Воздействие соединений марганца на иммунобиологические и биохимические процессы в организме цыплят-бройлеров в онтогенезе

Ручий, Олег Сергеевич

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Воздействие соединений марганца на иммунобиологические и биохимические процессы в организме цыплят-бройлеров в онтогенезе
ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Воздействие соединений марганца на иммунобиологические и биохимические процессы в организме цыплят-бройлеров в онтогенезе"

На правах рукописи

Ручий Олег Сергеевич

ВОЗДЕЙСТВИЕ СОЕДИНЕНИИ МАРГАНЦА НА ИММУНОБИОЛОГИЧЕСКИЕ И БИОХИМИЧЕСКИЕ ПРОЦЕССЫ В ОРГАНИЗМЕ ЦЫПЛЯТ БРОЙЛЕРОВ В ОНТОГЕНЕЗЕ

Специальность 03 00 04 - Биохимия

-->онй5

АВТОРЕФЕРАХ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва - 2007

003175855

Работа выполнена на кафедре органической и биологической химии в ФГОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К И Скрябина»

Научный руководитель

доктор биологических наук, профессор

Кармолиев Рафик Хакимович

Официальные оппоненты: доктор биологических наук,

профессор

Клопов Михаил Иванович

доктор биологических наук,

Букова Наталья Константиновна

Ведущая организация

ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский и технический институт птицеводства»

Защита диссертации состоится «5» «декабря» 2007 г. в 14°° часов на заседании диссертационного совета Д 220 04204 в ФГОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К И Скрябина» (109472, Москва, ул Академика Скрябина, 23, тел 377-93-83)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К И. Скрябина»

Автореферат разослан «/£>> _ _ 2007 года

Ученый секретарь диссертационного совета

В Д Фомина

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. За последнее время учеными были разработаны нормированные полноценные корма, различные добавки и способы внесения биологически активных веществ в организм птицы, коррегирующие аминокислотно-белковый, ли-пидно-липопротеидный, углеводно-энергетический, водно-солевой и витаминно-минеральный обмены, однако, проблемы в птицеводстве, такие как стимуляция эмбрионального и посгэм-брионального развития бройлеров, повышение их резистентности и продуктивности остаются актуальными и востребованными (Бессарабов Б.Ф., 1991, 1992, 2007, Кармодиев Р.Х., 1998, 1999, 2000; Найдёнский М.С., 2000,2001,2002 и др.).

По данным академика Самохина В.Т. (2005), в нашей стране нет биогеохимических провинций и даже отдельных зон и полей с оптимальным содержанием в почвах меди, цинка, марганца, кобальта, йода и селена. Дефицит этих элементов в растениях и кормах, а соответственно и в организме продуктивных животных и птицы достигает 30-70 % от потребности (гипомикроэлементозы).

Изучение роли влияния микроэлементов в составе биологически активных веществ органической природы на организм птицы в онтогенезе является актуальной проблемой на сегодняшний день.

С точки зрения биохимии любое вещество, попадая в организм, прежде всего, воздействует на клеточном уровне, разрушая клетку или, наоборот, стимулирует её деятельность, эти процессы сказываются на всём организме в целом. Так, например, марганец является незаменимой частью многих ферментов (декарбоксилаз, фосфатаз, аминопептидаз, супер-оксиддисмутазы и др.), участвует в тканевом дыхании, и в ан-тиоксидазной защите, способствует синтезу витаминов и т д.

Янтарная кислота (сукцинат) является универсальным метаболитом, образующимся в общем, пути катаболизма в растительных и животных клетках.

Метаболизм янтарной кислоты в организме, прежде всего, связан с продукцией энергии, необходимой для обеспечения жизнедеятельности.

Изучение воздействия предынкубационной обработки яиц соединениями марганца на различные биохимические, гемопоэтические и иммунобиологические процессы в организме цыплят-бройлеров является весьма актуальной задачей. Данное вещество может применяться как для профилактики, так и для терапии недостатка марганца в организме птицы, а также как биологически активная добавка, повышающая естественную резистентность организма и стимулирующая обменные процессы

Цель и задачи исследований. Основная цель - синтезировать марганецсодержащее метаплорганическое соединение, разработать, изучить и усовершенствовать технологию применения соединений марганца для воздействия на физиологические, иммунобиологические и биохимические процессы в организме цыплят-бройлеров с целью повышения продуктивности и естественной резистентности

В связи с этим нами были поставлены следующие задачи

- разработать технологию синтеза комплексного соединения марганца с янтарной кислотой и изучить его физико-химические и биологические свойства,

- изучить динамику реакций синтеза и выявить критерии чистоты полученного препарата марганца,

- установить острую токсичность и среднюю летальную дозу водного раствора полученного соединения;

- разработать способы обогащения инкубационных куриных яиц и доказать количественную проницаемость через скорлупу в яйцо соединений марганца,

- установить оптимальную дозу и кратность применения различных соединений марганца для цыплят-бройлеров,

- исследовать воздействие соединений марганца на гемопоэтические, биохимические, иммунобиологические и морфологические процессы в организме цыплят-бройлеров,

- дать зооветеринарную характеристику состояния организма цыплят в онтогенезе под воздействием различных соединений марганца,

- провести сравнительный анализ эффективности применения органических и неорганических соединений марганца,

Научная новизна. Разработан синтез комплексного соединения марганца с янтарной кислотой Изучены его физико-химические константы: температура плавления, спектры поглощения 0,1 М р-ра, молярный коэффициент погашения, абсолютное содержание марганца, растворимость. Проведён рент-генодифракционный анализ структуры синтезированного вещества Определена средняя летальная доза водных растворов сукцината марганца тетрагидрата при введении в брюшную полость, и на основании данных исследований установлен класс токсичности данного вещества Получены новые данные о влиянии предынкубационной обработки яиц сукцинатом и хлоридом марганца на биохимические, гемопоэтические и иммунобиологические процессы в организме цыплят-бройлеров в эмбриональный и постэмбриональный периоды онтогенеза Установлена биологическая полноценность мяса цыплят-бройлеров, выведенных из яиц подвергшихся предынкубационной обработке растворами сукцината и хлорида марганца

Практическая и теоретическая значимость. 1) Разработанный способ получения сукцината марганца тетрагидрата позволяет синтезировать данное соединение высокой степени чистоты при минимальном использовании реагентов реакции и при этом в процессе превращения исходных веществ исключается образование побочных примесей Это даёт возможность использовать сукцинат марганца в ветеринарной медицине в качестве профилактического и лекарственного средства, биологически активной добавки (на способ получение сукцината марганца получен патент РФ)

2) Проведенные эксперименты позволяют рекомендовать водный раствор сукцината марганца для предынкубационной обработки яиц в современных условиях птицефабрик с целью стимулирования процессов роста и развития цыплят-бройлеров на самых ранних этапах эмбриогенеза, что позволит

в последующем получить дополнительный объём экологически безопасных и высоко качественных мясных продуктов убоя птиц.

3) Полученные данные проведённых исследований в значительной степени расширяют и дополняют сведения о воздействии соединений марганца на организм цыплят бройлеров и связывают структурное строение сукцината марганца с его некоторыми биологическими свойствами (Заявка на патент: «Способ количественного определения проницаемости марганца через скорлупу в яйцо»)

Основные положения выносимые на защиту: 1. Изучение динамики синтеза, физико-химических констант и структуры сукцината марганца тетрагидрата

2 Биологические свойства сукцината марганца по влиянию на процессы роста и развития и продуктивность цыплят -бройлеров в онтогенезе.

Апробация работы. Материалы диссертационной работы доложены и обсуждены на 69-й научно-практической конференции, посвященной 75-летию СтГАУ (Ставрополь, 2005), на научно-практической конференции, посвященной 40-летию ветеринарно-биологического факультета МГАВМиБ им К.И. Скрябина (Москва, 2006), на конференции молодых учёных и аспирантов ветеринарно-биологического факультета МГАВМиБ им К И. Скрябина (Москва, 2005)

Публикации. По теме диссертации опубликовано 6 научных статей, в том числе в журнале из перечня рецензируемых ВАК, в которых изложены основные материалы выполненной работы Получен патент на способ синтеза сукцината марганца тетрагидрата.

Внедрение. Результаты исследования внедрены на птицефабрике ООО Агрофирмы «Луч», Московской области (Акт о внедрении от 26 апреля 2007 года). Полученные данные используются на лекционных и лабораторно-практических занятиях по дисциплине «Ветеринарная биохимия Методы биохимических исследований» в ФГОУ ВПО МГАВМиБ им К.И. Скрябина

Объем и структура работы. Диссертация изложена на 141 страницах компьютерного текста и включает введение, обзор литературы, материалы и методы исследований, результаты собственных исследований, обсуждение результатов, выводы, практические предложения, список литературы и приложения Работа иллюстрирована 44 таблицами, 20 рисунками и 4 фотографиями Список литературы включает 138 источников, в том числе 28 иностранных авторов

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Материалы и методы исследования

Работа была выполнена в период 2004-2007 гг в условиях лаборатории кафедры органической и биологической химии МГАВМиБ им. К И Скрябина, лаборатории патологии обмена веществ Государственного научного учреждения Ставропольского научного исследовательского института животноводства и кормопроизводства (ГНУ СНИИЖК), лаборатории рентгеноструюурного анализа Института Элементоор-ганических Соединений (ИНЭОС) им АН. Несмеянова Российской Академии Наук (г Москва), лаборатории сертификации и стандартизации Всероссийского научно-исследовательского института ветеринарной санитарии, гигиены и экологии Россельхозакадемии, независимой ветеринарной лаборатории «Шанс-Био», агрофирмы «Луч» (Московская область, Раменский район) и частного сектора Ставропольского края Петровского района

Научная работа состоит из трех частей Общая схема исследований представлена на рис 1

Биоматериалом исследований служили монокристаллы сукцината марганца, белые мыши; цельная кровь и сыворотка крови цыплят-бройлеров, их красные и белые мышцы; желток и белок куриных яиц. Основные биохимические исследования проводились на цыплятах-бройлерах, во всех экспериментах подобранных по принципу аналогов, кроссов СК-4 Русь и Смена-7.

Воздействие соединений марганца на иммунобиологические и биохимические процессы е _организме цьггмяч бройлеров в онтогенезе

Разработка технологии синтеза и изучение структуры и физико-химических констант

Эксперименты по воздействию соединений марганца (II) на opi аиизм цыплят-бройлеров в разные периоды онтогенеза

Токсиколог ическая

оценка водного раствора сукцинага марганца тетрагидрата

Установление закономерностей проницаемости Мп-Бисс через скорлупу в яйцо яри

предынкубационной обработке его различными концентрациями растворов сукцината марганца_

Исследование сравнительной эффективности воздействия различных по концентрации растворов сукцината и хлорида марганца на организм цыплят-бройлеров

при пред «инкубационной _______обработке яиц____

Изучение токсико-биологической

оценки и относительной биологической ценности мяса 42-

сут цыплят-бройлеров, выведенных из яиц обработанных до инкубации растворами соединений марганца и дистиллированной водой

Воздействие соединений марганца на физиологические и биохимические процессы 15-и 30-суг цыплят при предыккубационной обработке яиц

Биохимические исследования сыворотки крови цмплят-бройчеров в динамике при подкожной инъекции цыплятам раствора сукцината марганца

Изучаемые тесты (показатели) исследований

Гематологические

Биохимические

1 Иммунологические! I Зоотсхн

'схнические

т §

а 1 о. й а ! * .1 S. 5

о о ч &

8 •у э-

§ 5

5 в

! 3 °

I £

I 1

% в*

«1

£ и Ml ill S ь 86

111 S $ 1 f i

g 8 й 0> >> = 1 0

a § 5 g a £ § » я g = я S I g 1 s P й 1 a

0 a о 1 S i g. 1 § Si

ш £ 0

Рис. 1. Общая схема экспериментов

Реттенодифракционное исследование монокристалла сукцината марганца тетрагидрата размером 0,45x0,30x0,25мм проводилось на дифрактометре СА04 Епга£Коши8

Изучение острой токсичности марганца сукцината проводили в соответствии с рекомендациями Фармакологического Комитета (Арзамасцев ЕВ. и др, 1998). В работе использовали нелинейных, здоровых половозрелых мышей обоего пола, подобранных по принципу аналогов Вычисление средней летальной дозы (Ы)5о) проводили по методу Кербера (М Л Беленький, 1963)

Инкубационные яйца для всех серий эксперимента, кроме пятой, были взяты от родительского стада кур 13-14-мес возраста при соблюдении принципа аналогов на птицефабрике ОАО «Богословское» Ставропольского края

В первой серии экспериментов изучалась проницаемость в яйца и влияние на микроэлементный состав яиц, различных по концентрации растворов сукцината марганца (Мп-Бисс) (0,1 %, 0,05 %, 0,01 % растворы Мп-Бисс, дистиллированная вода и контроль) при однократной предынкубационной обработке Материалом исследования служили желток и белок яиц, полученные от контрольной и четырех опытных групп.

Обработку яиц проводили методом вакуумных ванн (Орлов М В , 1989)

Во второй серии экспериментов изучалась сравнительная эффективность воздействия различных по концентрации растворов сукцината (0,1, 0,05, 0,01% растворы) и хлорида (0,1, 0,05, 0,01% растворы) марганца на организм цыплят-бройлеров при предынкубационной обработке яиц в эмбриональный и постэмбриональный периоды онтогенеза

В первом опыте данной серии изучалось влияние предынкубационной обработки яиц дистиллированной водой и соединениями марганца на развитие зародышей и физиологические и биохимические показатели 19-сут эмбрионов

Во втором опыте изучалось влияние предынкубационной обработки яиц различными по концентрации растворами хлорида и сукцината марганца на показатели выводимости,

продуктивности, сохранности и продуктивности цыплят-бройлеров. Началом опыта следует считать конец 20 сут инкубации, на которые происходит начало вывода цыплят, данный опыт является продолжением первого опыта во второй серии экспериментов.

В третьей серии экспериментов изучался характер воздействия однократной предынкубационной обработки яиц соединениями марганца- 1 группа - дистиллированная вода, 2 группа -0,01 % раствор сукцината марганца, 3 группа - 0,01 % раствор хлорида марганца и 4 группа - контрольная на иммунобиологические, физиологические и биохимические процессы в организме 15- и 30-сут цыплят

Материалом исследования служили сыворотка и цельная кровь, полученная из ярёмной и подкрыльцовой вен

На 42 сут выращивания от каждой группы по принципу аналогов были отобраны по шесть цыплят с целью получения материала для проведения токсико-биологической оценки мяса цыплят-бройлеров.

В пятой серии эксперимента по принципу аналогов было отобрано две группы цыплят-бройлеров (опытная и контрольная) по 100 голов в каждой Материалом исследования служила сыворотка крови, полученная из крови, взятой из подкрыльцовой вены цыплят-бройлеров через 3, 6, 12, 48 ч и 6 сут после однократного подкожного введения опытной группе цыплят 6 %-ного водного раствора Mn-Succ в дозе 0,5 мл на голову и однократного подкожного введения воды для инъекций в дозе 0,5 мл на голову контрольной группе цыплят.

При проведении экспериментов использовали биохимические, иммунобиологические, гематологические зооветеринарные показатели с применением общепринятых методов

Статистическую обработку результатов исследования проводили на компьютере с процессором PENTIUM IV с использованием программ Microsoft Excel и «Primer of Biostatis-tics 4 03 for Windows». Степень достоверности различий вычисляли с использованием критерия Стьюдента Изменения по

сравнению с контролем считались достоверными при вероятности Р=0,05 и меньше (Р X Кармолиев, 1971) Цифровой материал представлен в единицах СИ, рекомендованных Всемирной организацией здравоохранения и стандартом СЭВ 1062-78

2.2. Результаты исследований

Рентгенодифракционное исследование монокристалла янтарнокислого марганца (Мп-висс)

Мп-Бисс кристаллизуется в рацемической (центросим-метричной) пространственной группе Структура олигомерная {Мп(Н20)4(00С(СН2)2С00)}п, фрагмент Мп(Н20)4 координирует с двумя дианионами янтарнй кислоты, образуя олигомер-ные цепочки Катион марганца Мп++ в структуре шестикоор-динирован В его координационную сферу входят четыре молекулы воды и два дианиона янтарной кислоты, образуя, таким образом, тетрагональную бипирамиду (искаженный октаэдр), основание которой образуют молекулы воды Изучение острой токсичности и определение средней летальной дозы раствора сукцината марганца при внутри-брюшинном введении.

При изучении острой токсичности сукцината марганца было установлено, что через 2-10 минут после однократного внутрибрюшинного введения 2 % раствора препарата поведение животных изменяется Из общих признаков интоксикации можно выделить то, что дыхание животных становится глубоким и частым, наблюдаются признаки возбуждения (хаотично двигаются, совершают прыжки на месте), которые длятся от 1 до 15 минут, затем происходит резкое угнетение, животные забиваются в угол клетки, перестают реагировать на звуковые, световые и болевые раздражители и, в зависимости от дозы, погибают через 1-25 минут Доза сукцината марганца тетрагидрата, ко-

торая вызывает гибель 50 % (ЬО50) животных при внутри-брюшинном введении, равняется 330,875 мг/кг.

Результаты исследования острой токсичности сукцината марганца на белых мышах свидетельствуют, что, в соответствии с классификацией И.В.Сидорова (1977) по токсичности веществ при введении в брюшную полость животного, этот препарат относится к 4 классу токсичности - малотоксичные вещества Установление факта и закономерностей проницаемости сукцината марганца через скорлупу в яйца кур при пре-дынкубационной обработке При проведении исследований по проницаемости растворов Бисс-Мп в куриные яйца, было отмечено, что содержание марганца в желтке яиц, подвергшихся обработке растворами Мп-Бисс, достоверно (Р<0,05) превышает содержание марганца в желтке других групп Количество марганца в желтке яиц, которые были обработаны 0,1 % раствором Мп-Бисс, достоверно превышает на 0,1132 мкмоль количество марганца в желтке яиц контрольной группы

В желтке яиц, которые были обработаны 0,05 % раствором сукцината марганца, достоверная (Р<0,05) разница в содержании марганца, по сравнению с контрольной, составляет 0,0994 мкмоль Количество марганца в желтке яиц опытной группы, которые обрабатывались 0,01 % раствором 8исс-Мп, достоверно превышает содержание марганца в контрольной на 0,1172 мкмоль

Для определения проницаемости Мп-Бисс в яйцо после обработки, необходимо рассчитать общее количество содержания микро- и макроэлементов в желтке и белке (табл 1)

Таблица 1. Общее количество микро- и макроэлементов в белке и желтке после предынкуба-ционной обработки, (п=5)

№ гр Используемые вещества Мп, мкмоль/яйцо гп, мкмоль/яйцо Ре, мкмоль/яйцо Си, мкмоль/яйцо N3, ммоль/яйцо

1 Дис вода 0,5155±0,021 0,999±0,098** 5,711±0,3809 0,3174±0,04 19,23±0,635

2 0,1 % раствор Бисс-Мп 0,6659±0,015* 1,342±0,0939 6,016±0,5076 0,3735±0,06 17,3±0,85

3 0,05 % раствор Бисс-Мп 0,716±0,033* 1,461±0,1067 5,635±0,4748 0,328±0,035 18,36±0,973

4 0,01 % раствор Бисс-Мп 0,7023±0,027* 1,356±0,0755 5,827±0,3039 0,3181±0,036 17,55±0,905

5 Контрольная 0,5704±0,017 1,367±0,0523 5,564±0,1435 0,3887±0,049 18,4±1,27

*Р<0,005

**Р<0,05

Из таблицы 1 видно, что количество марганца в желтке и белке на яйцо в 2, 3 и 4 опытных группах достоверно (Р<0,005) превышает на 0,0955, 0,1456 и 0,1319 мкмоль соответственно количество данного элемента в яйце контрольной группы. Также следует отметить достоверное (Р<0,05) снижение количества цинка в желтке и белке на яйцо первой группы на 0,368 мкмоль по сравнению с контрольной, группой яиц

Не учитывая константы и степень диссоциации молекул сукцината марганца тетрагидрата можно рассчитать количество мкмоль/яйцо сукцината марганца, проникшего в яйцо Для этого можно воспользоваться формулой

М(5исс-Мп)х(Т~К) X =-= мкмольБисс— Мп / яйцо

А{Мп)

где, X - количество Бисс-Мп проникшего в яйцо, мкмоль, Т - концентрация марганца в яйцах опытной группы, мкмоль, К - концентрация марганца в яйцах контрольной группы, М(8исс-Мп) - молекулярная масса сукцината марганца, моль; А(Мп) - атомная масса марганца.

Так, при обработке яиц 0,01 % р-р Мп-Бисс в яйцо приблизительно проникает 0,40 мкмоль сукцината марганца, при обработке 0,05 % р-ом - 0,45 мкмоль, а при обработке 0,1 % р-ом -0,30 мкмоль молекул сукцината марганца. Таким образом выявлен обратный концентрационный эффект между обрабатываемым раствором биологически активной добавки и его количеством проникшим в яйцо

Изучение сравнительной эффективности воздействия различных по концентрации растворов сукцината и хлорида марганца на организм цыплят-бройлеров после предынку-бационной обработки яиц

В 19-сут эмбрионах полученных из яиц, обработанных растворами сукцината марганца, уровень активности щелочной фосфатазы (КФ 3 13 1) был достоверно (Р<0,05) ниже по сравнению с контрольной группой (29,95 ±3,182 мкат/л)

В группе цыплят, где применялся 0,1 % р-р сукцината марганца, разница составляла 95 % (1,53±1,32 мкат/л), если применялся 0,05 % р-р - 91 % (2,667 ±1,514 мкат/л), а в группе, в которой использовали 0,01 % р-р, 88,5 % (3,43 ±3,71 мкат/л).

Достоверно (Р<0,05) низкое содержание D-глюкозы (18,99± 17,72 ммоль/л), по сравнению с контрольной группой (44,94± 15,22 ммоль/л), было отмечено в группе цыплят, где использовался 0,1 % р-р МпС12 В этой же группе цыплят содержание мочевой кислоты было достоверно (Р<0,05) ниже на 40 % (46,87±6,25 ммоль/л) по сравнению с контрольной (78,15±4,455 ммоль/л)

Данные о развитии куриных эмбрионов, полученные в результате овоскопии яиц, показывают, что на 18,5 сут. инкубации в яйцах, которые до инкубации были обработаны 0,01 % раствором сукцината марганца, отмечается достоверная разница (Р<0,05), по числу эмбрионов с физиологически нормальным развитием в обработанной группе (96 %) больше на 21 % чем в контрольной группе (75 %)

Масса цыплят-бройлеров опытной группы (1258±37 г), где для предынкубационной обработки использовался 0,01 % раствор Succ-Mn к 40-сут выращивания, достоверно (Р<0,05) была больше на 124 г, чем в контрольной группе (1134±40 г) Она достоверно (Р=0,01) превышала на 149 г массу цыплят той группы, где использовалась дистиллированная вода (1109±20 г) и была достоверно (Р<0,05) выше массы цыплят, где до инкубации использовали 0,1 % р-р МпС12 (1140±25 г), 0,05% р-р МпС12 (1125±21 г) и 0,01 % р-р МпС12 (1119 ±45) т е превышала массу тела на 118, 133 и 139 г, соответственно Такая же тенденция отмечена в группе цыплят-бройлеров, где в предынкубационной обработке использовался 0,05 % р-р Succ-Mn (1239±28 г). Так, по сравнению с контрольной группой и группой где использовалась дистиллированная вода, масса цыплят-бройлеров данной группы достоверно превышала на 105 и 130 г, соответственно, а по сравнению с группами, где

использовались 0,1 %, 0,05 % и 0,01 % растворы хлорида марганца на 99, 114, и 120 г

Изучение воздействия предынкубационной обработки яиц растворами сукцината и хлорида марганца на гематопо-этические и биохимические процессы 15-сут цыплят

Содержание эритроцитов в крови цыплят контрольной группы (1,18±0,022-1012/л) достоверно (Р<0,05) выше на 6 %, по сравнению с группой цыплят вылупившихся из яиц обработанных 0,01 % раствором сукцината марганца (1,11±0,009 1012/л)

Содержание Б-глюкозы в крови цыплят, вылупившихся из яиц обработанных дистиллированной водой (9,69±1,77 ммоль/л), достоверно (Р<0,05) выше по сравнению с контрольной группой^,69 ±2,19) на 95 %

Активность аланинаминотрансферазы (КФ 2.6 1.2) в группе цыплят, выведенных из яиц обработанных раствором хлорида марганца (0,64±0,19 мкат/л), достоверно (Р<0,05) выше на 75 % по сравнению с контрольной группой (0,365 ±0,175)

Бактерицидная активность сыворотки крови цыплят, выведенных из яиц подвергнутых обработке раствором сукцината марганца (76,95±1,35 %), была достоверно (Р<0,05) выше по сравнению с контрольной группой (70,2±3,3 %)на 6,75 %. Достоверно (Р<0,05) низкая лизоцимная активность сыворотки крови наблюдалась в группе цыплят, где применялся для пре-дынкубационной обработки яиц раствор сукцината марганца (29,31±5,99 %), по сравнению с контрольной группой (38,78±5,65%) этот показатель ниже на 9,47 %.

Обработка яиц 0,01 % раствором сукцината марганца приводит к достоверному снижению уровня в сыворотке крови 15-сут цыплят альбуминов (4,98±0,44 г/л), постальбуминов (1,35±0,12 г/л), церулоплазминов (0,172±0,017г/л) и р2-глобулинов (1,19 ±0,10 г/л) на 35,0 %, 57,8 %, 37,4 % и 67,2 %, соответственно, и достоверному(Р<0,05) увеличению количества трансферринов (13,82 ±1,23 г/л) и Баг-макроглобулинов (2,34±0,21 г/л) на 58,0 % и 98,3 %, соответственно, по сравнению с контрольной группой

(Alb-7,67 ±0,69г/л, Post AIb-3,21 ±0,29г/л; Cp-0,275 ±0,025г/л, p2-3,615 ±0,32 г/л, Tf-8,745 ±0,78 г/л; a2M-U8 ±0,11 г/л)

В сыворотке крови цыплят, выведенных из яиц обработанных дистиллированной водой, отмечается достоверное увеличение содержания р2-глобулинов (6,38±0,20 г/л) на 76,5 % по сравнению с контрольной группой В этой группе также наблюдается тенденция к снижению постальбуминов (2,17±0,08 г/л), церулоплазминов (0,070±0,001 г/л) и ß-липопротеидов (2,81±0Д 1 г/л) на 32,5, 74,5 и 48,3 %, соответственно, по сравнению с контролем (ß-Lp-5,435 ±0,485г/л) (Р<0,01)

Увеличение Баг-макроглобулинов (2,885±0,365г/л) на 98,3 %, по сравнению с контрольной группой, отмечается в сыворотке крови 15-сут цыплят-бройлеров, выведенных из яиц подвергшихся предынкубационной обработке раствором хлорида марганца У цыплят этой группы содержание постальбуминов (1,295±0,165 г/л), р2-глобулинов (2,22±0,28 г/л) и ß-липопротеидов (2,285±0,415г/л) достоверно меньше в сыворотке крови на 58,8 %, 38,6 % и 57,9 %, соответственно, по сравнению с количеством данных белковых веществ в сыворотке крови цыплят контрольной группы (Р<0,01)

Токсико-биологическая оценка мяса цыплят-бройлеров, методом основанным на выживаемости тест-организма (инфузорий) показала, что однократная обработка яиц до инкубации 0,01 %-ным раствором сукцината марганца не снижает относительную биологическую ценность мяса цыплят-бройлеров полученных, из этих яиц Мясо цыплят-бройлеров выведенных, из яиц обработанных 0,01 %-ным водным раствором сукцината марганца, нетоксично

Таблица 2,Относительная биологическая ценность (ОБЦ) мяса цыплят-бройлеров, (п=6) __

Группы Используемые вещества Среднее количество инфузорий в 1 мл среды ОБЦ в %% к контролю

1 Без обработки (контроль) (28,25±0,80)хЮ4 100

2 Дистиллированная вода (27,50±1,20)хЮ4 97,30

3 0,01 % раствор МпС12 (29,20±1,00)хЮ4 103,40

4 0,01 % раствор висс-Мп (28,75±1,30)хЮ4 101,80

Р>0,05

Биохимические исследования сыворотки крови цыплят-бройлеров в динамике воздействия на организм биологически активной добавки - сукцината марганца

Подкожная инъекция водного раствора биоактивного вещества - сукцината марганца достоверно (Р=0,011) снижает активность аланинаминотрансферазы (КФ 2 6 1.2) в сыворотке крови цыплят опытной группы (179±2ед/л), по сравнению с контрольной группой (188±19 ед/л) Через 48 ч после инъекции 8исс-Мп, разница составляет 11,75 ед/л.

Достоверная разница (Р=0,027) по количеству общего белка в сыворотке крови цыплят-бройлеров между опытной (29,3±2,5г/л) и контрольной группой (38,3±1,7г/л) наблюдается через 6 ч после начала эксперимента При этом в контрольной группе содержание общего белка на 9 г/л, больше по сравнению с опытной группой

Содержание постальбуминов в сыворотке крови цыплят опытной группы (6,321±0,562г/л) через 6 ч после инъекции было достоверно (Р<0,05) меньше на 2,303 г/л, по сравнению с контрольной группой (8,624±0,337г/л) Также в этот период исследования отмечены достоверные различия по количественному содержанию трансферринов, уг-глобулинов и

р-липопротеидов В сыворотке крови опытной группы С№2,955±0,218; у, =1,058±0,110, р-Ьр=0,688±0,052г/л) цыплят количество этих белковых веществ достоверно (Р<0,05) меньше на 1,121 г/л, 0,495 г/л, 0,298 г/л по сравнению с контрольной группой (№4,076 ±0,265; у1 =1,553 ±0,075, Р-Ьр=0,986 ±0,086г/л), соответственно

На 12 ч после введения Мп-Бисс картина белковых веществ сыворотки крови цыплят имела следующий вид. количество трансферринов, церулоплазминов и 8а2-макроглобулинов в опытной группе (ТГ=3,072±0,117; Ср=1,608±0,042, «2м=5,122±0,098г/л) было достоверно (Р<0,05) меньше на 1,008, 0,991 и 0,984 г/л, по сравнению с контрольной группой (Т^=4,080 ±0,143; Ср=2,599 ±0,102, а2М=6,106 ±0,035г/л), соответственно; уровень Рг-глобулинов в сыворотке крови цыплят-бройлеров опытной группы (1,917±0,073г/л), напротив, был достоверно (Р<0,05) выше на 0,542 г/л по сравнению с контрольной группой (1,375 ±0,183г/л).

Через 3 ч после инъекции 8исс-Мп, содержание мочевой кислоты в сыворотке крови у контрольной группы цыплят (3,025±0,256ммоль/л) достоверно (Р=0,027) превышало на 0,8 ммоль/л количество данного метаболита в крови цыплят опытной группы (2,225±0,103ммоль/л) Так же достоверное различие (Р=0,032) в содержании мочевой кислоты между контрольной (2,800±0,551 ммоль/л) и опытной группами (1,175±0,256ммоль/л) установлено на 12 ч после начала эксперимента, разница составила 1,625 ммоль/л.

Уровень общего билирубина в сыворотке крови цыплят-бройлеров опытной группы (5,25±0,09мкмоль/л) через 6 ч после инъекции Бисс-Мп достоверно (Р=0,020) превышал на 0,8 мкмоль/л, уровень результатов полученных в контрольной группе (4,45±0,24мкмоль/л) Однако на 48 ч исследования в опытной группе цыплят (2,53±0,13мкмоль/л) содержание данного метаболита в сыворотке крови было достоверно меньше на 0,575 мкмоль/л, по сравнению с контролем (3,10±0,11 мкмоль/л)

Содержание холестерола в сыворотке крови цыплят-бройлеров опытной группы (4,57±0,14ммоль/л) через 48 ч после подкожного введения раствора сукцината марганца было достоверно меньшим на 1,45ммоль/л, по сравнению с контрольной группой (6,02±0,23ммоль/л)

В опытной группе цыплят-бройлеров(1,865±0,081 и 0,845±0,066 ммоль/л) после подкожного введения водного раствора сукцината марганца через 3 ч и 12 ч, отмечен достоверно низкий (Р=0,026 и Р=0,003) уровень содержания триа-цилглицеролов, по сравнению с контрольной группой (3,312±0,439 и 2,170±0,285ммоль/л) Разница составила 1,447 ммоль/л и 1,325 ммоль/л, соответственно

Через 3 ч после подкожной инъекции цыплятам сукцината марганца происходит достоверное увеличение а-Ьр (ЛВП - липопротеидов высокой плотности) в сыворотке крови опытной группы на 4,215 %, по сравнению с контрольной группой Через 6 ч после введения Бисс-Мп наблюдается достоверное снижение рге-р-Ьр (ЛОНП - липопротеидов очень низкой плотности) в сыворотке крови цыплят-бройлеров на 3,108 %, по сравнению с контролем К 12 ч исследования в сыворотке крови цыплят опытной группы установленн увеличение СЬт (хиломикронов) По сравнению с контрольной группой цыплят этот метаболит достоверно превышал на 5,21 % Уровень СЬт в крови цыплят опытной группы на 48 ч исследования достоверно превышал количество данного липопротеида в крови цыплят контрольной группы на 10,96 %, а содержание РгЬр, наоборот, достоверно снизилось на 19,26 %, по сравнению с контролем. На 6 сут исследования отмечается достоверное понижение уровня а-Ьр в сыворотке крови опытной группы цыплят-бройлеров на 1,75 %, по сравнению с а-Ьр в сыворотке крови контрольной группы цыплят-бройлеров

Достоверная разница в активности а-амилазы (КФ 3 2 11) между контрольной (547,2±61,7 и 896,2±35,6 ед/л) и опытной группами наблюдается через 12 (Р=0,042) и 48 ч (Р=0,0001) В первом и втором случаях активность этого фермента в опыт-

ной группе(357,5±39,7 и 594,0±11,2 ед/л) была ниже на 187,4 и 302,2 ед/л, соответственно.

Достоверная разница (Р=0,048) между контрольной (585±68 ед/л) и опытной группами (897±1 Обед/л), в активности лактатдегидрогеназы (КФ1 1 1 27) сыворотки крови отмечена через 48 ч после инъекции 8исс-Мп В этот период исследования уровень активности этого фермента в опытной группе был на 311,5 ед/л выше, по сравнению с контрольной.

В крови опытной группе цыплят (7,86±0,68 ммоль/л) через 3 ч после подкожной инъекции раствора биоактивной добавки-сукцината марганца тетрагидрата наблюдалось достоверно (Р=0,0001) низкое содержание ¿-глюкозы по сравнению с контрольной группой (15,04±0,10) разница составила 7,178 ммоль/л, на 6 сут исследования - разница в 6,32 ммоль/л была близкой к достоверной (Р=0,055)

Отмечено, что после подкожной инъекции сукцината марганца через 6, 12 ч и 6 сут активность щелочной фосфатазы (КФЗ 1.3 1) сыворотки крови цыплят-бройлеров в опытной группе (2113±52, 1599±59, 1702±47 ед/л) цыплят-бройлеров достоверно (Р<0,05) превышал таковую в контрольной группе (1350±121, 1360±77, 1510±56 ед/л) на 736, 239 и 192 ед/л, соответственно

3. ВЫВОДЫ

1 Разработана технология синтеза комплекса микробиогенного металла - марганца с естественным метаболитом -янтарной кислотой, позволяющая получать данное вещество высокой степени чистоты с затратой минимального количества реагентов реакций, что позволяет использовать сукцинат марганца тетрагидрат ветеринарной медицине.

2. Водный раствор сукцината марганца является малотоксичным веществом и относится к 4-классу по токсичности веществ, вводимых в брюшную полость. Доза сукцината мар-

ганца тетрагидрата, которая вызывает гибель 50 % животных при внутрибрюшинном введении, равняется 330,875 мг/кг

3 Олигомерная структура сукцината марганца тетрагидрата, в которой фрагмент Мп(Н20)4 координирует с двумя дианионами янтарной кислоты образуя олигомерные цепочки обуславливает его специфическую способность проникать через биомембраны куриного яйца Так, при обработке яиц 0,01 % р-р Мп-8исс в яйцо проникает 0,40 мкмоль 8исс-Мп, при обработке 0,05 % р-ом - 0,45 мкмоль, а при обработке 0,1% р-ом -0,30 мкмоль Бисс-Мп. При этом выявлен обратный концентрационный эффект между обрабатываемым раствором биологически активной добавки и его количеством проникшим в яйцо

4. Снижение активности фермента щелочной фосфата-зы сыворотки крови в среднем на 88,5-95 % (Р<0,05) по сравнению с контрольной и другими группами у 19-сут опытных эмбрионов цыплят-бройлеров, полученных из яиц обработанных растворами сукцината марганца, является специфическим показателем, характерным для механизма воздействия на организм биологически активной добавки - 8исс-Мп

5. Однократная обработка яиц до инкубации 0,01 % раствором сукцината марганца оказывает интенсивный стимулирующий эффект на продуктивность, рост, развитие, биохимические и иммунобиологические процессы и естественную резистентность организма цыплят-бройлеров на протяжении всего периода эмбриогенеза и, частично, на протяжении постэмбрионального онтогенеза Так, количество яиц со своевременным нормальным развитием эмбрионов к началу вывода в этой группе составило 96 % (Р<0,05); масса тела 19-сут эмбрионов этой группы была самой высокой - 46,9±1,8 г (Р>0,05), выводимость, сохранность цыплят этой группы - 100 % (Р<0,05); масса тела цыплят-бройлеров этой группы к концу выращивания (40-сут) составила 1257,6±36,7 г; бактерицидная активность сыворотки крови 15-сут цыплят этой группы по сравнению с контролем достоверно превышала на 6,75 % (Р<0,05), а

лизоцимная активность была достоверно ниже по сравнению с другими группами в среднем на 28 % (Р<0,05).

6. Испытуемый на цыплятах-бройлерах биоактивная добавка - Бисс-Мп коррегирует аминокислотно-белковый обмен- в сыворотке крови 15-сут цыплят опытной группы количество альбуминов, постальбуминов, церулоплазминов и р2-глобулинов на 35,0 %, 57,8 %, 37,4 % и 67,2 % (Р<0,05), соответственно было ниже, по сравнению с контролем,

- в сыворотке крови 15-сут цыплят опытной группы содержание трансферринов и 8а2-макроглобулинов на 58,0 % и 98,3 % (Р<0,05), соответственно достоверно превышало количество данных белковых веществ в контрольной группе.

7 Токсико-биологическая оценка мяса цыплят-бройлеров методом основанным на выживаемости тест-организма (инфузорий) показала, что однократная обработка яиц до инкубации 0,01 % раствором сукцината марганца не снижает относительную биологической полноценности мяса цыплят-бройлеров, полученных из этих яиц Мясо цыплят-бройлеров выведенных из яиц обработанных 0,01 % водным раствором сукцината марганца, нетоксично.

8 Подкожное введение сукцината марганца цыплятам-бройлерам, оказывает влияние на аминокислотно-белковый, липидно-липопротеидный, углеводно-энергетический и минеральный обмены преимущественно воздействием на нейрогу-моральную регуляцию и энергетические процессы, о чем свидетельствуют следующие результаты биохимических тестов- через 3 ч после инъекции наблюдалось достоверно

(Р=0,0001) низкое содержание Б-глюкозы в крови; по сравнению с контрольной группой разница составила 7,178 ммоль/л;

- через 3 и 12 ч после инъекции сукцината марганца, содержание мочевой кислоты в сыворотке крови опытной группы

цьптлят-бройлеров достоверно (Р=0,027 н Р=0,032) уменьшилось на 0,8 ммоль/л и 1,625 ммоль/л что в свою очередь приводит к дальнейшим изменениям в организме цыплят-бройлеров

4. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ И РЕКОМЕНДАЦИЙ

Рекомендуем водный раствор сукцината марганца для предынкубационной обработки яиц в современных условиях птицефабрик с целью стимулирования процессов роста и развития и резитенгности организма цыплят-бройлеров на самых ранних этапах эмбриогенеза, что позволит в последующем повышать их мясную продуктивность. Оптимальная доза биологически активной добавки Бисс-Мп при предынкубационной обработке яиц: 0,01 % р-р сукцината марганца, ^ раствора 5-10 С0, экспозиция 5 минут.

Разработанная технология синтеза сукцината марганца тетрагидрата позволяет получить данное вещество высокой степени чистоты при минимальном затрате реактивов Рекомендуем сукцинат марганца в ветеринарной медицине в качестве профилактического и лекарственного средства (при моче-кислом диатезе и пррозисе), а также в качестве биологически активной добавки

Фаю- ингибирования сукцинатом марганца образования урата в организме цыплят-бройлеров при подкожном введении 0,1 % раствора в дозе 0,5 мл/гол, позволяет рекомендовать этот препарат для профилактики и терапии мочекислого диатеза птиц

5. СПИСОК РАБОТ ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Кармолиев Р.Х Соединения марганца и их воздействие на иммунобиологические и биохимические процессы в организме птиц / Р.Х Кармолиев, О С. Ручий// Диагностика,

лечение и профилактика заболеваний сельскохозяйственных животных сбнаучтр - Ставрополь, 2005. - С. 69-70

2 Ручий О С Изучение острой токсичности раствора сук-цината марганца при внутрибрюшинном введении /ОС Ручий, Р X Кармолиев // Ветеринарная медицина - 2006. №. 6 - С 31-32.

3 Кармолиев Р. X Биохимические и иммунобиологические механизмы воздействия соединений марганца на организм цыплят-бройлеров в эмбриональный и постэмбриональный периоды онтогенеза / Р X Кармолиев, О С Ручий// Вопросы физико-химической биологии в ветеринарии сб науч тр к 40-летию ВБФ и 110-летию С И Афонского - М ФГОУ ВПО МГАВМиБ им К И Скарябина, 2006 - С. 49-53

4 Ручий О С Определение средней летальной дозы 0,01 % раствора сукцината марганца на белых мышах при внутрибрюшинном введении /ОС Ручий, Р X Кармолиев // Доклады РАСХН. - 2007 № 1. С 45-46

5 Ручий О С Биологический контроль инкубации после обработки яиц растворами соединений марганца./ О С Ручий // Ветеринарная медицина - 2007 № 1 С 28-30

6. Кармолиев Р X Биохимические доказательства и закономерности факта проницаемости сукцината марганца тет-рагидрата (Мп-Бисс), через скорлупу в куриные яйца в процессе вакуумной обработки/ Кармолиев Р.Х., Ручий ОС/ Ветеринария сельскохозяйственных животных - 2007. № 8. С 44-49

Воздействие соединений марганца на иммунобиологические и биохимические процессы в организме цыплят бройлеров в онтогенезе

Лицензия № ЛР-№ 040830 от 17.07.97

Формат 60x90/16 Печать офсетная

Бум тип Тираж 100 экз. Заказ №170

ООО «Полиграфсервис» 109316 Москва, ул Талалихина, 26

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Ручий, Олег Сергеевич

ВВЕДЕНИЕ.

1 .ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1.Комплексы металлов с органическими соединениями и изучение их влияния на организм животных и птицы.

1.2.Различные способы предынкубационной обработки яиц.

1.3.Биологическая и биохимическая роль марганца и его влияние на организм.

1.4.Роль янтарной кислоты и её солей в физиологических и биохимических процессах.

2.МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.

3.РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.

ЗЛ.Рентгенодифракционное исследование монокристалла сукцината марганца тетрогидрата.

3.2.0сновные физико-химические показатели сукцината марганца тетрагидрата.

3.3.У становление острой токсичности и определение средней лётальной дозы раствора сукцината марганца при внутрибрюшинном введении.

3.4.Исследование микроэлементного состава яиц при предынкубационной обработке растворами сукцината марганца и дистиллированной водой, и установление факта проницаемости сукцината марганца в куриные яйца.

3.5.Сравнительная эффективность воздействия различных по концентрации растворов соединений марганца на организм цыплят-бройлеров после предынкубационной обработки яиц.

3.5.1.Биологический контроль инкубации после обработки яиц растворами соединений марганца.

3.5.2.Влияние предынкубационной обработки яиц дистиллированной водой и соединениями марганца на биохимические процессы 19-сут эмбрионов.

3.5.3. Влияние предынкубационной обработки яиц различными по концентрации растворами соединений марганца на выводимость, сохранность, рост и развитие цыплят-бройлеров.

3.5.4.Принципы воздействия соединений марганца на физико-биохимические, гематологические и иммунологические показатели.

15 и 30-сут цыплят после предынкубационной обработки яиц:.

-установленные гематологическими исследованиями цельной крови 15-сут цыплят;.

-выявленные исследованием биохимических процессов в организме 15-сут цыплят;.

-на основании исследований белковых веществ сыворотки крови у 15-сут цыплят;.

-установленные гематологическими исследованиями цельной крови 30-сут цыплят;.г.

-установленные исследованием биохимических процессов в организме 30-сут цыплят;.

-изучением метаболизма белковых веществ сыворотки крови в организме 30-сут цыплят.

3.6.Токсико-биологическая оценка и относительная биологическая ценность мяса 42-сут цыплят-бройлеров, выведенных из яиц обработанных до инкубации растворами соединений марганца и дистиллированной водой.

3.7. Биохимические исследования сыворотки крови цыплят-бройлеров^ в динамике при подкожной инъекции цыплятам водного раствора сукцината марганца.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Воздействие соединений марганца на иммунобиологические и биохимические процессы в организме цыплят-бройлеров в онтогенезе"

Актуальность темы

За последнее время учеными были разработаны нормированные полноценные корма, различные добавки и способы внесения биологическиактивных веществ в организм птицы, корригирующие аминокислотно-белковый, липидно-липопротеидный, минеральный и углеводно-энергетический обмены, однако, проблемы в птицеводстве, такие как стимуляция эмбрионального и постэмбрионального развития бройлеров, повышение их резистентности и продуктивности остаются актуальными и востребованными. (Бессарабов Б.Ф., 1991, 1992, 2007; Кармолиев Р.Х., 1998, 1999, 2000; Найдёнский М.С., 2000, 2001, 2002 и др.).

С точки зрения биохимии любое вещество, попадая в организм, прежде всего, воздействует на клеточном уровне, разрушая клетку или, наоборот, стимулирует её деятельность, эти процессы сказываются на всём организме в целом (В.П. Комов, В.Н. Шведова, 2004). Так, например, марганец является незаменимой частью многих ферментов (декарбоксилаз, фосфатаз, аминопептидаз, супероксиддисмутазы и др.), участвует в тканевом дыхании, и в антиоксидазной защите, способствует синтезу витаминов и т.д.

Янтарная кислота (сукцинат) является универсальным метаболитом, образующимся при взаимопревращении углеводов, белков и жиров в растительных и животных клетках.

Метаболизм янтарной кислоты в организме, прежде всего, связан с продукцией энергии, необходимой для обеспечения жизнедеятельности. При возрастании нагрузки на любую из систем организма поддержание её работы обеспечивается преимущественно за счёт окисления янтарной кислоты. Мощность системы энергопродукции, использующей янтарную кислоту, в сотни раз превосходит все другие системы энергообразования организма. Именно это и обеспечивает широкий диапазон неспецифического лечебного действия янтарной кислоты и её солей. Кроме того, янтарная кислота обладает и такими эффектами, как актопротекторный и противовирусный (Силаева A.M., 1983; Мудрый И.Н., 1973; Николаенко В.П., 1988; Акопян В.И. и др. 1988; Найденский М.С., 1994).

Многие исследователи: Тен Э.В. (1991), Бушов А.В. (2001), Кальницкий Б.Д. (1988), Мерзленко О.В. (1998), Кабиров Г.Ф., Логинов Г.П., Хазипов Н.З. (2004), Кармолиев Р.Х. (2006) и другие, подтверждают высокую эффективность стимулирующего действия соединений биогенных металлов с различными лигандами, в том числе и сукцинатом, на процессы роста и развития, сохранность и продуктивность с.-х. животных и птиц.

Цель и задачи исследований

Основная цель - синтезировать марганецсодержащее металлоорганическое соединение, разработать, изучить и усовершенствовать технологию применения соединений марганца для воздействия на физиологические, иммунобиологические и биохимические процессы в организме цыплят-бройлеров с целью повышения продуктивности и естественной резистентности.

В связи с этим нами были поставлены следующие задачи: - разработать синтез комплексного соединения марганца с янтарной кислотой и изучить его физико-химические и биологические свойства;

- изучить динамику реакций синтеза и критерии чистоты полученного препарата Мп;

- изучить острую токсичность и среднюю летальную дозу водного раствора полученного соединения;

- разработать способы обогащения инкубационных куриных яиц и доказать проницаемость через скорлупу в яйцо соединений марганца;

- установить оптимальную дозу и кратность применения различных соединений марганца для цыплят-бройлеров;

- исследовать воздействие соединений марганца на гемопоэтические, биохимические, иммунобиологические и морфологические процессы в организме цыплят-бройлеров;

- дать зооветеринарную характеристику состояния организма цыплят в онтогенезе под воздействием различных соединений марганца;

- провести сравнительный анализ эффективности применения органических и неорганических соединений марганца;

Научная новизна

Разработан синтез комплексного соединения марганца с янтарной кислотой. Изучены его физико-химические свойства: температура плавления, спектры поглощения 0,1 М р-ра, молярный коэффициент погашения, абсолютное содержание марганца, растворимость. Проведён рентгеноструктурный анализ полученного вещества. Определена средняя летальная доза водных растворов сукцината марганца тетрагидрата при введении в брюшную полость и на основании данных исследований определен класс токсичности данного вещества. Получены новые данные о влиянии предынкубационной обработки яиц сукцинатом и хлоридом марганца на биохимические, гемопоэтические и иммунобиологические процессы в организме цыплят-бройлеров в эмбриональный и постэмбриональный периоды онтогенеза. Установлена биологическая полноценность мяса цыплят-бройлеров, выведенных из яиц подвергшихся предынкубационной обработке растворами сукцината и хлорида марганца.

Практическая значимость

1) Разработанный способ получения сукцината марганца тетрагидрата позволяет синтезировать данное соединение высокой степени чистоты при минимальном использовании реагентов реакции и при этом в процессе превращения исходных веществ исключается образование побочных примесей. Это даёт возможность использовать сукцинат марганца в ветеринарной медицине в качестве профилактического и лекарственного средства, биологически активной добавки и реагента в различных синтезах. (На способ получение сукцината марганца получено положительное решение о выдачи патент РФ от 27 июля 2007 г, заявка № 2006114228/04(015472) от 27.04.2006).

2) Проведённые эксперименты позволяют рекомендовать водный раствор сукцината марганца для предынкубационной обработки яиц в современных условиях птицефабрик с целью стимулирования процессов роста и развития цыплят-бройлеров на самых ранних этапах эмбриогенеза, что позволит в последующем получить дополнительный объём качественных продуктов убоя птиц.

3) Полученные данные проведённых исследований в значительной степени расширяют и дополняют сведения о воздействии соединений марганца на организм цыплят бройлеров и связывают структурное строение сукцината марганца с его некоторыми биологическими свойствами (Планируется подача заявки на патент: «Способ количественного определения проницаемости марганца через скорлупу в яйцо»).

Апробация работы

Основные положения диссертации доложены на 69-й научно-практической конференции, посвященной 75-летию СтГАУ (Ставрополь, 2005), на научно-практической конференции, посвященной 40-летию ветеринарно-биологического факультета МГАВМиБ им. К.И. Скрябина (Москва, 2006), на конференции молодых учёных и аспирантов ветеринарно-биологического факультета МГАВМиБ им. К.И. Скрябина (Москва, 2005).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 6 научных статей, в которых изложены основные материалы выполненной работы, а также подана заявка на патент «Способ получения сукцината марганца тетрагидрата» № 2006114228/04(015472) от 27.04.2006, на которую получено положительное решение о выдачи патента от 27 июля 2007 г.

Объем и структура работы. Диссертация изложена на 141 страницах компьютерного текста и включает введение, обзор литературы, материалы и методы исследований, результаты собственных исследований, обсуждение результатов, выводы и практические предложения, список литературы и приложения. Работа иллюстрирована 44 таблицами, 20 рисунками и 4 фотографиями. Список литературы включает 138 источников, в том числе 28 иностранных авторов.

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Ручий, Олег Сергеевич

5. ВЫВОДЫ

1. Разработана технология синтеза комплекса микробиогенного металла- марганца с естественным метаболитом - янтарной кислотой, позволяющая получать данное вещество высокой степени чистоты с затратой минимального количества реагентов реакций, что позволяет использовать сукцинат марганца тетрагидрат в ветеринарной медицине.

2. Водный раствор сукцината марганца является малотоксичным веществом и относится к 4-классу по токсичности веществ, вводимых в брюшную полость. Доза сукцината марганца тетрагидрата, которая вызывает гибель 50% животных при внутрибрюшинном введении, равняется 330,875 мг/кг.

3. Олигомерная структура сукцината марганца тетрагидрата, в которой фрагмент Мп(Н20)4 координирует с двумя дианионами янтарной кислоты, образуя олигомерные цепочки, обуславливает его специфическую способность проникать через биомембраны куриного яйца. Так, при обработке яиц 0,01% р-р Mn-Succ в яйцо проникает 0,40 мкмоль Succ-Mn, при обработке 0,05 % р-ом - 0,45 мкмоль, а при обработке 0,1% р-ом - 0,30 мкмоль Succ-Mn. При этом выявлен обратный концентрационный эффект между обрабатываемым раствором биологически активной добавки и его количеством проникшим в яйцо.

4. Снижение активности фермента щелочной фосфатазы сыворотки крови в среднем на 88,5-95% (Р<0,05) по сравнению с контрольной и другими группами у 19-сут опытных эмбрионов цыплят-бройлеров, полученных из яиц обработанных растворами сукцината марганца, является специфическим показателем, характерным для механизма воздействия на организм биологически активной добавки - Succ-Mn.

5. Однократная обработка яиц до инкубации 0,01 % раствором сукцината марганца оказывает интенсивный стимулирующий эффект на продуктивность, рост, развитие, биохимические и иммунобиологические процессы и естественную резистентность организма цыплят-бройлеров на протяжении всего периода эмбриогенеза и, частично, на протяжении постэмбрионального онтогенеза. Так, количество яиц со своевременным нормальным развитием эмбрионов к началу вывода в этой группе составило 96% (Р<0,05); масса тела 19-сут эмбрионов этой группы была самой высокой - 46,9±1,8 г (Р>0,05); выводимость, сохранность цыплят этой группы - 100% (Р<0,05); масса тела цыплят-бройлеров этой группы к концу выращивания (40-сут) составила 1257,6±36,7 г; бактерицидная активность сыворотки крови 15-сут цыплят этой группы по сравнению с контролем достоверно превышала на 6,75% (Р<0,05), а лизоцимная активность была достоверно ниже по сравнению с другими группами в среднем на 28% (Р<0,05).

6. Испытуемый на цыплятах-бройлерах биоактивная добавка - Succ-Mn коррегирует аминокислотно-белковый обмен:

- в сыворотке крови 15-сут цыплят опытной группы количество альбуминов, постальбуминов, церулоплазминов и (32-глобулинов на 35,0%, 57,8%, 37,4% и 67,2% (Р<0,05), соответственно было ниже, по сравнению с контролем;

- в сыворотке крови 15-сут цыплят опытной группы содержание трансферринов и 8а2-макроглобулинов на 58,0% и 98,3 % (Р<0,05), соответственно достоверно превышало количество данных белковых веществ в контрольной группе.

7. Токсико-биологическая оценка мяса цыплят-бройлеров методом основанным на выживаемости тест-организма (инфузорий) показала, что однократная обработка яиц до инкубации 0,01 % раствором сукцината марганца не снижает относительную биологической полноценности мяса цыплят-бройлеров, полученных из этих яиц. Мясо цыплят-бройлеров выведенных из яиц обработанных 0,01% водным раствором сукцината марганца, нетоксично.

8. Подкожное введение сукцината марганца цыплятам-бройлерам, оказывает влияние на аминокислотно-белковый, липидно-липопротеидный, углеводно-энергетический и минеральный обмены преимущественно воздействием на нейрогуморальную регуляцию и энергетические процессы, о чём свидетельствуют следующие результаты биохимических тестов:

- через 3 ч после инъекции наблюдалось достоверно (Р=0,0001) низкое содержание D-глюкозы в крови; по сравнению с контрольной группой разница составила 7,178 ммоль/л;

-через 3 и 12 ч, отмечен достоверно низкий (Р=0,026 и Р=0,003) уровень триацилглицеролов; по сравнению с контрольной группой разница составила 1,447 ммоль/л и 1,325 ммоль/л, соответственно; - через 3 и 12 ч после инъекции сукцината марганца, содержание мочевой кислоты в сыворотке крови опытной группы цыплят-бройлеров достоверно (Р=0,027 и Р=0,032) уменьшилось на 0,8 ммоль/л и 1,625 ммоль/л, что в свою очередь приводит к дальнейшим изменениям в организме цыплят-бройлеров.

6. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ И РЕКОМЕНДАЦИЙ Рекомендуем водный раствор сукцината марганца для предынкубационной обработки яиц в современных условиях птицефабрик с целью стимулирования процессов роста, развития и резистентности организма цыплят-бройлеров на самых ранних этапах эмбриогенеза, что позволит в последующем повышать их мясную продуктивность. Оптимальная доза биологически активной добавки Succ-Mn при предынкубационной обработке яиц: 0,01 % р-р сукцината марганца, t° раствора 5-10 С0, экспозиция 5 минут.

Разработанная технология синтеза сукцината марганца тетрагидрата позволяет получить данное вещество высокой степени чистоты при минимальном затрате реактивов. Рекомендуем сукцинат марганца в ветеринарной медицине в качестве профилактического и лекарственного средства (при мочекислом диатезе и перозисе), а также в качестве биологически активной добавки.

Факт ингибирования сукцинатом марганца образования урата в организме цыплят-бройлеров при подкожном введении 0,1% раствора в дозе 0,5 мл/гол, позволяет рекомендовать этот препарат для профилактики и терапии мочекислого диатеза птиц.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Ручий, Олег Сергеевич, Москва

1. Акопян, В.И. Влияние некоторых биологически активных веществ на продуктивность бройлеров при повышении энергетического уровня рациона/В.И. Акопян, Л.Р.Канаян, Д.С. Баласянян//Птицеводство.-1988.-№2.-С.23.

2. Андронов, О.В. Возможности физиотерапии в современном животноводстве /О.В. Андронов, К.В. Кирасиров, А.А. Кабалов, Г.И. Григорьева, В.П. Крылов// Актуальные вопросы экологической безопасности сельского и лесногохозяйства.-М, 2004.-С.204-209.

3. Арзамасцев, Е.В.Методические рекомендации по изучению общетоксического действия фармакологических средств / Е.В. Арзамасцев, Т.А. Гуськова, С.С. Либерман// Ведомости фармакологического комитета. 1998. - №1. - С. 27-32.

4. Астахов, В.Г. Влияние предынкубационной обработки яиц янтарной и щавелевой кислотой на результаты вывода цыплят/В.Г.Астахов, А.Л.Трегубов//Зоотехнические основы интенсификации животноводства:Сб.науч.тр. Горький, 1988.-С.79-81.

5. Афанасьев, Г.Е. Глубинная обработка куриных яиц /Т.Е. Афанасьев, В.Д. Соколов, О.В. Виноходов// Ленинградский межотраслевой территориальный центр научн.-техн.информ. и пропоганды. Информ.листок № 400-82-Сх 1982 г.

6. Ахметов, Н.С. Общая и неорганическая химия: Учебник для вузов.- М.:Высшая школа, 1989. 643с.

7. Бараней, Н.А. Использование показателей активности сукцинатденедрогеназа лимфоцитов для прогнозирования течения постреанимационного периода / Н.А.Бараней, В.Г.Долгих, Г.Ф.СусловаУ/Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 1985. -№11 С. 541-543.

8. Беленький, M.J1. Элементы количественной оценки фармакологического эффекта /М.Л.Беленький, Изд. Академии наук Латвийской ССР. -Рига, 1963. 115 с.

9. Бернштейн, Ф. Я. К вопросу о влиянии солей кобальта, цинка, марганца, алюминия на каталазу крови/ Ф.Я.Бернштейн//, Физиол. Журн. Сообщение 2, 1935.

10. Бернштейн, Ф. Я. Физиол. журн./Ф.Я.Бернштейн, М.К. Тищенко, Н.М. Шкляр// XIX, 4. Сообщение 1, 1935.

11. Брюшинин, Н.В. Применение экологически безопасных препаратов для стимуляции эмбрионального и постэмбрионального развития бройлеров, их резистентности и продуктивности. Автореф.дис.канд.вет. наук./МГАВМиБ им. К.И. Скрябина.-М., 2004. 17с.

12. Бессарабов, Б.Ф. Подагра (мочекислый диатез) /Б.Ф. Бессарабов, И. Мельникова// Птицеводство, 2001. №5. -С 2129.

13. Бессарабов, Б.Ф. Подагра (мочекислый диатез) // Ветеринария сельскохозяйственных животных. 2007.-№ 8. -С.41-43.

14. Бессарабов, Б.Ф. Производство экологически чистой продукции/ Б.Ф. Бессарабов // Птицеводство.-1992.-№6.-С.24-26.

15. Бурлаков, С.С. Влияние микродоз биологически активных соединений на эмбриональное и постэмбриональное развитие бройлеров.Автореф.дис. .канд.с.-х.наук./Рос.гос.аграр.заоч. ун-т. -М.,2001.-17с.

16. Бурмистров Е.Н. Клиническая лабораторная диагностика. Основные исследования и показатели/ Е.Н.Бурмистров, Программа повышения профессиональных знаний ветеринарных врачей в области клинической лабораторной диагностики. М.: ООО ЦЭВМ «Шанс», 2005. - 92 с.

17. Вернадский, В. И. Очерки геохимии. М., 1934. -139с.

18. Гедгройц К. К. Труды Селъскохоз. хим. лабор., вып. 6, СПб., 1909.

19. Георговский, В.И. Зависимость содержания аминистого азота и гексозаминов в крови кур от уровня марганца в рационе / В.И. Георговский, Е.П. Полякова// Биоогические основы и технологические методы интенсификации птицеводства. -М.,1988.- С. 11-16.

20. Георгиевский, В.И. Минеральное питание с.-х. птицы/ В.И. Георгиевский. -М.:Колос, 1970.-327 с.

21. Георгиевский, В.И. Усвоение марганца цыплятами и курами из разных рационов /В.И. Георгиевский, Е.П. Полякова // Микроэлементы в биологии и их применение в медицине и в сельском хозяйстве. Т.З. М. 1986. - С. 177-179.

22. Георгиевский, В.И. Удержание макро- и микроэлементов в организме бройлеров в связи с уровнем микроэлементов в рационе / В.И. Георгиевский, Д.А. Хазин, Е.ГТ. Полякова// Сельскохозяйственная биология. -1981.-Т. XVI. С. 446-449.

23. Гильметдинов, Б.М. Фармако-токсикологическая оценка производных дикарбоновых кислот. Автореф.дис.канд. биол.наук./Всерос.н.-и.вет.ин-т.- Казань, 2003.- 23 с.

24. Гордеев, В. В. Влияние растворов янтарной кислоты на естественную резистентность, прирост живой массы цыплят: Вопросы физико-химической биологии в ветеринарии. -М., 1995.-89 с.

25. Премексы. Методы определения массовой доли микроэлементов (марганца, железа, меди, цинка, кобальта): ГОСТ РФ 51637-2000/ Комбикорма. Методы анализа : (сб. стандартов). -М., 2002.-Ч.8. С.92-110.

26. Дёмина, Е.Н. Влияние сукцината цинка на гематологические показатели цыплят в процессе роста и развития/Е.Н.Дёмина// Матер. Межд. учеб.-метод и науч.-практ.конф. посвященной 85-летию академии. Часть 2/МГАВМиБ им. К.И. Скрябина.-М., 2004.- С.315-317.

27. Заржевский, B.C. Стабелист мощный улучшает результаты инкубации/ B.C. Заржевский, JI.M. Наумова, С. Донец// Птицеводство.-2003.-№7.-С. 11-12.

28. Иваницкий, Ю.Ю. Влияние сукцината натрия на молочную продуктивность коров/ Ю.Ю. Иваницкий, О.Ф. Леккина//Зоотехния. 1994. -№ 11. - С. 19-20.

29. Иващенко, А.Т. Механизмы влияния анионов на активность АТФ-азы/А.Т. Иващенко// Науч. докл. выш. школы. Биолог, наука. -1981.-№7.-С.5-15.

30. Иващенко,А.Т. Анионочувствительная аденозинтрифосфотаза мембран эритроцитов крысы//Биохимия.-1978.-Т.43, вып.б.-С. 1086-1089.

31. Измеров, Н.Ф. Параметры токсикометрии промышленных ядов при однократном воздействии: Справочник/Н.Ф. Измеров, И.В. Саноцкий, К.К. Сидоров.— " М.: Медицина, 1977.- 365 с.

32. Кабиров, Г.Ф. Хелатные формы биогенных металлов в животноводстве/ Г.Ф. Кабиров, Г.П. Логинов, Н.З. Хазипов; ФГОУ ВПО «Казанская гос.акад.вет.мед». Казань, 2004.-248 с.

33. Кальницкий, Б.Д. Биологическое значение хелатных соединений микроэлементов в организме поросят. /Б.Д. Кальницкий, И.И. Стеценко, В.И. Павлов// Пятый Всесоюзный биологический съезд: Тезисы стендовых сообщений. Т. 3.- М.,1986.-С. 260-261.

34. Кальницкий, Б.Д. Профилактика анемии поросят/Б.Д. Кальницкий, С.Г. Кузнецов, А.П. Батаева//Ветеринария. -1988. №7. - С.51-52.

35. Канаян, Л.Р. Применение янтарата калия и N -ацетилэтаноламина для предынкубационной обработки яиц/Л.Р. Канаян, Р.Г. Камалян, Н.Н. Натишвили, Ю.Н.

36. Погосян// Учёные Ереванского зоотехнико-ветерннарного института производству. -1986. С. 19-20.

37. Карапетьянц, М.Х. Общая и неорганическая химия: Учебник для вузов/М.Х. Карапетьянц, С.И. Дракин.- М.: Химия, 1993.-457с.

38. Кармолиев, Р.Х. Методические указания к лабораторному практикуму по органической химии.-2-e изд., перераб. и доп. -М.,1978.- 64с.

39. Кармолиев, Р.Х. Реакция цыплят на введение глицината и сукцината/Р.Х. Кармолиев, В.А. Лукичёва, М.С. Найденский, А.Д. Чикмарёв// Птицеводство.-2003.-№2.-С.6-7.

40. Кармолиев Р.Х. Современные биохимические методы исследования в ветеринарии и зоотехнии. -М.: Колос, 1970.-288с.

41. Кармолиев, Р.Х. Сравнительная физико-химическая характеристика белков крови крупного рогатого скота в различные периоды онтогенеза, стельности и лактации.

42. Дис.доктора.биол.наук./Вет.акад. им К.И. Скрябина. М., 1988.- 486с.

43. Кармолиев, Р.Х. Стимуляция энергетического обмена организма цыплят-бройлеров биологически активными веществами в процессе роста и развития /Р.Х. Кармолиев, В.А. Лукичева// Вопросы физико-химической биологии в ветеринарии. -М, 1999. -С.11-13.

44. Кармолиев, Р.Х. Теоретические основы в биохимии испытания биологически активных соединений сукцината и аминоацетата/ Р.Х. Кармолиев, P.P. Кармолиев, В.В. Нестеров// Доклады Российской академии селскохозяйственных наук. 2006. - № 2. - С. 35-40.

45. Кибец, Н. М. Синтез смешанолегандных комплексов металлов с витаминами и аминокислотами и изучение их биологических свойств на животных: Дисс. Доктора биолог наук./ МГАВМиБ им. К.И. Скрябина,- М.,2006.-329с.

46. Клименко, Ю. В. Химическое обогащение марганцовых руд /Ю.В. Клименко, А.П. Квасков//-М., 1946.-125с.

47. Комов, В.П. Биохимия: Учеб. для вузов/В.П. Комов, В.Н. Шведова.- М.: Дрофа, 2004. 640с.

48. Кондрашева, М.Н. Биохимические основы физиологического влияния янтарной кислоты и общая характеристика ее действия на организм/ М.Н. Кондрашева//Терапевтическое действие янтарной кислоты:.- Пущино, 1976.-С.6-36.

49. Кондрашова, М.Н. Взаимодействие гормональной и митохондриальной регуляции /М.Н. Кондрашова, Е.И.

50. Маевский// В кн.: Регуляция энергетического обмена и физиологическое состояние организма / под ред. М.Н. Кондрашовой. М.: "Наука", 1978. - С. 217-229.

51. Кормовая добавка: пат. 2086149 Рос. Федерация: С 1, 6 А 23 К 1/16 / Заживихина Е.И, Смирнова С.Н.; заявитель и патентообладатель Чувашский государственный университет им.И.Н. Ульянова. -№ 95112248/13; заявл. 18.07.95; опубл. 10.08.97, Бюл.№22.- 8с.:ил.

52. Косенко, Е.А. Янтарнокислый натрий-радиопротектор. /Е.А. Косенко, Ю.Г. Каминский// Янтарная кислота в медицине, пищевой промышленности, сельском хозяйстве: Сб.науч.тр./-Пущино, 1997.-С. 128-133.

53. Коттон, Ф. Основы неорганической химии. /Ф. Коттон, Дж. Уилкинсон. М.: Мир, 1979.- 487С.

54. Кребс, Г.А. Превращения энергии в живых системах /Г.А. Кребс, Г.Л. Корнберг// М.: Изд. иностр. лит., 1959.-137с.

55. Кривова, Т.С. Синтетические металлохелаты и проблема повышения репродуктивных функций с/х животных / Т.С. Кривова, Г.М. Артемьева, Э.С. Елисеева// Пятый Всесоюзныйбиологический съезд: Тезисы стендовых сообщений. Т. 3.-М., 1986.-С.265-266.

56. Кузнецов, С.Г. Биологическая доступность минеральных веществ для животных: Обзорная информация/ ВНИИТЭИагропром. М.: ВНИИТЭИагропром, 1992.-52 с.

57. Курсуая, Ю.А. Воздействие предынкубационной обработки куриных яиц излучениями плазмы. Автореф. дис. . канд. с.-х. наук./Моск. с.-х. акад. им. К. А. Тимирязева.-М., 2002.-19с,

58. Логинов, Г.П. Влияние синтетических металлохелатов на содержание свободных аминокислот в плазме крови и продуктивность кур: Сб.науч.тр./ Казанский вет.ин-та.-Казань, 1981.-Т.137.-С.67-71.

59. Лузбаев, К. Янтарная кислота как стимулятор роста/ К. Лузбаев, Н.С. Найденский, С. Зубалин// Птицеводство.- 1996.-№2.-С. 20-21.

60. Маевский, Е.И. Коррекция метаболического ацидоза путем поддержания функций митохондрий/ Е.И. Маевский, А.С. Розенфельд, Е.В. Гришина, М.Н. Кондрашова.- Пущино, 2001.- 155 с.

61. Малов, Д.В. Фармако-токсикологические свойства и эффективность применения сукцината железа -при алиментарной анемии поросят: Дис.канд. вет. наук./ Казанская гос. академия вет. медицины им. Н.Э. Баумана.-Казань, 2002.-152 с.

62. Мерзленко, О.В. Фармакологические свойства препаратов, полученных на основе биокоординационных соединений металлов с аскорбиновой кислотой.: Автореф.дис.д-ра вет.наук/ Урал.гос.ин-т вет.медицины.- Троицк, 1998.-39с.

63. Мудрый, И.Н А.С. № 55396Э МКИ А 23 к 1/16 Официальный бюллетень "Снятие стрессового состояния у птицы".

64. Мудрый, И.Н. Стрессы у кур-несушек и пути их предупреждения// Уральские Нивы. 1973. - №3. - С.52-54.

65. Мудрый, И.Н. Сравнительная характеристика биологических веществ для профилактирования стрессов у птицы/ Й.Н. Мудрый, Н.А. Кравченко// Животноводство. 1978.-№ З.-С. 67-69.

66. Найденский, М.С. Применение янтарной кислоты для стимуляции роста и развития цыплят /М.С. Найденский, В.В. Нестеров, Р.Х. Кармолиев, В.А. Лукичева.// Ветеринария. 2002. -№ 12.-С.44-46.

67. Найденский, М.С. Резервы повышения продуктивности цыплят бройлеров/ М.С. Найденский// Современные проблемы в зоотехнии. -М., 2001. -4.2. -С. 128-129.

68. Неликаева, Е.Г. Продуктивность и некоторые показатели обмена веществ у кур-несушек при скармливании хелатныхсоединений микроэлементов.: Автореф.дис.канд.биол. наук./МГАВМиБ им. К.И. Скрябина,- М., 2000.-20с.

69. Нестеров, В.В. Влияние янтарной кислоты и комбинированное применение их с озоном на инкубационные качества яиц: Российский Международный экологический форум. Курск, 1995.- С. 40-43.

70. Нижарадже, Т. Влияние температурных факторов на стимулирующий эффект ГАМК (гаммааминомасляной кислоты). /Т. Нижарадже, JI. Тортладзе// Сб.науч.тр. Груз.гос.зоотехн.-вет. академии. Тбилиси, 2002.-60.№1.-С.348-356.

71. Никулина, А.А. К вопросу влияния янтарной кислоты на свёртываемость крови и баланс катехоламинов / В.П. Никулина, С.И. Храпова, Е.А. Тебякина// Фармакология и токсикология. -Рязань, 1988. №3.- С. 28-30.

72. Орлов, М.В. Биологический контроль в инкубации.- 3-е изд., перераб. и доп.-М.: Россельхозиздат, 1987.-239 с.

73. Орлов, М.В. Повышение биологической полноценности яиц путём введения в них перед инкубацией витаминовгруппы-В/М.В. Орлов, Ю.Н. Владимирова, К.В. Злочевская// Труды ВНИИП. Т XXXVIII/.- 1963.-С.457-459.

74. Самохин, В.Т. Хронический комплексный гипомикроэлементоз и здоровье животных// Ветеринария.-2005. -№12.-С. 3-5.

75. Тауцинь, Э.Я. Влияние ЭДТА и хлортетрациклина на усвоение микроэлементов у цыплят/ Э.Я. Тауцинь//

76. Физиологические активные компоненты питания животных: Сб.науч.тр.- Рига: Зинатне, 1969.-С.213-227.

77. Тен, А. Э. Рост и физиолого-биохимические показатели бройлеров под влиянием прединкубационной вакуумной обработки яиц растворами соединений марганца. Дисс.канд.биол. наук./ Ульяновская гос.с.-х. академия. Ульяновск.-2000. 111С.

78. Тен, Э.В. Биологические эффекты хелат-комплексов биогенных элементов и технология их использования в животноводстве: Автореф. дис. д-ра биол.наук/ВНИИ физиологии, биохимии и питания с-х. животных.-Боровск,1987.-29с.

79. Тен, Э.В. Влияние глицинатов меди и цинка на продуктивные качества кур-несушек /Э.В. Тен, Я.Л. Гудкович, И.И. Стеценко// Эндемические болезни и микроэлементы: Сб. науч. тр. Казан, зоовет. ин-тут.- Казань, 1977. С.90-91.

80. Тен, Э.В. Метаболические маршруты биогенных металлов в организме животных /Э.В. Тен// Биохимические аспекты использованя хелатных структур переходных металлов в животноводстве. -Ульяновск, 1997. -С. 4-9.

81. Тен, Э.В. Стимуляция прироста живой массы молодняка крупного рогатого скота/Э.В. Тен, А.Н. Конев// Вестник Ульяновской государственной с-х. акад. Серия «Ветеринария. Зоотехния». Ульяновск, 2001.-№4.-С.125-126.

82. Троцкий, М. В. Труды Гос. Ин-та усовершенствования врачей в Казани, 1933.

83. Успенский, Е. Е. Опытная агрономия.- XVI, 1915. С.4-6.

84. Филатова, Г.Ф. Содержание катехоламинов в органах крыс при охлаждении на фоне производных янтарной кислоты /Г.Ф. Филатова, Г.А. Кузнецова, Ю.Г. Бобков// Бюл. Экспериментальной биологии и медицины.-М; 1986.-№ 9.- С. 315-316.

85. Фисинин, В.И. Продуктивные качества кур, дыхание и окислительное фосфорелирование в митохондриях печени под влиянием янтарной и малоновой кислот / В.И. Фисинин, А.Г. Бирюков, Б.Ф. Авдонин// Сельскохозяйственная биология. -1986. №12. - С.3-7.

86. Фисинин, В.И. Промышленное птицеводство/ В.И. Фисинин, Г.А. Тардатьян. -М.: Агропромиздат, 1985.- 479 е., ил.

87. Фурдуй, Ф.И. Состояние и перспективы исследований проблемы стрессов и адаптации в промышленном животноводстве// Сельскохозяйственная биология. 1990. -№ 2.-С. 11-21.

88. Хал из ев, А. А. Химические стимуляторы, Сельхозгиз, М—Л., 1934.

89. Храброва, Е.М. Профилактика стрессов в птицеводстве путем использования экологически чистых препаратов // Актуальные проблемы животноводства: Сб.науч.тр.-М., 1998. -С. 123-128.

90. Черняк, М.И. Эффективность применяемых световых режимов при производстве яиц и мяса кур (зарубежный опыт): Обзор. -М., 1995. -43 с.

91. Bertrand, G. С. R. Soc. Biol., 120,1895.-Р.266—269.

92. Bertrand, G. С. R. Soc. Biol., 124, 1897.-P.1032—1036

93. Beauchamp, D.A. Chem.-Eur/ D. A. Beauchamp, S. J. Loeb// J., 2002, 8, P.5094.

94. Ehrismann, O. Ztschr. f. Hyg. u. Infektionskrankh., 122,2, 1939

95. Fritz, J.C. Trance elements needs and to erances by poultry. -Poultri Pig., 1973, vol.32, №8, P.362-364.

96. G.M.Sheldrick, SHELXTL Version 5, Software Reference Manual, Siemens Industrial Automation, Madison, WI, 1994.

97. Gibbons, R.A. Manganese metabolism in cows and goats. / R.A. Gibbons, S.N. Dixon, K. Hallis et al.// Biohim. Biophys. Acta, vol.444,№ 1,1976, P. 1-10.

98. He W., Miao F.J., Lin D.C., Schwandner R.T. et al. Citric acid cycle intermediates as ligands for orphan G-protein-coupled receptors //Nature. 2004 May 13;429(6988): 188-93.

99. Jian Fan, Hui-Fang Zhu, T.Okamura, Wei-Yin Sun, Wen-Xia Tang, U.Norikazu, Chin. J.Inorg.Chem., 2004, 20, 17.

100. Kondrashova, M.N., Volkova S.P., Kuznetzov V.I. et al. Succinic acid as a physiological signal molecule // in Signal molecules and behavior. Eds. W. Winlow, O. Vinogradova, D. Sakharov, Manchester & NY, Manchester University Press, 1990, P. 294301.

101. Leach, R. M. Manganese.// Trace elements in human health and disase. New York; London, 1976. Vol. 11. P. 236-247.

102. Longstaff, M., Hill R. The influence of dietary manganese and stage of egg production on the hexosavine and hydroxyprolain contents and parts of the oviduct.// Brit. Poultrey Sci. 1972. Vol. 12, №2 P. 401-411.

103. Maevsky, E.I., Gusar I.B., Rosenfeld A.S. et al. Doesn't succinic acid mediate adrenaline stimulation in mitochondria? // II Europ. Bioenerg. Conf. Lyon, 1982. P. 589-590.

104. Mapes, J.P, Hariis R.A. Febs tell., 1975, vol.5l.,P.680-683.

105. McCarrison R. Ind. J. Med. Res., 14, 614—648, 1927.

106. McHorge. Am. J. Physiol., 77, 245, 1926.

107. Mellor J. W. A comprehensive Treatise on Inorganic and theoretical Chemistry, XII, 1932.

108. Orent and Collum J. Biol. Chem., 92,951,1931

109. Richet, Gardner et Goodbody. C. R. Acad. Sci., 181, 1105, 1925

110. Rutzler I. E. Langecker, 1323, 1934.

111. Skinner, Peterson und Steenbock. Biochem. Ztschr., 250,1932.

112. Spenser T.L. Fed.Proc., 1976 , vol.35.,p.1760-1764.

113. Structure Correlation. Ed. H.-B.Burgi and J.D.Dunitz. VCH: Weinheim, 1994, v.2, p.767-784.

114. Titus, Cave und Hughes J. Biol. Chemie, 80, 1928.

115. Weisiger R.A.,Fridovich J. Mitichondrial superoxide dismutase // J. Biol.Chem. 1973. Vol. 248.№13 P.4793-4796.