Влияние различных факторов на адгезивные свойства Candida albicans на поверх-ности вагинальных эпителиоцитов женщин репродуктивного возраста

Свиридов, Максим Александрович

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Влияние различных факторов на адгезивные свойства Candida albicans на поверх-ности вагинальных эпителиоцитов женщин репродуктивного возраста
ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Влияние различных факторов на адгезивные свойства Candida albicans на поверх-ности вагинальных эпителиоцитов женщин репродуктивного возраста"

На правах рукописи

СВИРИДОВ OO31G05GG

Максим Александрович

ВЛИЯНИЕ РАЗЛИЧНЫХ ФАКТОРОВ НА АДГЕЗИВНЫЕ СВОЙСТВА CANDIDA ALBICANS НА ПОВЕРХНОСТИ ВАГИНАЛЬНЫХ ЗПИТЕЛИ0ЦИТ0В ЖЕНЩИН РЕПРОДУКТИВНОГО ВОЗРАСТА

03 00 07 - микробиология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Челябинск-2008

О Р 2008

003168566

Работа выполнена на кафедре микробиологии, вирусологии, иммунологии, в НИИ иммунологии ГОУ ВПО «Челябинская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» и Южно-Уральском научном центре Российской академии медицинских наук

Научный руководитель:

член-корреспондент РАМН, доктор медицинских наук,

профессор Долгушин Илья Ильич

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук,

профессор Габидуллин Зайнулла Гайнуллинович

доктор медицинских наук,

профессор Туйгунов Марсель Маратович

Ведущая организация:

ГУ Институт клеточного и внутриклеточного симбиоза УрО РАН (г Оренбург)

Защита состоится 27 мая 2008 г в 12 часов на заседании диссертационного совета Д 208 117 03 при ГОУ ВПО «Челябинская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» по адресу 454092, г Челябинск, ул Воровского, 64

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО «Челябинская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Автореферат разослан « ¿*3>» апреля 2008 г

Ученый секретарь диссертационного совета доктор медицинских наук,

профессор Телешева Лариса Федоровна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Большинство инфекций человека начинается с колонизации кожи и слизистых оболочек полостей, сообщающихся с внешней средой Доля инфекционных заболеваний, заражение которыми происходит через слизистые оболочки, превалирует в сравнении с болезнями, при которых оно возникает контактным путем через кожу (Ernst РВ et al, 1999)

По данным ВОЗ, пятая часть населения Земли страдает различными

rnuüvnsuuu С ,, ДР , 200'!} Кандида - ОсШЫИ

распространенный из системных микозов человека, так как свыше 40% взрослых людей являются носителями Candida albicans (С albicans), и любое серьезное нарушение местного или общего иммунитета может спровоцировать их активацию (Арзуманян В Г, Семенов Б Ф , 2001, Баруссе ММ и др , 2004, Маянский А Н , 2006) Во всем мире кандидозные вульвовагиниты встречаются наиболее часто и из всех инфекций влагалища занимают второе место после бактериального вагиноза (HillerS L , Lau R J , 1997), являясь одной из основных причин обращения женщин репродуктивного возраста за медицинской помощью (Прилепская В Н , Байрамова ГР, 2004) Особенностью данной инфекции является длительное течение, частое рецидивирование, возможность распространения на другие органы и системы с развитием генерализованных форм, высокая резистентность возбудителей кантимикотическчм препаратам, трудность лечения беременных и новорожденных (Масюкова CA и др , 2004) Вот почему урогенитальный кандидоз является актуальной общеклинической проблемой и имеет социальное значение, так как снижает качество жизни женщины, вызывает аллергизацию, может привести к осложнениям беременности и патологии у новорожденных, способствует возникновению иммунодефицитных состояний, развитию неопластических процессов (Анкирская АС и др , 1998, Самсыгина ГА , Буслаева ГН , 2004)

Микроорганизмы, попавшие на слизистую оболочку влагалища, должны на ней закрепиться (адгезироваться), преодолев ряд защитных приспособлений хозяина На процесс адгезии могут оказывать влияние факторы как со стороны (чанднд, так и со сторопы оргапизклз лозяина, которое изучено» педостзточпо и требуют уточнения

Выход кандид за пределы очага первичной колонизации сопровождается выраженным воспалительным процессом Одним из главных эффекторов воспалительной реакции, обеспечивающих защиту против кандидозной инвазии, служат нейтрофилы Участие нейтрофильных продуктов во взаимоотношениях кандид с вагинальными эпителиоцитами остается неизвестным

Несмотря на многочисленные исследования роли местного иммунитета в антикандидозной защите, недостаточно изучены механизмы действия клеточных ' и гуморальных компонентов мукозального иммунитета на адгезию кандид Кроме того, в литературе существуют противоречивые данные о роли нормальной микрофлоры в реализации адгезивного потенциала в системе «С albicans -

вагинальные эпителиоциты»

В связи с вышеизложенным было решено изучить влияние различных факторов на адгезивные свойства С albicans на поверхности вагинальных эпителиоцитов женщин репродуктивного возраста, уточнить роль секреторных продуктов нейтрофилов в регуляции микробиоценоза влагалища здоровых женщин, исследовать лерсистентный потенциал различных штаммов С albicans и влияние его на адгезию

Мы полагаем, что исследования по данной проблеме позволят уточнить особенности развития микотического процесса на начальном этапе колонизации слизистой оболочки влагалища С albicans и в дальнейшем разработать мероприятия, направленные на профилактику и лечение данной патологии

Цель исследования изучить особенности адгезии С albicans на поверхности вагинальных эпителиоцитов женщин репродуктивного возраста и факторов, влияющих на адгезивные характеристики С albicans

Задачи исследования

1 Изучить адгезивные характеристики С albicans на поверхности вагинальных эпителиоцитов в сравнении с буккальными и прочность адгезии С albicans на поверхности клеток вагинального эпителия практически здоровых женщин репродуктивного возраста

2. Изучить роль гликолиза, синтеза белка и изменений цитоскелета вагинальных эпителиоцитов и С albicans в процессе адгезии

3 Определить значение гуморальных факторов сыворотки крови и вагинальной жидкости практически здоровых женщин в адгезии С albicans на поверхности вагинальных эпителиоцитов

4 Изучить влияние секреторных продуктов нейтрофилов на показатели адгезии С albicans на поверхности вагинальных эпителиоцитов

5 Оценить взаимосвязь между наличием факторов персистенции у штаммов С albicans и их адгезивными свойствами

Научная новизна

Установлено, что вагинальные эпителиоциты играют активную роль во взаимоотношениях с кандидами Адгезия С albicans зависит от процессов гликолиза в эпителиальных и грибковых клетках Впервые изучено влияние секреторных продуктов нейтрофилов на процесс адгезии С albicans на поверхности вагинального эпителия и установлено, что при предварительной обработке кандид супернатантами нейтрофилов, активированных лактобактериями, адгезия снижается Впервые проведена сравнительная оценка адгезивных показателей штаммов С albicans, имеющих различные персистентные характеристики, выделенных из влагалища женщин, больных вульвовагинальным кандидозом, и носителей Впервые обнаружено, что влагалищная жидкость и ее компоненты, в частности муцин, препятствуют адгезии грибов на поверхности вагинальных эпителиоцитов

Теоретическая и практическая значимость работы

Теоретическая значимость результатов исследования состоит в расширении знаний о характере адгезии С albicans на поверхности вагинального эпителия практически здоровых женщин репродуктивного возраста, что позволяет уточнить некоторые вопросы патогенеза микотического процесса на начальном этапе колонизации грибами слизистой оболочки влагалища Информация о влиянии факторов содержимого влагалища на адгезивные реакции С albicans с вагинальными эпителиоцитами позволяет дополнить

сврлрниа п ив*аии««;у ..v. .C^CII.IM

Полученные данные позволяют расширить представление о роли нейтрофилов в защите слизистых оболочек Определены факторы, способные влиять на адгезию С albicans на поверхности вагинальных эпителиоцитов

С помощью освоенного метода тестирования адгезии грибов можно выявлять группы риска поражения кандидоинфекцией - женщин, слизистые оболочки которых обладают высокой способностью к адгезии клеток грибов Кроме того, определение адгезивной способности, как одного из факторов, характеризующих патогенность грибов рода Candida, позволяет выявлять наиболее вирулентные штаммы этих микроорганизмов

Полученные результаты могут помочь при разработке новых методов лечения и профилактики кандидоза путем целенаправленного изыскания средств блокирования адгезии грибов к поверхности слизистых оболочек

Положения, выносимые на защиту

1 На адгезию в системе «С albicans - эпителиоцит» влияет вид эпителия (буккальный, вагинальный), соотношение клеток грибов и эпителия Адгезивные характеристики С albicans in vitro выше к буккальному эпителию, чем к вагинальному, что подтверждает зависимость адгезии от органной принадлежности эпителиоцитов. При увеличении соотношения кандиды/ эпителиоциты происходит возрастание показателей адгезии Штаммы С albicans, выделенные от больных кандидозным вульвовагинитом женщин,

бладают повышенной адгезивной способностью Высокий процент прочности дгезивных контактов между С albicans и вагинальными эпителиоцитами 75,77%) обеспечивает устойчивую колонизацию влагалища грибами

2 Компоненты сыворотки крови и вагинальной жидкости, секреторные родукты нейтрофилов практически здоровых женщин, муцин и блокада ликолиза кандид препятствуют адгезии С albicans на поверхности вагинального пителия

3 У штаммов С. albicans, проявляющих антикомплементарную или нтилактоферриновую активность, адгезивные характеристики выше по равнению со штаммами С albicans, не обладающими данными видами

активности Более высокие значения антилактоферриновой активности егистрируются у штаммов С albicans, выделенных из влагалища больных ульвовагинальным кандидозом женщин, по сравнению со штаммами, олученными от носителей

Апробация работы

Основные положения диссертации доложены, обсуждены и опубликованы на IV и V итоговой научно-практической конференции молодых ученых ЧелГМА (Челябинск, 2006,2007), V Всероссийском конгрессе по медицинской микологии (Москва, 2007), Всероссийском научном Форуме имени академика В И Иоффе «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге Молекулярные основы иммунорегуляции, иммунодиагностики и иммунотерапии» (Санкт-Петербург, 2007), научно-практической конференции по медицинской микологии «X Кашкинские чтения» (Санкт-Петербург, 2007), на научной сессии, посвященной 10-летию Южно-Уральского научного центра РАМН «Медицинская академическая наука - здоровью населения Урала» (Челябинск, 2008) Работа была поддержана грантом Правительства Челябинской области в 2006 г Результаты исследования используются в процессе преподавания на кафедре микробиологии, вирусологии, иммунологии, а также в практической работе лаборатории противоинфекционного иммунитета НИИ иммунологии ГОУ ВПО Челябинской государственной медицинской академии

Публикации

По теме диссертации опубликовано 14 печатных работ

Структура и объем диссертации

Диссертация изложена на 144 страницах машинописного текста и содержит введение, обзор литературы, материалы и методы, 5 глав собственных исследований, заключение, выводы и список литературы, включающий 157 отечественных и 121 иностранных источников Иллюстрации представлены 21 таблицей и 2 рисунками

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования

Нами обследованы 143 практически здоровые женщины в возрасте от 18 до 26 лет в первой фазе менструального цикла У всех женщин проводили забор вагинального отделяемого из заднего свода влагалища, буккалоного и вагинального эпителия для изучения адгезии С albicans С целью определения влияния сыворотки крови и секреторных продуктов нейтрофилов на адгезию С albicans к эпителию применяли венозную кровь, взятую у этих женщин

В работе использовали С albicans штамм 601, полученный из НИИ гигиены и профпатологии МЗ РФ (Нижний Новгород), а также штаммы С albicans, выделенные из генитального тракта женщин с клиникой вульвовагинального кандидоза и носителей, полученные из бактериологической лаборатории Клиники ЧелГМА Кандиды выделяли из влагалища практически здоровых женщин с титром менее 103 КОЕ/мл и больных вульвовагинальным кандидозом с титром 106 и более КОЕ/мл S aureus «Cowan 209» взят из коллекции кафедры микробиологии, вирусологии, иммунологии ЧелГМА

Получение вагинальных эпителиоцитов осуществляли с боковых стенок влагалища практически здоровых женщин, дважды отмывали забуференным физиологическим раствором (ЗФР, pH 7,2-7,4) в течение 5 минут при 1500 об/ мин и готовили взвесь с концентрацией 10е кл/мл

Получение буккальных эпителиоцитов Буккальный эпителий забирали со стенок щеки у некурящих доноров, утром, натощак, дважды отмывали ЗФР в течение 5 минут при 1500 об/мин и готовили взвесь с концентрацией 10е кл/мл Клетки буккального и вагинального эпителия получали от одной и той же женшины

Получение суточной культуры С. albicans Во всех экспериментах использовали суточную культуру штаммов С albicans, которую получали в дрожжевой фазе при культивировании на агаре Сабуро (ФГУП «НПО «МИКРОГЕН» №3 РФ, г Махачкала) в течение 24 часов при температуре +37°С Посевы смывали ЗФР, трижды отмывали десятикратным объемом, удаляли клеточные агрегаты центрифугированием (1500 об/мин, 2 мин), ресуспендировали в ЗФР и доводили до необходимой концентрации в зависимости от методики исследования 107-10экл/мл методом спектрофотометрии при 'к =540 нм

Получение вагинальной жидкости осуществляли из заднего свода влагалища от практически здоровых женщин, вагинальный эпителий которых использовали в опытах 0,2 мл вагинальной жидкости помещали в 1,8 мл стерильного физиологического раствора натрия хлорида С целью осаждения клеточных элементов пробирку с исследуемым материалом центрифугировали в течение 2 минут при 1000 об/мин Надосадочную жидкость использовали в дальнейшей работе

Получение секреторных продуктов нейтрофилов периферической венозной крови. Выделение секреторных продуктов полиморфноядерных лейкоцитов проводили с помощью метода, разработанного И И Долгушиным с соавторами (1992) Секреторные продукты получали из взвеси нейтрофилов периферической крови, полученных на двойном градиенте растворов фиколла-урографина и доведенных до концентрации 5x106 клеток/мл в физиологическом растворе хлорида натрия

Для полумения супернатантов неактивированных нейтрофилов (СНН) клетки помещали в термостат при температуре +37°С на 30 минут Для выделения супернатантов активированных нейтрофилов (САН) клетки I инкубировали в тех же условиях в присутствии микросфер латекса или активировали взвесью суточной культуры контрольных штаммов S aureus («Cowan 209»), Е coli (штамм М-17), Lactobactenum spp , Bifidobactenum spp Для получения супернатанта активированных и неактивированных нейтрофилов клетки и частицы латекса удаляли путем центрифугирования при скорости 3000 об/мин в течение 10 минут Надосадочную жидкость фильтровали через I мембранные фильтры с диаметром пор 0,22 мкм ("Millipore", USA)

Сыворотку крови получали из 15,0 мл периферической венозной негепаринизировзнной крови, которую отстаивали в течение 2 часов при

комнатной температуре Надосадочную жидкость освобождали от оставшихся клеток крови центрифугированием в течение 30 минут при 3000 оборотах в минуту Сыворотку от 5-7 доноров смешивали и использовали

Определение персистентных характеристик С. albicans. Антилизоцимную активность (АЛА) С albicans определяли фотометрическим методом (Бухарин О В , 1999; Для определения антилактоферриновой активности (АЛфА) использовали метод И В Валышевой с соавторами (2003) Антикомплементарную активность (АКА) определяли методом кинетического титрования комплемента с измерением в качестве меры активности последнего максимальной скорости лизиса сенсибилизированных эритроцитов барана (Мисетов И А , 1993)

Оценка адгезии С albicans на зпителиоцитах В своей работе мы взяли за основу методику Т В Махровой (2004), которая изучала адгезивные свойства С albicans на поверхности буккального эпителия, и дополнили ее

Равные объемы (по 0,5 мл) взвеси вагинальных или буккальных эпителиоцитов в концентрации 106кл/мл и кандид в концентрации 107кл/мл инкубировали в течение 30 мин при температуре +37°С в растворе Хенкса без фенолового красного, встряхивая каждые 5 мин После инкубации эпителиоциты трехкратно отмывали десятикратным объемом ЗФР от неприкрепившихся кандид (1500 об/мин, в течение 5 мин) Из осадка клеток готовили мазки, которые высушивали, фиксировали 96% этиловым спиртом, окрашивали спиртовым раствором кристаллического фиолетового и исследовали с помощью световой микроскопии (увеличение 630)

Адгезию оценивали по трем показателям 1 Активность адгезии (АА) -количество вагинальных или буккальных эпителиоцитов с адгезированными кандидами из 100 посчитанных эпителиоцитов, % 2 Интенсивность адгезии (ИА) - количество кандид, адгезированных на 100 вагинальных или буккальных зпителиоцитах, уел ед 3 Адгезивное число (АЧ) - среднее количество адгезированных кандид на одной эпителиальной клетке, уел ед

Прочность адгезивных контактов оценивали согласно методике А Н Маянского с соавторами (2003) Для анализа прочности адгезивных контактов 1 мл взвеси эпителиоцитов с прикрепившимися кандидами наслаивали на 2 мл раствора фиколла-урографина с плотностью 1,077 г/см3 и центрифугировали в течение 10 минут при 8000 об/мин Из осадка клеток готовили мазки - опыт Для контроля подсчитывали эпителиоциты с прикрепившимися кандидами до центрифугирования В опытном и контрольном мазках оценивали адгезивное число, затем рассчитывали процент прочно адгезированных кандид по формуле

Процент прочно адгезированных кандид = (X опыт/ X K0HTp0J х 100%, где X мыт - показатель адгезивного числа после центрифугирования через фиколл-урографин, X ,онтроль - показатель адгезивного числа до центрифугирования через фиколл-урографин

Определение влияния вагинальной жидкости на адгезию С. albicans на вагинальном эпителии К осадку С albicans (1x107 клеток/мл) добавляли

0,5 мл вагинальной жидкости и инкубировали 30 мин при температуре +37°С, встряхивая каждые 5 мин После инкубации кандиды отмывали десятикратным объемом ЗФР и использовали для изучения адгезивных реакций с вагинальными клетками Контролем служил ЗФР Для удаления антител вагинальную жидкость истощали микробной взвесью 109 клеток С albicans на 0,5 мл вагинальной жидкости в течение 30 мин, встряхивая каждые 5 мин, при температуре -М°С для исключения возможного участия комплемента (Маянский АН и др , 1982) После центрифугирования при 1500 об/мин в течение 10 минут надосадочную

жмптгтк «Кмрапы и "C"CrLZZZZr..\ Z ОГ.^Тал Для изучения ее Ш1ИЯНИЯ НЭ

адгезию кандид аналогично цельной вагинальной жидкости

Определение влияния муцина на адгезию С. albicans на вагинальном эпителии Осадок кандид (1x107 клеток/мл) или вагинальных зпитепиоцитов (1x10sклеток/мл) смешивали с 0,5 мл муцина (Type l-S, «Sigma», США 1мг/мл) и инкубировали 30 мин при температуре +37°С Оценку влияния муцина на адгезию С albicans проводили аналогично экспериментам с вагинальной жидкостью

Определение влияния супернатантов неактивированных и активированных нейтрофилов на адгезию С albicans на вагинальном эпителии. Вагинальные эпителиоциты (1x10sклэток/мл) или С albicans (1x107 клеток/мл) и супернатанты активированных и неактивированных нейтрофилов смешивали в равных объемах (по 0,5 пл) и инкубировали 30 мин при температуре +37°С, встряхивая каждые 5 мин После инкубации эпителий или кандиды отмывали десятикратным объемом ЗФР и использовали для изучения адгезивных реакций с кандидаш или вагинальными клетками, соответственно Контролем служил ЗФР

Изучение влияния сыворотки крови на адгезию С. albicans на вагинальном эпителии К осадку С albicans (1x107 клеток/мл) добавляли 0,5 мл свежего пула сыворотки от 5-7 доноров, инкубировали при температуре +37°С 30 мин, встряхивая каждые 5 мин После инкубации кандиды отмывали I десятикратным объемом ЗФР и затем использовали для изучения адгезивных реакций с вагинальными клетками В контроле вместо сыворотки крови использовали ЗФР В ряде опытов для удапении антител сыворотку истощали взвесью С albicans (109 клеток) в режиме, исключающем активацию комплемента при температуре +4°С (Маянский АН и др , 1982), и использовали для изучения влияния ее на адгезию кандид аналогично цельной сыворотке

Влияние метаболической активности вагинальных зпитепиоцитов и I С albicans на адгезивную активность в системе «С albicans- вагинальные эпителиоциты» осуществляли путем совместного инкубирования смеси эпителиоцитов и кандид при температуре +37°С Гликолиз подавляли фторидом натрия (ОАО «Реактив», С Петербург) Вагинальные эпителиоциты или кандиды преинкубировали с фторидом натрия - 20мМ в течение 15 мин Синтез белка вагинальных эпителиоцитов или кандид ингибировзли циклогоксимидом («AppliChem», Германия) - 16 мкг/мл в течение 30 мин при температуре +37°С

(Махрова Т В , 2004)

Влияние активности элементов цитоскелета на адгезию кандид. Для

ингибирования активности микротрубочек использовали колхицин 1мкг/мл («Sigma», США) (Махрова ТВ , 2004), которым обрабатывали вагинальные эпителиоциты или кандиды в течение 30 мин при температуре +37°С и использовали для изучения адгезивных реакций

Определение жизнеспособности вагинальных эпителиоцитов проводили с помощью окраски 1% раствором трипанового синего Для этого 0,2 мл взвеси эпителиоцитов в физиологическом растворе (концентрация 106кл/мл) смешивали с 0,02 мл 1% раствора трипанового синего, ресуспендировали Клетки помещали в камеру Горяева и исследовали в световом микроскопе Мертвыми считались окрашенные клетки Окрашивание вагинальных эпителиоцитов проводили в суспензии клеток до и после воздействия различных факторов

Жизнеспособность культуры С albicans после обработки различными факторами определяли следующим образом Из взвеси кандид после воздействия какого-либо фактора готовили серию разведений (от 1 104до 1 107) Из каждого разведения делали высев (0,05 мл) на агар Сабуро по методу Дригальского В контроле использовали суспензию интактных кандид в аналогичных разведениях После инкубации в течение 24 часов при температуре 37°С подсчитывали количество КОЕ/мл в опытных и контрольных образцах

Полученные результаты исследований были подвергнуты статистической обработке на ПК под управлением операционной системы Windows ХР с использованием пакета статистических программ «Statistica for Windows 6 0» с вычислением средней арифметической и ее стандартной ошибки (М ± т), л -количество наблюдений в выборке Различия между сравниваемыми группами считали достоверными при р < 0,05 О достоверности различий показателей в сравниваемых группах судили по критериям Mann-Whitney, Wald-Wolfowitz, Wilcoxon

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ '

Условно-патогенные грибы рода Candida часто находятся на поверхности слизистых оболочек человека Адгезия (прикрепление) грибов к поверхности эпителиальных клеток является начальным и критическим по своему значению этапом колонизации слизистых оболочек грибами Candida, определяющим возможность дальнейшего развития микотического процесса Механизмы I адгезии до сих пор полностью не раскрыты, так как адгезия - сложный процесс, который складывается из суммы неспецифических (врожденных) и специфических лиганд-рецепторных взаимодействий микробной клетки и клетки хозяина Малопонятна сущность различий в адгезии отдельных штаммов С albicans в пределах одного вида До конца не определена связь вирулентности грибов с их способностью к адгезии на поверхности эпителиоцитов

Недостаточно изучено влияние факторов, контролирующих состояние эпителиоцитов, в частности вагинальных, на способность грибов к адгезии Несмотря на многочисленные исследования роли местного иммунитета в антикандидозной защите (Маянский А H , Галиуллин Д H , 1984, Маянский А H , Маянский Д H , 1989, Телешева Л Ф , 2000, Долгушин И И , Бухарин О В , 2001, Телешева Л Ф и др , 2001, Андреева Ю С , 2005, Овденко M Б , 2006), механизмы действия клеточных и гуморальных компонентов мукозального иммунитета на адгезию кандид требуют уточнения Неизвестным остается yu?c™e ce"peTcp"L'^ "рсдутсс ,:сГ,трсф.;лсс zc БзаптОстпишепгшл ламдпд о вагинальными эпителиоцитами

Так как влияние многообразных факторов на адгезию грибов рода Candida к эпителиоцитам не поддается учету in vivo, адгезивную активность С albicans в реакции с вагинальными эпителиоцитами человека мы изучали в опытах in vitro при совместной инкубации клеток гриба и эпителиоцитов

С целью определения штамма с устойчивыми адгезивными характеристиками нами поставлена серия экспериментов с девятью свежевыделенными из влагалища практически здоровых женщин штаммами С albicans (по 12 экспериментов с каждым штаммом) и проведено сравнение с адгезивными свойствами штамма 601 К вагинальному эпителию, взятому от одной женщины, добавляли взвесь клеток различных штаммов С albicans в конечной концентрации 107кл/мл, совместно инкубировали и изучали 3 показателя активность адгезии (АА) в %, интенсивность адгезии (ИА) и адгезивное число (A4) в условных единицах

Адгезивные характеристики штаммов в пределах одного вида кандид - С albicans, изученных нами, отличались разнообразием, при этом средний уровень активности адгезии 9 штаммов С albicans, выделенных из влагалища практически здоровых женщин, составил 58,93±1,62%, интенсивности адгезии - 133,93±6,54 уел ед , адгезивного числа - 2,18±0,06 уел ед При сравнении адгезивных свойств свежевыделенных штаммов С albicans от практически здоровых женщин с музейным штаммом 601 достоверных различий нами не установлено, поэтому мы сочли возможным в дальнейших исследованиях использовать штамм 601, так как он обладал достаточно высоким уровнем адгезивной активности и давал наиболее постоянные результаты показателей адгезии

Поскольку от прочности адгезии грибов к поверхности слизистой влагалища может зависеть ее колонизация с возникновением носительства, а в дальнейшем и микотического процесса, мы изучили прочность адгезивных контактов между С albicans (штамм 601) и вагинальными эпителиоцитами, используя фиколл-урографиновый тест Нами установлено, что показатель прочно связанных кандид составил 75,77%, что свидетельствует о высокой резистентности грибов к механизмам клиренса, а значит и возможности персистенции кандид на поверхности слизистой влагалища

У человека типично прикрепление грибов Candida к слизистым оболочкам, выстланным неороговевающим или слабо ороговевающим эпителием (ротовая

полость, пищевод, влагалище) Учитывая противоречивость данных литературы об адгезии кандид к эпителиоцитам слизистых оболочек разной локализации у одного индивидуума (Быков В Л , Величко Е В , 1990, King R D et al, 1980, Sobel J D et al, 1981, Macura А В et al, 1983), нами проведено изучение способности С albicans адгезироваться к различным видам эпителия -вагинальному и буккальному, взятых от одного донора Адгезивные свойства С albicans к эпителиоцитам оценивали по активности адгезии, интенсивности адгезии и адгезивному числу у 25 практически здоровых женщин

Результаты исследований показали, что адгезивные характеристики С albicans значительно выше к буккальному эпителию (АА=85,96±1,15, ИА=371,56+20,88, АЧ=4,29±0,21), чем к вагинальному (АА=66,60±2,25, ИА=159,92+14,44, АЧ=2,32±0,13), р<0,0001, что возможно зависит от физиологических свойств эпителия

Учитывая полученные нами различия в адгезивной активности С albicans на поверхности вагинальных и буккальных эпителиоцитов, мы изучили влияние соотношения грибных и эпителиальных клеток

Нами установлено, что при увеличении соотношения кандиды/ эпителиоциты с 10 1 до 1000 1 происходит увеличение показателей адгезии С albicans как на буккальном, так и на вагинальном эпителии (таблица 1), при этом активность адгезии приближалась к 100% Однако при соотношении 1000 1 на процесс адгезии влияла коадгезия клеток гриба Кроме того, увеличение соотношения между числом клеток гриба и вагинальными или буккальными эпителиоцитами с 10 1 до 1000 1 приводило к нарастанию адгезивного числа, то есть количества клеток С albicans, адгезировавшихся к одному эпителиоциту, что, вероятно, свидетельствует об отсутствии насыщения участков связывания на зпителиоцитах Следует также отметить, что при таком увеличении соотношения кандиды/эпителиоциты (с 10 1 до 1000 1) увеличивается количество эпителиоцитов с высоким содержанием клеток гриба, относительное число которых оценивается показателем интенсивности адгезии, что имеет особое патогенетическое значение Эти эпителиоциты могут служить участками, где прикрепившиеся в большом количестве клетки С albicans способны преодолеть барьерные свойства эпителия и перейти к ипвазивному росту Именно с наличием таких эпителиоцитов можно связать очаговый характер поражений слизистых, выявленный в гистологических исследованиях (Быков В Л идр , 1985, Быков В Л , Величко Е В , 1990, Николаев Ю А , ПроссерДж И , 2000)

Кандиды (в частности, С albicans) являются частью нормальной микрофлоры слизистых оболочек При развитии заболевания в патогенез кандидозной инфекции вовлекаются как факторы патогенности кандид, так и система защиты организма хозяина Главным вопросом остается определение «пусковых» механизмов, приводящих к нарушению баланса в системе «кандиды - слизистые оболочки»

В серии опытов нами прослежено влияние метаболической активности и

состояния цитоскелета кандид и вагинальных эпителиоцитов на адгезию С albicans на поверхности вагинальных эпителиоцитов Опыты проводили с блокадой их энергетического обмена путем подавления гликолиза (фторидом натрия), синтеза белка (циклогексимидом) и выключением реакций цитоскелета (опыты с колхицином)

Таблица 1

Показатели адгезии С. albicans к вагинальному и буккальному эпителию при различной концентрации грибов, (М ± т)

Группы п=25 Показатель

Активность адгезии, % Интенсивность адгезии, уел ед Адгезивное число, уел ед

Концентрация С albicans 107 + вагинальный эпителий 106 66,60±2,25 159,92±14,44 2,32±0,13

Концентрация С albicans 108 + вагинальный эпителий 10б 92,68±3,9 7 pi <0,001 660,40±45,41 Pi <0,001 7,08±0,35 Pi <0,001

Концентрация С albicans 109 + вагинальный эпителий 106 99,68+0,16 pi <0,001 рз <0,002 2055,84±122,31 pi <0,001 Рз <0,001 20,61±1,22 pi <0,001 рз <0,001

Концентрация С albicans 107 + буккальный эпителий 106 85,96±1,15 pi <0,001 371,6+20,9 pi <0,001 4,29±0,21 pi <0,001

Концентрация С albicans 108 + буккальный эпителий 106 98,64±0,32 р2 <0,001 рз =0,17 1156,92+58,84 р2 <0,001 Рз <0,001 11,70±0,57 P2 <0,001 Рз <0,001

Концентрация С albicans 109 + буккальный эпителий 10s 99,92±0,06 р2 <0,001 P4 <0,002 Р5 =0,59 2518,56+128,52 р2 <0,001 р4 <0,001 р5 <0,01 25,20±1,28 Р2 <0,001 Р4 <0,001 р5 <0,01

Примечание к таблице 1

р,-достоверность различий от концентрации С albicans 107 + вагинальный эпителий по Мапп-Wh.tney и Wald-Wolfowitz

р2-достоверность различий от концентрации С albicans 107 + буккальный эпителий

р3-достоверность различий от концентрации С albicans 108 + вагинальный эпителий

р,- достоверность различий от концентрации С albicans 10е + буккальный эпителий

р5-достоверность различий от концентрации С albicans 109 + езгинальный эпителий

Предварительное подавление гликолиза в клетках вагинального эпителия фторидом натрия при последующей совместной инкубации с интактными С albicans приводило к увеличению интенсивности адгезии на 30,2% и адгезивного числа на 24,7%, что свидетельствует о том, что процесс адгезии является энергетически зависимым При предварительном воздействии фторидом натрия

на С albicans показатели адгезии снижались по сравнению с контролем интенсивность адгезии - на 17,7%, адгезивное число - на 19,3%, что подтверждает важность сохранения гликолиза грибов в процессе прикрепления их к эпителию

После блокады синтеза белка или активности микротрубочек как вагинального эпителия, так и С albicans достоверных отличий в адгезивных свойствах грибов по сравнению с контролем не выявлено Однако следует отметить, что после предварительной блокады синтеза белка или активности микротрубочек клеток вагинального эпителия имеет место тенденция к увеличению интенсивности адгезии и адгезивного числа, в то время как при предварительном воздействии циклогексимидом или колхицином на С albicans наблюдается тенденция к снижению всех показателей адгезии грибов

Известно, что самая эффективная защита организма обеспечивается средствами иммунной системы Традиционно, иммунные механизмы классифицируются как врожденные (видовые, неспецифические) и приобретенные (индивидуальные, специфические), которые частично перекрывают друг друга И врожденные, и приобретенные механизмы представлены молекулярными продуктами (гуморальный иммунитет) и клетками, действующими при непосредственном контакте с патогеном (клеточный иммунитет) (Теплова С Н , Алексеев Д А , 2002)

По дачным литературы, существенным препятствием для микробной колонизации являются секреторные антитела класса lg А, специфические в отношении адгезинов Соединяясь с адгезинами, они создают препятствие для осуществления связи адгезина с рецептором на эпителиальной клетке хозяина (Костюкова Н Н , 1989) Значительная часть антител поступает из кровотока на поверхность слизистой влагалища Другим источником антител влагалищной жидкости являются секретирующие иммунокомпетентные клетки влагалища (Беляков И М , 1997,ТелешеваЛ Ф , 1998, Долгушина В Ф идр ,2000, Сергеев А Ю , Сергеев Ю В , 2004, Hocini Н et al, 1987)

С целью уточнения действия гуморальных факторов мукозального иммунитета на адгезию кандид нами проведены эксперименты, в которых изучено взаимодействие грибов и вагинальных эпителиоцитов с гуморалоьыми факторами сыворотки крови, вагинальной жидкости и муцином

При обработке кандид цельной сывороткой крови происходило ослабление адгезии С albicans на вагинальных клетках, причем снижались все адгезивные характеристики (АА от 71,54+2,90 до 51,08+4,00, ИА от 173,46±10,99 до 94,54±11,96, АЧ от 2,42±0,11 до 1,78±0,11, р<0,003) Данное свойство сыворотки могло быть обусловлено различными факторами, в том числе, антиадгезивной активностью могли обладать антитела, содержащиеся в сыворотке крови Для определения вклада антител в общий антиадгезивный эффект сыворотку крови истощали микробной взвесью С albicans После обработки кандид истощенной сывороткой крови получили такой же эффект, как и при воздействии на них цельной сывороткой

Полученные нами данные свидетельствуют о том, что антитела сыворотки крови здоровых женщин, вероятно, являются только одним из факторов, влияющим на адгезию кандид Возможно, антиадгезивная роль сыворотки крови принадлежит и другим гуморальным факторам, например, белкам системы комплемента, белкам острой фазы и тд Данное предположение подтверждают выявленные нами штаммы С albicans, проявляющие антикомплементарные и антилактоферриновые свойства, которые обладали повышенными адгезивными характеристиками, что косвенно указывает на влияние белков системы

тмпп?..еиг2 гс:тгсфсрр.:..с ..С СДГСЗ„К> С ¿ШП,01К>

Учитывая двоякое происхождение противокандидозных антител в вагинальном содержимом - локальный синтез и поступление их из крови, мы изучили влияние компонентов содержимого влагалища на процесс адгезии С albicans на поверхности вагинальных эпителиоцитов Кандиды обрабатывали цельной вагинальной жидкостью и вагинальной жидкостью, истощенной микробной взвесью С albicans, а так же проводили преинкубацию кандид с муцином Во всех опытах при воздействии на С albicans таких факторов, как муцин, цельная или истощенная вагинальная жидкость происходило однонаправленное достоверное снижение адгезивных показателей грибов Так при воздействии муцина АА снижалась от 66,35±2,86 до 56,55+2,03, ИА от 162,20+12,40 до 116,85±5,26, A4 от 2,40±0,11 до 2,07±0,06, р<0,02, цельной вагинальной жидкостью - АА от 64,39±2,60 до 56,00±1,70, ИА от 156,67±12,08 до 113,50±2,94, A4 от 2,39+0,11 до2,04±0,05, р<0,05, истощенной вагинальной жидкостью - АА от 68,00±2,90 до 56,92+1,60, ИА от 173,54±13,38 до 116,23±5,65, A4 от 2,54+0,14 до 2,03+0,06, р<0,007 Полученные нами данные свидетельствуют о том, что содержимое влагалищной жидкости способно блокировать адгезивные молекулы кандид

Учитывая представительство С albicans в нормсфлоре, антигены их клеточной стенки (Casanova M et al, 1989), протеиназы и другие литические ферменты (De Bernardis F et al, 1997) должны индуцировать образование антител у здоровых людей По результатам наших опытов антитела, находящиеся в вагинальной жидкости, не вносят существенного вклада во взаимоотношения кандид и вагинальных зпителиоцитов очевидно, специфичеслое звено местного иммунитета менее активно, чем неспецифическое, поэтому не принимает участия в блокаде начальных фаз развития кандидозной инфекции

Таким образом, на основании полученных нами данных можно утверждать, что вагинальная жидкость, обладая антиадгезивным эффектом, препятствует прикреплению и активному размножению С albicans на слизистой влагалища здоровых женщин репродуктивного возраста Часть антиадгезивного потенциала вагинальной жидкости может принадлежать муцину

После изучения действия гуморальных факторов мукозального иммунитета на адгезию кандид к вагинальному эпителию наше внимание было обращено на клеточное звено иммунитета, так как известно, что основную работу по избазлению макроорганизма от Candida spp выполняют профессиональные

фагоциты - макрофаги и нейтрофилы

За последние годы получены новые данные о секреторной функции нейтрофилов, химическом строении их медиаторов (Третьякова И Е , 2003, Андреева Ю С , 2005) Гранулоциты содержат различные биологически активные продукты, которые образуются в процессе созревания клеток и присутствуют в их гранулах, а также синтезируются вновь после активации (Маянский А Н , Галиуллин Д Н , 1984, Маянский А Н , Маянский Д Н, 1989, Долгушин И И , Бухарин О В , 2001) Активированный нейтрофил решает эффекторные задачи одним из двух способов либо с помощью фагоцитоза, либо путем секреции биологически активных веществ

Несмотря на то, что изучению роли нейтрофилов в регуляции иммунного и других звеньев гомеостаза посвящено много работ (Долгушин ИИ идр , 1986, 1988, 1990,1998, Маянский А Н. и др , 1997, Бахов НИ и др , 1997, Долгушин И И , Бухарин О В , 2001, Smolen J А , Boxer L А , 1995), их участие в регуляции микробиоценозов слизистых оболочек урогенитального тракта женщины остается недостаточно изученным В литературе отсутствуют данные о влиянии секреторных продуктов нейтрофилов на адгезивные характеристики кандид при взаимодействии с эпителиоцитами Однако оно может иметь значение в развитии кандидозного процесса, в частности при вагинальном кандидозе

Нами изучено влияние секреторных продуктов нейтрофилов на показатели адгезии С albicans в реакциях с вагинальными эпителиальными клетками здоровых женщин репродуктивного возраста (таблица 2) В результате проведенных исследований установлено, что секреторные продукты интактных нейтрофилов, а также нейтрофилов, активированных лактобактериями или S aureus, при воздействии на С albicans снижают адгезивные свойства грибов и, тем самым, препятствуют колонизации грибами вагинального эпителия и, следовательно, развитию кандидозной инфекции, но не влияют на адгезивные свойства кандид при воздействии этими супернатантами на вагинальный эпителий Супернатанты нейтрофилов, активированных бифидобактериями, повышают адгезивные характеристики кандид Секреторные продукты нейтрофилов, активированных Е coli или латексом, при последующем воздействии на вагинальные эпителиоциты или кандиды не оказывают влияния на процесс адгезии (р > 0,05)

Следует заметить, что лактобактерии, как представители нормальной микрофлоры влагалища, играют важную роль в микробиоценозе женского репродуктивного тракта, прежде всего за счет большого количества они могут препятствовать адгезии условно-патогенных и патогенных микроорганизмов у здоровых женщин Кроме того, активируя находящиеся во влагалище нейтрофилы, они опосредованно оказывают антиадгезивное действие на грибы и другие микроорганизмы, что приводит к поддержанию колонизационной резистентности влагалища

С целью установления зависимости адгезии кандид на поверхности

Таблица 2

Влияние супернатантоп неактивированных и активированных мейтрофилов на адгезивную способность Candida albicans к вагинальным эпителиоцитам, (М •• т)

Группа Показатель Без воздействия (контроль) ! Предварительно обработанные СНН Без воздействия (контроль) / Предварительно обработанные САН Lacto Без воздействия (контроль) / Предварительно обработанные САН S aureus Без воздействия (контроль) / Предварительно обработанные САН Bifido Без возде йствия (контре ль) / Предварительно обработанные САН H coli Без воздействия | (контроль) / j Предварительно i обработанные I САН Латекс

п=23 n=13 л=10 п=7 n=1 i n=9

Вагинальные эгште-лисциты АА, % 59,91±2,12/ 58,43±3 05 63,23+2 80 / 67,00±3 08 64 30±3,61 / 56,20±4 61 59,0012,64/ 65,4312 67 * р<0,05 64,6212,78/ 60,1511,31 60 0013,23 / 52,3314,11

НА, уел ед 125,57±7,5У 125,4818,84 138,54±8,S8 / 153,85±15,21 133,20±13,46 / 105 70±8,73 126,4319,08 / 170,14116,73 138,77l|. 99/ 142,651 4,26 123 00110,22/ 102,00112,19

A4, уел ед 2,06±0,07 / 2,1210,10 2,1В±0,08/ 2,25±0,13 2,03±0,11 / 1,88±0,06 2,1510,15/ 2,5810,20 2,1310,37/ 2,3310 14 2,0310,08 / 1,9110,12

С albicans АА, % 59,61 ±2,23/ 49,13±3,09 * р<0,005 62,62±2,65 / 53,54±2,04 * р<0,005 62,80±3,88 / 51,0013,18* р<0,03 61,86*3,61 / 67,1412,09 64,00±2 47 / 59,92±; ,64 58,8912,85 / 54 6713,19

ИА, уел ед 125,0017,73 1 95,57±8,26 * р<0,003 135,77±8,97 1 99,77±5,53 * р<0,007 131,101 14,03/ 96,4017,58 * р-^0,03 132,43112,96/ 205,00123,04 * р<0 05 140,4215,34/ 140,08111,59 119,8919,69/ 108,11110,84

A4, уел ед 2,06±0,07 / 1,89±0,07 * р<0,03 2,15±0,08 / 1,86±0,06 * р<0,03 2,0410,11 / 1,8710 06 2,1210,12/ 3 0410 30 2,1810,06/ 2 3010,12 2,01±0,08 / 1,9710,15

Примечание к таблице 2 *- достоверность различий показателей адгезии С albicans от контроля, no Wilco> on

вагинального эпителия от персистентных свойств грибов исследованы С albicans, выделенные от практически здоровых женщин и больных вульвовагинальным кандидозом

Штаммы С albicans, полученные из влагалища больных вульвовагинальным кандидозом женщин, обладали повышенной адгезивной способностью по отношению к вагинальным зпителиоцитам по сравнению со штаммами, выделенными от носителей, что соответствует данным Е В Величко (1987), В И Кисиной (2003) Этот факт свидетельствует о том, что патогенность штаммов С albicans, выделенных от больных, может быть связана и с их более высокой адгезивностью

Общепризнано, что представители нормальной микрофлоры, обладая определенными механизмами прикрепления, способны вызывать заболевание при снижении иммунитета, а потому этих возбудителей относят к условно-патогенным микроорганизмам Однако при развитии болезни шансы выжить у возбудителей резко падают Поэтому многие из них выработали свойства, направленные не столько на поражение хозяина, сколько на взаимную их адаптацию, позволяющую возбудителюдлительно персистировать в организме

Кандиды используют разнообразные механизмы, позволяющие им адгезироваться и колонизировать ткани, которые до настоящего времени изучены недостаточно В последние годы внимание исследователей привлекает оценка механизмов ингибирования факторов естественной защиты макроорганизма, определяемые как антилактоферриновая (АЛфА), антилизоцимная (АЛА), антикомплементарная (АКА) активность, которые сформировались у грибов и бактерий в процессе эволюции

Изучив персистентные свойства у штаммов С albicans, выделенных из влагалища женщин с клиническими признаками вагинального кандидоза и носителей, мы обнаружили, что высокие значения АЛфА характерны для штаммов С albicans, выделенных из влагалища больных вульвовагинальным кандидозом, составив в среднем 16,72+0,32 нг/мл, в то время как у здоровых АЛфА равнялась 1,32±0,27 нг/мл Согласно данным литературы, более высокие значения антилактоферринового признака имеют микроорганизмы, выделенные при хронических формах инфекционного процесса и от бактерионосителей (Валышева И В , 2005, Валышев А В , Валышева И В , 2006)

Обращает на себя внимание тот факт, что АЛфА обладали все штаммы С albicans (100%), выделенные нами из влагалища больных вульвовагинальным кандидозом, в то время как у носителей это свойство было обнаружено лишь у 22,2% штаммов С albicans Достоверное повышение АЛфА у штаммов, выделенных из влагалища больных вульвовагинальным кандидозом по сравнению со штаммами С albicans, полученными из влагалища практически здоровых женщин, связано, по-видимому, с селекцией вариантов, способных адаптироваться к лактоферрину и обладающих максимальной выраженностью признака

Высокая частота (76-78%) присутствия антилактоферриновой активности

у С albicans, изолированных из различных биотопов человека, обнаружена и другими авторами (Бухарин О В и др , 2005) А В Валышев и соавторы (2003) обнаружили антилактоферриновую активность у 90% штаммов грибов рода Candida, высеянных из фекалий пациентов при обследовании их на дисбиоз кишечника

Таким образом, штаммы С albicans, выделенные нами из влагалища больных вульвовагинальным кандидозом женщин, отличались способностью инактивировать лактоферрин и обладали большей агрессивностью по отношению

Ii narMuarii-uu... Л,,Т.."С;.хТОфсрр«1пиигао ьпийо1вс1 ланДИД,

вероятно, участвуют в персистенции С albicans - длительном переживании возбудителя в организме хозяина, способствуя возникновению и хронизации воспаления Выраженность АЛфА у С albicans зависит от наличия или отсутствия в организме человека инфекционного процесса

У штаммов С albicans, проявляющих антикомплементарные или антилактоферриновые свойства, активность адгезии была достоверно выше, интенсивность адгезии и адгезивное число имели тенденцию к повышению по сравнению со штаммами С albicans, не обладавшими данными свойствами, что свидетельствует об антиадгезивных свойствах комплемента и лактоферрина А В Валышев с соавторами (2003) выявили способность к ингктивации белков системы комплемента (антикомплементарную активность) у 78,3% штаммов С albicans, выделенных из фекалий пациентов при обследовании на дисбиоз кишечника

Согласно данным литературы, лактоферрин обладает антиадгезивным действием за счет снижения концентрации свободного железа (Qiu J eta!, 1998) и аффекта пептидных фрагментов - лактоферрицинов (Czirok Е et al, 1990)

Одним из факторов естественной резистентности хозяина является также лизоцим, который относится к классу ферментов-мурамидаз и может оказывать влияние на исход персистенции патогена (Бухарин О В , 2000)

По результатам наших опытов адгезивные характеристики у штаммов кандид, проявляющих антализоцимную активность, были достоверно ниже, чем у штаммов, не проявляющих таковую Значит, штаммы кандид, не способные инактивировать лпзоцим, адгезируются лучше, возможно потому, что лизоцим, воздействуя на клеточную стенку кандид, разрыхляет ее, обнажая рецепторы для адгезии

Учитывая вышеизложенное, адгезию микроорганизмов можно рассматривать как приспособительную реакцию, направленную на выживание в тканях макроорганизма

Таким образом, проведенные нами исследования свидетельствуют о сложности отношений в системе «С albicans - вагинальные эпителиоциты», которые определяют возможность дальнейшего развития микотического процесса На начальном этапе колонизации слизистой оболочки влагалища грибами они зависят от адгезивных свойств возбудителя и влагалищного эпителия, причем последний принимает активное участие в этом процессе, а

также от персистентных характеристик С albicans Вагинальная среда, обладая антиадгезивным эффектом, препятствует прикреплению и активному размножению С albicans на слизистой влагалища здоровых женщин репродуктивного возраста Кроме того, на взаимоотношения кандид с вагинальными эпителиоцитами влияют клеточные (нейтрофилы, лактобактерии) и гуморальные компоненты мукозального иммунитета (муцин, белки системы комплемента, лактоферрин), которые участвуют в обеспечении колонизационной резистентности влагалища

ВЫВОДЫ

1 Адгезия С albicans на поверхности эпителиоцитов зависит от вида эпителия (буккальный, вагинальный), соотношения клеток грибов и эпителия, происхождения штамма (больные, носители) Адгезия кандид in vitro выше к буккальному эпителию, чем к вагинальному При увеличении соотношения кандиды/эпителиоциты происходит возрастание показателей адгезивной способности грибов Штаммы С albicans, выделенные от больных кандидозным вульвовагинитом женщин, обладают повышенной адгезией Прочность адгезивных контактов между С albicans и вагинальными эпителиоцитами составила 75,77%

2 Подавление гликолиза в клетках вагинального эпителия фторидом натрия приводит к повышению адгезии кандид, а подавление гликолиза С albicans вызывает снижение их адгезивных свойств на поверхности вагинального эпителия

3 Сыворотка крови и вагинальная жидкость практически здоровых женщин обладают антиадгезивным эффектом в системе «С albicans - вагинальные эпителиоциты» Муцин уменьшает адгезию кандид на вагинальных эпителиоцитах

4 Секреторные продукты нейтрофилов интактных, активированных лактобактериями или S aureus, снижают адгезию С albicans на поверхности вагинального эпителия Продукты нейтрофилов, стимулированных бифидобактериями, наоборот, повышают адгезию

5 Адгезивные свойства у штаммов С albicans, проявляющих анти-лактоферриновую и антикомплементарную активность, выше, а у штаммов С albicans, обладающих антилизоцимной активностью, ниже Повышенная антилактоферриновая активность регистрируется у штаммов С albicans, выделенных из влагалища больных вульвовагинальным кандидозом женщин Штаммы С albicans женщин носителей способны инактивировать лизоцим

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1 Свиридов, МА Влияние временного фактора на взаимодействие

дрожжеподобных грибов рода Candida и вагинальных эпителиоцитов in vitro / М А Свиридов, Ю С Андреева, Е В Плеханова, Л В Плаксина, Л В Подлубная //Материалы IV-ой итоговой научно-практической конференции молодых ученых ЧелГМА - Челябинск, 2006 - С 100-101

2 Долгушин, И И Нейтрофилы регулируют формирование микробиоценоза слизистых оболочек / И И Долгушин, Ю С Андреева, Е А Мезенцева, А Ю Савочкина, Е В Плеханова, М А Свиридов, М В Пешикова / /Мед иммунология -2006 -Т 8, №2-3 - С 135-136

3 Лппгушим ми разлимпетл шкаммив

дрожжеподобных грибов рода Candida на поверхности вагинальных эпителиоцитов / И И Долгушин, М А Свиридов, Ю С Андреева, Л В Плаксина II 1-й Российско-Чешский медицинский Форум сб материалов - Челябинск,

2006 - С 163

4 Свиридов, М А Оценка адгезивной активности грибов Candida albicans на поверхности вагинальных эпителиоцитов под воздействием вагинального секрета/М А Свиридов, И И Долгушин, Л В Подлубная//Успехи медицинской микологии материалы пятого всерос конгр по медицинской микологии - М ,

2007 - Т 9 - С 20-22

5 Свиридов, М А Сравнение адгезивной активности различных штаммов Candida albicans, выделенных из влагалища больных вульЕовагинальным кандидозом и здоровых женщин, с персистентными характеристиками этих штаммов / М А Свиридов, И И Долгушин, Л В Плаксина, Л В Подлубная, В А Нечет, О Л Карташова // Успехи медицинской микологии материалы пятого всерос конгр по медицинской микологии - М , 2007 - Т 9 - С 22-23

6 Свиридов, М А Факторы и условия, влияющие на адгезивную активность Candida albicans в системах с вагинальными эпителиоцитами / М А Свиридов // Конкурс грантов студентов, аспирантов и молодых ученых вузов Челябинской области сборник рефератов науч-исслед работ аспирантов -Челябинск Изд-во ЮУрГУ, 2007 - С 42-43

7 Свиридов, М А Изучение влияния метаболической активности вагинальных эпителиоцитов на адгезию Candida albicans IМ А Свиридов, Е В Плеханова, Л В Подлубпая // Материалы V-ои итоговой научно-практической конференции молодых ученых ЧелГМА - Челябинск, 2007 -С 75-77

8 Долгушин, И И Влияние нейтрофилов и продуктов их секреции на факторы, участвующие в формировании колонизационной резистентности /ИИ Долгушин, Ю С Андреева, М А Свиридов, С И Марачев, А Н Скороходов, Е А Мезенцева, Е В Плеханова, А Ю Савочкина, Л Ф Телешева, Д Н Матвеева, В В Чванов, В А Тупиков//Мед иммунология -2007 -Т 9, №2-3 -С 133134

9 Долгушин, И И Влияние компонентов сыворотки крови на адгезивные свойства Candida albicans/И И Долгушин, М А Свиридов//Мед иммунология -2007 -Т 9, № 2-3 - С 134-135

10 Свиридов, М А Влияние блокады синтеза белка на адгезию Candida

spp на вагинальном эпителии / М А Свиридов, И И Долгушин, В В Чванов // Проблемы медицинской микологии - 2007 - Т 9, № 2 - С 94-95

11 Долгушин, И И Влияние секреторных продуктов нейтрофилов на адгезивные свойства Candida albicans / И И Долгушин, М А Свиридов // Российский аллергологический журн - 2007 - №3 - С 262 - Прил

12 Долгушин, И И. Нейтрофилы и продукты их секреции оказывают регулирующее влияние на факторы колонизационной резистентности слизистых оболочек /ИИ Долгушин, Ю С Андреева, М А Свиридов // Рос аллергологический журн - 2007 - №3 - С 263 - Прил

13 Долгушин, И И Формирование микробиоценоза слизистых оболочек контролируетсянейтрофилами/И И Долгушин, ЮС Андреева, М А Свиридов, ЕА Мезенцева, А Ю Савочкина//Российский аллергологический журн -2008 — №1 -С 94-95 - Прил

14 Долгушин, И И Нейтрофилы слизистых оболочек/И И Долгушин, Ю С Андреева, М А Свиридов, Е А Мезенцева, Л Ф Телешева//Медицинская наука и образование Урала - 2008 - №2 - С 37-40

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

АА - активность адгезии АКА- антикомплементарная активность АЛА - антилизоцимная активность АЛфА - антилактоферриновая активность A4 - адгезивное число

ЗФР - забуференный физиологический раствор

ИА - интенсивность адгезии

КОЕ - колониеобразующая единица

САН (латекс) - секреторные продукты нейтрофилов, активированных частицами пслистирольного латекса

САН (Bifido) - секреторные продукты нейтрофилов, активированных Bifidobacterium spp

САН (Е coli) - секреторные продукты нейтрофилов, активированных Е coli (штамм М-17)

САН (Lacto) - секреторные продукты нейтрофилов, активированных Lactobacterium spp

САН (S aureus) - секреторные продукты нейтрофилов, активированных S aureus (штамм "Cowan 209")

СНН - секреторные продукты неактивированных нейтрофилов

На поавах рукппигп

Свиридов Максим Александрович

ВЛИЯНИЕ РАЗЛИЧНЫХ ФАКТОРОВ НА АДГЕЗИВНЫЕ СВОЙСТВА CANDIDA ALBICANS НА ПОВЕРХНОСТИ ВАГИНАЛЬНЫХ ЭПИТЕЛИОЦИТОВ ЖЕНЩИН РЕПРОДУКТИВНОГО ВОЗРАСТА

03 00 07 - микробиология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Челябинск-2008

Отпечатано в полиграфическом отделе ООО «Институт медико-социальных исследований» Подписано в печать 17 04 2008 г Формат 60x84 Бумага офсетная Гарнитура Arial Суг Уел п л 1,0 Печать на ризографе Тираж 100

Содержание диссертации, кандидата медицинских наук, Свиридов, Максим Александрович

Список основных сокращений

Введение

Глава 1. Обзор литературы

1.1 Экология и морфо-функциональные особенности дрожжевых грибов рода Candida

1.2 Морфо-функциональные особенности вагинальных эпителиоцитов женщины и колонизационная резистентность влагалища

1.3 Особенности взаимодействия грибов рода Candida с эпителиоцитами слизистой влагалища

Глава 2. Материалы и методы исследования

2.1 Общая характеристика обследованных

2.2 Получение исследуемого материала

2.2.1 Получение вагинальных эпителиоцитов

2.2.2 Получение буккальных эпителиоцитов

2.2.3 Получение суточной культуры С. albicans

2.2.4 Получение вагинальной жидкости

2.2.5 Получение секреторных продуктов нейтрофилов периферической венозной крови

2.2.6 Получение сыворотки крови

2.3 Определение персистентных характеристик С. albicans

2.3.1 Метод определения антилизоцимной активности С. albicans

2.3.2 Метод определения антилактоферриновой активности

С. albicans

2.3.3 Метод определения антикомплементарной активности

С. albicans

2.4 Оценка адгезии С. albicans на эпителиоцитах

2.4.1 Определение параметров адгезии С. albicans на поверхности вагинальных и буккальных эпителиоцитов

2.4.2 Оценка прочности адгезии

2.5 Оценка влияния различных факторов на адгезию С. albicans на вагинальном эпителии

2.5.1 Определение влияния вагинальной жидкости на адгезию

С. albicans на вагинальном эпителии

2.5.2 Определение влияния муцина на адгезию С. albicans на вагинальном эпителии

2.5.3 Определение влияния супернатантов неактивированных и активированных нейтрофилов на адгезию С. albicans на вагинальном эпителии

2.5.4 Изучение влияния сыворотки крови на адгезию С. albicans на вагинальном эпителии

2.5.5 Влияние метаболической активности вагинальных эпителиоцитов и С. albicans на адгезивную активность в системе «С. albicans — вагинальные эпителиоциты»

2.5.6 Влияние активности элементов цитоскелета на адгезию С. albicans

2.6 Определение жизнеспособности вагинальных эпителиоцитов и С. albicans

2.7 Методы статистической обработки материала

Глава 3. Изучение параметров адгезии С. albicans на клетках вагинального эпителия женщин репродуктивного возраста

3.1 Выбор штамма С. albicans для изучения адгезии

3.2 Оценка прочности адгезивных контактов между С. albicans и вагинальными эпителиоцитами

3.3 Сравнительная характеристика адгезии С. albicans на поверхности вагинальных и буккальных эпителиоцитов

Глава 4. Влияние метаболической активности и состояния цито скелета вагинальных эпителиоцитов и С. albicans на процесс адгезии

4.1 Энергозависимость адгезивной способности С. albicans к поверхности вагинальных эпителиоцитов

4.2 Зависимость адгезии С. albicans на поверхности вагинальных эпителиоцитов от синтеза белка в клетках

4.3 Зависимость адгезии С. albicans к вагинальным эпителиоцитам от состояния цитоскелета

Глава 5. Влияние гуморальных факторов сыворотки крови и вагинальной жидкости на адгезивную способность С. albicans к вагинальным эпителиоцитам

5.1 Влияние антител сыворотки крови на адгезивную способность

С. albicans к вагинальным эпителиоцитам

5.2 Влияние антител вагинальной жидкости на адгезивную способность С. albicans к вагинальным эпителиоцитам

5.3 Роль муцина в адгезии С. albicans на вагинальных эпителиоцитах

Глава 6. Влияние секреторных продуктов нейтрофилов на взаимодействие

С. albicans с вагинальными эпителиоцитами

Глава 7. Оценка адгезивных свойств и персистентных характеристик С. albicans, выделенных от больных вульвовагинальным кандидозом и практически здоровых женщин, на поверхности вагинального эпителия

7.1 Сравнение адгезивных свойств С. albicans, выделенных от больных вульвовагинальным кандидозом и практически здоровых женщин

7.2 Оценка персистентных характеристик С. albicans

Введение Диссертация по биологии, на тему "Влияние различных факторов на адгезивные свойства Candida albicans на поверх-ности вагинальных эпителиоцитов женщин репродуктивного возраста"

Актуальность исследования Большинство инфекций человека начинается с колонизации кожи и слизистых оболочек полостей, сообщающихся с внешней средой. Доля инфекционных заболеваний, заражение которыми происходит через слизистые оболочки, превалирует в сравнении с болезнями, при которых заражение возникает контактным путем через кожу (Ernst P.B.et al., 1999).

По данным ВОЗ, пятая часть населения Земли страдает различными грибковыми заболеваниями (Кисина В.И. и др., 2001). Кандидоз — самый распространенный из системных микозов человека, так как свыше 40% взрослых людей являются носителями Candida albicans (С. albicans), и любое серьезное нарушение местного или общего иммунитета может спровоцировать их активацию (Арзуманян В.Г., Семенов Б.Ф., 2001; Баруссе М.М. и др., 2004; Маянский А.Н., 2006).

В классификации микозов грибковые инфекции, возбудителями которых являются грибы рода Candida, стоят обособленно, так как способны вызывать широкий диапазон поражений: от довольно «безобидных» заболеваний кожи и слизистых оболочек до инвазивных процессов, которые могут поражать практически любой орган, нередко создавая при этом угрозу для жизни больных (Масюкова С.А. и др., 2004; Маянский А.Н., 2006).

Отмечаемый во всем мире рост заболеваемости кандидозами связан, прежде всего, с тем, что эта инфекция является оппортунистической, поэтому она носит преимущественно эндогенный характер (Самсыгина Г.А. и др., 1996; Прилепская В.Н. и др., 1997; Cannon R.D. et al., 1995). При кандидозе поражается организм человека, ослабленный воздействием различных неблагоприятных факторов: изменяющейся экологией окружающей среды, широким использованием химических средств в быту и на производстве, применением медикаментозных препаратов, особенно антибиотиков, кортикостероидов, цитостатиков, иммунодепрессантов и других (Тихомиров А.Л., Олейник Ч.Г., 2001; Кантон О.М. и др., 2007).

Среди оппортунистических инфекций кандидозные вульвовагиниты являются наиболее часто встречающимися заболеваниями во всем мире, занимая из всех инфекций влагалища второе место после бактериального вагиноза (Hiller S.L., Lau R.J., 1997), являясь одной из основных причин обращения женщин репродуктивного возраста за медицинской помощью (Прилепская В.Н., Байрамова Г.Р., 2004). Распространенность этой патологии неуклонно растет как в России, так и во всем мире (Родионов А.Н., 1998; Сергеев Ю.В. и др., 2003).

Особенностью данной инфекции является длительное течение, частое рецидивирование, возможность распространения на другие органы и системы с развитием генерализованных форм, высокая резистентность возбудителей к антимикотическим препаратам, трудность лечения беременных и новорожденных (Масюкова С.А. и др., 2004). Вот почему урогенитальный кандидоз является актуальной общеклинической проблемой и имеет социальное значение, так как снижает качество жизни женщины, вызывает аллергизацию, может привести к осложнениям беременности и патологии у новорожденных, способствует возникновению иммунодефицитных состояний, развитию неопластических процессов (Анкирская А.С. и др., 1998; Самсыгина Г.А., Буслаева Г.Н., 2004).

Слизистая влагалища является экологической нишей, в которой постоянно вегетирует большое количество различных видов бактерий, вирусов, грибов как у практически здоровых людей, так и у больных. В структуре инфекционной патологии нижнего отдела гениталий кандиды составляют 40-50% (Прилепская В.Н. и др., 1997; Прилепская В.Н., Байрамова Г.Р., 1998; Мавров И.И., 2002). С. albicans считается основным возбудителем урогенитального кандидоза. На ее долю по разным данным приходится от 60 до 90% поражений (Прилепская В.Н. и др., 1997; Мавров И.И., 2002; Тютюнник В.Л., 2003; Кунгуров Н.В. и др., 2005; Пестрикова

Т.Ю. и др., 2005; Подзолкова Н.М. и др., 2005; Байрамова Г.Р. и др., 2007; Герасимова Н.М. и др., 2007; Sobel J.D. 1998).

В последние годы большой интерес исследователей вызывает изучение взаимоотношений между кандидами и эпителиоцитами, поскольку полагают, что кандидоз является результатом нарушения баланса между механизмами клиренса в системе мукозального эпителия и условиями, обеспечивающими активное размножение и персистенцию грибов на слизистых оболочках (Сергеев А.Ю., Сергеев Ю.В., 2001).

Микроорганизмы, попавшие на слизистую оболочку, должны на ней закрепиться (адгезироваться), преодолев ряд защитных приспособлений хозяина. Адгезия С. albicans на вагинальных эпителиоцитах является начальным и критическим по своему значению этапом колонизации слизистых оболочек, определяющим возможность дальнейшего развития микотического процесса. Этот вид грибов обладает максимально выраженными адгезивными свойствами (Прилепская В.Н., Байрамова Г.Р., 2004). На реализацию адгезивного потенциала в системе «кандиды — эпителиоциты» могут оказывать влияние многие факторы как со стороны кандид, так и со стороны организма хозяина, которые изучены недостаточно и требуют уточнения.

Выход кандид за пределы очага первичной колонизации сопровождается выраженным воспалительным процессом. Одним из главных эффекторов воспалительной реакции, обеспечивающих защиту против кандидозной инвазии, служат нейтрофилы. В последние годы показано, что нейтрофилы, мигрируя на поверхность слизистых оболочек, погибают (Долгушин И.И., Бухарин О.В., 2001), возможно выделяя наружу антимикробные продукты своих лизосом, которые, обладая бактерицидностью, влияют на микрофлору, заселяющую слизистые оболочки (Андреева Ю.С., 2005). Установлено, что в вагинальном содержимом здоровых женщин содержится значительное количество нейтрофилов (Телешева Л.Ф., 2000), возможно участвующих в регуляции микробиоцепоза влагалища. Участие нейтрофильных продуктов во взаимоотношениях кандид с вагинальными эпителиоцитами остается неизвестным.

Несмотря на многочисленные исследования роли местного иммунитета в антикандидозной защите, недостаточно изучены механизмы действия клеточных и гуморальных компонентов мукозального иммунитета на адгезию кандид. Кроме того, в литературе существуют противоречивые данные о роли нормальной микрофлоры в реализации адгезивного потенциала в системе «С. albicans — вагинальные эпителиоциты».

В связи с вышеизложенным было решено изучить влияние различных факторов на адгезивные свойства С. albicans на поверхности вагинальных эпителиоцитов женщин репродуктивного возраста, уточнить роль секреторных продуктов нейтрофилов в регуляции микробиоценоза влагалища здоровых женщин, исследовать персистентный потенциал различных штаммов С. albicans и влияние его на адгезию.

Мы полагаем, что исследования по данной проблеме позволят уточнить особенности развития микотического процесса на начальном этапе колонизации слизистой оболочки влагалища С. albicans и в дальнейшем разработать мероприятия, направленные на профилактику и лечение данной патологии.

Цель исследования

Целью настоящего исследования явилось изучение особенностей адгезии Candida albicans на поверхности вагинальных эпителиоцитов женщин репродуктивного возраста и факторов, влияющих на адгезивные характеристики С. albicans.

Задачи исследования

1. Изучить адгезивные характеристики С. albicans на поверхности вагинальных эпителиоцитов в сравнении с буккальными и прочность адгезии С. albicans на поверхности клеток вагинального эпителия практически здоровых женщин репродуктивного возраста.

2. Изучить роль гликолиза, синтеза белка и изменений цитоскелета вагинальных эпителиоцитов и С. albicans в процессе адгезии.

3. Определить значение гуморальных факторов сыворотки крови и вагинальной жидкости практически здоровых женщин в адгезии С. albicans на поверхности вагинальных эпителиоцитов.

4. Изучить влияние секреторных продуктов нейтрофилов на показатели адгезии С. albicans на поверхности вагинальных эпителиоцитов.

5. Оценить взаимосвязь между наличием факторов персистенции у штаммов С. albicans и их адгезивными свойствами.

Научная новизна

Установлено, что вагинальные эпителиоциты играют активную роль во взаимоотношениях с кандидами. Адгезия С. albicans зависит от процессов гликолиза в эпителиальных и грибковых клетках. Впервые изучено влияние секреторных продуктов нейтрофилов на процесс адгезии С. albicans на поверхности вагинального эпителия и установлено, что при предварительной обработке кандид супернатантами нейтрофилов, активированных лактобактериями, адгезия снижается. Впервые проведена сравнительная оценка адгезивных показателей штаммов С. albicans, имеющих различные персистентные характеристики, выделенных из влагалища женщин, больных вульвовагинальным кандидозом, и носителей. Впервые обнаружено, что влагалищная жидкость и её компоненты, в частности муцин, препятствуют адгезии грибов на поверхности вагинальных эпителиоцитов.

Теоретическая и практическая значимость исследования

Теоретическая значимость результатов исследования состоит в расширении знаний о характере адгезии С. albicans на поверхности вагинального эпителия практически здоровых женщин репродуктивного возраста, что позволяет уточнить некоторые вопросы патогенеза микотического процесса на начальном этапе колонизации грибами слизистой оболочки влагалища. Информация о влиянии факторов содержимого влагалища на адгезивные реакции С. albicans с вагинальными эпителиоцитами позволяет дополнить сведения о механизмах их взаимоотношений.

Полученные данные позволяют расширить представление о роли нейтрофилов в защите слизистых оболочек. Определены факторы, способные влиять на адгезию С. albicans на поверхности вагинальных эпителиоцитов.

С помощью освоенного метода тестирования адгезии грибов можно выявлять женщин, слизистые оболочки которых обладают высокой способностью к адгезии клеток грибов, то есть группы риска поражения кандидоинфекцией. Кроме того, определение адгезивной способности, как одного из факторов, характеризующих патогенность грибов рода Candida, позволяет выявлять наиболее вирулентные штаммы этих микроорганизмов.

Положения, выносимые на защиту

1. На адгезию в системе «С. albicans - эпителиоцит» влияет вид эпителия (буккальный, вагинальный), соотношение клеток грибов и эпителия. Адгезивные характеристики С. albicans in vitro выше к буккальному эпителию, чем к вагинальному, что подтверждает зависимость адгезии от органной принадлежности эпителиоцитов. При увеличении соотношения кандиды/эпителиоциты происходит возрастание показателей адгезии. Штаммы С. albicans, выделенные от больных кандидозным вульвовагинитом женщин, обладают повышенной адгезивной способностью. Высокий процент прочности адгезивных контактов между С. albicans и вагинальными эпителиоцитами (75,77%) обеспечивает устойчивую колонизацию влагалища грибами.

2. Компоненты сыворотки крови и вагинальной жидкости, секреторные продукты нейтрофилов практически здоровых женщин, муцин и блокада гликолиза кандид препятствуют адгезии С. albicans на поверхности вагинального эпителия.

3. У штаммов С. albicans, проявляющих антикомплементарную или антилактоферриновую активность, адгезивные характеристики выше по сравнению со штаммами С. albicans, не обладающими данными видами активности. Более высокие значения антилактоферриновой активности регистрируются у штаммов С. albicans, выделенных из влагалища больных вульвовагинальным кандидозом женщин, по сравнению со штаммами, полученными от носителей.

Апробация работы

Основные положения диссертации доложены, обсуждены и опубликованы на IV и V итоговой научно-практической конференции молодых ученых ЧелГМА (Челябинск, 2006, 2007), V Всероссийском конгрессе по медицинской микологии (Москва, 2007), Всероссийском научном Форуме имени академика В.И. Иоффе «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге: Молекулярные основы иммунорегуляции, иммунодиагностики и иммунотерапии» (Санкт-Петербург, 2007), научно-практической конференции по медицинской микологии «X Кашкинские чтения» (Санкт-Петербург, 2007), на научной сессии, посвященной 10-летию ЮжноУральского научного центра РАМН «Медицинская академическая наука — здоровью населения Урала» (Челябинск, 2008). Работа была поддержана грантом Правительства Челябинской области в 2006 г. Результаты исследования используются в процессе преподавания на кафедре микробиологии, вирусологии, иммунологии, а также в практической работе лаборатории противоинфекционного иммунитета НИИ иммунологии ГОУ ВПО Челябинской государственной медицинской академии.

Апробация диссертации была проведена на совместном заседании НИИ иммунологии ЧелГМА, кафедры микробиологии, вирусологии, иммунологии ЧелГМА, самостоятельного курса клинической лабораторной диагностики ЧелГМА, ЦНИЛ ЧелГМА (2008).

Публикации По теме диссертации опубликовано 14 печатных работ.

Структура и объём диссертации

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Свиридов, Максим Александрович

113 Выводы

1. Адгезия С. albicans на поверхности эпителиоцитов зависит от вида эпителия (буккальный, вагинальный), соотношения клеток грибов и эпителия, происхождения штамма (больные, носители). Адгезия кандид in vitro выше к буккальному эпителию, чем к вагинальному. При увеличении соотношения кандиды/эпителиоциты происходит возрастание показателей адгезивной способности грибов. Штаммы С. albicans, выделенные от больных кандидозным вульвовагинитом женщин, обладают повышенной адгезией. Прочность адгезивных контактов между С. albicans и вагинальными эпителиоцитами составила 75,77%.

2. Подавление гликолиза в клетках вагинального эпителия фторидом натрия приводит к повышению адгезии кандид, а подавление гликолиза С. albicans вызывает снижение их адгезивных свойств на поверхности вагинального эпителия.

3. Сыворотка крови и вагинальная жидкость практически здоровых женщин обладают антиадгезивным эффектом в системе «С. albicans -вагинальные эпителиоциты». Муцин уменьшает адгезию кандид на вагинальных эпителиоцитах.

4. Секреторные продукты нейтрофилов интактных и, активированных лактобактериями или S. aureus, снижают адгезию С. albicans на поверхности вагинального эпителия. Продукты нейтрофилов, стимулированных бифидобактериями, наоборот, повышают адгезию.

5. Адгезивные свойства у штаммов С. albicans, проявляющих антилактоферриновую и антикомплементарную активность, выше, а у штаммов С. albicans, обладающих антилизоцимной активностью, ниже. Повышенная антилактоферриновая активность регистрируется у штаммов С. albicans, выделенных из влагалища больных вульвовагинальным кандидозом женщин. Штаммы С. albicans женщин носителей способны инактивировать лизоцим.

114

Заключение

Условно-патогенные грибы рода Candida часто находятся на поверхности слизистых оболочек человека и при снижении иммунитета могут вызывать воспаление. В последние годы кандидоз стал наиболее распространенной грибковой инфекцией. На ее долю приходится подавляющее большинство случаев грибковых поражений слизистых оболочек (Хмельницкий O.K., 2000). С каждым годом увеличивается показатель распространенности бессимптомной грибковой колонизации с доминированием С. albicans (Баруссе М.М. и др., 2004). По данным литературы (Сергеев А.Ю. и др., 2001; Sobel J.D. et al., 1998), кандидозные вульвовагиниты встречаются в 20-30% из всех инфекций влагалища, достигая во время беременности 40-46% (Жуманова Е.Н., 2001). Частота кандидозного вульвовагинита за последние десять лет почти удвоилась и составляет 30-40% в структуре инфекционных поражений вульвы и влагалища (Тихомиров A.JL, Олейник Ч.Г., 2004). По данным J. Bingham (1999), 75% женщин репродуктивного возраста имеют по крайней мере один эпизод кандидозного вульвовагинита в течение жизни. Данная патология представляет собой значительную социальную проблему, так как снижает качество жизни женщины, может привести к осложнениям беременности, патологии у новорожденных.

Начальным и критическим по своему значению этапом колонизации слизистых оболочек грибами Candida, определяющим возможность дальнейшего развития микотического процесса, является адгезия (прикрепление) грибов к поверхности эпителиальных клеток (Быков, B.JL, 1985). Механизмы адгезии до сих пор полностью не раскрыты, так как адгезия - сложный процесс, который складывается из суммы неспецифических (врожденных) и специфических лиганд-рецепторных взаимодействий микробной клетки и клетки хозяина. Малопонятна сущность различий в адгезии отдельных штаммов С. albicans в пределах одного вида.

До конца не определена связь вирулентности грибов с их способностью к адгезии на поверхности эпителиоцитов. Недостаточно изучено влияние факторов, контролирующих состояние эпителиоцитов, особенно вагинальных, на способность грибов к адгезии. Несмотря на многочисленные исследования роли местного иммунитета в антикандидозной защите (Маянский А.Н., Галиуллин Д.Н., 1984; Маянский А.Н., Маянский Д.Н., 1989; Телешева Л.Ф., 2000; Долгушин И.И., Бухарин О.В., 2001; Телешева Л.Ф. и др., 2001; Андреева Ю.С., 2005; Овденко М.Б., 2006), механизмы действия клеточных и гуморальных компонентов мукозального иммунитета на адгезию кандид требуют уточнения. Неизвестным остается участие секреторных продуктов нейтрофилов во взаимоотношениях кандид с вагинальными эпителиоцитами.

Так как влияние многообразных факторов на адгезию грибов рода Candida к эпителиоцитам не поддается учету in vivo, адгезивную активность С. albicans в реакции с вагинальными эпителиоцитами человека мы изучали в опытах in vitro при совместной инкубации клеток гриба и эпителиоцитов.

С целью определения штамма с устойчивыми адгезивными характеристиками нами поставлена серия экспериментов с девятью свежевыделенными из влагалища практически здоровых женщин штаммами С. albicans (по 12 экспериментов с каждым штаммом) и проведено сравнение с адгезивными свойствами штамма 601. К вагинальному эпителию, взятому от одной женщины, добавляли взвесь клеток различных штаммов С. albicans в конечной концентрации 10 кл/мл, совместно инкубировали и изучали 3 показателя: активность адгезии (%), интенсивность адгезии (усл. ед.) и адгезивное число (усл. ед.).

Адгезивные характеристики штаммов в пределах одного вида кандид -С. albicans, изученных нами, отличались разнообразием, при этом средний уровень активности адгезии 9 штаммов С. albicans, выделенных из влагалища практически здоровых женщин, составил 58,93±1,62%, интенсивности адгезии - 133,93±6,54 усл. ед., адгезивного числа — 2,18±0,06 усл. ед. При сравнении адгезивных свойств свежевыделенных штаммов С. albicans от практически здоровых женщин с музейным штаммом 601 достоверных различий нами не установлено, поэтому мы сочли возможным в дальнейших исследованиях использовать штамм 601, так как он обладал достаточно высоким уровнем адгезивной активности и давал наиболее постоянные результаты показателей адгезии.

Поскольку от прочности адгезии грибов к поверхности слизистой влагалища может зависеть ее колонизация с возникновением носительства, а в дальнейшем и микотического процесса, мы изучили прочность адгезивных контактов между С. albicans и вагинальными эпителиоцитами, используя фиколл-урографиновый тест. Нами установлено, что показатель прочно связанных кандид составил 75,77%, что свидетельствует о высокой резистентности грибов к механизмам клиренса, а значит и возможности персистенции кандид на поверхности слизистой влагалища.

У человека типично прикрепление грибов Candida к слизистым оболочкам, выстланным неороговевающим или слабо ороговевающим эпителием (ротовая полость, пищевод, влагалище). Учитывая противоречивость данных литературы об адгезии кандид к эпителиоцитам слизистых оболочек разной локализации у одного индивидуума (Быков B.JL, Величко Е.В., 1990; King R.D. et al, 1980; Sobel J.D. et al., 1981; Macura A.B. et al., 1983), нами проведено изучение способности С. albicans адгезироваться к различным видам эпителия — вагинальному и буккальному, взятых от одного донора. Адгезивные свойства С. albicans к эпителиоцитам оценивали по активности адгезии интенсивности адгезии и адгезивному числу у 25 практически здоровых женщин.

Результаты исследований показали, что адгезивные характеристики С. albicans значительно выше к буккальному эпителию, чем к вагинальному, что возможно зависит от физиологических свойств эпителия.

Учитывая полученные нами различия в адгезивной активности С. albicans на поверхности вагинальных и буккальных эпителиоцитов, мы изучили влияние соотношения грибных и эпителиальных клеток.

Нами установлено, что при увеличении соотношения кандиды/эпителиоциты с 10:1 до 1000:1 происходит достоверное увеличение показателей адгезии С. albicans как на буккальном, так и на вагинальном эпителии, при этом активность адгезии приближалась к 100%. Однако при соотношении 1000:1 на процесс адгезии влияла коадгезия клеток гриба. Кроме того, увеличение соотношения между числом клеток гриба и вагинальными или буккальными эпителиоцитами с 10:1 до 1000:1 приводило к нарастанию адгезивного числа, то есть количества клеток С. albicans, адгезировавшихся к одному эпителиоциту, что, вероятно, свидетельствует об отсутствии насыщения участков связывания на эпителиоцитах. Следует также отметить, что при таком увеличении соотношения кандиды/эпителиоциты (с 10:1 до 1000:1) увеличивается количество эпителиоцитов с высоким содержанием клеток гриба, относительное число которых оценивается показателем интенсивности адгезии, что имеет особое патогенетическое значение. Эти эпителиоциты могут служить участками, где прикрепившиеся в большом количестве клетки С. albicans способны преодолеть барьерные свойства эпителия и перейти к инвазивному росту. Именно с наличием таких эпителиоцитов можно связать очаговый характер поражений слизистых, выявленный в гистологических исследованиях (Быков B.JI. и др., 1985; Быков B.JL, Величко Е.В., 1990; Николаев Ю.А., Проссер Дж.И., 2000).

Кандиды (в частности, С. albicans) являются частью нормальной микрофлоры слизистых оболочек. При развитии заболевания в патогенез кандидозной инфекции вовлекаются как факторы патогенности кандид, так и система защиты организма хозяина. Главным вопросом остается определение «пусковых» механизмов, приводящих к нарушению баланса в системе «кандиды - слизистые оболочки».

В серии опытов нами прослежено влияние метаболической активности и состояния цитоскелета кандид и вагинальных эпителиоцитов на адгезию С. albicans на поверхности вагинальных эпителиоцитов. Опыты проводили с блокадой их энергетического обмена путем подавления гликолиза (фторидом натрия), синтеза белка (циклогексимидом) и выключением реакций цитоскелета (опыты с колхицином).

Предварительное подавление гликолиза клеток вагинального эпителия фторидом натрия при последующей совместной инкубации с интактными С. albicans приводило к увеличению интенсивности адгезии на 30,2% и адгезивного числа на 24,7%), что свидетельствует о том, что процесс адгезии является энергетически зависимым. При предварительном воздействии фторидом натрия на С. albicans показатели адгезии снижались по сравнению с контролем: интенсивность адгезии - на 17,7%), адгезивное число - на 19,3%, что подтверждает важность сохранения энергетического метаболизма грибов в процессе прикрепления их к эпителию.

После блокады синтеза белка или активности микротрубочек как вагинального эпителия, так и С. albicans достоверных отличий в адгезивных свойствах грибов по сравнению с контролем не выявлено. Однако следует отметить, что после предварительной блокады синтеза белка или активности микротрубочек клеток вагинального эпителия имеет место тенденция к увеличению интенсивности адгезии и адгезивного числа, в то время как при предварительном воздействии циклогексимидом или колхицином на С. albicans наблюдается тенденция к снижению всех показателей адгезии грибов.

Известно, что самая эффективная защита организма обеспечивается средствами иммунной системы. Традиционно, иммунные механизмы классифицируются как врожденные (видовые, неспецифические) и приобретенные (индивидуальные, специфические), которые частично перекрывают друг друга. И врожденные, и приобретенные механизмы представлены молекулярными продуктами (гуморальный иммунитет) и клетками, действующими при непосредственном контакте с патогеном (клеточный иммунитет) (Теплова С.Н., Алексеев Д.А., 2002).

По данным литературы, существенным препятствием для микробной колонизации являются секреторные антитела класса IgA, специфические в отношении адгезинов. Соединяясь с адгезинами, они создают стерическое препятствие для осуществления связи адгезина с рецептором на эпителиальной клетке хозяина (Костюкова Н.Н., 1989). Значительная часть антител поступает из кровотока на поверхность слизистой влагалища. Другим источником антител влагалищной жидкости являются секретирующие иммунокомпетентные клетки влагалища (Беляков И.М., 1997; Телешева Л.Ф., 1998; Долгушина В.Ф. и др., 2000; Сергеев А.Ю., Сергеев Ю.В., 2004; Hocini Н. et al., 1987).

С целью уточнения действия гуморальных факторов мукозального иммунитета на адгезию кандид нами проведены эксперименты, в которых изучено взаимодействие грибов и вагинальных эпителиоцитов с гуморальными факторами сыворотки крови, вагинальной жидкости и муцином.

При обработке кандид цельной сывороткой крови происходило ослабление адгезии С. albicans на вагинальных клетках (р < 0,05), причем снижались все адгезивные характеристики. Данное свойство сыворотки могло быть обусловлено различными факторами, в том числе антиадгезивной активностью могли обладать антитела, содержащиеся в сыворотке крови. Для определения вклада антител в общий антиадгезивный эффект сыворотку крови истощали микробной взвесью С. albicans. После обработки кандид истощённой сывороткой крови получили такой же эффект, как и при воздействии на них цельной сывороткой.

Полученные нами данные свидетельствуют о том, что антитела сыворотки крови здоровых женщин, вероятно, являются только одним из факторов, влияющим на адгезию кандид. Возможно, антиадгезивная роль сыворотки крови принадлежит и другим гуморальным факторам, например, белкам системы комплемента, белкам острой фазы и т.д. Данное предположение подтверждают выявленные нами штаммы С. albicans, проявляющие антикомплементарные и антилактоферриновые свойства, которые обладали повышенными адгезивными характеристиками, что косвенно указывает на влияние белков системы комплемента и лактоферрина на адгезию С. albicans.

Учитывая двоякое происхождение противокандидозных антител в вагинальном содержимом - локальный синтез и поступление их из крови, мы изучили влияние компонентов содержимого влагалища на процесс адгезии С. albicans на поверхности вагинальных эпителиоцитов. Кандиды обрабатывали цельной вагинальной жидкостью и вагинальной жидкостью, истощённой микробной взвесью С. albicans, а так же проводили преинкубацию кандид с муцином. Во всех опытах при воздействии на С. albicans таких факторов, как муцин, цельная или истощённая вагинальная жидкость происходило однонаправленное достоверное снижение адгезивных показателей грибов. Полученные нами данные свидетельствуют о том, что содержимое влагалищной жидкости способно блокировать адгезивные молекулы кандид.

Учитывая представительство С. albicans в нормофлоре, антигены клеточной стенки С. albicans маннаны и маннанопротеины (Casanova М. et al., 1989), белковые антигены, представленные, прежде всего, протеинами теплового шока (Matthews R.C. et al., 1991), протеиназы и другие литические ферменты (De Bernardis F. et al., 1997) должны индуцировать образование антител у здоровых людей, которые могли бы принимать участие в антиадгезивных реакциях, в частности с вагинальными эпителиоцитами. По результатам наших опытов антитела, находящиеся в вагинальной жидкости, не вносят существенного вклада во взаимоотношения кандид и вагинальных эпителиоцитов. Очевидно, специфическое звено местного иммунитета менее активно, чем неспецифическое, поэтому не принимает участия в блокаде начальных фаз развития кандидозной инфекции.

Таким образом, на основании полученных нами данных можно утверждать, что вагинальная жидкость, обладая антиадгезивным эффектом в системе «С. albicans — вагинальные эпителиоциты», препятствует прикреплению и активному размножению С. albicans на слизистой влагалища здоровых женщин репродуктивного возраста, причем часть антиадгезивного потенциала вагинальной жидкости может принадлежать муцину. Известно, что он является гликопротеином клеточной стенки эпителиальных клеток и препятствует прикреплению микроорганизмов к слизистой оболочке (Лыкова С.Г. и др., 2005). Кроме того, по данным литературы, антиадгезивная функция биологических жидкостей связана с тем, что растворенные в них макромолекулы физиологически активных веществ взаимодействуют с лигандами микроорганизмов, меняют свойства поверхностных структур микробных клеток и создают стерические препятствия для связывания с рецепторами клеток-мишеней (Еропкина Е.М., Афиногенов Г.Е., 1994), поэтому, входя в состав вагинальной жидкости, антиадгезивным действием может обладать муцин.

Изучив действие гуморальных факторов мукозального иммунитета на адгезию кандид к вагинальному эпителию, наше внимание было обращено на клеточное звено иммунитета. Известно, что основную работу по избавлению макроорганизма от Candida spp. выполняют профессиональные фагоциты - макрофаги и нейтрофилы.

За последние годы получены новые данные о секреторной функции нейтрофилов, химическом строении их медиаторов (Третьякова И.Е., 2003; Андреева Ю.С., 2005). Гранулоциты содержат различные биологически активные продукты, которые образуются в процессе созревания клеток и присутствуют в их гранулах, а также синтезируются вновь после активации (Маянский А.Н., Галиуллин Д.Н., 1984; Маянский А.Н., Маянский Д.Н,

1989; Долгушин И.И., Бухарин О.В., 2001). Активированный нейтрофил решает эффекторные задачи одним из двух способов: либо с помощью фагоцитоза, либо путем секреции биологически активных веществ.

Несмотря на то, что изучению роли нейтрофилов в регуляции иммунного и других звеньев гомеостаза посвящено много работ (Долгушин И.И. и др., 1986, 1988, 1990, 1998; Маянский А.Н. и др., 1997; Бахов Н.И. и др., 1997; Долгушин И.И., Бухарин О.В., 2001; Smolen J.A., Boxer L.A., 1995), их участие в регуляции микробиоценозов слизистых оболочек урогенитального тракта женщины остается недостаточно изученным. В литературе отсутствуют данные о влиянии секреторных продуктов нейтрофилов на адгезивные характеристики кандид при взаимодействии с эпителиоцитами. Однако оно может иметь значение в развитии кандидозного процесса, в частности при вагинальном кандидозе.

Нами изучено влияние секреторных продуктов нейтрофилов на показатели адгезии С. albicans в реакциях с вагинальными эпителиальными клетками здоровых женщин репродуктивного возраста.

В результате проведенных исследований установлено, что секреторные продукты интактных нейтрофилов, а также нейтрофилов, активированных лактобактериями или S. aureus, при воздействии на С. albicans снижают адгезивную активность грибов и, тем самым, препятствуют колонизации грибами вагинального эпителия и, следовательно, развитию кандидозной инфекции, но не влияют на адгезивные свойства кандид при воздействии этими супернатантами на вагинальный эпителий. Супернатант нейтрофилов, активированных бифидобактериями, повышает адгезивные характеристики кандид. Секреторные продукты нейтрофилов, активированных Е. coli или латексом, при последующем воздействии на вагинальные эпителиоциты или кандиды не оказывали влияния на процесс адгезии (р > 0,05).

Следует заметить, что лактобактерии, как представители нормальной микрофлоры влагалища, играют важную роль в микробиоценозе женского репродуктивного тракта, прежде всего за счёт большого количества они могут препятствовать адгезии условно-патогенных и патогенных микроорганизмов у здоровых женщин. Кроме того, активируя находящиеся во влагалище нейтрофилы, они опосредованно оказывают антиадгезивное действие на грибы и другие микроорганизмы, что приводит к поддержанию колонизационной резистентности влагалища.

Стафилококки, являясь антагонистами кандид на уровне адгезии, активируя нейтрофилы, оказывают антиадгезивное действие, тем самым препятствуют развитию кандидоза при стафилококковых поражениях влагалища.

С целью установления зависимости адгезии кандид на поверхности вагинального эпителия от персистептных свойств грибов исследованы С. albicans, выделенные от практически здоровых женщин и больных вульвовагинальным кандидозом.

Штаммы С. albicans, полученные из влагалища больных вульвовагинальным кандидозом женщин, обладали повышенной адгезивной способностью по отношению к вагинальным эпителиоцитам по сравнению со штаммами, выделенными от носителей, что соответствует данным Е.В. Величко (1987); В.И. Кисиной (2003) и L.J. Douglas et al. (1981). Этот факт свидетельствует о том, что патогенность штаммов С. albicans, выделенных от больных, может быть связана и с их более высокой адгезивностью.

Общепризнано, что представители нормальной микрофлоры, обладая определенными механизмами прикрепления, способны вызывать заболевание при снижении иммунитета, а потому этих возбудителей относят к условно-патогенным микроорганизмам. Однако при развитии болезни шансы выжить у возбудителей резко падают. Поэтому многие из них выработали свойства, направленные не столько на поражение хозяина, сколько на взаимную их адаптацию, позволяющую возбудителю длительно персистировать в организме.

Кандиды используют разнообразные механизмы, позволяющие им адгезироваться и колонизировать ткани, которые до настоящего времени изучены недостаточно. В последние годы внимание исследователей привлекает оценка механизмов ингибирования факторов естественной защиты макроорганизма, определяемые как антилактоферриновая (АЛфА), антилизоцимная (АЛА), антикомплементарная (АКА) активность, которые сформировались у грибов и бактерий в процессе эволюции.

Изучив персистентные свойства у штаммов С. albicans, выделенных из влагалища женщин с клиническими признаками вагинального кандидоза, и носителей, мы обнаружили, что высокие значения АЛфА характерны для штаммов С. albicans, полученных из влагалища больных вульвовагинальным кандидозом, составив в среднем 16,72 ± 0,32 нг/мл, в то время как у здоровых АЛфА равнялась 1,32 ± 0,27 нг/мл. Согласно данным литературы, более высокие значения антилактоферринового признака имеют микроорганизмы, высеянные при хронических формах инфекционного процесса и от бактерионосителей (Валышева И.В., 2005; Валышев А.В., Валышева И.В., 2006).

Обращает на себя внимание тот факт, что АЛфА обладали все штаммы 1

С. albicans (100%), выделенные нами из влагалища больных вульвовагинальным кандидозом, в то время как у носителей это свойство было обнаружено лишь у 22,2 % штаммов С. albicans. Достоверное повышение АЛфА у штаммов, выделенных из влагалища больных вульвовагинальным кандидозом по сравнению со штаммами С. albicans, полученными из влагалища практически здоровых женщин, связано, по-видимому, с селекцией вариантов, способных адаптироваться к лактоферрину и обладающих максимальной выраженностью признака.

Высокая частота (76-78%) присутствия антилактоферриновой активности у С. albicans, изолированных из различных биотопов человека, обнаружена и другими авторами (Бухарин О.В. и др., 2005). Наиболее часто и с высокими значениями этот признак регистрировался у штаммов из репродуктивного тракта женщин, причем у бактерий вагинального и цервикального микробиоценозов, выделенных от больных, он превышал таковой у здоровых. Выявлена обратная зависимость между уровнем антилактоферриновой активности микрофлоры и содержанием лактоферрина при воспалительном процессе у женщин (Бухарин О.В. и др., 2005). А.В. Валышев и соавторы (2003) обнаружили антилактоферриновую активность у 90% штаммов грибов рода Candida, высеянных из фекалий пациентов при обследовании их на дисбиоз кишечника.

Таким образом, штаммы С. albicans, выделенные нами из влагалища больных вульвовагинальным кандидозом женщин, отличались способностью инактивировать лактоферрин и обладали большей агрессивностью по отношению к вагинальным эпителиоцитам. Антилактоферриновые свойства кандид, вероятно, участвуют в персистенции С. albicans - длительном переживании возбудителя в организме хозяина, способствуя возникновению и хронизации воспаления. Выраженность АЛфА у С. albicans зависит от наличия или отсутствия в организме человека инфекционного процесса.

У штаммов С. albicans, проявляющих антикомплементарные или антилактоферриновые свойства, активность адгезии была достоверно выше, интенсивность адгезии и адгезивное число имели тенденцию к повышению по сравнению со штаммами С. albicans, не обладавшими данными свойствами, что свидетельствует об антиадгезивных свойствах комплемента и лактоферрина.

Согласно литературным данным, лактоферрин обладает антиадгезивным действием за счет снижения концентрации свободного железа (Qiu J. et al., 1998) и эффекта пептидных фрагментов -лактоферрицинов (Czirok Е. et al., 1990).

А.В. Валышев с соавторами (2003) выявили способность к инактивации белков системы комплемента (антикомплементарную активность) у 78,3% штаммов С. albicans, выделенных из фекалий пациентов при обследовании на дисбиоз кишечника.

Одним из важнейших факторов естественной резистентности хозяина является лизоцим, который относится к классу ферментов-мурамидаз, субстратом действия которых являются полисахариды клеточной стенки бактерий. В процессе эволюции у бактерий и грибов сформировались различные механизмы ингибирования лизоцима. Лизоцимсвязывающая способность бактерий, которая сопровождается подавлением биологической функции лизоцима, представляет один из вариантов антилизоцимной активности (АЛА) микроорганизмов. Другим фактором, регулирующим уровень АЛА in vivo, могут быть физико-химические параметры среды обитания микроорганизма (температура, рН, окислительно-восстановительный потенциал, наличие факторов роста, биологически активных веществ и др.). Добавление липополисахарида к биологическим жидкостям, содержащим лизоцим (слюна, материнское молоко, сыворотка), приводило к подавлению ферментативной активности лизоцима (Бухарин О.В., Валышев А.В., 2006).

По результатам наших опытов адгезивные характеристики у штаммов кандид, проявляющих антилизоцимную активность, были достоверно ниже, чем у штаммов, не проявляющих таковую. Значит, штаммы кандид, не способные инактивировать лизоцим, адгезируются лучше, возможно потому, что лизоцим, воздействуя на клеточную стенку кандид, разрыхляет её, обнажая рецепторы для адгезии.

Активность адгезии и интенсивность адгезии штаммов С. albicans, выделенных из влагалища больных вульвовагинальным кандидозом женщин, были достоверно выше показателей адгезии штаммов С. albicans, выделенных у носителей. Значит штаммы, выделенные от носителей, способны инактивировать лизоцим - фактор естественной резистентности организма.

Учитывая вышеизложенное, адгезию микроорганизмов можно рассматривать как приспособительную реакцию, направленную на выживание в тканях макроорганизма.

Таким образом, проведенные нами исследования свидетельствуют о сложности отношений в системе «С. albicans - вагинальные эпителиоциты», которые определяют возможность дальнейшего развития микотического процесса. На начальном этапе колонизации слизистой оболочки влагалища грибами они зависят от адгезивных свойств возбудителя и влагалищного эпителия, причем последний принимает активное участие в этом процессе, а также от персистентных характеристик С. albicans. Вагинальная среда, обладая антиадгезивным эффектом, препятствует прикреплению и активному размножению С. albicans на слизистой влагалища здоровых женщин репродуктивного возраста. Кроме того, на взаимоотношения кандид с вагинальными эпителиоцитами влияют клеточные (нейтрофилы, лактобактерии) и гуморальные компоненты мукозального иммунитета (муцин, белки системы комплемента, лактоферрин), которые участвуют в обеспечении колонизационной резистентности влагалища.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата медицинских наук, Свиридов, Максим Александрович, Челябинск

1. Азов, Н.А. Механизмы опосредованной реактивности нейтрофила к пептидогликану Escherichia coli / Н.А. Азов, А.Н. Маянский // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1985. - №10. — С. 66-69.

2. Андреев, С.В. Некоторые особенности местного иммунитета влагалища у женщин с острым и хроническим кольпитом / С.В. Андреев, А.Ю. Волянский // Актуальные вопросы микробиологии, эпидемиологии и иммунологии инфекционных болезней. Харьков, 1993. - С. 33

3. Андреева, Ю.С. Роль нейтрофилов в регуляции микробиоценоза влагалища женщин: автореф. дис. . канд. мед. наук / Ю.С. Андреева. -Челябинск, 2005. 24 с.

4. Анкирская, А.С. Бактериальный вагиноз: особенности клинического течения, диагностика и лечение / А.С. Анкирская, В.Н. Прилепская, Г.Р. Байрамова и др. // Рус. мед. журн. 1998. - Т. 6, №5. - С. 276-282.

5. Анкирская, А.С. Микроэкология влагалища и профилактика акушерской патологии / А.С. Анкирская // Гинекология. — 1999. — Т. 1, №3. — С. 80-82.

6. Анкирская, А.С. Видовой состав и некоторые биологические свойства лактобацилл при различных состояниях микроэкологии влагалища / А.С. Анкирская, В.В. Муравьева // Акушерство и гинекология. 2000. - №3. -С. 26-28.

7. Антоньев, А.А. Кандидоз кожи и слизистых оболочек / А.А. Антоньев, JI.A. Бульвахтер, JI.K. Глазкова и др. -М.: Медицина, 1985. 160 с.

8. Арзуманян, В.Г. Чувствительность дрожжей рода Candida, выделенных от больных аллергическими заболеваниями, к противогрибковым препаратам / В.Г. Арзуманян, Б.Ф. Семенов // Бюл. эксперим. биологии и медицины.-2001.-Т. 131, №4.-С. 411-414.

9. Байрамова, Г.Р. Эффективность ливарола (кетоконазола) в терапии острого вульвовагинального кандидоза/ Г.Р. Байрамова, В.Н. Прилепская, А.С. Анкирская и др. // Акушерство и гинекология. 2007. - №3. - С. 6771.

10. Бахов Н.И. Концепция апоптоза / Н.И. Бахов, Ю.Ф. Майчук, А.В. Корнев // Иммунология. 1997. - №3. - С. 62-64.

11. Беляков, И.М. Иммунная система слизистых / И.М. Беляков // Иммунология. 1997. - №4. - С. 7-13.

12. Белянин, B.JI. Значение специфического и неспецифического звена иммунитета в развитии оппортунистических микозов / B.JI. Белянин, Р.А. Аравийский // Проблемы мед. микологии. 2001. - №2. - С. 33-38.

13. Боровиков, В.П. STATISTICA: искусство анализа данных на компьютере. Для профессионалов (+CD). / В.П. Боровиков. СПб.: Питер, 2003.-688 с.

14. Бурова, С.А. Клинические разновидности и лечение кандидоза / С.А. Бурова, Г.В. Воинова // Вестн. дерматологии. 1997. — № 4. - С. 24-28.

15. Бурова, С.А. Диагностика оппортунистической кандидозной инфекции / С.А. Бурова, И.В. Курбатова // Клин. лаб. диагностика. — 2000. №8. - С. 41-43.

16. Бухарин, О.В. Биомедицинские аспекты персистенции бактерий / О.В. Бухарин // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. -1994.-С. 4-13.-Прил.

17. Бухарин, О.В. Факторы персистенции микрофлоры при воспалительных заболеваниях внутренних женских половых органов / О.В. Бухарин, О.Д. Константинова, С.В. Черкасов и др. // Вестн. Рос. ассоц. акушеров-гинекологов. — 1998. — №3. — С. 62-65.

18. Бухарин, О.В. Персистенция патогенных бактерий / О.В. Бухарин. М.: Медицина, 1999. - 366 с.

19. Бухарин, О.В. Значение персистенции бактериальных патогенов для клинической практики / О.В. Бухарин // Рос. мед. вести. 2000. - №3 -С. 18-25.

20. Бухарин, О.В. Антилактоферриновая активность микроорганизмов. / О.В. Бухарин, O.JI. Карташова, С.Б. Киргизова и др. // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2005. - №6. - С. 710.

21. Бухарин, О.В. Микробные ингибиторы лизоцима / О.В. Бухарин, А.В. Валышев // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. -2006.-№4.-С. 8-13.

22. Быков, B.JI. Патогенез и морфогенез кандидоза / В.Л. Быков // Арх. патологии. 1984. - Т. 46, №12. - С. 75-82.

23. Быков, В.Л. Адгезивные взаимоотношения грибов рода Candida с эпителиальными клетками слизистых оболочек человека / В.Л. Быков, Н.Р. Корнев, Е.В. Величко // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1985. - №10. - С. 88-94.

24. Быков, В.Л. Адгезия грибов рода Candida к клеткам млекопитающих и неклеточным субстратам / В.Л. Быков, З.О. Караев, Е.В. Величко // АН СССР. Успехи соврем, биологии. 1985. - Т. 99, №3. - С. 420-434.

25. Быков, В.Л. Патогенез и морфологические особенности кандидозного кольпита / В.Л. Быков // Арх. патологии. 1986. - Т. 48, №5. - С. 59.

26. Быков, В.Л. Этиология, эпидемиология и патогенез кандидозного вульвовагинита / В.Л. Быков // Акушерство и гинекология 1986. - №9. -С. 5-7.

27. Быков, В.Л. Патогенез кандидоза слизистых оболочек (ультраструктурное исследование) / В.Л. Быков, С.Е. Хохлов // Вестн. дерматологии и венерологии. 1987. - №8. - С. 9-12.

28. Быков, В.Jl. Цитогистологические и ультраструктурные особенности ранних этапов взаимодействия грибов Candida с эпителиоцитами / В.Л. Быков, С.Е. Хохлов, Е.В. Величко // Бюл. эксперим. биологии и медицины. 1987. - Т. 104, №12. - С. 752-754.

29. Быков, В.Л. Изменения адгезии грибов Candida к эпителию в течение менструального цикла / В.Л. Быков, З.О. Караев, Е.В. Величко // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1988. - №8. - С. 1315.

30. Быков, В.Л. Цитоморфологический анализ адгезии грибов рода Candida к эпителиальным клеткам человека и животных / В.Л. Быков, Е.В. Величко.//Известия АН СССР. Сер. Биол. 1990. - №1. - С. 45-51.

31. Валышев, А.В. Анаэробная микрофлора женского репродуктивного тракта / А.В. Валышев, Н.Н. Елагина, О.В. Бухарин // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2001. - №3. - С. 7884.

32. Валышев, А.В Факторы персистенции дрожжеподобных грибов рода Candida / А.В. Валышев, Н.Б. Перунова, И.В. Валышева и др. // Успехи медицинской микологии: материалы первого всерос. конгр. по медицинской микологии. М., 2003. - Т. 1. - С. 53.

33. Валышев, А.В. Роль антилактоферриновой активности бактерий в их персистенции / А.В. Валышев, И.В. Валышева // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2006. - №4. - С. 25-28.

34. Валышева, И.В. Новый метод определения антилактоферриновой активности микроорганизмов / И.В. Валышева, А.В. Валышев, О.Л. Карташова и др. // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. — 2003. — №4. — С. 63-67.

35. Валышева, И.В. Антилактоферриновая активность микроорганизмов. Автореферат дис. . канд. биол. наук / И.В. Валышева. Оренбург, 2005. -24 с.

36. Васильев, Ю.М. Клетка как архитектурное чудо. Часть 1. Живые нити / Ю.М. Васильев. // Соросовский общеобразовательный журн. 1996. - №2. -С. 36-43.

37. Величко, Е.В. Условия и факторы адгезии грибов рода Candida к эпителиоцитам слизистых оболочек: автореф. дис. . канд. биол. наук / Е.В. Величко. Л., 1987. - 22 с.

38. Величко, Е.В. Адгезия грибов рода Candida к эпителию влагалища при некоторых физиологических изменениях уровней половых гормонов /Е.В. Величко, В.Л. Быков / Акушерство и гинекология. 1989. - №2. - С. 6768.

39. Герасимова, Н.М. Эффективность препарата гинофорт в терапии вульвовагинитов кандидозной этиологии / Н.М. Герасимова, О.А. Воронова, Н.Л. Жулимова // Акушерство и гинекология. 2007. - №3. - С. 71-72.

40. Гинекология от пубертата до постменопаузы / Под ред. Э.К. Айламазяна. М.: МЕДпресс-информ, - 2006. - 496 с.

41. Глазкова, Л.К. Кандидоз: метод, пособие / Л.К. Глазкова; УрГМА. -Екатеринбург, 1999. 56 с.

42. Глазкова, Л.К. Этиология, клиника и терапия кандидозного вульвовагинита / Л.К. Глазкова // Акушерство и гинекология. 2005. -№3. — С. 55-58.

43. Гланц, С. Медико-биологическая статистика / С. Гланц. М.: Практика, 1999.-450 с.

44. Гублер, Е.В. Применение непараметрических критериев статистики в медико-биологических исследованиях / Е.В. Гублер, А.А. Генкин. М.: Медицина, 1973.-141 с.

45. Дерябин, Д.Г. Спектр микрофлоры, изолируемой из различных отделов репродуктивного тракта женщин / Д.Г. Дерябин, А.А. Минаков, С.Д. Борисов // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. -2001.-№4.-С. 84-86.

46. Долгушин, И.И. Влияние активированных и интактных нейтрофилов на функции моноцитов периферической крови / И.И. Долгушин, А.В. Зурочка, С.И. Марачев // Иммунология. 1986. - №2. - С. 79-80.

47. Долгушин, И.И. Влияние нейтрофилокинов на иммунный ответ мышей / И.И. Долгушин, А.В. Зурочка, Л.Я. Эберт и др. // Бюл. эксперим. биологии и медицины. 1988. - Т. 11, №9. - С. 330-331.

48. Долгушин, И.И. Секреторные продукты нейтрофилов и иммунный ответ / И.И. Долгушин, А.В. Зурочка, А.В. Власов и др. // Иммунология. -1990.-№3.-С. 35-37.

49. Долгушин, И.И. Изучение кооперации нейтрофилов с клетками иммунной системы в норме и патологии: метод, рекомендации / И.И. Долгушин, А.В. Зурочка, Л.Я. Эберт и др. Челябинск, 1992. - 19 с.

50. Долгушин, И.И. Местная противоинфекционная защита репродуктивного тракта женщин различного возраста / И.И. Долгушин, Л.Ф. Телешева, В.Ф. Долгушина // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2000. - № 2. - С. 86-89.

51. Долгушин, И.И. Нейтрофилы и гомеостаз / И.И. Долгушин, О.В. Бухарин. Екатеринбург: УрОРАН, 2001. - 288 с.

52. Долгушина, В.Ф. Местный иммунитет половой системы у беременных с генитальной инфекцией / В.Ф. Долгушина, И.И. Долгушин, Л.Ф. Телешева // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. -2000,-№2.-С. 92-95.

53. Елинов, Н.П. Химическая микробиология / Н.П. Блинов. М.: Высшая школа, 1989.-С. 349-365.

54. Еропкина, Е.М. Антиадгезивная активность белковых комплексов биологических жидкостей и секретов / Е.М. Еропкина, Г.Е. Афиногенов // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1994. — №2. -С. 110-114.

55. Жуманова, Е.Н. Вульвовагинальная инфекция в акушерстве / Е.Н. Жуманова, О.Р. Асцатурова, А.П. Никонов // Мед. помощь. 2001 - №3, -С. 13-15.

56. Журавлева, Н.П. Морфовары популяции Candida albicans в глубинных условиях роста и взаимосвязь их с клетками макроорганизма / Н.П. Журавлева, З.О. Караев, Г.А. Бабенко и др. // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1993. - №6. - С. 8-10.

57. Звягинцев Д.Г. Взаимодействие микроорганизмов с твердыми поверхностями / Д.Г. Звягинцев. Изд-во МГУ, 1973. 176 с.

58. Зеленова, Е.Г. Адгезия различных видов микроорганизмов в экспериментальной системе «буккальный эпителиоцит бактерии» / Е.Г. Зеленова, Е.В. Салина, А.Н. Маянский и др. // Нижегородский мед. журн. - 1993. -№3.- С. 24-28.

59. Кантин, О.М. Принципы лечения вульвовагинального кандидоза во время беременности и профилактики инфицирования кандидами новорожденных / О.М. Кантин, И.М. Корсунская, Н.И. Сюч // Акушерство и гинекология. 2007. - №5. - С. 93-95.

60. Караев, 3.0. К вопросу о биологической активности Candida albicans. Микотическая инфекция и сенсибилизация / З.О. Караев, Т.Н. Лебедева // Сб. науч. тр. Ленинград, 1982. - С. 14-17.

61. Караев, З.О. Основные характеристики процесса адгезии грибов Candida к эпителиоцитам человека / З.О. Караев, Е.В. Величко, В.Л. Быков // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1986. - № 7.-С. 59-61.

62. Караев, З.О. Состояние иммунной системы у больных кандидозом / З.О. Караев, Н.В. Сардыко, Т.Н. Лебедева и др. // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1987. — №11. - С. 63-67.

63. Караев, З.О. Антигенные препараты для иммунодиагностики кандидоза / З.О. Караев, Г.А. Бабенко, С.М. Игнатьева и др. // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1990. — № 7. - С. 104-109.

64. Касабулатов, Н.М. Вагинальный кандидоз / Н.М. Касабулатов // Рус. мед. журн.-2003.-Т. 17, №17.-С. 985-989.

65. Кафарская, Л.И. Микробная экология влагалища / Л.И. Кафарская, О.В. Коршунова, Б.А. Ефимов и др. // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2002. - №6. - С. 91-99.

66. Кашкин, П.Н. Практическое руководство по медицинской микологии / П.Н. Кашкин, В.В. Лисин. Л.: Медицина, 1983.- 192 с.

67. Кира, Е.Ф. Бактериальный вагиноз (клиника, диагностика, лечение): автореф. дис. . д-ра мед. наук / Е.Ф. Кира. — СПб, 1995. 44 с.

68. Кира, Е.Ф. Бактериальный вагиноз / Е.Ф. Кира. СПб.: «Нева-Люкс», 2001.-363 с.

69. Кисина, В.И. Первичный и рецидивирующий кандидозный вульвовагинит: патогенез, терапия и профилактика. / В.И. Кисина. // Гинекология.-2003.-Т. 5, №5.-С. 185-187.

70. Климко Н.Н. Возбудители инвазивного кандидоза у больных в Санкт-Петербурге, 1998-2007 г.г. / Н.Н. Климко, Л.А. Пестова, Т.С. Богомолова и др. // Проблемы медицинской микологии 2007. - Т. 9, №2. - С. 64.

71. Колганова, Т.В. Влияние ферментов аспарагиназы и полифенолоксидазы на адгезивные свойства микроорганизмов / Т.В. Колганова, А.В. Ермолаев, Р.Дж. Дойл // Бюл. эксперим. биологии и медицины. 2002. - Т. 133, №1.-С. 71-74.

72. Корнев, Н.Р. Распределение эпителиоцитов по числу адгезированных на них клеток Candida albicans и оценка интенсивности адгезии в тесте in vitro / Н.Р. Корнев, Е.В. Величко // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1987. -№5. - С. 28-32.

73. Коршунов, В.М. Изучение бифидофлоры влагалища у женщин репродуктивного возраста / В.М. Коршунов, З.А. Гудиева, Б.А. Ефимов и др. // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1999. -№4. - С. 74-78.

74. Коршунов, В.М. Микроэкология влагалища. Коррекция микрофлоры при вагинальных дисбактериозах: учебное пособие / В.М. Коршунов, Н.Н. Володин, Б.А. Ефимов и др. М.: ВУНМЦ МЗ РФ, 1999. - 80 с.

75. Костюкова, Н.Н. Начальный этап инфекционного процесса — колонизация и пути её предотвращения / Н.Н. Костюкова // Журн.микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. — 1989. — №9. — С. 103-110.

76. Кравчук, JI.A. Лечение вагинитов у беременных один из принципов профилактики эндометритов после родов: автореф. дис. . канд. мед. наук / Л. А. Кравчук. - Иркутск, 2000. - 20 с.

77. Кунгуров, Н.В. Актуальные проблемы лечения урогенитального кандидоза / Н.В. Кунгуров, Н.М. Герасимова, И.Ф. Вишневская // Акушерство и гинекология. — 2005. — №4. — С. 50-53.

78. Курдина, М.И Видовая идентификация и чувствительность к антимикотикам возбудителей вульвовагинального кандидоза / М.И. Курдина, В.Е. Маликов, Н.Е. Жарикова и др. // Акушерство и гинекология. 2005. - №6. - С. 38-40.

79. Куценко, И.И. Иммунокоррегирующая терапия в комплексном лечении рецидивирующих вульвовагинальных кандидозов / И.И. Куценко, И.О. Боровиков, Е.И. Назаренко и др. // Рос. вестн. акушера-гинеколога. 2003. -№5.-С. 17-20.

80. Лебедева, Т.Н. К вопросу о специфическом гуморальном иммунитете у больных кандидозом / Т.Н. Лебедева // Вестн. дерматологии и венерологии. 1982. - №9. - С. 22-25.

81. Лесовой, B.C. Кандидоз ротовой полости (обзор) / B.C. Лесовой, А.В. Липницкий, О.М. Окчурова. //Проблемы медицинской микологии. 2003. -Т. 5. -№ 1.-С. 21-24.

82. Литяева, Л.А. Бактериоскопическое и бактериологическое исследование влагалищного содержимого беременных женщин / Л.А. Литяева // Лаб. дело. 1991. - №9. - С. 72-74.

83. Логутова, Л.С. Оценка эффективности залаина при лечении больных с острым кандидозным вульвовагинитом / Л.С. Логутова, Н.Д. Гаспарян Т.С. Будыкина // Рос. вестн. акушера-гинеколога. 2007. - №2. - С. 32-34.

84. Лыкова С.Г. Поверхностный кандидоз в практике в практике врача-дермато-венеролога / С.Г. Лыкова О.Б. Немчанинова, О.С. Петренко и др. // Вестн. дерматологии и венерологии. 2005. - №6. - С. 26-32.

85. Лыкова, С.Г. Поверхностный кандидоз в практике в практике врача-дермато-венеролога Часть II. / С.Г. Лыкова, О.Б. Немчанинова, О.С. Петренко и др. // Вестн. дерматологии и венерологии. 2006. - №1. - С. 11-18.

86. Мавров, И.И. Половые болезни: Симптоматика и диагностика; клиническая картина; импотенция и бесплодие; Профилактика и лечение. / И.И. Мавров. М.: ACT - Пресс Книга, 2002. - 752 с.

87. Марцишевская, Р.Л. Исследование вагинального отделяемого / Р.Л. Марцишевская, И.П. Шабалова // Лаб. дело. 1990. - №6. - С. 38-43.

88. Масюкова, С.А. Глубокий кандидоз актуальность и перспективы проблемы / С.А. Масюкова, М.В. Устинов, И.В. Ильина // Рус. мед. журн. -2004.-Т. 12, №4.-С. 189-195.

89. Махрова Т.В. Факторы и условия, влияющие на адгезивную активность Candida albicans в системах с буккальными эпителиоцитами: автореф. дис. . канд. мед. наук / Т.В. Махрова. Челябинск, 2004. - 24 с.

90. Маянский, А.Н. Опсоническая функция альтернативного пути активации комплемента: способ определения и клиническая характеристика / А.Н. Маянский, М.С. Куравская, О.И. Пикуза и др. // Иммунология. 1982. - №3. - С. 84-87.

91. Маянский, А.Н. Реактивность нейтрофила / А.Н. Маянский, А.Н. Галиуллин. Казань: Изд-во Казан, ун-та, 1984.-158с.

92. Маянский, А.Н Очерки о нейтрофиле и макрофаге / А.Н. Маянский, Д.Н. Маянский. Новосибирск: Наука, 1989. - 254 с.

93. Маянский, А.Н. Апоптоз: начало будущего / А.Н. Маянский, Н.А. Маянский, М.А. Абаджиди, М.И. Заславская // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1997. - №2. - С. 88-94.

94. Маянский, А.Н. Адгезивные реакции в системе «буккальные эпителиоциты Candida albicans» у детей с бронхиальной астмой и гастродуоденитом / А.Н. Маянский, Е.В. Салина, М.А. Абаджиди и др. // Педиатрия. - 2002. - №3. - С. 41-43.

95. Маянский, А.Н. Способ оценки прочности адгезии Candida albicans на эпителиоцитах / А.Н. Маянский, Е.В. Салина., М.И. Заславская // Клин, лаб. диагностика. 2003. - №2. - С. 53-54.

96. Маянский, А.Н. Патогенетическая микробиология / А.Н. Маянский. -Н. Новгород : Издательство НГМА, 2006. 520 с.

97. Мирзабалаева, А.К. Проблема кандидоза гениталий в практике акушера-гинеколога / А.К. Мирзабалаева // Вопросы гинекологии, акушерства и перинатологии. 2005. - Т. 4, №5-6. - С. 139-144.

98. Мирзабалаева, А.К. Клинико-лабораторные особенности хронического рецидивирующего кандидоза гениталий у женщин, обусловленного не albicans Candida spp. / А.К. Мирзабалаева, Ю.В. Долго-Сабурова // Акушерство и гинекология. — 2007. №5. - С. 89-93.

99. Мисетов, И.А. Кинетический метод определения антикомплементарной активности бактерий // Сб. науч. работ 1 областной конференции молодых учёных. Оренбург, 1993. С. 73-74.

100. Муравьева, В.В. Особенности микроэкологии влагалища при бактериальном вагинозе и вагинальном кандидозе / В.В. Муравьева, А.С. Анкирская // Акушерство и гинекология. 1996. — №6. - С. 27-30.

101. Мюллер, Э. Микология / Э. Мюллер, М. Лёффлер. М.: Мир, 1995. -343 с.

102. Назарова, Е.К. Микробиоценоз влагалища и его нарушения. Этиология, патогенез, клиника, лабораторная диагностика / Е.К. Назарова, Е.И. Гиммельфарб, Л.Г. Созаева // Антибиотики и химиотерапия 2002. - Т. 47, №4. - С. 34-42.

103. Никитин, М.В. Изучение штаммов Candida albicans, выделенных от женщин с различными формами вагинального кандидоза / М.В. Никитин, Л.В. Артемова, Э.Г. Кравцов и др. // Бюл. эксперим. биологии и медицины. -2003.-Т. 135, №3.-С. 319-324.

104. Николаев, Ю.А. Внеклеточные факторы, влияющие на адгезию Pseudomonas fluorescens на стекле / Ю.А. Николаев, Дж.И. Проссер // Микробиология. 2000. - Т. 69, №2. - С. 231-236.

105. Николаев, Ю.А. Свойства адгезина и антиадгезина Pseudomonas fluorescens / Ю.А. Николаев, Дж.И. Проссер // Микробиология. — 2000. -Т. 69, №2. С. 237-242.

106. Овденко, М.Б. Клинико-иммунологическая оценка эффективности применения бестима в комплексной терапии хронического рецидивирующего кандидозного вульвовагинита у женщин: автореф. дис. . канд. мед. наук / М.Б. Овденко. Челябинск. - 2006. - 24 с.

107. Осипов, В.А. Мониторинг резистентности Candida spp. / В.А. Осипов, И.А. Искров, И.Д. Шляга // Проблемы медицинской микологии. 2007. -Т.9, №2. — С. 85.

108. Пестрикова, Т.Ю. Рецидивирующий вагинальный кандидоз / Т.Ю. Пестрикова, Н.И. Безрукова, Е.Ф. Юрасова // Акушерство и гинекология. 2005.-№3.-С. 41-42.

109. Подзолкова, Н.М. Применение микосиста для лечения кандидозного вульвовагинита при подготовке к медицинскому аборту / Н.М. Подзолкова, Т.И. Никитина, H.JI. Шамугия // Рос. вестн. акушера-гинеколога. 2005. - №3. - С. 34-36.

110. Пол, У. Иммунология / У. Пол. // М.: Мир, 1989. Т.З. 360с.

111. Прилепская, В.Н. Современные представления о бактериальном вагинозе / В.Н. Прилепская, Г.Р. Байрамова // Вестн. Рос. ассоц. акушеров-гинекологов. 1996. - №3. - С. 40-42.

112. Прилепская, В.Н. Генитальный кандидоз. Современные подходы к лечению / В.Н. Прилепская // Акушерство и гинекология. 1996. - №6. -С. 28-29.

113. Прилепская, В.Н. Вагинальный кандидоз / В.Н. Прилепская А.С. Анкирская, Г.Р. Байрамова и др. М.: 1997. - 40 с.

114. Прилепская В.Н. Современные представления о вагинальном кандидозе / Г.Р. Байрамова, В.Н. Прилепская. // Рус. мед. журн. — 1998. -Т. 6, №5.-С. 301-308.

115. Прилепская, В.Н. Вульвовагинальный кандидоз в практике акушера-гинеколога / В.Н. Прилепская, Г.Р. Байрамова // Гинекология. 2004. - Т. 6, №2.-С. 59-60.

116. Прилепская, В.Н. Хронический рецидивирующий вульвовагинальный кандидоз / В.Н. Прилепская, Г.Р. Байрамова // Consilium medicum. 2004. -Т. 6, №7.-С. 479-481.

117. Рахматуллина, М.Р. Современные представления об этиологии и патогенезе кандидозного вульвовагинита / М.Р. Рахматуллина, A.JI. Просовецкая // Вестн. дерматологии и венерологии 2007. - №5. - С. 2932.

118. Реброва, Р.Н. Грибы рода Candida при бактериальных инфекциях / Р.Н. Реброва. М.: Медицина, 1979. - 256 с.

119. Реброва, Р.Н. О лизоцимной активности грибов рода Candida / Р.Н. Реброва, В.И. Горохов // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1983. - №3. — С. 45-46.

120. Роджерс, А.К. Рецидивирующий вульвовагинальный кандидоз и причины его возникновения. / А.К. Роджерс, А.Дж. Бердалл // Инфекции передаваемые половым путем 2000. - №3. - С. 22-27.

121. Родионов, А.Н. Грибковые заболевания кожи / А.Н. Родионов. — СПб.: Питер, 1998. -288 с.

122. Рязанцев, С.В. Роль слизистой оболочки в защите JIOP-органов от потенциально патогенных для организма антигенных факторов / С.В. Рязанцев, Н.М. Хмельницкая, Е.В. Тырнова // Вестн. оториноларингологии. 2000. - №3. - С.60-64.

123. Самсыгина, Г. А. Кандидоз новорожденных и детей раннего возраста. Дифлюкан в лечении и профилактике кандидоза / Г.А. Самсыгина, Г.Н. Буслаева, М.А. Корнюшин М.: 1996. - 40 с.

124. Самсыгина, Г.А. Кандидоз новорожденных и детей первого года жизни: пособие для практических врачей / Г.А. Самсыгина, Г.Н. Буслаева. М. : Печатный город, 2004. - 64 с.

125. Саттон, Д. Определитель патогенных и условно патогенных грибов: пер. с англ. / Д. Саттон, А. Фотергилл, М. Ринальди. // М.: Мир, 2001. -486 с.

126. Сергеев, А. Ю. Кандидоз / А.Ю. Сергеев, Ю.В. Сергеев // М.: Триада -X, 2001.-472 с.

127. Сергеев, Ю.В. Фармакотерапия микозов / Ю.В. Сергеев, Б.И. Шпигель, А.Ю. Сергеев // М.: Медицина для всех, 2003. 200 с.

128. Сергеев, А.Ю. Факторы резистентности и иммунитет при грибковых инфекциях кожи и слизистых оболочек / А.Ю. Сергеев, Ю.В. Сергеев // Иммунопатология, аллергология, инфектология. 2004. — №1. - С. 6-14.

129. Серова, О.Ф. Острый вульвовагинальный кандидоз. Современный взгляд на проблему, инновации в лечении / О.Ф. Серова, В.А. Туманова,

130. Н.В. Зароченцева и др. // Росс, вестн. акушера-гинеколога. — 2007. №1. -С. 60-62.

131. Симчера, И.А. Состояние микробиоценоза влагалища при беременности и в послеродовом периоде: автореф. дис. . канд. мед. наук / И.А. Симчера. СПб., 1999. - 24 с.

132. Телешева, Л.Ф. Механизмы противоинфекционной защиты репродуктивного тракта женщин / Л.Ф. Телешева, В.Ф. Долгушина, И.И. Долгушин // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. -1998.-№4.-С. 85-90.

133. Телешева, Л.Ф. Иммунологические факторы секретов репродуктивного тракта женщин: автореф. дис. . д-ра мед. наук / Л.Ф. Телешева. -Челябинск, 2000.-41 с.

134. Теплова, С.Н. Секреторный иммунитет / С.Н. Теплова, Д.А. Алексеев. -Челябинск, 2002. 200 с.

135. Теплякова, М.В. Секреторный иммунитет влагалища при остром неспецифическом сальпингите / М.В. Теплякова, А.А. Радионченко, И.А. Рыжова // Акушерство и гинекология. 1991. - №6. - С. 56-57.

136. Тихомиров, А.Л. Современное лечение кандидозного вульвовагинита / А.Л. Тихомиров, Ч.Г. Олейник // Рус. мед. журн. 2001. - Т. 9, №6. - С. 227-229.

137. Тихомиров, А.Л. Кандидозный вульвовагинит: от этиологии до временных принципов терапии: методическое пособие для врачей акушеров-гинекологов / А.Л. Тихомиров, Ч.Г. Олейник. М., 2004. - 20 с.

138. Третьякова, И.Е. Роль секреторных продуктов нейтрофилов в регуляции локальных реакций воспаления и иммунитета: дис. . д-ра мед. наук / И.Е. Третьякова. Челябинск, 2003. — С. 320.

139. Торчинов, A.M. Современные аспекты лечения вульвовагинального кандидоза / A.M. Торчинов, М.В. Мазуркевич // Гинекология. — 2007. Т. 9, №2.-С. 54-58.

140. Тютюнник В.Л. Вагинальный кандидоз и беременность: этиология, патогенез, клиника, диагностика, лечение / В.Л. Тютюнник // Гинекология.-2001.-Т. 3,№3.-С. 89-91.

141. Тютюнник, В.Л. Вагинальный кандидоз и беременность / В.Л. Тютюнник, Н.В. Орджоникидзе // Рус. мед. журн. 2001. - Т. 9, №19. - С. 833-835.

142. Тютюнник, В.Л. Вагинальный кандидоз у беременных: этиология, патогенез, клиника, диагностика, лечение / В.Л. Тютюнник // Фарматека. — 2003.-№11.-С. 62-65.

143. Уварова, Е.В. Влагалище как микроэкосистема в норме и при воспалительных процессах гениталий различной этиологии (обзор литературы) / Е.В. Уварова, Ф.Ш. Султанова // Гинекология. 2002. - Т. 4, №4.-С. 189-195.

144. Удовицкая, Е.В. Эндокринологические аспекты стоматологии / Е.В. Удовицкая. -М.: Медицина, 1975. 191 с.

145. Хамаганова, И.В. Опыт применения сертаконазола при вульвовагинальном кандидозе / И.В. Хамаганова, В.В. Кальменсон // Вестн. дерматологии и венерологии. 2007. -№3. - С. 57-61.

146. Хмельницкий, O.K. О кандидозе слизистых оболочек / O.K. Хмельницкий // Арх. патологии. 2000. — №6. — С. 3-10.

147. Хэм, А. Гистология : в 5т. / А. Хэм, Д. Кормак // М.: Мир, 1983. Т. 4. -245 с.

148. Черкасов, С.В. Бактериальные механизмы колонизационной резистентности репродуктивного тракта женщин / С.В. Черкасов // Журн.микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2006. — №4. — С. 100-105.

149. Aroucheva, A. Defense factors of vaginal lactobacilli / A. Aroucheva, D. Gariti., M. Simon et al. // Am. J. Obstet. Gynecol. 2001. - Vol. 185, №2. - P. 375-379.

150. Bailey, A. Adherence of Candida albicans to human buccal epithelial cells: host-induced protein synthesis and signaling events / A. Bailey, E. Wadsworth, R. Calderone // Infect. Immun. 1995. - Vol. 63, №2. - P. 569-572.

151. Barembaum, S. Effect of Chitosan and Sodium Alginate on the adherence of autochthonous C. albicans to oral epithelial cells (in vitro) / S. Barembaum, C. Virga, A. Bojanich, L. Cornejo et al. // Med Oral. 2003. - Vol. 8, №3. - P. 188-196.

152. Barns, S.M. Evolutionary relatinships among pathogenic Candida species and relative / S.M. Barns, D.J. Lane, M.L. Sogin et al. // J. Bacteriol. — 1991. — Vol. 173, №7 P. 2250-2255.

153. Beachey, E.H. Bacterial adherence: adhesin-receptor interactions mediating the attachment of bacteria to mucosal surface / E.H. Beachey // J. Infect. Dis. — 1981. Vol. 143, №3. - P. 325-345.

154. Bercovici, B. Vaginal and oral cytology of the menopause. A comparative study / B. Bercovici, S. Gron, S. Pisanty // Acta Cytol. 1985. - Vol. 29, №5. -P. 805-809.

155. Bingham, J. What to do with the patient with recurrent vulvovaginal candidiasis / J. Bingham // Sex Transm. Inf. 1999. - Vol. 75. - P. 225-227.

156. Bjercke, S. NLA-DR expressing Langergans-like cell in vaginal and cervical epithelium / S. Bjercke, M. Scott, L.R. Braathen et al. // Acta. Obstet. Gynecol. Scand. 1983. - Vol. 62, №6. - P. 585-589.

157. Braude, A.I. Infectious diseases and Medical Microbiology 2nd ed. / A.I. Braude, C.E. Davis, J. Fierer. Philadelphia: W.B. Saunders, 1986. - P. 571579.

158. Briese, V. Proteinnaehweis in Zervicovaginalspullflussigkeiten unter besonderer Berucksichtigung des sekretorischen immunoglobulin A / V. Briese, W. Straube, J. Brock et al. // Zbl. Gynecol. 1982. - Bd. 104, №17. - S. 10901099.

159. Brinkmann, V. Neutrophil extracelllular traps kill bacteria / V. Brinkmann, U. Rechard, C. Goosmann et al. // Sciense. 2004. - Vol. 303. - P. 1532-1535.

160. Calderone, R.A. Adherence and receptor relationship of Candida albicans / R.A. Calderone, P. Braun // Microbiol. Rev. 1991. - Vol. 55. - P. 1-20.

161. Calderone, R.A. Molecular interactions at the interface of Candida albicans and host cells / R.A. Calderone // Arch. Med. Res. 1993. - Vol. 24, №3. - P. 275-279.

162. Calderone, RA. Recognition between Candida albicans and host cells / R.A. Calderone // Trends Microbiology. 1993. - Vol. 1, №2. - P. 55-58.

163. Cannon, R.D. Oral Candida: clearance, colonization, or candidiasis? / R.D. Cannon, A.R. Holmes, A.B. Mason et al. // J. Dent. Res. 1995. - Vol. 74, №5.-P. 1152-1161.

164. Cannon, R.D. Oral colonization by Candida albicans / R.D. Cannon, W.L. Chaffin // Crit. Rev. Oral. Biol. 1999. - Vol. 10, №3. - P. 359-383.

165. Casanova, M. Identification of wall-specific antigens synthesized during germ tubeformation by Candida albicans / M. Casanova, M.L. Gil, L. Caldenoso et al. // Infect. Immun. 1989. - Vol. 57. - P. 262-271.

166. Catlin, B.W. Gardnerella vaginalis: characteristics, clinical consideration, and controversies / B.W. Catlin // Clin. Microbial. Rev. 1992. - Vol. 5, №3. -P. 213-237.

167. Centeno, A. Modulation of Candida albicans attachment to human epithelial cells by bacteria and carbohydrates / A. Centeno, C.P. Davis, M.S. Cohen et al. //Infect. Immun. 1983. - Vol. 39, №3. - P. 1354-1360.

168. Chaffin W.L. Cell wall and secreted proteins of Candida albicans: identification, function, and expression / W.L. Chaffm, J.L. Lopez-Ribot, M.

169. Casanova et al. // Microbiol. Mol. Biol. Rev. 1998. - Vol. 62, №1. - P. 130180.

170. Chan, R.C.Y. Competitive exclusion of uropathogens from human uroepithelial by Lactobacillus whole cells and wall fragments / R.C.Y. Chan, G. Reid, R.T. Irvin et al. // Infect. Immun. 1985. - Vol. 47. P. 84-89.

171. Chattaway, F.W. Cell wall composition of the mycelial and blastospore forms of Candida albicans / F.W. Chattaway, M.R. Holmes, A.J. Barlow // J. Gen. Microbiol. 1968. - Vol. 51, №3. - P. 367-376.

172. Chattaway, F.W. Changes in the cell surface of the dimorphic forms of Candida albicans by treatment with hydrolytic enzymes / F.W. Chattaway, S. Shenolikar, J.O Reilly et al. // J. Gen. Microbiol. 1978. - Vol. 96, №2 - P. 335-347.

173. Cole, G.T. The role of gastrointestinal tract in hematogenous candidiasis: from the laboratory to the bedside / G.T. Cole, A.A. Halawa, E.J. Anaissie // Clin. Infect. Dis. 1996. - Vol. 22. - P. 73-88.

174. Cox, F. Adherence of Candida albicans to buccal epithelial cells in children .and adults / F. Cox // J. Lab. Clin. Med. 1983. - Vol. 102. - P. 960-972.

175. Czirok, E. In vitro and in vivo (LD50) effects of human lactoferrin on bacteria / E. Czirok, H. Milch, K. Nemeth et al. // Acta. Microbiol. Hung. -1990.-Vol. 37, №1.-P. 55-71.

176. Douglas, L.J. Adherence of Candida albicans to human buccal epithelial cells after growth on different carbon sources / L.J. Douglas, J.G. Houston, J. McCourtie // FEMS Microbiol. Letters. 1981. - Vol. 12, №3. - P. 241-243.

177. Douglas, L.J. Effect of tunicamycin treatment on the adherence of Candida albicans to human buccal epithelial cells / L.J. Douglas, J. McCourtie // FEMS Microbiol. Letters. 1983. - Vol. 16, №2-3. - P. 199-202.

178. Ernst, P.B. Regulation of mucosaal immune response / P.B. Ernst F. Song, G.R. Klimpel et al., // Am. J. Trop. Med. Hyg. 1999. - Vol. 60, №4. - P. 2-9.

179. Evans, E.G.V. Relevance of Antigenicity of Candida Albicans Growth Phases to Diagnosis of Systemic Candidiasis / E.G.V. Evans, M.D. Richardson, F.C. Odds, et al. // Brit. Med. J. 1973. - Vol. 4. - P. 86-87.

180. Farmer, I. Expression of adhesion and activation molecules in human buccal spithelial cell lines and normal human buccal epithelium in situ / I. Farmer, J. Freysdottir, A.M. Dalghous, F. Fortune // J. Oral. Pathol. Med. 2001. - Vol. 30.-P. 113-120.

181. Fidel, P.L. Jr. Vaginal candidiasis: review and role of local mucosal immunity / P.L. Fidel Jr. // AIDS Patient Care and STDs 1998. - Vol. 12, №5. -P. 359-366.

182. Filler, S.G. Penetration and damage of endothelial cells by Candida albicans / S.G. Filler, J.N. Swerdloff, C. Hobbs et al. // Infect. Immun. 1995. - Vol. 63, №3. - P. 976-983.

183. Fitzsimmons, N. Inhibition of Candida albicans by Lactobacillus acidophilus: evidence for the involvement of a peroxidase system / N. Fitzsimmons, D.R. Berry. // Microbios. 1994. - Vol. 80. - P. 125-133.

184. Gale, C. Cloning and expression of a gene encoding an integrin-like protein in Candida albicans / C. Gale, D. Finkel, N. Tao et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1996. - Vol. 93, №1. - P. 357-361.

185. Garcia-Tamayo, J. / Human genital candidiasis: histochemistry, scanning and transmission electron microscopy / J. Garcia-Tamayo, G. Castillo, A.J. Martinez // Acta cytol. 1982. - Vol. 26. - P. 7-14.

186. Gibbons, R.J. Bacterial adherence in oral microbial ecology / R.J. Gibbons, J.V. Houte // Annu. Rev. Microbiol. 1975. - Vol. 29. - P. 19-44.

187. Gordon, A.S. Electrolyte Effects on Attachment of an Estuarine Bacterium / A.S. Gordon, F.J. Millero // Appl. Environ. Microbiol. 1984. - Vol. 47, №3. -P. 495-499.

188. Goswami, R. Species-specific prevalence of vaginal candidiasis among, patients with diabetes mellitus and its relation to their glycaemic status / R. Goswami, V. Dadhwal, S. Tejaswi et al. // Journal of Infection. 2000. - Vol. 41, №2.-P. 162-166.

189. Hellstein, J. Genetic similarity and phenotypic diversity of commensal and pathogenetic strains of Candida albicans isolated from the oral cavity / H. Vawter-Hugart, P. Fotos, J. Schmid et al. // J. Clin. Microbiol. 1993. - Vol. 31, №12.-P. 3190-3199.

190. Henderson, B. Commensal communism and the oral cavity / B. Henderson, M. Wilson. //Dent Res. 1998. -Vol. 77, №9.-P. 1674-83.

191. Hiller, S.L. Vaginal microflora in postmenopausal women who have not received estrogen replacement therapy / S.L. Hiller, R.J. Lau // Clin. Infect. Dis. 1997. - Vol. 25, №2. - P. 123-126.

192. Hilton, E. Ingestion of yoghurt containing Lactobacillus acidophilus as prophylaxis for Candida vaginitis / E. Hilton, H.D. Isenferg, P. Alperstein et al. // Ann. Intern. Med. 1992. - Vol. 116. - P. 353-357.

193. Hocini, H. Sistemic and secretory humoral immunity in the normal human vaginal tract / H. Hocini, A. Barra, L. Belec et al. // Scandinavian J. Immunol. -1987. Vol. 42, №2. - P. 269-274.

194. Howlett, J.A. Candida albicans ultrastructure: colonization and invasion of oral epithelium / J.A. Howlett, C.A. Squier // Infect. Immun. 1980. - Vol. 29, №1. - P. 252-260.

195. Kagnoff, M.F. Epithelial cells as sensors for microbial infection / M.F. Kagnoff, L. Eckmann // J.Clin. West. 1997. - Vol. 100. - P. 6-10.

196. Kearns, M.J. Variability of the adherence of Candida albicans strains to human buccal epithelial cells: inconsistency of differences between strains related to virulence / M.J. Kearns, P. Davies, H. Smith // Saboraudia. 1983. -Vol. 21, №2.-P. 93-98.

197. Kimura, L. Adherence of Candida albicans to human buccal epithelial cells / L. Kimura, N.N. Pearsall // Infect. Immun. 1978. - Vol. 21, №1 - P. 64-68.

198. Kimura, L. Relationship between germination of Candida albicans and increased adherence to human buccal epithelial cells / L. Kimura, N.N. Pearsall //Infect. Immun. 1980. - Vol. 28, №2. - P. 464-468.

199. King, R.D. Adherence of Candida albicans and other Candida species to mucosal epithelial cells / R.D. King, J.C. Lee, A.L. Morris // Infect. Immun. -1980. Vol. 27, №2. - P. 667-674.

200. Klebanoff, S.J. Viricidal effect of Lactobacillus acidophilus on human immunodeficiency virus type 1: possible role in heterosexual transmission / S.J. Klebanoff, R.W. Coombs // J. Exp. Med. 1991. - Vol. 174, №1. - P. 289-292.

201. Klebanoff, S.J. Control of the microbial flora of the vagina by Н2Ог-generating lactobacilli / S.J. Klebanoff, S.L. Hillier, D.A. Eschenbach et al. // J. Infect. Dis. 1991. - Vol. 164, №1. - P. 94-100.

202. Klotz, S.A. Adherence and penetration of vascular endothelium by Candida yeasts / S.A. Klotz, D.J. Drutz, J.L. Harrison et al. // Infect. Immun. 1983. Vol. 41.-P. 374-384.

203. Larsen, B. Vaginal flora in health and disease / B. Larsen // Clin. Obstet. Gynecol. 1993.-Vol. 36, №1.-P. 107-121.

204. Lehrer, N. In vitro and in vivo adherence of Candida albicans to mucosal surfaces / N. Lehrer, E. Segal, L. Barr-Nea // Ann. Microbiol. 1983. - Vol. 134.-P. 293-306.

205. Levin, R.J. VIP, vagina, clitoral and periuretral glands an update on human female genital arousal / R.J. Levin // Exp. Clin. Endocrinol. 1991. - Vol. 98, №2.-P. 61-69.

206. Macura, A.B. Candida adherence to mucosal epithelial cells with regard its pathogenicity / A.B. Macura, B. Pawlik, B. Wita // Zentralbl Bakteriol Mikrobiol Hyg А. 1983. - Bd. 254, №4. - S. 561-565.

207. Maisch, P.A. Adherence of Candida albicans to a fibrin-platelet matrix formed in vitro / P.A. Maisch, R.A. Calderone // Infect. Immun. 1980. - Vol. 27, №2.-P. 650-655.

208. Manns, J.M. Production of a hemolytic factors by Candida albicans / J.M. Manns, D.M. Mosser, H.R. Buckley // Infect. Immun. 1994. - Vol. 62. - P. 5154-5156.

209. Marrie, T.J. The ultrastructure of Candida albicans infections / T.J. Marrie, J.W. Costerton// Canad. J. Microbiol. 1981. - Vol. 27, №11. - P. 1156-1164.

210. Matthews, R.C. Autoantibody to hsp90 can mediate protection against systemic candidosis / R.C. Matthews, J.P. Bumie, D. Howat et al. // Immunology 1991. - Vol. 74. - P. 20-24.

211. McCourtie, J. Relationship between cell surface composition of Candida albicans and adherence to acrylic after growth on different carbon sources / J.

212. McCourtie, L.J. Douglas // Infect. Immun. 1981. - Vol. 32, №3. - P. 12341241.

213. Mileva, E. Microelectrophoretic study of Candida utilis / E. Mileva, P. Atmadzhov, A. Srentz // Folia med. 1978. - Vol. 20, №1. - P. 27.

214. Millon, L. Longitudinal study of anti-Candida albicans mucosal immunity against aspartic proteinases in HIV-infected patients / L. Millon, C. Drobacheff, R. Piarroux et al. // J. Acquir. Immune Defic. Syndr. 2001. -Vol. 26, №2.-P. 137-144.

215. Mirbod, F. Purification and characterization of lysophospholipase-transacylase (h-LPTA) from a highly virulent strain of Candida albicans / F. Mirbod, Y. Banno, M.A. Ghannoum et al. // Biochim. Biophys. Acta. 1995. -Vol. 1257, №2.-P. 181-188.

216. Muller, J. Electron microscopic presentation of immune reactions on Candida cells: asteroid bodies in Candida albicans from the urine of nephritis patients / J. Muller, H. Takamija, R. Jaeger // Sabouraudia. 1977. - Vol. 15, №1. - P. 87-93. ■

217. Munro, C.A. Anti-fungal therapy at the HAART of viral therapy / C.A. Munro, B. Hube // Trends Microbiology. 2002. - Vol. 10, №4. - P. 173-177.

218. Neumann, G. Zur bedeutung von Scheideinhaltsstoffen als Terrainfactoren bei Genitalmykosen / G. Neumann, J. Gartzke, H. Boyme et al. // Zbl. Gynecol. 1984. -Bd.106, №5. - S. 326-330.

219. Odds, F.C. Epidemiology of vaginal Candida infection: significance of numbers of vaginal yeasts and their biotypes / F.C. Odds, C.E. Webster, V.C. Riley et al. // Eur. J. Obstet. Gynecol. Reprod. Biol. 1987. - Vol. 25, №1. -P. 53-66.

220. Osset, J. Assessment of the capacity of Lactobacillus to inhibit the growth of uropathogens and block their adhesion to vaginal epithelial cells / J. Osset, R.M. Bartolome, E.Garcia // J. Infect. Dis. 2001. - Vol. 183, №3. - P. 485491.

221. Otero, L. Vulvovaginal candidiasis in female sex workers / L. Otero, V. Palacio, F. Carreno et al. // J. STD AIDS. 1998. - Vol. 9, №9. - P. 526-530.

222. Peer, A.K. Vaginal yeast infections in diabetic women / A.K. Peer, A.A. Hoosen, M.A. Seedat et al. // S. Afr. Med. J. 1993. - Vol. 83, № 10. - P. 727729.

223. Perdigon, G. Systemic augmentation of the immune response in mice by feeding fermented milks with Lactobacillus casei and Lactobacillus acidophilus / G. Perdigon, M.E.N, de Macias, S. Alvarez et al. // Immunology. 1988. -Vol. 63.-P. 17-23.

224. Poulain, D. Antigenic variability between Candida albicans blastospores isolated from healthy subjects and patients with Candida infection / D. Poulain, G. Tronchin, B. Lefebvre et al. // Sabouraudia. 1982. - Vol. 20, №3. - P. 173177.

225. Poulain, D. Antigenic variations of Candida albicans in vivo and in vitro relationships between P antigens and serotypes / D. Poulain, G. Tronchin, A. Vernes et al. // Sabouraudia. 1983. - Vol. 21, №3. - P. 99-112.

226. Pupponen, R. Relationship between the maturation index and lactate dehidrogenase activity in human vaginal epithelium / R. Pupponen, A. Lukola, M. Nase et al. // Gynecol. Obstet. Invest. 1983. - Vol. 16, №3.-P. 412-416.

227. Qiu, J. Human milk lactoferrin inactivates two putative colonization factors expressed by Haemophilus influenzae / J. Qiu, D.R. Hendrixson, E.N. Baker et al. // Proc Natl Acad Sci USA. 1998. - Vol. 95, №21. - P. 12641 - 12646.

228. Raffi, R.O. Proteins of human vaginal fluid / R.O. Raffi, K.S. Mogrissi, A.G. Sacco //Fertil Steril. 1977. - Vol. 28.-P. 1345.

229. Rangel-Frausto, M.S. An experimental model for study of Candida survival and transmission in human volunteers / M.S. Rangel-Frausto, A.K. Houston,

230. M.J. Bale et al. // Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. 1994. - Vol. 13. - P. 590-595.

231. Redondo-Lopez, V. Emerging role of lactobacilli in the control and maintenance of the vaginal bacterial microflora / V. Redondo-Lopez, R.L. Cook, J.D. Sobel //Rev. Infect. Dis. 1990. - Vol. 5, №12. - P. 856-872.

232. Reid, G. Lactobacillus inhibitor production against Escherichia coli and coaggregation ability with uropathogens / G. Reid, J.A. McGroarty, R. Angotti et al. // Can. J. Microbiol. 1988. - Vol. 34. - P. 344-351.

233. Roig de Vargas-Linare, C.E. The vagina as a sourse of immunoglobulins. The Human Vagina; E.S.E. Hafez, T.N. Evans Eds North Holland Publishing Co.: New York, 1978.-P. 193.

234. Rossel-Goffeng, A. Fetal fibronectin and microorganisms in vaginalfluid of healthy pregnant women / A. Rossel-Goffeng, E. Hoist, I. Milson et al. // Acta. Obstet. Gynecol. Scand. 1996. - Vol. 75, №6. - P. 520-525.

235. Samaranayake, L.P. The effect of dietary carbohydrates on the in-vitro adhesion of Candida albicans to epithelial cells/ L.P. Samaranayake, T.W. Mac Farlane//J. Med. Microbiol. 1982.-Vol. 15.-P. 511-517.

236. Sandin, R.L. Evidence for mannose-mediated adherence of Candida albicans to human buccal cells in vitro / R.L. Sandin, A.L. Rogers, R.I. Patterson et al. // Infect. Immun. 1982. - Vol. 35, №1. - P. 79-85.

237. Santoni, G. Candida albicans expresses a fibronectin receptor antigenically related to alpha 5 beta 1 integrin / G. Santoni, A. Gismondi, J.H. Lin et al. // Microbiology. 1994. - Vol. 140, №11.- P. 2971-2979.

238. Schmid, J. Computer-assisted methods for assessing strain relatedness in Candida albicans by fingerprinting with the moderately repetitive sequence

239. СаЗ / J. Schmid, E. Voss, D.R. Soil // J. Clin. Microbiol. 1990. - Vol. 28, №6.-P. 1236-1243.

240. Schnadig, V.G. The cytologist and bacteriose of the vaginal-ectocervical area. Clues, commas and confusion / V.G. Schnadig, K.S. Davie, S.K. Shafer et al. // Acta. Cytol. 1989. - Vol. 33, №3. - P. 287-297.

241. Segal, E. Adherence of Candida albicans to human vaginal• epithelial cells: inhibition by aminosugars / E. Segal, N. Lehrer, I. Ofek // Exp. Cell. Biol. -1982.-Vol. 50, №1.-P. 13-17.

242. Segal, E. Correlative relationship between adherence of Candida albicans to human vaginal epithelial cells in vitro andcandidal vaginitis / E. Segal, A. Soroka, A. Schecter // Sabouraudia. 1984. - Vol. 22. - P. 191-200.

243. Sepulveda, P. Evidence for the presence of collagenous domains in Candida albicans cell surface proteins / P. Sepulveda, A. Murgui, J.L. Lopez-Ribot et al. //Infect. Immun. 1995. - Vol. 63, №6. - P. 2173-2179.

244. Silva T.M. Influence of cell surface hydrophobicity on attachment of Candida albicans to extracellular matrix proteins / T.M. Silva., P.M. Glee., K.C. Hazen. // J. Med. Vet. Mycol. 1995. - Vol. 33, №2. - P. 117-122.

245. Simoes, J.A. Prevalence of cervicovaginal infections during gestation and accuracy of clinical diagnosis / J.A. Simoes, P.C. Giraldo, A. Faundes // Infec. Liseases Obstet. Ginecol. 1998. - Vol. 6,№3.-P. 129-133.

246. Smolen, J.E. Function of neutrophils / J.E. Smolen, L.A. Boxer // Williams Hematology. 5 th ed. 1995. - P. 779-798.

247. Sobel, J.D. Adherence of Candida albicans to human vaginal and buccal epithelial cells / J.D. Sobel, P.G. Myers, D. Kaye et al. // J. Infect. Dis. 1981. -Vol. 143.-P. 76-82.

248. Sobel, J.D. Comparison of bacterial and fungal adherence to vaginal exfoliated epithelial cells and human vaginal epithelial tissue culture cells / J.D. Sobel, P.G. Myers, M.E. Levison et al. // Infect. Immun. 1982. - Vol. 35. - P. 697-701.

249. Sobel, J.D. Effects of subinhibitory concentrations of ketoconazole on in vitro adherence of Candida albicans to vaginal epithelial cells / J.D. Sobel, N. Obedeanu // Europ. J. Clin. Microbiol. 1983. - Vol. 2. - P. 445-452.

250. Sobel, J.D. Vulvovaginal candidiasis: epidemiologic, diagnostic, and therapeutic considerations / J.D. Sobel, S. Faro, R.W. Force et al. // Am. J. Obstetr. Gynecol. 1998. - Vol. 78. - P. 201-211.

251. Sobel, J.D. Vulvovaginitis when Candida becomes a problem. / J.D. Sobel //Dermatol. Clin. - 1998. - Vol. 16. - P. 763-768.

252. Soil, D.R. Genetic dissimilarity of commensal strains of Candida spp. carried in different anatomical locations of the same healthy women / D.R Soil, R. Galask, J. Schmid et al. // J. Clin. Microbiol. 1991. - Vol. 29, №8. - P. 1702-1710.

253. Spinillo, A. Clinical and microbiological characteristics of symptomatic vulvovaginal candidiasis in HIV-seropositive women / A. Spinillo, G. Michelone, C. Cavanna et al. // Genitourin. Med. 1994. - Vol. 70, № 4. - P. 268-272.

254. Spinillo, A. Torulopsis glabrata Vaginitis / A. Spinillo, E. Capuzzo, Т.О. Egbe et al. // Obstet Gynecol. 1995. - Vol. 85, № 6. - P. 993-998

255. Stanley, V.C. Growth of Candida species in cultures of mouse epithelial cells / V.C. Stanley, R. Hurley // J. Pathol. Bacteriol. 1967. - Vol. 94, №2. -P. 301-315.

256. Sundstrom, P. Adhesion in Candida spp. / P. Sundstrom // Cell Microbiol. -2002.-Vol. 8.-P. 461-469.

257. Surarit, R. Evidence for a glycosidic linkage between chitin and glucan in the cell wall of Candida albicans / R. Surarit, P.K. Gopal, M.G. Shepherd // J. Gen. Microbiol.- 1988.-Vol. 134, №6.-P. 1723-1730.

258. Topley and Wilson's. Microbiology and Microbial Infections. Vol. Medical Mycology. 9th ed. 1999 (Online version).

259. Vandenbergh, P.A. Lactic acid bacteria, their metabolic products and interference with microbial growth / P.A. Vandenbergh // FEMS Microbiol.Rev. — 1993.-Vol. 12.-P. 221-238.

260. Vazquez, J.A. Nosocomial acquisition of Candida albicans: an epidemiologic study / J.A. Vazquez, V. Sancher, C. Dmuchowski et al. // J. Infect. Dis.- 1993. -Vol. 168, №1.-P. 195-201.

261. Viljoen, B.C. Yeast associated with Chedda and Gouda making / B.C. Viljoen, T. Greyling // Int. S. Food. Microbiol. 1995. - Vol. 28. - P. 79-88.

262. Vitkov, L. Candida attachment to oral epithelium / L. Vitkov, W.D. Krautgartner, M. Hannig et al. // Oral Microbiol. Immunol. 2002. - Vol. 96, №.5.-P. 230-243.

263. Vudhichamnong, K. The effect of secretory immunoglobulin A on the in-vitro adherence of the yeast Candida albicans to human oral epithelial cells / K. Vudhichamnong, D.M. Walker, H.C. Ryley // Arch. Oral. Biol. 1982. - Vol. 27.-P. 617-621.

264. Watts, H.J. Altered adherence in strains of Candida albicans harbouring null mutations in secreted aspartic proteinase genes / H.J. Watts, F.S. Cheah, B. Hube et al. //FEMS Microbiol Lett. 1998. - Vol. 159, №1. -P. 129-135.

265. White, T.C. Candida albicans secreted aspartyl proteinases: isoenzyme pattern is determined by cell type, and levels are determined by environmental factors / T.C. White, N. Agabian // J. Bacteriol. 1995. - Vol. 177. - P. 52155221.

266. Yu, Z. Partial characterization of a Candida albicans fimbrial adhesin / Z. Yu, R.R. Zee, K. Ens et al. // Infect. Immun. 1994. - Vol. 62. - P. 2834-2842.

Информация о работе

Свиридов, Максим Александрович
кандидата медицинских наук
Челябинск, 2008
ВАК 03.00.07

Диссертация

Влияние различных факторов на адгезивные свойства Candida albicans на поверх-ности вагинальных эпителиоцитов женщин репродуктивного возраста - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы