Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Влияние ультразвуковых колебаний на замораживание и отогрев клеток костного мозга

ВАК РФ 03.00.22, Криобиология

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Душейко, Алексей Григорьевич

ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

ГЛАВА I. КРИОКОНСЕРВИРОВАНИЕ КЛЕТОК КОСТНОГО МОЗГА ПОД ЗАЩИТОЙ ПЭ0

I.I. Причины криоповреждения миелокариоцитов . II

1.2. Криопротекторное действие ПЭ0

ГЛАВА 2. БИОЛОГИЧЕСКИЕ ЭФФЕКТЫ УЛЬТРАЗВУКОВЫХ И КРИОУЛЬТРАЗВУКОВЫХ ВОЗДЕЙСТВИЙ

2.1. Ультразвуковые воздействия

2.2. Криоультразвуковые воздействия

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

ГЛАВА 3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Объект исследований.;.

3.2. Оценка морфо-функциональных характеристик клеток костного мозга

3.3. Замораживание и деконсервирование образцов.

3.4. Ультразвуковые и криоультразвуковые воздействия.

ГЛАВА 4. ВЛИЯНИЕ УЛЬТРАЗВУКА НА МИЕЛОКАРИОЦИТЫ

4.1. Влияние параметров ультразвуковой обработки и состава среды на сохранность клетов

4.2. Влияние ультразвуковой обработки на ультраструктуру ядерных клеток костного мозга

4.3. Последействие ультразвукового облучения

ГЛАВА 5. ЗАМОРАЖИВАНИЕ МИЕЛОКАРИОЦИТОВ, ПРЕДВАРИТЕЛЬНО ОБРАБОТАННЫХ УЛЬТРАЗВУКОМ

5.1. Влияние продолжительности экспозиции клеток с П30

5.2. Влияние температурных режимов экспозиции и облучения ультразвуком

5.3. Влияние концентрации криопротектора

5.4. Ультраструктурные и цитохимические характеристики щелокариоцитов

ГЛАВА 6. ЗАМОРАЖИВАНИЕ КОСТНОГО МОЗГА В УЛЬТРАЗВУКОВОМ ПОЛЕ

6.1. Влияние ультразвуковых воздействий на морфо-функциональное состояние замораживаемых миелокариоцитов

6.2. Влияние ультразвука на скорость возникновения зародышей льда.

6.3. Влияние ультразвука на линейную скорость кристаллизации

6.4. Влияние ультразвука на перераспределение клеточных элементов в замораживаемой суспензии.

ГЛАВА 7. ВЛИЯНИЕ УЛЬТРАЗВУКА НА МИЕЛОКАРИОЦИТЫ В

ПЕРИОД ДЕКОНСЕРВИРОВАНИЯ КЛЕТОЧНОЙ СУСПЕНЗИИ

7.1. Ультразвуковая обработка в процессе размораживания

7.2. Облучение ультразвуком размороженных клеточных суспензий

Введение Диссертация по биологии, на тему "Влияние ультразвуковых колебаний на замораживание и отогрев клеток костного мозга"

Замораживание и последующий отогрев в большинстве случаев оказывает сильное повреждающее действие на биологические объекты. Степень повреждения их структур определяется в основном такими факторами как величина кристаллов льда [12б] , продолжительность пребывания клеток в гипертонических средах [225] , обезвоживание клеток [238] , внутриклеточная кристаллизация [235] , рекристаллизация [228] , агрегация и денатурация клеточных белков [14].

Под влиянием непосредственного воздействия данных факторов у клеток возникают первичные криоповреждения: изменение формы, объема, нарушение целостности мембраны, изменение конформации макромолекул и др. Первичные криоповреждения могут явиться причиной вторичных повреждений, которые развиваются в клетках в различное время после размораживания.

Важность вопросов, связанных с повышением эффективности существующих и разработкой новых способов криоконсервирования биологического материала, обусловливает необходимость всестороннего изучения возможностей увеличения криорезистентности биологических объектов и изыскания способов дополнительной криозащиты их структур [69,80,109] .

В связи с этим в криобиологии наряду с совершенствованием таких традиционных подходов, как определение рациональных для каждого объекта криозащитных сред и режимов криоконсервирования все чаще изучаются возможности использования физических факторов, способных оказывать на криолабильные структуры биологических систем обратимо модифицирующие воздействия. К таким факторам относится и ультразвук (УЗ) низкой интенсивности. Применение ультразвука в медицинских и биологических исследованиях охватывает

2 —2 диапазон его интенсивностей от единиц мВт-см до тысяч Вт-см , частоты от десятков кГц до сотен МГц, в импульсном и непрерывном режимах с длительностями озвучивания от мс до многих суток, в экспериментах in vlVO ж In vitr-0, при локальной обработке отдельных органов и при озвучивании больших участков организма [130] . Наблюдаемые реакции биологических систем на действие этого фактора при таком разнообразии экспериментальных условий многогранны.

Столь же многогранные отклики биологических систем, по-видимому, можно получить и при комбинированном применении ультразвуковых и низкотемпературных: воздействий. Подтверждением этому могут служить ряд экспериментальных работ, в которых получены при использовании фактически одинаковых по параметрам ультразвуковых воздействия совершенно противоположные по характеру реакции биообъектов: увеличение чувствительности биологических структур к действию низких температур [ 99,121] и повышение их криорезистент-ности [26,37] . Тем не менее для реализации на практике таких криобиологических эффектов ультразвука необходимо иметь четкие представления о.; суммарных реакциях биологических структур на одновременное действие ряда физико-химических факторов, проявляющихся в облучаемых ультразвуком криобиологических системах.

Если реакции биообъектов на раздельные ультразвуковые и низкотемпературные воздействия изучены хорошо на молекулярном, клеточном и тканевом уровнях, то возможности целенаправленного влияния на криоконсервируемые объекты с помощью УЗ-воздействий изучены недостаточно. Эффект увеличения криорезистентности получен на весьма ограниченном наборе биологических объектов: мужских половых клетках [24] и безъядерных клетках крови [37] .

Практически не освещены возможности аналогичного использования ультразвука при криоконсервировании соматических ядерных клеток, хотя большинство из них имеют довольно высокую криолабильность.

Не изучены и механизмы ультразвукового воздействия на криобиологические системы.

Учитывая это, целесообразно исследовать возможности применения УЗ-облучений для оптимизации условий низкотемпературного консервирования такой гетерогенной (с точки зрения морфологии, функции, гистогенеза и криорезистентности) популяции ядерных клеток, как популяция миелокариоцитов.

Это позволит повысить эффективность способов замораживания и отогрева кроветворных клеток, сохранность которых в большинстве случаев не превышает 50-70% [75,92,104,146] и выявить подходы к использованию УЗ-воздействий при криоконсервировании весьма крио-лабильных биологических систем, состоящих из ядерных клеток.

В связи с этим цель настоящей работы - анализ, обобщение и развитие представлений о механизмах комбинированного действия ультразвука и низких температур на клеточные структуры и изуче-. ние возможности, применения УЗ-воздействий для оптимизации условий низкотемпературного консервирования ядерных клеток костного мозга.

В задачи исследования входило:

1. Изучение влияния ультразвуковых облучений, проводимых во время подготовки к замораживанию, замораживания и деконсервиро-вания костного мозга, на структурное состояние миелокариоцитов.

2. Определение оптимальных режимов УЗ-воздействий, необходимых для повышения устойчивости ядерных клеток костного мозпа в процессе 1фиоконсервирования.

3. Исследование механизмов ультразвукового влияния на криобиологические системы.

Анализ литературы свидетельствует о том, что биологические эффекты ультразвука и низких температур определяются множеством факторов, таких как время и интенсивность воздействия, временная и пространственная структура звукового поля, физиологическое состояние объекта, качественный и количественный состав среды, внешние условия и т.п. Ввиду того, что такое число переменных затрудняет анализ их влияния, в данной работе поочередно рассмотрены зависимости эффекта от величины наиболее часто варьируемых в экспериментах параметров ультразвукового воздействия (частота, интенсивность, время облучения) на фоне стандартных манипуляций с клеточными суспензиями, проводимых при 1фиоконсервировании костного мозга под защитой ПЭ0-400.

В связи с тем, что в литературе имеются лишь отрывочные данные о реакциях клеток костного мозга на ультразвуковые воздействия [,187,200-202] , ряд исследований был направлен на выяснение возможных структурных и функциональных изменений, возникающих в миелокариоцитах при варьировании параметров и условий ультразвукового воздействия, и на выбор безопасных доз ультразвуковой обработки.

В результате проведенных исследований впервые получены сведения о влиянии на структурно-функциональные показатели ядерных клеток костного мозга комбинированных воздействия ультразвука и низких температур (при различных их сочетаниях), которые позволили установить факт положительного влияния УЗ-облучений на сохранность миелокариоцитов в процессе криоконсервирования.

Показано, что резистентность ядерных клеток костного мозга к УЗ-воздействиям коррелирует с их криорезистентностью и повышается при обработке клеток ПЭ0-400.

Установлено, что облучение деконсервируемых миелокариоцитов ультразвуком низкой интенсивности снижает проницаемость их мембран для эозина и некоторых ферментов, а также способствует частичной репарации поврежденных клеточных структур.

Выявлено влияние данного физического факторами, защитное действие ПЭ0-400 для криоконсервируемых миелокариоцитов,

Изучено влияние ультразвука на кинетику кристаллизации модельных систем и клеточных суспензий.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Ультразвуковая обработка костного мозга во время экспозиции его с ПЭ0-400 и в процессе замораживания, усиливая защитное действие этого криопротектора на миелокариоциты в первом случае и оказывая влияние на их взаимодействие с растущими кристаллами льда - во втором, повышает сохранность данных клеток при криокон-сервировании.

2. Облучение ультразвуком низкой интенсивности деконсервируе-мых миелокариоцитов повышает барьерные свойства их мембран, способствует частичной репарации поврежденных клеточных структур и оказывает декомпактизирующее действие на клеточные конгломераты, возникающие в процессе криоконсервирования.

3. Устойчивость ядерных клеток костного мозга к УЗ-воздейст-виям находится в прямой зависимости от их 1фиорезистентности и повышается при обработке этих клеток ПЭ0-400.

Выполненные исследования являются частью научной работы Института проблем криобиологии и криомедицины АН УССР по теме "Изучение влияния физических и химических факторов на кинетику некоторых процессов, протекающих в клетках и тканях при криоконсерви-ровании с целью усовершенствования способов замораживания" (номер государственной регистрации 79015698).

В процессе их выполнения разработан новый подход для повышения эффективности криоконсервирования ядерных клеток, основанный на дополнительном использовании ультразвуковых воздействий.

Разработаны оптимальные режимы ультразвуковой обработки миело-кариоцитов в процессе подготовки к замораживанию, во время замораживания и в период деконсервирования, необходимые для повышения устойчивости данного вида клеток к действию низкотемпературных факторов, а также частичной репарации повреждений, возникающих в криоконсервированных клетках.

Установлена связь между криорезистентностью миелокариоцитов и их устойчивостью к ультразвуковым воздействиям, а также показана возможность увеличения данной устойчивости обработкой клеток ПЭ0-400.

Эти данные могут использоваться при разработке новых способов криоконсервирования ядерных клеток, отбора клеточных суспензий с целью криоконсервирования и сонопротекции биологических структур.

Материалы диссертации докладывались и обсуждались на Всесоюзном симпозиуме с международным участием "Взаимодействие ультразвука с биологической средой" (Пущино, 1979), семинаре "Изменение структуры и свойств водных систем под влиянием физико-химических воздействий" (Киев, 1980), Ш Всесоюзной конференции "Ультразвук в биологии и медицине" (Ташкент, 1980), I Украинском съезде гематологов и трансфузиологов (Харьков, 1980), Научно-практической конференции "Эффективность использования современных технических средств в медико-биологических исследованиях" (Харьков, 1980), Всесоюзном симпозиуме с международным участием "Ультразвук в биологии и медицине" (УЕИОМЕД-5, Пущино,1981), I Всесоюзном биофизическом съезде (Москва, 1982), Всесоюзной конференции "Взаимодействие ультразвука с биологической средой" (Ереван, 1983), П Всесоюзной конференции по теоретическим и прикладным вопросам криобиологии (Харьков, 1984).

Основные положения, результаты и выводы диссертации опубликованы в открытой печати в 15 научных работах.

Полученные результаты легли в основу изобретений:

1. А.с. 822799 (СССР), "Способ консервирования клеточных суспензий" ;

2. А.с. 997649 (СССР), "Способ размораживания биологических объектов";

3. А.с. 9578II (СССР), "Способ деконсервирования клеточных суспензий";

4. А.с. III0430 (СССР), "Устройство для замораживания и отогрева биологических объектов".

Работа состоит из обзора литературы, описания материалов и методов, четырех глав собственных исследований с обсуждением результатов, заключения, выводов, раздела "Внедрение в практику", списка цитированной литературы.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение Диссертация по теме "Криобиология", Душейко, Алексей Григорьевич

ВЫВОДЫ

1. Обработка клеточных суспензий костного мозга ультразвуком терапевтического диапазона частот перед гипотермическим хранением и на основных этапах криоконсервирования с ПЭ0-400 улучшает качество деконсервируемых миелокариоцитов. По силе положительного влияния УЗ-воздействия располагаются в следующей убывающей последовательности: на этапе размораживания, после деконсервирования, перед хранением при +4°С, во время экспозиции клеток с криопротек-тором и в процессе замораживания.

2. Ультразвуковые колебания с частотой 880 кГц, применяемые для обработки костного мозга перед гипотермическим хранением и в процессе криоконсервирования, повышают сохранность миелокариоцитов значительнее, чем УЗ-колебания с частотой 2640 кГц.

3. Оптимальные УЗ-воздействия с частотой 880 кГц, применяемые на основных этапах криоконсервирования миелокариоцитов под защитой ПЭ0-400 и максимально повышающие эффективность данного проо цесса, характеризуются следующими параметрами: 0,75 Дж-м в течение 7-10 мин - во время экспозиции клеток с нриопротектором, о

0,4 Дж«м в течение 8 мин - в процессе кристаллизации суспензии,

Я —Я

2 Дж-м в течение 3 мин - на этапе размораживания и 0,25 Дж-м в течение 3 мин - после деконсервирования.

4. Ультразвуковые воздействия, проводимые во время размораживания и после деконсервирования миелокариоцитов, повышают барьерные свойства их мембран, способствуют частичной репарации поврежденных клеточных структур и оказывают декомпактизирующее действие на клеточные конгломераты, возникающие в процессе криоконсервирования.

5. Обработка костного мозга во время экспозиции его с ПЭ0-400 усиливает защитное действие этого криопротектора на миелокариоциты.

6. Положительное влияние ультразвука, наблюдающееся во время замораживания миелокариоцитов в УЗ-полях с небольшой плотностью энергии, реализуется за счет микропотоков, которые возникают вокруг клеток и способствуют их вытеснению растущими кристаллами льда в межкристаллические пространства. Одновременно с этим в о полях с плотностью энергии свыше I Дж. м ультразвук увеличивает количество возникающих зародышей льда и линейную скорость кристаллизации.

7. Устойчивость ядерных клеток костного мозга к УЗ-воздейст-виям находится в прямой зависимости от их криорезистентности и повышается при обработке этих клеток ПЭ0-400.

ВНЕДРЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ В ПРАКТИКУ

1. Разработанные на основании результатов исследований способы замораживания и отогрева клеточных суспензий с применением дополнительной ультразвуковой обработки используются в работе Харьковской областной станции переливания крови (справка об использовании от 2 марта 1984 года).

2. По результатам диссертационной работы опубликовано в открытой печати 15 работ, в том числе 4 авторских свидетельства.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Анализ имеющихся в литературе данных по реакциям клеток на комбинированные воздействия низких температур и ультразвуковых колебаний показал, что биологические структуры способны специфически реагировать на действие каждого взятого в отдельности фактора и результирующая реакция клетки при одновременном действии нескольких факторов зависит от того, суммируется ли эффект их действия или возникает компенсирующий эффект.

Экспериментальный материал, полученный при выполнении данной работы и имеющийся в ряде литературных источников [75,92,138,187, 200-202J , свидетельствует о том, что клетки костного мозга являются довольно чувствительным объектом к раздельным воздействиям этих двух физических факторов. Этим, по-видимому, и объясняется тот факт, что ни применение в процессе криоконсервирования данных клеток такого эффективного криопротектора как ПЭ0-400, ни использование оптимальных программ замораживания и отогрева не исключают возникновения криоповреждений в значительной их части (до 30$).

К наиболее характерным криоповреждениям ультраструктуры миелокариоцитов можно отнести изменения, затрагивающие цитоплазму клеток: локальные или общие ее просветления, набухание митохондрий и эндоплазматической сети. Ядра большинства клеток имеют плотноконденсированный хроматин. У ряда клеток расширяется пери-нуклеарное пространство. Цитоплазматические мембраны некоторых из этих клеток имеют локальные вздутия.

Морфологические изменения приводят к сдвигу функционального статуса криоконсервированных миелокариоцитов. Так, к примеру, в процессе замораживания - оттаивания ингибируется электроннотранспортная цепь ядерных клеток костного мозга, а также увели-:; чивается проницаемость их цитоплазматических и внутриклеточных мембран.

С другой стороны, облучение гемопоэтических клеток, суспендированных в консервирующем растворе ЦОЛИПК-З,ьне вызывает видимых нарушений их структур только в тех случаях, когда плотность энергии ультразвукового поля в суспензии и время его воздействия на

Я 9 клетки не превышают соответственно 0,25 Дж.м и 6'10 с (10 мин).

Среди всего спектра клеток, содержащихся в суспензии костного мозга доноров, наибольшей чувствительностью к ультразвуковым воздействиям характеризуются мегакариоциты, промиелоциты и миелоци-ты. Низкая резистентность этих клеток к ультразвуку связана, по-видимому, с относительно большими их размерами. Наиболее устойчивыми к ультразвуку являются ретикулярные клетки. Из клеток белого ряда высокую устойчивость к данному фактору имеют палочко-сегментоядерные нейтрофилы. Сравнительный анализ устойчивости всего видового состава клеток костного мозга доноров к повреждающему действию ультразвуковых полей частоты 880 кГц с плотностью о энергии 2,0 ДЖ'М и криорезистентности соответствующих клеток показывает наличие корреляции между этими параметрами.

Результаты исследований состояния ультраструктуры миелокариоцитов, подвергавшихся действию ультразвуковых полей с плотностью энергии 1,75 . 2,25 Дж*м , свидетельствуют о том, что в таких клетках изменяются прежде всего цитоплазма и органеллы, а также образуются на их поверхности везикулы и пузыри. Действие полей о с меньшей плотностью энергии (0,75 . 1,25 Дж«м ) сводится к локальным просветлениям цитоплазмы и отслоением цитоплазматиче-ской мембраны.

Изучение зависимости сохранности миелокариоцитов от дозы воздействия ультразвуковых полей при варьировании времени облучения' ультразвуком и плотности энергии его поля в облучаемом объеме позволило выявить фактически два "временных" вида ультразвуковых повреждений этих клеток.

Эти повреждения, проявление которых можно зафиксировать по морфо-функциональному состоянию клеток уже / спустя 0,3.1 мин после ультразвукового воздействия. Их количество пропорционально плотности энергии поля, что быстрее всего указывает на механическую природу данных изменений. И более отдаленные повреждения, по-видимому, физико-химической природы, интенсивность проявления которых пропорциональна (при постоянной плотности энергии) времени ультразвукового воздействия. Времена облучения, необходимые для того, чтооы на гемопоэтических клетках проявлялись ультразвуковые повреждения первого и второго типов, отличаются более чем на порядок.

Примечателен тот факт, что, несмотря на потерю во время облучения определенной части (по-видимому, более ослабленных клеток), обработка суспензий миелокариоцитов в течение 10 мин ультразвуq ковыми полями со средней плотностью энергии до 1,25 Дж*м (при частоте 880 кГц) и до 3,0 Дж«м~3 (при частоте 2640 кГц) не вызывает увеличения скорости разрушения клеток в процессе гипотерми-ческого хранения их в растворе ЦОЛИПК-З. В течение первых 12 суток хранения наблюдается тенденция противоположного характера. При субнулевой температуре лучше сохраняются ядерные клетки в облученных ультразвуком суспензиях.

С повышением частоты ультразвуковых колебаний резистентность гемопоэтических клеток к их действию возрастает. Резистентность миелокариоцитов к ультразвуку заметно повышается также в присутствии криопротектора ПЭ0-400. В популяции клеток, содержащей 15$ этого вещества, не обнаруживаются клетки с сильной везикуляцией $щтоплазматической мембраны даже в полях частоты 880 кГц с плото ностью энергии 1,75 . 2,25 Дж'М . Клетки, подверженные в аналогичной ситуации действию полей с плотностью энергии 0,75 . о

1,25 Дж«м , практически не отличаются от клеток исходного состояния.

Результаты опытов с облучением ультразвуком миелокариоцитов, отмытых от данного 1фиопротектора, свидетельствуют о том, что эффект сонопротекции ПЭ0-400 связан не только с повышением порога кавитации облучаемой среды, за счет увеличения ее вязкости, но обусловлен и эффектом взаимодействия данного вещества с клетками.

Использование на основных этапах криоконсервирования гемопо-этических клеток с ДЭ0-400 обработки клеточных суспензий ультразвуковыми полями терапевтического диапазона частот, улучшает качество деконсервируемых миелокариоцитов. Зависимость показателя сохранности ядерных клеток от плотности энергии ультразвукового поля имеет колоколообразный характер. С повышением плотности энергии его величина, постепенно возрастая, достигает максимального значения и затем снижается. Этот процесс растянут в довольо но широком диапазоне плотностей (0 . 2,0 Дж-м для 880 кГц), если ультразвуковой обработке подвергаются неповрежденные (на-тивные) клетки.

С проявлением в облучаемой ультразвуком системе дополнительных повреждающих факторов (как в случае кристаллизации клеточной суспензии в ультразвуковом поле) его выраженность наблюдается о уже в более узком диапазоне плотностей энергии: 0.1,0 Дж-м . Еще больше сужается диапазон плотностей энергии (0 . 0,5 Дж«м~3) ультразвуковых полей, оказывающих положительное влияние, если ультразвуковому воздействию подвергаются клетки после криовоздей-ствия, т.е. клетки, имеющие ряд криоповреждений.

Такое сужение усиливает колокообразный характер зависимости показателя сохранности миелокариоцитов от плотности энергии ультразвукового поля. В последнем случае эта зависимость фактически приближается к параболической.

Облучение криоконсервируемых суспензий костного мозга ультразвуком с частотой 880 кГц оказывает на морфо-функциональное состояние миелокариоцитов более существенное влияние, чем с частотой 2640 Кгц. К тому же эффект положительного влияния в случае использования более высокочастотных колебаний растянут в значительно большем диапазоне плотностей энергии.

По силе положительного влияния, оказываемого на криоконсерви-руемые гемопоэтические клетки, ультразвуковые воздействия располагаются в следующем убывающем порядке: на этапе всего отогрева, в период экспозиции клеток с криопротектором, после деконсерва-ции и в процессе замораживания. Так, к примеру, размораживание образцов костного мозга доноров в водяной бане (+40°С), облучаемой ультразвуком частоты 880 кГц, повышало сохранность миелокариоцитов на 20%. Максимальное превышение показателя сохранности ядерных клеток в образцах, облученных ультразвуком, в период экспозиции их с ГО0-400 и после размораживания над уровнем контрольных образцов, составляло соответственно 17% и 13%. Между образцами, закристаллизовавшимися в ультразвуковом поле и вне поля, аналогичное различие составляло 12%. При этом оптимальные, с точки зрения повышения качества 1фиоконсервируемых миелокариоцитов, плотности энергии ультразвукового поля данной частоты для всех четырех случаев соответственно имели следующие значения: 1,8; 0,75; 0,25 и 0,4 Дж-м~3.

Троекратное увеличение частоты воздействующего поля повышает примерно во столько же раз в каждом конкретном случае, значения оптимальной плотности энергии ультразвука и несколько снижает ( на 3 . Ъ%) величину самого эффекта.

Следует отметить, что если для свежезаготовленного донорского костного мозга повышение показателя сохранности миелокариоцитов при использовании ультразвуковых воздействий во время его крио-консервирования происходит фактически только за счет увеличения их количества в единице объема деконсервируемых суспензий, то для костного мозга 1фыс,1фиорезистентность клеток которого несколько ниже донорских - увеличение этого показателя обусловливается двумя параметрами (количеством клеток и их эозиновым показателем) .

Количественная оценка активностей ЦХО и А1Ф-азы в деконсервируемых миелокариоцитах свидетельствует о том, что ультразвуковая обработка клеточных суспензий в процессе экспозиции с ПЭ0-400 и после их деконсервирования снижает активность первого фермента и увеличивает активность второго. По этим параметрам предпочти-ние можно отдать облучению суспензии в процессе отогрева и после деконсервации, которое восстанавливает почти до исходного уровня активность АТФ-азы и увеличивает в 1,7 раза активность ЦХО.

Так как доказательств возможности непосредственного активирования АТФ-азы и ЦХО при замораживании - оттаивании до сих пор не получено, степень их активностей быстрее всего коррелирует с доступом соответствующих субстратов и свидетельствует о повреждении мембран,на которых они локализованы.

Следует полагать, что возникающие при охлаждении изменения в мембранных структурах проявляются в процессе отогрева, когда после таяния 1фисталлов льда возникают осмотические потоки через дефектные участки мембран. Поскольку эозиновый показатель и активность АЗФ-азы отражают состояние цитоплазматической мембр;аны, а активность ЦХО - мембран митохондрий, полученные данные позволяют сделать заключение о возможности частичного предотвращения возникновения криоповреждений и репарации криоповрежденных структур в наружных и внутриклеточных мембранах миелокариоцитов воздействием ультразвуковых полей с небольшой плотностью энергии.

Варьирование параметров и условий облучения клеточных суспензий ультразвуком на фоне реализации основных этапов их криоконсервирования позволило выявить ведущие механизмы положительного влияния ультразвука на такую криобиологическую систему как суспензия миелокариоцитов.

Облучение ультразвуком клеточных суспензий костного мозга в период экспозиции их с ПЭ0-400 улучшает взаимодействие миелокариоцитов с криопротектором, усиливает его защитное действие.

Положительное влияние ультразвуковых воздействий на миелока-риоциты в процессе их замораживания быстрее всего реализуется за счет микропотоков, возникающих вокруг клеток и способствующих улучшению взаимодействия клеток с растущими кристаллами льда. Влияние ультразвука на скорость зародышеобразования и линейную скорость кристаллизации проявляется в полях с плотностью энергии о свыше 1,0 Дж«м ив области больших переохлаждений.

Воздействие ультразвуковых полей на миелокариоциты во время отогрева и после деконсервирования повышает барьерные функции их мембран, способствует частичной репарации поврежденных клеточных структур и оказывает декомпактизирующее действие на клеточные конгломераты, возникающие в процессе криоконсервирования.

Так как каждый этап криоконсервирования характеризуется своими физико-химическими процессами, играющими на данном этапе ведущую роль, эффект облучения 1фиобиологичеокой системы ультразвуком определяется направленностью и силой влияния на эти процессы сопутствующих распространению ультразвуковой волны факторов: механического, теплового и физико-химического.

Действие механического фактора на клетках проявляется, прежде всего, в повышении или в снижении (в зависимости от параметров и условий ультразвукового воздействия) барьерных функций их мембран для молекул воды, ферментов, 1фиопротекторов и других веществ. Возникающие возле этих структур микропотоки интенсифицируют процессы тепло-массообмена, а также оказывают на клеточные органеллы микромассирующее действие. Первое способствует 1фиосоп-ротивляемости клеток, второе - репарации моленулярно-структурных нарушений. Кроме того, данный фактор интенсифицирует процесс кристаллизации, снижая зернистость кристаллов льда и оказывает на клетки ориентирующее действие, способствуя им занять в межкристаллических каналах более выгодные положения.

Локальный нагрев мембран за счет преобразования акустической энергии в тепловую при определенных плотностях энергии ультразвука частично может снимать напряжения в их структурах, появление которых обусловлено осмотическими градиентами.

Физико-химический фактор ультразвука также способствует ( в определенных ситуациях ) повышению криорезистентности клеток, снижая интенсивность их метаболических процессов.

В зависимости от того на каком этапе криоконсервирования используется ультразвук, положительное его влияние на криобиологическую систеа/jy реализуется за счет тех или иных механизмов.

Полученные в данной работе видовые различия в величине положительного влияния ультразвука на криоконсервируемые гемопоэти-ческие клетки, а также результаты облучения этих клеток в уеловиях повышающих их криолабильно сть свидетельствуют о перспективности применения ультразвуковых воздействий при криоконсервирова-нии биологических объектов, имеющих низкую криорезистентность.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Душейко, Алексей Григорьевич, Харьков

1. Авцын А.П., Шахламов В.А. Ультраструктурные основы патологии клетки. - М.: Медицина, 1979. - 316 с.

2. Акопян В.Б., Сарвазян А.П. Исследование механизмов действия ультразвука на биологические среды и объекты. Акустический журнал, 1979, 25, В 3, с.462-463.

3. Акопян В.Б. Распределение интенсивностей в поле медицинского излучателя ультразвука. В кн.: Проблемы молекулярной биологии и патологии. - М.: МСХ СССР, 1979, с.60-62.

4. Акопян В.Б. Пороги биологического действия ультразвука по электрофизиологическим характеристикам клеточных мембран.

5. В кн.: Взаимодействие ультразвука с биологической средой: Тезисы докл. Всесоюз.симпоз. Пущино, 1979, с.22-26.

6. Акопян В.Б. Действие ультразвука на клеточном уровне. В кн.: Ультразвук в биологии и медицине: Тез.докл.Всесоюз.симпоз. Пущино, 1981, с.65-66.

7. Акопян В.Б. Закономерности биологического действия ультразвука низких интенсивностей: Автореф.дис. . д-ра биол.наук.-М., 1982. 32 с.

8. Алексеева Л.П. Влияние этапов замораживания на сохранность родоначальных клеток костного мозга. В кн.: Матер.Всесоюз. симпозиума по вопр.косер.культив. и типиров.костного мозга.-М., 1971, с.13-15.

9. Антонов С.Ф., Лебедев В.Ф., Хасилев В.Я., Шемякин Ю.А. А.с. 618096 (СССР). Способ замораживания пищевых продуктов. -Опубл.в Б.И., 1979, J& 29.

10. Бейли Н.Т.Дж. Статистические методы в биологии. М.: Мир, 1963. - 271 с.

11. Белева-Стайкова Р., Шисанец М., Джермакян А. Влияние ультразвука на звенья биосинтеза порфинов.1.Изменение уровня црото-коптро- и уропорфиринов после однократного воздействия ультразвука. Биофизика, 1978, 23, 2, с.197-200.

12. Белоус A.M., Луговой В.И., Гулевский А.К. Актуальные проблемы современной криобиологии. Криобиология и криомедицина, 1975, в.1, с.8-15.

13. Белоус A.M., Бондаренко Т.П., Бондаренко В.А. Молекулярные механизмы криоповреждения мембранных структур. Криобиология и криомедицина, 1979, в.5, с.3-13.

14. Белоус A.M., Бондаренко В.А. Структурные изменения биологических мембран при охлаждении. Киев: Наук.думка, 1982. -256 с.

15. Берстон М. Гистохимия ферментов. М.: Мир, 1965. - 349 с.

16. Бронштейн В.Л. Физико-математический анализ повреждения клеток при замораживании: Автореф.дис. . канд.физико-матема-тич.наук. М., 1978. - 17 с.

17. Буторин Г.Т., Скрипков В.П. Кристаллизация переохлажденной воды. Кристаллография, 1972, 17, № 2, с.349-384.

18. БуцВ.А., Измайлова А.Н., Сафронов Б.Г., Скибенко К.П., Дудаева А.А. Влияние ультразвуковых полей на рост опухолевых клеток аденокарциономы Эрлиха. Сборник научн.трудов Моек, вет.акад., 1974, 78, с.51-54.

19. Быховский А.И. 0 механизмах роста кристаллов бетола из расплава. В кн.: Кристаллизация и фазовые переходы /Под ред. акад.Н.Н.Сироты. - Минск: изд-во АН БССР, 1962, с.79-82.

20. Вишневский В.И. Электрометрия биофизических процессов в сперме быков-производителей при замораживании: Автореф.дис. . канд.биол.наук. Харьков, 1970. - 30 с.

21. Вишневский В.И., Марющенко А.В. Стимуляция переживаемости спермы быков ультразвуковыми колебаниями. В кн.: Физико-химические основы действия физических факторов на живой организм и его антиокислительные системы. - М., 1974, с.54-57.

22. Вишневский В.И., Мусульбас М.С. Проникновение меченого глицерина 1-е14 в спермии быков под действием ультразвука. -Научно-технический бюллетень НИИЖ Лесостепи и Полесья УССР.-Харьков, 1976, В 17, с.68-70.

23. Вишневский В.И., Марющенко А.В. А.с. 494163 (СССР). Способ консервирования биологических жидкостей. Опубл. в Б.И., 1975, № 45.

24. Вишневский В.И., Марющенко А.В. Влияние ультразвуковых колебаний на кристаллизацию спермы быков-производителей. Криобиология и криомедицина, 1975, в.1, с.48-51.

25. Вишневский В.И. Применение ультразвуковых колебаний при замораживании. В кн.: Совершенствование процессов машин и аппаратов холодильной и криогенной техники и кондиционирования воздуха. Ташкент, 1977, с.

26. Вишневский В.И., Гордиенко О.И. Измеритель акустической мощности ультразвука. В кн.: Вопросы криоконсервирования биологических объектов. - Киев: Наук.думка, 1978, с.25-28.

27. Вишневский В.И., Гордиенко О.И. Влияние ультразвуковых колебаний на пассивную проницаемость мембраны эритроцитов к ионам калия. В кн.: Ультразвук в биологии и медицине. Пущино: АН СССР, 1981, с.73-75.

28. Вишневский В.И., Скорняков Б.А. Низкотемпературное консервирование спермы сельскохозяйственных животных. В кн.: Актуальные проблемы криобиологии. Киев: Наук.думка, 1981,0,248280.

29. Владимиров Ю.А., Добрецов Г.Е. Флуоресцентные зонды в исследовании биологических мембран. М.: Наука, 1980. - 320 с.

30. Гавашели Т.В., Акопян В.Б. Оценка состояния рыбы при ртутном отравлении по скорости ультразвукового гемолиза. В кн.: Ультразвук в биологии и медицине: Тез.докл.Всесоюз.симпоз. УБИОЩЦ-У, Пущино, 1981, с.29.

31. Гаврилов Л.Р., Календо Г.С., Рябухин В.В. и др. Ультразвук как средство усиления биологического действия ионизирующего излучения. В кн.: Т^уды УШ Все союз, акуст. конференции. Тез. докл., секция Ц, М., 1973, с.165-168.

32. Гаврилов Л.Р., Календо Г.С., Рябухин В.В. и др. Ультразвук как средство усиления действия гамма-облучения на злокачественные опухоли. Акуст.журнал, 1975, 21, £ 2, с.187-191.

33. Гаврилов Л.Р. Некоторые биологические эффекты ультразвука и их механизмы. В кн.: Взаимодействие ультразвука с биологической средой: Тез.докл.Всесоюз.симпоз.Пущино, 1979, с.3-6.

34. Гордиенко О.И., Вишневский В.И. Влияние ультразвука на пассивную проницаемость мембран эритроцитов для ионов калия. -В кн.: Ультразвук в физиологии и медицине: Тез.докл.Всесоюз. конференции. Ташкент, 1980, с.198-199.

35. Гордиенко О.И. Барьерно-транспортная функция мембран эритроцитов при комбинированном воздействии низких температур и ультразвуковых колебаний: Автореф.дис. . канд. биол. наук. -Харьков, 1983. 23 с.

36. Горский Ф.К. Влияние различных физических факторов на кристаллизационные параметры вещества. В кн.: Сборник научн. работ Минского медицинского института. 1955, 15, с.51-57.

37. Граменицкий Е.М. Прижизненная окраска клеток и тканей. Л.: Медгиз, 1963. - 161 с.

38. Данилов В.И. Кристаллизация органических веществ в ультразвуковом поле. В кн.: Строение и кристаллизация жидкости. Киев: Наук.думка, 1956, с.284-292.

39. Даценко Б.М., Булатова Р.Ф., Пушкарь H.G. и др. К вопросу о механизме защитного действия ПЭО на клетки костного мозга при замораживании до -196°С. Пробл.гематол. и перелив.крови, 1970, II, с.32-37.

40. Дворкин Г.А. Влияние ультразвуковых волн на физико-химические и ферментативные свойства поверхностных слоев эритроцитов. В кн.: Вопросы биофизики, биохимии и патологии эритроцитов. Красноярск: СО АН СССР, I960, с.35-36.

41. Добрецов Г.Е., Бондаренко В.А., Б1лоус A.M. Вплив кр1опро-тектор1в на властивост1 розчинника I фосфол1п1дного б1шарув водних суспенз1ях мембран. ДАН УССР, 1978, № I, с.58-60.

42. Жук Е.Ф., Файтбельгер-Бланк В.Р. Влияние ультразвуковых колебаний на клетки и субклеточные структуры. Вопр.курортологии, физиотерапии и лечебной физкультуры, 1972, № 3, с.198-201.

43. Журавлев А.И., Акопян В.Б. Ультразвуковое свечение. М.: Наука, 1977. - 135 с.

44. Зинченко В.Д., Манк Б.В., Моисеев В.А., Овчаренко Ф.Д. Исследование межмолекулярных взаимодействий в системе вода по-лиэтиленгликоль. - Коллоидный журнал, 1976, 38, № I, с.44-50.

45. Иванов Н.Н., Ли Сын Хи, Логвинов Г.П., Новиков Б.К. Размораживание пищевых продуктов в электромагнитном поле СВЧ с использованием ультразвука. Электронная обраб.материал.,1975, № 6, с.64-66.

46. Илюхин В.В., ЦюпаВ.И., Титов Е.И., Ермаков Ю.П. А.с.395060 (СССР). Способ замораживания пищевых продуктов и биопрепаратов. Опубл.в Б.И., 1973, J& 35.

47. Иоффе А.Л. Некоторые вопросы консервирования костного мозга и его клинического применения: Автореф.дисс. . канд.мед. наук. Ташкент, 1973. 21 с.

48. Иткин Ю.А. Исследование некоторых физических процессов, происходящих при замораживании костного мозга: Автореф.дисс. . канд.биол.наук. Харьков, 1972. - 25 с.

49. Иткин Ю.А. Влияние скоростей охлаждения на сохранность кле/ ток костного мозга. В кн.: Трансплантация органов и тканей: Материалы респ.конф., Минск, 1974, с.290-292.

50. Иткин Ю.А. Изучение внеклеточной и внутриклеточной кристаллизации в процессе низкотемпературной консервации биологических объектов. В кн.: Трансплантация органов и тканей. Горький, 1974, с.290-292.

51. Иткин Ю.А. Исследование некоторых физико-химических процессов при низкотемпературном консервировании биологических объектов. В кн.: Актуальные вопросы криобиологии и 1фио-медицины. Киев: Наук.думка, 1974, с.18-20.

52. Иткин Ю.А., Бронштейн В.Л., Розанов Л.Ф. Изучение влияния структуры льда на процесс обезвоживания и внутриклеточную кристаллизацию при замораживании клеточной суспензии. Криобиология и криомедицина, 1977, вып.З, с.35-41.

53. Календо Г.С., Савинов А.Г., Успенская О.Е. и др. Влияние ультразвука малой интенсивности на реакцию облученных клеток Не . В кн.: Ультразвук в биологии и медицине: Тез. докл. Всесоюз. симпоз. УБИОМВД-У. Пущино, 1981, с.81-82.

54. Карась А.Ф. Влияние низкотемпературного и криоультразвуково-го воздействия на состояние мембранных структур клеток. В кн.: Тез.сообщ.1 Всесоюз.биофиз.съезда. Москва, 1982, 2,с.330.

55. Кацнельсон Р.С., Хенок М.А. Влияние ультразвука на дрожжи^ -ДАН СССР, 1951, 76, I, с.133-135.

56. Ковалева В.М., Шарый Н.И., Поздняков В.И. Защитное действие версена при ультразвуковом облучении культур клеток человека. В кн.: Некоторые актуальные вопросы биологии и медицины. - М., 1968, с.172-174.

57. Комолова Г.С. Реакции дрожжевых клеток на ультразвуковое воздействие. В кн.: 0 химическом и биологическом действии ультразвука. Красноярск: изд-во Сиб.отд-ния АН СССР, 1962,с.84-166.

58. Комолова Г.С., Левинсон М.С. К вопросу о механизме действия ультразвука на мшфобную клетку. В кн.: Вопросы биофизики и механизма действия ионизирующей радиации (Укр.респ.общество рентгенологов и радиологов), Киев, 1964, с.139-142.

59. Консервация клеток лекоконцентрата периферической крови человека при низких температурах (-196°С) с применением 10$ концентрации полиэтиленоксида М.в.400: Методические рекомендации. Харьков, 1979. 6 с.

60. Кортнев А.В., Макарова Т.В. Исследование влияния ультразвука на диффузионную проницаемость мембран животного происхождения. В сб.: Акустика и ультразвуковая техника. Киев: Тех-н1ка, 1968, в 3, с.27-29.

61. Кортнев А.В., Макарова Т.В., Серденко В.В. Физические основы переноса вещества через пористую перегородку в ультразвуковом поле. В сб.: Акустика и ультразвуковая техника, Киев: Техн1ка, 1975, с.3-9.

62. Кортнев А.В., Макарова Т.В., Серденко В.В. Воздействие ультразвука на диффузию органических веществ через пористую перегородку. В сб.: Акустика и ультразвуковая техника. Респ. межвед.научн.-техн.сборник. Вып.II. Киев: Техн1ка, 1976,с.24-26.

63. Кравченко Л.П., Луговой В.И. Влияние низких температур и криопротекторов на стабильность лизосомальных мембран. В кн.: Механизмы криоповреждения и криозащиты биологических структур. Киев: Наук.думка, 1977, с.21-22.

64. Криоконсервирование клеточных суспензий /Цуцаева А.А., Агра-ненко В.А., Федорова Л.И. и др. Под общ.ред.Цуцаевой А.А. -Киев: Наук.думка, 1983. 240 с.

65. Крупник В.Д., Мысик С.В., Ткаченко В.Н., Товстяк В.в. Исследование влияния ультразвука на мембраны клеток. В кн.: Взаимодействие ультразвука с биологической средой: Тез,докл. Всесоюз.конф. (Ереван, 1-4 июня, 1983), Москва, 1983, с.43.

66. Кузнецов А.Н. Метод спинового зонда. М.: Наука, 1976.- с.

67. Кулешова Л.Г., Моисеев В.А., Иткин Ю.А. Кристаллизация водных растворов некоторых криопротекторов. Криобиология и криомедицина, 1976, в.2, с.27-31.

68. Кулешова Л.Г. Кинетика льдообразования в живых клетках и модельных системах: Автореф.дисс. . канд.биол.наук. Харьков, 1983. - 24 с.

69. Лаврик С.С. Консервирование костного мозга поливиншпшрроли-доном путем замораживания в жидком азоте. Пробл.гематол.и перелив.крови, 1966, 2, с.50-64.

70. Лаврик С.С. Консервирование костного мозга. Киев: Здоров*я, 1975. - 127 с.

71. Леви А., Сикевиц Ф. Структура и функции клетки. М.: Мир, 1971. - 583 с.

72. Лобынцева Г.С., Щербак Г.М., Полякова А.И. Низкотемпературная консервация ядросодержащих клеток крови под защитой ПЭО различного молекулярного веса. В кн.: Актуальные вопросы криобиологии и криомедицины. Киев: Наук.думка, 1974, с. 6970.

73. Лобынцева Г.С., Вишневский В.И., Марценюк В.Ф., Гордиенко О.И. Изучение влияния ультразвука на эритроциты с применением математических методов планирования эксперимента. Криобиология и криомедицина, 1978, вып.4, с.57-58.

74. Лозина-Лозинский Л.К. Мультифакторная теория криоповреждений. Криобиология и криомедицина, 1980, вып.7, с.3-6.

75. Луговой В.И., Кравченко Л.П. Стаб1льн1сть л1зосомальних мембран при р1зних режимах заморожування. Укр.б1ох1м.журнал, 1976, 48, В 4, с.430-432.

76. Маракуева И.В., Маслов К.И., Трепаков В.В. Влияние ультразвука на яйцеклетки и ранний эмбриогенез морского ежа. В кн.: Взаимодействие ультразвука с биологической средой: Тез.докл. Всесоюз.конф. (Ереван, 1-4 июня 1983), Москва, 1983, с.31.

77. Маргулис М.А., Акопян В.Б. Экспериментальное исследование зависимости скорости звукохимических реакций и потока соно-люминесценции от интенсивности ультразвука. Ж.физ.химии, 1973, 52, J& 3, с.601-605.

78. Маркова 0.П., Обозная Э.И., Капрелянц А.С., Строна В.И. Срав^ нительное цитологическое, цитохимическое и электронно-микроскопическое изучение клеток костного мозга, замороженных под защитой ПЭ0-400. Криобиология и криомедицина, 1979, вып.5, с.36-41.

79. Медведев П.М., Русанович Т.И. К исследованию холо до защитного действия ПЭ0-400 на клетки костного мозга трупов. В кн.: Трансплантация органов и тканей: Материалы У1 Всесоюз.конф. по пересадке органов и тканей. Рига, 1972, с.505-506.

80. Медведев П.М., Русанович Т.И. Процессы льдообразования и режимы охлаждения суспензии клеток крови и костного мозга.

81. В кн.: Актуальные вопросы консервирования и трансплантации костного мозга и крови. Харьков: АН УССР, 1972, с.11-25.

82. Миронов М.А. О роли сил Бьеркнесса при акустической коагуляции аэрозолей. -В кн.: Тезисы докладов IX Всесоюз. акустической конференции, секция "М". М., 1977,C.I3I 134.

83. Миронов М.А. Рост и растворение свободных пузырьков в звуковом поле. В кн.: Взаимодействие ультразвука с биологической средой: Тез.докл.Всесоюз.конф. (Ереван, 1-4 июня 1983),1. Москва, 1983, с.32.

84. Михайлов В.Г. Консервирование костного мозга (при положительных и низких температурах) и применение его в клинике: Авто-реф.дисс. . д-ра мед.наук.- Ташкент, 1969.

85. Насонов Д.Н., Александров В.Л. Реакции живого вещества на внешние воздействия. Мл.-Л.: АН СССР, 1942.

86. Ниборг В. Акустические течения. В кн.: Физическая акустика /Под ред.У.М.Мэзона. - М.: Мир, 1969, т.2, с.302-377.

87. Низкотемпературное консервирование костного мозга. /Н.С.Пушкарь, A.M.Белоус, А.А.Цуцаева и др. Киев: Наук.думка, 1976.287 с.

88. Обозная Э.И. Изучение ряда окислительно-восстановительных ферментов и дыхания ядросодержащих клеток костного мозга и 1фови до и после различных сроков низкотемпературной консервации (-196°С): Автореф.дис. . канд.биол.наук. Харьков, 1973. - 19 с.

89. Останкова Л.В., Шенберг М.Г., Пушкарь Н.С. Определение жизнеспособности консервированного костного мозга при трансплантации онкологическим больным. Ортопедия, травматология и протезирования, 1971, 5, с.43-47.

90. Останкова Л.В. Оценка жизнеспособности костного мозга при консервировании (-196°С) под защитой полиэтиленоксида: Ав-тореф. дис. . канд.биол.наук. Харьков, 1972, - 19 с.

91. Осташко Ф.И. Глубокое замораживание и длительное хранение спермы производителей. Изд.2-е. Киев, Урожай, 1978. -256 с.

92. Панков Е.Я., Маркова О.П., Строна В.И. Влияние низких температур на аденозинтрифосфатную систему клеток костного мозга крыс. Криобиология и криомедицина, 1976, вып.2, с.56-57.

93. Панков Е.Я., Обозная Э.И., Строна В.И. Механизмы цитохимических изменений в клетках костного мозга и крови при низкотемпературном консервировании. В кн.: Механизмы криоповреждения и криозащиты биологических структур. - Киев: Наук, думка, 1977, с.25-26.

94. Пачес А.И., Шенталь В.В., Птуха Т.П. Криоультразвуковое воздействие при лечении опухолей головы и шеи. Вестник АМН СССР, 1978, № 5, с.37-40.

95. Петров И.Р., Карташевский Н.С. Определение жизнеспособности клеток костного мозга. В кн.: Трансплантация костного мозга в эксперименте и клинике. - Л.: Медицина, 1967, с.78-89.

96. Полякова А.И., Иткин Ю.А., Гордиенко Е.А., Лобынцева Г.С. Влияние режимов оттаивания на жизнеспособность ядерных клеток крови, консервированных при -196°С под защитой ПЭ0-400. Пробл.гематол. и перелив.крови, 1974, 9, с.26-29.

97. Полякова А.И., Гордиенко Е.А. Выбор оптимального режима оттаивания для ядросодержащих клеток крови, консервированных глубоким охлаждением. Криобиология и криомедицина, 1975, вып.1, с.124-126.

98. Пушкарь Н.С. Консервирование глубоким охлаждением (-196°С)костного мозга и его использование в клинических целях: Автореф.дис. . докт.мед.наук. Харьков, 1968. - 28 с.

99. Пушкарь Н.С., Даценко Б.М., Щелокова и др. Консервирование костного мозга глубоким охлаждением (-196°С) в практике хирургии и онкологии. В кн.: Материалы научно-практических конф. врачей Харьковской обл. Харьков, 1968, с.215-^219.

100. Пушкарь Н.С., Шенберг М.Г., Наконечный А.А. и др. Ограждающее действие полиэтиленоксида на клетки при глубоком замораживании. Пробл.гематол.и перелив.крови, 1972, 17, $ 3, с.30-34.

101. Пушкарь Н.С., Розанов Л.Ф., Гордиенко Е.А. Некоторые аспекты повреждения клеток при замораживании. Пробл.гематол, и перелив.1ф0ви, 1974, № 4, с.44-47.

102. Пушкарь Н.С., Белоус A.M. Введение в криобиологию. Киев: Наук.думка, 1975. - 334 с.

103. ПО. Пушкарь Н.С., Щраго М.И., Белоус A.M., Калугин Ю.В. Криопро-текторы. Киев: Наук.думка, 1978. - 204 с.

104. Пушкарь Н.С., Вишневский В.И., Гордиенко О.И. Влияние ультразвуковых колебаний на замораживание эритроцитов человека.-Криобиология и криомедицина, 1981, № 8, с.19-21.

105. Пушкарь Н.С., Лобынцева Г.С., Гиндина Е.И. и др. А.с.825081 (COOP). Способ консервирования лейкоцитов. Опубл. в Б.И., 1981, & 16.

106. Рахматулаев А.Р. Сравнительная оценка жизнеспособности консервированного костного мозга методами культуры тканей.

107. В кн.: Трансплантация органов и тканей: Материалы 1У Всесоюзно нф. М., 1966, с.519-520.

108. Ревис В.А. К вопросу о консервации костного мозга. Пробл. гематол.и перелив.крови, 1961, № 9, с.35-40.

109. Резниченко А.А. Изменение свойств каталазы эритроцитов крови человека под влиянием ультразвука разных параметров.

110. В кн.: Ультразвук в физиологии и медицине: Тез.докл.I научн. конф., Ростов-на-Дону, 1972, I, с.68-69.

111. Рейнольде, цит.по кн.: Электронномикроскопические методы исследования биологических объектов /В.И.Бирюзова, В.Л.Бо-ровягин, В.П.Гилев и др. М.: изд-во АН СССР, 1963.-204 с.

112. Рикберг А.Б., Андрейченко В.И., Бакай Э.А. и др. К вопросу об использовании воздействия низких температур и ультразвука в онкологии. В кн.: Ультразвук в физиологии и медицине.

113. Тез .Всесоюз.конф. Ульяновск, 1975, с.92-94.

114. Рикберг А.В., Бакай Э.А. О биологическом действии низких температур в условиях озвучивания. В кн.: Новые приборы и устройства в биологии и медицине. - Киев: Наук.думка, 1975, с.3-5.

115. Рикберг А.Б. Усиление криоповреждений опухолей с помощью ультразвука малой интенсивности (экспериментальное исследование): Автореф.дис. . канд.биол.наук. Киев, 1982. -23 с.

116. Розанов Л.Ф. Криомикроскопическое изучение процессов замораживания и отогрева клеточных суспензий: Автореф.дис. . канд.биол.наук. Киев, 1975. - 20 с.

117. Розанова Н.А., Селиванов В.А., Пашковин Т.Н. Исследование влияния ультразвука на процессы ионного транспорта и ферменты митохондрий. В кн.: Тез.докл.стенд.сообщений I Всесоюз. биофиз.съезда, М., 1982, 2, с.322.

118. Рэ Л. Консервация жизни холодом. М.: Гос.изд.мед.лит., 1962. - 175 с.

119. Рэ Л., Симато Д. Биофизические аспекты действия низких температур на живые клетки и ткани: Труды междунар.симпоз.по цитоэкологии, М.-Л.: Наука, 1964, с.59-66.

120. Рябухин В.В. Усиление криоповреждений биологических тканей ультразвуком малых интенсивностей. В кн.: Взаимодействие ультразвука с биологической средой: Тез.докл. Всесоюз.сим-поз., Пущино, 1979, с.56-59.

121. Самыгин Г.А. Причина вымерзания растений. М.: Наука, 1974.191 с.

122. Сарвазян А.П. Специфические механизмы биологического действия импульсного ультразвука, связанные с динамикой биологических систем. В кн.: Молекулярная и клеточная биофизика.-М.: Наука, 1977, с.107-113.

123. Сарвазян А.П. Биологическое действие ультразвука. В кн.: Ультразвук в физиологии и медицине: Тез.докл.Ш Всесоюз.конф., Ташкент, 1980, с.14-16.

124. Сарвазян А.П. Некоторые общие вопросы биологического действия ультразвука. Пущино, 1981. - 28 с. - (Препринт АН СССР, Научный центр биол.иссл., Ин-т биофизики).

125. Селье Г. На уровне целого организма. М.: Наука, 1972. -122 с.

126. Смит 0. Биологическое действие замораживания и переохлажден ния. М.: И.Л., 1963. - 505 с.

127. Стражеско Н.Д., Яновский Д.Н. Атлас клинической гематологии.-М.: Медицина, 1963.

128. Строна В.И. Действие производных окиси этилена на ядерные клетки костного мозга крыс. Криобиология и криомедицина, 1976, в.2, с.57-59.

129. Строна В.И. Изменение АТФазной активности миелокариоцитсв крыс при замораживании клеточной суспензии. Криобиология и криомедицина, 1977, в.З, с.35-41.

130. Терапевтический справочник. М.-Л.: Медицина, 1946, т.2. -532 с.

131. Тимошенко Ю.П., Лобынцева Г.С., Полякова А.И., Пахомова И.С. Размораживание биологических объектов СВЧ-энергией. У. Комбинированный способ размораживания биологических объектов. -Криобиология и криомедицина, 1977, в.З, с.73-76.

132. Тодоров И. Клинические лабораторные исследования в педиатрии. София: Медицина и физкультура, I960. - 607 с.

133. Тюлин В.Н. Введение в теорию излучения и рассеяния звука. -М.: Наука, 1976. 256 с.

134. Федотенков А.Г., Мефедова Н.А., Дишкант И.П. Вопросы заготовки и консервирования костного мозга. Пробл^гематол. ж перелив.крови, 1961, 2, с.46-49.

135. Федотенков А.Г., Данилова Л.А., Дишкант И.П. и др. Новый метод заготовки трупного костного мозга, предназначенного ддя трансплантации. Пробл.гематол.и перелив.крови, 1963, 8,1. J& 2, с.28-34.

136. Федотенков А.Г., Данилова Л.А., Мефедова Н.А. и др. Консервирование костного мозга в жидких средах. В кн.: Матер.докл.Ш Всесоюз.конф. по пересадке тканей и органов, Ереван, 1963, с.239-240.

137. Федотенков А.Г. Консервирование костного мозга для клинических целей: Автореф.дис. . д-ра мед.наук. М., 1967. -35 с.

138. Федотенков А.Г., Данилова Л.А., Алексеева Л.П. Влияние различных режимов замораживания на пролиферативную активность и дифференцировку родоначальных клеток костного мозга. -Пробл.гематол и перелив.крови, 1971, 16, № 8, с.21-25.

139. Холодный А.Я., Турбина И.Л., Петренко Г.И., Руденко Н.Н.

140. К вопросу о лечебной эффективности аутотрансплантации консервированного костного мозга. В кн.: Материалы симпоз. по эффект.транспл.костного мозга в клинике, актуальн.вопросам гематол.и трансф.- Ташкент: Медицина, 1973, с.48-49.

141. Холодный А.Я., Петренко Г.И., Багаутдинов М.Т. Опыт применения полиэтиленоксида-400 (Ш0-400) при замораживании клеток посмертного костного мозга. Пробл.гематоли перелив, крови, 1976, 21, № 12, с. 12-49.

142. Цедрик М.С. Изучение кристаллизации бетола и азобетола методом малых капель. В кн.: Кристаллизация и фазовые переходы. Минск: Изд-во АН БССР, 1962, с.71-73.

143. Цитохимия замороженной клетки /Э.И.Обозная, Н.С.Пушкарь, О.П.Маркова, Е.Я.Панков. Киев: Наук.думка, 1981. - 176 с.

144. Цыпин Д.Б. О состоянии клеточных мембран во время консервации. В кн.: Консервация органов. - М.-Тбилиси, 1975,с.250-253.

145. Чернух A.M., Алексеев О.В. Микровезикуляция, вакуолизацияи пузыреобразование в эндотелии кровеносных капилляров нормальных и облученных животных. Арх.анатомия, 1969, 3, с.ПО.

146. Шарый Н.И., Ковалева В.М., Крюкова Г.В. Влияние многократного действия ультразвука на культуры клеток человека. -Гигиена и санитария, 1979, 2, с.48-50.

147. Шенталь В.В., Календо Г.С., Птуха Т.П. Потенцирование крио-деструкции биологической ткани ультразвуком. РгоЫешу Techniki W Medycynie (Польша), 1977, 8, № 3-4, С.213-217.

148. Элышнер И.Е., Дворкин Г.А. Влияние ультразвуковых волн на электрокинетический потенциал клеток. Биофизика, 1958, 3, с.641-647.168.JjV

149. Элышнер И.Е. Биофизика ультразвука. М.: Наука, 1973. -384 с.

150. Юрина Н.А. Цитохромоксидаза в форменных элементах.крови и костного мозга в норме и в условиях частичной декортикации и хронического раздражения коры головного мозга. Труды 1-го Моск.мед.ин-та,им.И.М.Сеченова, 1957, 2, с.166-170.

151. Ackerman Е. Resonant effects of mamnalian erythrocytesin ultrasonic fields. J.Acoust.Soc.America, 1952, 24, 1, p.118.

152. Akopyan V.B. Relationship between rate of ultrasonic haemolysis and state of organisme. In: Ultrasound, Praha, 1981, v.2, p.120-123.

153. Akopyan V.B., Abuladze U.K. Interspecific differences of erythrocytes ultrasonic resistivity of warm-blooded animals. Studia biophisica, 1982, 88, 2, p.119-124.

154. Andrews S., Levitt J. The effect of cryoprotective agentson intersolecular S-S formation during freezing of thiogel.

155. Cryobiology, 1967, 4, p.85589.

156. Angerer O.P., Barth G., Winkler G. Ubel der Wirkungsmecha-nism us biologisher ultraschallreaktionen (Der Frequenzein-fluss auf die Ultraschallhamolyse. Strahlentherapie,1950, 82, 4, p.461-467.

157. Astaldi G., Verge L. The glycogen content of the cells of lymphatie leukemia. Acta Haematol, 1957, 17, N 3, p. 129134.

158. Bjm L., Cram S., Steenstrup F.R. Some studies of ulltra-sound assisted filtration rates. Ultrasonics, 1978, 16, 3, p.103-107.

159. Block N.C., Van Deenen L.L.M., Be Grier J. Ehe effect of cholesterol incorporation on the temperature dependence of water permeation through lipisomal membranes prepared from phosphatidycholines. Biochim.et biophys.acta.,1977, 464, К 3, p.509-518.

160. Bundy M.L., Lerner J., Messier D.L., Rooney J.A. Effects ofultrasound on transport in avian erithrocytes. Ultrasound in Med.Biol., 1978, 4, 3, p.259-262.

161. Chapman D., Huck D.J., Penkett S.A., Shipley A.A. Physical studies of phospholipids. X. The effect of sonication on aqueous dispersions of egg yolk leethin. Bipchim.et bio-phys.acta, 1968, 163, N 2, p.255-261.

162. Chapman J.V., Macnallу IT.A., Tucker S. Ultrasound induced changes in influx in vivo. Ultrasound in Med.Biol., 1,980, 6, 1, p.47-58.

163. Ciaravino V., Miller M.W., Kaufman G.E. The effect of 1MN ultrasound on synchronized Chinese hamster V-79 cells. -Ultrasound in Med.Biol., 1981, 7, 2, p.175-184»

164. Clarke P.R., Hill C.R. Biological action of ultrasound in relation to the cell cycle. Exptl.Cell Res,, 1970, 58, p.443-444.

165. Dognon A., Simonot Y. Cavitation et hemolyse par ultrasones de frequences differentes. II. Compt.Rend.Acad.Sci., 1951, 232, 26, p.2411-2413.

166. Drastichilova V. Pospisilova J. The influence of ultrasound on tissue culture cells. Scripta medica, 1969, 42k 1, p.23-27.

167. Drovak M., Hrazdira J. Changes in the ultrastructure of bone marrow cell in rats following exposure to ultrasound.-1966" Zcchr.mikrosk. anat.Porsch., 1966, 75, N 4, p.451-460.

168. ELmer W.A., Heisher A.C. Enhancement of ША synthesis in neonatal mouse tibial epiphyses after eixposure to therapeutic ultrasound. J.din.Ultrasound, 1974, 2, p.1i91-1<95.

169. Finer E.G., Nuclear magnetic resonance studies of lipid-water systems. Chem.and Phys.Lipids, 1.972, 8, N 4, p.327-330.

170. Fung H., Cheung K., Lyons E.A., Kay W.E. The effect of low close ultrasound on human peripheral lymphocyte function in vivo. In: Ultrasound in Medicine (Ed.D.White,E.Lyons). N6Y., L., 1978, 4, p.583-586.

171. Garsia Gerado L., Tolles Y/alter E. Ultrasonic disaggregation of cell clusters. J.Histochem and Cytochem., 1977, 25, N 7, p.508-512.

172. Hill C.R., Joshi G.P. The significance of cavitation in interoreting the biological effects of ultrasound. In: Ultrasonics in Biology and Medicine. Warszawa-Poznan, 1-972, p. 125-132.

173. Hill C.R., Joshi G.P., Revell S.H. A search for chromosome damage following exposure of Chinese hanster cells to high intensity pulsed ultrasound. Brit.J.Radiol., 1972, 3 45» 533, p.333-334.

174. Hochachka P.W. Basic strategies and mechanisms of enzyme: adaptation to temperature. In: Effect of temperature on ectothermic organisms. Berlin, 1973, p.69-81.

175. Hrazdira I# Vliv ultrazvukji na sedimentacni rychlost ery-trocytu. Scripta medica, 1958, 31, 7-8, p.303-3D6.

176. Hrazdira I., Bilkova B. Effect of ultrasound on bone marrow cell suspensions. Folia Biol., (CSSEO, 1963, 9, N 5, p.398-401.

177. Hrazdira I. Direct and indirect effect of ultrasound on bone marrow cell suspensions. Folita Biol. (CSSR), 1965, 11, Ж 4, p.330-333.

178. Hrazdira I. Zeitfaktor der biologischen ultraschallwirkung.-Studia biophysica, Berlin, 1967, 2, 2, p.127-131.1.74

179. Hrazdira I. Current opinions on the biological effect of ultrasound. Scripta Medica, 1975, 48, 1-2, p.328.

180. Hrazdira I. U1trasonically induced stimulation of haemo-poetic tissue. Proc.Symp.UBIOMED-IV. Visegrad, 1979, 1, p.112-116.

181. Joschi G.P., Hill C.R., Forrester J.A. Mode of action of ultrasound on the surface charge of mammalian cells in vitro. Ultrasound in Med. Biol., 1973, 1, 1, p.45-48.

182. Karow A.M., Carrier 0., Holland W.A. Cardiac toxicity of several cryoprotective agents studied of normothermia. -Soc.for Cryobiology, 1967, 7, 8, p.9-11.

183. Kaufman G.E., Miller M.W. Growth retardation in Chinese hamster.' V-79 cells exposed to 1MH„ ultrasound. Ultrasound in Med. Biol., 1978, 4, рИ39-144.

184. KLeeman W. McConnel H.M. Lateral phase separation in Escherichia coli membranes. Biochim.et biophys.acta, 1974, 345, N 2, p.220-230.

185. Kremkau F.W., Witcofski R.L. Mitotic reduction in rat liver exposed to ultrasound. J.Clin.Ultrasound, 1974, 2, p. 123-126».

186. LeejA.G. Functional properties of biological membranes: a physical-chemical approach. Progr.Biophys.amd Mol. Biol., 1975, 29, N 1, p.3-56.

187. Leibo S.P., Mazur P. Freezing of bacteriophage T.4. Temperature and rate effects of freezing on marrow stem cell suspensions: interactions of cooling and warming rates in the presence of PVP sucrose or glycerol. Cryobiology, 1870, 6, p.315-322.

188. Lehmann J.F., Krusen F.H. Effect of pulsed and continuous application of ultrasound on transport of lions through biological membranes. Arh.Phys.Med.Rehabilit., 1954, 35, 1, p.20-23.

189. Lenart I., Auslander D. The effect of/ultrasound diffusion through membranes. Ultrasonics, 1980, 18, 5,р.21б-218.

190. Levitt J. Thiogel a model system for demonstrating inter-molecular disulfide bond formation in freezing. Cryobiology, 1965, 1, 31, p.316.

191. Levitt J. Y/inter hardiness in plant. In Cryobiology, Hew York - London, 1966, p. 49 5*

192. Levitt J., Dear J. The role of membrane proteins in freezing. In: The Frozen Cell, London, 1970, p. 149-173.

193. Lewis J.P. Long term preservation of hematopaetic tissue for marrow transplantation. Blut., 1974, 28, IT 6, p.389-395.1,76

194. Linden C.D., Keith A.D., Pox C.F. Correlations betweenfatty acid distribution in phospholipids ana the temperature dependence of membrane physical state. J.Supramol. Struct., 1973, N 3, p.523-534.

195. Lovelock J.E. The haemolysis of huijian red blood cells by freezing and thanring. Biochim.et.biophys.acta, 1953, 10, p.414.

196. Lovelock J.E. The denaturation of lipid protein complexes as a cause of damage by freezing. Proc.Roy.Soc.(B),1957, 147, p.427.

197. Low L.A.j Kremkau F.W. Intracellular temperature distribution produced by ultrasound. J.Acoust.Soc.America, 1980, 67, 3, p.1045-1050.

198. Lusting G., Lindehl P.E. Activation of mobility in bull and rabbet spermatozoa by ultrasonic treatment recorded by photographic method. Internat.J.Fertil., 1970, 15, 3, p.135-142.

199. Luyet B.J. Anatomy of the freezing process in biological materials. In Cryobiology. London-N,V., 1966, 115

200. Maeda K., Murao P. Studies on influence of ultrasound irradiation on growth of cultured cell in vitro. In: Ultrasound in Medicine (Ed.D.White., E.Lyons), N.-Y. L., Plenum Press, 1976, 3B, p.2045-2050.

201. Martin C.J., Cemmell H.G. A study of ultrasonically induced pulsations of gas-filled channels in ELodia. Phys.

202. Med.and Biol., 1979, 24, N 3, p.600-612.

203. Martins B.I., Rain M.R., Hayes T.L., Tobias C.A. Survival of cultured mammalian cells exposed to ultrasound. Ra-tiat. and Environ Biophys*, 1977, 14, 3, p.243-250.

204. Maupoume R., Verain A• Effects des ultrasons sur les sper-matozoides de taureau. Comt.Rend.Soc.Biol., 1957, 151, 8-9, p^1502-1504.

205. Maupoume R., Verain A. Comportement des spermatozoides de taureau vis-a-vis des ultrasons. Cmt Rend.Acad.Sci., 1.958, 246, 16, p.2407-2409.

206. Mazur P. Physical and chemical basis of injury in singler celled microorganisms subjected to freezing and thawing. -Ш: Cryobiology. L.-N.-Y. , 1962, 214 p.

207. Mazur P. Cryobiology: The fr&ezing of biological systems. -Science, 1970, 168, p.939.

208. Menz L. Structural changes and impairment of function asso-tiated with freezing and thawing. Cryobiology, 197 i, 8,1, p.1-14.

209. Meryman H.T.- The relationship between dehydration and freezing injury in the human erythrocytes. In: Cellular Injury and Resistance in Freezing, Organisms. Sapporo, 1967, p.231-244.

210. Meryman H.T. Observation on the present state of blood preservation by freezing. Cryobiology, 1968, 5, p.144-149.

211. Meryman H.T. The exceding of minimum tolerable cell volume in hypertonic suspension an a cause of freezing injury. -In: Frozen Cell. London, 1970, p.51-63.

212. Meryman H.T. Cryoprotactive, agents. Cryobiology, 1971, 8, 2, p. 173-183.

213. Meryman H.T. Osmotic stress as a mechanism of freesing injury. Cryobiology, 1971, 8, 5, p.489-501.

214. Naniappa B.H., Chang H.K., Glomski G.A. Trauma of the; ery throcyte membrane associated with lov; shear stress. Bio-phys.J., 1973, 13, p.1212-1222.

215. Nash T. Chemical constitution of compounds which, protect erythrocates against freezing damage. J.Gen.Physiol.,1962, 46, N 1, p.167-175

216. Hyborg W. Cavitation in biological systems. In: Pinite-amplitude wave effects in fluids. - London I PC.ScI-. and Technol.Press., 1974, p.-245~251.i

217. Padykula H.A., Herman е. Цит. по : Берстон M. Гистохимия ферментов. M.: Мир, 1965, с. 209.

218. Pinamonti S., Gallenga P.E., Mazzeo V. Further experiments in pulsecho sonication of erythrocytes in vitro. In: Ultrasound in Medicine (Ed.D.White, E.Lyons). 1J.-Y., L., Plenum Press, 1.976, 3B, p.2101.

219. Santarius К.Л., Heber U. The Kinetics of the inactivation of thylakoid membranes by freezing and high concentrations of electrolytes. Cryobiology, 1970, 7, p.71.

220. Schneider M.J.Т., Shneider A.S. Water in biological membranes: adsorption isotherms and circular dichroism as a function hydration. J .Membrane: Biol., 1972, 9, 2, p.127-140.

221. Schreck R. A method for counting the viable cells in normal and malignant cell suspensions. Amer.J.Cancer.,1936, 28, p.389-392.

222. Semmelink A. Ultrasonically enhanced liquid filtering. -In: Ultrasonics Internat. , Cuilford, IPC Sci. and Te,chnol. Press., 1973, p.7-10.

223. Sherman J.K., Kim K.S. Correlation of cellular ultrastructure before freezing, white frozen and after thawing in asseeing freeze-thawinduced injury. Cryobiology, 1967, 4, 2, p.61.

224. Sherman J.K. Freeze-thaw induced structural changes in cells. III. Experimental approach to analysis of ultra-structural cryoinjury. Cryosurgery, 1,969, 2, p. 189-206.

225. Stephens R.J., Hart C.P., Torbit C.A., Edmonds P.D. Reproducible subcellilar alterations on heratocytes resulting from ultrasound. Ultrasound in Med. Biol., 1980, 6, 3, p.239-249.

226. Stumpf P., Green D.E., Smith F.W. Ultrasonic desintegration as a method of extracting bacterial enzimes. J.Bact. 1946, 51, 5, p.487-493.

227. Takehara I., Rowe, A.W. Increase in ATPase activity in red cell membranes as a function of freezing, regiment. Cryobiology, 1971., 8, 6, p. 559-569.

228. Taylor K.J.W., Newman D.L. Electrophoretic mobility of Erlich cell sespensions exposed to ultrasound of varying parameters. Phys.Med.Biol., 1972, 17, 1, p.270-276.

229. Taylor K.J.W., Pond J.B. Primary sites of ultrasonic damage on cell systems. In: Interaction of Ultrasound and Biological Tissues (Ed.J.Reid, M.Sikov), N.-Y., DHEW Publ., 1972, p.87-92.

230. Till J.E., McCullorch E. A. A direct measurement of the. radiation sensitivity of normal mouse bone marrow cells. -Rad.Res., 1961, 14, 2, p.213-233.

231. Vassort P., Winderholer M., Frindel E. Kinetic parameters of bone marrow stem cells using in vivo suicide by tri-tiated thymidine or by hydroxyurea. Blood, 1.973, 41,3, p.789-796*

232. Veress E., Vincze J. The haemolysing action of ultrasound on erythrocytes. Acustica, 1976, 36, 2, p.100-103.18lt

233. Veress E. On "the factors, which determine the destruction of the erythrocytes in ultrasonic fields. In: Ultrasound in Biol. Medicine.Proc.Symp.UBIOMED-III, Wove Mesto na. Morave, 1977, p.12.

234. Vishnevsky V.J. Use of ultrasonic ascoillations on freezing. In: Fifteenth annual meet. Soc.cryobiol.,Toryo, 1978, p.20.

235. Watmough D.G., Denty P.P*, Eastwood L.M., Gregory D.M., Gordon F.C.A., Wheatley D.N. The biophysical effects of theerapeutic ultrasound on Hela:cells. Ultrasound in Ivied.

236. Biol., 1977, 3, 2-3, p.205-220.

237. V/atmough D.J., Pratt В., Mallard J.R. Circumstantial evidence for surface modes of resonance on the surface of He-la cell nuclei. Ultrasound in Med. Biol., 1979, 5, 3, p.283.

238. Webster D.F., Pond G.B., Dyson M., Harvey W. Role of cavitation in the "in vitro" stimulation of protein synthesis in human fibroblasts. Ultrasound in Med. Biol., 1978,4, 4, p.343-351.

239. Webster D.F., Dyson M., Harwey W. Ultrasonically-induced stimulation of collagen synthesis "in vivo". In; Ultrar sound in Biology and Medicine.Proc.Symp.UBIOMED-IV, Visegrad, 1979, p.135-140.

240. Williams A.R. A possible alteration in the permeability of ascites cells membranes after exposure to acoustic micro-streaming. J.Cell.Sci., 1973, 12, 3, p.875-885.

241. Wunderlich F., Ronai A., Speth V., Blume A. Thermotropic lipid clustering in tetrahymena membranes. Biochemistry, 1975, 14, 7, p.3730-3735.