Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Роль экстраклеточных структур агробактерий в контакте с поверхностью бактериальной и растительной клеток

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Волохина, Ирина Васильевна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Агробактериальная трансформация двудольных растений.

1.2. Биология агробактерий.

1.3. Этапы агробактериальной трансформации растений.

1.3.1. Хемотаксис и прикрепление агробактерий к стенке растительной клетки.

1.3.2. Белки и белковые структуры ризобий и агробактерий, участвующие в прикреплении к растительной клетке.

1.3.3. Рецепторы на поверхности растительных клеток для прикрепления агробактерий.

1.3.4. Экспрессия генов агробактерий в ответ на растительные фенолы.

1.3.5. Формирование Т-комплекса.

1.3.6. Выход Т-ДНК из бактерии через ш>5-зависимый канал.

1.3.7. Перенос Т-комплекса в ядро растительной клетки, и встраивание Т-ДНК в геном растительной клетки.

1.3.8. Формирование опухоли.

1.4. Системы переноса ДНК у агробактерий.

1.5. Общие черты процессов агробактериальной трансформации и бактериальной конъюгации.

ГЛАВА И. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Штаммы и плазмиды, используемые в работе.

2.2.1. Среды, условия культивирования.

2.2.2. Растения.

2.2.3. Приготовление экстрактов из растительных тканей.

2.2.4. Измерение количества прикрепившихся к корням пшеницы бактерий радиоизотоным методом.

2.2.5. Полуколичественное определение эффективности прикрепления бактерий к корневым волоскам растений с помощью световой микроскопии.

2.2.6. Электронная микроскопия.

2.2.6.1. Сканирующая электронная микроскопия.

2.2.6.2. Трансмиссионная электронная микроскопия.

2.2.7. Измерение концентрации клеток.

2.2.8. Выделение плазмидной ДНК.

2.2.9. Метод иммунодота.

2.2.10. Мечение целых клеток для просвечивающей электронной микроскопии.

2.2.11. Подсчет трансконъюгантов при скрещивании агробактерий.

2.2.12. Статистическая обработка результатов.

III. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

3.1. Исследование влияния физико-химических факторов на частоту переноса плазмиды pTd33 между агробактериями.

3.1.1. Влияние ацетосирингона и рН среды на перенос плазмиды pTd

3.1.2. Влияние температуры скрещивания на частоту переноса плазмиды pTd33 между агробактериями.

3.1.3. Влияние центрифугирования, SDS и блокиратора синтеза белка (КЦХГ) на перенос плазмиды pTd33 между агробактериями

3.2. Внеклеточные структуры агробактерий, принимающие участие в межклеточных контактах.

3.2.1. Локализация и идентификация Уй:В2-зависимых структур на поверхности агробактерий.

3.2.2. Локализация и идентификация VirBl-зависимых структур на поверхности агробактерий.

3.3. Прикрепление агробактерий с неиндуцированными v/r-генами к корням и корневым волоскам пшеницы.

3.3.1. Динамика прикрепления агробактерий к поверхности корня пшеницы.

3.3.2. Связь прикрепления агробактерий к поверхности корня пшеницы с наличием Ti-плазмиды.

3.4. Прикрепление агробактерий с индуцированными vz'r-генами к поверхности корня и к корневым волоскам пшеницы

3.4.1. Влияние предобработки агробактерий экстрактом каланхое.

3.4.2. Влияние предобработки агробактерий ацетосирингоном на способность прикрепляться к поверхности корня и корневого волоска пшеницы.

3.4.3. Влияние температуры выращивания и совместной инкубации на vir-зависимое и vzr-независимое прикрепление агробактерий.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Роль экстраклеточных структур агробактерий в контакте с поверхностью бактериальной и растительной клеток"

Актуальность проблемы.

Конец 20-го века обозначен, как время "второй зеленой революции", когда в мировом сельском хозяйстве ведущую роль начинают играть трансгенные растения. Несмотря на интенсивное развитие различных методов переноса генетической информации в растительные клетки, использование агробактериальной системы, остается наиболее широко распространенным методом трансформации, в первую очередь для двудольных растений.

В природе A.tumefaciens вызывает образование опухолей на растении в результате встраивания части Ti-плазмиды, Т-ДНК, внутрь растительного генома. В генетической инженерии растений используют вектора, в которых у Т-ДНК удалены гены, вызывающие образование опухоли.

Хотя в этой области достигнуты значительные результаты, но механизм переноса Т-ДНК в растение до сих пор до конца не изучен. Понимание механизма агробактериальной трансформации особенно важно для разработки способов преодоления хозяйской специфичности этих микроорганизмов при использовании агробактерий для трансформации однодольных растений, как наиболее важных сельскохозяйственных культур. Причины и молекулярные механизмы, ограничивающие трансформацию однодольных растений, до конца не ясны. Возможно, что ограничение трансформации, может быть следствием отсутствия сайтов для прикрепления бактерий на растительной клетке, или сигнальных молекул, запускающих процесс агробактериальной трансформации.

Существенным моментом в процессе заражения растений агробактериями является распознавание партнеров, которое опосредуется процессами синтеза и рецепции специфических компонентов или сигнальных молекул, а так же формирование у организмов специфического 7 физиологического ответа на них. В связи с этим, изучение механизма адсорбции бактериальных клеток к специфическим рецепторам на поверхности реципиентной клетки растения-хозяина, является крайне важным для понимания причин успешной колонизации и инфицирования микроорганизмами растительных тканей.

В 1987 году была высказана гипотеза о возможном сходстве механизмов агробактериальной трансформации и бактериальной конъюгации, где основную роль играют контактные взаимодействия клеток партнеров.

Физический контакт донорной и реципиентной клеток при бактериальной конъюгации происходит при помощи половых пилей, которые появляются на поверхности клеток донора, несущего конъюгативную плазмиду с ^га-генами, и способны специфически связываться с поверхностью бесплазмидных клеток-реципиентов. Другой поверхностной структурой, необходимой при бактериальной конъюгации, является ДНК-проводящий канал или конъюгационная пора для переноса ДНК через мембраны донорной и реципиентной клеток.

Агробактериям при трансформации растений так же необходимо взаимодействие с клеткой хозяина и образование канала для переноса Т-ДНК в растительную клетку. Но в отличие от бактериальной конъюгации Т-комплекс переносится через мембраны клеток различных типов, включая цитоплазму и мембраны А. turn efaciens, растительную плазматическую и ядерную мембраны. Причем последние две мембраны значительно удалены друг от друга в пространстве.

Хотя бактериальная конъюгация уже давно используется как модельная система для исследования процесса переноса высокомолекулярных нуклеиновых кислот через биологическую мембрану, структурная организация и механизм функционирования канала для переноса ДНК при конъюгации у бактерий, так же как и канала для переноса Т-ДНК при агроинфекции неизвестен. В связи с этим изучение ранних этапов 8 агробактериальной трансформации растений и, в частности, поверхностных структур, играющих основную роль в этом процессе, является важной и интересной задачей для научного исследования.

Цель работы - изучение роли v/r-зависимых и v/r-независимых экстраклеточных структур у агробактерий в процессах переноса ДНК в системах бактерия-бактерия и роли этих структур в установлении первичного контакта в системе бактерия-растение.

Задачи исследования

1) Определить влияние биохимических и физико-химических факторов на частоту переноса плазмиды pTd33 между агробактериями.

2) Локализовать v/r-зависимые и v/r-независимые поверхностные структуры агробактерий, принимающие участие в межклеточных контактах.

3) Изучить особенности прикрепления агробактерий С( индуцированными и не индуцированными vzr-генами к поверхности корня и корневых волосков пшеницы.

4) Определить участие v/r-зависимых поверхностных структур агробактерий в прикреплении к поверхности корня и корневых волосков пшеницы.

Научная новизна

Установлено влияние физико-химических факторов (температура, рН среды, центрифугирования, обработка детергентом), на частоту переноса плазмиды pTd33 между агробактериями. Определены оптимальные условия для Wr-зависимого переноса неконъюгативной плазмиды pTd33. 9

На поверхности агробактерий выявлены пилеподобные структуры, состоящие из VirBl- и VirB2-белков. Обнаружено формирование vir-независимых экстраклеточных структур различной морфологии у агробактерий при конъюгации. Установлено участие v/r-зависимых белков, но не в У1гВ2-белка, процессе первичного контакта агробактерий с поверхностью кончиков корневых волосков, но не с клетками эпидермиса корня пшеницы.

Впервые показана стимуляция адсорбционных свойств агробактерий под воздействием раневых эксудатов растений и ацетосирингона, и зависимость процесса адсорбции от температурных условий.

Научно-практическая значимость

Результаты экспериментальных исследований по особенностям прикрепления агробактерий к тканям растения-хозяина позволяют повысить эффективность методов трансформации растений и могут быть использованы для оптимизации методов получения трансгенных растений и в селекционной практике.

Материалы диссертации используются при чтении спецкурса "Биологические мембраны" на факультете нелинейных процессов Саратовского государственного университета им. Н.Г.Чернышевского.

Результаты диссертационной работы использовались при подготовке курсовых и дипломных работ студентами биологического факультета СГУ.

Методические рекомендации. Данные по исследованию влияния биохимических и физико-химических факторов на процесс агробактериальной трансформации были использованы для оптимизации метода трансформации растений сорго (НИИСХ Юго-Востока, г. Саратов).

10

На защиту выносятся следующие основные положения:

1. Специфическая индукция v/r-генов ацетосирингоном вызывает увеличение частоты переноса плазмиды pTd33 между агробактериями при коньюгативном процессе. Физико-химические факторы (температура, рН среды, механическое удаление, обработка детергентом) изменяют частоту переноса плазмиды pTd33 между агробактериями.

2. Т-пили, состоящие из \%В2-белка, локализованы на одном из полюсов KJivioKA.tumefaciens в виде пучка тонких гибких фибрилл.

3. VirBl-белок образует агрегаты на поверхности агробактерий. VirBl-белок не обнаруживается в составе структур, при коньюгативном процессе.

4. У фитопатогенных агробактерий при коньюгативном процессе наблюдается образование v/r-независимых экстраклеточных структур различной морфологии.

5. Агробактерии с индуцированными vir -генами прикрепляются к корням и корневым волоскам пшеницы активнее, по сравнению с агробактериями с не индуцированными v/r-генами, и формируют экстраклеточные структуры для взаимодействия с поверхностью растительной клетки (корневых волосков пшеницы), в число которых входят v/'r-зависимые белки.

Апробация работы

Материалы, диссертации были представлены на: 5-м и 6-м Международных Симпозиумах по бактериальной генетике и экологии,

11

Напфлион, Греция, 1996; Флоренция, Италия, 1999); 8-м Международном Конгрессе по молекулярной биологии растительно-микробного взаимодействия, (Ноксвилл, США, 1996); Международном Симпозиуме по почвенной микробиологии (Давос, Швейцария, 1996); Втором съезде биохимического общества Российской Академии наук (Москва, 1997); 17-м Международном Конгрессе по биохимии и молекулярной биологии (Сан-Франциско, Калифорния, 1997); 7-м Международном Конгрессе по фитопатологии (Эдинбург, Шотландия, 1998); VII-ой Конференции "Новые направления биотехнологии" (Москва, 1998); 2-м съезде биофизиков России (Москва, 1999); Всероссийском Симпозиуме "Изучение генома и генетическая трансформация растений" (Иркутск, 1999); школе-конференции молодых ученых «Горизонты физико-химической биологии» (Пущино, 2000); 5-й школе-конференции молодых ученых «Биология - наука 21 века» (Пущино, 2001); на Международном симпозиуме «Молекулярные механизмы генетических процессов и биотехнологии» (Москва-Минск, 2001); на ежегодных научных конференциях ИБФРМ РАН (Саратов, 1995-2001).

Структура и объем работы

Диссертация состоит из введения и трех глав, в том числе обзора литературы, материалов и методов исследования, изложения полученных результатов и их обсуждения, заключения, выводов и списка использованных литературных источников. Работа изложена на 128 страницах, иллюстрирована 22 рисунками и включает 12 таблиц. Список использованных литературных источников включает 155 наименований, из них 23 работы на русском языке и 132 англоязычных публикации.

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Волохина, Ирина Васильевна

выводы

1. Специфическая иидуция v/r-генов ацетосирингоном вызывает увеличение частоты переноса плазмиды pTd33 между агробактериями при конъюгативном процессе.

2. Установлено, что температурный интервал (19-25°С) и рН (5,5) являются оптимальными условиями для переноса плазмиды pTd33 между агробактериями. Повышение температуры до 30°С, центрифугирование, обработка SDS, ингибитором переноса электронов вызывают снижение частоты переноса плазмиды pTd33.

3 УпВ2-белок наблюдается в составе пилей, локализованых на одном из полюсов клеток A.tumefaciens, в виде пучка тонких гибких фибрилл у индуцированных ацетосирингоном клеток.

4. VirBl-белок образует агрегаты и пилеподобные структуры на поверхности агробактерий. VirBl-белок не обнаруживается в составе контактных структур у скрещивающихся агробактерий.

5. Обнаружено формирование ^-независимых экстраклеточных структур различной морфологии у агробактерий при конъюгации.

6. Охарактеризовано прикрепление патогенных агробактерий к поверхности корня и корневого волоска пшеницы в условиях индукции vzr-генов. Показана стимуляция адсорбционных свойств под воздействием раневых эксудатов каланхое. Обработка агробактерий ацетосирингоном приводит к увеличению числа бактерий, прикрепившихся к поверхности кончиков корневых волосков, но не к клеткам эпидермиса пшеницы. УпВ2-белок не принимает участие в формировании агрегатов на кончиках корневых волосков пшеницы. ill

112

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Агробактериальная трансформация стала основой современного направления сельскохозяйственной биотехнологии - получения трансгенных растений с новыми свойствами, а Т-ДНК - природным вектором, используемым для переноса новых генов в растение. Однако, несмотря на широкое практическое использование трансгенных растений, площадь которых в мире в настоящее время превышает 40 млн. га, многие процессы, посредством которых Т-ДНК транспортируется из Agrobacterium в растение, не изучены.

Одним из ключевых и наименее изученных аспектов механизма переноса Т-ДНК является контакт партнеров во время переноса ДНК и механизм переноса ДНК через мембрану бактериальной и растительной клетки.

Первоначальным этапом наших исследований было изучение прикрепления и конъюгативного контакта агробактериальной клетки с растительной и бактериальной клеткой. В частности, исследовался перенос плазмиды pTd33 между штаммами агробактерий с использованием vir-зависимого канала и Прикрепление агробактерий в v/r-индуцирующих условиях. Было определено влияние различных физико-химических факторов на частоту переноса плазмиды pTd33. На основании проведенных экспериментов установлено стимулирующее влияние обработки донорных клеток ацетосирингоном и пониженного рН на частоту переноса плазмиды pTd33 между агробактериями. Воздействие на донорную клетку (центрифугирование, обработка блокиратором дыхания (КЦХГ), SDS) перед скрещиванием и повышенная температура скрещивания (30°С) приводят к значительному снижению частоты переноса плазмиды pTd33 между агробактериями. Полученные экспериментальные данные позволяют сделать вывод, что предварительная обработка донорных клеток перед скрещиванием может нарушать экспрессию или конформацию структур, участвующих в процессе переноса плазмидной ДНК между агробактериями.

109

Адгезивные пили агробактерий были открыты более десяти лет, но их функция не установлена, vzr-зависимые пили агробактерий были открыты пять лет назад, и показана их роль в конъюгативном переносе плазмид между агробактериями, а также при переносе Т-ДНК в растение. Но конкретная функция и клеточная локализация пилей не установлена.

Методом иммуномечения в ходе данного исследования получены прямые доказательства локализации меченных коллоидным золотом антител к УпВ2-белку на пилеподобных структурах, которые обнаруживаются на поверхности клеток A.tumefaciens, обработанных ацетосирингоном. У агробактерий впервые описано образование vz'r-независимых тонких прямых фибрилл с неизвестной функцией и различной морфологии.

Прикрепление патогенных агробактерий и ризобий к поверхности двудольных растений играет важную роль в процессе инфекции. В процессе переноса, как Т-ДНК, так и плазмидной ДНК требуется прямой контакт партнеров, и нарушения в прикреплении негативно сказываются на успешности переноса ДНК. На основании анализа литературы выявлены наименее изученные ключевые моменты взаимодействия агробактерий и растений. К ним можно отнести прикрепление бактериальной клетки к поверхности растительной клетки, формирование канала для переноса Т-ДНКи УпЕ2-белка.

В нашей работе мы. показали, что при прикреплении к поверхности растительной клетки агробактерии начинают формировать экстраклеточные структуры, количество которых со временем увеличивается. Значительная часть экстраклеточных фибрилл патогенных и непатогенных агробактерий представлена целлюлозными фибриллами. Причем динамика прикрепления агробактерий к корням пшеницы сходна с динамикой прикрепления бактерий к двудольным растениям, но отличается от прикрепления к корневым волоскам. Клетки не располагаются равномерно по поверхности корня, а локализованы в отдельных местах, образуя агрегаты. Агрегаты из клеток агробактерий с внеклеточными фибриллами образуются преимущественно на кончиках молодых активно растущих волосков пшеницы.

110

Образование агрегатов из агробактерий на кончиках корневых волосков пшеницы и гороха может указывать на сходный механизм колонизации агробактерий на поверхности однодольных и двудольных растений.

Пили, как выступающие за пределы клетки надмембранные структуры, могут принимать участие в процессе первичного контакта с поверхностью растительной клетки. Наблюдается незначительный стимулирующий прикрепление эффект после обработки агробактерий ацетосирингоном во время инкубации с корнями при температуре 19-25°С. У агробактерий с индуцированными при 25°С vir-генами способность прикрепляться к кончикам корневых волосков пшеницы была оптимальной при температуре совместной инкубации 19-25°С.

Анализ действия ацетосирингона и температуры инкубации на прикрепление агробактерий к поверхности корня и корневого волоска пшеницы показывает, что изменения поверхности, вызываемые этими факторами, сказываются различным образом на прикрепление агробактерий к корню и кончикам корневых волосков.

Стимулирующее действие экстракта из листьев каланхое на прикрепление к корням и корневым волоскам пшеницы имеет сходный характер. Сигнальные растительные молекулы и рН оказывают сильное воздействие на агробактерии, запуская v/r-систему. У агробактерий, индуцированных ацетосирингоном при температуре 19-25°С, осуществляется синтез пилей, которые могут участвовать в прикреплении.

Таким образом, мы может отметить значительное сходство процесса прикрепления агробактерий к поверхности двудольных и однодольных растений. Различия в прикреплении к поверхности корня и корневого волоска существуют, но объяснить эту специфику прикрепления пока затруднительно.

Ill

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Волохина, Ирина Васильевна, Москва

1. Гринюс JI.JI. Транспорт макромолекул у бактерий // М., Наука. - 1986. -240с.

2. Захарченко Н.С., Каляева М.А., Бурьянов Я.И. Индуцирование процессинга агробактериальной Т-ДНК эксудатами однодольных растений // Физиология растений 1999. - Т.46. - С. 266-275.

3. Иванова Л.Ю., Емцев В.Т., Чумаков М.И. Модифицированный метод выделения ассоциированных азотфиксирующих бактерий из-под злаков.// Известия ТСХА. 1987. - №3 - с.112-115.

4. Карпунина Л.В., Вишневецкая О.А., Богатырев В.А., Никитина В.Е., Итальянская Ю.Е. Определение локализации лектинов и агглютининов у почвенных бактерий // Микробиология 1995. - Т. 64. - №.4. - С.453-457.

5. Кацы Е.И. Генетико-биохимические и экологические аспекты подвижности и хемотаксиси у фитопатогенных, симбиотических и ассоциированных с растениями бактерий. // Успехи современной биологии. 1996. - Т. 116. - С. 579-593.

6. Курбанова И.В., Соловова Г.К., Эльконин Л.В., Хон Б., Чумаков М.И. Агробактериальная трансформация однодольных растений // Изучение генома и генетическая трансформация растений. Материалы Всероссийского симпозиума, 23-27 августа, Иркутск.- 1999. С.15.

7. Курбанова И.В., Чумаков М.И. Образование внеклеточных структур, содержащих VirB2 белки в скрещивающихся культурах агробактерий // Биологические мембраны 2000. Т. 17. №.1. С.107-111.

8. Кучук Н.В. Генетическая трансформация высших растений, опосредованная бактериями из рода Agrobacterium. // Успехи современной биологии. 1997. - Т.117. - вып.6. - С.645-650.

9. Лутова Л.А., Павлова З.Б., Иванова М.М. Агробактериальная трансформация как способ изменения гормонального метаболизма у высших растений //Генетика. 1998. - Том.34. - №.2. - С.165-182.из

10. Ю.Манниатис Т., Фрич Э., Сэмбрук Дж. Молекулярное клонирование.// М.: Мир. 1984. - 480с.

11. П.Никитин Д.И., Васильева JI.B. Фимбрии у почвенных бактерий // Известия АН СССР, (серия биол.). 1965. - С. 400-402.

12. Пирузян Э.С. Основы генетической инженерии растений // М. Наука. -1988.-303 с.

13. И.Пухальский В.А., Смирнов С.П., Корыстылева Т.В., Билинская Е.Н., Елисеева А.А: Генетическая трансформация пшеницы (Triticum aestivum L.) с помощью Agrobacterium tumefaciens //Генетика. 1996. - Т.32. - №.11. - С.1596-1600.

14. Определитель бактерий Берджи / Ред. Дж. Хоулт., Н.Криг, П.Спит, Дж. Стейнли, С.Уилльямс.// М.: Мир. 1980 - 800 с.

15. Сабельников А.Г., Березкина Н.Е., Чупин В.В., Гонгадзе Г.М., Боровягин B.JI, Структурные изменения мембран Escherichia coli во время конъюгации // Биол. мембраны. 1994. - Т. 4. - С. 393-401.

16. Соловова Г.К., Кривопалов Ю.В., Беликов В.А., Чумаков М.И. Прикрепление Agrobacterium radiobacter 5D-1 к корням пшеницы //Микробиология. 1995. - Т. 64. - Вып. 4. - С. 623-630.

17. Соловова Г.К., Калаптур О.В., Чумаков М.И. Анализ прикрепления агробактерий к корням пшеницы и риса // Микробиология. 1999. - Вып. 68. - №. 1.-С. 63-68.

18. Титель Т., Эвальд Р. Границы проницаемости клеточных стенок в клеточных суспензиях. // Физиология растений. 1999 - т.46 - №6 - с. 845850.

19. Уи'кли Б. Электронная микроскопия для начинающих // М.:Мир. 1975. -324 с.

20. Чернин JI.C. Первые шаги в будущее: генная инженерия растений. М.: Агропромиздат. - 1990. - 256с.

21. Чумаков М.И., Курбанова И.В. Локализация VirBl белка на поверхности агробактерий // Биологические мембраны. 1998. - Т. 15. - Вып. 6. - С.719-721.114

22. Чумаков М.И. Перенос генетической информации из агробактерий в бактериальную и растительные клетки: мембранные и надмембранные структуры, участвующие в переносе (обзор) // Биологические мембраны -2000.-Т. 13. №.3. С.245-263.

23. Чумаков М.И., Курбанова И.В. Изучение конъюгативного переноса плазмиды pTd33 между штаммами агробактерий // Микробиология. -2000.-Т. 69. №.1. - С.81-88.

24. Achtman М., Morelli G., Schwuchow S. Cell-cell interaction in conjugating Escherichia coli: role of F pili and fate of mating aggregates. // J.Bacteriol. -1978. V.135. г P.1053-1061.

25. Aldemita R.R., Hodges Т.К. Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation of japonica and indica rice varieties.// Planta. 1996.- v.1999. -p.612-617.

26. Ankenbauer R.G. Best E.A., Palanca C.A., Nester E.W. Mutants of Agrobacterium tumefaciens virA gene exhibiting acetosyringone-independent expression of the vir regulon. // Molec. Plant-Microbe Interact. 1991. - V.4. -№.4. - P.400-406.

27. Ashby A.M., Watson M.D., Shaw C.H. A Ti-plasmid determined function is responsible for chemotaxis towards the plant wound product acetosyringone // FEMS Microbiol. Lett. 1987. - V. 41. - P. 189-199.

28. Baron C., Llosa M, Zhou S., Zambryski P. VirBl, a component of the T-complex tranfer machinery of Agrobacterium tumefaciens is processed to a C-terminal secreted product, VirBl //J.Bacteriol. 1997a. - V.179. - P. 1203-1210.

29. Belanger C., Loubens I., Nester E.W., Dion P. Variable efficiency of a Ti plasmid-encoded VirA protein in different agrobacterial host // J. Bacteriol. -1997. V.179. - №.7. - P.2305-2313.

30. Berger B.R., Christie P.J. The Agrobacterium tumefaciens v/>B4 gene product is an essential virulence protein requiring an intact nucleoside triphosphate-binding domain // J. Bacteriol. 1993. - V.175. - № 6. - P.1723-1734.115

31. Berger B.R. Christie P.J. Genetic complementation analysis of the Agrobacterium tumefaciens virB operon: vz>B2 through virB 11 are essential virulence genes // J.Bacteriol. 1994. - V.176. - №.12. - P.3646-3660.

32. Billing E. Entry and establishment of pathogenic bacteria in plant tissues // In: Bacteria and Plants / eds. Rhodes-Roberts M.E. and Skiner F.A. Academic Press Inc., London. 1982. - P.51-70.

33. Binns A.N., Thomashow M.F. Cell biology of Agrobacterium infection and transformation of plants // Ann. Rev. Microbiol. 1988. - V. 42. - P.575-606.

34. Bodman S.B., McCutchan J.E., Farrand S.K.Characterization of conjugal transfer functions of Agrobacterium tumefaciens Ti-plasmid pTiC58 // J.Bacteriol. 1989. - V.171. - №.10. - P.5281-5289.

35. Bogatyrev V.A., Dykman L.A., Matora L.Yu., Schwartsburg B.I. The serotyping of Azospirillum spp. by cell-gold immunoblotting // FEMS Microbiol. Lett. 1992. - V.96. - P.115.

36. Bradley D. E., Taylor D.E., Cohen D.R. Specification of surface mating system among conjugative drug resistance plasmids in Escherichia coli K-12 // J.Bacteriol. 1980. - V.143. - P 1466-1470.

37. Braun A.C. Thermal studies on the factor responsible for tumor initiation in cron gall // J.Botanica 1947 - v. 34 -p.234-240.

38. Buchanan-Wollaston V., Passiatore J.E., Cannon F. The mob and oriT mobilization functions of a bacterial plasmid promote its transfer to plants // Nature. 1987.:- Y.328. - P.172-175,

39. Bundock P., Hookaas P.JJ. Integration of Agrobacterium tumefaciens T-DNA in Saccharomices cerevisiae genome by illegitimate recombination // Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 1996. - V.93. - P.l5272-15275.

40. Cangelosi G.A., Ancenbauer R.G., Nester E.W. Sugar induce the Agrobacterium virulence genes through a periplasmic binding protein and a transmembrane signal protein // Proc.Natl.Acad.Sci. USA. 1990. - Y.87. -P.6708-6712.116

41. Charles T.C., Nester E.W. A chromosomaly encoded two component sensory transduction system is required for virulence of Agrobacterium tumefaciens II J.Bacteriol. 1993. - V.175. - P.6614-6625.

42. Chesnokova O., Coutinho J.B., Khan I.H., Mikhail M.S., Kado C.I. Characterization of flagella genes of Agrobacterium tumefaciens and the effect of a bald strain on virulence // Mol.Microbiol. 1997. - V.23. - P.579-590.

43. Cheysen G., Villarroel R., van Montagu M. Illgitimate recombination in plants: a model for T-DNA integration// Genes Dev. -1991. V.5. - P. 287-297.

44. Chilton M.- D., Drummond M.H., Merlo D.J., Sciaky D., Montoya A.L., Gordon M.P., Nester E.W. Stable incorporation of plasmid DNA into higher plant cells: the molecular basis of crown gall tumorigenesis // Dept. Bioch. -1977. V.ll. - P.263-271.

45. Christie P.J., Ward J.E., Winans S.C., Nester E.W. The Agrobacterium tumefaciens virE2 gene product is a sinle-stranded-DNA-binding protein that associates with'T-DNA // J.Bacteriol. 1988. - V.170. - №.6. - P.2559-2667.

46. Christie P.J. Agrobacterium. tumefaciens T-complex transport apparatus: a paradigm for a new family of multifunctional transporters in eubacteria // J.Bacteriol. 1997. - V.179. - P.3085-3094.

47. Chumakov M. I., Kurbanova I. V. Localization of the protein VirBl involved in contact formation during conjugation among Agrobacterium cells // FEMS Microbiol. Letters. 1998. - V.168. - P.297-301.

48. Citovsky V.C., Wong M.L., Zambryski P. Cooperative interaction of Agrobacterium VirE2 protein with single-stranded DNA: implications for the T-DNA transfer process // Proc. Natl. Acad. Sci. 1989. V.86. - P. 1193-1197

49. Citovsky V., Warnick D., Zambryski P. Nuclear import of Agrobacterium VirD2 and VirE2 proteins in maize and tobacco // Proc.Natl.Acad. Sci.USA. 1994 V. 91.- P.3210-3214.

50. Citovsky V., Guralnik В., Simon M.N., Wall J.S. The molecular structure of Agrobacterium VirE2-single DNA complexes involved in nuclear import // J.Mol.Biol.1997. V.272. - P.718-727.117

51. Cook D.M., Farrand S.K.The oriT region of the Agrobacterium tumefaciens Ti plasmid pTiC58 shares DNA sequence identity with the transfer origins of RSF1010 and RK2/RP4 and with T-region borders // J.Bacteriol. 1992. -V.174. - №.19. - P.6238-6246.

52. Cook D.M., Li P-L., Ruchaud F., Padden S., Farrand S.K.Ti plasmid conjugation is independent of vir: reconstruction of the tra functions from pTiC58 as a binary system // J.Bacteriol. 1997. - V.179. - P.1291-1297.

53. Coorley M.B., D'Souza M.R., Kado C.I. The virG and virD operons of the Agrobacterium Ti plasmid are regulated by the Ros chromosomal gene: analysis of the cloned Ros gene// J. Bacteriol. 1991. - V.713. - №.8. - P.2608-2616.

54. Cornish A., Greenwood J.A., Jones C.W. Binding-protein-dependent sugar transport by Agrobacterium radiobacter and A. tumefacients grouwn in continuous culture // J.Gen. Microbiol. 1989. - V.135. - P.3001-3013.

55. Clore A.M., Dannenhoffer J.M., B.A. Larkins EF-la is associated with cytoskeletal network surrounding protein bodies in maize endosperme cells // Plant Cell. 1996. - V.8. - P.2003-2014.

56. Dang T.A.T., Christie P. The VirB4 ATPase of Agrobacterim tumefaciens is a cytoplamic membrane protein exposed at the periplasmic surface // J.Bacteriol. 1997.-V. 179.-P.453-462.

57. Dazzo F.B., Napoli C.A., Hubbell D.H. Adsorption of bacteria to roots as related to host spesifity in the Rhizobium-oXoMtx symbiosis // Appl. Environ. Microbiol. 1976. - V.32. -P.166-171.

58. Dazzo F., Hollingsworth R.E. Trifoliin A and carbohydrate receptors as mediators of cellular recognition in the Rhizobium trifolii-clover symbiosis // Biol.Cell. 1984a. - V.51. - P.267- 274.

59. De.Cleene M., De Ley J. The host range of crown gall //Bot. Rev. 1976. -V.42. -№. 4. - P.389-466.

60. Dumas, F., Duckely, M., Pelczar, P., Van Gelder, P. & Hohn, B. An Agrobacterium VirE2 channel for transferred-DNA transport into plant cells // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2001. - V.98. - P. - 485-490.118

61. Durrenberger M.B., Villiger W., Bachi Th. Conjugation junction: morphology of specific contact in conjugating Escherichia coli bacteria I I J.Struct.Biol. -1991. V.107. - P. 146-156.

62. Engstrom P., Zambryski P., van Montague M., Stachel S. Characterization of Agrobacterium tumefaciens virulence proteins induced by the plant factor acetosyringone // J.Mol.Biol. 1987. - V.197. - P.635-645.

63. Escudero J., Hohn B. Transfer and integration of T-DNA without cell injury in the host plant // The Plant Cell. 1997. - V.9. - P.2135-2142.

64. Farrand S.K., Hwang I., Cook D.M. The tra region of the nopaline-type Ti-plasmid is a chimera with elements related to the transfer systems of RSF1010, RP4 and F// J.Bacteriol 1996. - V.178. - P.4233-4247.

65. Filichkin S.A., Gelvin S.B. Formation of putative relaxation intermediate during T-DNA processing directed by the Agrobacterium tumefaciens VirDl,VirD2 endonucleases // Mol.Microbiol. 1993. - V. 8. -P.915-926.

66. Fullner K.J., Lara J.C., Nester E.W. Pilus assembly by Agrobacterium T-DNA transfer genes // Science. 1996a. - V.273. - P.1007-1009,

67. Fullner K.J, Nester E.W. Temperature affects the T-DNA transfer machinery of Agrobacterium tumefaciens // J.Bacteriol. 1996b. V.178. - P. 1498-1504.

68. Fullner K.J. Role of Agrobacterium virB genes in transfer of T complexes // J.Bacteriol. 1998. V.180. №.2. P. 430-434.

69. Gelvin S.B., Habeck L.L. Vir gene influence conjugal transfer of the Ti plasmid of Agrobacterium tumefaciens //J.Bacteriol. 1990. - V.172. - P. 16001608.

70. Graves A.E., Goldman S.L., Banks S.W., Graves A.C.F. Scanning electro microscope studies of Agrobacterium tumefaciens attachment to Zea mays, Gladiolus sp., and Triticum aestivum // J. Bacteriol. 1988. - V.170. - №.3. -P.2395-2400.119

71. Hapfelmeier S., Domke N., Zambryski P., Baron C. VirB6 Is required for stabilization of VirB5 and VirB3 and formation of VirB7 homodimers in Agrobacterium tumefaciens II J. Bacteriol. 2000. - V. 182. - №. 16. - P. 45054511.

72. Hawes M.C., Pueppke S.G. Correlation between binding of Agrobacterium tumefaciens by root cap cells and susceptibility of plants to crown I I Plant Cell Reports. 1987. - V.6. - №.4. - P.287-290.

73. Hawes M.C., Smit L.Y. Requirement for chemotaxis in pathogenisity of Agrobacterium tumefaciens on roots of soil-grown pea plants //J.Bacteriol. -1989. V.171. - P.5668-5675.

74. Hooykaas P.J.J., Klapwijk P.M., Nuti M.P., Schilperoort R.A., Rorsch A. Transfer of the Agrobacterium tumefaciens Ti plasmid to avirulent Agrobacterium and to Rhizobium ex planta I/ J. Gen. Microbiol. 1977. -V.98. - P.477-484.

75. Hooykaas P.J.J., van Brussel A.A.N., den Dulk-Ras H., van Slogteren G.M.S., Schilperoort R.A. Sym plasmid of Rhizobium trifolii expressed in different rhizobial species and Agrobacterium tumefaciens 11 Nature -. 1981. Y.291. -P.351-353.

76. Hooykaas P. J. J., A.G.M. Beijersbergen. The virulence system of Agrobacterium tumefaciens П Annu. Rev.Phytopathol. 1994. - V.32. - P. 157179.

77. Howard E.A., Zupan J.R.,Citovsky V., Zambryski P.C. The VirD2 protein of A.tumefaciens contains a C-terminal bipartite nuclear localization signal: implications for nuclear uptake of DNA in plant cells //Cell. 1992. - V.68. -P.109-118.

78. Huang Y. VirA, coregulator of Ti-specified virulence genes, is phosphorylated in vitro // J.Bacteriol. 1990. - V.172. - P.l 142-1144.

79. Hwang I., Smyth A.J., Luo Z.Q., Farrand S.K. Modulating quorum sensing by antiactivation: TraM interacts with TraR to inhibit activation of Ti plasmid conjugal transfer genes // Mol. Microbiol. 1999. - V.34. - P.282-294.120

80. Isaakson R.E. Pilus adhesins // In: Bacterial Adhesion Mechanisms and Phisiological Significance / Eds. Savage D.C., Fletcher M. Plemium press. New York and London. 1985. - P.307-336.

81. Johansen I., Boye E. Acquisition of tumour-inducing ability by non-oncogenic agrobacteria as a result of plasmid transfer // Nature. 1975. - V.255. - P.742-743.

82. Jones A.L., Lai E-M., Shirasu K., Kado C.I. VirB2 is a processed pilin-like protein encoded by the Agrobacterium tumefaciens Ti plasmid // J.Bacteriol. -1996. -V.178. -P. 5706-5711.

83. Kado С. I. Promiscuous DNA transfer system of Agrobacterium tumefaciens: role of the virB operon in sex pilus assembly and synthesis. 11 Molec. Microbiol. -1994. V.12. - №.1. - P.17-22.

84. Kahl G. Molecular biology of wound healing: the conditioning phenomenon // In: ■ Molecular Biology of Plant Tumors. Kahl G., Schell J. (eds.). New York Academic Press. 1982. - P.211-268.

85. Kemner J.M., Liang X., Nester E.W. The Agrobacterium tumefaciens virulence gene chvE is a part of a putative ABC-type sugar transport operon //J.Bacteriol. 1997. - V.179. - №.7. - P.2452-2458.

86. Kerr A., Nane M.E. Agrocins and the biological control of crown gall // Biological Sciences. 1984. - V.l. - №.1. - P. 1-4.

87. Knauf V.C., Panagopoulos C.G., Nester E. W. Genetical factor controling the host range of Agrobacterium tumefaciens 11 Phytopathology. 1982. - V.72. -№.12.-P.1545-1549.

88. Krens F.A., Molendijk L., Wullems G.J., Schilperoort R.A. The role of bacterial attachment in the transformation of cell-wall-regenerating tobacco protoplasts by Agrobacterium tumefaciens // Planta. 1985. - V.l66. - P.300-306.

89. Kuehn M.J., Ogg D.J., Kihlberg J., Slonim L.N., Flemmer K., Bergforrs Т., S.J. Hultgren Structural basis of pilus subunit recognition by the PapD chaperone // Science. 1993. - V.262. - P.1234-1241.121

90. Kuldau G., De Vos G., Owen J., McCaffrey M., Zambryski P. The virB operon of Agrobacterium tumefaciens pTiC58 encodes 11 open reading frames // Mol.Gen.Genet. 1990. - V.221. - P.256-266.

91. Kunik Т., Tzfira Т., Kapulnik Y., Gafni Y., Dingwall C., Citovsky V. Genetic transformation of HeLa cells by Agrobacterium II Proc.Natl.Acad.Sc.USA. -2001. V98. - P. 1871-1876.

92. Lai E-M., Kado C.I. Processed VirB2 is the major subunit of the promiscuos pilus of Agrobacterium tumefaciens И J.Bacteriol. 1998. - V.180. - P.2711-2717.

93. Lanka E., Wilkins B. DNA processing reaction in bacterial conjugation // Ann.

94. Rev. 1995. - V. 64. - P.141-169.

95. Lessl M., Balzer D., Pansegrau W., E.Lanka Sequence similarities between the RP4 Tra2 and the Ti-plasmid VirB region strongly support the conjugation model for T-DNA transfer // J.Biol.Chem.1992. V. 267. - P.20471-20480.

96. Lessl M., Lanka E. Common mechanisms in bacterial conjugation and Ti-mediated transfer to plant cells // Cell. 1994. - V.77. - P.321-324.

97. Lippincott B.B., Lippincott J.A. Bacterial attachment to a specific wound site as an essential stage in tumor initiation by Agrobacterium tumefaciens II J.Bacteriol. 1969. - V. 97. - №.2,- P.620-628.

98. Lippincott B.B., Whatley M.H., Lippincott J.A. Tumor induction by Agrobacterium involves attachment of the bacterium to a site on the host plant cell wall // Plant Physiol. 1977. - V.59. - P.388-390.

99. Matthysse A.G., Wyman P.M., Holmes K.V. Plasmid-dependent attachment of Agrobacterium tumefaciens to plant tissue culture cells // Inf. Immun. 1978. -V.22.-№.2,-P.516-522.

100. Matthysse A.G., Holmes K.V., Gurlitz R.H.G. Elaboration of cellulose fibrils by Agrobacterium tumefaciens during attachment to carrot cells // J.Bacteriol. -1981. V.145. - №.1. - P.583-595.

101. Matthysse A., Gurlitz R.H.G. Plant cell range for attachment of Agrobacterium tumefaciens to tissue culture cells // Physiol. Plant Pathol. -1982122

102. Matthysse A.G. Mechanisms of bacterial adhesion to plant surfaces // In: Bacterial Adhesion Mechanisms and Phisiological Significance / Eds. Savage D.C., Fletcher M. New York and London. Plemium Press. 1985. - P.255-278.

103. Matthysse A.G., Thomas D.L., White S. Mechanism of cellulose synthesis in Agrobacterium tumefaciens II J.Bacteriol. 1995. - Y.177. - №.4. - P.1076-1081.

104. McAinsh M.R., Brownlee C., Hetherington A.M. Visualizing changes in cytosolic-free Ca2+ during the response of stomatal guard cells to abscisic acid //Plant Cell. 1992. - V.4. - P. 1113-1122.

105. Messens E., Dekeyser R., Stachel S. Nontransformable Triticum monococcum monocotyledonous culture produces the potent Agrobacterium v/r-inducing compount ethyl ferulate // Proc. Natl.Acad.Sc.USA. 1990. -V. 87. - P.4368-4372.

106. Narasimhulu S.B., Deng X.-B., Sarria R., Gelvin S.B. Early transcription of Agrobacterium T-DNA genes in tobacco and maize I I The Plant Cell. 1996. -V.8. - P.873-886.

107. Nation J.L. A new method using hexamethyldisilazane for preparation of soft insect tissues for scanning electron microscopy.// Stain Technol. 1983. -v.58. - p.347-351.

108. Neu T.R. Significance of bacterial surface-active compounds in interaction of bacteria with interfaces //Microbiol. Rev. 1996. - V.60. - № 1. - P. 151-166.

109. Ohyama K., Pelcher L.E., Schaefer A.E., Fowke L.C. In vitro binding of Agrobacterium tumefaciens to plant cells from suspension culture // Plant Physiol. 1979. - V.63. - P.382-387.

110. Pansegrau W., Lanka E. Enzymology of DNA transfer by conjugation mechanisms // Progress in Nucl. Acid Res. & Molec.Biol. 1996. - V.54. -P. 197-251.

111. Piers K.L., Heath J.D., Liang X., Stephens K.M., Nester E.W. Agrobacterium tumefaciens-medmtQd transformation of yeast // Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1996. - V.93. №. - 4. - P.1613-1618.123

112. Piper K.R.,: von Bodman S. В., Farrand S.K. Conjugation factor of Agrobacterium. tumefaciens regulates Ti plasmid transfer by autoinduction // Nature. 1993. - V.362. - P. 448-450.

113. Robinson J.B., Tuovinen O.H., Bauer W.D.Role of divalent cations in the subunit associations of complex flagella from Rhizobium meliloti //J.Bacteriol. -1992. V.174. - №1. - P.3896-3902.

114. Rossi L., Hohn.B., Tinland B. Integration of complete transferred DNA units is dependent on the activity of virulence E2 protein of Agrobacterium tumefaciens II Proc. Natl. Acad. Sci.USA. 1996. - V.93. - P.126-130.

115. Schmidt-Eisenlohr H., Domke N., Angerer СWanner G., Zambryski P.C., Baron C. Vir protein stabilize VirB5 and mediate its association with the T pilus of Agrobacterium tumefaciens I I J.Bacteriol. 1999. - V.181. - №24. -P.7485-7492.

116. Schroder G., Waffenschmidt S., Weiler E.W., Schroder J. The T-region of Ti plasmid codes for an enzyme synthesizing indole-3-acetic acid // Eur. J. Biochem. 1984. - V.138. - P.387-391.

117. Schroder J., Lintig J.V., Zanker H. Functional organization of the region responsible for nopaline and octopine catabolism in Ti plasmids of Agrobacterium tumefaciens I I Kluwer Academic Publishers. The Netherlands. -1991. V.l. - P.28-31.

118. Shimoda N., Toyoda-Yamamoto A., Aoki S., Machida Y. Genetic evidence for an interaction between the Vir A sensor protein and the ChvE sugar-binding protein of Agrobacterium // J.Bacteriol. 1993. - V.268. - №35. - P.26552-26558.

119. Shirasu K., Kado С. I. Membrane location of the Ti plasmid VirB proteins involved in the biosynthesis of a pilin-like conjugative structure on124

120. Agrobacterium tumefaciensl'/ FEMS Microbiol. Letters. 1993b. - V. 111. -P.287-294.

121. Silverman P.M. Towards a structural biology of bacterial conjugation //Mol. Microbiol. 1997. - V. 23. - P.423-429.

122. Smit G., Kjine J.W., Lugtenberg B.J.J. Correlation between extracellular firbils and attachment of Rhizobium leguminosarum to pea root hair tips // J.Bacteriol. 1986. - V.168. - P.821-827.

123. Smit G., Kijne J.W., Lugtenberg B. J.J. Both cellulos fibrils and Ca 2+-dependent adhesin are involved in the attachment of Rhizobium leguminosarum to pea root hair tips I I J.Bacteriol. 1989. - V. 171. - №1. - P.569-572.

124. Sonti R.V., Chiurassi M., Wong D., Davies C.S., Harlow G.R., Mount D.W. Singer E.R. Arabidopsis mutants deficient in T-DNA integration // Proc. Natl. Acad. Sci.USA. 1995. - V.92. - P.l 1786-11790.

125. Stachel S.E., Messens E., van Montagu M., Zambryski P. Identification of the signal molecules produced by wounded plant cells that activate T-DNA transfer in Agrobacterium tumefaciens //Nature. 1985. V.318. - P.624-629.

126. Stachel S.E., Timmerman В., Zambryski P.C. Generation of single-stranded T-DNA molecules during the initial stages of T-DNA transfer from Agrobacterium tumefaciens to plant cells // Nature. 1986a. - V.322. - P.706-711.

127. Stachel S.E., Zambryski. P.C. Agrobacterium tumefaciens and the susceptible plant cell: a novel adaptation of extracellular recognition and DNA conjugation // Cell. 1986c. - V.47. - P.155-157.

128. Stachel S.E., Nester E.W., Zambryski P.C. A plant cell factor induces Agrobacterium tumefaciens vir gene expression. 11 Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1986d.-V.83.-P.379-383.

129. Stachel S.E., Nester E.W. The genetic and transcriptional organization of the vir region of the A6 Ti plasmid of Agrobacterium tumefaciens // EMBO J. -1986e. V.5. - P.1445-1454.125

130. Steck T.R., Kado C.I. Virulence genes promote conjugative transfer of the Ti plasmid between Agrobacterium strains I I J.Bacteriol. 1990. - V.172. - P. 2191-2193.

131. Stemmer W.P.C., Sequeira L. Fimbriae of phytopathogenie and symbiotic bacteria // Phytopathol. 1987. - V.77. - №.12. - P.1633-1639.

132. Swart S., Smit G., Lugtenberg B.J.J., Kijne J.W. Restoration of attachment, virulence and nodulation Agrobacterium tumefaciens chvB mutants by rhicadhesin // Mol.Microbiol. 1993. - V.10. - P.597-605.

133. Sundberg C. D., Ream W. The Agrobacterium tumefaciens chaperone-like protein, VirEl, interacts with VirE2 at domains required for single-stranded DNA binding .and cooperative interaction 11 J.Bacteriol. 1999. - V.181. -№.21. -P.6850-6855.

134. Tempe J., Petit A., Holsters M., Montagu M., Shell J. Termosensivity step associated with transfer of the Ti plasmid during conjugation possible relation to transformation in crown gall // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1977. - V. 711. - P. 2848-2849.

135. Tinland В., Koukolikova N.Z., Hall M.N., Hohn B. The T-DNA-linked VirD2 protein contains two distinct functional nuclear localization signals // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1992. - V.89. - P.7442-7446.

136. Tinland B. The integration of T-DNA into plant genomes// Trends of Plant Science- 1996:-V.I.-P. 178-184.

137. Tinland В.- Hohn В., H. Puchta Agrobacterium tumefaciens transfers single-stranded trasferred DNA (T-DNA) into the plant cells nucleus // Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1994. V.91. P.8000-8004.

138. Tinland В., Schoumacher F., Gloeckler V., Bravo-Angel A.M., Hohn B. The Agrobacterium tumefaciens virulence VirD2 protein is responsible for precise126integration of T-DNA into plant genome // The EMBO J. 1995.V.14. P.3585-3595.

139. Thorstenson Y.R., Kuldau G.A., Zambryski P.C. Subcellular localization of seven VirB proteins of Agrobacterium tumefaciens: implications for the formation of a T-DNA transport structure 11 J.Bacteriol. 1993. - V.l 75. - №16. - P.5233-5241.

140. Thomashow M.F., Karlinsey J.E., Marks J R., Hurlbert R.E. Identification of a new virulence locus in Agrobacterium tumefaciens that affects polysaccharide composition and plant cell attachment // J. Bacteriol. 1987. -V.169. - №7. - P.3209-3216.

141. Usami S., Morikawa S., Takebe I., Machida Y. Factors inducing Agrobacterium tumefaciens vir gene expression present in monocotyledonous plants// Mol. Gen. Genet. 1987. - V.209. - P.221-226.

142. Vesper S.J., Bauer W.D. Characters of Rhizobium attachment to soybean roots. // Symbiosis. 1985. - V.l. - P.139-162.

143. Vesper S.J., Bauer W.D. Role of pili (fimbriae) in attachment of Bradyrhizobium japonicum altered in attachment to host roots // Appl. Environ. Microbiol. 1986. - V.52. - P.134-141.

144. Wagner V., Matthysse A.G. Involvement of a vitronectin-like protein in ttachment of Agrobacterium tumefaciens to carrot suspension culture cells 11 J.Bacteriol. 1992. - V. 174. - №18. - P. 5999-6003.

145. Wall L.G., Favelukes G. Early recognition in the Rhizobium meliloti-alfalfa symbiosis: root exudate factor stimulates root adsorption of homologus Rhizobia/l J.Bacteriol. -1991. V.173. - № 11. - P.3492-3499.

146. Whatley M.H., Bodwin J.S., Lippincott B.B., Lippincott J.A. Role for Agrobacterium cell envelope lipopolysaccharide in infection site attachment // Inf. Immun. 1.976. - V.13.-№4.-P.1080-1083.

147. Weiss A.A„ Johnson F.D., Burns D.L. Molecular characterisation of an operon required for pertussis toxin secretion // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. -1993. V.90. - P.2970-2974.127

148. Willetts N,, Skurray R. Structure and function of the F factor and mechanism of conjugation // In: Escherichia coli and Salmonella typhimurium: Cellular and Moleculare Biology/ 1987. - V. 2. - P.l 110-1133

149. Yusibov V.M., Steck T.R., Gupta V., Gelvin S.B. Association of single-strand transferred DNA from Agrobacterium tumefaciens with tobacco cells // Proc. Natl. Acad. USA 1994. - V.91. - P.2994-2998.

150. Zambryski P. Chronicles from the Agrobacterium-plant cell DNA transfer story // Annu.Rev.Plant Physiol. Plant Mol.Biol. 1992. - V. 43. - P. 465-490.

151. Zhu J.-K., Damsz В., Kononowicz A.K., Bressan R.A. and P.M. Hasegawa. A higher plant extracellular vitronectin-like adhesion protein is related to the translational elogation factor-la // The Plant Cell. 1994. - V.6. - P.393-404.1281. БЛАГОДАРНОСТИ

152. Я признательна всем коллегам ИБФРМ РАН за оказанную помощь и поддержку.