Влияние рибофлавинового статуса организма на обмен и биохимические показатели обеспеченности витамином В-6

Харитончик, Лариса Анатольевна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Влияние рибофлавинового статуса организма на обмен и биохимические показатели обеспеченности витамином В-6
ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Влияние рибофлавинового статуса организма на обмен и биохимические показатели обеспеченности витамином В-6"

РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ МЕДИЦИНСКИХ НАУК ИНСТИТУТ ПИТАНИЯ

На правах рукописи УДК 577.164.1 :[543.867+ 15.08]

1 0 МАЙ Ш

ХАРИТОНЧИК ЛАРИСА АНАТОЛЬЕВНА

ВЛИЯНИЕ РИБОФЛАВИНОВОГО СТАТУСА ОРГАНИЗМА НА ОБМЕН И БИОХИМИЧЕСКИЕ ПОКАЗАТЕЛИ ОБЕСПЕЧЕННОСТИ ВИТАМИНОМ В-6

(03.00.04 биохимия)

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва -2000

Работа выполнена в лаборатории витаминов и минеральных веществ Института питания РАМН

Научный руководитель: доктор биологических наук,

старший научный сотрудник В.М.Коденцова

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор Г.А.Яровая

доктор биологических наук, профессор Ю.В.Букин

Ведущая организация: Биологический факультет МГУ им. М.В.Ломоносова

Защита диссертации состоится « /5>> 2000 г. в -/-У ч на за-

седании Диссертационного совета (Д.001.02.01) при Институте питания РАМН по адресу: 109240 Москва, Устьинский пр., 2/14.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института питания РАМН

Автореферат разослан « С » иЛ? 2000 г.

Ученый секретарь Диссертационного совета, кандидат медицинских наук

Еш^зг о

В.М.ЖМИНЧЕНКО

6 ££ • о

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Для оценки обеспеченности организма витамином В-6 определяют концентрацию ПАЛФ в плазме крови, экскрецию с мочой 4-ПК. Оба соединения являются продуктами реакций, катализируемых витамин B-2-зависимыми ферментами: ФМН-зависимой ПФО, превращающей пиридоксамин(пиридоксин)-5'-фосфат в ПАЛФ, и ФАД-содержащей альдеги-доксидазой, окисляющей ПАЛ до 4-ПК, экскретируемой с мочой (Букин Ю.В., 1975; Clements J.E., Anderson В.В., 1980; Donald E.S., 1986; Ebadi M., 1986; Adelekan et al., 1987). Алиментарный дефицит рибофлавина y крыс приводит к снижению на 50-85% активности ПФО во всех органах (Rasmussen K.M., е.а., 1979; Sauberlich Н Е., 1980), а ее активность в эритроцитах и степень активации in vitro ФМН (ФМН-эффект) предложено использовать в качестве показателя рибофлавинового статуса (Rasmussen K.M., е.а., 1979).

У людей с дефицитом витамина В-2 обнаружены сниженные скорость превращения пиридоксина в ПАЛФ и уровень ПАЛФ в крови по сравнению с людьми, обеспеченными этим витамином (Anderson B.B. е.а., 1976; Lakshnii A.V., Bamji M.S., 1974-1976). Недостаточность витамина В-2 у крыс и люден даже при достаточном содержании в рационе витамина В-6 сопровождается снижением экскреции 4-ПК до уровня, характерного для алиментарного дефицита пиридоксина (Kant А., 1988, Коденцова В.М. и др., 1992). Все это привело к « возникновению понятая вторичного эндогенного или сопутствующего дефицита функционально связанных витаминов группы В (Борец В.М. с соавт.,1988; Островский Ю.М.,1987; Sauberlich Н.Е., 1980), высказывается мнение, что рибофлавин является лимитирующим нугриентом (Madigan S.M. е.а., 1998). Однако на практике при использовании концентрации ПАЛФ в крови и экскреции 4-ГТК с мочой в качестве показателей, отражающих пиридоксиновый статус, обеспеченность витамином В-2 во внимание не принимается. В связи с этим, выяснение степени влияния недостаточности витамина В-2 на параметры, используемые в качестве показателей обеспеченности организма витамином В-6, представлялось весьма актуальной задачей.

Витамин B-6-зависимые ферменты участвуют в обмене катехоламинов и серотонина, образовании гистамина и др. биогенных аминов, играющих важную роль в регуляции процессов возбуждения и торможения центральной нервной системы, нарушения в функционировании которой наблюдаются при ФКУ. Ясности в вопросе об обмене этого витамина и его зависимости от обеспеченности витамином В-2 при ФКУ нет. Имеются данные о повышенной концентрации ПАЛФ в плазме крови детей, больных ФКУ (Anderson К., 1986; Prince А.Р., Leklem J.Е.,1994). При нагрузке триптофаном у пациентов с ФКУ, по данным Kochen W.et al (1975), не наблюдалось увеличения экскреции продуктов витамин B-6-зависимого метаболизма этой аминокислоты, тогда как по результатам Buhrdel P. et al (1982), отмечалось более чем 2-кратное увеличение выве-Принятые сокращения: ВЭЖХ - высокоэффективная жидкостная хроматография, ПАЛ(Ф)-пнридоксаль(фосфат), 4-ПК - 4-пиридоксиловая кислота, ПФО - пиридоксаминфосфатокси-даза, ФКУ - феннлкегонурия.

дение кинуренина, отражающее снижение активности ПАЛФ-зависимой кину-рениназы вследствие дефицита витамина В-6. Трактовка этих данных осложняется тем, что в данных обследованиях обеспеченность пациентов витамином В-2 во внимание не принималась. В связи с этим выявление особенностей обмена витамина В-6 при данном заболевании имеют исключительно важное значение для правильной оценки и коррекции пиридоксинового статуса организма больных ФКУ.

Применение некоторых лекарственных препаратов (противотуберкулезный препарат метазид, обладающий свойствами антивитамина В-6) индуцирует возникновение дефицита (лекарственный дефицит) витаминов группы В. За исключением витамина В-6, данные о влиянии препаратов изониазидового ряда на обмен других витаминов группы В отсутствуют. Особый интерес в этом отношении представляет витамин В-2, поскольку в метаболизме пиридоксина функционируют ФМН- и ФАД-зависимые ферменты, а недостаточность рибофлавина приводит к нарушению обмена витамина В-6.

Исследования проводились в соответствии с планами НИР Института питания РАМН по темам: Зависимость показателей витаминного статуса от обеспеченности рибофлавином и разработка возрастных показателей обеспеченности витаминами группы В в норме и при различных заболеваниях (1993-95); Разработка системы оценки и коррекции витаминного статуса детского и взрослого населения России (1996-1998); Особенности обмена витаминов, разработка критериев оценки и способов улучшения витаминного статуса детей при фе-нилкетонурии (1999-2000).

Цель и задачи исследования. Цель работы - изучение влияния недостаточности рибофлавина на показатели обеспеченности витамином В-6 в норме и при некоторых состояниях организма с измененным обменом витамина В-6.

В соответствии с этим предполагалось решить следующие задачи:

1. Провести сравнительный анализ существующих методов определения 4-ПК в моче с целью выбора наиболее надежного. Наладить метод определения Г1АЛФ в плазме крови с помощью ВЭЖХ. Провести корреляционный анализ методов оценки обеспеченности организма витамином В-6. Установить диапазоны концентраций ПАЛФ и величин экскреции 4-ПК с мочой, соответствующие адекватной обеспеченности здоровых детей и взрослых витамином В-6.

2. Исследовать влияние алиментарной недостаточности рибофлавина на показатели обеспеченности организма витамином В-6 в эксперименте на животных и на клиническом материале.

3. Охарактеризовать особенности обмена витамина В-6 у больных ФКУ

детей.

4. Изучить влияние метазида на обмен витаминов В-2 и В-6 в эксперименте на крысах и попытаться провести коррекцию выявленных нарушений, используя комбинированный препарат метазида с рибофлавином и/или пиридок-сином.

Научная новизна работы. Изучено влияние различной обеспеченности

организма животных и людей рибофлавином на показатели пиридоксинового статуса. Выявлено, что наиболее чувствительным к недостаточности витамина В-2 параметром является экскреция 4-ПК с мочой.

На основании сравнительного и корреляционного анализа выбраны корректные, специфические методы определения витамина В-6 в крови и моче, адекватно отражающие обеспеченность им организма. Впервые получена полная кривая зависимости экскреции 4-ПК от содержания ПАЛФ в плазме крови во всем диапазоне концентраций ПАЛФ. На основе изучения взаимозависимости этих показателей, а также из зависимости от содержания витамина В-6 в рационе установлены пределы концентраций ПАЛФ в плазме крови и величины часовой экскреции 4-ПК с мочой, отражающие достаточную обеспеченность организма взрослых и детей разного возраста витамином В-6.

Выявлены особенности обмена пиридоксина при ФКУ, проявляющиеся в его повышенном содержании в плазме крови и сниженном выведении 4-ПК с мочой. Установлено, что показатели обеспеченности витамином В-6 больных ФКУ приближаются к таковым у здоровых при дополнительном приеме витамина В-2.

Показано, что введение противотуберкулезного препарата метазида, обладающего свойствами антивитамина В-6, приводит к развитию недостаточности витамина В-2 у крыс.

Научно-практическое значение работы. Показано, что величина экскреции 4-ПК дает правильную информацию об обеспеченности витамином В-6 только при нормальной обеспеченности организма витамином В-2. Определен диапазон концентраций ПАЛФ в плазме крови и пределы экскреции 4-ПК с мочой, соответствующие адекватной обеспеченности организма витамином В-6 здоровых детей и взрослых. Эти показатели использованы для оценки пиридоксинового статуса.

Данные о нормализующем влиянии дополнительного приема физиологических доз витамина В2 на обмен витамина В-6 при ФКУ используются в схеме лечения больных детей в клиническом отделении Московского городского центра неонатального скрининга на базе детской психиатрической больницы № 6.

Полученные результаты использованы на кафедре технологии лекарств Рязанского медицинского университета при разработке рецептуры комплексного противотуберкулезного препарата, содержащего наряду с витамином В-6 рибофлавин.

Полученная информация может быть использована в научно-исследовательской работе, медицинской и педагогической практике.

Разработанные методы и критерии использованы в выборочных обследованиях витаминной обеспеченности различных групп взрослого и детского населения и оценке эффективности витаминизации.

Апробация диссертации. Результаты исследований доложены на 9 Международ. симп. "Vitamin В-6 and carbonyl catalysis" (Кипр, 1994); 7 Европейской конф. "Over- and Undernutrition" (Австрия, 1995); 2 и 3 симп. "Неинвазивные методы диагностики" (Москва, 1995,1997); 2 Конгр. педиатров России "Болезни органов пищева-

рения у детей. Питание здоровых и больных детей" (Н.Новгород, 1996); 2 между нар. симп. "Питание и здоровье: биологически активные добавки к пшце" (Москва, 1996); международ, конф. "Лечебно-профилактическое и детское питание" (С.-Петербург, 1996); международ, симп, "Экология человека: пищевые технологии и продукты на пороге XXI века (Пятигорск, 1997), научно-практ. конф. с международ, участием "Актуальные проблемы профилактики неинфекционных заболеваний" (Москва, 1997), 3 международ, контр. "Питание и здоровье. Биологически активные добавки в клинике внутренних болезней (Тюмень, 1997), SS1EM 36th Annual Symposium (Йорк, 1998), 2 международ, научно-практ. конф. "Продовольственный рынок и проблемы здорового питания" (Орел, 1999), 6 конф. "Актуальные проблемы абдоминальной патологии у детей" (Москва, 1999), 5 конгр. педиатров России "Здоровый ребенок" (Москва, 1999), международ, конгр. "Парентеральное и энтеральное питание" (Москва, 1999), 1 Всерос. конгр. с междунар. участием «Питание детей: XXI век» Москва, 2000).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 19 работ.

Объем и структура работы. Диссертационная работа, общим объемом 132 стр., состоит из введения, обзора литературы, описания материала и методов исследования, изложения результатов собственных исследований и их обсуждения, заключения, выводов и библиографического указателя (279 источников), содержит 14 таблиц и 20 рисунков.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

При изучении влияния степени обеспеченности витамином В-2 на параметры обеспеченности витамином В-б использовали 40 крыс (масса тела 140±10 г), получавших полноценный полусинтетический рацион (Bamji M.S., Sharada D., 1972), на основе казеина, отмытого от водорастворимых витаминов. Животные были разделены на 5 групп, получавших с рационом в течение 21 дня дробные количества рибофлавина (от 3 до 33 мкг/сут).

В экспериментах по исследованию влияния метазида на обмен витамина В-6 использовали 70 крыс породы Вистар (масса тела 200±10 г), получавших рацион вивария Рязанского медицинского университета. Животные были предоставлены ассистентом кафедры технологии лекарств Т.А.Коваленко. .

Эксперимент 1 на крысах с исходной недостаточностью витамина В-2. Животные 1 -ой группы (контроль) - интактные животные; 2-я группа (метазид) -животным в течение 10 суток вводили ректально суппозитории, содержащие метазид в дозе 20 мг на 100 г массы тела. 3-я группа (метазид+В-6) - животным в течение 10 суток вводили ректально суппозитории, содержащие метазид в дозе 20 мг на 100 г массы тела и пиридоксин гидрохлорид -100 мкг на крысу.

Эксперимент 2 на крысах, адекватно обеспеченных витамином В-2. Животные были разделены на 4 группы по 10 крыс в каждой. 1-я группа (контроль) и 2-я группа (метазид) были такими же как и в эксперименте 1. 3-я группа (ме-тазид+В-2) - животным вводили ректально суппозитории, содержащие метазид в дозе 20 мг на 100 г массы тела и рибофлавин 100 мкг на крысу. 4-я группа (метазид+В-2+В-6) - животным вводили суппозитории, содержащие метазид (20 мг на 100 г массы тела), рибофлавин и пиридоксин (по 100 мкг/ крысу).

В-работе использовали венозную кровь после ночного перерыва и утреннюю порцию мочи, собранную за 1 ч натощак, практически здоровых взрослых и детей обоего пола (доноры крови, добровольцы, дети, отдыхающие в подмосковных санаториях им. А.И.Герцена и «Клязьма») и 36 больных ФКУ детей 6-8 лет, посещающих специализированный детсад при психоневрологическом диспансере № 6 Москвы. Подбор и диагностика больных проведены С.Н.Денисовой, Т.В.Бушуевой (Институт питания РАМН).

Для улучшения витаминной обеспеченности различных групп населения были использованы напитки серии «Золотой шар» с витаминами и ß-каротином («Валетек-продимпекс», РФ), содержащая витамины биологически активная добавка к пище «Витабаланс 2000» («Витамакс», США).

ПАЛ и ПАЛФ в плазме крови и гидролизатах печени определяли методом обращеннофазовой ВЭЖХ (Ubbink J.B., 1985,1987). В отличие от оригинальной методики, предполагающей предварительное превращение ПАЛФ в семикарба-зон до введения в колонку, осуществляли одновременную постколоночную подачу этого реагента и раствора щелочи. Исключение стадии очистки экстракта плазмы диэтиловым эфиром упростило и сократило время анализа.

4-ПК в моче определяли с помощью ВЭЖХ (Gregory J.F., 1979).

Активность аспартатаминотрансферазы и ПАЛФ-эффект гемолизатов эритроцитов определяли спектрофотометрически в системе, сопряженной с ма-латдегидрогеназой при 340 нм (Коденцова В.М., 1990). Концентрацию рибофлавина в плазме крови и моче определяли титрованием рибофлавинсвязываю-щим белком (Коденцова В.М., 1994). Интенсивность флуоресценции измеряли на спектрофлуориметре «Perlón Elmer» MPF-43A (Англия).

Белок определяли биуретовым методом, ксантуреновую кислоту в моче -колориметрически (Wachestein М., 1952), креатинин - методом Поппера (1987). Активность щелочной фосфатазы в сыворотке крови измеряли по гидролизу п-нитрофенилфосфата (Болдырев A.A., 1983).

Коэффициенты линейной корреляции, уравнения линейной регрессии и уравнения, описывающие ветви кривых зависимости между показателями обеспеченности организма витамином В-6, рассчитывали методом наименьших квадратов (Лакин Г.Ф., 1990) с использованием программы "Quattro-Pro, v.1.0" (Borland). Для статистической обработки использовали t-критерий Сгыодента, доверительный интервал, медиану (Me), моду (Мо), среднюю величину (М) и среднеквадратичное отклонение (а) (Урбах В.Ю., 1975). Коэффициенты корреляции рангов (р) рассчитывали по Спирмену (Гублер Е.В., Генкин A.A., 1973).

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ 1. Сравнительный анализ методов оценки обеспеченности организма витамином В-6.

На первом этапе с целью выбора наиболее надежных и специфичных методов для исследования обмена пиридоксина были проведены сравнительный и коррелятивный анализ, налажены методы определения параметров, использующихся для оценки обеспеченности организма витамином В-6.

1.1. Сравнение методов определения 4-пнридоксиловой кислоты в моче. Пределы обнаружения 4-ПК в моче флуориметрическим методом с ис пользованием внешнего стандарта, методом добавок и ВЭЖХ составили 15, К и 4 нг/мл, соответственно. Воспроизводимость метода (п=12) составила дл) ВЭЖХ 1,5%, для метода с использованием внутреннего стандарта - 3,6%, дл) метода с внешним стандартом - 5,6%. Правильность метода (процент выявлен») или открытия) составила, соответственно, 97,5±2,6% (п=10), 98,7+2,8% (п=12) 101,713,9% (п=12).

Парные расчеты коэффициентов линейной корреляции при определении 4-ПК в 34 образцах мочи людей показали достаточно высокую сходимость между методом ВЭЖХ и методом добавок: R=0,98. Методы дают практически совпадающие результаты (у=1,0х+0,06). Коэффициент линейной корреляции между методом ВЭЖХ и методом с внешним стандартом - R=0,77. Последний метод дает завышенные результаты по сравнению с ВЭЖХ (уравнение линейной регрессии у=0,8х+0,52), особенно, в области низких концентраций. Таким образом, использование внешнего стандарта не всегда позволяет выявить дефицит витамина В-6 по экскреции его метаболита с мочой.

Расчет критерия Стыодента для каждой из пар сравниваемых методов показал отсутствие различий между результатами определения 4-ПК в моче с помощью метода ВЭЖХ и методом добавок (t=l,33, tra6n=l,68, f=40, р<0,05) и наличие таковых между результатами, полученными методом с использованием внешнего стандарта и методом ВЭЖХ (t=2,99, , f=40, р<0,05).

Таким образом, метод ВЭЖХ является наиболее надежным и специфичным. Величины, измеряемые с его помощью, согласуются с данными литературы (Gregory J.F., 1979; Ubbink J.B., 1986).

1.2. Определение пиридоксалевых коферментов в плазме крови Пределы обнаружения ПАЛФ и ПАЛ в плазме крови принятым нами методом составили 0,6 и 0,8 нг/мл, соответственно. Воспроизводимость метода (п=6) - 2%, процент выявления ПАЛФ - 96,1±4,0%, что сопоставимо с обычными для ВЭЖХ характеристиками.

2. Изменение обмена витамина В-6 при алиментарной недостаточности рибофлавина.

2.1. Влияние различной обеспеченности витамином В-2 на обмен пиридоксина у крыс В эксперименте на половозрелых крысах было обнаружено, что при глубоком дефиците витамина В-2 (около 3 мкг/сут. рибофлавина на крысу) происходило достоверное увеличение содержания в печени ПАЛ на 28% и пиридок-самина - на 52%, а экскреция 4-ПК имела тенденцию к уменьшению, что, по-видимому, обусловлено снижением активности ФАД-зависимой альдегидокси-дазы (рис. 1). Расчет коэффициентов ранговой корреляции выявил наличие выраженной обратной связи между уровнем витамеров В-6 в печени животных и содержанием рибофлавина в их рационе (р=-0,356, п=35, Р<0,05) и печени (р=-0,199, п=35, Р<0,10).

200

. шг/ещ

ЕСи+012* . »/МЛ П11М1 про»*

Рис. 1. Зависимость содержания ПАЛ (•), пи-ридоксамина (о) в печени крыс и суточной экскреции 4-ПК с мочой (А) от содержания в рационе рибофлавина.

Рис. 2. Зависимость часовой экскреции 4-ПК от концентрации пирндоксалевых кофермен-тов в плазме крови людей, обеспеченных рибофлавином (•) и с его недостаточностью (А)

2.2. Зависимость показателен обеспеченности витамином В-6 организма взрослых и детей от их рибофлавннового статуса.

Результаты, полученные на крысах, нашли подтверждение при обследовании здоровых детей (39 человек) и взрослых обоего пола (45 человек), которые были разделены на 2 группы: обеспеченных витамином В-2 (уровень рибофлавина в плазме крови > 6 нг/мл) и с его недостаточностью.

Высокая степень корреляции между содержанием ПАЛФ в плазме крови и экскрецией 4-ПК с мочой обнаруживалась только при адекватной обеспеченности (рис. 2, кривая 1) организма взрослых (р = 0,511, п = 20, Р < 0,01) и детей (р = 0,469, п=22, Р < 0,01) рибофлавином. При дефиците витамина В-2 экскреция 4-ПК (кривая 2) практически не зависела от содержания ПАЛ+ПАЛФ в плазме крови (р = 0,041 (п=11) и 0,049 (п=18)).

Таким образом, результаты обследования людей и данные, полученные в опытах на крысах, свидетельствуют о том, что недостаток в питании рибофлавина приводит к снижению экскреции 4-ПК на 50-60%, уменьшению концентрации пиридоксалевых коферментов в крови (на 20-30%), причем степень изменения этих показателей (особенно для мочи) сопоставима по величине с изменениями при истинном пищевом дефиците витамина В-6. Т. е. по этим признакам алиментарный дефицит рибофлавина может быть ошибочно принят за пищевой дефицит витамина В-6.

3. Установление критериев обеспеченности витамином В-6 здоровых взрослых и детей.

Учитывая, что показатели обеспеченности организма витамином В-6 зависят от рибофлавннового статуса, при установлении критериев обеспеченности витамином В-6 и выявления коррелятивных связей между параметрами обеспеченности этим витамином принимались во внимание только показатели лиц, адекватно обеспеченных витамином В-2.

Критерии адекватной обеспеченности организма человека витамином В-6 устанавливали на основании следующих подходов (Коденцова В.М., 1996):

1. Построение кривых зависимости между парами различных показателей обеспеченности организма витамином В-6.

2. Изучение зависимости показателя пиридоксинового статуса от содержания витамина В-6 в рационе.

3. Статистическая обработка данных (частоты распределения показателя после витаминизации).

4. Установление величины показателя, при которой происходит нарушение метаболических функций

Для построения метаболических кривых близкие по величине концентрации ПАЛФ объединяли в группы и для каждой образовавшейся группы рассчитывали среднее значение экскреции 4-ПК (Ног\У1Й М.К., 1986, Коденцова В.М., 1996). Обшая для здоровых взрослых людей и детей 9-13 лет кривая зависимости между концентрацией ПАЛФ в плазме крови и экскрецией 4-ПК с мочой имеет сложную форму (рис. 3). Между этими показателями обеспеченности организма витамином В-6 обнаруживается высокая степень не линейной, а ранговой корреляции (табл. 1).

Таблица 1. Коэффициенты ранговой корреляции между показателями обеспеченности витамином В-6.

Параметр Р п Уровень значимости

Концентрация ПАЛФ в плазме - ПАЛФ-эффект -0,445 20 Р<0,05

Концентрация ПАЛФ в плазме - экскреция 4-ПК

Здоровые взрослые и дети 9-13 лет 0,557 20 Р<0,01

Здоровые дети 5-7 лет 0,514 25 Р<0,01

Возрастающая ветвь кривой (участок 3) отражает ( >ункциональное со-

стояние организма, при котором существует пропорциональность между уровнем ПАЛФ в плазме крови (диапазон от 7,5 до 13 нг/мл) и экскрецией 4-ПК с мочой (увеличение с 70 до 255 мкг/ч). Это наблюдается в ситуации, когда организм насыщен витамином В-6, т.е. поступление витамина В-6 с пищей соответствует или несколько превышает необходимое. При концентрациях ПАЛФ, превышающих 13 нг/мл, наблюдается постепенное замедление скорости выведения 4-ПК. В области концентраций ПАЛФ в плазме крови от 18 до 25 нг/мл, происходит переход в другое функциональное состояние (участок 4), при котором

Рис. 3. Зависимость часовой экскреции 4-ПК с мочой от содержания ПАЛФ в плазме крови у здоровых взрослых (•) и детей 9-13 лет (о).

[ПАЛФ], нг/мл плазмы крови

экскреция практически не зависит от уровня ПАЛФ в плазме крови. Это может происходить тогда, когда поступление витамина В-6 с пищей существенно превышает необходимое и, по-видимому, отражает наличие некоей лимитирующей стадии в метаболизме витамина В-6. Возможно, таким звеном является витамин В-2-зависимая альдегидоксидаза, окисляющая пиридоксалевые коферменты в 4-ПК (ЕЬасН М., 1986). При недостаточности витамина В-2 за счет уменьшения образования и, следовательно, выведения 4-ПК с мочой, кривая зависимости экскреции 4-ПК от концентрации ПАЛФ в плазме крови будет становиться более плоской. Участок 3 при углублении дефицита витамина В-2 постепенно будет сжиматься вплоть до полного исчезновения при глубоком дефиците рибофлавина и превращения в прямую (см. рис. 2).

Участки 1 и 2, очевидно, отражает ситуацию, когда организм недостаточно обеспечен витамином В-6, т.е. состояние, при котором концентрация ПАЛФ в плазме крови поддерживается за счет внутренних резервов организма, возможно, из пула ПАЛФ, находящегося в скелетных мышцах.

В пользу такой интерпретации кривой зависимости экскреции 4-ПК от концентрации ПАЛФ в плазме крови может служить зависимость концентрации ПАЛФ от уровня витамина В-6 в рационе, представляющая собой кривую (1) насыщения (рис. 4). Увеличение потребления витамина В-6 до величин, в 3-4 раза превышающих рекомендуемые 2 мг, приводит к увеличению концентрации ПАЛФ до 19 нг/мл. Выведение 4-ПК с мочой (кривая 2) при увеличении уровня ПАЛФ от 9 до 19 нг/мл находится в диапазоне от 220 до 300 мкг/ч. Таким образом, при адекватном или несколько избыточном потреблении витамина В-6, обеспечивающем насыщенность организма этим витамином (участок 3 и начало участка 4 на рис. 3), уровень ПАЛФ в плазме крови находится в диапазоне от 9 до 20 нг/мл, а часовая экскреция 4-ПК - в пределах от 75 до 260 мкг.

В качестве еще одного подхода для определения границ нормальной обеспеченности организма витамином В-6 были проанализированы частоты

%зо

0 10 20 30 40

[ПАЛФ], нг/мл

Рис. 4. Зависимость концентрации ПАЛФ в плазме крови (о) и экскреции 4-ПК с мочой (•) от содержания внтамина В-6 в рационе.

г * 6

Содержание витамина Гс в рационе, мг

Рис. 5, Распределение частот встречаемости (%) данной концентрации ПАЛФ в плазме крови 60 здоровых взрослых людей после В-6 витаминизации. Сплошная вертикальная линия -средняя величина, пунктирные - доверительный интервал дм математического ожидания.

встречаемости концентрации ПАЛФ в плазме крови у людей после В-6-витаминнзации (рис. 5). В соответствии с гистограммой, представляющей собой распределение, близкое к распределению Гаусса (М = 10,6 нг/мл, Ме = 9,4 нг/мл, Мо = 9,2 нг/мл), доверительный интервал (а = 4,6 нг/мл) для математического ожидания, в который входят 70,0% обследованных, составляет от 6,0 до 15,2 нг/мл. С учетом лиц с уровнем ПАЛФ, превышающем 15,2 нг/мл, доля людей, обеспеченных этим витамином, составит 86,7% от всех дополнительно получавших витамин В-6. Исходя из этого, в качестве нижней границы нормальной обеспеченности организма витамином В-6 следует принять концентрацию ПАЛФ 6 нг/мл плазмы крови, в качестве верхней границы - 20 нг/мл.

Аналогичным способом устанавливали нормальные величины показателей обеспеченности витамином В-6 для детей. Кривая зависимости экскреции 4-Г1К от концентрации ПАЛФ для детей 5-7 лет имеет ту же форму, что и для взрослых (рис. 6), причем точки перегиба, т.е. перехода с одного участка на другой, происходят практически при одних и тех концентрациях ПАЛФ в плазме крови (см. рис. 3). Кривые практически совпадают в области низких концентраций ПАЛФ (менее

|11АЛФ|, нг/мл пла1мы кропи

Рис. 6. Зависимость часовой экскреции 4-ПК с мочой от содержания ПАЛФ в плазме крови у здоровых детей 5-7 лет.

7-8 нг/мл), однако в области более высоких концентраций ПАЛФ кривая для детей заметно снижена относительно таковой для взрослых. Повышение концентрации ПАЛФ с 7,5 до 22 нг/мл (участок 3 и начало участка 4) сопровождается увеличением экскреции 4-ПК у детей с 45 до 150 мкг/ч, а у взрослых - с 70 до 250 мкг/ч. Это означает, что концентрации ПАЛФ в плазме крови, соответствующие нормальной обеспеченности организма витамином В-6, одинаковы для взрослых и детей, тогда как при незначительной разнице нижних пределов экскреции 4-ПК, отражающих адекватную обеспеченность витамином В-6, верхний предел этого показателя для детей существенно ниже.

В качестве дополнительных подходов для установления критериев адекватной обеспеченности организма детей и взрослых витамином В-6 были исследованы взаимозависимости других пар показателей, имеющие 2-фазный характер (табл.2).

Наконец, у людей с концентрацией ПАЛФ в плазме крови < 8 нг/мл и экскрецией 4-ПК < 70 мкг/ч наблюдалось нарушение метаболизма ниацина, проявляющееся в снижении экскреции 1-МНА при достаточном содержании ниацина в рационе до уровня, характерного для алиментарного дефицита витамина PP.

Большинство способов определения критериев и границ величин показателей, соответствующих нормальной обеспеченности организма витамином В-6,

Таблица Я Показатели адекватной обеспеченности организма витамином В-6.

Зависимость, используемая для расчета (возраст) ПАЛФ -эффект Уровень ПАЛФ, нг/мл плазмы крови Экскреция 4-ПК с мочой, мкг/ч

Плазма - экскреция (взрослые, дети 9-13 лет) - 7,5-25 70-255

Плазма - экскреция (дети 5-7 лет) - 7,0-20 55-150

ПАЛФ-эффект - плазма (взрослые) 2,1 9,2 -

ПАЛФ-эффект - экскреция (дети 5-7 лет) 2,9 - 57

Частоты распределения показателей после В-6 витаминизации - 6-20 -

Нарушение метаболических функций - < 8,0 <70

Содержание витамина В-6 в рационе (взрослые) - 9-20 75-260

Критерий адекватной обеспеченности

Взрослые н дети старше 9 лет 1,0-2,5 8,0-20 70-260

Дети 5-7 лет 1,0-2,5 8,0-20 60-150

дали достаточно хорошо совпадающие между собой величины (табл. 2). Концентрация ПАЛФ в плазме крови, отражающая нормальную обеспеченность организма витамином В-6, находится в диапазоне от 8 до 20 нг/мл, нижняя граница нормы (в среднем 7,8+0,4 нг/мл плазмы крови) согласуется с величиной 8,5 нг/мл, рекомендуемой в качестве нормы другими авторами (Driskell J.A., 1984; Donald Е.А., 1986; Pingoli А, 1995) и ранее установленными в нашей лаборатории (Коденцова В.М.,1996). Концентрации ПАЛФ, превышающие 20 нг/мл, свидетельствуют об избыточном поступлении витамина В-6 с рационом. Концентрации ПАЛФ менее 4 нг/мл указывают на глубокий дефицит пиридоксина.

Часовая экскреция 4-ПК для взрослых и детей старше 9 лет, характеризующая нормальную обеспеченность этим витамином, находится в пределах от 70 до 250 мкг, детей 5-7 лет - от 60 до 150 мкг.

4. Особенности обмена витамина В-6 при фенилкетонурии.

Между содержанием ПАЛФ и рибофлавином в плазме крови больных детей обнаруживалась положительная ранговая корреляция (р=0,313, п=28, Р< 0,05). Как и в случае здоровых людей, у больных ФКУ детей наблюдалась явная зависимость экскреции 4-ПК от обеспеченности организма витамином В-2: у детей с выраженным дефицитом рибофлавина (концентрация в плазме крови < 4 нг/мл) экскреция 4-ПК была достоверно (Р<0,001) ниже, чем у адекватно обеспеченных витамином В-2, и составила 75±13 мкг/ч (п=9) против 145±11 мкг/ч (п=24). При этом в обеих группах содержание ПАЛФ в плазме крови было одинаковым и достаточно высоким (18,9±2,2 и 18,8±1,5 нг/мл).

В связи с этим для исследования обмена витамина В-6 принимались во внимание только показатели детей, адекватно обеспеченных витамином В-2.

Гистограмма распределения частот встречаемости (в %) данной концентрации ПАЛФ в плазме крови больных ФКУ детей, получавших помимо витамина В-6, содержащегося в продуктах естественного происхождения, по 1,7 мг пиридоксина за счет специализированного продукта, что близко к рекомендуе-

[11АЛФ1, «г/мл

10 20 30

[ПА Пф], л ппази ы Рис. 8. Зависимость экскреции 4-ПК с мочой от концентрации ПАЛФ в плазме крови у детей больных ФКУ (1). В скобках радом с точкой указано количество обследованных. Пунктирной линией нанесена соответствующая зависимость у здоровых детей (2).

Рис. 7. Распределение частот встречаемости (в %) данной концентрации ПАЛФ в плазме крови детей, больных ФКУ. Сплошная вертикальная линия - средняя по группе всличчна, пунктирные - доверительный интервал для математического ожидания. Сплошная кривая - распределение для здоровых детей, обеспеченных витаминами В2 и В6.

мому суточному потреблению этого витамина для здоровых детей, характеризуется симметрией относительно средней по группе концентрации ПАЛФ (М= 17,6 нг/мл), о чем свидетельствует близость к этой величине медианы (Ме=16,5 нг/мл) и моды (Мо=16,5 нг/мл), однако кривая распределения сильно сдвинута вправо (в область высоких концентраций) относительно обычно наблюдаемых кривых распределения для здоровых, хорошо обеспеченных витамином В-6 людей (рис. 7). Средняя по группе концентрация ПАЛФ в 2 раза выше величины, принятой в качестве критерия адекватной обеспеченности витамином В-6 здоровых детей (8 нг/мл), что согласуется с данными Anderson К. (1986) и Prince А.Р., Leklem J.E. (1994). Если у здоровых детей концентрации ПАЛФ в плазме крови, превышающие 20 нг/мл, встречаются крайне редко, го у половины обследованных больных ФКУ детей этот параметр оказался выше 16,5 нг/мл, что не является следствием снижения активности щелочной фосфатазы плазмы крови у больных ФКУ детей (активность этого фермента у больных составила 23,0±1,4 Е/л (п=7) против 23,3±2,4 Е/л (п=10) у здоровых детей).

В соответствии со средним квадратичным отклонением (<т=6,5 нг/мл), в доверительный интервал для математического ожидания от 11,1 до 24,1 нг/мл попали показатели 78,6% обследованных. Если учесть долю детей с уровнем ПАЛФ в плазме крови, превышающим верхнюю границу доверительного интервала (т.е. более 24,1 нг/мл), что в сумме составило в данной выборке 90,5%, то в качестве нижней границы, отражающей достаточное поступление витамина В-6, можно считать концентрацию ПАЛФ в плазме крови 11 нг/мл.

На рис. 8 представлена кривая (1) зависимости экскреции 4-ПК от содержания ПАЛФ в плазме крови для больных ФКУ детей, характеризующаяся высокой степенью ранговой корреляции (р=0,479, п=28, Р<0,01). Кривая имеет двухфазный характер, расположена существенно ниже и сдвинута вправо относительно кривой (2), полученной для здоровых детей. Т.е. у больных ФКУ детей содержание ПАЛФ в плазме крови выше, чем обычно наблюдается у здоровых

детей, причем при одинаковой концентрации ПАЛФ в плазме крови выведение 4-ПК у больных детей существенно ниже.

Обращает на себя внимание отсутствие для обследованных детей пологой ветви, соответствующей низким концентрациям ПАЛФ (менее 10 нг/мл), т.е. отражающей недостаточную обеспеченность организма витамином В-6. Возрастающая ветвь кривой отражает состояние насыщенного витамином В-6 организма, при котором существует пропорциональность между концентрацией ПАЛФ в плазме крови и выбросом конечного продукта его метаболизма с мочой (у=9,04х-19,13). При уровне ПАЛФ > 20 нг/мл происходит переход в другое функциональное состояние, отражающее наличие лимитирующей витамин-В-2-зависимой стадии (альдегидоксидаза) в метаболизме витамина В-6, при котором экскреция слабо зависит от уровня ПАЛФ в плазме крови (у'=0,41х'+138,7).

В пользу этого предположения свидетельствует тот факт, что потребление больными ФКУ детьми дополнительно по 2 мг рибофлавина сопровождалось уменьшением в 1,4 раза концентрации ПАЛФ в плазме крови и увеличением в 1,3 раза экскреции 4-ПК с мочой (табл. 3). При этом относительное количество детей с повышенным уровнем ПАЛФ в плазме крови уменьшилось в 2,6 раза, а со сниженной экскрецией - в 5 раз. Таким образом, средние значения обоих показателей приближались к характерным для здоровых детей. Это можно рассматривать как косвенный аргумент в пользу более высокой потребности больных ФКУ детей в витамине В-2. Кроме того, при дополнительном приеме витамина В-2 наблюдалась тенденция к уменьшению выведения с мочой ксатуре-новой кислоты, экскреция которой возрастает у здоровых людей при нагрузке триптофаном в условиях дефицита витамина В-6 (ЕЬаШ М., 1986). Таблица 3. Влияние 3-недельного дополнительного приема 2 мг/сут. рибофлавина на

показатели обеспеченности организма больных ФКУ детей витамином В6.

06- Пределы Количество обследован-

Исследуемый п сле- М ±т колеба- ных, %

показатель дова-ние ний с уровнем > 20 нг/мл с экскрецией < 70 мкг/ч

ПАЛФ, нг/мл плазмы 16 1 21,4±2,0 10,1-38,1 50 -

2 15,8±1,2* 9,6-26,1 19 -

ПАЛ, нг/мл плазмы 16 1 9,4±0,8 4,1-16,1 - -

2 6,3±1,5 1,2-21,8 - -

Экскреция 4-ПК, мкг/ч 11 1 88±16 31-192 - 45

2 118±14 60-205 - 9

Экскреция ксантурено- 9 1 92±15 35-241 - -

вой кислоты, мкг/ч 2 60±13 31-131 - -

Примечание: 1 - обследование до витаминизации;

2 - обследование после витаминизации.

* - достоверное отличие (Р<0,05) от показателя до витаминизации.

В целом, следует отметить, что для страдающих ФКУ детей характерно повышенное по сравнению со здоровыми детьми содержание ПАЛФ в плазме

крови, что согласуется с данными других авторов (Anderson К., 1986, Prince А Р. 1994). Выявленная тенденция к нормализации показателей обеспеченности витамином В-6 у больных ФКУ детей при потреблении повышенных доз витамина В-2 указывает на необходимость дальнейших исследований по установлению оптимальпмх уровней потребления этих витаминов при данном заболевании. 5. Мо!п:ид-инд\цируемая недостаточность витаминов В-2 и В-6 у крыс и ее предотвращение при использовании комбинированных препаратов метазида с рибофлавином и пнридоксином.

Показатели обеспеченности витаминами В-2 и В-6 крыс с исходной умеренной недостаточностью витамина В-2 (эксперимент 1) при введении им суп-позиторне?. с метазидом представлены в табл. 4. Введение таким крысам метазида уже через 10 сут. приводило к дальнейшему углублению недостаточности витамина В-2, что проявлялось в достоверном снижении (на 15%) его содержания в печени до уровня, характерного для выраженного дефицита этого витамина, и тенденции к снижению концентрации рибофлавина в плазме крови. Суточная экскреция рибофлавина с мочой при этом увеличивалась в 3 раза. Эффект метазида на содержание витамина В-2 в эритроцитах был менее заметен.

Введение метазида крысам с дефицитом витамина В-2 приводило к ухудшению обеспеченности витамином В-6, что проявлялось в тенденции к снижению содержания ПАЛ в печени и увеличении экскреции 4-ПК с мочой в 1,6 раза (табл. 4). Активность витамин B-6-зависимой аспартатаминотрансферазы эритроцитов при этом не изменялась и составила 1,02±0,09 для контрольной группы и 1,00±0,07 мкмоль/мин на 1 мл для животных, получавших метазид. Таблица 4. Суточная экскреция с мочой и содержание в печени и плазме крови вита-

минов группы В у крыс с умеренным дефицитом витамина В-2 при ректальном введении в суппозиториях метазида и его комбинированного препарата с пиридоксином (М ± т; п=101.__

Показатель контроль метазид метазид! В-6

Суточная экскреция с мочой, мкг

рибофлавин 1,4±0,2 4,4±0,8* 7,1±0,9*'**

4-ПК 11,1±0,9 18,1±1,1* 48,0±2,1*'**

1 -метилникотинамид 2,4±0,3 2,7±0,3 3,5±0,6

Уровень в печени, мкг/г

рибофлавин 24,6±1,1 21,0+1,3* 21,7±1,0 •

пиридоксаль 1,20±0,08 1,07±0,10 1,50+0,05*'**

Уровень в плазме, нг/мл

рибофлавин 14,1±1,0 П,1±1,2 15,6±1,3**

Содержание в эритроцитах, нг/мл

рибофлавин 50,9±4,1 41,3 ±6,9 -

Примечание. Здесь и в табл.5 * - достоверное отличие (р<0,05) от контрольной группы, ** - от группы, получавшей метазид.

Введение суппозиториев с комбинированным препаратом метазида с пиридоксином не восстанавливало содержание рибофлавина в печени до уровня контрольных животных и характеризовалось резким возрастанием экскреции 4-

ПК с мочой и некоторым увеличением содержания ПАЛ в печени. Экскреция конечного продукта метаболизма ниацнна по ПАЛФ-зависимому пути - 1-ме-тилникотипамида практически не различалась во всех группах крыс.

Введение метазида животным с исходной оптимальной обеспеченностью витамином В-2 (эксперимент 2) также сопровождалось ухудшением обеспеченности рибофлавином (табл. 5). На фоне не изменившейся экскреции с мочой его содержание как в плазме, так и в печени достоверно снижалось на 35 и 9%, соответственно. На фоне нормальной обеспеченности витамином В-2 при введении метазида нарушения обмена витамина В-б (увеличенное выведение при одновременной тенденции к снижению его содержания в печени, наблюдаемые в условиях недостаточной обеспеченности крыс рибофлавином) не выявлялись.

Таким образом, метазид оказывает побочное действие, вызывая дефицит рибофлавина в организме. Это действие более выражено при недостаточной исходной обеспеченности витамином В-2 (см. табл. 4). В нашем эксперименте обеспеченность этим витамином ухудшилась уже через 10 сут. введения метазида. Продолжительность лечения противотуберкулезными препаратами достигает нескольких месяцев, что может приводить к серьезным нарушениям обмена рибофлавина. В свою очередь при недостаточности витамина В-2 метазид-индуцируемые изменения метаболизма витамина В-6 носят более выраженный характер (табл. 4,5).

Таблица 5. Суточная экскреция с мочой и содержание в печени и плазме крови вита- *

минов группы В у крыс, обеспеченных витамином В-2, при ректальном введении в суппозиториях метазида и его комбинированных препаратов с рибофлавином и пиридоксином (М ± т).__

Показатель контроль (п=6) метазид (п=8) метазид+В-2 (п=8) метазид+В2+В6 (п=8)

Суточная экскреция с мочой, ми-

рибофлавин 3,1+0,7 2,8±0,2 37,2±0,9*'** 33,1±1,6***

4-ПК 15,71=0,7 13,8±1,2 19,8±2,4** 115,1±19,2*'**

1-метилникотинамид 13,7+0,8 14,1±0,6 12,4±2,0 10,б±0,3

Уровень в печени, мкг/г

рибофлавин 35,1+0,9 31,9±1,1* 36,4±2,0 37,9±1,5**

пиридоксаль 1,1710,09 1,25±0,07 1,59±0,09*"м 1,77±0,11*'**

Уровень в плазме, нг/мл

рибофлавин 25,2±3,2 16,3±2,0* 39,9±4,1*** 37,6±7,2**

В последние годы для предупреждения и устранения побочных эффектов разработаны комбинированные препараты изониазида с пиридоксином (Mahe-shwari R.K., Gupta B.D.,1991). Для предотвращения развития дефицита витамина В-2 были использованы суппозитории, содержащие наряду с метазидом рибофлавин в дозе, соответствующей рекомендуемому суточному потреблению крысы, а также метазид с рибофлавином и пиридоксином.

В соответствии с данными табл. 5, рибофлавин, введенный в суппозиториях ректально, хорошо усваивается организмом, о чем свидетельствует его

увеличенная, по сравнению с контролем, концентрация в плазме крови и экскреция его избытка с мочой. Применение комплексного препарата метазида с рибофлавином полностью предотвратило развитие дефицита витамина В-2 у крыс: его содержание в плазме крови и в печени было достоверно повышено но сравнению с группой, получавшей метазид (табл. 5). При этом содержание в печени не отличалось от контроля. Одновременно наблюдалось достоверное увеличение концентрации ПАЛ в печени и экскреции 4-ПК с мочой (табл. 5). Таким образом, введение комбинированного препарата метазида с рибофлавином оказывало нормализующее действие на обмен витаминов В-2 и В-6.

Введение суппозиториев, содержащих метазид с рибофлавином и пири-доксином, возвращало к норме (контроль) содержание рибофлавина в печени, увеличивало содержание ПАЛ в печени в 1,5 раза и выведение избытка пири-доксина в виде 4-ПК (табл. 5).

Таким образом, введение в течение 10 суг. метазида (20 мг на 100 г массы тела) в суппозиториях вызывает развитие дефицита витамина В-2 как у крыс с исходной недостаточностью этого витамина, так и у адекватно обеспеченных животных, что проявляется в снижении содержания витамина В-2 в печени и плазме крови. При недостаточности витамина В-2 метазид-индуцируемые изменения метаболизма витамина В-6 носят более выраженный характер по сравнению с животными, обеспеченными рибофлавином.

Использование суппозиториев, содержащих комбинированный препарат метазида с рибофлавином (в дозе 100 мкг на крысу, что соответствует рекомендуемому суточному потреблению), полностью предотвращало развитие дефицита витамина В-2. По-видимому, суппозитории, содержащие комбинированный препарат метазида с рибофлавином и/или пиридоксином в дозах, соответствующих рекомендуемому суточному потреблению, целесообразно рекомендовать для клинического испытания при лечении больных туберкулезом людей, что позволит не только свести к минимуму побочное действие метазида, но и ликвидировать возможную недостаточность рибофлавина и пиридоксина. б. Оценка пиридоксинового статуса и эффективности витаминизации различных групп населения

Налаженные методы определения метаболитов витамина В-6 в плазме крови и моче с помощью ВЭЖХ, а также установленные критерии были использованы для оценки обеспеченности витамином В-6 разных возрастных групп здоровых и больных людей (около 300 человек) из различных регионов Российской Федерации. Относительное количество людей с выраженным дефицитом витамина В-6 достигает 50-85%.

С использованием предложенных методов была проведена оценка эффективности витаминизации (по уровню ПАЛФ в плазме крови - 118 человек, по экскреции с мочой - 26 человек), включающей использование новых форм поливитаминных препаратов и содержащих витамины биологически активных добавок к пище.

ВЫВОД ы.

1. Проведено сравнение традиционного флуориметрического метода определения 4-пиридоксиловой кислоты в моче с методом ВЭЖХ. Установлено, что вследствие низкой специфичности ранее принятый метод дает завышенные результаты. Усовершенствованы методы определения пиридоксалевых кофер-ментов в плазме крови с помощью ВЭЖХ.

2. Глубокий дефицит рибофлавина у крыс приводит к увеличению содержания пиридоксаля и пиридоксамина в печени и пиридоксаль-5'-фосфата в плазме крови людей при одновременном снижении экскреции 4-пиридоксиловой кислоты до уровня, характерного для алиментарного дефицита витамина В-6.

3. Концентрация пиридоксаль-5-фосфата в плазме крови, ПАЛФ-эффект и часовая экскреция 4-пиридоксиловой кислоты с мочой при нормальной обеспеченности организма рибофлавином хорошо коррелируют между собой, что показывает irx полную взаимозаменяемость для оценки пиридоксинового статуса. Недостаточность витамина В-2 приводит к исчезновению взаимосвязи между этими параметрами.

4. Установлены пределы часовой экскреции 4-пиридоксиловой кислоты с утренней порцией мочи, собранной натощак. Соответствующие нормальной обеспеченности организма витамином В-6 величины составляют 60 - 150 мкг/ч для детей 5-7 лет и 70 - 260 мкг/ч - для детей старше 9 лет и взрослых. Это дает возможность использовать данный неинвазивный метод для оценки обеспеченности организма пиридоксином. При адекватной обеспеченности организма витамином В-6 концентрация пиридоксаль-5'-фосфата в плазме крови находится в диапазоне от 8 до 20 нг/мл.

5. Для больных фенилкетонурией детей характерно повышенное содержание ПАЛФ в плазме крови по сравнению со здоровыми. Дополнительное потребление витамина В-2 в физиологической дозе приближало показатели обеспеченности витамином В-6 больных фенилкетонурией детей к наблюдаемым у здоровых.

6. Введение метазида (в дозе 20 мг на 100 г массы тела) в суппозиториях вызывает развитие дефицита витамина В-2 как у крыс с исходной недостаточностью этого витамина, так и у адекватно обеспеченных животных, что проявляется в снижении содержания витамина В-2 в печени и плазме крови. При недостаточной обеспеченности организма витамином В-2 метазид-индуцируемые изменения метаболизма витамина В-6 носят более выраженный характер по сравнению с таковыми у животных, обеспеченных рибофлавином. Совместное введение метазида с рибофлавином в физиологической дозе полностью предотвращает развитие дефицита витамина В-2.

7. Установленные критерии оценки пиридоксинового статуса организма взрослых и детей применены для выявления недостаточности витамина В-6 и оценки эффективности витаминизации различных групп населения в ходе выборочных обследований.

Практические рекомендации

Больным, принимающим препараты изониазидового ряда, целесообразно постоянно принимать рибофлавин в составе поливитаминных препаратов в дозах, соответствующих физиологической потребности человека, что позволит не ючько сггсти к минимуму побочное действие антивитамина В-6, проявляющееся в возникновении недостаточности витаминов В-2 и В-6, но и ликвидировать низмен;!')*! исходную недостаточность этих витаминов.

Ь'\'".»нлм ФКУ целесообразно дополнительно назначать витамин В-2 в физиологических дозах.

Вмрржаю глубокую благодарность руководителю лаборатории обмена витаминов и минеральных веществ д.б.н., профессору В.Б.Спиричеву за постоянное внимание, консультации, обсуждения и замечания, а также поддержку данной работы.

РАБОТЫ, ОПУБЛИКОВАННЫЕ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Якушина Л.М., Бекетова Н.А., Бендер Е.Д., Харитончик Л.А. Использование методов ВЭЖХ для определения витаминов в биологических жидкостях и пищевых продуктах. //Вопр. питания.- 1993.-№ 1.- С.43-48.

2. Коваленко Т.А., Коденцова В.М., Сокольников А.А., Якушина Л.М., Харитончик Л.А., Сонин Б.В., Строев Е.А. Использование комбинированных препаратов метазида с рибофлавином и пиридоксином в суппозиториях для коррекции метазид-индуцируемых нарушений обмена витаминов группы В у крыс. // Пробл. туберкулеза,- 1993,- № 6.- С.42-45.

3. Коденцова В.М., Сокольников А.А., Алексеева И.А., Вржесинская О.А., Харитончик Л.А., Бекетова Н.А., Спиричев В.Б. Нормы часовой экскреции с мочой витаминов группы В для детей 5-7 лет. // Вопр. питания - 1994.- № 1-2.-С. 18-21.

4. Харитончик Л.А., Коденцова В.М., Вржесинская О.А., Рисник В.В., Спиричев В.Б. Уточнение критериев обеспеченности организма витамином В-6. // Вопр. мед. химии.- 1995,- Т.41, № 3,- С.46-50.

5. Kodentsova V.M., Kovalenko Т.A., Vrzhesinskaya О.A., Kharitonchik L.A., Spirichev V.B. Metazid-induced vitamin B-2 deficiency in rat and its prevention. // Укр. биохим. журн,- 1995,-T.67, № 5,- C.126-128.

6. Спиричев В.Б., Блажеевич Н.В., Исаева В.А., Коденцова В.М., Сокольников А.А., Вржесинская О.А., Бекетова Н.А., Харитончик Л.А., Алексеева И.А., Алейник С.И., Якушина Л.М., Переверзева О.Г. Обеспеченность витаминами взрослого населения Российской Федерации и ее изменение в 1983-93 гг. Сообщение 2. Витамины группы В. // Вопр. питания,- 1995,- № 6,- С.3-8.

7. Коденцова В.М., Пустограев Н.Н., Вржесинская О.А., Харитончик Л.А., Переверзева О.Г., Якушина Л.М., Трофименко Л.С., Спиричев В.Б. Сравнение обмена водорастворимых витаминов у здоровых и страдающих инсулинзави-симым сахарным диабетом детей в зависимости от содержания витаминов в рационе. // Вопр. мед. химии.- 1996 - Т.42, № 2,- С.153-158.

8. Deniso.va S.N., Kodentsova V.M., Kharitonchik L.A., Vakhrameeva S.N., Kopylova N.V., Vrzesinskaya O.A. Vitamin status in PKU children. // Pediatr. Res.- 1996.--P.256.

9. Коденцова B.M., Вржесинская O.A., Харитончик Л.А., Водясова H.A., Якушина Л.М., Спиричев В.Б. Изучение взаимосвязи между показателями обеспеченности витаминами В-2 и В-6 детей 7-10 лет. // Клин. лаб. диагностика.-

1997,-№ 1.-С.6-8.

Ю.Вржесинская O.A., Коденцова В.М., Водясова H.A., Харитончик Л.А., Гри-цинская В.Л., Якушина Л.М., А.Д., Спиричев В.Б. Обеспеченность витаминами детей 7-10 лет. // Росс, вестн. перинатол. и педиатр,- 1997,- № 2.- С.63.

11.Денисова С.А., Вржесинская O.A., Коденцова В.М., Харитончик Л.А., Копы-лова Н.В., Вахрамеева С.Н., Бекетова H.A., Переверзева О.Г., Исаева В.А Изучение обеспеченности витаминами детей, страдающих фенилкетонурией (ФКУ) //Тез. научн. практ. конф. с междунар. участием «Актуальные проблемы профилактики неинфекционных заболеваний». - М., 1997,- С.58-59.

12.Денисова С.А.,Вржесинская O.A., Коденцова В.М.,Харитончик Л.А., Копы-лова Н.В., Бекетова H.A., Переверзева О.Г., Исаева В.А, Банков A.A., Спиричев В.В. Обеспеченность витаминами и витаминный состав диеты детей, страдающих фенилкетонурией. //Росс, вестн. перинатол - 1997.-Т.42, № 6,-С.61.

13.Бушуева Т.В., Коденцова В.М., Вржесинская O.A., Рыбакова Е.П., Денисова С.А., Бекетова H.A., Таранова А.Г., Переверзева О.Г., Харитончик Л.А., Ко-пылова Н.В., Банков A.A., Милехина В.А., Соломадина Л.В., Круглик В.И. Сравнительная оценка использования в диетотерапии больных фенилкетонурией детей специализированных продуктов «Тетрафен» и «Фенил-Фри». // Вопр. питания,- 1998.-№2.-С.14-18.

14.Denisova S.N., Kopylova N.V., Kodentsova V.M., Kharitonchik L.A., Vrzhesinskaya O.A., Beketova N.A., Shilov A.V., Baikov A.D. Vitamin status and diet in PKU children. II J. Inher. Metab. Dis.- 1998,- V.21, Suppl.2.- P.14.

15.Коденцова B.M., Пустограев H.H., Вржесинская O.A., Бекетова H.A., Переверзева О.Г., Харитончик Л.А., Шилина Н.М., Ленская Р.В., Снигирева Т.В., Шатнюк Л.Н., Пилютик В.Ф., Смирнов В.В., Спиричев В.Б., Трофименко Л.С., Конь И.Я. Использование в диетотерапии детей, больных инсулинзави-симым сахарным диабетом, витаминизированного напитка. // Вопр. питания.-

1998,-№5-6,-С. 19-25.

16.Коденцова В.М., Пустограев H.H., Вржесинская O.A., Бекетова H.A., Харитончик Л.А., Переверзева О.Г., Спиричев В.Б., Смирнов В.В. Диагностика и профилактика гиповитаминозных состояний у здоровых и хронически больных детей. // В ежегод. науч. практ. сб. «Эндокринные заболевания у детей и актуальные вопросы клинической педиатрии».- М., 1998 - Вып. 4 - С.20.

17.Коденцова В.М., Вржесинская O.A., Пустограев H.H., Трофименко Е.В., Бекетова H.A., Переверзева О.Г., Харитончик Л.А., Спиричев В.Б., Трофименко Л.С. Использование витаминизированных напитков в питании здоровых и

диетотерапии больных хроническими заболеваниями детей. // Тез. V конгр. педиатров России «Здоровый ребенок».- М., 1999,- С. 209.

18.Денисова С.Н., Николаева А.Н., Семячкина А.Н., Коденцова В.М., Вржесин-ская O.A., Харитончик JI.A., Переверзева О.Г., Шилов A.B. Витаминный статуса у детей с наследственными нарушениями обмена. // Тез. 3 междунар. конгр. «Парентеральное и энтеральное питание». - 1999, М,- С.12.

19.Ладодо К.С., Рыбакова Е.П., Бушуева Т В., Соломадина Л.В., Байков А.Д., Коденцова В.М., Вржесинская O.A., Милехина В.А., Харитончик Л.А., Тара-нова А.Г., Переверзева О.Г. Результаты клинической апробации новых отечественных продуктов для лечения больных фенилкетонурией. // Педиатрия.-1999,-№6,- С.51-55.

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Харитончик, Лариса Анатольевна

Список сокращений.

ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1. Обмен витамина В-6 и его зависимость от обеспеченности организма витамином В-2.

2. Биохимические критерии и методы оценки обеспеченности организма человека витамином В-6.

2.1. Экскреция 4-пиридоксиловой кислоты с мочой.

2.2. Содержание пиридоксаль-5'-фосфата в плазме (сыворотке) крови.

2.3. Активность аспартатаминотрансферазы эритроцитов и степень ее активации экзогенным ПАЛФ.

2.4. Функциональные тесты.

2.4.1. Триптофановый нагрузочный тест.

2.4.2. Метиониновый нагрузочный тест.

2.5. Сравнительный анализ методов определения 4-пиридоксиловой кислоты в моче.

2.6. Анализ методов определения витамеров В-6 - пиридоксаль-5'-фосфата и пиридоксаля в плазме крови.

3. Нарушение обмена витамина В-6 при некоторых заболеваниях.

3.1. Фенилкетонурия.

3.2. Прием препаратов изониазидового ряда.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

1. Экспериментальные модели.

1.1. Исследование влияния различной обеспеченности организма витамином В-2 на обмен витамина В-6.

1.2. Исследование влияния антивитамина В-6 - метазида на обмен витамина В-6 у крыс.

2. Клинический материал.

3. Объекты исследования.

3.1. Сыворотка крови.

3.2. Плазма крови и гемолизаты.

3.3. Моча.

3.4. Кислотно-ферментативный гидролизат печени крыс.

4. Методы определения 4-пиридоксиловой кислоты и некоторых других метаболитов в моче.

4.1. Флуориметрический метод определения 4-пиридоксиловой кислоты с использованием внешнего стандарта лактона 4-пиридоксиловой кислоты

4.2. Флуориметрический метод с использованием внутреннего стандарта

4-пиридоксиловой кислоты (метод добавок).

4.3. Определение 4-пиридоксиловой кислоты методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.

4.4. Определение 1-метилникотинамида.

4.5. Определение ксантуреновой кислоты.

4.6. Определение креатинина.

5. Методы определения витамеров в плазме крови.

5.1. Определение пиридоксалевых коферментов в плазме крови методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.

5.2. Определение рибофлавина методом титрования рибофлавинсвязывающим белком.

6. Определение пиридоксаля и пиридоксамина в печени крыс.

7. Определение активности ферментов.

7.1 Определение активности аспартатаминотрансферазы эритроцитов и величины ПАЛФ-эффекта.

7.2. Определение активности щелочной фосфатазы.

8. Аналитические методы исследования.

8.1. Спектрофотометрическое определение концентрации рибофлавина, пиридоксаля, пиридоксамина и пиридоксаль-5'-фосфата и 1-метилникотинамида.

8.2. Измерение интенсивности флуоресценции.

9. Расчет и определение содержания витаминов В-2 и В-6 в рационах.

10. Математическая обработка экспериментальных данных.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

1. Сравнительный анализ методов оценки обеспеченности организма витамином В

1.1. Сравнение методов определения 4-пиридоксиловой кислоты в моче.

1.2. Определение пиридоксалевых коферментов в плазме крови.

2. Изменение обмена витамина В-6 при алиментарной недостаточности рибофлавина.

2.1. Влияние различной обеспеченности витамином В-2 на обмен пиридоксина у крыс.

2.2. Зависимость показателей обеспеченности витамином В-6 организма взрослых и детей от их рибофлавинового статуса.

3. Установление критериев обеспеченности витамином В-6 здоровых взрослых и детей.

4. Особенности обмена витамина В-6 при фенилкетонурии.

5. Метазид-индуцируемая недостаточность витаминов В-2 и В-6 у крыс и ее предотвращение при использовании комбинированных препаратов метазида с рибофлавином и пиридоксином.

6. Оценка пиридоксинового статуса и эффективности витаминизации различных групп населения.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Влияние рибофлавинового статуса организма на обмен и биохимические показатели обеспеченности витамином В-6"

Актуальность проблемы. Для оценки обеспеченности организма витамином В-6 обычно определяют концентрацию пиридоксаль-5'-фосфата (ПАЛФ) в плазме крови, экскрецию с мочой метаболита витамина В-6 - 4-ПК. Оба соединения являются продуктами реакций, катализируемых витамин Независимыми ферментами: ФМН-зависимой пиридоксаминфосфатоксидазой (ПФО), осуществляющей превращение пиридоксамин(пиридоксин)-5'-фосфата в ПАЛФ, и ФАД-содержащей альдегидоксидазой, окисляющей ПАЛ до 4-ПК, экскретируемой с мочой [3,54,87,100,110]. Показано, что алиментарный дефицит рибофлавина у крыс приводит к снижению на 50-85% активности ПФО во всех органах [227,230], а ее активность в эритроцитах и степень ее активации in vitro ФМН (ФМН-эффекг) даже предложено использовать в качестве показателя рибофлавинового статуса [227].

У людей с дефицитом витамина В-2 обнаружены более низкая скорость превращения пиридоксина в ПАЛФ и сниженный уровень ПАЛФ в крови по сравнению с людьми, обеспеченными этим витамином [59,156,157,159]. Недостаточность витамина В-2 у крыс и людей даже при достаточном содержании в рационе витамина В-6 сопровождается существенным снижением экскреции 4-ПК до уровня, характерного для алиментарного дефицита пиридоксина [17,146]. Все это привело к возникновению понятия вторичного эндогенного или сопутствующего дефицита функционально связанных витаминов группы В [31,32,221], высказывается мнение о том, что рибофлавин является лимитирующим нутриентом [181]. Однако на практике при использовании концентрации ПАЛФ в крови и экскреции 4-ПК с мочой в качестве биохимических показателей, отражающих обеспеченность организма пиридоксином, обеспеченность витамином В-2 во внимание не принимается. В связи с этим, выяснение степени влияния недостаточности витамина В-2 на параметры, используемые в качестве показателей обеспеченности организма витамином В-6 представлялось весьма актуальной задачей. 7

Витамин B-6-зависимые ферменты участвуют в обмене катехоламинов и серотонина, образовании гистамина и др. биогенных аминов, играющих важную роль в регуляции процессов возбуждения и торможения центральной нервной системы, нарушения в функционировании которой наблюдаются при ФКУ. Ясности в вопросе об обмене этого витамина и его зависимости от обеспеченности витамином В-2 при ФКУ нет. Имеются данные о повышенной концентрации ПАЛФ в плазме крови детей больных ФКУ [14,215]. При нагрузке триптофаном у пациентов с ФКУ, по данным [150] не наблюдалось увеличения экскреции продуктов витамин B-6-зависимого метаболизма этой аминокислоты, тогда как по результатам [75] отмечалась более чем 2-кратное увеличение выведение кинуренина, отражающее снижение активности ПАЛФ-зависимой ки-нурениназы вследствие дефицита витамина В-6. Трактовка этих данных осложняется еще и тем, в данных обследованиях обеспеченность пациентов витамином В-2 во внимание не принималась. В связи с этим выявление особенностей обмена витамина В-6, установление критериев адекватной обеспеченности этим витамином при данном заболевании имеют исключительно большое значение для правильной оценки и коррекции пиридоксинового статуса организма больных ФКУ.

Исследования проводились в соответствии с планами НИР Института питания РАМН по темам: Зависимость показателей витаминного статуса от обеспеченности рибофлавином и разработка возрастных показателей обеспеченности витаминами группы В в норме и при различных заболеваниях (199395); Разработка системы оценки и коррекции витаминного статуса детского и 8 взрослого населения России (1996-1998); Особенности обмена витаминов, разработка критериев оценки и способов улучшения витаминного статуса детей при фенилкетонурии (1999-2000).

Цель и задачи исследования. Цель работы состояла в изучении влияния недостаточности рибофлавина на показатели обеспеченности витамином В-6 в норме и при некоторых состояниях организма с измененным обменом витамина В-6.

В соответствии с этим предполагалось решить следующие задачи:

1. Провести сравнительный анализ существующих методов определения 4-ПК в моче с целью выбора наиболее надежного. Наладить метод определения ПАЛ и ПАЛФ в сыворотке крови с помощью ВЭЖХ. Провести корреляционный анализ методов оценки обеспеченности организма витамином В-6. Установить критерии и диапазон концентраций ПАЛФ и величин экскреции 4-ПК с мочой, соответствующие адекватной обеспеченности здоровых детей и взрослых витамином В-6.

3. Охарактеризовать особенности обмена витамина В-6 у больных ФКУ детей.

Научная новизна работы. Изучено влияние различной обеспеченности организма животных и людей рибофлавином на показатели пиридоксинового статуса. Выявлено, что наиболее чувствительным к недостаточности витамина В-2 параметром является экскреция 4-ПК с мочой.

На основании сравнительного и корреляционного анализа выбраны корректные, специфические методы определения витамина В-6 в крови и моче, адекватно отражающие обеспеченность им организма. Впервые получена пол9 ная кривая зависимости экскреции 4-ПК от содержания ПАЛФ в плазме крови во всем диапазоне концентраций ПАЛФ. На основе изучения взаимозависимости этих показателей, а также из зависимости от содержания витамина В-6 в рационе установлены пределы концентраций ПАЛФ в плазме крови и величины часовой экскреции 4-ПК с мочой, отражающие достаточную обеспеченность организма взрослых и детей разного возраста витамином В-6.

Научно-практическое значение работы. Показано, что величина экскреции 4-ПК дает правильную информацию об обеспеченности витамином В-6 только при нормальной обеспеченности организма витамином В-2. Определен диапазон концентраций ПАЛФ в плазме крови и пределы экскреции 4-ПК с мочой, соответствующие адекватной обеспеченности организма витамином В-6 здоровых детей и взрослых. Установлен критерий адекватной обеспеченности витамином В-6 по содержанию ПАЛФ в плазме крови для больных ФКУ. Эти показатели используются для оценки пиридоксинового статуса.

Данные о нормализующем влиянии дополнительного приема физиологических доз витамина В-2 на обмен витамина В-6 при ФКУ используются в схеме лечения больных детей.

Полученные результаты использованы при разработке рецептуры комплексного противотуберкулезного препарата, содержащего наряду с витамином В-6 рибофлавин.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Биологические функции витамина В-6 в организме отличаются исключительным многообразием [163,164]. В форме кофермента он принимает участие более чем в ста реакциях, в том числе в реакциях метаболизма аминокислот и углеводов, биосинтеза и деградации сфинголипидов, биосинтеза гема и нейро-медиаторов, а также синтеза многих других жизненно важных молекул [163,232].

Термином «витамин В-6» в соответствии с определением Международной комиссии по номенклатуре по биологической химии обозначают родственные в химическом отношении производные З-гидрокси-2-метилпиридина, обладающие биологической активностью. К ним относят три природные формы: пиридоксин - 2-метил-З -окси-4,5 -(бис)-оксиметил-пиридин; пиридоксаль (ПАЛ) - 2-метил-3-окси-4-формил-5-оксиметил-пиридин; пиридоксамин - 2-метил-З -окси-4-аминометил-5-оксиметил-пиридин (ПМ) и их фосфорилированные производные. [102,144]. Основным источником витамина В-6 служат продукты, богатые белком: мясо, орехи, неочищенные крупы зерно, сыр. Овощи и фрукты содержат очень мало этого витамина. Ежедневная потребность в витамине В-6 составляет: для женщин 1,6 мг в сутки при потреблении 50 г белка в сутки или более 0,016-0,019 мг/г потребленного белка, а для мужчин 2,0 мг в сутки при потреблении 63 г белка в сутки [129,138,144,203].

Всасывание витамина В-6 в желудочно-кишечном тракте осуществляется пассивной диффузией преимущественно в тонком кишечнике (в тощей кишке и значительно хуже в подвздошной) [4,164,196]. Все три формы витамина В-6 (пиридоксин, ПМ, ПАЛ) адсорбируются с равной эффективностью. Фосфорилированные формы этого витамина, поступающие в кишечник с пищей, дефос-форилируются неспецифической щелочной фосфатазой [176,189]. Неясным остается вопрос, какую роль играет процесс дефосфолирирования при абсорбции витамеров В-6, так как было показано, что при пассивной диффузии через базо-латеральную мембрану лимитирующей стадией является реакция гидролиза фосфорилированных форм. Однако эти формы тоже могут поглощаться [196]. В большинстве тканей преобладающей циркулирующей формой витамина В-6

12 является ПАЛ. Большая часть витамеров В-6 транспортируется в связанном с альбумином состоянии в печень [195] - основной орган, в котором метаболизи-рует витамин В-6 [176].

Не останавливаясь на всех выше перечисленных функциях этого витамина, рассмотрим только те из них, которые непосредственно влияют или используются для оценки пиридоксинового статуса организма.

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Харитончик, Лариса Анатольевна

ВЫВОДЫ.

3. Концентрация пиридоксаль-5'-фосфата в плазме крови, ПАЛФ-эффект и часовая экскреция 4-пиридоксиловой кислоты с мочой при нормальной обеспеченности организма рибофлавином хорошо коррелируют между собой, что показывает их полную взаимозаменяемость для оценки пиридоксинового статуса. Недостаточность витамина В-2 приводит к исчезновению взаимосвязи между этими параметрами.

106

108

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В ходе работы на основании сравнительного и корреляционного анализа традиционных и налаженных методов определения 4-ПК и ПАЛФ с помощью ВЭЖХ показано, что последний метод является наиболее корректным и специфичным для определения витамина В-6 в плазме крови и моче. При определении этих показателей методом ВЭЖХ оба параметра адекватно отражают обеспеченность организма витамином В-6. Полученная кривая зависимости экскреции 4-ПК от содержания ПАЛФ в плазме крови во всем диапазоне концентраций ПАЛФ, обычно измеряемых у здоровых людей, позволила установить пределы концентраций ПАЛФ и величин часовой экскреции продукта его метаболизма, соответствующие нормальной обеспеченности организма взрослых и детей витамином В-6.

В ходе проведенных исследований было показано, что недостаточность витамина В-2 даже приводит к нарушению обмена витамина В-6, что проявляется в уменьшении экскреции 4-ПК с мочой. Это накладывает существенное ограничение на использование этого неинвазивного метода для оценки обеспеченности организма витамином В-6, и означает, что результаты, полученные с его помощью, позволяют правильно выявить недостаточность витамина В-6 только при условии нормальной обеспеченности витамином В-2. Таким образом, неоднозначность этого показателя требует измерения дополнительных параметров, в данном случае экскреции рибофлавина. С другой стороны, принимая во внимание лимитирующую роль витамина В-2 [181] в обмене других функционально связанных витаминов группы В [31], полученные результаты обосновывают преимущество совместного сбалансированного использования витаминов В-2 и В-6 для коррекции витаминной недостаточности, и укладывается в концепцию сбалансированного питания.

Выявленная зависимость обмена витамина В-6 от обеспеченности организма витамином В-2 становится еще более ощутимой при состояниях организма с нарушенным обменом витамина В-6. Во-первых, как было показано в модельных опытах на крысах, метазид оказывал побочное действие, ухудшая обеспеченность организма рибофлавином как у исходно обеспеченных витами

104 ном В-2 животных, так и с недостаточностью этого витамина. При В-2-гиповитаминозе метазид-индуцируемые изменения метаболизма витамина В-6, проявляющиеся в увеличенном выведении 4-ПК с мочой при одновременной тенденции к снижению содержания ПАЛ в печени, носят более выраженный характер по сравнению с таковыми у животных, адекватно обеспеченных рибофлавином. Совместное введение метазида с рибофлавином в физиологической дозе полностью предотвращает развитие дефицита витамина В-2. Полученные данные показывают целесообразность включения в комплексные препараты изониазидового ряда наряду с витамином В-6 витамина В-2 или назначения этих витаминов при приеме этих лекарственных средств.

Аналогичным образом дополнительное назначение детям, больным ФКУ, витамина В-2 в физиологической дозе приводит к снижению повышенного при этом заболевании уровня ПАЛФ в плазме крови и увеличению сниженной у этой категории больных экскреции 4-ПК с мочой, приближая эти показатели до уровней, характерных для здоровых детей.

105

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Харитончик, Лариса Анатольевна, Москва

1. Биохимические методы исследования в клинике. / Под ред. А.А.Покровского,- М., Медицина, 1969,- С.484-486. (652с.)

2. Бондарев Г.И., Мартинчик А.Н., Хотимченко С.А., Лешик Я.Д., Соколов А.И. Коррелятивная взаимосвязь фактического потребления витаминов В-1, В-2 и В-6 с биохимическими показателями обеспеченности ими организма // Вопр. питания,- 1986.- N 2.- С.34-39.

3. Букин Ю.В. Биосинтез коферментных форм витамина В-6 и фолевой кислоты, его регуляция и физиологическое значение / Автореф. дис. . д-ра биол. наук.- М., 1975.

4. Букин Ю.В. Пиридоксин / Экспериментальная витаминология / Под ред. Ю.М.Островского.- Минск: Наука и техника, 1979.- С.385-409.

5. Вржесинская O.A., Коденцова В.М., Харитончик Л.А. и др. Критерии обеспеченности организма детей, больных инсулинзависимым сахарным диабетом, витаминами В-1, В-2 и В-6 // Вопр. мед. химии.- 1995.- Т.6. С 58-62.

6. Гвоздова Л.Г. О выделении 4-пиридоксиновой кислоты с мочой у практически здоровых людей. // Вопр. питания,- 1965.- N2.- С.37-40.

7. Гвоздова Л.Г., Парамонова Е.Г., Горяченкова Е.В., Полякова Л.А. The level of vitamin coenzymes in plasma of patients with coronary atherosclerosis kept on a curative diet of vitamin В-6 // Вопр. питания.- 1966.- T.25.- C.40-44.

8. Глинка Е.Ю., Сокольников A.A., Коденцова B.M. Об использовании ПАЛФ-эффекта как показателя обеспеченности витамином В-6 // Вопр. мед. химии,- 1989,- N2,- С.52-59.

9. Гублер Е.В., Генкин A.A. // Применение непараметрических критериев статистики в медикобиологических исследованиях Л.: Медицина, 1973. -141с.

10. Досон Р., Эллиот Д., Эллиот У., Джонс К. Справочник биохимика.- М.: Мир, 1991,- С.99-122.

11. Ефремов В.В. // В кн.: Витамины. Под ред. М.И.Смирнова. М., Медици109на, 1974. -С. 18-45.

12. Ефремов В.В., Берулава И.Т. Ликвидация заболеваемости пеллагрой в Грузинской ССР //Вопр. питания.-1956.-N 5.-С.26-30

13. Ефремова В.В., Гвоздова Л.Г. // В кн.: Тезисы докладов на XV научной сессии Института питания АМН СССР. -М. -1963.

14. Кастрикина Л.Н., Чурдалева Е.В., Спиричев В.Б., Копылова Н.В., Рыбакова Е.П., Ладодо К.С. Активность глутатионредуктазы и ФАД-эффект как показатели обеспеченности рибофлавином в эксперименте и у больных фенилкетонурией. Вопр питания 1975; 5: 12 18.

15. Коваленко Т.А.// В сб. докл. конф. "Вклад молодых ученых в решение проблем фармации" Д.21726.Д991.-С.43-47.

16. Ковлер М.А., Павленко A.A., Курганов Б.И., Аввакумов В.М., Влияние пи-ридоксальфосфата на активность аспартатаминотрансферазы в сыворотке крови кроликов при токсичном гепатите // Хим.-фарм. журнал.- 1986.-Т.32,- С.60-62.

17. Коденцова В.М. Экскреция с мочой витаминов и их метаболитов как критерий обеспеченности витаминами организма человека // Вопр. мед. химии." 1992.- Т.38, №4.- С.33-37.

18. Коденцова В.М. Разработка системы биохимических критериев оценки обеспеченности организма человека витаминами группы В // Дисс. . докт. биол. наук.- М., 1996.

19. Коденцова В.М., Бекетова H.A., Рисник В.В., Сокольников A.A., Вржесин-ская O.A., Спиричев В.Б. К выбору наиболее адекватных критериев обеспеченности организма человека витамином В-6 // Клин. лаб. диагн.- 1993.-N6.-C.22-27.

20. Коденцова В.М., Вржесинская O.A., Сокольников A.A., Алексеева И.А.,110

21. Спиричев В.Б. Влияние обеспеченности рибофлавином на обмен водорастворимых витаминов.// Вопр. мед. химии.- 1993.- Т.39, № 5.- С.29-33.

22. Коденцова В.М., Глинка Е.Ю. Изменение кинетических свойств пиридок-сальзависимых ферментов при элементарной недостаточности витамина В-6 у крыс. // Укр. биохим. журнал,- 1990,- Т.62, №1.- С.44-49.

23. Коденцова В.М., Успенская И.Д., Вржесинская O.A. и др. Особенности обмена витаминов группы В и критерии обеспеченности ими детей, страдающих целиакией. //Вопр. мед. химии.- 1995.- Т.41, №4.- С.41-45.

24. Копылова Н.В., Рыбакова Е.П., Тарабанько В.М. Изучение обеспеченности лечебных рационов больных фенилкетонурией витаминами группы В и аскорбиновой кислотой. Вопр питания 1979; 2: 24 26.

25. Лабораторные методы исследования в клинике / Под ред. В.В.Меньшикова.- М.: Медицина, 1987,- С.219-221.

26. Ладодо К.С., Денисова С.Н., Бушуева Т.В. и др. Клинико-биохимические особенности течения фенилкетонурии у детей. Рос вестн перинатол и педиатр 1997; 2: 62-63.

27. Лакин Г.Ф. Биометрия,- М.: Высшая школа, 1990,- С.264-266.

28. Максютинская О.В. Выделение 4-ПК (4-пиридоксиловой кислоты) с мочой у детей 2-3 лет // Вопр. питания- 1967.- N2,- С.83-84.

29. Малюк В.И., Сокирко Т.А. Коррекция токсического действия препаратов изониазида// Проблем, туберк.- 1987,- N8,- С.64-66.

30. Машковский М.Д. Лекарственные средства.-11-е изд.-М., 1988.-Т.2.

31. Межвитаминные отношения при ишемической болезни сердца и гипертонической болезни / Борец В.М., Мирончик В.В., Артаева Л.П.- Минск, 1988.-206с.

32. Метаболические эффекты недостаточности функционально связанных В-витаминов // Под ред. Островского Ю.М.- Минск: Наука и техника, 1987.-256с.

33. Механизмы межвитаминных взаимоотношений / Под ред. Островского Ю.М., Минск, 1973. 216 с.111

34. Никифоров В.Н., Павленко А.А., Курганов Б.И., Гусниев А.М. Изменение активности аспартатаминотрансферазы, зависящее от разведения сыворотки крови // Вопр. мед. химии.- 1986.-Т.32.- С.522-524.

35. Нормы физиологических потребностей в пищевых веществах и энергии для различных групп населения СССР. МЗ СССР,- М., 1991.

36. Подорожный П.Г., Томашевский Я.И. Клиническая витаминология,- Киев: Здоровье, 1977.- С. 142.

37. Поляновский О.Л. Аспартатаминотрансфераза. Исследование структуры и каталитических функций. // Успехи биол. химии.- 1977.- Т. 18.- С.92-121.

38. Потребность человека в витаминах / Под ред. Смирнова М.И.- М.: Медицина, 1966.-С.270-285.

39. Пятницкая И.Н., Богданов Н.Г., Сапрунова М.М. Изучение некоторых показателей метаболизма витамина В-6 у практически здоровых детей и детей, страдающих конституционально-экзогенным ожирением //Вопр. питания,- 1982, N3,- С.34-36.

40. Пятницкая И.Н., Гвоздова Л.Г. Витамин В-6 // В кн.: Теоретические и клинические аспекты науки о питании,- М., 1987,- Т.8.- С.109-119.

41. Сапрыкин Л.В., Гусаров А.А., Киселева Н.В. Определение витамина В-6 и полупродуктов его синтеза методом ВЭЖХ в ион-парном варианте и с применением динамически модифицированного силикагеля // ЖАХ.-1992,- Т.47, N12,- С.2066-2071.

42. Селиванова В.М. // Бюлл. экспер. биол. и мед. -1960. -Т.50, N8. -С.37.

43. Спиричев В.Б. Обеспеченность витаминами детей в России // Вопр. питания,- 1996,-№5,- С.45-53.

44. Теоретические и клинические аспекты науки о питании / Под ред. Волга-рева М.Н.- М., 1987.-Т.8,- 217с.

45. Туберкулез органов дыхания: Руководство для врачей/ Под ред. А.Г.Хоменко.-М., 1988.-576 с.

46. Уайт А., Хендлер Ф., Смит Э. и др. Основы биохимии. М. 1981.

47. Удалов Ю.Ф., Белозерова О.П., Гладких С.П., Гришина А.П. К вопросу о112роли витаминов в профилактике атеросклероза // Вопр. питания.- 1975.-N2.- С.20-25.

48. Урбах В.Ю. Статистический анализ в биологических и медицинских исследованиях,- М., 1975.-295с.

49. Халмурадов А.Г. Ниацин (витамин РР) //В сб.: Методы оценки и контроля витаминной обепеченности населения,- М., 1984,- С.87-93.

50. Химический состав пищевых продуктов./ Под ред. Скурихина И.М., Вол-гарева М.Н.- М., Агропромиздат, 1987,- 224с.

51. Шатц В.Д., Сахартова О.В. Высокоэффективная жидкостная хроматография. Рига: Знание, 1988. С. 168-180. (392 с).

52. Экспериметальная витаминология. Под ред. Ю.М.Островского.- Минск: Наука и техника, 1979.- 550 с.

53. Acota Р.В., Wenz Е., Williamson М. Nutrient intake of treated infants with phenylketonuria . //Am. J. Clin. Nutr.- 1977.-V.30.-P. 198-208.

54. Adelekan D.A., Adekile A.D., Thurnham D,J. Dependence of pyridoxine metabolism on riboflavin status in sickle cell patients // Am. J. Clin. Nutr.-1987.- V.46, N1.- P.86-90.

55. Analysis of B-6 vitamers and pyridoxic acid in plasma, tissues and urine using high performance liquid chromatography // Nutr. Res.- 1989,- V.9, N3,- P.259-272.

56. Anderson B.B., O'Brien H., Griffin G.E., Mollin D.L. Hydrolysis of pyridoxal-5'-phosphate in plasma conditions with raised alkaline phosphatase // Gut.-1980,-V.21.-P. 192-194.

57. Anderson B.B., Peart M.B., Fultford-Janes E.G. The measurement of serum pyridoxal by a microbiological assay using Lactobacillus casei // J. Clin. Pathol.-1970.- V.23.- P.232-242.

58. Anderson B.B., Perry G., Modell C.B., Child J.A., Mollin D.L. Abnormal red-cell metabolism of pyridoxine associated with J3-thalassemia // Br. J. Haematol.-1979.- V.41.- P.497-507.

59. Anderson B.B., Saary M., Stephens M.D. et al. Effect of riboflavin on red-cell113metabolism of vitamin B-6 //Nature.- 1976,- Vol.264- P.574-575.

60. Anderson K. Vitamin B-6 status of children treated for phenylketonuria // Nutr. Rep. Int. -1986.-V.34- P.387-392.

61. Araki A. Plasma homocystein concentration in Japanese patients with noninsulin dependent diabetes mellitus: effect of parenteral methylcobalamin treatment//Atherosclerosis.-1993.- Vol.103, N 2.- P. 149-157.

62. Argoudelis C.J. Simple isocratic high-performance liquid chromatographic method for the separation of the six vitamers of vitamin B-6 // J. Chromatog. Biomed. Appl.- 1988,- V.424.- P.315-323.

63. Atkins J.N. Maternal plasma concentration of pyridoxal phosphate during pregnancy: adequacy of vitamin B-6 supplementation during isoniazid therapy // Am. Rev. Respir. Dis.- 1982.-Vol.126, N4.-P.714-716.

64. Bayoumi R.A., Rosalski S.B. Evaluation of methods of coenzymes for detection of deficiency of vitamin B-l, B-2 and B-6 //Clin. Chem.-1976.- Vol.22.- P.327-335.

65. Bender D.A. The tryptophane load test for vitamin B-6 status is inappropriate for women recieving oastrogens // Proc. Nutr. Soc.- 1982,- V.41.- P. 120A.

66. Bhagavan H.N., Koogler J.M.Jr., Coursin D.B. Enzymatic microassay of pyridoxal-5'-phosphate using L-tyrosine apodecarboxylase and L-l- Cjtyrosine //Int. J. Vit. Nutr. Res.- 1976,- V.46.- P. 160-164.

67. Biehl J.P., Vilter R.W. Effects of Isoniazid on pyridoxine metabolism // JAMA.-1954,-V. 165,-P. 1549-1552.

68. Bitsch R. Vitamin B-6 // Internat. J. Vit. Nutr. Res.- 1993,- V.63, N4,- P.278-282.

69. Bonjour J.P. Vitamins and alholism. III. Vitamin B-6 // Int. J. Vitamin. Nutr.-1980,- V.50.- P.215-230.114

70. Brent J., Vo N., Kulig K., Rumack B.H. Reversal of prolonged isoniazid-induced coma by pyridoxine // Arch. Intern. Med.- 1990.-V.150, N8.- P. 17511753.

71. Brooker G.A., Ahmed N. Raiten D.J., McClelland F.L., Moser-Veillon P.B., Reynolds R.D. Changes in urinary 4-pyridoxic acid (4PA) excretion during pregnancy and lactation // FASEB.- 1995,- V.9, N4.- P.A985.

72. Brown R.R. The tryptophane load test as an index of vitamin B-6 nutrition. In: Methods in vitamin B-6 nutrition. Analysis and status assessment. / Eds. Leklem J.E., Reynolds R.D.- N.Y., London, Plenum, 1981,- P. 321-340.

73. Buhrdel P., Grimm U., Wasser St. e.a. Tryptophan metabolism in infants with PKU //Padiatr.Grenzgeb.-1982.- V21> P.309-317.

74. Camp V.M., Chipponi J., Faraj B.A. Radioenzymatic assay for direct measurement of plasma pyridoxal-5-phosphate // Clin. Chem.- 1983.- V.29.-P.642-644.

75. Chabner B., Livingston D. A simple enzymatic assay for pyridoxal phosphate // Anal. Biochem.- 1970,- V.34, N2,- P.413-423.

76. Chabner B.A., DeVita V.T., Livingston D.M., Oliverio Y.T. Abnormalities of tryptophan metabolism and plasma pyridoxal phosphate in Hodgkin's // N. Engl. J. Med.- 1970,- V.282.- P.838-843.

77. Chatterjee A.K., Jamblar S C., Ghosh B.B. Changes in alanine transaminase activity in the liver of riboflavin-deficient rats // Experienta (Basel).- 1966.-V.22- P.794-795.

78. Chauhan M.S., Dakshinamurti K. Fluorimetric assay of B-6 vitamers in biological materials // Clin. Chim. Acta.- 1981.- V.109.- P. 159-167.

79. Chauhan M.S., Dakshinamurti K. Fluorometric assay of B-6 vitamers in biological materials //Clin. Chim. Acta.- 1981,- V.109.- P. 159-167.115

80. Cheney M.C., Curry D.M., Beaton J.H. // Can. J. Physiol. Pharmacol.- 1965.-V.43.- P.579-583.

81. Chrisley B.M., Hendricks T.S., Driskell J.A. Yitamn B6 status of a group of cancer patients // Nutr. Res.-1986.- V.6, N9.

82. Chrisley B.Mc., Thye F. W., McNaier H.M., Driskell J.A. Plasma B-6 vitamer and 4-pyridoxic acid concentrations of men fed controlled diets // J. Chromatogr. Biomed. Applic.- 1988,- V.428.- P.35-42.

83. Cinnamon A.A., Beaton J.R. // Am. J. Clin. Nutr.- 1970,- V.23.- P.696-699.

84. Clements J.E., Anderson B.B. Pyridoxine (pyridoxamine) phosphate oxidase activity in the red cell // Biochim. Biophys. Acta.- 1980,- V.613.- P.401-409.

85. Cleopath P., Smith V.C., McCully K.S. Growth promotion by homocysteic acid // Science.- 1976,- V. 192,- P.372-374.

86. Coburn S.P., Lewis D.L., Fink W.J. Estimation of human vitamin B-6 pools through muscle biopsies // Am. J. Clin. Nutr.- 1988,- V.49.- P.291-294.

87. Coburn S.P., Mahuren J.A., Wostmann B.S. , Snyder D.L., Towsend D.W. Role of intestinal microflora in the metabolism of vitamin B-6 and 4'-deoxypyridoxine examined using germfree guinea pigs and rats // J. Nutr.-1989.- Vol.119.-P. 181187.

88. Coburn S.P., Mahuren J.D. A versatile cation-exchange procedure of measuring the seven major forms of vitamin B-6 in biological samples // Anal. Chem.-1983,-V. 129,-P.310-317.

89. Cochay E.F., Gershoff S.N., Sodowski G.A. Aging and vitamin B-6 depletion:116effects on plasma pyridoxal-5-phosphate and erythrocyte aminotrasferase activity coefficients in rats //Am. J. Clin. Nutr.- 1990,- Vol.51.- P.446-452.

90. Contractor S.F., Shane B. Estimation of vitamin B-6 compound in human blood and urine // Clin. Chem. Acta.- 1968.- V.21.- P.71-77.

91. Contractor S.F., Shane B. Blood and urine levels of vitamin B-6 in the mother and fetus before and after loading of the mother with vitamin B-6 // Am. J. Obstet. Gynecol.- 1970,- V. 107,- P.635-640.

92. Coyer J.R., Nicholson D.P. Isoniazid-induced convulsions: Part 1 // Clin. South Med.- 1976,- V.69.- P.294-?.

93. Dakshinamurti K., Chauhan M.S. Chemical analysis of pyridoxine vitamers // In: Methods in vitamin B-6 nutrition. Analysis and status assessment., ed. Leklem J.E., Reynold R.D., pp.99-122. New York/London: Plenum. 401 pp.

94. Dempsey W.B., Christensen H.N. The specific binding of pyridoxal-5-phosphate to bovine plasma albumin // J. Biol. Chem.- 1962.- V.237.- P. 11131120.

95. Diehl A.M., Potter J., Boitnott J., Van Duyn M.A., Herlong H.F., Mezey E. Relationship between pyridoxal-5-phosphate deficiency and aminotransferase levels in alcoholic hepatitis // Gastroenterology.- 1984,- V.86.- P.632-636.

96. Donald E.A. Nutritional aspects of vitamin B-6. // In: Vitamin B-6 pyridoxal phosphate: Chem., Biochem. and Med. Aspects.- New York, 1986,- Pt B.-P.477-505.

97. Driskell J. A. Vitamin B-6 // In: Handbook of vitamins. Nutritional, biochemical and clinical aspects /Ed. Machlin L.J.- Marcel Dekker INC, New York, Basel, 1984.- P.379-401.

98. Driskell J.A. Vitamin B-6 requirement of humans // Nutr. Res.- 1994.- V.14, N2,- P.293-324.

99. Driskell J.A., Chrisley B.Mc. Plasma B-6 vitamers and plasma and urinary 4-pyridoxic acid concentrations in young women as determined using highperformance liquid chromatography // Biomed. Chromatogr.- 1991.- V.5.-P. 198-201.117

100. Driskell J.A., Chrisley B. Mc., Reynolds L.K., Moak S.W. Plasma B-6 vitamer and plasma and urinary 4-pyridoxic acid concentrations of middle-aged obese black women // J. Chromatogr. Biomed. Applic.- 1991,- V.568.- P.333-340.

101. Driskell J.A., Chrisley B.M., Thye F.W., Reynolds L.K. Plasma pyridoxal phosphate concentration of men fed different levels of vitamin B-6 // Am. J. Clin. Nutr.- 1988,- V.48.- P. 122-126.

102. Driskell J.A., Gebers J.M., Urban M.C. Vitamin B-6 status of young men, women, and women using oral contraceptives // J. Lab. Clin. Med.- 1976,-V.87.- P.816-821.

103. Driskell J.A., Kirskey A. // J. Nutr.- 1974.- V. 101- P.661-670.

104. Driskell J.A., Moak S.W.Plasma pyridoxal phosphate concentrations and coenzyme stimulation of erythrocyte alanine aminotransferase activities of white and black adolescent girls // Am. J. Clin. Nutr.- 1986.- V.43.-P.599-603.

105. Durko Y., Yuknovska Y.V., Ivanov C.P. A new fluorimetric method for the determination of vitamin B-6 in blood // Clin. Chem. Acta- 1973.- V.49.-P.407-414.

106. Ebadi M. Catabolic pathways of pyridoxal phosphate and derivatives // In: Vitamin B-6 pyridoxal phosphate: Chemical, Biochemical and Medical Aspects.- New York, 1986,- PT.B.- P.449-505.

107. Ebadi M. In: Vitamin B-6 pyridoxal phosphate: Chemical, biochemical and medical aspects. New York 1986; B: 449-476.

108. Editorial. Aufgabe und wirkung des vitamin B-6 in saglings und kindesalter. // Pediatr. Patol.- 1974.- V.9 -P.301-309.

109. Ejderhamm J., Hamfelt A. Ryridoxal phosphate concentration in blood newborn infants and their mothers compared with the amount of extra pyridoxol taken during pregnancy and breast feeding // Acta Paediatr. Scand.-1980,- V.69.- P.327-330.

110. Ferroli C.E., Trumbo P.R. Bioavailability of vitamin B-6 in young and older men //Am. J. Clin. Nutr.- 1994,- V.60.- P.68-71.

111. Fisher I., Walter H. Different activation by pyridoxal phosphate of aspartate118aminotransferase from young and old human erythrosates // BBA.- 1966,-V.184.- P.660-663.

112. Giraud D.W., Martin H.D., Driskell J.A. Erythrocyte and plasma B-6 vitamer concentrations of long-term tobacco smokers, chewers, and nonusers // Am. J. Clin. Nutr.- 1995,- V.62.- P. 104-109.

113. Gregory J.F. Determination of pyridoxal-5-phosphate as the semicarbazone derivative using high-performance liquid chromatography // Anal. Biochem.-1980.-V. 102-P.374-379.

114. Gregory J.F. Relative activity of the nonphosphoiylated B-6 vitamers for Saccharomyces uvarum and Kloeckera brevis in vitamin B-6 microbiological assay//J. Nutr.- 1982,-V. 112.-P. 1643-1647.

115. Gregory J. F., Feldstein D. Determination of vitamin B-6 in food and other biological materials by paired-ion high-performance liquid chromatography // J. Agric. Food. Chem.- 1985,- V.33.- P.359-363.

116. Gregory J.F., Kirk J.R. Determination of urinary 4-pyridoxic acid using high performance liquid chromatography//Am. J. Clin. Nutr. -1979. -V.32. -P.879-883.

117. Guilarte T.R. Radiometric-mikrobiological assay of vitamin B6: Assay simplification and sensivity study // J. Assoc. Off. Anal. Chem.- 1983.- V.66-P.58-61.

118. Guilarte T.R., Mclntyre P. A. Radiometric-mikrobiological assay of vitamin B6: Analysis of plasma samples // J. Nutr.- 1981,- V.l 11.- P. 1861-1868.

119. Guilarte T.R., Mclntyre P.A., Tsan M.F. Growth response of the yeast Saccharomyces uvarum and Kloeckera brevis to the free biologically active forms of vitamin B-6 // J. Nutr.- 1980,- V. 110.- P.954-958.

120. Guilarte T.R., Tsan M.F. Microbiological assays of total vitamin B-6 using119yeast Saccharomyces uvarum. and Kloeckera brevis 11 J. Nutr.-1983.- V.113.-P.721-724.

121. Handbook of vitamins. Marcel Dekker INC.- N.Y., Basel, 1984.- 459p.

122. Hankers L.V. Nicotinic acid and nicotinamide // In: Handbook of vitamins, nutritional, biochemical and clinical aspects. / Ed. Machlin L.J.- Marcel Dekker INC., New York, Basel, 1984,- P.379-401.

123. Hanley W.B., Feigenbaum A., Clarke J.T.R., Schoonheyt W., Austin V. Vitamin B-12 deficiency in adolescents and young adults with phenylketonuria. Lancet 1993; 343: 997.

124. Hansen C.D., Leklem J.E., Miller L.T. Changes in vitamin B-6 status indicators of women fed a constant protein diet with protein diet with varying levels of vitamin B-6//Am. J. Clin. Nutr.- 1997,-V. 66,-P. 1379-1387.

125. Harker L.A., Ross R., Slichter S.J., Scott C.R. Homocystine-induced arteriosclerosis //J. Clin. Invest.- 1976.- V.58.- P.731-741.

126. Hartmeier G.M., Sawhney A.K., Yang B.I. Inhibition of coenzyme activation of aspartate aminotransferase // Biochem. Biophys. Res. Commun.- 1983,-V.112.- P.629-637.

127. Haskell D.E., Snell E.E. An improved apotrypyophanase assay for pyridoxal assay for pyridoxal phosphate // Anal. Biochem.- 1972.- V.45.- P.567-576.

128. Heiskanen K., Salmenpera L., Perheentupera J., Siimes M.A. Infant vitamin B-6 status changes with age and with formula feeding // Am. J. Clin. Nutr.-1994.- V.60.- P 907-910.

129. Heller S., Salkeld R.M. Korner W.F.// Amer. J. Clin. Nutr.- 1973. -Vol.26.-P.1339-1348.

130. Henderson J.M., Codner M.A., Hollins B., Kutner M.H., Merrill A.H. The fasting B-6 vitamer profile and response to pyridoxine load in normal and cirrhotic subjects // Hepatology.-1986.- V.6- P.464-471.

131. Hollins B., Henderson J.M. Analysis of vitamers of B-6 in plasma by reseved-phase column liquid chromatography // J. Chromatogr. Biomed. Applic.-1986,- V.380.- P.67-75.120

132. Horwitt M.K. Interpretation of requirements for thiamin, riboflavin, niacin-thryptophan, and vitamin E plus comments on balance studies and vitamin B-6. //Amer. J. Clin. Nutr.- 1986,- V.44.- P.973-985.

133. Huang Y.C., Chen W„ Evans M.A., Mitchell M.E., Shultz T.D. Vitamin B-6 requirement and status assessment of yuong women fed a high-protein diet with various levels of vitamin B-6. //Am. J. Clin. Nutr.- 1998.-V.67.- P.208-220.

134. Huff J.W., Perlzweig W.A. A product of oxidative metabolism of pyridoxine, 2-methyl-3-hydroxy-4-carboxy-5-hydroxy-methyl-pyridine (4-pyridoxic acid) // J. Biol. Chem. -1944. -V.155. -P.345-355.

135. Huff J.W., Perlzweig W.A. A sensitive method for the determination of 1N-methylnicotinamide in urine // J. Biol. Chem.- 1947.- V. 167.- P. 157-167.

136. Hunter J.E., Harper A.E. Stability of some pyridoxal phosphate-dependent enzymes in vitamin B-6 deficient rats // J. Nutr.- 1976,- V.105.- P.653-664.

137. Hurwitz J. Enzymatic Phosphorylation of vitamin B-6 analogues and their effect on tyrosine decarboxylase // J. Biol. Chem.- 1955,- V.217.- P.513-525.

138. Ink S.L., Henderson L.M. Vitamin B-6 metabolism // Ann. Rev. Nutr.- 1984,-V.4.- P.455-470.

139. IUPAC-IUB Commission on Biochemical Nomenclature (CBN). Nomenclature for vitamins B-6 and related compound: Recommendations 1973 // Eur. J. Biochem.- 1973.- V.40.- P.325-327.

140. Kang-Yoon S.A., Krisley A. Relation of short-term pyridoxine-HCl supplementation to plasma vitamin B-6 vitamers and amino acid concentrations in young women // Am. J. Clin. Nutr.- 1992,- V.55.- P.865-872.

141. Kant A.K., Moser-Veillon P.B., Reynolds R.D. Effect of age on changes in plasma, erythrocyte and urinary B-6 vitamers after an oral vitamin B-6 load // Am. J. Clin. Nutr.- 1988,- V.48.- P. 1284-1290.

142. Kark J.A., Haut M.J., Hicks C.U., Mc Quilken C.T., Reynolds R.D. A rapid fluorometric assay for erythrocyte pyridoxal kinase // Biochem. Med.- 1982,-V.27,N1.-p. 109-120.

143. Kazarinoff M.N, McCormick D.B. N-(5'-phospho-4'-pyridoxyl)-amines121substrates for pyridoxine (pyridoxamine)-5'-phosphate oxidase // Biochem. Biophys. Res. Commun.- 1973.- V.52.- P.440-446.

144. Kazarinoff M.N.,McCormik D.V. Rabbit liver pyridoxamin (pyridoxine)-5'-phosphate oxidase. Purification and properties // J. Biol. Chem.- 1975,- V.250.-P.3436-3442.

145. Kochen W., Buhrlen E., Byrd D.J. Tryptophan metabolism in untreated phenylketonuria // Acta Vitaminol.Enzymol.- 1975,- V.29.- P. 177-184.

146. Kopple J.D., Mercurio K., Bluemenkrantz M.J. Daily requirements for pyridoxine supplements in chronic renal failure. // Kidney Int.- 1981,- V.19.1. P.694-704.

147. Korede O., Alabade-Ajajyi O. Free and bound erythrocyte vitamin B-6 concentration of healthy adolescents // Nutr. Res.- 1993.- Vol.13, N 1.- P.37-43.

148. Koumans A.K.J., Wildschut A.J. Nutrition and atherosclerosis: some neglected aspects // Clin. Cardiol.-1985,- V.8.- P.547-551.

149. Kozik A., McCormick D.B. Mehanism of pyridoxine uptake by isolated rat liver cells // Arch. Biochem. Biophys.- 1984,- V.229.- P. 187-193.

150. Labadarios D., Rossouws J.E., McConnell J.B. Davis M., Williams R. Vitamin B-6 deficiency in cronic liver disease evidence for increased degradation of pyridoxal-5-phosphate // Gut.- 1977.- V. 18,- P.23-27.

151. Lakshmi A.V., Bamji M.S. Pyridoxal-5-phosphate-dependent enzymes in riboflafin deficiency//Indian. J. Biochem. Biophys.- 1975.- V.12.- P. 136-138.

152. Lakshmi A.V., Bamji M.S. Tissue pyridoxal phosphate concentration and pyridoxamine phosphate oxidase activity in riboflavin deficiency in rats and man // Brit. J. Nutr.- 1974,- V.32.- P.249-255,

153. Lakshmi A.V., Bamji M.S. Pyridoxal-5'-phosphate-dependent enzymes in riboflavin deficiency// Indian. J. Biochem. Biophys.- 1975,- V.12.- P. 136-138.

154. Lakshmi A.V., Bamji M.S. Regulation of blood pyridoxal phosphate in riboflavin deficiency in man // Nutr. Met.- 1976,- V.20.- P.228-233.

155. Lee C.M., Leklem J.E. Differences in vitamin B-6 status indicator responses122between young and middle-aged women fed constant diets with two levels of vitamin B-6 // Am. J. Clin. Nutr.- 1985,- V.42.- P.226-234.

156. Leinert J., Simon I., Hotzel D. Methoden und deren wertung zur bestimmung des vitamins-B-6-versorgungszustandes bein menschen // Int. J. Vitam. Nutr. Res.- 1983.-V.53.-P. 166-178.

157. Leklem J.E. Vitamin B-6: a status report // J. Nutr.- 1990,- V.120, N115S.-P.1503-1507.

158. Leklem J.E. Vitamin B-6. In Handbook of vitamins / Ed. Machlin L.J. Dekker, New York, 2 nd ed., 1991,- P.341-392.

159. Leklem J.E. Vitamin B-6 // In: Present knowledge in nutrition, 7th edition. Ed.E.E. Ziegler, L.J. Filer, Jr ILSI Press, Washington, DC, 1996, pp. 174-183.

160. Leklem J.E., Brown R.R., Rose D.P., Linkswiler H. Vitamin B-6 requirements of women using oral contraceptives // Am. J. Clin. Nutr.- 1975,- V.28.- P.535-541.

161. Leklem J.E., Miller L.T., Hardin K., Wang X., Ridlington J. Influence of three levels of riboflavin on vitamin B-6 status in women // FASEB J.- 1995,- V.9.-P.A154.

162. Leklem J.E., Reynolds R.D.(eds.) Current topics in nutrition and disease. Vol.19. C

163. Lequeu B., Greulland J.C., Klepping J. Measurement of plasma pyridoxal-5'-phosphate by combination of an enzymatic assay with high-performance liquid chromatography/electrochemistry // Anal. Biochem.- 1985,- V.149.- P.296-300.

164. Li T.-K., Lumeng L. Regulation of pyridoxal phosphate metabolism in liver // Biochem. Biophys. Res. Commun.- 1974,- V.61.- P.677-684.

165. Lim K.L., Young R.W., Driskell J.A. Separation of vitamin B-6 components by high-performance liquid chromatography // J. Chromatogr.- 1980.- V.188.-P.285-288.

166. Linkswiller H. Methionine metabolite excretion as effected by a vitamin B-6 deficiency. In: Methods in vitamin B-6 nutrition./ Eds. Leklem J.E., Reynolds

167. R.D.- N.Y., Plenum Press, 1981.- P.373-381.

168. Lipinska L. Riboflavin status in phenylketonuria patients in the course of dietary treatment J Inherit Metab Dis 1994; 17: 242-245.

169. Lowik M.R., van der Berg H., Kiatemaker C., Brants H.A.M., Brussaard J.H. Interrelationship between riboflafin and vitamin B-6 among elderly people. (Dutch nutrition surveillance system) // Int. J. Vitam. Nutr. Res.- 1994.-V.64., N3,-P. 198-203.

170. Lumeng L., Li T.-K. Characterization of the pyridoxal-5-phosphate and pyridoxamine-5'-phosphate hydrolase activity in rat liver: identity with alkaline phosphatase // J. Biol. Chem.- 1975.- V.250.- P.8126-8131.

171. Lumeng L., Li T.-K. in Vitamin B-6 metabolsm and role in growth G.P. Tryfiates, Editor, pp.27-51. Food and Nutrition Press. Westprt CT. 1980.

172. Lumeng L., Lui A., Li T.-K. Plasma content B-6 vitamers and its relationship to hepatic vitamin B-6 metabolism // J. Clin. Invest- 1980,- V.66.- P.688-695.

173. Lumeng L., Li T.-K, Lui A., Raudebush R.L. The interorgan transport and metabolism of vitamin B-6 In: Vitamin B-6: its role in health and desease.-New York, 1985,-P.35-54.

174. Lumeng L., Ryan M.P., Li T.-K. Validation of the diagnostic value of plasma pyridoxal-5-phosphate measurements in vitamin B-6 nutrition of rat // J. Nutr.-1978,-V. 108,-P.545-553.

175. Luming L., Schenker L.S., Li T.-K., Brashear R.E., Compton M.C. Clearance and metabolism of plasma pyridoxal-5'-phosphate in the dog // L. Lab. Clin. Med.- 1984.-V. 103,-P.59-69.

176. Maheshwari R.K., Gupta B.D. Pyridoxine supplementation with isonexis it necessary? (letter) // Indian. J. Pediatr.-1991.-Vol.58, N3,- P.387-388.

177. Manore M.M., Leklem J.E., Walter M.C. Vitamin B-6 metabolism as affected by exercise in trained and untrained women fed diets differing in carbohydrate and vitamin B-6 content // Am. J. Clin. Nutr.- 1987,- V.46.- P.995-1004.

178. McCormick D.B. Two interconnected B vitamins: riboflavin and pyridoxine // Physiol. Rev.- 1989,- V.69, N4,- P. 1170-1198.

179. McCormick D.B., Gregory M., Snell E.E. Pyridoxal phosphokinase. I. Assay, distribution, pyrification and properties // J. Biol. Chem.- 1961,- V.236.-P.2076-2084.

180. McCormick D.B., Merril A.H.Jr. Pyridoxamine (pyridoxine)-5'-phosphate oxidase. In: Vitamin B-6. Mehanism and role in growth, ed. G.P. Trybiates, pp. 1-26. Wesport, Conn: Food and Nutrition, 377 pp.

181. McCully K.S. Homocysteine theory of arteriosclerosis: development and current status//Atherosclerosis Rev.- 1983.-V. 11.-P. 157-246.

182. Mehanso H., Buss D.D., Hamm M.W., Henderson L.M. Transport and metabolism of pyridoxine in rat liver // Biochim. Biophys. Acta.- 1980.-V.631.- P. 11-123.

183. Mehansho H., Hamm M.W., Henderson L.M. Transport and metabolism of pyridoxal phosphate in the small intestine of the rat // J. Nutr.- 1979,- V.109.-P.1542-1551.

184. Mehansho H., Henderson L.M. Transport and accumulation of pyridoxine and pyridoxal by erythrocytes // J. Biol. Chem.- 1980,- V.255.- P. 11901-11907.

185. Merrill A.H., Henderson J.M. Diseases associated with defects in vitamin B-6 metabolism or utilisation // Ann. Rev. Nutr.- 1987.- V.7.- P. 137-156.

186. Merrill A.H.Jr., Henderson J.M., Wang E., Codner M.A., Hollins B., Millikan W.J. Activities of the hepatic enzymes of vitamin B-6 metabolism for patients with cirrhosis //Am. J. Clin. Nutr.- 1986.- V.44.- P.461-467.

187. Merrill A.H.Jr., Henderson J.M., Wang E., McDonald B.W., Millikan W.J.125

188. Metabolism of vitamin B-6 by human liver I I J. Nutr.-1984.- V.114.- 16641674.

189. Merrill A.H.Jr., Horiike K., McCormick D.B. Evedence for the regulation of pyridoxal-5'-phosphate formation in liver by pyridoxamine (pyridoxine)-5'-phosphate oxidase // Biochem. Biophys. Res. Commun.- 1978.- V.83.- P.984-990.

190. Middleton H.M. Uptake of pyridoxine-HCl by the rat jejunal mucosa in vitro // J.Nutr.- 1977,- V. 107,- P. 126-131.

191. Middleton H.M. Intestinal Absorption of pyridoxal-5'-phosphate: disappearance from perfused segments of rat jejunum in vivo // J. Nutr.- 1979.-V.109.- P.975-981.

192. Middleton H.M., Mills L.R., Singh M. Effect of ethanol on the uptake of pyridoxine-HCL in the rat jejunum // J. Nutr.- 1984,- V.39.- P.54-61.

193. Miller L.T. Oral contraceptives and vitamin B-6 metabolism // In: Current topics in nutrition and disease.- 1985,- V. 13. Vitamin B-6: its role in health and disease,

194. Miller L.T. Do oral contraceptive agents affect nutrient requirements-vitamin B-6?//J. Nutr.- 1986.-V.l 16.-P. 1344-1345.

195. Mitchell D., Wagner C., Stone W.J., Wilkinson G.R., Schenker S. Abnormal regulation of plasma pyridoxal-5'-phosphate in patients with liver disease // Gastroenterology.- 1976,- V.71.- P. 1043-1049.

196. Mokejea S., Jamdas S.C. Liver transaminase activity in riboflavin-deficient rats // Canad. J. Biochem. -1962,- V.40.- P. 1065-1070.

197. Morrison L.A., Driskell J.A. Quantities of B6 vitamers in human milk by high-performence liquid chromatography. Influence of maternal vitamin B6 status // J. Chromatogr. Biomed. Applic.- 1985.- V.337.- P.249-258.

198. National Reseach Council, Subcommittee on Tenth Edition of the RDAs. Recommended Dietary Allowances, 10th ed. Washington, DC: National Academy Press, 1989.

199. Nisar M., Watkin S.W., Bucknall R.C., Agnew R.A.L. Exacerbation ofisoniazid-induced peripheral neuropathy by pyridoxine // Thorax.- 1990.-V.45, N5,- P.419-420.

200. Nutter L.M. Meisler N.T. Thanassi J.W. Absence of pyridoxine(pyridoxamine)-5'-phosphate oxidase in Morris hepatoma 7777 //

201. Biochem.- 1983.-V.22.-P. 1599-1604.

202. Pannemans D.L., Berg H., Westerterp K.R. The influence of protein intake on vitamin B-6 metabolism differs in young and elderly humans. // J. Nutr.- 1994.-Vol.l24,N 8,- P. 1207-1214.

203. Park J.K., Lnkswiler H.E. Effect of vitamin B-6 depletion in aduld man on the excretion of cystathionine and other methionine metabolites // J. Nutr.- 1970,-V. 100.-P. 110-116.

204. Pellock J.M., Howell J., Kending E.L., Bakes H. Pyridoxine dificiency in children treated with isoniazid // Chest.-1986.- Vol.87, N5.-P.658-661.

205. Perry G.M., Anderson B.B., Dodl.N. The effect riboflavin on red-cell vitamin B-6 metabolism and globin synthesis // Biomedicine.- 1980.- V.33.- P. 36-38.

206. Pingoli A., Trumbo P. Relative bioavailability of B-6 vitamers from cooked ground beef in humans. // Nutr.Res.- 1995.- V.15.- N5.- P.659-668.

207. Pogell B.M. Enzymatic oxidation of pyridoxamine phosphate to pyridoxal phosphate in rabbit liver // J. Biol. Chem.- 1958,- V.232.- P.761-776.

208. Potera C., Rose D.P., Brown R.R. Vitamin B-6 deficiency in cancer patients // Am. J. Clin. Nutr.- 1977.-V.30,- P. 1677-1679.

209. Prasad R., Lakshmi A.V., Bamji M.S., Impaired collagen maturity in vitamins B-2 and B-6 deficiency probable molecular basis of skin lesions // Biochem. Med.- 1983.- V.30.- P.333-341.

210. Pregnolato P., Maranesi M., Marchetti M., Barzanti V., Bergami R., Tolomelli B. Interaction among dietary vitamin B-6, protein and lipids: effects on liver lipids in rats. // Int. J. Vitam. Nutr. Res.- 1994,- Vol.64, N 1,- P.263-269.

211. Prince A.P., Leklem J.E. Vitamin B-6 status of school-aged patients with phenylketonuria // Am. J. Clin. Nutr.- 1994.- V.60.- P.262-268.

212. Rao G.M., Morghom L.O., Kabur M.N., Mohmud B.H. Serum glutamic127oxaloacetic transaminase (GOT) and glutamic pyruvic transaminase (GPT) levels in diabetic mellitus.// Indian. J. Med. Sci.- 1989,- Vol.43.- P. 118-121.

213. Rasmussen K.M., Barsa P.M., McCormick D.B. Pyridoxine (pyridoxamine) phosphate oxidase activity in rat tissues during development of riboflavin or pyridoxine deficiency // Proc. Soc. exp. Biol. Med. (N.Y.).- 1979,- V.161.-P.527-530.

214. Rattan V., Sidhu H., Third S.K. Biochemical mehanism of action of pyridoxine in the prevention of glycolate induced hyperoxaluriain male albino rats. // Nutr.Res.- 1995,- V.15, N4.- P.581-588.

215. Reddy A.S., Reynolds M.S., Price J.M. The determination of 4-pyridoxic acid in human urine //J. Biol. Chem.- 1958,- V.233.- P.691-696.22Q Reinken L., Dapunt O. Vitamin B-6 nutriture during pregnancy //Int. J. Vit. Nutr. Res.- 1998,- V.48.- P.341-347.

216. Reynolds R.D., Leklem L. eds.New York, 526. P.243-255.nutrient requirements-vitamin B-6? // J. Nutr.- 1986.- V.116.- P. 1344-1345.

217. Rinehart J.F., Greenberg L.D. Arteriosclerotic lesions in pyridoxine-deficient monkeys //Am. J. Pathol.- 1949,- V.25.- P.481-491.

218. Roepke L.J.B., Kirksey A. Vitamin B-6 nutriture during pregnancy and lactation. 1. Vitamin B-6 intake, levels of the vitamin in biological fluid, and condition of the infant at birth // Am. J. Clin. Nutr.- 1979,- V.32.- P.2249-2256.

219. Rose D.P., Braidman I. Excretion of tryptophan metabolites as affected by pregnancy, contraceptive steroids, and steroid hormones // Am. J. Clin. Nutr.-1972,- V.24.- P.673-683.

220. Rose D.P., Gyorgy P., Butler M., Andres R„ Norris A.H., Shock N.W., Tobin J., Brin M., Spiegel H. Age differences in vitamin B-6 status of 617 men // Am. J. Clin. Nutr.- 1976,- V.29.- P.847-853.

221. Rosen F., Lowy R.S., Spince A. A rapid assay for xanthurenic acid in urine // Proc. Soc. Exp. Biol. Med.- 1951.-V.77.- P.399-401.

222. Russmussen K.M., Barsa P.M., McCormick D.B. Pyridoxine(pyridoxamine)128phosphate oxidase activity in rat tissues during development of riboflavin of pyridoxine deficiency // Proc. Soc. exp. Biol. Med. (N.Y.)- 1979,- V.161.-P.527-530.

223. Sah R. Nicotinyl and isonicotinyl hydrozones of pyridoxal // J. Am. Chem. Soc.- 1954,- V.76.- P.300-304.

224. Sampson D.A., 0"Conner D.K. Analysis of B-6 vitamers and pyridoxic acid in plasma, tissuees and urine using high performance liquid chromatography // Nutr. Res.- 1989.- V.9, N 3.- P.259-272.

225. Sauberlich H.E. Interactions of thiamin, riboflavin and other B-vitamins // Ann. N.Y. Acad. Sci.- 1980,- V.355.- P.88-97.

226. Sauberlich H.E. Newer laboratory methods for assessing nutriture of selected B-complex vitamins // Ann. Rev. Nutr.- 1984,- V.4.- P.377-407.

227. Sauberlich H.E. Interaction of vtamin B-6 with other nutrients / In Reynolds R.D.,Leklem J.E., eds. Vitamin B-6: Its role in health and disease New York: AR Liss, Inc., 1985,- P. 193-217.

228. Sauberlich H.E., Skala J.H., Dowdy R.P. Laboratory tests for the assessment of nutritional status. Cleveland, Ohio: CRC Press, 1974.

229. Schaltenbrend W., Lane H., Coburn S., Townsend D., Conn P., Smith S.M., LeBlanc A. Increased pyridoxic acid excretion during bed rest // FASEB J.-1995,- V.9, N4,- P.A986.

230. Schrijver J., Speek A.J., Schreurs W.H.P. Semi-automated fluorometric determination of pyridoxal-5'-phosphate (vitamin B-6) in whole blood by highperformance liquid chromatography (HPLC) // Int. J. Vitamin. Nutr. Res.-1981,- V.51.- P.216-222.

231. Schuster K. Urinary 4-pyridoxic acid excretion in 24-hour versus random urine samples as measurement of vitamin B-6 status in humans // Am. J. Clin. Nutr.-1984,- V.39, N3,- P.466-470.

232. Schuster K., Bailey L.B., Mahan C.S. Effect of maternal pyridoxine-HCl supplementation on vitamin B-6 status of mother and infant and on pregnancy outcome // J. Nutr.- 1984.- V.114.- P.977-998.129

233. Schwartz V., Kjeldgaard N.O. The enzymatic oxydation of pyridoxal by liver aldehyde oxydase//Biochem. J.-1951,- V.48.- P.333-337.

234. Serfontein W.J., Ubbink J.B., De Villers L.S. Rapley C.H. Becker P.J. Plasma pyridoxal-5'-phosphate level as risk index for coronary artery disease // Atherosclerosis- 1985,- V.55.- P.357-361.

235. Shane B. Vitamin B-6 metabolism and turnover in the ethanol-fed rat // J. Nutr.- 1982,- V.l 12.- P.610-618.

236. Shephard G.S., Louw M.E.J. Labadarios D. Analysis of vitamin B-6 vitamers in plasma by cation-exchange high-performanceliquid chromatography // J. Chromatogr., Biomed. Applic.- 1987,- V.416.- P. 138-143.

237. Shibuya M., Okada M. Effect of pyridoxine-deficiency on the turnover of aspartate aminotransferase in rat liver // J. Biochem.- 1986.- V.99.- P.939-944.

238. Shin-Buehring Y., Rasshofer R., Enders W. A new enzymatic method for pyridoxal-5'-phosphate determination // J. Intern. Metab. Dis.- 1981.-V.4.-P. 123-124.

239. Shultz T.D., Leklem J.E. Supplementation and vitamin B-6 metabolism. In Reynolds R.D., Leklem J.E. Vitamn B-6: its role in healthy and disease.- N.Y., 1985,- P.55-67.

240. Shultz T.D., Leklem J.E. Vitamin B-6 status and bioavailability in vegetarian women. //AmJ.Clin.Nutr. -1987. -V.46, -P.647-651.

241. Smith G.P., Samson D., Peters T.J. A fluorimetric method for the measurement130of pyridoxal and pyridoxal phosphate in human plasma and leucocytes, and its application to patients with sideroblastic marrows // J. Clin. Pathol.- 1983,-V.36.- P.701-706.

242. Snell E.E., Haskell B.E. In Comprehensive Biochemistry 1971, ed. M. Florkin, E.H. Stotz.-21:47-67. New York: Elsevier.

243. Snider D.E. Pyridoxine supplementation during isoniazid therapy // Tubercule.-1980.-Vol.61.- P. 191-196.

244. Solomon L.R. Vitamin B-6 metabolism in human red cells: Limitations in cofactor activities of pyridoxal and pyridoxal-5'-phosphate // Enzyme.- 1982,-V.28.- P.242-250.

245. Solomon L.R., Hillman R.S. Vitamin B-6 metabolism in human red blood cells //Enzyme.- 1978.-V.23,-P.262-273.

246. Stanulovic M., Chaykin S. Metabolic and drug-induced inactivation of vitamin B-6 // In: Vitamin B-6 metabolism and role in Growth, ed. G.P.Tryfiates. pp. 113-136. Wesport, Conn: Food and Nutrition, 377pp.

247. Stanulovic M., Jeremic V., Lescovac V., Chaykin S. New Pathway of conversion of pyridoxal to 4-pyridoxic acid // Enzyme.- 1976.- V.21.- P.357-369.

248. Storvick C.A., Peters J.M. Method for the determination of vitamin B-6 in biological materials // Vit. Horm (NY).- 1964.- V.22.- P.833-854.

249. Swift M.E., Shultz T.D. Relationship between vitamin B-6 and vitamin B-12 to homocysteine levels risk for coronary heart disease // Nutr. Rep. Int.- 1986,-V.34.-P.1-14.

250. Thanassi J.W., Meisler N.T., Kittler J.M. Vitamin B-6 metabolism and cancer P.319-336

251. Thanassi J.W., Nutter L.M., Meisler N.T.,Commers P., Chiu J.-F. Vitamin B-6 metabolism by Morris hepatoma // J. Biol. Chem.- 1981,- V.256.- P.3370-3375.

252. Trumbo P.R., Wang J.W. Vitamin B-6 status indices are lower in pregnant than nonpregnant women but urinary excretion of 4-Pa does not differ // J. Nutr.1311993,-V. 123-P.2137-2141.

253. Tryfiates G.P., Sattsangi S. Separation of vitamin B-6 compounds by paired-ion high-performance liquid chromatography // J. Chromatogr.- 1982.- V.227.-P. 181-186.

254. Ubbink J.B., Serfontein MSc.W., Becker P. J., De Villiers L.S. Determination of urinary 4-pyridoxic acid lactone using high performance liquid chromatography // Am. J. Clin. Nutr.- 1986,- V.44.- 698-703.

255. Van den Berg H., Schreurs W.H.P., Joosten G.P.A. Evaluation of the of the vitamin B-6 status in pregnancy // Internal J. Vit. Nutr. Res.- 1978,- V.48.-P. 12-21.

256. Vanderslice J.T., Brownlee S.G., Maire C.E., Reynolds R.D., Polansky M. Forms of vitamin B-6 in human milk // Am. J. Clin. Nutr.- 1983.- V.37.- P.867-871.

257. Vanderslice J.T., Maire C.E. Liquid chromatographic separation and quantification of B-6 vitamers at plasma concentration levels // J. Chromatogr.-1980,-V. 196,-P. 176-179.

258. Vanderslice J.T., Maire C.E., Beecher G.R. B-6 vitamer analysis in human plasma by high performance liquid chromatography: a preliminary report // Am. J. Clin. Nutr.- 1981,- V.34.- P.947-950.132

259. Wachstein M.5 Gudaitis A. Detection of vitamin B-6 deficiency. Utilization of an improved method for rapid determination of xanthurenic acid in urine // Am. J. Clin. Pathol.- 1952,- V.22.- P.652-655.

260. Wada H., Morisue T., Nishimura J., Morino, Sakamota J., Ichihara K. Enzymatic studies on pyridoxine metabolism // Proc. Japan. Acad.- 1959.-V.35.- P.299-304.

261. Wada H., Snell E.E. The enzymatic oxidation of pyridoxine and pyridoxamine phosphate // J. Biol. Chem.- 1961,- V.236.- P.2089-2095.

262. Whitehouse L.W. Isoniazid-induced hepatic steatosis in rabbits: an explanation for susceptibility and its antagonism by pyridoxine hydrocloride // Can. J. Physial. Pharmacol.- 1983,- V.61, N5,- P.478-487.

263. Whyte M.P., Mahuren J.D., Vrabel. L.A., Coburn S.P. Markedly increased circulating pyridoxal-5-phosphate levels in hypophosphatasia // J. Clin. Invest.- 1985,- V.75.- P.752-756.

264. Willett W.C., Does low vitamin B-6 intake increase the risk of coronary heart disease?//Curr. Top. Nutr. Dis.- 1985,-V.13.-P.337-346.

265. Williams A.K., High-performance liquid chromatography of vitamin B-6 // Meth. Enzymol.- 1979,- V.62.- P.415-422.

266. Woodring M.J., Fisher D.H., Storvick C.A. A microprocedure for determination of 4-pyridoxic acid urine // Clin. Chem.- 1964.- V.10.- P.479-489.

267. Wozenski J.R., Leklem J.E., Miller L.T. The metabolism of small doses of vitamin B-6 in men. // J. Nutr.- 1980,- V. 110,- P.275-285.

268. Yess M., Price G.M., Brown R.R., Swan P.B., Linkswiller H. Vitamin B-6 depletion in man: urinary excretion of tryptophane metabolites // J. Nutr.-1964.- V.84.- P.229-236.

269. Zive M.M., Taras H.L., Broyles S.L., Frank-Spohrer G.C., Nader P.R. Vitamin and mineral intakes of Anglo-American and Mexican-American preschoolers // J. Am. Diet Assoc.- 1995.- V.95, N3,- P.329-335.

Информация о работе

Харитончик, Лариса Анатольевна
кандидата биологических наук
Москва, 2000
ВАК 03.00.04

Диссертация

Влияние рибофлавинового статуса организма на обмен и биохимические показатели обеспеченности витамином В-6 - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы