Влияние церебрамина на регуляторные процессы в мозге крыс при окклюзии сонных артерий

Даудова, Лейла Абдулмуслимовна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Влияние церебрамина на регуляторные процессы в мозге крыс при окклюзии сонных артерий
ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Влияние церебрамина на регуляторные процессы в мозге крыс при окклюзии сонных артерий"

На правах рукописи

ДАУДОВА ЛЕЙЛА АБДУЛМУСЛИМОВНА

ВЛИЯНИЕ ЦЕРЕБРАМИНА НА РЕГУЛЯТОРНЫЕ ПРОЦЕССЫ В МОЗГЕ КРЫС ПРИ ОККЛЮЗИИ СОННЫХ АРТЕРИЙ

03.00.04 - биохимия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Махачкала - 2006

Работа выполнена в ГОУ ВПО «Дагестанский государственный технический университет».

Научный руководитель:

доктор биологических наук,

профессор

Эмирбеков ЭЗ.

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, доцент Кличка нов II. К.

кандидат биологических наук, доцент Пашаева М.Э.

Ведущая организация:

ГОУ ВПО «Ростовский государственный педагогический университет»

Защита состоится 27 декабря 2006 г. в 14.30 часов на заседашш дисс^р-тационнго совета К 212.053.12 по присуждению ученой степени кандидата биологических наук при Дагестанском государственном университете по адресу: 367025, г.Махачкала, ул.Батырая, 4, Даггосуниверснтет, биологический факультет.

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке Даггосуни-верситета.

Автореферат разослан «18» ноября 2006 года

Ваш отзыв, заверенный печатью, просим направлять по адресу: 367025 г.Махачкала, ул. М. Гаджиева, 43А, биологический факультет, е-таН -Sarat_77@mail.ru, факс: (8-8722) 67-59-15.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор биологических наук, профессор

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования. Известно, что в патогенезе большинства заболеваний, в том числе и заболеваний, связанных с ишемическим повреждением мозга, важное место занимают цепные процессы свободнораднкального окисления (СРО) (Тельпухов и др., 1992; Bilenko, 2001), Как правило, эти реакции протекают по механизму перекисиого окисления лип идо в (ПОЛ) (Хача-турьян и др., 1996) и традиционно оцениваются по скорости и количеству образования одного из конечных продуктов окисления малонового диальдегида (МДА). Для ряда активных форм кислорода (NO*, Н202) обнаружено участие в регуляции тонуса сосудов (Зоров и др., 2005; Каленикова и др., 2004). Динамика образования продуктов ПОЛ контролируется мембранно-связанной системой биоантиоксидантов, которая, как известно, представлена в основном глутатионсодержащими ферментами (Меньшикова и др., 2006). Кроме того, структурное нарушение мембран в результате интенсификации перекисных процессов после ишемии/реперфузин сопровождается накоплением токсических веществ, усиливающих функциональные нарушения клеток мозга (Жилина, 1999). В литературе имеются сведения о характере ПОЛ при цереброваску-ляриой патологии (ЦВП) (Волошин и др., 1991; Смирнова и др., 2002). Однако, вопросы развития и динамики этих процессов у больных с нарушением мозгового кровообращения (НМК) в зависимости от основного этнологического фактора и неврологической симптоматики мало изучены, что ие позволяет сделать однозначных выводов о механизме развития этой патологии (Владимиров, 1986; Федорова и др., 1999).

Возможности фармакологической коррекции ишемических повреждений мозга широки и включают препараты, влияющие на различные звенья патогенеза посташемического и постгипокснческого повреждения нервной ткани. Используются активаторы энергетического метаболизма мозга, ноотропные средства, аминокислоты, препараты, улучшающие синаптач ескую передачу, анти-гипоксанты, антиокенданты, церебральные в азодилятаторы (Панченко, 2004; Стулин И;др., 2003). Вместе с тем многие существенные проблемы, касающиеся разработки эффективных способов предупреждения развития и замедления темпов прогрессирования ишемических повреждений мозга, остаются далекими от полного разрешения (Манвелов и др., 199S; Скворцова, Стаховская, 2004). Ввиду сложности и многокомпонентности патогенеза сосудистых заболеваний мозга возникает необходимость применения большого количества средств, влияющих на различные звенья, что приводит к полипрагмазии, нередко сопровождающейся осложнениями. Поэтому поиск новых возможностей в лечении больных с ишемией мозга, ишемическим инсультом, по-прежнему, является актуальной проблемой (Hacke et al., 2004).

Учитывая сложность нейрохимических реакций при ишемии, не представляется возможным свести выбор терапевтического воздействия до какого-либо единственного лекарственного или физического фактора, поскольку в процессе лечения необходимо добиться нормализации системного и мозгового кровообращения, скорректировать нарушения метаболизма тканей мозга (Виленскнй, 1999; Парфенов, 2004; Танашян, 2004).

Тахим образом, важнейшими направлениями в снижении метаболических сдвигав при кислородной недостаточности мозга являются нормализация гемо-перфузии, использование антиоксидантов и антигипоксантов. В этой связи представляет интерес изучение эффектов отечественных биологически активных добавок (БАД), таких как «Цитаминов», созданных в Институте биорегу-ляцин и геронтологии РАМН (Морозов и др., 2001). Среди цитаминов в настоящее время при лечении хронической и переходящей ишемии мозга используют БАД - церебрамин.

Цель н задачи исследования. Целью данной работы является выяснение свободно-радикальньк механизмов развития ишемических повреждений мозга и коррекция нарушения мозгового кровообращения церебрамином.

Для выполнения поставленной цели нами были выдвинуты следующие задачи:

• изучить состояние свободнорадикальных процессов в мозге и крови животных при переходящей односторонней, хронической односторонней и двусторонней окклюзии сонных артерий.

- исследовать ионный баланс в мозге и крови животных при переходящей односторонней, хронической односторонней и двусторонней окклюзии сонных артерий.

- изучить изменение уровня эндогенной интоксикации и энергетического обмена в мозге и крови животных при переходящей односторонней, хронической односторонней и двусторонней окклюзии сонных артерий.

- изучить влияние церебрамина на свободнорадикальные процессы, ионный баланс, уровень эндогенной интоксикации и энергетический обмен в крови и мозге крыс при двусторонней окклюзии сонных артерий.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Характер свободно-радикальных процессов изменяется в зависимости от степени нарушения мозгового кровообращения. При 3-х минутной окклюзии правой сонной артерии происходит активация глутатионпероксидазы и снижение каталазной активности в коре головного мозга животных, что отражает незначительное возрастание интенсивности перекисных процессов, тогда как в стволовых структурах происходит нарушение глутатионовой антиокси-дантной системы защиты, что приводит к накоплению ТБК-реактнвн ых продуктов. В результате в стволовых структурах возрастает соотношение лак-тат/пируват и уровень эндогенной интоксикации.

2. При хроническом пережатии левой сонной артерии на 24 часа в мозге происходит снижение первичных и накопление вторичных продуктов пе-рекиского окисления липидов на фоне пониженна активности глутатионпероксидазы и содержания восстановленного глутатнона. Это отражается на еще большем, чем при переходящем НМК, возрастании соотношения лак-тат/пируват и нарушении ионной емкости мнтохондриальной фракции стволовых структур.

шению энергетического обмена не только стволовых структур, но и гемисферы коры и существенных отклонениях в ионной емкости мозга животных.

4. Церебрамин, обладая свойством фармакологического прекондицио-нировання, в модели двусторонней окклюзией сонных артерий способствует снижению влияния НМК на про- и антиоксидантные системы, нормализует энергетический обмен и ионную емкость мозга и крови животных.

Научная новизна. Впервые показано, что при окклюзии сонных артерий разной продолжительности смещение баланса про- и антиоксидантов в мозге животных усиливается при увеличении степени нарушения мозгового кровообращения. При переходящем или хроническом пережатии сонной артерии интенсификация свободнорадикальных процессов происходит в стволовых структурах, а при двусторонней окклюзии сонных артерий, - и в гемисферах коры больших полушарий. Увеличение интенсивности процессов переокисления положительно коррелирует с нарушением энергетического обмена и ионной емкостью в структурах мозга животных.

Впервые установлено, что церебрамин снижает влияние двусторонней окклюзии сонных артерий путем активации антиоксидантной системы зашиты, в результате чего происходит уменьшение накопления продуктов переокисления липидов, т.е. нарушения клеточных мембран, что, в свою очередь положительно отражается на энергетическом обмене и ионной емкости клеток мозга и крови. ■ V:

Теоретическая и практическая значимость работы. Полученные результаты исследований являются вкладом в решение проблем цереброваску-лярной патологии, расширяют представления о механизмах этой патологии, дают оценку состояния регуляторных систем мозга и крови.

Результаты проведенного исследования показывают эффективность цереб-рамнна как препарата, снижающего негативные последствия ншемнзации ткани мозга, что позволяет рекомендовать его для дальнейших преклинических исследований при данном осложнении.

Внедрение результатов работы в практику. Основные результаты работы внедрены в учебный процесс в виде методических разработок для проведения практических и семинарских занятий на кафедре биохимии и биофизики Дагестанского государственного университета.

Апробация работы. Основные результаты работы докладывались: на III Международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы современных наук: теория и практика». Днепропетровск, 2006; на XXVII итоговой научно-технической конференции преподавателей, сотрудников, аспирантов и студентов ДГТУ. Махачкала, 2006.

Основные публикации. По теме диссертации опубликовано 5 научных работ.

Структура и объем работы. Диссертация изложена на 139 страницах машинописного текста и состоит нз введения, обзора литературы, описания материалов и методов, изложения результатов собственных исследований, заключения и выводов. Список литературы содержит 207 источников, из них 98 отече-

ственных и 108 иностранных авторов. Работа содержит 27 таблиц и 14 рисунков.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Исследование проведено на 96 белых беспородных половозрелых крысах-самцах в возрасте 3-х месяцев, массой 200-250 г. Животные были разделены па группы: 1-я группа - ложнооперированные крысы (контроль); 2-я группа - животные, которым проводили перевязку правой сонной артерии (ПСА) на 3 минуты; 3-я группа - животные, которым проводили перевязку левой сонной артерии (JICA) на 24 часа; 4-я группа - животные, которым проводили перевязку ПСА на 3 минуты и ЛСА на 24 часа; 5-я группа - животные, которым перораль-но вводили церебрамин в течение 5-ти суток (кормление проводили 1 раз в сутки в утренние часы) в дозе 0,5 мг/кг с последующим проведением ложной операции; б-я группа - животные, которым перорально вводили церебрамин в дозе 0,5 мг/кг в течение 5-ти суток и проводили перевязку ПСА на 3 минуты и ЛСА на 24 часа.

Через 24 часа после операций животных декапнтировали, собирали кровь и выделяли структуры мозга (кору больших полушарий и стволовые структуры). Ишемизаиия мозга достигалась перевязкой левой сонной артерии (ЛСА) » через минуту — временной окклюзией (на 3 минуты) правой сонной артерии (ПСА) с последующей 24-часовой реоксигенацией. Во второй ipynne животных проводили перевязку ПСА на 3 минуты. В 3-й группе крыс проводили хроническую перевязку ЛСА на 24 часа. В 4-й и 6-й группах моделировали двустороннюю окклюзию: 3-минутную окклюзию ПСА и 24-часовую окклюзию ЛСА. Все хирургические процедуры проводили стерильно под барбамиловым наркозом (2-4 мг на 100 г массы животного). Получение митохондриальной фракции мозга проводили методом М.И. Прохоровой (1982). Митохондрии ресуспенди-ровали в 0,5 мл дистиллированной воды и проводили измерение содержания электролитов. Содержание малонового днальдегида (МДА) в плазме крови и гомогенатах мозга определяли флюориметричеекм методом (Арутюиян и др., 2000). Активность каталазы в плазме крови и супернатантах гомогенатов тканей определяли методом М.А. Королюка и др. (1988). Активность глутатион-пероксидазы (ГПО) в гемолизате и мозге определяли по методу Ганзлера и др. (Gunzler et al., 1986). Определение концентрации восстановленного глутатиоиа (ВГ) в гемолизате и мозге проводили методом Эльмана (Ellman, 1959). Определение активности глутатион-5-трансферазы (ГТ) проводили по А.И. Карпи-шенко (1999). Определение содержания тиоловых групп белков основано на способности ннэкомолекулярных тиоловых соединений при взаимодействии с 5,5'-дитио-бис-(2-нитробензойной кислотой) (ДТНБ) образовывать окрашенное соединение - тио-2-нитробентойную кислоту, водный раствор которого имеет максимум поглощения при Х=412 им. С этой целью к плазме крови и супериа-тантзм гомогенатов мозга добавляли раствор ДТНБ в соотношении объемов 1:25 (Камышников, 2004). Содержание гемоглобина в эритроцитах определяли с помощью набора «КлиниТесг-Гем К 800» фирмы «Эко-Сервис» (Россия). Ок-

сидазную активность церулоплазмина (ЦП) в плазме крови определяли модифицированным методом Ревина и др. (1982). С целью определения степени эндогенной интоксикации регистрировали содержание молекул средней массы (МСМ) в плазме крови, а также в мозге скрининг-методом А. Бабеля и др. (1974). Содержание глюкозы в крови и мозге определяли знзиматическим колориметрическим методом с помощью набора реагентов фирмы Ольвекс Диаг-ностикум» (Россия). Содержание пировиноградной кислоты (ПВК) в крови и гомогенатах мозга определяли модифицированным методом Умбрайта (Камышников, 2000). Содержание молочной кислоты (МК) определяли по В.В. Меньшикову (1987). Содержание ионов Na+, К+ и Са в плазме крови, супер-натангах гомогенатов мозга и митохондриальных фракциях коры и ствола мозга определяли методом пламенной фотометрии с использованием пламенного фотометра ФПЛ-1 (Россия).

Статистическую обработку данных проводили с использованием персонального компьютера и пакета программ Statistics for Windows 5.5.

ИЗЛОЖЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ

Влияние окклюзии сонных артерий на свободнораднкальные пронес* сы в мозге и крови крыс. В биологических исследованиях широкое применение получил метод определения ТБК-реактивных продуктов (ТБК-РП), часто используемого в качестве интегрального показателя активации свободно-радикальных процессов (Колесова и др.. 1984; Pompella et al., 1987; Draper et al., 1993). В наших опытах (табл. 1) содержание ТБК-реактивных продуктов значительно изменяется при нарушении кровоснабжения мозга.

Таблица 1

Содержание ТБК-рсаитнвных продуктов в мозге (нм/г) н кровн (мкм/мг белка)

крыс в условиях окклюзии сонных артерий, №1 ± ш; п — 6-8)

Структуры мозга, кровь/группы 1 группа Контроль 2 группа (3-мин. оккл. ПСА) 3 группа (24-ч.оккл. ЛСА) 4 группа (3-м.оккд,ПСА+ 24-ч.оккл.ЛСА)

Кора больших полушарий ТБК-РП 83,77+3,11 88,18+3,89 92,95+4,72 66,37±3,23*,**\**

липопер екиси 54,77+2,34 28,63+1, J 3* 9,22+0,37**

Ствол, структуры ТБК-РП 73,96+3,38 128,17+5,92* 98,78+4,42** 149,93+6,61*, ****

липопе-рекиси 26,50±1,05 17,73+0,71* 16,01+0,62* 2,96+0,07*,***,

Плазма крови ТБК-РП 36,57+1,21 16,96i±0,S8* 28,93+1,14** 24,9б±0,96\ ***

лип опере к иси 22,67+1,09 26,I1±U9 35,33±0,94*,** 69,50+2,77*,***, ****

Условные обоз начеши:

* - достоверные отличия показателей по отношению к контролю;

** • достоверные отличия показателей 3-й группы относительно 2-й;

+** • достоверные отличия показателей 4-й группы относительно 2-Й;

**** - достоверные отличи« показателей 4-И группы относительно 3-й.

При 3-минутной окклюзии ПСА в стволовых структурах наблюдается значительное накопление ТБК-реакшвных продуктов на +73% относительно контроля, В коре больших полушарий отмечается снижение накопления липоперекисей (-48%) по сравнению с 1-й группой животных. При 24-часовом НМК (3-я группа) в стволовых структурах животных 3-й группы обнаруживается достоверное возрастание содержания МДА (+34%) и снижение уровня липопереки-сей (-40%; р<0,05) по сравнению с показателем ложнооперированных крыс. Одновременно в гемисферах коры происходит понижение содержания липоперекисей (-83%). В крови животных третьей группы отмечается значительное возрастание содержания первичных продуктов ПОЛ (+56%; р<0,05) по сравнению с 1-й группой. При двустороннем нарушении мозгового кровообращения (НМК) (4-я группа) наблюдалось снижение содержания ТБК-реактивных продуктов (-21%; р<0,05) и липоперекисей (-64%; р<0,05) в коре больших полушарий. В стволовых структурах происходило выраженное накопление ТБК-РП (+103%; р<0,01), тогда как содержание липоперекисей, напротив, понижалось на -89% (р<0,05). Таким образом, в условиях двусторонней окклюзии СА происходит наиболее выраженная интенсификация СРП, приводящая к накоплению вторичных продуктов переокисления прежде всего в стволовых структурах мозга.

Для опенки антиоксидантного статуса мозга и крови животных исследовали состояние глутатионовой системы (рис. 2-4). В результате проведенного анализа изменения активности ГПО при 3-минутной окклюзии ПСА с последующей 24-часовой реоксигенацией получены следующие результаты. В коре больших полушарий 2-й группы активность ГПО возрастает на +59%, тогда как в стволовых структурах и плазме крови активность данного фермента, напротив, значительно понижается, соответственно, на -56% и -75% относительно значений ложнооперированных животных. При хронической окклюзии ЛСА отмечается более значительное снижение активности ГПО в стволовых структурах и гемолизате крови по сравнению со 2-й группой животных, а также менее выраженное понижение активности глутатионпероксидазы в гемисферах коры. В том числе, снижение активности фермента в коре больших полушарий составляет -72%, в столовых структурах -77%, а в гемолизате крови -89% относительно контроля. Следовательно, хроническое нарушение мозгового кровообращения является фактором более высокой интенсивности, при котором в большей степени повышаются процессы пероксцдации, приводящие к нарушению клеточных структур, по сравнению со 2-й группой. При двусторонней окклюзии сонных артерий (4-я группа) в мозге отмечается возрастание активности ГПО (в коре больших полушарий на +31%, в ствсловых структурах на +56%, тогда как в гемолизате активность глутатионпероксидазы снижается на -59% по сравнению с 1-й группой.

Нарушение мозгового кровообращения, моделируемое в нашем эксперименте 3-минутной перевязкой ПСА, способствует изменению содержания ВГ

только к стволовых структурах (-41%; р<0,05), тогда как в коре больших полушарий и плазме крови содержание ВГ остается на уровне контроля. При хронической окклюзии ЛСА (3-я группа) содержание восстановленного глутатиона снижается в коре больших полушарий (-49%) и стволовых структурах (-36%; р<0,05) относительно 1-й группы животных. В гемолизате содержание фермента остается на уровне контроля. В условиях двусторонней окклюзии сонных артерий снижение'уровня ВГ в коре больших полушарий (-52%), стволовых структурах (-78%) и гемолизате крови (-33%) свидетельствует о наиболее выраженном повреждении антиоксидантной глутатионовой системы организма. Известно, что глутаггион восстанавливает и изомеризуст дисульфндные связи, влияет на активность многочисленных ферментов и белков, биосинтез нуклеиновых кислот и, возможно, белка, поддерживает функции и структуру мембран, выполняет коферментные функции, участвует в обмене зйкозаноидов, метаболизме ксенобиотиков, является резервом цистеина, повышает резистентность клеток к вредным воздействиям, влияет на пролиферацию и является стабилизатором генетического аппарата клеток (Link, 1990). Таким образом, в условиях двусторонней окклюзии СА наиболее высок риск нарушения структуры мембран, повышения уровня токсичных продуктов СРО и негативного воздействия на геном рейрональных и глиальных клеток.

Наши исследования (рис. 2-4) показали, что активность ГР также изменяется в условиях нарушения мозгового кровообращения. Так, при 3-минутной окклюзии ПСА активность этого фермента снижается в гемнсферах коры (28%) и стволовых структурах (-40%), а в гемолизате крови, напротив, возрастает на +148% по сравнению с 1-й группой. Следовательно, при переходящем НМК происходит снижение процесса восстановления окисленного глутатиона в структурах мозга (особенно стволовых структурах), тогда как в плазме обнаружена обратная тенденция. При хроническом пережатии ЛСА значительное возрастание активности ГР наблюдается в стволовых структурах (+372%). В гемолизате активность данного фермента, также повышается контроля (+51%), хотя и не столь значительно, как во 2-й группе. В 4-Й группе двусторонняя окклюзия СА способствует лишь снижению активности ГР в гемолизате крови (-17%; р<0,05) относительно контроля, тогда как активность фермента в структурах мозга остается на уровне 1-й группы животных, возможно за счет чего наблюдается снижение содержания ВГ в мозге животных.

При 3-минутной окклюзии ПСА в мозге животных отмечалось значительное возрастание активности ГТ, в том числе, в коре больших полушарий увеличение активности фермента составляет +67%, а стволовых структурах - +71%. В то же время, снижение активности глутатион-З-трансферазы в гемолизате (• 94%) свидетельствует в пользу накопления в крови токсичных продуктов СРО. При 24-часовой окклюзии ЛСА в коре больших полушарий так же, как и во 2-й группе, происходит возрастание активности ГТ (+28%), тогда как в стволовых структурах отмечается некоторое снижение активности данного фермента (17%). В гемолизате сниженная активность ГТ (-40%) относительно контроля также отражает недостаточность детоксикационных процессов в крови, хотя и не столь значительных, как во 2-й группе. При двусторонней окклюзии в мозге

(преимущественно в стволовых структурах) обнаруживается возрастание активности ГТ, тогда как в гемолизате, напротив - снижение.

Важную роль в комплексной антиоксидантной (АО) защите организма играют легко окисляющиеся пептиды, в состав которых входят БН-содержащие аминокислоты, БН-содержащим соединениям принадлежит ведущая роль в защите клеток от ОН'-радикала, прошв которого не выработано специализированных протекторных систем, подобных каталазе.

Во 2-й- группе животных (рис. 2-4) отмечается значительное возрастание , содержания тиоловых групп, как в мозге, так и плазме крови. В том числе, в коре больших полушарий содержание БН-групп увеличивается на +41%, в стволовых структурах на +129%, а в плазме крови на +113% относительно группы ложнооперированных животных. Менее значительное накопление тиоловых групп обнаруживается при 24-часовой окклюзии ЛСА, В гемисферах коры содержание БН-групп возрастает на +21%, в стволовых структурах на +246%, а в крови содержание тиоловых групп не отличается от контрольных значений.

При двусторонней окклюзии также происходит изменение содержания тиоловых групп. В коре больших полушарий их уровень повышается на +24%, в стволовых структурах—на +75% (р<0,05), тогда как в плазме крови - снижается на -32%. Вероятно, возрастание содержания тиоловых групп в мозге и крови животных при окклюзии сонных артерий связано с максимальной инактивацией образовавшихся в процессе иш емии/реперфуэин ОН'-радикалов. Менее выраженное повышение уровня ЭН-групп в 4-й группе может отражать истощение АО-защиты в данной модели НМК.

Кроме того, как видно по рис. 1 при 3-минутной окклюзии ПСА (2-я группа) обнаруживается значительное понижение каталазной активности в коре больших полушарий (-43%) и стволовых структурах (-61%). Тогда как в плазме крови значения активности катал азы не отличаются от контрольного значения. Причиной инактивации катал азы может быть вызванная стрессом деградация свободных и связанных с мембранами эндоплазматической сети рибосом, которые ответственны за синтез фермента, за образование его мономера и тетраме-ра, а также деструкция плазматических мембран и мембран пероксисом, где находится основное количество фермента, приводящая к потере каггал азы клетками мозга. В условиях 24-часовой окклюзии ЛСА (3-я группа), напротив, в структурах мозга каталазная активность соответствовала уровню крыс 1-6 труппы, а в плазме крови происходит выраженное снижение активности катала-зы (-38%). Поэтому можно предположить, что неполная хроническая окклюзия оказывает меньшее влияние на активность данного фермента в мозге, тогда как в плазме крови чрезмерная интенсификация ПОЛ способствует истощению запасов катал азы. При двусторонней окклюзии в стволовых структурах обнаруживается повышение катал азной активности (+108%) по сравнению с контролем, что может быть результатом более значительной интенсификации СРП при двусторонней окклюзии сонных артерий по сравнению со 2-й и 3-й трупами. Вероятно, такие различия в активности каталазы в 2-й, 3-й и 4-й группах крыс связано с особенностями кровоснабжения в разных моделях окклюзии СА. То есть, в особенностях перераспределения кровотока в структурах мозга

при переходящем нарушении мозгового кровообращения, а также неполной хронической односторонней и двусторонней окклюзии С А, а, соответственно, н в условиях включения фермента в АО-защиту организма.

Изменения антиоксндантной активности церулоплазмина (ЦП) в плазме крови при окклюзии сонных артерий (табл. 2) носят следующий характер.

Таблица 2

Оксидазная активность (мкмоль/л) в плазме крови крыс в условиях

окклюзии сонных артерий, (М + т; в - 6-8)

Группы Содержание ЦП>

1 группа (контроль) 0,98+0,04

2 Группа (3-мнн.оккл.ПСА) 1,43±0,06*

3 группа (24-час.оккл. ЛСА) 2,66+0,11*

4 группа (З-мин.оккл. ПСА+24-час.оккл. ЛСА) 1,17+0,05

Условные обозначения: * - достоверные отличия показателей по отношению к контролю; ** - достоверные отличия показателей 3-й группы относительно 2-й; *** • достоверные отличия показателей 4-й группы относительно 2-Й; **** - достоверные отличия показателей 4-й группы относительно 3-й.

В условиях 3-минутной окклюзии ПСА происходит накопление содержа* кия ЦП на +43%. Еще более выраженное возрастание уровня церулоплазмина наблюдается при 24-часовой окклюзии ЛСА (+171%). При двусторонней же окклюзии СА отмечается менее значительное повышение содержания фермента по сравнению со 2-й и 3-Й группами. Одним из возможных предположений, объясняющих повышение активности ЦП в плазме крови животных при НМК, может быть освобождение его из печени и переход в кровь вследствие нарушения проницаемости гисгогемагических барьеров. Таким образом, в результате проведенного анализа влияния окклюзии СА на СРП в мозге и крови животных нарушение мозгового кровообращения снижает антиоксидантный статус организма в зависимости от степени нарушения кровоснабжения мозга. Наиболее выраженные изменения в процессах переокисления отмечаются при двусторонней окклюзии сонных артерий.

1УО 0110 а га

| Ю

V 50

-во

12 группа аз группа □ 4 групп»

13 группа В 6 группа_

Рис.

Рис.2.

170

i 110 S то

I га

X U

I '30

■ta

__г_s_i_s_

■ 2 группа ПЗ группа В4 группа В S группа 36 группа_

ïffEî h ïll-pT

if У1 |„ и

200 , 150

10С ■ »■

а ■ -so -к» ■

ТТЕГ

12 группа S3 Группа ЕЭ4 группа 15 группа Об группа_

Рис. 4.

Рис. 3.

Рис. 1. Изменение катал азной активности в мозге и крови животных относительно контроля (1 - в гемисфере коры; 2 - в стволовых структурах; 3 -в плазме крови). Рнс. 2-4. Изменение активности и содержания АО-ферментов (рис. 2. - в коре больших полушарий; рис. 3-я стволовых структурах; рнс. 4 — в гемолиз ате). Условные обозначения: 1 — активность глутионпероксидаоы; 2 - содержание восстановленного глутатиона; 3 - активность глутатионредуктаэы; 4 - активность глутатион-З-трансферазы; 5- содержание SH-групп).

Необходимо указать на некоторые выявленные особенности течения сво-боднорадикальных процессов при окклюзии сонных артерий разной продолжительности. Во-первых, переходящее НМК в большей степени способствует активации процессов пероксидации и повреждению клеток (по сравнению с хронической, 3-я группа), о чем косвенно свидетельствует снижение активности ГПО, ГР и каталазной активности в мозге. Аналогичные результаты получены и при исследовании системы СРО в условиях двусторонней окклюзии сонных артерий, где также производили 3-минутную перевязку ПСА (с последующей 24-часовой реоксигенацией) одновременно с 24-часовой окклюзией ПСА. Во-вторых, в 3-й группе (24-часовая окклюзия ПСА), а также при двусторонней окклюзии СА отмечается большее, чем при переходящем НМК (2-я группа) снижение содержания ВГ. В-третьих, во 2-й и 4-й группах наблюдалась сходная картина изменения активности ГТ (повышение активности в мозге и снижение — в гемолизате).

Таким образом, можно сделать вывод о сходстве течения СРП в мозге и Крови при двусторонней окклюзии СА, как со 2-й, так и 3-Й группами. Однако, необходимо уточнить, что хроническое пережатие ПСА все та км является фактором более высокой интенсивности, о чем свидетельствуют данные литературы (Менджерицкий и др., 2006). Несмотря на то, что доказано участие активных форм кислорода (АФК) в гибели клеток, конкретные механизмы этой гибели зачастую неизвестны. Выделяют четыре наиболее вероятных мишеней окислительной цитотоксической атаки активированных кислородных метаболитов: индукция ПОЛ в биологических мембранах (Владимиров и др., 1991), повреждение мембраносвязаиных белков (Richards et al., 1988), инактивация ферментов (Drapier, Hibbs, 1988) н повреждение ДНК клеток (Hoffman et al., 1984). В том числе, мишенью для свободных радикалов служит

том числе, мишенью для свободных радикалов служит митохондриальная мембрана, что приводит к нарушению энергетического обмена. Поэтому, далее мы проводили изучение влияния окклюзии сонных артерий на показатели энергетического статуса, эндогенной интоксикации н ионного баланса в структурах мозга и крови животных.

Влияние окклюзии сонных артерий на энергетический обмен, уровень эндогенной интоксикации и ионный баланс в мозге и крови крыс. Как известно, снижение кровоснабжения мозга сопровождается понижением содержания гликогена и пирувата, а также возрастанием уровня глюкозы и лактата. В этом плане важно определение соотношения лактат/пируват, которое резко возрастает при кислородной депрнвации мозга, что свидетельствует об усилении процессов анаэробного гликолиза (Пшенникова, 2004).

Полученные нами результаты исследования представлены в таблице 3.

Таблица 3.

Содержание глюкозы, молочной сыворотки и пировиноградной кислот в мозге И Крови крыс В условиях ОККЛЮЗИИ СОННЫХ артерий, (М + т;п-М)

Структуры мозга, кровь/группы , 1 группа Контроль 2 группа (3-мин. оккл. ПСА) 3 группа (24-ч.оккл. ЛСА) 4 группа (3- М.ОККЛ.ПСА+ 24-ч .окклЛ СА)

Глюкоза

Кора больших полушарий 2,98+0,10 5,05+0,21* 1,56+0,05*,** 1,52+0,03*, ***

Стволовые структуры 3,02+0,11 8,54+р,35* 4,37+0,19*,** 3,44+0,13*** ****

Плазма крови 4,92+0,22 10,57+0,47* 4,00+0,16*,** 4,66+0,19*** ****

Молочная кислота

Кора больших полушарий 0,91+0,04 0,47+0,02* 0,61±0,03*,** 0,86+0,04***,

Стволовые структуры 1,42+0,06 3,бб±0,И* 1,34+0,05** 1,38+0,06***

Плазма крови 0,11+0,003 0,14+0,05* 0,15±0,008* 0,12+0,002

Пиров нноградная кислота

Кора больших полушарий 1,39+0,07 1,11+0,05 3,08+0,10*,** 0,87+0,03*,*** Ф***

Стволовые структуры 3,70+0,09 1,22+0,03* 2,20+0,08*,** 2,18+0,11*,***

Плазма крови 0,37+0,01 0,35+0,008 0,36+0,009 0,26+0,01*,***

Условные обозначения:

* • достоверные отличия показателей по отношению к контролю; "' ** • достоверные отличия показателей 3-й группы относительно 2-Й; *** • достоверные отличи* показателей 4-й группы относительно 2-й; **** - достоверные отличия показателей 4-Й группы относительно 3-й.

При З-минутноЙ оккшозии ПСА в гемисферах коры, стволовых структурах и плазме крови резко возрастает содержание уровня глюкозы, соответственно, на -<-69%, +183% и +115% относительно ложнооперированных животных. Поскольку в мозге основным энергетическим субстратом является именно глюкоза, синтез которой нарушается при снижении притока кислорода в мозг, при переходящем НМК происходит возрастание выброса глюкозы за счет расщепления гликогена. Однако запасы гликогена в мозге очень ограничены, поэтому, в условиях хронической односторонней окклюзии ЛСА содержание глюкозы были снижены в коре больших полушарий (-48%), в стволовых структурах, напротив, возрастает (+45%). В плазме крови уровень глюкозы был на уровне контрольных значений. При двусторонней окклюзии происходят сходные изменения уровня глюкозы, как и в 3-й группе животных. В гемисферах коры снижение содержания глюкозы составляет -49%, в стволовых структурах и плазме крови уровень глюкозы существенно не отличается от контрольных значений.

Содержание лактата резко понижается при 3-минутной окклюзии ПСА (2-я группа) в коре больших полушарий (-48%), тогда как в стволовых структурах и плазме крови, напротив, возрастает, соответственно, На +158% и +27%. При хроническом пережатии ЛСА на 24 часа {3-я группа) также отмечается снижение содержания молочной кислоты в коре больших полушарий (-33%; р<0,05). В стволовых структурах уровень показателя соответствует значению ложнооперированных животных. Тогда как в плазме крови уровень лактата превышает контрольных значений на +36%. При двусторонней окклюзии (4-я группа) содержание лактата в мозге и крови животных значительно не различается пос равнению с таковыми у 1-й группы.

При анализе влияния НМК на изменение содержания пировнноградной кислоты в мозге и крови животных, получены следующие результаты. Во 2-й группе животных (3-минутная окклюзия ПСА) снижение содержания пирувата относительно группы ложнооперированных крыс в коре больших полушарий и стволовых структурах составляет, соответственно, -20% и -67%. В крови уровень пировиноградной кислоты соответствует показателю ложнооперированных животных. При 24-часовой окклюзии ЛСА (3-я группа) отмечается возрастание содержания пировиноградной кислоты в гемисферах коры (+122%), а в стволовых структурах - снижение (-41%) по сравнению с контрольными значениями. В условиях двустронней окклюзии (4-я группа) уровень пирувата падает ниже контроля в коре больших полушарий на -37%, в стволовых структурах на -41% и плазме крови на -30%.

*., ..--I_--г-1-

■ 2 группа ЕЗЗ группа ЕЭ4 группа

■ 5 группа группа_|

Рис. 5.

12 группа СЭЗ группа 04 группа 15 группа Р6 группа_

Рис. 7.

_1_а »_*

12 группа ОЗ группа О4 группа

15 группа И б группа__

Рис.6.

Рис. 5. Изменение содержания молекул средней массы в коре больших полушарий (1), стволовых структурах (2) и крови (3) животных по сравнению с контролем. Рис. 6. Изменение содержания ионов в ни-тохондриальной фракции мозга животных по сравнению с контролем (1 — ионов Ыа* в гсмнсфере коры; 2 - К* в гемнсфере коры; 3 — Иа* в стволовых структурах; 4 — К+ в стволовых структурах), Рис. 7. Изменение содержания ионов в плазме крови по сравнению с контролем (I —ионов Иа*; 2 - ионов К*; ионов Са .

В результате проведенного анализа влияния НМК на изменение соотношений лактат/пируват в мозге и крови животных было установлено, что в коре больших полушарий данный показатель снижается у крыс 2-й (-35%) и 3-й групп (-69%), тогда как в 4-Й группе, напротив, возрастает (+52%) относительно контроля, В стволовых структурах данное соотношение увеличивается во 2-й (+689%), 3-й (+60%) н 4-й (+67%) группах. Аналогичные изменения показателя лактат/пируват наблюдается и в крови во 2-й (+33%; р<0,05), 3-й (+40%; р<0,05) и 4-й (+53%; р<0,05) группах относительно ложнооперированкых животных, Таким образом, наиболее значительное усиление процессов анаэробного гликолиза в стволовых структурах вызвало моделирование 3-минутной окклюзии ПСА С последующей 24-часовоЙ реоксигенацией. Тогда как в коре больших полушарий возрастание значения лактат/пируват происходит лишь при двусторонней окклюзии сонных артерий. Следовательно, нарушение энергетического обмена в мозге зависит не только от степени НМК, но и других факторов, отражающих различную устойчивость структур мозга к недостатку кислорода.

Кроме того, нами установлено (рис.5), что интенсификация свободноради-кальных процессов и нарушение энергетического обмена сопровождаются накоплением в организме молекул средней массы, являющихся фактором эндогенной интоксикации. Среди эффектов МСМ на молекулярном уровне есть и такие, как подавление активности ряда ферментов: лактатдегидрогеназы, аде-

нилатциклазы, пируваткиназы, Ыа+,К+-АТФазы, ферментного каскада мнтохон-дриального дыхания, влияние на активность МАО в мозге, которое рассматривают как вероятный механизм нейротропного эффекта МСМ. Наряду с этим МСМ оказывают и неспецифическое мембранотропное действие, сопровождающееся повышением проницаемости клеточных и лизосомальных мембран, связанное с тем, что они, не диффундируя внутрь клетки, взаимодействуют с клеточными рецепторами или липиднымн структурами клеточных мембран (Малахова И др., 1994).

При 3-минутной окклюзии ПСА (2-я группа) отмечается значительно снижение содержания МСМ в коре больших полушарий (-50%) и плазме крови (38%). Напротив, в стволовых структурах уровень МСМ повышается на +36% относительно контрольных значений.

Известно, что качество биологических эффектов МСМ определяется их молекулярно-массовым распределением. При этом изменения последнего параметра сопряжены с трансформацией «токсических» свойств МСМ в антиок-сидантное, антиноцицептивное и стресс-протекторное действия. Установлено, что высокополимерные фракции МСМ стимулируют функциональную активность нейтрофнлов и макрофагов, тогда как олигомерные фракции обладают ингибирующим действием на фагоциты (Малахова, 1995).

Поэтому, снижение содержания МСМ в гемисферах коры и плазме крови во 2-й группе животных можно объяснить понижением антиоксидантного статуса организма в ответ на ишемическое/реперфузионное воздействие, тогда как в стволовых структурах в большей степени возрастает прооксидантная активность. При 24-часовой окклюзии ЛСА (3-я труппа) наблюдается повышение уровня МСМ в мозге и крови животных. В том числе, в коре больших полушарий происходит накопление молекул средней массы на +71%, в стволовых структурах - на +72% и плазме крови — на +68%.

В 4-й группе в гемисферах коры, как и во 2-й труппе, отмечается значительное понижение содержания МСМ (-25%; р<0,05), но в столовых структурах и плазме крови, напротив, наблюдается возрастание уровня эндогенной интоксикации, соответственно, на +68% (р<0,05) и +64% (р<0,05). Вероятно, снижение уровня МСМ в коре больших полушарий происходит в ответ на реперфузи-онное воздействие, которое моделировалось во 2-й И 4-й группах, что отражает смещение в гемисферах коры понижением акгиоксидакгаого статуса. В стволовых структурах, возможно, накопление молекул средней массы происходит вследствие повышения уровня эндогенной интоксикации за счет резкой интенсификации свободнорадикальных процессов.

Поскольку выше описанные процессы, происходящие при НМК (интенсификация перекисных процессов и нарушение энергетического обмена) сопровождаются изменениями в работе ионных каналов, далее было проведено исследование влияния окклюзии сонных артерий на баланс ионов Са , и К' в крови, а также Ыа* и К+ в митохондриальной фракции структур мозга.

В наших опытах (рис. 6-7) при 3-минутной окклюзии ПСА (2-я группа) отмечаются следующие отклонения в балансе ионов. При исследовании ионного баланса в митохондриальной фракции мозга обнаружено, что в коре больших

полушарий значительно изменяется содержание ионов К* (+55%), а в митохондриальной фракции стволовых структур происходит понижение уровня ионов Ыа+ (-32%). Это может свидетельствовать, с одной стороны, о нарушении структуры ионных каналов мембран митохондрий в процессе развития НМК. Это, в свою очередь затрагивает процесс перераспределения ионов в митохондриях и цитозоле. С другой стороны, это может означать, что существуют раз* личные механизмы нарушения ионной емкости (в коре больших полушарий и стволовых структурах мозга). В плазме крови возрастает количество ионов (+37%), К* (+35%) и Са2+ (+23%). При 24-часовоЙ окклюзии ЛСА (3-я группа) увеличивается содержание ионов Ыа+ (+28%) н К+ (+50%) в митохондриальной фракции коры больших полушарий. Кроме того, в митохондриальной фракции стволовых структур изменяется уровень ионов N8+ (+34%) и К+ (-33%). В плазме крови достоверных изменений в балансе ионов не обнаруживается относительно контрольных значений. При двусторонней окклюзии сонных артерий также более значительные изменения в балансе ионов обнаруживается в митохондриальной фракции стволовых структур мозга, что выражается в накоплении ионов (+67%) и снижении уровня ионов К* (-38%). Эти результаты могут усилить деполяризациошше процессы в данных структурах мозга (т.е. усиления возбудимых процессов, возможно за счет возрастания выброса глута-мата, что характерно для ишемического повреждения мозга). Но, при этом в митохондриальной фракции коры больших полушарий возрастает уровень ионов Иа+ (+43%) и К (+150%) относительно контрольного. Этот факт может свидетельствовать о том, что интенсификация свободнорадикальных процессов в данной модели НМК приводит к преобладанию тормозных процессов в коре больших полушарий. При этом в 4-й группе наблюдаются наиболее выражен* ные изменения в работе ионных каналов нейронов гемисферы коры по сравнению со 2-й и 3-й экспериментальными группами, свидетельствующие о том, что в данная модель окклюзии сонных артерий является фактором высокой интенсивности (по Л.Х. Гаркави, 2002). Таким образом, нарушение мозгового кровообращения способствует развитию окислительного стресса, энергетического дефицита и эндогенной интоксикации, что сопровождается ионным дисбалансом, наиболее выраженным при двустронней окклюзии сонных артерий.

Поскольку, в настоящее время актуальным является поиск препаратов, обладающих общесистемными свойствами, мы проводили изучение влияния церебрамина, биологически активной добавки, проявляющей стресс-протекторные эффекты при различных сосудистых нарушениях мозга, и исследовали влияние этого БАДа в экспериментальных моделях НМК на биохимические показатели, отражающие функциональные нарушения в организме в ответ на ишем ию/реперфузию.

Эффекты церебрамина на свободнорядикальные процессы в мозге и крови крыс в условиях окклюзии сонных артерий. Оказалось, что в рацион питания церебрамина у интактных животных в гемисферах коры больших полушарий происходит значительней понижение липоперекисей (-65%), тогда как в стволовых структурах и плазме крови, напротив, накопление, соответственно, на +80% и +55%. В то же время уровень липоперекисей липидов снижается в

коре больших полушарий, а стволовых структур и плазме крови — возрастает. В 6-Й группе животных, которым до двусторонней окклюзии СА добавляли в рацион питания Б АД) в коре больших полушарий отмечается снижение накопления ТБК-РП (-32%) и лнпоперекисей липидов (-47%). В стволовых структурах и крови, напротив, происходит повышение содержания лнпоперекисей, соответственно, на +31% и +247% (рис. 2-4).

При исследовании влияния церебрамина на активность ГПО показано, что в 5-й группе происходит понижение активности данного фермента в мозге (коре больших полушарий на -49%, в стволовых структурах на >64%) и гемолизате (-61%) относительно контрольной группы крыс. Вероятно, снижение активности данного фермента при добавлении в рацион питания крысам церебрамина может быть результатом включение его в каталитическую реакцию восстановления глутатионом нестойких органических гидроксипероксидов. Последние могут образовываться в ответ на введение церебрамина, способствующего некоторому повышению интенсификации перекисных процессов в организме животных. То есть церебрамин увеличивает интенсификацию свободнорадикаль-ных процессов в мозге и крови животных, возможно, за счет увеличения метаболических процессов. В доказательство этому в условиях двусторонней окклюзии церебрамин повышает активность ГПО в стволовых структурах (+94%), где наблюдаются наиболее выраженные изменения в СРП при нарушении мозгового кровообращения. В коре больших полушарий активность глутэтнонпероксидазы была на контрольном уровне, а в гемолизате — ниже на -55% по сравнению с 1-й группой. Кроме того, по сравнению с 4-Й группой выявляется положительное влияние церебрамина на активность ГПО в стволовых структурах (+24%). Но, в коре больших полушарий активность ГПО снижается на -42%, а в гемолизате крови остается на уровне 4-й группы.

Содержание ВГ в мозге и крови ложнооперированных крыс 5-й группы сохраняется на контрольном уровне. Возможно, действие церебрамина заключается в том, что на фоне понижения активности ГПО параллельно происходит возрастание активности у-глутамилцистеинсинтетазы, сохраняющей уровень восстановленного глутатнона на нормальном функциональном уровне. В 6-й группе крыс под влиянием церебрамина обнаруживается менее значительное понижение содержания ВГ относительно 4-Й группы. В том числе, в условиях окклюзии сонных артерий у животных б-й группы происходит понижение содержания ВГ в коре больших полушарий (-25%) и стволовых структурах (• 58%), но относительно 4-Й группы в этих же структурах мозга наблюдается увеличение уровня восстановленного глутатнона, соответственно, на +55% и +94%. В гемолизате 6-й группы содержание данного фермента незначительно понижается по сравнению с ложнооперированными крысами и недостоверно повышается по сравнению с 4-й группой.

При введении в пищевой рацион интактных животных (5-я группа) церебрамина активность глутатионредуктазы в мозге и гемолизате не изменяется по отношению к контролю. Тогда как в условиях окклюзии сонных артерий (6-я группа) церебрамин оказывает положительное влияние на содержание этого фермента в коре больших полушарий и плазме крови. Так, в гемисферзх коры

уровень ГР повышается на +111%, а в гемолиззге крови - на +218% по сравнению о 1-й группой. В стволовых структурах наблюдается значительное снижение его содержания (-33%) по отношению к показателю ложнооперированных крыс. Сравнительный анализ изменения содержания ГР в б-й группе относительно 4-й показывает, что добавление в пищевой рацион БАДа способствует повышению уровня глутатионредукгазы в коре больших полушарий (+136%) и гемолизате крови (+284%), тогда как в стволовых структурах его содержание снижается на ->2^%.

Таким образом, церебрамин, способствуя, с одной стороны, интенсификации перекисгод; процессов в мозге животных, с другой стороны, активирует ряд ангиоксид^нгных ферментов, что, вероятно, является тем фактором, который способствует реализации предуготовленности организма к возможному развитию окислительного стресса. В том числе, добавление в рацион питания ложнооперированным животным БАДа (S группа) приводит к возрастанию активности глут^т^он-З-трансферазы в коре больших полушарий на +413% и гемолизате крови *на +55% относительно контрольного уровня.

Эти результаты еще раз подтверждают предположение о том, что в коре больших полушарий и стволовых структурах существуют принципиальные различия в защите нервной ткани от окислительного стресса. В том числе, в гемнсферах коры глутатионовая система защиты более активна по сравнению со стволо выми структурами.

В условия^ двусторонней окклюзии сонных артерий церебрамин (6-я труппа) также способствует увеличению активности ГТ в мозге: в гемнсферах коры (+292%) и стволовых структурах (+35%). В плазме крови активность этого фермента сохраняется на уровне контроля. Тогда как относительно изменений активности ГТ в 4-й труппе добавление церебрамина в рацион питания животных 6-Й группы приводит к возрастанию активности фермента только в коре больших полушарий (+188%) и плазме крови (+162%). А в стволовых структурах активность ГТ снижается на -22%.

Значительных изменений в содержании тиоловых групп в мозге 5-Й группы животных не обнаруживается, а в плазме происходи понижение уровня SH-групп (-31%; р<0,05). Это может свидетельствовать о том, что церебрамин способствует некоторому повышению образования ОН*-рааикалом в крови, защищая от токсичности которых снижается содержание тиоловых групп.

В 6-Й группе также не обнаруживается изменение уровня SH-групп относительно контроля. В плазме крови наблюдалось возрастание данного показателя на +22% ф<0,05).

По сравнению с 4-й группой животных в содержании тиоловых групп происходит следующие изменения: в стволовых структурах отмечалось понижение их уровня (-38%), в плазме крови - возрастание (+80%). Следовательно, в ин-тактных условиях церебрамин не способствует синтезу антиоксидантов данной группы, тогда как в условиях нарушения мозгового кровообращения приводит к изменению их содержания в крови животных.

При исследовании катапазной активности у животных, которым в рацион питания добавляли церебрамин, получены следующие результаты. В 5-й группе

у интактных крыс отмечается возрастание каталазной активности только в стволовых структурах (+22%; р<0,05) относительно контроля. Следовательно, данная биологически активная добавка стимулирует синтез ферментов, обладающих каталазной активностью, преимущественно в тех структурах, которые, согласно нашим результатам, наиболее уязвимы к воздействию окислительного стресса, - стволовых структурах. Тогда как в гемисферах коры больших полушарий и плазме крови уровень активности фермента поддерживается на уровне контрольных значений. При воздействии окклюзии ^ сонных артерий церебрамин способствует возрастанию каталазной активности как в коре больших полушарий (+180%), так и, особенно, стволовых структурах (+230%). В плазме крови также происходило увеличение активности фермента Йа+29%. Параллельно в гшазме крови у животных 5-й и 6-й групп наблюдается значительное увеличение супероксндустраняющей активности, которой обладает в крови церулоплазмин. Так, у интактных крыс 5-Й группы происходит увеличение содержания ЦП на +193%, а животных, находящихся в условиях окклюзии сонных артерий (б-я группа), которым в рацион питания добавляли церебрамин, - на +138%. Таким образом, проведенное исследование влияния церебрамнна на интенсивность свободнораднкальных процессов животных показывает, что Б АД регулирует перекисные процессы в мозге и крови крыс в зависимости от условий, в которых находятся экспериментальные жив (При двусторонней окклюзии биологически активная добавка стимулирует в организме животных преимущественно интенсификацию синтеза антиоксн-дантов как в мозге (особенно стволовых структурах мозга), так и крови, проявляя свойства фармакологического прекондиционирования. Такое общесистемное действие церебрамнна дает основания предполагать, что БАД оказывает и другие стресс-протекторные эффекты на функциональные системы организма, в том числе, энергетику клеток, ионный баланс и уровень эндогенной интоксикации.

Эффекты церебрамнна на ионный баланс, энергетический обмен и уровень эндогенной интоксикации в мозге и крови крыс в условиях окклюзии сонных артерий. При исследовании состояния энергетического обмена у животных 5-й группы установлено, что при добавлении в рацион питания крысам церебрамнна происходит повышение содержания глюкозы только в стволовых структурах (+23%; р<0,05). Тогда как в коре больших полушарий н плазме крови уровень данного показателя не изменяется относительно контроля.

После моделирования окклюзии сонных артерий в 6-й группе церебрамин способствует сохранению содержания глюкозы в мозге и крови крыс на контрольном уровне. Относительно же 4-й группы в б-й группе отмечается снижение содержания глюкозы в стволовых структурах на -24%. Последний факт свидетельствует о том, что в мозге и крови животных при нарушении мозгового кровообращения церебрамин не способствует чрезмерному увеличению уровня глюкозы (т.е. не происходит расщепления гликогена в клетках мозга и печени). Содержание же лактата значительно изменяется в коре больших полушарий (+43%), столовых структурах (-27%) и плазме крови (-45%) у ложноопериро-

ванных крыс 5-й группы. Следовательно, церебрамин способствует увеличению уровня метаболических процессов преимущественно в гемисферах коры, тогда как в стволовых структурах и плазме крови, напротив, происходит торможение утилизации глюкозы.

В 6-й группе животных отмечается понижение содержания лактата в мозге (в коре больших полушарий на -36%, в стволовых структурах - на -23%). Возможно, в условиях окклюзии сонных артерий церебрамин запускает каскад биохимических реакций, которые на фоне снижения метаболизма и приводят к понижению интенсификации перекисных процессов в мозге. А в плазме крови животных б-й труппы наблюдается повышение уровня молочной кислоты (+55%). По сравнению с 4-й группой животных в 6-й группе в коре больших полушарий мозга отмечается снижение, а в плазме, напротив, возрастание уровня лактата, соответственно, на -33% и на +183%. Содержание же пирувата повышается в гемисферах коры (+30%) и плазме крови (+24%) интактных животных 5-й группы относительно контроля.

В условиях нарушения мозгового кровообращения церебрамин способствует увеличению уровня пировнноградной кислоты в коре больших полушарий относительно 4-й группы (+19%), хотя ее содержание и оставается ниже контроля на -25%. В столовых структурах и плазме крови животных б-й труппы обнаруживаются изменения уровня пирувата только по сравнению с 4-Й труппой.

Результаты изменения соотношений лактат/пируват в мозге и крови животных 5-й и б-й групп таковы (рис. 8).

■ Ряд2 ВРядЗ В Ряд4 МРяд5 ВРядб

Рис. 8. Изменение соотношения лактат /ппруват в мозге и крови крыс при ОСА относительно контроля

1- г« ми сфера коры; 2 - стволовые структуры; 3 - плазма крови.

У ложнооперированных животных данное соотношение значительно изменяется только в плазме крови (-37%) по сравнению с 1-й группой, что, является признаком усиления аэробного гликолиза в данных условиях. При моделировании двусторонней окклюзии церебрамин способствует снижению значения лактат/пнруват в стволовых структурах на -32%, а в плазме крови повышение этого соотношения составляет +43% относительно 1-й группы животных.

Таким образом, благодаря проведенному исследованию в модели нарушения мозгового кровообращения было установлено положительное влияние церебрамина на энергетический обмен в мозге животных. В связи с этим нами выдвинуто предположение о том, что Б АД должен оказывать благоприятные эффекты и на содержание молекул средней массы в мозге и крови крыс при нарушении мозгового кровообращения.

Введение в рацион питания церебрамина ложнооперировакным животным (5-я группа) не приводит к изменению содержания МСМ в мозге и плазме крови, свидетельствуя о предупреждении активации катаболических процессов в организме, находящегося в условиях физиологической нормы. На фоне предварительного введения в рацион питания церебрамина крысам перед окклюзией сонных артерий (б-я группа) отмечается восстановление содержания МСМ (254,280 нм) до уровня контроля, которое изменяется как в мозге, так и крови экспериментальных животных 2-й, 3-й и 4-Й трупп (рис.5).

Влияние церебрамина на баланс ионов в мозге и крови крыс 5-й группы (рис. 6,7) проявляется преимущественно возрастанием содержания ионов Na* в митохондриальной фракции коры больших полушарий — на +109%. Это может свидетельствовать о возрастании деполяризационных провессов под влиянием БАДа. В условиях двусторонней окклюзии сонных артерий церебрамин способ, ствует снижению влияния НМК, что в первую очередь, проявляется в снижении содержания кальция в плазме крови до уровня контрольной труппы, а также понижении уровня Са1+ относительно 4-й группы. Следовательно, происходит восстановление баланса ионов Na* и К4". Кроме того, в плазме крови б-й группы животных сохраняется баланс ионной емкости в пределах контрольной группы крыс. В митохондриальной фракции гемисферы коры б-й группы животных (двустороння окклюзия сонных артерий) отмечается значительное возрастание содержание ионов калия (+27%; р<0,05). В митохондриальной фракции стволовых структур б-й группы крыс происходит меньшее накопление ионов натрия и большее — ионов калия относительно 4-й группы, что предполагает стресс-протекторный эффект церебрамина на состояние мембран митохондрий в условиях окклюзии сонных артерий, и, соответственно, на энергетический баланс мозга животных.

Полученные нами результаты по влиянию церебрамина на метаболизацию мозга и крови животных при ишемии мозга и их анализ представлены в виде схемы на рис. 9.

Снижение нарушения метаболизм* в ишеиигкрованиом мозге

Рис. 9. Эффекты церебрамина на метаболизм мозга и крови крыс, находящихся в условиях двусторонней окклюзии сонных артерий.

Таким образом, в результате проведенного исследования уточнены механизмы стресс-протекторного действия церебрамина в условиях окклюзии сонных артерий разной продолжительности. В том числе, установлено, что Б АД оказывает положительное влияние на состояние свободнорадикальных процессов, энергетический баланс, уровень эндогенной интоксикации и баланс ионов.

-Ч'

ВЫВОДЫ

1. В условиях 3-минутной окклюзии правой сонной артерии в гемисферах коры на фоне снижения липоперекисей липидов происходит возрастание активности глутатионпероксидазы, глутатионтрансферазы и содержания тиоло-вых групп, при снижении активности глутатионредукхазы и каталазной активности, а также понижении содержания молекул средней массы и соотношения лактат/пируват. В стволовых структурах происходит снижение первичных и накопление вторичных продуктов переокисления, понижение активности глутатионпероксидазы, глутатионредуктазы, а также повышение активности глутатионтрансферазы, содержания ЗН-групп, каталазной активности и уровня молекул средней массы. При этом нарушается ионная емкость митохондрий и увеличивается соотношение лактат/пируват, что свидетельствует о деструкции клеточных мембран и энергетической несостоятельности нейрональных и гли-альных клеток.

2. В условиях 24-часовоЙ окклюзии ЛСА в мозге снижается содержание первичных и накапливаются вторичные продукты переокисления. В коре больших полушарий отмечается снижение уровня восстановленного глутатиона и тиоловых групп, повышение активности глутатионтрансферазы и уровня молекул средней массы, понижение соотношения лактат/пируват на фоне нарушения ионной емкости митохондрий, В стволовых структурах происходит снижение активности глутатионпероксидазы и содержания восстановленного глутатиона одновременно с возрастанием активности глутатионредуктазы, глутатионтрансферазы, содержания тиоловых групп, молекул средней массы и соотношения лактат/пируват на фоне нарушения ионной емкости митохондрий. Эти

факты свидетельствуют об увеличении деструктивных процессов в мозге в условиях хронической оккшозии CÀ по сравнению с переходящей.

3. При двусторонней окклюзии в гемисферах коры снижение содержания продуктов ПОЛ происходит на фоне возрастания активности глутатноперокси-дазы, глутатиошрансферазы и содержания тиоловых групп, тогда'как содержание восстановленного глутатиона и молекул средней массы снижается. Одновременно появляются признаки усиления анаэробного гликолиза. В стволовых структурах происходит накопление ТБК-РП и снижение уровня липоперекисей липидов; возрастание активности глутатионпероксидазы, глутатионтрансфера-' зы, уровня тиоловых групп и каталазной активности и понижение содержания восстановленного глутатиона. Также наблюдается повышение уровня молекул средней массы, соотношения лактат/пируват, нарушения ионной емкости митохондрий. Такое сочетание признаков ншемического и реперфузнонного повреждения регуляторных процессов в мозге усугубляет функциональную несостоятельность свободнорадикальных систем защиты.

\ 4. Введение церебрамина способствует интенсификации свободнорадикальных процессов в стволовых структурах. В то же время в условиях двусторонней окклюзии сонных артерий предварительное введение церебрамина снижало накопление продуктов переокисления в гемисферах коры и способствовало возрастанию липоперекисей в стволовых структурах мозга крыс. Компенсаторные перестройки в системе АО-защиты в мозге и крови животных свидетельствуют о наличии эффекта фармакологического прекондиционирования у церебрамина, что положительно отражается на энергетическом обмене и ионной емкости тканей крыс.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ

!. Даудова Т.Н., Эмирбеков Э.З., Даудова Л,А. Исследование содержания ионов в плазме крови при окклюзии сонных артерий. // Сборник материалов III Международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы современных наук: теория и практика». Том 2. - Днепропетровск, 2006.-С. 41-43.

2. Даудова Л.А. Некоторые особенности энергетического обмена мозга при окклюзии сонных артерий. // XXVII итоговая Научно-техническая конференция преподавателей, сотрудников, аспирантов и студентов ДГТУ. Технические науки, - Махачкала. 2006, - С.203-204.

3. Даудова Л. А., Даудова Т.Н. Влияние окклюзии сонных артерий на свободно-радикальные процессы в мозге и крови крыс Л Наука и образование. - Ростов-на-Дону. - 2006. - № 4. - С. 54-59.

4. Даудова Л.А., Даудова Т.Н. Эффекты церебрамина на свободно-радикальные процессы в мозге и крови крыс в условиях окклюзии сонных артерий. // Наука и образование. - Ростов-на-Дону. - 2006, Xs 4. - С. 60-66.

5. Эмирбеков Э.З., Даудова Л.А., Карантыш ГЛ., Демьяненко C.B. Влияние церебрамина на свободно-радикальные процессы и энергетический обмен в модели двусторонней окклюзии сонных артерий у крыс.// «Известия высших учебных заведений. Северо-Кавказский регион». Естественные науки. Приложение Да 12. - Ростов-на-Дону. - 2006,— С.70-73.

_Подписано в печать 16.11.2006.1М6. Печать офсетная

Усл. леч. л. -1,73 ИЗД. печ. Л. -1.75, Заказ-258 - 06. Тираж 100 экз. Отпечатано в «Деловой мир» Махачкала, ул. Коркмасоаа, 35а

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Даудова, Лейла Абдулмуслимовна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Экспериментальные модели ишемии головного мозга.

1.2. Патогенетические механизмы, лежащие в основе ишемии мозга.

1.3. Нарушение энергетического обмена в головном мозге как фактор нарушения мозгового кровообращения.

1.4. Эффективность биологически активных добавок при нарушении мозгового кровообращения.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Постановка эксперимента.

2.2. Модель ишемии мозга.

2.3. Получение биологического материала.

2.3.1. Получение плазмы крови.

2.3.2. Приготовление суспензии эритроцитов и гемолизатов.

2.3.3. Приготовление гомогенатов мозга.

2.3.4. Получение митохондриальной фракции мозга.

2.4. Биохимические методы исследования.

2.4.1. Определение содержания гидроперекисей липидов и ТБК-РП.

2.4.2. Определение активности каталазы.

2.4.3. Определение активности глутатионпероксидазы.

2.4.4. Определение концентрации восстановленного глутатиона.

2.4.5. Определение активности глутатионредуктазы.

2.4.6. Определение активности глутатион-Б-трансферазы.

2.4.7. Определение содержания тиоловых групп белков.

2.4.8. Определение содержания белка.

2.4.9. Определение содержания гемоглобина.

2.4.10. Определение оксидазной активности церулоплазмина.

2.4.11. Определение содержания молекул средней массы.

2.4.12. Определение содержания глюкозы.

2.4.13. Определение содержания пировиноградной кислоты.

2.4.14. Определение содержания молочной кислоты.

2.4.15. Определение содержания ионов Na+, К+ и Са2+.

2.5. Статистическая обработка.

ГЛАВА 3. ОПИСАНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ.

3.1. Влияние окклюзии сонных артерий на свободнорадикальные процессы в мозге и крови крыс.

3.2. Влияние окклюзии сонных артерий на ионный баланс, энергетический обмен и уровень эндогенной интоксикации в мозге и крови крыс.

3.3. Эффекты церебрамина на свободнорадикальные процессы в мозге и крови крыс в условиях окклюзии сонных артерий.

3.4. Эффекты церебрамина на ионный баланс, энергетический обмен и уровень эндогенной интоксикации в мозге и крови крыс в условиях окклюзии сонных артерий.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Влияние церебрамина на регуляторные процессы в мозге крыс при окклюзии сонных артерий"

Актуальность исследования. Известно, что в патогенезе большинства заболеваний, в том числе и заболеваний, связанных с ишемическим повреждением мозга, важное место занимают цепные процессы свободно-радикального окисления (Тельпухов и др., 1992; Bilenko, 2001). Как правило, эти реакции протекают по механизму перекисного окисления липидов (ПОЛ) (Хачатурьян и др., 1996) и традиционно оцениваются по скорости и количеству образования одного из конечных продуктов окисления малонового ди-альдегида (МДА). Динамика образования продуктов ПОЛ контролируется мембранно-связанной системой биоантиоксидантов, которая, как известно, представлена в основном глутатионзависимыми ферментами (Меньшикова и др., 2006). Кроме того, структурное нарушение мембран в результате интенсификации перекисных процессов после ишемии/реперфузии сопровождается накоплением токсических веществ, усиливающих функциональные нарушения клеток мозга (Жилина, 1999). В литературе имеются сведения о характере ПОЛ при цереброваскулярной патологии (Волошин и др., 1991; Смирнова и др., 2002). Однако, вопросы развития и динамики этих процессов у больных с нарушением мозгового кровообращения в зависимости от основного этиологического фактора и неврологической симптоматики мало изучены, что не позволяет сделать однозначных выводов о механизме развития этой патологии (Владимиров, 1986; Федорова и др., 1999).

Возможности фармакологической коррекции ишемических повреждений мозга широки и включают препараты, влияющие на различные звенья патогенеза постишемического и постгипоксического повреждения нервной ткани. Используются активаторы энергетического метаболизма мозга, ноотропные средства, аминокислоты, препараты, улучшающие синаптическую передачу, антигипоксанты, антиоксиданты, церебральные вазодилятаторы (Стулин и др., 2003; Панченко, 2004). Вместе с тем многие существенные проблемы, касающиеся разработки эффективных способов предупреждения развития и замедления темпов прогрессировать ишемических повреждений мозга, остаются далекими от полного разрешения (Манвелов и др., 1998; Скворцова, Стаховская, 2004). Ввиду сложности и многокомпонентности патогенеза сосудистых заболеваний мозга возникает необходимость применения большого I количества средств, влияющих на различные звенья, что приводит к полипрагмазии, нередко сопровождающейся осложнениями. Поэтому поиск новых возможностей в лечении больных с ишемией мозга, ишемическим инсультом, по-прежнему, является актуальной проблемой (Hacke et al., 2004).

Учитывая сложность нейрохимических реакций при ишемии, не представляется возможным свести выбор терапевтического воздействия до какого-либо единственного лекарственного или физического фактора, поскольку I в процессе лечения необходимо добиться нормализации системного и мозгового кровообращения, скорректировать нарушения метаболизма тканей мозга (Виленский, 1999; Парфенов, 2004; Танашян, 2004).

Таким образом, важнейшими направлениями в снижении метаболических сдвигов при кислородной недостаточности мозга являются нормализация гемоперфузии, использование антиоксидантов и антигипоксантов. В этой связи представляет интерес изучение эффектов отечественных биологически i активных добавок (БАД), таких как «Цитаминов», созданных в Институте биорегуляции и геронтологии РАМН (Морозов и др., 2001). Среди цитаминов в настоящее время при лечении хронической и переходящей ишемии мозга используют БАД - церебрамин.

Цель и задачи исследования. Целью данной работы является выяснение свободнорадикальных механизмов развития ишемических повреждений мозга и коррекция нарушения мозгового кровообращения церебрамином. k Для выполнения поставленной цели нами были выдвинуты следующие задачи:

- изучить состояние свободнорадикальных процессов в мозге и крови животных при переходящей односторонней, хронической односторонней и двусторонней окклюзии сонных артерий.

- изучить изменение уровня эндогенной интоксикации и энергетического об-I мена в мозге и крови животных при переходящей односторонней, хронической односторонней и двусторонней окклюзии сонных артерий.

- изучить влияние церебрамина на свободно-радикальные процессы, ионный баланс, уровень эндогенной интоксикации и энергетический обмен в крови и мозге крыс при двусторонней окклюзии сонных артерий.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Характер свободно-радикальных процессов изменяется в зависимо-I сти от степени нарушения мозгового кровообращения. При 3-минутной окклюзии правой сонной артерии активация глутатионпероксидазы и снижение каталазной активности в коре головного мозга животных отражают незначительное возрастание интенсивности перекисных процессов, тогда как в стволовых структурах происходит нарушение глутатионовой антиоксидантной системы защиты, что приводит к накоплению ТБК-реактивных продуктов. В результате в стволовых структурах возрастает i соотношение лактат/пируват и уровень эндогенной интоксикации.

2. При хроническом пережатии левой сонной артерии на 24 часа в мозге происходит снижение первичных и накопление вторичных продуктов перекисного окисления липидов на фоне понижения активности глутатионпероксидазы и содержания восстановленного глутатиона. Возрастание активности глутатионтрансферазы в гемисферах коры свидетельствует о большей защищенности коры больших полушарий от продуктов ПОЛ (гидрофобных пероксидов). Это отражается на еще большем, чем при переходящем НМК, возрастании соотношения лактат/пируват и нарушении ионной емкости митохондриальной фракции стволовых структур.

3. При двусторонней окклюзии сонных артерий отмечаются сходства в течении свободно-радикальных процессов с моделями как переходящего, так и хронического нарушения мозгового кровообращения, что отражается в нарушении энергетического обмена не только стволовых структур, но и геми-сферы коры и существенных отклонениях в ионной емкости мозга животных.

4. Церебрамин, обладая свойством фармакологического прекондицио-нирования, в модели двусторонней окклюзии сонных артерий способствует снижению влияния нарушения мозгового кровообращения на про- и антиок-сидантные системы, нормализует энергетический обмен и ионную емкость тканей мозга и крови животных.

Научная новизна. Впервые показано, что при окклюзии сонных артерий разной продолжительности смещение баланса про- и антиоксидантов в мозге животных усиливается при увеличении степени нарушения мозгового кровообращения. При переходящем или хроническом пережатии сонной артерии интенсификация свободно-радикальных процессов происходит в стволовых структурах, а при двусторонней окклюзии сонных артерий, - и в коре больших полушарий. Увеличение интенсивности процессов переокисления положительно коррелирует с нарушением энергетического обмена и ионной емкостью в структурах мозга животных.

Впервые установлено, что церебрамин снижает влияние двусторонней окклюзии сонных артерий путем активации антиоксидантной системы защиты, в результате чего происходит уменьшение накопления продуктов переокисления липидов, т.е. нарушения клеточных мембран, что, в свою очередь положительно отражается на энергетическом обмене и ионной емкости клеток мозга и крови.

Теоретическая и практическая значимость работы. Полученные результаты исследований являются вкладом в решение проблем цереброваскулярной патологии, расширяют представления о механизмах этой патологии, дают оценку состояния регуляторных систем мозга и крови.

Результаты проведенного исследования показывают эффективность церебрамина как препарата, снижающего негативные последствия ишемизации ткани мозга, что позволяет рекомендовать его для дальнейших преклиниче-ских исследований при данном осложнении.

Внедрение результатов работы в практику. Основные результаты работы внедрены в учебный процесс в виде методических разработок для проведения практических и семинарских занятий на кафедре биохимии Дагестанского государственного университета и включены в спецкурс «Нейрохи-мия».

Основные публикации. По теме диссертации опубликовано 5 научных работ.

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Даудова, Лейла Абдулмуслимовна

ВЫВОДЫ

1. В условиях 3-минутной окклюзии правой сонной артерии в гемисферах коры на фоне снижения липоперекисей липидов происходит возрастание активности глутатионпероксидазы, глутатионтрансферазы и содержания тио-ловых групп белков, при снижении активности глутатионредуктазы и каталазной активности, а также понижении содержания молекул средней массы и соотношения лактат/пируват. В стволовых структурах происходит снижение первичных и накопление вторичных продуктов переокисления, понижение активности глутатионпероксидазы, глутатионредуктазы, активности катала-зы, а также повышение активности глутатионтрансферазы, содержания SH-групп белков, каталазной активности и уровня молекул средней массы. При этом нарушается ионная емкость митохондрий и увеличивается соотношение лактат/пируват, что свидетельствует о деструкции клеточных мембран и энергетической несостоятельности нейрональных и глиальных клеток.

2. В условиях 24-часовой окклюзии JICA в мозге снижается содержание первичных и накапливаются вторичные продукты переокисления. В коре больших полушарий отмечается снижение уровня восстановленного глутатиона и тиоловых групп белков, повышение активности глутатионтрансферазы и уровня молекул средней массы, понижение соотношения лактат/пируват на фоне нарушения ионной емкости митохондрий. В стволовых структурах происходит снижение активности глутатионпероксидазы и содержания восстановленного глутатиона одновременно с возрастанием активности глутатионредуктазы, глутатионтрансферазы, содержания тиоловых групп, молекул средней массы и соотношения лактат/пируват на фоне нарушения ионной емкости митохондрий. Это свидетельствует об увеличении деструктивных процессов в мозге в условиях хронической окклюзии СА по сравнению с переходящей.

3. При двусторонней окклюзии в гемисферах коры снижение содержания продуктов ПОЛ происходит на фоне возрастания активности глутатиопероксидазы, глутатионтрансферазы и содержания тиоловых групп, тогда как содержание восстановленного глутатиона и молекул средней массы снижается. Одновременно появляются признаки усиления анаэробного гликолиза. В стволовых структурах происходит накопление ТБК-РП и снижение уровня липоперекисей липидов; возрастание активности глутатионпероксидазы, глутатионтрансферазы, уровня тиоловых групп и каталазной активности и понижение содержания восстановленного глутатиона. Также наблюдается повышение уровня молекул средней массы, соотношения лактат/пируват, нарушения ионной емкости митохондрий. Такое сочетание признаков ишеми-ческого и реперфузионного повреждения регуляторных процессов в мозге усугубляет функциональную несостоятельность свободнорадикальных систем защиты.

4. Введение церебрамина контрольным животным способствует интенсификации свободно-радикальных процессов в стволовых структурах. В то же время в условиях двусторонней окклюзии сонных артерий предварительное введение церебрамина снижало накопление продуктов переокисления в ге-мисферах коры и способствовало возрастанию липоперекисей в стволовых структурах мозга крыс. Компенсаторные перестройки в системе АО-защиты в мозге и крови животных свидетельствуют о наличии эффекта фармакологического прекондиционирования у церебрамина, что положительно отразилось на энергетическом обмене и ионной емкости тканей крыс.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Даудова, Лейла Абдулмуслимовна, Махачкала

1. Беркович Е.М. Энергетический обмен в норме и патологии. М.: Медицина. - 1964. - 334 с.

2. Биленко М.В. Ишемические и реперфузионные поражения поражения органов (Молекулярные механизмы, пути предупреждения и лечения). М.: Медицина, - 1989. - 368 с.

3. Биленко М.В., Тельпухов В.И., Чуракова Т.Д., Комаров Р.Г. Влияние ишемии и реперфузии мозга крыс на липидную пероксидацию и защитный эффект антиоксидантов / Бюл. эксперим. биологии и медицины. 1988. Т. 105, № 4. - С. 394-397.

4. Беляков Н.А., Малахова М.Я., Соломенников А.В. Концентрация в крови и биологическая активность молекул средней массы в критических состояниях. // Анаст. и реаниматол., 1987. - № 1. - С. 41-44.

5. Болдырев А.А. Двойственная роль свободнорадикальных форм кислорода в ишемическом мозге / Нейрохимия, 1995. - Т. 12, № 3. - С. 246257.

6. Весельский И.Ш., Саник А. В. Микроциркуляция, реологические свой-^ ства крови, их коррекция при ишемических нарушениях мозгового кровообращения // Журн. невропатол. и психиатр., 1991. - № 11. - С. 6770.

7. Верещагин Н.В., Варакин Ю.Я. Регистры инсульта в России: результаты и методологические аспекты проблемы // Журн. неврологии и психиатрии (приложение «Инсульт»), 2001. - № 1. - С. 25-27.

8. Виленский Б.С. Инсульт: профилактика, диагностика, лечение. СПб., ^ 1999.-336 с.

9. Викторов И.В. Роль оксида азота и других свободных радикалов в ише-мической патологии мозга. // Вестник РАМН, 2000. - № 4. - С. 5-10.

10. Владимиров Ю.А., Арчаков А.И. Перекисное окисление липидов. М., - 1972. - С. 252.

11. Владимиров Ю.А. Развитие хемилюминисцентных методов исследова-^ ния при диагностике сердечно-сосудистых заболеваний. // Биохемилюминисценция в сельском хозяйстве. Наука, - 1986. - С. 47-50.

12. Владимиров Ю.А., Азизова О.А., Деев А.И. и др. Свободные радикалы в живых системах. // Итоги науки и техники. Серия Биофизика. М., -1991.-С. 1-249.

13. Волошин П.В., Яворская В.А., Малахов В.А. Структурно-функциональные свойства эритроцитов у больных атеросклеротиче-ской дисциркуляторной энцефалопатией //Журн. невропатол. и психиатр., -1991.-№ 1. С. 62-65.

14. Гаврилов В.Б., Гаврилова А.Р., Мажуль JI.M. Анализ методов определения продуктов ПОЛ в сыворотке крови по тесту с ТБК// Вопр. мед. химии, 1987. - Т.ЗЗ, № 1. - С. 118-122.

15. Ганнушкина И.В., Шафранова В.П., Федорова Т.Н. и др. Защитный эффект антиоксиданта ионола при ишемии мозга с рециркуляцией в эксперименте. // Журн. патологич. физиология и экспериментальная терапия, -1986.-№ 3. С. 36-38.

16. Голиков С.Н., Саноцкий И.В., Тиунов JI.A. Общие механизмы токсического действия.- JI.: Медицина, 1986.- 280 с.

17. Григоров Ю.Г., Козловская С.Г., Медовар Б.Я. Роль особенностей питания в проблеме долголетия // Вопр геронтологии.- 1996, №6.- С. 79-85

18. Гусев Е. И., Скворцова В.И., Коваленко А.В., Соколов М.А. Механизмы повреждения ткани мозга на фоне острой фокальной ишемии мозга / Журн. невропатологии и психиатрии им. С. С. Корсакова. -1999. Т. 99,№2.-С. 65-70.

19. Гусев Е.И., Скворцова В.И. Нейропротективная терапия ишемического инсульта. //Атмосфера. Нервные болезни, 2002. - № 1. - С. 3-7.

20. Даштаянц Г.А. Клиническая гематология. Киев, - 1978. - 230 с.

21. Дремина Е.С., Шаров B.C., Владимиров Ю.А. Использование кинетики Fe2+- индуцированной хемилюминисценции в трис-буферной суспензии липосом для исследования антиоксидантной активности плазмы крови. // Биофизика, 1993. - Т. 38. - Вып. 6. - С. 1047-1052.

22. Дьяконов М.М. Отечественные биорегуляторы цитамины входят в повседневную врачебную практику // TERRA MEDIC A nova, 2000. № 3. -С. 7.

23. Дьяконов М.М. Цитамины годы и результаты // TERRA medica nova, -2005. - № 1. - Вып. 37. - С. 52-54.

24. Жилина Н.М. Оптимизация диагностики эндогенной интоксикации: Дис. канд. биол. наук. Тула, - 1999. - 122 с.ц 31. Зайчик А.Ш., Чурилов Л.П. Основы общей патологии. Часть 1. СПб.,1999. ЭЛБИ. - 624 с.

25. Зозуля Ю.А., Барабой В.А., Сутковой Д.А. Свободнорадикальное окисление и антиоксидантная защита при патологии головного мозга. -"Знание-М" Москва, 2000. - С. 344.

26. Зоров Д.Б., Банникова С.Ю., Белоусов В.В. и др Друзья или враги. Активные формы кислорода и азота. // Биохимия. 2005. - Т. 70. - Вып. 2.-С. 265-272.

27. Каленикова Е.И., Городецкая Е.А., Мурашев А.Н. и др. Роль свободных радикалов в повышенной чувствительности гипертрофированного миокарда крысы к ишемии. // Биохимия. 2004. - Т. 69. - Вып. 3. - С. 386392.

28. Камышников B.C. Справочник по клинико-биохимической лабораторной диагностике. Минск.: "Беларусь", - 2000. - Т.1. - 495 с.

29. Ким А.В., Джимбладзе Д.Н., Семеновский М.Л. и др. Клапанная патология и ишемический инсульт.// Неврологический журнал, 2004. - № 6.-С. 11-15.

30. Ковалев Г.И. Пресинаптические рецепторы ЦНС млекопитающих как объект фармакологического воздействия.- ИНТ ВИНИТИ. Сер. Фармакология. Химиотерапервтические средства.-1987.- т. 15.- С.3-61.

31. Колб В.Г., Камышников B.C. Справочник по клинической химии. ^ Минск: Беларусь.-1982.-366 с.

32. Колесниченко Л.С., Кулинский В.И. Глутатионтрансферазы.// Успехи современной биологии, 1989.-Т. 107.-Вып. 2.-С. 179-194.

33. Колесова О.Е., Маркин А.А., Федорова Т.Н. Перекисное окисление ли-пидов и методы определения продуктов липопероксидации в биологических средах.// Лабораторное дело, 1984. № 9. - С. 540-546.

34. Комаров Ф.И. Применение пептидных биорегуляторов в клинической ф медицине// В сб. «Геронтологические аспекты пептидной регуляциифункций организма».- СПб: Наука, 1996.- С.48.

35. Коркушко О.В., Хавинсон В.Х., Бутенко Г.М., Шатило В.Б. Пептидные препараты тимуса и эпифиза в профилактике ускоренного старения // С-Пб.: Наука, 2002.- 202 с.

36. Корнеева А.А., Комисарова И.А. Роль глутатиона в формировании метаболического ответа клетки на гипоксию. //Известия АН, сериябиологическая, 1993. № 4. - С. 542-549.

37. Королюк М.А., Иванова Л.И., Майорова И.Г., Токарев В.Е. Метод определения активности каталазы // Лаб. дело.-1988.-№1.-С.16-19.

38. Крыжановский Г.Н. Общая патофизиология нервной системы. Руководство. М.: Медицина, 1997. - 352 с.

39. Кузник Б.И., Морозов В.Г., Хавинсон В.Х. Цитомедины.- С-Пб.: Наука, 1998.-310 с.

40. Лакин Г.Ф. Биометрия. М.: Высшая школа. - 1973.- 343 с.

41. Ланкин В.З. Атеросклероз как пример свободнорадикальной патологии: механизмы нарушения ферментативной регуляции процессов сво-боднорадикального перекисного окисления липидов в биомембранах при атерогенезе.// Биоантиоксидант. Тюмень, 1997. - С. 51-53.

42. Ларкий Э.Г. Методы определения и метаболизм металлобелковых комплексов.// Итоги науки и техники. Серия биологическая химия, 1990. -Т. 41. 118 с.

43. Лыскова Т.И., Аксенцов С.Л., Федорович С.В. и др. Влияние факторов ^ ишемического повреждения на ПОЛ в синаптосомах мозга крыс / Биофизика. 1997. - Т. 43, № 3. - с. 408-411.

44. Малахова М.Я., Соломенников А.В., Беляков Н.А., Владыка А.С. Определение молекул средней массы в сыворотке крови осаждением белков трихлоруксусной кислотой и ультрафильтрацией. // Лабораторное дело, 1987. № 3. - С. 224-227.

45. Малахова М.Я. Формирование биохимического понятия «субстрат эндогенной интоксикации». // Тез. междунар. симп. «Эндогенные интоксикации». СПб., 1994. - С. 38.

46. Малахова М.Я., Беляков Н.А. и др. Количественная оценка тяжестикритического состояния и фаз развития эндогенной интоксикации. // Тез. междунар. симп. «Эндогенные интоксикации». СПб., 1994. - С. 77.

47. Манвелов Л.С., Варакин Ю.Я., Смирнов В.Е., Горностаева Г.В. Профилактика сосудистых заболеваний головного мозга. // Журнал неврологии и психиатрии им. С.С. Корсакова, 1998. № 12. - С. 44-47.

48. Медведев А.В. Патогенез сосудистой деменции. // Ж.неврологии и психиатрии.- 1995. № 5. - С. 97-100.

49. Медицинские лабораторные технологии. Справочник/ Под ред. Кар-пищенко. СПб.: Интермедика, 1999. - Т.2. - С. 23-24.

50. Менджерицкий A.M., Карантыш Г.В., Краснова И.Л., МИхалева И.И., Демьяненко С.В. Адаптогенный эффект дельтарана в модели окклюзии сонных артерий.// Нейрохимия, 2006. № 4. - С. 135-148.

51. Меньшиков В.В. Лабораторные методы исследования в клинике.// Справочник. М.; Медицинаю - 1987.

52. Меньшикова Е.Б., Зенков Н.К. Антиоксиданты и ингибиторы радикальных окислительных процессов. // Успехи современной биологии, 1993.-№4.-С. 112-117.

53. Меныцикова Е.Б., Ланкин В.З., Зенков Н.К. и др. Окислительный стресс. Прооксиданты и антиоксиданты. М.: Фирма «Слово», 2006. -556 с.

54. Методы биохимических исследований// Учебное пособие. Под ред. М.И. Прохоровой. Изд. Ленинградского университета. Ленинград. -1982.-С. 37-38.

55. Морозов В.Г., Рыжак Г.А., Малинин В.В. Цитамины (биорегуляторы клеточного метаболизма). СПб., 2001. 103 с.

56. Нагнибеда Н.Н. Изменение содержания катехоламинов в тканях и биологических жидкостях при гипоксии.// Hipoxia Medical J., 1994. № 2. -P. 15-16.

57. Новиков B.C., Смирнов B.C. Иммунофизиология экстремальных состояний. СПб.: Наука. 1995. - 172 с.

58. Олешкевич Ф.В., Скороход А.А., Федулов А.С., Мойсеенок А.Г. Анти-оксидантная терапия при хирургическом лечении артериальных аневризм головного мозга / Материалы VI международной конференции "Биоантиоксидант". Москва, 2002, с. 432-434.

59. Осипов А.Н. Якутова Э.Ш., Владимиров Ю.А. Образование гидро-ксильных радикалов при взаимодействии гипохлорита с ионами железа. // Биофизика.- 1993. Т. 38. - вып. 6. - С. 390-396.

60. Панин Л.Е. Энергетические аспекты адаптации. Л.: Медицина, 1978.-191 с.

61. Панченко Е.П. Место антиагрегантов в профилактике и лечении ише-мических инсультов.// Кардиоваскулярная терапия и профилактика, 2004.-№3.-4. 1.-С. 88-93.

62. Парфенов В.А. Профилактика повторного ишемического инсульта. // Consilium medicum. Репринт, 2004. № 2. - С. 3-6.

63. Пожаров В.П., Миняйленко Т.Д. Перекисное окисление липидов в условиях тяжелой гипоксии: возможные механизмы адаптации.// Hipoxia. Medical J., 1993. -№3.- С. 13-17.

64. Покровский А.В. Может ли кардиолог спасти больного от инсульта? // Кардиология.- 2003. Т. 44. - № 3. - С. 4-6.

65. Покровский А.В. 20 лет работы сосудистого отделения. М.: «Новости». - 2004. - 256 с.

66. Преображенский Д.В., Сидоренко Б.А., Пересыпко М.К. Принципы и цели длительной антигипертензивной терапии при гипертонической болезни. // Кардиология.- 1999. № 9. - С. 80-90.

67. Ракитский В.Н. Проблема оценки потенциальной и реальной опасности в санитарной токсикологии и гигиене: Сб. науч. тр. Уфа. - 1997. -С.12-14.

68. Раевский К.С., Башкатова В.Г., Ванин А.Ф. Роль оксида азота в глута-матергической патологии мозга. // Вестник РАМН, 2000. № 4. - С. 1115.

69. Середенин С.Б., Дурнев А.Д. Фармакологическая защита генома. М.: ВИНИТИ, 1992.-162 с.

70. Скворцова В.И. Современные подходы к терапии ишемического инсульта. // Междун. журн. медицинской практики, 2000. № 4. - С. 3334.

71. Скворцова В.И. Механизмы повреждающего действия церебральной ишемии и нейропротекция. // Вестник РАМН, 2003. № 11. - С. 74-81.

72. Скворцова В.И., Стаховская JI.B. Роль клопидогеля во вторичной профилактике ишемического инсульта. // Фарматека, 2004. № 9-10. - С. 1-5.

73. Скворцова В.И. Артериальная гипертония и цереброваскулярные нарушения. // Consilium Medicum.- 2005. № 2. - С. 3-10.

74. Скороход А.А. Влияние антиоксидантной терапии на уровень продуктов перекисного окисления липидов крови больных с артериальными аневризмами головного мозга / Материалы VI международной конференции "Биоантиоксидант". Москва, 2002, с. 530-531.

75. Соколовский В.В., Кузьмина B.C., Москадынова Г.А., Петрова Н.Н. Спектрофотометрическое определение тиолов в сыворотке крови// Клин. Лабор. Диагностика. 1997. - №11. - С. 20-21.

76. Стулин И.Д., Мусин Р.С., Белоусов Ю.Б. Инсульт с точки зрения доказательной медицины. // Качественная клиническая практика, 2003. № 4.-С. 1-17.

77. Танашян М.М. Реперфузионная терапия при ишемических нарушениях j. мозгового кровообращения. // Атмосфера. Нервые болезни, 2004. № 1.-С. 2-7.

78. Тельпухов В.И., Биленко М.В., Хохлов А.В., Комаров П.Г. Изменение ЭЭГ и ВНД крыс при использовании для противоишемической защиты головного мозга ацелизина.// Бюлл. экспер. биол. и мед., 1992. № 3. -С. 245-247.

79. Топчян А.В., Мирзоян Р.С., Баласанян М.Г. Локальная ишемия мозга ^ крыс, вызванная перевязкой средней мозговой артерии. // Экспер. иклин, фармакол.- 1996. Т. 59. - № 5.- С. 62-64.

80. Федорова Т.Н., Болдырев А.А., Ганнушкина И.А. Перекисное окисление липидов мозга при экспериментальной ишемии мозга. // Биохимия, 1999.-Т. 64.-Вып. 1.-С. 94-98.

81. Хачатурьян М.Л., Гукасов В.М., Комаров П.Г. и др. Показатели пере-кисного окисления липидов органов крыс с различной устойчивостью к

82. Т гипоксии. \\ Бюлл. экспер. биол. мед., 1996. -Т. 121. № 1. - С. 26-29.

83. Шаронов Б.П., Говорова Н.Ю. Антиокислительные свойства деградация сыворотки активными формами кислорода (CV, ОСГ), генерируемыми стимулированными нейтрофилами. // Биохимия, 1988. Т. 53. -Вып. 5.-С. 816-825.

84. Юнкеров В.И., Григорьев С.Г. Математико-статистическая обработка данных медицинских исследований. СПб.: ВМедА. - 2002. - 266 с.

85. Юрженко Н.Н., Французова Н.А., Антоненко Л.И. Роль свободнорадикального окисления в патогенезе антиоксидантной недостаточности и пути его коррекции. // Биоантиоксидант.: Тез. Докл. III Всес. конф.: М., 1989.- Т. 1.-С. 75.

86. Якутова Э.Ш., Дремина Е.С., Евгина С.А. и др. Образование свободныхрадикалов при взаимодействии гипохлорита с ионами железа (II). // Биофизика. 1994. - Т. 39. - Вып. 2. - С. 275-279.

87. Adams R., Fischer I.M. Pathology of cerebral vascular occlusion.// In b. Pathogenesis and treatment of cerebrovascular diseases. Springfield. 1961. -P. 126-142.

88. Adams JM, Cory S. The Bcl-2 protein family: Arbiters of cell survival //

89. S Science 1998; Vol. 281:1322-1326.

90. Asaho Т., Matsui T. Various pathogenetic factors revolving around the central role of protein kinase С activation in the occurrence of cerebral vasospasm // Critical Rev. in Neurosurgery. 1998. - Vol. 8, № 3. - P. 176-187.

91. Ashwal S., Cole D., Osborne S. et al. A new model of neonatal stroke: reversible middle cerebral artery occlusion in the rat pup.// Pediatr. Neurol., 1995.-Vol. 12.-P. 191-196.

92. T 103. Astrup J., Siesjo B.K., Symon L. Thresholds in cerebral ischemia theischemic penumbra.// Stroke, 1981. Vol. 12. - № 6. - P. 723-725.

93. Bada Т., Black K.L., Ikezaki K. et al. Intracarotid infusion of leukotriene C4 selectivily increases blod-brain permeability after focal ischemia in rats // J. CBF and Metabolism. 1991. - Vol. 11, № 4. - P. 638-644.

94. Bari F., Louis T.M., Buija D.W. Effects of ischemia on arteriolar dilatation to arterial hypoxia in piglets.// Stroke, 1998. Vol. 29. - P. 222-227.

95. Benjelloun N., Renolleau S., Represa A., Ben-Ari Y., Charriaut-Marlangue1. B1

96. C. Inflammatory responses in the cerebral cortex after ischemia in the P7 neonatal rat.// Stroke Sept., 1999. P. 1916-1924.

97. Benzi G., Pastoris 0., Villa R.F., Giuffrida A.M. Influence of aging and exogenous substances on cerebral energy metabolism in posthypoglycemic recovery.// Biochem. Pharmacol., 1985. Vol. 34. - № 9. - P. 1477-1483.

98. Bilenko M.V. Free Radical Mechanisms of Ischemic and Reperfusion Injuries to Varies Organs./ Monographia. Nova Science Publishers, Inc. Huntington, New York, 2001.-380 p.

99. V 112. Brown M.M., Wade J.P., Bishop C.C.R., Russei R.W.R. Reactivity jf cerebral circulation in patients with carotid occlusion.// J. Neuron. Neurosurg. Psychiatr., 1986. Vol 49. - P. 899-904.

100. Briviba K., Kissner R., Koppenol W.H., Sies H. Kinetic study of the reaction of glutathione peroxidase with peroxynitrite.// Chem. Res. Toxicol., 1998. -Vol. 11.-P. 1398-1401.

101. Caner H. The role of lipid peroxidation in the genesis of vasospasm secondary to subarachnoid hemorrhage // Kobe J. Med. Sci. 1991. - Vol. 37, № l.-P. 13-20.

102. Caner H. Lipid peroxide level increase in experimental hydrocephalus // Acta Neurochir. (Wien). 1993. - Vol. 121, № 1-2. - P. 68-71.

103. Caner H. The role of lipid peroxidation in the genesis of vasospasm secondary to subarachnoid hemorrhage // Kobe J. Med. Sci. 1991. - Vol. 37, № l.-P. 13-20.

104. Chapman N., Huxley R., Anderson C. et al. Effects of a perindopril-based blood pressure-lowering regimen on the risk of recurrent stroke according to stroke subtype and medical history. The PROGRESS Trial.// Strore, 2004. -Vol. 35.-№ l.-P. 116-121.

105. Chen Y., Engidawork E., Loidl F. et al. Short- and long-term effects of perinatal asphyxia on monoamine, amino acid and glycolysis product levels measured in the basal gandlia of the rat.// Brain Res. Dev. Brain Res., 1997. -Vol. 104.-P. 19-30.

106. Counsell C., Dennis M., McDowall M., Warlow C. Predicting outcome after acute and subacute stroke: development and validation of new prognostic models.// Stroke, 2002. - Vol. 33. - P. 1041-1047.

107. Dell'Anna E., Chen Y., Engidawork E. et al. Delayed neuronal death following perinatal asphyxia in rat.// Exp. Brain Res., 1997. Vol. 115. - P. 105115.

108. Del Rio L.A., Sandalio L.M., Palma J.M. et al. Metabolism of oxigen radicals in peroxisomes cellular implication.// Free Radical Biol, and Med., 1992.-Vol. 13.-P. 557-580.

109. Derlon J.M., Bouvcird G., Viader F. et al. Impaired cerebral hemodymaics in internal carotid occlusion.// Cerebrovasc. Dis., 1992. Vol. 2. - P. 72-81.

110. Deshmukh M., Johnson E.M. Programmed cell death in neurons: focus on the pathway of nerve growth factors deprivation-inducted death of sympathetic neurons.// Molecular Pharmacology, 1997. - Vol. 51. - P. 897-906.

111. Desilva D., Aust S.D. Stoichiometry of Fe (II) oxidation during ceruloplas-min-catalyzed loading of ferritin.// Arch. Biochem. Biophys., -1992. Vol. 298.-P. 259-264.

112. Deugin N., Wendland M., Miramatsu K. et al. Evolution of brain injury after transient middle cerebral artery occlusion in neonatal rats.// Stroke, -2000. -Vol. 31.-P. 1752.

113. Dijkhuizen R.M., Knollema S., Bart van der Worp H. et al. Dynamics of tissue injury and perfusion after hypoxia-ischemia in the rat.// Stroke, -1998. -Vol. 29.-P. 695-704.

114. Draper H.H., Squires E.J., Mahmoodi H. Et al. A comparative evaluation of thiobarbituric acid the determination of malondialdehyde in biological materials.// Free Radical Biol. Med., 1993. Vol. 15. - P. 353-364.

115. Esker R.D., Pichelmann M.A., Meissner I. et al. Durability of carotied en-darterectomy.// Stroke, 2003. Vol. 34. - № 12. - P. 2941-2944.

116. Ellman G.L. Tissue sulfhydryl groups// Arch. Biochem. Biophys. 1959. -Vol.82.-P.70-81.

117. Engidawork E., Chen Y., Dell'Anna E. et al. Effect of the perinatal asphyxia on systemic and intracerebral pH and glycolysis metabolism in the rat.// Exp. Neurol., 1997. Vol. 145. - P. 390-396.

118. Floyd R. Role of oxygen free radicals in brain ischemia. // FASEB.- 1990. Vol. 4, № 9.-P. 2587-2597.

119. Fullerton H.J., Ditelberg J.S., Chen S.F. et al. Copper/zinc superoxide dis-mutase transgenic brain accumulates hydrogen peroxide after perinatal hypoxia ischemia.// Ann Neurol., 1998. Vol. 44. - P. 357-364.

120. Ginsberg N.D. The new language of cerebral ischemia.// AJNR Am. J. Neu-roradiol., 1997. Vol. 18. - № 8. - P. 1435-1445.

121. Ginsberg N.D., Pulsinelli W.A. The ischemic Penumbra, injury thresholds, and the therapeutic window for acute stroke.// Ann. Neurol., 1994. Vol. 36,-№4.-P. 553-554.

122. Greishen G. Ischemia of the preterm brain.// Biol. Neonate, 1992. Vol. 62. -P. 243-247.

123. Gunzler W.A., Flohe L. Glutathione peroxidase// Handbook of methods for oxygen radical research. Boca Ration: CRC Press, 1986. - P. 203-211.

124. Gutterdge J.M.C. Antioxidant activity of ceruloplasmin.// Handbook of Me-tods for Oxigen Radicals by normal human plasma: The important primary role iron-oxidising proteins.// Biochim. Biophys. Acta, 1992. Vol. 1159. -P. 248-254.

125. Hall E.D., Andrus P.K., Althaus J.S., von Voiglander P.E. Hydroxyd radicals production and lipid peroxidation paralells selective post-ischemic vulnerability in gerbil brain // J. Neuroch. Res. 1993. - Vol. 34. - P. 107-112.

126. Hacke W., Kaste M., J. Bogousslavsky et al. Ишемический инсульт. Профилактика и лечение. European Stroke Initiative. - Пер. с анг. С.В. Моисеева. - 2004. - 24 с.

127. Hardeland R., Reiter R.J., Poeggeler В., Tan D.-X. The significance of the metabolism of neurogormone melatonin: antioxidative protection and formation ofbioactive substance.//Neurosci. Biobehav. Res., 1993. Vol. 17. - P. 347-357.

128. Hattori H., Morin A., Schwartz P. et al. Posthypoxic treatment with MK-801 reduses hypoxic-Ischemic damage in the neonatal rat.// Neurology, 1989. -Vol. 39.-P. 713-718.

129. Hickenbottom S.L., Grotta J. Neuroprotective therapy.// Semin. Neurol., 1998.-Vol. 18.- №4. -P. 485-492.

130. Hillered L., Chan P.H. Role of arachidonic acid other free fatty acids in mitochondrial dysfunction in brain ischemia // J. Neurosci. Res. 1988. -Vol. 20.-P. 451-456.

131. Hoeger H., Englemann M., Bernet G. et al. Long term neurological and behavioral effects of graded perinatal asphyxia in the rat.// Life sciences, 2000. -Vol. 66.-P. 947-962.

132. Hoffman M.E., Mello-Filho A.C., Meneghini R. Correlation between cytotoxic effect of hydrogen peroxide and the yield of DNA strand breaks in cells of different species.// Biochim. Biophys. Acta., 1984. Vol. 781. - P. 234-238.

133. Horakova L., Lukovic L., Uraz V., Stole S. Time course of lipid peroxidation during incomplete ischemia followed by reperfusion in rat brain // Physiol. Bohemoslov. 1990.-Vol. 39, № 6. - P. 513-517.

134. Iuvone L., Geloso M.C., Dell'Anna. Changes in open field behavior, spatial memory, and hippocampal parvalbumin immunoreactivity folloving enrichment in rats exposed to neonatal anoxia.// Exp. Neurol., 1996. Vol. 13. - P. 9, 25-33.

135. Jeroudi M.O., Triana F.J., Bharat S.P., Bolli R. Effect of superoxide dismu-tase and catalase, given separately, on myocardial «stunning».// Amer. J. Physiol., 1990.-Vol. 253. P. H889-H901.

136. Kamii H., Kato I., Kinouchi H. et. al. Amelioration of wasospasm after subarachnoid hemorrhage in transgenic mice overexpressing CuZn-superoxide dismutase // Stroke. 1999. - Vol. 30, № 4. - P. 867-871.

137. Kathman A.N., Herschkowitz N. Arachidonic acid participates in the anoxia-induced increase in mEPSC freguency in CAI neurons of the rat hippocampus // Neurosci. Lett. 1994. - Vol. 68. - P. 217-220.

138. Katsuki H., Okuda S. Arachidonic acid as a neurotaxic and neurotrophic substence // Prog, in Neurobiol. 1995. - Vol. 46. - P. 607-636.

139. Kohlhauser C., Mosgoeller W., Hoeger H. et al. Colinergic, monoaminergic and glutamatergic changes following perinatal asphyxia in the rat.// Cell Mol. Life Sci., 1999,-Vol. 55.-P. 1491-1501.

140. Kohlhauser C., Kaehler S., Mosgoeller W. Histological changes and neurotransmitters levels three month following perinatal asphyxia in the rat.// Life Sci., 1999.-Vol. 64.-P. 2109-2124.

141. Kohlhauser C., Mosgoeller W., Hoeger H., Lubec B. Mielination deficits in brain of rats following perinatal asphyxia.// Life Sci., 2000. Vol. 67. - P. 2355-2368.

142. Kuriyama Y., Nakamura M., Kyougoku I., Sawada T. Effects of carvedilol on cerebral blood flow and its autoregulation in previous stroke patients with hypertension.// Eur. J. Clin. Pharmacol., 1990. Vol. 38. - P. S120-S21.

143. Lazzarino G. The relevance of malondialdehyde as a biochemical index of lipid peroxidation of postischemic tissues in the rat and human beings // Biol. Trace Elem. Res. 1995. - Vol. 47, № 1-3. - P. 165-170.

144. Link E.M. Enzymic pathways involved in cell response to H2O2.// Free radic. Res. Commun., 1990. Vol. 11. - P. 89-97.

145. Lowry O.H. et al. (1951) уточнить

146. Lubec В., Kozlov A., Krapfenbauer K. et al. Nitric oxide and nitric oxide syntase in the early phase of perinatal asphyxia of the rat.// Neurosci., 1999. -Vol. 93.-P. 1017-1023.

147. Macdonald R.D., Wallace M.C., Coyne T.J. The effect of surgery the severity of vasospasm // J. of Neurosurg. 1994. - Vol.80, №3. - P. 433- 439.

148. Mares J. Models of focal hypoxia of the central nervous system.// Chesk. Fysiol. 1995. - Vol. 44. - № 4. - P. 183-187.

149. McConkey D.J., Zhivotovsky В., Orrenius S. Apoptosis-molecular mechanisms and biomedical implications //Molec. Aspects Med., 1996. — Vol. 17. -P. 1-110.

150. Meisel C., Prass K., Braun J. et al. Preventive antibacterial treatment improves the general medical and neurological outcome in a mouse model of stroke.// Stroke, 2004. Vol. 36. - № 1. - P. 2-6.

151. Mills G.C. Hemoglobin catabolism. I. Glutathione peroxidase, an erythrocyte enzyme which protects hemoglobin from oxidative breakdown.// J. Biol. Chem., 1957.-Vol. 229.-P. 189-197.

152. Minghetti L., Polazzi S., Nicolini A. et al. Interferon-gamma and nitric oxide down regulate LPS-induced prostanoid production in cultured red microglial cells by inhibiting cyclooxigenase-2 expression // J. Neurochem. -1996.-Vol. 66.-P. 1963-1970.

153. Mitsufuji N., Yoshioka H., Okano S. et al. A new model of transient cerebral ischemia in neonatal rats.// J. Cereb. Blood Flow Metab., 1996. Vol. 16. -P. 237-243.

154. Moncada S., Palmer R.M.J., Higgs E.A. Nitric Oxide: Physiology, pato-physiology and pharmacology.// Pharmacol. Revs.- 1991. Vol. 43. - P. 109-142.

155. Muratmatsu K., Fukuda A., Todari H. et al. Vulnerability to cerebral hypoxic-ischemic insult in neonatal but not in adult rats is in parallel with disruption of the blood-brain barrier.// Stroke, 1997. Vol. 28. - P. 2281-2288.

156. Nedelcu J., Clein M.A., Aguzzi A. et al. Biphasic edema after hypoxic-ischemic brain injury in neonatal rats reflecs early neuronal and late glial damage.// Pediatric Research, 1999. Vol. 46. - P. 297-304.

157. Palek J., Kahr K.E. Mutations of the red blood cell memran proteins: from clinical evaluation to detection of the underlying genetic defect.// Blood, 1992.-Vol. 80.-P. 308-330.

158. Parke D.V. Activation mechanisms to chemical toxicity // Arch. Toxicol., 1987.-Vol. 60.-№ l.-P. 5-15.

159. Pasgulin A. Epidemiology and pathophysiology of cerebral vasospasm following subrachnoid hemorrhage // J. Neurosurg. Sci. 1998. - Vol. 42, № 1, Suppl l.-P. 15-21.

160. Pellegrini-Giampietro D.P., Chtrici G., Alesiani M. et al. Excitatory amino acid release and free radical formation may cooperate in the genesis of ischemia induced neuronal damage // J. Neurosci. - 1990. - Vol. 10. - P. 1035-1041.

161. Pompella A., Maellaro E., Casini A.F. et al. Measurement of lipid peroxidation in vivo: A comparison of different procedures.// Lipids, 1987. Vol. 22. -P. 206-211.

162. Pulera M.R., Adams L.M., Liu H. et a. Apoptosis in a neonatal rat model of Cerebral hypoxia-ischemia.// Stroke, 1998. Vol. 29. - P. 2622-2630.

163. Pulsinelli W.A., Brierley J.B., Plum F. Temporal profile of neuronal damage in a model of transient forebrain ischemia.// Ann. Neurol., 1982. Vol. 11.-P. 491-498.

164. Purves V.L. The physiology of the cerebral circulation. // Cambridge: Univ.press. 1972. - 367 p.

165. Raju T.N.K. Some animal models for the study of perinatal asphyxia.// Biol. Neunate., 1992.-P. 202-214.

166. Renolleau S., Aggoun-Zouaoui D., Ben-Ari Y., Charriaut-Marlangue С. A model of transient unilateral focal ischemia with reperfusion in the P7 neonatal rats.//Stroke, 1998. Vol. 29. - P. 1454-1461.

167. Richards D.M.C., Dean R.T., Jessup W. Membrane proteins are critical targets in free radical mediated cytolysis.// Biochim. Biophys. Acta., 1988. -Vol. 946.-P. 281-288.

168. Rotruch J.T., Pope A.L., Ganther H.E. et al. Selenium: Biochemical role as a component of glutathione peroxidase.// Science, 1973. Vol. 179. - P. 585590.

169. Sano K. Acute ischemic and delayed ischemic neurological deficit as the causes of bad grading in aneurismal subarachnoid hemorrhage // Neurolog. Res.- 1994.-Vol.16.-P. 35-39.

170. Sano K. Grading and timing of surgery for aneurismal subarachnoid hemorrhage //Neurolog. Res. 1994. - Vol.16. - P.23-26.

171. Schurr A., Changaris D.G., West C.A., Rigor B.M. Glutamine protects neuronal function against hypoxie in vitro. In: Mechanisms of cerebral ischemia and stroke (ed by G. Sonijen). -N.Y.; L.: Plenum Press, 1999. P. 423-425.

172. Schwartz P.H., Massarweh W.F., Vinters H.V., Wasterlain C.G. A rat model of severe neonatal hypoxic-ischemic brain injury.// Stroke, 1992. Vol. 23. -P. 539-546.

173. Scremlin O.U. The Rat Cerebral Vascular System./ Academic Press Inc., 1995.-P. 3-35.

174. Semenov D.G., Tyul'kova I.I., Samoilov M.O., Lazarevich Involvement of intracellular regulatory systems in the adaptive effects of transient anoxia in vitro.// Neurosci. Behav. Physiol., 2000. Vol. 30. - № 3. - P. 357-363.

175. Siems W., Brenke R. Changes in the glutatione system of erytrocytes due to enhanche formation of oxygen free radicals during short-term whole body cold stimulus.// Arctic. Res., 1992. Vol. 51. - P. 3-9.

176. Sies H., Sharov V.S., Klotz L.-O., Briviba K. Glutathione peroxidase protects against peroxynitrite-mediated oxidations.// J. Biol. Chem., 1997. -Vol. 272.-P. 27812-27817.

177. Siesjo B.K. Pathophysiology and treatment of focal cerebral ischemia. // Part I: Pathophysiology. J. Neurosurg, 1992. Vol. 77. - № 2. - P. 169-184.

178. Shigeno Т., Teasdale G.M., McCulloch J., Graham D.I. Recirculation model following MCA occlusion in rats. Cerebral blood flow, cerebrovascular permeability, and brain edema.// J. Neurosurg., 1985. Vol. 63. - P. 272274.

179. Stainbsy W. Local control of regional blood flow. // Ann. Rev. Physiol. -1973.-Vol. 35.-P. 151-168.

180. Stoll G., Jander S., Schroeter M. Inflammation and glial responses in ischemic brain lesions // Progr. in Neurobiol. 1995. - Vol. 46. - P. 607636.

181. Stoll G., Jander S., Schroeter M. Inflammation and glial responses in ischemic brain lestions // Progr. Neurobiol., 1998. Vol. 56. - № 2. - P. 149-171.

182. Straub S., Junghans U., Jovanovic V. et al. Systemic trombolysis with recombinant tissue plasminogen activator and tirofiban in acute middle cerebral artery occlusion.// Stroke, 2004. Vol. 35. - № 3. - P. 705-709.

183. Vannucci R.C., Christensen M.A., Stein D.T. Regional Cerebral Glucose utilization in the immature rat: effect of hypoxia-ischemia.// Pediatr. Res., 1989.-Vol. 26. P. 208-214.

184. Varga S.I., Novak Z., Pataki L. et al. The influence of antioxidants on the oxidative stress of red blood cells.// Clin. Chim. Acta, 1992. Vol 205. - H. 241-244.

185. Wahlgren N.G. Cytoprotective therapy for acute stroke./ In: M. Fisher (Ed.) Stroke Therapy. Boston: Butterworth and Heinemann, 1995. P. 315-350.

186. Yoshida S., Abe K., Busto R. et al. Influence of transient ischemia on lipide-soluble antioxidants, free fatty acids and energy metabolism in rat brain // Brain Res., 1982.-Vol. 245.-P. 307-316.

187. Yoshida S., Inoh S., Asano T. et al. Effect of transient ischemia on free fatty acids and phospholipids in the gerbil brain. Lipid peroxidation as a possiblecause of postischemic injury // J. Neurosurg. 1980. - Vol. 53, № 3. - P. 323-331.

188. Zalewska M.M., Wilson D.F. Lipid hydroperoxides inhibit reacylation of phospholipids in neuronal membranes // J. Neurochem. 1989. - Vol. 52. -P. 255-260.

Информация о работе

Даудова, Лейла Абдулмуслимовна
кандидата биологических наук
Махачкала, 2006
ВАК 03.00.04

Диссертация

Влияние церебрамина на регуляторные процессы в мозге крыс при окклюзии сонных артерий - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы