Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Влияние вторичных посредников на кратковременную пластичность холинорецепторов идентифицированных нейронов виноградной улитки

ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Влияние вторичных посредников на кратковременную пластичность холинорецепторов идентифицированных нейронов виноградной улитки"

МОСКОВСКИЙ ОРДЕНА ЛЕНИНА., ОРДЕНА ОКТЯБРЬСКОЙ РЕВОЛЮЦИИ И ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ ИМ М.В. ЛОМОНОСОВА

БИОЛОГИЧЕСКИЙ ФАКУЛЬТЕТ

На правах рукописи

ДРОЗДОВА Елена Ивановна

УДК: 591.181:594.382.4

ВЛИЯНИЕ ВТОРИЧНЫХ ПОСРЕДНИКОВ НА КРАТКОВРЕМЕННУЮ ПЛАСТИЧНОСТЬ ХОЛИНОРЕЦЕПТОРОВ ИДЕНТИФИЦИРОВАННЫХ НЕЙРОНОВ ВИНОГРАДНОЙ УЛИТКИ

03.00.13 - физиология человека и животных

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва-1991

Работа выполнена на кафедре высшей нервной деятельности Биологического факультета Московского государственного университета им. М.В. Ломоносова.

Научный руководитель

кандидат биологических наук, ст. н. сотр. А ¡.С. Пивоваров.

Официальные оппоненты

доктор биологических наук, зав. -лаб. П.М. Балабан; кандидат биологических наук, ст. н. сотр. Т.Л. Дьяконова.

Ведущее учреждение -

Институт мозга Всесоюзного научного центра психического здоровья АМН СССР.

Защита состоится ^^Гс^/рс 1991 г. в "час. на

заседании Специализированного биологического совета Д.053.05.35 при Московском государственном университете им. М.В. Ломоносова по адресу: 119899, Москва, Ленинские Горы, Биологический факультет.

С диссертацией можно ознакомиться в Биологического факультета МГУ.

библиотеке

Автореферат разослан

1991 г.

Ученый секретарь Специализированного совета кандидат биологических наук

И'

Б.А. Умарова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ.

Актуальность проблемы. Способность организмов к обучению и имяти основана на свойстве нервных клеток проявлять пластичность - изменять реактивность под влиянием последовательных раздражений ии при ассоциировании с другими факторами. Одним из современных I продуктивных подходов к изучению механизмов обучения и памяти шляется исследование физико-химических закономерностей шастичности нервных клеток в экспериментальных моделях обучения.

Исследованиями последних лет установлено, что пластичность 1ервной клетки обусловлена изменением мембранных белков [Кругликов, 1986; C83tellucci et al, 1986; Ашмарин, 1987; Kandel, 987 ). В зависимости от формы изменения белков различают (олговременную и кратковременную пластичность. В случае с [олговременной пластичностью происходит встраивание в мембрану ¡новь синтезированных белков, отличных по своей структуре от [еградированных, что меняет реактивность клетки минимум на период изни этих белков. При кратковременной пластичности, которая :ороче времени жизни мембранных белков, последние не заменяются [ругими, а подвергаются химической модификации (Ашмарин, 1987; andel, 1987). Наиболее распространенной формой химической юдификащш белков является их фосфорилирование (Северин, Ко-:еткова, 1985), которое катализируют протеинкиназы. Последние, в вою очередь, регулируются рядом соединений, в число которых входа особая группа веществ, называемых "вторичными посредниками".

функциональное значение вторичных посредников в регуляции азличных форм пластичности в настоящее время широко зучается.

Цель работы состояла в изучении® роли ряда вторичных зсредников в кратковременной пластичности холинорецептивной >мбраны идентифицированных нейронов виноградной улитки.

Задачи исследования.

1. Идентификация холинорецепторов соматической мембраны (ентифицированных нейронов ЛПаЗ и ППаЗ.

2. Роль цАМФ в кратковременной пластичности нейронов.

3. Роль цГМФ в кратковременной пластичности нейронов.

4. Роль в кратковременной пластичности нейронов арахвдоновой слоты и продуктов ее метаболизма.

№1

5. Роль кальмодулина в кратковременной пластичности нейронов

6.Роль протеинкиназы С в кратковременной пластичност] нейронов.

Научная новизна работы.

Обнаружено два типа рецепторов никотиновой и мускариново) природы на соме нейронов ППаЗ и ЛПаЗ, которые отличаются по своив фармакологическим свойствам от соответствующих рецепторо] нейронов позвоночных животных.

Впервые обнаружено участие цП№; арахвдоновой кислоты и е( производных, образующихся при липоксигеназном окислении, включа! 15-гидроксиэйкозатетраеновую кислоту; а также внутриклеточное рецептора ионов кальция кальмодулина в регуляции кратковременно} пластичности холинорецепторов нейронов.

Показано, что цАМФ, протеинкиназа С (внутриклеточные рецептор 1,2-диацилглицерола) и производные арахвдоновой кислоты, образующиеся при ее: циклооксигеназном окислении, не вовлечены е регуляцию кратковременной пластичности.

Научно-теоретическое и практическое значение работы.

Выполненная работа расширяет . представление об участии вторичных посредников в кратковременной пластичности и, принимая во внимание важность постсинаптической пластичности нейронов для процессов обучения и памяти, может. быть полезна в дальнейших теоретических и практических исследованиях. Учет полученных результатов позволяет моделировать пластичность холинорецепторов нейрона путем селективного воздействия на отдельные системы вторичных посредников, для которых установлена регуляторная функция.

Практическое значение работы состоит также в возможности тестировать и изучать механизмы действия нейрофармакологических препаратов, воздействуя на холинорецепторы никотиновой у. мускариновой природа в нейронах ЛПаЗ и ППаЗ.

Положения выносимые на защиту.

1. На мембране нейронов ЛПаЗ и ППаЗ виноградной улити расположены холинорецепторы никотиновой и мускариновой природы, которые отличаются по своим фармакологическим свойствам от соответствующих рецепторов нейронов позвоночных животных.

2. В регуляции кратковременной пластичности холинорецепторог

принимают участие цГМФ; арахидоновая кислота и ее липоксигеназные производные, в том числе I5-HETE; кальмодулин.

3. цАМФ, протеинкиназа С и циклооксигеназные производные арахидоновой кислоты не вовлечены в регуляцию кратковременной пластичности холинорецепторов.

Апробация работы. Основные материалы диссертации были доложены на II Всесоюзной конференции "Простые нервные системы и их значение для теории и практики", Казань, 1988; на II Всесоюзной конференции по нейронаукам, Киев, 1988; на VI Всесоюзном симпозиуме "Роль циклических нуклеотидов и вторичных посредников в регуляции ферментативных реакций", Петрозаводск, 1988; на Международном симпозиуме "Транспорт ионов и механизмы его регуляции", Тбилиси, 1989; на Всесоюзном симпозиуме "Биохимия рецепторных систем", Таллинн, 1990; на Региональной конференции Международного общества нейробиологии беспозвоночных "Простые нервные системы", Минск, 1991. Диссертация апробирована на заседании кафедры высшей нервной деятельности Биологического факультета МГУ /1991/.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 16 печатных работ.

Структура и объеи диссертации. Диссертация состоит из введения, .обзора литературы, описания методов исследования, экспериментальных результатов (6 глав), их обсуздеяия и выводов. Содержание диссертации изложено- на страницах машинописного

текста, содержит 31 иллюстрацию. Библиография включает наименования.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

Эксперименты выполнялись на препарате изолированных ганглиев виноградной улитки крымской популяции (Helix lucorum taurica Кгуп). Исследовались нейроны ЛПаЗ, ППаЗ и. ППа4 (п=228). Регистрировались внутриклеточно потенциалы или трансмембранные ионные токи (с помощью методики двухэлектродной фиксации потенциала), возникавшие в ответ на ионофоретическое подьединиг.-IX к соме нейронов. Для ионофорезз использовались катиошши токи L40-900 нА длительностью 1-7 с.

Процедура опыта но изучению роли вторичных посредников в пластичности нервных клеток представляла собой несколько серий

угашения АХ-реакций - контрольных (до фармакологической воздействия), опытных (в период нахождения исследуемого веществ; в проточной камере) и восстановления '(после промыванш препарата). Перед серией наносились 2-3 контрольных' стимула дам проверки стабильности АХ-ответа. Серия угашения включала 1С повторных и 1-3 тестирующих последовательных аппликаций А) форетическим ток§м постоянной силы, длительности и направления. Интервалы между повторными стимулами составляли 35-80 с (у 1Ша4) и 40-120с (ППаЗ и ЛПаЗ). Тестирующие стимулы подавались для оценки скорости восстановления угашенной реакции с интервалом е 10 мин.

В работе использованы следующие соединения: никотин основание и цитизин (агонисты нХР); а-тубокурарин хлорид и а-Сунгаротоксин (блокаторы нХР); EL-мускарина хлорид и ареколина гидрохлорид (агонисты мХР); атропина сульфат, скополамина гидрохлорид и плати£иллина гидротартрат (блокаторы мХР); пилокарпина гидрохлорид (агонист MjXP); оксотреморина сескуфумарат и карбамилхолина хлорид (агонисты MgXP); пирензепин (блокатор Mj-XP); форсколин (активатор АЦ) и имидазол (активатор ФДЭ); нитропруссид Na и азид Na (активаторы ГЦ); кальмидазолий (R 24571), трифлуоперазин, хлорпромазин, прениламина лактат (блокаторы КМ); полимиксин.В (блокатор ПКС) и 12-0-тетрадеканоил форбол-13-ацетат (активатор ПКС); арахидоновая к-та, хинакрин (блокатор фосфолипазы Ag), индометацин (блокатор _циклооксигеназ-ного окисления арахидоновой к-ты); нордигидрогваяретовая к-та, 8,11,14-эйкоэатрииновая к-та, 5,8,11,14-эйкозатетраиновая к-та, 5,8,11,14,17-эйкозапентаиновая к-та (блокаторы липоксигеназного окисления арахидоновой к-ты); I5s-riwpoKCH-5z,8z,ilz,13E-эйкозотетраеновая к-та (I5-HETE).

Растворы всех перечисленных соединений, за исключением агонистов холинорецепторов, вводились в проточную камеру в объемах 2-10 мкл микрошприцем ( "Hamilton", США) или 10-100 шел микропипеткой ("Labsyeterns", Финляндия).

Для изучения холинорецепторов применялась инъекция агонистов АХ на поверхность нейронов из стеклянных микрошшеток с помощью давления, создаваемого микроиньектором КМ-2 (НТО АН СССР, Черноголовка). Сопротивление пипеток составляло 20-70 МОм,

концентрация растворов агонистов - 1-80 мМ. Количество растворов, выводами: под давление^ из пипетки за 5-15 с, составляло 0,2-156 пмоль в объеме 0,2-2 нл.

Влияние соединений оценивали по глубине угашения АХ-ответа. Амплитуда АХ-ответа на первый стимул принималась за 100%, все последующие ответы в серии, а также АХ-реакции на тестирующие стимулы, измерялись в процентном отношении к первому. Достоверность влияния соединений на процесс угашения оценивали по непараметрическим критериям - парному t-критерию Вилкоксона (на отдельных нейронах) и критерию знаков (на популяции исследованных клеток). Достоверность влияния веществ на величину АХ-реакции оценивали по и-критерию Вилкоксона (Манна - Уитни). Статистическую обработку результатов проводили на персональном компьютере IBM PC хт с помощью специализированной программы "ДИАСТА".

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

I. Идентификация никотиновых и мускариновых холинорецепторов на нейронах ЛПаЗ и ППаЗ.

Поскольку АХ активирует никотиновые ХР (нХР), а также мускариновые ХР (мХР) Mj и м2 подтипов, предварительно была проверена чувствительность нейронов ППаЗ и ЛПаЗ на селективные агонисты нХР (никотин, цитизин), смешанные агонисты Mj и м2 типов мХР (мускарин, ареколин), а также на преимущественные агонисты MjXP (пилокарпин) и м2ХР (оксотреморин, карбамилхолин) (Зеймаль, Шелковников, 1989).

На локальное подведение к соме всех использованных•агонистов разных типов ХР в нейронах регистрировался входящий ток, величина которого зависела от дозы агониста. Чувствительность к разным агонистам была неодинаковой. Наибольшая чувствительность отмечена для агонистов нХР - никотина и цитизина и MgXP - карбамилхолина, а наименьшая для агониста MgXP - оксотреморина. Длительность входящего тока, вызываемого всеми агонистами кроме карбамилхолина, превышала длительность АХ-тока. Ток, вызываемый карбамилхолиноы, в ряде нейронов имел ту же длительность, что и АХ-ток. Действие селективных агонистов ХР указывает' на наличие мХР и нХР на соме нейронов ЛПаЗ и ППаЗ .

Отличительной особенностью реакций нейронов' - на все

2-Ш

использованные селективные агонисты, кроме карбамилхолина,. является длительное снижение амплитуда входящего тока на повторные инъекции. Одного кратковременного ( подведения агониста ХР (до 15 с) было достаточно, чтобы проявилась длительная ■десенситизация мембранных рецепторов на соматической мембране -последующая аппликация агониста с интервалом более 1ч не вызывала реакции, равной первоначальной. В отличие от этого 10 минутного интервала было достаточно для восстановления чувствительности нейронов к локальному воздействию карбамилхолина. Столь ке короткий период требуется для полного восстановления АХ-тока.

Для выяснения вопроса о связи мембранных рецепторов, с которыми взаимодействуют АХ и другие агонисты ХР, проведены серии с последовательным подведением к соме селективного агониста ХР и АХ таким образом, чтобы воздействие медиатора приходилось в период возникшей реакции на селективный холиномиметик,, то есть, когда соответствующие рецепторы были заняты селективным агонистом.

Обнаружено, что АХ-ток, возникавший при такой форме эксперимента, подавлялся на фоне предварительного действия всех холиномиметиков, но в разной степени. Наименьшее подавление АХ-тока проявлялось на фоне оксотреморина. Развившееся подавление АХ-тока после предварительного воздействия никотина, цитизина, мускарина и ареколина было необратимым. Полного восстановления амплитуды АХ-тока не возникало в течение Зч (максимальное время наблюдения) - происходило лишь частичное восстановление. Следует отметить еще одну особенность изменения АХ-реакции на фоне действия селективных, холиномиметиков. Кроме снижения амплитуды АХ-тока наблюдалось возрастание его длительности на фоне действия никотина, цитизина, мускарина, ареколина и пилокарпина, которая не восстанавливалось до контрольной величины.

Идентификация мембранных рецепторов проведена в опытах по влиянию селективных блокаторов нХР (¿-тубокурарин, а-бунгароток-син) и мХР (атропин, скополамин, платифиллин) и м1ХР (пирензепин) на АХ-ток.

Антагонисты нХР - никотин (10-60 мкмоль/л), а-бунгаротоксин (0,2-1 мкмоль/л) и мХР - атропин (30-70 мкмоль/л), а также м1ХР -пирензепин (100-500 мкмоль/л) снижали амплитуду АХ-тока на величину более, чем 10%. Два других антагониста мХР - скополамин

(10-250 мкмоль/л) и платифиллин (10-700 мкмоль/л) были неэффективны даже в достаточно высоких дозах. Наименее эффективное подавление АХ-тока отмечено для пирензепина, а наиболее для а-бунгаротоксина, действие которого необратимо. Результаты этих экспериментов позволяют говорить об активации медиатором никотиновых и мускариновых рецепторов,- которые, однако, имеют ряд фармакологических отличий от соответствующих ХР позвоночных животных.

Как уже было отмечено выше, длительная десенситизация рецепторов после действия ряда селективных холиномиметиков не позволила использовать их в опытах с блокадой ХР антагонистами. Исключение составил карбамилхолин. Оказалось, что входящий ток, вызванный этим агонистом MgXP, подавлялся антагонистом Mj и м2ХР атропином (30-70 мкмоль/л), а также селективным антагонистом MjXP пирензепином (100-500 мкмоль/л). Подобное действие атропина позволяет предполагать активацию-- карбамилхолином мХР, а высокие концентрации пирензепина говорят об их отличии от подтипа MjXP позвоночных животных.

На основании перечисленных результатов можно сделать заключение, что АХ активирует рецепторы соматической мембраны, которые можно отнести к ХР никотинового и мускаринового типов. Аналогичные результаты получены ранее на нейроне ППа4 (Пивоваров, Саганелидзе, 1988). Тем не менее, перечисленные в результатах особенности фармакологической чувствительности нХР и мХР к селективным агонистам и антагонистам свидетельствуют об их отличии от классических рецепторов и не дают оснований определить мХР нейронов виноградной улитки как Mj и м2 подтипы.

2. цАМФ и угашение АХ-реакции.

При взаимодействии АХ с холинорецепторами происходит уменьшение внутриклеточного содержания цАМФ за счет подавления активности АЦ G^ белком (McKinney et al,1985, Evans et al,1984) И активирования ФДЭ, которое может происходить при увеличении внутриклеточной концентрации Са2+, (Evans et а1,1984).

Поэтому регулирующее влияние цАМФ на кратковременную пластичность холинорецепторов идентифицированных нейронов ЛПаЗ, ППаЗ и ППа4 попытались выявить, изменяя его содержание в клетка

активатором аденилатциклазы - форсколином или активатором фосфодиэстеразы - имидазолом.

Введение в проточную камеру форсколина, повшпающего содеркание цАМФ, в концентрации от 20 до 60 мкмоль/л вызывало уменьшение амплитуда АХ-деполяризации в среднем на 12,1+5,4% (р<0,05) в нейронах Ш1а4 и АХ-тока в среднем на 38,8±9,5 (р<0,01) в нейронах ЛПаЗ и ППаЗ (всего в 12 клетках из 14) (р<0,001) В то же время динамика,угашения АХ-реакции оставалась Неизменной у II нейронов из 14 (З-ЛПаЗ, Н-ППа4). В трех нейронах ППа4 изменение угашения АХ-потенциала происходило разнонаправленно: в двух клетках - усиление в среднем на 17,2+2,4% и в одной - ослабление на 7,2±2,0%.

Действие имидазола, уменьшающего содержание цАМФ, проверялось на 10 нейронах из 10 Препаратов (7-ППа4 и З-ППаЗ). В концентрации 5 млмоль/л имидазол не изменял величину АХ-реакции в 9 нейронах и не ;влиял на кинетику угашения в 8 нейронах.

Из этих данных можно сделать вывод, что кратковременная пластичность холинорецепторов нейронов ЛПаЗ, ППаЗ и ППа4 не зависит от внутриклеточного содержания цАМФ.

3. ЦГМФ и угашение АХ-реакции.

Активация клетки АХ или другими мускариномиметиками приводит к увеличению содержания цГМФ за счет активации гуанилатциклазы. В качестве активаторов гуанилатциклазы применяются нитросоединения, содержащие или образующие свободнорадикальную группу no. Наиболее эффективными активаторами ГЦ являются нитропруссид Na+ и азид Nat

Азид натрия в концентрациях 0,5-1 млмоль/л вызывал уменьшение АХ-реакции на 15,4+4,4% (р<0,01) ^ 7 нейронах ППа4 из 12. Нитропруссид натрия в концентрации I млмоль/л, уменьшал АХ-ответ в среднем на 25,6+9,6% (р<0,05) в нейронах 1Ша4 и на 47,2+7,3% (р<0,01) у нейронов ЛПаЗ и ППаЗ (всего в II клетках из 17).

Как нитропруссид натрия, так и азид натрия изменяли процесс угашения АХ-реакции у 24 из 29 нейронов (р<0,01); у 15 из 17 клеток (3~&fa3, З-ППаЗ, 11-ППа4) при действии первого соединения и у 9 из 12 нейронов ППа4 при действии второго. Изменение во всех 24 нейронах было однонаправленным - усиление, но характер отличался в зависимости от типа нейронов.

На нейроне ППа4 нитропруссид натрия и азид натрия усиливали скорость и глубину угашения АХ-потенциала во время серии в среднем на 22,6+1,5% (п=10) и на 15,5+1,5% (п=9), не изменяя при этом длительности спонтанного восстановления угашенного ответа. Данный эффект был обратим.

У нейронов ЛПаЗ (п=3) и ППаЗ (п=2) нитропруссид Яа+ не изменял динамику угашения АХ-тока, но значительно замедлял (р<0,001) его восстановление. Так, если время спонтанного восстановления угашенного ответа в контрольной серии составляло 10 мин, то на фоне нитропруссида длительность сохранения угашенной реакции возрастала: даже третий тестирующий стимул, нанесенный через 40 мин после серии аппликаций, не выявил частичного восстановления. В то время, как последующее промывание препарата раствором Рингера в течение двух часов восстанавливало не только угашенный АХ-ток, но и способность к восстановлению через 10 мин после серии.

Полученные результаты позволяют сделать вывод о том, что цГМФ участвует в регуляции кратковременной пластичности нейронов ППаЗ, ЛПаЗ и ППа4, активируя цГМФ-зависимую протеинкиназу, фосфорилирующую белки. По-видимому, в клетках ППаЗ и ЛПаЗ' модификация белков происходит на более длительное время по сравнению с клеткой Ш1а4. Выявленное отличие влияния цГМФ на пластичность холинорецепторов нейронов разных типов макет быть связана с различием их функционального значения.

4. Эйкозаноиды и угашение АХ-реакции.

Влияние арахидоновой кислоты на кратковременную пластичность холинорецепторов проверяли при ее внеклеточном воздействии. Вещество вводили в проточную камеру с таким расчетом, что конечная концентрация составляла 50-100 мкмоль/л. При этом происходило снижение амплитуды АХ-тока во всех 14 исследовавшихся нейронах (9-ЛПаЗ и 5-ППаЗ) в среднем на 41,9*4,8« (р<0,001). Действие развивалось за 20-60 мин и было обратимым. Арахидоновая кислота усиливала угашение АХ-тока у 8 клеток из 14 в среднем на II,6-0,6% (р<0,01). В трех нейронах происходило ослабление угашения АХ-ответа в среднем на 12,1*1,3£, и в 3 клетках изменений не было. Такие данные позволяют заключить, что арахидоновая кислота в концентрации 50-100 мкмоль/л достоверно 3- №}

усиливает угашение АХ-тока.

В качестве соединения, снижающего содержание арахидоновой кислоты в нейроне, применялся ингибитор фосфолипазы А2 - хинакрин Хинакрин в концентрации от 100 до 600 мкмоль/л обратимо уменьшал (р<0,001) величину АХ-тока во всех II исследовавшихся нейронах (4-ЛПаЗ и 7-ППаЗ). За 20-60 мин амплитуда АХ-реакции снижалась в среднем на 42,7±5,5%. Изменение угашения АХ-тока происходило в 9 клетках из II (р<0,01), однако влияние хинакрина было' разнонаправленным. У 4 нейронов это соединение ослабляло угашение на 10,5±1,0% , а у 5 клеток усиливало в среднем на И,9±0,7%. Такие данные не позволяют сделать однозначный вывод о преимущественном направлении влияния хинакрина на динамику угашения АХ-тока.

Разнонаправленные эффекты хинакрина отражают, по-видимому, его действие не только на фосфолипазу Аг, но и на другие ферменты. Если активность образующихся при этом метаболитов выше, чем у фосфолипазы Аг, то наблюдается противоположный эффект.

Выявлено два основных способа, окисления арахидоновой кислоты, липоксигеназный, при котором образуются ациклические эйкозаноиды, и циклооксигеназный, ведущий к образованию циклических эйкозаноидов. Чтобы установить, какой класс соединений принимает участие в регуляции пластичности клеток, мы использовали ингибитор липоксигеназ - нордигидрогваяретовую кислоту, и ингибитор циклооксигеназы - индометацин (Robinson, Kendall, 1989).

Нордигидрогваяретовая кислота в концентрации от 3 до 10 мкмоль/л необратимо уменьшала амплитуду АХ-тока у всех 13 исследовавшихся клеток (4-ЛПаЗ и 9-ППаЗ) в среднем на 44,6±3,6% (р<0,001) за 20-60 мин. Обратимое ослабление угашения АХ-реакции наблюдалось в 7 нейронах из 13 в среднем на 9,6±0,6%(р<0,05). В двух нейронах - в среднем I0,I±I,I% и в 4 - изменений не было. Полученный результат позволяет сделать вывод о том, что нордигидрогваяретовая кислота достоверно и обратимо ослабляет угашение АХ-реакции.

Индометацин (10-50 мкмоль/л) уменьшал (р<0,01) амплитуду АХ-тока у 7 из 8 клеток через 20-60 мин, как правило, необратимо в среднем на 20,4±9,0 (р<0,01). Изменений в динамике угашения

АХ-тока не проявлялось в 6 нейронах из 8. В одной клетке наблюдалось ослабление на 14,1+1,6% (р<0,01), в другой - усиление на 9,2+0,6% (р<0,01).

Из полученных результатов следует, что арахидоновая кислота и ее липоксигеназные ациклические производные регулируют кратковременную пластичность холинорецепторов нейронов виноградной улитки. Циклооксигеназные циклические эйкозаноида регулирующего влияния на пластичность холинорецепторов не оказывают.

Для дальнейшего изучения влияния арахидоновой кислоты и ее ациклических производных выбрали полиацетиленовые аналоги, такие как 8,11,14-эйкозатриинову» (ЕТгУА), 5,8,11,14-эйкозатетраиновую (ЕТУА) и 5,8,11,14,1?-эйкозапентаиновую (ЕРУА) кислоты, которые образуют группу достаточно сильных и селективных ингибиторов различных липоксигеназ (Заболотский и др., 1990).

8,11,14-эйкозатрииновая кислота в концентрации 10-100 мкмоль/л не проявляла достоверного однонаправленного влияния ни на амплитуду АХ-тока, ни на динамику его угашения (п=6).

5,8,11,14-эйкозатетраиновая кислота в концентрации 30-60 мкмоль/л уменьшала амплитуду АХ-тока во всех 6 исследовавшихся нейронов (р<0,01) в среднем на 43,6*2,2% (р<0,001) за 10-40 мин. Эта кислота обратимо ослабляла угашение во всех 6 клетках (р<0,01) в среднем-на 16,1+0,7%.

На 7 нейронах было проверено влияние 5,8,11,14,17-эйко-I запентаиновой кислоты в концентрации 4-50 мкмоль/л. В 5 клетках наблюдалось уменьшение амплитуды АХ-тока в среднем на 32,8±8,4Ж (р<0,001> за 10-40 мин. Эйкозапентаиновая кислота обратимо ослабляла угаиение АХ-тока в 5 из 7 клеток (р<0,05) в среднем на 12,4+0,5%. В двух нейронах изменений в динамике угашения АХ-ответа не наблюдалось.

Аналогичные эффекты ЕТУА и ЕРУА на амплитуду АХ-тока и его угашение предполагают один и тот же клеточный механизм. Меньшие эффективные концентрации ЕРУА по сравнению с ЕТУА , скорее всего, свидетельствует о более специфичном ингибировании ЕРУА тех липоксигеназ, которые вызывают образование метаболитов, принимающих наиболее активное участие в регуляции кратковременной пластичности. Отсутствие, влияния на угашение со стороны КТгУА можно объяснить меньшей по сравнению с ЕТУА и ЕРУА блокирующей

активностью по отношению к липоксигеназам: показано, что ЕТгУА ингибирует 12-липоксигеназу в 12 раз слабее, чем етуа (Бш1 ъХ а1, 1981). Кроме этого, ЕТгУА, видимо, не способна ингибировать действие 5-липоксигеназ из-за отсутствия в ее структуре 5,6-трой-ной связи, в отличие от етуа и ЕРУА (Заболотский и др., 1990).

Полученные данные подтверждают сделанный ранее вывод об участии липоксигеназных метаболитов арахидоновой кислоты в кратковременной пластичности нейронов виноградной улитки.

Мы проверили также действие одного из продуктов метаболизма арахидоновой кислоты - 15-нете. Окисление арахидоновой кислоты под действием 15-липоксигеназы приводит к образованию 15(Б)-гид-роперокси-5г,11 г,13Е- зйкозатетраеновой кислоты, которая далее восстанавливается до 15(8)-гидрокси-52,аг,112,1 ЗЕ-эйкоззтетрае-новой кислоты (15-НЕТЕ). Как и для других эйкозаноидов, для нее вероятна сигнальная функция в клетке.

Результаты получены на 12 нейронах (5-ШаЗ и 7-ЛПаЗ). 15-НЕТЕ в концентрации 4-16 мкмоль/л уменьшала величину АХ-тока у II нейронов в среднем на 48,5±6,2% (р<0,001). При экспозиции препарата от 10 до 60-80 мин 15-НЕТЕ снижала глубину угашения у 7 щйронов в среднем на 12,0+0,7%, у одной клетки угашение усилилось, а у 4 но менялось.

В процессе промывания препарата наблюдалось дальнейшее углубление угашения АХ-реакции (р<0,05). Такое действие проявилось в 7 из Ю нейронов, величина смещения кривой угашения составляла в среднем 13,1+0,6%. Только в 3 случаях происходило восстановление кривой угашения ( в 2 - полное, в I - частичное ).

Объяснить 'такое изменение угашения соединения можно при допуц-знии двух разнонаправленных эффектов 15-НЕТЕ - коротко- и длиннолатентном. Дополнительные эксперименты подтвердили правомочность такого предположения. На 3 нейронах провели последовательно несколько серий угашения при постоянной концентрации 15-НЕТЕ, но с возрастающей экспозицией. На всех нейронах получен одинаковый результат. Первоначально происходило ослабление угашения АХ-тока, далее эта реакция ослабевала и еще через некоторое время наблюдалось усиление угашения. После отмыва препарата в течение 30 мин кривая угашения оставалась на том же уровне, что и предыдущая опытная кривая, демонстрируя усиление

угашения по сравнению с контролем. -

Полученные результаты свидетельствуют, что 15-НЕТЕ вызывает два разнонаправленных эффекта на угашение АХ-тока исследованных нейронов, зависящее от времени экспозиции вещества. Коротко-латентное действие (от 10 до 60-80 мин) состоит в ослаблении угашения, а длиннолатентное действие (через 60-80 мин) проявляется в усилении угашения АХ-тока. Коротколатентное влияние 15-НЕТЕ может быть связано с известным ингибированием ею 5-липоксигеназы (УапйегЬоек et а1, 1980; Наузлг еЪ а1, 1987) и 12-липоксигеназы (УапаегЬоек е1, а1, 1980а), что ведет к ослаблению угашения АХ-тока . Длиннолатентный эффект 15-НЕТЕ может, быть связан с ее прямым действием. Скорее всего, два разнонаправленных действия 15-НЕТЕ запускаются одновременно, но влияние, опосредованное блокированием 5- и 12-липоксигеназ, хотя и превосходит по силе прямой эффект 15-НЕТЕ, но менее длительное.

Следовательно, 15-НЕТЕ может принимать участие в регуляции пластичности холинорецепторов нейронов ЛПаЗ и ППаЗ виноградной улитки.

5. ПКС и угашение АХ-реакции.

Поскольку естественный активатор ПКС - 1,2-диацилглицерол является химически нестойким соединением, то его действие имитировали 12-0-тетрадеканоилфорбол-13-ацетатом (ТФА), который как и некоторые другие эфиры форбола, повышает сродство ПКС к Са2+ (Веггаа^е а1, 1984, Нок1п, 1985).

Введение ТФА в проточную камеру в концентрации 0,1-1 мкмоль/л вызывало уменьшение входящего АХ-тока в среднем на 19,3+3,6% (р<0,01) за 20 мин. Но даже длительное его действие (30-60 мин до начала серии угашения) не оказывало влияния на характер угашения в 7 из 8 клетках (5-ЛПаЗ и З-ППаЗ) и лишь в одной клетке произошло углубление привыкания АХ-тока на 14,7+0,9%.

Концентрация ТФА в этих экспериментах соответствует тем, какие использовались в работах на других объектах для активации данным соединением ПКС при вниклпточном его нриминпнии. Поэтому уменьшение АХ-тока косвенно свидетельствует об активации ПКС со стороны эфира форбола в тех же концентрациях на нейронах ППаЗ и ЛПаЗ.

Однако для большей убедительности дополнительно было проверено действие ТФА на угашение АХ-реакции в более высоких концентрациях. (1-7 мкмоль/л). АХ-ток при этом уменьшался в среднем на 34,2±3,0% (р<0,01) в 9 клетках из 12. Действие ТФА на угаиение было разнонаправленным - в 6 клетках эфир форбола ослаблял угашение в среднем на 14,5±1,2%, а в 3 - углублял в среднем на 11,3+0,8%, в трех нейронах изменений в динамике угашения не наблюдалось. Поэтому можно сказать, что ТФА и в более высоких концентрациях не оказывал достоверного однонаправленного влияния на угашение АХ-тока.

Хотя эфиры форбола, в том числе и ТФА, считают достаточно селективным и эффективным инструментом активации ПКС, мы проверили также влияние на угашение полимиксина В, ингибирующего ПКС.

В наших экпериментах полимиксин В использовался в концентрациях от 100 до 500 мкмол/л. Внесение этого соединения в проточную камеру за 15 мин до серии угашения не меняло ее динамику в 5 клетках из 8 (6-ЛПаЗ и 2-ППаЗ). В трех нейронах привыкание на АХ аппликацию ухудшалось при действии данного блокатора в среднем на 9,4±0,4%. Величина АХ ответа также не •менялась. Отсюда можно сделать вывод об отсутствии достоверного влияния (р<0,05) полимиксина В на угашение АХ-тока нейронов.

Из приведенных результатов следует, что ПКС не включена в молекулярные механизмы регуляции кратковременной пластичности холщоре цепторов нейронов ППаЗ и ЛПаЗ виноградной улитки, поскольку ни ТФА, активирующий ШС, ни полимиксин В, ингибируюций ее действие, не оказывают достоверных эффектов на угашение АХ-тока.

6. Кальмодулин и угашение АХ-реакции.

Роль Са2+ в регуляции кратковременной пластичности холинорецепторов исследовалась на нейронах ППа4, ППа5 и ВЗ .(Пивоваров, Саганелидзе, 1986) и нейронов ЛПаЗ и ППаЗ (Пивоваров, Котляр . 1990). Возможно, что обнаруженное при увеличении внутриклеточной концентрации усиление привыкания

опосредовано образованием активного комплекса Са/КМ. С целью проверки данного положения изучалось участие КЫ в угашении АХ-реакции с использованием его блокаторов.

Учитывая, что ни один из известных блокаторов КМ не . проявляет- достаточно строгой селективности (Орлов, 1987, Огеиг^, 1982, Тапака, ,1988) в работе использовались 4 соединения: трифлуоперазин,. хлорпромазин, калмидазолий №4571), црениламина лактат. Это дало возможность сопоставить их действие и исключить, тем самым, возможность неспецифического эффекта.

Эффект блокатора и 24571 проверяли на 9 нейронах (7-ЛПаЗ и 2-ППаЗ) в концентрациях от 20 до 50 мкмоль/л. За 10-20 мин происходило уменьшение, величины АХ-тока в среднем на 17,0+5,9% (р<0,05) (п=8). В 6 клетках кальмидазолий' вызывал ослабление угашения АХ-реакций в среднем на 19,8+0,8%, в одной клетке -усиление на 12,6+4,7% и в двух нейронах изменения динамики угашения не было. Отсюда можно сделать вывод, что И 24571 ослабляет привыкание холинорецепторов нейронов виноградной улитки (р<0,05).

Действие трифлуоперазина в концентрациях 50-200 мкмоль/л проверяли на 10 клетках из 10 .препаратов (8-ЛПаЗ и 2-ППаЗ). При таких концентрациях происходило уменьшение АХ-огвета в среднем на 38,9±8,0% (р<0,001) в 6 нейронах. Уменьшение скорости и глубины угашения наблюдалось в 7 нейронах в среднем на 20,1+0,6%. Углубление привыкания холинорецепторов происходило в одной клетке на 16,2+1,4% и в 2 нейронах трифлуоперазин не влиял на кинетику угашения. Кроме того, данное соединейие увеличивало длительность спонтанного восстановления угашенного ответа с 10 мин до 40-60 мин. О достаточно длительном действии этого вещества говорит тот факт, что даже продолжительное (1,5 - 2 ч) отмывание препарата I приводило только к частичному восстановлению амплитуды АХ~тока и кривой угашения. Следовательно, трифлуоперазин достоверно ослабляет угашение АХ-тока нейронов ППаЗ и ЛПаЗ (р<0,001).

Хлорпромазин действовал на нейроны виноградной улитки также, как и трифяоуперазин, но в меньших концентрациях - 20-60 мкмол/л. АХ-ток уменьшался при этом в среднем на 27,6+10,9% (р<0,05). Ослабление угашения наблюдалось в 4 клетках из 5 в среднем на 19,9+1,6%. Действие этого соединения было длительным, отмывание 1грепарата в течение 1-1,5 ч приводило только к частичному восстановлению кривой угашения. Отсюда можно сделать заключение, что хлорпромазин достоверно (р<0,05) ослабляет угашение АХ-тока.

Подобно предыдущим блокаторам прениламина лактат ( 30-400

мкмоль/л ) уменьшал величину АХ-тока и глубину его угашения. Амплитуда АХ-тока обратимо снижалась в среднем на 17,1+4,8 (р<0,01) в 7 нейронах из 8 исследовавшихся (7-ЛПаЗ и 1-ПДаЗ) за 10-20 мин. Глубина угашения уменьшалась в среднем на 12,0±0,5Ж в 7 нейронах. На нейроне ЛПаЗ произошло усиление привыкания к АХ аппликациям на 5,1±1,9%. Реакция клеток на это соединение была полностью обратимой, время восстановления 30-60 мин. Исходя из полученных результатов, можно сказать, что прениламина лактат достоверно ослаблял угашение АХ-токов нейронов виноградной улитки (р<0,01).

Результаты экспериментов свидетельствуют о влияют всех четырех использованных блокаторов кальмодулина на угашение АХ-реакций нейронов ШаЗ и ЛПаЗ виноградной улитки. Кальмидазолий, трифлоуперазин, хлорпромазин.и прениламина лактат ослабляют скорость и глубину угашения. Однонаправленность действия всех указанных блокаторов на угашение говорит о том, что их эффект на кратковременную пластичность холинорецейторов специфичен и обусловлен ингибированием кальцийсвязывающего бежа в нейроне.

Из этого следует заключение, что кальмодулин принимает участие во внутриклеточной регуляции кратковременной пластичности холинорецепторов нейронов виноградной улитки.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ.

" На основании результатов, полученных при использовании селективных холиномиметиков и холинолитиков, мы установили наличие холинорецепторов мускаривовой и никотиновой природы на нейронах ЛПаЗ и ППаЗ виноградной улитки.

По данным литературы известно, что активация мускариновых холинорецепторов приводит к снижению уровня цАМФ, увеличению ЦГМФ и усилению обмена фосфоинозитидов.

Проведенное исследование показало, что цАМФ не принимает участия в регуляции кратковременной пластичности холинорецепторов, так как ни имидазол, снижающий содержание цАМФ в клетке, имитируя тем самым результат активации мХР,- ни форсколин, повышающий концентрацию этого циклического нуклеотида, не меняли динамику угашения АХ-реакции. Вероятно, что

фосфорилирование белков цАМФ-зависимой протеинкиназой не играет существенной роли в данной экспериментальной модели.

Другой циклический нуклеотид, цГМФ, напротив, участвует в регуляции кратковременной пластичности нейронов. Это продемонстрировано в опытах с использованием активаторов гуанилатциклазы азидом Na+ и нитропруссидом Na+, в которых выявлена отрицательная корреляция между содержанием цГМФ в нейроне и величиной АХ-реакции. В связи с этим мы можем предположить, что повышение содержания цГМФ за счет усиления его синтеза при ритмической активации мХР вызывает прогрессивное снижение АХ-реакции. Стабилизация АХ-ответа на определенном уровне может быть обусловлена выходом на плато концентрации внутриклеточного ЦГМФ. Параллельно с этими процессами идет активации цГМФ-зависимой протеинкиназы и ,фосфорилирование ею белков холинорецепторов и ионных каналов.'

Предполагается, что в нативных условиях активация гуанилатциклазы и образование цГМФ происходит с участием ациклических метаболитов арахидоновой кислоты (Snider et. al., 1984), которая образуется из фосфолипидов при активации фосфолипазы А2, и из 1,2-диацилглицерола, продукта фосфоино-зитидного обмена. Применение арахидоновой кислоты в наших экспериментах вызывало усиление угашения АХ-тока. Для того, чтобы установить за счет каких производных арахидоновой кислоты, циклооксигеназных или липоксигеназных, происходит указанное изменение, применялись ингибиторы этих путей окисления.

Блокатор циклооксигеназы не менял динамику угашения АХ-ответа, что дает основание исключить циклические эйкозаноида из числа возможных эндогенных регуляторов пластичности холинорецепторов. В то же время блокаторы липоксигеназ: нордигидро-гваяретовая кислота, ETYA и EPYA, ослабляли угашение АХ-реакции.

' Исходя из этого, можно полагать, что углубление угашения, вызванное АК, есть следствие как ее прямого действия, так и опосредованного . ее липоксигеназными производными, поскольку создаваемый блокаторами дефгщит • ациклических эйкозаноидов ослабляет их влияние на угашение, в результате чего глубина угашения снижается.

Такое предположение подтверждается обнаруженным влиянием

одного из продуктов липоксигеназного окисления, 15-НЕТЕ, на динамику угашения АХ-реакции.

Учитывая, что цГМФ влияет на угашение АХ-тока в том же направлении, как АК и ее ациклические производные, можно предположить возможность регуляции пластичности холинорецепторов эйкозаноидами, в том числе 15-НЕТЕ, через ЦГМФ путем активации ими гуанилатциклазы.

Взаимодействие АХ с мускариновыми холинорецепторами приводит к усилению обмена фосфоинозитидов и увеличению, таким образом, внутриклеточного содержания Са?+. Происходит также поступление Са2+ в цитоплазму через хемоуправляемые каналы.

Ранее было показано положительное влияние Са2+, вошедшего в клетку через мембрану, и Са , мобилизованного из внутриклеточных депо, на пластичность холинорецепторов нейронов ЛПаЗ и ППаЗ (Пивоваров, Котляр 1990). Учитывая, что , внутриклеточным рецептором Са2+ является кальмодулин, было .интересно проверить его влияние на кратковременную пластичность. Однонаправленное действие всех использованных блокаторов кальмодулина продемонстрировало его участие в - регуляции кратковременной пластичности, которое заключается скорее всего в фосфорилировании белков Са2+/КМ - зависимой протеинкиназой.

Одним из метаболитов фосфоинозитидного обмена является 1,2-диацилглицерол, активатор протеинкиназы С.

Из полученных результатов следует,что ПКС не включена в молекулярные механизмы регуляции кратковременной пластичности холинорецепторов нейронов ППаЗ и ЛПаЗ виноградной улитки, поскольку ни ТФА, активирующий киназу С, ни полимиксин В, ингиби-рунций ее, не оказывают достоверных эффектов на угашение АХ-тока. Иными словами, кратковременная пластичность холинорецепторов развивается без участия белков, фосфорилирувдихся протеинкиназой С.

Подводя итог, можно предположить, что модификация белков, необходимая для развития угашения АХ-реакции в процессе ритмического воздействия медиатора, регулируется цГМФ-зависимой и Са2+/КМ-зависимой протеинкиназами, и не зависит от цАМФ-зависимой протеинкиназы и ПКС.

ВЫВОДЫ

I. Обнаружено два типа холинорецепторов никотиновой и

мускариновой природы на соме нейронов ЛПаЗ и ШаЗ, которые отличаются по своим фармакологическим свойствам от соответствующих типов рецепторов нейронов позвоночных животных.

2.' Активатор 'аденилатциклазн форсколин (20-60 мкмоль/л) и активатор фосфодиэстеразы имидазол (5 млмоль/л) не изменяют динамики угашения реакций нейронов ЛПаЗ, ШаЗ и ППа4 на ионофоретически подводимый АХ. Следовательно, кратковременная пластичность холинорецепторов этих нейронов не зависит от внутриклеточного содержания циклического 3,5-аденозинмонофосфата.

3. Активаторы гуанилатциклазы нитропруссид Na+ и азид Na+ (0,5-1 млмоль/л) усиливают угашение реакций нейронов ЛПаЗ, ППаЗ и ППа4 на АХ. Следовательно, циклический з|5-гуанозинмонофосфат принимает участие в регуляции кратковременной пластичности холинорецепторов исследованных нейронов.

4. Арахидоровая кислота (50-100 мкмоль/л) усиливает угашение реакций нейронов ЛПаЗ и ППаЗ на АХ. Следовательно, она принимает участие в регуляции кратковременной пластичности холинорецепторов исследованных нейронов.

5. Блокатор циклооксигеназного окисления арахидоновой кислоты индометацин (10-50 мкмоль/л) не изменяет динамики угашения АХ-реакции. Блокаторы липоксигеназного окисления арахидоновой кислоты: нордигидрогваяретовая кислота (3-10 мкмоль/л), 5,8,11,14 -эйкозатетраиновая кислота (30-60 мкмоль/л) и 5,8,11,14,17-эйко-запентаиновая кислота (4-50 мкмоль/л) ослабляют угашение АХ-реакции нейронов ЛПаЗ, ППаЗ. 15(~3)-гидрокси-5г,8г,11г,13Е-эй-козатетраеновая кислота, производное арахидоновой кислоты, вызывает два разнонаправленных эффекта на угашение АХ-реакции исследовавшихся нейронов. Коротколатентное действие (10-60 мин) состоит в ослаблении угашения АХ-тока, а длиннолатентное (60-80 мин) - в усилении. Следовательно, ациклические производные арахидоновой кислоты, в том числе l5(-S),-rH5poKCH~5Z,8Z,ilZ,l3E--эйкозотетраеновая кислота, принимают участие в регуляции,' кратковременной пластичности холинорецепторов, а циклические производные арахидоновой кислоты - не участвуют.

6. Активатор и блокатор протеинкиназы С 12-0-тетрадеканоил-форбол-13-ацетат (0,1-1 мкмоль/л) и полимиксин В (100-500 мкмоль/л) не влияют на угашение АХ-реакции нейронов ЛПаЗ и ППаЗ.

Следовательно, протеинкиназа С не участвует в регуляции кратковременной пластичности холинорецепторов.

7. Блокаторы кальмодулина: R 24571 (20-50 мкмоль/л), трифлуоперазин (50-200 мкмоль/л), хлорпромазин (20-60 мкмоль/л) и прениламина лактат (30-400 моль/л) ослабляют угашение АХ-реакции нейронов ЛПаЗ и ППаЗ. Следовательно, кальмодулин принимает участие в кратковременной пластичности холинорецепторов.

8. Циклический 3,5-гуанозинмонофосфат; арахадоновая кислота и ее производные, образующиеся при липоксигеназном окислении, включая 15(-s)-гидрокси-5г,8Z, 11Z, 1ЗЕ-эйкозатетраеновую кислоту; а также внутриклеточный рецептор ионов кальция кальмодулин, принимают участие в регуляции кратковременной пластичности холинорецепторов нейронов. Циклический 3,5-аденозинмонофосфат; протеинкиназа С (внутриклеточный-рецептор 1,2-диацилглицерола) и производные арахидоновой кислоты, образующиеся при ее циклооксигеназном окислении, не вовлечены в регуляцию кратковременной пластичности.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ.

1. Пивоваров A.C., Дроздова Е.И., Котляр Б. И. Влияние активаторов гуанилатциклазы на кратковременную пластичность холинорецепторов идентифицированных нейронов виноградной улитки. // Материалы II Всесоюзной конференции "Простые нервные системы и их значение для теории и практики" - Казань. - Л.:Наука - 1988. -С.230-232.

2. Пивоваров A.C., Дроздова Е.И., Котляр Б. И. Изучение роли цПЙ в кратковременной пластичности холинорецепторов идентифицированных нейронов виноградной улитки. // Тезисы докладов II Всесоюзной конференции по нейронаукам. - Киев. - 1988. - С.57-58.

3. Пивоваров A.C., Дроздова Е.И., Котляр Б. И. Изучение роли циклического 3',5' - аденозиныонофосфата в угашении реакций идентифицированных нейронов виноградной улитки на ацетилхолин. // Биол. науки. - 1988. г *И. - C.54-6I.

4. Пивоваров A.C., .Дроздова Е.И., Котляр Б.И. Изучение роли цАМФ и цПКФ в кратковременной пластичности холинорецепторов идентифицированных нейронов виноградной улитки. // VI Всесоюз, симп. "Роль циклических нуклеотидов и вторичных посредников в регуляции ферментативных реакций". Тезисы докл.- Петрозаводск.- I988.C.I40.

5. Пивоваров А.С., Дроздова Е.И., Котляр Б.И. Вторичные посредники в регуляции пластичности нервной клетей при обучении. // Биол. науки. - 1989. ->63- С.75-101.

6. Пивоваров А.С., Дроздова Е.И., Котляр Б.И. Роль ЦГМФ в угашении реакций идентифицированных нейронов виноградной улитки на ацетилхолин. // Журн. высш. нерв. деят. - 1989. - Т.39. - # 4. -С.728-735.

7. Пивоваров А.С., Дроздова Е.И., Котляр Б.И. Протеинкиназа С не вовлечена в регуляцию кратковременной пластичности холинорецеп-торов нейронов ПпаЗ и ЛпаЗ виноградной улитки. // Биол. науки. -1989 - * 10 - С.51-58.

8. Пивоваров А.С., Дроздова Е.И., Котляр Б.И. Положительная регуляция пластичности холинорецепторов нейрона Са^+ и кальмодулином // Тезисы докладов международного симпозиума "Транспорт ионов и механизмы его регуляции". - Тбилиси, "Мецниереба". - 1989. - С.59.

9. Пивоваров А.С., Дроздова Е.И., Котляр Б.И. Блокаторы кальмодулина ослабляют кратковременную пластичность холинорецепторов нейронов виноградной улитки. // Журн. высш. нерв, деят. - 1990. - т.40. - ЖЗ. - с.535-541.

• 10. Дроздова Е.И., Пивоваров А.С., Котляр Б.И. Активатор и блокатор протеинкиназы С не влияют на кратковременную' пластиность холинорецепторов нейронов ППаЗ и ЛПаЗ виноградной улитки. '// Всесоюз. симп. "Биохимия рецепторных систем". - Таллинн.- 1990. -С.17.

II. Пивоваров А.С., Дроздова Е.И., Котляр Б.И. Регуляция эйкозаноидами пластичности холинорецепторов нейрона. // Всесоюз. симп. "Биохимия рецепторных систем". - Таллинн,- 1990. - С.51.

12. Drozdova E.I., Pivovarov A.S., Vorisova R.S., Myagkova G.I. Diverse effects of 15-hydro[yeicosatetraenoic acid on extinction of acetylcholine- induced inward current in Helix neurons. // Regional meeting ISIN "Simpler nervous systems". -Minsk. - 1991. - p21.

13. Pivovarov A.S., Drozdova E.I., Belosludtsev Yu.Yu., Demin P.M. Eicosapolyynoic acids, inhibitors of lipoxygenases, attenuate extinction of acetylcholine- induced inward current in Helix neurons. // Regional meeting ISIN "Simpler nervous systems". -

г 22 -

Minsk. - 1991. - р73.

14. Пивоваров A.C., Дроздова Е.И., Белослудцев Ю.Ю., Демин П.М., Мягкова -Г.И. Коротко- и длиннолатентные эффекты 15-гидроксиэйкозатетраеновой кислоты на угашение вызванного ацетилхолином входящего тока нейронов виноградной улитки. // Бюлл. эксп. биол. и мед. - 1991. - Ш.

15. Пивоваров A.C., Дроздова Е.И., Заболотский Д.А., Мягкова Г.И. Ингибиторы липоксигеназ, эйкозаполииновые кислоты, ослабляют кратковременную пластичность холинорецепторов нейронов виноградной улитки. // Ж. высш. нерв. деят. - 1991. - Jfö.

16. Пивоваров A.C., Дроздова Е.И., Котяр Б.И. Арахидоновая кислота и ее липоксигеназные производные регулируют кратковременную пластичность холинорецепторов виноградной улитки. // Ж. высш. нерв, деят. - 1991. - *4