Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

ВЛИЯНИЕ РЕКОМБИНАНТНОГО БЕЛКА С ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬЮ СОМАТОСТАТИНА НА ПРОДУКТИВНОСТЬ И ОБМЕН ВЕЩЕСТВ У ОТКОРМОЧНЫХ БЫЧКОВ

ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "ВЛИЯНИЕ РЕКОМБИНАНТНОГО БЕЛКА С ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬЮ СОМАТОСТАТИНА НА ПРОДУКТИВНОСТЬ И ОБМЕН ВЕЩЕСТВ У ОТКОРМОЧНЫХ БЫЧКОВ"

А-зт 9

РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ НАУК ВСЕРОССИЙСКИЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ЖИВОТНОВОДСТВА (ВИЯ)

на правах рукописи

АРАЛБАЕЕ ЖАНЫБЕК

ВЛИЯНИЕ РЕКОМВИНДШНОГО БЕЛКА С ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬЮ ' ООМАТОСТАТИНА НА ПРОДУКТИВНОСТЬ И ОВМЕН ВЕЩЕСТВ У ОТКОРМОЧНЫХ БЫЧКОВ

ОЗ. 00.13- Физиология человека и животных

Автореферат

диссертации на соискание уч'еной степени кандидата' биологических наук

Дуброзици - 1995

Работа выполнено в лаборатории'по изучению продуктов биотехнологии ЕНИИ животноводетва РАСХН > .

Научный руководитель; доктор сельскохозяйственных наук.,

академик РАСХН Эрнст Ж. К.

Официальные оппоненты: доктор биологических наук,

Галочкин Е А.

доктор биологических наук Марзанов КС.

Ведупэя организация- 1 Биотехцентр Российской акадеыиии

сельскохозяйственных наук.

Зашита диссертации состоится". _1995 Г.

в Ь часов на заседании специализированного совета Д. ОЕО. 16. ОЙ при Всероссийском научно- исследовательском институте животноводства.

С диссертацией мояио ознакомиться в библиотеке ЕНИИ животноводство РАСлН по адресу: 14К012. московская область,' Подольский район, п. ДУброаицы.

Автореферат разослан".

$ " 1995 г.

Ученый секретарь специализированного совета доктор биологических наук

Шумейко ПА.

- 3 -

I. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность работы. В современных условиях обеспечение населения продуктами животноводства возможно только при использовании высокоинтенсивных технологий, На решение этих задач направлены селекция животных, оптимизация условий кормления, содержания и ветеринарного контроля. Важной частью технологии современного интенсивного животноводства является применение стимуляторов продуктивности самой различной химической природы: гормональных, тканевых препаратов, антибиотиков и др. В то же время при>*5::;ние гормональных препаратов сопровождается определенными сложностями, ввиду опасности аккумулировании гормонов тканями животных и их попадания в продукты питания человека.

Прогресс в развитии биотехнологической науки открыл интересные и перспективные направления по созданию стимуляторов принципиально нового типа негормональной природы, таких, как антисоматостатиновые иммунные сыворотки или иммуногенные со-матостатиновые конъюгаты.

Соматостатин - биологически активный тетрадекапептид, вырабатывается в гипоталамусе и желудочно- кишечном тракте всех высших животных. Этот гормон впервые оыл выделен Кги1юЬ в 19Б8г. Соматостатин оказывает выражен иное ингибирукздее действие на широкий круг гормонов продуцируемых аденогипофизом и желудочно-кишечным трактом: соматотропин, тиреотропный гормон, инсулин, глюкагон. Он способен также ингибировать активность желудочных и панкраетических ферментов (секретин, гаст-рин), снижать секрецию желудка, печени и поджелудочной железы и тормозить адсорбцию глюкозы, триглицеридав и аминокислот из кишечника.

Необычайно широкий спектр действия соматостатина на процессы ответственные за гидролиз, всасывание и утилизацию питательных веществ, открывает реальные перспективы его использования с целью повышения количества, улучшения качества ■ и снижения затрат кормов на производство животноводческой продукции. В связи с этим большой интерес представляет возможность инициации и использования аутоиммунной реакции на соматостатин, потенциально способной понизить концентрацию этого пептида в крови за ■ '-ут-шит ^-.пи^чантите-

ЦЕНТРАЛЬНАЯ

НАУЧНАЯ Б; ТЕТКА

академии

- 4 - ■"..'■'

лами. Этот методический подход получил название в научной литературе как инмунорегуляция или иммунокоррекция метаболизма и он имеет следствием активизацию комплекса анаболических процессов в организме животных. .

Данный прием позволяет получать экологически чистые продукты питания, т.к. не связан с применением стероидных гормонов и антибиотиков, а основан на минимальных изменениях концентрации данного регуляторного пептида в крови обрабатываемых животных. Таким образом, социальная и народнохозяйственная аначимость этой научной проблемы представляется очевидной.

В то же время соматостатин является низкомолекулярным ■ пептидом, время полужизни которого в кровотоке составляет всего несколько минут. В связи с этим для иммунизации сома-тостатиком применяется не сам пептид, который в чистом виде неиммуногенен, а его химические конъюгаты с различными белками.

Настояидя работа посвящена изучению возможности применения в качестве стимулятора продуктивности рекомбинантного белка содержащего аминокислотную последовательность соматос-татина включенного в его молекулу генноинмэкерным методом.

Цель м задач* работы. Целью настоящей работы являлось изыскание сйособов использования рекомбинантного белка хло-рамфениколацетилтрансферазы (ХАТ) лишенного ферментативной активности и содержащего в своем составе последовательность соматостатин^, в качестве стимулятора продуктивности' растущих, откормдиваемых бычков. В задачу работы входило также сравнительные изучение обмена веществ, количества и качества полученной продукции контрольных и подопытных животных в иммунизационный и постиммунизационный периоды.

Научная новизна м практическая значимость работы. В настоящей работе впервые в Российской Федерации использованы ре-комбинантные белки с последовательностью соматостатина и бе~ лок-носитель без соматостатина, полученные отечественными учеными с помощью технологии генноинжеверного синтеза . Показана принципиальная возможность применения этих препаратов, как стимуляторов ¡.ясной пр*. ,, ктлвности молодняка крупного ро-

гатсго скота. Проведена оценка физиолого- биохимических изменений, происходящих в организме под влиянием испьггывавшихся препаратов, как в процессе четырех месячного периода иммунизации, так и на протяжении шести месяцев после завершения обработки животных.

Апробация работы. Результаты работы были доложены и об-су.ждены:

- на расширенном заседании отдела биотехнологии ВНИИ животноводства.

- на Всеросийской XIII региональной научно-практической конференции молодых ученых и специалистов г. Оренбург, 1994

Объем работы. Диссертация изложена на страницах

машинописного текста, содержит таблиц. 1 рисунка. Список литературы включает /^/источников, в том числе иностранных авторов.

II. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Экспериментальная часть работы проведена в 1992-1994 гг. на молодняке крупного рогатого скота, черно-пестрой породы на базе комплекса по откорму крупного рогатого скота "Вороново" Подольского района Московской области.

Для эксперимента были отобраны бычки в возрасте 3.5-4 месяца. Шли сформированы 3 экспериментальные группы живот-

Таблица 1.

Схема опыта.

Кол-во Характернотика

Группы голов опыта

контроль 17 Основной рацион: солома пшеничная, сенаж

разнотравный, комбикорм (ОР),

И опытная 17 ОР+ иммунизация белком носителем ( хло-

рамфениколацетилтрансфераза (ХАТ)).

111 опьггная 17 ОР+ иммунизация рекомбинантным белком с

последовательностью еоматосгатина

- 6 -

ных- аналогов по 17 голов к каждой (табл. 1).

Состав и применение препарата . В качестве антигенов использовали белки, синтезированные генноинженерным методом в Институте сельскохозяйственной биотехнологии. Исследуемый белок представлял собой трехкомпонентную систему, состоящую из белка носителя, сгтейсермой последовательности и соматостати-на, В качестве белка-носителя служила хлорамфениколацетидт-рансфераза (ХАТ), кодируемая нукдеотидной последовательностью транспоэона 7К9 и не обладающая ферментативной активность».

Группу ХАТ использовали в качестве методического активного контроля

Иммунизация проводилась согласно общепринятой методике т.е. вторая иммунизация через две недели после первой , третья и четвертая последовательно через месяц. После четвертой иммунизации через 2 месяца проведена пятая инъекция.

Оба препарата инъецировали подкожно за лопатку, в дозах 50 мкг/кг живой массы в виде суспензии. Суспензия препаратов была приготовлена на смеси оливкового масла и воска, в соотношении 4/1. Воск использован в качестве пролонгатора. Контрольной группе инъецировали плацебо.

Условия кормления и режим содержания были одинаковыми для всех групп. Ежемесячно проводили индивидуальное взвешивание и определяли среднесуточный прирост живой массы животных.

После завершения эксперимента был проведен контрольный убой бычков по 4 головы из каждой группы на Подольском мясокомбинате по методике БИЖа. При убое учитывали: живую массу, массу парной и охлажденной туши, внутреннего жира, внутренних органов.

Морфологический состав туш изучали путем обвалки туш. Учитывали массу мякоти, костей, а также выход мякоти на 1 кг. костей (коэффициент мясноети).

Изучались фиэико- химические показатели средней пробы мяса с определением следующих показателей: содержание влаги, белка, жира и золы- по методике БИЖа.

Образцы крови у животных брали методом пункции яремной ьекы после каждой иммунизации, а затем ежемесячно на протяжении всего периода эксперимента. Кровь консервировали гепари-

ном, затем получали плазму и ее использовали для биохимических анализов.

Биохимические показатели определяли на приборе "Синхрон" фирмы "Beckman" в лаборатории биохимии с/х животных ВИЖа. Проанализированы следующие показатели; общий белок, альбумины, мочевина, креатинин, аспартат и аланинаминотранеферззы, холестерин, триглицериды и глюкоза.

Концентрацию гормона роста анализировали иммунофермент-ным методом в лаборатории эндокринной регуляции ВНИИФБиП сельскохозяйственных животных.

На протяжении всего эксперимента животные получали равноценные для всех групп рационы, принятые в хозяйстве на основе детализированных зоотехнических норм кормления.

Математический анализ полученых данных проведен методом вариационной статистики с использованием PC АТ-286.

III. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Динамика живой кассы и среднесуточных приростоз бычков. Динамика живой массы представлена в таблице N 2. Из данных таблицы видно, что средняя живая масса животных ГП-ей группы в течение первых трех иммунизаций была выше чем у животных 1-ой и П-оП группы. После второй иммунизации эта разница составляет 14.3 кг или 8.1% (Р<0.05) и 5.6 кг. или 37* .соответственно, Шсле третьей иммунизации разница еще более увеличивалась и составил 21 кг или 10.2Z (Р<0.01) и 7 кг. иди 3.5% относительно 1-ой и 13-ой группы соответственно. После четвертой инъекции бычки ]11-ей группы превосходили животных контрольной группы на 15 кг. или 7.15% (Р<0.05). Наиболее интересным оказалось то обстоятельство, что к этому времени животные П-ой группы уже превосходили аналогов 1-ой и Ш-ей групп соответственно на 17.63 кг. или 7.15% (Р<0. 05) и на 2.6 кг или IX, Это совершенно неожиданное для нас преимущество продолжало сохраняться и при последующих взвешиваниях. Через 2 месяца после последней иммунизации бычки Ц]-ей группы продолжали превосходить своих аналогов из контрольной группы. За этот же отрезок времени бычки 11 группы продолжали наращивать

свои преимущества по отношению и к контрольной, и к Ш-ей опытным группам. При снятии с откорма в момент завершения

Таблица N 2

Динамика дивой массы бычков, кг

Периода Группы

взвешивание ---------------------------------------

I II III '

Предварит, период 146. 8+а 25 - 148. 3+3. 41 . 147. О+З. 47

После 2-инъекции 176. 7+3. 97 185. 4+4. 99 191.0+4. 82*

После 3-инъекции 206. 0+5. 04 £20. 0+5. Об* 227. 7+6. 27**

После 4-инъекции 246.3+4.67 263. 9+6.98* 261.3+7.92*

Через 2-месяца, 280, 9+5. 02 307. 4+7.1*** 298, 3+7. 2*

В конце опыта 379.8+7.34 401.4+8.2* ■ 387.6+15. Э ■

Р< 0.05- *; Р< 0.01- Р< 0.001-

опыта живая масса бычков 11-ой группы была вше контрольной Группы на 21.6 КГ или 5.7Х (Р<0.05) й Ш-ей группы на ia 8 кг что составляет 3.6Х.

Тагам образом полученный экспериментальный материал, с одной стороны показывает> что применение данных препаратов в качестве стимуляторов для роста животных, вполне возможно и способствует, более высокой интенсивности роста, особенно в период иммунизации.

С другой стороны, интерпретация данных полученных опытным путем, чрезвычайно затруднена и нуждается как в допольни-тельном теоретическом осмыслении физиолого-биохимических механизмов дежаших в их основе и повлекших за собой этот результат по П-ой группе, так и в дополнительной экспериментальной подтверждении. Исходя из нашего сегодняшего понимания проблемы, можно попытаться объяснить более высокую интенсивность роста животных П-ой группы как следствие кеслецифи-ческой иммунологической встряски с проявившимся положительным эффектом после иммунизацией хлорамфениколацетилтрансфераэой, лишенкой ферментативной активности. Принимая во внимание современную концепций о тесной функциональной взаимосвязи нерв-

ной, иммунной и эндокринной систем и о причастности иммунной системы к регуляции обмена веществ наша гипотеза представляется вполне правомочной.

В таблице 3 представлены данные о среднесуточных приростов подопытных бычков по периодам иммунизации и за весь цикл откорма.

Таблица 3

Среднесуточный прирост »ивой массы, г

Периоды Группы

иммунизации I II III

После 2-инъекции 524+33 651+46. 7* 772+46.25***

После 3-инъекции 732+57. 5 865+62. г 917+S9. 6**

После 4-инъекции 1230+80. 2 1331+82. 7 1018+73. 3

Через 2- месяца

после 4-инъекции 962+70. 2 1208+67. 8** 1027+52. 7

В конце опыта 766+67. 6 728+30. 3 692+43. 0

В среднем за

весь опыт 789+34. Z 857+35.6 815+34.1

Р< 0.05- *; Р< 0.01- **; Р< 0.001- ***;

Совершенно естественно, что фактический материал приведенный в таблице полностью подтверждает информацию только что обсуждавшуюся по таблице N 2.

К концу периода откорма среднесуточные приросты бычков I1-ой так и III-ей группы были ниже чем у аналогов из 1-ой группы. Ш нашему мнению, затухание роете т нму лиру те г о эффекта примерно через 70-90 дней после последней иммунизации, возможно, обусловлено сроком жизни иммунокомпетентных клеток и циркулирующих антител, поскольку среднее время жизни лимфоцитов m vivo составляет 1.5-2 месяца. Вероятно, дополнительные иммунизации могут увеличить силу иммунного ответа ,и продолжительность проявления биологического эффекта. Тем не менее за весь период опыта в целом, бычки И и Ш группы превосходили аналогов из контрольной группы по этому показателю на 68 и 28 гр. . что составляет в процентах соответствен-

но 8. 6 я 3.31. Иммунизация антигеном, включающим соматостати-новую последовательность была эффективной только в течение 2-х месяцев. 1

3.2. Мясная продуктивность животных Результаты контрольного убоя животных приведены в таОли-

Таблица 4

Результаты контрольного убоя бычков (п=12)

Показатели

Группы I

II

III

Предубойная масса, кг Масса парной туши, кг Внутренний жир, кг ■ Убойная масса, кг Убойный выход. X Масса внутренних органов И шкуры, кг: шкуры печени легких сердца Состав туши, кг: масса охл. туш мякоть кости

коэффициент мясности

378.8+4.3 191. 7+3. 2 4. 75+0. 46 196. 5+а 4 51. 8+0. 4

32. 4+0. 5 5. 45+0. 2 3. 13+0.1 1.63+0.02

19а 3+1. 6 153+3. 9 40. 3+2. 9 а 8+0. 3

382. 6+7. 9 375. 9+6. О 201+5.25 189+2.95 8. 54+0. 3*** 5, 0+0, 3 209.5+5.3* 194+3.3 54.7+1.3** 51.6+0.3

31,2+1.5 32.9+0.9 5. 53+0. 2 . 5.29+0. 04

3. 25+0. 43 3. 38+0. 05 1. 73+0. 03** 1. 68+0.03

204.7+3.3*** 183+9.2 165.7+3.3* 141+8.7 39.0+4.31 41.6+2.2

4. 33+0. 27 3. 4+0. 25

це 4 . Иэ данной таблицы видно что. при убое наибольший выход туши и убойный выход наблюдается у бычков П-ой группы. По этим показателям они превосходили аналогов 1-ой группы соответственно на 4.85 и 3. 82, а Ш-ей группы на 6.3 и 4. АХ. Между животными 1-ой и Ш-ей групп разница по этим показателям была незначительна. Масса внутренного жира у животных П-ой группы почти 2 раза превышала это показатель у животных 1-ой и Ш-ей групп :'Р<0. 999),

- 11 -

Результаты контрольного убоя показали, что у подопытных бычков масса внутренних органов была в пределах физиологических норм (табл 4). в целом у животных ]1-ой и III-ей групп при недостоверном разнице наблюдается тенденция к повышению массы сердца и легких, что может указывать на усиленное протекание процессов газообмена, а тага® на активизацию функции связанной с транспортировкой питательных веществ.

Результаты обвалки туш бычков (табл.4) показывают, что у животных 11-ой группы выход мякоти были больше чем в 1-ой и Ш-ей группах соответственно на 12.7 кг. или 8. 3%. (Р< 0.05) и 24.7 кг, или 17.51 (Р< 0.01). Вследствие этого коэффициент мясности составил в 1-ой группе 3.3, во П-ой- 4.33 и в III-ей- 3. 4( Р<0. 01),

Из данной таблицы й 5 видно, что , по химическому составу мяса, между животными опытных и контрольной групп, еущест-

Таблица 5

Химический состав мяса, в X

Показатели

Группы сухое в-во белок жир зола

1 33. 45+3. 78 18. 66+0. 5 18. 97+1.32 0. 77+0. 02

II 36. 56+3. 59 17. 94+0. 56 17. 72+3. 1 0. 76+0. 04

III 34.98+2. 90 16. 65+0. 89 15. 43+0.18 0. 84+0. 01

веонных различий не наблюдалось. Хотя у животных III группы отмечено уменьшенное отложение жира, что соответствует современным требованию к мясной продукции.

.Таким образом, введение животным рекомбинантного белка с последовательностью соматостатина и белка- носителя существенно не повлияло на химический состав мяса. Качество мяса животных полностью соответствовало принятым ГОСТам, что подтверждает отсутствия каких- либо негативных последствий вводимых препаратов.

3.3. Результаты Сиохимическхх исследовании. По результатам сравнительного анализа уровня метаболитов белкового обмена в плазме .крови, в период иммунизации, установили .что бычки II и III опытных групп превосходили своих аналогов из контрольной группы по содержанию мочевины, креатинина, активности АЛГ И ACT.

Полученные данные в таблице N 6, позволили установить, что после второй иммунизации во 11-ой группе концентрация общего белка по сравнению с 1-ой и Ш-ей группами была выше соответственно на 4.1 и 8.4Х, При этом разница по альбумину была выше в Ш-ей группе по сравнению с 1-ой и П-ой группами соответственно на 27. зх <Р<0,001) и 14.752.

Большое значение при изучении белкового обмена придается концентрации остаточного азота и его фракциям. Так если уровень мочевины во П-ой группе был выше по сравнению с !-ой группой на 2Z, то эта разница в Ш-ей группе составила по сравнению с 1-ой и 11-ой группами соответственно 18.6 и 16Х.

Уровень креатинина, как показатель энергообеспеченности мышечной ткани, у животных П-ой и Ш-ей групп были выше, чем в контрольной на 12.8 (Р<0.05) и 13.8Z.

При определении активности основных ферментов переамини-рования аминокислот установлено, что активность AJTT во П-ой (PcO.OOl) и Ш-ей (Р<0.01) группах была выше чем в контрольной. Повышение активности AJTT в крови опытных групп возможно связывано с активатиэацией синтеза белка в организме животных.

Углеводам и липидам принадлежит важная роль в обменных процессах у жвачных. Они являются основными источниками энергии и пластического материала для построения клеток тканей., Из таблицы N 4 видно, что уровень глюкозы в крови бычков П-ой и Ш-ей групп был постоянно выше, чем в контрольной.

Уровень холестерина в крови животных является показателям интенсивности липидного обмена. Концентрация холестерина во П-ой и III-ей опытных группах была ниже чем в контрольной соответственно на 11.3 и 1.8Х . Соотношение холестерина к мочевине у животных II и Ш групп были н:1же чем в контрольной соответственно на i2.5 и 24. IX.

- 13 -

Результаты полученные после третьей иммунизации, по соотношению основных изученных метаболитов оказались в общих

Таблица 6

Концентрация метаболитов белкового обмена период иммунизации

Периоды Группы

иммунизации 1 П III

Общий белок

После 2- инъекции 6. 79+0. 09 7. 07+0. 18 6. 52+0. 27

Пэсле 3- инъекции С. 91+0. 45 7. 03+0. 33 6.61+0. 31

После 4- инъекции 8.30+0. 25 8. 47+0.1 9.07+0. 47

Альбумины

После 2- инъекции 1.10+0. 04 1. 22+0. 07 1. 4+0.08***

После 3- инъекции 1. 27+0. 08 1. 4+0. 05 1.33+0.09

После 4- инъекции 1. 23+0. 05 1. 23+0. 03 1.13+0.05

Мочевина

После 2- инъекции 28. 67+2. 34 29. 3+4.1 34+3.06

После 3- инъекции 16. 7+1.5 18. 7+0.9 17+0.58

После 4- инъекции 31. 0+0. 82 31. 3+2. 41 32. 3+0. 47

Креатинин

После 2- ■ингекции 0.94+0.02 1. 06+0. 04* 1.07+0. 11

После 3- инъекции 0. 95+0.05 1. 02+0. 04 1.09+0.07

После 4- инъекции 1.00+0.04 1.27+0.27 1.10+0. 11

АЛТ

После 2- инъекции 29. 33+0.67 36.7+2.03*** 36. 7+3. 34**

После 3- инъекции 32+3.52 35. 7+1.86 40. 67+2. 41 *

После 4- инъекции 19. 0+0. 41 20.1+2.03 24. 3+3. 57

' - АСТ

После 4- инъекции 94. 7+8. 33 91. 5+2. 03 135.3+12. 9***

Р<0. 05- *; Р<0. 01- **; Р<0. 001- ***; чертах аналогичным!; предыдущему. Сохраняются те же преимущества у опытных животных по метаболитам белкового обмена. При рассмотрении углевод ¡ю- липидного обмена (табл.7) также наблюдается та же картина что и после второй иммунизации, за исключением Ш-ей группы, где отмечается повышение уровня хо-

лестерика.

На основе этих данных, можно аргументированно утверждать, что иммунизация животных белком с соматостатиновой после до ват ель ноет ьи и белком-носителем обусловливает более интенсивное протекание азотистого обмена в организме животных.

Период после четвертой инъекции харатеризуется у животных П1-ей группы недостоверным снижением уровня прироста живой массы по сравнению с 1-ой и 11-ой группами (табл. 3}.

Таблица 7

Показатели углеводно-липидного обмена в период иммунизации

Группы

Периоды -------------------------------------—

иммунизации I II III

Глюкоза

2-инъекция 44.33+0. 33 47. 33+1.9 46+3.62

3-инъекция 35.33+3.4 46.7+1.77** 39+1.53

4-ИнъекЦИЯ 47.7+1.6 46.0+2.05 49.7+2.25

Холестерин

2-инъекция 196.7+24.1 176. 7+14.6 193. 3+12.05

3-инъекция 186. 7+26. 1 153. 3+3. 34 210+23. 16

4-ИнъекЦИЯ 177.3+5.72 177.3+6.71 176.7+4.64

Триглицериды

2-инъекция 134. 7+12. 7 126. 0+9. 5 122. 0+5. 52

3-инъекция 128.7+2.61 119.0+4.05 119.0+5.31

4-ИнъекЦИЯ 145. 0+9. 9 162.7+12. 3 155, 3+8. О

Холестерин/Мочевина

2-инъекция 7,1+1.36 6.31+1.2 5.72+0.24

3-инъекция 11.55+2.5 8.3+0.6 12.47+1.79

4-инъекциЯ 5.72+0.2 5.75+0.63 5.47+0.3

Р< 0. 05- *; Р<0.01- **; Р<0. 001- ***;

Как видно из таблицы N 6, уровень общего белка повысился во всех группах по сравнению с предыдущим периодом.

У животных Ш-ей группы уровень общего белка был вьше на фоне 1-ой и 11-ой групп на 46.5 и 7.1Х. Повышение концент-

радии общего бедка у животных П-ой и Ш-ей связано, видимо с повышением напряженности иммунного ответа в конце иммунизационного периода.

При таком относительно низком уровне прироста, у животных 1П-ей группы, уровни концентрации мочевины, креатинина и активности ферментов переаминирования АЛГ и АСТ С Р< О. 001) продолжали оставаться повышенным по сравнению с таковыми в контрольной так и 11-ой группах.

У животных был повышен уровень глюкозы (табл.7), при относительно высоком приросте живой массы.

О более интенсивном обмене веществ можно судить по показателям соотношения метаболитов белкового и жирового обменов (холестерин/мочевина). Считается признанным, что чем выше этот показатель, тем интенсивнее липидный обмен. Как видно, отношение холестерин/мочевина у животных 111-ей группы по сравнению с 1-ой и 11-ой группами меньше на 6 и 5.5Х.

Проводя анализ показателей белкового, углеводно- липид-ного обмена веществ в целом за период иммунизации, можно сказать, что у бычков ольггных групп наблюдался более высокий синтез белка, о чем свидетельствует повышение ряда метаболитов белкового обмена и снижение показателей липидного обмена веществ.

3.3.1. Динамика биохимических показателей в постюмунк-зацисжный период. Доя того, чтобы определить насколько действие вводимых препаратов влияет на протекания обменных процессов в организме, после завершения иммунизации, через два месяца, были проведены допольнительные исследования метаболитов крови. В этот период животные опытных групп имели высокий среднесуточный прирост (см. табл 3). Данные таблицы N 8 показывают, что в плазме крови животных опытных групп, как и в иммунизационный период, концентрация метаболитов азотистого обмена находится на более высоком уровне, чем в контрольной группе.

Содержание белка во 11-ой и Ш-ей группах бил также выше на 15 к 17. 8Х (соответственно), по сравнению с контрольной. При этом, его альбуминовые фракции, выполняющие в крови

основную транспортную функцию, имели высокую концентрацию и

Таблица 8

Показатели белкового, углеводного и липидного обменов в постиммунизационный период*

Показатели

I

Группы II

III

Через 2-месяца после 4-инъекции В конце ольгга Через 2-месяца после 4-инъекции В конце опыта Через 2-месяца после 4-инъекции В конце опыта Через 2-месяца после 4-инъекции Через г-месяца после 4-инъекции В конце опыта Через 2-месяца после 4-инъекции В конце опыта Через 2-месяца после 4-инъекции 133.32+26.11 В конце опыта Через 2-месяца после 4-инъекции В конце опыта Через 2-месяца после 4-инъекции В конце опьла

Общий белок

6.13>0. 61 7.05+0.32 7.22+0.23

7.91+0.21 7.42+0.06** 7.66+0.03 Альбумины

О. 93+0.15 1. 36+0.11* 1. 35+0.14*

1.26+0.12 1.29+0.04 1.48+0.03: Мочевина ■

44.33+2. 86 40, 33+1. 46 45.67+6. 66

51.0+2.52 57.7+1.67* 42.7+а 39* Креатинин

0.97+0.14 1..01+0.06 1.11+0.14 АЯГ

53.67+6.51* 60. 33+6.19

39.0+2.09 35.33+4.11 Глюкоза

49. 67+2. 61 . 52+2. 32

45. 0+2.65 46. 33+0. 88* Холестерин

203.33+20. 34 210+26. 54

246. 7+21.9 216. 7+29. 72 . 256. 7+12. 05

Триглицериды

55.67+1.77 113+6.13** 122.67+20.26

119.0+3.06 114.3+3.19 115.33+1.21

Хол/Мочевина

5.34+0.39 5.03+0.4 . 4.78+0.89

4.85+0.41 3.79+0.61 6.06+0.33*

33+4. 37 35.0+4. 63

45. 33+4. 68 43. 0+1.16

Р<0. 05- *; Р<0.01- **;

составляли соответственно 46.2 (Р<0. 05) и 45.22 (Р<0. 05). Повышенным были выше уровень мочевины, креатинина, АЛТ и глюкозы.

3.3.2. Динамика концентрации гормона роста. Анализ данных по концентрации гормона роста в крови подопытных животных выявил исключительно интересные закономерности (таблица 9). Собственно гормон роста следует рассматривать как один из компонентов сложной многокомпонентной соматрояиновой системы. Однозначная интерпретация полученных данных объективно затруднена и она требует понимания общих закономерностей функционирования соматролиновой системы в целом. Это один из самых универсальных гормонов. В организме он принимает активное участие в регуляции практически всех видов обмена веществ. Основное его действие конечно направлено на процессы, связанные с ростом и развитием организма В разной степени, но на всех этапах гормон роста проявляет свое биологическое действие в тесной взаимосвязи с инсулиновой, тиреоидной системами и стероидами, как гонадными, так и кортжоидными.

Таблица N 9 Динамика концентрации гормона роста, нг/мл

Группы

Показатели

I II вХ к III ВХ К

контр контр

После инъекции . 35+. 05 . 93+. 32 265.7 1. 35+. 23* 385. 7

После 3-инъекции . 5+. 25 .32+. 06 64.0 1. 87+. 9* 374.0

После 4-инъекции . 45+. 12 . 32+. 02 71. 1 1. 08+. 51 240. 0

Через 2-месяца

после 4-инъекции . 7+'. 4 .33+. 07 47.1 . 73+. 23 104.3

В конце опыта • 6+.3 . 43+. 13 71.7 . 72+. 32 120.0

Р< 0.05- *;

В настоящее время подтверждено стимулирующее действие гормона роста на молочную продуктивность и не вызывает абса-лютко никакого сомнения у всех исследователей. Что касается

роста и мясной продуктивности, то здесь толкование многочисленных наблюдений и полученные результаты различными исследователями продолжают оставаться противоречивым.

Подученный экспериментальный материал в наших исследованиях показал существенное и достоверное повышение концентрации соматропинав крови животных III-ей группы после второй и .третьей имьопизашш (386 и 374Z к контролю соответственно). ГЪсле четвертой иммунизации концентрация гормона роста у этик животных ente продолжала более чем 2 раза превышать уровень гормона в крови контрольных животных. Затем, в последующие периоды опыта содержание гормона роста у этих двух групп сравнялось.

Вместе с тем для второй группы была характерна совершенно иная динамика содержания гормона в крови. После второй иммунизации белком-носителем отмечено резкое повышение гормона по сравнению с контролем (в Z.7 раза). В то время как на протяжении всего последующего эксперимента концентрация соматро-пина в этой группе ни разу не поднялась выше значений, свойственных контрольным животным,

В качестве наиболее примечательного следует отметить тот факт, что в наших экспериментах динамика концентрации сома-тот ролика в Ш-ей группе имела четко выраженную прямую коррелятивную связь с интенсивностью роста животных. Отрезки времени с повышенным уровнем соматотропина строго совпадали с повышенным приростам живой массы. Во П-ой опытной группе эта закономерность совершенно не прослеживалась, т.е. в те периоды опыта когда отмечалась наибольшая интенсивность роста по сравнению с контрольной группой содержание соматотропина у этих животных было ниже, чем у животных контрольной группы.

Завершая обсуждение характера обменных процессов в организме подопытных животных считаем уместным подчеркнуть, что в обеих экспериментальных группах не наблюдалось никаких клинических нарушений. Это свидетельствует о том, что введение шфлтов рекомбинантных белков не оказывало никакого токси-ч-':кого эг>1)екта и не вызвало патологических изменений в органа не ч к-,? i le ¡-у i ims нталь них животных.

- 19 -Выводы.

1. Испытание рекомбинантного белка с последовательностью соматоетатина и белка-косителя показало, что использованная доза вводимых антигенов 50 мкг/кг живой массы и примененная схема иммунизации вызывает у растущих и откормливаемых бычков существенные изменения в функциональном состоянии соматотро-пиновой системы, в белковом, углеводном и липидном обменах веществ, в скорости роста животных, в количестве и качестве допольнительно лодучеамой мясной продукции.

2. Динамика и интенсивность ответной реакции организма бычков на введение обеих ислыгывавшихся препаратов имела дифференцированный характер. Концентрация гормона роста в крови животных Ш-ей группы достоверно повышалась .после второй, третьей и четвертой иммунизация с постепенным возвращением к фоновому уровню. Во П-ой группе резкое повышение гормона (в 2.7 раза) отмечалось после второй иммунизации и в последующем он ни разу не превышал значений присущих контрольным животным. В 1И-ей группе на протяжении всего опытного периода динамика содержания соматотропина имела четко выраженную прямую коррелятивную зависимость с интенсивностью роста животных. Во 11-ой группе эта закономерность не прослеживалась.

3. Концентрация глюкозы в крови животных обеих опытных групп была выше как в иммунизационную, так и в постиммуниэа-ционную фазы эксперимента, характеризуя метаболическую направленность процессов на режим экономного расходования углеводов и гликогенкых аминокислот в биосинтетических реакциях.

4. Сравнительный анализ содержания в крови подопытных животных основных метаболитов липидного обмена свидетельствует о высокой динамической стабильности в соотношении энергопроизводящих и энергопотребляющих, процессов обеспечиваемых липолиэом и липогенезом. Отмечавшиеся концентрационные изменения триглицеридов и холестерина по величине и по времени соответсвовали складывавшейся интенсивности и направленности обменных процессов и скорости роста животных.

5. Иммунизация бычков обоими, препаратами вызвала повышение в крови основных метаболитов белкового обмена и активности двух главных ферментов переаминирования аминокислот, что активизировало процессы биосинтеза белка..

. 6, Описанная совокупность изменений в обмене веиэств у экспериментальных групп животных в итоге проявилась в повышенной скорости роста Живая масса бычков в 10-ти месячном возрасте т.е. в конце иммунизационной фазы бала £80.9; 307. 4 и £98.3 кг соответственно.по 1-ой, П-ой и Ш-ей группам. В постиммунизационную фазу, хотя ростстимулирующий эффект уже снизился но животные II -ой группы оставались к концу опыта тяжелее контрольных.

7. Испытанные рекомбинантные белки оказали выраженный стимулирующий эффект беа проявление патологических изменений в организме подопытных животных и могут служить основой для разработки новых, эффективных способов повышения количества, улучшения качества и снижения затрат кормов на производство животноводческой продукции.

По материалам диссертации опубликована;

1. Аралбаев Ж. Повышение мясной продуктивности крупного рогатого скота методом иммунокоррекции концентрации эндогенного еоматостатина. //Тезисы докладов XI11 региональной научной конференции шлодых ученых и специалистов посвященную к 250-летию Оренбургской губернии. 7-8 апреля 1994 г.

годпясаяо к печати ß.CS-I905r. Объем 1,2 уч-изц.я.,. Заказ 136

Тирад ВО экз.

"чаоток оперативной пошгоефт ЕНТЯ.?: