Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Влияние R плазмид группы Inc W на онкогенную и фитогормональную активность штаммов Agrobacterium Tumefaciens

ВАК РФ 03.00.15, Генетика

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Фомичева, Виктория Владимировна

введение.

ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1 Общая характеристика Agrobacterium tumefaciens • •••••••••••••«•• ii

1.2 Ti плазмиды как этиологические агенты корончатых галлов.

1.2.1 Генетика Ti плазмид . . е.

1.2.2 Механизмы интеграции pTi в геном растения

1.3 Роль фитогормонов В Опс+ фенотипе А. tumefaciens

1.4 Фитогормональная активность Agrobacterium rhizogenes , Pseudomonas savastanoi , Co-rynebacterium fasciens.

1.5 Биологические факторы, ограничивающие

ОНКОГвННОСТЬ A. tumefaciens

1.5.1 Агроцины - как один из биологических методов борьбы с корончатогалловой болезнью.

1.5.2 Влияние плазмиды pSa группы inc w на

ОНКОГеиНОСТЬ А.tumefaciens

Введение Диссертация по биологии, на тему "Влияние R плазмид группы Inc W на онкогенную и фитогормональную активность штаммов Agrobacterium Tumefaciens"

Актуальность темы. Среди патологических новообразований у растений, индуцируемых фитопатогенными бактериями, особое место занимают корончатогалловые опухоли, вызываемые Agrobacterium tumefaciens , a.tumefaciens поражает двудольные растения, относящиеся К 60 семействам ( Elliot , 1951; De Cleene and De Ley , 1976). Абсолютно иммунных к бактериальному раку растений нет, относительно иммунные и слабо поражаемые растения встречаются среди семейств Fabaceae t Papaveraceae , Primulaceae , Berberiola-ceae f Ramuncuiaceae ( Галачьян, 1979). В Советском Союзе бактериальный рак зарегистрирован повсеместно, отличается большой вредоносностью, отмечен на многих культурных растениях, таких как цитрусовые, чайные кусты, ягодные кустарники, хмель, томаты, бобовые культуры, свекла ( Чернышева, Назарчук, 1975; Павленко, 1963; Исаева, 1975;,Калиниченко, 1975; Горленко, 1975). Однако наиболее часто им поражаются виноградная лоза и плодовые. Например, в Молдавии поражаемоеть бактериальным раком виноградников доходит в некоторых районах до 65 % ( Станко, Тутевич, 1972). В настоящее время a.tumefaciens является третьим по значению фи-топатогеном и такая его агрессивность диктует необходимость использования различных подходов и методов борьбы с ним.

Бактериальный рак растений представляет собой гиперпластическое заболевание, при котором в зараженных тканях в результате ускоренного и неконтролируемого клеточного деления возникает опухоль. Свойства опухолей растений, индуцируемых агробактериями, изучаются давно и довольно хорошо описаны ( Байдербек, 1981 ; Puhler,1983)•

В настоящее время установлено, что онкогенность A.tumefa-ciens определяется наличием в клетках этих бактерий крупных плазмид ( 95-160 МД ), названных Ti , ИЛИ pTi ( Zaenen et al ., 1974)« Сравнительно небольшой участок Ti плазмид, обозначенный как Т-район, включается в геном растительной клетки и изменяет ее метаболизм, морфологию и физиологию, т.е. приводит к ее трансформации ( Chilton et al.,1977; Schell et al.,1979; Learners et al .1980; De Beuckeler et al .,1981).

В настоящее время вызванные A.tumefaciens опухоли растений используются в качестве модели душ изучения этиологии и патогенеза рака у различных организмов, включая животных и человека, a Ti плазмиды рассматриваются в качестве природного вектора для переноса, интеграции и экспрессии различных генов в растениях ( Van Montagu, Schell,1979; Schell ,1978; liester, Montoya ,1979; Lawton and Chilton ,1984; Винецкий,1984; Андрианов, 1984).'

Несмотря на интенсивные исследования, которые ведутся в последнее время с целью выявления механизма опухолеобразования у растений при заражении их A.tumefaciens , этот вопрос до сих пор остается дискуссионным. Экспериментальные модели онкогене-за, предложенные для растений и животных, во многом сходны. Одна из гипотез, объясняющая механизм внедрения Т-ДНК в геном растения, состоит в том, что Т-ДНК имеет транспозонную структуру и подобно другим "прыгающим" генам способна перескакивать с бактериальной ДНК на ДНК растения и экспрессироваться в составе Последней. В Последние ГОДЫ ИЗ генома дрожжей ( Cameron et al,, 1979), дрозофилы и млекопитающих ( Georgiev et ai .,1981) также изолированы мобильные диспергированные генетические элементы. Транспозиция мобильных диспергированных генов - относительно частые события, они могут являться одной из наиболее существенных причин генетических перестроек, ведущих к опухолевой трансформации ( Георгиев с соавт.,1981).

Наряду с этим известно, что в составе и плазмид находятся гены, контролирующие продукцию фитогормонов - ауксинов и ци-ТОКИНИНОВ ( Liu et al ,,1981; Inze et ai,I984; Schroder et al,, 1984), Предполагают, что изменение баланса фитогормонов, связанного с активностью этих генов, лежит в основе злокачественного перерождения клеток двудольных растений под влиянием A.tu-mefaciens ( Nester, Kosuge ,1981; Schilperoort et al ,,1980; Чернин,1983). Представления о гормональной природе онкогенной активности pTi нуждаются в дальнейшей экспериментальной проверке. Именно поэтому практическое и теоретическое значение проблемы канцерогенеза у растений обусловливает закономерный интерес к изучению опухолеобразования и роли основного природного ауксина - индолил-3-уксусной кислоты (ИУК) в этом процессе.

Обнаружение феномена подавления онкогенного фенотипа штаммов a.tumefaciens путем введения в их клетки плазмиды pSa из группы inc v. ( Loper and Kado ,1979) дает право предположить, что такие природные плазмид-плазмидные взаимодействия, направленные на подавление онкогенности, могут быть использованы в борьбе с корончатогалловой болезнью растений. Это определило необходимость изучения природы данного явления, поиск других плазмид с антионкогенной активностью и исследование возможности использования их в борьбе с опухолеобразованием у растений.

Цели и задачи исследования. Целью настоящей работы явилось изучение влияния R плазмид из различных групп несовместимости на онкогенные свойства вирулентных штаммов Agrobacterium tumefaciens , относящихся к октопиновому и нопалиновому типам, а также исследование наличия взаимосвязи между онкогенностью различных штаммов A.tumefaciens И ИХ СПОСОбНОСТЬЮПрОДУДИрОВаТЬ ИУК.

Исходя из целей исследования, перед нами стояли следующие задачи :

- изучение природы антионкогенного действия плазмиды pSa

В штаммах A.tumefaciens.

- выявление новых плазмид с антионкогенной активностью.

- исследование значения способности штаммов A.tumefaciens продуцировать основной природный ауксин - ИУК в проявлении их онкогенности.

Научная новизна и практическая значимость работы. Впервые установлено, что подавление онкогенной активности вирулентных штаммов A.tumefaciens октопинового и нопалинового типов не является уникальным свойством плазмиды pSa из группы inc w . Оно присуще по крайней мере еще одной плазмиде, r3b8 , которая также относится к группе несовместимости w . Антионкогенная активность является специфическим свойством плазмид psa и r388 , поскольку другие R плазмиды, используемые в работе, а именно: rp4 и r68.45 из группы inc pi, r6k из группы inc х, а также r7k из группы inc w не обладают способностью подавлять опс+ фенотип штаммов A.tumefaciens. Установлено, что эффект плазмид pSa и r388 не связан с вытеснением из трансконъюгантов плазмиды pTi и подавлением ее соматических функций, включая катаболизм опинов. Исходя из предположения о том, что ИУК может являться тем патогенетическим фактором, который приводит к развитию опухоли, выявлена взаимосвязь между онкогенностью и уровнем продукции

ИУК у целого ряда штаммов A.tumefaciens и A.radiotacter • Впервые показано, что антионкогенное действие плазмид pSa или кзев сочетается с их способностью снижать уровень продукции ИУК трансконъюгантами ДО УРОВНЯ неонкогенных ШТЭММОВ A.tumefaciens и A.radiotacter, причем обработка инфицируемых растений экзогенной ИУК обеспечивает химическую комплементацию One" фенотипа трансконъюгантов, содержащих плазмилу pSa или R388 , выражающуюся в восстановлении их онкогенности. Элиминация плазмид pSa или R388 из трансконъюгантов ведет к восстановлению онко-генной И фитогормональной функции Ti плазмиды штамма A.tumefaciens АТСС 15955, Полученные результаты указывают на важную роль ИУК бактериального происхождения в инлукции корончатых галлов на растениях и на возможную природу антионкогенной активности R плазмид ИЗ группы Inc W ( pSa И R388 ).

Установлено, что плазмида pSa повреждает и/или существенно модифици'рует клеточный липополисахарид в трансконъюгантах, несущих pTi 15955, в результате чего нарушается прикрепление последних к клеточной стенке растения. Однако этот эффект является строго специфичным, поскольку наблюдается только в одном штамме A.tumefaciens АТСС 15955 и отсутствует в штамме С58, Плазмида R388 не оказывает аналогичного эффекта в штаммах A.tumefaciens АТСС 15955 и С58.

Подавление Опс+ фенотипа Ti плазмид вирулентных штаммов A.tumefaciens ПЛаЗМИДвМИ pSa И R388 ИЗ Группы Inc W преДСТЭВ-ляет большой интерес в практическом отношении. Мы предполагаем, что такое взаимодействие R плазмид с pTi , приводящее к подавлению онкогенной активности штаммов A.tumefaciens , МОЖвТ быть использовано в качестве одного из биологических методов защиты растений от корончатых галлов и борьбы с возбудителем этой болезни.

Заключение Диссертация по теме "Генетика", Фомичева, Виктория Владимировна

вывода.

1. Выявлено, что наряду с плазмидой pSa из группы inc v< ан-тионкогенной активностью В штаммах A.tumefaciens С p?i ОК-топинового (штамм АТСС 15955) и нопалинового (штамм С58) типов обладает также плазмида R388 из той же группы несовместимости W .

2. Антионкогенная активность является специфическим свойством плазмид pSa и R388 и не присуща еще одной плазмиде из группы inc w , R7K , а также плазмидам RP4 и R68.45 из группы Inc PI И RbK из группы Inc X .

3. Эффект плазмид рЗа и R388 не связан с вытеснением PTi из трансконъюгантов и подавлением ее соматических функций, включая катаболизм опинов.

4. Антионкогенная активность плазмид pSa и R368 сочетается с их способностью снижать уровень продукции ИУК трансконъюган-тами ДО уровня неонкогенных штаммов A.tumefaciens И А.ГЕ-diobacter.

5. Обработка инфицируемых растений экзогенной ИУК обеспечивает химическую комплементацию One" фенотипа трансконъюгантов, содержащих плазмиду pSa или R388 , выражающуюся в восстановлении их вирулентности.

6. Элиминация плазмид pSa или R388 из трансконъюгантов ведет к восстановлению онкогенной и фитогормональной функции pTi 15955.

7. Имеется взаимосвязь между онкогенностью штаммов A.tumefaciens и уровнем продукции ИУК, указывающая на роль ИУК бактериального происхождения в.индукции корончатых галлов на растениях.

8, Показано, что плазмида pSa повреждает клеточный липополиса-харид в трансконъюгантах, несущих pTi 15955, Однако этот эффект является строго специфическим, поскольку наблюдается ТОЛЬКО В ОДНОМ штамме A.tumefaciens АТСС 15955 И Отсутствует в штамме С58. Плазмида Н388 не оказывает аналогичного эффекта В штаммах A.tumefaciens АТСС 15955 И С58.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Фомичева, Виктория Владимировна, Минск

1. Авдиенко И.Д., Зоз H.H., Сахарова М.Н., Чернин Л.С. Выделение И Характеристика штамма Agrobacterium tumefaciens С ПОвышенной продукцией ауксина.- В сб.: Тезисы докладов 16 конференции федерации европейских биохимических обществ, 1984, стр. 430.

2. Андрианов В.ГЛ. Плазмиды Agrobacterium как потенциальные векторные системы для генетической инженерии высших растений.-Генетика, 1984, т. XX, № 5, стр. 709-721.

3. Андрианоё В.М., Пирузян Э.С., Поглазов А.Б., Чернин Л.С. Клонирование Т-ДНК Ti плазмиды Agrobacterium tumefaciensВ ВвК-торную плазмиду RP4 .- В сб.: Метаболические плазмиды бактерий, Таллин, 1982, стр. 20.

4. Байдербек Р. Опухоли растений« М., Колос, 1981, 303 стр.

5. Воронин A.M. Внехромосомные детерминанты в развитии микроорганизмов.- В сб.: Онтогенез микроорганизмов., Москва, Наука, 1979, стр. 24-33.

6. Винецкий ЮЛ. Генетическая инженерия высших растений. Журнал Всесоюзного химического общества им. Д.И.Менделеева, 1984, т. XIX, № 2, стр. 37-40.

7. Галачьян P.M. Возбудители бактериальных опухолей как стимуляторы роста растений. Ереван, Из-во АН АрмССР, 1979,154 стр.

8. Георгиев Г.П., Ильин Ю.В., Рысков А.П., Крамеров Д.А. Мобильные диспергированные генетические элементы эукариот и их возможное отношение к канцерогенезу,- Генетика, 1981, т. ХУП, ih 2, стр. 222-229.

9. Гладун А.А., Сарнацкая В.В., Калинин Ф.Л. Изучение плазмид-НОЙ ДНК Agrobacterium tumefaciens В СВЯЗИ С ОПухОЛвОбраЗО-ванием у раотений.- В сб.: Молекулярная биология, 1979, т.24, стр. 54-57.

10. Горленко М.В. Распространение в СССР инфекционных патологических новообразований у растений.- В кн.: Проблемы онкологии и тератологии растений. Л., Наука, 1975, стр. 27-30.

11. Зоз Н.Н., Леманова Н.Б., Чернышева З.С., Петрова Н.Ф., Жилен-ко Н.А., Самусь Т.М., Морозова И.С., Павленко В.В. Проблемы защиты растений от бактериального рака,- В кн.: Патологические новообразования у растений, Черноголовка, 1983, стр. 12-26.

12. Израильский В.П., Ягу дин В.Д., Шкляр С.Н. Бактериальные болезни растений (под ред. Израильского В.П.). М., Колос, 1979, 288 стр.

13. Ильина Т.С. Генетика бактериальных плазмид.- В сб.: Итоги науки и техники. Микробиология-3, Генетика микроорганизмов. М., ВИНИТИ АН СССР, 1974, стр. 73-109.

14. Ильина Т.С,, Смирнов Г.БС Мигрирующие генетические элементыи их роль в эволюции бактерий,- В сб.: Итоги науки и техники. Микробиология-Ю, М., ВИНИТИ АН СССР, 1979, стр. 99-153.

15. Калинин Ф.Л., Сарнацкая В.В., Полищук В.Е. Применение метода культуры тканей в изучении опухолевой трансформации.

16. В кн.: Методы культуры ткани в физиологии и биохимии растений. Наук, думка, 1980, стр. 277.

17. Калиниченко АвН0 Заболевание малины стеблевым раком в Алтайском крае.- В кн.: Проблемы онкологии и тератологии растений. Л., Наука, 1975, стр. II6-II8.

18. Кефели В.И. Фитогормоны и природные ингибиторы в процессах роста растений.- В сб.: Биология развития растений (под ред. Чайлахяна М.Х.), М., Наука, 1975, стр. 89-110.

19. Меркис А.И. Ауксин и рост растений. Вильнюс, Мокслас, 1982, 200 стр.

20. Павленко В.В. Рак персика.- Защита растений от вредителей и болезней, 1963, № 6, стр. 50.

21. Полевой В.В. Фитогормоны. Л., Из-во Л1У, 1982 , 248 стр.

22. Слепян Э.И. Проблема патологических новообразований у растений, ее аспекты и их значение для науки, народного хозяйства и медицины.- В кн.: Проблемы онкологии и тератологии растений. Л., Наука, 1975, стр. 5-16.

23. Станко А.И., Тутевич И.Т. Бактериальный рак опасное заболевание винограда.- Садоводство, виноградарство и виноделие Молдавии, 1972, I, стр. 33.

24. Чайлахян М.Х. (ред). Биология развития растений. М., Наука, 1975, 230 стр.

25. Чернин Л.С. Молекулярная и генетическая организация плазма

26. ДЫ F И ее функционирование В Escherichia coli В сб.: Успехи современной генетики.М., Наука, 1978, т.7, стр. 32-63,

27. Чернин Л.С. Плазмида фитопатогенных бактерий в процессах онкогенеза и дифференцировки клеток растений.- В кн.: Патологические новообразования у растений. Черноголовка, 1983, стр. II4-I38.

28. Чернышева З.С., Назарчук B.C. Бактериальный рак как причина изреживания виноградных насаждений в Одесской области.-В кн.: Проблемы онкологии и тератологии растений. Л., Наука, 1975, стр. 155-157.

29. Amasino R.Li., and Liiller G.O. Hormonal control of tobacco crown gall tumor morphology.- Plant Physiol., 1982, v. 69, Ко 2, p. 389-392.

30. Bevan LI.W., Chilton M.-D. Multiple transcripts of T-LNA detected in nopaline crown gall tumors.- J. Mol. and Appl. Genet., 1982, v. I, No 6, p. 539-546.

31. Biemann K., Lioret C., Asselinean J., Lederer E., Polonski J. On the structure of lysopine, a new amino acid isolation from crown gall tissue.- Biochim. Biophys. Acta, I960, v. 40, Ho 2, p. 369-370.

32. Bomhoff G., Klapwijk P.M., Kester H.C., Schilperoort R.A., Her-nalsteens J.P., Schell J. Octopine and nopaline synthesis and breakdown genetically controlled by a A. tumef aciens.- LIol. Gen. Genet., 1976, v. 145, No 2, p. 177-181. .

33. Braun A.C. Thermal studies on the factors responsible for tumor initiation in crown gall.- Ammer. J. Bot., 1947, v. 34, p. 234-240.

34. Braun A.C. Plant tumours.- Biochim. Biophys. Acta, 1978, v.516, No 2, p. I67-I9I. •

35. Cavara P. Bacteria are the cause of plant tumors on grapevines - Stn. Sper. Ital. Modena, 1897, v. 30, p. 482-484.

36. Chapman R.W., Morris R.O., Zaerr J.B. Occurence of trans-ribosylzeatin in Agrobacterium tumefaciens tRNA.- Nature (London), 1976, v. 262,No 5563, p. 153-154.

37. Chatterjee A., Starr M. Transfer among Erwinia and other Ente-robacteria of antibiotic resistance carried R-factors.- J. Bac-teriol., 1972, v. 112, No I, p. 576-584.

38. Chilton M.-D., Drummond M.H., Merlo D.J., Sciaky D. Highly conserved DNA of Ti plasmids overlaps T-DNA, maintained in plant tumors.- Natures 1978 a, v. 275, No 5676, p. 147-149.

39. Chilton M.-D., Drummond M.H., Merlo D.J., Sciaky D., Montoya A.Lo, Gordon M.P., JNester E.W. Stable incorporation of plasmid DNA into higher plant cells: the molecular basis of crown gall tumorigenesis.-Cell, 1977, v. II, p. 263-271.

40. Chilton M.-D., Merlo D.J., Yang E.M., Drummond M.H., Garfinkel D.J., Saiki R., Nutter R.C., Wester E.W., Gordon M.P. Studies of the T-DNA of Agrobacterium Ti plasmids»- Proc. 4-th Int. Conf. Plant Pathog. Bact., Angers, 1978(3 , v. I, p. I09-II3.

41. Chilton M.-D., Montoya AeL., Merlo J.D., Drummond M.H., Nutter R., Gordon M.P., Nester E.Vv. Restriction endonuclease mapping of a plasmid that confers oncogenity upon Agrobacterium tumefaciens strain B6-806.- Plasmid, I978B , v. I, p. 254-269.

42. Chilton M.-D., Saiki R.K., Yadav N., Gordon M.P., Quetier P. T-DNA from Agrobacterium Ti plasmid is in the nuclear DNA fraction of crown gall tumor cells.- Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1980, v. 77, Ko 7, p. 4060-4064.

43. Cohen S.H. Transposable genetic elements and plasmid evolution. Hature, 1976, v. 263, Ho 5580, p. 731-738.

44. Comai L., Kosuge T. Involvment of plasmid deoxyribonucleic acid in indoleacetic acid synthesis in Pseudomonas savastanoi.

45. J. Bacteriol., 1980, v. 143, Ho 2, p. 950-957.

46. Comai L., Surico G., Kosuge T. Relation of plasmid D1TA to indoleacetic acid production in different strains of Pseudomonas syringae pv. savastanoi.- J. Gen. Microbiol., 1982, v. 128,1. Ho 9, p. 2157-2163.

47. Coetzee J.H., Datta IT., and Hedges R.W. R factors from Proteus rettgeri.- J. Gen. Microbiol., 1972, v. 72, Ho 3, p. 543-552.

48. Das P.K., Basu M., Chatterjee G.C. Lipideprofile of the strains of Agrobacterium tumefaciens in relation to agrocine resistance. Appl. Microbiol., 1979, v. 25, Ho I, p. 1-9.

49. De Greve H., Decraemar H., Seurinck J., Van Montagu M., Schell J. The functional organization of octopine Agrobacterium tumefaciens plasmid pTiB6S3.- Plasmid, 1981, v. 6, No 2, p. 235248.

50. Depicker A., Van Montagu M., Schell J. Homologous DNA sequences in different Ti plasmids are essential for oncogenicity.-Nature, 1978, v. 275, No 567b, p. 150-153.

51. Depicker A., Stachel S., Dhaese P., Zambryski P., Goodman H.M. Nopaline synthase: transcript mapping and DNA sequence.- J. Mol.and Appl. Genet., 1982, v. I, p. 561-574.

52. De Vos G., De Beuckeleer M„, Van Montagu M., Schell J. Restriction enaonuclease mapping of octopine tumor inducing plasmid pTiAch5 of Agrobacterium tumefaciens.- Plasmid, 1981, v.6, No 2, p. 249-253.

53. Einset J.W., Cheng A. Regeneration of tobacco plant from crown gall tumor.- In vitro, 1979, v. 15, N° 9, p. 703-708.

54. Elliot C. Manual of bacterial plant pathogenes.- Chronica Botanica, Waltham, Mossachusetts, 2 nd ed., 1951, p. 3-12.

55. Ellis J., Kerr A., Tempe J., Petit A. Arginine catabolism: a new function of both octopine and nopaline Ti plasmids of Agrobacterium.- Mol. Gen. Genet., 1979 a,v. 173,Ko 3, p. 263-269.

56. Ellis J.G., Kerr A., Van Montagu M., Schell J. Agrobacterium:genetic studies on agrocin 84 production and the biological control of crown gall.- Physiol. Pathol., 1979 (3, v. 15, p. 311-319.

57. El-Khalifa ivI.P., lippincott J.A. The influence of plant growth factors on primary pinto bean leaves.- J. Expt. Bot., 1968,v. 19, Mo 61, p. 749-759.

58. Engler G., Holsters 1,1., Van Montagu M., Schell J., Hernalsteens J.P., Schilperoort R.A. Agrocin 84 sensitivity: a plasmid determinated property in A.tumefaciens.- Mol. Gen. Genet., 1975,v. 138, Ho 4, p. 345-349.

59. Falkow S. Infections multiple drug resistance. Pion, London, 1975.

60. Farrand S.K., Kado C.I., Ireland C.R. Suppression of tumorige-nicity by the Inc W R-plasmid pSa in Agrobacterium tumefaciens.-Mol. Gen. Genet., 1981, v. 181, No I, p. 44-51.

61. Galsky A.G., Lippincott J.A. Production of a gibberellin like substance by strains of A.tumefaciens.- Plant Physiol., 1967, v. 42, S29.

62. Garfinkel D.J., Nester E.W. Agrobacterium tumefaciens mutants affected in crown gall tumorigenesis and octopine catabolisra.-J. Bacteriol., 1980, v. 144, No 2, p. 732-743.

63. Garfinkel L.J., Simpson R.3., Ream L.W., White F.F., Gordon M.P., Nester E.W. Genetic analysis of crown gall: fine structure map of the T-DNA by site-directed mutagenesis.- Cell, 1981,v. 27, p. 143-153.

64. Gelvin S.B., Thomashow M.F., Mc Pherson J.C., Gordon M.P., Nester E.W. Size and map positions of several plasmid-DNA-encoded transcripts in octopine-type crown gall tumors.- Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1982, v. 79, No I, p. 76-80.

65. Genetello C., Van Larebeke A., Holsters M., Depicker A., Van Montagu M., Schell J. Ti-plasmid of Agrobacterium as conjugati-ve plasmid.- Nature, 1977, v. 265, No 5594, p. 561-563.

66. Goldmann A.', Thomas D.W., Morel G. Sur la structure de la no-paline metabolite anormal de certaines tumeurs de crown gall.-C.R. Acad. Sci.(Paris), 1969, v. 268, p. 852-854.

67. Gordon S.A., Weber R.P. Colorimetric estimation of indoleacetic acid.- Plant Physiol., 1951, v. 26, No I, p. 192-195.

68. Gresshoff P.M„ Phytogormones and growth and differentiation of cells and tissues cultured in vitro.- In: D.S. Letham, Goodwin

69. P. and Higgins T.J. (eds). Phytohormones and related compaunds/ a comprehensive treatise, v. II, Elsevier/ North Holland Pub., 1978, p. 1-29.

70. Gresshoff P.M., Scotnicki M.L., and Rolfe B.G. Crown gall teratoma formation is plasmid and plant controlled.- J. Bacteri-ol., 1979, v. 137, No 2, p. I020-I02I.

71. Guyon P., Chilton M.-D., Petit A., Tempe J. Agropine in "nulltype" crown gall tumors: evidence for generality of the opine concept.- Proc. Natl. Acad. Sei. USA, 1980, v. 77, No 5,p. 2693-2697.

72. Hahn Ho, Heitmann I., Blumbach LI» Cytokinins: production and biogenesis of №-( ^-isopentenyl) adenin in cultures of A.tumefaciens, strain B.6. Z. Planzenphysiol., 1976, v. 79,p. 143-153.

73. Heidekamp P., Dirkse W.G., Hille J., Ormondt H. Van. Nucleotide sequence of the Agrobacterium tumefaciens octopine Ti plasmid-encoded tmr gene.- Nucl. Acids Res., 1983, v. II, No 18, p.62II-6223.

74. Hernalsteens J.P., De Greve H., Van Montagu M., Schell J. Mutagenesis by insertion on of the drug resistance transposon Tn7 applied to the Ti plasmid of Agrobacterium tumefaciens.- Plasmid, 1976, v. I, p. 218-225.

75. Herrera-Sstrella L., De Block M., Messens E«, Hernalsteens J.P., van Montagu M., Schell J. Chimeric genes as a dominantselectable markers in plant cells.- ELBO J., 1983a,v. 2, p. 987-991.

76. Herrera-Estrella L., Depicker A., Van Montagu Li. t Schell J. Expression of chimaeric genes transferred into plant cells using a Ti-plasmid-derivec vector.- Nature, 1983(5 , v. 303, Ho 5914, p. 209-213.

77. Holsters M., Hernasteens J.P., Van Montagu Lh, Schell J. Ti plasmids of Agrobacterium tumefaciens: nature of the TIP. In Molecular biology of plant tumors. Academic Press Inc., 1982, p. 269-298.

78. Iyer V.N., Klee H.J., Neater E.W. Units of genetic expression in the virulence region of a plant tumor-inducing plasmid of Agrobacterium tumefaciens.- Mol. Gen. Genet., 1982, v. 188, No 3, p. 418-424.

79. Johson R., Guderian R.H., Enden P., Chilton M.-D., Gordon M. P., Nester E.W. Detection and quantitation of octopine in normal plant tissue and crown gall tumor tissue.- Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1974, v. 71, No 2, p. 536-539.

80. Kado C.I., Lurquin P.Pe Reconstitution of plasmid BNA with tobaccco mosaik virus protein for introducing plasmid into hairy plant cell.- In: Microbiology-1978, Washington, D.C., 1978, p. 231-234.

81. Kaiss-Chapman R.V/c, Morris R.O. Trans-zeatin in culture filtrates of Agrobacterium tumefaciens.- Biochem. Biophys. Res. Commun., 1977, v. 76, No 2, p. 453-459.

82. Kao J.C., Perry K.L., Kado C.I. Indoleacetic acid complementation to host range specifying genes on the Ti plasmid of Agrobacterium tumefaciens.- Mol. Gen. Genet., 1982, v. 188,1. No 3, p. 425-432. •

83. Kaper J.M., Veldstra H. On the metabolism of tryptophan by A.tumefaciens.- Biochim. Biophys. Acta, 1958, v. 30, No 2,p. 401-420.

84. Kemp J.D. A new amino-acid derivative presence in crown gall tumor tissue.- Biochem. Biophys. Res. Commun., 1977, v. 74, No 3, p. 862-868.

85. Kerr A. Biological control of crown-gall: seed inoculation.-J. Appl. Bacterid., 1972, v. 35, p. 493-497.

86. Kerr A., Htai K. Biological control of crown gall through bac-teriocin production.- Physiol. Plant Pathol., 1974, v. 4, No I, p. 37-48.

87. Kerr Ao, Roberts W.P. Agrobacterium: correlation between and transfer of pathogenicity, octopine ana nopaline metabolism and bacteriocin 84 sensitivity.- Physiol. Plant Pathol., 1976, v. 9, No 2, p. 205-211.

88. Kersters K., De Ley J., Sneath P.H.A., Sakin I.i. Numerical ta-xonomic analysis of Agrobacterium.- J. Gen. Microbiol., 1973, v. 78, No 2, p. 227-239.

89. Klein R.M., Link G.K.K. Studies on the metabolism of plant neoplasms.V. Auxins as a promoting agent in the transformation of normal to crown-gall tumor cells.- Proc. Natl. Acad. Sci. USA (Wash.), 1952, v. 38, p. 1066-1072.

90. Koekman B.P., Ooms G., Klapwijk P.M., Schilperoort R.A. Genetic map of an octopine Ti plasmid.- Plasmid, 1979, v. 2,No 3, P. 347-357.

91. Lawton ivi.A., and Chilton M.-D. Agrobacterium Ti plasmid as potential vectors for genetic engineering.- Hord Science, 1984, v. 19, p. 40-42.

92. E22. Leemans J., Deblaere R., Willmitzer L., De Greve H., Hernals-teens J.P., Van Montagu LI., Schell J. Genetic identification of functions of TL-DNA transcripts in octopine crown gall.-The EMBO J., 1982 a, v. I, p. 147-152.

93. Lippincott J.A., Lippincott B.B. Auxin and crown-gall tumor initiation.- Phytopathology, 1965, v. 58, p. 1058.

94. Lippincott J.A., Lippincott B.B. The genus Agrobacterium and plant tumorigenesis.- Ann. Rev. Microbiol., 1975, v. 29,p. 377-406.

95. Lippincott B.B., Whatley M.H., and Lippincott J.A. Tumor induction by Agrobacterium involves attachment of the bacterium to a site on the host plant cell wall.- Plant Physiol., 1977, v. 59, No 3, p. 388-390.

96. Lin B.-C. and Kado C.I. Studies on Agrobacterium tumefaciens. VII. Avirulence induced by temperature and ethiaium bromide.-Can. J. Microbiol., 1977, v. 23, No II, p. I554-I56I.

97. Liu S.-Tc, Kado C.I. Inaoleacetic acid production: a plasmid function of Agrobacterium tumefaciens.- Biochem. Biophys. Res. Commun., 1979, v. 90, No I, p. I7I-I78.

98. Liu S.-T., Perry K.L., Schandle C.L., Kado C.I. Agrobacterium Ti plasmid inaoleacetic acid gene is requered for crown gall oncogenesis.- Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1982, v. 79, No 9, p. 2812-2816.

99. Loper J.E., Kado C.I. Host range conferred by the virulence-specifying plasmid of Agrobacterium tumefaciens.- J. Bacteri-ol., 1979, v. 139,No 2, p. 591-596.

100. Lowry O.H., Rosebrough N.J., Parr A.L., Randall R.J. Protein measurement with the Polin phenol reagent.- J. Biol. Chem., 1951, v. 193, No I, p. 265-275.

101. Lurquin P.P. Entrapment of plasmid DNA by liposome and their interactions with plant protoplasts.- Nucl. Acids Res., 1979,v. 6, No 12, p. 3773-3784.

102. Matzke A.J.M„, Chilton II.-D. Site-specific insertion of genes into T-DNA of the Agrobacterium tumor-inducing plasmid: an approach to genetic engineering of higher plant cells.- J.

103. Mol. and Appl. Genet., 1981, v. 1, No I, p. 39-49.

104. Mc Closkey J.A., Hashizume T., Basile B., Ohno Y., Sonaki S, Occurence and levels of cis- and trans-zeatin ribosides in culture medium of a virulent strain of Agrobacterium tumefaciens.- Pebs-Letters, 1980, v. Ill, No I , p. I8I-I83.

105. Mc Pherson J.C., Nester E.W., Gordon iVi.P. Proteins encoded by Agrobacterium tumef aciens Ti plasmid DNA (T-DNA) in crown gall tumors.- Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1980, v. 77, No 5, p.2666-2670.

106. Messens E., Clayes LI. Ti plasmid encoded production of cytoki-nins in culture media of Agrobacterium tumefaciens.- In: Proc. 4-th Int. Conf. Plant Path. Bact. Angers, 1978, p. 169-170.

107. Lion toy a A.L., Chilton M.-D., Gordon M.P., Sciaky D., Nester E.V/o Oct opine and nopaline metabolism in A.tumefaciens and crown gall tumor cells: role of plasmid genes.- J. Bacterid., 1977, v. 129, No I, p. I0I-I07.

108. Moore L., Warren G., Stroble G. Involvment of a plasmid in the hairy-root disease of plant caused by Agrobacterium rhi-zogenes.- Plasmid, 1979, v. 2, No 4, p. 617-626.

109. Morris R.O., Chapman R.W. Cytokinins in A.tumefaciens tRNA.-Plant Physiol., 1975, v. 56, Supplo, p. 28.

110. Murai N., Kemp J. Octopine synthase mRNA isolated from sunflower crown gall callus is homologous to the Ti plasmid of Agrobacterium tumefaciens.- Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1982, v. 79, No I, p. 86-90.

111. Nester E.W., Montoya A. Crown gall: a natural case of genetic engineering.- ASM News, 1979, v. 45, P» 283-287.

112. Nester E.We, Kosuge T. Plasmids specifying plant hyperplasias Ann. Rev. Microbiol., 1981, v. 35, P* 531-565.

113. Ooms G., Hooykaas P.J.J., Moolenaar G., Schilperoort R.A. Crown gall plant tumors of abnormal morphology, induced by Agrobacterium tumefaciens, carrying mutated octopine Ti plasmids, analysis of T-DNA functions. Gene, 1981, v. 14, No 1/2, p. 3350.

114. Otten L., Vrfugdehhil D., Schilperoort R.A. Properties of D+-lisopine-dechydrogenase from crown gall tumor tissue.- Bio-chim. Biophys. Acta, 1977, v. 485, Ho 2, p. 268-277.

115. Roberts W.P., Tate Ы.Е., Kerr A. Agrocin 84 is 6-N-Phosphor-amidate of adenin nucleotid analogue.- Nature, 1977, v. 265, No 5532, p. 379-381.

116. Regier D.Ac, Morris R.0. Secretion of trans-zeatin by Agrobacterium tumefaciens: a function determined by the nopaline Ti plasmid. Biochem. Biophys. Res. Commun., 1982, v. 104, No 4, p. 1560-1566.

117. Sacristan M.D., Melchers G. Regeneration of plants from "habituated" and "Agrobacterium-transformed" single-cell clones of tobacco.- Mol. Gen. Genet., 1977, v. 152, Ro I, p. III-II7.

118. Schell J. On the transfer and expression of procaryotic DHA in plant cells transformed by Agrobacterium turaefaciens.-Hoppe-Seyler's J. Physiol. Chem., 1977, v. 358,No 4, p. 422-423,

119. Schell J. The use of the Ti plasmid as a vector for the introduction of foreign MA into plants.- In: Proc. 4-th Int. Conf. Plant Path. Bact., Angers, 1978, v. I, p. II5-I26.

120. Schell J., Van Montagu M. Genetic interactions and gene transfer.- In: Brookhaven Symp. in biology, Brookhaven, Eat. Lab., Upton, H.Y., 1978, v. 29, p. 36-49.

121. Schell J., Van Montagu M., De Beuckeleer M., De Block M., Depicker Ac, De Wilde M., Engler G., Genetello C., Hernalsteens

122. J.P., Holsters M., Senrinc K.J., Silva B., Van Vliet P., Villaroel R. Interactions and DlvA transfer between Agrobacteriumtumefaciens, the Ti plasmid and the plant host.- Proc. R. Soc.1.nd. ser. B., 1979, v. 204, Ho 1155, p. 251-266.

123. Schilperoort R.A., Klapwijk P.M., Qoms G., 7/ullems G.J. Planttumours caused by bacterial plasmids: crown gall.-In Cleton

124. F.J., Simons J.V/.I.M. (eds). Genetic origins of tumor cells.

125. Martinus Hifhoff Publishers bv. The Hague, Boston, London,1980, p. 67-108.it 11

126. Schroder G., Klipp W., Hillebrand A., Ehring R., Konocz C.,

127. Genet., 1982, v. 165, No I, p. 51-55.ti tt1.3o Schroder G., Waffenschmidt S., Weiler E.W., Schroder J. The

128. T-region of Ti plasmids codes for an enzyme synthesizing in-dole-3-acetic acid.- Eur. J. Biochem., 1984, v. 138, No 2, p. 387-391.

129. Simpson R.B., O'Hara P.J., Kwok Montoya A.L., Lichtestein C., Gordon Ii.P., Nester E.W. DNA from the AoS/2 crown gall tumor contains scrambled Ti-plasmid sequences near its functions with plant DNA.- Cell, 1982, v. 29, No 3, p. I005-I0I4.

130. Stepp C. Pflanzenpathogene bacterien. Verlag Paule Parey, Hamburg, 1958.

131. Stonier T. Agrot&cterium tumefaciens Coun. II. Production of an antibiotic substance .- J. Bacteriol., I960, v. 79,p. 889-898.

132. Sukanya N.K., Vaidyanothan G.S. Aminotransferase of A.tumefaciens.- Biochem. J., 1964, v. 92, No 3, p. 594-598.

133. Tanner J.W., Anderson I.C. External effect of combined nitrogen on nodulation.- Plant Physiol., 1964, v. 39, No 6, p.1039-1043.

134. Tait R.C., Lundquist R.C., Kado C.I. Genetic map of the crown gall supressive Inc W plasmid pSa.- idol. Gen. Genet., 1982, v. 186, No I, p. 10-15.

135. Tait R.C., Close T.J., Lundquist R.C., Hagiya 1*1., Rodriguez R.L., Kado C.I. Construction and characterization of a versatile broad host range cloning system for gram negative bacteria.- Biotechnol., 1983 a, v. I, p. 269-275.

136. Tait R.C., Kado C.I., Rodriguez R.L. A comparison of the origin of replication of pSa with R6K.- Mol. Gen. Genet., 1983 d, v. 192, No 1/2, p. 32-38.

137. Tate M.E., Murphy P.J., Roberts W.P., Kerr A. Adenin N6-subs-tituent of agrocin 84 determines in bacteriocin-like specificity.- Nature, 1979, v. 280, No 5724, p. 697-699.

138. Temper J., Petit A., Holsters M., Van Montagu M., Schell J.

139. Thermosensitive step associated with transfer of the Ti plas-mid during conjugation: possible relation to transformation of crown gall.- Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1977, v. 74, No 7, p. 2848-2849.

140. Turgeon R., Wood M.K., Brown A.C. Studies on the recovery of crown gall tumor cells.- Proc. Natl. Acad. Sci. (Y<ash.), 1976, v. 73, No 10, p. 3562-3564.

141. E90. Upper.C.D., Hedgeson J.PC, Kemp J.D., Schmidt C.J. Gal-liquid chromotographic isolation of cytokinins from natural sources.-Plant Physiol., 1970, v. 45,No 5, p. 543-547.

142. I. Van Lare"beke N., Engler G., Holsters M., Van den Elsacker S., Zaenen I., Schilperoort R.A., Schell J. Large plasmid in A.tumefaciens essential for crown gall inducing ability.- Nature, 1974, v. 252, No 5479, p. 169-170.

143. Van Montagu M., Schell J. The plasmids of Agrobacterium tumettfaciens.- In: Timmis K., Puhler A.(eds), Plasmids of medical, enviromental and commercial importance. Elsevier, Amsterdam, 1979, p. 71-96.

144. Veldstra H. Plant tumors and crown gall and analysis of autónomas growth.- In: Proc. 3-th Int. Conf. Plant Path. Bact., Toronto, Univ. Toronto Press, 1972, p. 213-222.

145. Vidaver A.K. The plant pathogenic Corynebacteria.- Ann. Rev.

146. Watson Be, Currier T.C., Gordon M.P., Chilton M.-D., Nester E.W. Studies on a plasmid required for virulence of A.tumefaciens.- J. Bacteriol., 1975, v. 123, No I, p. 255-264.

147. Weiler E.W., Spanier K. Phytohormones in the formation of crown gall tumors.- Planta, 1981, v. 153, P* 326-337.

148. White P.R., Braun A.C« A cancerous neoplasm of plants. Autono-mons bacteria-free crown-gall tissue.- Cancer Res., 1942, v.2, p. 597-617.

149. White F.F., Ghidossi G., Gordon M.P., Nester E.W. Tumor induction by Agrobacterium rhizogenes involves the transfer of plasmid DNA to the plant genome.- Proc, Natl. Acad. Sei. USA, 1982, v. 79, No 10, p. 3193-3197.

150. Willmitzer L., Sanchez-Serrano J., Buschfeld E., Schell J. DNA from Agrobacterium rhizogenes is transferred to and expressed in axenic hairy root plant tissues.- Mol. Gen. Genet., 1982, v. 186, No I, p. 16-22.

151. Yaaav N.S., Van der Leyden J., Benett D.R., Barnes V«;.M., Chilton M.-D. Short direct repeats flank the T-DNA on a nopaline Ti-plasmid.- Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1982, v. 79, No 20,1. Fc 6322-6326.

152. Yang P., Mc Pherson J.C., Gordon ¡¿.P., Nester 3.W. Extensive transcription of foreign DNA in a crown gall teratoma.- Biochem. Biophys. Comaun. Res., 1980 a, v. 92, No 4, p. 1273-1277.

153. Yang P., Montoya A.L., Merlo D.J., Drummond M.H., Chilton M.-D., Nester E.W., Gordon M.P. Foreign DNA sequences in crown gall teratomas and their fate during the loss of tumorous traits.-Mol. Gen. Genet., 1980 <5, v. 177, No 4, p. 707-714.

154. Yanssens A., Engler G., Zambryski P., Van Montagu M. The nopaline C58 T-DNA region is transcribed in Agrobacterium tumefa-ciens.- Lah. Voor. Genetica, Rijksuniversiteit Gent., 13-9000, Gent., Belgium, 1984, v. 195, p. 341-350.

155. Zaenen 1«, Van Larebeke N., Teuchy HM Van Montagu M., Schell J. Supercoiled circular DNA in crown-gall inducing Agrobacterium strains.- J. Mol. Biol., 1974, v. 86, No I, p. 109-127.

156. Zambryski P., Holsters M., Krugger K., Depicker A., Schell J., Van Montagu M., Goodman H.M. Tumor DNA structure in plant cells transformed by A.tumefaciens.- Science, 1980, v. 209, No 4463, p. I385-I39I.