Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Внутривидовые и межвидовые гибридные популяции клеток и их биологические свойства

ВАК РФ 03.00.23, Биотехнология

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Ставничий, Евгений Валерьевич

страница

Список сокращений.

1. Введение.

1.1. Актуальность темы.

1.2. Цель работы и основные задачи исследований.

1.3. Научная новизна.

1.4. Практическая значимость.

1.5. Основные положения, выносимые на защиту.

1.6. Апробация и публикация результатов.

2. Обзор литературы.

2.1. Клеточные культуры в биотехнологии.

2.1.1. Первичные клеточные культуры.

2.1.2. Перевиваемые клеточные линии.

2.1.3. Культуры клеток системы мононуклеарных фагоцитов свиней в ветеринарной вирусологии.

2.1.4. Клеточные культуры в изучении вируса геморрагической болезни кроликов.

2.2. Гибридизация соматических клеток животных.

2.3. Мутантные культуры клеток.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Внутривидовые и межвидовые гибридные популяции клеток и их биологические свойства"

1.1. Актуальность темы.

Гибридизацию соматических клеток в полуселективной системе, когда одним из партнеров слияния являются первично-изолированные клетки, можно рассматривать как один из методов получения генетически трансформированных клеточных систем. Исследование этих искусственных биомоделей открывает новые методологические перспективы изучения вопросов регуляции биосинтетических процессов в клетках, расшифровки механизмов направленной экспрессии на основе переноса генов с интеграцией необходимого гена в специфическом локусе хромосомы и получения клеточных популяций с заданными биологическими свойствами, например, продуцентов биологически активных веществ и клеточных субстратов для вирусологических исследований.

В основе этих исследований, направленных на решение как фундаментальных, так и прикладных вопросов современной биологии, лежит использование генетически маркированных клеточных линий, причем спектр таких культур крайне ограничен [34].

В ветеринарной вирусологии актуальной является проблема получения перевиваемых линий клеток, чувствительных к вирусам, для которых в настоящее время не существует пермиссивных перевиваемых клеточных систем, например для вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней (РРСС), геморрагической болезни кроликов (ГБК) и других.

Естественно пермиссивными клетками для вируса РРСС являются легочные альвеолярные макрофаги свиньи [242, 245], а цитохимическим маркером клеток системы мононуклеарных фагоцитов (СМФ) свиньи служит фермент неспецифическая эстераза [114].

Поскольку клетки системы мононуклеарных фагоцитов in vitro не размножаются, одним из путей поиска стабильного клеточного субстрата для изучения этого вируса может стать получение на их основе гибридных клеточных популяций.

Для вируса ГБК пермиссивная клеточная культура до сих пор не найдена [5], однако факт наибольшего накопления вируса in vivo в тканях печени кролика [16, 36, 106] нацеливает на поиск пермиссивных клеток для гибридизации среди субпопуляций гепатоцитов этого вида животных.

Актуальной остается и проблема получения дефектных по гену ти-мидинкиназы стабильных высокопродуктивных линий клеток, устойчивых к высоким концентрациям антиметаболитов, необходимых для успешного проведения молекулярно-биологических исследований в области конструирования и изучения рекомбинантных вирусов.

В целом, для решения этих специфических задач клегочно-инженерными методами, необходимы как новые маркированные линии клеток, так и оптимизированные методы выделения пермиссивных первичных клеток, получение соматических гибридов и изучение их биологических свойств.

Заключение Диссертация по теме "Биотехнология", Ставничий, Евгений Валерьевич

5. Выводы

1. Клональная сублиния перевиваемых клеток тестикул поросенка ПТП ТК"(410), полученная методом многошаговой селекции, дефектна по гену тимидинкиназы, устойчива к 5-бром-2-дезоксиуридину в концентрации 410 мкг/мл. Культивирование в присутствии 500 Мм гипоксантина, 20 Мм аминоптерина, 800 Мм тимидина вызывает гибель 100% клеток в течение 6-8 суток. Данная культура клеток паспортизирована по цитоморфоло-гическим, культуральным, кариологическим показателям, хранится в музее клеточных культур ВНИИВВиМ.

2. Клональная сублиния перевиваемых клеток тестикул поросенка ПТП ГГФРТ"(380), полученная методом многошаговой селекции, дефектна по гену гипоксантин-гуанинфосфорибозилтрансферазы, устойчива к 8-азагуанину в концентрации 380 мкг/мл. Культивирование в присутствии 500 Мм гипоксантина, 20 Мм аминоптерина, 800 Мм тимидина вызывает гибель 100% клеток в течение 10 суток. Данная культура клеток паспортизирована по цитоморфологическим, культуральным, кариологическим показателям, хранится в музее клеточных культур ВНИИВВиМ.

3. Разработана методика получения гепатоцитов новорожденных крольчат путем нециркуляторной перфузии коллагеназой печени крольчонка, которая обеспечивает сохранение жизнеспособности и пролиферацию клеток в среде ДМЕМ с 20% содержанием фетальной сыворотки теленка в течение 4-х субпассажей.

4. Получен 31 стабильный клон внутривидовых клеточных гибридов легочных альвеолярных макрофагов свиньи и мутантных клеток, дефектных по генам тимидинкиназы и гипоксантин-гуанинфосфорибозил-трансферазы. Создан криобанк гибридов. Установлено фенотипическое многообразие внутривидовых гибридных популяций по морфологическим, кариологическим показателям и адгезивным свойствам. Показана передача цитохимического маркера макрофагов - неспецифической эстеразы -внутривидовым гибридам.

123

5. Установлено проявление маркирующего признака альвеолярных макрофагов - чувствительности к вирусу классической чумы свиней во внутривидовых гибридах, при отсутствии этого признака в мутантной линии ПТП. В гибридных клетках нереализованы факторы и механизмы чувствительности к вирусу репродуктивно-респираторного синдрома свиней, свойственные материнским первичным клеткам.

6. На модели 8 стабильных межвидовых гибридов гепатоцитов новорожденного крольчонка и мутантных клеток сублинии ПТП установлено отсутствие пермиссивности гибридных клеток к вирусу геморрагической болезни кроликов. Два клона были чувствительны к вирусу миксомы (штамм «В 82») с развитием ЦПД.

7. Установлена пригодность сублинии клеток тестикул поросенка, дефектной по гену тимидинкиназы, для генно-инженерных исследований. С использованием данного клеточного субстрата проведена селекция ре-комбинантного вируса болезни Ауески, несущего ТК" - признак.

124

6. Практические предложения.

1. Разработаны методические рекомендации по поддержанию и хранению стабильных сублиний перевиваемых клеток тестикул поросенка, дефектных по ферментам тимидинкиназе ПТП ТК" (410) и гипоксантин-гуанинфосфорибозилтрансферазе ПТП ГГФРТ" (380), утвержденные директором ВНИИВВиМ.

2. Паспортизированы новые стабильные маркированные сублинии клеток ПТП ТК" (410) и ПТП ГГФРТ" (380). Оба паспорта предложено включить в новое издание «Каталога коллекции клеточных культур ВНИИВВиМ».

3. Стабильные маркированные сублинии клеток ПТП ГГФРТ" (380) и ПТП ТК" (410) депонированы в Национальной специализированной коллекции перевиваемых соматических клеточных культур сельскохозяйственных и промысловых животных (СХЖ Россельхозакадемии) при Всероссийском научно-исследовательском институте экспериментальной ветеринарии им. Я.Р. Коваленко под номерами 58 и 59 соответственно.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Ставничий, Евгений Валерьевич, Покров

1. Адаме Р. Методы культуры клеток для биохимиков. М.: Мир, 1983.258 с.

2. Анджапаридзе О. Г. Симпозиум по онкогенной безопасности вирусных вакцин. //Вопр. вирусол. 1969.- 4.- С. 506-507.

3. Анджапаридзе О.Г., Борискин Ю.С., Богомолова Н.Н., Бектимиров Т.А., и др. Персистенция антигена аренавируса в перевиваемых клеточных линиях. Попытки выделения инфекционного вируса. // Вопр. вирусол.- 1977.-5.-С. 557-561.

4. Балышев В.М., Вишняков И.Ф., Федорищев И.В. и др. Вакцина против чумы, инфекционного гепатита и парвовирусного энтерита плото- —j ядных. // Патент РФ №2154496 с приоритетом от 04.12.1997 зарегистрирован в Госреестре изобр. 20.08.2000г.

5. Ю.Бернет Ф. Клеточная иммунология. М.: Мир, 1971.- С. 122-133.

6. Бурба Л.Г. Морфологическая картина костного мозга свиней при африканской чуме. // Бюлл. института / Всеросс. ин-т. экспер. ветерин. -1967.- вып. III.-С. 103-108.

7. Ван Везель AJI. Биотехнология клеток животных. М.- 1981.

8. З.Ван Везель A.JI. Системы выращивания в монослое: гомогенные процессы в единичном оборудовании. // Биотехнология клеток животных / Под ред. А.А.Ван Везеля. Москва, 1989.- С. 281-300.

9. Ван Фюрт Р. Система монуклеарных фагоцитов, новая классификация макрофагов, моноцитов и их клеток предшественников. // Бюлл. ВОЗ. - 1973.-т. 46.-6.-С. 814.

10. Вишняков И.Ф., Карпов Г.М., Куриннов В.В. и др. Способ получения вакцины против чумы плотоядных. // Патент РФ №2129442, при- I оритет от 18.07.1996, зарегистрирован в Госреестре изобр. 27.04. 1999г.

11. Власов Н.А. Физико-химические свойства и антигенная структура вируса геморрагической болезни кроликов: Автореф. дис. . докт. биол. : наук. Покров, 1998.

12. Гальнбек Т.В. Клеточные культуры щитовидной железы и кишечника свиньи и их использование в вирусологической практике: Автореф. дис . канд. биол. наук. М., 1991. - С. 16.

13. Герасимов В.Н., Кулешбякова Ш.К., Гусев А.А. и др. Морфологические и кариологические характеристики постоянных линий при дли- 4 тельном культивировании. // Цитология. 1999. - т. 41. - №3-4. - С. 226.

14. Глузман Д.Ф., Сидоренко С.П., Надгорная В.А. Цитохимия и имму-ноцитология злокачественных лимфопролиферативных заболеваний. -Киев.: Наукова думка, 1982. С. 72.

15. Глузман Д.Ф., Надгорная В.А. Цитохимическая диагностика вариантов острого лейкоза и метастазов рака в костный мозг и лимфотические узлы. // В сб.: Ультраструктура и гистохимия нормальных и опухолевых клеток / Наукова думка, 1980. С. 105-111.

16. Голубев Д.Б., Соминина А.А., Медведева М.Н. Руководство по применению клеточных культур в вирусологии. Л.: Медицина, 1976. - С. 224.

17. Грачев В.П. Современные аспекты крупномасштабного культивирования клеточных субстратов и вирусов. // Культивирование клеток животных и человека: Тез. докл., Пущино, 1985. С. 61-64.

18. Грачев В.П., Дзагуров С.Г., Шалунова Н.В., Миронова JI.JI. Проблема использования культур клеток в производстве вирусных вакцин и вопросы контроля их безвредности. // Руководство по вакцинному и сывороточному делу: Москва, 1978. С. 176-184.

19. Гулак П.В., Дудченко A.M., Зайцев В.В., Лукьянова Л.Д., Новиков К.Н., Орлов С.Н., Покудин Н.И., Попова О.А., Уголев А.Т. Гепато-цит. Функционально-метаболические свойства. М.: Наука, 1985. - 272 с.

20. Гусев А.А., Байбиков Т.З., Куляшбекова Ш.К., Жукова Л.Г. и др.

21. Особенности репродукции вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней (РРСС) в культуре клеток "MARC-145". // Вирусные болезни с/х животных: Тез. докл. научн.-практ. конф., Владимир,1995. С. 95.

22. Дульцина С.М.,Потапова С.Г.,Герасимова Н.А. Цитологическая характеристика моноцитов в норме. (Обзор литературы и собственные данные). // Проб, гемат. 1978. - №2. - С. 47-50.

23. Дьяконов Л.П. Культуры клеток и тканей как модель для изучения инфекционной патологии животных. // Бюлл. института / Всеросс. ин-т. экспер. ветерин. выпуск XXXIII. - М., 1978. - С. 3-8.

24. Дьяконов Л.П. Гибридные и генетически трансформированные клетки сельскохозяйственных животных в биотехнологии. //Цитология. 1992. - т.34. - 9. - С. 67.

25. Дьяконов Л.П., Кущ А.А., Тугизов Ш.М. Гибридизация соматических клеток и перспективы использования клеточных гибридов в решении проблем инфекционной патологии с/х животных. //Сельскохозяйственная биология. 1985. - 1. - С. 22-28.

26. Дьяконов Л.П., Кущ А.А., Тугизов Ш.М., Майджи Е.В. Получение гибридных клеток сельскохозяйственных животных и исследование их восприимчмвости к вирусным инфекциям. //Цитология. 1987. - т.9. - 2. -С. 1082.

27. Дьяконов Л.П., Майджи Е.В., Герасимов В.Н., Гальнбек Т.В., и др. Штамм внутривидовых гибридных клеток Suis domestica, используемый для выделения и культивирования вируса классической чумы свиней. //Патент РФ №20827580, 1997.

28. Дьяконов Л.П., Ситьков В.И. Животная клетка в культуре: Москва, Спутник, 2000 г. 399 с.

29. Егорова А.И., Шажко Ж.А., Герасимов В.Н., Коропова В.Н., и др. Изучение репродукции вируса КЧС в клеточных культурах. //Акт. вопр. вет. вирус: Матер, науч. конф. ВНИИВВиМ, Покров, 1995. С. 18.

30. Жестерев В.И., Каламина Т.В., Балышева В.И., Кушнир С.Д. Характеристика клеточных линий, используемых в биотехнологии. // Цитология. 1996. - т.38. - 7. - С. 681-185.

31. Зеленин А.В., Бандира И.Н. Ранние этапы слияния. // Биофизика мембран. Москва, 1984. - С. 218-242.

32. Карпов Г.М., Вишняков И.Ф., Курин нов В.В. и др. Аттенуированный штамм вируса чумы плотоядных Virus pestis car nivorum. // Патент РФ №2108385, приоритет от 18.06.1996., зарегистрирован в Госреестре изобр. 10.04.1998г.

33. Карр Я. Макрофаги. Обзор ультраструктуры и функции. М.: Медицина, 1978. - 188 с.

34. Колбасова O.JI., Юрков С.Г., Куриннов В.В., Середа С.Д., Кушнир С.Д., Смыслова Н.Ю., Чермашенцева Н.А. Клональная характеристика перевиваемой линии клеток почки поросенка (РК-15) // Доклады РАСХН. 2000. - № 3. - С. 39-41.

35. Комитет экспертов ВОЗ по стандартизации биологических препаратов. //Серия технических докладов ВОЗ: М., 1995. №848.

36. Кононов В.Г., Цыганова А.А., Макаров В.В. Биохимическая характеристика культуры А-клеток костного мозга свиней. //Доклады ВАСХ-НИЛ, М., 1984. №2. - С. 33-34.

37. Конюшко О.И., Миронова Л.Л., Дьяконов Л.П. Аттестация культур клеток почек овец на спонтанную контаминацию прионами скрепи. //Цитология. 1999. - т.41. - С. 281-282.

38. Курносов А.Н. Экспериментальная разработка и усовершенствование способов получения и выращивания первичных культур клеток и органов животных в вирусологических целях: Автореф. дис. . д-ра биолог, наук. Покров, 1980. - 45 с.

39. Курносов А.Н., Осидзе Д.Ф., Зуев В.А., Опарин В.Н. и др. Отчет по теме 30 "Усовершенствование и разработка новых методов культивирования первично-трипсинизированных (переживающих и растущих) и перевиваемых клеток. //Покров, 1974. инв.№798. - С. 6-51.

40. Курносов А.Н., Зуев В.В., Опарин В.Н., Юрков С.Г. Инструкция по приготовлению питательных сред и клеточных культур. // ГУВ Госаг-ропром СССР. М., 1987. - 154 с.

41. Лакин Г.Ф. Биометрия. М.: Наука, 1990. - 352 с.

42. Линг Н.Р. Стимуляция лимфоцитов. М.: Медицина, 1971. - С. 9-17.

43. Лурия Е.А. Кроветворная и лимфоидная ткань в культурах. М.: Медицина, 1972.

44. Лымарь В.Г., Прохор В.Ф., Ялышев М.Р., Сирица И.И., и др. Характеристика постоянной линии клеток ВНК-21 после 20 лет непрерывного хранения при температуре минус 196°.// Биотехнология, 1992. 5. - С. 75-77.

45. Малахова М.С., Макаров В.В. Проблема контаминации клеточных субстратов в биотехнологии. // III Всесоюз. сов.: Культивирование клеток животных и человека. Тез. докл. М., 1990. - С. 117-118.

46. Малыгина И.И., Конюшко О.И., Хапчаев Ю.Х., Орлова Т.М., Миронова Л.Л. Опыт длительного сохранения клеток животных в жидком азоте. // Всесоюзная конференция по теоритическим и прикладным вопросам криобиологии: Тез. докл. Харьков, 1984. - 1. - С. 172.

47. Мамаева С.Е. Закономерности кариотипической эволюции клеток в культуре. // Цитология. 1996. - т.38. - №8. - С. 787-814.

48. Мамаева С.Е. Хромосомный анализ культивируемых клеток. // Методы культивирования клеток. Л., 1988. - С. 78.

49. Миронова Л.Л. Клеточные культуры и применение их для изготовления противовирусных препаратов. // Автореф. дисс. . д-ра биолог, наук. М., 1968.

50. Миронова Л.Л., Конюшко О.И., Попова В.Д., Кармышева В.Я., Чумаков М.П. Получение различных видов культур клеток почки овцы и возможность их применения в биотехнологии. // Биотехнология. 1999. - 5. - С. 19-30.

51. Миронова Л.Л., Хапчаев Ю.Х. Культивирование клеток животных для медицинской биотехнологии. М., 1995. - 148 с.

52. Миронова Л.Л., Хапчаев Ю.Х., Попова В.Д. и др. Применение линии 4647 для крупномасштабного производства ВАКУУМ. // Цитология. -1994. том 36. - №6. - С. 573.

53. Мищенко В.А. Экологические аспекты инфекционной патологии воспроизводства свиней. // Вирусные болезни с/х животных: Тез. докл. научно-практической конференции, г. Владимир, 1995. С. 169.

54. Муканов К.К. Морфология и некоторые биофизические свойства вируса трансмиссивного гастроэнтерита свиней. // Автореф. дис. . канд. ветер. наук. М., 1982. - 24 с.

55. Низамов Р.С., Киясов А.П., Алимов И.М., Ахметшин Э.Ю., Орлова

56. О.Е. Иммунологическое изучение фенотипов клеток в органотипиче-ской культуре печени эмбрионов крыс. // Цитология. 2001. - т. 43. - 1. - С. 92-98.

57. Новохатский А.С. Клеточные культуры в вирусологии. // Общая и частная вирусология. М., Медицина, 1982. - С. 463-493.

58. Новохатский А.С. Тканевые и клеточные культуры в вирусологии и молекулярной биологии. // Итоги науки и техники, ВИНИТИ, сер. Вирусология, 1979, т. 8. С. 3-135.

59. Новохатский А.С., Михайлова Г.Р., Хижняков Т.М. Каталог перевиваемых линий. // Институт Вирусол. АМН, М., 1985. 85. - С. 86.

60. Пилле Э.Р., Дзагуров С.Г. Современное состояния проблемы контроля биологических препаратов на отсутствие вирусов-контаминантов. // Матер, научн. конф. Гос. контрольного инст. им. Л.А.Тарасевича. М., 1970. - С. 129-141.

61. Полянская Г.Г., Дьяконов Л.П. Влияние условий культивирования на кариотипическую структуру клеточной сублинии почки кенгуровой крысы. // Цитология. 1988. - т. 30. - 11. - С. 1355-1363.

62. Попов В.И. Разработка и усовершенствование средств и способов специфической профилактики классической чумы свиней. // Автореф. дис. . докт.биологич. наук. Покров, 1981.

63. Пригодность клеточных субстратов для производства биологических препаратов. // Бюл. ВОЗ, сер. гехн. докл. №747. - Женева, 1988.

64. Прудовский И.А., Сухарев С.И. Гибридизация клеток животных. // Методы культивирования клеток. Л., 1988. - С. 176.

65. Рингерц Н., Сэвидж Р. Гибридные клетки. М.: Мир, 1979. - С. 11.

66. Романова Л.К., Младковская Т.Б., Покровская М.С., Овчаренко

67. С.И., Филиппов В.В. Пролиферативная активность альвеолярных макрофагов бронхоальвеолярных смывов. // Цитология. 1987. - 9. - С. 1102.

68. Рубан Е.А. Оптимизация и масштабирование процессов глубинного культивирования микроорганизмов и клеток животных с использованием методов системного анализа. // Диссер. . д-ра биолог, наук. М., 1995.

69. Рубан Е.А., Самуйленко А.Я., Заерко В.И. Промышленное культивирование клеток животных. //Животная клетка в культуре / Под редакцией Л.П.Дьяконова, В.И. Ситькова. Москва, 2000. - С. 159-169.

70. Рудобельский Э.В., Сергеев В.А., Попов В.И. Накопление вируса чумы свиней в культуре клеток. // Ветеринария. 1977. - 6. - С. 38-40.

71. Сергеев В.А. Репродукция и выращивание вирусов. М.: Колос, 1976. -С. 15-125.

72. Сергеев В.А. Вирусные вакцины. Киев, "Урожай", 1993. - 368 с.

73. Спиер Р.Е., Гриффите Дж. Б. Биотехнология клеток животных. -М.: Агропромиздат, 1989. 518 с.

74. Сюрин В.Н.,Самуйленко А.Я.,Соловьев Б.В.,Фомина Н.В. Вирусные болезни животных. М.: ВНИТИБП, 1998. - 928 с.

75. Тарасов В.Н. Культуры клеток в вирусологии. // Итоги науки и техники, ВИНИТИ: сер. Вирусология. М., 1990. - 19. - С. 167.

76. Тарасов В.Н. Культуры клеток в производстве биопрепаратов. // Итоги науки и техники, ВИНИТИ: сер. Вирусология. М., 1991. - 21. - С. 172.

77. Террито М.С. Исследование функции макрофагов в клинике. // Последние достижения в клинической иммунологии / Под ред. Томпсона Р.А. М.: Медицина, 1983. - С. 386.

78. Требования к перевиваемым линиям клеток, используемых для производства биологических препаратов. Комитет экспертов ВОЗ по стандартизации биологических препаратов. // Серия технических докладов ВОЗ №745. -М., 1988.-С. 85-98.

79. Тугизов Ш.М. Мутантные и гибридные штаммы клеток крупного рогатого скота и свиньи для вирусологических исследований: Дис. . канд. биолог, наук. М., 1985. - 170 с.

80. Феннер Ф., Мак-Ослен Б., Миме С., Сэмбрук Дж., Уайт Д. Биология вирусов животных. М., 1977. - т. I. - С. 56, 447.

81. Хейхоу Ф.Г.Дж.,Кваглино Д. Гематологическая цитохимия. М.: Медицина, 1983. - С. 172.

82. Худяков Г.А., Герасимов Г.Н., Манин Б.Л., Караченцева В.И., Федорова Е.Е. Каталог перевиваемых линий и диплоидных штаммов клеточных культур, хранящихся при -196°С под защитой криофилактиков. Владимир, 1990. - 31 с.

83. Чернов В.М., Чернова О.А. Микоплазменные инфекции как возможный фактор генетических изменений в клетках высших эукариот. // Цитология. 1996. - т.38. - 2. - С. 107-114.

84. Чертков И.Л., Воробьев А.И. Современная схема кроветворения. // Пробл. гематологии и переливания крови. 1973. - 18. - №10. - С. 3-14.

85. Чертков И.Л., Фриденштейн А.Я. Клеточные основы кроветворения. М., 1977.

86. Шалунова Н.В. Принципы стандартизации клеточных линий, применяемых в биотехнологии. // Тез. докл. конф., М., 1985. С. 223-224.

87. Шевак И.М. Иммунология. // Под ред. У. Пола. г.1, М.: Мир, 1987. -С. 117.

88. Шевченко А.А., Бакулов И.А., Власова Т.А. Некоторые вопросы эпизоотологии вирусной геморрагической болезни кроликов. // Ветер и- "Т нария. 1997. - №7. - С. 17.

89. Шулаева М.П. Влияние грипозной инфекции на функциональную активность альвеолярных макрофагов.// Авгорефер. дис. . канд. биолог. наук. Казань, 1999.

90. Эфруси Б. Гибридизация соматических клеток. Москва, Мир, 1976. -198 с.

91. Юрков С.Г. О перекрестной контаминации перевиваемых культур клеток. //Вопросы вирусологии. 1995. - 5. - С. 225-227.

92. Юрков С.Г. Совершенствование методики изготовления альвеолярных макрофагов свиньи. // Ветеринария. 1996. - 1. - С. 19-21.

93. Юрков С.Г., Аверина Н.Н., Курносов А.Н. Адгезия и трансформация клеток гемопоэтической системы. // Вопр. вет. вирусол., микробиол. и эпизоотол: Тезисы докл. научн. конференции ВНИИВВиМ, Покров, 1985. С. 100-102.

94. Юрков С.Г., Зуев В.В., Сидоров С.И., Кушнир С.Д., Смыслова Н.Ю., Неверовская Н.С., Чермашенцева Н.А., Прилепская Е.П.,

95. Анисимова Л.И., Колбасова О.Л. Каталог коллекции клеточных культур ВНИИВВиМ. Покров.: Россельхозакадемия, ВНИИВВиМ, 2000. -78 с.

96. Юрков С.Г., Колбасова О.Л., Кушнир С.Д., Куриннов В.В. и др.

97. Юрков С.Г., Курносое А.Н. Трансформация клеток моноцитарного ряда в суспензионной культуре лейкоцитов свиньи. // Вопр. вет. виру-сол., микробиол. и эпизоотол: Тез. докл. научн. конф. ВНИИВВиМ, Покров, 1992. С. 283-284.

98. Agathoon W.R., Birch J.R. Large-scale cell culture in biotechnology. // Science. 1986. - 232. - 4756. - P. 1390-1395.

99. Albertoo E.L., Jacquemont В., Patet J. Susceptibility to Herpes simplex virus type-1 infection of non-permissive Rat x C(HPRT-) x permissive mouse L (TK-) hybrid cells. // J. Gen. Virol. 1985. - 66. - 8. - P. 1805-1809.

100. Ashwood-Smith M.J. Radioprotectiveand cryoprotective properties of DMSO.//New York 1971.-P. 168-177.

101. ATCC. Catalogue of cell line and hybridomas. // Reference ATCC-CCL-81-Vero, 1985.-P. 45-46.

102. ATCC. Catalogue of cell lines and hybridoms. // Rockville, 1988. P. 408.

103. Aula P., Nichols W.W. The cytogenetic effects of mycoplasma in human leukocyte cultures. // Cell Phisiol. 1967. - vol. 70. - P. 281-290.

104. Baker R.M., Ling V. Membrane mutants of mammalian cells in culture. //Methods in membrane biology. New York, 1978. - vol. 9. - P. 337-384.

105. Barile M.F. Mycoplasma tissue cell interactions. //The mycoplasmas., vol. 2 Human and animal mycoplasmas. New York ect. Acad. Press., 1979. -P. 500.

106. Barret Т., Belsham G.J., Subbarao S.M., Evans S.A. Immunisation with vaccinia recombinant expression the F protein protects rabbits from challenge with a lethal dose of rinderpest virus // Yirol. 1989. - v. 170. -P. 11-18.

107. Barski G., Sorieul S., Cornefert F. "Hybrid" type cells in combined cultures of two mammalian cell strains. // Nat. Cancer. Inst., 1961. v. 26. -P. 1269-1291.

108. Baur H., Kasperek S., Pfaff E. Criteria of viability of isolated liver cells.

109. Hoppe-Seyler's Ztschr. Physiol. Chem., 1975. Bd. 356. - P. 827-838.

110. Blav M.J., Botham G.M., Lycy J.A. Calcium ions and cell fusion effects of chemicals fusogens on the permeability of erythrocytes to calcium and other ions. // Biochem. J. 1979. - 182. - P. 553-563.

111. Bolin S.R., Black J.W., Frey M.L.,Katz J.B., et al. Detection of a cell line contaminated with hog cholera virus. // Amer. Vet. Med. Assoc., 1994. -205. 5. - P. 742.

112. Borenfreund E., Krim V., Sanders F.K., Sternberg S.S., Bendich A.

113. Malignant conversion of cell in vitro by carcinogens and viruses. // Proc. Natl. Acad., Sci. USA, 1966. 46. - P. 672-679.

114. Boynton W.H. Preliminary report on the propagation of hog cholera virus in vitro. // Vet. Med. 1946. - 41. - P. 346-347.

115. Branster M.V., Morton R.K. Isolation of intact cells. // Nature. 1957. -vol. 180. - P. 1283-1284.

116. Campbell A.M. Monoclonal antibody technology. // Amsterdam, 1985. -326 p.

117. Carrel A., Burrows M. Human sarcoma cultivated outside of the body. // J. Am. Med. Ass. 1910. - 8. - 1289. - P. 55.

118. Carter S.B. The cytochalasins as research tools in cytology. // Endeavour. -1972.-31.-P. 77-82.

119. Cartwright T. Characterisation of the Searle 17/1 fibroblast cell line. //Proc. NIH Worksshop Cell Substrates Vaccine Prod., 1976, p. 184-197.

120. Chen T.R. Chromosome identity of human prostate cancer cell lines, PC-3 and PPC-1. // Cytogenet. Cell Genet. 1993. - v.62. - P. 183-184.

121. Chernov V.M., Chernova O.A., Volkova E.N., Sitnikova S.N., et al. Chromosome abnormalities in human cells infected with mycoplasmas. // IOM Lett., 1994. v.3. - P. 642.

122. Chitko-McKown C.G., Blecha F. Pulmonary intravascular macrophages: a rewiew of immune properties and functions. // Ann. Rech. Vet. 1992. - 23. -P. 201-214.

123. Chitko-McKown C.G., Chares S.K., Brown R.E., Phillips R.M., et. al.

124. Porcine alveolar and pulmonary intravascular macrofages: comparison of immune function. // Leukocyte Biol. 1991. - 50. - P. 364-372.

125. Chitko-McKown C.G., Phillips R.M., Brown R.E., Blecha F. Porcine alveolar and pulmonary intravascular macrofages: susceptibility to pseudora-bies virus infection. // Proc. 71 st. Conf. Res. Workers Anim. Dis., 1990. -21.

126. Constable Г., Kao K.N. Agglutination and fusion of plant protoplasts by polyethylene glycol. // Canad. J. Bot. 1974. - vol.52. - P. 1603-1606.

127. Couillin P. Evidence for synteny between a polio receptor gene and glu-cosephosphate isomerase (GPI) by analysis of human-mouse hybruds. // Cy-togen. Cell Genet. 1976. - v. 1. - P. 111-113.

128. Dale C.N., Songer B.A. In vitro propagation of hog cholera virus. 1. Method of cultivation and observation on color changes in the medium. // Am, J. Vet. Res. 1957. - 18. - P. 362-368.

129. Dea S., Bilodeau R., Athanaseus R., Sauvageau R.A., Martineau G.P. PRRS syndrome in Quebec: isolation of a vims serological related to Lelystad virus. // Vet. Rec. 1992. - v. 130. - 8. - P. 167.

130. Dresp J., Schmid E., Bauchinger M. The cytogenetic effect of bleomycin on human peripheral lymphocytes in vitro and in vivo. // Mut. Res. -1978.-v. 56.-P. 341-353.

131. Duan X., Nauwyhck H.J., Favoreel H., Pensaert M.B. Porcine reproductive and respiratory syndrome virusinfection of alveolar macrophges can be blocked by monoclonal antibodies against cell surface antigens. // Adv. Exp. Med. Biol. 1998. - 440. - P. 81.

132. Duan X., Nauwynck N.J., Favoreel H.W., Pensaert M.B. Identification of a Putative Receptor for Porcine Reproductive and Respiratory syndrome virus on Porcine Alveolar Macrophages. // J. Virology, may 1998. P. 4520 -4523.

133. Dubois M., Chany C. Permissivenes of mouse monkey and hybrid cells to encephalomyocarditis (EMC) virus. // J. Gen. Virol. 1976. - vol. 31. - P. 173-181.

134. Dunne H.W., Luedke A.J.,Hokanson J.F. The growth of animal leukocytes and their use in the cultivation of animal viruses. // Am. J. Vet. Res. -1958. 19.-P. 707-711.

135. Dunne H.W., Leudke A.J., Reich C.V.,Hokanson J.F. The in vitro growth of hog cholera virus in cells of peripheral blood. // Am. J. Vet. Res. 1957. 18.-P. 502-507.

136. Elliott K.A.C., Libet B. Studies on the metabolism of brain suspensions. // J. Biol. Chem. 1942. - vol. 143. - P. 227-246.

137. Enders J.F., Weller Т.Н., Robbins F.C. Cultivation of the Lansing strain of poliomyelitis virus in cultures of varioushuman embryonic tissues. // Science. 1949. - v. 109. - P. 85-87.

138. Fan V.S.C., Mc Cammon J.R., Ealy G.T., Burke K.V. Process of membrane fusion. // In XIth International Congress of Biochemistry Abstracts, National Research Council of Canada, Ottawa, Ontario, 1979. P. 387.

139. Ford C.E., Hamerton J.L. A colchicine, hypotonic citrate, squash sequence for mammalian chromosomes. // Stain Technol. 1956. - 31. - p. 247251.pression following endotoxin exposure. 11 Amer. Rev. Respir. Dis. 1990. -141. -P. 353.

140. Franke C.A., Berry E.S., Smith A.W., Hruby D.E. Immunisation of cattle with recombinant togavirus-vaccinia virus strain // Res.Vet.Sci. 1985. -39,- 1. -P. 113-115.

141. Frenkel S., van Bekkum J.G., Frenkel H.S. On the cultivation of hog cholera virus in swine spleen tissue explanted in a fluid medium. // Bull, of Internat Epizoot. 1955. - 43. - P. 327- 330.

142. Freshney R.J. Culture of Animal Cells. A manual of basic technique. // New York, Alan R. Liss, 1983.

143. Gadhia P., Gadhia M., Zankl H. Effects of bleomycin on Down's syndrome lymphocytes in culture. //Mut. Res. 1988. - v. 207. - P. 153-158.

144. Gartler S.M. Apparent HeLa cell contamination of human heteroploid cell lines. //Nature. 1968. - 217. - P. 750-751.

145. Glukhova L.A., Kiseleva I.A., Korneeva M.N., Nosic D.N., et al. Karyological approach to the identification of true cell lines susceptible to the human immunodeficiency virus (HIV). // Biomed. Sci. 1991. - v.2. - P. 293-297.

146. Goding J. Antibody production by hybridoma. // Immunol. Meth. 1980. -v.39.-P. 285-308.

147. Goetz I.E., Moklebust R., Warren C.J. Effect of some antibiotics on the growth of human diploid skin fibroblasts in cell culture. // In vitro. 1979. -15.-P. 114-119.

148. Golde D.W.,Cine M.J. Growth of human bone marrow in liquid culture. //Blood. 1973. -41. - P. 45.

149. Gordon S., Cohu Z. Macropage-melanocyte heterokarions. 1. Preparation and Properties. // J. Exp. Med. 1970. - 131. - P. 981 1003.

150. Harris H., Watkins J.F. Hibrid cell derived from mouse and man: Artificial heterokaryons of mammalian cells from different species. // Nature, London, 1965. 205. - P. 640-646.

151. Harris H. Behaviour of differentiated nuclei in heterokaryons of animal cell from different species // Nature, 1965. v. 206. - P. 583-588.

152. Harris M. Cell culture and somatic variation. // Holt, Rinehart and Winston, New York. u <-<-'•.■<'

153. Hayflick L., Moorpead P.S. The serial cultivation of human diploid cell strains. // Exp. Cell Res. 1961. - vol. 25. - P. 585-621

154. Hecke F. Die kunstliche vermehrung des schweunepestivirus mittels ge-webekultuzen. //Zbl. Bact. Abt. I. Orig. 1932. - 126. - P. 517-526.

155. Heneen W.K. HeLa cells and their posible contamination of other cell lines; karyotype studies. // Hereditas. 1976. - v.82. - P. 217-248.17S Hooft B. van Iddekinge, N.de Wind, Wensvoort G., Kimmann Т.,

156. Howell A.N., Sager R. Tumorogenicity and its suppression in cyrids of mouse and Chinese hamster cell lines. // Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 1978. v. 75. - P. 2358-2362.

157. Ji C.Y., Du N.X., Xu W.Y. Adaption of the viral haemorrhagic disease virus of rabbits to the DJRK cell strain. // Rev. Sci. Tech. off. Int. Epiz. -1991. 10(2). - P. 337-345.

158. Jonson J.W.D.,Mei B.,Conh Z.A. The separation, long-term cultivation, and maturation of the human monocyte. // J. Exp. Met., December 1, 1977. -v. 146.-6. P. 1613-1626.

159. Kaplow L.S. Cytochemical heterogeneity of human circulatind monocytes. // Acta cytologica. 1975. - 19. - P. 358.

160. Katinger H.W. Animal cell culture: biological and technological aspects. // Proc. 4th Eur. Congr. Biotechnol. Amsterdam, June 14-18, 1987. v. 4. -Amsterdam, 1987. - P. 21-24.

161. Klebe R., Mancuso M. Chemicals which promote cell hibrization. //Somat. Cell Genet. 1981. - 7. - P. 473-488.

162. Knutton S. Studies of membrane fusion. Fusion of erythrocytes with polyethylenglycol. // J. Cell Sci. 1979. - 36. - P. 61-72.

163. Kohler G., Milstein C. Continuous cultures of fused cells secreting antibody of predefined specificity. // Nature. 1975. - v. 256. - P. 495-497.

164. Korn G., Zoeth B. Uber die vermehrung des schweinepestivirus in einem stamm von lymphozyten-phtozellen und einem monozytenzell-stamm. //Zbl. Bakt. Hyg. I. Abf. Orig A. 1971. - 218. - P. 407-416.

165. Kresse J.I.,Stewart W.C.,Carbreg E.A.,Snyder M.L. Sensitivity of swine buffy coat culture to infection with hog cholera virus. // Am. J. Vet. Res. 1976.-P. 1315-1318.

166. Kurstak E., Kurstak C. Comparative diagnosis of viral diseases. // N.Y., 1977. v. 1-2.

167. Lajtha L.G. Bone marrow in culture. // Cell and tissues in culture. N.U.: Acad. Press.- 1965.-2.-P. 173-196.

168. Lathe R., Kieny M.P., Drillien R., Lecocq P., Wictor T.J., Macfarlan R., Korpowski H. Immunisation against rabies using recombinant vaccinia virus expressing the rabies glycoprotein // Genet.Res. 1985. - 45. - 2. - P. 203-213.

169. Laws J. O., Stickland L.H. Metabolism of isolated liver cells. // Nature. 1956.-v. 178.-P. 309-310.

170. Li C.X., Lam K.W., Yam L.T. Esterases in human leucocytes. // J. His-tochem. Cytochem. 1973. - v. 21. - P. 1-12.

171. Littlefield J.W. Three degrees of guanylic acid-inosinic acid pyrophos-phorylase deficiency in mouse fibroblasts. // Nature. 1964. - 203. - P. 1142-1144.

172. Loan R.W.,Gustafson D.P. Cultivation of hog cholera virus in subcul-turable swin buffy coat cells. //Am. J. Vet. Res. 1961. - 22. - P. 741-745.

173. Longmuir I. S., ap Rees W. A. Preparation of suspensions from rat liver. //Nature. 1956. - vol. 177. - P. 997.

174. Lowy I., Pellicer A., Jackson J., Sim G., Silverstein S., Axel R. Isolation of transformating DNA: Cloning the hamster aprt gene. // Cell. 1980. -22. - P. 817-823.

175. Lubinieckj A.S. Endogenus retroviruses. Continuous cell lines as substrates for biologicals. // Proc. Symp., Arlington, Va, May 26-29, 1988. P. 207.

176. Maaloe O. On the relation between alexin and opsonin. // Munksgaards, Copenhagen, 1946. P. 186.

177. Macpherson I.A. The characteristics of animal cells transformed in vitro. // Adv. Cancer Res. 1970. - 13. - P. 169-215.

178. Macpherson I.A. Mycoplasmas in tissue culture. // Cell Sci. 1966. - v. 1. -P. 145-168.

179. McCuIIoch E.A.,Parker R.C. Continuous cultivation of cells of hemis origin. // Canadian cancer Conference. 1957. - 2. - P. 152-167.

180. Mercer W.E., Schlegel R.A. Phytohemagglutinin enhancement of cellfu-sion reduces polyethyleneglycol cytotoxity. // Exp.Cell Res. 1979. - 120. -P. 417-421.

181. Metcalf D., Moore M.A.S. Haemopoietic cells. Amsterdam, 1971.

182. Meuret G., Hoffman G. Monocyte kinetic studies in normal and disease states. // British Journal of Hematology. 1973. - 24. - P. 275-285.

183. Michlopoulos G., Russell F., Biles C. Primary cultures of hepatocytes on human fibroblasts. II In vitro. 1979. - 15. - 10. - P. 796-806.

184. Morrow J. Genetic analysis of azaguanine resistance in an established mouse cell line. II Genetics. 1970. - 65. - P. 279-287.

185. Morton D., Betram T.A. Isolation and preliminary in vitro characterization of the porcine pulmonary intravascular macrophage. // Leukocyte Biol. -1988. -43. P. 403-410.

186. Nakamura S.,Sasahara J.,Shimizu M.,Shimizu Y. Replication of hog cholera virus in porcine alveolar macrophage cultures. // Nat. Inst. Anim. Heth Quart. 1983. - P. 102.

187. Nelson-Rees W.A., Daniels D.W., Flandermeyer R.R. Cross-contamination of cell in culture. // Science. 1981. - v.212. - P. 446-452.

188. Nelson-Rees W.A., Flandermeyer R.R., Hawthorne P.K. Banded marker chromosomes as indicators of intraspecies cellular contamination. // Science. - 1974. - v. 184. - P. 1093-1096.

189. Norwood Т.Н., Zeigler C.J., Martin G.M. Dimethyl sulfoxide enhances polyethylene glycol-mediated somatic cell fusion. // Somat. Cell Genet. -1976. -2. P. 263-270.

190. Norwood Т.Н., Zeigler C.J., Martin G.M. Dimethyl sulfoxide enhances polyethylenglycol-mediated cell fusion. // Somat. Cell Genet. 1976. - 3. - P. 163-170.

191. Okada Y.,Murayama F. Multinucleated giant cell formation by fusion between cells of two different strains. // Exp. Cell Res. 1965. - 40. - P. 154158.

192. Papaevangelou G., Dandolos E., Roumeliotou-Karayannis A., Richardson S.C. Immunigenicity of recombinant hepatitis В vaccine // Lancet. 1985. - 8426. - P. 455-456.

193. Parker R.C. Methods of Tissue Culture, 3 rd. ed. // Harper (Hoeber), New York, 1961.

194. Paul J. Cell and Tissue Culture. 3 rd. Ed. // Williams and Wilkins Baltimore, Maryland, 1965.

195. Pellicer A., Wigler M., Axel R., Silverstein S. The transfer and stable integration of the HSV thymidine kinase gene into mouse cell. // Cell. 1978. - 14. -P. 133-141.

196. Penso G., Balducci D. Tissue Cultures in Biological Research. // Elsevier, Amsterdam, 1963.

197. Peterson A.R., Krahn D.F., Peterson H., Heidelberger C., Bhuyan

198. B.K., Li L.H. The influence of serum components on the growth and mutation of Chinese hamster cells, in medium containing 8-azaguanine. // Mutat. Res. 1976.-36.-P. 345-356.

199. Petricciani J.C. Use of cell lines in biotechnology. П Adv. Res. Anim. Cell. Technol.: Proc. NATO Adv. Res. Workshop, Brussels, Sept. 21-24, 1987. Dordrecht etc. - 1989. - P. 65-73.

200. Petricciani J.C. Cells, science and health. // Dev. Biol. Stand. 1989. -70.-P. 3-10.

201. Plowright W., Ferris R.D. Research in tissue culture. // ASF. East. Afr. Res. Org.-Ann. R.P. - 1957. - P. 28.

202. Pol J., Wagenaar F., Broekhuijsen-Davies J., Wensvoort J. The morphogenesis of Lelystad virus in porcine lung alveolar macrophges. // Proc. 12th congress, august 17-20, 1992. -1, II. P. 127.

203. Pontecorvo G. Production of indefinitely multiplying mammalian somatic cell hybrids by polyethylene glycol (PEG) treatment. // Somat. Cell Genet. 1976. - vol. 1. - P. 397-400.

204. Potter V.R. The essay of animal tissues for respiratory enzymes. IV. Cell structure in relation to farry acid oxidation. // J. Biol. Chem. 1946. - vol.163.-P. 437-446.

205. Ruddle Г.Н. Chromosome variation in cell populations derived from pig kidney. // Cancer Res. 1961. - 21. - P. 885-894.

206. Sanford K.K., Earl W.R., Likely G.D. The growth in vitro of single isolated tissues cell. // J. Natl. Cancer Inst. 1948. - 9. - P. 229-246.

207. Scangos G., Ruddle F. Mechanisms and applications of DNA-mediated gene transfer in mammalian cells. // Gene. 1981. - 14. - P. 1-10.

208. Scheven B.H., Milne J.S., Robins S.P. A sequential culture approach to study osteoclast differentiation from nonadherent porcine bone marrow cells. //In Vitro Cell Dev. Biol. Anim. 1998. - jul-aug. - 34. - 7. - P. 568-577.

209. Schneiderman S., Farber J.L., Baserga R. A simple method for decreasing the toxicity of polyethylenglycol a mammalian cell hibridization. // Somat. Cell Genet. 1979. - 5. - P. 263-270.

210. Seglen P. O. Effects of anaerobiosis, glucose, inssulin and glucagon on glycogen metabolism in isolated parenchymal rat liver cells. // FEBS Lett. -1973.-vol. 36.-P. 309-312.

211. Seglen P. O. Preparation of rat liver cells. II. Effects of ions and chelators on tissue dispersion. // Exp. Cell Res. 1973. - vol. 76. - P. 25-28.

212. Seglen P. O. Preparation of isolated rat liver cells. // Meth. Cell Biol. -1976.-vol. 13.-P. 29-83.

213. Shows T.D., Brown J. Human X-linked genes regionally mapped utilizing X-autosome translocations and somatic cell hybrids. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1975. 72 (6). - P. 2125-2129.

214. Siminovitch L. On the nature of hereditable variation in cultured somatic cells. //Cell. 1976. - vol. 7. - P. 1-17.

215. Smith C.L., Ankoug F., Kisher D. Is purified polyethylene glycol able to induce cell fusion? // Biohem. Biophys. Acta. 1982. - 692. - 1. - P. 109-114.

216. Stanbridge E. Mycoplasmas and cell cultures. // Bacteriol. Rev. 1971. -v.35. - 2. - P. 206-227.

217. Stanbridge E., Onen M., Perkins F.T., Hayflic L. Karyological and morphological characteristics of human diploid cell strain WI-38 infected with mycoplasmas. //Exp. Cell Res. 1969. - vol. 57. - P. 397-410.

218. Stewart S.D., Watson H.L., Cassell G.H. Investigation of the clasto-genic potential of Ureaplasma urealyticum on human leykocytes. // JOM Lett. 1994. - v.3. - P. 662-663.

219. Subbarao S.M., Evans S.A. Immunisation with vaccinia recombinant expression the F protein protects rabbits from challenge with a lethal dose of rinderpest virus // Virol.- vol.170. 1989. - P. 11-18.

220. Terpstra C., Wenswoort J., Pol J.M.A. Experimental repraduction of porcine epidemic abortion and respiratory syndrome (mystery swine disease)141by infection with Lelystad virus. Koch's postulates fulfilled. // Vet. Quart. -1991.-v.13.-3.-P. 131-136.

221. Territo M.C., Golde D.W.,Cline M.J. Macrophage activation and function. // Manual of Clinical Immunology. 1977. - P. 142-147.

222. Territo M.C., Cline M.J. Monocyte function in man. // Journal of Immunology. 1977. - 118. - P. 187-192.

223. Wensvoort G., Terpstra C., Pol J.M.A., ter Laac E.A., et al. Mystery swine disease in the Netherlands: the isolation of Lelystad virus. // Vet. Quart. 1991.- 13. -P.121-130.

224. WHO. Acceptability of cell substrates for production of biologicals. // Technical report series N747. Report of a WHO study group, 1987.

225. Willcox M.B.,Golde D.W.,Cline M.J. Cytochemical reactions in human haemopoetic cell in liquid culture. // J. Histochem. Cytochem. 1976. - 24. -P. 979.

226. Wright J.A., Lewis W.H., Parfett C.L.J. Somatic cell genetics:A review of drug resistance, lectine resistance and gene transfer in mammalian cells in culture. // Canad. J. Genet. Cytol. 1980. - vol. 22. - P. 443-496.

227. Пассаж. Клетки пассировали в лаборатории культур клеток в течение 135 пассажей. Культура заморожена и хранится в жидком азоте на 120-м пассаже.

228. Способ поддержания. Выращивают в пристеночных культурах. Для диспергирования клеточного пласта используют 0,02% раствор версена и 0,25% раствор трипсина в соотношении 6:1 при 37°С.143

229. Ростовые свойства. При коэффициенте пересева 1:3 монослой формируется на 2-е сутки культивирования. Урожай клеток с литрового матраса составляет 45 млн. клеток.

230. Кариология. (2п=38). Интервал варьирования числа хромосом от 34 до 44. Модальное число 39 хромосом. Величина модального класса 68%.

231. Среда замораживания. Среда культивирования (90%) и диметилсульфоксид (10%).

232. Восстановление после хранения в жидком азоте. Жизнеспособность 93%. Клетки восстанавливают исходные ростовые свойства в течение 3-х пассажей.

233. Пассаж. Клетки пассировали в лаборатории культур клеток в течение 150 пассажей. Культура заморожена и хранится в жидком азоте на 130-м пассаже.

234. Среда культивирования. Игла MEM (90%), сыворотка крови КРС (10%), рН 7,2-7,3. Клетки устойчивы к антиметаболту 8-азагуанин в концентрации 380 мы/ш„ который добавляют в питательную среду каждые 1520 пассажей и культивируют с ним в течении 5 пассажей.

235. Способ поддержания. Выращивают в пристеночных культурах. Для диспергирования клеточного пласта используют 0,02% раствор версена и 0,25% раствор трипсина в соотношении 6 :1 при 37°С.1. ПТП ГГФРТ (380).145

236. Ростовые свойства. При коэффициенте пересева 1:3 монослой формируется на 2-е сутки. Урожай клеток с литрового матраса 45 млн. клеток.

237. Кариология. (2п=38). Интервал варьирования числа хромосом от 34 до 45. Модальное число 39 хромосом. Величина модального класса 70%.

238. Среда замораживания. Среда культивирования (90%) и диметилсульфоксид (10%).

239. Восстановление после хранения в жидком азоте. Жизнеспособность 96%. Клетки восстанавливают исходные ростовые свойства в течение 3-х пассажей.

240. Зав. лабораторией культур клеток с музеем клеточных штаммов

241. ВСЕРОССИЙСКИЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ВЕТЕРИНАРНОЙ ВИРУСОЛОГИИ И

242. МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ПОДДЕРЖАНИЮ И ХРАНЕНИЮ СТАБИЛЬНЫХ СУБЛИНИЙ ПЕРЕВИВАЕМЫХ КЛЕТОК ТЕСТИКУЛ

243. ПОРОСЕНКА ДЕФЕКТНЫХ ПО ФЕРМЕНТАМ ТИМИДИНКИНАЗЕ ПТП ТК (410) И ГИПОКСАНТИН-ГУАНИНФОСФОРИБОЗИЛТРАНСФЕРАЗЕ ПТП ГГФРТ (380)1. МИКРОБИОЛОГИИ1. УТВЕРЖДАЮ1. ПОКРОВ 20021. Общие положения

244. Повышение устойчивости мутантных клеточных линий к действию антиметаболитов обеспечивает более быстрый и эффективный отбор гибридов в селективной системе ГАТ и снижает уровень реверсии.

245. Растворы, питательные среды и реактивы

246. Каждую серию питательной среды и сыворотки контролируют1.на стерильность путем высева на бактериальные среды и допускают к использованию только при отсутствии контаминантов в соответствии с ГОСТ 28085-89.

247. Поддержание матричных расплодок перевиваемых мутантныхклеток свиньи.

248. В эти же сроки производят проверку дефектных по ферментам линий клеток на реверсию (обратную мутацию).

249. Обнаружение нежелательных отклонений от выше указанных характеристик служит основанием для выбраковки и замены матричных распло-док клеток.

250. Поддержание стабильных мутантных сублиний клеток ткстикул поросенка ПТП ТЩ410) и ПТП ГГФРТ(380).

251. При коэффициенте пересева 1:3, монослой формируется на 2-3 сутки. Урожай клеток с литрового матраса культуры клеток ПТП ТК"(410) составляет 45-50 млн., а ПТП ГГФРТ"(380) 35 -45 млн.

252. Мутантные культуры клеток ПТП ТК"(410) устойчивы к антиметаболиту 5-БДУ в концентрации 410 мкг/мл, а клоны ПТП ГГФРТ" (380) устойчивы к антиметаболиту 8-АГ в концентрации 380 мкг/мл.

253. Характеристика культур клеток

254. Интервал варьирования числа хромосом у клеток сублинии ПТП ТК' (410) от 34 до 44. Модальное число 39 хромосом. Величина модального класса 68%.

255. Интервал варьирования числа хромосом у клеток ПТП ГГФРТ" (380) от 34 до 45. Модальное число 39 хромосом. Величина модальногокласса 70%.

256. Коэффициент клонообразования в клетках ПТП ТК" (410) находился в пределах от 14,7% до 39,5%, а у клеток ПТП ГГФРТ"(380) от 20,1% до 43,3% на среде Игла MEM с 10% содержанием сыворотки крупного рогатого скота.

257. Клетки мутантных сублиний свободны от бактериальной, грибковой, микоплазменной инфекции и по данным ИФА не содержат антиген вируса КЧС.

258. Хранение расплодок мутантных сублиний при низких температурах.

259. Криоконсервирование клеточного материала в жидком азоте при-196°С обеспечивает сохранение расплодками сублиний клеток ростовых и морфологических свойств, а также ее маркерных признаков в течение неопределенно долгого времени.

260. Хранение клеток в низкотемпературном холодильнике -70°С.

261. Для эквилибрации расфасованные по флаконам расплодки клеток выдерживают в течение 35-40 минут при температуре +4°С, после чего помещают их для охлаждения и последующего хранения в камеру низкотемпературного холодильника, работающего в режиме -70°С.

262. Восстановление клеток после низкотемпературного хранения.

263. После образования монослоя в первом пассаже проводят 1-3 пересева размороженных клеток с коэффициентом 1:1, 1:2 в течение которых клетки полностью восстанавливают исходные ростовые и морфологические свойства.

264. Сразу после восстановления рекомендуется накопить достаточное количество клеток и вновь их заморозить с целью уменьшения диапазона пассажного уровня у сохраняемого резерва клеточного материала.1. Разработчики:младший научный сотрудник

265. Зав. лабораторией «Культур клеток с музеем клеточных штаммов», старший научный сотрудник, кандидат биологических наук1. С.Г. Юрковроссийская академия

266. СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ наук (РАСХН)

267. ГНУ РОССИЙСКИЙ КУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ЭКСПЕРЕМЕНТАЛЬНОЙ ВЕТЕРИНАРИИ ИМ. Я.Р. КОВАЛЕНКО1. ВИЭВ)109472, г. Москва, Кузьминки, ВИЭВ

268. СПРАВКА О ДЕПОНИРОВАНИИ сублинии перевиваемых клеток тестикул поросенка, дефектной по ферменту гипоксантинхуанинфосфорибозилтрансферазе

269. Зам.МркЬор^: Шзв по научной ^д0Ьте / .Д-Т. Сеыенюта

270. Руководитель специализированнойколлекции (СХЖ РАСХН), профессор Дьяконое