 - 13,14%; 04 - 11,43%; 078 - 9,86%; Olli -8,29%; 08-7,0%.

3.Из энтеропатогенных штаммов Escherichia coli выделен серотип 0157:Н7, относящийся к энтерогемморагической группе диареегенных эшерихий, представляющий эпидемиологическую опасность и вызывающий геморрагический энтероколит, гемолитико-уремический синдром у животных, птиц и людей.

4. При диарейном симптомокомплексе формирование микрофлоры кишечного тракта цыплят сопровождалось обильным заселением БГКП (5,06 log КОЕ/г), количество которых нарастало с возрастом на фоне снижения бифидо-(5,05 log КОЕ/г) и молочнокислых бактерий (4,97 log КОЕ/г).

5. Введение в рацион растительного энтеросорбента ЭБК-2 (0,2 г/кг живой массы) и пробиотика Наринэ (ОД г/кг живой массы) привело к увеличению количества молочнокислых бактерий (5,56 log КОЕ/г), бифидобактерий (8,15 log КОЕ/г) и резкому снижению количества условно-патогенных микроорганизмов в кишечнике цыплят.

6. Введение в рацион цыплятам растительного энтеросорбента ЭБК-2 и пробиотика Наринэ сопровождается повышением показателей БАСК — 39,8% и ЛАСК - 8,09% на 30-е сутки, тогда как в контрольной группе они составили 29,8% и 6,23% соответственно. Показатели крови у цыплят характеризовались увеличением количества эритроцитов (3,55х1012/л), лейкоцитов (30,98х109/л) и содержанием гемоглобина (115,49 г/л).

7. Применение растительного энтеросорбента ЭБК-2 с пробиотиком Наринэ в рекомендованных дозах позволили увеличить сохранность птицы до 98%, по сравнению с контролем (96%).

4 ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Материалы диссертационной работы включены в научно-практические

рекомендации «Пути повышения сохранности птиц при ассоциированных

желудочно-кишечных инфекциях», утв. на НТС КрасГАУ, протокол № 1 от

11.12.2012 г., и используются ветеринарными специалистами и слушателями

курсов повышения квалификации АПК.

В практическую работу ветеринарных специалистов СПХ ЗАО «Владимировское» Назаровского района Красноярского края внедрены разработанные нами рекомендации по лечению и профилактике острых желудочно-кишечных инфекций цыплят в раннем постнатальном онтогенезе.

Некоторые разделы диссертации внедрены в учебный процесс кафедр: эпизоотологии, микробиологии, паразитологии и ветеринарно-санитарной экспертизы; физиологии и зоогигиены животных; разведения, генетики и биотехнологии с.-х. животных ИПБиВМ ФГБОУ ВПО КрасГАУ; морфологии и физиологи животных ФГБОУ ВПО ХГУ им. Н.Ф. Катанова; ветеринарной микробиологии, инфекционных и инвазионных болезней ФГБОУ ВПО им. П. А. Столыпина.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Счисленко, С.А. Этиологическая структура возбудителей желудочно-кишечных инфекций птиц в птицеводческих хозяйствах Красноярского края / С.А. Счисленко, Н.М. Ковальчук // Вестник КрасГАУ. - 2010. - № 8. - С. 94-97.

2. Счисленко, С.А. Применение пробиотиков и энтеросорбентов на птицефабрике СПХ ЗАО «Владимировское» / С.А. Счисленко // Межд. науч,-практ. конф. «Современные проблемы, перспективы и инновационные тенденции развития аграрной науки» посвящ. 85-лет со дня рождения член.-кор. РАСХН, д.в.н., профессора М.М. Джамбулатова (часть 1). - Махачкала — 2010. — С. 316

3. Счисленко, С.А. Анализ эпизоотической ситуации и противоэпизоотические мероприятия, проводимые в птицеводческих хозяйствах Красноярского края / С.А. Счисленко, Н.М. Ковальчук // Инновации в науке и образовании: опыт, проблемы, перспективы развития: мат-лы всерос. очно -заочной науч.-практ. и науч.-метод. конф. с междунар. участием. Ч. 2. Инновации в научно-практической деятельности (19-28 апреля 2010) / Краснояр. гос. аграр. ун-т. - Красноярск, 2010. - С. 282-283

4. Счисленко, С.А. Морфо-биохимические показатели крови цыплят породы Родонит-2 при одновременном введении в рацион энтеросорбента и пробиотика / С.А. Счисленко // Аграрные проблемы аридных территорий Центральной Азии: мат-лы междунар. науч.-практ. конф., посвящ. 10-летию образования Тувинского научно-исследовательского института сельского хозяйства - Новосибирск, 2011. - С. 255-257

5. Счисленко, С.А. Физиологические показатели и продуктивность цыплят кросса «Родонит-2» при скармливании ЭБК-2 и Наринэ / С.А. Счисленко // Вестник КрасГАУ. - 2011. - № 10. - С. 180-183.

6. Счисленко, С.А. Коррекция микробиоценоза кишечника цыплят на фоне применения энтеросорбента ЭБК-2 и пробиотика / Н.М. Ковальчук,

С.А. Счисленко, С.А. Кузнецова // Вестник КрасГАУ. - 2011. - № 11. - С. 176-179.

7. Счисленко, С.А. Эффективность ЭБК-2 в птицеводческих хозяйствах Красноярского края / С.А. Счисленко // VIII межд.науч.-практ.конф. «Актуальные и новые направления сельскохозяйственной науки» Ч. 2, посвящ. 75-летию со дня рождения ученого-микробиолога и агроэколога А.Т. Фарниева, Владикавказ. - 2012. - С. 127-129

8. Счисленко, С.А. Сравнительная характеристика энтеросорбентов группы ЭБК в птицеводстве / С.А. Счисленко // У1И межд.науч.-практ.конф. «Актуальные и новые направления сельскохозяйственной науки» Ч. 2, посвящ. 75-летию со дня рождения ученого-микробиолога и агроэколога А.Т. Фарниева, Владикавказ. - 2012. - С. 129-131

9. Счисленко, С.А. Состояние естественной резистентности организма цыплят раннего постнатального периода на фоне применения ЭБК-2 и Наринэ / Н.М. Ковальчук, С.А. Счисленко // Современные тенденции и перспективы развития агропромышленного комплекса Сибири: материалы Всероссийской научно-практической конференции. - Абакан, 2012. - С. 25-27

10. Счисленко, С.А. Пути повышения сохранности птиц при ассоциированных желудочно-кишечных инфекциях: научно-практические рекомендации / С.А. Счисленко, Н.М. Ковальчук // Краснояр. Гос. Аграр. Ун-т. - Красноярск, 2012. - 23 с.

11. Счисленко, С.А. Культурально-морфологические свойства микрофлоры биоматериала птиц / С.А. Счисленко // Актуальные проблемы современной науки: мат-лы трудов участников 10-ой международной телеконференции. Т.2, № 1. - Томск, 2013. - С. 59

12. Счисленко, С.А. Современные методы профилактики колибактериоза птицы / С.А. Счисленко // Актуальные проблемы научной и практической ветеринарной медицины: мат-лы Межд. науч.-практ. конф. посвящ. памяти заслуженного деятеля науки РФ, д-р ветеринар, наук, проф. Сивкова Геннадия Сергеевича (28-29 марта 2013 г.). - Тюмень, 2013. - С. 207-208

Подписано к печати 15.11.2013г. Формат бумаги 15x21. Печать оперативная. Гарнитура Times New Roman. Усл. печ. л. 1,0 Тираж 100 экз. Отпечатано в типографии ООО «ПАНДА» 644043, г. Омск, ул. Красный путь, 63

Текст научной работыДиссертация по сельскому хозяйству, кандидата ветеринарных наук, Счисленко, Светлана Анатольевна, Красноярск

ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮЖДЕТНОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ КРАСНОЯРСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ АГРАРНЫЙ УНИВЕРСИТЕТ

На правах рукописи

Г-

04201452424

СЧИСЛЕНКО СВЕТЛАНА АНАТОЛЬЕВНА

ВОЗРАСТНАЯ ДИНАМИКА МИКРОБИОЦЕНОЗА ЖЕЛУДОЧНО-КИШЕЧНОГО ТРАКТА ЦЫПЛЯТ НА ФОНЕ ПРИМЕНЕНИЯ РАСТИТЕЛЬНОГО ЭНТЕРОСОРБЕНТА (ЭБК-2)

06.02.02 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

ДИССЕРТАЦИЯ

на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Научный руководитель:

доктор ветеринарных наук, профессор

Ковальчук Наталья Михайловна

Красноярск -2013

17

22

23

Оглавление

ВВЕДЕНИЕ 4

1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 15

1. 1 Диагностика бактериальных инфекций птиц 15

1. 2 Особенность микробиоценоза желудочно-кишечного тракта

цыплят при диарейном симптомокомплесе 1. 3 Особенности естественной резистентности цыплят (клеточные

и гуморальные факторы) в раннем постнатальном периоде 1. 4 Научное обоснование применения энтеросорбентов при

желудочно-кишечных заболеваниях птиц 1. 5 Многообразие энтеросорбентов в ветеринарии 26

1. 6 Научное обоснование применения пробиотиков при

33

желудочно-кишечных заболеваниях птиц 1. 7 Применение пробиотика Наринэ 36

1. 8 Заключение по обзору литературы 39

2 ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ 43

2.1 Этиологическая структура возбудителей острых желудочно-кишечных инфекций цыплят в условиях птицеводческих хозяйств 43 Красноярского края

Коррекция микробиоценоза кишечника цыплят с диарейным симптомкомплексом при использовани растительного 49

энтеросорбента ЭБК-2 и пробиотика Наринэ

2.3 Физиологические показатели цыплят при внесении в рацион растительного энтеросорбента ЭБК-2 и пробиотика Наринэ

2.4 Интенсивность роста и сохранность цыплят при применении растительного энтеросорбента ЭБК-2 и пробиотика Наринэ

3. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

64

70

ВЫВОДЫ 95

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ 97

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ 98

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 99

ПРИЛОЖЕНИЯ 124

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. За последние два десятилетия в промышленном птицеводстве приобрели актуальность проблемы, связанные со снижением колонизационной резистентности слизистой оболочки кишечника и факторов естественной резистентности, ответственных за поддержание физиологического статуса организма птицы. Широкое применение антибиотиков, несбалансированное кормление и технологический стресс обуславливают нарушение сложившегося микробного равновесия и провоцируют развитие дисбактериоза кишечника (Выдрин А.Н., 1998; Бовкун Г.Ф., 2003; Берсенева А.Б., Чупахина Е.В., 2004; Деблик А.Г., 2005; Field М., 1979; Roberfroid М.В., 2000).

Степень разработанности. Одним из перспективных направлений в решении проблемы лечения и профилактики желудочно-кишечных инфекций, коррекции микробиоценоза желудочно-кишечного тракта и повышения сохранности молодняка сельскохозяйственных животных и птицы является применение энтеросорбентов и кормовых добавок, использование которых повышает уровень колонизационной резистентности слизистой оболочки кишечника за счет стимуляции размножения молочнокислых бактерий и бифидобактерий (Хаитов P.M., Пинегин Б.В., 2000; Субботин В.В., Сидоров М.А., 2000; Митрохин С.Д., 2004; Субботин В.В., 2009; Панин А.Н., Малик Н.И., 2009, 2011; Плешакова В.И., Шмидт Г.О., 2012; Panda А.К., Morkunas М., 2001).

Во всем мире, в том числе и России, проводится активная разработка и внедрение безопасных эффективных энтеросорбентов и пробиотических препаратов, как альтернативы антибиотикам (A.M. Степанова, 2011). Роль энтеросорбентов сводится к детоксикации организма и способности сорбировать в кишечнике токсические вещества, продукты жизнедеятельности

микробов и выведению их из организма, при этом сами сорбенты не содержат компоненты, которые бы всасывались в кишечнике и метаболизировались. Природные растительные сорбенты, обладающие уникальными ионообменными и сорбционными свойствами, являются объектами современных исследований и актуальны для внедрения в ветеринарную практику (Мащенко И.С., 1983; Давыдов В.И., Белякова H.A., 1991; Коптев В.Ю. и др. 1998; Раицкая В.И., 2002; Гунько В.М. и др., Донкова Н.В., 2004; Веприкова Е.В., Щипко M.JL, Кузнецова С.А, Кузнецов Б.Н., 2005; Тараканов Б.В., 2005, 2007)

Основой пробиотиков служат либо микроорганизмы, представляющие нормальную микрофлору, либо нехарактерные для нормофлоры сапрофиты, способные вытеснять патогенные микроорганизмы из просвета кишечника (Сидоров М.А. с соавт., 2000; Шевелева С.А. с соавт., 2002; Павлова Н.В., Лебедева И.А., 2007; Ноздрин Г.А., Соколов В.Д., Андреева Н.Л. и др., 2009; Малик Н.И. и др. 2011, Клетикова Л.В., 2012; Kushal et al., 2000; O'Sullivan D.J., 2001; Oggioni M.R., 2003; Ouwehand A.C., 2003; Bernardeau M., 2009).

Цель исследований установить этапы формирования микробиоценоза кишечника цыплят и определить естественную резистентность птицы на фоне применения растительного энтеросорбента ЭБК-2 в комплексе с пробиотиком Наринэ.

Для достижения цели были поставлены задачи:

1. изучить этиологическую структуру острых кишечных инфекций у цыплят в условиях птицеводческих хозяйств;

2. изучить биологические свойства выделенных возбудителей микроорганизмов;

3. установить структуру микробиоценоза кишечника цыплят с диарейным симптомокомплексом и лечебно-профилактическую эффективность применения растительного энтеросорбента ЭБК-2 и пробиотика Наринэ;

4. оценить морфологический состав крови, установить динамику биологических показателей естественной резистентности организма цыплят (общий белок, БАСК, ЛАСК) и определить сохранность цыплят на фоне комплексного применения растительного энтеросорбента ЭБК-2 и Наринэ.

Научная новизна. Изучены этиологически значимые ассоциации микроорганизмов семейства ЕШегоЪаМепасеае, определена роль острых желудочно-кишечных инфекций в общей бактериальной патологии птиц.

Изучено формирование и становление микробиоценоза кишечника цыплят при воздействии растительного энтеросорбента ЭБК-2 и пробиотика Наринэ.

Определен видовой состав и серологический профиль этиологически значимых условно-патогенных бактерий у птиц.

Установлена коррекция показателей естественной резистентности организма птиц на фоне применения растительного энтеросорбента ЭБК-2 и пробиотика Наринэ.

Теоретическая и практическая значимость работы. Полученные данные дополняют сведения по научному обоснованию применения растительных энтеросорбентов для профилактики и лечения острых желудочно-кишечных инфекций.

Доказана эффективность использования растительного энтеросорбента ЭБК-2 в комплексе с пробиотиком Наринэ при коррекции микробиоценоза кишечника цыплят, повышения уровня естественной резистентности организма и увеличения сохранности птицепоголовья.

Апробирована и предложена схема коррекции микрофлоры желудочно-кишечного тракта цыплят с диарейным симптомокомплексом при использовани растительного энтеросорбента ЭБК-2 и пробиотика Наринэ и обосновано повышение сохранности птиц при ассоциированных желудочно-кишечных инфекциях.

Разработаны научно-практические рекомендации «Пути повышения

сохранности птиц при ассоциированных желудочно-кишечных инфекциях» (утв. на научно-техническом совете КрасГАУ, протокол № 1 от 11.12.2012).

Методология и методы исследований. Работа выполнена в период с 2007 по 2012 гг. на кафедре эпизоотологии, микробиологии, паразитологии и ветеринарно-санитарной экспертизы ИПБиВМ, лаборатории НИИЦ ФГБОУ ВПО КрасГАУ. Экспериментальные исследования по определению профилактической эффективности растительного энтеросорбента ЭБК-2 и пробиотика Наринэ проведены на базе птицефабрики СПХ ЗАО «Владимировское» Назаровского района Красноярского края.

При изучении эпизоотической ситуации по острым кишечным инфекциям птицепоголовья в птицеводческих хозяйствах Красноярского края проанализированы отчетные документы КГКУ «Красноярская ветеринарная лаборатория» за период с 2000 по 2011 гг., а так же результаты собственных исследований.

Объектом исследований являлись цыплята кросса «Родонит-2» различных возрастных групп с момента вывода до 30-ти сут. возраста. В экспериментах использовали цыплят, подобранных по принципу аналогов, содержащихся в равных условиях.

Для коррекции микробиоценоза кишечника цыплят, повышения продуктивных качеств и сохранности птицепоголовья в раннем постнатальном онтогенезе использовали растительный энтеросорбент ЭБК-2 (Патент RU 2389498, 2009) и пробиотик Наринэ (бактерий Lactobacillus acidophillus штамм ЕР 317/402).

При проведении экспериментальной части работы по изучению растительного энтеросорбента ЭБК-2 были сформированы три группы по 100 голов. Схема исследований представлена в таблице 1.

Рисунок 1. Схема исследований

Материалом исследований служили пробы фекалий цыплят опытных и контрольной групп, качественный состав микроорганизмов кишечника птицы определяли лабораторными методами. Количество микроорганизмов в 1 г рассчитывали путем высева 0,1 мл различных разведений исследуемого материала на чашки Петри с плотными дифференциально-диагностическими питательными средами. Материал для исследований получали в утренние часы до кормления.

Ферментацию углеводов, определяли путем посева исследуемых культур на среды Гисса, содержащие 0,1-0,2% пептона и 0,25% соответствующего углевода: лактозу, галактозу, арабинозу, глюкозу и манит (по две пробирки с каждым углеводом). В одну из пробирок для создания анаэробных условий на поверхность среды наслаивали стерильное вазелиновое масло столбиком высотой 0,5 см. Посевы инкубировали при 37°С в течении 4 суток.

На основании морфологических, культуральных и биохимических свойств микроорганизмов определяли их видовую принадлежность, используя «Определитель бактерий Берджи» (1997) и «Определитель зоопатогенных микроорганизмов» (Сидоров М. А. и др., 1995).

Для изучения вирулентных свойств выделенных микроорганизмов проводили заражение белых мышей массой 15-20 г путем внутрибрюшинного введения 0,5 мл микробной взвеси в дозе 0,5x109 м.т./мл.

Определение вирулентных свойств Escherichia coli проводили используя для заражения белых беспородных мышей с массой тела 12-15 г. Взвесь суточной агаровой культуры Escherichia coli на физрастворе вводили лабораторным животным внутрибрюшинно в дозе 0,5 млдр. микробных клеток. Клиническое наблюдение за зараженными животными вели в течение 5-х суток. Павших и убитых животных подвергали патологоанатомическому вскрытию с последующим бактериологическим посевом проб из внутренних органов на МПА и МПБ и изучением мазков отпечатков из паренхиматозных органов и крови. Культуру признавали патогенной в случае гибели двух и более

лабораторных животных в течение 3-х суток после заражения и относили ее к возбудителю болезни.

Серотипизацию, выделенных эшерихий проводили из проб фекалий больных диареей птиц, патологического материала от павших или убитых с диагностической целью птиц.

Пробы фекалий от больных диареей и содержимое тонкого отдела кишечника погибших цыплят исследовали по методическим указаниям «Ускоренная индикация морганелл, сальмонелл и энтеропатогенных эшерихий с адгезивными антигенами в патологическом материале, кормах, объектах внешней среды в реакции коагглютинации» JI.C. Каврук и др. (2001).

Полученные пробы разводили в стерильном физиологическом растворе 1:20 - 1:30, а затем засевали суспензию бактериологической петлей широкими частыми штрихами на плотные селективные питательные среды в чашках (агар Эндо, Минка, среду Плоскирева). Посевы из внутренних органов и тканей животных и птиц, погибших от диареи, проводили в соответствии с действующими методическими указаниями по бактериологической диагностике колибактериоза (эшерихиоза), сальмонеллеза и других заболеваний, вызываемых патогенными энтеробактериями.

Исследованию в реакции коагглютинации подлежали первичные 16-18 час культуры бактерий (чистые или смешанные), полученные на питательных средах, применяемых для выделения искомых бактерий из патологического материала. Дня обнаружения морганелл использовали культуры на агаре Плоскирева, сальмонелл - культуры в средах обогащения и на агаре Плоскирева, энтеропатогенных эшерихий с адгезивными антигенами К88, 987Р, А20 - на агаре Эндо (или Левина); энтеропатогенных эшерихий с адгезивными антигеноми К99, F41, F18 - культуры на агаре Минка.

Возрастную динамику становления микробиоценоза желудочно-кишечного тракта цыплят изучали на 1-, 5-, 10-, 15-, 20-, 25-, 30-е сут.,

используя методические указания «Выделение и идентификация условно-патогенных энтеробактерий и сальмонелл при острых кишечных заболеваниях молодняка сельскохозяйственных животных» (Блохина И. Н., Воронин Е. С. и др. - 1991); «Диагностика колибактериоза животных и птицы» (1991), «Диагностика смешанной кишечной инфекции», (1991) с использованием коммерческих сред и тест-систем СИБ производства ФГУП «НПО Микроген» МЗ РФ, по методическим указаниям, разработанным Л.С.Коврук с соавторами «Ускоренная индикация морганелл, сальмонелл и энтеропатогенных эшерихий с адгезивными антигенами в патологическом материале, кормах, объектах внешней среды в реакции коагглютинации» (2001).

Проведено бактериологическое исследование растительных кормов (п=1010) на соответствие санитарным нормам, допустимым при кормлении животных и птиц, а так же кормов растительного производства (п=35)

Для изучения действия растительного энтеросорбента ЭБК-2 и пробиотика Наринэ на физиологические показатели роста и развития цыплят в динамике, проводили взвешивание, определяли среднесуточный прирост и скорость роста (Броди, 1945).

Для исследования морфологических и биохимических показателей кровь получали при диагностическом убое цыплят опытных и контрольной групп. Все манипуляции с птицей производили согласно Европейской конвенции о защите позвоночных животных, используемых для экспериментов или иных научных целей (2003)

Морфологические исследования крови включали определение количества

12 9

эритроцитов (1x10 /л) и лейкоцитов (1x10 /л) с использованием камеры Горяева гемоглобин определяли по методу Сали, общий белок крови рефрактометрическим методом по Филипповичу Ю.В. (1975).

Иммунологические исследования включали определение лизоцимной активности сыворотки крови (Дорофейчук А.Г., 1968). Бактерицидную активность сыворотки крови определяли по Смирновой О. В. и Кузьминой А. Т. (1966) в модификации Максимюк Н. Н., Телешевской JI. Я. (1995).

Статистическую обработку результатов, полученных в ходе экспериментов и наблюдений, проводили при помощи компьютерной программы Microsoft Excel 2003 и пакета программ Statistica.

Выражаем большую благодарность сотрудникам КГКУ «Красноярская ветеринарная лаборатория» за любезно предоставленные архивные документы, за консультативную помощь в проведении исследований сотрудникам кафедры эпизоотологии, микробиологии, паразитологии и ветеринарно-санитарной экспертизы и НИИЦ КрасГАУ.

Основные положения, выносимые на защиту:

•этиологическая структура острых кишечных инфекций у цыплят в условиях птицеводческих хозяйств Красноярского края;

• коррекция микробиоценоза кишечника цыплят с диарейным симптомкомплексом при использовани растительного энтеросорбента ЭБК-2 и пробиотика Наринэ

•показатели морфологического состава крови, динамика иммунологических показателей естественной резистентности организма и сохранность цыплят на фоне применения растительного энтеросорбента ЭБК-2 и пробиотика Наринэ.

Степень достоверности и апробация полученных результатов. Данные проведенных исследований являются частью комплексных исследований в рамках программы фундаментальных и приоритетных направлений НИР кафедры эпизоотологии, микробиологии, паразитологии и ветеринарно-санитарной экспертиза ИПБиВМ ФГБОУ ВПО КрасГАУ: «Оценка лечебно-профилактической эффективности препаратов при массовых болезнях

продуктивных животных и птиц», что предусматривает изыскание и испытание эффективных экологически безопасных препаратов для лечения и профилактики массовых инфекционных болезней животных и птиц.

Материалы диссертационной работы используются в учебном процессе кафедр: эпизоотологии, микробиологии, паразитологии и ветеринарно-санитарной экспертизы; физиологии и зоогигиены животных; разведения, генетики и биотехнологии с.-х. животных ИПБиВМ ФГБОУ ВПО КрасГАУ; морфологии и физиологии животных ФГБОУ ВПО ХГУ им. Н.Ф. Катанова; ветеринарной микробиологии, инфекционных и инвазионных болезней ФГБОУ ВПО им. П.А. Столыпина.

Результаты исследований внедрены в практическую работу ветеринарной службы СПХ ЗАО птицефабрики «Владимировская» Назаровского района Красноярского края.

Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на научных конференциях: Всероссийской очно-заочной научно-практиче�