Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Влияние природных каротиноидов на витаминный и минеральный состав тканей и органов кур-несушек, пигментацию желтка

ВАК РФ 03.01.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Влияние природных каротиноидов на витаминный и минеральный состав тканей и органов кур-несушек, пигментацию желтка"

004618335 На правах рукописи

Вострикова Светлана Михайловна

ВЛИЯНИЕ ПРИРОДНЫХ КАРОТИНОИДОВ НА ВИТАМИННЫЙ И МИНЕРАЛЬНЫЙ СОСТАВ ТКАНЕЙ И ОРГАНОВ КУР-НЕСУШЕК, ПИГМЕНТАЦИЮ ЖЕЛТКА

03.01.04 - биохимия

Автореферат диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических наук

2 3 /\С!{ .ад

Курск-2010

004618835

Работа выполнена в ГОУ ВПО «Белгородский государственный университет»

Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор

Шапошников Андрей Александрович

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор

Еременко Виктор Иванович

кандидат биологических наук, доцент Яковлева Инесса Николаевна

Ведущая организация: Государственное научное учреждение «Всероссийский научно-исследовательский институт животноводства Российской академии сельскохозяйственных наук»

Защита состоится «/3 » 2010 года в часов на заседа-

нии диссертационного совета17Д 220^040.03 при ФГОУ ВПО «Курская государственная сельскохозяйственная академия имени профессора И.И. Иванова» по адресу: 305021, г. Курск, ул. К. Маркса, 70.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Курская государственная сельскохозяйственная академия имени профессора И.И. Иванова».

Автореферат разослан 2010 г. и размещён на сайте

http:// www.kgsha.ru

Учёный секретарь диссертационного совета

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Промышленное птицеводство - одна из интенсивных и динамичных отраслей сельского хозяйства. Развитие этой отрасли обусловлено высокой рентабельностью, ценными питательными и диетическими свойствами получаемой продукции. В питании человека большое значение имеют куриные яйца, являющиеся прекрасными источниками белков, липидов и других питательных веществ.

Реализация генетического потенциала продуктивности кур зависит от многих факторов. Но наиболее важную роль для ведения интенсивного птицеводства в условиях промышленной технологии содержания птицы играет её полноценное, сбалансированное по питательным, минеральным и биологически активным веществам кормление. При дисбалансе или недостатке каких-либо компонентов рациона в организме происходят нарушения метаболического и иммунного статуса, в результате чего снижается продуктивность и качество получаемой продукции (В.И. Георгиевский, 1970; В.И. Фисинин, 1998; И. Егоров, 2003; Т.С. Кузнецова, 2004; Т.Н. Хамидуллин, 2005; E.H. Андрианова, 2007).

Основная тенденция совершенствования технологии кормления и ветери-нарно-профилактических мероприятий современного птицеводства - разработка и внедрение в производство функциональных кормовых добавок. Важным компонентом комбикорма являются витаминные добавки, недостаток которых приводит к нарушению ферментативных процессов обмена веществ, снижению продуктивности животных и увеличению риска возникновения заболеваний. К их числу относятся и каротиноиды, которые наряду с А-витаминной активностью, являются самостоятельными участниками ряда биохимических процессов (А.Г. Кощаев, 2008).

В мире постоянно растёт спрос на продукты птицеводства, целенаправленно обогащенные важными для человека соединениями. Это позволяет создавать так называемые функциональные пищевые продукты, которые благодаря повышенному накоплению физиологически активных пищевых ингредиентов при систематическом употреблении снижают риск развития заболеваний (ГОСТ 52349-2005) и поэтому могут быть рекомендованы в профилактических целях. Это относительно новое направление в животноводстве получило название -пищевой дизайн (food design), который ставит главной целью производство продуктов питания с заданными свойствами путём целенаправленного изменения рациона кормления животных (В. Фисинин, 2007; В.И. Фисинин, АЛ. Штеле, 2008; Я.О. Хорбаньчук и др. 2009).

Доказано, что путём обогащения йодом, селеном, полиненасыщенными жирными кислотами, витаминами, натуральными каротиноидами комбикормов для птицы можно получать яйца с прогнозированным химическим составом и новыми функциональными свойствами. Яйца с заданным уровнем ка-ротиноидов и цветом желтка являются одним из продуктов питания высокого качества, производство которых организовано в промышленных масштабах (А. Османян и др., 2003; М. Сурухи, 2004; А. Штеле и др., 2004; В.И. Фисинин, А.Л. Штеле, 2008а).

Основные компоненты каротиноидного комплекса желтка - ксантофиллы: лютеин и зеаксантин, источником которых могут быть вегетативная масса растений или зерно кукурузы, добавляемые в кормовые смеси.

Для обогащения яиц каротиноидами в мире используются различного рода добавки, как природные, так и синтетические. Часто они предназначены для обеспечения желаемой окраски желтка, привлекающей потребителей, и, в лучшем случае увеличивают аитиоксидантную активность готовой продукции, но не затрагивают проблемы, связанные непосредственно с химическими свойствами самих каротиноидов, которые имеют биомедицинское значение для организма человека.

Накопление каротиноидов в различных тканях и органах человека достаточно специфично. Например, в жёлтом пятне сетчатки глаза (macula luted) накапливаются два основных ксантофилла - лютеин и зеаксантин (W. Schalch, 2000), где они находятся в соотношении примерно 4:1 и защищают зрительный аппарат от УФ-излучения. Считается, что нехватка этих пигментов отвечает за возрастную потерю зрения. Потребление около 6 мг лютеина и зеаксантина в день снижает риск возникновения катаракты и возрастного заболевания макулы в два раза (J.M. Seddon et al., 1994). Также они ингибируют процессы перекисного окисления липидов и профилактируют возникновение некоторых онкологий (B.J. Lyle et al., 1999).

Поэтому для более эффективного использования каротиноидов, желательно создавать такие добавки, которые бы обеспечивали необходимое соотношение между индивидуальными каротиноидами и учитывали физиологические особенности человека. В частности, для решения проблем связанных с макулярной дистрофией необходимо создание добавок, обеспечивающих накопление лютеина и зеаксантина в продуктах питания в соотношении 4:1, поскольку совместное действие этих двух пигментов при именно таком соотношении наиболее эффективно.

Кроме того, доказано, что нехватка ксантофиллов приводит к ухудшению воспроизводительных функций птицы, снижению выводимости и сохранности цыплят (Ж.В. Карасёва, 1984; Т.М. Околелова, A.M. Сергеева, 1988). А поскольку каротиноиды не синтезируются в ее организме, то они должны поступать с кормом.

В связи с этим использование в кормлении птицы кормовых добавок, богатых не просто каротиноидами, а именно ксантофиллами, с целью повышения качества яиц, представляет практический интерес и для производителей и для потребителей продукции птицеводства.

Поэтому научный и практический интерес представляет разработанная нами новая биологически активная добавка (БАД), содержащая ксантофиллы растительного происхождения и сбалансированная по соотношению лютеин : зеаксантин.

Для внедрения в практику любой новой добавки необходимо экспериментальное подтверждение её безопасности для организма и метаболической активности.

Решение комплекса перечисленных вопросов определяет актуальность выбранного направления исследований.

Цель it задачи исследований. Целью настоящей работы является обоснование и разработка состава добавки, обеспечивающей биотрансформацию растительных ксантофиллов в организме кур-несушек и обогащение яиц лютеином и зеаксантином в благоприятном для здоровья человека соотношении.

Для достижения цел» были поставлены следующие задачи:

1. определить концентрацию каротиноидов в лепестках цветков бархатцев (Tagetes erecta L.) и чашечках физалиса декоративного (Physalis alkekengi), подобрать состав биологически активной добавки с оптимальным соотношением лютеина и зеаксантина.

2. изучить влияние сроков хранения сухих измельчённых лепестков цветков бархатцев и чашечек физалиса декоративного на концентрацию в них ксантофиллов.

3. разработать опытный вариант получения, хранения и использования в птицеводстве новой биологически активной добавки.

4. определить влияние различных доз разработанной биологически активной добавки на организм кур-несушек:

- изменения в крови и печени;

- обеспеченность организма ксантофиллами, витаминами А и Е;

- содержание и динамику накопления ксантофиллов (лютеина и зеаксантина) и холестерола в желтках яиц;

- морфологию яйца и прочность скорлупы;

5. изучить влияние различных типов ксантофиллов (лютеина - в этери-фицированной и неэтерифицированной форме, этерифицированного зеаксантина и эпоксиксантофиллов) на их накопление в желтках яиц перепелов.

Научная новизна работы. Впервые изучено влияние разных доз разработанной нами БАД растительных ксантофиллов на физиологическое состояние организма, морфологические и биохимические параметры тканей и органов кур-несушек, на депонирование ксантофиллов в желтках яиц в соотношении наиболее оптимальном для организма человека. Экспериментально доказана возможность обогащения яиц карогиноидами до количеств, позволяющих обеспечить человеку половину суточной потребности человека в ксантофиллах. Также впервые изучено влияние различных типов ксантофиллов (лютеина - в этерифицированной и неэтерифицированной форме, этерифицированного зеаксантина и эпоксиксантофиллов) на их накопление в желтках яиц перепелов. Научная новизна исследований подтверждена патентом РФ №2328137 от 9 апреля 2007 г.

Практическая значимость работы. Доказана возможность увеличения концентрации каротиноидов в желтках куриных яиц за счёт введения разработанной добавки растительных ксантофиллов в рацион. Доказана необходимость составления комплексных сбалансированных по соотношению лютеина и зеаксантина кормовых добавок, что важно не только для организма кур, но и для человека, так как данные добавки повышают качество яиц, а их включение в рацион может потенциально корректировать метаболизм и профил актировать возникновение нарушения функций зрения и ряда других заболеваний

человека, связанных с перекисным и свободнорадикальным окислением ненасыщенных липидов.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Способ получения биологически активной добавки на основе лепестков цветков бархатцев и чашечек физалиса и её использование в рационе кур-несушек.

2. Влияние разных доз разработанной биологически активной добавки в рационе кур-несушек на:

- динамику содержания ксантофиллов и холестерола в желтке яиц;

- физико-химические и качественные параметры яиц;

- морфологические и биохимические показатели тканей и органов.

3. Повышение обеспеченности организма кур-несушек карогиноидами. Оптимальное для человека соотношение лютеина и зеаксантина (4:1) в желтке яиц.

Апробация результатов исследования. Материалы диссертации были представлены и получили положительную оценку на Международной научно-практической конференции «Достижения супрамолекулярной химии и биохимии в ветеринарии и зоотехнии» (Москва, 2008); Международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы химической науки, практики и образования» (Курск, 2009); на Всероссийской школе-семинаре «Современные наукоёмкие лечебные к фармацевтические технологии для офтальмологии» для молодых учёных (Белгород, 2009); на совместном заседании кафедры биохимии и фармакологии, кафедры биотехнологии, морфологии и физиологии живых систем БелГУ и кафедры физиологии и фармакологии БелГСХА (Белгород, 2009). За разработку кормовой биологически активной добавки в 2008 г. Получена серебряная медаль VIII Московского Международного салона инноваций и инвестиций и диплом XIII Московского Международного салона «Архимед-2009».

Публикации результатов исследований. По теме диссертации опубликовано 6 статей, в том числе 4 в изданиях перечня ВАК РФ, три тезиса докладов международных конференций, один патент на изобретение РФ №2328137,2007 г.

Структура и объём диссертации. Диссертация представляет собой рукопись компьютерного набора объемом 143 страницы и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов исследований и их обсуждения, заключения, выводов, практического предложения, списка литературы и приложений. Текст включает 16 таблиц и 23 рисунка. Всего использовано 366 источников литературы, в том числе 193 публикации зарубежных авторов.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Для достижения цели и решения поставленных задач была разработана общая схема исследований (рис. 1), в соответствии с которой на курах-

несушках и перепёлках-несушках в период с 2007 по 2009 гг. были выполнены два опыта.

Рис. 1. Общая схема исследований

Согласно схеме исследований было проведено два физиологических опыта. Первый - на курах-несушках, второй - на перепёлках-несушках.

Первый опыт был проведён в условиях вивария Белгородской государственной сельскохозяйственной академии. В опыте выясняли влияние трёх доз разработанной БАД растительных ксантофиллов на общее состояние гпицы, особенности метаболизма, физические качества яиц, накопление ксантофиллов и холестерола в желтках яиц.

Группы кур-несушек кросса «Hubbard F-15» в возрасте 295 суток были сформированы по принципу аналогов по живой массе, клиническому состоянию и уровню продуктивности. Опыт длился с 27 июня по 9 августа 2007 года. Адаптационный период составил 12, а основной - 32 суток. Схема опыта представлена в таблице 1.

Таблица 1

Схема физиологического опыта на курах-несушках

Группа Количество птиц Схема кормления Доза ксантофиллов, мг/гол*суг Длительность периода, сут.

1-контрольная 10 ОР - 32

П-опытная 10 ОР + добавка ксантофиллов ■ 2.37 32

Ш-опытная 10 ОР + добавка ксантофиллов 7.11 32

IV-опытная 10 ОР + добавка ксантофиллов 14.22 32

Для исследования влияния различных количеств ксантофиллов на их накопление в желтках-куриных яиц, в качестве добавки, содержащей ксантофиллы, нами была выбрана новая БАД растительных ксантофиллов, разработанная на базе Белгородского государственного университета. БАД содержит

диэфиры лютеина, полученые из лепестков цветков бархатцев (Tagetes sp.), и диэфиры зеаксантина, полученые из пузыревидновздутых чашечек физалиса декоративного (Р. alkekengi), в соотношении 4:1.

Бархатцы сортов Сиера оранжевый, Родос и Оранжевый снег (Т. erecta L.) и физалис декоративный были выращены в Ботаничеком саду БелГУ и в ГУ ВИЛАР. Лепестки цветков бархатцев и чашечки физалиса были отделены от остальных частей растений и раздельно высушены без доступа прямого солнечного света до воздушно-сухого состояния. Затем они были измельчены (отдельно друг от друга) на мельнице типа МПР-31 со скоростью 6000 об/мин в течение 1 минуты. В измельчённом растительном материале спек-трофотометрическим методом было определено суммарное содержание ди-эфиров лютеина и диэфиров зеаксантина. В качестве растворителя использовали ацетон. На момент проведения опыта на курах-несушках содержание диэфиров лютеина в 1 г высушенных лепестков цветков бархатцев в 2007 г составило 16.77, а диэфиров зеаксантина в чашечках физалиса декоративного -10.96 мг. Поэтому для обеспечения соотношения ксантофиллов 4:1 смешали измельченные лепестки бархатцев в количестве 500 г с измельченными чашечками физалиса в количестве 191г. Полученную добавку хранили в тёмном месте.

Основной рацион (ОР) был представлен стандартным комбикормом для кур-несушек ПК-1 сбалансированный по питательным и биологически активным веществам. В течение адаптационного периода все птицы получали только ОР. Курам давали комбикорм дважды в сутки в общем количестве 140 граммов на птицу. Потребление воды не ограничивалось.

По завершении адаптационного периода определили содержание ксантофиллов в желтках яиц всех групп.

В основной период контрольная группа получала только ОР. Птицы со второй по четвёртую опытную группу наряду с ОР получали новую БАД растительных ксантофиллов в количестве 0.150, 0.450, 0.900 г на птицу в сутки соответственно (что соответствует 2.37, 7.11, 14.22 мг диэфиров ксантофиллов в сутки на одну курицу).

На протяжении всего периода опыта ежедневно наблюдали за общим состоянием птиц. Также определяли массу яиц путём индивидуального взвешивания с точностью до 1 г и индекс формы. Визуально с помощь овоскопа определяли качество скорлупы, оценивая «мраморность»; упругую деформацию измеряли с помощью индикаторной головки часового типа - с точностью до 1 мкм (П.П. Царенко, 1988). Яйца кур на исследования физических качеств отбирали еженедельно в течение всего опыта.

По окончании первого физиологического опыта произвели убой птицы путём декапитации и отобрали образцы тканей и органов для лабораторных анализов.

С целью проверки возможности перехода лютеина в организме животных в зеаксантин был проведён второй физиологический опыт на 105 перепёлках-несушках породы фараон в возрасте 165 суток в условиях вивария в частном фермерском хозяйстве Белгородской области с. Нижний Ольшанец

Шебекинского района. Из перепёлок сформировали пять групп (I-контрольная, П-У - опытные) по 21 птице в каждой.

Опыт длился с 3 августа по 14 сентября 2009 года. Адаптационный период составил 14 суток, основной - 29 суток. Схема опыта представлена в таблице 2.

Таблица 2

Схема физиологического опыта на перепёлках-несушках

Группа Количество птиц Схема кормления Доза ксантофиллов, мг/гол*сут Длительность периода, сут.

1-контрольная 21 ОР - 29

Ii-опытная 21 ■ ОР + бархатцы 0.1 29

Ш-олытная 21 ОР + физалис 0.1 29

IV-опытная 21 ОР + подсолнечник 0.1 29

V-опытная 21 ОР + «ОРО ГЛО» 0.1 29

Для опыта были приготовлены индивидуализированные БАД:

- лепестки цветков бархатцев, содержавшие по спектрофотометрическим данным 12.5 ± 1.5 мг ксантофиллов на 1 г добавки (в пересчете на не-этерифицированный лютеин);

- чашечки физалиса, по спектрофотометрическим данным содержавшие 9.0 ± 0.3 мг ксантофиллов на 1 г добавки (в пересчете на неэтерифици-рованный зеаксантин);

- лепестки подсолнечника, по спектрофотометрическим и хроматогра-фическим данным содержавшие 2.1 ± 0.3 мг эпоксиксантофиллов на 1 г добавки (в пересчете на лютеин);

- препарат «ОРО ГЛО», по спектральным и хроматографическим данным содержавший 20 мг/г ксантофиллов (в основном неэтерифицированный полностью транс-лютеин).

Содержание ксантофиллов в добавках определяли спектрофотометрическим и хроматографическим методами.

Для приготовления добавок были использованы лепестки цветков бархатцев, лепестки подсолнечника, чашечки физалиса декоративного собранные в 2009 году и высушенные при комнатной температуре в течение 7 дней без доступа света. Полученный материал измельчали в кофемолке (BOSCH МКМ 6003).

В течение опыта все перепёлки в качестве ОР получали комбикорм, используемый в частном фермерском хозяйстве. Контрольная группа получала только ОР, птицы со второй по пятую опытную группу - ОР с добавлением индивидуализированных БАД согласно схеме. Все добавки вводили в количестве, обеспечивавшем поступление 0.1 мг ксантофиллов в сутки на одну перепелку. Потребление воды не ограничивалось.

По завершении адаптационного периода определяли содержание ксантофиллов в желтках яиц всех опытных групп. Яйца на анализы в лабораторию отбирали еженедельно на протяжении всего опыта.

Гематологические и биохимические анализы тканей и органов кур-несушек (крови и печени) проведены в лаборатории биологических исследований БелГСХА.

В пробах крови кур-несушек определяли количество эритроцитов и лейкоцитов методом подсчёта в камере Горяева; концентрацию гемоглобина - ге-моглобинцианидным методом; витамин А - спектрофотометрически; витамин Е - по модифицированному методу Биери; кальций - титриметрически по де Ваарду; фосфор - колориметрически по реакции с ванадат-молибденовым реактивом (Лабораторные исследования в ветеринарии, 1991).

В печени кур-несушек определяли витамины А и Е, каротиноиды — спектрофотометрически; кальций - трилонометрическим методом; фосфор -колориметрически по реакции с ванадат-молибденовым реактивом.

В желтках яиц кур и перепёлок определяли ксантофиллы и холестерол. Для определения суммарного содержания каротиноидов использовали спек-трофотометрический метод (спектрофотометр КФК-3-01), а для определения соотношения лютеин : зеаксантин и количества холестерола - метод высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ).

Полученный цифровой материал был обработан статистически (Г.Ф. Лакин, 1980). При определении достоверной разницы между контрольной и опытными группами был использован аргумент Стьюдента. Результаты рассматривали как достоверные, начиная со значения <0,05.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Обоснование, создание и экспериментальная разработка биологически активной добавки, обогащенной ксантофиллами

3.I.I. Выбор сырья В качестве источника лютеина в Б АД были выбраны лепестки цветков бархатцев, так как в них в основном накапливаются диэфиры лютеина (J.D. Rivas, 1989), которые усваиваются в организме птицы так же как и сам лютеин, - в организме происходит омыление эфиров. В качестве зеаксантин-содержащего компонента на основе местного сырья были выбраны пузыре-видновздутые чашечки физалиса декоративного.

Из этих растительных материалов и была создана в Белгородском государственном университете первая отечественная БАД для кур, содержащая диэфиры лютеина и диэфиры зеаксантина в соотношении 4:1. В этой добавке используются раздельно высушенные и измельчённые лепестки цветков бархатцев и чашечки физалиса декоративного (А. Шапошников и др., 2009; С.М. Вос-трикова и др., 2009). Разработанная добавка отличается от импортных сбалансированностью по содержанию ксантофиллов (в плане соотношения 4:1) и позволяет увеличивать накопление ксантофиллов в желтке куриных яиц.

3.1.2. Контроль содержания ксантофиллов в сырье Суммарное содержание ксантофиллов в растительном сырье определяли спектрофотометрическим методом. Спектры соответствуют литературным данным для лютеина и зеаксантина по положению максимумов абсорбции (D.B. Rodrigues-Amaya, 2001).

Качественное определение ксантофиллов проводили методом ВЭЖХ. На хроматограмме экстракта лепестков бархатцев в условиях обращено-фазовой ВЭЖХ (рис. 2), обнаруживаются 7 основных пиков (диэфиров полностью транс-лютеина: от дилаурата (время удерживания порядка 5.5 мин.) до дистеарата (12.5 мин.)).

Рис. 2. Хроматограмма ацетонового экстракта цветков бархатцев и чашечек физалиса

На хроматограмме ацетонового экстракта чашечек физалиса декоративного виден дипальмитат зеаксантииа (9.8 мин), пальмитат-миристата зеаксан-тина (8.6 мин) и пальмитат р-криптоксантина (6.1 мин), видна таже группа мо-ноэфиров зеаксантина (4.4 мин). Соотвественно, контроль состава готовой добавки может быть выполнен тем же методом, поскольку пики эфиров зеаксантина не совпадают с пиками производных лютеина.

Наши исследования показали, что уровень накопления ксантофиллов в цветках бархатцев одних и тех же сортов и чашечках физалиса декоративного зависит от многих факторов и может изменяться от года к году (табл. 3).

Таблица 3

Содержание ксантофиллов в высушенном растительном сырье в разные годы, мг/г

Содержание ксантофиллов 2006 г 2007 г 2008 г 2009 г

Диэфиры лютеина (Т. erecta) 22.13±0.56 20.77±0.81 17.81±0.80 12.37±0.98

Диэфиры зеаксантина (Р. alkekengi) 15.02±0,12 14.91±0.12 13.89±0.36 12.91±0.55

На момент проведения опыта на курах-несушках содержание диэфиров лютеина в 1 г высушенных лепестков цветков бархатцев в 2007 г составило 16.77 мг, а диэфиров зеаксантина в чашечках физалиса - 10.96 мг.

3.1.3. Сохранность ксантофиллов в сырье При хранении высушенного и грубо измельченного растительного материала без доступа прямого солнечного света содержание ксантофиллов в течение первого года хранения монотонно уменьшалось в 1.47 раза (с 22.13 до 15.05 мг/г) для диэфиров лютеина, а для диэфиров зеаксантина - в 1.64 раза (с 15.02 до 9.16 мг/г). Это позволяет использовать БАД в течение длительного времени без особых условий хранения.

Высокая сохранность ксантофиллов в этой БАД объясняется тем, что при высушивании мембраны хромопластов становятся жесткими и плотными. При грубом измельчении растительного сырья степень разрушения этих оболочек невелика, что подтверждается невысокой экстрагируемостью ксантофиллов органическими растворителями.

Собранное и высушенное растительное сырье лучше хранить либо не измельченным, а процесс измельчения производить непосредственно перед употреблением БАД либо грубо измельчённым.

3.2. Биохимические исследования тканей и органов кур-несушек

3.2.1. Влияние новой добавки на морфологические показатели и биохимический состав крови кур-несушек БАД вызвала определённые изменения в гематологическом составе крови. Во второй опытной группе наблюдается тенденция к увеличению количества эритроцитов на 28.14, в третьей - на 27.74, а в четвёртой - на 37.72% (р<0.05) (табл. 4). Этот параметр находился в пределах границ физиологической нормы.

Таблица 4

Морфологические показатели крови

Группа Эритроциты. Н0,2-л-' ' Лейкоциты, 1-Ю9-л"1 Гемоглобин, гл-1

1-контрольная 2.51 ±0.21 19.24 ±2.24 87.65 ±7.14

И-опытная 3.21 ±0.51 23.67 ±2.77 96.33 ±4.17

Ш-опытная 3.20 ±0.21 22.08 ± 0.48 100.44 ±7.62

1У-опытная 3.45 ±0.06* 24.25 ±3.34 93.76 ±5.37

Примечание: здесь и далее: * - р<0.05; ** - р<0.0¡; *** - р<0.001

Концентрация лейкоцитов во всех группах не превышает физиологическую норму (В.М Митюшников, 1985; А.И. Голиков и др., 1991). Во второй, третьей и четвёртой опытных группах прослеживается тенденция увеличения лейкоцитов на 23.02, 14.76 и 26.04 % соответственно, не выходящая за рамки нормы. Статистически достоверных изменений количества лейкоцитов у птиц опытных групп, в сравнении с контролем, выявлено не было.

Во второй, третьей и четвёртой опытных группах наблюдается увеличение концентрации гемоглобина в единице объема крови кур по сравнению с контролем на 9.90,14.59 и 6.97 % соответственно. Во всех опытных группах количество гемоглобина находится в пределах нормы (И.П. Кондрахин, 1985).

Результаты анализа крови на содержание кальция и фосфора представлены в таблице 5.

Таблица 5

Концентрация кальция и фосфора в сыворотке крови кур, г*л-1

Группа Кальций Фосфор

[-контрольная 0.194 ±0.009 0.059 ±0.001

Н-опытная 0.237 ±0.018** 0.063 ± 0.0003**

Ш-опытная 0.190 ±0.012 0.068 ± 0.0008**

[У-опытная 0.209 ±0.013* 0.072 ± 0.004*

Исследования показали, что скармливание БАД не оказало отрицательного действия на содержание кальция и фосфора в крови. Следует отметить тенденцию к снижению концентрации качьция в третьей опытной группе на 2.26 %.

Во второй и четвёртой опытных группах содержание кальция по сравнению с контролем повысилось на 22.07 (р<0.01) и на 7.36% (р<0.05), а количество фосфора в сыворотке крови всех опытных групп превосходит контроль на 5.39 (р<0.01), 13.80 (р<0.01) и 20.87% (р<0.05) соответственно.

Результаты проведенных исследований показывают, что в опытных группах не происходит достоверного изменения в содержании витаминов А и Е (табл. 6).

Таблица 6

Содержание витаминов и каротиноидов в сыворотке крови кур-несушек, мг*л"'

Группа Витамин А Витамин Е Каротиноиды

1-контрольная 1.55 ±0.07 7.70 ±4.88 0.51 ±0.05

П-опытцая 1.51 ±0.13 13.63 ±3.58 0.87 ±0.11*

Ш-опытная 1.64 ± 0.16 13.40 ± 1.10 1.77 ±0.22**

1У-опытная 1.28 ±0.08 10.30 ±0.81 1.28 ±0.04**»

Содержание витамина А во второй опытной группе находится на уровне контроля. В третьей группе оно превышает контроль на 5.81%, а в четвёртой - ниже, чем в контроле на 17.42%. Уровень витамина Е во второй, третьей и четвёртой опытных группах выше контроля на 77.01, 74.03 и 33.77% соответственно. Но эти данные не подтверждаются статистически.

Во всех опытных группах по сравнению с контролем происходит достоверное повышение содержания каротиноидов в сыворотке крови. Во второй опытной группе, получавшей 2.37 мг диэфиров ксантофиллов в сутки на одну курицу, содержание ксантофиллов в 1.71 раза (р<0.05) больше, чем в контроле. В трепет и четвёртой опытных группах, получавших соответственно 7.11 и 14.22 мг диэфиров ксантофиллов в сутки на одну курицу, содержание ксантофиллов больше контрольного в 3.47 (р<0.01) и в 2.51 раза(р<0.001).

3.2.2. Исследование печени кур-несушек Приведённые в таблице 7 данные говорят о том, что существует некоторая тенденция увеличения концентрации золы и сухого вещества в печени второй опытной группы на 17.56 и 30.49% (р<0.05) и третьей группы на 6.45 и 6.14% по сравнению с контролем соответственно.

Таблица 7

Концентрация сухого вещества и золы в печени кур-несушек, г*кг1

Группа Сухое вещество Зола

1-контрольная 297.23 ±13.81 12.87 ± 1.90

11-опытная 387.87 ±17.94* 15.13 ± 3.14

Ш-опытная 315.47 ±4.93 13.70 ± 1.17

1У-опытная 376.50 ±28.00 12.60 ± 1.02

В четвёртой группе содержание сухого вещества превосходит контроль на 26.67%, а содержание золы меньше, чем в контроле на 2.10%.

Анализ печени на содержания кальция и фосфора (табл. 8) показал, что при введении различных доз добавки в рацион кур-несушек достоверных различий концентраций этих макроэлементов с контрольной группой нет.

Таблица 8

Концентрация кальция и фосфора в печени кур-несушек, г'кг'1

Группа Кальций, г* кг"1 Фосфор, г* кг"'

1-контрольная 0.38 ± 0.029 2.80 ±0.410

П-опытная 0.49 ±0.035 3.29 ±0.808

Ш-опытная 0.39 ± 0.026 3.57 ±0.215

1У-опытная 0.48 ± 0.028 3.23 ±0.286

Содержание витамина А в печени кур опытных групп не имеет достоверных различий с контролем, кроме второй опытной группы, где витамина А меньше на 34.73% (р<0.05) (табл. 9).

Таблица 9

Концентрация витаминов и каротиноидов в печени, мг'кг'1

Группа Витамин А Витамин Е Каротиноиды

1-контрольная 1167.00 ±87.01 262.67 ±27.76 1.91 ±0.09

Н-опытная 761.67 ±53.72* 217.33 ±6.84 5.04 ±0.09+**

Ш-опытная 1203.33 ± 114.81 278.33 ± 13.32 6.60 ±0.42***

ГУ-опытная 984.67 ±61.80 252.67 ± 12.99 13.51 ±0.66***

Концентрация витамина Е в печени второй и четвёртой опытных групп меньше, чем в контроле на 17.26 и 3.81% соответственно, а в третьей группе больше на 5.96%. Эти различия не являются статистически достоверными.

Из таблицы 9 видно, что во второй опытной группе уровень каротиноидов в печени достоверно превышает контроль в 2.64 раза (р<0.001), а в третьей группе - в 3.46 раза (р<0.001), что соответствует 2.37 и 7.11 мг ди-эфиров ксантофиллов в сутки на одну курицу. Наиболее высокий уровень каротиноидов, а именно 13.51 мг'кг"1, наблюдается в четвёртой опытной группе, получавшей максимальное количество ксантофиллов (14.22 мг диэфиров ксантофиллов в сутки на одну курицу). Здесь содержание каротиноидов достоверно выше контроля в 7.07 раза (р<0.001).

В целом можно сказать, что введение в рацион натуральных природных каротиноидов в дозах: 2.37, 7.11, 14.22 мг диэфиров ксантофиллов в сутки на одну курицу не оказало отрицательного влияния на обеспеченность организма кур витаминами и каротиноидами.

3.3. Биохимические и морфологические исследования яиц кур-несушек

3.3.1. Исследование накопления ксантофиллов в яичном желтке

Биохимический анализ яиц имеет важное значение при исследовании эффективности использования добавок для обогащения яиц биологически активными веществами.

Данные по определению суммарного количества каротиноидов в желтках яиц (в пересчёте на лютеин) представлены в таблице 10.

Содержание каротиноидов во всех группах до скармливания добавки было примерно одинаково и достоверно не различалось.

Таблица 10

Содержание ксантофиллов (в пересчёте на лютеин) в желтках яиц, мг/кг

Группа до скармливания добавки ч-з 15 суток скармливания добавки в конце скармливания добавки (ч-з 32 суток)

1-контрольная 10.86 ±2.08 7.52 ±0.45 6.23 ±0.82

П-опытная 10.99 ± 1.00 15.73 ±0.77*** 23.51 ±2.33*

Ш-опытная 11.37 ±0.86 п 29.83 ±4.37*** 39.48 ±3.81"

1У-опытная 11.03 ±1.22 45.01 ±5.13*** 103.77± 1.51***

При анализе полученных данных установлено, что через 15 суток кормления БАД в контрольной группе содержание ксантофиллов уменьшилось по сравнению с исходным в 1.44 раза, а к концу опыта (через 32 суток) - в 1.74 раза. Во всех же опытных группах содержание ксантофиллов по сравнению с исходным увеличивалось. Через 15. суток скармливания добавки количество ксантофиллов в желтке увеличилось в 1.43 (р<0.001), в 2.62 (р<0.001) и в 4.08 раза (р<0.001) для второй, третьей и четвёртой опытных групп соответственно.

В конце опыта (через 32 суток) исследование количества ксантофиллов показало увеличение в 2.14 (р<0.05), 3.47 (р<0.01) и в 9.41 раза (р<0.001) для второй, третьей и четвёртой опытных групп соответственно. В конце опыта содержание каротиноидов превысило норму во всех опытных группах. Эти данные говорят о положительном влиянии нашей БАД на накопление ксантофиллов в желтках куриных яиц. К тому же в желтках яиц всех опытных групп отношение лютеина к зеаксантину было близко к 4:1.

Приведенные ниже графики (рис. 3) наглядно демонстрируют динамику изменения концентрации ксантофиллов в яйцах кур опытных групп от начала к концу опыта.

Разделение и количественное определение лютеина и зеаксантина осуществляли с использование нормально-фазовой ВЭЖХ.

В начале опыта уровень и соотношение между количеством лютеина и зеаксантина в желтке яиц всех экспериментальных групп кур-несушек был одинаковым и весьма большим (1.5 : 1), что, вероятно, обусловлено исполь-

зованием в корме для кур большой доли кукурузы, отличающейся небольшим различием между накоплением этих ксантофиллов (рис. 4).

Рис. 4. Хроматограмма ксантофиллов куриных яиц перед началом эксперимента.

К концу опыта на фоне общего увеличения уровня накопления ксантофиллов при росте количества добавки соотношение между лютеином и зеак-сантином оставалось практически неизменным, попадая в интервал 3.6^ 4.1 : 1 (рис. 5), что можно расценивать как примерно одинаковую бидоступность лютеина и зеаксантина из использованной БАД.

Рис. 5. Хроматограмма ксантофиллов желтков яиц кур-несушек опытных групп

в конце опыта. •

Появление в печати сведений о том, что зеаксантин в организме животных и человека может быть получен изомеризацией лютеина (R.A. Bone et al., 2007), поставило под вопрос целесообразность использования в нашей БАД источника зеаксантина - физалиса декоративного. Также в ходе выполнения работы у нас возник ряд вопросов, связанных с действием на накопление ксантофиллов в желтке яиц отдельно диэфиров лютеина и диэфиров зеаксантина, а также эпоксикаротиноидов.

Для того чтобы найти ответы на эти вопросы мы были вынуждены провести дополнительный опыт на перепёлках-несушках. Для проверки усвояемости ксантофиллов из растительных материалов нами были подготовлены

индивидуализированные БАД, содержащие: диэфиры лютеина (бархатцы), диэфиры зеаксантина (физалис), эпоксиксантофиллы (подсолнечник) и не-этерифицированный лютеин («ОРО ГЛО»).

Спектр ацетонового экстракта лепестков подсолнечника (рис. б) подтверждает наличие эпоксисоединений - по смещению максимумов абсорбции в коротковолновую область вследствие сокращения цепи сопряжения.

400 420 440 460 480 500 Длина волиЫ| нм

Рис. 6. Спектр ацетонового экстракта лепестков подсолнечника

Спектры, представленные на рисунке 7, свидетельствуют о том, что во всех четырех случаях - с добавками бархатцев, подсолнечника и «ОРО ГЛО»

Рис. 7. Спектры ацетоновых экстрактов желтков перепелиных яиц: А - с добавкой бархатцев; Б - с добавкой физалиса; В - с добавкой подсолнечника

Количественное определение ксантофиллов в желтках яиц перепелок проводили в пересчете на лютеин для оценки суммарного уровня накопления.

В целом накопление ксантофиллов, как и при кормлении кур (В .Л. Владимиров и др. 2005; Л.А. Дейнека и др., 2007), увеличивается при использовании добавок бархатцев, физалиса и «ОРО ГЛО» и практически не изменяется в случае с подсолнечником (рис. 8).

Следовательно, в организме ферментов, отвечающих за деэпоксидиро-вание, нет. Поэтому растения, накапливающие эпоксикаротиноиды, не эффективны в кормлении птиц для увеличения накопления ксантофиллов. Добавки диэфирсв и неэтерифицированных ксантофиллов примерно одинаково

эффективны, т.е. этерификация не сказывается на биодоступности ксантофиллов, что соответствует литературным данным (Ь. й а!., 2009).

Рис. 8. Изменение накопления ксантофиллов в желтках перепелиных яиц при использовании индивидуализированных добавок

Дополнительная необходимая информация была получена при хрома-тографическом исследовании (нормально-фазовая хроматография) тех же образцов желтка (рис. 9).

контроль г|:

зеаксантин

Рис. 9. Разделение ксантофиллов желтка яиц перепелок: А- с добавкой бархатцев; Б - с добавкой физалиса

Анализ хроматограмм показал, что в случаях с бархатцами, подсолнечником и «ОРО ГЛО», а также в контрольном опыте хроматограммы (как и в выше рассмотренном эксперименте по кормлению кур) различались только площадью пиков при неизменном соотношении между лютеином и зеаксан-тином (в диапазоне 1 : (5^7)). Но уже ко второй неделе наблюдалось очень большое различие для образцов, полученных с использованием физалиса: доля зеаксантина в желтке таких яиц даже немногим превысила долю лютеи-на (46 против 36 %, соответственно).

Результаты наших исследований показали, что в группе перепёлок получавшей добавку с диэфирами зеаксантина (физалис) в желтках накаплива-

ется преимущественно зеаксантин и небольшое количество лютеина из комбикорма, а в группах, получавших добавку с этерифицированным и неэтери-фицированным лютеином (бархатцы и препарат «ОРО ГЛО»), накапливается только лютеин, причём в примерно одинаковых количествах. Полученные нами данные говорят о том, что если превращение лютеина в зеаксантин и происходит, то очень медленно и в незначительных количествах. Таким образом, создание сбалансированной по содержанию лютеина и зеаксаншна добавки является оправданным направлением пищевого дизайна.

3.3.2. Исследование содержания холестерола в желтках яиц

Особенность нашего метода анализа холестерола связана с тем, что при подготовке образца к хроматографированию используется экстракция холе-.стерола ацетоном из липофильной матрицы желтка, образованной рядом веществ. Экстракт желтка яиц, который использовался для определения каро-тиноидов, может быть использован и для определения холестерола на той же хроматографической обращено-фазовой колонке, но с рефрактометрическим детектированием.

Предварительный анализ хроматограмм экстрактов яичного желтка показал, что пик, соответствующий холестеролу сопоставим по величине с пиками экстрагируемых вместе с ним триацилглицеролов при использовании не отличающегося высокой чувствительностью рефрактометрического метода детектирования (рис. 10).

V 1

£ 1 II

А

Г ( 1

, [

4 АЛ л л

0 5 10 мин

Рис. 10. Разделение компонентов экстракта желтка куриных яиц. А - ацетоновый экстракт желтка; Б - стандартный раствор холестерола. 5 - холестерол; II - триацилглицеролы

Полноту экстракции холестерола оценивали, сопоставляя результаты определения холестерола при различной массе навески желтка. При этом оказалось, что в диапазоне навесок 0.25 - 1.0 г было получено одно и то же значение концентраций холестерола в желтке, но при увеличении навески до 2.0 г результат оказывался заниженным примерно на 30%. Расхождение между параллельными наблюдениями не превышало двух относительных процентов (В .И. Дейкека и др., 2007).

На рисунке 11 показано изменение концентрации холестерола в исследуемом образце экстракта при изменении соотношения желток - ацетон.

При увеличении соотношения (Я) массы желтка к объему экстрагента (ацетона) более 0.1 концентрация холестерола в экстракте оказывается умень-

шенной. При этом повторная экстракция из остатка на фильтре при Я = 0.1 показала отсутствие остаточного холестерола в образце, что свидетельствовало о полной экстракции холестерола в первом объеме экстрагента. Появление максимума сопровождается еще более существенным изменением концентрации триацилглицеролов в экстракте, что свидетельствует о замене экстракции перераспределением веществ между двумя фазами при больших соотношениях желток/экстрагент.

С, иг/мл

о од о,: М'*.!

Рис. 11. Концентрация холестерола в экстракте желтка при различных Р.-соотношениях желток/экстрагент

Градуировочный коэффициент оставался постоянным, по крайней мере, в диапазоне 0.2 - 1.5 мг/мл. В целом, максимально допустимая относительная погрешность определения холестерола по предлагаемой методике не превышала 4.5 % (Р = 0.95) при использовании в качестве результата среднего значения двух параллельных определений (для двух параллельных экстрактов образца яичного желтка), каждое из которых является средним значением двух параллельных результатов хроматографирования каждого экстракта.

Результаты применения предложенной в работе методики определения холестерола представлены в таблице 11.

Таблица 11

Концентрация холестерола в желтке куриных яиц, мг-г'1

Группа В начале опыта В конце опыта

1-контрольная 13.8 ± 0.15 14.2 ±0.52

П-опытная 14.5 ± 0.65 14.1 ±0.21

Ш-опытная 13.9 ±0.94 14.1 ±0.34

1У-опытная 14.0 ±0.82 14.4 ±0.44

В эксперименте, выполненном для получения продукции, обогащенной ксантофиллами, при 2-х - 3-х кратном росте концентрации суммы лютеина и зеаксантина заметных различий по накоплению холестерола не было обнаружено (среднее содержание 14.1 мг на 1 г желтка).

3.3.3. Исследование морфологических и физических характеристик ягсц Важными характеристиками морфологического и физического состояния яиц являются: форма, масса, толщина скорлупы, отсутствие на ней кальциевых отложений или трещин и др.

Из таблицы 12 видно, что средняя масса яиц в начале опыта в третьей и четвёртой опытных группах достоверно меньше, чем в контрольной группе.

К концу опыта масса яиц в контрольной группе достоверно уменьшилась на 5.09 % (р<0.05), а в четвёртой опытной группе достоверно увеличилась на 16.50 % (р<0.01). Во второй и третьей группах масса яиц осталась на том же уровне, впрочем, полученные данные не являются статистически достоверными.

Таблица 12

Масса яиц, г

Группа В начале опыта В конце опыта

[-контрольная 74.8 ± 1.5 71.0 ±0.9*

И-опытная 74.5 ± 1.2 76.5 ±0.8

Ш-опытная 69.6 ± 1.6* 69.3 ± 0.9

IV-опытная 64.1 ±2.9** 74.7 ± 1.4**

Было, также выявлено, что скармливание новой БАД не оказало отрицательного влияния на форму яиц, «мраморность» скорлупы и упругую деформацию.

ВЫВОДЫ

1. Концентрация диэфиров лютеина в лепестках цветков бархатцев и диэфиров зеаксантина в чашечках физалиса декоративного варьировала и составила 18.27 и 14.26 мг на один грамм воздушно-сухого сырья соответственно.

2. В процессе хранения биологически активной добавки без доступа солнечного света при температуре 20-22" С концентрация ксантофиллов в течение года хранения уменьшилась с 22.13 до 15.05 мг/г (в 1.47 раза) для диэфиров лютеина и с 15.02 до 9.16 мг/г (в 1.64 раза) для диэфиров зеаксантина, что позволяет хранить и использовать добавку в течение года.

3. Введение в состав рациона кур-несушек биологически активной добавки растительных ксантофиллов в дозах 0.150, 0.450, 0.900 г/птицу в сутки (что соответствует 2.37, 7.11, 14.22 мг диэфиров ксантофиллов в сутки на одну курицу) не оказывает отрицательного влияния на физиологическое состояние, морфологические и биохимические показатели крови птицы, способствует обеспеченности организма кур каротиноидами.

4. Использование биологически активной добавки растительных ксантофиллов в рационе кур-несушек в дозах 0.150, 0.450, 0.900 r/rrrauy в сутки (что соответствует 2.37, 7.11, 14.22 мг диэфиров ксантофиллов в сутки на одну курицу) способствовало повышению уровня каротиноидов в сыворотке крови с 0.51 до 0.87 во второй группе, до 1.77 в третьей группе и до 1.28 мг*л"' в четвёртой груше. Также добавка растительных ксантофиллов способствовала повышению уровня каротиноидов в печени с 1.91 до 5.04,6.60 и 13.51 мг*кг'' соответственно для второй, третьей и четвёртой опытных групп.

5. Под влиянием новой биологически активной добавки в сыворотке крови кур второй и четвёртой опытных групп концентрация кальция увеличилась с 0.1944 до 0.2373 и 0.2087 г*л~' соответственно по сравнению с контролем. Содержание фосфора в сыворотке крови всех опытных групп увели-

чилось по сравнению с контрольной группой с 0.0594 до 0.0626, 0.0676 и 0.0718 г*л"1 для второй, третьей и четвёртой опытных групп соответственно.

6. Через 15 суток после начала введения биологически активной добавки растительных ксантофиллов содержание последних в желтках яиц кур-несушек достоверно увеличилось во второй опытной группе с 7.524 до 15.730, в третьей группе до 29.825, и в четвёртой группе до 45.010 мг/кг. Депонирование ксантофиллов через 32 суток достоверно увеличилось во всех четырёх опытных группах с 6.226 до 23.508,39.476 и 103.772 мг/кг соответственно.

7. Соотношение лютеина к зеаксаитину в желтках яиц у кур-несушек контрольной группы составило 2.7:1, а в желтках яиц птиц всех опытных групп, получавших добавку растительных ксантофиллов, было близко к 4:1.

8. Использование новой биологически активной добавки, содержащей ксантофиллы, не влияет на накопление холестерола в желтках куриных яиц.

9. Накопление ксантофиллов не зависит от их формы - этерифицирован-ной или омыленной. Индивидуализированные по лютеину и зеаксантину добавки в корм птицы приводят к увеличению накопления соответствующих ксантофиллов, при этом эпоксиксантофиллы организмом птиц не усваиваются.

10. Превращение лютеина в зеаксантин если и происходит в организме птиц, то с недостаточной скоростью, поэтому создание добавок, сбалансированных по соотношению этих ксантофиллов, оправдано.

Практические предложения

Для повышения содержания каротиноидов в желтках яиц кур-несушек рекомендуется использовать новую биологически активную добавку, содержащую диэфиры лютеина (полученные из лепестков цветков бархатцев) и ди-эфиры зеаксантина (полученные из чашечек физалиса) в соотношении 4:1.

Полученный материал исследований можно рассматривать в процессе обучения специалистов высших учебных заведений.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

* - работы, опубликованные в рекомендованных ВАК РФ изданиях

1. ^Владимиров, В.Л. Исследование каротиноидного состава желтка куриных яиц / В.Л. Владимиров, A.A. Шапошников, Д.В. Дейнека, С.И. [т.е. М.] Вострикова, В.И. Дей-нека // Доклады РАСХН. - 2005. -№6. - С.46-48.

2. +Шапошников, A.A. Биологическая ценность добавления каротиноидов в корм кур-несушек / A.A. Шапошников, С.М. Вострикова, Т.О. Гусева // Ветеринария и кормление. -2007. -Х»6- С. 11.

3. Дейнека, В.И., Определение холестерола в желтке куриных яиц / В.И. Дейнека, A.A. Шапошников, Л.А. Дейнека, С.М. Вострикова, И.А. Гостищев, Т.С. Гусева // Научные ведомости БелГУ. Серия: Естественные науки. - 2007. - №3. - С. 164-171.

4. Дейнека, Л.А. Пищевой дизайн: исследование накопления ксантофиллов в желтке куриных яиц I Л.А. Дейнека, A.A. Шапошников, С.М. Вострикова, В.И. Дейнека // Научные ведомости БелГУ. Серия: Естественные науки. - 2007. - №5. - С.133-138.

5. *Гостшцев, И.А. Хроматографический контроль качества яичной продукции: определение холестерола в желтке / И.А. Гостищев, С.М. Вострикова, A.A. Шапошников, Л.А. Дейнека, В.И. Дейнека // Сорбционные и хроматографические процессы. Воронеж. -2009. - Т.9.

6. Вострикова, С.М. Изучение накопления ксантофиллов в желтке куриных яиц при введении в диету специальных биологически активных добавок / С.М. Вострикова, A.A. Шапошников, Л.А. Дейнека // Тезисы международной конференции «Достижения супрадалеку-лярной химии и биохимии в ветеринарии и зоотехнии», - Москва 2008. - С. 159.

7. Вострикова, С.М. Каротиноиды желтка куриных яиц: возможности пищевого дизайна / С.М. Вострикова, A.A. Шапошников, В.И. Дейнека, Л.А. Дейнека // Актуальные проблемы химической науки, практики и образования: Сборник статей Международной научно-практической конференции, 19-21 мая 2009 г., ч. 2. - Курск 2009. - С. 96-99.

8. Вострикова, С.М. Пищевой дизайн и профилактика офтальмологических заболеваний / С.М. Вострикова, Т.Н. Сёмкина, Л.А. Дейнека, А А. Шапошников, В.И. Дейнека // Сборник материалов Всероссийской школы-семинара «Современные наукоёмкие лечебные и фармацевтические технологии для офтальмологии» для молодых учёных, г. Белгород . 28 сентября - 1 октября 2009 г. - Белгород: ИПЦ «ПОЛИТЕРРА», 2009. - С. 20-29.

9. * Шапошников, А. Источники биологически активных ксантофиллов для яичной продукции / А. Шапошников, В. Дейнека, Г. Симонов, С. Вострикова, М. Третьяков // Птицеводство. - 2009. - №4. - С. 41.

10. Патент 2328137 Российская Федерация, МПК А 23 К 1/00, А 23 К 1/16. Биологически активная добавка для кур и способ ее получения / Дейнека Л А., Дейнека В.И., Шапошников A.A., Гусева Т.С., Третьяков М.Ю., Вострикова С.М., Шаркунова H.A.; заявитель, и патентообладатель Белгородский государственный университет. - № 2007113094/13; заявл. 09.04.2007; опубл. 10.07.2008, Бюл. №19; приоритет 09.04.2007. - 5 с.: ил.

Подписано в печать 15.11.2010. Гарнитура Times New Roman. Формат 60x84/16. Усл. п. л. 1,0. Тираж 100 экз. Заказ 186. Оригинал-макет подготовлен и тиражирован в издательстве Белгородского государственного университета 308015, г. Белгород, ул. Победы, 85