Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Вовлеченность полиморфизма генов сигнального каскада арилгидрокарбонового рецептора и биотрансформации ксенобиотиков в развитие гипертонической болезни и ее осложнений

ВАК РФ 03.02.07, Генетика

Автореферат диссертации по теме "Вовлеченность полиморфизма генов сигнального каскада арилгидрокарбонового рецептора и биотрансформации ксенобиотиков в развитие гипертонической болезни и ее осложнений"

На правах рукописи

БУЛГАКОВА Ирина Викторовна

ВОВЛЕЧЕННОСТЬ ПОЛИМОРФИЗМА ГЕНОВ СИГНАЛЬНОГО КАСКАДА АРИЛГИДРОКАРБОНОВОГО РЕЦЕПТОРА И БИОТРАНСФОРМАЦИИ КСЕНОБИОТИКОВ В РАЗВИТИЕ ГИПЕРТОНИЧЕСКОЙ БОЛЕЗНИ И ЕЕ ОСЛОЖНЕНИЙ

03.02.07 - генетика

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

3 О ОКТ 2014

005553978

Белгород - 2014

005553978

Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Курский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации.

Научный руководитель:

Полоников Алексей Валерьевич,

доктор медицинских наук, профессор

Официальные оппоненты:

Зинченко Рена Абульфазовна,

доктор медицинских наук, профессор, ФГБУ «Медико-генетический научный центр РАМН», руководитель лаборатории генетической эпидемиологии Асанов Алий Юрьевич

доктор медицинских наук, профессор, ГБОУ ВПО «Первый Московский государственный медицинский университет им. И.М. Сеченова» Министерства здравоохранения Российской Федерации, заведующий кафедрой медицинской генетики

Ведущая организация:

Федеральное государственное бюджетное учреждение «Российский кардиологический научно-производственный комплекс» Министерства здравоохранения Российской Федерации

Защита диссертации состоится «13» ноября 2014 года в 12:00 на заседании совета по защите диссертаций на соискание ученой степени кандидата наук, на соискание ученой степени доктора наук Д 212.015.13 при ФГАОУ ВПО «Белгородский государственный национальный исследовательский университет», по адресу: 308015, г. Белгород, ул. Победы, 85. |

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке ФГАОУ ВПО ! «Белгородский государственный национальный исследовательский университет» Минобрнауки России и на сайте: www.bsu.edu.ru.

Автореферат разослан «25» октября 2014 года ¡

¡

Ученый секретарь совета

по защите диссертаций на соискание учёной степени кандидата наук, на соискание учёной степени доктора наук Д 212.015.13,

доктор биологических наук

Общая характеристика работы

Актуальность проблемы. Артериальная гипертония - самое распространенное в мире сердечно-сосудистое заболевание, актуальность которого определяется высоким уровнем его заболеваемости и смертности, а также отсутствием на сегодняшний день эффективных методов лечения и профилактики патологии в масштабах популяции. Распространенность АГ в России по данным научно-исследовательского центра профилактической медицины РФ составляет 40% среди взрослого населения. Вклад АГ в смертность лиц среднего возраста от ССЗ составляет 40%, а в смертность от мозгового инсульта от 70 до 80% [Глотов A.C., Баранов B.C., 2007; Агеев Ф.Т., 2004; Шальнова С.А., 1999].

Гипертоническая болезнь (ГБ) - наиболее распространенная форма артериальных гипертензий, в настоящее время рассматривается как мультифакториальное заболевание (МФЗ), в основе развития которого лежат полигенные генетические механизмы, обусловливающие высокую активность прессорных механизмов длительного действия и определяющие стойкое хроническое повышение уровня систолического и/или диастолического артериального давления (АД). Полиэтиологичность заболевания связана с вовлеченностью в его этиопатогенез большого числа факторов риска как средовых, так и генетических [Алмазов В.А., Шварц Е.И., 2000; Corizzato M., Sega R., 2005; Qi Y, Niu W., 2008].

В последние годы научно-медицинское сообщество все больше получает доказательств того, что на роль ведущей причины прогрессирующего роста заболеваемости ГБ могут претендовать экологические факторы, а именно существенно нарастающее химическое загрязнение окружающей среды [Brook et al., 2009; Dong et al., 2013; Foraster et al., 2014]. Эколого-эпидемиологические исследования свидетельствуют о прямой зависимости заболеваемости ГБ от уровня химического загрязнения окружающей среды и в первую очередь атмосферного воздуха. Тем не менее на сегодняшний день фактически не изучены и по-прежнему остаются без должного внимания исследователей эколого-генетические аспекты этиопатогенеза ГБ [Urch et al., 2005; Sun et al., 2008; Brook et al., 2009; Dong et al., 2013; Foraster et al., 2014]. В условиях современной техногенной цивилизации наиболее существенный вклад в формирование предрасположенности к социально значимым болезням человека, включая ГБ, могут вносить гены ферментов биотрансформации ксенобиотиков (ФБК) [Полоников A.B. с соавт., 2008]. Учитывая факт того, что контроль и регуляция экспрессии генов ФБК осуществляется посредством целого каскада взаимосвязанных сигнальных реакций, инициируемых арилгидрокарбоновым рецептором (КАГР) [Okey A.B., 1994; Hahn М.Е., 2009], гены КАГР также могут вносить свой вклад в предрасположенность к гипертонической болезни. Однако до настоящего времени исследований вовлеченности генов сигнального каскада арилгидрокарбонового рецептора и индуцируемых им генов биотрансформации ксенобиотиков при ГБ не проводилось ни в России, ни за рубежом.

Цель: Провести анализ вовлеченности генов сигнального каскада арилгидрокарбонового рецептора и биотрансформации ксенобиотиков в формирование предрасположенности к гипертонической болезни и ее осложнениям.

Задачи:

1. Изучить частоты аллелей и генотипов полиморфизмов генов КАГР и ФБК, таких как AHR (R554K), ARNT (C189G), AHRR (Р185А), CYP1A1 (I462V), CYPIA2 (1540А), CYP1B1 (V432L) и NQOl (P187S) в популяции русских жителей Центральной России.

2. Исследовать ассоциации аллелей и генотипов полиморфизмов генов КАГР и ФБК с риском развития ГБ в анализируемой популяции, в том числе с учетом пола и возраста манифестации заболевания.

3. Изучить взаимодействия между генами КАГР и ФБК, а также известными генами-кандидатами ГБ и дать оценку их совместной вовлеченности в формирование наследственной предрасположенности к заболеванию.

4. Провести оценку гаметических корреляций между полиморфными вариантами генов КАГР и ФБК и определить паттерны аллельных сочетаний у больных ГБ и здоровых индивидов.

5. Исследовать генно-средовые взаимодействия, детерминирующие предрасположенность к ГБ, посредством совместной оценки полиморфизмов генов КАГР и ФБК и курения.

6. Изучить связи полиморфизма генов КАГР и ФБК с особенностями клинического течения ГБ и развитием осложнений.

Новизна исследования. Впервые проведен комплексный анализ ассоциации полиморфизма генов сигнального каскада арилгидрокарбонового рецептора AHR (R554K), ARNT (C189G), AHRR (Р185А) совместно с ферментами биотрансформации ксенобиотиков CYP1A1 (I462V), CYP1A2 (1540А), CYP1BI (V432L) и NQOl (P187S) с риском развития гипертонической болезни и развивающихся на ее фоне осложнений. Впервые установлены пол-специфические эффекты полиморфных вариантов генов КАГР и ФБК в отношении предрасположенности к ГБ. Впервые показаны различия во взаимосвязях генов КАГР и ФБК с риском развития ГБ в зависимости от возраста дебюта заболевания. Впервые охарактеризованы взаимодействия между полиморфными вариантами генов КАГР и ФБК, составляющие генетическую основу предрасположенности к гипертонической болезни.

Научно-практическое значение Полученные в ходе исследования результаты расширяют представления о эколого-токсикогенетической природе гипертонической болезни и создают основу для дальнейших исследований этиологии и патогенеза заболевания и разработки методов молекулярной диагностики, лечения и профилактики патологии. Полученные результаты могут быть востребованы в практической деятельности врачей-генетиков,

4

терапевтов, кардиологов и неврологов для оценки риска развития ГБ и ее осложнений задолго до их клинической манифестации. Такой подход позволит формировать группы риска развития болезни и проводить среди них превентивные мероприятия, направленные на предупреждение риска развития ГБ и улучшение качества жизни людей. Результаты исследования могут использоваться при чтении специальных курсов по медицинской и клинической генетике, биохимии, патофизиологии, кардиологии и внутренних болезней в медицинских вузах и на курсах повышения квалификации медицинских работников.

Апробация работы. Материалы диссертационного исследования доложены на XXIII Всероссийской конференции обучающихся «Национальное достояние России» (Москва, 2008), 74-й межвузовской итоговой научной конференции студентов и молодых ученых: Молодежная наука и современность (Курск, 2009), 75-й Всероссийской научной конференции студентов и молодых ученых с международным участием: Молодежная наука и современность (Курск, 2010), конференции Европейского общества генетиков -ESHG (Амстердам, 2011), Российском конгрессе с международным участием: «Молекулярные основы клинической медицины - возможное и реальное» (Санкт-Петербург, 2012), 78-й Всероссийской научной конференции студентов и молодых учёных с международным участием «Молодёжная наука и современность», посвященной 78-летию КГМУ и 80-летию со дня рождения члена-корреспондента РАМН, профессора A.B. Завьялова (Курск, 2012), V Международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы биологии, нанотехнологий и медицины» (Ростов-на-Дону, 2013), IX Международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы современных наук» (Прага, 2013), VII международной научной конференции молодых ученых-медиков (Курск, 2013), XVIII заочной научной конференции Research Journal of International Studies (Екатеринбург, 2013), Международной научно-практической конференции «Перспективы развития науки» (Уфа, 2014), Международной заочной научно-практической конференции «Наука, образование, общество: проблемы и перспективы развития» (Тамбов, 2014 г.).

Личный вклад автора. Диссертантом проанализированы отечественные и зарубежные источники по теме диссертационного исследования, с использованием которых был подготовлен литературный обзор. Диссертант лично участвовала в сборе дополнительного клинического и биологического материалов, обследовании больных ГБ, а также в анкетировании 220 пациентов в период 2011-2012 гг. Диссертантом лично проведено выделение ДНК у пациентов и проведено генотипирование 7 полиморфизмов генов КАГР и ФБК на выборке из 1151 человека. Автор принимал непосредственное участие в статистической обработке полученных данных и интерпретации и описании результатов исследования. Диссертант подготовила основные публикации по теме выполненной работы и участвовала в апробации и внедрении результатов исследования.

Публикации. По материалам диссертации опубликована 21 печатная работа, из них 8 в журналах из списка ВАК.

Положения, выносимые на защиту:

1. Гены сигнального каскада арилгидрокарбонового рецептора и сопряженные с ними гены ферментов биотрансформации ксенобиотиков являются частью токсико-генетической компоненты предрасположенности к гипертонической болезни.

2. Влияние полиморфных вариантов генов КАГР и ФБК на риск развития гипертонической болезни характеризуется возрастными различиями в дебюте заболевания, а также пол-специфическими эффектами полиморфизмов на подверженность болезни у мужчин и женщин.

3. Полиморфизмы генов КАГР и ФБК не оказывают существенного влияния на клиническое течение гипертонической болезни, однако связаны с риском развития мозгового инсульта и гипертрофии миокарда левого желудочка сердца.

4. Полиморфные варианты генов КАГР и ФБК взаимодействуют с известными генами-кандидатами гипертонической болезни, что отражает их совместную вовлеченность в молекулярные звенья патогенеза заболевания.

Структура и объем диссертации Диссертация состоит из введения, обзора литературы, Материалов и методов исследования, трех глав результатов собственных исследований, заключения в виде обсуждения полученных результатов, выводов, практических рекомендаций, списка литературы и приложения. Работа изложена на 166 страницах машинописного текста, содержит 28 таблиц и 7 рисунков. Библиографический список используемой литературы включает 375 источников, из которых 296 зарубежные.

Материалы и методы исследования.

Общая характеристика выборки

Объектом для данного исследования послужила выборка неродственных индивидов русской национальности, проживающих на территории ЦентральноЧерноземного региона России (преимущественно в Курской области). В исследование был вовлечен 1151 человек. Всего было обследовано 602 больных гипертонической болезнью, в том числе 125 человек, перенесших ишемический инсульт, а также 549 относительно здоровых лиц с нормальным АД. Критериями отбора пациентов в исследуемые группы были: отсутствие родства между индивидами, русская национальность и проживание на территории ЦЧР. Формирование групп больных ГБ проводилось на базах профильных кардиологических и неврологических отделений областной клинической больницы и больницы скорой медицинской помощи в периоды 2003-2004, 2008-2009 и 2011-2012 гг. Включение пациентов в группу больных ГБ осуществлялось только после установления клинического диагноза заболевания, подтвержденного клиническими и лабораторно-

инструментальными методами обследования. Контрольная выборка относительно здоровых лиц формировалась как из здоровых добровольцев, пациентов травматологического, отоларингологического, хирургических отделений областной клинической больницы, так и при массовых обследованиях населения во время профосмотров на промышленных предприятиях, экспедиций в образовательных и других учреждениях г. Курска и Курской области. Критериями включения индивидов в контрольную группу были нормальный уровень артериального давления и отсутствие хронических заболеваний. Группа больных ГБ соответствовала контрольной группе как по полу, так и по возрасту (р>0.05). Данные распределения представлены в таблице 1. У всех пациентов проводилось клинико-генеалогическое исследование семейного анамнеза и анкетирование с целью оценки факторов риска развития болезни (образ жизни, наличие вредных привычек, особенности питания и др.).

Таблица 1

Распределение обследованных групп по полу и возрасту

Группа больных ГБ (n=602) Контрольная группа (п=549) р-уровень значимости по возрасту р-уровень значимости по полу

ср. возраст X ± а пол, п ср. возраст X ± ст пол, п

M Ж M Ж

55,6±12,3 352 250 55,5±11,7 332 217 0,2 0,5

Молекулярно-геиетические методы

Для проведения молекулярно-генетических исследований у всех обследуемых за период с 2011-го по 2012 г. проводился забор венозной крови. В работе также использовались образцы ДНК биобанка кафедры биологии, медицинской генетики и экологии КГМУ, полученные от больных ГБ и здоровых индивидов за периоды обследования в 2003-2004 и 2008-2009 гг.

В рамках исследования проводилось генотипирование 7 полиморфизмов (SNP-маркеров) генов КАГР и ФБК: AHR (R554K, rs2066853), ARNT (VI 89V, rs2228099), AHRR (P185A, rs2292596), СУР1А1 (I462V, rsl048943), CYP1A2 (1540A, rs762551), CYP1B1 (V432L, rsl056836) и NQOl (P187S, rsl800566). Для изучения межгенных взаимодействий дополнительно использовались результаты генотипирования различных генов-кандидатов ГБ, выполненного в генетической лаборатории кафедры биологии, медицинской генетики и экологии КГМУ в рамках ранее проведенных исследований [Полоников A.B., 2006; Солодилова М.А., 2010]: AGT (М235Т, rs699), AGT (Т174М, rs4762), AGTR1 ( 1166А/С, rs5186), ACE (I/D, rs4340), NOS3 (E298D, rsl799983), NOS3 (-786T>C, rs2070744), GNB3 (G814A/G272S, rs5442), GNB3 (C825T, rs5443), MPO (-463G>A, rs2333227), GSTM1 (+/del), GSTT1 (+/del) и GSTP1 (I105V, rsl 695), С ATI (-262СЛГ, rsl001179) ADD1 (G460W, rs4961), TGFB1 (R25P, rsl 800471).

Генотипирование ДНК-маркеров генов КАГР и ФБК осуществлялось методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени на амплификаторе CFX-96 (Bio-Rad) с использованием прамеров и зондов, синтезированных ООО «Синтол». Генотипирование полиморфизмов КАГР и ФБК проводилось методом дискриминации аллелей с использованием TaqMan-зондов и программного обеспечения - Standard Edition Version 2.0 (Bio-Rad). Проводился контроль качества генотипирования около 5% образцов по каждому полиморфизму, результаты которого на 100% соответствовали изначальным данным генотипирования.

Генетико-статистические методы

Статистическая обработка данных проводилась на персональном компьютере с использованием пакета прикладных программ STATISTICA for Windows v8.0 (StatSoft Inc., США) и MS Excel 2007. Оценка соответствия распределений генотипов ожидаемым значениям при равновесии Харди-Вайнберга (РХВ) и сравнение распределений частот генотипов и аллелей в выборках больных и здоровых осуществлялась с использованием критерия у_2 Пирсона. Показатель ожидаемой гетерогиготности рассчитывали по Nei. Относительное отклонение ожидаемой гетерозиготности от наблюдаемой (D) рассчитывали, используя следующую формулу: D = (Но-Не)/Не, где Но-наблюдаемая гетерозиготность, Не - ожидаемая гетерозиготность.

Анализ ассоциации полиморфизмов генов КАГР и ФБК с предрасположенностью к ГБ. Сравнение частот аллелей и генотипов между различными группами осуществлялось в таблицах сопряженности 2x2 (df= 1) с помощью критерия х~ с поправкой Йетса на непрерывность данных. Ассоциации аллелей и генотипов с предрасположенностью к ГБ оценивали по показателю отношения шансов - odds ratio (OR). Границы 95%-го доверительного интервала (Cl) для OR вычисляли методом В. Woolf.

Анализ ассоциации парных генных сочетаний. Межгенные взаимодействия изучали путем сравнения парных сочетаний генотипов КАГР и ФБК, а также других кандидатных генов ГБ. При проведении множественных сравнений использовали поправку Бонферрони [Реброва О.Ю., 2006].

Гаиетические корреляции между парами ДНК-маркеров рассчитывались по W.G. Hill. Гаметические корреляции рассчитывались методом максимального правдоподобия исходя из частот генотипов в таблицах сопряженности 3x3 при условии кодоминирования между оцениваемыми полиморфизмами отдельного гена.

Анализ генно-средовых взаимодействий осуществлялся путем сопоставления величин отношения шансов (OR), рассчитанных для индивидуальных генотипов в группах, сформированных по критерию наличия или отсутствия средового фактора риска (курения).

Результаты собственных исследований 1. Частоты аллелей и генотипов КАГР и ФБК у русских жителей центральной России и их связь с предрасположенностью к ГБ. При анализе распределения генотипов полиморфизмов генов КАГР и ФБК и их соответствия равновесию Харди-Вайнберга отклонений частот их генотипов от равновесия Харди-Вайнберга не наблюдалось. При сравнительном анализе частот аллелей изучаемых генов аллелей полиморфных генов КАГР и ФБК у больных гипертонической болезнью не выявлено статистически значимых различий от таковых в контрольной группе (р>0.05). В таблице 2 представлены данные сравнительного анализа частот генотипов, который также не выявил статистически значимых различий между группами больных ГБ и здоровых индивидов ни по одному из изучаемых ДНК-полиморфизмов.

Таблица 2

Сравнительный анализ частот генотипов полиморфных вариантов генов КАГР и ФБК

в группах больных ГБ и контроля

Ген Полиморфизм Генотипы Частоты генотипов X2' (Р) OR (Cl 95%)

Больные ГБ (п=602) Контрольная группа (п=549)

п % п %

AHR R554K. 554RR 486 81 425 77,8 1.6(0,21) 0,83 (0,62-1,1)

554RK 106 17,1 106 19,4 0,85 (0,36) 0.86 (0,64-1,17)

554К.К 11 1,8 15 2,7 1,09 (0,30) 0,66 (0,3-1,45)

AHRR Р185А 185РР 192 32,1 166 30,3 0,39 (0,53) 0,92 (0.72-1,19)

185РА 281 46,9 273 49,9 1,03 (0,31) 0,89(0,7-1,12)

185АА 126 21,0 108 19,7 0,29 (0,59) 1,02 (0,81-1,44)

ARNT G189C 189GG 227 37,8 228 41,5 1,70(0,19) 1,17(0.92-1,48)

189GC 290 48,3 248 45,2 1,09 (0,30) 1,13(0,9-1,43)

189СС 84 14,0 73 13,3 0,11 (0,74) 1,06 (0,76-1,48)

CYP1A1 I462V 462II 501 83,5 433 79,4 3,12(0,08) 0,76 (0,57-1,03)

4621V 94 15,7 108 19,8 3,38 (0,70) 0,75 (0.55-1,02)

462VV 5 0,8 4 0,7 0,04 (0,85) 1,14(0,3-4,25)

CYP1A2 1540А 154СС 63 10,5 68 12,4 1,10(0,29) 1,21 (0,84-1,75)

154СА 232 38,5 220 40,2 0,34 (0,56) 0,93 (0,74-1,18)

154АА 307 51,0 259 47,3 1,53 (0,22) 1,16(0,92-1,46)

CYPIB1 V432L 432VV 111 18,4 99 18,1 0,03 (0,87) 0,98 (0,72-1,32)

432VL 294 48,8 273 49,8 0,11 (0,74) 0,96 (0,76-1,21)

432LL 197 32,7 176 32,1 0,05 (0,83) 1,03 (0,8-1,32)

NQOl P187S 187РР 371 61,8 347 63.2 0,23 (0,63) 1,06 (0,83-1,35)

187PS 196 32,7 172 31,3 0.24 (0,63) 1,06 (0,83-1,36)

187SS 33 5,5 30 5,5 0,00 (0,98) 1.01 (0,61-1,67)

2. Проявление полового диморфизма в ассоциациях генов сигнального каскада арилгидрокарбонового рецептора и биотрансформации ксенобиотиков с предрасположенностью к гипертонической болезни. Стратифицированный по полу сравнительный анализ частот аллелей исследуемых генных локусов между группами мужчин больных ГБ и контрольной группы позволил установить, что аллель 55411 гена

9

AHR ассоциирован с риском развития гипертонической болезни у мужчин (OR=l,5 95%С1 1,07-2,14 р=0,02). В то же самое время аллель 154А гена CYP1A2 ассоциировался с риском развития заболевания (OR=l,28 95%С1 1,011,62 р=0,04). При проведении сравнительного анализа частот генотипов полиморфизмов генов КАГР и ФБК между группами мужчин больных ГБ и контрольной группы было установлено, что гомозиготный генотип по аллелю дикого типа 554RR гена AHR ассоциирован с риском развития гипертонической болезни (OR=l,54; 95%С1 1,04-2,22 р=0,03). При проведении сравнительного анализа генотипов в группе женщин нами не было выявлено статистически значимых ассоциаций генов ФБК и КАГР с предрасположенностью к ГБ ни по одному из изучаемых ДНК-полиморфизмов. Полученные результаты свидетельствуют о взаимосвязях отдельных полиморфных вариантов генов сигнального каскада арилгидрокарбонового рецептора (AHR R554K) и биотрансформации ксенобиотиков (CYP1A2 154СА) с предрасположенностью к гипертонической болезни у мужчин. Кроме того, результаты демонстрируют генетические различия между мужчинами и женщинами в предрасположенности к ГБ и обосновывают концепцию полового диморфизма в подверженности мультифакториальным заболеваниям, типичным примером которого и является гипертоническая болезнь.

3. Анализ ассоциации аллелей и генотипов полиморфизмов генов сигнального каскада арилгидрокарбонового рецептора и биотрансформации ксенобиотиков с риском развития ГБ с учетом возраста манифестации заболевания. Первоначально нами был проведен анализ распределения возраста манифестации ГБ на нормальность с помощью статистического критерия Колмогорова-Смирнова. Распределение больных по возрасту манифеста ГБ соответствовало критериям нормального распределения (р>0,05). Средний возраст манифестации ГБ составил 35,2±11,5 лет, который использовался нами для разделения больных с ранним (до 35 лет) и поздним (после 35 лет) дебютом заболевания. Анализ ассоциации проводился как в общей выборке пациентов, так и раздельно у мужчин и женщин. В таблице 3 суммированы статистически значимые ассоциации аллелей генов ФБК и КАГР с предрасположенностью к гипертонической болезни. Было установлено, что аллель 554R гена AHR ассоциировался с риском развития ГБ с поздним дебютом заболевания у мужчин (OR=7,36; 95%С1 1,01-13,9). Аллель 154А гена CYP1A2 был ассоциирован с риском развития гипертонической болезни как раннего (OR=l,6; 95%С1 1,64-3,91), так и позднего дебюта (OR=l,68; 95%С1 1,16-2,42). Также установлено, что гетерозиготный генотип 554RR гена AHR был ассоциирован с повышенным риском развития ГБ у мужчин с возрастом манифестации заболевания после 35 лет (OR=6,17; 95%С1 1,09-12,4). Гетерозиготный генотип 189GC гена ARNT ассоциировался с повышенным риском развития гипертонической болезни у женщин с поздним дебютом заболевания (OR=l,96; 95%С1 1,18-3,26). Носительство гомозиготного генотипа 154АА гена CYP1A2 было связано с повышенным риском развития ГБ независимо от возраста начала болезни. В целом полученные результаты свидетельствуют о том, что полиморфизмы генов КАГР и ФБК являются

значимыми предикторами возраста манифестации ГБ как у мужчин, так и у женщин.

Таблица 3

Ассоциации аллелей и генотипов полиморфизмов генов КАГР и ФБК с возрастом _манифестации гипертонической болезни_

Аллели и генотипы КАГР и ФБК Общая выборка OR 95%С1 (Р) Мужчины OR 95%CI (Р) Женщины OR 95%С1 (Р)

Манифестация до 35 лет п=102 Манифестация после 35 лет п=94 Манифестация до 35 лет п=28 Манифестация после 35 лет п=26 Манифестация до 35 лет п=74 Манифестация после 35 лет п=68

554R AHR 1,27 0,44-3,6 (0,66) 1,08 0,48-2,43 (0,86) 1,56 0,713,44 (0,27) 7,36 1,0113,9 (0,02)* 0,57 0,22-1,47 (0,24) 0,80 0,361,77 (0,58)

154А CYP1A2 1,6 1,64-3,91 (0,02)* 1,68 1,16-2,42 (0,01)* 1,02 0,472,23 (0,95) 0,50 0,142,85 (0,29) 0,47 0,17-1,3 (0,14) 0,54 0,191,55 (0,25)

554RR AHR 0,57 0,261,26 (0,17) 0,72 0,21-2,47 (0,62) 0,84 0,361,95 (0,69) 6,17 1,09-12,4(0,02)* 1,08 0,45-2,6 (0,87) 1,05 0,542,08 (0,88)

189GC ARNT 0,84 0,381,85 (0,94) 0,94 0,43-2,05 (0,88) 0,98 0,452,15 (0,96) 1,14 0,68-1,92(0,61) 0,71 0,41-1,21 (0,84) 1,96 1,183,26 (0,005)*

154АА CYP1A2 3,6 23-6,72 (0,01)* 2,06 130-3,24 (0,001)* 0,8 0,13-5,03 (0,52) 0,75 0,4-1,18(0,18) 0,95 0,57-1,59 (0,74) 0,89 0,762,79 (0,78)

* - статистически значимые ассоциации

4. Анализ ассоциации аллелей и генотипов полиморфизмов генов КАГР и ФБК с особенностями клинического течения гипертонической болезни и развитием осложнений. С целью оценки вклада изучаемых генов в детерминацию особенностей клинического течения гипертонической болезни был проведен стратифицированный анализ ассоциаций аллелей и генотипов с развитием лабильной (лГБ) и стабильной (сГБ) форм заболевания. Однако проведенный анализ не выявил статистически значимых различий между изучаемыми группами (данные не представлены).

Таблица 4

Сводные данные о взаимосвязях полиморфизмов генов КАГР и ФБК с развитием

осложнений на фоне ГБ

Ген Полиморфизм Ишемический инсульт х\ (р) ГМЛЖ X, (Р)

AHR R554K 4,14(0,04)'* 0,93 (0,33)

ARNT G189C 4,79 (0,03)J* 0,36 (0,24)

ARNT 6,47 (0,01 )4* 0,21 (0,65)

CYP1A1 1462V 0,5 (0,48) 4,14 (0,03)'*

CYP1A2 154С>А 5,55 (0,02)'* 1,43 (0,23)

CYPIA2 4,82 (0,03)3* 0,08(0,78)

CYP1A2 4,10 (0,04)5* 1,28 (0,26)

CYPIA2 5,86 (0,02)v 0,12(0,73)

CYP1A2 4,04 (0,04)6* 0,61 (0,43)

CYP1A2 6,67 (0,01)4* 2,42 (0,12)

1-общая выборка больных ГБ; 2-сГБ (общая выборка); 3- ГБ у мужчин; 4-сГБ у мужчин; 5-лГБ у мужчин; 6-сГБ у женщин; * - статистически значимые ассоциации; ГМЛЖ - гипертрофия миокарда левого желудочка.

Нами была также оценена взаимосвязь полиморфизмов генов КАГР и ФБК с риском развития ишемических мозговых инсультов и гипертрофией миокарда левого желудочка сердца на фоне гипертонической болезни. Полученные данные представлены в таблице 4. Полученные результаты свидетельствуют о значимой роли генов КАГР и ФБК в детерминации не только предрасположенности к ГБ, но и к ее осложнениям - ишемическому мозговому инсульту и развитию гипертрофии миокарда левого желудочка сердца.

5. Анализ ассоциации парных комбинаций генотипов сигнального каскада арилгидрокарбонового рецептора и биотрансформации ксенобиотиков, а также других генов-кандидатов гипертонической болезни. Посредством анализа парных межгенных сочетаний генотипов были изучены взаимодействия полиморфных вариантов генов КАГР и ФБК у больных гипертонической болезнью. Были обнаружены 73 парные комбинации генотипов, которые были ассоциированы с риском развития ГБ при анализе общих выборок пациентов (данные не представлены). Однако после внесения поправки Бонферрони на множественность межгрупповых сравнений только 22 парных сочетания генотипов показали статистически значимые ассоциации с риском развития ГБ. В таблицах 5, 6 суммированы наиболее значимые ассоциации парных межгенных комбинаций генотипов генов КАГР и ФБК с развитием гипертонической болезни у мужчин и у женщин. Статистически значимыми были ассоциации комбинаций генотипов, повышающие риск развития ГБ у мужчин: гены КАГР и ФБК, такие как AHR, ARNT, CYP1AI, CYP1A2 и CYP1BI в сочетании с генами-кандидатами ГБ и геном антиоксидантной системы (АОС), такими как ADDI, AGT, GSTT1, которые увеличивали риск развития ГБ. В группе женщин гены КАГР и ФБК, такие как AHR, AHRR, CYPIAI в сочетании с генам и-кандидатам и ГБ, такими как AGT, ADD1, GNB3 и NR3C2 влияли на риск развития ГБ. Таким образом, полиморфные варианты генов КАГР и ФБК взаимодействуют с известными генами-кандидатами гипертонической болезни, что отражает их совместную вовлеченность в молекулярные звенья патогенеза заболевания.

Таблица 5

Ассоциации парных межгенных комбинаций генотипов генов КАГР и ФБК с предрасположенностью к гипертонической болезни у женщин

№ Комбинации генотипов N % N % x2(p) OR (95%С1)

Женщины

1 AHR 554RR х NR3C2 4582АА 13 10,1 17 27,0 9,18 (5,8x10"5) 0,30 (0,14-0,67)

2 AHRR 185РР х NR3C2 4582АА 5 3,9 10 15,9 8,25 (7,0x10 6) 0,22 (0,07-0,67)

3 CYPIAI 462IV х ADDI 460GG 12 9,3 17 27,0 10,32 (1,2x10"4) 0,28 (0,12-0,63)

4 CYPIAI 46211 x GNB3 825CC 5 3,9 16 25,4 8,76 (4,1x10"5) 2,65 (1,38-5,12)

5 CYPIAI 4621V x NR3C2 45 82А А 1 0,8 6 9,5 9,22 (5,1х10 7) 0,07 (0,01-0,63)

Таблица 6

Ассоциации парных межгенных комбинаций генотипов генов КАГР и ФБК с предрасположенностью к гипертонической болезни у мужчин

№ Комбинации генотипов N % N % х2(р) ОЯ (95%С1)

Мужчины

1 АНИ 5541*1* х 05777 ёе1 13 10,8 47 32,6 17,72 (4,7x10"5) 3,99 (2,03-7,82)

2 АН 1111 185РА х.407"253МТ 7 13,5 27 37,5 8,77 (3,2x10-6) 0,26 (0,10-0,66)

3 АМТ 18900 х СУР1А1 462IV 36 11,0 14 4,4 9,9 (3,6х10"5) 0,37 (0,20-0,70)

4 А1МТ \89GG х 05777 ёе1 4 3,3 23 16,0 11,39 (6,1x10"") 5,51 (1,85-16,43)

5 АЯЫТ 1890С х 05777 ёе1 9 7,5 29 20,1 8,49 (3,7x10"7) 3,11 (1,41-6,87)

6 СУР1А1 46211 х ЛО£>/ 4600\У 78 60,5 21 33,3 12,48 (3,2x10"5) 3,06(1,63-5,75)

7 СУР1А1 462IV х 05777+ 27 22,5 14 9,7 8,15 (5,1x10"') 0,37 (0,18-0,75)

8 СУР1А1 46211 х 05777 с1е1 14 11,7 48 33,3 17,1 (4,6x10"5) 3,7(1,69-8,04)

9 СУР1А2 154СС х ЛОГ235ТТ 12 23,1 2 2,8 12,42 (9,3x10"") 6,50 (2,24-9,30)

10 СУР1В1 432УЬ х 05777 <1е1 5 4,2 29 20,1 8,8 (4,2x10"5) 3,83 (1,51-9,07)

6. Анализ гаметических корреляций между полиморфными вариантами генов сигнального каскада арилгидрокарбонового рецептора и биотрансформации ксенобиотиков, а также известными генами-кандидатами гипертонической болезни. Важной задачей при оценке межгенных взаимодействий было изучение гаметических корреляций аллельных вариантов генов КАГР, ФБК и других генов-кандидатов ГБ. Гаметические корреляции отражают неслучайное сочетание аллелей различных генных локусов в гаметах - так называемых гаплотипических групп. Нами были проанализированы парные коэффициенты гаметических корреляций (г8), рассчитанные для индивидуальных полиморфизмов генов в исследуемых группах пациентов. Матрица гаметических корреляций между полиморфными вариантами исследуемых генов в группах больных ГБ и здоровых индивидов представлена в таблице 7.

Таблица 7

Матрица гаметических корреляций (р<0.05) между полиморфными вариантами генов КАГР, ФБК и генов-кандидатов ГБ в исследуемых группах

АНИ Я554К СУР1А1 1462У СУР1А2 154С/А АСТР! 1166 А/С Л£Ю/ 0460,Л' СЫВЗ С825Т Ш55 Е298Э Ш53 -786Т/С ЫЯЗС2 А4582С

АНЯ Я554К 0.275 0.208 0.255

СУР1А1 1462У 0.188

-0.190 0.165

СУР1А2 154С/А 0.181

В верхних ячейках представлены коэффициенты корреляций у здоровых индивидов, в нижних - у больных ГБ (серый фон)

У здоровых индивидов были установлены 7 статистически значимых (р<0,05) гаметических корреляций между следующими аллельными вариантами генов: AHR R554K и ADD1 G460W (iy=0.275), AHR R554K и NOS3 E298D (rg=0.208), AHR R554K. и NOS3 -786Т/С (rg=0.255), CYP1A1 1462V и NR3C2 A4582C (rB=O.I88), CYPIA2 154A и GNB3 C825T (rB=0.181). В группе больных ГБ были установлены только 2 статистически значимые (р<0,05) гаметические корреляции между аллельными вариантами генов CYP1A1 I462V и AGTR1 1166А/С (rg=-0.190), а также между аллельными вариантами CYP1A1 1462V и NR3C2 А4582С (rg=0.165). Таким образом, были выявлены существенные различия как количественного, так и качественного характера между группами больных ГБ и здоровых индивидов в отношении аллельных ассоциаций различных классов полиморфных генов, расположенных в различных участках генома человека. Примечательно, что гаметические корреляции у здоровых лиц наблюдались между геном AHR и генами, вовлеченными в патогенез гипертонической болезни, а именно генами а-аддуцина (полиморфизм G460W) и эндотелиальной синтазы окиси азота (кодирующий E298D и промоторный -786Т/С полиморфизмы). В то же время ген CYP1A2 (полиморфизм С154А) показал ассоциацию с геном GNB3 (полиморфизм С825Т). Следует отметить, что указанные гены играют важную роль в регуляции артериального давления и увеличивают риск развития гипертонической болезни, в том числе и в изученной нами популяции русских жителей Курской области. По всей видимости, такие взаимодействия сформировались в процессе эволюции под действием естественного отбора, направленного на сохранение в генофонде не отдельных полиморфных вариантов генов, а целых совокупностей генов, функциональные варианты которых способны обеспечивать оптимальную адаптацию в условиях нарастающего химического загрязнения окружающей среды.

Анализ парных сочетаний генотипов и гаметических корреляций между локусами подтверждает предположение о том, что исследованные нами гены работают не автономно друг от друга, а в тесной координации, обеспечивающей адекватную реакцию физиологических систем организма на действие химических факторов внешней среды. Когда воздействие химических факторов внешней среды на организм достигает своих максимальных значений, как это имеет место в современных экологических условиях, дискоординация в функционировании генов КАГР, ФБК и регуляции сосудистого гомеостаза, видимо, способна потенцировать токсические влияния ксенобиотиков на организм и способствовать формированию нарушений сосудистого тонуса и развитию артериальной гипертензии.

7. Анализ генно-средовых взаимодействий, детерминирующих предрасположенность к гипертонической болезни. Для оценки индивидуального уровня химического воздействия нами использовались данные о статусе курения пациентов, полученные при анкетировании. Курение было выбрано по причине того, что в состав табачного дыма входят полициклические ароматические углеводороды (ПАУ) - типичные индукторы арилгидрокарбонового каскада. Исследуемые группы больных ГБ и здоровых

14

индивидов не отличались по статусу курения (р>0.05). Был выполнен анализ ассоциации генотипов исследуемых полиморфных вариантов генов КАГР и ФБК с развитием гипертонической болезни в зависимости от статуса курения. В таблице 8 представлены статистически значимые взаимодействия генотип-среда, показавшие ассоциации с риском развития ГБ. Было обнаружено 4 значимых статистических генно-средовых взаимодействия. Установлено, что гомозиготный генотип по вариантному аллелю 189С гена ЛЯЛТ ассоциирован с повышенным риском развития ГБ среди курящих людей, однако в группе некурящих женщин генотип 189СС гена ARNT достоверно ассоциирован со снижением риска развития ГБ. Более того, вариантный генотип СУР1А2154АА повышал риск ГБ в группе курящих мужчин.

Таким образом, комплексная оценка взаимодействий генетических и средовых факторов на риск возникновения ГБ позволила определить взаимодействия генотип-среда, формирующие основу предрасположенности к болезни, а также обозначить токсикогенетические механизмы, посредством которых внешние факторы способны спровоцировать развитие патологии у генетически предрасположенных индивидов.

Таблица 8

Влияние курения на риск развития изучаемых ГБ в зависимости от генотипов ферментов

КАГР и ФБК

Больные гипертонической болезнью (п=573)

Генотипы КАГР и ФБК Больные ГБ, OR 95%С1 (Р) Больные ГБ, мужчины OR 95%CI (Р) Больные ГБ, женщины OR 95%С1 (Р)

Курящие, (п=159) Некурящие, (п=393) Курящие, (п=148) Некурящие, (п=148) Курящие, (п=11) Некурящие, (п=245)

ARNT 189ССТ 1,58 1,01-2,45(0,04)* 0,74 0,483,86 (0,93) 0,49 0,342,51 (0,78) 0,89 0,543,48 (0,69) 1,41 0861,29 (0,16) 0,78 0,61-1,12(0,48)

ARNT 189004- 0,48 0,831,58 (0,96) 0,92 0,342,05 (0,76) 0,89 0,543,05 (0,93) 1,42 0,871,94 (0,65) 0,74 0,491,41 (0,89) 0,55 0,310,98 (0,04)*

CYP1A2 154ААТ 2,68 1,26-5,07(0,01)* 0,79 0,48-2,18(0,19) 2,47 1,135,4 (0,02)* 0,38 0,521,51 (0,77) 0,85 0,452,44 (0,59) 0,97 0,551,63 (0,34)

* - статистически значимые ассоциации

Выводы

1. Полиморфные варианты генов сигнального каскада арилгидрокарбонового рецептора и ферментов биотрансформации ксенобиотиков, а именно аллель 554R и генотип 554RR гена AHR и аллель 154А гена CYP1A2 ассоциированы с повышенным риском развития гипертонической болезни у мужчин.

2. Полиморфные варианты генов КАГР и ФБК взаимосвязаны с возрастом манифестации гипертонической болезни: аллель 554R и генотип 554RR гена AHR у мужчин и генотип 189GC гена ARNT у женщин ассоциированы с поздним дебютом заболевания (после 35 лет), тогда как аллель 154А и генотип 154АА гена CYP1A2 у мужчин и женщин были связаны с риском развития ГБ независимо от возраста ее манифестации.

3. Носительство генотипа 189СС гена ARNT, а также генотипа 154СА гена CYP1A2 у мужчин, носительство генотипа154АА гена CYP1A2 у женщин оказывает влияние на риск возникновения мозгового инсульта на фоне гипертонической болезни; полиморфизм I462V гена CYPIA1 ассоциирован с риском развития гипертрофии миокарда левого желудочка сердца у больных ГБ.

4. Установлены статистически значимые генно-средовые взаимодействия, детерминирующие предрасположенность к ГБ: генотип 189СС гена ARNT и генотип 154АА CYP1A2 (у мужчин) ассоциировались с повышенным риском развития болезни исключительно у курящих индивидов, в то время как генотип 189СС гена. ARNT у некурящих женщин ассоциировался с пониженным риском развития ГБ.

5. Установлены ассоциации гипертонической болезни с широким спектром сочетаний генотипов КАГР и ФБК между собой и с генотипами известных генов-кандидатов заболевания: всего обнаружено 10 парных сочетания генотипов у мужчин и 5 парных сочетаний генотипов у женщин, существенная часть которых ассоциировалась с риском развития ГБ на высоком уровне статистической значимости (р<0.001).

6. У здоровых индивидов в отличие от больных ГБ обнаружены статистически значимые гаметические корреляции между аллельными вариантами генов КАГР, ФБК и другими генами-регуляторами гомеостаза, которые могут отражать эволюционно закрепленную функциональную сопряженность различных физиологических систем в обеспечении адаптации к химическим факторам среды.

Практические рекомендации

1. Рекомендовать для внедрения в практику медико-генетического консультирования генотипирование полиморфизма генов ферментов КАГР и ФБК {AHR R554K, ARNT 189G>C, CYP1A2 1540А) для выявления среди населения лиц, предрасположенных к гипертонической болезни.

2. Рекомендовать практическим врачам, осуществляющим первичную диагностику гипертонической болезни, направлять пациентов в медико-генетическую консультацию с целью оценки генетического риска развития мозгового инсульта на основе генетического тестирования генов КАГР и ФБК.

3. В рамках медико-генетического консультирования пациентов с ГБ и членов их семей помимо генетического тестирования КАГР и ФБК необходимо учитывать наличие средовых факторов риска, таких как курение для более точной вероятностной оценки риска развития заболевания и разработки мероприятий по его индивидуальной профилактике.

4. С целью оптимизации поиска генов предрасположенности к гипертонической болезни и расширения представлений о токсико-генетической природе заболевания предлагается проведение совместного генетического тестирования полиморфизма генов ферментов КАГР и ФБК с другими тестируемыми генами-кандидатами болезни.

5. Внедрить результаты исследования в образовательный процесс в рамках изучения специальных курсов по медицинской и клинической генетике в вузах медицинского профиля, а также на курсах повышения квалификации медицинских работников для освещения вопросов эколого-токсикогенетических механизмов развития гипертонической болезни.

Список условных сокращений

SNP - single nucleotide polymorphism (однонуклеотидный полиморфизм)

АД - артериальное давление

ГБ - гипертоническая болезнь

КАГР - каскад арил-гидрокарбонового рецептора

лГБ - лабильная форма гипертонической болезни

МФЗ - мультифакториальные заболевания

АОС - антиоксидантная система

ПАУ - полициклические ароматические углеводороды

ПЦР - полимеразная цепная реакция

РХВ - равновесие Харди-Вайнберга

сГБ - стабильная форма гипертонической болезни

ССЗ - сердечно-сосудистые заболевания

ФБК - ферменты биотрансформации ксенобиотиков

ЦЧР - Центрально-Черноземный регион

ГМЛЖ - гипертрофия миокарда левого желудочка

AHR - арилгидрокарбоновый рецептор

AHRR - репрессор арилгидрокарбонового рецептора

ARNT- арилгидрокарбоновый ядерный транслокатор

АСЕ - ангиотензин конвертирующий фермент

AGT- ангиотензиноген

AGTR1 - ангиотензиногеновый рецептор 1 типа CYP1A1 - цитохром Р-450, семейство А, подсемейство I, CYP1A2 - цитохром Р-450, семейство А, подсемейство II, CYP1B1 - цитохром Р-450, семейство В, подсемейство I, GNB3 - гуанин нуклеотид-связывающий белок, рЗ-субъединица ADD1- альфа-аддуцин1

TGFB1 - трансформирующий ростовой фактор бета 1 GSTM1 - глутатион-Б-трансфераза, класс ц, изоформа 1 GSTP1 - глутатион-5-трансфераза, класс я, изоформа 1 GSTT1 - глутатион-Б-трансфераза, класс 9, изоформа 1 NOS3 - синтаза окиси азота 3 типа, эндотелиальная NQOl - НАД(Ф)Н дегидрогеназа, хинон 1

Список опубликованных работ по теме диссертации

1. Булгакова, И.В Полиморфизм генов ферментов глютатион -S-трансфераз и его роль в формировании предрасположенности к гипертонической болезни / И.В. Булгакова, М.А. Солодилова // Национальное достояние России: материалы XXIII Всерос. конф. обучающихся (Москва, 27-30 марта 2008 г.). -М„ 2008.-С. 531.

2. Связь полиморфизма 1166А>С гена рецептора 1 типа ангиотензина-П с предрасположенностью к гипертонической болезни у русских жителей Центрального Черноземья / Е.К. Кононенко,... И.В. Булгакова [и др.] // Молодежная наука и современность : материалы 74-й межвуз. итог. науч. конф. студентов и молодых ученых, посвящ. Году молодежи в России (21-22 апр. 2009 г.). - Курск, 2009. - Ч. 1. - С. 65-66.

3. Булгакова, И.В. Роль полиморфизмов генов системы ренин-ангиотензин-альдостерон в формировании повышенного артериального давления / И.В. Булгакова, М.А. Солодилова // Молодежная наука и современность : материалы 74-й межвуз. итог. науч. конф. студентов и молодых ученых, посвящ. Году молодежи в России (21-22 апр. 2009 г.). - Курск, 2009. - Ч. 1. -С. 54.

4. Анализ ассоциации полиморфизма -463G>A гена миелопероксидазы с предрасположенностью к эссенциальной гипертензии в Центральном Черноземье / Е.К. Кононенко, A.B. Полоников, И.В. Булгакова [и др.] // Вестн. РГМУ. - 2010. - Спец.вып. № 2. - С. 465-466.

5. Вовлеченность полиморфизма гена глутатион-Б-трансферазы PI в формирование полового диморфизма предрасположенности к гипертонической болезни / И.В. Булгакова [и др.] // Молодежная наука и современность: материалы 75-й Всерос. науч. конф. студентов и молодых учёных с междунар. участием, посвящ 75-летию КГМУ (20-21 апр. 2010 г.).-Курск, 2010. - Ч. 1.-С.51.

6. Промоторный полиморфизм -262С>Т гена каталазы и риск возникновения гипертонической болезни у русских жителей Курской области / В.А. Кабанина, A.B. Полоников,... И.В. Булгакова [и др.] // Вестн. РГМУ. - 2010. -Спец. вып. № 2. - С. 495-496.

7. Защитный эффект полиморфизма gly272ser гена GNB3 в развитии гипертонической болезни и его взаимосвязь со средовыми факторами риска развития заболевания / A.B. Полоников,... И.В. Булгакова [и др.] // Терапевт, арх. - 2011. - № 4. - С. 55-60.

8. Polymorphism Ilel05Val of the GSTP1 gene is a predictor for ischemic stroke in patients with essential hypertension in Russian population / A.V. Polonikov,... I.Bulgakova [et al.] // Eur. J. Human Genetics. - 2011. - Vol. 19 (Suppl. 2). -P. 296.

9. Genetic variation in glutathione S-transferase genes and risk of nonfatal cerebral stroke in patients suffering from essential hypertension / A. Polonikov,... I. Bulgakova [et al.] // J. Mol. Neurosci. - 2012. - Vol. 47, N 3. - P. 511-513.

10. Булгакова, И.В. Полиморфизм генов метаболизма глутатиона и предрасположенность к гипертонической болезни - анализ ассоциаций и генно-средовых взаимодействий / И.В. Булгакова, М.А. Солодилова, A.B. Полоников // Молекулярные основы клинической медицины -возможное и реальное : сб. тез. II Рос. конгр. с междунар. участием (Санкт-Петербург, 18-20 июня 2012 г.). - СПб., - 2012. - С. 99-100.

11. Связь полиморфизма гена каталазы с повышенным риском развития церебрального инсульта у больных гипертонической болезнью / Е.К Вялых, A.B. Полоников,...И.В, Булгакова [и др.] //Журн. неврологии и психиатрии им. С.С. Корсакова. - 2012. -Xs 8, вып. 2. - С. 3-7.

12. Булгакова, И.В. Полиморфизм А154С гена CYP1A2 и риск развития гипертонической болезни: анализ ассоциации и взаимосвязь со средовыми факторами риска / И.В. Булгакова, О.Ю. Бушуева, A.B. Полоников // Фундаментальные исследования. - 2013. - № 9. - С. 994-998.

13. Изучение роли полиморфизмов генов ферментов цитохромов Р450 у больных гипертонической болезнью / И.В. Булгакова [и др.] // Молодежная наука и современность: материалы 78-й Всерос. науч. конф. студентов и молодых учёных с междунар. участием (Курск, 17-18 апр. 2013 г.) : в 3 т. -Курск, 2013.-Т. 1.-С.64.

14. Изучение связи полиморфизма Val432Leu гена CYP1B1 с развитием гипертонической болезни в популяции русских жителей центральной России / И.В. Булгакова [и др.] // Курск, науч.-практ. вестн. "Человек и его здоровье". - 2013.-№3,- С. 11-16.

15. Исследование ассоциации I/D полиморфизма гена АСЕ с риском развития гипертонической болезни / Е.С. Гаврюк, О.Ю. Бушуева,...И.В. Булгакова [и др.] // Молодежная наука и современность: материалы 78-й Всерос. науч. конф. студентов и молодых учёных с междунар. участием (Курск, 17-18 апр. 2013 г.).-Курск, 2013.-С. 68-69.)

16. Полиморфизм lle462Val гена CYP1A1 и его роль в формировании предрасположенности к гипертонической болезни / И.В. Булгакова [и др.] // Современные достижения науки-2013: материалы IX междунар. науч.-практ. конф. - Прага: Образование и наука, 2013. - С. 80-83.

17. Проявление полового диморфизма в ассоциации полиморфного варианта М235Т гена AGT с риском развития артериальной гипертензии в популяции Центрально-Черноземного региона России : материалы XVIII заочной науч. конф. Research Journal of International Studies / T.A. Стецкая, О.Ю. Бушуева,...И.В. Булгакова [и др.] // Междунар. науч.-исслед. журн.-2013. -№ 8 (15). - Ч. 4. - С. 37-39.

18. Проявление полового диморфизма в ассоциациях гена ARNT (Vall89Val) с предрасположенностью к гипертонической болезни / И.В. Булгакова [и др.] // Актуальные проблемы биологии, нанотехнологий и медицины : материалы V Междунар. науч.-практ. конф. (Ростов-на-Дону, 3-5 окт. 2013 г.). -Ростов/н Д, 2013. - С. 226-228.

19. Булгакова, И.В. Проявление полового диморфизма в ассоциациях гена AHR (Arg554Lys) с предрасположенностью к гипертонической болезни / И.В. Булгакова, A.B. Полоников, И.И. Барт // Перспективы развития науки : материалы междунар. науч.-практ. конф. (Уфа, 20 марта 2014 г.). - Уфа, 2014.-С. 283-285.

20. Изучение вовлеченности полиморфизма G554C гена AHR в развитие гипертонической болезни / И.В. Булгакова [и др.] // Наука, образование, общество: проблемы и перспективы развития: материалы междунар. заочной науч.-практ. конференции (Тамбов, 28 февр. 2014 г.). - Тамбов, 2014. -С. 22-24.

21. Анализ ассоциации полиморфизма P187S гена NQOl с риском развития гипертонической болезни / И.В. Булгакова [и др.] // Современная медицина: актуальные вопросы - сборник статей по материалам XXX междунар. науч.-практ. конференции №4 (30). (Новосибирск, апрель, 2014 г.). - Новосибирск. Изд. «СибАК», 2014.-С. 37-41.

Лицензия ЛР № 020862 от 30.04.99 г. Сдано в набор 23.09.2014 г. Подписано в печать 25.09.2014 г. Формат 30х42'/8 Бумага офсетная. Гарнитура Times New Rom. Печать офсетная. Усл. печ. л. 1,0. Тираж 100 экз. Заказ № 279(A). Издательство Курского государственного медицинского университета 305041, г. Курск, ул. К. Маркса, 3.