Биологические особенности грибов рода Candida, изолируемых из вагинального биотопа женщин репродуктивного возраста

Дробкова, Вера Анатольевна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Биологические особенности грибов рода Candida, изолируемых из вагинального биотопа женщин репродуктивного возраста
ВАК РФ 03.02.03, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Биологические особенности грибов рода Candida, изолируемых из вагинального биотопа женщин репродуктивного возраста"

На правах рукописи ft-

Дробкова Вера Анатольевна

БИОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ ГРИБОВ РОДА CANDIDA, ИЗОЛИРУЕМЫХ ИЗ ВАГИНАЛЬНОГО БИОТОПА ЖЕНЩИН РЕПРОДУКТИВНОГО ВОЗРАСТА

03.02.03 Микробиология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

1 8 НОЯ 2010

Пермь 2010

004613241

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования Пермская государственная медицинская академия имени академика Е.А. Вагнера Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию, Пермь

Научный руководитель:

доктор биологических наук, профессор Карпунина Тамара Исаковна Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Тимашева Ольга Анатольевна доктор медицинских наук Несчисляев Валерий Александрович

Ведущая организация Институт клеточного и внутриклеточного симбиоза Уральского отделения РАН, Оренбург

Защита состоится ^ноября 2010 г. в'' часов на заседании диссертационного совета ДМ 004.019.01 в Институте экологии и генетики микроорганизмов УрО РАН по адресу: 614081, г. Пермь, ул. Голева, д.13. Факс (342)280-32-11

Автореферат диссертации размещен на сайте Института экологии и генетики микроорганизмов УрО РАН (http://www.iegm.ru)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института экологии и генетики микроорганизмов УрО РАН

Автореферат разослан « 010 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета, /У?'/*/.

кандидат биологических наук/^--(у Максимова Юлия Геннадьевна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. За последние десятилетия техногенные воздействия на современные экосистемы, внедрение в медицинскую практику достижений фармакологии привели к значительным изменениям как биоценоза самого человека, так и этиологической структуры инфекционной патологии. На смену традиционным возбудителям пришли условно патогенные микроорганизмы, ранее сравнительно редко проявлявшие свои болезнетворные свойства (Бухарин О.В. и соавт., 2007, 2009; Mark Cichocki, R.N., 2009). Такие микроорганизмы отличают более выраженные адаптивные способности, а наряду с высокой природной резистентностью к антимикробным препаратам - относительно быстрое развитие приобретаемой, в том числе дозозависимой устойчивости. В этом одна из глобальных причин роста грибковых заболеваний, которыми сегодня, по данным Всемирной организации здравоохранения, страдает каждый пятый житель планеты. В ряду возбудителей микозов грибы рода Candida занимают одну из ведущих позиций (Кубась В.Г., 2004; Шелковая Н.Г., 2007; Calderone R.A., 2009). Эти микромицеты могут быть причиной широкого спектра заболеваний — от неопасных поражений слизистой оболочки до жизнеугрожающих инвазивных процессов в любых органах. Среди всех микотических поражений организ-• ма второе место (после онихомикоза) приходится на кандидомикоз кожи и слизистых оболочек, до 20% случаев которого составляет урогени-тальная локализация процесса. Только в США ежегодно регистрируется 13 миллионов случаев вульвовагинального кандидоза (Kent H.L., 1999). При этом наиболее важной современной тенденцией следует признать возрастание роли мочеполовых путей в качестве первичного источника грибковых инфекций, в том числе у реанимационных больных с канди-демией (Блинов Н.П., 2004; PfallerM.A., 1996).

К числу важнейших медико-социальных проблем относится инфекционная патология репродуктивной системы женщины, в структуре которой грибковые поражения играют весьма существенную роль. Однако, статистически достоверной информации о распространенности вагинального кандидоза практически нет, так как в большинстве случаев заболева-

ние не выделяется из прочих дисбиотических процессов, часто регистрируемых во влагалищном биотопе сексуально активных женщин. Согласно кооптированным данным (Анкирская A.M. и соавт, 2009), частота выделения грибов в популяции женщин групп повышенного риска увеличилась с 3-4% в 60-70-е годы прошлого до 17-20% в начале XXI века. Грибы Candida albicans составили 83,7-86%, нQ-albicans виды - 14-16,3% без выраженной тенденции к росту или снижению. Более 90% грибов С. albicans и С. parapsilosis сохранили чувствительность к имидазолам и триазолам. Среди "проблемных" видов (С. glabrata, С. krusei) нечувствительные штаммы в основном имели дозозависимую чувствительность, которая может быть преодолена увеличением курсовой дозы препарата. Однако есть сведения, указывающие на более значительные изменения и в видовой структуре возбудителей кандидозной инфекции влагалища, и в их устойчивости к антимикотическим препаратам (Веселов A.B. и соавт., 2005, 2008; Meis J., et al, 2000; Pappas P.G., et al, 2004; Seidler M., 2006; ShufordJ., 2007).

Вагиниты, обусловленные сочетанным воздействием не менее двух факторов, например бактериального вагиноза и кандидозного вульвоваги-нита, встречаются достаточно часто, составляя от 10 до 30% всех случаев инфекционных заболеваний влагалища. Результат взаимного влияния возбудителей трудно предсказуем, но в большинстве случаев клиническая картина искажается, что затрудняет диагностику и выбор адекватной терапии (Байрамова Г.Р.и соавт., 2001; Мирзабалаева А.К. и соавт., 2004; Бебнева Т.Н., 2006; Fidel P.L. et al, 2004; Linda О., Eckert, 2006). Более того, до настоящего времени не разработаны четкие рекомендации, позволяющие оценить роль изолируемых из вагинального содержимого грибов рода Candida, колонизация слизистых которыми у практически здоровых людей колеблется от 15 до 40% и может возрасти до 80% на фоне какой-либо патологии в условиях длительной госпитализации. Считается, что СамЛ/а-инфекция может выступать в роли маркера общего дисбактерио-за (Сергеев А.Ю., 2000). Присутствуя в биоценозе, они взаимодействуют с другими видами условно-патогенных микроорганизмов и представителями нормофлоры, изменяя факторы персистенции и вирулентности последних (Бухарин О.В., 2002; Morales D.K., Hogan D.A. 2010). В микробных ассоциациях между разными видами возбудителей возникают неоднозначные взаимоотношения, что может существенно повлиять на характер инфекционного процесса (Долгушина В.Ф. и соавт., 2004; Karagozov I.

et al., 2004; Zhou X. et al., 2004, Mijac V.D. et al., 2006). В настоящее время нет единого мнения о том, какой вклад вносят различные микроорганизмы в формирование избыточной грибной колонизации слизистых оболочек (Хомич Ю.С. и соавт., 2006). До сих пор открытым остается и вопрос об антагонистической активности дрожжевых грибов в отношении условно патогенных бактерий (Перунова Н.Б., 2006). В контексте вагинальных инфекций практически отсутствуют систематизированные сведения о пленкообразующей способности грибов Candida и формировании ими, в том числе, смешанных с условно патогенными бактериями биопленок (Валышев А.В. и соавт., 2009).

До последнего времени при определении этиологии неспецифических инфекций решающее значение придавалось численности обнаруженных условно патогенных микроорганизмов в пораженном органе, а в случае микстинфекции - установлению количественных соотношений между ассоциантами (Бухарин О.В. с соавт., 1998, 2002). Вместе с тем, в подобных ситуациях многими исследователями (Семенов А.В, 2009; Ва-хитов Т.Я., 2007 Barefoot S.F. et al., 1994, Meams-Spragg A. et al., 1998, Yan L. et al., 2003, Dubuis C., Haas D., 2007) более существенным признается определение у выделенных культур факторов патогенности и оценка характера взаимоотношений, складывающихся между сочленами микробных сообществ в том или ином биотопе. Особое внимание при этом уделяется продукции ряда ферментов (Odds F.C., 2008; Bernardo S.M., 2008; Gaillardin С., 2010), уровень которой может колебаться в широких пределах в зависимости от условий, существующих в макроорганизме и создаваемых in vitro, что приводит к искажению истинной картины, характеризующей вклад изолируемых штаммов в инфекционный процесс. Отсутствие стандартов по набору изучаемых параметров и условиям их определения для грибов рода Candida делает необходимым накопление и обобщение максимально большего количества наблюдений в этой области для выработки четких критериев, позволяющих однозначно охарактеризовать патогенность штамма, разграничивая кандидоз и кандидоносительство.

Цель настоящего исследования: совершенствование лабораторной диагностики вагинальной кандидозной инфекции на основе изучения видового состава, биологических особенностей изолируемых грибов рода Candida, а также характера их взаимоотношений с сопутствующей микрофлорой.

Основные задачи исследования:

1. Изучить частоту встречаемости грибов рода Candida в составе микрофлоры влагалища женщин репродуктивного возраста в период 2005-2009 гг.

2. Оценить видовой спектр и чувствительность к антимикотическим препаратам изолируемых грибов рода Candida в динамике.

3. Определить особенности микроскопической картины при изучении нативного материала, а также морфологических и культуральных свойств штаммов Candida, изолируемых из вагинального биотопа.

4. Изучить основные факторы патогенности грибов (морфологическая трансформация, фосфолипазная и протеолитическая активность), пленкообразование и влияние абиотических факторов (длительность инкубации, рН, Т°) на их проявление.

5. Проследить особенности взаимодействия основных представителей условно патогенной грибковой и бактериальной флоры влагалища.

Научная новизна исследования. На основе комплексного анализа фенотипических характеристик обоснован новый подход к определению этиологической значимости грибов рода Candida, изолируемых при микробиологическом исследовании вагинального содержимого. Показаны отличия морфологических и биохимических свойств штаммов в зависимости от их роли в биотопе (комменсал - возбудитель инфекционного процесса), что позволяет систематизировать изоляты по их способности колонизировать, либо вызывать инфекционный процесс в макроорганизме на этапе скрининга. Впервые изучено влияние абиотических факторов на проявление патогенных свойств «вагинальными» культурами С. albicans. Подобраны условия (состав среды для культивирования, рН, температура инкубации) для проведения экспериментов in vitro, наиболее приближенные к жизнедеятельности грибов в макроорганизме. Впервые установлено разнонаправленное изменение пленкообразующей активности С. albicans под влиянием абиотических факторов и бактериальных метаболитов, а также интенсивности формирования смешанных биопленок в зависимости от взаимоотношений, складывающихся между микроорганизмами-ассоциантами (антагонизм - нейтрализм - синергизм).

Теоретическая и практическая значимость. Выработан новый подход к оценке этиологической значимости Candida spp. при их обнару-

жении в исследуемом материале, учитывающий биологические особенности изолятов и условия их культивирования. Предложен новый способ оценки взаимоотношений между микроорганизмами, населяющими вагинальный биотоп, с учетом изменения их пленкообразующей активности при совместном культивировании. Это позволит врачу практического звена здравоохранения адекватно интерпретировать получаемые результаты микробиологического обследования и оценивать состояние микробиоценоза влагалища женщин репродуктивного возраста.

Результаты исследования могут быть использованы как один из критериев диагностики вульво-вагинального кадидоза и прогнозирования микотических осложнений при оценке репродуктивного здоровья женщин, прежде всего в период прегравидарной подготовки и при наступлении беременности.

Основные положения, выносимые на защиту:

1.В многолетней динамике (2005-2009гг.) наметилась стабилизация показателей инфицированности женщин репродуктивного возраста грибами рода Candida, в видовой структуре которых устойчиво доминируют представители С. albicans. При этом регистрируется множественная лекарственная устойчивость н^-albicans видов и увеличение дозозависимой чувствительности к флуконазолу среди С. albicans.

2. Биологические особенности Candida spp., вызывающих инфекционные процессы во влагалище, обусловливают необходимость комплексного подхода к оценке этиологической значимости изолируемых штаммов с учетом их количества, морфо-функциональных характеристик, набора факторов патогенности и влияния условий культивирования на их проявление.

3. О характере взаимоотношений, складывающихся в вагинальном биотопе между компонентами грибково-бактериальных ассоциаций, можно судить по результатам сравнительного анализа показателей, характеризующих интенсивность формирования ими моно- и смешанных биопленок in vitro.

ского научно-практического общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов (Пермь, 2008, 2010), XII Международном конгрессе МАКМАХ/ЕБСМШ по антимикробной терапии (Москва, 2010).

Диссертация апробирована на расширенном заседании научного координационного Совета по микробиологии ГОУ ВПО «ПГМА им. ак. Е.А. Вагнера Росздрава» от 30 сентября 2010 г.

По материалам диссертации опубликовано 11 печатных работ, в том числе 2 статьи в журналах, рекомендованных ВАК РФ.

Внедрение в практику. Результаты работы внедрены в практику ЦВПП МСЧ №9, применяются в работе бактериологических лабораторий МУЗ ГКБ №7, ГУЗ КПКД №1 «Фтизиопульмонология». Материалы диссертации используются в учебном процессе на кафедре микробиологии и вирусологии ГОУ ВПО Пермская государственная медицинская академия им. ак. Е.А. Вагнера Росздрава.

Связь работы с научными программами. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом НИР ГОУ ВПО Пермская государственная медицинская академия им. ак. Е.А.Вагнера Росздрава № государственной регистрации темы 01.2.00709666.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 137 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, главы материалов и методов, трех глав собственных исследований, заключения, выводов, списка литературы, включающего 190 источников, из них 82 отечественных и 108 зарубежных авторов. Работа иллюстрирована 27 таблицами и 18 рисунками.

Список принятых сокращений: УПМ - условно патогенные микроорганизмы, МТ - морфологическая трансформация, ФЛА - фосфолипаз-ная активность, ПА - протеазная активность, ФЛ - фосфолипаза, ОП -оптическая плотность, ЦК - цитологический коэффициент.

Благодарности. Автор выражает благодарность заведующей бактериологической референс-лаборатории МУЗ ГКБ №7 Авдеевой Н.С. за предоставленные образцы и помощь в проведении микологических исследований.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования

Для реализации поставленных задач представляемое исследование было разделено на ретроспективную, клинико-лабораторную и экспериментальную части.

С целью получения статистически значимых данных о частоте встречаемости грибов рода Candida в составе микрофлоры влагалища женщин репродуктивного возраста, их видовой структуре и чувствительности к антимикотическим препаратам был проведен ретроспективный анализ 5306 историй болезни и амбулаторных карт пациенток, пролеченных либо проходивших профилактические осмотры на базе акушерско-гинеколо-гического отделения МУЗ ГКБ №7 г. Перми.

В клинико-лабораторную часть данного исследования было включено изучение 250 образцов вагинального секрета. На первом этапе проводили цитологическое и бактериоскопическое исследование традиционными методами (Федоров Р.В. и др., 1995; Интерпретация результатов цитологического исследования при урогенитальных инфекциях: Метод, реко-мендаци. - Пермь, 1998). Состояние микробиоценоза влагалища оценивали по следующим критериям: общая микробная обсемененность, доминирующие морфотипы, наличие дрожжевых клеток, бластоспор, нитей псевдомицелия, эпителиальных и «ключевых» клеток, лейкоцитов. В качестве дополнительных были использованы следующие тесты: определение суммарного количества лейкоцитов и эпителиальных клеток (CK); определение цитологического коэффициента (ЦК) по соотношению числа лейкоцитов к эпителиальным клеткам (Трухина Е.В., 2005). Морфометриче-ские характеристики клеток и колоний получали с помощью компьютерной микроскопии с использованием установки OLYMPUS (производство Япония) при увеличениях 100x1,36x10 и 4x0,85x10 соответственно.

Для выделения и идентификации микробных культур использовали соответствующие питательные среды производства Дагестанского института питательных сред г. Махачкала и НПО «Биомед» г. Пермь, а также хромогенные среды (HiMedia Laboratories Pvt. Limited, Индия): для молочнокислых бактерий (лактобациллы и стрептококки) - среда MPC; энтерококков - среда Калины; стафилококки выделяли на желточно-солевом агаре и HiCrome Aureus Agar Base; энтеробактерии определяли при высе-

ве на среду Эндо и HiCrome ЕСС Agar; анаэробы - на обогащенной среде для контроля стерильности, разлитой «высоким столбом» по пробиркам. Выделенные бактериальные культуры идентифицировали на основании изучения морфологических, тинкториальных, биохимических свойств с использованием наборов стандартных энтеро-, стафило- и стрептотестов (производство «Lachema», Чехия).

При углубленном микологическом и экспериментальном исследовании грибы рода Candida выделяли и изучали их свойства в соответствии с Тилевой Е.А. (2003 г.) на жидкой и плотной среде Сабуро, HiCrome Candida Agar, а также на плотной среде Сабуро с добавлением желтка (продукция фосфолипаз) и бычьего альбумина (продукция протеаз).

Особенности взаимодействия C.albicans с бактериями-ассоциантами изучали традиционными методами совместного культивирования (Баженов Л.Г., 1997; Эйсфильд Д.А, 2002) и отсроченного антагонизма (Глуша-нова H.A. с соавт., 1999), а также по оригинальной методике, учитывающей пленкообразующую способность моно- и смешанных культур (приоритетная справка № 2010127885 от 06.07.2010).

Статистическая обработка полученных результатов проведена вариационно-статистическими методами в программе Statistica 6.0 фирмы StatSoft (США). Различие показателей оценивали с помощью параметрического t-критерия Стьюдента. Для оценки связи двух признаков рассчитывали величину статистического критерия Хи-квадрат, а силу связи признаков измеряли коэффициентом сопряженности (информативности) Пирсона. Результат считали достоверным при р<0,05.

Результаты работы и их обсуждение

Последнее десятилетие характеризуется ростом оппортунистических инфекций, причем спектр значимых УПМ расширяется, и повышается значение в генезе инфекционно-воспалигельных заболеваний, в том числе при их объединении в ассоциации. Выполненные нами исследования подтверждают существующие на современном этапе представления (Анкирская A.M. и соавт, 2009; Calderone R.A., 2009) о роли грибов рода Candida, в том числе при патологических процессах в урогенитальном тракте. Среднемноголегаий показатель инфицированносги грибами влагалища женщин за период 20052009 гг. составил 16,5±1,1%. Его колебания были незначительными: максимальный уровень (18,6%), отмечен в 2005 г., в последующие два года несколько снизился (до 15,2%) и вновь начал расти, но к концу 2009 г. так и не достиг отмеченного максимума (рис. 1).

15 10 5 0

2005 2006 2007 2008 2009

Рис. 1. Доля женщин, инфицированных грибами рода Candida в 2005-2009 гг.

Темп прироста за 5-летний период наблюдений составил 1,4%. Однако, расчет границ достоверности прямолинейной тенденции показал, что разница в показателях инфицированное™ влагалища случайна (р < 0,05). Это говорит о стабилизации ситуации по распространенности грибов рода Candida на изучаемой территории.

Доминирующим видом, как и можно было ожидать, оставался С. albicans. Частота его выделения из влагалища за 5-летний период существенно не изменялась (р < 0,05) и составила в среднем 87,2±1,1%, хотя по ряду территорий исследователи отмечают снижение доли изолятов этого вида до 65-70%.

Сравнение частоты встречаемости отдельных нe-albicans видов показало динамичность их видового спектра. Так, к 2008 г. доля С. parapsilosis возросла в 2 раза, при том, что количество изолируемых из вагинального отделяемого штаммов С. guilliermondii уменьшилось в 5 раз (р < 0,5). В 2008-2009гг. уменьшилась в 1,8 раза доля С. glabrata, в 3 раза доля С. tropicalis, (р > 0,5). Удельный вес С. krusei и С. kefyr на протяжении всего периода наблюдения оставался относительно стабильным.

Чаще всего грибковые культуры входили в состав микробных ассоциаций, доля монокультур не превышала 28,3±1,8%. Более чем в половине слу-

чаев в ассоциациях обнаруживали Staphylococcus spp. (66±2,7%), на втором месте по частоте встречаемости были различные виды энтеробактерий.

Каждый второй штамм С. albicans и каждый третий С. tropicalis, С. parapsilosis были чувствительны ко всем выбранным антимикотикам (табл. 1). Хорошей чувствительностью к нистатину, амфотерицину и клот-римазолу отличались С. albicans и С. kefyr (более 80%). В то же время, более половины изолированных штаммов С. glabrata и С. guilliermondii были устойчивы ко всем фунгицидным препаратам взятого спектра. В динамике наблюдений прослеживается тенденция роста устойчивости С. albicans к фунгицидным препаратам, так количество штаммов чувствительных ко всем 4 антимикотикам сократилось в 1,4 раза (с 63,6% в 2005-2006 гг. до 44,8% в 2008 г.).

Таблица 1

Доля грибов Candida (%), чувствительных к антимикотическим препаратам взятого спектра

Виды Препараты, M±m

Нистатин Амфотерицин Клотримазол Флуконазол

С. albicans 86,7±1,4 83,9+1,5 93,8+1,0 87,8±1,4

С. glabrata 39,6±3,6 41,6+13,7 52,1 ±13,9 27,0+12,3

С. parapsilosis 59,2±10,7 68,1+10,2 64,2+10,5 42,6+10,8

С. tropicalis 63,9+12,4 58,3+12,7 72,2+11,6 44,4+12,8

С. krusei 64,2+10,7 65,0±10,7 86,7±7,6 53,3+11,2

С. kefyr 93,8+8,5 87,5+11,7 81,3+13,8 56,3±17,5

C.gullliermondU 41,7+18,6 50,0+18,9 50,0+18,9 4,2±7,6

Особое внимание было обращено на частоту выделения грибов, устойчивых и имеющих дозозависимую чувствительность к флуконазолу - препарату выбора при кандидозной инфекции гениталий. С 2006 года отмечен рост количества штаммов С. albicans с дозозависимой чувствительностью к флуконазолу с 12% до 27,9%, в то время как число культур устойчивых к этому препарату оставалось примерно на одном уровне (р < 0,05).

Достоверно оценить динамику изменения чувствительности не-albicans видов не представлялось возможным из-за малого количества изолированных культур. Эффективным in vitro антимикотиком в отношении всех видов Candida spp. оставался клотримазол.

Микроскопическое изучение вагинальных мазков, с последующим культуральным изучением соименных образцов влагалищного отделяемого, позволило проследить характерные особенности цитологической картины, морфологии клеточных и мицелиальных форм грибов, качественного и количественного состава ассоциантов, что позволило классифицировать исследованные образцы на две основные группы: I группа характерна для микроценоза, не сопровождающегося воспалительной реакцией, расцененная нами как вариант нормоценоза или дисбиотических реакций во влагалище, где обнаруженные клетки грибов лишь подчеркивали их выраженность (кандидоносительство); во И-й группе, где прослеживались явные признаки воспалительной реакции, доминировали гифальные формы грибов и наблюдались существенные изменения в составе сопутствующей микрофлоры - мы расценили участие С. albicans в качестве возбудителей инфекционного процесса (вагинального кандидоза) (рис.2).

Экспериментальное сравнительное изучение проявления патогенного потенциала представителями С. albicans, изолированными при различных состояниях, под влиянием различных абиотических факторов позволило установить следующее (табл. 2). Формирование псевдомицелия в условиях, типичных для бактериального вагиноза (рН=7,0 и Т=37°С), происходило значительно активнее, в особенности у изолятов, отнесенных нами к патогенным вариантам (Ki=0,694; х2=91,5; р < 0,0001). Способность к

т *

|ЙЙ f L * \

Ш ч

Ш1111 кк-. Шш. ^жШ

Рис. 2. Варианты микроскопической картины вагинальных мазков: а - в I группе, б - во II группе.

морфологической трансформации при температуре окружающей среды, либо при уровне рН=4Д характерном для нормоценоза, когда грибы оцениваются как представители транзиторных УПМ, проявляло менее половины тестируемых культур С. albicans. В обеих группах обнаружена прямая корреляционная зависимость проявления филаментации от продолжительности инкубации: умеренная при Т=25°С (Ki=0,686; х2=166,1; р< 0,00001 в первой группе; Ki=0,636; х2=Ю9,5; р < 0,0001 во второй группе) и сильная при Т=37°С (Ki=0,760; %2=219,3; р < 0,0001 в первой группе; £7=0,805; х2=206,7; р < 0,0001 во второй группе).

Сравнительный статистический анализ показателей, характеризующих фосфолипазную и протеолитическую активность, показал однотипность зависимости их проявления от условий эксперимента. Установлены статистически значимые различия в сроках проявления ФЛА при различных условиях культивирования в группах изолированных грибов. Так, в первой группе прослеживали слабую зависимость продукции экзофермен-та от продолжительности инкубации (Ki=0,360), которая во второй группе была еще менее выражена (£7=0,249), поскольку более 80% штаммов продуцировали ФЛ уже на 2 сутки. При оценке протеолитической активности в первой группе также отмечена слабая зависимость от продолжительности инкубации (£7=0,463), в то время как во второй группе такая связь не установлена (£/=0,165; р < 0,0001). Следует отметить, что достоверных различий между количеством штаммов, продуцирующих фосфо-липазу и протеазы на средах с рН=7,0 и рН=5,6 при обоих температурных режимах в группах изолированных грибов не выявлено (р > 0,05) в то время как доля изолятов, проявивших фосфолипазную активность на средах с рН=7,0 и 5,6, достоверно выше чем при рН=4,0 (р < 0,0001). В группе этиопатогенов количество штаммов с указанными свойствами при рН=7,0 и рН=5,6 при Т=37°С достоверно выше, чем в группе комменсалов (р < 0,0001). Статистический анализ полученных данных, позволил нам с большой долей вероятности предположить, что оптимум активности продукции протеаз и фосфолипаз для вагинальных штаммов С. albicans, соответствует рН=5,6 и 7,0 и Т=37°С (зависимость продукции протеаз .fo"=0,701; х2=58,6; р < 0,0001 и £/=0,642; ^=46,7; р < 0,0001; продукции фосфолипаз £7=0,592; ^=38,3;р < 0,0001 и £3=0,710; tf=60,6;р < 0,0001).

Таблица 2

Проявление факторов патогенности штаммами С. albicans из групп сравнения при различных условиях через 48 ч культивирования

Фактор патогенности %±т штаммов из 1 группы %±т штаммов из II группы

Т=25° Т=37° Т=25° Т=37°

рН=4,0 рН=5,б рН=7,0 рН=4,0 рН=5,6 рН=7,0 рН=4,0 рН=5,6 рН=7,0 рН=4,0 рН=5,6 рН=7,0

Морфологическая трансформация 0 1,2±1,2 1,2+1,2 2,5±1,7 46,9+5,5* 59,3+5,5* 0 2,2+2,2 2,2+2,2 4,4±3,1 66,7±7,0* 73,3±6,6*

Фосфолипазная активность 0 2,5±1,7 2,5+1,7 7,4±2,9 53,1±5,5* 58,0+5,5* 0 4,4+3,1 4,4±3,1 6,7±3,7 73,3±6,6* 80,0±6,0*

Протеазная активность 0 1,2+1,2 1,2±1,2 4,9±2,4 22,2±4,6 29,6+5,1 0 2,2±2,2 2,2±2,2 6,7+3,7 31,1±6,9 37,8±7,2

* различия показателей сравниваемых групп достоверны (р < 0,05)

Группа 1 Группа 2

Рис. 3. Проявление пленкообразующей способности штаммами С. albicans при разной температуре культивирования.

Так, показатель оптической плотности биопленок, сформированных при Т=37 °С, в первой группе в среднем составил 0,42±0,03, во второй

0,81±0,04, в то время как при Т=25 °С - соответственно 0,77±0,04 и 0,54±0,04 (р < 0,05).

При культивировании грибов на питательных, средах с различным уровнем рН в обеих группах в большинстве случаев отмечали рост показателя интенсивности пленкообразования при рН=7,0 в сравнении с рН=4,0 и рН=5,6 (рис.4.). Реакция в проявлении пленкообразующей способности на изменение рН среды у разных штаммов С. albicans индивидуальна.

1,2

0,8

0,6

0,4

0,2

Рис. 4. Проявление пленкообразующей способности штаммами С. albicans

при разных рН среды

рН = 4,0 рН = 5,6 рН = 7,0 рН = 4,0 рН = 5,6 рН = 7,0 Группа 1 Группа 2

фект, т.е. показатель смешанной биопленки (ОП т;х) достоверно не отличался от суммы показателей каждого тестируемого штамма (ОП i+ОП 2) -регистрировали нейтральный характер, если показатель ОПт|х>ОП,+ОП2-синергический характер, если показатель ОП т«<ОП|+ОП2 - антагонистический характер в межмикробном взаимодействии. В табл. 3 в качестве примера приведены результаты исследования двух типичных для каждой группы наблюдения представителей С. albicans при взаимодействии с рядом референс-штаммов из государственной коллекции патогенных микроорганизмов ГИСК им. JI.A. Тарасевича, поскольку наиболее часто в составе микробных ассоциаций обнаруживали представителей именно этих таксонов. В наших наблюдениях при изучении формирования смешанных пленок грамположительными и грамотрицательными бактериями с исследуемыми штаммами С. albicans, были выявлены все три типа взаимодействия: индифферентный (нейтрализм), стимулирующий (синергизм) и ингибирующий (антагонизм) с преобладанием синергичных отношений.

Типы взаимодействия - антагонизм, синергизм и нейтрализм - в микробных ассоциациях складываются под влиянием различных факторов, в том числе синтеза бактерицидных веществ, других продуктов обмена и компонентов самих клеток, которые могут оказывать не только сходное, но и разнонаправленное действие на уровень пленкообразования. В зависимости от природы микроорганизмов, воздействие может осуществляться преимущественно за счет микробных клеток и их компонентов, либо выработки экзометаболитов, а также возможно сочетание двух этих механизмов. Мы предположили, что изменение интенсивности пленкообразования при совместном культивировании грибов с бактериальными штаммами и их метаболитами, можно использовать для расшифровки характера межмикробных взаимоотношений, формирующихся в вагинальном биотопе, где присутствующие в нем микроорганизмы, как правило, структурированы в сложные сообщества. Более того, нам представляется, что, используя такой подход, можно оценивать разные стороны взаимодействия микробов-ассоциантов. В первом случае - оценивается характер отношений, складывающихся между ассоциантами анализируемого биотопа, во втором - удается индивидуализировать возможные механизмы воздействия бактерий на тестируемые грибковые культуры.

Таблица 3

Сравнительная оценка изменения интенсивности пленкообразования в присутствии клеток и культуральных фильтратов тест-штаммов

Штаммы Моно-пленки £ coli К. pneumoniae P. aeruginosae S. aureus S. haemolytlcus С. albicans Контроль

ОПупм ОПс.а/йгеапТ^^^ 0,171 ±0,004 0,187±0,002 0,766±0,024 0,170±0,005 0,260±0,005 0,206+0,002 0,147+0,001

С. albicans 1 группа 0,256+0,02 0,413±0,009 0,420±0,024 0,597±0,019 0,149±0,008* 0,139±0,034* 0,149+0,025* 0,147±0,001

С. albicans 2 группа 2,156±0,104 1,547±0,047 0,373±0,028* 0,962+0,079 1,970±0,08* 2,344±0,067 0,174+0,022* 0,147+0,001

Культуральные фильтраты

С. albicans 1 группа 0,256±0,02 0,149±0,008* 0,175±0,036* 0,453+0,034* 0,239±0,028 0,264±0,025 - 0,119±0,017

С. albicans 2 группа 2,156±0,104 1,504+0,064* 1,612±0,075* 2,686±0,174* 2,087+0,22 2,125+0,23 0,119±0,017

*- р < 0,05

Таким образом, сравнительное изучение биологических свойств грибов рода Candida (морфологическая трансформация, продукция ферментов - фосфолипаз и протеаз, способность к пленкообразованию) в условиях, типичных для нормоценоза и неспецифических инфекционных процессов во влагалище, а также для окружающей среды, позволяет более адекватно оценивать этиологическую значимость изолируемых культур, что, в свою очередь, способствует дифференциальной диагностике канди-доносительства и вульво-вагинального кандидоза. Изменение интенсивности пленкообразования при совместном культивировании штаммов С. albicans и бактерий-ассоциантов отражает характер складывающихся между ними взаимоотношений, что может указывать на развитие смешанной неспецифической инфекции влагалища, а также повышенный риск хронизации инфекционного процесса. Комплексный подход к оценке инфицированное™ влагалища женщин репродуктивного возраста грибами рода Candida с учетом перечисленных показателей будет способствовать повышению эффективности проводимого лечения.

ВЫВОДЫ

1. Среднемноголетний показатель инфицированности грибами влагалища женщин репродуктивного возраста за период 2005-2009 гг. составил 16,5%, с темпом прироста 2,29 на 1000 обследованных (1,4%). Расчет границ достоверности прямолинейной тенденции указывает на стабилизацию ситуации по распространенности потенциальных возбудителей вагинального кандидоза.

2. Установлено, что за период наблюдений в видовой структуре грибов рода Candida, колонизирующих вагинальный биотоп, устойчиво доминировали представители С. albicans, доля которых составляла 84,3-88,9% от всех изолируемых культур. При этом у 27,3% установлена дозозависимая чувствительность к флуконазолу, а более половины m-albicans видов отличала множественная лекарственная устойчивость.

3. Предложено классифицировать варианты микроскопической картины вагинальных мазков на две основные группы: I группа (44,4%) - без признаков воспалительной реакции (ЦК= 1-1,2; £l+e < 10, при наличии бластоспор Candida spp. не более 10 в поле зрения) - кандидоносительст-во, П-группа (55,6%) с признаками воспалительной реакции (ЦК> 1,2; £l+e >10, при наличие бластоспор Candida spp. более 10 в поле зрения и характерными филаментациями) - кандидозная инфекция.

4. В группе возбудителей вагинального кандидоза показана зависимость проявления изученных факторов патогенности от температуры, pH среды и сроков инкубации (МТ^= 487,4; ФЛАх2^ 139,5; ПА%2= 138,8;/? < 0,00001); у комменсалов от действия абиотических факторов существенно зависела только морфологическая трансформация (МТ -¿= 346,4; р < 0,00001)

5. При 48-часовой экспозиции в условиях, типичных для кандидозной инфекции влагалища и бактериального вагиноза (Т=37°, рН=5,6-7), у штаммов С. albicans, относящихся к группе возбудителей, способность к пленкообразованию и изученные факторы патогенности фенотипически проявлялись достоверно чаще, по сравнению с культурами, изолированными при кандидоносительстве (способность к пленкообразованию 82±4,3% против 29,4±5,1%, переход в гифальную форму 73,3±6,6% штаммов против 59,3±5,5%; проявление фосфолипазной активности 80,0±0,6% культур против 58,0±5,5%).

6. Для определения характера взаимоотношений С. albicans и бакте-рий-ассоциантов, изолируемых из влагалища женщин репродуктивного возраста, предложен и апробирован новый методический подход, основанный на комплексной оценке пленкообразования смешанными культурами, в присутствии грибов и бесклеточных культуральных фильтратов бактерий, а также микроскопического изучения сформированных при этом биопленок.

СПИСОК НАУЧНЫХ РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

Статьи в изданиях, рекомендованных ВАК РФ

1. Карпунина Т.И., Олина A.A., Машуров М.Г., Чемурзиева Н.В., Дробкова В.А. Фосфолипазы оппортунистических грибов: их возможная роль в патогенезе и диагностике микозов // Проблемы медицинской микологии. - 2006. -Т. 8. - №4. - С. 41-47.

2. Карпунина, Т.И., Олина A.A., Машуров М.Г., Чемурзиева Н.В., Дробкова В.А. Особенности диагностики вагинального кандидоза, ассоциированного с возбудителями неспецифических вагинитов // Пермский медицинский журнал. - 2007. — Т.24. - №1-2. - С. 62-67.

Публикации в других сборниках и журналах

3. Карпунина Т.И., Олина A.A., Машуров М.Г., Дробкова В.А.

К дифференциальной диагностике и этиотропной терапии кандидозной инфекции влагалища // Стратегия и тактика борьбы с внутрибольничными

инфекциями на современном этапе развития медицины: материалы меж-дунар. конгр. - Москва, 2006. - С. 86-87.

4. Карпунина Т.И., Олина A.A., Машуров М.Г., Дробкова В.А. Сложности диагностики и лечения вагинального кандидоза, ассоциированного со стафилококковой инфекцией // Вестник Российской военно-медицинской академии. Приложение. - 2007. - Ч. 1. - №1 (17). - С. 487.

5. Дробкова В.А., Карпунина Т.И., Исаева Н.В. Влияние грибов рода Candida на возникновение и развитие донозологических форм внутри-больничных инфекций у рожениц и новорожденных. // Современные проблемы эпидемиологии. Сборник статей, посвященный 65-летию кафедры эпидемиологии Нижегородской Государственной Медицинской Академии. -2007 - С. 58.

6. Дробкова В.А. Опыт определения взаимного влияния грибов С. albicans и условно патогенных бактерий, изолированных из вагинального биотопа // Гастроэнтерология Санкт-Петербурга. - 2009. - №4. Материалы 2-го Международного конгресса по пробиотикам. - М. 13.

7. Дробкова В.А. Карпунина Т.И. Видовой состав и чувствительность к антимикотикам грибов рода Candida у гинекологических больных. // III Всероссийская конференция «Проблемы женского здоровья и пути их решения» - Москва, 2009.

8. Дробкова В.А. Биологические свойства грибов рода Candida, изолированных при вагинальных инфекциях // Материалы V Молодежной школы-конференции с международным участием «Актуальные аспекты современной микробиологии» - Москва, 2009. - С. 23-24.

9. Дробкова В.А. Карпунина Т.И. Видовой спектр и биологические свойства грибов рода Candida, изолированных из влагалища женщин репродуктивного возраста // Современные проблемы инфекционной патологии человека. Сборник научных трудов. - Минск, 2009. - Вып. 2. -С. 244-248.

10. Дробкова В.А. Динамическая характеристика видового спектра и чувствительности грибов рода Candida к антимикотическим препаратам при дисбиотических процессах во влагалище // Материалы IV Международной научной конференции молодых ученых-медиков. -Курск, 2010 - Т.1 - С. 353-355.

И. Дробкова В.А., Карпунина Т.И. Пленкообразующая способность грибов Candida albicans, колонизирующих вагинальный биотоп. // Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия. Приложение. -2010. - Т. 12. - № 2. - С. 25-26.

Дробкова Вера Анатольевна

Автореферат

Подписано в печать 15.10.2010. тираж 110 экз. Усл. печ. л. 1,0 Формат 60^84/16. Набор компьютерный. Заказ № 547/2010.

Отпечатано в типографии ИД "Пресстайм" Адрес: 614025, г. Пермь, ул. Героев Хасана, 105

Содержание диссертации, кандидата медицинских наук, Дробкова, Вера Анатольевна

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА I ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Распространенность и видовой спектр возбудителей кандидозной инфекции влагалища

1.2 Таксономия, морфологические и кулътуральные свойства грибов рода Candida

1.2.1 Морфологические свойства

1.2.2 Культуральные свойства

1.3 Факторы патогспности грибов

1.3.1 Морфологическая трансформация: дрожжевая — гифальная форма

1.3.2 Фосфолипазная активность

1.3.3 Продукция протеолитических энзимов

1.3.4 Способность к пленкообразованию

1.3.5 Устойчивость грибов рода Candida к антимикотическим препаратам

1.4 Взаимоотношения грибов рода Candida и бактерий

1.5 Смешанные биопленки

ГЛАВА II МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1 Многолетняя динамика инфицированности влагалища женщин репродуктивного возраста грибами рода Candida

2.2 Микробиологическое исследование образцов вагинального секрета

2.2.1 Отбор проб для исследования

2.2.2 Микроскопическое исследование образцов вагинального секрета

2.3 Изучение биологических свойств С. albicans

2.3.1 Изучение морфологической трансформации С. albicans

2.3.2 Изучение ферментативных свойств С. albicans

2.3.3 Изучение способности грибов С. albicans к формированию биопленок

2.4 Изучение взаимного влияния микробных культур

2.4.1 Метод совместного культивирования

2.4.2 Метод отсроченного антагонизма

2.4.3 Формирование смешанных биопленок

2.5 Методы статистической обработки

ГЛАВА III ДИНАМИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ВИДОВОГО СОСТАВА И ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ ГРИБОВ РОДА CANDIDA К АНТИМИКОТИЧЕСКИМ ПРЕПАРАТАМ

3.1 Многолетняя динамика инфицированности влагалища женщин репродуктивного возраста грибами рода Candida

3.2 Внутригодовая динамика инфицированности влагалища женщин репродуктивного возраста грибами рода Candida

3.3 Видовой спектр грибов рода Candida, изолированных из влагалища женщин в 2005 - 2009 гг.

3.4 Состав микробных ассоциаций, изолированных из вагинального отделяемого

3.5 Динамика чувствительности грибов рода Candida к антимикотическим препаратам

ГЛАВА IV БИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ШТАММОВ ГРИБОВ С. ALBICANS, ИЗОЛИРОВАННЫХ ИЗ ВАГИНАЛЬНОГО ОТДЕЛЯЕМОГО ЖЕНЩИН РЕПРОДУКТИВНОГО ВОЗРАСТА

4.1 Микроскопические исследования

4.2 Культуральное исследование вагинального секрета

4.3 Морфометрическая характеристика штаммов С. albicans

4.4 Влияние абиотических факторов на функциональные характеристики С. albicans

4.4.1 Морфологическая трансформация (дрожжевая-гифальная форма)

4.4.2 Фосфолипазная активность

4.4.3 Продукция протеаз 74 4.5 Пленкообразующая способность С. albicans, колонизирующих вагинальный биотоп

4.5.1 Характеристика пленкообразующей способности С. albicans

4.5.2 Влияние абиотических факторов на пленкообразование у грибов

4.5.2.1 Влияние состава питательных сред на формирование биопленок у штаммов С. albicans

4.5.2.2 Влияние условий культивирования (температуры и рН питательной среды) на формирование биопленок С. albicans

ГЛАВА V ОСОБЕННОСТИ ВЗАИМОТНОШЕНИЙ ГРИБОВ С. ALBICANS И БАКТЕРИЙ

5.1 Изучение взаимного влияния С. albicans и бактерий методом совместного культивирования

5.2 Изучение взаимного влияния С. albicans и бактерий методом отсроченного антагонизма

5.3 Формирование смешанных биопленок грибами С. albicans и условно патогенными бактериями, изолированными из вагинального биотопа

Введение Диссертация по биологии, на тему "Биологические особенности грибов рода Candida, изолируемых из вагинального биотопа женщин репродуктивного возраста"

Актуальность проблемы. За последние десятилетия техногенные воздействия на современные экосистемы, внедрение в медицинскую практику достижений фармакологии привели к значительным изменениям, как биоценоза самого человека, так и этиологической структуры инфекционной патологии. На смену традиционным патогенным возбудителям пришли условно патогенные микроорганизмы (УГТМ), ранее сравнительно редко проявлявшие свои болезнетворные свойства [14]. Такие микроорганизмы отличают более выраженные адаптивные способности, а наряду с высокой природной резистентностью к антимикробным препаратам - относительно быстрое развитие приобретаемой, в том числе дозозависимой устойчивости. В этом ряду грибы рода Candida занимают одну из ведущих позиций. Кандиды могут быть причиной широкого спектра заболеваний - от неопасных поражений слизистой оболочки до жизнеугрожающих инвазивных процессов в любых органах. Казавшиеся ранее редкими и мало актуальными микозы в последние десятилетия превратились в «краеугольный камень современного здравоохранения» [57]. Этому способствует выраженное иммуносупрессивное воздействие современных условий жизни на организм человека. Популяционные исследования указывают на наличие фунгинальных патологических процессов у 5-20 % взрослого населения [55]. Среди всех микотических поражений организма второе место (после онихомикоза) приходится на кандидомикоз кожи и слизистых оболочек, до 20 % случаев которого составляет урогенитальная локализация процесса. При этом наиболее важной современной тенденцией следует признать возрастание роли мочеполовых путей в качестве первичного источника грибковых инфекций, в том числе у реанимационных больных с кандидемией [12; 185].

Инфекционная патология репродуктивной системы женщины относится к числу важнейших медико-социальных проблем. Статистически достоверных данных о распространенности вагинального кандидоза нет, так как в большинстве случаев заболевание не выделяется из прочих дисбиотических процессов, так часто регистрируемых во влагалищном биотопе сексуально активных женщин. Более того, до настоящего времени не разработаны четкие рекомендации, позволяющие оценить роль изолируемых из вагинального содержимого грибов рода Candida. В связи с двойственной природой этих микроскопических грибов, которые в качестве комменсалов присутствуют в составе нормальной микрофлоры здоровых людей, а также регистрируются как этиопатогены при различных воспалительных процессах - у клиницистов нередко возникают сложности при оценке результатов обследования, определении целесообразности назначаемого лечения и выборе лекарственных препаратов [6; 57]. В диагностике неспецифических инфекций до последнего времени решающее значение при определении этиологической значимости придавалось численности обнаруженных микроорганизмов в пораженном органе, а в случае микст-инфекции — установлению количественных соотношений между ассоциантами [3; 14]. Такие характеристики, как степень обсемененности исследуемого материала, различные фенотипические свойства изолятов, уровень их чувствительности к антибиотикам могут отражать функциональное состояние микроорганизмов, что особенно актуально при оценке вовлеченности условно патогенных представителей в патологический процесс. Вместе с тем, в подобных ситуациях многими исследователями [65; 89; 140] более существенным признается определение у выделенных культур факторов патогенности и оценка характера взаимоотношений, складывающихся между сочленами микробных сообществ в том или ином биотопе. Однако отсутствуют стандарты по набору изучаемых параметров и условиям их определения для различных условных патогенов, в том числе грибов рода Candida. На сегодняшний день не выработано четких критериев, позволяющих однозначно охарактеризовать патогенность штамма и разграничить кандидоз и кандидоносительство.

Основные задачи исследования:

1. Изучить частоту встречаемости грибов рода Candida в составе микрофлоры влагалища женщин репродуктивного возраста в период 20052009 гг.

Изучено влияние абиотических факторов на проявление патогенных свойств «вагинальными» культурами С. albicans. Подобраны оптимальные условия (состав среды для культивирования, рН, температура инкубации), наиболее приближенные к жизнедеятельности грибов в макроорганизме, для проведения экспериментов in vitro.

Установлено разнонаправленное изменение пленкообразующей способности С. albicans под влиянием абиотических факторов и бактериальных метаболитов, а так же интенсивности формирования смешанных биопленок в зависимости от взаимоотношений, складывающихся между микроорганизмами-ассоциантами (антагонизм -нейтрализм — синергизм).

Теоретическая и практическая значимость. Выработан новый подход к оценке этиологической значимости Candida spp. при их обнаружении в исследуемом материале, учитывающий биологические особенности изолятов и условия их культивирования. Предложен новый способ оценки взаимоотношений между микроорганизмами, населяющими вагинальный биотоп, с учетом изменения их пленкообразующей способности при совместном культивировании.

Результаты исследования могут быть использованы в качестве дополнительных критериев диагностики вульвовагинального кандидоза и прогнозирования микотических осложнений при оценке репродуктивного здоровья женщин, в частности в период прегравидарной подготовки и при наступлении беременности.

Положения, выносимые на защиту:

1. В многолетней динамике (2005-2009гг.) наметилась стабилизация показателей инфицированности женщин репродуктивного возраста грибами рода Candida, в видовой структуре которых устойчиво доминируют представители С. albicans. При этом регистрируется множественная лекарственная устойчивость н ^-albicans видов и увеличение дозозависимой чувствительности к флуконазолу среди С. albicans.

Личный вклад автора в проведенное исследование. Автор самостоятельно проводил микроскопическое, бактериологическое и микологическое изучение нативного материала, выполнение экспериментальных исследований, а также систематизацию и анализ, в том числе статистический, полученных результатов.

Апробация работы и публикации. Основные положения работы доложены и обсуждены на V Молодежной школе-конференции с международным участием «Актуальные аспекты современной микробиологии» (Москва, 2009), IV Международной научной конференции молодых ученых-медиков (Курск, 2010), заседании Пермского отделения Всероссийского научно-практического общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов (Пермь, 2008, 2010), XII Международном конгрессе МАКМАХ/Е8СМШ по антимикробной терапии (Москва, 2010).

Диссертация апробирована на расширенном заседании научного координационного Совета по микробиологии ГОУ ВПО «ГТГМА им.ак. Е.А.Вагнера Росздрава» от 30 сентября 2010 г.

Внедрение в практику. Результаты работы внедрены в практику ЦВГТП МСЧ №9. применяются в работе бактериологических лабораторий МУЗ ГКБ №7, ГУЗ КГТКД №1 «Фтизиопульмонология». Материалы диссертации используются в учебном процессе на кафедре микробиологии и вирусологии ГОУ ВПО Пермская государственная медицинская академия им. ак. Е.А.Вагнера Росздрава.

Связь работы с научными программами. Диссертационная работа выполнена в соответствии с общим планом НИР ГОУ ВПО Пермская государственная медицинская академия им. ак. Е.А.Вагнера Росздрава № государственной регистрации 01.2.00709666.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 128 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, главы материалов и методов, трех глав собственных исследований, заключения, выводов, списка литературы, включающего 190 источников, из них 82 отечественных и 108 зарубежных авторов. Работа иллюстрирована 26 таблицами и 15 рисунками.

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Дробкова, Вера Анатольевна

Выполненные исследования и полученные результаты позволили нам сделать следующие ВЫВОДЫ:

1. Среднемноголетний показатель инфицированности грибами влагалища женщин репродуктивного возраста за период 2005-2009 гг. составил 16,5 %, с темпом прироста 2,29 на 1000 обследованных (1,4 %). Расчет границ достоверности прямолинейной тенденции указывает на стабилизацию ситуации по распространенности потенциальных возбудителей вагинального кандидоза.

2. Установлено, что за период наблюдений в видовой структуре грибов рода Candida, колонизирующих вагинальный биотоп, устойчиво доминировали представители С. albicans, доля которых составляла 84,388,9 % от всех изолируемых культур. При этом у 27,3 % установлена дозозависимая чувствительность к флуконазолу, а более половины не-albicans видов отличала множественная лекарственная устойчивость.

3. Предложено классифицировать варианты микроскопической картины вагинальных мазков на две основные группы: I группа (44,4 %) - без признаков воспалительной реакции (ЦК = 1-1,2; Хын < Ю, при наличие бластоспор Candida spp. не более 10 в поле зрения) - кандидоносительство, II-rpynria (55,6%) с признаками воспалительной реакции (ЦК > 1,2; Xl+e-^O, при наличие бластоспор Candida spp. более 10 в поле зрения и характерными филаментациями) - кандидозная инфекция.

4. В группе возбудителей вагинального кандидоза показана зависимость проявления изученных факторов патогенности от температуры, рН среды и сроков инкубации (МТ К = 487,4; ФЛА Х = 139,5; ПА х2=: 138,8; р < 0,00001); у комменсалов от действия абиотических факторов достоверно зависела только морфологическая трансформация (МТ 346,4; р < 0,00001)

5. При 48-часовой экспозиции в условиях, типичных для кандидозной инфекции влагалища и бактериального вагиноза (Т = 37°, рН = 5,6-7), у штаммов С. albicans, относящихся к группе возбудителей, способность к пленкообразованию и изученные факторы патогенности фенотипически проявлялись достоверно чаще, по сравнению с культурами, изолированными при кандидоносительстве (способность к пленкообразованию 82 ± 4,3% против 29,4 ± 5,1 %, переход в гифальную форму 73,3 ± 6,6 % штаммов против 59,3 ± 5,5 %; проявление фосфолипазной активности 80,0 ± 0,6 % культур против 58,0 ± 5,5 %).

6. Для определения характера взаимоотношений С. albicans и бактерий-ассоциантов, изолируемых из влагалища женщин репродуктивного возраста, предложен и апробирован новый методический подход, основанный на комплексной оценке пленкообразования смешанными культурами, в присутствии грибов и бесклеточных культуральных фильтратов бактерий, а также микроскопического изучения сформированных при этом биопленок.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В последние десятилетия изучение группы оппортунистических (потенциально или условно патогенных) грибов - активно развивающееся направление микологических исследований. К оппортунистическим относят грибы, которые в природных условиях преимущественно развиваются как сапротрофы, но в определенных ситуациях способны вызывать заболевания человека и животных. Основные направления в исследовании таких микромицетов - их инвентаризация, изучение экологии, физиолого-биохимических и молекулярно-генетических свойств, устойчивости к антимикотическим препаратам. Особенно интенсивно эти вопросы разрабатываются в отношении представителей рода Candida, что связано и с их широким распространением, и ролью в патологии человека. Несмотря на многолетнюю историю изучения, многие вопросы далеки от своего разрешения. До сих пор окончательно не ясно, обладают ли оппортунистические грибы, способные вызвать заболевания у человека, какими-либо особыми свойствами? каковы отличия сапротрофных и клинических штаммов? в каких условиях может происходить их наиболее активное развитие?

По современным представлениям во взаимоотношениях человек - гриб возможность заражения, в первую очередь, определяется состоянием макроорганизма, его иммунным статусом. Однако, не вызывает сомнений и большое значение индивидуальных особенностей штаммов, инфицирующих различные биотопы организма человека. Их специфические свойства зачастую становятся определяющими в том, как они поведут себя в той или иной экологической нише: как практически безвредные комменсалы, либо — возбудители серьезных заболеваний, среди которых кандидозы вообще и, в частности вагинальный кандидоз, занимают особое место.

Не вызывает сомнений, что детерминированность способности оппортунистических грибов развиваться в качестве патогенов человека многофакторна, так как обусловлена наличием определенного набора свойств, включая системы адгезии, образование токсинов, внеклеточных ферментов и т.п. Установлен ряд особенностей эколого-физиологических характеристик оппортунистических грибов в целом и, в частности, их клинических изолятов. Основными из них являются лучший рост при повышенной температуре, наличие диморфизма и выраженной способности трансформироваться из дрожжевой, относительно безвредной, формы в более агрессивную - мицелиальную. Наиболее четко показаны отличия клинических и сапротрофных вариантов по активности ряда ферментов, например, фосфолипазы, эластазы. Однако проявления этих свойств могут варьировать в широких пределах, затрудняя дифференциальную диагностику патологических состояний и оценку этиологической значимости изолируемых при этом микромицетов. В случае кандидозной инфекции влагалища ситуация усугубляется тем, что это открытая экологическая ниша, в составе микробиоты которой могут обнаруживаться представители более 200 видов различных микроорганизмов. Часть из них вступает в конкурентные отношения друг с другом, другая - кооптируется, вызывая длительно и вялотекущие микст-инфекции, последствия которых трудно предугадать.

Противоречивые сведения отечественных и зарубежных исследователей, касающиеся распространенности и частоты встречаемости вагинального кандидоза, динамических изменений видового спектра Candida и чувствительности различных представителей к антимикотическим препаратам, обусловливают необходимость инвентаризации таких данных на отдельных территориях. Согласно нашим наблюдениям, согласующимся с данными других исследователей, среднемноголетний показатель инфицированности грибами влагалища женщин за период 2005-2009 гг. составил 16,5 %. Его колебания были незначительными: максимальный уровень (18,6%), отмеченный в 2005 гг., в последующие два года несколько снизился (до 15,2%) и вновь начал расти, но к концу 2009 г. так и не достиг отмеченного максимума. Рассчитанный темп прироста за 5-летний период наблюдений составил 1,4 %. Однако, расчет границ достоверности прямолинейной тенденции показал, что разница в показателях инфицированное™ влагалища случайна (t = 0,8 < 2). Это говорит о стабилизации ситуации по распространенности грибов рода Candida, что, зачастую, не совпадает с результатами исследований, выполненных на других территориях, где частота встречаемости микотических поражений вагины по-прежнему растет.

Доминирующим видом, как и можно было ожидать, оставался С. albicans. Частота его выделения из влагалища за 5 летний период существенно не изменялась (р < 0,05) и составила в среднем 87,2 ± 1,1 %, хотя по ряду территорий исследователи отмечают снижение доли изолятов этого вида до 65-70%. Сравнение частоты встречаемости отдельных не-albicans видов показало динамичность их видового спектра. Так к 2008 г. доля С. parapsilosis возросла в 2 раза, при том, что количество изолируемых из вагинального отделяемого штаммов С. guilliermondii уменьшилось в 5 раз (р < 0,5). В 2008-2009гг. уменьшилась в 1,8 раза доля С. glabrata, в 3 раза доля С. tropicalis, (р > 0,5). Удельный вес С. krusei и С. kefyr на протяжении всего периода наблюдения оставался относительно стабильным.

Чаще всего грибковые культуры входили в состав микробных ассоциаций, доля монокультур не превышала 28,3 ± 1,8 %. Более чем в половине случаев в ассоциациях обнаруживали Staphylococcus spp. (51,1 ± 2,0%), на втором месте по частоте встречаемости были различные виды энтеробактерий.

Каждый второй штамм С. albicans и каждый третий С. tropicalis, С. parapsilosis были чувствительны ко всем выбранным антимикотикам. Хорошей чувствительностью к нистатину, амфотерицину и клотримазолу отличались С. albicans и С. kefyr (более 80 %). В то же время, более половины изолированных штаммов С. glabrata и С. guilliermondii были устойчивы ко всем фунгицидным препаратам взятого спектра. В динамике наблюдений прослеживается тенденция роста устойчивости С. albicans к фунгицидным препаратам, гак количество штаммов чувствительных ко всем 4 антимикотикам сократилось в 1,4 раза (с 63,6 % в 2005-2006 году до 44,8 % в 2008 году). Особое внимание было обращено на частоту выделения грибов, устойчивых и имеющих дозозависимую чувствительность к флуконазолу -препарату выбора при кандидозной инфекции гениталий. С 2006 года отмечен рост количества штаммов С. albicans с дозазависимой чувствительностью к флюконазолу с 12 % до 27,9 %, в то время как число культур устойчивых к этому препарату оставалось примерно на одном уровне (р < 0,5). Достоверно оценить динамику изменения чувствительности нQ-albicans видов не представляется возможным из-за малого количества изолированных культур. Эффективным in vitro антимикотиком в отношении всех видов Candida оставался клотримазол.

Микроскопическое изучение вагинальных мазков, с последующим культуральным изучением соименных образцов влагалищного отделяемого позволило проследить характерные особенности цитологической картины, морфологии клеточных и мицелиальных форм грибов, качественного и количественного состава ассоциантов, что позволило классифицировать исследованные образцы на две основные группы: I группа характерна для микроценоза, не сопровождающегося воспалительной реакцией, расцененная нами как вариант нормоценоза или дисбиотических реакций во влагалище, где обнаруженные клетки грибов лишь подчеркивали их выраженность (кандидоносительство), во П-й группе, где прослеживались явные признаки воспалительной реакции, доминировали гифальные формы грибов и существенные изменения в составе сопутствующей микрофлоры — мы расценили участие С. albicans в качестве возбудителей инфекционного процесса (вагинального кандидоза).

Экспериментальное сравнительное изучение проявления патогенного потенциала представителями С. albicans, изолированными при различных состояниях, под влиянием различных абиотических факторов позволило установить следующее. Формирование псевдомицелия в условиях, типичных для инфекции влагалища (рН = 7,0 и Т = 37°С), происходило значительно активнее, в особенности у изолятов, отнесенных нами к патогенным

-у вариантам (Ki = 0,694; 5^"= 91,5; р < 0,0001). Способность к морфологической трансформации при температуре окружающей среды, либо при уровне рН = 4,0, характерном для нормоценоза, когда грибы оцениваются как представители транзиторной УПМ, проявляло менее половины тестируемых культур С.albicans. В обеих группах обнаружена прямая корреляционная зависимость проявления филаментации от продолжительности инкубации, умеренная при Т = 25°С {Ki =0,686; 166,1 ; р < 0,00001 в первой группе; Ki = 0,636; х = 109,5 ; р < 0,0001 во второй группе), и сильная при Т = 37°С {Ki = 0,760; /= 219,3 ; р < 0,0001 в первой группе; Ki =0,805; х2= 206,7 ; р < 0,0001 во второй группе).

Сравнительный статистический анализ показателей, характеризующих фосфолипазную и протеолитическую активность, показал однотипность зависимости их проявления от условий эксперимента. Установлены статистически значимые различия в сроках проявления ФЛА при различных условиях культивирования в группах изолированных грибов. Так, в первой группе прослеживали слабую зависимость продукции экзофермента от продолжительности инкубации (Ki = 0,360), которая во второй группе была еще менее выражена (Ki = 0,249), поскольку более 80 % штаммов продуцировали ФЛ уже на 2 сутки. При оценке протеолитической активности в первой группе также отмечена слабая зависимость от продолжительности инкубации (Ki = 0,463), в то время как во второй группе такая связь не установлена (Ki = 0,165) р < 0,0001. Следует отметить, что достоверных различий между количеством штаммов, продуцирующих фосфолипазу и протеазы на средах с рН = 7,0 и рН=5,6 при обоих температурных режимах в группах изолированных грибов не выявлено (р > 0,05) в то время как доля изолятов, проявивших фосфолипазную и протеолитическую активность на средах с рН = 7,0 и 5,6, достоверно выше чем при рН = 4,0 (р < 0,0001). В группе патогенов количество штаммов, проявивших указанные свойства при рН = 7,0 и рН=5,6 при Т = 37°С достоверно выше, чем в группе комменсалов (р < 0,0001).

Статистический анализ полученных данных, позволил нам с большой долей вероятности предположить, что оптимум активности продукции протеаз и фосфолипаз, продуцируемых вагинальными штаммами С. albicans, соответствует рН = 5,6 и 7,0 и Т = 37°С (зависимость продукции протеаз Ki =0,701; /= 58,6; р < 0,0001 и Ki =0,642; /= 46,7 ; р < 0,0001; продукции фосфолипаз Ki =0,592; /= 38,3; р < 0,0001 и Ki =0,710; /= 60,6 ; р < 0,0001).

Развитие прикрепленных сообществ - одна из основных стратегий выживания микроорганизмов и в окружающей среде, и в организмах инфицируемых хозяев. Пленкообразование у грибов мало изучено, а данные о пленкообразующей способности грибов рода Candida spp. весьма противоречивы. Вместе с тем общепризнанно, что биопленки лежат в основе многих затяжных и хронических инфекционных процессов, что характерно для развития кандидозной инфекции влагалища. В нашем исследовании отмечен высокий уровень проявления этого свойства у С. albicans, изолированных из вагинального отделяемого женщин с проявлениями кандидозной инфекции, в то время как при кандидоносительстве у большинства культур способности к формированию биопленок не обнаружено. Установлено, что способность грибов образовывать биофильмы значительно зависела от температуры. Так показатель оптической плотности сформированных биопленок при Т = 37 °С в первой группе в среднем составил 0,42 ± 0,03, во второй 0,81 ± 0,04, в то время как при Т = 25 °С соответственно 0,77 ± 0,04 и 0,54 ± 0,04. При культивировании грибов на питательных средах с различным уровнем рН в обеих группах установлен рост показателя интенсивности пленкообразования при рН = 7,0 в сравнении со стандартными условиями (рН = 5,6). Реакция в проявлении пленкообразующей способности на изменение рН среды у разных штаммов С. albicans индивидуальна.

Как свидетельствуют многочисленные исследования различных авторов, развитие инфекционного процесса зависит не только от особенностей инфицируемого организма и инфекта, но в значительной степени от качественного и количественного состава «сочленов» микробного сообщества, которое формируется в колонизируемом биотопе. Изучение взаимного влияния культур проводили 3 методами: традиционными -совместного культивирования, отсроченного антагонизма с незначительными модификациями, а также используя предложенную и апробированную нами методику, основанную на способности грибов и бактерий формировать смешанные биопленки. Результаты, полученные с применением традиционного метода совместного культивирования, для оценки взаимоотношений между представителями разных по биологическим свойствам таксономических групп (грибов и бактерий) свидетельствуют о том, что такой способ не позволяет достоверно оценить их характер. По сути метод отсроченного антагонизма удовлетворяет поставленным задачам, однако получение результатов требует продолжительного времени, а 3-4 суточная экспозиция штаммов, культивируемых «чашечным» методом, затрудняет объективную оценку, за счет избыточного накопления биомассы и деформации первоначально нанесенного микробного штриха.

Типы взаимодействия — антагонизм, синергизм и нейтрализм - в бактериальных ассоциациях складываются под влиянием различных факторов, в том числе синтеза бактерицидных веществ, других продуктов обмена и компонентов самих клеток, которые могут оказывать не только сходное, но и разнонаправленное действие на уровень пленкообразования. В зависимости от природы микроорганизмов, воздействие может осуществляться преимущественно за счет микробных клеток и их компонентов, либо выработки экзометаболитов, а также возможно сочетание двух этих механизмов. Мы предположили, что изменение интенсивности пленкообразования при совместном культивировании грибов с бактериальными штаммами и их метаболитами, можно использовать для расшифровки характера межмикробпых взаимоотношений, формирующихся в вагинальном биотопе, где присутствующие в нем микроорганизмы, как правило, структурированы в сложные сообщества. Более того, нам представляется, что, используя такой подход, можно оценивать разные стороны межмикробного взаимодействия. В первом случае - оценивается характер отношений, складывающихся между ассоциантами анализируемого биотопа, во втором — удается индивидуализировать возможные механизмы воздействия бактерий на тестируемые грибковые культуры.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата медицинских наук, Дробкова, Вера Анатольевна, Пермь

1. Аак О.В. Аллергены грибов. Особенности микогенной сенсибилизации // Проблемы медицинской микологии. — 2005. Т.7. — № 2. — С. 12-16.

2. Анализ многолетней динамики заболеваемости: Методическая разработка. Ленинград, 1989. - 25 с.

3. Анкирская А.С., Муравьева В.В. Микробиологическая характеристика инфекций влагалища, вызванной грибами рода Candida II ЗППП. 1998.- №2.-С. 12-14.

4. Анкирская А.С., Муравьева В.В. Видовой состав и некоторые биологические свойства лактобацилл при различных состояниях микроэкологии влагалища // Акушерство и гинекология. — 2000. — № 11. — С. 26-28.

5. Анкирская А.С., Муравьева В.В. Опыт микробиологической диагностики оппортунистических инфекций влагалища // Клин, микробиол. антимикроб, химиотер. -2001. Том 3. -№ 2. - С. 190-4.

6. Анкирская А.С., Муравьева В.В. Инфекции влагалища: диагностика. Лабораторная диагностика оппортунистических инфекций влагалища. // Consilium medicum. 2005. - Т. 7 - № 3 С. 103-107.

7. Афифи Ф., Эйзен С. Статистический анализ: подход с использованием ЭВМ / пер. с англ. М.: Мир, 1982. - 488 с.

8. Байрамова Г.Р. Кандидозная инфекция. Полиеновые антибиотики в лечении вульвовагинального кандидоза // Гинекология. — 2001. Т.З. -№ 6.- С.212-214.

9. Бактериальный вагиноз: методическое пособие. — Екатеринбург, 1996.-53 с.

10. Безбородов A.M., Астапович Н.И. Секреция ферментов у микроорганизмов. М.: Наука. — 1984. — 70 с.

11. Белобородов В.Б., Синякова J1.A. Нозокомиальная кандидурия: алгоритм диагностики и лечения. // Consilium medicum. 2003. - Т. 5. - № 7 -С. 103-107.

12. Бурова С.А., Воинова Г.В. Клинические разновидности и лечение кандидоза. // Вестник дерматологии. — 1997. — Т. 4. — С. 24-28.

13. Бухарин О.В. Механизмы выживания бактерий / Бухарин О.В., Гинцбург A.JL, Романова Ю.М., Эль-Регистан Г.И. М.: Медицина. - 2005. -367 с.

14. Быков B.J1. Динамика инвазивного роста Candida albicans в тканях хозяина. // Вестник дерматологии и венерологии. 1990. — № 4. - С. 25-28.

15. Валышев A.B. Образование биопленок фекальными штаммами энтеробактерий и дрожжевых грибов рода Candida / Валышев A.B., Валышева И.В., Гайде И.В. // ЖМЭИ. 2009. - № 4. - С. 44-46.

16. Гейро O.A. Клинико-лабораторная характеристика генитального каидидоза у беременных женщин: автореф. дис. . канд. мед. наук. — С — Петербург, 2006. 24 с.

17. Глазкова JI.K. Этиология, клиника и терапия кандидозного вульвовагинита // Акушерство и гинекология. 2005. - № 3. - С. 55-58.

18. Гланц С. А. Медико-биологическая статиститка / Пер. с англ. -М.: Практика. 1998. - 459 с.

19. Глушанова H.A., Блинов А.И., Бахаеев В.В. Об антагонизме пробиотических лактобацилл // Эпидемиология и инфекционные болезни . -2004.-№6.-С. 37-39

20. Глушко Н.И., Лисовская С.А., Халдеева Е.В. Устойчивость штаммов Candida albicans к флуконазолу и возможный путь ее возникновения. // Проблемы медицинской микологии.— 2005. — Т.7. — № 2. — С. 100.

21. Голубничая В.Н. Кандидоз у беременных женщин и новорожденных детей. // Проблемы медицинской микологии. 2005. - Т.7. -№ 2. - С. 72.

22. Гордеева C.B. Образование биопленок клиническими штаммами Candida albicans при дисбиозе кишечника / Гордеева C.B., Иванова Е.В., Перунова Н.Б., Фадеев С.Б. // Иммунопатология, аллергология, инфектология,- 2009 № 1.- С. 20-21.

23. Данилова О.П., Никифорова H.A. Микрофлора женских гениталий в норме и при патологии: учебное пособие. СПб., 1997. — 80 с.

24. Дерябин Д.Г., Минаков A.A., Борисов С.Д. Спектр микрофлоры, изолируемой из различных отделов репродуктивного тракта женщин // ЖЭМИ. 2001. - №4 - С. 84-86.

25. Егорова Е.В., Минскер О.Б. Грибковые и некоторые паразитарные заболевания женских половых органов. М.: Медицина, 1988. -221 с.

26. Елинов Н.П. Патогенные дрожжеподобные организмы. — М.: Медицина, 1964.-382 с.

27. Елинов Н.П. Структурированные и неструктурированные формы существования микромицетов в искусственных и естественных условиях // Проблемы медицинской микологии. -2009. Т. 11 -№ 3. - С. 3-10.

28. Ждан-Пушкина С.М. Основы роста культур микроорганизмов. -Ленинград: Изд-во ЛГУ. 1983. - 94 с.

29. Зеленова Е.Г., Заславская М.И., Махрова Т.В. Кандиды: экология, морфофункциональные особенности и факторы пагогенности // Нижегородский медицинский журнал. 2002. — №. 1. - С. 73-84

30. Зубков М.Н. Диагностика и антимикробная терапия катетер-ассоциированных инфекций кровотока // Consilium medicum. Прил. Хирургия. №. 1. - 2008. - С. 18-22.

31. Ильина Т.С., Романова Ю.М., Гинцбург А. Л. Системы коммуникаций у бактерий и их роль в патогенности // Молекулярная генетика, микробиология и вирусология. 2006. - № 3. - С. 22-29.

32. Интерпретация результатов цитологического исследования при урогенитальных инфекциях: методические рекомендации. — Пермь: ПГМА, 1998.-56 с.

33. Караев З.О., Лебедева Т.Н. К вопросу о биологической активности Candida albicans II Микотическая инфекция и сенсибилизация. — сб. науч. труд. Ленинград, 1982. - С. 14-17.

34. Кисина В.И. Микроценоз влагалища в норме и при вагинальных инфекциях: методы его коррекции. // Consilium medicum. 2002. - Т. 04. -№ 9 - С. 103-107.

35. Коваленко Г.А., Кузнецова Е.В., Ленская В.М. Углеродминеральные носители для адсорбционной иммобилизации нерастущих бактериальных клеток // Биотехнология. — 1998. № 1. — С. 4756.

36. Коноплева В.И. Candida species в структуре причин инфекционных заболеваний. / Коноплева В.И., Бирюков В.В., Карпова Т.И., Люлина Е.В., Тимофеева Т.А. // Проблемы медицинской микологии — 2005. -Т.7. № 2. - С. 44.

37. Кошкин П.Н. Медицинская микология. Ленинград: Наука, 1962.- С. 89-101

38. Кубась В. Г., Чайка Н. А. Кандидоз и СПИД: рекомендации для врачей. СПб.: Изд-во СПбГИДУВ, 1992. - 48с.

39. Лепцнер А.А., Ленцнер Х.П., Карки Т.В. Лактофлора влагалища и перспективы создания пробиотиков из лактобацилл для профилактики и лечения вульвовагинального кандидоза // Журнал акушерства и женских болезней. 1998. - Спец. вып. - С. 85-86.

40. Лисовская Л.А. Новый подход к оценке патогенного потенциалаклинических штаммов Candida albicans: автореф. дис.канд. биол. наук1. Казань, 2008.- 24 с.

41. Лисовская С.А. Изменение вирулентных свойств Candida albicans в ассоциациях с Klebsiella pneumoniae / Лисовская С.А., Глушко Н.И., Халдеева Е.В., Баязитова Л.Т. // Проблемы медицинской микологии — 201 O.T.I 2.-№2.-С.

42. Марфенина О.Е., Фомичева Г.М. Эволюция терморегуляции у животных и патогенные свойства грибов. // Проблемы медицинской микологии,- 2005. Т.7. - № 2. - С. 106.

43. Масюкова С.А., Устинов М.В., Ильина И.В. Глубокий кандидоз- актуальность и перспективы проблемы // РМЖ. 2004. - Т. 12. - № 4- С. 189.

44. Маянский А.Н. Микробиология для врачей. Нижний Новгород: НГМА, 1999.-394 с.

45. Микроэкология влагалища. Коррекция микрофлоры при вагинальных дисбактериозах: учебное пособие. Москва. - 1999. - 80 с.

46. Мирзабалаева А.К. Современные подходы к лечению кандидозного вульвовагинита у беременных женщин. // Проблемы медицинской микологии. 2005. - Т.7. - № 2. - С. 74.

47. Милько Е.С., Мартынкина Л.П. Морфологические и физиолого-биохимические особенности диссоциантов Pseudomonas aeruginosas II Микробиология. 1996.-Т. 65.-№3.-С. 352-356.

48. Молчанов О.Л., Кира Е.Ф. Биохимические и биологические свойства влагалищной жидкости // Журнал акушерства и женских болезней.- 1997 № 1.-С. 55-58.

49. Мошкевич И. Р. Микробные биопленки при смешанных инфекциях: автореф. дисс. .канд. мед. наук. Санкт-Петербург, 2007. -22 с.

50. Мюллер Э., Лёффлер В. Микология. М: Мир, 1995. - 343 с.

51. Назарова Е.К., Гиммельфарб Е.И., Созаева Л.Г. Микробиоценоз влагалища и его нарушения. Этиология, патогенез, клиника, лабораторная диагностика. // Клиническая лабораторная диагностика. 2003. - № 2. - С. 25-32.

52. Наумкина Е.В. Мониторинг микробиоценозов влагалища в системе эпиднадзора при инфекционно-воспалительных заболеваниях половой сферы: автореф. дисс.докт. мед. наук. Омск, 2009. - 36 с.

53. Николаев Ю.А., Плакунов В.К. Биопленка «город микробов» или аналог многоклеточного организма? // Микробиология. — 2007. —Т. 76. — №2.-С. 149-163.

54. Олина A.A. Неспецифические инфекционные заболевания влагалища (медико-социальные, этиологические, клинико-диагностические особенности: автореф. дисс.докт. мед. наук. Пермь, 2009. — с. 39.

55. Определитель патогенных и условно патогенных грибов. — М.: Мир, 2001.-с. 486

56. Основы эпидемиологии и эпидемиологическая диагностика неинфекционных болезней: учебно-методическое пособие для врачей. С-Петербург: С-ПбМАПО, 1994.

57. Паников Н.С. Кинетика роста микроорганизмов: общие закономерности М.: Наука, 1982. -206 с.

58. Платонов А.Е. Статистический анализ в медицине и биологии: задачи, терминология, логика, компьютерные методы. — М.: РАМН. — 2000. — 50 с.

59. Прилепская В.Н., Анкирская A.C., Байрамова Г.Р., Муравьева В.В. Вагинальный кандидоз. М., 1997. - 40 с.

60. Реброва Р.Н. Грибы рода Candida при заболеваниях негрибковой этиологии. М: Медицина, 1989. - 128 с.

61. Свиридов М.А. Влияние различных факторов на адгезивные свойства Candida albicans на поверхности вагинальных эпителиоцитов женщин репродуктивного возраста: автореф. дисс. . канд. мед. наук. -Челябинск, 2008. с. 22.

62. Семенов A.B. Характеристика антагонистической активности бактерий при межмикробных взаимодействиях: дисс.канд. биол. наук. -Оренбург, 2009.- 132 с.

63. Сергеев А.Ю., Сергеев Ю.В. Кандидоз: природа инфекции, механизмы агрессии и защиты, лабораторная диагностика, клиника и лечение. М.: Триада-Х, 2001. - 472 с.

64. Сергеев А.Ю., Сергеев Ю.В. Грибковые инфекции: руководство для врачей. М.: Бином-Пресс, 2008. - 480 с.

65. Сидоренко C.B. Роль бактериальных биопленок в патологии человека. // Инфекции в хирургии 2004. - № 2 (3). - С. 16-20.

66. Сидоренко C.B. Клиническое значение резистентности микроорганизмов к антимикробным препаратам. // Российские медицинские вести. 1998. - № 1. - С. 28-34.

67. Тилева Е.А. Ферментативные и патогенные свойства криптококков — изолятов от больных и сапробионтов: дисс. . канд. мед. наук. С-Петербург, 2003. - с. 143.

68. Трухина Е.В. Клинико-лабораторное и экспериментальное обоснование новых подходов к диагностике и лечению кандидозной инфекции влагалища: автореф. канд. . мед. наук. Пермь, 2005. - 22 с.

69. Фадеев С.Б. Способность возбудителей флегмон мягких тканей формировать биопленки / Фадеев С.Б., Немцева Н.В., Перунова Н.Б., Тарасенко B.C., Бухарин О.В. // Инфекции в хирургии. 2009. - № 2. - С. 41 -45.

70. Федорович В.В., Калюжный C.B., Ваедер Мирен П., Верстрает В. Разработка феноменологической модели кинетики бактериальной адсорбции на низкоэнергетических поверхностях // Вестник московского университета. Сер 2. - 2002. - Т. 43.- № 6. - С. 417-419

71. Флуер Ф.С. Бактериальные фосфолипазы типа С. // ЖЭМИ. -2008.- №6,- С. 5-11.

72. Хомич Ю.С. Изучение характера взаимоотношений Candida albicans и Lactobacillus plantarum при совместном культивировании на поверхности плотной питательной среды / Хомич Ю.С., Бурмистрова А.Л.,

73. Самышкина Н.Е., Поспелова А.В. // Современные проблемы науки и образования. 2006. - № 2 - С. 60-61.

74. Шевяков М.А. Стандартные подходы к диагностике и лечению кандидоза слизистых оболочек пищеварительного тракта // Проблемы медицинской микологии. — 2000. Т.2. —№ 2. — С.53

75. Шендеров Б.А. Медицинская микробная экология и функциональное питание. М., 2007. - 287 с.

76. Шелудько B.C. Подлужная М.Я. Теоретические основы медицинской статистики: методические рекомендации. Пермь, 2001 .-36 с.

77. Эйсфельд Д. А. Биологическая характеристика производственных штаммов лактобактерий: автореф. дисс. .канд. биолог, наук. — Пермь, 2002. -22 с.

78. Юдина Н.А., Курочкина А.Ю. Контроль биопленки в современной стратегии профилактики и лечения стоматологических заболеваний // Стоматология. 2009. - № 3. - С. 77-80.

79. Agatensi L. Vaginopathic and proteolytic Candida species in outpatients attending a gynaecology clinic / Agatensi L, Franchi F, Mondello F, Bevilacqua RL, Ceddia T, De Bemardis F, Cassone A. // J Clin Pathol . — 1991. — №44 (10).-P. 826-30.

80. Allison D.G. Community structure and Co-operation in biofilms // Cambridge University Press, 2000. — 365 p.

81. Al-Fattani M. A., Douglas L. J. Penetration of Candida Biofilms by Antifungal Agents // Antimicrob. Agents Chemother.-2004.-№ 48.-P. 3291-3297.

82. Alteras I., Aryeli J. The incidence of Candida albicans in the last day of pregnancy and the first days of the new born.// Mycopathologia 1980 - Oct 31 -72:2-P. 85-7

83. Asticcioli S. Reccurent vulvovaginal candidiasis: prevalens antifungal susceptibiliti patterns and genotyping of different species / Asticcioli S., Migliavacca R., Nucleo E., et al. // Clin. Microbial, and infect 2004. - Vol. 10, Suppl. 3.-P.226.

84. Auger P, Joly J. Microbial flora associated with Candida albicans vulvovaginitis. // Obstet Gynecol. 1980. - № 55 (3). - P. 397-401.

85. Bailey A., Wadsworth E., Calderone R. Adherence of Candida albicans to human buccal epithelial cells: host-induced protein synthesis and signaling events // Infect Immun. 1995.- № 63 (2). - P. 569-572.

86. Barbone F. A follow-up study of methods of contraception, sexual activity, and rates of trichomoniasis, candidiasis, and bacterial vaginosis / Barbone F., Austin H., Louv W.C., Alexander W.J. // Am J Obstet Gynecol.-1990- № 163.-P. 104-514.

87. Barry A.L., Thornsberry C. Susceptibility tests: Diffusion test procedures / In: Murray P., editor. Diffusion test procedures. — Washington D.C.: ASM Press, 1993.

88. Basson N. J. Competition for glucose between Candida albicans and oral bacteria grown in mixed culture in a chemostat // J. Med. Microbiol. — 2000. -№49. P.969-975.

89. Bendel C.M., Hostetter M.K. Distinct mechanisms of epithelial adhesion for Candida albicans and Candida tropicalis. JClin Invest. — 1993. — № 92.-P. 1840-1849.

90. Benz C.C. Acquired chronic candidiasis treated with transfer factor / Benz C.C., Thomas J.W., Mandl M., Morgan N. // Br J Dermatol .- 1977.- № 97 (l).-P. 87-91.

91. Bergen M.S., Voss E., Soil D.R. Switching at the cellular level in the white- opaque transition of Candida albicans II J Gen Microbiol. 1990. - № 136 (10).-P. 1925-1936.

92. Bernardis F. The pH of the host niche controls gene expression in and virulence of Candida albicans / Bernardis F., Muhlschlegel F. A., Cassone A., Fonzi W.A // Infection and immunity. 1998. - P. 3317-3325.

93. Bertholf M.E., Stafford M.J. Colonization of Candida albicans in vagina, rectum, and mouth // J Fam Pract.- 1983 .- May -16:5 P. 919-24

94. Bingham J.S. What to do with the patient with recurrent vulvovaginal candidiasis.// Sex. Transm. Inf. 1999. - № 75. - P. 225-7.

95. Bisschop M.P., Merkus J.M., Van Cutsem J. The growth-promoting activity of vaginal fluid for Candida albicans (and the problem of enhanced susceptibility to vaginal candidosis) // Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol .- 1985 -Aug-20:2.-P. 107-112.

96. Blaschke-Hellmessen R. Vertical transmission of Candida and its consequences // Mycoses .- 1998 .- 41-Suppl -2 .- P. 11-16

97. Bro F. The diagnosis of Candida vaginitis in general practice. // Scand J Prim Health Care .- 1989.- №7(1) .- P. 19-22.

98. Boeke A.J., Dekker J.H., Peerbooms P.G. A comparison of yield from cervix versus vagina for culturing Candida albicans and Trichomonas vaginalis II Genitourin Med .- 1993.-№ 69 (1).- P. 41-43.

99. Bohler K. Reinthaller A. Immunohistochemical study of in vivo and in vitro IgA coating of Candida species in vulvovaginal candidiasis / Bohler K., Klade H., Poitschek C., Reinthaller A. // Genitourin Med.- 1994.- № 70 (3) .- P. 182-186.

100. Borderon J.C., Guillon M., Soutoul J.H., Laugier J., Drouhet E. Incidence of mother-child contamination by Candida albicans during labor // Arch Fr Pediatr-1976 May-33:5.-P. 477-484.

101. Braude A. Candida, Infectious diseases and Medical Microbiology // 2nd ed., 1986.- 571p.

102. Busscher Y.S., Geertsema-Doornbusch G.G., van der Mei H.C. Adhesion to silicone rubber of yeast and bacteria isolated from voice prostheses: influence of salivary conditioning films // J Biomed Mat Res. 1997. - № 34. - P. 201-209.

103. Bykov V.L. Histopathology of human vaginal candidosis. // Mycoses-1992 -№ 35 (3-4) .-P. 77-82.

104. Calderone R.A. Yeast adhesion in the pathogenesis of endocarditis due to Candida albicans: studies with adherence-negative mutants / Calderone R.A., Cihlar R.L., Lee D.D., Hoberg K., Scheld W.M. // J Infect Dis. 1985. - № 152 (4).-P. 710-715.

105. Calderone R.A., Braun P. Adherence and receptor relationship of Candida albicans. Microbiol Rev. 1991. - № 55:1. - P. 20.

106. Cannon R.D. Oral Candida: clearance, colonization, or candidiasis? / Cannon R.D., Holmes A.R., Mason A.B., Monk B.C. // J Dent Res. 1995. - № 74(5) .-P. 1152-1161.

107. Cannon R.D., Chaffin W.L. Oral colonization by Candida albicans II Crit Rev Oral Biol. 1999.-№ 10 (3). - P. 359-383.

108. Cartiedge J.D., Midgely J., Gazzard B.G. Clinical response to ketoconazole of HIV-related oral candidosis is predicted by Odds relative growth method of susceptibility testing // J. Antimicrob. Chemother. 1997. - Vol.40. -№1. - P. 117-1 19.

109. Cassone A. Cell wall of Candida albicans: its functions and its impact on the host //Curr Top Med Mycol. 1989. - № 3. - P. 248-314.

110. Chaffin W.Z. Cell wall and secreted proteins of Candida albicans: identification, function and expression / Chaffm W.Z., Lopez-Ribot J.Z., Casanova M., Gozalbo D., Martinez J.P. // Microbiol Mol Biol Rev. 1998. - № 62. - P. 130-180.

111. Chandra J. Biofilm formation by the fungal pathogen Candida albicans: development, architecture, and drug resistance / Chandra J., Kuhn D.M., Mukherjee P.K et al. // J. Bacteriol. 2001. - Vol. 183, № 18. - P. 5385-5394.

112. Cole G.T., Halawa A.A., Anaissie E.J. The role of gastrointestinal tract in hematogenous candidiasis: from the laboratory to the bedside // Clin Infect Dis.- 1996. -№22. -P. 73-88.

113. Corrigan E.M Cellular immunity in recurrent vulvovaginal candidiasis / Corrigan E.M., Clancy R.L., Dunkley M.L., Eyers F.M., Beagley K.W. // Clin Exp Immunol. 1998. - № 111 (3). - P. 574-578.

114. Costerton, J.W., Stewart P.S., Greenberg E.P. Bacterial biofilms: a common cause of persistent infections // Science. 1999. - Vol. 284. - P. 13181322.

115. Costa M. Correlation in vitro itraconazole and fluconazole susceptibility with clinical outcome for patients with vulvovaginal candidiasis / Costa M., Passas X.S., Miranda A.T.B. et al. // J Mycopathol. 2004. - №157. -P. 43-47.

116. De Oliveira J.M. Prevalence of Candida albicans in vaginal fluid of asymptomatic Portuguese women / De Oliveira J.M., Cruz A.S., Fonseca A.F., Vaz C.P., Rodrigues A., Aurea F., Maia J., Sousa J.A. // J Reprod Med. 1993. - Jan 38:1.-P. 41-42.

117. Diamond R.D. Interaction of phagocytic cells with Candida and other opportunistic fungi // Arch Med Res. 1993. - №24. - P. 361-369.

118. Douglas L.J. Candida biofilms and their role in infection // Trends Microbiol.-2003.-№ 11.-P. 30-36.

119. Edwards J.E. Cell extracts of Candida albicans block adherence of the organisms to endothelial cell / Edwards J.E., Mayer C.L., Filler S.D., Wadsworth E., Calderone R.A. // Infect Immun. 1992. - № 60. - P. 3087-3091.

120. Eckert L.O. Vulvovaginal candidiasis: clinical manifestations, risk factors, management algorithm / Eckert L.O., Hawes S.E., Stevens C.E., Koutsky L.A., Eschenbach D.A., Holmes K.K // Obstet Gynecol. 1998. - № 92:5. - P. 757-765.

121. El-Azizi M.A., Starks S.E., Khardori N. Interactions of Candida albicans with other Candida spp. and bacteria in the biofilms // J Appl Microbiol. 2004. -№ 96(5). - P. 1067-1073.

122. Emmerson J. Sampling for vaginal candidosis: how good is it? / Emmerson J., Gunputrao A., Hawkswell J., Dexter A., Sykes R., Searle S., Cross A., Nathan P.M. // Int J STD AIDS. 1994. - № 5 (5). - P. 356-358.

123. Fidel J. An intravaginal live Candida challenge humans leads to new hypotheses for immunopathogenesis of vulvovaginal candidiasis / Fidel J., Barrouse M., Espinosa T. et al. // Infect. Immun. 2004. - T. 72. - № 5. - P. 2939-2946.

124. Garner R.E Characterization of Candida albicans mannan-induced, mannan-specific delayed hypersensitivity suppressor cells / Gamer R.E., Childress A.M., Human L.G., Domer J.E. // Infect Immun 1990. № 58 (8). - P. 26132620.

125. Granger S.E. The etiology and pathogenesis of vaginal candidosis: an update // Br. J. Clin. Bact. -1992. V.46. - №4. - 258-259.

126. Gustafson K.S. Molecular mimicry in Candida albicans II Gustafson K.S., Vercellotti G.M., Bendel C.M., Hostetter M.K. // J Clin Invest. 1991. - № 87.- P. 1896-1902.

127. Hartz A.S. Candida albicans from aids patients, susceptibility in vitro to antifungal agents / Hartz A.S., Cury A. E., Compertz O. F. et al. // Rev.Microbiol. 1992. - Vol.23. - №2. - P. 133-135.

128. Hoegli L., Ollert M., Körting H.C. The role of Candida albicans secreted aspartic proteinase in the development of candidoses // J. Mol. Med. -1996. Vol.74. -№3. - P. 135-142.

129. Hogan D.A., Kolter R. Pseudomonas-Candida interactions: an ecological role for virulence factors //Science. 2002. - № 296(5576) . - P. 22292232.

130. Horowitz B.J. Mycotic vulvovaginitis: a broad overview // Am. J. Obstet. Gynecol. 1991. - V.165. - №4. - P. 1188-92.

131. Hostetter M.K. Adhesins and ligands involved in the interaction of Candida spp. With epithelial and endothelial surfaces // Clin Microbiol Rev. — 1994.- № 7. P. 29-42.

132. Jenkinson H.F., Douglas L.J. Interactions between Candida species and bacteria in mixed infections / In Polymicrobial diseases Edited by: Brogden K.A., Guthmiller J.M. // ASM Press, 2002. P. 357-373.

133. Jin Y. Biofilm formation of Candida albicans is variably affected by saliva and dietary sugars / Jin Y., Samaranayake L.P., Samaranayake Y., Yip ILK. // Arch Oral Biol. 2004. - № 49(10). - P. 789-798.

134. Kaleli I. Anticandidal activity of Pseudomonas aeruginosa strains isolated from clinical specimens/ Kaleli I., Cevahir N., Demir M., Yildirim U., Sahin R. // Mycoses. 2007. - № 50(1) . - P. 74-78.

135. Kaminishi H. Activation of the Plasma Kallikrein-Kinin System by Candida albicans proteinase / Kaminishi H., Tanaka M., Cho T., Maeda H., Hagihara Y. // Infection and Immunity. 1990. - Vol. 58, - № 7.- P. 2139-2143.

136. Kerr J.R. Suppression of fungal growth exhibited by Pseudomonas Aeruginosa IIJ Clin Microbiol. 1994. - № 32(2). - P. 525-527.

137. Kojic E.M., Darouiche R. Candida infections of medical devices // Clin. Microbiol. Rev. 2004. - Vol. 17. - P. 255-267.

138. Manns J.M., Mosser D.M., Buckley H.R. Production of a hemolytic factors by Candida albicans II Infect Immun. 1994. - № 62. - P. 5154-5156.

139. McEldowney S., Fletcher M. Effect of pH, temperature and growth condition on the adhesion of a gliding bacterium and three nongliding bacteria to polysterene//Microbiol. Ecol. 1988.- Vol.169. - P. 183-195.

140. Moran J.P. Identification and expression of multidrug transporters responsible for fluconazole resistence in Candida dublidiensis / Moran J.P., Sanglard D., Donnelly S.M. et al. // Antimicrob. agents chemother. 1998. -Vol.42. - №7. - P. 1819-1830.

141. Mikamo H. Penetration of Oral Fluconazole into Gynecological Tissues. / Mikamo H., Kawazoe K., Sato Y., Izumi K., Ito T. // Antimicrobial agents and chemotherapy. 1999. - Vol.43. - №1.- P. 148-51.

142. Mitrovic S. In vitro proteinase and phospholipase activity and pathogenicity of Candida species // Mitrovic S., Kranjcic I., Arsic V., Dramic A. //J. Chemother. 1995. - Vol.7. - №4, Suppl. - P.43-45.

143. Miyakawa V., Kuribayashi T., Kagaya K. Role of specific determinant in mannan of Candida albicans serotype A in adherence to human buccal epithelial cells // Infect Immun. 1992. - № 60. - P. 2493-2499.

144. Naglik J. R. Challacombe S.J., Hube B. Candida albicans secreted aspartyl proteinases in virulence and pathogenesis // Microbiol. Mol. Biol. Rev. — 2003,- V.67. — P. 400-428.

145. Nair R.G., Samaranayake L.P. The effect of oral commensal bacteria on candidal adhesion to human buccal epithelial cells in vitro II J Med Microbiol 1996.- №45,- P. 179-185.

146. National Committee for Clinical Laboratory Standards. Performance standards for antimicrobial susceptibility testing; eleventh informational supplement. 2001; 21(1).

147. Odds F.S. Candida and candidosis // 2nd ed. London: Bailliere Tindall, 1988.

148. Odds F.C. Candida species and virulence // ASM News. 1994. -№60.- P. 313-318

149. CT Sullivan J.M., Jenkison H.F., Cannon R.O. Adhesion of Candida albicans to oral streptococci in promoted by selective adsorption of salivary proteins to the streptococcal cell surface / // Microbiology. 2000. - № 146. - P. 41-48.

150. CTToole G.F., Kaplan H.B., Kolter R. Biofilm formation as micribial development // Ann Rev Microbiol. 2000. - № 54. - P. 49-79.

151. Pawderly W.G., Robinson R., Keath E.J. Molecular epidemiology of recurrent oral candidiasis in human immunodefency virus-positive patients: evidence for two patterns of recurrence // J Infect Dis. 1993. - № 168. - P. 463-466.

152. Pendrak M.Z., Klotz S.A. Adherence of Candida albicans to host cells // FEMS Microbiology letters. 1995. - № 129. - P. 103-114.

153. Pereiro M., Losada A., Toribo S. Adherence of Candida albicans strains isolated from AIDS patients. Comparison with pathogenic yeasts isolated from patients without HIV infection // Br J Dermatol. 1997. - № 137. - P. 7680.

154. Perry C.M., Whittington R. Fluconazole // Drugs. 1995. - Jun. 49(6).-P. 984-1006.

155. Reisner A. In vitro biofilm formation of commensal and pathogenic E. coli strains: Impact of environmental and genetic factors / Reisner A., K. A. Krogfelt, B. Klein, E. L. Zechner, and S. Molin // J. Bacteriol. 2006. - № 188. -P. 3572-3581.

156. Ramage G., Vandewalle K., Wickes B.L., Lopez-Ribot J.L. Characteristics of biofilm formation by Candida albicans //Rev Iberoam Micol. -2001.-№18(4) .-P. 163-170.

157. Samaranayake Y.H., Wu P.C., Samaranayake L.P., So M. Relationship between the cell surface hydrophobicity and adherence of Candida krusei and Candida albicans to epithelial and denture acrylic surfaces // APMIS. -1995. -№ 103 (10).-P. 707-713.

158. Schaller M. Differential expression of secreted aspartyl proteinases in a model of human oral candidosis and in patient samples from the oral cavity / Schaller M., Schafer W., Korting H.C., Hube B. // Mol. Microbiol. 1998. -Vol.29. - №2.- P. 605-615.

159. Schaller M. Investigations on the regulation of secreted aspartyl proteases in amodel of oral candidiasis in vivo / Schaller M., Korting H.C., Schafer W. et al.//Mycoses. 1988.- Vol.41, Suppl.2. - P. 69-73.

160. Segal E. Inhibitors of Candida albicans adhesion to prevent candidiasis // Adv Exp Med Biol. 1996. - № 408. - P. 197-206.

161. Segal E., Soroka A., Schecter A. Correlative relationship between adherence of Candida albicans to human vaginal epithelial cells in vitro and candidal vaginitis//Sabouraudia. 1984.- №22.- P. 191-200.

162. Sherwood J. Contact sensing in Candida albicans: a possible aid to epithelial penetration / Sherwood J^, Gow N.A.R., Gooday G.M., Gregory D.M., Marshall D. // J Med Vet Mycol. 1992. - № 30. - P. 461-469.

163. Sobel J. D. Vulvovaginitis. When Candida becomes a problem // Dermatol. Clin. 1998. - Vol.16. - P. 763-768.

164. Sobel J. Vulvovaginal candidiasis: Epidemiologic, diagnostic, and therapeutic considerations / Sobel J., Faro S., Forse R. et al. // Am.J.Obstet.Gynecol.-1998,-Vol. 178.-P. 203—211

165. Soil D.R. High-frequency switching in Candida albicans II Clin Microbiol Rev. 1992. - № 5 (2). - P. 183-203.

166. Srikantha T. The frequency of integrative transformation at phase-specific genes of Candida albicans correlates with their transcriptional state /

167. Srikantha T., Moitow B., Schroppel K., Soil D.R. // Mol Gen Genet. 1995. - № 246 (3). - P. 342-352.

168. Sturtevant J., Calderone R. Candida albicans adhesins: biochemical aspects and virulence // Rev J beroam Micol. 1997. - № 14. - P. 90-97.

169. Thein Z.M., Samaranayake Y.H., Samaranayake L.P. Effect of oral bacteria on growth and survival of Candida albicans biofilms // Arch Oral Biol. -2006. —№ 51(8). P. 672-680.

170. Topley and Wilson's. Microbiology and Microbial Infections. Vol. Medical Mycology. 9th ed.1999 (Online version).

171. Tumbarello M. Analysis of the risk factors associated with the emergence of azole resistant oral candidosis in the course of HIV Infection / Tumbarello M., Caldarolla G., Tacconelli F. et al. // J. Antimicrob. Chemother. -1996.-Vol.38.-№4.-P. 691-699.

172. Van Weissenbruch R. Chemoprophylaxis of fungal deterioration of the Provox in post-laryngectomy patients / Van Weissenbruch R., Bouckaert S., Remon J.P., Nelis H.J., Albers F.W. // Ann Oto Rhinol Laryngol. 1997. - № 106.- P. 329-337.

173. Vazquez J.A Nosocomial acquisition of Candida albicans', an epidemiologic study / Vazquez J.A., Sancher V., Dmuchowski C., Dembry L.M., Sobel J.D.,Zervos M.J. //J Infect Dis. 1993.- № 168(1).- P. 195-201.

174. Voss A. Investigation of the sequence of colonization and candidemia in nonneutropenic patients / Voss A., Hollis R.J., Pfaller M.A., Wenzel R.P., Doebble B.N. // J Clin Microbiol. 1994. - № 32. - P. 975-980.

175. Wellmer A., Berhardt H. Adherence on buccal epithelial cells and germ tube formation in the continuous flow culture of clinical Candida albicans isolated // Mycoses. 1997. - № 40. - P. 363-368.

176. White T.C. Agabian N. Candida albicans secreted aspartyl proteinases: isoenzyme pattern is determined by cell type, and levels aredetermined by environmental factors // J Bacteriol. 1995. - № 177. - P. 5215

177. Wilson C. Reccurent vulvovaginitis candidiasis: an overview of traditional and alternative therapies. //Adv Nurse Pract. 2005 May; 13 (5) . - P.

178. Yang, Y.L. Virulence factors of Candida species II J. Microbiol. Immunol. Infect. 2003. - Vol. 36. - № 4. - P. 223-228.

179. Yu Z. Partial characterization of a Candida albicans fimbrial adhesin / Yu Z., Zee K.K., Ens K. Doig P.C., Carpenter M.R., Staddon W. // Infect Immun-1994.-№62,- P. 2834-2842.5221.24.9.

Информация о работе

Дробкова, Вера Анатольевна
кандидата медицинских наук
Пермь, 2010
ВАК 03.02.03

Диссертация

Биологические особенности грибов рода Candida, изолируемых из вагинального биотопа женщин репродуктивного возраста - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы