Влияние природных и синтетических полимеров на биохимические свойства липаз из различных источников

Тульская, Екатерина Валерьевна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Влияние природных и синтетических полимеров на биохимические свойства липаз из различных источников
ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Влияние природных и синтетических полимеров на биохимические свойства липаз из различных источников"

На правах рукописи

Тульская Екатерина Валерьевна

ВЛИЯНИЕ ПРИРОДНЫХ И СИНТЕТИЧЕСКИХ ПОЛИМЕРОВ НА БИОХИМИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ЛИПАЗ ИЗ РАЗЛИЧНЫХ ИСТОЧНИКОВ

03.00.04-биохимия

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва - 2008

003459320

Работа выполнена на кафедре органической и биологической химии в ФГОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина»

Научный руководитель:

доктор биологических наук, доктор химических наук,

профессор Зайцев Сергей Юрьевич

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук,

профессор Байматов Валерий Нурмухаметович

доктор биологических наук Букова Наталья Константиновна

Ведущая организация: ФГОУ ВПО «Санкт-Петербургская

государственная академия ветеринарной медицины»

Защита состоится » ЗМ'&З'М 2009 г. в /Л час.

на заседании диссертационной совета Д 220.042.04 в ФГОУ ВПО

«Московская государственная академия ветеринарной медицины и

биотехнологии имени К.И. Скрябина» по адресу: 109472, Москва, ул.

Академика Скрябина, 23.

Тел.: (495)377-93-83

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина»

Автореферат разослан <сг_» 2008

Ученый секретарь

диссертационного совета Фомина В. Д.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Исследования биокаталитических систем на основе липаз являются важными и актуальными как по фундаментальной, так и по прикладной направленности. Липазы - это сериновые гидролазы, катализирующие ряд ключевых биохимических реакций: гидролиз, этерификация, трансэтерификация, алкоголиз, ацидолиз [Афонский С.И., 1966; Брокерхоф X., 1976; Малахов А.Г., 1982; Зайцев С.Ю., 2005 и другие]. Липазы применяются в пищевой, фармакологической, агрохимической и кожевенной промышленности, в производстве моющих средств, поверхностно и оптически активных соединений, вкусовых и ароматических компонентов, для аналитических целей в медицине. Свойство энантиоселективности липаз широко применяется в органическом синтезе биологически активных веществ и их синтетических аналогов, таких как простагландины, алкалоиды, терпеноиды, антибиотики, производные нуклеозидов и т.п.

Однако, дальнейшее применение липаз в промышленности сдерживается сложностями в создании оптимальной реакционной системы, высокой ценой ферментов, загрязненностью большинства ферментных препаратов, низкой термостабильностью, невысокими скоростями реакций и т.д. Решения большинства вышеперечисленных проблем лежат на пути использования иммобилизованных ферментов. Иммобилизация липаз способствует отделению фермента от продуктов реакции, позволяет экономить фермент, увеличивает термостабильность и активность липаз. В настоящее время накоплен обширный материал по иммобилизации липаз из различных источников методами адсорбции, ковалентного связывания, включения в полимерные гели и т.д. [Мосбах К., 1976; Березин И.В. и др., 1987; Кабанов В.А. и др., 1987; Вудворд Дж., 1988; Варфаломеев С.С. и др., 1999; Штильман М.И., 2006 и другие]. Однако, систематизированных данных о влиянии полимеров на коллоидно-химические и каталитические свойства липаз из различных источников до начала наших работ в литературе §ыло

недостаточно. При исследовании новых биоматериалов и методов иммобилизации важно проводить фундаментальную работу по изучению физико-химических свойств иммобилизованных липаз.

Цель работы - изучение ферментативной активности и динамического поверхностного натяжения систем липаз из различных источников с природными и синтетическими полимерами.

Исходя из этой цели, были поставлены задачи:

1. Изучить влияние природного полимера - бычьего сывороточного альбумина на активность липаз из различных источников.

2. Изучить влияние синтетических разнозаряженных полиэлекгролитов -полистиролсульфоната натрия и полидиаллилдиметиламмоний хлорида на активность липаз из различных источников.

3. Изучить сочетанное влияние температуры и полимерного окружения на активность липаз из различных источников.

4. Провести сравнительное исследование параметров динамического поверхностного натяжения панкреатической липазы в системах с синтетическими и природными полимерами.

5. Предложить эффективный способ регуляции ферментативной активности липаз из различных источников и модели супрамолекулярных наноразмерных систем на основе липаз и полиэлектролитов.

Научная новизна работы. Предложены модели супрамолекулярных наноразмерных систем на основе липаз и полиэлектролитов. Выявлены молекулярные механизмы и впервые изучено влияние температуры на активность липаз из поджелудочной железы свиньи и гриба Мисог¿ауатсия в системах с синтетическими полиэлектролитами: полистиролсульфонатом натрия и полидиаллилдиметиламмоний хлоридом. Впервые исследовано динамическое поверхностное натяжение систем липазы из поджелудочной железы свиньи с бычьим сывороточным альбумином, поли-Ь-глутаминовой кислотой, поли-Ь-лизином, полистиролсульфонатом натрия и полидиаллилдиметиламмоний хлоридом при различных молярных

соотношениях липаза: полимер. Научная новизна работы подтверждена 3 патентами РФ № 2301830, №2301831, № 2308486 (Зайцев С.Ю., Каштиго Т.В., Тульская Е.В., Царькова М.С., Коршикова A.B.).

Теоретическая и практическая значимость. Разработан эффективный способ направленной регуляции активности липаз в супрамолекулярных наноразмерных системах с разнозаряженными полиэлектролитами. Установлено значительное увеличение ферментативной активности и стабильности липаз в полимерных системах при возрастании температуры, что имеет большую практическую ценность для новых биотехнологических и биохимических методов. Полученные параметры динамического поверхностного натяжения систем липазы с природными и синтетическими полимерами важны как для понимания механизмов основных биохимических процессов в организме животных, так и для применения в биомедицинской диагностике. Результаты диссертационной работы используются для обучения студентов 3, 4 и 5 курсов ветеринарно-биологического факультета ФГОУ ВПО МГАВМиБ по специальности «Биохимия». Основные положения практической значимости работы отражены в 3 патентах РФ № 2301830, № 2301831, № 2308486 (Зайцев С.Ю., Канггаго Т.В., Тульская Е.В., Царькова М.С., Коршикова A.B.).

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Данные по влиянию природного полимера - бычьего сывороточного альбумина - на активность липаз из различных источников.

2. Данные по влиянию синтетических полиэлектролитов полистиролсульфоната натрия и полидиаллилдиметиламмоний хлорида - на активность липаз из различных источников.

3. Данные по влиянию температуры на активность липаз из различных источников в системах с указанными синтетическими полиэлектролитами.

4. Параметры динамического поверхностного натяжения систем панкреатической липазы с синтетическими и природными полимерами.

5. Включение липазы в системы с полиэлектролитами в определенных соотношениях как эффективный способ регулирования каталитической активности липаз из различных источников. Модели супрамолекулярных наноразмерных систем, представляющих собой различные типы комплексов липазы, поликатиона, полианиона и эмульгированного триацилглицерола.

Апробация работы. Основные материалы диссертации были доложены на Всероссийской выставке научно-технического творчества молодежи, ВВЦ, Москва, 2005 г.; на Четвертой Всероссийской Каргинской конференции «Наука о полимерах 21-му веку», МГУ, Москва, 2007 г.; на XVIII Менделеевском съезде по общей и прикладной химии, РАН, Москва,

2007 г.; на III международной конференции по коллоидной химии и физико-химической механике, МГУ, Москва, 2008; на международной научно-практической конференции «Достижения супрамолекулярной химии и биохимии в ветеринарии и зоотехнии», ФГОУ ВПО МГАВМиБ, Москва,

2008 г.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 11 печатных работ, из них 6 статей (в т.ч. 1 - в журнале «Доклады РАСХН», 1 - в журнале «Ветеринарная медицина»), 5 тезисов докладов на российских и международных конференциях, а также получено 3 патента РФ.

Личный вклад автора. Все экспериментальные исследования были проведены лично автором. В обработке данных участвовал ряд сотрудников кафедры органической и биологической химии под руководством заведующего кафедрой проф. С.Ю. Зайцева (научный руководитель данной диссертационной работы).

Структура и объем работы. Материалы диссертационной работы изложены на 131 странице. В работе приведено 79 рисунков и 14 таблиц. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов экспериментов и их обсуждения, выводов, списка литературы и приложения. Список литературы включает 161 источник (из них 33 отечественных и 128 зарубежных).

Экспериментальная часть Материалы и методы

Исследования проведены в 2005-2008 гг. на кафедре органической и биологической химии в ФГОУ ВПО МГАВМиБ им. К.И. Скрябина

В работе использовали следующие реактивы: липаза из поджелудочной железы свиньи (Л-1), Mw = 50 000 г/моль, активность фермента 15-35 МЕ/мг; липаза из гриба Mucor javanicus (Л-2), Mw = 40 000 г/моль, активность фермента 696 МЕ/мг; липаза из бактерии Pseudomonas fluorescence (Л-3), Mw = 33 000 г/моль, активность фермента 36 МЕ/мг; триацилглицерол (фирменное название - триацетин), Mw = 218,21 г/моль, чистота не менее 99 %; полистиролсульфонат натрия (ПСС), Mw = 70 000 г/моль; полидиаллилдиметиламмоний хлорид (ЛАМА), Mw = 450 000 г/моль; поли-L-лизин гидробромид (ПЛ), Mw = 30 000-70 000 г/моль; поли-Ь-глутаминовая кислота натриевая соль (ПГ), Mw= 15 000-50 000 г/моль; бычий сывороточный альбумин (БСА), Mw= 66 000 г/моль; раствор NaOH (0,01М) использовали в качестве титранта; растворы NaCl (0,05М) и СаС12 (0,05М) использовали для приготовления рабочего раствора субстрата. Активность липазы была измерена с помощью метода потенциометрического титрования на автоматическом титраторе "Radiometer" (Копенгаген) по скорости гидролиза субстрата триацетина. Одна единица активности липазы соответствует 1 мкмолю уксусной кислоты, выделяющейся при ферментативном гидролизе субстрата (триацетина) в одну минуту. Каждая проба была измерена по 3-5 раз и рассчитано среднее значение абсолютной активности липазы. Относительная активность (в %) рассчитывалась как отношение активности опытной пробы к активности контрольной пробы. Измерение параметров динамического поверхностного натяжения (ДПН) липазы в комплексах с полимерами проводили на приборах ВРА-1Р и РАТ-2Р "Sinterface" (Германия). Прибор ВРА-1Р основан на методе максимального давления в пузырьке и измеряет ДПН при коротких и средних временах существования поверхности (от 0,001 до 100 с). Прибор РАТ-2Р

измеряет ДПН при средних и длинных временах (от 10 до 10000 с) с помощью метода висящей капли.

Статистическую обработку проводили с помощью пакета программ "Статистика". Определены значения критерия достоверности на основе распределения Стьюдента с учётом принятого для научных экспериментов уровня значимости 0,05*, 0,01**, 0,001***.

Результаты и их обсуждение 1. Влияние белкового окружения ыа активность липаз из различных

источников

Бычий сывороточный альбумин (БСА) является одним из наиболее простых и доступных белков для изучения влияния биополимерного окружения на активность липаз из различных источников. Активность липазы из поджелудочной железы свиньи (Л-1), измеренная при соотношениях фермент:БСА от 10:1 до 1:100, не показала достоверных отклонений от активности липазы без БСА, принятой за 100 %. В случае липазы из гриба Мисог ]ауап1сш (Л-2) наблюдается снижение активности фермента в присутствии БСА на 4-16 % при избытке липазы относительно БСА, и снижение активности на 27-28 % при избытке БСА относительно фермента (табл.1).

Таблица 1. Относительная активность (А) липазы из Мисог javanicus (Л-2) и Pseudomonas fluorescens (Л-3) в присутствии бычьего сывороточного альбумина при разных соотношениях фермент: БСА.

Параметры А при 10:1,% А при 1:1,% А при 1:10,% А при 1:100,%

Л-2 84±8* 96±7 72±8* 73±8*

Л-3 147±6* 114±11* 128±7* 126±9*

Активность липазы из Pseudomonas fluorescens (Л-3) в присутствии БСА всегда была выше контроля (за контроль была принята активность липазы без БСА) и максимальна при соотношении липаза: БСА, равном 10:1 (выше контроля в 1,5 раза).

Таким образом, указанные липазы по-разному взаимодействуют с БСА, который является оптимальным «активатором» только для липазы из Pseudomonas fluorescens. В случае липаз из поджелудочной железы свиньи и Mucor Javanicus требовались другие полимеры, которые были выбраны из имеющихся синтетических полиэлектролитов.

2. Влияние полиэлектролитного окружения на активность липаз из поджелудочной железы свиньи и гриба Mucor javanicus Активность липазы из поджелудочной железы свиньи (Л-1) и липазы из гриба Mucor javanicus (JI-2) была измерена в присутствии полидиаллидциметиламмоний хлорида (ЛАМА) и полистиролсульфоната натрия (ПСС) в соотношениях липаза: полиэлектролит 1:1, 1:10, 1:100 при pH 7,0 и 25 °С (табл. 2, 3). Активность липаз без полиэлектролитов была принята за 100 %.

Таблица 2. Относительная активность (А) липазы из поджелудочной железы свиньи (JI-1) в присутствии ПАМА и ПСС при разных соотношениях липаза: полиэлектролит.

Параметры А при 1:1,% А при 1:10,% А при 1:100,%

Л-1 :ПАМА 73±6* 94±5 44±6**

Л-1 : ПСС 23±5** 117±4* 115±8*

Активность липазы из поджелудочной железы свиньи в присутствии ПСС при соотношениях 1:10 и 1:100 была выше контроля на 17 и 15% (табл. 2), что может быть связано с увеличением микрогетерогенности системы в результате взаимодействия липазы с полиэлектролитом. Использование смеси липаза: ПСС 1:1 приводит к значительной инактивации липазы (до 23%), поскольку недостаточно ПСС для образования микрогетерогенности системы. В присутствии ПАМА даже «наивысшая» активность панкреатической липазы при соотношении липаза: полиэлектролит равном 1:10 оказалась ниже контроля на 6% (табл. 2). По-видимому, отрицательно заряженная при нейтральных значениях рН липаза в процессе комплексообразования оказывается

расположенной внутри глобулы положительно заряженного полимера и становится менее доступной для субстрата. Это подтверждается тем, что при увеличении содержания ПАМА в смеси до 1:100 происходит значительное уменьшение активности липазы на 56 %.

Таблица 3. Относительная активность (А) липазы из Мисог ¡ачатст (Л-2) в присутствии ПАМА и ПСС при разных соотношениях липаза: полиэлектролит.

Параметры А при 1:1,% А при 1:10,% А при 1:100,%

Л-2: ПАМА 96±4 108±5 116±3*

Л-2: ПСС 152±3** 63±6* 108±5

Максимальная активность липазы из гриба Мисог ¿спатсив наблюдалась в присутствии ПАМА при соотношении 1:100 (116%), а в присутствии ПСС при соотношении 1:1 (152%). Увеличение активности липазы из Мисог ]татси5 с увеличением концентрации положительно заряженного ПАМА относительно фермента (от 96% при соотношении 1:1 до 116% при соотношении 1:100) связано прежде всего с удалением отрицательно заряженных жирных кислот из реакционной смеси путем электростатического взаимодействия с полиэлектролитом и сдвигом равновесия в сторону образования продуктов реакции. Увеличение активности липазы на 52 % в случае эквимолярного соотношения фермента с ПСС (табл. 3) можно объяснить закреплением каталитически выгодной конформации фермента в комплексе с ПСС.

Таким образом, активность липазы существенно зависит от заряда полиэлектролита и от концентрации его относительно фермента. Наилучшими для Л-1 являются системы с ПСС 1:10 и 1:100, для Л-2 -системы с ПАМА 1:100 или ПСС 1:1.

3. Регуляция активности липаз путем направленного изменения условий среды Резкое повышение температуры является одним из важнейших факторов, который с одной стороны увеличивает скорость реакции, а с

другой - вызывает инактивацию любых ферментов, в том числе липаз. Учитывая перспективы практического использования, были исследованы температурные зависимости активности липаз из поджелудочной железы свиньи и гриба Мисог]татс№ в комплексах с полиэлектролитами.

Активность липазы из поджелудочной железы свиньи в присутствии ПАМА в соотношении 1:10 (рис. 1) значительно выше активности чистой липазы с максимумом при 60 °С (выше в 2,3 раза), и наблюдается сдвиг температурного оптимума в сторону более высоких температур по сравнению с исходным ферментом. При соотношении липаза: ПАМА= 1:1 (рис. 1) активность панкреатичкской липазы оказалась как выше, так и ниже, чем в отсутствие полимера, хотя наиболее близкие значения отмечены при температуре 60 °С (ниже в 1,2 раза). Все данные свидетельствуют о взаимодействиях в системе липаза: полиэлектролит, которые делают фермент более устойчивым к температурным воздействиям.

2,5

А Я

£ %

1,5

0,5

И-

■ А(Л-1ЛАМА 1:1)/А(без полимеров) А А(Л-1ПАМА 1:10)/А(без полимеров)

Температура,

Рис. 1. Зависимость относительной активности липазы из поджелудочной железы свиньи (Л-1) в комплексе с ПАМА от температуры.

Показано, что в присутствии ПСС липаза из поджелудочной железы свиньи при 20 °С имеет активность около 100% по отношению к контролю при 25 °С при всех изученных концентрациях полиэлектролита. При повышении температуры до 60 °С активность панкреатической липазы во

' п

всех случаях была выше активности липазы без полиэлектролита при той же температуре: при соотношениях 1:1 и 1:10 активность увеличилась в 2,0 и 2,8 раз, соответственно.

Активность липазы из гриба Mucor javanicus в присутствии ПАМА в соотношении 1:1 (рис. 2) возросла в 2,7 раз при 60 °С относительно активности этой липазы без ПАМА. При соотношении липаза: ПАМА 1:10 (рис. 2) активность фермента возрастает при повышении температуры до 60 °С в 3,9 раз.

н 80

Рис. 2. Зависимость относительной активности липазы из Мисог}а\<атсии (Л-2) в комплексе с ПАМА от температуры.

Активность липазы из Мисог ]а\'атсш в присутствии ПСС с увеличением температуры до 60 °С уменьшается в 2,3 раза (при соотношении 1:1), и увеличивается в 2,8 раз (при соотношении 1:10).

Таким образом, установлено качественное и количественное изменение зависимости относительной активности фермента от температуры для систем липазы с разнозаряженными полиэлектролитами.

4. Изучение динамического поверхностного натяжения систем липазы из поджелудочной железы свиньи с природными и синтетическими полиэлектролитами

Впервые исследовано ДПН систем липазы с природным полимером -

о в

4,5 4 3,5 3

2,5 2 1,5 1

0,5 0

S-

о-

S А(Л-2ЛАМА 1:1)/А(без полимеров) А А(Л-2ЛАМА 1:10)/А(без полимеров)

Температура, "С

бычьим сывороточным альбумином (табл. 4), с модельными полипептидами -поли-Ь-лизином и поли-Ь-глутаминовой кислотой, и с синтетическими полиэлектролитами полидиаллилдиметиламмоний хлоридом и полистиролсульфонатом натрия. С помощью двух взаимодополняющих методов были получены тензиограммы при коротких (от 0,01 до 100 с) и длинных (до 3500 с) временах существования поверхности. По данным тензиограмм в программе Reading ADSA были рассчитаны параметры ДПН: ст2 (мН/м) - значения ДПН при 1 с, рассчитывали в координатах с - lg Т; стз и С4 (мН/м) - значения ДПН при 100 и 3500 с, определяли в координатах ст -Тш; 'ко vi (мН/м'с1/2) - углы наклона начального и конечного участка тензиограммы.

Таблица 4. Изменение параметров ДПН систем липаза: БСА при различных соотношениях компонентов.

Соотношение липаза:БСА 02, мН/м мН/м'1 ст аз, мН/м h, мН/м"1 ст а4, мН/м

1:0 71,7 ±0,1* 5,3 ±0,5* 70,6 ±0,3* 1,2 ±0,6* 42,9 ±1,2*

100:1 72,0 ±0,4* 4,9 ±0,3* 70,8 ±0,6* 2,1 ±0,2* 47,8 ±2,9*

10:1 72,1 ±0,1* 4,8 ±0,4* 71,1 ±0,1* 1,3 ±0,3* 45,4 ±1,8*

1:1 71,8 ±0,1* 5,4 ±0,1* 67,7 ±0,2* 7,4 ±0,9* 49,8 ±0,7*

1:10 69,9 ±0,2* 5,6 ±0,2* 61,9 ±0,2* 13,2 ±0,3* 52,0 ±0,1*

1:100 69,6 ±0,3* 5,9 ±0,2* 61,9 ±0,4* 12,5 ±0,5* 51,7 ±0,4*

0:1 69,4 ±0,1* 5,8 ±0,5* 62,0 ±0,3* 11,4 ±0,8* 51,7 ±0,1*

Параметры ДПН о2, 03, Ао изменяются достоверно, но не значительно. Наибольшие отличия в ДПН для всех изученных смесей (табл. 4) наблюдались при длинных временах существования поверхности (параметры А-1 и а4), однако наиболее характеристичным и надежным является параметр 04, который и будет далее обсуждаться (табл. 5).

ДПН растворов ПГ, ПЛ, ПАМА и ПСС постоянно во всем временном диапазоне (табл. 5). Белки понижают ДПН: 04 для раствора липазы было равно 42,9±1,2 мН/м, а 04 для раствора БСА - 51,7±0,1 мН/м (при концентрации 10"5 М). Параметр ДПН 04 для системы липаза: БСА практически не зависит от их соотношения и лишь незначительно снижается (на 3,9 мН/м) при увеличении концентрации липазы относительно БСА от 1:100 до 100:1 (табл. 5).

Таблица 5. Показатель ДПН 04 (мН/м) липазы в присутствии различных природных и синтетических полиэлектролитов.

Липаза:ПЭ Л:БСА Л:ПГ Л:ПЛ Л-.ПСС Л:ПАМА

100:1 47,8 ±2,9* 55,8 ±0,9* 46,1 ±1,1* 55,0 ±3,2* 46,1 ±3,7*

10:1 45,4 ±1,8* 53,6 ±1,4* 47,1 ±3,5* 67,3 ±1,6* 39,7 ±3,4*

1:1 49,8 ±0,7* 55,9 ±3,1* 50,5 ±2,9* 66,6 ±0,7* 50,3 ±3,1*

1:10 52,0 ±0,1* 69,0 ±0,1* 66,5 ±2,4* 68,7 ±0,1* 64,3 ±0,8*

1:100 51,7 ±0,4* 69,2 ±0,1* 68,6 ±0,1* 68,8 ±0,7* 69,1 ±0,2*

0:1 51,7 ±0,1* 69,5 ±0,2* 68,9 ±0,1* 69,2 ±0,1* 70,0 ±0,2*

В случае систем липазы с пептидными полиэлекгролитами ПЛ и ПГ параметр с?4 снижается на 22,5 и 13,4 мН/м при увеличении содержания липазы в системах от 1:100 до 100:1, что объясняется образованием гидрофобных комплексов липазы и полиэлектролитов, адсорбирующихся на поверхности раздела фаз и снижающих ДПН (табл. 5). Параметр 04 систем липазы с синтетическими полиэлектролитами ПСС и ПАМА снижается на 13,8 и 23,0 мН/м. Таким образом, величина изменения динамического поверхностного натяжения 04 для систем панкреатической липазы с полимерами с увеличением относительного содержания фермента от 1:100 до 100:1 уменьшается в ряду ПАМА > ПЛ > ПСС > ПГ > БСА. 5. Модели ферментативных супрамолекулярных наноразмерных систем При изучении каталитических свойств липаз из различных источников

в супрамолекулярных наноразмерных системах, представляющих собой комплексы липазы, поликатиона, полианиона, эмульгированного триацилглицерола и солей (ЫаС1, СаСЬ), сложно предсказать количественно изменение активности фермента в зависимости от типа полиэлектролита и его концентрации относительно фермента. Поэтому далее обсуждаются качественные характеристики взаимодействия компонентов ферментативной супрамолекулярной системы, которые определяют изменения в каталитической активности липазы и позволяют построить ряд обобщенных моделей таких систем (рис. 3 и 4). Среди многих типов взаимодействий, возникающих между ферментом и полиэлектролитом, могут преобладать взаимодействия электростатической природы (как в случае отрицательно заряженной панкреатической липазы и поликатиона ПАМА) или гидрофобной природы (как в случае комплекса липазы с полианионом ПСС).

Одним из факторов способствующих активации липазы на границе раздела фаз является увеличение микрогетерогенности системы в результате взаимодействия липазы с полиэлектролитами с образованием супрамолекулярных наноразмерных систем радиусом 54-94 нм [Зайцев и др., 2003]. Однако при большом избытке полимера относительно фермента в результате взаимодействия липазы и полиэлекгролита может наблюдаться снижение активности фермента вследствие уменьшения доступности субстрата из-за блокировки активного центра фермента и перехода липазы в закрытую конформацию. Уменьшение доступности субстрата и как следствие снижение активности фермента можно объяснить взаимодействием отрицательно заряженного субстрата с положительно заряженным полиэлектролитом. Напротив, электростатическое связывание полиэлектролитом (или БСА) образующихся карбоновых кислот и удаление их из реакционной среды способствует сдвигу равновесия реакции в сторону образования продуктов реакции и увеличению общей каталитической активности.

Ли««« • «крытая конфоршци*

Три«циягпиц«р»яы

Кйнформация ТриацилглицФрол

Мэивацилгпицерап

И 3?йрНЫ# кис поты

Рис. 3. Модели систем липаза : ПСС, равных (а) 1:1 - «низкая активность» и (б) 1:10 - «высокая активность»

ПАМАф/Д

Яигша - открытая конфврмация

Триацияглицероп

Моноациягпидерол и жирны» киедаты

Ливана - закрытая информация

Рис. 4. Модели систем липаза : I1AMA, равных (а) 1:1 - «низкая активность» и (б) 1:10 - «высокая активность»

Таким образом, только одновременным действием описанных эффектов можно объяснить изменения ферментативной активности липазы в супрамолекулярных наноразмерных системах с полиэлектролитами.

Выводы

1. Показано, что природный полимер - бычий сывороточный альбумин может как увеличивать (в случае липазы из Pseudomonas fluorescens на 1447 %), так и уменьшать (в случае липазы из Mucor javanicus на 4-28 %) относительную активность фермента в зависимости от типа липаз.

2. Обнаружено, что активность липаз из различных источников зависит

от природы синтетического полимера (полидиаллилдиметиламмоний хлорида или полистиролсульфоната натрия) и его содержания в смеси с ферментом при стандартных условиях. Относительная активность липазы из поджелудочной железы свиньи увеличивается на 17 и 15 % в присутствии полистиролсульфоната натрия в соотношении 1:10 и 1:100, соответственно.

3. Установлено, что наибольшее увеличение активности липаз в присутствии полиэлектролитов при 60 °С наблюдается для системы липазы из поджелудочной железы свиньи с полистиролсульфонатом натрия (в 2,8 раза) и для системы липазы из Mucor javanicus с полидиаллилдиметиламмоний хлоридом (в 3,9 раза) относительно активности этих липаз без полиэлектролитов при той же температуре.

4. Впервые показано влияние природы полимера при его взаимодействии с липазой на параметры динамической тензиометрии, характеризующие скорость адсорбции данных комплексов на поверхность раздела фаз. Величина изменения динамического поверхностного натяжения с?4 для систем панкреатической липазы с полимерами с увеличением относительного содержания фермента от 1:100 до 100:1 уменьшается в ряду: полидиаллилдиметиламмоний хлорид > поли-Ь-лизин > полистиролсульфонат натрия > поли-Ь-глутаминовая кислота > бычий сывороточный альбумин.

5. Предложен эффективный способ регулирования каталитической активности липаз из различных источников (из поджелудочной железы свиньи, гриба Mucor javanicus и бактерии Pseudomonas fluorescens) при включении липазы в системы с разнозаряженными полимерами. Предложены модели супрамолекулярных наноразмерных систем, представляющих собой различные типы комплексов липазы, поликатиона, полианиона и эмульгированного триглицерида.

Сведения о практическом использовании и рекомендации по использованию результатов исследования Предложен способ включения липаз из различных источников (из

поджелудочной железы свиньи, гриба Mucor javanicus и бактерии Pseudomonas fluorescenS) в системы с разнозаряженными полиэлектролитами, который позволяет получать ферментные препараты, стабильные в широком температурном интервале, что представлено в патентах автора и др. №2301830, №2301831, №2308486. Основные результаты диссертации используются для обучения студентов 3, 4 и 5 курсов ветеринарно-биологического факультета ФГОУ ВПО МГАВМиБ по специальности «Биохимия».

Список работ, опубликованных по теме диссертации Статьи:

1.* Тульская, Е.В. Влияние параметров среды на активность липазы из поджелудочной железы свиньи, иммобилизованной в полиэлектролитные комплексы / Тульская Е.В., Зайцев С.Ю., Каштиго Т.В. // Ветеринарная медицина. - 2006. - №2-3. - С. 59-60.

2. Тульская, Е.В. Изучение влияния полиэлектролитов и параметров среды на активность липазы из поджелудочной железы свиньи / Тульская Е.В., Зайцев С.Ю., Каштиго Т.В., Фролова JI.A. // Вопросы физико-химической биологии в ветеринарии: Сб.науч.тр. / Моск. гос. акад. вет. мед. и биотехн. им. К.И. Скрябина,- Москва, 2006,- С. 20-24.

3. Зайцев, С.Ю. Влияние температуры на активность комплексов липазы из гриба Mucor javanicus с полиэлектролитами / Зайцев С.Ю., Шароменко О.С., Тульская Е.В., Каштиго Т.В., Миллер Р. , JI.A. Фролова // Вопросы физико-химической биологии в ветеринарии: Сб.науч.тр. / Моск. гос. акад. вет. мед. и биотехн. им. К.И. Скрябина,- Москва, 2006,- С. 16-19.

4. Тульская, Е.В. Изучение влияния полиэлектролитов на активность липазы из поджелудочной железы свиньи и гриба Mucor javanicus / Тульская Е.В., Каштиго Т.В., Шароменко О.В., Милаёва И.В. // Сб. науч. трудов молодых ученых «Вопросы ветеринарии и ветеринарной биологии». - 2006. -С. 14-18.

5.* Зайцев, С.Ю. Зависимость активности панкреатической липазы свиньи в комплексе с полимерами от условий среды / Зайцев С.Ю., Тульская Е.В., Каштиго Т.В. // Доклады РАСХН. - 2007. - №3. - С. 72-73.

6. Тульская, Е.В. Динамическое поверхностное натяжение комплексов липазы с альбумином и полипептидами / Тульская Е.В., Зайцев С.Ю., Миллер Р. // Сборник статей Международной научно-практической конференции «Достижения супрамолекулярной химии и биохимии в ветеринарии и зоотехнии», Москва. - 2008. - Вып. 1. - С. 116-121.

Тезисы докладов:

7. Тульская, Е.В. Полимер-ферментные комплексы как функциональные нанобиоматериалы / Тульская Е.В., Шароменко О.В., Гуревич И.В. //

Сборник материалов ко Всероссийской выставке научно-технического творчества молодежи, Москва. - 2005. - С. 107-108.

8. Тульская, Е.В. Изменение активности липазы в присутствии полиэлектролитов/ Тульская Е.В., Зайцев С.Ю. //Четвертая Всероссийская Каргинская конференция «Наука о полимерах 21-му веку», Москва. - 2007. -С. 435.

9. Tulskaya E.V. Comparative study of the lipase activity in supramolecular polymer complexes / Tulskaya E.V., Zaitsev S.Yu. // XVIII Менделеевский съезд по общей и прикладной химии, Москва. - 2007. - Т.6. - С. 125.

10. Тульская, Е.В. Изучение активности липазы в присутствии синтетических и природных полиэлектролитов/ Тульская Е.В., Зайцев С.Ю. // III международная конференция по коллоидной химии и физико-химической механике, Москва. - 2008. - С. 63.

11. Тульская, Е.В. Динамическое поверхностное натяжение комплексов липазы с альбумином и полипептидами / Тульская Е.В., Зайцев С.Ю., Миллер Р. // Сборник тезисов Международной научно-практической конференции «Достижения супрамолекулярной химии и биохимии в ветеринарии и зоотехнии», Москва. - 2008. - С. 17.

Патенты:

12.* Патент РФ № 2301830 «Способ получения иммобилизованной липазы» Зайцев С.Ю., Тульская Е.В., Каштиго Т.В., Царькова М.С., Коршикова A.B., опубликовано 27.06.2007 Бюл. № 18.

13.* Патент РФ № 2301831 «Способ получения иммобилизованной липазы» Зайцев С.Ю., Тульская Е.В., Каштиго Т.В., Царькова М.С., Коршикова A.B., опубликовано 27.06.2007 Бюл. № 18.

14.* Патент РФ № 2308486 «Способ получения иммобилизованной липазы» Зайцев С.Ю., Тульская Е.В., Каштиго Т.В., Царькова М.С., Коршикова A.B., опубликовано 20.10.2007 Бюл. № 29.

* - издания для публикации основных научных результатов, рекомендуемые ВАК.

Отпечатано в ООО «Компания Спутник+» ПД № 1-00007 от 25.09.2000 г. Подписано в печать 22.12.08. Тираж 100 экз. Усл. п.л. 1,18 Печать авторефератов: 730-47-74,778-45-60

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Тульская, Екатерина Валерьевна

УСЛОВНЫЕ ОБОЗНАЧЕНИЯ И СОКРАЩЕНИЯ.

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. Обзор литературы.

1. Липолитические ферменты.

1.1. Липаза из поджелудочной железы свиньи.

1.2. Липаза из гриба рода Mucor.

1.3. Липаза, выделенная из бактерий рода Pseudomonas.

1.4. Кинетика липолиза.

2. Общие принципы иммобилизации ферментов.

2.1. Носители для иммобилизации ферментов.

2.2. Методы иммобилизации ферментов.

3. Особенности иммобилизации липаз.

3.1. Адсорбция.

3.2. Ковалентная иммо билизация липаз.

3.3. Включение или микрокапсулирование.

Глава 2. Материалы и методы.

1. Перечень используемых реактивов.

2. Методики приготовления растворов.

2.1. Приготовление рабочего раствора субстрата.

2.2. Приготовление растворов липаз.

2.3. Приготовление растворов полиэлектролитов.

3. Методы и приборы.

3.1. Методы и аппаратура для измерения активности липаз.

3.2. Исследование липазы в комплексах с полиэлектролитами методом межфазной тензиометрии.

4. Статистическая обработка результатов.

Глава 3. Результаты собственных исследований и их обсуждение.

1. Влияние белкового окружения на активность липаз из различных источников.

2. Влияние полиэлектролитного окружения на активность липаз из поджелудочной железы свиньи и гриба Мисог¿ауатсиэ.

3. Регуляция активности липаз путем направленного изменения условий среды.

3.1. Влияние рН среды на активность липаз из поджелудочной железы свиньи и гриба Мисог¿ауатсиз.

3.2. Влияние температуры на активность липаз из поджелудочной железы свиньи и гриба Мисог ]ауатси$.

3.3. Влияние температуры на активность липаз в комплексе с синтетическими полиэлектролитами.

3.3.1. Изменение активности липазы из поджелудочной железы свиньи в комплексе с полиэлектролитами при увеличении температуры.

3.3.2. Изменение активности липазы из гриба Мисог]а\атс№ в комплексе с полиэлектролитами при увеличении температуры.

4. Изучение динамического поверхностного натяжения систем липазы из поджелудочной железы свиньи с природными и синтетическими полиэлектролитами.

4.1. Измерение динамического поверхностного натяжения растворов липазы из поджелудочной железы свиньи в смеси с природным полимером - бычьим сывороточным альбумином.

4.2. Измерение динамического поверхностного натяжения растворов липазы из поджелудочной железы свиньи в смеси с поли-Ь-глутаминовой кислотой.

4.3. Измерение динамического поверхностного натяжения растворов липазы из поджелудочной железы свиньи в смеси с поли-Ь-лизином.

4.4. Измерение динамического поверхностного натяжения растворов липазы из поджелудочной железы свиньи в трехкомпонентном комплексе с поли-Ь-лизином и поли-Ьглутаминовой кислотой.

4.5. Измерение динамического поверхностного натяжения растворов липазы из поджелудочной железы свиньи в смеси с полистиролсульфонатом натрия.

4.6. Измерение динамического поверхностного натяжения растворов липазы из поджелудочной железы свиньи в смеси с полидиаллилдиметиламмоний хлоридом.

4.7. Измерение динамического поверхностного натяжения растворов липазы из поджелудочной железы свиньи в трехкомпонентном комплексе с полистиролсульфонатом натрия и полидиаллидиметиламмоний хлоридом.

5. Модели ферментативных супрамолекулярных наноразмерных систем.

ВЫВОДЫ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Влияние природных и синтетических полимеров на биохимические свойства липаз из различных источников"

Актуальность темы. Исследования биокаталитических систем на основе липаз являются важными и актуальными как по фундаментальной, так и по прикладной направленности. Липазы - это сериновые гидролазы, катализирующие ряд ключевых биохимических реакций: гидролиз, этерификация, трансэтерификация, алкоголиз, ацидолиз [120, 88]. Липазы применяются в пищевой, фармакологической, агрохимической и кожевенной промышленности, в производстве моющих средств, поверхностно и оптически активных соединений, вкусовых и ароматических компонентов, для аналитических целей в медицине [8, 23, 114, 95, 101, 50, 128, 136, 161]. Свойство энантиоселективности липаз широко применяется в органическом синтезе биологически активных веществ и их синтетических аналогов, таких как простагландины, алкалоиды, терпеноиды, антибиотики, производные нуклеозидов и т.п. [118, 148].

Однако, дальнейшее применение липаз в промышленности сдерживается сложностями в создании оптимальной реакционной системы, высокой ценой ферментов, загрязненностью большинства ферментных препаратов, низкой термостабильностью, невысокими скоростями реакций и т.д. Решения большинства вышеперечисленных проблем лежат на пути использования иммобилизованных ферментов. Иммобилизация липаз способствует отделению фермента от продуктов реакции, позволяет экономить фермент, увеличивает термостабильность и активность липаз. В настоящее время накоплен обширный материал по иммобилизации липаз из различных источников методами адсорбции, ковалентного связывания, включения в полимерные гели и т.д. [28, 95, 157]. Однако систематизированных данных о влиянии полимеров на коллоидно-химические и каталитические свойства липаз из различных источников до начала наших работ в литературе было недостаточно. При исследовании новых биоматериалов и методов иммобилизации важно проводить фундаментальную работу по изучению физико-химических свойств иммобилизованных липаз.

Исходя из этой цели, были поставлены задачи:

2. Изучить влияние синтетических разнозаряженных полиэлектролитов -полистиролсульфоната натрия и полидиаллилдиметиламмоний хлорида на активность липаз из различных источников.

Научная новизна работы. Предложены модели супрамолекулярных наноразмерных систем на основе липаз и полиэлектролитов. Выявлены молекулярные механизмы и впервые изучено влияние температуры на активность липаз из поджелудочной железы свиньи и гриба Мисог]спатсш в системах с синтетическими полиэлектролитами: полистиролсульфонатом натрия и полидиаллилдиметиламмоний хлоридом. Впервые исследовано динамическое поверхностное натяжение систем липазы из поджелудочной железы свиньи с бычьим сывороточным альбумином, поли-Ь-глутаминовой кислотой, поли-Ь-лизином, полистиролсульфонатом натрия и полидиаллилдиметиламмоний хлоридом при различных молярных соотношениях липаза: полимер. Научная новизна работы подтверждена 3 патентами РФ № 2301830, №2301831, № 2308486 (Зайцев С.Ю., Каштиго Т.В., Тульская Е.В., Царькова М.С., Коршикова A.B.).

Теоретическая и практическая значимость.

Разработан эффективный способ направленной регуляции активности липаз в супрамолекулярных наноразмерных системах с разнозаряженными полиэлектролитами. Установлено значительное увеличение ферментативной активности и стабильности липаз в полимерных системах при возрастании температуры, что имеет большую практическую ценность для новых биотехнологических и биохимических методов. Полученные параметры динамического поверхностного натяжения систем липазы с природными и синтетическими полимерами важны как для понимания механизмов основных биохимических процессов в организме животных, так и для применения в биомедицинской диагностике. Результаты диссертационной работы используются для обучения студентов 3, 4 и 5 курсов ветеринарно-биологического факультета ФГОУ ВПО МГАВМиБ по специальности «Биохимия». Основные положения практической значимости работы отражены в 3 патентах РФ № 2301830, № 2301831, № 2308486 (Зайцев С.Ю., Каштиго Т.В., Тульская Е.В., Царькова М.С., Коршикова A.B.).

Основные положения, выносимые на защиту:

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Тульская, Екатерина Валерьевна

Выводы

2. Обнаружено, что активность липаз из различных источников зависит от природы синтетического полимера (полидиаллилдиметиламмоний хлорида или полистиролсульфоната натрия) и его содержания в смеси с ферментом при стандартных условиях. Относительная активность липазы из поджелудочной железы свиньи увеличивается на 17 и 15 % в присутствии полистиролсульфоната натрия в соотношении 1:10 и 1:100, соответственно.

3. Установлено, что наибольшее увеличение активности липаз в присутствии полиэлектролитов при 60 °С наблюдается для системы липазы из поджелудочной железы свиньи с полистиролсульфонатом натрия (в 2,8 раза) и для " системы липазы из Mucor javanicus с полидиаллилдиметиламмоний хлоридом (в 3,9 раза) относительно активности этих липаз без полиэлектролитов при той же температуре.

4. Впервые показано влияние природы полимера при его взаимодействии с липазой на параметры динамической тензиометрии, характеризующие скорость адсорбции данных комплексов на поверхность раздела фаз. Величина изменения динамического поверхностного натяжения 04 для систем панкреатической липазы с полимерами с увеличением относительного содержания фермента от 1:100 до 100:1 уменьшается в ряду: полидиаллилдиметиламмоний хлорид > поли-Ь-лизин > полистиролсульфонат натрия > поли-Ь-глутаминовая кислота > бычий сывороточный альбумин.

5. Предложен эффективный способ регулирования каталитической активности липаз из < различных источников (из поджелудочной железы свиньи, гриба Mucor javanicus и бактерии Pseudomonas fluorescens) при включении липазы в системы с разнозаряженными полимерами. Предложены модели супрамолекулярных наноразмерных систем, представляющих собой различные типы комплексов липазы, поликатиона, полианиона и эмульгированного триглицерида.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Тульская, Екатерина Валерьевна, Москва

1. Балабушевич, Н.Г. Включение белков в полиэлектролитные микрокапсулы из декстран-сульфата, протамина и меламинформальдегида / Балабушевич Н.Г., Сухоруков Г.В., Ларионова Н.И. // Вестник МГУ. Серия 2 Химия,- 2002ю № 43. - С. 370-376.

2. Беззубов, Л.П. Химия жиров / Л.П. Беззубов. М.: Пищевая промышленность, 1975. - 279 с.

3. Березин, И.В. Иммобилизованные ферменты. Современное состояние и перспективы: Учеб. пособие / И.В .Березин, В.К. Антонов, К. Мартинек,- М.: Изд-во Моск. Ун-та, 1976.- 296с.

4. Березин, И.В. Практический курс химической и ферментативной кинетики: Учеб. пособие / И.В. Березин, A.A. Клесов. М.: Изд-во МГУ, 1976.

5. Березин, И.В. Основы физической химии ферментативного катализа: Учеб. пособие / И.В. Березин, K.M. Мартинек. М: Высшая школа, 1977.

6. Березин, И.В. Иммобилизованные ферменты / И.В. Березин, Н.Л. Клячко, A.B. Левашов. М.: Высшая школа, 1987. - 159 с.

7. Брокерхоф, X. Липолитические ферменты / X. Брокерхоф, Р. Дженсен; Под ред. акад. А.Е. Браунштейна и Е.В. Горяченковой. М.: Мир, 1978. - 396 с.

8. Бургелев, О.О. Механизм ингибирующего эффекта полианионов и поликатионов / Бургелев О.О., Каплун А.П., Козлов Л.В., Лисакова C.B.,

9. Дьяков В.Л., Швец В.И. // Биоорганическая химия. 2003,- Т.29.- №2 -С.139-142.

10. Володькин, Д.В.Включение белков в полиэлектролитные микрочастицы путем послойной адсорбции полиэлектролитов на агрегатах белка / Володькин Д.В., Балабушевич Н.Г., Сухоруков Г.Б., Ларионова Н.И. // Биохимия. 2003. - Т. 68. - № 2. - С. 283-289.

11. Горохова, И. В. Изучение взаимодействия и активации липазы из Pseudomonas fluorescens в монослоях и преципитатах ПАВ / Горохова И.В., Иванов А.Е., Зайцев С.Ю., Зубов В.П. // Известия Академии наук. Серия химическая. 2003. - № 4. - С. 38-47.

12. Денуэль, П. Система липаза-колипаза как модель липолитического биокатализа. Физико-химические проблемы ферментативного катализа / П. Денуэль. М. Наука, 1984. - 250 с.

13. Диксон, М. Ферменты / М. Диксон, Э. Уэбб. пер.англ.- М.: Мир, 1982.-т. 1.-392 с.

14. Зайцев, С.Ю. Мембранные структуры на основе синтетических и природных полимеров: Монография. М.: ФГОУ ВПО МГАВМиБ, 2006. -189 с.

15. Изумрудов В. А. Макромолекулярный обмен в растворах комплексов глобулярных белков с неприродными полиэлектролитами / Изумрудов В.А., Зезин А.Б., Кабанов В.А. // Докл. АН СССР. 1984. - Т. 275. -С. 1120-1123.

16. Изумрудов, В.А. Равновесие интерполиэлектролитных реакций и явление молекулярного "узнавания" в растворах интерполиэлектролитных комплексов / Изумрудов В.А., Зезин А.Б., Кабанов В.А. // Успехи химии. -1991.-Т. 60.-С. 1570-1585.

17. Иммобилизованные клетки и ферменты. Методы / Под ред. Дж. Вудворда. Пер.с англ. - М.:Мир, 1988. - 215с.

18. Иммобилизованные ферменты / Березин И.В., Клячко H.JL, Левашов A.B. и др. М.: Высш. шк., 1987. - 159 с.

19. Кабанов В.А. Влияние ионной силы и pH среды на поведение комплекса БСА с поли-4-винил-К-этилпиридинийбромидом в водных растворах / Кабанов В.А., Мустафаев В.И. // ВМС А. 1981. - Т. 23. - С. 255260.

20. Кислухина, О.В. Ферменты в производстве пищи и кормов / О.В. Кислухина. -М.: ДеЛи принт, 2002. 179 с.

21. Клёсов, A.A. Ферментативный катализ: учеб. пособие / A.A. Клёсов, И.В.Березин.- М. Изд-во Моск. Ун-та, 1980. 264с.

22. Лейтес, Ф.Л. Гистохимия липолитических ферментов в норме и при патологии липидного обмена / Ф.Л. Лейтес. М.: Медицина, 1967.

23. Мустафаев, М.И. Комплексы неприродных полиэлектролитов с белками: Дис. . докт. хим. наук / М.И. Мустафаев; Московский гос. ун-т. -Москва, 1981.-344 с.

24. Неклюдов А. Д. Свойства иммобилизованной липазы из Rhizopus oryzae / Неклюдов А.Д., Средов Б.Д., Шибанов В.В.// Прикл. биохимия и микробиология. 1981. - № 17. - С. 510-517.

25. Рахимов, М.М. Субстратная специфичность иммобилизованных липаз / Рахимов М.М., Джанбаева Н.Р. // Доклады академии наук СССР. -Биохимия. 1976.Т. 229. - №6. - С. 79.

26. Русанов, В.М. Лечебные препараты крови / В.М. Русанов, И.С. Левин,- М.: ИД Медпрактика, 2004.- 284 с.

27. Самсонов В.Г. Полимерные комплексы, включающие синтетические полиэлектролиты и физиологически активные вещества / Самсонов В.Г. //ВМС А. 1979. - Т. 21. - № 4. - С. 725-733.

28. Тривен, М. Иммобилизованные ферменты / М. Тривен,-М.:Мир,1983. -213с.

29. Трофимова, О.Д. Исследование молекулярного механизма реакции ферментативного гидролиза триглицеридов: Автореф.дис. . канд.биол.наук: 3.00.02 / О.Д. Трофимова; Воронежский гос. ун-т. Воронеж, 2004. -16 с.

30. Халгаш, Я. Биокатализаторы в органическом синтезе / Я. Халгаш. -Пер. со словац. С. С. Злотского. М.:Мир,1991. - 204 с.

31. Adamczalc М. Enhanced activity of intracellular lipases from Rhizomucor miehei and Yarrowia lipolytica by immobilization on biomass support particles / Adamczalc M., Bednarski W. // Process Biochem. 2004. -Vol. 39. - P. 1347-1361.

32. Ai H. Biomedical Applications of Electrostatic Layer-by-Layer Nano-Assembly of Polymers, Enzymes, and Nanoparticles / Ai H., Jones S.A., Lvov Y.M. // Cell Biochem. Biophys. 2003. - Vol. 39. - P. 23-43.

33. Andrade J.D. Protein adsorption and materials biocompatibility: A tutorial review and suggested hypotheses / Andrade J.D., Hlady V. // Adv. Pol. Sci. -1986.-Vol. 79.-P. 1-63.

34. Antipov A.A. Carbonate microparticles for hollow polyelectrolyte capsules fabrication / Antipov A.A., Shchukin D., Fedutik Y., Petrov A.I., Sukhorukov G.B., Mohwald H. // Colloid. Surf.: Physicochem. Eng. Aspects. -2003. Vol. 224. -P. 175-184.

35. Antipov A.A. Polyelectrolyte multilayer capsule permeability control I Aiitipov A.A., Sukhorukov G.B., Leporatti S., Radtchenko I.L., Donath E., Mohwald H. // Colloid. Surf.: Physicochem. Eng. Aspects. 2002. - Vol. 198. - P. 535-541.

36. Ariga A. Assembling alternate dye-polyion molecular films by electrostatic layer-by-layer adsorption / Ariga A., Lvov Y., Kunitake T. // J. Am. Chem. Soc. 1997. - Vol. 119. - P. 2224-2231.

37. Arroyo M. Immobilization/stabilization on different hydroxilic supports of lipase from Candida rugosa / Arroyo M., Moreno J.M., Sinisteixa J.V. // J. Mol. Catal. 1993. - Vol. 83. - P. 261-271.

38. Bai Z.W. A novel enzyme support derived from aminated silica gel and polysuccinimide: preparation and application for the immobilization of porcine pancreatic lipase / Bai Z.W., Zhou Y.K. // Reactive & Functional Polymers. -2004.-Vol. 59.-P. 93-98.

39. Balcao V.M. Adsorption of protein from several commercial lipase preparations onto a hollow-fiber membrane module / Balcao V.M., Vieira M.C., Malcata F.X. // Biotechnol. Prog. 1996. - Vol. 12. - P. 164-172.

40. Balcao V.M. Bioreactors with immobilized lipases: State of the art / Balcao V.M., Paiva A.L., Malcata F.X. // Enzyme Microb. Technol. 1996. - Vol. 18.-P. 392-416.

41. Balcao V.M. On the Performance of a Hollow-Fiber Bioreactor for Acidolysis Catalyzed by Immobilized Lipase / Balcao V.M., Malcata F.X. // Biotechnol. Bioeng. 1998. - Vol. 60. - P. 114-123.

42. Betigeri S.S. Immobilization of lipase using hydrophilic polymers in the form of hydrogel beads / Betigeri S.S., Neau S.H. // Biomaterials. 2002. - Vol. 23.-P. 3627-3636.

43. Bomscheuer U.T. Optimizing lipases and related enzymes for efficient application / Bomscheuer U.T., Bessler C., Srivinas R., Krishna S.H. // Trends Biotechnol. 2002. - Vol. 20. - P. 433-437.

44. Bouwer S.T. The performance of enzymemembrane reactors with immobilized lipase / Bouwer S.T., Cuperus F.P., Derksen J.T.P. // Enzyme Microb. Technol. 1997. - Vol. 21. - P. 291-296.

45. Brockerhoff H. Action of pancreatic lipase on emulsions of water-soluble esters / Brockerhoff H. // Archives of Biochemistry and Biophysics. Vol. 134,-№2.-P. 366-371.

46. Brockerhoff H. Substrate specificity of pancreatic lipase / Brockerhoff H. // Biochimica et Biophysica Acta (BBA) Enzymology. - 1968. - Vol. 159. -№ 2. - P. 296-303.

47. Brockman H. Colipase-induced reorganization of interfaces as a regulator of lipolysis / Brockman H. // Colloids and Surfaces B: Biointerfaces. -2002. -Vol. 26. № 1-2. - P. 102-111.

48. Brockman H.L. Kinetic behavior of the pancreatic lipase-colipase-lipid system / Brockman H. L. // Biochimie. Vol. 82. - № 11. - P. 987-995.

49. Brockman H.L. Triglyceride lipase from porcine pancreas : EC 3.1.1.3 Triacylglycerol acylhydrolase / Brockman H.L. // Methods in Enzymology. -1981.-Vol. 71.-P. 619-627.

50. Carta G. Enzymatic synthesis of esters using an immobilized lipase / Carta G., Gainer J.L., Benton A.H. // Biotechnol. Bioeng. 1991. - Vol. 37. - P. 1004-1009.

51. Caruso F. Assembly of beta-glucosidase multilayers on spherical colloidal particles and their use as active catalysts / Caruso F., Fiedler H., Haage K. // Colloid. Surf.: Physicochem. Eng. Aspects. 2000. - Vol. 169. - № 1-3. - P. 287-293.

52. Caruso F. Enzyme Encapsulation in Layer-by-Layer Engineered Polymer Multilayer Capsules / Caruso F., Trau D., Mohwald H., Renneberg R. // Langmuir. 2000. - Vol. 16. - P. 1485-1488.

53. Caruso F. Protein multilayer formation on colloids through a stepwise self-assembly technique / Caruso F., Mohwald H. // J. Amer. Chem: Soc. 1999. -Vol. 121. - № 25. - P. 6039-6046.

54. Chapus C. Minireview on pancreatic lipase and colipase / Chapus C., Rovery M., Sarda L., Verger R. // Biochimie. 1988. - Vol. 70. - № 9. - P. 12231233.

55. Chapus C. Role of colipase in the interfacial adsorption of pancreatic lipase at hydrophilic interfaces / Chapus C., Sari H., M. Semeriva M., Desnuelle P. //FEBS Letters. 1975. - Vol. 58. - № 1-2. - P. 155-158.

56. Cheung J. Molecular-level processing of conjugated polymers. Layer-by-layer manipulation of via electrostatic interactions / Cheung J., Stockton W., Rubner M. // Macromolecules. 1997. - Vol. 30. - P. 2712-2716.

57. Chiou S.H. Immobilization of Candida rugosa lipase on chitosan with activation of the hydroxyl groups / Chiou S.H., Wu W.T. // Biomaterials. 2004. -Vol. 25.-P. 197-204.

58. Dautzenberg H. Immobilization of trypsin in polycation-polyanion complexes / Dautzenberg H., Karibyants N., Zaitsev S.Yu. // Macromol. Rapid Commun. 1997. - Vol. 18. - P. 175-182.

59. Deujgnat C. pH-Responsive Properties of Hollow Polyelectrolyte Microcapsules Templated on Various Cores / Deujgnat C., Sukhorakov G.B // Langmuir. 2004. - Vol. 20. - P.7265.

60. Donath E. Novel hollow polymer shells via colloid templated assembly of polyelektrolytes / Donath E., Sukhorakov G. B., Caruso F. et al. // Angew. Chem. 1998. - Vol. 110. - P. 2323-2327.

61. Dumitriu S. Polyionic hydrogels as support for immobilization of lipase / Dumitriu S., Chornet E., Vidal P.F., Moresoli C. // Biotechnology Techniques. -1995.-Vol. 9.-P. 833-836.

62. Duri B.A. Lipase immobilization: An equilibrium study of lipases immobilized on hydrophobic and hydrophilic/hydrophobic supports / Duri B.A., Yong Y.P. // Biochem. Engineering Journal. 2000. - Vol. 4. - P. 207-215.

63. Fang M. Magnetic Bio/Nanoreactor with Multilayer Shells of -Glucose Oxidase and Inorganic Nanoparticles / Fang M., Grant P., McShane M., Sukhorakov G., Golub V., Lvov Y. // Langmuir. 2002. - Vol.18. - P.6338-6344.

64. Fernandez-Lafuente R. Immobilization of lipases by selective adsorption on hydrophobic supports / Fernandez-Lafuente R., Armisen P., Sabuquillo P., Fernandez-Lorente G, Guisan J.M. // Chemistry and Physics of Lipids. 1998. -Vol. 93.-P. 185-197.

65. Gao C. Swelling and Shrinking of Polyelectrolyte Microcapsules in Response to Changes in Temperature and Ionic Strength / Gao C., Leporatti S., Moya S., Donath E., Mohwald H. // Chem. Europ. J. 2003. - Vol. 9. - № 4. - P. 915-920.

66. Gandhi N. Applications of lipase / Gandhi N. / JAOCS. 1997. - Vol. 74. -№4.-P. 621-634.

67. Gargouri Y. Gastric lipases: Biochemical and physiological studies / Gargouri Y., Moreau H., Verger R. // Biochimica et Biophysica Acta: Lipids and Lipid Metabolism. Vol. 1042. - № 3. - P. 421.

68. Gilbert S.J. Pseudomonas lipases: Biochemical properties and molecular cloning / Gilbert J. // Enzyme and Mcrobial Technology. 1993. - Vol. 15. -№ 8. -P. 634-645.

69. Giorno L. Biocatalytic membrane reactors: applications and perspectives / Giorno L., Drioli E. // TIBTECH. 2000. - Vol. 18. - P. 339-349.

70. Giorno L. Hydrolysis and regioselective transesterification catalyzed by immobilized lipases in membrane bioreactors / Giorno L., Molinari R., Natoli M., Drioli E. //J. Membr. Sci.- 1997. Vol. 125. - P. 177-187.

71. Hammond P. Formation of polymer microstructures by selective deposition of polyion multilayers using patterned monolayers as a template / Hammond P., Whitesides G. // Macromolecules. 1995. - Vol. 28. - P. 75697571.

72. Hermoso J. Nuetron crystallographic evidence of lipase-colipase complex activation by a micelle / Hermoso J., Pignol D., Penel S. // The EMBO J. 1997. - Vol.16. - P. 5531-5536.

73. Hoq M.M. Continuous hydrolysis of olive oil by lipase in microporous hydrophobic hollow fiber bioreactor / Hoq M.M., Koike M., Yamane T., Shimizu S. //Agric. Biol. Chem. 1985. - Vol. 49. - P. 3171-3178.

74. Hsu A. Transesterification activity of lipase immobilized in a phylosilicate sole-gel matrix / Hsu A., Jones K., Marmer W. // J. Kluwer. 2004. -Vol. 11.-P. 917-921.

75. Iler R. J. Multilayers of colloidal particles / Iler R. J. // Colloid & Interface Sci. 1966. - Vol. 21. - P. 569-594.

76. Ivanov A. E. Methods for the immobilization of lipases and their use for ester synthesis / Ivanov A. E., Schneider M. P. // J. Mol. Catal. B.: Enzymatic. -1997. -№3.- P. 303-309.

77. Jaeger K.E. Lipases for biotechnology / Jaeger K.E., Eggert T. // Curr. Opin. Biotechnol. 2002. - Vol. 13. - P. 390-397.

78. Jensen R.G. Lipolytic enzymes / Jensen R.G. // Progr. Chem. Fats Other Lipids. 1971. - Vol. 11. - P. 347.

79. Keller S. Layer-by-layer assembly of intercalation compounds and superlattices on surfaces: Towards molecular "beaker" epitaxy / Keller S., Kim H., Mallouk T. //J. Am. Chem. Soc. 1994. - Vol. 116. - P. 8817-8818.

80. Klieadr E.E. Impact of liposome-encapsulated enzyme cocktails on cheddar cheese ripening / Kheadr E.E., Vuillemard J.C., Deeb S.A. // Food Research International. 2003. - Vol. 36. - P. 241-252.

81. Kimura Y. Application of immobilized lipase to hydrolysis of triacylglyceride / Kimura Y., Tanaka A., Sonomoto K., Nihira T., Fukui S. // Applied. Microbiol. Technol. 1983. - Vol. 17. - P. 107-112.

82. Knezevic Z. Alginate-immobilized lipase by electrostatic extrusion for the purpose of palm oil hydrolysis in lecithin/isooctane system / Knezevic Z.,

83. Bobic S., Obradovic B., Mojovic L., Bugarski B. // Process Biochem. 2002. -Vol. 38. -№3.-P. 313-318. •

84. Knezevic Z. Immobilization of lipase on a hydrophobic zeolite type Y / Knezevic Z., Mojovic L., Adnadevic B. // J. Serb. Chem.Soc. 1998. - Vol. 63. -P. 257-264.

85. Knezevic Z. Kinetics of lipase-catalyzed hydrolysis of palm oil in lecithin/isooctane reversed micelles / Knezevic Z., Siler-Marinkovic S., Mojovic L. // Appl. Microbiol. Biotechnol. 1998. - Vol. 49. - P. 267-271.

86. Knezevic Z. Operating regime of a biphasic oil/aqueous hollow-fibre reactor with immobilized lipase for oil hydrolysis / Knezevic Z., Kukic G., Vukovic M., Bugarski B., Obradovic B. // Process Biochem.- 2004. Vol. 39. - P. 1377-1385.

87. Knezevic Z. Palm oil hydrolysis by lipase from Candida cylindracea immobilized on zeolite type Y / Knezevic Z., Mojovic L., Adnadjevic B. // Enzyme Microb. Technol. 1998. - Vol. 22. - P. 275-280.

88. Lawrens R.C. Method for the Quantitative Estimation of Microbial Lipases / Lawrens R.C., Fiyer T.F., Reiter B. // Nature. 1967. - Vol. 213. - P. 1264.

89. Lee J. Thin-film light emitting devices from an electroluminescent ruthenium complex / Lee J., Yoo D.; Handy E., Rubner M. // Appl. Phys. Lett. -1996. Vol. 69. - P. 1425-1426.

90. Lortie R. Enzyme catalyzed esterification / Lortie R. // Biotechnology Advances. 1997. - Vol. 15. - P. 1-15.

91. Lvov Y. Assembly, structural characterization and thermal behavior of layer-by-layer deposited ultrathin films of polyvmylsulfate and polyallylamine / Lvov Y., Decher G, Mohwald H. // Langmuir. 1993. - Vol. 9. - P.481-486.

92. Lvov Y. Assembly of polyelectrolyte molecular films onto plasma treated glass / Lvov Y., Haas H., Decher G., Mohwald H. // J. Phys. Chemistry. -1993.-Vol. 97.-P. 12835-12841.

93. Lvov Y. Direct electrochemistry of myoglobin and cytochrome P450 in alternate layer-by-layer films with polyions / Lvov Y., Schenkman J., Rusling J // J. Am. Chem. Soc. 1998. - Vol. 120. - P. 4073-4080.

94. Lvov Y. Urease Encapsulation in Nano/organized Microshells / Lvov Y., Antipov A., Mamedov A., Mohwald H., Sukhorukov G. // Nano Letters. -2001,-Vol. l.-P. 125-128.

95. Malcata F.H. Immobilized lipase reactors for modification of fats and oils / Malcata F.H., Reyes H.R., Garcia H.S., Hill C.G., Amimdson C.H. // JAOCS. 1990. - Vol. 67. - P. 890-909.

96. Malcata F.H. Kinetics and mechanisms of reactions catalysed by immobilized lipases / Malcata F.H., Reyes H.R., Garcia H.S., Hill C.G., Amundson C.H. //Enzyme Microb.Technol. 1992. - Vol. 14. - P. 426-446.

97. Malcata F.X. Use of a lipase immobilized in a membrane reactor to hydrolyze the glycerides of butteroil / Malcata F.X., Hill C.G., Amundson C.H. // Biotechnol. Bioeng. 1991. - Vol. 38. -P. 853-868.

98. Matsumoto M. Immobilization of lipase in microcapsules prepared by organic and inorganic materials / Matsumoto M., Sumi N., Ohmori K, Kondo K. // Process Biochem. 1998. - Vol. 33. - P. 535-540.

99. Mercon F. Lipase immobilized membrane reactor applied to babassu oil hydrolysis / Mercon F., Erbes V.L., Sanf Anna G.L. Jr., Nobrega R. // Braz. J. Chem. Eng. 1997. - Vol. 14. - № 1. -P. 1-11.

100. Miled N. Discrimination between closed and open forms of lipases using electrophoretic techniques / Miled N., Riviere M., Cavalier J.F., Buono G.,

101. Berti, L., Verger R. I I Analytical Biochemistry. 2005. - Vol. 338. - № 2. - P. 171-178.

102. Miled N. Interfacial catalysis by lipases / Miled N., Beisson F., de Caro J., de Caro A., Arondel V., Verger R. // Journal of Molecular Catalysis B: Enzymatic. -2001. -Vol. 11.-№4-6.-P. 165-171.

103. Mojovic L. Immobilization of lipase from Candida rugosa on a polymer support / Mojovic L., Knezevic Z., Popadic R., Jovanovic S. // Appl. Microbiol. Biotechnol. 1998. - Vol. 50. - P. 676-681.

104. Mojovic L. Rhizopus arrhizus lipase-catalyzed interesterification of the midfraction of palm oil to a cocoa butter equivalent fat / Mojovic L., Siler-Marinkovic S., Kukic G., Vunjak-Novakovic G. // Enzyme Microb. Technol. -1993.-Vol. 15.-P. 438-443.

105. Moreno J.M. Immobilization of lipase from Candida cylindracea on inorganic supports / Moreno J.M., Sinisterra J.V. // J. Mol. Catal. 1994. - Vol. 93.-P. 357-369.

106. Murakata T. Immobilization of lipases with polyion complex and its esterification activity in organic medium / Murakata T., Makabe H., Yamakage Y. // J. of chemical engineering of Japan. 1997. - Vol.30. - №2. - P. 195-201.

107. Okumura S. Synthesis of various kinds of esters by four microbial lipases / Okumura S., Iwai M., TsujisakaY. // Biochim. Biophys.Acta. 1979. -Vol. 575.-P. 156-165.

108. Pandey A. The realm of microbial lipases in biotechnology / Pandey A., Benjamin S., Soccol C.R., Nigam P., Krieger N., Soccol V.T. // Biotechnol. Appl. Biochem. 1999. - Vol. 29. - P. 119-131.

109. Philipp B. Polyelectrolyte complexes — recent developments and open problems / Philipp B., Dautzenberg H., Linow K. J., Koetz J., Dawydoff W. // Progr. Polym. Sci. 1989. - Vol. 14. - P. 91.

110. Piéroni G. Interactions of lipases with lipid monolayers : Facts and questions / Piéroni G., Gargouri Y., S arda L., Verger R. // Advances in Colloid and Interface Science. 1990. - Vol. 32. - № 4. - P. 341-378.

111. Pignol D. Critical role of micelles in pancreatic lipase activation revealed by small angle neutron scattering / Pignol D., Ayvazian L., Kerfelec B. // J. Biol Chem. 2000. - Vol. 275. - P. 4220-4224.

112. Pignol D. The lipase/colipase complex is activated by a micelle: neutron crystallographic evidence / Pignol D., Hermoso J., Kerfelec B., Crenon I., Chapus C., Fontecilla-Camps J.C. // Chemistry and Physics of Lipids. 1998. -Vol. 93.-№ 1-2.-P. 123-129.

113. Pronk W. The hydrolysis of triglycerides by immobilized lipase in a hydrophilic membrane reactor / Pronk W., Kerkhof P.J.A.M., van Helden C., van t RietK. //Biotechnol. Bioeng. 1988. - Vol. 32. - P. 512-518.

114. Ransac S. Covalent inactivation of lipases / Ransae S., Gargouri Y., Marguet F. // Methods in Enzymology: Lipases, Part B: Enzyme Characterization and Utilization; Ed. by B. Rubin and E. A. Dennis. New York: Academic Press, 1991.- Vol. 286.-P.190-198.

115. Rasor J.P. Enzyme-catalyzed processes in pharmaceutical industry / Rasor J.P., Voss E. // Appl. Catalysis A: General. 2001. - Vol. 221. - P. 145158.

116. Riddihough G. Picture an enzyme at work / Riddihough G. // Nature -1993,- Vol. 362.-P.793.

117. Schuler C. Preparation of enzyme multilayers on colloids for biocatalysis / Schüler C., Caruso F. // Macromol. Rapid Commun. 2000. - Vol. 21.-№11.-P. 750-753.

118. Shi X. Encapsulation of Submicrometer-Sized 2-Methoxyestradiol Crystals into Polymer Multilayer Capsules for Biological Applications / Shi X., Wang S., Chen X., Meshinchi S., Baker J.R. // Molecular pharmaceutics. 2004. -Vol. 3. -№2.-P. 144-151.

119. Siler-Marinkovic S. Enzymatic production of monoacylglycerol in microemulsion / Siler-Marinkovic S., Mojovic L., Knezevic Z., Antonovic N. // J. Serb. Chem.Soc. -1995. Vol. 60. - P. 567-574.

120. Skirtach A.G. Ultrasound stimulated release and catalysis using polyelectrolyte multilayer capsules / Skirtach A.G., De Geest B.G., Mamedov A., Antipov A.A., Kotove N.A., Sukhorukov G.B. // J. Mater. Chem. 2007. - Vol. 17.-P. 1050-1054.

121. Stamatis H. Biocatalysis using microemulsion-based polymer gels containing lipase / Stamatis H., Xenaksis A. // J. Molecular Catalysis B: Enzymatic. 1999. - Vol. 6. - P. 399-406.

122. Stroeve P. Gas transfer in supported films made by molecular self-assembly of ionic polymers / Stroeve P., Vasques V., Coelho M., Rabolt J. // Thin Solid Films.- 1996. Vol. 284. - P. 708-712.

123. Sukhorukov G. B. Comparative Analysis of Hollow and Filled Polyelectrolyte Microcapsules Templated on Melamine Formaldehyde and Carbonate Cores / Sukhorukov G. B., Shchukin D.G., Dong. W. et al // Macromol. Chem. Phys. 2004. - Vol. 205. - P. 530.

124. Sukhorukov G.B. Stepwise Polyelectrolyte Assembly on Particle Surfaces: a Novel Approach to Colloid Design / Sukhorukov G.B., Donath E., Davis S., Lichtenfeld H., Caruso F., Popov V.I., Mohwald H. // Polym. Adv. Technol. 1998. - Vol. 9. - P. 759-767.

125. Svendsen A. Lipase protein engineering / Svendsen A. //Biochim Biophys Acta. 2000.- Vol. 1543. - №2. - p. 223-238.

126. Taqieddin E. Enzyme immoblization in novel alginate-chitosan coreshell microcapsules / Taqieddin E., Amiji M. // Biomaterials. 2004. - Vol. 25.-P. 1937-1945.

127. Taylor R.F. Commercially available supports for protein immobilization, in protein immobilization: fundamentals and application / Taylor R.F.; Ed. R.F. Taylor. New York: Marcel Dekker Inc, 1991. - P. 139-160.

128. Taylor R.F. Covalent and coordination immobilization of protein, in protein immobilization: fundamentals and application / Taylor R.F., Cabrai J.M.S., Kennedy J.F.; Ed. R.F. Taylor. New York: Marcel Dekker Inc, 1991. - P. 73-138.

129. Tlieil F. Lipase supported synthesis of biologically active compounds / Theil F. // Chem. Rev. 1995. - № 95. - P. 2203-2227.

130. Tilbeurgh H. Colipase: structure and interaction with pancreatic lipase / Tilbeurgh H., Bezzine S., Cambillau C., Verger R., Carrière F. // Biochimica et Biophysica Acta: Molecular and Cell Biology of Lipids. 1999. - Vol. 1441. - № 2-3.-P. 173-184.

131. Van der Padt A. Enzymatic acylglycerol synthesis in a membrane bioreactor / Van der Padt A., Edema M.J., Sewalt J.J.W., Van t Riet K. // J. Am. Oil. Chem. Soc. 1990. - Vol. 67. - P. 347-352.

132. Verger R. The sulfhydryl groups of pancreatic lipase / Verger R., Sarda L., Desnuelle P. // Biochimica et Biophysica Acta: Protein Structure. 1970. -Vol. 207. - № 2. - P. 377-379.

133. Villeneuve P. Customizing lipases for biocatalysis: a survey of chemical, physical and molecular biological approaches / Villeneuve P., Muderhwa J.M., Graille J., Haas M.J. // J. Molecular Catalysis B: Enzymatic. -2000.-Vol. 9.-P. 113-148.

134. Volodkin D.V. Matrix Polyelectrolyte Microcapsules: New System for Macromolecule Encapsulation / Volodkin D.V., Petrov A.I., Prevot M., Sukhorukov G.B. // Langmuir. 2004. - Vol. 20. - P. 3398-3406.

135. Volodkin D.V. Protein Encapsulation via Porous CaCC>3 Microparticles Templating / Volodkin D.V., Larionova N.I., Sukhorukov G.B. // Biomacromolecules. 2004. - Vol. 5. - P. 1962-1972.

136. Vulfson E.N. Industrial applications of lipases, in: Lipases: their structure, biochemistry and application / Vulfson E.N.; Eds. P. Woolley and S.B. Peterson. Cambridge: Cambridge University press, 1994. - P. 271-288.

137. Xia J. Protein-Polyelectrolyte Complexes / Xia J., Dubin P.L. // Macromolecular Complexes in Chemistry and Biology; Ed. by P. L. Dubin, J. Bock, R. M. Davies, D. N. Schulz, C. Thies. Berlin: Springer Verlag, 1994. -Vol. 15.-P. 247-271.

138. Yin L. Influence of polyglycerol esters of fatty acid on in vitro digestibility of lipid droplets by pancreatic lipase / Yin L., Wang Z., Kobayashi I., Nakajima M. // Chemistry and Physics of Lipids. -2008. Vol. 154. - № 1. - P. 3536.

139. Zaitsev S.Yu. General approach for lipase immobilization in polyelectrolyte complexes / Zaitsev S.Yu., Gorokhova I.V., Kashtigo T.V., Zintchenko A., Dautzenberg H. // Colloids and Surfaces A: Physicochem. Eng. Aspects. 2003. - Vol. 221. - P. 209-220.

140. Zaks A. Application of biocatalysts and biotransformations to the synthesis of pharmaceuticals / Zaks A., Dodds D.R. // DDT. 1997. - Vol. 2. - P. 513-531.

Информация о работе

Тульская, Екатерина Валерьевна
кандидата биологических наук
Москва, 2008
ВАК 03.00.04

Диссертация

Влияние природных и синтетических полимеров на биохимические свойства липаз из различных источников - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы