Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

Влияние селенорганических препаратов на формирование урожая вешенки устричной

ВАК РФ 06.01.09, Растениеводство

Автореферат диссертации по теме "Влияние селенорганических препаратов на формирование урожая вешенки устричной"

На правах рукописи

Полубояринов Павел Аркадьевич

ВЛИЯНИЕ СЕЛЕ НОРГАНИ ЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ НА ФОРМИРОВАНИЕ УРОЖАЯ ВЕШЕНКИ УСТРИЧНОЙ (РЬЕДООТШ ОвТЛЕАТив (Кг.) Китш.)

Специальность: 06.01.09-растениеводство

Автореферат диссертации на соискание учёной степени кандидата сельскохозяйственных наук

Пенза 2006

Диссертационная работа выполнена на кафедре биологии и экологии ФГОУ ВПО «Пензенская государственная сельскохозяйственная академия» в 1999-2005 гг.

Научный руководитель - доктор биологических наук, профессор

Ведущая организация - ГНУ «Пензенский научно-исследовательский институт сельского хозяйства»

Защита состоится 29 марта 2006 года в 10 часов на заседании диссертационного совета Д. 220.053.01 в Пензенской государственной сельскохозяйственной академии по адресу: 440014, г. Пенза, ул. Ботаническая, 30.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Пензенской государственной сельскохозяйственной академии.

Автореферат разослан «/Г» 2006 г.

Учёный секретарь диссертационного совета -

А.И. Иванов

Официальные оппоненты: доктор сельскохозяйственных наук,

профессор А.П. Стаценко

кандидат сельскохозяйственных наук, доцент А.С. Власов

доктор сельскохозяйственных наук

В.А. Гущина

¿00£А_ 496°

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. В условиях современного интенсивного культивирования съедобных грибов актуальным вопросом является поиск новых препаратов, обладающих физиологической активностью в отношении роста и развития мицелиальных культур, а также плодовых тел базидиальных макромицетов. Не менее важным аспектом является изучение влияния новых препаратов на контаминантную микрофлору, затрудняющую культивирование съедобных грибов.

Из литературных источников известно о стимулирующем влиянии на рост мицелия агарикоидных грибов ультрамалых концентраций неорганических соединений селена - селенита и селената натрия. Интерес к селену также в значительной степени вызван эссенциальностью этого элемента в питании человека. Однако следует отметить высокую токсичность неорганических соединений селена для животных и человека.

Намного меньшей токсичностью (40-100 раз) обладают селенорганиче-ские соединения: ДАФС-25 (диацетофенонилселенид), СП-1 (9-фенил-сим-нонагидро-10-селенаантрацен) и 13СПС-1 (трийодид 9-фенил-сим-октагидро-10-селенониантрацена). Важно то, что данные соединения при полном отсутствии мутагенных свойств обладают антиоксидантным действием, совместимостью с любыми ингредиентами питательных сред и субстратов, защищая их от окислительной деструкции.

В связи с этим особую актуальность приобретают исследования, посвященные изучению влияния соединений селена на рост и развитие мицелиальных культур грибов.

Цели и задачи исследований. Целью настоящей работы было изучение влияния селенорганических препаратов на рост и развитие базидиальных макромицетов.

В ходе исследования были поставлены следующие научные задачи:

1) изучить возможности применения селенорганических препаратов ДАФС-25, СП-1 и 13СПС-1 в грибоводстве для повышения урожайности плодовых тел вешенки устричной;

2) определить влияние селенорганических препаратов на характер роста и культурально-морфологические признаки мицелиальных культур вешенки устричной и других видов культивируемых грибов;

3) исследовать возможность использования селенорганических препаратов для ингибирования контаминантной микрофлоры;

4) выявить влияние селенорганических препаратов на рост и развитие культур микромицетов;

5) проанализировать характер влияния селенорганических препаратов на активность ряда ферментов микромицетов и базидиальных макромицетов;

6) определить экономическую эффективность применения селенорганических препаратов при выращивании вешенки устричной.

Научная новизна. Впервые детально было изучено влияние селенорганических препаратов на развитие мицели ттелей раз-

личных семейств базидиальных макромицетов; выявлено селективное действие селенорганических препаратов: стимулирующее в отношении базидиальных макромицетов и ингибирующее в отношении некоторых видов контаминантой микрофлоры и культур микромицетов; выявлено ингибирующее влияние селенорганических препаратов на ряд ферментов грибов.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Селенорганический препарат ДАФС-25 при внесении в субстратные блоки повышает урожайность плодовых тел вешенки устричной (Pleurotos ostreatus (Fr.) Kumm.) на 8,5... 11,4 %.

2. Применение селенорганических препаратов для стимуляции роста ми-целиальных культур вешенки устричной может быть использовано для сокращения производственного цикла при производстве посевного материала.

3. Селенорганические препараты оказывают стимулирующее влияние на мицелиальные культуры не только вешенки, но и других культивируемых грибов, в первую очередь таких, как шампиньон двуспоровый (Agaricus bisporus L.: Pers.), шампиньон двукольцевой (Agaricus bitorquis (Quel.) Sacc.), опенок зимний (Flammulina velutipes (Curt.: Fries) Karst.), трутовик лакированный (Gano-derma lucidum (Fr.) Karst.).

4. Селенорганические препараты обладают иигибирующей активностью в отношении микромицетов родов Aspergillus, Fusarium, Tnchoderma, Chaetom-íum, Mucor, поражающих субстрат при культивировании вешенки.

Практическая ценность работы. Установлено, что добавление селенорганических препаратов в агаризованные питательные среды оказывает положительное воздействие на развитие мицелиальных культур большинства видов базидиальных макромицетов, что дает основания рекомендовать внесение данного вещества как компонента искусственных и синтетических питательных сред для базидиальных макромицетов. Кроме стимулирующего эффекта в отношении макромицетов выявлена ингибирующая активность этих же концентраций селенорганических соединений в отношении некоторых видов контаминантной микрофлоры и культур микромицетов. Выяснена возможность применения селенорганических препаратов как стимуляторов роста посевного мицелия вешенки устричной и шампиньона двуспорового, а также препарата ДАФС-25 как стимулятора плодоношения у вешенки устричной.

Апробация. Основные положения диссертации доложены на расширенном заседании кафедры биологии и экологии ПГСХА. Материалы диссертации сообщались на международной научно-практической конференции 23-24 ноября 2000 г. (Пенза), научно-практической конференции, посвященной 75-летию со дня рождения профессора Г.Б. Гальдина (Пенза, 2003), конференции «Актуальные проблемы экологии» (Томск, 2004), международной научно-практической конференции, посвящённой 50-летию кафедры общего земледелия, «Актуальные проблемы земледелия на современном этапе развития сельского хозяйства» (Пенза, 2004), международной научной конференции «Биология, систематика и экология грибов в природных экосистемах и агрофитоценозах» (Минск, 2004), УП1 молодежной конференции ботаников в Санкт-Петербурге

(Санкт-Петербург, 2004), научно-практической конференции агрономического факультета ПГСХА «Роль науки в развитии АПК» (Пенза, 2005).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 8 работ.

Объём и структура работы. Диссертация состоит из введения, 8 глав, выводов и предложения для производства, списка литературы (105 наименований, в т. ч. 40 иностранных). Работа изложена на 109 страницах машинописного текста, содержит 22 таблицы, 32 рисунка и приложение.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ 1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Потребность грибов в микроэлементах

В данном разделе приводятся сведения о влиянии микроэлементов на метаболизм грибов. Представлены литературные данные о влиянии серы (в виде сульфатов и серусодержахцих аминокислот) как самого близкого к селену микроэлемента, а также о механизме фунгицидного действия элементарной серы на грибы (Мюллер, Лёффлер, 1995; Негруцкий, 1990; Груздев, 1987).

1.2 Распространение и роль селена в природе

Раздел посвящен распространению селена в природе и различных биологических объектах. Представлена роль селена в этиологии вирусных заболеваний, влияние селена на бактерии и актиномицеты, а также на представителей растительного мира

1.3 Восстановление соединений селена и их влияние на ферменты микроорганизмов

В разделе представлен материал о влиянии соединений селена на ферменты микроорганизмов, а также восстановление соединений селена до аморфного состояния (Levine, 1925; Ковальский и др., 1965).

1.4 Селен в грибах

В разделе приводятся сведения о влиянии неорганических соединений селена на развитие микромицетов, а также базидиальных макромицетов. Приведены данные о грибах как биоконцентраторах селена, а также об антистрессовом воздействии неорганических соединений селена на мицелиальные культуры и плодоношение культивируемых видов грибов (Денисова, 1999; Иванов, Блинохватов, 2003).

1.5 Характеристика селенорганических препаратов

В разделе представлены литературные данные о применении использованных в работе селенорганических препаратов в качестве средств восполнения дефицита селена в рационе животных, а также сведения об антимикробной и фунгицидной активности данных препаратов (Блинохватов, 1993).

2 МАТЕРИАЛЫ, ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Объектами исследования данной работы были агарикоидные макромице-ты и представители различных таксономических групп микромицетов.

В ходе изучения влияния соединений селена на рост и развитие базиди-альных макромицетов были исследованы штаммы, принадлежащие к различным систематическим группам и характеризующиеся различными трофическими особенностями. Некоторые из изученных культур были привлечены в эксперимент из коллекции кафедры биологии и экологии Пензенской ГСХА (Agaricus bisporus: штамм J - 217), кроме того, некоторые культуры были выделены в период исследований из плодовых тел дикорастущих грибов (Agaricus bitorquis, Pleurotus ostreatus, Ganoderma lucidum и др.). Выделение чистых культур проводилось из плодовых тел грибов по стандартным методикам (Дудка и др., 1982).

Экспериментальные исследования проводились в период с 2000 по 2005 год на базе Пензенской государственной сельскохозяйственной академии.

В ходе экспериментов применялись органические соединения селена: ДАФС-25(диацетофенонилселенид), СП-1 (9-фенил-сим-нонагидро-10-селенаан-трацен) и Л3СПС-1 (трийодид 9-фенил-сим-октагидро-10-селенониантрацена). Для изучения влияния селенорганических препаратов на скорость роста мицелия грибов в культуре использовались линейные методы измерения.

Для выгонки плодовых тел вешенки устричной в лабораторных условиях использовали в качестве субстрата пшеничную солому, приготовленную по общепринятым методикам (Рекомендации по выращиванию грибов вешенки, 1983; Гарибова, 2005).

Для выяснения характера влияния селенорганических препаратов на мик-ромицеты нами были выбраны следующие виды: Rhizopus stolonifer, Mucor mucedo, Aspergillus flavus, Aspergillus niger, Aspergillus furragatus, Chaetomium globosum, Fusarium moniliforme, Trichoderma viride. Данные виды из коллекции микроорганизмов Биофака МГУ им. Ломоносова были любезно предоставлены нам доктором биологических наук Лихачевым А.Н.

Фунгистатическую активность разных концентраций селенорганических препаратов рассчитывалась по формуле Эббота: R = (do - dj) х 100/do, где R -подавление роста гриба (в %), do - диаметр колонии гриба в контроле, d] - диаметр колонии гриба в опыте.

Определение микопаразитической активности Trichoderma viride в отношении мицелия Pleurotus ostreatus на средах, содержащих селенорганический препарат ДАФС-25, проводилось методом «встречных культур». Для изучения микопаразитической активности Trichoderma viride на мицелиальной пленке культуру гриба Pleurotus ostreatus выращивали поверхностным культивированием на жидкой питательной среде, содержащей определенные концентрации селенорганического препарата ДАФС-25. Затем пленку гриба помещали во влажную камеру. Посев культуры Trichoderma viride проводился конидиальной суспензией с определенным титром -10'3 конидий / мл.

Определение активности катал азы в грибах проводили, основываясь на пирометрическом определении количества разложившейся перекиси водорода в течение определенного времени.

Для определения активности глкжозооксидазы использовали экспресс-метод, основанный на титрометрическом определении активности глкжозооксидазы по количеству перекиси водорода, образующейся в процессе окисления глюкозы глюкозооксидазой (Дудка, Вассер и др., 1982).

Анализы плодовых тел на содержание в них селена проводились в лаборатории кафедры биологии животных Пензенской ГСХА флуориметрическим методом.

Математическая обработка данных проводилась по методике Б.А. Доспе-хова (1985).

3 ВЛИЯНИЕ СЕЛЕНОРГАНИЧЕСКОГО ПРЕПАРАТА ДАФС-25 НА УРОЖАЙНОСТЬ ПЛОДОВЫХ ТЕЛ ВЕШЕНКИ УСТРИЧНОЙ

Для изучения воздействия раствора селенорганического препарата ДАФС-25 в этиловом спирте на плодоношение вешенки устричной его вносили в пастеризованный гидротермическим методом субстрат (пшеничная солома). Субстрат перемешивали, инокулировали зерновым мицелием (производственный штамм НК-35) и набивали им полиэтиленовые пакеты по 10 кг. Опыт закладывали в трех сериях по 5 повторений. Обрастание проходило в течение 19-20 суток при температуре +23... 25 °С затем температуру снижали до +15... 16 °С.

На 20-22-е сутки в опытных вариантах с добавлением селенорганического препарата ДАФС-25 появлялись зачатки плодовых тел - примордии. В контрольных вариантах примордии появлялись на 2-3 суток позже.

Поражение блоков грибами рода ТпсЬоёеппа в контрольных вариантах составило 24...30 %. В вариантах с препаратом ДАФС-25 (концентрация 10^* г/л) количество пораженных блоков уменьшалось до 7... 10 %, а в концентрации 10" 3 г/л пораженных блоков не отмечалось.

В течение первой волны плодоношения, которая длилась чуть более трех недель, средняя урожайность вешенки в контроле составила 901,8 г с блока. В опытном варианте с препаратом ДАФС-25 (концентрация 10"3 г/л) было собрано 887,8 г, а в варианте с концентрацией 10"4 - 918,0 г.

Селенорганический препарат ДАФС-25 также стимулирует вторую волну плодоношения, причем даже более ярко, чем первую (рисунок 1).

Средняя урожайность плодовых тел с блока весом 10 кг составила: контроль - 1484,4 г; вариант с препаратом ДАФС-25, концентрация 10"3 г/л -1611,4; концентрация 10"4 г/л - 1654,0 г (таблица 1).

Итак, в результате проведенных исследований было установлено, что добавление в субстрат для культивирования Р1еигоШ$ г^геаШБ спиртового раствора селенорганического препарата ДАФС-25 в концентрациях 1 (У3... 10"4 г/л позитивно влияет на плодоношение: увеличивается как ранний, так и общий урожай грибов. Кроме того, отмечается более дружное наступление плодоношения, особенно отчетливо появляется вторая волна грибов. Также следует отме-

тип. ингибирующее действие препарата ДАФС-25 (особенно концентрации 10"3) на грибы рода ТпсЬо<1егта, что выражается в меньшем количестве пораженных блоков.

Таблица 1 - Урожайность плодовых тел гриба вешеики _ (Р1еигоШ оз^еаХш), грамм с блока_

Вариант № Волна Общая Средняя

опыта 1-я 2-я урожайность

1 901,8 617,2 1519,0

Контроль 2 861,2 576,4 1437,6 1484,4

3 890,8 605,8 1496,6

ДАФС-25 (10'3г/л) 1 887,8 748,2 1636,0

2 865,4 725,6 1591,0 1611,4

3 875,0 738,0 1615,8

ДАФС-25 (Ю^г/л) 1 918,0 778,8 1696,8

2 911,8 772,6 1623,8 1654,0

3 892,8 763,6 1666,4

НСР05 0,62 0,66

01-я волна ■2-я волна □Общ.урожай ■ 1-я волна ■2-я волна □Общ.урожай 01-я волна ■2-я волна □ Общ.урожай

Рисунок 1 - Влияние селенорганического препарата ДАФС-25 на динамику и общую урожайность грибов (грамм с блока) вешенки устричной

В варианте с селенорганическим препаратом ДАФС-25 (концентрация 10"4 г/л) остаточное содержание селена достигало 11,9 мг/кг сухого веса, что не превышает допустимых норм и содержится в дикорастущих плодовых телах Р1еигоШз овЦ-еаШв - 10,6 (Иванов, Блинохватов, 2002). Также, по данным Денисовой (1999), содержание селена в базидиомах Agaricus Ывропв, выращенных на субстратах, обогащенных селенатом натрия, достигало 8,2 мг/кг, тогда как в контроле плодовые тела содержали всего 1,0.. .2,5 мг/кг сухого веса.

Высокая пищевая ценность плодовых тел вешенки со столь значительной концентрацией селена позволяет говорить о перспективности использования гриба как пищевой добавки, обеспечивающей терапевтическую дозу селена.

Таким образом, полученные данные позволяют рекомендовать селенор-ганический препарат ДАФС-25 для обогащения плодовых тел вешенки жизненно важным элементом в питании человека - селеном.

4 ВЛИЯНИЕ СЕЛЕНОРГАНИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ НА РОСТ МИЦЕЛИЯ ВЕШЕНКИ УСТРИЧНОЙ

Актуальным вопросом производства мицелия вешенки устричной является сокращение сроков культивирования маточной культуры (на агаризирован-ных питательных средах) и посевного мицелия на зерновом субстрате.

Для определения влияния селенорганических препаратов на скорость роста мицелия вешенки на агаризированной среде и зерновом субстрате нами были заложены опыты с разными штаммами этого вида. В процессе опыта производилось измерение линейной скорости роста мицелия, плотность обрастания по 3-балльной шкале (Бухало, 1988) и цвет по шкале Бондарцева (1953). Результаты опыта представлены в таблицах 2,3.

Таблица 2 — Скорость роста мицелия вешенки устричной

на пшеничном агаре с добавлением различных концентраций селенорганических препаратов (мм/сутки, при +25 X!)

Штамм Контроль Селенорганический препарат НСРо5, ед.

ДАФС-25 г/л СП-1 г/л •13СПС-1 г/л

10 10 ю4 102 10 10 10 10 10"4

В-1 12,7 ±0,66 6,0 ±0,43 12,8 ±0,33 14,7 ±0,56 8,1 ±0,09 10,6 ±0,05 12,8 ±0,34 7,6 ±0,15 9,3 ±0,11 11,9 ±0,32 1)0,96 2)0,71 3)0,81

В-2 12,2 ±0,21 6,1 ±0,12 12,5 ±0,34 13,9 ±0,51 8,7 ±0,23 12,1 ±0,31 12,6 ±0,08 9,4 ±0,11 10,6 ±0,3 12,3 ±0,17 1)0,62 2)0,43 3)0,39

В-3 10,3 ±0,13 5,5 ±033 10,6 ±0,1 11,8 ±0,17 7,8 ±0,51 8,9 ±0,43 10,6 ±0,19 7,5 ±0,07 9,6 ±0,29 9,8 ±0,41 1)0,38 2)0,67 3)0,49

Таблица 3 - Скорость роста мицелия вешенки устричной на зерновом субстрате с добавлением селенорганических препаратов (при +25 СС, мм/сутки)

Штамм Контроль Селенорганический препарат НСР05, ед.

ДАФС-25 г/л СП-1 г/л 13СПС-1 г/л

10 10 ю-4 ю-2 10 ю-4 10 10 ю-4

В-1 9,8 ±0,51 8,6 ±0,24 10,1 ±0,14 10,9 ±0,12 8,9 ±0,24 9,7 ±0,2 10,1 ±0,5 8,7 ±0,13 8,9 ±0,13 9,9 ±0,19 1)0,56 2)0,76 3)0,80

В-2 9,9 ±0,3 7,5 ±0,11 10,0 ±0,21 11,1 ±0,06 6,9 ±0,1 8,9 ±0,2 10,2 ±0,12 7,2 ±0,09 8,3 ±0,11 10,0 ±0,07 1)0,36 2)0,37 3)0,32

В-3 8,2 ±0,1 6,6 ±0,06 9,0 ±0,07 9,1 ±0,17 5,4 ±0,11 8,0 ±0,16 8,9 ±0,21 6,8 ±0,1 8,1 ±0,15 8,4 ±0,19 1)0,21 2)0,29 3)0,26

Селенорганические препараты в высокой концентрации (10'2г/л) ингиби-руют рост мицелия на 33...50 % по сравнению с контролем. В вариантах с препаратами СП-1 и J3CnC-1 (концентрация 10"3... 10"4 г/л) скорость роста мицелия была на уровне контроля либо отмечался слабый стимулирующий эффект. Наиболее сильно скорость роста мицелия стимулировал селенорганический препарат ДАФС-25 в концентрации 10"* г/л. В этом варианте скорость роста мицелия на 13...16 % превосходила контроль.

Для изучения влияния селенорганических соединений на зерновом субстрате препараты в виде спиртовых растворов до инокуляции добавляли в субстрат при тщательном перемешивании.

Анализируя полученные данные, следует отметить меньшую линейную скорость роста мицелия вешенки устричной на зерновом субстрате по сравнению с авизированной средой. Также следует отметить меньшую отзывчивость мицелия вешенки устричной на внесение в субстрат селенорганических препаратов. В вариантах с селенорганическими препаратами СП-1 и J3CnC-l (концентрация 10"3 г/л) скорость роста мицелия была на уровне контроля, а в вариантах с концентрацией 10"4 г/л превышала контроль на 3...8 %. Наиболее ярко выраженное стимулирующее влияние на скорость роста мицелия вешенки устричной оказал препарат ДАФС-25 в варианте с концентрацией 10Ч г/л, где скорость роста мицелия превышала контроль на 10,9... 11,2 %. Если учесть, что время культивирования посевного мицелия в стеклянных емкостях 0,5 л составляет 14 суток, то добавление препарата ДАФС-25 (концентрация 10"4 г/л) в субстрат позволит сократить время культивирования на до 12,5 суток.

5 ВЛИЯНИЕ СЕЛЕНОРГАНИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ НА МИЦЕЛИАЛЬНЫЕ КУЛЬТУРЫ ДРУГИХ ВИДОВ МАКРОМИЦЕТОВ, ПЕРСПЕКТИВНЫХ ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ

S.1 Характеристика культур базидиальных грибов, использованных в работе

Для выяснения, является ли действие селенорганических препаратов специфичным для P. ostreatus или универсальным по отношению к базидиалышм макромицетам, нами были заложены опыты с мицелиальными культурами еще 8 видов грибов: Agaricus bisporus L.: Pers., A. bitorquis (Quel.)Sacc.); Coprinus co-matus (Fr.) S.F.Gray, С. Iagopus Fr.; Flammulina velutipes (Curt.: Fries) Karst.; Laetiporus sulphureus (Bull.- Fr.) Murr.); Ganoderma applanatum (Pers.) Pat., G. lucidum (Fr.) Karst.

В данном разделе описаны происхождение, культурально-морфологичес-кие свойства всех изученных штаммов на агаризованной питательной среде. Проведено определение средней скорости роста, а также ростового коэффициента (PK) каждой мицелиальной культуры.

5.2 Влияние различных концентрации селенорганических соединений ДАФС-25, СП-1 и Л3СПС-1 на культур ально-морфологнческие особенности мицелиальных культур базиднальных макромицетов

В разделе представлены описания колоний мицелиальных культур, культивируемых на питательных средах, содержащих спектр концентраций селенорганических препаратов от 10"2 до 10"4 г/л и сравнение их с таковыми в контрольных вариантах, не содержащих указанных добавок. Высокие концентрации селенорганических препаратов угнетают рост мицелиальных культур большинства видов (таблица 4).

Таблица 4-Скорость роста мицелия агарикоидных базидиомицетов на пшеничном агаре с добавлением различных концентраций селенорганических препаратов (мы/сутки, при +25 'С)

Вид Селенорганический препарат НСР05, ед.

Контроль ДАФС-25 г/л СП-1 г/л ;3спс-1 г/л

10 ю-3 ю-4 10"2 ю-3 10 ю-2 ю-3 ю-4

Agaгicus ЫврогиБ 7,0 ±0,08 6,5 ±0,11 7,0 ±0,04 8,5 ±0,13 6,15 ±0,11 7,23 ±0,08 11,1 ±0,09 5,6 ±0,17 8,7 ±0,11 8,4 ±0,08 1)0,26 2) 0,17 3) 0,22

Agaricus Ьиогфпв 5,6 ±0,08 5,9 ±0,12 6,2 ±0,15 6,5 ±0,11 6,0 ±0,13 6,1 ±0,17 6,3 ±0,14 6,1 ±0,17 6,0 ±0,11 6,2 ±0,04 1)0,22 2) 0,25 3)0,21

СорпгшБ сотаПк 4,9 ±0,13 1,9 ±0,17 3,6 ±0,14 5,1 ±0,08 2,2 ±0,12 5,0 ±0,04 5,2 ±0,09 2,0 ±0,17 3,4 ±0,65 4,9 ±0,05 1)0,25 2)0,19 3)0,65

СорппиБ ^орив 7,8 ±0,07 4,3 ±0,12 7,6 ±0,34 7,1 ±0,09 4,6 ±0,11 8,6 ±0,23 10,1 ±0,15 5,6 ±0,20 9,1 ±0,19 8,8 ±0,34 1)0,36 2) 0,29 3) 0,42

Ьаейрогив зШрЬигеив 8,5 ±0,08 3,2 ±0,11 6,7 ±0,14 12,5 ±0,08 6,8 ±0,15 7,1 ±0,17 10,7 ±0,12 6,6 ±0,19 9,4 ±0,09 11,1 ±0,23 1)0,21 2) 0,25 3) 0,30

Ganoderma арр1апаШт 3,8 ±0,32 1,4 ±0,21 2,5 ±0,12 3,9 ±0,05 3,5 ±0,11 3,4 ±0,07 3,8 ±0,04 2,7 ±0,12 4,1 ±0,13 4,2 ±0,35 1)0,38 2) 0,33 3) 0,39

Сапос1егта 1ис1(1ит 16,3 ±0,15 9,4 ±0,10 16,4 ±0,34 16,3 ±0,20 11,3 ±0,11 14,1 ±0,07 17,1 ±0,23 16,9 ±0,11 16,7 ±0,17 16,2 ±0,12 1)0,41 2) 0,30 3) 0,38

Р1атти1та уеМрев 6,4 ±0,13 1,6 ±0,11 5,1 ±0,08 7,6 ±0,21 5,7 ±0,13 6,0 ±0,12 8,2 ±0,35 4,3 ±0,15 7,4 ±0,08 7,4 ±0,17 1) 0,27 2) 0,39 3) 0,26

1) НСР05 Для опыта с препаратом ДАФС-25

2) НСР05 для опыта с препаратом СП-1

3) НСР05 Для опыта с препаратом 13СПС-1

Из приведенных данных можно сделать вывод, что селенорганические препараты ДАФС-25, СП-1 и J3CnC-l обладают явным стимулирующим действием на мицелий агарикоидных макромицетов. Стимулирующей у селенорга-нических препаратов является концентрация 10'3... 10"4 г/л.

Рост колоний ксилсггрофов (L. sulphureus, G. applanatum Fl. velutipes PI. ost-reatus) и С. lagopus сильно замедлялся в вариантах с концентрацией 10'2 г/л се-ленорганических препаратов (особенно с ДАФС-25), а стимулирующей для этих видов является концентрация Ю^г/л.

Исключением был вид Ganoderma lucidum (трутовик лакированный), колония которого росла в вариантах с концентрацией 10"2 г/л и оказалась мало чувствительной к высоким концентрациям селенорганических препаратов.

5.3 Влияние различных концентраций селенорганических препаратов

на рост мицелия штаммов Laetiporus sulphureus

Вопрос о характере влияния селенорганических соединений на рост мицелия штаммов одного вида представляет интерес, так как штаммы Laetiporus sulphureus различаются по скорости роста. Как и для большинства других видов, можно сделать вывод о стимулирующем влиянии селенорганических препаратов в концентрации 10'3...10^г/л на скорость роста штаммов Laetiporus sulphureus и ингибирующем концентрации 10~2 г/л.

5.4 Влияние различных концентраций селенорганического препарата

ДАФС-25 на биомассу мицелия и накопление селена при культивировании на жидкой питательной среде

Важным показателем интенсивности роста мицелия является скорость накопления биомассы. Для изучения влияния селенорганических препаратов на накопление биомассы базидиальных макромицетов нами был выбран препарат ДАФС-25.

В ходе исследований было установлено, что биомасса воздушно-сухого мицелия видов Pleurotus ostreatus, Ganoderma lucidum и Agaricus bisporus, выращенного на средах с добавлением препарата ДАФС-25, превышала контрольные варианты, тогда как для Flammulina velutipes и Coprinus lagopus данная добавка не стимулировала накопление биомассы.

Анализ степени накопления селена в мицелии некоторых видов грибов, выращенном на питательной среде, содержащей препарат ДАФС-25, показал, что базидиальные макромицеты способны аккумулировать селен и из селенорганических соединений (таблица 5).

Таблица 5 - Содержание селена в воздушно-сухом мицелии базидиомицетов, выращенном на обогащенной селенорганическим препаратом ДАФС-25 жидкой питательной среде (мг/кг сухого веса)

Вид Контроль ДАФС-25

10"J г/л lO"4 г/л

Pleurotus ostreatus 1,31 10,86 2,22

Flammulina velutipes 2,34 8,14 7,87

Ganoderma lucidum 3,01 21,18 11,21

Таким образом, можно отметить, что данные виды макромицетов обладают способностью аккумулировать селен из селенорганических соединений. При этом количество селена в мицелии зависит не только от концентрации селенор-ганического препарата в питательной среде, но и от вида гриба.

5.5 Рост мицелия агарикоидных базидиомицетов на твердых органических субстратах при обогащении различными селенорганическими препаратами

Полученные в ходе исследований результаты свидетельствуют о том, что на зерновом субстрате использованные в работе виды агарикоидных макромицетов, растущие на агаризованной питательной среде, зачастую демонстрируют некоторое снижение показателей скорости роста.

Препараты не равнозначны по стимулирующему эффекту на зерновом субстрате. Наибольшая скорость роста мицелия базидиальных грибов отмечался в вариантах с препаратом ДАФС-25 и превышает контрольные варианты на 10... 15 %. В вариантах с препаратом СП-1 и 13СПС-1 скорость роста мицелия была близка к контролю.

Вероятно, явление более низкой «заинтересованности» мицелиальных культур в селене при культивировании их на твердых органических субстратах может объясняться тем, что такие среды по сравнению с агаризованными являются более богатыми источниками микроэлементов, и в частности серы, которая является антагонистом селена. Возможно, это связано с малообратимой адсорбцией селена субстратом, что делает элемент недоступным для мицелия.

6 ИНГИБИРУЮЩЕЕ ВЛИЯНИЕ СЕЛЕНОРГАНИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ НА РОСТ КОНТАМИНАНТНОЙ МИКРОФЛОРЫ И МИЦЕЛИАЛЬНЫХ КУЛЬТУР МИКРОМИЦЕТОВ

В ходе экспериментов с мицелиальными культурами базидиальных макромицетов сразу определилась следующая тенденция: в вариантах опыта, содержащих селенорганические препараты, наряду со стимуляцией роста мицелиальных культур макромицетов отмечалось угнетение контаминантной микрофлоры, случайно попавшей на питательную среду в чашки Петри.

По методу Коха (осаждение клеток микроорганизмов на плотных питательных средах) было изучено влияние селенорганических препаратов на контаминант-ную микрофлору.

Наиболее сильное фунгицидное и бактерицидное влияние оказывал препарат ДАФС-25 в концентрации 10'2 г/л, при которой отсутствует рост как грибной, так и бактериальной микрофлоры. В концентрации 10 г/л роста грибов-контаминантов не наблюдалось, а бактериальная контаминация сильно угнеталась. В концентрации 10"4 г/л отмечались только фунгистаггический и бактерио-

статический эффекты. У препаратов СП-1 и 13СПС-1 во всех концентрациях отмечались только фунгистатический и бактериостатический эффекты.

Для изучения влияния селенорганических препаратов на развитие культур микромицетов были использованы виды, указанные в таблице б.

Таблица 6 - Влияние разных концентраций селенорганических препаратов на рост мицелия микромицетов (3-е сутки, среда Чапека, при +25° С)

Селенорганический препарат

Вид Контроль ДАФС-25 г/л СП-1 г/л J3CnC-l г/л

ю-2 10-* 104 10 10 10"4 ю-2 10 ю-4

Aspergillus fumigatus d 16,7 ±0,05 0,0 0,0 0,0 11,5 ±0,13 13,5 ±0,01 16,5 ±0,1 0,0 10,5 ±0,03 16,0 ±0,05

R 0,0 100 100 100 55,1 19,2 1Д 100 37,1 4,2

Aspergillus niger d 22,3 ±0,15 0,0 0,0 11,5 ±0,12 13,6 ±0,04 19,0 ±0,01 21,5 ±0,1 14,0 ±0,2 15,5 ±0,13 22,1 ±0,2

R 0,0 100 100 48,4 39,0 14,8 3,6 37,2 30,5 0,9

Aspergillus flavus d 29,3 ±0,1 0,0 14,0 ±0,03 20,7 ±0,1 24,0 ±0,01 23,7 ±0,12 28,6 ±0,3 22,7 ±0,1 27,2 ±0,02 26,6 ±0,04

R 0,0 100 52,2 29,4 18,1 19,1 2,4 22,5 7,2 9,2

Fusarium moniliforme A 50,0 0,0 0,0 5,0 44,0 42,0 44,8 43,0 42,0 42,3

±0,23 ±0,1 ±0,2 ±0,1 ±0,4 ±0,2 ±0,03 ±0,23

R 0,0 100 100 90,0 12,0 16,0 10,4 14,0 16,0 15,4

Chaetomium globosum d 38,0 ±0,15 0,0 0,0 8,0 ±0,12 6,6 ±0,21 14,3 ±0,13 30,7 ±0,1 0,0 14,0 ±0,15 28,8 ±0,05

R 0,0 100 100 78,9 82,6 62,4 19,2 100 63,2 24,2

Mucor mucedo j 30,5 0,0 0,0 12,0 25,1 28,3 28,6 22,0 24,5 30,1

±0,3 ±0,1 ±0,03 ±0,01 ±0,2 ±0,1 ±0,34 ±0,21

R 0,0 100 100 60,7 17,7 7,2 6,2 27,9 19,7 1,3

Rhizopus stolomfer d 85,0 ±0,26 0,0 0,0 0,0 57,0 ±0,2 72,5 ±0,3 75,0 ±0,1 52,0 ±0,2 65,0 ±0,05 70,1 ±0,25

R 0,0 100 100 100 32,9 14,7 11,8 38,8 23,5 17,5

Trichoderma viride A 35,3 0,0 12,0 14,5 28,4 29,3 32,2 24,6 29,1 32,5

±0,05 ±0,02 ±0,22 ±0,11 ±0,06 ±0,2 ±0,2 ±0,34 ±0,02

R 0,0 100 66,0 58,9 19,6 17,0 8,8 30,3 17,6 7,9

Примечание. Я - подавление роста гриба (%);

ё - диаметр колонии гриба (мм).

Таким образом, из приведенных данных можно сделать вывод о том, что селенорганические препараты оказывают ингибирующее воздействие на рост колоний данных видов микромицетов. Наиболее сильное ингибирующее действие оказывает препарат ДАФС-25 при его содержании в среде 10'2...10'3 г/л.

В концентрации 1О"4 г/л он ингибирует рост колоний (в зависимости от вида) на 29... 100 % по сравнению с контролем.

Препарат СП-1 во всех концентрациях обладает фунгистатическим эффектом, ингибируя рост колоний микромицетов на 1,2...82,б % по сравнению с контролем.

Препарат 13СПС-1 ингибирует рост микромицетов на 1,3... 100 %, а также влияет на культурально-морфологические признаки колоний.

6.1 Воздействие селенорганических препаратов на спорогенез микромицетов

Известно, что неорганические соединения селена оказывают заметное влияние на образование спор и интенсивность спороношения микромицетов видов Асгетопштп cllrysogcnum, Р^сИит соссшеит, РетаШитп сЬгузо£епиш, ТлсЬоёегта viride (Ильин, 2001). Концентрации селената натрия на уровне 10"2...10"3 г/л привели (практически для всех видов) к усилению спороношения,

а концентрации 10"3___10~* г/л повлекли ослабление этого процесса в сравнении

с контрольными вариантами.

Как отмечено в наших предыдущих опытах, селенорганические препараты проявили фунгицидное и фунгистатическое действие на рост мицелия разных видов микромицетов. Для изучения влияния селенорганических препаратов на интенсивность спроношения нами был проведен ряд опытов.

Таблица 7 - Показатели споруляции микромицетов на среде Чапека с добавлением селенорганических препаратов (7-е сутки, спор*1&/мл суспензии)

Вид Контроль ДАФС-25 (г/л) СП-1(г/л) ^спс-Кг/л)

10 10 104 10 10'3 ю-4 ш2 10 104

Авре^Нив йт^айи 1,80 - - - 1,51 1,43 1,73 1,32 1,45 1,62

Азре^Пив niger 1,10 - - 0,62 0,81 0,64 0,66 0,32 0,34 0,63

Авре^ПиБ Аауив 1,32 - 0,02 0,25 0,54 0,95 1,11 0,23 0,65 0,97

Тпс1юёегта утёе 1,56 - - 0,14 0,45 0,74 0,98 0,52 0,79 0,87

В ходе опытов было установлено, что селенорганические препараты оказывают ингибирующее действие на спороношение данных видов микромицетов. Наиболее сильное ингибирующее действие отмечается у препарата ДАФС-25, при этом в концентрации 10'2 г/л спороношение отсутствует для всех изучаемых видов.

Для вариантов с другими селенорганическими препаратами характерно ослабление интенсивности спороношения, разное в зависимости от вида и концентрации.

Таким образом, можно сделать вывод, что для представителей микромике-тов важна форма поступающего селена. Наиболее предпочтительной является неорганическая форма в виде селенат-иона (5е04'2), а селен, содержащийся в составе селенорганических соединений, для микромицетов токсичен. Это не зависит от концентрации в среде селена как такового, так как при использовании одинаковой концентрации 10"3 г/л содержание селена в среде с селенатом натрия почти в два раза выше, чем при введении в состав среды селенорганических препаратов.

В результате проведенных исследований по селективности стимулирующего действия в отношении культур базидиальных макромицетов и инги-бирующего действия в отношении контаминантной микрофлоры и культур микромицетов можно выделить препарат ДАФС-25.

6.2 Накопление биомассы мицелия ТНсЪоёеппа \iride в зависимости от концентрации селенорганического препарата ДАФС-25

в жидкой культуре

В условиях глубинного культивирования биомасса мицелия ТпсЬо(1егта \ппёе в контроле составила 25,2 г, в варианте с препаратом ДАФС-25 (концентрация 10'3 г/л) - 1,3 г, а при концентрации Ю^г/л - 7,5 грамм. Таким образом, четко обозначилось фунгистатическое влияние селенорганического препарата ДАФС-25 на развитие мицелия гриба ТпсЬо<1егп1а ушс!е.

6.3 Прорастание конидий и развитие мицелия под влиянием различных концентраций ДАФС-25 (диацетофенонилселеннда) и его серусодержащего аналога - диацетофенонилсульфида

Для выявления механизма действия препарата ДАФС-25 на культуры микромицетов нами был использован его серный аналог - диацетофенонилсульфид.

Таблица 8 - Влияние селенорганического препарата ДАФС-25 и его сераорганического аналога на рост мицелия ТпсИос1егта \iride

Вид Контроль ДАФС-25 диацетофенонилселенид

102г/л 10"3г/л 10"*г/л

Тпс1юс1еппа утёе й 58,3 0,0 24,7 36,1

0,0% 100,0 57,6 1 38,1

Диацетофенонилсульфид

10'2т/л 10° г/л Ю^г/л

а 58,4 59,3 60,0

к% 0,34 101,7 102,9

Таким образом, результаты свидетельствуют о том, что на развитие колоний микромицета ТпсИоёегта ут<1е оказывает влияние селенсодежащий пре-

парат ДАФС-25, тогда как серный аналог данного соединения не оказывает негативного влияния на рост мицелия

Прорастание же конидий не наблюдалось при концентрации 10"2...10"3г/л. В концентрации 10"4 г/л прорастание наблюдалось с задержкой в 2-3 дня, колония выглядела угнетенной и слабо спорулировала.

В опыте с внесением ДАФС-25 и его сераорганического аналога отмечалось достоверное снижение фунгицидного воздействия препарата ДАФС-25 в присутствии сераорганического аналога на прорастание конидий микромицета ТгюЬоёеппа ушёе, что говорит о конкуренции серы и селена в метаболизме клеток.

6.4 Микопаразитическая активность ТпсЬоёегта ут<к на мицелии и пленке Ркигойк

Для выявления селективного влияния препарата ДАФС-25 нами был проведен опыт по совместному культивированию Р1. овП-еаШз и Тпс1ю<1епг1а лапёе методом «встречных культур».

На третьи сутки в контрольных вариантах после встречи колоний грибов мицелий Р1. о^еаШБ прекращал свой рост, в то время как колония триходермы начинала спорулировать. В то же время в вариантах с ДАФС-25 (концентрация 10"2... 10"3г/л) роста колоний триходермы не отмечалось. В варианте с ДАФС-25 (концентрация 10'4г/л) отмечалось фунгистатическое действие на рост мицелия ТпсЪоёсгта утёе.

Таким образом, выявлено селективное фунгицидное и фунгистатическое действие препарата ДАФС-25 в отношении пропагул ТпсЬоёегша уш<1е, которое не затрагивает колонию агарикоидного макромицета Р1. овИ-еаЩв.

В связи с наличием у селенорганического препарата ДАФС-25 явного ин-гибирующего влияния на рост колоний ТпсЬоёегта утёе сразу возникал вопрос о его последействии или влиянии на микопаразитическую активность гриба.

Таблица 9 - Микопаразитическая активность микромицета ТпсИойегта viiri.de

Вид Контроль г ДАФС-25

10"2г/л 10"3г/л 10"4г/л

ТпсЬоёегша утс1е ++ ( 1М 1 +++ +

Рост ТпсЪоёсгта ут(1с на мицелиальной пленке Р1. оз^еаШэ оценивали по пятибалльной системе: 1-2 балла (+, ++) означают слабый рост мицелия микопаразита, спорообразование, отсутствие разрушенных участков мицелиальной пленки; 3-4 балла (+++, ++++) - наличие обильного и хорошо развитого мицелия микопаразита, обволакивающего субстрат. В этом случае визуально отмечается деградация мицелиальной пленки гриба Р1. оБНеаШБ.

Таким образом, можно отметить, что микопаразитическая активность микопаразита Тпс1юс1егта утёе наиболее ярко выражена в тех вариантах, где

Р1. ов^ваЛи росла с селенорганическим препаратом ДАФС-25 в самой высокой концентрации.

Данный факт можно объяснить тем, что селен в составе белков и аминокислот стимулирует развитие микопаразита.

6.5 Устойчивость штаммов Тг!с1юс1еппа у|П<1е к селенорганическому препарату ДАФС-25 и фунгициду фувдазолу

Для защиты культуры вешенки от грибов ТпсЬоёеппа врр. за рубежом применяют промышленный фунгицид - фундазол (беномил). Фундазол селективно ингибирует рост колоний триходермы и не оказывает влияния на рост колоний вешенки.

Мы предположили, что одновременное применение селенорганического препарата ДАФС-25 и фундазола будет более эффективным, чем применение каждого из них в отдельности.

Рисунок 2 - Влияние препарата ДАФС-25 и фунгицида фундазола на рост колоний ТпсИоскгта \iride отдельно и в смеси

Все испытанные комбинации эффективно подавляют линейный рост штаммов по сравнению с пассированием штаммов на среде с одним препаратом. Наиболее выраженным фунгицидным и фунгистатическим эффектом обладала комбинация ДАФС-25 (Ю'.-.Ю"4 г/л) + Фундазол (1,0 мкг/мл). Эффект синергизма отчетливо выражен для всех комбинаций препаратов. Подавление линейного роста штаммов сильнее на 9...32 % по сравнению с вариантами, содержащими один препарат, и на 74.. .100 % по сравнению с контролем.

7 ВЛИЯНИЕ СЕЛЕНОРГАНИЧЕСКОГО ПРЕПАРАТА ДАФС-25 НА АКТИВНОСТЬ ФЕРМЕНТОВ ТШСНООЕИМА\ IRIDF

Из литературных источников известно, что препараты неорганической серы проникают в споры и в мицелий грибов благодаря растворению в липи-дах грибов. Сера является акцептором водорода, поэтому она нарушает ход реакций гидрирования и дегидрирования. В клетках образуется сероводород, который тормозит прорастание спор и жизнедеятельность мицелия, а также инактивирует каталазу, связывает Ре, Си, Мп, 7л\ (Груздев, 1987).

Мы предположили, что механизм действия на ферменты микромицетов у серы и селена одинаков. Вероятно, из молекулы ДАФС-25 элиминируется

элементарный селен, который, как и сера, подвергается гидрированию с образованием селеноводорода (Н23е), оказывающего инактивирующее действие на ферменты.

Штаммы ТпсЬоёегта viride культивировали в течение 7 дней на жидкой среде Чапека, затем вносили препарат ДАФС-25 в концентрациях 10 2.. .10"4 г/л. На следующие сутки на поверхности мицелия гриба наблюдалось выделение красной модификации элементарного селена (8е°). Активность катал азы анализировали на первые, третьи и шестые сутки. Результаты приведены в таблице 10.

Таблица 10 - Активность катшазы (Е) в I г мицелия ТпсИо(1егта \iride

Сутки Контроль ДАФС-25, г/л

10" 10 10"4

1 161,1±12,2 85,1±5,7 73,1 ±6,7 137,8±15,2

3 188,7±10,4 57,5±6,8 41,4±4,2 85,8±8,1

6 176,0±11,2 48,9±7,1 32,2±5,1 42,6±7,3

Из результатов, приведенных в таблице, можно сделать вывод о снижении активности катал азы в мицелии микромицета Тпс1^егта \ппёе при добавлении в среду селенорганического препарата ДАФС-25. При этом на 6 сутки активность фермента минимальна в опытных вариантах.

Параллельно определению активности каталазы мы проводили определение активности глюкозооксидазы в мицелии ТпсЬск1егта у^е.

Таблица 11 - Активность глюкозооксидазы (Е) в 1 г мицелия Тгкко(1егта у/ги/е

Сутки Контроль ДАФС-25, г/л

10 ю-3 104

1 29,5± 2,7 13,4±1,2 9,2±0,5 10,4±1,3

3 31,3±3,1 11,2±0,8 8,4±0,4 9,3±0,9

6 27,3±2,9 10,5±0,7 1 7,5±0,7 8,0±0,7

Таким образом, выделение элементарного селена (8е°) на поверхности мицелия грибов и ингибирующее действие на ферменты в целом согласуется с литературными данными, известными по препаратам серы.

8 ЭКОНОМИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА ПРИМЕНЕНИЯ СЕЛЕНОРГАНИЧЕСКОГО ПРЕПАРАТА ДАФС-25

Основными показателями оценки культивирования различных штаммов гриба вешенки являются: получение большого количества продукта в натуре и стоимостном выражении на рубль производственных затрат, чистый доход на тонну субстрата. Культивирование вешенки является трудоемким и высокозатратным производством. Это связано с большими затратами на покупку по-

севного мицелия, термообработку субстрата и ручного труда на формирование грибных блоков.

Анализ данных финансовых затрат на 1 тонну субстрата, предназначенного для культивирования вешенки, в среднем составляют 3308 руб.

Расчет экономической эффективности показал, что применение препарата ДАФС-25 способствовало улучшению экономических показателей при культивировании вешенки. В среднем за три опыта условно чистый доход в варианте с препаратом ДАФС-25 (концентрация 10"3 г/л) превышал контроль на 420,6 руб., а в варианте с препаратом ДАФС-25 (концентрация 10"4 т/л) - на 590,6 руб. (таблица 12).

Таблица 12 - Экономическая эффективность культивирования гриба вешенки

Вариант Урожайность грибов с 1000 кг субстрата Прибавка к контролю, кг Стоимость урожая, руб. Затраты средств на 1000 кг субстрата Условно чистый доход, руб.

Контроль 148,4 - 5936,0 3308,0 2628,0

ДАФС-25 10° г/л 161,4 12,0 6456,0 3407,4 3048,6

ДАФС-25 Ю-4 г/л 165,4 16,4 6616,0 3397,4 3218,6

Наибольший условно чистый доход - 3218,6 рублей на тонну субстрата -получен в варианте с применением селенорганического препарата ДАФС-25 (концентрация 10"4г/л).

ВЫВОДЫ

1. Селенорганический препарат ДАФС-25 при внесении в субстратные блоки повышает урожайность плодовых тел вешенки устричной на 8... 11 %.

2. Селенорганические препараты ДАФС-25, СП-1 н 13СПС-1 обладают физиологической активностью в отношении мицелиальных культур вешенки устричной. Высокие концентрации селенорганических препаратов в питательной среде (102 г/л) ингибируют линейный рост мицелия, тогда как более низкие концентрации (10 3... 10"4 г/л) оказывают стимулирующее действие.

3. Применение селенорганических препаратов для стимуляции роста мицелиальных культур вешенки может быть использовано для сокращения производственного цикла при производстве посевного материала.

4. При поверхностном культивировании на твердом органическом субстрате (зерно пшеницы) мицелиальные культуры вешенки имеют меньшую отзывчивость на селенорганические препараты, чем на агаризированных средах, что связано с более богатым минеральным составом органического субстрата. Возможно, это связано с малообратимой адсорбцией селена субстратом, вследствие чего элемент становится труднодоступным для мицелия.

5. Селенорганические препарат» оказывают стимулирующее влияние на мицелиальные культуры не только вешенки, но и других культивируемых грибов, в первую очередь таких, как шампиньон двуспоровый, шампиньон дву-кольцевой (Agaricus bitorquis), опенок зимний (Flammulina velutipes), трутовик лакированный (Ganoderma lucidum).

6. Селенорганические препараты обладают ингибирующей активностью в отношении микромицетов родов Aspergillus, Fusarium, Trichoderma, Chae-tomium, Mucor, поражающих субстрат при культивировании вешенки.

7. Конидии Trichoderma viride оказались более чувствительны к фунги-цидному эффекту ДАФС-25 по сравнению с вегетативным мицелием. Вероятно, это связано с различной проницаемости клеточных стенок мицелия и конидий для данного препарата.

8. Комбинация селенорганического препарата ДАФС-25 и фунгицида фун-дазола сильнее ингибирует линейный рост мицелия микромицета Trichoderma viride по сравнению с пассивированием на среде, содержащей один препарат, т.е. препараты в смеси проявляют эффект синергизма.

9. Активность ферментов каталазы и глкжозооксидазы микромицета Trichoderma viride ингибируется при введении в питательную среду селенорганического препарата ДАФС-25.

10. При внесении в субстрат селенорганического препарата ДАФС-25 в виде спиртового раствора (концентрация 10"4 г/л) экономический эффект составляет 3218,6 рублей на тонну субстрата за счет повышения урожайности плодовых тел вешенки устричной.

ПРЕДЛОЖЕНИЯ ПРОИЗВОДСТВУ

При культивировании съедобного гриба вешенки грибоводческим хозяйствам рекомендуется применять 10"4 г/л спиртовой рабочий раствор селенорганического препарата ДАФС-25 перед инокуляцией посевным мицелием гриба вешенки субстрата с нормой расхода 1 л/т с последующим перемешиванием, что обеспечивает увеличение урожайности грибов на 16,4 кг с тонны субстрата.

Автор выражает сердечную благодарность доктору биологических наук, профессору А.И. Иванову за научное руководство и помощь в проведении работы. За неоценимую помощь и поддержку выражает благодарность к.б.н, доценту В.А. Вихревой и О.В. Марковцевой. Также автор глубоко признателен за критические замечания, помощь и ценные советы при написании работы Л.В. Гарибовой и А.Н. Лихачеву. Особую благодарность хочу выразить |А-Ф. Блинохватову| как человеку, привившему любовь к науке и идейному вдохновителю данной работы.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Блинохватов А. Ф., Иванов А. И., Рязанов А. П., Полубояринов П. А. Влияние ультрамикроэлементов на культивируемые виды съедобных грибов // Проблемы с.-х. производства в изменяющихся экономических и экологических условиях в XXI веке: Сборник материалов Международной научно-практической конференции. 23-24 ноября 2000 г. - Пенза, 2000. - С. 188-189.

2. Блинохватов А. Ф., Иванов А. И., Полубояринов П. А. Влияние селе-норганических препаратов ДАФС-25 и СП-1 на рост мицелия шампиньона дву-спорового (Agaricus bisporus) и вешенки обыкновенной (Pleurotus ostreatus) // Материалы научно-практической конференции, посвященной 75-летию со дня рождения профессора Г.Б. Гальдина. - Пенза, 2003. - С. 19-21.

3. Полубояринов П. А. Блинохватов А. Ф., Иванов А. И. Влияние селе-норганических препаратов ДАФС-25 и СП-1 на рост мицелия шампиньона дву-спорового (Agaricus bisporus) и вешенки обыкновенной (Pleurotus ostreatus) // Актуальные проблемы экологии: Сборник научных работ - Т. 3., № 3 - Томск, 2004.-С. 433.

4. Блинохватов А. Ф., Иванов А. И., Полубояринов П. А. Влияние селе-норганических препаратов ДАФС-25 и СП-1 на рост мицелия шампиньона дву-спорового (Agaricus bisporus) и вешенки обыкновенной (Pleurotus ostreatus) // Актуальные проблемы земледелия на современном этапе развития сельского хозяйства: Сборник материалов международной научно-практической конференции, посвященной 50-летию кафедры общего земледелия. 17-18 февраля 2004 г. - Пенза, 2004. - С. 165-166.

5. Полубояринов П. А. Влияние селенорганических препаратов ДАФС-25 и СП-1 на скорость роста мицелиальньгх культур грибов // Биология, систематика и экология грибов в природных экосистемах и агрофитоценозах: Материалы международной научной конференции. 20-24 сентября 2004 г. - Минск, 2004.-С. 195-198.

6. Полубояринов П. А. Блинохватов А. Ф., Иванов А. И. Влияние селенорганических препаратов ДАФС-25 и СП-1 на рост мицелия шампиньона дву-спорового (Agaricus bisporus) и вешенки обыкновенной (Pleurotus ostreatus) // Материалы VIII молодежной конференции ботаников в Санкт-Петербурге. 17-21 мая 2004 г. - Санкт-Петербург, 2004 г. - С. 71-72.

7. Полубояринов П.А. Вихрева В.А. Влияние селенорганического препарата ДАФС-25 на активность каталазы гриба Tricboderma viride // Роль науки в развитии АПК: Сборник материалов научно-практической конференции агрономического факультета Пензенской ГСХА. - Пенза, 2005. - С. 101-102.

8. Полубояринов П.А. Вихрева В.А. Иванов А. И. Влияние селенорганических препаратов на рост мицелия культивируемых съедобных грибов // Гав-риш, № 4,2005. -С.41-43.

Отпечатано с готового оригинал-макета в типографии «Копи-Riso» ИП Попова М.Г. г. Пенза, ул. Московская, 74 28.02.2006 г., тираж 100 экз., 1,25 усл. печ. л., заказ 67

YHO

Содержание диссертации, кандидата сельскохозяйственных наук, Полубояринов, Павел Аркадьевич

Введение.

1 Обзор литературы.

1.1 Отношение грибов к микроэлементам.

1.2 Распространение и роль селена в природе.

1.3 Восстановление соединений селена и их влияние на ферменты микроорганизмов.

1.4 Селен в грибах.

1.5 Характеристика селенорганических препаратов.

2 Материалы, объекты и методы исследования.

3 Влияние селенорганического препарата ДАФС-25 на урожай

• 34 р ность плодовых тел вешенки устричнои.

4 Влияние селенорганических препаратов на рост мицелия вешенки устричной.

5 Влияние селенорганических препаратов на мицелиальные культуры других видов макромицетов, перспективных для культивирования.

5.1 Характеристика культур базидиальных грибов, использованных в работе.

5.2 Влияние различных концентраций селенорганических соединений

ДАФС-25, СП-1 и 13С11С-1 на культурально-морфологические особенности мицелиальных культур.

5.3 Влияние различных концентраций селенорганических препаратов

9 на рост мицелия штаммов Ьае^рошБ Б^рИигеиБ.

5.4 Влияние различных концентраций селенорганического препарата ДАФС- 25 на накопление биомассы мицелия при культивировании на жидкой питательной среде.

5.5 Рост мицелия агарикоидных базидиомицетов на твердых органических субстратах при обогащении различными селенорганическими препаратами.

6 Ингибирующее влияние селенорганических препаратов на рост контаминантной микрофлоры и мицелиальных культур микро-мицетов.

6.1 Воздействие селенорганических препаратов на спорогенез микромицетов.

6.2 Накопление биомассы мицелия ТпсЬоёегша ушс!е в зависимости от концентрации селенорганического препарата ДАФС-25 в жидкой культуре.

6.3 Прорастание конидий и развитие мицелия под влиянием различных концентраций ДАФС-25 (диацетофенонилселенида) и его сераорганического аналога - диацетофенонилсульфида.

6.4 Микопаразитическая активность ТпсИоёегша утс1е на мицелии и пленке Р1еигоШБ ОБ^еаШБ.

6.5 Устойчивость штаммов ТпсИоёегша утс1е к селенорганическому препарату ДАФС-25 и фунгициду фундазолу.

7 Влияние селенорганического препарата ДАФС-25 на активность ферментов грибов.

8 Экономическая оценка применения селенорганического препарата ДАФС-25.

Выводы.

Предложения производству.

Список литература.

Введение Диссертация по сельскому хозяйству, на тему "Влияние селенорганических препаратов на формирование урожая вешенки устричной"

В современных условиях интенсивного культивирования съедобных видов грибов актуальным вопросом является поиск новых препаратов, обладающих физиологической активностью в отношении роста и развития мицелиаль-ных культур, а также плодовых тел базидиальных макромицетов. Не менее важным аспектом является изучение влияния новых препаратов на контами-нантную микрофлору, затрудняющую культивирование съедобных грибов.

Ряд авторов отмечают стимулирующее влияние на рост мицелия агарико-идных грибов ультрамалых концентраций неорганических соединений селена -селенита и селената натрия (Блинохватов, Иванов, Денисова, 2000). Интерес к селену в значительной степени вызван также эссенциальностью этого элемента в питании человека (Авцын, Постников, 1991). Кроме того, имеющиеся в литературе данные говорят о специфической способности макромицетов аккумулировать селен из окружающей среды. Однако биологический смысл и природная целесообразность такого явления, как и вопросы о метаболических функциях селена в грибах, остаются пока невыясненными. Способность грибов к аккумулированию селена заслуживает особого внимания в связи с возникшим в последнее время дефицитом селена, который объясняется разрушением гумусового слоя почвы, являющегося природным резервуаром элемента. В связи с этим особую актуальность приобретают исследования, посвященные изучению влияния соединений селена на рост и развитие мицелиальных культур грибов.

Однако следует отметить высокую токсичность неорганических соединений селена, а также возможное прооксидантное действие селенита и селената натрия на компоненты питательных сред.

Намного меньшей токсичностью (40-100 раз) обладают селенорганиче-ские соединения: ДАФС-25 (диацетофенонилселенид), СП-1 (9-фенил-сим-нонагидро-10-селенаантрацен) и 13СПС-1 (трийодид 9-фенил-сим-октагидро-10-селенониантрацена). Данные препараты используют в качестве средств восполнения селенового дефицита рационов животных и человека, являющегося причиной более двадцати тяжело протекающих заболеваний. Важно то, что данные соединения при полном отсутствии мутагенных свойств обладают ан-тиоксидантным действием, совместимостью с любыми ингредиентами питательных сред и субстратов, защищая их от окислительной деструкции.

В связи с этим целью настоящей работы было выявление влияния селе-норганических препаратов на особенности роста и развития базидиальных мак-ромицетов. В ходе исследования были поставлены следующие научные задачи:

1) изучить возможности применения селенорганических препаратов ДАФС-25, СП-1 и 13СПС-1 в грибоводстве для повышения урожайности плодовых тел вешенки устричной;

2) определить влияние селенорганических препаратов на характер роста и культуралыю-морфологические признаки мицелиальных культур вешенки устричной и других видов культивируемых грибов;

3) исследовать возможность использования селенорганических препаратов для ингибирования контаминантной микрофлоры;

4) выявить влияние селенорганических препаратов на рост и развитие культур микромицетов;

5) проанализировать характер влияния селенорганических препаратов на активность ряда ферментов микромицетов и базидиальных макромицетов;

6) определить экономическую эффективность применения селенорганических препаратов при выращивании вешенки устричной.

Новым с научной точки зрения в работе является следующее:

1) впервые было детально изучено влияние селенорганических препаратов на развитие мицелиальных культур представителей различных семейств базидиальных макромицетов;

2) выявлено селективное действие селенорганических препаратов: стимулирующее в отношении базидиальных макромицетов и ингибирующее в отношении контаминантой микрофлоры;

3) выявлено ингибирующее влияние селенорганических препаратов на ряд ферментов грибов.

Практическая ценность работы состоит в следующем:

1) установлено, что добавление селенорганических препаратов в агаризо-ванные питательные среды оказывает положительное воздействие на развитие мицелиальных культур большинства видов базидиальных макромицетов, что дает основания рекомендовать внесение данного вещества как компонента искусственных и синтетических питательных сред для базидиальных макромицетов;

2) выявлена ингибирующая активность этих же концентраций селенорганических соединений в отношении контаминантной микрофлоры и культур микромицетов;

3) выяснена возможность применения селенорганических препаратов как стимуляторов роста посевного мицелия шампиньона двуспорового (Agaricus bisporus) и вешенки устричной, а также препарата ДАФС-25 как стимулятора плодоношения у вешенки устричной.

На защиту выносятся следующие положения:

1. Селенорганический препарат ДАФС-25 при внесении в субстратные блоки повышает урожайность плодовых тел вешенки устричной на 8,5-11,4 %.

2. Применение селенорганических препаратов для стимуляции роста мицелиальных культур вешенки может быть использовано для сокращения производственного цикла при производстве посевного материала.

3. Селенорганические препрпаты оказывают стимулирующее влияние на мицелиальные культуры не только вешенки, но и других культивируемых грибов, в первую очередь таких, как шампиньон двуспоровый, шампиньон дву-кольцевой (Agaricus bitorquis), опенок зимний (Flammulina velutipes), трутовик лакированный (Ganoderma lucidum).

4. Селенорганические препараты обладают ингибирующей активностью в отношении микромицетов родов Aspergillus, Fusarium, Trichoderma, Chae-tomium, Mucor, поражающих субстрат при культвировании вешенки.

1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение Диссертация по теме "Растениеводство", Полубояринов, Павел Аркадьевич

ВЫВОДЫ

1. Селенорганический препарат ДАФС-25 при внесении в субстратные блоки повышает урожайность плодовых тел вешенки устричной на 8-11 %.

2. Селенорганические препараты ДАФС-25, СП-1 и 13СПС-1 обладают физиологической активностью в отношении мицелиальных культур вешенки устричной. Высокие концентрации селенорганических препаратов в питательной среде (10" г/л) ингибируют линейный рост мицелия, тогда как более низкие концентрации (10"3-10"4 г/л) оказывают стимулирующее действие.

3. Применение селенорганических препаратов для стимуляции роста мицелиальных культур вешенки может быть использовано для сокращения производственного цикла при производстве посевного материала.

4. При поверхностном культивировании на твердом органическом субстрате (зерно пшеницы) мицелиальные культуры вешенки имеют меньшую отзывчивость на селенорганические препараты, чем на агаризированных средах, что связано с более богатым минеральным составом органического субстрата. Возможно, это связано с малообратимой адсорбцией селена субстратом, вследствие чего элемент становится труднодоступным для мицелия.

5. Ксилотрофные виды базидиальных макромицетов более чувствительны к высоким концентрациям селенорганических препаратов по сравнению с гумусовыми сапротрофами, которые довольно хорошо переносят концентрацию 10" г/л в питательной среде.

6. Селенорганические препараты оказывают стимулирующее влияние на мицелиальные культуры не только вешенки, но и других культивируемых грибов, в первую очередь таких, как шампиньон двуспоровый, шампиньон дву-кольцевой (Agaricus bitorquis), опенок зимний (Flammulina velutipes), трутовик лакированный (Ganoderma lucidum).

7. Селенорганические препараты обладают ингибирующей активностью в отношении микромицетов родов Aspergillus, Fusarium, Trichoderma, Chae-tomium, Mucor, поражающих субстрат при культвировании вешенки.

8. В эксперименте ингибирование роста культур микромицетов вызывали концентрации селенорганических препаратов 10"2-10"4 г/л в питательной среде. л

Концентрация 10" г/л препарата ДАФС-25 летальна для всех изученных видов микромицетов. Концентрация ДАФС-25 10"3 г/л в зависимости от вида микро-мицета проявляет фунгицидный или фунгистатический эффект. Только фунги-статический эффект отмечается при концентрации 10~4 г/л ДАФС-25. Препараты СП-1 и 1зСПС-1 обладают только фунгистатической активностью в отношении микромицетов, ингибируя линейный рост мицелия и споруляцию микромицетов.

9. Конидии ТпсЬоёеппа ушс1е оказались более чувствительными к фунги-цидному эффекту ДАФС-25 по сравнению с вегетативным мицелием, что говорит о различной проницаемости клеточных стенок мицелия и конидий для данного препарата. Вероятно, это одна из причин селективного действия этого препарата на макромицеты и микромицеты.

10. Комбинация селенорганического препарата ДАФС-25 и фунгицида фундазола сильнее ингибирует линейный рост мицелия микромицета ТпсЬоёеппа ушс1е по сравнению с пассивированием на среде, содержащей один препарат, т.е. препараты в смеси проявляют эффект синергизма.

11. Активность ферментов каталазы и глюкозооксидазы микромицета Тпс1юс1егта утс1е ингибируется при введении в питательную среду селенорганического препарата ДАФС-25.

12. При внесении селенорганического препарата ДАФС-25 в виде спиртового раствора в субстрат (концентрация 10"4 г/л) экономический эффект составляет 3218,6 руб. на тонну субстрата за счет повышения урожайности плодовых тел вешенки устричной.

ПРЕДЛОЖЕНИЯ ПРОИЗВОДСТВУ

При культивировании съедобного гриба вешенки, грибоводческим хозяйствам, рекомендуется применять 10"4 г/л спиртовой рабочий раствор селенорга-нического препарата ДАФС-25 перед инокуляцией посевным мицелием гриба вешенки субстрата с нормой расхода 1 л/т с последующим перемешиванием, что обеспечивает увеличение урожайности грибов на 16,4 кг с тонны субстрата.

100

Библиография Диссертация по сельскому хозяйству, кандидата сельскохозяйственных наук, Полубояринов, Павел Аркадьевич, Пенза

1. Абеленцев В.И., Голышин Н.М. Адаптация некоторых фитопатогенных грибов к беномилу // Химия в сельском хозяйстве 1973. № 6. - С. 32-36.

2. Алексеева K.JI. Интенсивные технологии выращивания вешенки и защита от болезней и вредителей // Гавриш. 2001. № 4. - С. 20-22.

3. Алексеева С.А., Ермаков В.В. Селен в макромицетах Восточной Мещеры // Материалы 3-й Российской биогеохимической школы «Геохимическая экология и биогеохимическое изучение таксонов биосферы». Новосибирск: изд-во СО РАН. 2000. - С. 235-236.

4. Беккер З.Э. Влияние внешних воздействий на плодоношение грибов // Успехи современной биологии. 1936. № 3. - С. 491-508.

5. Беккер З.И. Физиология и биохимия грибов. М.: Изд-во МГУ, 1988.227 с.

6. Блинохватов А.Ф. 9-11-сим-нонагидро-10-окса(халькогена) антрацены и соли 9-11-сим-октагидро-10-оксониа (халькогенониа) антрацена: Дис. . докт. хим. наук. Саратов, 1993. 378 с.

7. Блинохватов А. Ф., Денисова Г.В., Ильин Д.Ю., Иванов А.И. и др. Селен в биосфере. ПГСХА. - Пенза: РИО ПГСХА, 2001. - С. 324.

8. Блинохватов А.Ф. Селен универсальный адаптоген и стимулятор // Селен в биосфере: Пенза, 2001. - С. 3-55.

9. Бобко Е.В., Шенуренкова Н.П. О влиянии селенистой и селеновой кислот на развитие растений // ДАН СССР. 1945. - Т. 46. - Вып. 3. -С. 122-124.

10. Боряев Г.И. Использование кленбутерола в комплексе с органическими соединениями цинка и селена с целью повышения продуктивности и резистентности цыплят-бройлеров: Дисс. канд. биол. наук. Боровск, 1992.1. С. 47.

11. Бритиков Е. А. Биологическая роль пролина. М., 1975. - 116 с.

12. Бухало A.C. Высшие съедобные базидиомицеты в чистой культуре. -Киев: Наукова думка, 1988. 144 с.

13. Вихрева В. А., Хрянин В. Н., Стаценко А. П., Блинохватов А. Ф. // С.- х. биология. 2001. № 3. - С. 32-35.

14. Вихрева В.А., Блинохватова А.Ф., Хрянин В.Н. Селен в растительном мире // Селен в биосфере. Пенза, 2001. - С. 96-153.

15. Гарибова JI.B. Выращивание грибов. М., 2005.- 96 с.

16. Голубкина H.A., Мальцев Г.Ю., Богданов Н.Г. и др. // Вопр. питания.- 1995. №5.-С. 13-16.

17. Голубкина, Пирагова, Жукова. Специфика накопления селена грибами центрального региона России // Экология моря. 2000. - Вып. 54. - С. 75-82.

18. Голышин Н.М. Механизмы действия фунгицидов // Защита растений.- 1990. № 11.-С. 13-15.

19. Голышин Н.М. Резистентность возбудителей болезней растений к фунгицидам // Агрохимия. 1992. №5. - С. 130-150.

20. Гореликова Г.А., Маюрникова Л.А., Позняковский В.М. // Вопр. питания. 1997. №5. - С. 18-21.

21. Горленко Н. В. Грибы как источник пищевых белков // Микология и фитопатология. 1983. №3.- С. 177-181.

22. Давыдкина Т.А. Стереумовые грибы Советского Союза Л.: Наука. Ленингр. отд-ние, 1980. - 143 с.

23. Дворнина A.A. Субстраты, технология их подготовки в промышленном шампиньоноводстве: Обзорная информация. Кишинёв, 1980. - 101 с.

24. Денисова Г. В. Влияние неорганических соединений селена на рост и развитие базидиальных макромицетов: Дис. . канд. биол. наук. М., 1999. -130 с.

25. Денисова Г. В. Об отзывчивости различных штаммов А§апсиз ЫзрошБ на обработку селеном // Тез. докл. молодых учёных. Пенза, 1998.1. С. 102-103.

26. Денисова Г. В., Блинохватов А. Ф., Иванов А. И. Способ стимулирования роста посевного мицелия шампиньона /Патент на изобретение /Приоритет от 01.06.98.

27. Денисова Г. В., Иванов А. И., Блинохватов А. Ф. Влияние неорганического соединения селена на рост и плодоношение грибов // Сб. науч. конф. спец. сельского хоз-ва. Пенза, 1997. - С. 84-85.

28. Деркачев Э.Ф., Сидорова Н.Д. О возможности участия каталазы в процессах окислительного фосфорилирования // Митохондрии. М.: Наука, 1967. -342 с.

29. Диксон М.,УэббЭ. Ферменты. -М.: Мир, 1982.-Т. 1.- 329 с.

30. Доспехов Б.А. Методика полевого опыта. М.: Агропромиздат, 1985. -351 с.

31. Дудка И.А., Вассер С.П. и др. Методы экспериментальной микологии. Киев: Наукова думка, 1982. - 550 с.

32. Дудка И.А., Вассер С.П. Грибы. Справочник миколога и грибника. -Киев: Наукова думка, 1987. 535 с.

33. Ермаков В.В., Ковальский В.В. Биологическое значение селена. М.: Наука, 1974.-298 с.

34. Жильцова Т.С., Исакова Е.П., Шерова T.JL, Градова Н.Б. // Биотехнология. 1993. № 5. - С. 13.

35. Иванов А.И., Блинохватов А.Ф. О роли базидиальных макромице-тов в трансформации ультрамикроэлементов в экосистемах // Микология и фитопатология. 2003. № 37. - Т. 1. - С. 70-75.

36. Ильин Д.Ю. Влияние селена на рост и развитие микромицетов-продуцентов биологически активных веществ: Автореферат дис. . канд. биол. наук.-М., 2001 .-22 с.

37. Ключников Н.Г. Неорганический синтез. М.: Просвещение, 1971.270 с.

38. Ковальский В.В., Ананичев A.B., Шахова И.К. Борная биогеохимическая провинция Северо-Западного Казахстана // Агрохимия. 1965. № 11.1. С. 153.

39. Ковальский В. В., Ермаков В. В. Труды Биогеохимической лаборатории АН СССР, 1968. № 12. С 259.

40. Ковальский В.В., Раецкая Ю.И., Грачева Т.И. Микроэлементы в растениях и кормах. М., 1971. - 64 с.

41. Конова Н.И. К вопросу о биогеохимии селена в различных геохимических условиях // Микроэлементы. 1993. - Вып. 33. - С. 43-48.

42. Магдесиева H.H. Фармакология и токсикология препаратов селена. -М., 1967.-С. 41.

43. Манойлов С. Е., Вовси Б.А, Полосова Р.Г., Сидорова Н.Д. Влияние ка-талазы на процессы сопряженного окислительного фосфорилирования и на состояние адениловой системы в печени белых крыс // Биохимия. 1966. - № 3. -С. 25-31.

44. Мехтиева H.A., Рабкин H.A. // Селен в билогии. Баку, 1981. - Кн. 3. -С. 252.

45. Мюллер Э., Лёффлер В. Микология / Пер. с нем. М.: Мир, 1995.343 с.

46. Негруцкий С.Ф. Физиология и биохимия низших растений. Киев: Выща школа, 1990. - 200 с.

47. Некрасов Б.В. Основы общей химии. М.: Химия, 1973. - 351 с.

48. Перунова Е.В. Влияние селенсодержащих препаратов на морфологические показатели крови молодняка свиней // Физиология, морфология и биохимия животных. Межвузовский сборник научных трудов Мордовского государственного университета. Саранск, 2001. - С. 151.

49. Практикум по микробиологии: Учебное пособие / Е.З. Теппер, В.К. Шильникова, Г.И. Переверзева. -М.: Колос, 1993. 175 с.

50. Рекомендации по выращиванию грибов вешенки. М.: 1983. - 25 с.

51. Родионова Т.Н. Влияние добавок селена на продуктивность и показатели обмена веществ у кур-несушек: Автореф. дис. . канд. биол. наук. Москва, 1989.-С. 15-18.

52. Рокицкий П.Ф. Биологическая статистика. Минск: Вышэйша школа, 1967.-326 с.

53. Сале M., Лихачёв А.Н. Устойчивость природных штаммов возбудителей серой гнили к фунгицидам // Микол. и фитопатол. 1989. - Т .23., № 3. -С. 288-293.

54. Суриков М. Г., Голенда И.А. Гормоны и регуляция обмена веществ. -Минск: Беларусь, 1970. С.42.

55. Харченко В.Г., Чалая С.Н., Норицына М.В., Куликова Л.К. Синтез и антимикробная активность солей тиопирилия // Хим.-фарм. журн. 1976.1. Т. 10, № 1. С. 80-83.

56. Химическая защита растений: Учебник / Отв. ред. Г. С. Груздев М.: Агропромиздат, 1987. - 415 с.

57. Ченцов Ю.С. Общая цитология. М.: изд-во Моск. ун-та, 1984.350 с.

58. Шакури Б.К. Влияние солей селена на рост и развитие озимого ячменя на горно-каштановых почвах и на интенсивность микробиологических процессов: Мат-лы науч.- практ. конф. // Селен в биологии. Баку: Элм, 1976.1. С. 100-105.

59. Abe T., Nakaya R. // Japan J. Bacteriol. -1951. 463 p.

60. Alexander M. Introduction to soil microbiologi. New. York. - 2 nd ed. -1977.-467 p.

61. Alfthan G. Murcury and selenium in wild mushrooms // Proc. Finn. Soc. Nutrition Research. -1986:3 (abstract).

62. Bamsal M. P., Ip C., Medina D. // Proc. Soc. Environ. Biol. Med. 1991. -P. 147-154.

63. Bondhorst C. W., Palmer I. S. // J. Agrie, and Food Chem. 1957. N 5. -P. 931.

64. Breen W. M. Nutritional and medical value of special mushrooms // J.Food Prot. 1990. - 53, 10-P.883-894, 899.

65. Burk R. F. // J.Nutr. 1989. - 119, N 7. - P. 1051 -1054.

66. Butler J. A., Beilstein M. A., Whanger P. D. // J.Nutr. 1989. - 119, N 7. -P.1001-1009.

67. Castle A., Speranzini D., Rghei N., Aim G., Rinker D. Morphological and molecular identification of Trichoderma isolates on North American mushroom farms // Appl. Environ. Microbiol. 1998. Vol. 64, N 1. P. 133-137.

68. Davidse L. C. Modern selektiv fungicides. Jena: VEB Gustav Fisher Ver-glar, 1987.-P.185.

69. Chance B. The state of catalase in the respiting bacterial cell. Science, 1952. P. 106-202.

70. Chaudiere J., Tappel A .L. // J. Inorg. Biochem. 1984. Vol. 20. -P. 313-325.

71. Enoch H. G., Lester R. L. // J. Bacterid. 1972. - V. 110. - P. 1032.

72. Falcone G., Nickerson W. J. // Science. 1956. - V. 124. - P.722.

73. Falcone G., Nickerson W. J. // J. Bacterid. 1963. - V.85. - P. 754.

74. Fels I. G., Cheldelin V. H. // J. Biol. Chem. 1950. - V. 185 - P. 803.

75. Fujii M., Saijoh K., Sumino K. // Kobe. J. Med. Sci. 1997. N 1. -P. 13-23.

76. Ganther H. E. Trace Element Metabolism in Animals. Edinburgh London, 1970.-212 p.

77. Gavrilescu N., Peters R. A. // J. Biochem. 1931. V. 25 - 2150 p.

78. Kligler I. J., Levine V. E. // Biochem. Bull. 1915. V.4 - P. 196.

79. Klobloch H., Miksch J.N. // Biochem. Z. 1941. - P. 90.

80. Knight S. A. B., Sunde R.A. // J.Nutr. 1987. N 4. - P.732-38.

81. Levander O. Scientific rationale for the 1989 recommended dietary allowance for selenium // J.Am.Diet.Assoc. 1991. N 12. - P. 1572-1576.

82. Lorito M., Woo S. L., Fernandez I. G., Colucci G., Harman G. E., Pintor-Toro J. A., Filippone E., Muccifora S., Lawrence C. B., Zoina A., Tuzun S. and Scala

83. F. (1998). Genes from mycoparasitic fungi as a source for improving plant resistance to fungal pathogens. Proc. Natl. Acad. Sci. USA95: 7860-7865.

84. Monistrol L. F., Perezleblic M. L., Laborda F. Effect of subthol dose of be-nomyl on extracellulo enzyme production by cladosporum cucumerium. // Trans. Br. mycol. Soc. 1988. - V. 90. № 2. - P. 193-197.

85. Moxon A. L., Franke K. W. // Jndustr and Engng. Chem. 1935. - V. 27.1. P.77.

86. Muthumeenakshi S., Brown A. E., Mills P. R. Genetic comparison of the aggressive weed mold strains of Trichoderma harzianum from mushroom compost in North America ad the British Isles // Mycol. Res. 1998. - Vol. 102, N APR.1. P. 385-390.

87. Nicholas D. J. D., Scawin J. H. // Nature. 1956. - Vol. 178. - 1474 p.

88. Pinsent J. Biochem. J. 1954. - Vol. 57. - P. 10.

89. Potter V. R., Elvehjem C. A. // Biochem. J. 1936. - Vol. 30. - P. 189.

90. Ramauge M., Pallud S., Esfandiari A. et al. // Endocrinology. 1996. -Vol. 137,N7.-P. 3021-3025.

91. Schum A. C., Murphy J. C. // J. Bacterid. 1972. - V. 110. - P. 447.

92. Schwarz P. A., Foltz C. M. Selenium as an integral part of Factor 3 aganist dietary necrotic liver degeneration // J. Amer. Chem. Sci. 1957. - V. 79. - P. 3292.

93. Shrift A. Sulfur selenium antagonism. I. Antimetabolite action of selenate on the growth of Clorella vulgaris. //Am.J.Bot. 1954. - V. 41. - P. 223-230.

94. Singer R. The Agaricales in modern taxonomy. 3 th ed. Vaduz, 1975.912 p.

95. Spolar M. R., Schaffer E. M., Beelman R. B., Milner J. A. Selenium-enriched Agaricus bisporus mushrooms suppress 7,12-dimethylbenza.anthracene bioactivation in mammary tissue // Cancer Lett. 1999. - Vol. 138, № 1-2.1. P. 145-150.

96. Stalpers J. A. Identification of wood inhabiting Aphyllophorales in pure culture // Stud. Mycol. - 1978. - 16. - P. 248.

97. Tauber B. H. 1953. Oxidation of pyrogallol to purpurogallin by crystalli-catalase // J. Biol. Chem. V. 205, № 1. - P. 395.

98. Tilton R. C. Dissert. Abstr. 1967. - 28, 45-B.

99. Tilion R. C., Gunner H. B., Litsky W. // Canad. J. Microbiol. 1967. -V. 13.-P. 1175.

100. Weissmann G. S., Trelease S. F. // Amer. J. Bot. 1955. - V. 42. - P. 489.