Воздействие УФ-света и активированных кислородных метаболитов на структурно-функциональные свойства лимфоцитов человека в присутствии биогенных аминов

Попова, Людмила Ивановна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Воздействие УФ-света и активированных кислородных метаболитов на структурно-функциональные свойства лимфоцитов человека в присутствии биогенных аминов
ВАК РФ 03.00.02, Биофизика

Автореферат диссертации по теме "Воздействие УФ-света и активированных кислородных метаболитов на структурно-функциональные свойства лимфоцитов человека в присутствии биогенных аминов"

На правах рукописи

Попова Людмила Ивановна

ВОЗДЕЙСТВИЕ УФ-СВЕТА И АКТИВИРОВАННЫХ КИСЛОРОДНЫХ МЕТАБОЛИТОВ НА СТРУКТУРНО-

ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ СВОЙСТВА ЛИМФОЦИТОВ ЧЕЛОВЕКА В ПРИСУТСТВИИ БИОГЕННЫХ АМИНОВ

Специальность 03 00 02 - Биофизика

0031ВВЭ52

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

1 6 АПР 2008

Воронеж - 2008

003166952

Работа выполнена в Воронежском государственном университете

Научный руководитель доктор биологических наук,

профессор, заслуженный деятель науки РФ Артюхов Валерий Григорьевич

Официальные оппоненты, доктор биологических наук, профессор

Попова Татьяна Николаевна

кандидат биологических наук, доцент Дмитриев Евгений Владиславович

Ведущая организация Всероссийский научно-исследовательский

ветеринарный институт патологии, фармакологии и терапии РАСХН

Защита состоится 18 апреля 2008 г в 13 часов на заседании диссертационного совета Д 212 038 03 при Воронежском государственном университете по адресу 394006, Воронеж, Университетская пл, 1,ауд 59

С диссертацией можно ознакомиться в зональной научной библиотеке Воронежского государственного университета

Автореферат разослан «/^ » марта 2008 года

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор биологических наук

МЮ Грабович

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы В настоящее время исследователями активно обсуждается вопрос о функционировании иммунной системы организма при опухолевом росте Непосредственное участие в неопластическом процессе, связанное с распознаванием трансформированных клеток, их нейтрализацией и элиминацией из организма, принимают лимфоциты Однако опухоль способна избегать иммунного надзора благодаря ряду защитных механизмов изменению специфичности антигенов, выделению ичмуносупрессирующих факторов и др (А А Ярилин, 1999, И С Фрейдлин, А А Тотолян, 2001) Поэтому приоритетным является поиск и разработка способов направленной активации иммунного ответа на развивающуюся опухоль и усиления антигенных свойств неопласти-чески трансформированных клеток

К эффективным методам немедикаментозной терапии, использующихся для лечения широкого спектра заболеваний (вирусных, гнойно-септических, бронхо-легочных), относится аутотрансфузия УФ-облученной крови (АУФОК) В основе ее лечебного действия лежат фотохимические реакции, оказывающие влияние на поверхностные рецепторы и ферментные системы иммунокомпе-тентных клеток (Т П Гажеева и др , 1994) В связи с этим использование УФ-облучения с целью стимулирования компонентов иммунной системы и возможного применения активированных иммуноцитов в комплексной терапии опухолей является одним из перспективных направлений фотоиммунологии

Изучение деструктивно-модифицирующего, регуляторного и лечебно-профилактического действия АУФОК тесно связано с выяснением биологической роли активированных кислородных метаболитов (АКМ), образующихся при протекании разнообразных темновых и фотоиндуцированных реакций (У Прайор, 1979, Н К. Зенков, Е Б Меныцикова, 1997; А А Болдырев, 2003, Г С. Шаповап, В Ф Громовая, 2003) Учитывая противоречивую и неполную информацию о направленности изменений структурно-функционального состояния иммуноцитов в условиях оксидативной модификации, необходимо проведение исследований, позволяющих оценить вклад активных форм кислорода (АФК) в процесс УФ-модификации клеток крови для его целенаправленной регуляции.

Для стабилизации различных патологических состояний организма, сопровождающихся избыточным накоплением АФК и гипофункцией антиоксидант-ной системы, что наблюдается при действии экстремальных факторов (УФ- и ионизирующего излучений, некоторых ксенобиотиков, активации нейтрофилов и фагоцитов, избытке кислорода, тема, Ре2+, Си2+), необходима разработка способов эффективной утилизации АКМ и повышения устойчивости клеток и их компонентов к оксидативной модификации и фотоокислению

Колесниченко, 2002) Показана способность биогенных аминов проявлять фотопротекторное действие по отношению к белковым макромолекулам (В Г Ар-тюхов и др, 1994, 1997, ГА Вашанов, 1993, В И Кулинский, JIC Колесниченко, 2002) Установлены механизмы фотопротекторного эффекта биогенных аминов при исследовании сочетанного влияния УФ-света и данных соединений на структурно-функциональное состояние макромолекул лактатдегидрогеназы из разных источников (M А Наквасина, 2006) Однако отсутствуют работы, касающиеся изучения роли биогенных аминов в регулировании стр>ктурно-фукционального состояния иммуноцитов в условиях воздействия экзогенных агентов Исследования подобного рода интересны для выяснения механизмов патогенеза многих заболеваний (злокачественного роста клеток, аллергии, нервно-психических и др ) и межклеточных взаимодействий нервных и иммунных клеток в норме и после воздействия УФ-облучения и АФК

Все вышеизложенное обусловило необходимость проведения экспериментов, направленных на выявление возможного модулирующего действия УФ-облучения, АФК и биогенных аминов на структурно-функциональные характеристики иммуноцитов человека, что позволит разработать методы направленной иммунокоррекции для комплексной терапии опухолей и других заболеваний человека

Цель и задачи диссертационной работы Целью работы явилось изучение изменений структурно-функционального состояния лимфоцитов крови человека после УФ-облучения, воздействия активных форм кислорода в свободном состоянии и в присутствии биогенных аминов Задачи работы предусматривали

1 Исследование влияния УФ-света (240-390 нм) в дозах 75,5, 151, 755 и 1510 Дж/м2 на цитотоксическую активность, антителообразующую способность лимфоцитов, их жизнеспособность и уровень экспрессии некоторых рецептор-ных структур

2. Изучение изменений цитотоксичности, антителообразующей и ФНО-продуцирующей способности, жизнеспособности и уровня экспрессии рецепторов лимфоцитарных клеток в условиях экзогенной генерации активных форм кислорода (супероксидного анион-радикала, гидроксильного радикала, синг-летного кислорода и пероксида водорода)

3 Исследование сочетанного действия УФ-облучения (75,5, 151, 755 и 1510 Дж/м2) и биогенных аминов (гистамина, серотонина, дофамина и адреналина) на структурно-функциональные свойства лимфоцитов (цитотоксичность, антителообразующую и ФНО-продуцирующую способность, жизнеспособность, уровень экспрессии некоторых мембранных рецепторов)

Научная новизна Работа представляет собой систематическое исследование структурно-функциональных изменений лимфоцитарных клеток человека после воздействия УФ-излучения, активных форм кислорода в присутствии биогенных аминов (гистамин, серотонин, дофамин, адреналин)

Обнаружено корригирующее действие УФ-облучения в дозах 75,5, 151, 755 и 1510 Дж/м на цитотоксическую активность лимфоцитов доноров по отношению к клеткам асцитной карциномы Эрлиха

Показана взаимосвязь изменений функциональных свойств (цитотоксиче-ской и антителообразующей способности) фотомодифицированных лимфоцитов с уровнем экспрессии их мембранных рецепторов (Fe-, CD3, CD8, CD 19, CD56)

Предложена схема отдельных звеньев модифицирующего действия УФ-излучения на структурно-функциональные свойства лимфоцитов человека

Установлено, что активные формы кислорода (супероксидный анион-радикал, гидроксильный радикал и пероксид водорода) оказывают преимущественно инактивирующее воздействие на большинство показателей структурно-функционального состояния отдельных компонентов лимфоцитарных клеток человека, ответственных за противоопухолевую защиту

Выявлено модулирующее действие УФ-света и биогенных аминов на ци-тотоксическую активность лимфоцитов человека, обусловленное изменением экспрессии некоторых рецепторов (Fe-, CD8), участвующих в реализации функционального ответа иммуноцитов

Практическая значимость Научные положения диссертационной работы расширяют и углубляют современные представления о функционировании отдельных звеньев иммунного ответа в условиях воздействия физико-химических фактороз (УФ-света, активных форм кислорода и биогенных аминов)

Изучение УФ-индуцированных изменений цитотоксической активности, антителообразующей способности, жизнеспособности, уровня экспрессии антигенных детерминант лимфоцитов важно для понимания сущности и направленности реакций, лежащих в основе терапевтического эффекта метода аутотранс-фузии УФ-облученной крови

Экспериментальные данные, полученные при исследовании действия активных форм кислорода на структурно-функциональное состояние лимфоцитов и их отдельных популяций, полезны для расширения современных воззрений о механизмах редокс-регуляции иммунного ответа в норме и при патологии

Материалы исследований модулирующего действия биогенных аминов по отношению к некоторым характеристикам лимфоцитарных клеток, ответственных за противоопухолевую защиту, до и после УФ-облучения позволят выработать новые подходы к иммунокоррекции основных звеньев иммунного ответа при злокачественном росте клеток Эксперименты с использованием биогенных аминов также важны дня понимания механизмов тонкой регуляции функционирования иммуноцитов в норме, при патологии, после воздействия экзогенных агентов, а также физико-химических основ нейро-иммунных взаимодействий

Апробация работы Материалы диссертационной работы доложены и обсуждены на III Международном конгрессе «Слабые и сверхслабые поля и излучения в биологии и медицине» (Санкт-Петербург, 2003), III Internation conference «Reactive oxygen and nitrogen species, antioxidants and human healt» (Smolensk, 2003), III съезде биофизиков России (Воронеж, 2004), Международной научной конференции «Молекулярные, мембранные и клеточные основы функционирования биосистем» (Минск, 2004), Международной научной конференции «Биотехнология - охране окружающей среды» (Москва, 2004), I съезде физиологов СНГ (Сочи, 2005); IV съезде фотобиологов России (Саратов,

2005), III Международной конференции «Электромагнитные излучения в биологии» (Калуга, 2005), Научной сессии сотрудников Воронежского госуниверситета (Воронеж, 2005), III Международной конференции ИНТЕРНАС 2007 «Актуальные проблемы современного естествознания» (Калуга, 2007)

Публикации По теме диссертации опубликовано 6 статей и 10 тезисов

На защиту выносятся следующие положения

1 УФ-свет (240-390 нм) в дозах 75,5-1510 Дж/м2 оказывает корригирующее действие на цитотоксическую активность лимфоцитов человека

2 Направленность фотоиндуцированных (75,5-1510 Дж/м2) изменений функциональных свойств лимфоцитов коррелирует с уровнем экспрессии рецепторов (Fc-рецепторов, CD3, CD8, CD19, CD56) мембраны лимфоцитов после УФ-облучения

3 Активные формы кислорода (о^ > ОН", Н2О2) выступают в роли эффективных модуляторов структурно-функционального состояния лимфоцитов крови человека

4 Сочетанное действие УФ-света (75,5-1510 Дж/м2) и биогенных аминов позволило выявить новые звенья в механизме действия названных агентов на структурно-функциональное состояние лимфоцитарных клеток отчетливо наблюдается активирующее действие дофамина на цитотоксичность и уровень экспрессии рецепторов фотомодифицированных клеток, инактивирующее действие гистамина, дофамина и серотонина на изучаемые параметры иммуноци-тов проявляется преимущественно при максимальной дозе УФ-облучения (1510 Дж/м2)

5 Схема модулирующего действия УФ-излучения на структурно-функциональные свойства лимфоцитов человека

Структура и объем диссертации Диссертационная работа включает 199 страниц машинописного текста, 8 таблиц, 41 рисунок Состоит из «Введения», семи глав, «Заключения», «Выводов» Список литературы содержит 270 источников, из них 135 отечественных и 135 зарубежных

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ Глава I. Характеристика лимфоцитарных клеток человека, их участие в многоуровневой системе иммунной защиты

В главе изложены современные представления о структурно-функциональных свойствах лимфоцитов человека и их субпопуляций

Глава 2. Механизмы действия УФ-излучения на структурно-функциональное состояние компонентов иммунной системы

Рассмотрены УФ-индуцированные изменения компонентов (лимфоцитов, фагоцитов, цитокинов, системы комплемента) иммунной системы в изолированном состоянии и в составе цельной крови

Глава 3. Активированные кислородные метаболиты: общая характеристика; пути генерации, конверсии и утилизации в биосистемах; роль в процессах клеточного метаболизма

Представлен анализ литературных данных о механизмах образования, физико-химических свойствах, биологической роли и путях регулирования уровня активных форм кислорода в живых организмах

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ Глава 4. Объекты и методы исследования Объектом исследования явились лимфоцитарные клетки, выделенные из гепаринизированной крови доноров Лимфоциты получали путем центрифугирования донорской крови в градиенте плотности фиколл-урографина (Дж Клаус, 1990) Разделение лимфоцитарных клеток на Т- и В-популяции осуществляли по методу Terasaki (ЮМ Зарецкая, 1983) Для оценки чистоты Т- и В-клеточных суспензий, полученных по методу Terasaki, применяли метод прямой иммунофлуоресценции (В X Хавинсон и др, 1989 )

УФ-облучение суспензии лимфоцитарных клеток осуществляли сверху при их перемешивании в стеклянной термостатируемой (при температуре 20 ± 1° С) кювете полусферической формы с помощью ртутно-кварцевой лампы типа ДРТ-400 через светофильтр УФС-l с полосой пропускания 240 - 390 нм Интенсивность излучения - 151 Дж/м2 в мин с учетом расстояния до облучаемого объекта 0,23 м Объем вносимого в кювету образца составил 1 мл Дозы облучения клеточных суспензий - 75,5; 151, 755 и 1510 Дж/м2

В экспериментах по изучению структурно-функциональных свойств лимфоцитов применяли следующие системы генерации активных форм кислорода I) образование гидроксильных радикалов (ОН*) в системе унивалентного восстановления пероксида водорода ионами металлов (S Goldstein et al, 1993), 2) образование супероксидных анион-радикалов (Oj) в системе тетраметилэти-лендиамин-рибофлавин под действием видимого света (В Н Чумаков, Л Ф. Осинская, 1977), 3) пероксид водорода (Нг02) в концентрации 10"6 моль/л, 4) генерация синглетного кислорода ( 02) в присутствии метиленового голубого в условиях облучения красным светом с помощью устройства «Улокс», изготовленного по лазерной технологии на основе трехкомпонентного твердого раствора галлия, мышьяка и алюминия (Воронежский филиал государственной научно-производственной фирмы «Микротек»), длина волны максимума излучения - 665±15 нм, диапазон излучения - 630-700 нм, выходная интенсивность излучения - 20 мВт/см2

Цитотоксическую активность лимфоцитов по отношению к клеткам асцит-ной карциномы Эрлиха, культивируемой в лабораторных мышах линии SHK, определяли при помощи колориметрического МТТ-анализа (A A Loosdrecht et al., 1991). Для оценки антителообразующей способности лимфоцитов человека использовали метод локального гемолиза (X Фримель, Й Брок, 1986) Жизнеспособность лимфоцитов определяли по стандартной методике с использованием трипанового голубого (Д К Новиков, В И Новикова, 1996)

Для изучения уровня экспрессии Fc-рецепторов, CD3-, CD8-, CD 19- и С056-маркеров на поверхности нативных и модифицированных лимфоцитов применяли метод иммуноферментного анализа (ИФА) с использованием соответственно антисыворотки против IgG, моноклональных антител (МКА) LT3, LT8, LT19 и LT56, конъюгата к ним - козьих антител против IgG мыши, меченных пероксидазой хрена («Сорбент», Москва) (В А Егоров, 1991)

Определение концентрации фактора некроза опухолей (ФНОа) в лизатах нативных и модифицированных лимфоцитов проводили при помоши ИФА-тест-системы (ООО «Протеиновый контур», С -Петербург) на основе моноклональных антител к ФНОа человека

Статистическую обработку результатов экспериментов осуществляли с помощью набора электронных таблиц «Microsoft Excel» Достоверность отличия сравниваемых показателей от контроля определяли при помощи t-критерия Стыодента при 95% уровне значимости (Г Ф Лакин, 1990)

Глава 5. Исследование структурно-функциональных характеристик лимфоцитов человека после воздействия УФ-света

Анализ уровня цитотоксической активности интакгных и фото-модифицированных лимфоцитов периферической крови человека позволил выделить 3 группы доноров, различающихся как по исходным (до УФ-обтучения) величинам исследуемого параметра, так и по характеру их изменений, зарегистрированных после воздействия УФ-света в диапазоне доз 75,5 - 1510 Дж/м2

Первая группа (14 доноров) характеризовалась изначально высоким уровнем цитотоксичности - 95,4 ± 4,3% После УФ-облучения в дозах 75,5, 151, 755 и 1510 Дж/м2 для этой группы наблюдалось снижение величин изучаемого показателя соответственно на 8, 12, 14 и 25% по отношению к уровню контрольного образца (рис. 1, а), однако, статистически достоверные изменении уровня цитотоксической активности по сравнению с контролем были выявлены при дозах 755 и 1510 Дж/м2

Вторая группа (11 доноров) со средними показателями цитотоксичности -87,2% ± 2,4% - отличалась иным характером зависимости тестируемого параметра от дозы УФ-света (рис 1, б) Облучение в дозах 75,5 и 151 Дж/м2 индуцировало статистически достоверное повышение активности лимфоцитов по сравнению с нативным образцом При воздействии УФ-излучения в дозах 755 и 1510 Дж/м2 наблюдалось снижение цитотоксичности клеток до контрольного уровня и ниже (величины изучаемого параметра статистически достоверно не отличаются от контрольных значений)

В третьей группе (7 доноров) с изначально низкой активностью - 71,8% ± 5,1% - выявлено повышение уровня цитотоксичности во всем использованном диапазоне доз облучения (рис 1, в), причем статистически достоверные отличия от контроля зарегистрированы при воздействии УФ-света на лимфоциты в дозах 151,755 и 1510 Дж/м2

Динамика УФ-индуцированных изменений цитотоксической активности смеси лимфоцитов и Т-клеточной суспензии совпадает, хотя в случае смеси клеток обнаруженные нами эффекты проявляются более ярко Это, по всей ве-

роятности, указывает на участие в реализации механизма цитотоксичности не только Т-, но и В-клеток и №С, а также, возможно, и растворимых медиаторов, синтезируемых иммунокомпетентными клетками, в частности, фактора некроза опухолей, интерлейкинов 1 и 2, интерферонов.

По-видимому, процессы снижения и повышения уровня цитотоксичности лимфоцитов у разных групп доноров после УФ-облучения являются результатом доминирования того или иного процесса: фотодеструкции («шелушения») гликокаликса, открытия (демаскирования) на поверхности мембраны ранее скрытых предсуществующих структур (т.е. рецепторов), изменения уровня синтеза иммунокомпетентными клетками антител, цитокинов, вторичных мес-сенджеров.

Дж/м

г- ^ Д ^

а)

б)

Рис. I. Уровень цитотоксической активности лимфоцитов человека по отношению к клеткам асцитной карциномы Эрлиха после облучения УФ-светом

О 41 1— ш о

¡с - ¡с 2 Дж/М2

В)

Нами показано, что лимфоциты весьма устойчивы к действию УФ-света в используемом диапазоне доз, в то время как жизнеспособность клеток карциномы Эрлиха после их инкубации с облученными лимфоцитами снижается, причем наблюдаемый эффект усиливается с ростом дозы облучения иммуноци-тов. Следовательно, УФ-облучение оказывает активирующее действие на разнообразные эффекторные функции лимфоцитов, обеспечивающие уничтожение чужеродных агентов.

При помощи метода локального гемолиза установлено, что УФ-излучение в дозах 75,5 -ь 1510 Дж/м2 индуцирует снижение атителопродуцирующей способности В-лимфоцитов по отношению к антителам классов М и й.

При изучении изменений уровня Рс-рецепторов лимфоцитов, облученных УФ-светом в диапазоне доз 75,5 -М510 Дж/м2, было обнаружено, что у 11-ти

доноров (1 группа) наблюдалось дозозависимое снижение уровня Fc-рецепторов, у остальных 11-ти доноров (2 группа) регистрировалось повышение исследуемого параметра (рис 2, а) Нами выявлено, что воздействие УФ-света в диапазоне доз 75,5 - 1510 Дж/м2 на лимфоциты индуцирует у 12 из 20 доноров повышение уровня экспрессии CD56 маркеров изучаемых клеток. Показано повышение уровня экспрессии CD8 и CD3 Т-лимфоцитов после их УФ-облучения в интервале доз 75,5 - 1510 Дж/м2 по отношению к таковому необ-лученных клеток (рис 2,6)

D, 0,65

0,55 0,45 0,35

Рис 2 Изменения уровня экспрессии Fc-рецепторов (а) и CD3, CD8, CD56 (б) лимфоцитов человека после воздействия УФ-облучения

Установлено, что УФ-свет (75,5, 755 и 1510 Дж/м2) вызывает снижение уровня экспрессии CD19 лимфоцитов по отношению к таковому для необлу-ченных образцов (рис 3)

Рис. 3 Изменения уровня экспрессии CD 19 лимфоцитов человека после воздействия УФ-облучения

£ » Р К Дж/м2

Результаты исследования уровня экспрессии поверхностных маркеров лимфоцитарных клеток (Fc-рецепторов, CD3, CD8, CD19, CD56) указывают на то, что воздействие УФ-света на смесь лимфоцитов индуцирует изменения структурного состояния плазматических мембран отдельных субпопуляций лимфоцитов, определяющих, наряду с другими причинами, направленность изменений функциональной активности лимфоцитов в условиях облучения.

Глава 6. Исследование структурно-функциональных свойств лимфоцитов человека в условиях генерации активных форм кислорода

В связи с отсутствием детальных сведений о механизмах генерации АФК клетками иммунной системы и о влиянии этих высокореакционноспособных метаболитов на структурно-функциональные свойства лимфоцитов представлялось целесообразным проведение исследований, направленных на выявление возможного модулирующего действия АФК на лимфоцитарные клетки человека

Установлено, что в условиях генерации синглетного кислорода не происходит изменений цитотоксической активности лимфоцитов по отношению к таковой для интактных клеток (рис 4)

Рис 4 Уровень цитотоксичности лимфоцитов человека по отношению к клеткам асцитной карциномы Эрлиха в условиях экзогенной генерации АФК

1 - величина цитотоксичности нативных лимфоцитов,

величина цитотоксичности лимфоцитов в условиях генерации:

2 - синглетного кислорода,

3 - гидроксильного радикала,

4 — супероксидного анион-радикала;

5 — пероксида водорода

В условиях экзогенной генерации гидроксильного радикала, супероксидного анион-радикала и при добавлении пероксида водорода (10"6 моль/л) наблюдается статистически достоверное снижение уровня функциональной активности лимфоцитов соответственно на 5, 9 и 33 % по сравнению с контролем (рис 4)

Антителообразующая способность В-лимфоцитов по отношению к иммуноглобулинам класса С в условиях генерации гидроксильного радикала и пероксида водорода статистически достоверно снижается по сравнению с уровнем контрольного образца, синглетный кислород не влияет на величину изучаемого параметра Воздействие супероксидного анион-радикала на лимфоциты стимулирует антителопродуцирующую способность В-клеток в отношении

Нами обнаружено, что в условиях экзогенной генерации гидроксильного радикала и супероксидного анион-радикала наблюдается статистически достоверное снижение жизнеспособности лимфоцитов после 20 ч инкубации в среде ЯРМ1-1640 при 37°С по отношению к таковой контрольного образца (немоди-фицированные клетки)

Обработка лимфоцитов раствором пероксида водорода (10"6 моль/л) с их последующей 20-часовой инкубацией индуцирует снижение уровня синтеза ФНОа на 5,8±0,7 пкг/мл по отношению к таковому для контрольного образца

(50±0,9 пкг/мл) В условиях генерации супероксидного анион-радикала и гид-роксильнош радикала наблюдается повышение величины изучаемого параметра соответственно на 10,1±1,1 пкг/мл и 10,8-1=1,7 пкг/мл по сравнению с немо-дифицированными лимфоцитами При воздействии синглетного кислорода не выявлены статистически достоверные изменения уровня синтеза ФНОа по отношению к таковому для контрольных образцов (рис 5)

Рис 5 Уровень продукции ФНОа лимфоцитами человека в условиях экзогенной генерации АФК

1 - продукция ФНОа нативными лимфоцитами, уровень продукции ФНОа лимфоцитами в условиях генерации

2 - синглетного кислорода,

3 - гидроксильного радикала,

4 - супероксидного анион-радикала,

5 - пероксида водорода

1 2 3 4 5

При изучении уровня экспрессии Рс-рецепторов лимфоцитов в условиях генерации синглетного молекулярного кислорода, гидроксильного радикала и пероксида водорода выявлено, что у большинства доноров наблюдается статистически достоверное снижение величины изучаемого параметра по отношению к контролю По характеру изменений уровня экспрессии Рс-рецепторов в условиях воздействия супероксидного анион-радикала нами были выделены две группы доноров в первой (14 доноров) наблюдалось повышение величины изучаемого параметра по отношению к таковой для контрольных образцов, во второй (14 доноров)-снижение (рис 6)

Рис 6 Уровень экспрессии Рс-рецепторов лимфоцитов человека в условиях экзогенной генерации АФК-

1 - уровень экспрессии Рс-рецепторов нативных лимфоцитов,

уровень экспрессии Рс-рецепторов лимфоцитов в условиях генерации

2 - синглетного кислорода,

3 - гидроксильного радикала,

4 - супероксидного анион-радикала,

5 - пероксида водорода

Исследование уровня экспрессии СБ56 лимфоцитов в условиях генерации АФК позволило выявить две группы доноров, различающиеся по характеру ответной реакции на воздействие активированных кислородных метаболитов Для

Л, 55

§50 О

"45

492

3 I

1 2 3 4 5 □первая группа доноров □ вторая группа доноров

1-ой группы доноров обнаружено, что уровень экспрессии CD56 в условиях воздействия супероксидного анион-радикала снижается по отношению к контролю, в то время как другие АФК не влияют на величину изучаемого параметра Для второй группы отмечается снижение уровня экспрессии CD56 в условиях генерации всех используемых АФК

Выявлено снижение уровня экспрессии CD3 Т-лимфоцитов в условиях экзогенной генерации пероксида водорода, гидроксильного и супероксидного радикалов по отношению к контролю, наблюдалось также уменьшение экспрессии корецептора BCR - CD19, после воздействия супероксидного анион-радикала и пероксида водорода на лимфоциты

В условиях генерации АФК выявлены изменения уровня экспрессии поверхностных маркеров лимфоцитарных мембран - Fc-рецепторов, CD56, CD3 и CD 19 - определяющие, наряду с другими причинами, характер модификации функциональных свойств иммуноцитов под влиянием активных кислородных частиц

Глава 7. Исследование структурно-функциональных свойств лимфоцитов человека после воздействия УФ-света в присутствии биогенных аминов

Нами изучены УФ-индуцированные изменения структурно-функциональных свойств лимфоцитов человека в присутствии гистамина, серо-тонина, дофамина и адреналина

Совместное действие УФО в диапазоне доз 75,5-1510 Дж/м2 и гистамина в концентрации 10~8 моль/л приводит к увеличению уровня цитотоксичности лимфоцитов по сравнению с таковой для облученных клеток в отсутствие биогенного амина (рис 7)

Рис 7. Изменение цитотоксической активности лимфоцитов при сочетанном воздействии УФ-излучения и гистамина — - без гистамина,

в присутствии гистамина в концентрации-SS - ю-8 моль/л; H - Ю"7 моль/л; □ -10-6 моль/л

При минимальной дозе УФО (75,5 Дж/м2) гистамин в концентрациях 10"8, 10"7 и 10"6 моль/л оказывает стимулирующее действие на уровень функциональной активности Т-лимфоцитов по сравнению с таковым облученных свободных иммуноцитов

Сочетанное действие дофамина (10"8 моль/л) и УФО в дозах 151, 755 и 1510 Дж/м2 приводит к усилению цитотоксичности лимфоцитов по сравнению с таковой УФ-облученных клеток в свободном состоянии При добавлении до-

7 14

фамина в концентрации 10 моль/л к УФ-облучаемым лимфоцитам (75,5; 151; 1510 Дж/м2) наблюдается аналогичный ответ.

Дофамин (10'6 моль/л) оказывает стимулирующее действие на функциональную активность лимфоцитов, облученных УФ-светом в минимальной дозе (75,5 Дж/м2) и проявляет супрессирующий эффект в случае использования облучения в дозе 755 Дж/м2 по сравнению с исследуемым показателем для фото-модифицированных клеток (рис. 8).

ЦТ, %

Рис. 8. Изменение цитотоксической активности лимфоцитов при сочетанном воздействии УФ-излучения и дофамина:

- без дофамина; в присутствии дофамина в концентрации: SS- Ю"8 моль/л; Е2- 10~7 моль/л; □ -10"6 моль/л

Выявлено повышение уровня циготоксич-ности Т-клеток после УФО (151; 755 Дж/м') в присутствии дофамина ( 10"8, 10"6 моль/л) по сравнению с таковым фотомо-дифицированных лимфоцитов в отсутствие биогенного амина. Добавление дофамина в концентрации 10"7 моль/л к облучаемым в дозах 75,5 и 1510 Дж/м2 Т-клеткам также вызывает увеличение тестируемого параметра по сравнению с контролем.

Серотонин (10"8, 10" , 10"6 моль/л) снижает уровень цитотоксической активности лимфоцитов при использовании УФ-облучения в дозах 755; 1510 Дж/м2 по отношению к таковому облученных клеток в отсутствие биогенного амина (рис. 9).

Дж/м

ЦТ, %

Рис. 9. Изменение цитотоксической активности лимфоцитов при сочетанном воздействии УФ-излучения и серотонина: = - без серотонина;

в присутствии серотонина в концентрации: К - Ю"8 моль/л; 22- 10"7 моль/л; □ -10-6 моль/л

«ч Дж/м

Установлено повышение изучаемого параметра Т-лимфоцитов, подвергнутых воздействию УФ-света в дозе 151 Дж/м2 в присутствии серотонина (10"8, 10' 6 моль/л), по отношению к таковому для облученных клеток Увеличение уровня цитоюксичности Т-клеток регистрировалось также при использовании УФ-света в дозе 755 Дж/м2 и серотонина в концентрациях 107 и 10"6 моль/л Добавление биогенного амина в концентрации 10~7 моль/л к облучаемым (1510 Дж/м2) Т- лимфоцитам тоже вызывало повышение тестируемого параметра по сравнению с таковым фотомодифицированных клеток в отсутствие серотонина

Сочетанное действие УФО в дозах 151, 755, 1510 Дж/м2 и адреналина в концентрациях 10"8 и 10"6 моль/л приводит к усилению эффекторной функции Т-лимфоцитов по сравнению с таковой для фотомодифицированных клеток без биогенного амина Повышение изучаемого параметра иммуноцитов наблюдается еще при использовании адреналина в концентрации 10"7 моль/л и УФО в максимальной дозе

Установлено, что добавление гистамина и дофамина в концентрации 107 моль/л вызывает снижение продукции антител В-лимфоцитами на 18,6 и 13,8% соответственно по отношению к таковой нативных клеток Сочетанное действие УФ-света (75,5 Дж/м2) и биогенных аминов сопровождалось увеличением антителообразующей способности иммуноцитов по сравнению с фотомодифи-цированными клетками, при использовании максимальной дозы облучения (1510 Дж/м2) наблюдался обратный эффект

Выявлено, что адреналин, гистамин, дофамин и серотонин (10"7 моль/л) индуцируют снижение уровня продукции ФНОа лимфоцитами (рис. 10)

Рис 10 Изменение продукции ФНОа лимфоцитами человека после инкубации с биогенными аминами (10"7 моль/л)

1 - уровень синтеза ФНОа нативными лимфоцитами,

продукция ФНОа в присутствии-

2 - адреналина;

3 - гистамина,

4 - дофамина,

5 - серотонина

Сочетанное действие гистамина (108, 10" моль/л) и УФ-света в дозе 75,5 Дж/м2 приводит к уменьшению уровня экспрессии Fc-рецепторов по сравнению с таковым для свободных облученных клеток Инкубация лимфоцитов с биогенным амином в концентрации 10'8 моль/л и дальнейшее УФО в дозе 151 Дж/м2 индуцировали также снижение тестируемого показателя по отношению к таковому модифицированных УФ-светом иммуноцитов Этот же эффект наблюдался после использования гистамина в концентрациях 10'8; 10" и 10"6 моль/л и УФ-света в дозах 755 и 1510 Дж/м2 (исключение составило применение биогенного амина в концентрации 10'8 моль/л и УФО в дозе 1510 Дж/м2)

Выявлено активирующее влияние дофамина (10"8—10"6 моль/л) на уровень экспрессии Fc-рецепторов по отношению к таковому облученных в максимальных дозах (755, 1510 Дж/м2) лимфоцитов Стимулирующее действие данного агента (10"\ 10"6 моль/л) на тестируемый показатель отмечается при использовании УФ-излучения в дозе 151 Дж/м2 Данный эффект дофамина (10"8, 10"7 моль/л) наблюдается также в случае облучения лимфоцитов минимальной дозой УФ-света

Инкубация с серотонином (10"7 моль/л) и УФО в дозе 75,5 Дж/м2 индуцируют снижение уровня экспрессии Fc-рецепторов по сравнению с таковым свободных фотомодифицированных клеток Выявлено повышение уровня экспрессии Fc-рецепторов после совместного воздействия УФО во всем использованном интервале доз и серотонина (10"s моль/л) по отношению к таковому облученных лимфоцитов

При сочетанном действии адреналина (Ю-6 моль/л) и УФО в дозах 75,5 и ! 51 Дж/м2 наблюдалось снижение уровня экспрессии Fc-рецепторов по сравнению с таковым фотомодифицированных свободных клеток Использование биогенного амина в концентрации 10'8 моль/л приводило к увеличению экспрессии Fc-рецепторов УФ-облученных в дозах 75,5; 755, 1510 Дж/м2 лимфоцитов Добавление адреналина (10"8; 10"7и 10"6 моль/л) к УФ-модифицируемым лимфоцитам в дозах 755, 1510 Дж/м2 сопровождалось повышением уровня экспрессии Fc-рецепторов по сравнению с таковым облученных свободных клеток В случае применения адреналина (10"7и 10"6 моль/л) и УФО в дозах 75,5 и 151 Дж/м2 наблюдалось возрастание исследуемого показателя по сравнению с таковым свободных фотомодифицированных лимфоцитов

Совместное действие УФ-облучения в минимальной дозе (75,5 Дж/м2) и гистамина (10"8, 10"7, 10"6 моль/л) приводит к увеличению уровня экспрессии CD8 по отношению к таковому фотомодифицированных свободных лимфоцитов Применение гистамина (Ю"8, 10"7, 10"6 моль/л) и УФО в дозах 151 и 1510 Дж/м2 вызывало снижение уровня экспрессии CD8 по сравнению с таковым облученных лимфоцитов в отсутствие биогенных аминов Ингибирующий эффект гистамина, используемого в концентрации 10"8 моль/л, проявляется еще при УФ-облучении клеток в дозе 755 Дж/м2.

Сочетанное действие дофамина (10'8, 10"7, 10"6 моль/л) и УФ-света (75,5 Дж/м2) приводило к увеличению уровня экспрессии CD8 по отношению к таковому свободных необлученных клеток Повышение тестируемого показателя наблюдалось еще при использовании дофамина в концентрации 10"6 моль/л и УФ-облучении в дозах 151, 755 Дж/м2 Применение модификатора (108 моль/л) и максимальной дозы УФ-света индуцировало снижение уровня тестируемого параметра по сравнению с таковым облученных лимфоцитов в отсутствие биогенного амина. Подобный эффект наблюдался также при инкубировании клеток с дофамином в концентрации 10"8 моль/л и фотомодификации в дозе 755 Дж/м2.

Активирующее действие серотонина (10'7 и 10 моль/л) по отношению к уровню экспрессии CD8 проявилось лишь при использовании УФ-облучения в минимальной дозе (75,5 Дж/м2) Сочетанное влияние серотонина (10"8, 10"7, 10"6 моль/л) и УФ-света (151, 75 5 и 1510 Дж/м2) приводило к снижению величины

изучаемого параметра лимфоцитов по отношению к таковой свободных облученных клеток

При воздействии УФ-света в дозах 75,5 и 151 Дж/м2 и адреналина во всем использованном интервале концентраций его происходило увеличение уровня экспрессии CD8 по отношению к таковому свободных фотомодифицированных клеток Сочетанное влияние УФ-света (755, 1510 Дж/м2) и адреналина (10"7, 10"6 моль/л) также приводило к повышению экспрессии CD8 по сравнению с таковой облученных клеток без амина

Таким образом, модулирующее действие УФ-света и биогенных аминов на цитотоксическую активность лимфоцитов человека можно связать, в первую очередь, с модификацией плазматической мембраны клеток, приводящей к изменению функционирования антигенраспознающего и сигналтрансдуцирующе-го аппаратов клеток

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

С помощью методов иммуноферментного, МТТ-анализа, определения ан-тителообразующей и ФНО-продуцирующей способности, жизнеспособности лимфоцитов исследованы изменения структурно-функциональных свойств лимфоцитарных клеток человека в условиях воздействия УФ-света (240-390 нм) в дозах 75,5-1510 Дж/м2 и активных форм кислорода (супероксидного анион-радикала, гидроксильного радикала, синглетного кислорода и пероксида водорода) в присутствии биогенных аминов (адреналина, дофамина, гистамина и серотонина)

Выявлено корригирующее действие УФ-излучения (75,5-1510 Дж/м2) на цитотоксическую активность смеси лимфоцитов человека и их Т-популяции по отношению к клеткам асцитной карциномы Эрлиха УФ-облучение свободных лимфоцитов индуцирует дозозависимое снижение числа жизнеспособных опухолевых клеток Обнаружено, что воздействие УФ-света вызывает уменьшение антителопродуцирующей способности В-лимфоцитов по отношению к антителам класса М и G во всем использованном диапазоне доз Таким образом, вклад антителозависимого механизма цитотоксичности, реализующегося за счет образования комплекса клетка-мишень - антитело класса G - NK, в повышение общей цитотоксической активности лимфоцитов в условиях УФ-облучения, невелик.

Результаты исследования уровня экспрессии поверхностных маркеров лимфоцитарных клеток (Fc-рецепторов, CD3, CD8, CD19, CD56) свидетельствуют об УФ-индуцированных изменениях структурного состояния плазматических мембран Т- и В-лимфоцитов, натуральных киллеров, определяющих, наряду с другими причинами, направленность изменений функциональной активности лимфоцитов в условиях УФ-облучения Снижение цитотоксической активности лимфоцитов может осуществляться вследствие инактивации мембранных рецепторов (Fc-, CD19) за счет собственного поглощения энергии УФ-излучения, нарушения структурного состояния рецепторов в результате воздействия продуктов ПФОЛ, ПОЛ и активных форм кислорода, образующихся в ходе УФ-облучения и темновых реакций в исследуемой системе Инактивация

включает в себя процессы шеддинга (сшелушивания) и интернализации (погружения) рецепторов на мембране Повышение цитотоксической активности лимфоцитов после воздействия УФ-света может быть следствием экспонирования «скрытых» молекул рецепторов (CD3, CD8 и CD56) на поверхность плазматической мембраны Т-лимфоцитов и натуральных киллеров в результате модификации структурного состояния последней продуктами ПФОЛ, ПОЛ и свободными радикалами кислорода

При исследовании функциональных свойств (цитотоксической активности и антителообразующей способности) лимфоцитов в условиях экзогенной генерации АФК выявлено, что '02 практически не влияет на активность Т- и В-клеток Возможно, вследствие малых величин пробега и времени жизни синг-летный кислород акцептируется компонентами плазматической мембраны лимфоцитарных клеток, не связанными с процессами активации иммуноцитов, их цитотоксического действия и продукции антител Воздействие супероксидного анион-радикала, гидроксильного радикала и пероксида водорода индуцирует разнонаправленные изменения активности клеток По-видимому, исследуемые АФК непосредственно или через продукты ПОЛ и оксидативной модификации белков вызывают нарушение структурно-функционального состояния рецепторов Т- и В-лимфоцитов для антигена и других белковых компонентов каскада передачи внешнего сигнала в клетку Не исключена возможность модулирования уровня вторичных мессенджеров (цАМФ, Са2+) в иммуноцитах после их оксидативной модификации

Модуляция уровня продукции ФНОа лимфоцитами под влиянием пероксида водорода может осуществляться как в результате его диффузии внутрь клетки и изменения активности генов, так и за счет модификации мембранных компонентов, участвующих в процессе передачи сигнала в клетку. Действие гидроксильного радикала и супероксидного анион-радикала, по всей вероятности, проявляется за счет их высокой способности к оксидативной модификации поверхностных мембранных структур

Изучение уровня экспрессии поверхностных маркеров (Fc-рецепторов, CD3, CD8, CDI9, CD56) лимфоцитов в условиях экзогенной генерации АФК позволило сделать заключение о высокой модулирующей способности активных радикалов по отношению к компонентам мембраны иммуноцитов Причем в большинстве случаев наблюдалось снижение уровня экспрессии тестируемых маркеров после оксидативной модификации, что, возможно, связано с шеддин-гом рецепторов или их погружением в модифицированную мембрану

Наиболее яркие эффекты связаны с использованием системы экзогенной генерации супероксидного анион-радикала, который, по-видимому, способен прямо или опосредованно через продукты ПОЛ модулировать уровень растворимых медиаторов в клетке, вызывая изменение биосинтетических процессов

Основные результаты действия УФ-света и АФК на структурно-функциональное состояние лимфоцитарных клеток человека представлены в табл 1 и на рис 11

По всей вероятности, корригирующее влияние УФ-света на цитот оксиче-скую активность иммуноцитов по отношению к опухолевым клеткам обуслов-

лено стимулированием антителонезависимого механизма и ингибированием антителоза висимого механизма цитотоксичности Активные формы кислорода (супероксидный анион-радикал, гидроксильный радикал и пероксид водорода), в свою очередь, оказывают инактивирующее воздействие на большинство показателей структурно-функционального состояния исследуемых клеток

Таблица 1

Влияние АФК на структурно-функциональное состояние лимфоцитарных клеток человека

Показатель о; Н202 ОН* 'о2

Цитотоксическая активность 1 1 1 нет изменений

Уровень синтеза IgG t 1 1 нет изменений

Жизнеспособность клеток через 20 ч 1 нет изменений 1 нет изменений

Уровень синтеза ФНОа т 1 t нет изменений

Уровень экспрессии Fc-рецепторов (CD16 NK, Т-лимфоциты) •f главным образом 1 1 1

Уровень экспрессии CD56NK 1 1 1 I

Уровень экспрессии CD8 Т-лимфоцитов нет изменений нет изменений нет изменений нет изменений

Уровень экспрессии CD3 Т-лимфоцитов 1 1 J нет изменений

Уровень экспрессии CD 19 Т-лимфоцитов 1 1 нет изменений нет изменений

Обозначения | - снижение уровня исследуемого параметра, | - повышение уровня исследуемого параметра

Обнаружено повышение и, в ряде случаев, понижение уровня цитотоксичности лимфоцитов после воздействия биогенных аминов (гистамина, серотони-на, дофамина и адреналина), связанное с наличием на поверхности клеток специфических рецепторов к указанным модификаторам, сигнал от которых через трансдуцирующие системы передается внутрь клетки. Это приводит к изменению состояния мембраны иммуноцитов, что влечет за собой модулирование их функциональных свойств

В экспериментах по изучению фотоиндуцированных изменений цитотоксичности лимфоцитов в присутствии биогенных аминов УФ-свет вызывает снижение уровня тестируемого параметра в отсутствие указанных модификаторов Активирующее действие биогенных аминов на уровень цитотоксичности УФ-облученных клеток по сравнению с таковым фотомодифицированных иммуноцитов в отсутствие аминов наблюдается преимущественно в случае исследования Т-лимфоцитов При изучении функциональной активности смеси лим-

фоцитов после воздействия УФ-света наиболее отчетливо проявляется стимулирующий эффект дофамина по отношению к таковой облученных клеток без модификатора Ингибирующее влияние биогенных аминов на уровень цитоток-сичности лимфоцитов наблюдается в случае использования максимальных доз УФ-света (755, 1510 Дж/м2)

Рис 11. Схема отдельных звеньев модифицирующего действия УФ-излучения на структурно-функциональные свойства лимфоцитов человека

Гистамин и дофамин в концентрации 10"7 моль/л вызывают снижение ан-тителообразующей способности В-лимфоцитов. Фотомодификация иммуноци-тов в присутствии биогенных аминов сопровождалась увеличением тестируемого параметра в случае использования минимальной дозы УФ-света и уменьшением при УФО в максимальной дозе По-видимому, вклад антителозависи-мого механизма цитотоксичности, реализующегося за счет образования комплекса клетка-мишень - - №С, в повышение общей цитотоксической активности имеет место при использовании малых доз облучения (75,5 Дж/м2) и, скорее всего, не велик в случае высоких доз УФ-света (1510 Дж/м2)

Выявлено преимущественно снижение уровня ФНОа лимфоцитами после добавления к клеткам адреналина, гистамина, дофамина и серотонина в концентрации 10"7 моль/л Следовательно, модулирующие эффекты изучаемых медиаторов по отношению к цитотоксической активности лимфоцитов могут быть связаны и с изменением уровня вырабатываемого ими ФНОа

Установлено активирующее действие дофамина (ÎO^-W6 моль/л), серо тонина и адреналина (10"8 моль/л) на уровень экспрессии Fc-рецепторов УФ-облученных клеток (1 группа доноров - фотоинактивация) по сравнению с таковым свободных фотомодифицированных иммуноцитов При изучении тестируемого параметра лимфоцитов после воздействия УФ-света (2 группа доноров - фотоактивация) ярко проявляется стимулирующий эффект адреналина (10"8-10"6 моль/л) и ингибирующее влияние гистамина ( 10~s— 10"6 моль/л) после УФО преимущественно во всем интервале доз по отношению к таковому облученных клеток без модификатора

Показан стимулирующий эффект всех используемых биогенных соединений по отношению к уровню экспрессии CD8 лимфоцитов после ультрафиолетовой модификации клеток в минимальной дозе (75,5 Дж/м2) Значительное активирующее действие на уровень экспрессии изучаемого рецептора лимфоцитов, УФ-облученных в дозах 151, 755, 1510 Дж/м2, наблюдается в случае применения адреналина Противоположный эффект имеет место после добавления к фотомодифицированным в тех же дозах клеткам гистамина и серотонина (10" 8, 10"7, 10"6 моль/л)

Результаты изучения сочетанного действия УФ-света и биогенных аминов на экспрессию ряда рецепторов (CD8, Fc-) лимфоцитов позволяют связать изменения функциональной активности исследуемых клеток с мембранными перестройками, приводящими к перераспределению рецепторов, а, значит, модулированию уровня вторичных посредников, участвующих в реализации функционального ответа иммуноцитов

Таким образом, УФ-свет (75,5-1510 Дж/м2), АФК (oj, ОН', Н202) и биогенные амины выступают в роли факторов, избирательно модулирующих структурно-функциональное состояние отдельных компонентов лимфоцитар-ной мембраны и, тем самым, регулирующих уровень интенсивности иммунного ответа. Рассмотрение деструктивно-модифицирующих эффектов указанных физико-химических агентов в отношении отдельных показателей лимфоцитов может быть полезно при решении проблем иммунокоррекции звеньев противоопухолевого иммунитета и определения новых подходов к иммуномодулирую-щей терапии

ВЫВОДЫ

1 УФ-свет (240-390 нм) в дозах 75,5-1510 Дж/м2 оказывает корригирующее действие на цитотоксическую активность лимфоцитов донорской крови Направленность фотоиндуцированных изменений цитотоксической активности лимфоцитов зависит от исходных величин исследуемого параметра

2 Выявлено снижение антителообразующей способности В-лимфоцитов (по IgM и G) после УФ-облучения в дозах 75,5-1510 Дж/м2

3 Установлено повышение уровня экспрессии Fc-рецепторов (2 группа доноров), CD3, CD8, CD56 маркеров и снижение количества Fc-рецепторов (1 группа доноров), CD19 маркеров на УФ-модифицированной (75,5-1510 Дж/м2) мембране лимфоцитов, которые обусловливают направленность изменений функциональных свойств иммуноцитов после их УФ-облучения

4 Обнаружено, что в условиях генерации активных форм кислорода (с>2 > ОН, Н2О2) происходит уменьшение уровня цитотоксической активности лимфоцитов по сравнению с таковым немодифицированных клеток

5 Показано снижение уровня антителообразующей способности (по IgG) В-лимфоцитов в условиях экзогенной генерации пероксида водорода и гидро-ксильного радикала При использовании системы генерации супероксидного анион-радикала наблюдалось усиление процесса синтеза антител класса G В-клетками

6 При исследовании изменений уровня ФНОа лимфоцитов в условиях их оксидативной модификации выявлено, что о2 и ОН' стимулируют продукцию данного цитокина, в то время как Н202 проявляет ингибирующее действие по отношению к величине тестируемого параметра

7 В условиях экзогенной генерации АФК (02, ОН", Н202) выявлялось, преимущественно, снижение уровня экспрессии рецепторов лимфоцитов (Fc-рецепторов, CD3, CD 19, CD56) по сравнению с таковым нативных клеток

8 Показано, что гистамин (10"8 моль/л) повышает цитотоксическую активность иммуноцитов, фотомодифицированных в диапазоне доз 75,5-1510 Дж/м2 (смесь клеток) и в дозе 75,5 Дж/м (Т-популяция) Дофамин (108, 10"7 и 10"6 моль/л) стимулирует функциональный ответ смеси лимфоцитов и их Т-популяции, облученных УФ-светом, преимущественно во всем названном интервале доз Серотонин (10"8, 10"7 и 10"6 моль/л) вызывает снижение цитоток-сичности лимфоцитов, облученных максимальными дозами УФ-света (755 и 1510 Дж/м2)

9 Установлено, что гистамин и дофамин в концентрации 10'7 моль/л индуцируют снижение продукции антител класса G В-лимфоцитами Сочетанное действие УФ-света (75,5 Дж/м2) и биогенных аминов приводит к увеличению уровня антителообразующей способности иммуноцитов по сравнению с таковым свободных фотомодифицированных клеток, при использовании максимальной дозы облучения (1510 Дж/м2) наблюдалось уменьшение величины тестируемого параметра

10 Обнаружено снижение уровня ФНОа лимфоцитов после их инкубации с биогенными аминами (гистамином, серотонином, адреналином и дофамином) в концентрации 10"7 моль/л

11 Сочетанное действие УФ-света в дозе 75,5 Дж/м2 и биогенных аминов (10"8-10"6 моль/л), в большинстве случаев, индуцировало повышение уровня экспрессии CD8 лимфоцитов Активирующее действие на уровень экспрессии CD8 лимфоцитов, УФ-облученных в дозах 151, 755, 1510 Дж/м2, наблюдается в случае применения адреналина Снижение величины тестируемого параметра

имеет место после добавления к фотомодифицированным в тех же дозах клеткам гистамина и серотонина (10'8, 10'7,10"6 моль/л)

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1 Цитотоксическая активность нативных и УФ-модифицированных лимфоцитов человека по отношению к клеткам асцитной карциномы Эрлиха / В Г Артюхов, M А Наквасина, Л И Попова, M M. Свиридов // Слабые и сверхслабые поля и излучения в биологии и медицине труды III Междунар конгр тез докл , Санкт-Петербург, 1-4 июля 2003г - СПб, 2003.-Т 1 -С 67

2 УФ-индуцированные изменения структурно-функционального состояния эритроцитов и лимфоцитов крови человека /ММ Свиридов, JI И. Попова, В Г Артюхов, M А Наквасина // Организация и регуляция физиолого-биохимических процессов Межрегион сб науч работ - Вып 5 - Воронеж, 2003-С 141-146

3 The study of biogenic amines action on the levels of peroxide resistance and photostabihty of lymphocytic and erythrocytic human cells / M A Nakvasma, V G Artyukhov, LI Popova, M M Sviridov // Reactive oxygen and nitrogen species, antioxidants and human health Internation conference, Smolensk, 22-25 September 2003 - Smolensk, Russia, 2003 -P 167

4 Биогенные амины как модуляторы фоточувствительности некоторых компонентов крови человека / M А Наквасина, JIИ Попова, H В Агишева, В Г Артюхов // Рос физиол журн им И M Сеченова - 2004 - Т 90, № 8 (Приложение) - Ч 2 - С 220

5 Артюхов В.Г Структурно-функциональные модификации компонентов лимфоцитарных клеток человека в условиях воздействия некоторых экологических факторов / В Г. Артюхов, M А. Наквасина, Л И Попова // Биотехнология -охране окружающей среды 2 Междунар науч. конф • тез докл, Москва, 25-27 мая 2004 г - Москва, 2004. - С 158

6 Наквасина M А Функциональные свойства лимфоцитарных клеток человека в условиях воздействия УФ-излучения и активных форм кислорода / M А Наквасина, Л И Попова // III съезд биофизиков России тез докл , Воронеж, 24-29 июня 2004 г -Воронеж, 2004 -Т II -С 688-689

7 Функциональные свойства лимфоцитов человека в условиях воздействия УФ-света и активных форм кислорода / M А Наквасина, Л И Попова, M С Трубицына, В Г Артюхов // Молекулярные, мембранные и клеточные основы функционирования биосистем Сб статей -Минск, 2004 -Ч 2 - С 233-235

8 Оценка уровня фото- и пероксидной резистентности эритроцитарных и лимфоцитарных клеток человека в присутствии биогенных аминов / M А Наквасина, Л И Попова, H В Голуб, В Г Артюхов // Радиационная биология. Радиоэкология -2005.-Т 45, №4 - С 174-179

9 Структурно-функциональные модификации лимфоцитарных клеток человека в условиях воздействия активных форм кислорода / В Г Артюхов, M А Наквасина, Л И Попова, M С Трубицына // Вестник ВГУ - Сер Химия, Биология.-2005 -№2 -С 110-115

10 Наквасина M А Анализ модулирующих эффектов действия биогенных аминов на клетки крови человека и их компоненты в условиях воздействия УФ-

излучения / M А Наквасина, В Г Артюхов, JIИ Попова // Научные труды I съезда физиологов СНГ Т ] -Москва Медицина-Здоровье, 2005 -С 110

11 Артюхов В Г Структурно-функциональные модификации компонентов лимфоцитарных клеток человека в условиях воздействия УФ-излучения и активных форм кислорода / В Г Артюхов, M А Наквасина, JI И. Попова // Научные труды I съезда физиологов СНГ Т 1 — Москва Медицина-Здоровье, 2005 -С 111

12 Наквасина M А Структурно-функциональные модификации лимфоцитарных клеток человека в условиях воздействия УФ-излучения / М.А Наквасина, В Г Артюхов, JIИ Попова // IV съезд фотобиологов России тез докл, Саратов, 26-30 сентября 2005г - Саратов, 2005 - С 145-148

13 Наквасина M А Структурно-функциональные фотомодификации некоторых компонентов крови человека в присутствии биогенных аминов / M А Наквасина, В Г. Артюхов, JIИ Попова // Электромагнитные излучения в биологии труды III Междунар конф , Калуга, 5-7 октября 2005 г - Калуга, 2005 -С 4-8

14 Попова Л.И Структурно-функциональные модификации лимфоцитов человека в условиях воздействия УФ-излучения и активных форм кислорода / Л И. Попова, M С Трубицына // Труды молодых ученых ВГУ сб статей -2005 -Вып 1-2 - С 100-108

15 Артюхов В Г Анализ механизмов действия УФ-света на лимфоцитар-ные клетки человека / В Г Артюхов, М.А Наквасина, О В Лидохова, M С Трубицына, Л И Попова//Вестник Калужского университета -2007 -№1 -С. 56-63

16 Artyukhov V.G The modification of structural-functional properties of human blood lymphocytes in conditions of superoxide amon-radical génération / V G Artyukhov, M A Nakvasma, О V Lidokhova, M S. Trubicma, LI. Popova // 3rd International Conférence INTERNAS'2007, Kaluga, Russia, 22-25 may 2007 - Kaluga, 2007 -P.48-49

Статьи № 8,9 опубликованы в изданиях, входящих в список ВАК РФ.

Подписано в печать 12 03 08 Формат 60x84 Чи Уел печ л 1,4 Тираж 100 экз Заказ 536

Отпечатано с готового оригинала-макета в типографии Издательско-полиграфического центра Воронежского государственного университета 394000, Воронеж, ул Пушкинская, 3

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Попова, Людмила Ивановна

ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

ГЛАВА 1. Характеристика лимфоцитарных клеток человека, их участие в многоуровневой системе иммунной защиты.

1.1. Структурно-функциональные свойства лимфоцитов человека и их популяций.

1.2. Характеристика субпопуляций лимфоцитарных клеток.

1.2.1. Т-лимфоциты.

1.2.2. В-лимфоциты.

1.2.3. Натуральные клетки-киллеры.

ГЛАВА 2. Механизмы действия УФ-излучения на структурнофункциональное состояние компонентов иммунной системы.

ГЛАВА 3. Активированные кислородные метаболиты: общая характеристика; пути генерации, конверсии и утилизации в биосистемах; роль в процессах клеточного метаболизма.

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ.

ГЛАВА 4. Объекты и методы исследования.

4.1. Объекты исследования.

4.2. Методы исследования.

4.2.1. Выделение лимфоцитов из крови доноров.

4.2.2. Разделение лимфоцитов на Т- и В-популяции.

4.2.3. Метод иммунофлуоресценции.

4.2.4. Инкубация лимфоцитов с биогенными аминами.

4.2.5. УФ-облучение исследуемых образцов.

4.2.6. Системы генерации активных форм кислорода.

4.2.7. Получение клеток асцитной карциномы Эрлиха.

4.2.8. Определение цитотоксической активности лимфоцитов при помощи колориметрического МТТ-анализа;.

4.2.9. Исследование антителообразующей способности лимфоцитов методом локального гемолиза.

4.2.10. Определение жизнеспособности клеток.

4.2.11. Определение уровня экспрессии поверхностных маркеров методом имму ноферментного анализа.,.

4.2.12. Получение лизатов лимфоцитов для определения концентрации ФНОа.

4.2.13. Метод иммуноферментного анализа для определения концентрации ФНОа в лизатах лимфоцитов.

4.2.14. Статистическая обработка результатов экспериментов.

РЕЗУЛЬТАТЫ ЭКСПЕРИМЕНТОВ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

ГЛАВА 5. Исследование структурно-функциональных характеристик лимфоцитов человека после воздействия-У Ф-света.

5.1. Влияние УФ-облучения на цитотоксическую активность лимфоцитов донорской крови.

5.21 Исследование жизнеспособности лимфоцитов и клеток асцитной карциномы Эрлиха после УФ-облучения лимфоцитов.

5.3. Исследование антителопродуцирующей способности В-лимфоцитов после их УФ-облучения.

5.4. Изучение изменений экспрессии поверхностных маркеров лимфоцитарной мембраны в условиях воздействия,УФ-облучения.

5.4.1. Исследование уровня экспрессии Fc-рецепторов лимфоцитов после их УФ-облучения.

5.4.2. Изучение УФ-индуцированных изменений экспрессии CD56 лимфоцитарной мембраны.

5.4.3. Исследование уровня экспрессии CD8 лимфоцитарных клеток после воздействия УФ-света.

5.4.4. Изучение уровня экспрессии CD3 и CD19 лимфоцитов, модифицированных УФ-светом.

ГЛАВА 6. Изучение структурно-функциональных свойств лимфоцитов человека в условиях генерации активных форм кислорода.

6.1. Исследование функциональной активности лимфоцитов в условиях экзогенной генерации активных форм кислорода.

6.2. Определение жизнеспособности лимфоцитов в условиях воздействия активных форм кислорода.

6.3. Изучение изменений продукции фактора некроза опухолей лимфоцитами в условиям генерации активных форм кислорода.

6.4. Исследование изменений уровня экспрессии некоторых поверхностных маркеров лимфоцитарной мембраны в условиях воздействия активных форм кислорода.

ГЛАВА 7. Исследование структурно-функциональных свойств лимфоцитов человека после воздействия УФ-света в присутствии биогенных аминов.

7.1. Структурно-функциональные свойства биогенных аминов.

7.2. Исследование функциональных свойств лимфоцитов человека, модифицированных УФ-светом в присутствии биогенных аминов.

7.2.1. Сочетанное действие УФ-света и биогенных аминов на цитотоксическую активность лимфоцитов человека.

7.2.2. Изучение жизнеспособности лимфоцитов человека после УФ-облучения в присутствии биогенных аминов.

7.2.3. Изучение антителообразующей способности В-лимфоцитов человека после воздействия УФ-света в присутствии некоторых биогенных аминов.

7.2.4. Продукция ФНОа лимфоцитами человека в присутствии биогенных аминов.].

7.3. Исследование УФ-индуцированных изменений уровня экспрессии некоторых поверхностных маркеров мембраны лимфоцитов в присутствии биогенных аминов.

7.3.1. Влияние УФ-света на уровень экспрессии Бс-рецепторов лимфоцитов в присутствии биогенных аминов.

7.3.2. Сочетанное воздействие УФ-света и биогенных аминов на уровень экспрессии CD8 лимфоцитов человека.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Воздействие УФ-света и активированных кислородных метаболитов на структурно-функциональные свойства лимфоцитов человека в присутствии биогенных аминов"

Актуальность проблемы. В настоящее время исследователями активно обсуждается вопрос о функционировании иммунной системы организма при опухолевом росте. Непосредственное участие в неопластическом процессе, связанное с распознаванием трансформированных клеток, их нейтрализацией и элиминацией из организма, принимают лимфоциты. Однако опухоль способна избегать иммунного надзора благодаря ряду защитных механизмов: изменению специфичности антигенов, выделению иммуносупрессирующих факторов и др. (A.A. Ярилин, 1999; И.С. Фрейдлин, A.A. Тотолян, 2001). Поэтому приоритетным является поиск и разработка способов направленной активации иммунного ответа на развивающуюся опухоль и усиления антигенных свойств неопластически трансформированных клеток.

К эффективным методам немедикаментозной терапии, использующихся для лечения широкого спектра заболеваний (вирусных, гнойно-септических, бронхо-легочных), относится аутотрансфузия УФ-облученной крови (АУФОК). В основе ее лечебного действия лежат фотохимические реакции, оказывающие влияние на поверхностные рецепторы и ферментные системы иммунокомпетентных клеток (Т.П. Гажеева и др., 1994). В связи с этим использование УФ-облучения с целью стимулирования компонентов иммунной системы и возможного применения активированных иммуноцитов в комплексной терапии опухолей является одним из перспективных направлений фотоиммунологии.

Изучение деструктивно-модифицирующего, регуляторного и лечебно-профилактического действия АУФОК тесно связано с выяснением биологической роли активированных кислородных метаболитов (АКМ), образующихся при протекании разнообразных темновых и фотоиндуцированных реакций (У. Прайор, 1979; Е.Б. Меныцикова, Н.К. Зенков, 1997; A.A. Болдырев, 2003; Г.С. Шаповал, В.Ф. Громовая, 2003). Учитывая противоречивую и неполную информацию о направленности изменений структурнофункционального состояния иммуноцитов в условиях оксидативной модификации, необходимо проведение исследований, позволяющих оценить вклад активных форм кислорода (АФК) в процесс УФ-модификации клеток крови для его целенаправленной регуляции.

Для стабилизации различных патологических состояний организма, сопровождающихся избыточным накоплением АФК и гипофункцией антиок-сидантной системы, что наблюдается при действии экстремальных факторов (УФ- и ионизирующего излучений, некоторых ксенобиотиков, активации

О-}нейтрофилов и фагоцитов, избытке кислорода, гема, Бе" , Си" ), необходима разработка способов эффективной утилизации АКМ и повышения устойчивости клеток и их компонентов к оксидативной модификации и фотоокислению.

Биогенные амины являются нейромедиаторами, участвующими в проведении нервного возбуждения, формировании эмоций, поведения, адаптации, памяти, обучения, а также локальными и дистантными гормонами, регулирующими процессы воспаления, аллергии, стрессовой реакции и др. (И.Л. Вайсфельд, Г.Н. Кассиль, 1981; Н.Г. Сергиенко и др., 1992; В.И. Кулинский, Л.С. Колесниченко, 2002). Показана способность биогенных аминов проявлять фотопротекторное действие по отношению к белковым макромолекулам (В.Г. Артюхов и др., 1994, 1997; Г.А. Вашанов, 1993; В.И. Кулинский,.Л.С. Колесниченко, 2002). Установлены механизмы фотопротекторного эффекта биогенных аминов при исследовании сочетанного влияния УФ-света и данных соединений на структурно-функциональное состояние макромолекул лактатдегидрогеназы из разных источников (М.А. Наквасина, 2006). Однако отсутствуют работы, касающиеся^ изучения роли биогенных аминов в регулировании структурно-фукционального состояния иммуноцитов в условиях воздействия экзогенных агентов. Исследования подобного рода интересны для выяснения механизмов патогенеза многих заболеваний (злокачественного роста клеток, аллергии, нервно-психических и др.) и межклеточных взаимодействий нервных и иммунных клеток в норме и после воздействия УФ-облучения и АФК.

Все вышеизложенное обусловило необходимость проведения экспериментов, направленных на выявление возможного модулирующего действия УФ-облучения, АФК и биогенных аминов на структурно-функциональные характеристики иммуноцитов человека, что позволит разработать методы направленной иммунокоррекции для комплексной'терапии опухолей и других заболеваний человека.

Цель и задачи диссертационной работы. Целью работы явилось изучение изменений структурно-функционального состояния лимфоцитов крови человека после УФ-облучения, воздействия активных форм кислорода в свободном состоянии и*в присутствии биогенных аминов.

Задачи работы предусматривали:

1. Исследование влияния УФ-света (240-390 нм) в дозах 75,5; 151; 755 и 1510 Дж/м~ на цитотоксическую активность, антителообразующую способность лимфоцитов, их жизнеспособность и уровень экспрессии некоторых рецепторных структур.

2. Изучение изменений цитотоксичности, антителообразующей и ФНО-продуцирующей способности, жизнеспособности и уровня экспрессии рецепторов лимфоцитарных клеток в условиях экзогенной генерации активных форм кислорода (супероксидного анион-радикала, гидроксильного радикала, синглетного кислорода и пероксида водорода).

3. Исследование сочетанного действия УФ-облучения (75,5; 151; 755 и 1510 Дж/м~) и биогенных аминов (гистамина, серотонина, дофамина и адреналина) на структурно-функциональные свойства лимфоцитов (цитотоксич-ность, антителообразующую и ФНО-продуцирующую способность, жизнеспособность, уровнень экспрессии некоторых мембранных рецепторов).

Научная новизна. Работа представляет собой систематическое исследование структурно-функциональных изменений лимфоцитарных клеток человека после воздействия УФ-излучения, активных форм кислорода в присутствии биогенных аминов (гистамин, серотонин, дофамин, адреналин).

Обнаружено корригирующее действие УФ-облучения в дозах 75,5; 151; 755 и 1510 Дж/м" на цитотоксическую активность лимфоцитов доноров по отношению к клеткам асцитной карциномы Эрлиха.

Показана взаимосвязь изменений функциональных свойств (цитоток-сической и антителообразующей способности) фотомодифицированных лимфоцитов с уровнем экспрессии их мембранных рецепторов (Fc-, CD3, CD8, CD 19, CD56).

Предложена схема отдельных звеньев модифицирующего действия УФ-излучения на структурно-функциональные свойства лимфоцитов человека.

Выявлено модулирующее действие УФ-света и биогенных аминов на цитотоксическую активность лимфоцитов человека, обусловленное изменением экспрессии некоторых рецепторов (Fc-, CD8), участвующих в реализации функционального ответа иммуноцитов.

Практическая значимость. Научные положения диссертационной работы расширяют и углубляют современные представления о функционировании отдельных звеньев иммунного ответа в условиях воздействия физико-химических факторов (УФ-света, активных форм кислорода и биогенных аминов).

Материалы исследований модулирующего действия биогенных аминов по отношению к некоторым характеристикам лимфоцитарных клеток, ответственных за противоопухолевую защиту, до и после УФ-облучения^ позволят выработать новые подходы к иммунокоррекции основных звеньев иммунного ответа при злокачественном росте клеток. Эксперименты с использованием биогенных аминов также важны для понимания механизмов тонкой регуляции функционирования иммуноцитов в норме, при патологии, после воздействия экзогенных агентов, а также физико-химических основ нейро-иммунных взаимодействий.

Апробация работы. Материалы диссертационной работы доложены и обсуждены на III Международном конгрессе «Слабые и сверхслабые поля и излучения в биологии и медицине» (Санкт-Петербург, 2003); ПГ Internation conference «Reactive oxygen and nitrogen species, antioxidants and human healt» (Smolensk, 2003); III« съезде биофизиков России (Воронеж, 2004); Международной научной конференции «Молекулярные, мембранные и клеточные основы функционирования биосистем» (Минск, 2004); Международной научной конференции «Биотехнология - охране окружающей среды» (Москва, 2004); I съезде физиологов СНГ (Сочи, 2005); IV съезде фотобиологов России (Саратов, 2005); III Международной конференции «Электромагнитные излучения в биологии» (Калуга,, 2005); Научной сессии сотрудников Воронежского госуниверситета (Воронеж, 2005); III Международной конференции ИН-ТЕРНАС 2007 «Актуальные проблемы современного естествознания» (Калуга, 2007).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 6 статей и 10 тезисов.

На защиту выносятся следующие положения: Л

1. УФ-свет (240-390 нм) в дозах 75-,5-4510 Дж/м оказывает корригирующее действие на цитотоксическую активность лимфоцитов человека. л

2. Направленность фотоиндуцированных (75,5^-1510 Дж/м ) изменений функциональных свойств лимфоцитов коррелирует с уровнем экспрессии рецепторов (Fc-рецепторов, CD3, CD8, CD 19, CD56) мембраны лимфоцитов после УФ-облучения.

3. Активные формы кислорода (О25ОН", Н2О2) выступают в роли эффективных модуляторов структурно-функционального состояния лимфоцитов крови человека. у

4. Сочетанное действие УФ-света (75,5^-1510 Дж/м") и биогенных аминов позволило выявить новые звенья и направления в механизме действия названных агентов на структурно-функциональное состояние лимфоцитар-ных клеток: отчетливо наблюдается активирующее действие дофамина на цитотоксичность и уровень экспрессии рецепторов фотомодифицированных клеток; инактивирующее действие гистамина, дофамина и серотонина на изучаемые параметры иммуноцитов проявляется преимущественно при макл симальной дозе УФ-облучения (1510 Дж/м ).

5. Схема модулирующего действия УФ-излучения на структурно-функциональные свойства лимфоцитов человека.

Структура и объем диссертации. Диссертационная работа включает 199 страниц машинописного текста, 8 таблиц, 41 рисунок. Состоит из «Введения», семи глав, «Заключения», «Выводов». Список литературы содержит 270 источников, из них 135 отечественных и 135 зарубежных.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение Диссертация по теме "Биофизика", Попова, Людмила Ивановна

выводы

-у

1. УФ-свет (240-390 нм) в дозах 75,5-4510 Дж/м~ оказывает корригирующее действие на цитотоксическую активность лимфоцитов донорской крови. Направленность фотоиндуцированных изменений цитотоксической активности лимфоцитов зависит от исходных величин исследуемого параметра.

2. Выявлено снижение антителообразующей способности В-лимфоцитов (по IgM и G) после УФ-облучения^в дозах 75,5-И 510 Дж/м".,

3. Установлено повышение уровня экспрессии Fc-рецепторов (2 группа доноров), CD3, CD8, CD56 маркеров и снижение количества Fc-рецепторов (1 группа доноров), CD19 маркеров на УФ-модифицированной (75,5-^-1510 Дж/м2) мембране лимфоцитов, которые обусловливают направленность изменений функциональных свойств иммуноцитов после их УФ-облучения.

4. Обнаружено, что в условиях генерации активных форм кислорода

02, ОН', Н202) происходит уменьшение уровня цитотоксической активности лимфоцитов по сравнению с таковым немодифицированных клеток.

5. Показано снижение уровня антителообразующей способности (по IgG) В-лимфоцитов в условиях экзогенной генерации пероксида водорода и гидроксильного радикала. При использовании системы генерации супероксидного анион-радикала наблюдалось усиление процесса синтеза антител класса G В-клетками.

6. При исследовании изменений уровня ФНОа лимфоцитов в условиях их оксидативной модификации выявлено, что 02 и ОН" стимулируют продукцию данного цитокина, в то время как Н202 проявляет ингибирующее действие по отношению к величине тестируемого параметра.

7. В условиях экзогенной генерации АФК (02> ОН*, Н202) выявлялось, преимущественно, снижение уровня экспрессии рецепторов лимфоцитов (Fc-рецепторов, CD3, CD19, CD56) по сравнению с таковым нативных клеток. Q

8. Показано, что гистамин (10" моль/л) повышает цитотоксическую активность иммуноцитов, фотомодифицированных в диапазоне доз 75,5-И 510 Дж/м2 (смесь клеток) и в дозе 75,5 Дж/м2 (Т-популяция). Дофамин (10"8, 10"7 и 10"6 моль/л) стимулирует функциональный ответ смеси лимфоцитов и их Т-популяции, облученных УФ-светом преимущественно во всем названном ин

8 7 6 тервале доз. Серотонин (10" , 10" и 10" моль/л) вызывает снижение цитоток-сичности лимфоцитов, облученных максимальными дозами УФ-света (755 и 1510 Дж/м2).

9. Установлено, что гистамин и дофамин в концентрации 10"7 моль/л индуцируют снижение продукции антител класса G В-лимфоцитами. Соче-танное действие УФ-света (75,5 Дж/м") и биогенных аминов приводит к увеличению уровня антителообразующей способности иммуноцитов по сравнению с таковым свободных фотомодифицированных клеток; при использовагу нии максимальной дозы облучения (1510 Дж/м ) наблюдалось уменьшение величины тестируемого параметра.

10. Обнаружено снижение уровня ФНОа лимфоцитов после их инкубации с биогенными аминами (гистамином, серотонином, адреналином и доу фамином) в концентрации 10' моль/л.

11. Сочетанное действие УФ-света в дозе 75,5 Дж/м2 и биогенных амио /г нов

10-10"° моль/л), в большинстве случаев, индуцировало повышение уровня экспрессии CD8 лимфоцитов. Активирующее действие на уровень экспрессии CD8 лимфоцитов, УФ-облученных в дозах 151; 755; 1510.Дж/м2, наблюдается в случае применения адреналина. Снижение величины тестируемого параметра имеет место после добавления к фотомодифицированным о п g в тех же дозах клеткам гистамина и серотонина (10" , 10" , 10" моль/л).

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

С помощью методов иммуноферментного, МТТ-анализа, определения антителообразующей и ФНО-продуцирующей способности, жизнеспособности лимфоцитов исследованы изменения структурно-функциональных свойств лимфоцитарных клеток человека в условиях воздействия УФ-света (240-390 нм) в дозах 75,5-^1510 Дж/м и активных форм кислорода (супероксидного анион-радикала, гидроксильного радикала, синглетного кислорода и пероксида водорода) в присутствии биогенных аминов (адреналина, дофамина, гистамина и серотонина).

Выявлено корригирующее действие УФ-излучения (75,5-4510 Дж/м") на цитотоксическую активность смеси лимфоцитов человека и их Т-популяции по отношению к клеткам асцитной карциномы Эрлиха. УФ-облучение свободных лимфоцитов индуцирует дозозависимое снижение числа жизнеспособных опухолевых клеток. Обнаружено, что воздействие УФ-света вызывает уменьшение антителопродуцирующей способности В-лимфоцитов по отношению к антителам класса М и G во всем использованном диапазоне доз. Таким образом, вклад антителозависимого механизма ци-тотоксичности, реализующегося за счет образования комплекса клетка-мишень — антитело класса G - NK, в повышение общей цитотоксической активности лимфоцитов в условиях УФ-облучения, невелик.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Попова, Людмила Ивановна, Воронеж

1. Абрамов В.В. Взаимодействие иммунной и нервной систем 7 В.В. Абрамов. — Новосибирск: Наука; 1988. — 166 с.

2. Адо А.Д. О некоторых свойствах и взаимодействии рецепторов мембран лимфоцитов / А.Д. Адо // Иммунология.— 1993. :— № 6. — С. 12—17.

3. Алексеев Л.П. Молекулярная генетика системы HLA / Л.П. Алексеев, Р.Г. Василов // Трансплантация органов. — 1995. — № 2. — С. 3—11.

4. Артюхов В.Г. Биологические мембраны: структурная организация, функции, модификация физико-химическими агентами / В.Г. Артюхов, М. А. Наквасина. — Воронеж: Изд-во Воронеж, ун-та, 2000. — 296 с.

5. Артюхов В1Г. Биофизика: Учебное пособие / В.Г. Артюхов, Т.А. Ковалева, В.П. Шмелев. — Воронеж: Изд-во Воронеж, ун-та, 1994. — 336 с:

6. Арцишевская P.A. Десорбция гликопротеинов с поверхности лимфоцитов периферической крови человека после облучения коротковолновыми УФ-лучами / P.A. Арцишевская, А.П. Миронова, К.А. Ca-, мойлова // Цитология. — 1984. —№ 2. — С. 209—214.

7. Атлас микроскопического и ультрамикроскопического строения клеток, тканей и органов / В.Г. Елисеев и др.. — М.: Медицина, 2004. — 448 с.

8. Бизюкин A.B. Использование флуоресцентного индикатора гидро-этидина для изучения окислительного метаболизма фагоцитов / A.B. Бизюкин, Л.Г. Коркина // Клиническая лабораторная диагностика. —: 1994. — № 1. — С. 41—42.

9. Биленко М.В. Ишемические и реперфузионные повреждения органов / М.В. Биленко. — М.: Медицина, 1989. — 145 с.

10. Биологический энциклопедический словарь / Под ред. М.С. Гиляро-ва. — М.: Изд-во Большая российская энциклопедия, 1995. — 864 с.

11. Биохимия человека: в 2-х т. / Р. Марри и др.. — М.: Мир, 1993. — Т. 1. —415с.

12. Биохимия: учебник / Под ред. Е.С. Северина. — М.: ГЭОТАР-МЕД, 2003. —784 с.

13. Боголюбов В.М. Ультрафиолет: польза и вред / В.М. Боголюбов // Физиотерапия, бальнеология и реабилитация. — 2003. — № 5. — С. 3—8.

14. Болдырев A.A. Роль активных форм кислорода в жизнедеятельности нейрона / A.A. Болдырев // Успехи физиологических наук. — 2003. — Т. 34, № 3. — С. 21—34.

15. Брондз Б.Д. Молекулярные и клеточные аспекты иммунологического распознвания / Б.Д. Брондз, О.В. Рохлин. — М.: Наука, 1978. — 336. с.

16. Бурлакова Е.Б. Система окислительно-восстановительного гомеоста-за в радиационно-индуцированной нестабильности / Е.Б. Бурлакова, В.Ф. Михайлов, В.К. Мазурик // Радиационная биология. Радиоэкология. — 2001. — Т. 41, № 5. — С. 489—499.

17. Вайсфельд И.Л. Гистамин в биохимии и физиологии / И.Л. Вайс-фельд, Г.Н. Кассиль. — М.: Наука, 1981. — 227 с.

18. Вальтер Т. Фагоцитарная активность гранулоцитов после УФ-облучения / Т. Вальтер, М. Риттер, В. Гаст // Биофизика. — 1989. — Т. 34, № 6. — С. 1001—1003.

19. Вашанов Г.А. Анализ структурно-функционального состояния некоторых транспортных белков крови в условиях различного микроокружения: дис. . канд. биол. наук / Г.А. Вашанов. — Воронеж, 1993. —157 с.

20. Вершигора А.Е. Общая иммунология / А.Е. Вершигора. — Киев: Вища школа, 1990. — 736 с.

21. Вершигора А.Е. Основы иммунологии / А.Е. Вершигора. — Киев: Вища школа, 1980. — 504 с.

22. Взаимодействие гипохлорита с оксигемоглобином приводит к освобождению железа в каталитически активной форме / Э.Ш. Якутова и др. // Биофизика. — 1992. — Т. 39, вып. 2. — С. 275—279.

23. Владимиров Ю.А. Хемилюминесценция клеток животных / Ю.А: Владимиров, М.П. Шерстнев // Итоги науки и техники. Gep. Иммунология. — 1989. — Т. 24. — С. 1—176.

24. Влияние ультрафиолетового облучения крови на антиинфекционную резистентность больных с гнойно-воспалительными процессами / К.И. Савицкая,и др. // Хирургия. — 1988. — № 4. — С. 22—28.

25. Внутриклеточный окислительный стресс и апоптоз / Н.К. Зенков и др..// Успехи современной биологии. — 1999. — Т. 119, № 5. — С. 440—450.

26. Волгарева Е.В. Влияние УФ-облучения в терапевтической дозе и УФ-облученной крови на пролиферативную и рецепторную активность. аутологичных лимфоцитов / Е.В. Волгарева // Цитология. — 1991. —№9. —С. 59.

27. Волгарева Е.В. Влияние УФ-облучения и УФ-облученной аутологич-ной крови на функциональное состояние лимфоцитов периферической крови человека / Е.В. Волгарева, А.П. Волгарев, К.А. Самойлова // Цитология. — 1990. — № 12. — С. 1217—1223.

28. Вольский H.H. Влияние супероксидного радикала на пролиферацию лимфоцитов, стимулированную митогеном / H.H. Вольский, Н.В. Кашлакова, В.А. Козлов // Цитология. — 1988. — Т. 30, № 7. — С. 898—902.

29. Гаврилов O.K. Клетки костного мозга и периферической крови / O.K. Гаврилов, Г.И. Козинец, Н.Б. Черняк. — М.: Медицина, 1995. — 288с.

30. Гажеева Т.П. Иммунокорригирующее действие ультрафиолетового облучения крови у больных с различными видами патологии / Т.П. Гажеева, Н.И. Васин, С.А. Мухина // Казанский мед. журн. — 1994.1. Т. 75, № 6. — С. 419—424.

31. Галактионов В.Г. Иммунология / В.Г. Галактионов. — М.: Изд-во МГУ, 1998. —480 с.

32. Гамалей И.А. Перекись водорода как сигнальная молекула / И.А. Гамалей, И.В. Клюбин // Цитология. — 1996. — Т. 38, № 12. — С. 1233—1247.

33. Гамова И.М. Изменения экспрессии мембранных рецепторов имму-нокомпетентных клеток крови, индуцированные различными методами фотомодификации крови / И.М. Гамова, К.Д. Оболенская, К.А. Самойлова // Цитология. — 1991. — Т. 33, № 9. — С. 63.

34. Двурекова Е.А. Структурно-функциональное состояние иммуноци-тов при их взаимодействии с гуморальными факторами иммунной системы в условиях УФ-облучения: дис. . канд. биол. наук / Е.А. Двурекова. — Воронеж, 2005. — 208 с.

35. Дмитриев Е.В. Модуляция структурно-функциональных изменений мембран Т- и В-лимфоцитов крови человека некоторыми химическими и физическими агентами: дис. . канд. биол. наук / Е.В. Дмитриев. — Воронеж, 2003. — 161 с.

36. Дранник Г.Н. Иммунология / Г.Н. Дранник. — Киев: Медицинское информационное агентство, 2003. — 350 с.

37. Дубинина Е.Е. Роль активных форм кислорода в качестве сигнальных молекул в метаболизме тканей при. состояниях окислительного стресса / Е.Е. Дубинина // Вопр. мед. химии. — 2001. — Т. 47, № 6.1. С. 561—581.

38. Елисеева Л.С. Влияние иммунизации на связывание серотонина клетками иммунекомпетентных тканей мышей /Л.С. Елисеева, Л.Е.

39. Стефанович, B.C. Попова // Иммунология. — 1983. — № 4. — С. 45—48.

40. Зарецкая Ю.М. Клиническая иммуногенетика / Ю.М. Зарецкая. — М.: Медицина, 1983. — 208 с.

41. Зенков Н.К. Активированные кислородные метаболиты в биологических системах / Н.К Зенков, Е.Б. Меньшикова // Успехи современной биологии. — 1993. — Т. 113, вып. 3. — С. 286—296.

42. Зенков Н.К. Окислительный стресс: биохимический и патофизиологический аспекты / Н.К. Зенков, В.З. Ланкин, Е.Б. Меньшикова. — М.: МАИК «Наука / Интерпериодика», 2001. — 343 с.

43. Изменение иммунной реакции у животных в условиях активации и блокады Д. дофаминовых рецепторов / Л.В. Девойно и др.] // Экспериментальная и клиническая фармакология. — 2004. — Т. 67, № 3. — С. 48—50.

44. Изменения поверхности и активации циркулирующих лейкоцитов при аутотрансфузиях УФ-облученной крови / К.А. Самойлова и др. // Вестн. хирургии. — 1990. — Т. 144, № 6. — С. 99—105.

45. Иммунология: в 3-х т. / У. Пол и др.; перевод с англ. Т.И. Власик; под ред. У. Пола — М.: Мир, 1987. — Т. 3. — 340 с.

46. Искусных А.Ю. Исследование механизмов окислительно-восстановительного гомеостаза на примере системы «активированные нейтрофилы — пероксидное окисление липидов антиоксидан-ты»: дис. . канд. биол. наук / А.Ю. Искусных. — Воронеж, 2004. — 158 с.

47. Каган В.Е. Проблема анализа эндогенных продуктов перекисного окисления липидов / В.Е. Каган, О.Н. Орлов, Л.Л. Прилипко // Итоги науки и техники. Сер. Биофизика. — 1986. — Т. 18. — С. 1—135.

48. Калинкина Г.И. Метод определения антиоксидантной активности растительных водно-спиртовых экстрактов / Г.И. Калинкина, С.И. Писарева // Хим.-фарм. журн. — 1992. —№ 1. — С. 65—66.

49. Карандашов В.И. Ультрафиолетовое облучение крови / В.И. Каран-дашов, Е.Б. Петухов. — М.: Медицина, 1997. — 224 с.

50. Кетлинский С.А. Роль Т-хелперов типов 1 и 2 в регуляции клеточного и гуморального иммунитета / С.А. Кетлинский // Иммунология. — 2002. —№2. — С. 77—79.

51. Клетки крови и костного мозга: атлас / Под ред. Г.И. Козинца. — М.: Мед. информ. агентство, 2004. — 203 с.

52. Клинико-иммунологические параллели при лечении больных ауто-трансфузией УФ-облученной крови / А.Ф. Гаврилова и др. // Механизмы влияния облученной ультрафиолетовыми лучами крови на организм человека и животных. — Л., 1986. — С. 74—79.

53. Клиническая иммунология и аллергология / Под ред. A.B. Караулова. — М.: Мед. информ. агентство, 2002. — 651 с.

54. Колтаков И.А. Исследование структурно-функционального состояния Т-лимфоцитов крови человека при модификации а-интерфероном и в условиях УФ-облучения: дис. . канд. биол. наук / И.А. Колтаков. — Воронеж, 2007. — 130 с.

55. Котова С.Л. Внутриклеточная регуляция взаимодействия гистамина с рецепторами в норме и при атопии / С.Л. Котова, Н.М. Бережная // Иммунология. — 1992. — № 5. — С. 4—7.

56. Котова С.Л. Дифференцированная оценка взаимодействия гистамина с Т- и B-лимфоцитами периферической крови больных с атопиче-скими заболеваниями / С.Л. Котова, О.В. Белова, Н.М. Бережная // Иммунология. — 1995. — № 1. — С. 53—55.

57. Красновский A.A. Синглетный молекулярный кислород: механизмы образования и пути дезактивации в фотосинтетических системах / A.A. Красновский // Биофизика. — 1994. — Т. 39, вып. 2. — С. 236— 250.

58. Кровь и инфекция / Г.И. Козинец и др.. — М.: Триада-фарм, 2001. — 456 с.

59. Крыленков В.А. Электронно-микроскопическое исследование поверхности необлученных и УФ-облученных лимфоцитов крови человека / В.А. Крыленков, М.С. Брудная, Я.Ю. Комиссарчик // Цитология. — 1983. — № 4. — С. 476—479.

60. Крымский Л.Д. Растровая электронная микроскопия сосудов и крови / Л.Д. Крымский. — М.: Медицина, 1976. — 372 с.

61. Кузин A.M. Структурно-метаболическая теория в радиобиологии / A.M. Кузин. — М.: Наука, 1986. — 142 с.

62. Кулинский В.И. Катехоламины: биохимия, фармакология, физиология, клиника / В.И. Кулинский, Л.С. Колесниченко // Вопр. мед. химии. — 2002. — Т. 48, № 1. — С. 44—67.

63. Купер М. Иммунология: в 3-х т. / М. Купер, Д. Керни, И. Шер. — М.: Медицина, 1987-1988. — Т. 1: В-лимфоциты. — 92с.

64. Курский М.Д. Биохимические основы механизма действия серотони-на / М.Д. Курский, Н.С. Бакшеев. — Киев: Наукова думка, 1974. — 296 с.

65. Кцоян Л.А. р2-адренорецепторы в иммуномодуляции: современные представления и будущие направления (обзор) / Л.А. Кцоян, P.A. Петросян // Терапевтический архив. — 2002. — № 10. — С. 45—48.

66. Лакин Г.Ф. Биометрия / Г.Ф. Лакин. — М.: Высшая школа, 1990. — 351 с.

67. Лимфоциты: методы / Под ред. Дж. Клауса. — М.: Мир, 1990 — 395 с.

68. Лю Б.Н. Кислородно-перекисиая концепция апоптоза и возможные варианты его механизма / Б.Н. Лю // Успехи современной биологии. — 2001. —Т. 121, №5.,— С. 488—501.ы

69. Ляшенко В.А. Механизмы активации иммунокомпетентных клеток /

70. B.А. Ляшенко, В.А. Дроженников, И.М. Молотковская. — М.: Медицина, 1988. —240 с.

71. Макарков А.И. Механизмы регуляции экспрессии поверхностных структур дифференцированного лимфоцита / А.И. Макарков, Г.В. Порядин, Ж.М. Салмаси // Иммунология. — 1997. — № 3. — С. 4—8.

72. Мартынова Е.А. Влияние сфинголипидов на активацию Т-лимфоцитов / Е.А. Мартынова // Биохимия. — 1998. — Т. 63, № 1. —1. C. 122—132.

73. Маянский А.Н. Очерки о нейтрофиле и макрофаге / А.Н. Маянский, Д.Н. Маянский. — Новосибирск: Наука, 1989. — 340 с.

74. Маянский А.Н. Реактивность и медиаторные функции интестиналь-ных эпителиоцитов в системе мукозального гомеостаза / А.Н. Маянский, И.В. Маянская // Иммунология. — 2004. — № 3. — С. 185— 192.

75. Мембраны субклеточных органелл как источник супероксидных радикалов при ишемии печени / Л.С. Вартанян и др. // Бюл. экспериментальной биологии и медицины. — 1990. — № 6. — С. 550—552.

76. Меньшикова Е.Б. Окислительный стресс при воспалении / Е.Б. Меньшикова, Н.К. Зенков // Успехи современной биологии. — 1997. — Т. 117, вып. 2. —С. 155—157.

77. Митюшин В.М. Электронномикроскопическое исследование ультраструктуры клеток асцитной карциномы Эрлиха / В.М. Митюшин // Цитология. — 1962. — Т. IV, № 5. — С. 504—507.

78. Михайлов В.Ф. Сигнальная функция активных форм кислорода в ре-гуляторных сетях ответа клеток на повреждающие воздействия: участие в реализации радиочувствительности и нестабильности генома /

79. B.Ф. Михайлов, В.К. Мазурик, Е.Б. Бурлакова // Радиационная.биология. Радиоэкология. — 2003. — Т. 43, № 1. — С. 5—18.

80. Михилева Е.А. Модуляция физико-химическими агентами структурно-функционального состояния нейтрофилов крови человека: дис. . канд. биол. наук / Е.А. Михилева. — Воронеж, 2006. — 201 с.

81. Модуляция апоптоза нейтрофилов периферической крови человека УФ-излучением диапазона С и у-излучением / М.Г. Винокуров и др. // Биофизика. — 1999. — Т. 44, № 5. — С. 929—930.

82. Модуляция перекисного окисления липидов биогенными аминами в модельных системах / Е.Б. Бурлакова и др. // Вопр. мед. химии. — 1992. —№2. —С. 17—20.

83. Мушкамбаров H.H. Молекулярная биология / H.H. Мушкамбаров,

84. C.JI. Кузнецов. — М.: Мед. информ. агентство, 2003. — 544 с.

85. Некоторые аспекты клинического применения коротковолнового спектра ультрафиолетового облучения крови / М.М. Петров и др. // Эфферентная терапия. — 2004. — Т. 10; № 1. — С. 10—12.

86. Новиков Д.К. Оценка иммунного статуса / Д.К. Новиков, В.И. Новикова. — Витебск, М.: Медицина, 1996. — 282 с.

87. Олигомерные белки: структурно-функциональные модификации и роль субъединичных контактов / В.Г. Артюхов и др.. — Воронеж: Изд-во Воронеж, ун-та, 1997. — 264 с.

88. Определение субпопуляций Т- и B-лимфоцитов в крови человека иммунофлюоресцентным методом / В. X. Хавинсон и др. // Лабораторное дело. — 1989. — №9. — С. 58—61.

89. Осипов А.Н. Активированные формы кислорода и их роль в организме / А.Н. Осипов, O.A. Азизова, Ю.А. Владимиров // Успехи биол. химии.— 1990. —Т. 31. —С. 180—208.

90. Петров Р.В. Иммунология / Р.В. Петров. — М.: Медицина, 1987. — 416 с.

91. Пинегин Б.В. NK-клетки: свойства и функции / Б.В. Пинегин, C.B. Дамбаева // Иммунология. — 2007. — № 2. — С. 105—113.

92. Планельс Х.Х. Серотонин и его значение в инфекционной патологии / Х.Х. Планельс, З.А. Попенкова. — М.: Медицина, 1992. — 226 с.

93. Пыцкий В.И. Аллергические заболевания / В.И. Пыцкий, Н.В. Ад-рианова, A.B. Артомасова. —М.: Медицина, 1991. — 366 с.

94. Разумовский С.Д. Кислород элементарные формы и свойства / С.Д. Разумовский. — М.: Химия, 1979. — 126 с.

95. Робинсон Дж. Принципы мембранной структуры / Дж. Робинсон // Биологические мембраны: двенадцать очерков о структуре, свойствах и функциях мембран: сб. науч. тр. / Под ред. Д.С. Парсонс. — М.: Наука, 1978. — С. 53—63.

96. Робинсон M.B. Морфология и метаболизм лимфоцитов / М.В. Робинсон, Л.Б. Топоркова, В.А. Труфакин. — Новосибирск: Наука, 1986. — 128 с.

97. Ройт А. Иммунология / А. Ройт, Д. Бростофф, Д. Мейл; пер. с англ. В.И. Кандрор и др.. — М.: Мир, 2000. — 581 с.

98. Ройт А. Основы иммунологии / А. Ройт. — М.: Мир, 1991. — 328 с.

99. Савостина И.Е. Исследование влияния УФ-света и иммуномодулято-ров на антиоксидантный статус и "состояние мембран лейкоцитов: дис. . канд. биол. наук / И.Е. Савостина. — Воронеж, 2005. — 202 с.

100. Самойлова,К.А. Выход веществ из лимфоцитов периферической крови, человека, облученных коротковолновыми УФ-лучами / К.А. Самойлова, А.П. Миронов, P.A. Арцишевская // Цитология. — 1984. — Т. 26, № 1. —С. 102—108.

101. Свистунова! 0:И. Гликозилированные белки сыворотки крови: тест— фруктозамин / О.И. Свистунова, В.Н. Титов // Клиническая лабораторная диагностика. — 1992. — № 11—12. — С. 22—30.

102. Свободно-радикальный механизм антимикробного действия ксанти-ноксидазы и лактопероксидазы / Д.В. Альперович и др. // Бюл. экспериментальной биологии и медицины. — 1992. — № 9. — С. 272— 274.

103. Свободные радикалы в биологии: в 2-х т. / Под ред. У. Прайора. — М.: Мир, 1979. — Т. 1. — 320 с.

104. Свободные радикалы в живых системах / Ю.А. Владимиров и др. // Итоги науки и техники. Сер. Биофизика. — 1991. — Т. 29. — С. 1— 249.

105. Сергиенко Н. Г. Биогенные моноамины и возбудимость головного мозга / Н. Г. Сергиенко, В. И. Грищенко, В. А. Логинова. — Киев: Наукова думка, 1992. — 148 с.

106. Сидорик Е.П. Биохемилюминесценция клеток при опухолевом процессе / Е.П. Сидорик, Е.А. Баглей, М.И. Данко. — Киев: Наукова думка, 1989. —218 с.

107. Сидорова Е.В. Субпопуляции В-лимфоцитов и их функциональная роль / Е.В. Сидорова // Успехи современной биологии. — 2002. — Т. 122, №5. —С. 467-479.

108. Скулачев В.П. Энергетика биологических мембран / В.П. Скулачев. — М.: Наука, 1989. — 564 с.

109. Теория и практика иммуноферментного анализа / Под ред. A.M. Егорова. — М.: Высшая школа, 1991. — 287 с.

110. Труфакин В.А. Иммуноморфологические аспекты аутоиммунных процессов / В.А. Труфакин. — Новосибирск: Наука, 1983. — 178 с.

111. Ультрафиолетовая фотомодификация функционального состояния лейкоцитов / Е.Б. Жибурт и др. // Эфферентная терапия. — 1995. — Т. 1, №3. — С. 56—58.

112. Уманский» Ю.А. Лимфоциты и опухолевый рост / Ю.А. Уманский, В.Г. Пинчук. — Киев: Наукова думка, 1982. — 256 с.

113. Физиология человека: учебник / Под ред. В.М. Смирнова. — М.: Медицина. 2002. — 608 с.

114. Фотобиология и мембранная биофизика / Под ред. И.Д. Волотовско-го. — Минск.: Технопринт, 1999 — 352 с.

115. Фотомодификация иммунокомпетентных клеток крови человека / В. А. Крыленков и др. // Бюл. экспериментальной биологии и медицины. — 1987. — № 5. — С. 1217—1223.

116. Фрейдлин И.С. Иммунная система и ее дефекты: руководство для врачей / И.С. Фрейдлин. — СПб: НТФФ: «Полисан», 1998. — 113 с.

117. Фрейдлин И.С. Клетки иммунной системы: в 5-ти т. / И.С. Фрейдлин, A.A. Тотолян. — СПб.: Наука, 2001. — Т. 3: Лимфоциты. — 197 с.

118. Фримель X. Основы иммунологии / X. Фримель, Й. Брок. — М.: Мир, 1986, —254 с.

119. Хаитов P.M. Иммунология / P.M. Хаитов, Г.А. Игнатьева, И.Г. Сидо-рович. — М.: Медицина, 2000. — 432 с.

120. Холмогоров В.Е. Первичные фотопроцессы в крови и ее компонентах при действии оптического излучения / В.Е. Холмогоров, В.А. Кры-ленков, М.А. Османов // Молекулярные механизмы биологического действия оптического излучения. — М., 1988. — С. 164—177.

121. Чертков И.Л. Стволовая лимфоидная клетка / И.Л. Чертков, А.Я. Фриденштейн // Успехи современной биологии. — 1972. — Т. 74, № 2. —С. 292—301.

122. Чумаков В.Н. Количественный метод определения активности,цинк-, медь-зависимой супероксиддисмутазы в биологическом материале /

123. B.Н. Чумаков, Л.Ф. Осинская // Вопр. мед. химии. — 1977. — Вып. 5.1. С. 712—716.

124. Шаповал Г.С. Механизмы антиоксидантной защиты организма при действии активных форм кислорода / Г.С. Шаповал, В.Ф. Громовая // Укр. биохим. журн. — 2003. — Т. 75, № 2. — С. 5—11.

125. Шаронов Б.П. Антиокислительные свойства и деградация белков сыворотки активными формами кислорода, генерируемыми стимулированными нейтрофилами / Б.П. Шаронов, Н.Ю. Говорова // Биохимия.1988. — Т. 53, вып. 5. — С. 816—825.

126. Шинкаренко Н.В. Химические свойства синглетного молекулярного кислорода и значение его в биологических системах / Н.В. Шинкаренко, В.Б. Алесковский // Успехи химии. — 1982. — Т. 51, № 5. —1. C. 713—735.

127. Шиффман Ф.Дж. Патофизиология крови / Ф.Дж. Шиффман; перевод с англ. — М.: Изд-во БИНОМ, 2000. — 448 с.

128. Эфферентная терапия / Под ред. A.JL Костюченко. — СПб: ООО Фолиант, 2003. —432 с.

129. Яздовский В.В. Система HLA / В.В. Яздовский // Гематология и трансфузиология. — 1993. — № 4. — С. 27—32.

130. Ярилин A.A. Основы иммунологии / A.A. Ярилин. — М.: Медицина, 1999. —607 с.

131. A hemopoitetic specific gene encoding a small GTP binding protein is overexpressed during T cell activation / L. Reibel et al. // Biochem. and Biophys. Res. Commun. — 1991. —V. 175. — P. 451—458.

132. A mammalian equivalent of the avian bursa of Fabricius / M. Cooper et al. //Lancet. — 1966, № 7452. — P. 1388—1391.

133. Activation of complement in normal serum by hydrogen peroxide and hydrogen peroxide-related oxygen radicals produced by activated neutrophils / M. Shingu et al. // Clin, and Experim. Immunol. — 1992. — V. 90. — P. 72—78.

134. Adenosine: an endogenous inhibitor of neutrophil-mediated injury to endothelial cells / B.N. Cronstein et al. // J. Clin. Invest. — 1986. — V. 78.1. P. 760—770.

135. Ager A. Differential effects of hydrogen peroxide on indices of endothelial cell function / A. Ager, J.L. Gordon // J. Exp. Med. — 1984. — V. 159.—P. 592—603.

136. Arginase induction by suppressors of nitric oxide synthesis (IL-4, IL-10, PGE2) in murine bone-marrow-derived macrophages / I.M. Corraliza et al. // Biochem. and Biophis. Res. Commun. — 1995. — V. 206. — P. 667—673.

137. Babcock G.T. O2 activation in cytochrome oxidase and in other heme proteins / G.T. Babcock, C. Varotsis, Y. Zhang // Biochim. et biophis. acta.1992. —V. 1101. —P. 192—194.

138. Babior B.M. Biological defense mechanisms. The production by leukocytes of superoxide, a potential bactericidal agent / B.M. Babior, R.S. Kipnes, J.T. Carnutte // J. Clin. Invest. — 1973. — V. 52. — P. 741—744.

139. Bandy B. Mitochondrial mutations may increase oxidative stress Implications for carcinogenesis and aging / B. Bandy, A.J. Davison // Free Radical Biol, and Med. — 1990. — V. 8. — P. 523—535.

140. Bast A. Oxidants and antioxidants: State of the art / A. Bast, G.R.M.M. Haenen, C.J.A. Doelman // Amer. J. Med. — 1991. — V. 91. — P. 2S— 13S.

141. Beawen M.A. Histamine / M.A. Beawen // N. Engl. J. Med. — 1976. — P. 30—36.

142. Bergelson L.D. Topological asymmetry of phospholipids in membranes / L.D. Bergelson, L.I. Barsukov // Sciense. — 1977. — V. 197, №4300. — P. 224—230.

143. Berki T. Photo-immunotargeting with haematoporphyrin conjugates activated by a lowpower He-Ne laser / T. Berki, P. Nemeth // Cancer Immunol. and Immunother. — 1992. — V. 35. — P. 69—74.

144. Black P.H. Shedding from normal and cancer cell surfaces / P.H. Black // N Engl. J. Med. — 1980. —V. 303, № 24. — P. 1415—1416.

145. Boes M. Degradation of membrane phospholipids by direct nucleophilic action of superoxide anion / M. Boes, C. Debye, J. Pincemail // Free Radicals, Lipoproteins and Membrane Lipids. — 1989. — V. 54. — P. 105— 113.

146. Bokoch G.M. The role of small GTP-binding proteins in leukocyte function / G.M. Bokoch, U.G. Knaus // Curr. Opin. Immunol. — 1994. — V. 6. —P. 98—105.

147. Buchanan J.E. The role of nitric oxide in the regulation of cerebral blood flow / J.E. Buchanan, J.W. Phillis // Brain Res. — 1993. — V. 610. — P. 248—255.

148. Cadenas E. Low-level chemiluminescence of biological systems / E. Cadenas, A. Boveris, B. Chance // Methods in Enzymology. — 1984. — V. 105. —P. 211—242.

149. Carbon monoxide: A putative neural messenger / A. Verma et al. // Science. — 1993. — V. 259. — P. 381—384.

150. Cell mediated citotoxicity against U 937 cells by human monocytes and macrophages in a modified colorimetric MTT-assay / A.A. Loosdrecht et al1. // J. Immun. Methods. — 1991. — V. 141. —P. 15—22.

151. Chemical nature of DNA-protein crosslinks produced in mammalian chromatin by hydrogen peroxide in the presence of iron or copper ions / Z. Nackerdien et all. // Biochemistry. — 1991. — V. 30. — P. 4873-^1879.

152. Cheung K. Luminol-dependent chemiluminescence produced by neutrophils stimulated by immune complexes / K. Cheung, A. Archibald, F. Robinson // Austr. J. Exp. Biol, and Med. Sei. — 1984. — V. 62, Pt. 4. — p. 403—419.

153. Chlorination of tyrosyl residues by myeloperoxidase and human neutrophils / N.M. Domigan et al. // J. Biol. Chem. — 1995. — V. 270. — P. 16542—16548.

154. Collier J. Endothelium-derived relaxing factor is an endogenous vasodilator in man / J. Collier, P. Vallanse // British. J. Pharmacol. — 1989. — V. 97. —P. 639—641.

155. Cornwell D.G. Fatty acid paradoxes in the control of cell proliferation: Prostaglandins, lipid peroxides, and cooxidation reactions / D.G. Cornwell, N. Morisaki // Free Radicals in Biology. — 1984. — V. 6. — P. 96—149. .

156. De Witt D.L. Prostaglandine endoperoxidase synthase: regulation of enzyme expression / D.L. De Witt // Biochim. et biophis. acta. — 1991. — V. 1083. —P. 121—134.

157. Debono D.P. Exposure to low concentrations of hydrogen peroxide causes delayed endothelial cells death and inhibits proliferation of surviving cells

158. D.P. Debono, W.D. Yang // Atherosclerosis. — 1995. — V. 114. — P. 235—245.

159. Do human neutrophils form hydroxyl radical? Evaluation of an unresolved controversy / M.S. Cohen et al. // Free Radical Biol, and Med. — 1988.1. V. 5.—P. 81—88.

160. Dougherty T.J. Photodynamic therapy / T.J. Dougherty, S.L. Marcus // Eur. J. Cancer. — 1992. — V. 28A. — P. 1734—1742.

161. Dwyer J. Modern concepts of antigen binding receptors on lymphocytes: their nature and role in immune response / J. Dwyer, I. Mackey // Eur. J. Clin. Biol. Res. — 1971. — V. 16, № 8. — P. 743—751.

162. Eaton J.W. Catalases and peroxidases and glutathione and hydrogen peroxide: Mysteries of the bestiary / J.W. Eaton // J. Lab. and Clin. Med. — 1991.—V. 118.—P. 3—4.

163. Eckl P.M. Genotoxic properties of 4-hydroxyalkenals and analogous aldehydes / P.M. Eckl, A. Ortner, H. Esterbauer // Mutat. Res. — 1993. — V. 290. —P. 183—192.

164. Fink P. H-2 antigens of the thymus determine lymphocyte specificity / P. Fink, M. Bevan // J. Exp. Med. — 1978. — V. 148, № 3. — P. 766—775.

165. Free radicals and inflammation: superoxidedependent activation of a neutrophil chemotactic factor in plasma / W.F. Petrone et al. // Proc. Natl. Acad. Sei. USA. — 1980. — V. 77. — P. 1159—1163.

166. Free radicals and other reactive oxygen metabolites in inflammatory bowel disease / M.L. Harris et al. // Pharmacol, and Therapy. — 1992.1. V. 53.—P. 375—408.

167. Gamaley I.A. Roles of reactive oxygen« species: signaling and regulation of cellular function / I.A. Gamaley, I.V. Klyubin // Int. Review. Cytol. — 1999. — № 188. — P. 203—255.

168. Glucose: a role as a free radical scavenger in biological systems / A.L. Sagone et al. // J. Lab. and Clin. Med. — 1983. — V. 101. — P. 97— 104.

169. Goldstein S. Mannitol as an OH' scavenger in aqueous solutions and in biological systems / S. Goldstein, G. Czapski // Int. J. Radiat. Biol. —1984. — V. 46. — P. 725—729.

170. Goldstein S. The Fenton reagents / S. Goldstein, D. Meyerstein, G. Czapski // Free Radical Biol, and Med. — 1993. — V. 15. — P. 435—446.

171. Gutteridge J.M.C. Iron promoters of the Fenton reaction and lipid peroxidation can be released from haemoglobin by peroxides / J:M.C. Gutteridge // FEBS Lett. — 1986. — V. 201. — P. 291—295.

172. Halliwell B. Biologically significant scavenging of the myeloperoxidase-derived oxidant hypoclorous acid by ascorbic acid / B. Halliwell, M. Wasil, M. Grootveld // FEBS Lett. — 1987. — V. 213. — P. 15—18.

173. Hamers M.N. Oxidative stress in human neutrophilic granulocytes: Host defense and self-defense / M.N. Hamers, D. Roos // Oxidative stress. —1985. —V. 145. —P. 351—381.

174. Harman D. Free radicals theory of aging / D. Harman // Mutat. Res. — 1992. — V. 275. — P. 257—266.

175. Henderson B.W. Release of prostaglandin E2 from cells by photodynamic treatment in vitro / B.W. Henderson, J.M. Donovan // Cancer Res. — 1989. — V. 49. — P. 6896—6900.

176. Herberman R. Natural Cell Mediated Immunity Against Tumors / R. Her-berman. —New York: Academic Press, 1980. — 215 p.

177. Hydrogen peroxide as an inducer of elevated tyrosinase level in melanoma cells / E. Karg et al. // J. Invest. Dermatol. — 1993. — V. 100. — P. 209S—213S.

178. Immunobiology: the immune system in health and disease / Ch. Janeway et al.. — London, 1999. — 635 p.

179. Induction of apoptosis in NK cells by monocyte-derived reactive oxygen metabolites / M. Hansson et al. // J. Immunol. — 1995. — V. 156. — P. 42-47.

180. Induction of rat aortic muscle cell growth by the lipid peroxidation product 4-hydroxy-2-nonenal / J. Ruef et al. // Circulation. — 1998. — V. 97.1. P. 1071—1078.

181. Infections affecting blood cell morphology / P.D. Phatak et al. // Amer. J. Hematol. — 1998. — V. 3. — P. 238—241.

182. Inhibition by reactive aldehydes of superoxide anion radical production in stimulated human neutrophils / G. Witz et al. // Chem. Biol. Int. — 1985.1. V. 53. —P. 13—23.

183. Integration of receptor- mediated signals in T-cells by transmembrane adapter proteins / B. Schraven et al. // Immunol. Today. — 1999. — V. 20. —P. 431—441.

184. Iwaoka T. Lipid peroxidation and lipid peroxide detected by chemilumi-nescence / T. Iwaoka, F. Tabata, T. Takahashi // Free Radical Biol, and Med. — 1987. — V. 3. — P. 329—333.

185. Junod A.F. Effects of oxygen intermediates on cellular functions / A.F. Junod // Amer. Revs. Respir. Dis. — 1987. — V. 135. — P. S32—S34.

186. Kammer G1M. Role of adenilate cyclase in human T-lymphocyte surface fhtigen capping / G.M. Kammer, C.A. Boehm, S.A. Rudolph // Cell. Immunol. — 1986. — V. 101, № 1. — P.251—258.

187. Kanofsky J.R. Singlet oxygen production by biological systems / J.R. Kanofsky // Chem.-Biol. Interact. — 1989. — V. 70. — P. 1—8.

188. Kneepkens C.M.F. The potential of the hydrocarbon breath test as a measure of lipid peroxidation / C.M.F. Kneepkens, G. Lepage, C.C. Roy // Free Radical Biol, and Med. — 1994. — V. 17. — P. 127—160.

189. Koga S. Mechanism for the generation of superoxide anion and singlet oxygen during heme compound-catalyzed linoleic acid hydroperoxide decomposition / S. Koga, M. Nakano, K. Uehara // Arch. Biochem. and Bio-phys. — 1991. — V. 289. — P. 223—229.

190. Kulms D. Ultraviolet radiation inhibits IL-2-induced tyrocine phosphorylation and. the activation of STAT5 in T-lymphocytes / D. Kulms, T. Schwarz // J. Biol. Chem. — 2001. — V. 276. — P. 12849—12855.

191. Lefer A.M. Endothelial dysfunction in myocardial ischemia and reperfusion: role of oxygen-derived radicals / A.M. Lefer, D.J Lefer // Basic. Res. Cardiol. —1991,—V. 86, Suppl 2. —P. 109—116.

192. Lennon S.V. Dose-dependent induction of apoptosis in human tumour cell lines by widely diverging stimuli / S.V. Lennon, S.J Martin, T.G. Cotter // Cell. Prolif. — 1991. — V. 24. — P. 203—214.

193. Link E.M. Enzymic pathways involved in cell response to H2C>2 / E.M. Link // Free Radical Res. Commun. — 1990. — V. 11. — P. 89—99.

194. Lipid hydroperoxides induce apoptosis in T cells displaying a HIV-associated glutathione peroxidase deficiensy / P.A. Sandstrom et al. // J. Biol. Chem. — 1994. — V. 269. — P. 798—901.

195. Lovaas E. Free radical generation and coupled thiol oxidation by lactoper-oxidase/SCN7H202 / E. Lovaas // Free Radical Biol, and Med. — 1992.1. V. 13. —P. 187—195.

196. Marano N. Bivalent binding of an anti-CD3 antibody to Jurcat cells induces association of the T-cells receptor complex with the cytoskeleton / N. Marano, D. Holowka, B. Baird // J. Immunol. — 1989. — V. 143, № 3.1. P. 931—938.

197. McCaughan J.S. Photodynamic therapy: a review / J.S. McCaughan // Drugs Aging. — 1999. — V. 15. — P. 49—68.

198. McCord J.M. Superoxide inactivates creatine phosphokinase during reperfusion of ischemic heart / J.M. McCord // Oxy-Radicals in Molecular Biology and Phatology. — N.Y.: Liss., 1988. — P. 27—35.

199. Mediators of immediate hypersensitivity. In: Cellular, Molecular and Clinical Aspect of Allergie Disoders, ed. by S. Gupta and R.A. Good / P.C. Ho |et al.. —New York, 1979. — P. 179—228.

200. Melmon K.L. Histamine and its congener derivatives immune modulators / K.L. Melmon, M.N. Khan // Trends in Pharmacol. Sci. — 1991, — V. 8, № 11. — P. 43 7—441.

201. Moncada S. Nitric oxide: physiology, pathophysiology and pharmacology / S. Moncada, R.MJ. Palmer, E.A. Higgs // Pharmacol. Revs. — 1991. — V. 43. — P. 109—142.

202. Morel P. Crossregulation between Th-1 and Th-2 cells / P. Morel,,T. Oriss // Critical Reviews in Immunol. — 1998. — V. 18. — P. 275—303.

203. Morphological differences; between thymus- and bone marrow-derived lymphocytes. I. A light microscopic and experimental study in instimu-lated mice / N. Vujanovic et al. // Differentiation. — 1974. — V. 2, №2.1. P. 107—117.

204. Muransky P. Nature CD4+ T-cells perceive a positively selecting class II MHC / peptide complex in the periphery / P. Muransky, B. Chmielowski, L. Ignatowicz // J. Immunol. — 2000. — V. 164. — P. 3087—3094.

205. Murrell G; Modulation of fibroblast proliferation by oxygen free radicals / G. Murrell, F.N. Bromley // Biochem. J. — 1990. — V. 265. — P. 659— 665.

206. Nascimento A.L.T.O.' Chemiexcitation in the arachidonic acid cascade / A.L.T.O. Nascimento, G. Cilento // Photochem. and Photobiol. — 1991.1. V. 53. — P. 379—384.

207. Natarajan V. 4-Hydroxynonenal, a metabolite of lipid peroxidation, activates phospholipase D in vascular endothelial cells / V. Natarajan, W.M.

208. Scribner, M.M. Taher // Free Radical Biol, and Med. — 1993. — V. 15.1. P. 365—377.

209. Natural killer cell-mediated lysis involves an hydroxy 1 radical-dependent step / A.K. Duwe et al. // J. Immunol. — 1985. — V. 134. — P. 2637— 2644.

210. Nishizuka Y. Protein kinases in signal transduction / Y. Nishizuka // Trends Biochem. Sei. — 1984. — V. 9, №4. — P. 163—166.

211. Nogueira N. Intracellular mechanisms of killing / N. Nogueira // Contemporary Topics in Immunobiology. — N.Y.: Liss., 1984. — P. 53—69.

212. Nohl H. Is redox-cycling ubiquinone involved in mitochondrial oxygen activation? / H. Nohl // Free Radical Res. Commun. — 1990. — V. 8. — P. 307—315.

213. Noronha-Dutra A.A. Reaction of nitric oxide with hydrogen peroxide as a model for nitric oxide-mediated killing / A.A. Noronha-Dutra, M.M. Epperlein, N. Woolf// FEBS Lett. — 1993. — V. 321. — P. 59—62.

214. Nussenzweig M. Lymphocyte activation and effector functions / M. Nus-senzweig, P. Golstein // Current Opinion in Immunologie. — 2000. — V. 12, №3, — P. 239—241.

215. Oxy-radical metabolism and control of tumour growth / T. Galeotti et al. // Xenobiotica. — 1991. — V. 21. — P. 1041—1052.

216. Perez H.D. Generation of a chemotactic lipid from arachidonic acid by exposure to a superoxidegenerating system / H.D. Perez // Inflammation.1980. — V. 4. — P. 313—328.

217. PGH synthase and lipoxygenase generate superoxide in the presence of NADH and NADPH / RS. Kukreja et al. // Circ. Res. — 1986. — V. 59.1. P. 612—619.

218. Physiological production of singlet molecular oxygen in the myeloperoxi-dase-H202-chloride system / C. Kiryu et al. // FEBS Lett. — 1999. — V. 443. —P. 154—158.

219. Plaut M. Histamine, Hj and H2 antihistamines and immediate hypersensitivity reactions / M. Plaut // I. Allergy Clin. Invest. — 1975. — P. 371— 375.

220. Pourzand Ch. Apoptosis, the role of oxidative stress and the example of solar UV-radiation / Ch. Pourzand, R.M. Tyrrell // Photochem. Photobiol.1999. — V. 70. — P. 380—385.

221. Prodczacy J.J. Reduction of iodonitrotetrazolium violet by superoxide radicals / JJ. Prodczacy, R. Wei // Biochem. and Biophys. Res. Comm. — 1988. —V. 150. —P. 1294—1301.

222. Proteolytic conversion of xanthine dehydrogenase from the NAD-dependent type to the CVdependent type / Y. Amaya et al. // J. Biol. Chem. — 1990. — V. 265. — P. 1470—1475.

223. Pryor W.A. Oxy-radicals and related species: their formation, lifetimes, and reactions / W.A. Pryor // Ann. Rev. Physiol. — 1986. — V. 48. — P. 657—667.

224. Rashba-Step J. ESR studies on the production of reactive oxygen intermediates by rat liver microsomes in the presence of NADPH or NADH / J. Rashba-Step, N.J. Turro, A.I. Cederbaum // Arch. Biochem. and Biophys.1993. — V. 300. — P. 401—408.

225. Reaction of Cr(IV) with ascorbate and hydrogen peroxide generates hy-droxyl radicals and causes DNA damage: role of a Cr(IV)-mediated Fen-ton-like reaction / X. Shi et al. // Carcinogeneses. — 1994. — V. 15. — P. 2475—2478.

226. Reduction in tumor necrosis factor and cytotoxicity by hydrogen peroxide / L. Baud et al. // J. Immunol. — 1990. — V. 166. — P. 556—560.

227. Release of iron from ferritin and its role on oxygen radicals toxicities / V.M. Samokyszyn et al. // Drug Metab. Rev. — 1988. — V. 19. — P. 283—303.

228. Repine J.E. Hydroxy 1 radical scavengers produce similar decreases in the chemiluminescence responses and bactericidal activities of neutrophils / J.E. Repine, K.S. Johansen, E.M. Berger // Infect, and Immun. — 1984. — V.43.— P. 435—437.

229. Riley J.C.M. Oxygen radicals and reactive oxygen species in reproduction / J.C.M. Riley, H.R. Behrman // Proc. Soc. Exp. Biol, and Med. — 1991.1. V. 198: —P. 781—791.

230. Rodewald H. Pathways from hematopoietic stem cells to thymocytes / H. Rodewald // Current Opinion in Immunol. — 1995. — V.7. — P. 176— 187.

231. Role of hydroxyl radicals in the activation of human platelets / L. Iuliano et al. // Eur. J. Biochem. — 1994. — V. 221. — P. 695—704.

232. Roots R. Estimation of life times and diffusion distances of radicals involved in X-ray-induced DNA strand breaks or killing of mammalian cells / R. Roots, S. Okada // Radiat. Res. — 1975. — V. 64. — P. 306—320.

233. Rubanyi C.M. Vascular effects of oxygen-derived free radicals / C.M. Rubanyi //Free Radical Biol, and Med. — 1988. — V. 4. — P. 107—121.

234. Rubin R. Mechanism of the killing of cultured by hepatocytes by hydrogen peroxide / R. Rubin // Arch. Biochem. and Biophys. — 1984. — V. 228.—P. 450—459.

235. Sell S. Studies on rabbit lymphocytes in vitro. I. Stimulation of blast transformation with anti-allotype serum / S. Sell, P.G.H. Gell // J. Exp. Med.1965. — V. 122. — P. 432—440.

236. Serotonin-induced production of a monocyte chemotactie factor by human peripheral blood leukocytes / K.A. Foon et al. // J. Immunol. — 1976. — V. 117. —P. 1545—1552.

237. Shi X. Flavoenzymes reduce vanadium (V) and molecular oxygen and generate hydroxyl radical / X. Shi, N.S. Dalai // Arch. Biochem. and Bio-phys. — 1991. —V.289. —P. 355—361.

238. Simon R.H. Hydrogen peroxide causes the fatal injury to human fibroblasts exposed to oxygen radicals / R.H. Simon, C.H. Scoggin, D. Patterson // J. Biol. Chem. — 1981. — V. 256. — P. 7181—7186.

239. Singlet oxygen ('Ag O2) as the principal oxidant in myeloperoxidase-mediated bacterial killing in neutriphil phagosome / H. Tatsuzawa et al. // Biochem. and Biophys. Res. Commun. — 1999. — V. 262. — P. 647— 650.

240. Sjoodin B. Biochemical mechanisms for oxygen free radical formation during exercise / B. Sjoodin, Y.H. Westing, F.S. Apple // Sports Med. — 1990. — V. 10. — P. 236—254.

241. Sohal R.S. Hydrogen peroxide production by liver mitochondria in different species / R.S. Sohal, I. Svensson, U.T. Brunk // Mech. Ageing and Develop. — 1990. — V. 53. — P. 209—215.

242. Steinbeck M.J. Intracellular singlet oxygen generation by phagocytosing neutrophils in response to particles coated with a chemical trap / M.J Steinbeck, A.U. Khan, M.G. Karnovsky // J. Biol. Chem. — 1992. — V. 267. —P. 13425—13423.

243. Structural requirements of aldehydes produced in LPO for the activation of the heat-shock genes in HeLa cells / P. Allevi et al. // Free Radical Biol, and Med. —1995.—V. 18.—P. 107—116.

244. Sullivan T.I. Ir. Immediate hypersensitivity response / T.I. Sullivan, A.K. Kulczycki // Clinical Immunology. — Philadelphia, 1980. — P. 115— 142.

245. Sundqvist T. Bovine aortic endothelial cells release hydrogen peroxide / T. Sundqvist//J. Cell. Physiol. — 1991. —V. 148. —P. 152—156.

246. Suzuki YJ. Inhibition of Ca -ATPase of vascular smooth muscle sarcoplasmic reticulum by reactive oxygen intermediates / Y.J. Suzuki, G.D. Ford// Amer. J. Physiol. — 1991. —V. 261. — P. H568—H574.

247. Takahama U. Hydrogen peroxide-dependent generation of singlet molecular oxygen by human saliva: Its detection by chemiluminescence from a cypridina luciferin analog / U. Takahama // Photochem. and Photobiol. — 1993. — V. 57. — P. 376—379.

248. The superoxide generating system of B cell lines. Structural homology with the phagocytic oxidase and triggering via surface Ig / F.E. Maly et al. // J. Immunol. — 1988. — V. 140. — P. 2334—2339.

249. Torrielli M.G. Free radicals in inflammatory disease / M.G. Torrielli, M.U. Dianzani // Free Radicals in Molecular Biology, Aging and Disease.

250. N.Y.: Raven Press, 1984. — P. 355—379.

251. Vanasbeck B.S. Involvement of oxygen radicals and blood cells in the pathogenesis of ARDS by endotoxin and hyperoxia / B.S. Vanasbeck // Appl. Cardiopulm. and Pathophysiol. — 1991. — V. 4. — P. 127—138.

252. Vissers M.C.M. Oxidative damage fibronectin 2. The effect of H202 and hydroxyl radical / M.C.M. Vissers, C.C. Winterbourn // Arch. Biochem. and Biophys. — 1991. — V. 285. — P. 357—365.

253. Ward J.F. A comparison of the enzymatic repair kinetics of ionizing radiation and of hydrogen peroxide induced DNA strand breaks in V79 cells / J.F. Ward, W.F. Blakely, J.B. Moberly // Radiat. Res. — 1983. — V. 94.1. P. 629—630.

254. Weisfeldt M.L. Oxygen-derived free radicals and myocardial ischemic injury / M.L. Weisfeldt, J.L. Zweier, J.T. Flaherty // Heart Dis. — 1988. — №3.— P. 60—72.

255. Weiss SJ. The interplay of oxidants and proteinases in neutrophil-mediated tissue damage / S.J. Weiss // J. Cell. Biochem. — 1991. — Suppl. 5c. —P. 210.

256. Weiss S J. The role of superoxide in the destruction of erythrocytS-targets by human neutrophils / S.J. Weiss // J. Biol. Chem. — 1980. — V. 255. — P. 9912—9917.

257. Weitzman S.A. Inflammation and cancer role of phagocyte-generated oxidants in carcinogenesis / S.A. Weitzman, L.I. Gordon // Blood. — 1990. — V. 76. — P. 655—663.

258. Wendel A. Enzymes acting against reactive oxygen / A. Wendel // Enzymes: Tools and Targets. — Basel: Karger, 1988. — P. 161—167.

259. Willson R.L. Organic peroxy free radicals as ultimate agents in oxygen toxicity / R.L. Willson // Oxidative Stress. — L.: Acad. Press, 1985. — P. 41—72.

260. Wu S.M. Mechanism of hypochlorite-mediated inactivation of proteinase inhibition by alpha 2-macroglobulin / S.M. Wu, S.V. Pizzo // Biochemistry. — 1999. — V. 38. — P. 13983—13990.

261. Yu B.R. Cellular defenses against damage from reactive oxygen species / B.R. Yu // Physiol. Revs. — 1994. — V. 74. — P. 139—162.

262. Zhu L. Bactericidal activity of peroxynitrite / L. Zhu, C. Gunn, J.S. Beck-man // Arch. Biochem. and Biophys. — 1992. — V. 298. — P. 452—457.

Информация о работе

Попова, Людмила Ивановна
кандидата биологических наук
Воронеж, 2008
ВАК 03.00.02

Диссертация

Воздействие УФ-света и активированных кислородных метаболитов на структурно-функциональные свойства лимфоцитов человека в присутствии биогенных аминов - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы