Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Влияние низкодозового радиационного воздействия на возрастную динамику частоты спонтанных и индуцированных in vitro хромосомных аберраций в лимфоцитах человека

ВАК РФ 03.00.01, Радиобиология

Автореферат диссертации по теме "Влияние низкодозового радиационного воздействия на возрастную динамику частоты спонтанных и индуцированных in vitro хромосомных аберраций в лимфоцитах человека"



На правах рукописи

ЛЮБИМОВА НАТАЛЬЯ ЕВГЕНЬЕВНА

ВЛИЯНИЕ НИЗКОДОЗОВОГО РАДИАЦИОННОГО ВОЗДЕЙСТВИЯ

НА ВОЗРАСТНУЮ ДИНАМИКУ ЧАСТОТЫ СПОНТАННЫХ И ИНДУЦИРОВАННЫХ IN VITRO ХРОМОСОМНЫХ АБЕРРАЦИЙ В ЛИМФОЦИТАХ ЧЕЛОВЕКА.

03 00 01 - радиобиология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва-2007

□ОЗ1773

003177313

Работа выполнена на базе Федерального государственного учреждения «Российский научный центр радиологии и хирургических технологий Федерального агентства по высокотехнологичной медицинской помощи» (ФГУ РНЦ РХТ Росмедтехнология, Санкт-Петербург)

Научный руководитель

доктор биологических наук, профессор Воробцова Ирина Евгеньевна

Официальные оппоненты.

доктор биологических наук Рубанович Александр Владимирович Институт общей генетики им НИ Вавилова РАН

Доктор биологических наук Михельсон Виктор Михайлович

Институт цитологии РАН Санкт-Петербург

Ведущая организация ФГУ Российский научный центр рентгенорадиологии Федерального Агентства по здравоохранению

Защита состоится 20 декабря 2007 г. в 15.30 на заседании диссертационного совета Д 501 001.65 при Московском государственном университете им MB Ломоносова по адресу 119899, Москва, Ленинские горы, МГУ, биологический факультет, аудитория №

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Московского государственного университета им М.В Ломоносова

Автореферат разослан /-7. /С О ^

Ученый секретарь диссертационного совета

кандидат биологических наук Веселова Татьяна Владимировна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ.

Актуальность проблемы. Использование в 20-м веке ионизирующей радиации в военных, промышленных и медицинских целях привело к повышению радиационной нагрузки на отдельные контингента людей Различные аварийные ситуации еще больше увеличили радиационный фон планеты и массовость облучения людей, что потребовало прогнозов в отношении возможных отдалённых медико-биологических эффектов для человеческой популяции Последствия действия на человека ионизирующей радиации в относительно больших дозах достаточно хорошо изучены Однако большинство радиационных воздействий от техногенных источников характеризуются малыми дозами и малыми мощностями доз В этом случае трудно оценить риск негативных эффектов для здоровья человека с помощью прямых эпидемиологических наблюдений Изучение нарушений, которые возникают в клетках в ответ на такое облучение, становится весьма актуальным, так как оно позволяет понять начальные этапы процессов, приводящих в дальнейшем к развитию опухолевых и неопухолевых форм отдаленной лучевой патологии

A priori понятно, что повреждения ДНК не могут не отражаться на функциях клетки, на ее жизнеспособности, а следовательно, и на полноценности тканей и, в конечном итоге, на состоянии здоровья Комплексная и мониторная оценка состояния клеточного генома людей, подвергшихся низкодозовому облучению, по уровню хромосомных аберраций (ХА) представляется продуктивным подходом к оценке потенциальной опасности этого воздействия для облученных людей

Помимо морфологической характеристики генома облучённых людей по уровню ХА представляется актуальным для эпидемиологических прогнозов исследование его функциональной полноценности Одним из подходов к решению этого вопроса является, на наш взгляд, изучение стабильности хромосом лимфоцитов при тестирующем облучении этих клеток in vitro Исследования такого рода весьма немногочисленны (Бочков Н П., Пилосов РА, 1968, Чудика А. П, 1968, Sasaki М S et al, 1970, Воробцова И Е и др, 1995 с, Колюбаева С Н и др., 1995).

С увеличением срока между имевшим место низкодозовым облучением и сроком регистрации различных нарушений генома существенное значение для

оценки цитогенетических последствий такого воздействия может приобретать возраст обследуемых лиц Известно, что в процессе естественного старения, так же как и после радиационного воздействия, в клетках увеличивается пул мутационных событий (Кузнецов А И и др , 1980, Воробцова И Е и др , 2000, Мельнов С Б и др , 2004, Воробцова И Е и др , 2004 а, Bender М et al, 1989, Cole J et al, 1991, King С M et al, 1994, Tucker J D et al, 1994) Сравнительное исследование возрастной динамики уровня различных ХА у лиц, ранее облучённых, и контрольных позволит оценить вклад факторов «облучение» и «возраст» в наблюдаемые эффекты При этом влияние этих факторов может быть неодинаковым на различные типы ХА стабильные - нестабильные, спонтанные -индуцированные in vitro

Установлено, что спонтанная частота ХА является показателем риска развития онкологических и других заболеваний у человека (Hagmar L et al, 1994, Smerhovsky Zs et al, 2001, Воробцова И E, Семенов А В, 2006), то есть существует связь между уровнем первичных нарушений в клетках (ХА, мутации, нестабильность) и состоянием здоровья Выявление роли экзогенных (облучение) и эндогенных (возраст) факторов в возникновении этих нарушений и, как следствие, в формировании медико-биологических последствий низкодозового облучения для человека является актуальной задачей радиационной медицины Представление о спонтанном уровне различных ХА (стабильных и нестабильных) необходимо и в практической радиобиологии для проведения корректной биодозиметрии как в ранние (по частоте нестабильных ХА), так и в отдаленные (по частоте стабильных ХА) сроки после облучения с учетом возрастного уровня этих аберраций

Цели и задачи исследования Целью настоящей работы явилось установление закономерности влияния низкодозового радиационного воздействия и возраста на базовый уровень ХА в лимфоцитах человека и на стабильность их генома при облучении in vitro

ТТтиг ПОГТИЖРИИЯ гутгчй ИРгтн fikiпо пллтоп яадтл gjiодуцупша ЗЦДЯ"™

1 Оценить спонтанную частоту нестабильных ХА, выявляемых рутинным методом, в лимфоцитах лиц, подвергавшихся в прошлом неконтролируемому низкодозовому радиационному воздействию (экспонированная группа), по сравнению с людьми контрольной выборки,

2 Сравнить уровень стабильных ХА, выявляемых методом FISH, у лиц экспонированной и контрольной выборок,

3 Оценить радиочувствительность (стабильность) генома лимфоцитов по частоте индуцированных ХА при облучении in vitro в дозе 1,5 Гр гамма-излучения у этих же групп людей,

4 Изучить влияние возраста на частоту указанных типов ХА в обеих группах

Научная новизна и практическая значимость работы Впервые в рамках одной работы проведено параллельное исследование влияния двух факторов экзогенного (низкодозового облучения) и эндогенного (возраста) на базовый уровень различных ХА (нестабильного и стабильного типов) в лимфоцитах человека и на стабильность их генома, оценённую по критерию частоты ХА, индуцированных гамма-излучением in vitro Показано, что

- возрастное накопление ХА более выражено у лиц экспонированной группы по сравнению с контрольной, при этом в обеих группах уровень стабильных ХА увеличивается с возрастом быстрее, чем уровень нестабильных ХА,

- в контрольной группе наблюдается тенденция к возрастному увеличению радиочувствительности лимфоцитов по критерию нестабильных ХА,

- в экспонированной группе радиочувствительность лимфоцитов достоверно уменьшается с возрастом из-за разнонаправленного характера ее изменения у детей и взрослых у детей радиочувствительность лимфоцитов повышена по сравнению с детьми контрольной группы, а у взрослых — снижена по сравнению с соответствующей контрольной группой,

- низкодозовое облучение людей меняет возрастную динамику как спонтанных ХА, так и индуцированных in vitro

Теоретическое значение работы Полученные результаты свидетельствуют о том, что низкодозовое облучение ускоряет процесс естественного старения человека, оцениваемого по уровню стабильных и нестабильных ХА в лимфоцитах крови, и меняет возрастную динамику стабильности генома, оценённую по частоте индуцированных in vitro ХА

Практическая значимость результатов

- Данные по возрастной динамике спонтанного уровня ХА следует учитывать при

установлении факта неконтролированного облучения человека, особенно если установление факта облучения осуществляется на основе уровня стабильных ХА

- Тестирующее облучение лимфоцитов человека in vitro может быть использовано в качестве экспресс-метода для выявления скрытой нестабильности генома.

- Нестабильность генома детей, подвергавшихся низкодозовому облучению, может служить основанием для отнесения их к группе повышенного риска развития негативных медицинских последствий, в частности канцерогенных

Положения, выносимые на защиту

1 У лиц, подвергавшихся в прошлом неконтролируемому радиационному воздействию в низких дозах, повышена базовая частота нестабильных и стабильных ХА и ускорена их возрастная динамика по сравнению с контрольными донорами

2 Выявлен разнонаправленный характер изменения радиочувствительности лимфоцитов у лиц разного возраста экспонированной группы- у детей радиочувствительность лимфоцитов повышена по сравнению с детьми контрольной группы, у взрослых - снижена по сравнению с соответствующим возрастным контролем.

Апробация работы. Предварительная защита диссертации состоялась на заседании Проблемной комиссии отдела клинической радиобиологии ФГУ РНЦРХТ Росмедгехнологий Работа была апробирована на V международном экологическом форуме стран Балтийского региона «Экобалтика-2004» (16-18 июня 2004 г, Санкт-Петербург, Россия), Всероссийской научно-практической конференции «Чернобыль 20 лет спустя «Социально-правовые и медицинские проблемы граждан, пострадавших в радиационных авариях и катастрофах» (5-6 апреля 2006 г, Санкт-Петербург, Россия), V Съезде по радиационным исследованиям (радиобиология, радиоэкология, радиационная безопасность) (10-14 апреля 2006 г, Москва, Россия), Международной научно-практической конференции (23-25 мая 2007 г, Киев, У1фаина), Международной конференции «Новые направления в радиобиологии» (6-7 июня 2007 г, Москва, Россия), VI Европейском конгрессе "Healthy and active ageing for all Europeans" (5-8 июля 2007 г, Санкт-Петербург, Россия); Международной школе-конференции, посвященной

100-летию со дня рождения М Е Лобашева «Системный контрольгенетических и цитогенетических процессов» (10-13 ноября 2007 г, Санкт-Петербург, Россия)

Публикации Основные положения диссертации отражены в 9 публикациях 2 статьях, 7 тезисах докладов

Объем и структура диссертации Диссертация состоит из введения, литературного обзора, методической части, результатов исследования и обсуждения, заключения, выводов и списка цитированной литературы Диссертация изложена на 160 страницах машинописного текста, содержит 18 таблиц и 7 рисунков Список цитированной литературы включает 198 источников, из них 125 иностранных

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ.

1. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

1.1. Характеристика обследованных групп людей.

Рутинный цитогенетический анализ проведен у двух групп людей -контрольной и так называемой «экспонированной», то есть подвергавшейся в прошлом низкодозовому радиационному воздействию (в дозах до 50 сГр) Контрольная группа (128 человек) состояла из детей (ДК) и взрослых (ВК) обоего пола в возрасте от 3 до 72 лет, постоянно проживавших в Санкт-Петербурге, без профессиональных контактов с источниками ионизирующего излучения, не имевших в течение трёх месяцев до обследования острых заболеваний и диагностических рентгенологических процедур за полгода перед обследованием Экспонированная группа (282 человека) включала в себя категории лип взрослые (ВЭ) и дети (ДЭ) от 2 до 45 лет, эвакуированные из зон, загрязнённых радионуклидами, ликвидаторы последствий аварии на Чернобыльской АЭС (JI) в возрасте от 23 до 66 лет, лица, подвергавшиеся радиационному воздействию в результате аварий на ядерных предприятиях атомных подводных лодках и при испытании ядерного оружия, так называемые «ветераны подразделения особого риска» (ВТ) в возрасте 28-71 лет Срок от момента облучения до момента онтогенетического анализа составлял 1-45 лет

Цитогенетический анализ с использованием метода флуоресцентной гибридизации m situ (FISH-метод) был проведен у 27 ветеранов «подразделений особого риска» (ВТ) в возрасте от 45 до 76 лет и у 26 здоровых доноров (ВК) в возрасте от 45 до 72 лет.

На каждого человека заполняли анкету, содержащую, кроме паспортных данных, сведения о профессии и профессиональной вредности, вредных привычках (для взрослых), перенесенных заболеваниях и принимаемых лекарственных препаратах, у лиц, участвовавших в ликвидации последствий аварии на ЧАЭС, собирали информацию о сроках и характере выполняемой работы в тридцатикилометровой зоне, зарегистрированной дозе, у эвакуированных - о месте и времени проживания в загрязненной радионуклидами зоне, у ветеранов -сведения о характере выполняемой работы при возникновении чрезвычайной радиационной ситуации, зарегистрированной дозе

1.2. Приготовление метафазных препаратов лимфоцитов крови.

Культивирование лимфоцитов крови осуществляли по стандартной методике (Moorhead Р S. et al, 1960) Для определения доли клеток, находящихся на стадии первого митотического деления, проводили FPG-окрашивания по методу, описанному (Kulka U et al, 1995) Рутинный цитогенетический анализ выполняли на световом микроскопе «Бимам» (JIOMO, Россия) в проходящем свете под масляной иммерсией при суммарном увеличении х900 Для каждого обследованного подсчитывали не менее 200 клеток для определения спонтанного уровня ХА и не менее 100 клеток для определения уровня индуцированных ХА. Учитывали следующие типы аберраций хромосом: дицентрические и кольцевые хромосомы (нестабильные хромосомные обмены - НХО), парные фрагменты (ПФ), одиночные фрагменты (ОФ) Анализировали только метафазы первого митотического деления

1.3. Облучение образцов крови.

Кровь облучали в бакпечатках при комнатной температуре в среде без ФГА в дозе 1,5 Гр гамма-излучения 137Cs при мощности дозы 0,31±0,001 Гр/мин.

1.4. Окраска препаратов метафазных хромосом методом флуоресцентной гибридизации in situ.

Окрашивания хромосом-мишеней 1,4, 12 проводили по методике, описанной в работе (Воробцова И Е и др , 2000), а коммерческих хромосом-мишеней 1,4, 8, -по протоколу, рекомендованному фирмой «Cambio» (Великобритания)

Препараты анализировали на флуоресцентном микроскопе Axioplan (Carl Zeiss) при суммарном увеличении хЮОО Анализировали только метафазы первого митоза, содержащие шесть окрашенных хромосом-мишеней Регистрировали реципрокные и терминальные транслокации, инсерции, дицентрические хромосомы при анализе на каждого человека не менее 1000 клеток По частоте ХА с участием окрашенных хромосом-мишеней рассчитывали геномную частоту событий по формуле, рекомендованной (Lucas J N et al, 1992)

1.5. Статистическая обработка результатов.

При анализе результатов рутинного анализа для каждой группы рассчитывали среднюю частоту хромосомных аберраций на 100 клеток Достоверность межгрупповых отличий оценивали при помощи t-критерия Стьюдента При оценке влияния различных факторов на частоту ХА использовали корреляционный анализ Спирмана, регрессионный анализ с использованием метода наименьших квадратов, двухфакгорный дисперсионный анализ Для статистической обработки данных использовали программные пакеты «Statistica for Windows 6 0», Statgraphics Plus 5 1, GraphPad Prism 4 0

2. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Влияние ннзкодозового облучения на спонтанную частоту нестабильных ХА.

Результаты сравнения контрольной и экспонированной групп по частоте ХА представлены в таблице 1 В большинстве экспонированных групп частота ХА превышает контрольную У детей группы ДЭ частота маркеров радиационного воздействия (НХО) повышена в два раза по сравнению с детьми контрольной выборки, частота ОФ также превышает контрольную, однако различия не достоверны В группе взрослых общая частота ХА достоверно повышена во всех группах, у ВЭ - за счёт частоты ОФ, у J1 - за счёт аберраций хромосомного типа (НХО и ПФ), у ВТ - за счёт всех типов аберраций Наибольшая частота ХА

наблюдается у ВТ, хотя со времени окончания радиационного воздействия прошли десятилетия (от 15 до 45 лет) Таким образом, на нескольких контингентах лиц, подвергавшихся в прошлом низкодозовому облучению, продемонс грировано сохранение повышенного уровня нестабильных ХА, что совпадает с литературными данными Поскольку цитогенетический анализ проводили в отдалённые сроки после лучевого воздействия, представленные результаты могут свидетельствовать либо о длительном сохранении первично индуцированных ХА (повышение частоты НХО), либо об их более частом возникновении de novo, то есть о нестабильности облучённого генома (повышение частоты ПФ и ОФ)

Таблица 1 Спонтанная частота хромосомных аберраций (на 100 клеток) у людей различных групп

группа дети взрослые

ДК ДЭ ВК ВЭ Л ВТ

кол-во людей 43 75 92 19 174 22

кол-во клеток 7340 16009 17438 3730 32605 5477

всего ХА 1,88±0,16 2,0й±0,11 2,02±0,11 2,62±0Д7* 2,59±0,09* 3,52±0,26*

НХО 0,07±0,03 0,15±0,03* 0,11±0,02 0,13±0,0б 0,17±0,02* 0,55±0,10*

ПФ 0,76±0,Ю 0,67±0,06 0,94±0,07 1,07±0,17 1,30±0,06» 1,42±0,16*

ОФ 1,05±0,12 1,18±0,09 0,97±0,07 1,42±0,19* 1,12±0,06 1,55±0,17*

Примечание Отличия от контрольных групп достоверны * - р<0,05.

2.2. Влияние возраста на спонтанную частоту нестабильных ХА.

Для выявления связи между частотой ХА и возрастом было использовано два подхода корреляционный анализ Спирмана по индивидуальным данным возраст -частота ХА, корреляционный, дисперсионный и регрессионный анализы средних значений ХА и возраста в группах, объединённых в 10-летние возрастные интервалы

В контрольной выборке при корреляционном анализе Спирмана индивидуальных данных не было установлено достоверной связи с возрастом ни

_____ "V А -----------------------------.С--------Я ТТЛГ^Л ТТЛ ЛА----*

ии^п лл, ап 1№1их и|дпи>1шл 1Ш№о аисрроцпи — £1ли, 114*'. V**», ли1Я

для общей частоты аберраций хромосомного типа она была на грани достоверности При аналогичном анализе выборки экспонированных лиц наблюдали достоверное увеличение с возрастом общей частоты ХА, частот НХО и ПФ (табл 2)

Таблица 2 Коэффициенты корреляции между спонтанной частотой хромосомных аберраций и возрастом по индивидуальным данным и при разделении выборок на шесть возрастных групп

тип аберраций по индивидуальным данным по усредненным данным

контроль (N=128) экспонированные (N=282) контроль (N=6) экспонированные (N=6)

ХА г=0,17 р=0,059 1=0,23 р=0,0001 г=0,99 р=0,003 г=0,99 р=0,003

НХО г=0,15 р=0,097 г=0,13 р=0,036 г=0,94 р=0,017 г=0,70 р=0,136

ПФ г=0,1б р=0,074 1=0,24 р=0,000 г=0,94 р=0,017 г=0,54 р=0,017

ОФ г= -0,10 р=0,238 г=-0,02 р=0,696 1= -0,43 р=0,419 1=0,26 р=0,658

Примечание Жирным выделены достоверные коэффициенты корреляции (р< 0,05), ХА - аберрации хромосомного типа

В таблице 3 представлены данные о возрастной зависимости уровня ХА при разбиении выборок на десятилетние возрастные интервалы В обеих группах количество аберраций хромосомного типа увеличивается с возрастом

Таблица 3 Спонтанная частота хромосомных аберраций у лиц шести возрастных групп _

Группа возрастной интервал, годы средний возраст, годы кол-во чел кол-во аберраций на 100 клеток

ХА НХО ПФ ОФ

контроль 1-10 6,9±0,5 22 0,63±0,14 0,06±0,04 0,57±0,13 0,99±0,17

11-20 14,4±0,5 24 0,93±0,14 0,08±0,04 0,84±0,13 1,03±0,15

21-30 26,2±0,6 28 1,01±0,14 0,08±0,04 0,96±0,14 1,14±0,15

31-40 34,9±0,6 29 1,01±0,14 0,15±0,05 1,04±0,14 1,06±0,14

41-50 44,4±0,6 16 1,17±0,20 0,14±0,07 1,04±0,19 0,66±0,15

51-72 61,7±1,9 9 1,34±0,28 0,23±0,15 1,10±0,25 0,81±0,22

экспонированные 1-10 7,8±0,3 43 0,75±0,09 0,13±0,04 0,62±0,08 1,12±0,11

11-20 13,1±0,3 29 0,96±0,12 0,19±0,05 0,77±0,11 1,30±0,14

11-зи 27,б±0,4 1Ь 1,31±0,1б 0,15±0,05 1,16±0,15 1,16±0,15

31-40 35,8±0,3 82 1,33±0,09 0,14±0,03 1,19±0,09 1,27±0,09

41-50 45,0±0,4 65 1,59±0,12 0,23±0,05 1,36±0,11 1,03±0,09

51-72 58,1±0,9 37 1,65±0,14 0,28±0,06 1,37±0,13 1,32±0,13

Примечание ХА - аберрации хромосомного типа

При корреляционном анализе этих данных в контрольной выборке высокую достоверную положительную корреляцию наблюдали между возрастом и общей частотой аберраций хромосомного типа, а также частотами НХО и ПФ, что может быть связано с уменьшением межиндивидуальных различий за счет усреднения данных В экспонированной выборке подтвердилась и оказалась более теской

положительная связь частот аберраций хромосомного типа и возраста, установленная при анализе индивидуальных данных Корреляция частоты НХО и возраста, в отличие от аналогичной корреляции, рассчитанной по индивидуальным данным, оказалась недостоверной (табл 2)

Двухфакторный дисперсионный анализ, проведенный по усредненным данным в шести возрастных группах, выявил достоверный вклад фактора «облучённость группы» в значение частот всех изученных аберраций Фактор «возраст» оказывал достоверное влияние на общую частоту ХА (Р=3,5, р<0,01) и частоту ПФ (Р=5,5, р<0,001), но не на уровень НХО и ОФ

Как показал регрессионный анализ данных, усреднённых по десятилетним интервалам, зависимость частоты ХА, частоты НХО и частоты ПФ от возраста как в контрольной, так и в экспонированной выборках, удовлетворительно описывается линейной функцией вида У = а + ЬХ, где У - частота аберраций в процентах, X - возраст в годах В контрольной выборке линейная модель оказалась достоверной для аберраций хромосомного типа - НХО, ПФ и общей частоты ХА, в экспонированной выборке - для общей частоты ХА и частоты ПФ Коэффициенты уравнений регрессии частоты ХА на возраст представлены в табл 4, а соответствующие кривые на рис 1 Различия между соответствующими коэффициентами регрессии в контрольной и экспонированной выборках для общей частоты ХА достоверны, тогда как почти двукратные различия между коэффициентами регрессии для частоты ПФ лежат на грани достоверности (Р=0,07)

Таблица 4 Коэффициенты уравнений линейной регрессии частоты ХА на

возраст, рассчитанной по усреднённым данным для шести возрастных групп

группа ХА НХО ПФ

а ЬЧО"1 а ЬМО* а

К 0,65±0,07 1,1±0Д 0,02±0,02 0,3±0,1 0,64±0,07 0,8±0,2

Э 0,72±0,09* 1,8±0,2* 0,11±0,04 0,2±0,1 0,60±0,10

Примечание К - контрольная выборка, Э - экспонированная выборка, жирным выдепгена достоверная модель регрессии (^0,05), * - достоверные отличия от контроля (р<0,05), ХА - аберрации хромосомного типа

0 10 203040506070

ВОараСГ, ГОДэ!

Рис 1 Зависимость спонтанной частоты ХА от возраста для контрольной выборки У = (0,65±0,07)+(0,011±0,002)Х, для экспонированной выборки У = (0,72±0,09)+(0,018±0,002)Х

Таким образом, разные примененные способы анализа данных

(корреляционный, дисперсионный и регрессионный анализ) позволили установить

влияние возрастного фактора на частоту разных типов ХА как в контрольной, так и

в экспонированной выборках Более выраженное возрастное увеличение общего

количества ХА наблюдалось в экспонированной выборке. Частота ПФ также

быстрее увеличивалась с возрастом в экспонированной группе, хотя и

недостоверно Нарастание же частоты НХО с возрастом было практически

одинаково в обеих группах

2.3. Влияние низкодозового облучения на частоту стабильных ХА.

В таблице 5 представлены данные по геномной частоте стабильных (транслокации) и нестабильных (дицентрияеские хромосомы) хромосомных обменов в группах «ветераны» и «контроль» сравнимого возраста Средняя частота транслокаций у ВТ достоверно превышает таковую у доноров контрольной группы. В то же время практически двукратное увеличение частоты дицентрических хромосом в этой группе по сравнению с контрольной не является достоверным

Таблица 5 Частота хромосомных обменов в группе ветеранов и в контрольной группе _ ___

Группа Кол-во человек Возрастной интервал, годы Средний возраст, годы Кол-во транслокаций на 100 клеток Кол-во диц хромосом на 100 клеток

ВТ 27 45-76 63,0+1,5 2,76±0,23* 0,23+0,05

К 26 45-72 58,5±1,2 1,19±0,16 0,12±0,03

Примечание ВТ - группа ветеранов подразделений особого риска, К -контрольная группа, * - различия достоверны (р<0,001)

2.4. Влияние возраста на частоту стабильных ХА.

В контрольной группе была выявлена достоверная корреляция между индивидуальной частотой транслокаций и возрастом, коэффициент ранговой корреляции Спирмана составил 0,37 (р<0,05) В группе ВТ значение этого коэффициента

Таблица 6 Коэффициенты уравнений регрессии частоты стабильных ХА на

возраст у «ветеранов» и в контрольной группе

группа коэффициент «а» для частоты

транслокаций дицентрических хромосом

ВТ 0,044± 0,004* 0,003± 0,001

К 0,019± 0,002 0,004± 0,001

Примечание К - контрольная группа, ВТ - группа ветеранов, жирным выделена достоверная модель регрессии, * - различия достоверны (р<0,001)

составило 0,31 (р<0,05) Регрессионный анализ показал, что в исследованном

возрастном интервале в обеих группах зависимость «возраст-эффект» описывается

функцией вида Y = аХ (Y - частота транслокаций, X - возраст) (табл 6) Наклон

линии регрессии частоты транслокаций на возраст в группе ВТ оказался

достоверно бблыним, чем в группе ВК (табл 6) Это свидетельствует о более

интенсивном возрастном накоплении аберраций, т е, об ускоренном старении лиц,

подвергавшихся неконтролируемому облучению Отсутствовала достоверная

разница в возрастном увеличении частоты диценгрических хромосом между

группами, что наблюдалось для IIXО и при использовании рутинного метода (см

2 2)

2.5. Влияние низкодозового облучения на частоту индуцированных in vitro ХА.

В таблице 7 представлены результаты сравнения контрольной и экспонированной групп по частоте индуцированных m vitro ХА У детей экспонированной группы общая частота ХА и частота НХО повышены по сравнению с ДК, по частоте ПФ различия между этими двумя группами

отсутствуют. Для взрослых результаты, полученные для разных групп, неоднозначны Общая частота индуцированных ХА повышена в группе ВЭ по сравнению с контрольной, в основном за счёт НХО Частота ПФ, так же как у ДЭ, не отличается от частоты ПФ в контрольной группе В группах Л и ВТ общая частота изученных аберраций оказалась достоверно ниже, чем в контрольной группе у ликвидаторов - за счёт обоих типов ХА (НХО и ПФ), у ветеранов - в основном за счёт ПФ Таким образом, в экспонированванной выборке отмечается повышенная радиочувствительность лимфоцитов периферической крови у групп ДЭ и ВЭ В то же время наблюдалась бблыная по сравнению с контрольной группой радиорезистентность лимфоцитов у групп ВТ и Л, что напоминает

Таблица 7 Частота индуцированных хромосомных аберраций (на 100 клеток) у людей различных групп__

группа дети взрослые

ДК ДЭ ВК ВЭ Л ВТ

кол-во людей 29 42 38 12 106 5

кол-во клеток 3866 4981 4195 1350 12170 500

всего ХА 39,7±0,8 45,21 ±0,76* 41,31 ±0,76 45,33±1,36* 36,11±0,44* 35,80±2,14*

НХО 22,1±0,7 27,91±0,64* 22,07±0,64 25,48±1,19* 19,66±0,36* 18,60±1,74

ПФ 17,6±0,6 17,31±0,54 19,24±0,76 19,85±1,09 16,45±0,34* 13,40±1,52*

Примечание * - отличия от контрольных групп достоверны (р<0,05), ХА -аберрации хромосомного типа

реакцию адаптивного ответа Действительно, в группе ликвидаторов значительная часть людей до аварии на ЧАЭС профессионально подвергалась воздействию либо химических, либо радиационных факторов Кроме того, во время ликвидации аварии на ЧАЭС эти люди подвергались хроническому облучению Эш факюры могли вызвать состояние преадаптации лимфоцитов этих людей к последующему облучению in vitro Группа ВЭ состояла преимущественно из женщин, которые, также как и дети, не имели контакта с ионизирующей радиацией до аварии У них наблюдалась повышенная m vitro радиочувствительность лимфоцитов

Полученные результаты свидетельствуют о том, что низкодозовое облучение людей может приводить как к увеличению радиочувствительности (нестабильности) генома, так и к увеличению его радиоустойчивости, в

зависимости, по-видимому, от предшествующих генотоксических воздействий на человека

2.6. Влияние возраста на частоту индуцированных in vitro ХА

Для выявления связи между частотой индуцированных ХА и возрастом были использованы те же два подхода, что и при анализе влияния возраста на частоту спонтанных ХА

В контрольной выборке при корреляционном анализе индивидуальных данных не было выявлено достоверной корреляции с возрастом ни общего уровня индуцированных ХА, ни частот отдельных типов аберраций - НХО, ПФ При аналогичном анализе выборки экспонированных лиц была обнаружена достоверная

Таблица 8 Коэффициенты корреляции между частотой индуцированных хромосомных аберраций и возрастом по индивидуальным данным и при разделении выборок на шесть возрастных групп_

тип аберраций по индивидуальным данным по усредненным данным

контроль (N=67) экспонированные (N=165) контроль (N=5) экспонированные (N=6)

ХА г =0,12 р=0,330 г =-0,20 р=0,011 г=0,77 р=0,113 г= -0,83 р=0,038

НХО г =0,01 р=0,992 г = -0,25 р=0,001 г=0,64 р=0,242 г=-0,85 р=0,027

ПФ г =0,12 р=0,335 г = -0,05 р=0,509 г=0,82 р=0,088 1= -0,25 р=0,417

Примечание Жирным выделены достоверные коэффициенты корреляции (р<0,05), ХА - аберрации хромосомного типа

отрицательная корреляция общей частоты индуцированных ХА и частоты НХО и возраста (табл 8) В основном это определялось более высокой радиочувствительностью лимфоцитов периферической крови в детской группе по сравнению с взрослыми, так как возрастного уменьшения уровня индуцированных ХА во взрослой группе обнаружено не было Зависимость уровня ПФ и возраста отсутствовала в экспонированной выборке

В таблице 9 приведены частоты индуцированных ХА при разбиении выборок на шесть десятилетних интервалов Общая частота индуцированных ХА и частота ПФ в контрольной выборке имеют тенденцию к возрастному увеличению радиочувствительности клеток, при этом частота НХО практически не меняется с возрастом донора В экспонированной выборке, напротив, частота индуцированных ХА у детей повышена по сравнению с взрослыми Далее в

интервале 21-62 лет она не меняется Если сравнить детей (группа 1-20 лет) и взрослых (от 21 до 62 лет) контрольной и экспонированной выборок, то можно отметить разнонаправленный характер отличий радиочувствительности их лимфоцитов У детей экспонированной выборки лимфоциты более радиочувствительны, чем лимфоциты детей контрольной выборки, у взрослых экспонированной выборки, наоборот, менее радиочувствительны по сравнению с соответствующем возрастным контролем

Корреляционный анализ данных, сгруппированных по десятилетним интервалам, показал, что в контрольной выборке несмотря на существенное

Таблица 9 Частота индуцированных хромосомных аберраций у лиц шести возрастных групп.

групп а возрастной интервал, годы средний возраст, годы кол-во чел кол-во аберраций на 100 клеток

ХА НХО ПФ

контроль 1-10 6,87±0,63 15 38,68±1,11 21,98±0,94 16,70±0,85

12-20 13,20±0,48 15 40,40*1,09 21,16±0,91 18,36±0,86

21-30 26,21±0,80 14 42,40±1,23 22,59±1,04 19,80±0,99

31-40 34,63±0,72 19 39,83±1,07 21,55±0,90 18Д8±0,85

41-50 43,50±0,87 4 46,75±2,50 23,75±2,13 23,00±2,10

51-60 - - - - -

экспонированные 1-10 7,72±0,34 29 47,38±0,84 27,77±0,77 16,66±0,63

11-20 12,69±0,47 13 49,46±1,30 28,23±1,17 18,82±1,01

21-30 27,39±0,47 23 36,21±0,98 19,18±0,80 17,03±0,77

31-40 36,39±0,39 51 36,58±0,65 20,78±0,54 15,80±0,49

41-50 44,77±0,49 30 37,75±0,81 20,26±0,67 17,49±0,64

51-62 55,11±1,01 19 36,82±0,97 19,72±0,80 17,10±0,76

Примечание ХА - аберрации хромосомного типа

увеличение значений коэффициентов корреляции, положительная связь между частотой всех изученных аберраций и возрясточ остчпяеь недостоверной В экспонированной выборке подтвердилась и оказалась более тесной отрицательная связь общей частоты ХА, частоты НХО и возраста, установленная при анализе индивидуальных данных. Поскольку не было обнаружено какой-либо корреляции мeжлv частотой ХА и возпягтом V тпослктх экспонипованной выбопки. то есть в

V 1 ^ 1 А » '

возрастном интервале от 21 до 62 лет, можно полагать, что отрицательная корреляция «возраст - частота ХА», выявленная на всей выборке, определяется в основном бблыпей радиочувствительностью лимфоцитов детей по сравнению с взрослыми

Двухфакторный дисперсионный анализ, проведенный по данным табл 9, выявил достоверный вклад фактора «возраст» в значение частот всех изученных аберраций (р<0,001) Фактор «облучённость группы» оказывал достоверное влияние только на частоту ПФ (Б=11,55, р<0,001) Обнаружено достоверное взаимодействие обоих факторов в отношении общего уровня всех ХА (р<0,01), что свидетельствует о возрастном изменении радиочувствительности людей экспонированной выборки

Как показал регрессионный анализ данных, усредненных по десятилетним интервалам, зависимость общей частоты ХА, НХО и ПФ от возраста не является достоверной в контрольной группе В экспонированной выборке зависимость общей частоты ХА и частоты НХО от возраста удовлетворительно описывается линейной функцией вида У= а - ЬХ, где У - общая частота ХА или частота НХО в процентах, X - возраст в годах Коэффициенты соответствующих уравнений регрессии для разных типов ХА представлены в табл 10, а соответствующие кривые на рис 2 Таким образом, в контрольной группе частота индуцированных ХА имеет тенденцию увеличиваться с возрастом, наиболее выраженную после 40 лет Однако достоверность этого увеличения не удалось доказать при различных способах статистической обработки данных, что может быть связано с малочисленностью группы лиц старшего возраста В экспонированной выборке, в отличие от контрольной, была отмечена отрицательная связь общей частоты ХА и частоты НХО и возраста Лимфоциты ДЭ оказались более радиочувствительными, чем лимфоциты ДК В то же время лимфоциты большинства экспонированных взрослых обнаруживали реакцию, подобную адаптивному ответу Частота индуцированных ПФ практически не менялась с возрастом.

Таблица 10 Коэффициенты уравнений линейной регрессии частоты хромосомных аберраций на возраст, рассчитанной по усреднённым данным для шести возрастных групп

группа ХА НХП ПФ

а Ь а Ь а Ь

К 37,6±2,2 0,2±0,1 21,1±0,8 0,04±0,03 16,0±1,5 0,1±0,1

Э 46,1±2,7 -(00±0,1) 28,5±2,2 -(0Д±0,1) 17,6±0,9 -(0,01±0,03)

Примечание К - контрольная выборка, Э - экспонированная выборка, жирным выделена достоверная модель регрессии (р< 0,05), ХА - аберрации хромосомного типа

о"

• контрольная выборка

О экспонированн ая выборка

д

X

S 50-

о

OL S

а1

£40-

П о^^П

о 30 ь

0 10 20 30 40 50 60 возраст, годы

т

о га

Рис 2 Зависимость частоты индуцированных ХА от возраста для контрольной выборки У = (37,59±2,21)+(0,16±0,08)Х, для экспонированной выборки У = (46,07±2,68)-(0,20±0,08)Х

1. Спонтанная частота нестабильных ХА, выявляемых рутинным методом, и частота стабильных ХА, выявляемых методом FISH, повышена в лимфоцитах периферической крови у людей, перенёсших в прошлом низкодозовое воздействие, по сравнению с нормой

2 Возрастное накопление ХА более выражено у лиц экспонированной группы по сравнению с контрольной, при этом в обеих группах уровень стабильных ХА увеличивается с возрастом быстрее, чем уровень нестабильных ХА

3 Радиочувствительность лимфоцитов, оцененная по частоте индуцированных in vitro гамма-излучением (137Cs) в дозе 1,5 Гр ХА, у экспонированных детей повышена, а у экспонированных взрослых понижена по сравнению с одновозрастным контролем

4 Не выявлено достоверного возрастного изменения радиочувствительности лимфоцитов in vitro в контрольной выборке

3. ВЫВОДЫ

5 Радичувствительность лимфоцитов in vitro в экспонированной выборке отрицательно коррелирует с возрастом донора из-за разнонаправленных отличий радиочувствительности лимфоцитов детей и взрослых от соответствующих контролей

4. СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ.

1 И Е Воробцова, Н. Е. Любимова, А А Перова, А В. Семенов Исследование стабильных хромосомных аберраций, выявляемых FISH-методом, у ветеранов подразделения особого риска // Экологическая генетика - 2004 Т II № 2 - С 35-40

2 Любимова Н. Е., Воробцова И Е Влияние возраста и низкодозового облучения на частоту хромосомных аберраций в лимфоцитах человека // Радиационная биология Радиоэкология 2007 -Т 47 № 1 -С 80-85

3 I Е Vorobtsova, А V Semyonov, N. Е. Lubimova. Dynamics of chromosome aberrations in human lymphocytes under natural and radiation induced aging // VI Europeans Congress "Healthy and active ageing for all Europeans" Samt Petersburg, Russia, Juli 5-8, 2007 Успехи экспериментальной геронтологии 2007 - T 20 № 3 -С 76

4 Любимова Н. Е., Перова А А, Воробцова И Е Частота стабильных хромосомных аберраций, выявляемых методом FISH, у ветеранов, подвергавшихся неконтролируемому облучению // V международный экологический форум стран Балтийского региона «Экобалтика-2004» Санкт-Петербург, 16-18 июня 2004 г Сборник тезисов С-Пб, 2004 С 81

5 Любимова Н. Е., Воробцова И Е Возрастная динамика частоты спонтанных хромосомных аберраций в лимфоцитах здоровых доноров и лиц, подвергавшихся низкодозовому облучению // V Съезд по радиационным исследованиям (радиобиология, радиоэкология, радиационная безопасность) М 10-14 апреля 2006 г Тезисы докладов Т 1 (секции I-V) С 89

6 Любимова Н. Е., Воробцова И Е Влияние возраста и низкодозного облучения на частоту спонтанных и индуцированных in vitro хромосомных аберраций в

лимфоцитах человека // Чернобыль 20 лет спустя «Социально-правовые и медицинские проблемы граждан, пострадавших в радиационных авариях и катастрофах» (Материалы Всероссийской научно-практической конференции 5-6 апреля2006г) С-Пб,2006 С 106-107

7 Любимова Н. Е., Воробцова И Е Возрастная динамика спонтанных и индуцированных m vitro хромосомных аберраций у лиц, перенесших в прошлом низкодозовое радиационное воздействие // Отдаленные последствия воздействия ионизирующего излучения Международная научно-практическая конференция Киев 23-25 мая 2007 года Тезисы докладов Киив - 2007 С 207-208

8 И Е Воробцова, А В Семенов, Н. Е. Любимова, И С Колесникова, Ю В Гусева, Н А Пулатова Значение цитогенетических исследований для оценки медицинских последствий действия ионизирующих излучений // Международная конференция «Новые направления в радиобиологии» Москва, 6-7 июня 2007 года Тезисы докладов М Российский университет дружбы народов. 2007 С 1417

9 Любимова Н. Е. Низкодозовое облучение людей меняет возрастную динамику уровня спонтанных и индуцированных in vitro хромосомных аберраций в их лимфоцитах // Международная школа-конференция, посвященная 100-летию со дня рождения М Е Лобашева «Системный контрольгенетических и цитогенетических процессов» Санкт-Петербург, 10-13 ноября 2007 С 63-64

15 11 07 г Ък 241-75 РТП ИК -Синтез» Московский пр , 26

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Любимова, Наталья Евгеньевна

0. Введение

1. Обзор литературы.

1.1. Влияние иизкодозового облучения людей на частоту хромосомных аберраций в отдаленные сроки после лучевого воздействия.

1.2. Влияние иизкодозового облучения людей на радиочувствительность хромосом в отдаленные сроки после лучевого воздействия.

1.3. Влияние возрастного фактора на спонтанную частоту генетических нарушений в клетках человека.

1.4. Влияние возрастного фактора на чувствительность генома человека к мутагенам.

2. Материалы и методы.

2.1. Характеристика обследованных групп людей.

2.2. Приготовление метафазных препаратов лимфоцитов крови.

2.3. Облучение образцов крови.

2.4. Получение биотинилированных ДНК зондов, специфичных к хромосомам человека.

2.5. Приготовление препаратов метафазных хромосом методом флуоресцентной гибридизации in situ.

2.6. Статистическая обработка результатов.

3. Результаты и обсуждение.

3.1. Частота спонтанных хромосомных аберраций нестабильного типа в лимфоцитах людей контрольной и экспонированной групп.

3.1.1. Влияние иизкодозового облучения на частоту спонтанных ХА.

3.1.2. Влияние возраста на частоту спонтанных ХА.

3.2. Частота стабильных хромосомных аберраций в лимфоцитах людей контрольной и экспонированной групп.

3.2.1. Влияние иизкодозового облучения на частоту стабильных ХА.

3.2.2. Влияние возраста на частоту стабильных ХА.

3.3. Частота хромосомных аберраций, индуцированных при облучении лимфоцитов in vitro, у людей контрольной и экспонированной групп.

3.3.1. Влияние иизкодозового облучения людей на частоту индуцированных in vitro ХА.

3.3.2. Влияние возраста на частоту индуцированных in vitro ХА.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Влияние низкодозового радиационного воздействия на возрастную динамику частоты спонтанных и индуцированных in vitro хромосомных аберраций в лимфоцитах человека"

Актуальность проблемы. Использование в 20 веке ионизирующей радиации в военных, промышленных и медицинских целях привело к повышению радиационной нагрузки на отдельные контингенты людей. Различные аварийные ситуации ещё больше увеличили радиационный фон планеты и массовость облучения людей, что потребовало прогнозов в отношении возможных отдаленных медико-биологических эффектов для человеческой популяции. Последствия действия на человека ионизирующей радиации в относительно больших дозах достаточно хорошо изучены. Однако большинство радиационных воздействий от техногенных источников характеризуются малыми дозами и малыми мощностями доз. В этом случае трудно оценить риск негативных эффектов для здоровья человека с помощью прямых эпидемиологических наблюдений. Изучение нарушений, которые возникают в клетках в ответ на такое облучение, становится весьма актуальным, так как оно позволяет понять начальные этапы процессов, приводящих в дальнейшем к развитию опухолевых и неопухолевых форм отдаленной лучевой патологии.

A priori понятно, что повреждения ДНК не могут не отражаться на функциях клетки, на ее жизнеспособности, а следовательно, и на полноценности тканей и, в конечном итоге, на состоянии здоровья. Комплексная и мониторная оценка состояния клеточного генома людей, подвергшихся низкодозному облучению, по уровню ХА представляется продуктивным подходом к оценке потенциальной опасности этого воздействия для облучённых людей.

Помимо морфологической характеристики генома облучённых людей по уровню ХА представляется актуальным для эпидемиологических прогнозов исследование его функциональной полноценности. Одним из подходов к решению этого вопроса является, на наш взгляд, изучение стабильности хромосом лимфоцитов при тестирующем облучении этих клеток in vitro. Исследования такого рода весьма немногочисленны (Бочков Н. П., Пилосов Р. А., 1968; Чудина А. П., 1968; Sasaki М. S. et al, 1970; Воробцова И. Е. и др., 1995 Ь; Колюбаева С. Н. и др., 1995; Кузьмина Н. С., Сусков И. И., 2002; Аклеев А. В. и др., 2004).

По мере увеличения срока между имевшим место низкодозовым облучением и сроком регистрации различных нарушений генома существенное значение для оценки цитогенетических последствий такого воздействия может приобретать возраст обследуемых лиц. Известно, что в процессе естественного старения, так же как и после радиационного воздействия, в клетках увеличивается пул мутационных событий (Кузнецов А. И. и др., 1980; Воробцова И. Е. и др., 2000; Мельнов С. Б. и др., 2004; Воробцова И. Е. и др., 2004 a; Bender М. et al, 1989; Cole J. et al, 1991; King C. M. et al, 1994; Tucker J. D. et al, 1994). Сравнительное исследование возрастной динамики уровня различных ХА у лиц, в прошлом облучённых, и контрольных позволит оценить вклад факторов «облучение» и «возраст» в наблюдаемые эффекты. При этом влияние этих факторов может быть неодинаковым на различные типы ХА: стабильные - нестабильные; спонтанные - индуцированные in vitro.

В настоящее время показано, что спонтанная частота ХА является показателем риска развития онкологических и других заболеваний у человека (Hagmar L. et аЦ 1994; Smerhovsky Zs. et alf 2001; Воробцова И. E., Семенов А. В., 2006), то есть существует связь между уровнем первичных нарушений в клетках (ХА, мутации, нестабильность) и состоянием здоровья. Выявление роли экзогенных (облучение) и эндогенных (возраст) факторов в возникновении этих нарушений и, как следствие, в формировании медико-биологических последствий низкодозового облучения для человека является актуальной задачей радиационной медицины. Представление о спонтанном уровне различных ХА (стабильных и нестабильных) необходимо и в практической радиобиологии для проведения корректной биодозиметрии как в ранние (по частоте нестабильных ХА), так и в отдаленные (по частоте стабильных ХА) сроки после облучения с учетом возрастного уровня этих аберраций.

Цели и задачи исследования. Целью настоящей работы явилось установление закономерности влияния низкодозового радиационного воздействия и возраста на базовый уровень ХА в лимфоцитах человека и на стабильность их генома при облучении in vitro.

Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи:

1. Оценить спонтанную частоту нестабильных ХА, выявляемых рутинным методом, в лимфоцитах лиц, подвергавшихся в прошлом неконтролируемому низкодозовому радиационному воздействию (экспонированная группа), по сравнению с людьми контрольной выборки;

2. Сравнить уровень стабильных ХА, выявляемых методом FISH, у лиц экспонированной и контрольной выборок;

3. Оценить радиочувствительность (стабильность) генома лимфоцитов по частоте индуцированных ХА при облучении in vitro в дозе 1,5 Гр гамма-излучения у этих же групп людей;

4. Изучить влияние возраста на частоту указанных типов ХА в обеих группах.

Научная новизна и практическая значимость работы. Впервые в рамках одной работы проведено параллельное исследование влияния двух факторов: экзогенного (низкодозового облучения) и эндогенного (возраста) на базовый уровень различных ХА (нестабильного и стабильного типов) в лимфоцитах человека и на стабильность их генома, оценённую по критерию частоты ХА, индуцированных гамма-излучением in vitro. Показано, что:

- возрастное накопление ХА более выражено у лиц экспонированной группы по сравнению с контрольной, при этом в обеих группах уровень стабильных ХА увеличивается с возрастом быстрее, чем уровень нестабильных ХА;

- в контрольной группе наблюдается тенденция к возрастному увеличению радиочувствительности лимфоцитов по критерию нестабильных ХА;

- в экспонированной группе радиочувствительность лимфоцитов достоверно уменьшается с возрастом из-за разнонаправленного характера её изменения у детей и взрослых: у детей радиочувствительность лимфоцитов повышена по сравнению с детьми контрольной группы, а у взрослых - снижена по сравнению с соответствующей контрольной группой;

- низкодозовое облучение людей меняет возрастную динамику как спонтанных ХА, так и индуцированных in vitro.

Теоретическое значение работы. Полученные результаты свидетельствуют о том, что низкодозовое облучение ускоряет процесс естественного старения человека, оцениваемого по уровню стабильных и нестабильных ХА в лимфоцитах крови, и меняет возрастную динамику стабильности генома, оценённую по частоте индуцированных in vitro ХА. Практическая значимость результатов.

- Данные по возрастной динамике спонтанного уровня ХА необходимо учитывать при установлении факта неконтролированного облучения человека, особенно если оно осуществляется на основе уровня стабильных ХА.

- Тестирующее облучение лимфоцитов человека in vitro может быть использовано в качестве экспресс-метода для выявления скрытой нестабильности генома.

- Нестабильность генома детей, подвергавшихся низкодозовому облучению, может служить основанием для отнесения их к группе повышенного риска развития негативных медицинских последствий, в частности канцерогенных. Положения, выносимые на защиту.

1. У лиц, подвергавшихся неконтролируемому радиационному воздействию, наблюдается долговременное (даже спустя десятилетия) повышение частоты нестабильных ХА.

2. В отдаленные сроки после облучения частота стабильных ХА повышена у подвергавшихся неконтролируемому радиационному воздействию людей по сравнению с людьми контрольной группы.

3. Возрастное накопление ХА более выражено у лиц экспонированной группы по сравнению с контрольной, при этом в обеих группах уровень стабильных ХА увеличивается с возрастом быстрее, чем уровень нестабильных ХА.

4. Выявлен разнонаправленный характер изменения радиочувствительности лимфоцитов у лиц разного возраста экспонированной группы: у детей радиочувствительность лимфоцитов повышена по сравнению с детьми контрольной группы, у взрослых -снижена по сравнению с соответствующим возрастным контролем.

Апробация работы. Предварительная защита диссертации состоялась на заседании проблемной комиссии отдела клинической радиобиологии ФГУ РНЦ РХТ Росмедтехнологий. Работа была апробирована на V международном экологическом форуме стран Балтийского региона «Экобалтика-2004» (16-18 июня 2004 г., Санкт-Петербург, Россия); Всероссийской научно-практической конференции «Чернобыль: 20 лет спустя. «Социально-правовые и медицинские проблемы граждан, пострадавших в радиационных авариях и катастрофах»» (5-6 апреля 2006 г., Санкт-Петербург, Россия); V Съезде по радиационным исследованиям (радиобиология, радиоэкология, радиационная безопасность) (10-14 апреля 2006 г., Москва, Россия); Международной научно-практической конференции (23-25 мая 2007 г., Киев, Украина); Международной конференции «Новые направления в радиобиологии» (6-7 июня 2007 г., Москва, Россия); VI Европейском конгрессе "Healthy and active ageing for all Europeans" (5-8 июля 2007 г., Санкт-Петербург, Россия); Международной школе-конференции, посвященной 100-летию со дня рождения М.Е. Лобашева «Системный контроль генетических и цитогенетических процессов» (10-13 ноября 2007 г., Санкт-Петербург, Россия).

Публикации. Основные положения диссертации отражены в 9 публикациях: 2 статьях, 7 тезисах докладов.

Объем и структура диссертации. Диссертация состоит из введения, литературного обзора, методической части, результатов исследования и

Заключение Диссертация по теме "Радиобиология", Любимова, Наталья Евгеньевна

ВЫВОДЫ

1. Спонтанная частота нестабильных ХА, выявляемых рутинным методом, и частота стабильных ХА, выявляемых методом FISH, повышена в лимфоцитах периферической крови у людей, перенесших в прошлом низкодозовое воздействие, по сравнению с нормой.

2. Возрастное накопление ХА более выражено у лиц экспонированной группы по сравнению с контрольной, при этом в обеих группах уровень стабильных ХА увеличивается с возрастом быстрее, чем уровень нестабильных ХА.

3. Радиочувствительность лимфоцитов, оцененная по частоте индуцированных in vitro в дозе 1,5 Гр гамма-излучения (137Cs) ХА, у экспонированных детей повышена, а у экспонированных взрослых понижена по сравнению с одновозрастным контролем.

4. Не выявлено достоверного возрастного изменения радиочувствительности лимфоцитов in vitro в контрольной выборке.

5. Радичувствительность лимфоцитов in vitro в экспонированной выборке отрицательно коррелирует с возрастом донора из-за разнонаправленных отличий радиочувствительности лимфоцитов детей и взрослых от соответствующих контролей.

4. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Согласно одной из теорий старения - мутационной теории - с возрастом в клетках организма происходит накопление генетических нарушений, которые приводят в дальнейшем к инволютивным изменениям в тканях и органах и, как следствие, старению организма (Анисимов В. Н., 1999). Известно, что воздействие ионизирующей радиации даже в небольших дозах ускоряет процесс старения (Storer J. В., 1965; Curtis Н. J., 1966; Зайнуллин В. Г. и др., 2006). В обзоре литературы предоставлены многочисленные данные, полученные на животных и человеке, свидетельствующие о действительном накоплении различных генетических нарушений с возрастом (Лежава Т. А., Хламадзе Е. В., 1978; Кузнецов А. И. и др., 1980; Воробцова и др., 2004 a; Cole J. et al, 1988; Bender M. A. et al, 1989; Tucker J. et al, 1994; Tucker J. et al, 2000). На больших контингентах лиц, подвергавшихся низкодозовому облучению в результате радиационных аварий и других нештатных ситуаций, показано, что даже в отдаленные сроки (20-40 лет) после лучевого воздействия в клетках пострадавших обнаруживаются различные нарушения хромосомного аппарата в количестве, превышающем норму (см. обзор литературы).

Если облучение является триггером ускоренного старения организма, а уровень ХА показателем биологического возраста, можно полагать, что скорость накопления нарушений в клетках облучённых людей по мере старения окажется выше, чем в клетках необлучённых. При этом разные типы ХА (нестабильные и стабильные) будут, по-видимому, накапливаться с разной скоростью. ХА, выявляемые в лимфоцитах рутинным методом (дицентрические хромосомы, свободные фрагменты), относятся к типу нестабильных, то есть приводят к утрате хромосомного материала и гибели пролиферирующих предшественников лимфоцитов. В этой связи накопление таких ХА в периферических лимфоцитах с возрастом может нивелироваться митотической гибелью части клеток-предшественников, несущих нестабильные хромосомные нарушения (НХО, ПФ). Поскольку соотношение этих процессов у разных людей по всей вероятности различно, обнаружение возрастного увеличения уровня таких ХА представляет собой трудную задачу и требует большого объема выборок людей и большого количества проанализированных клеток.

Хромосомные аберрации, относящиеся к стабильному типу (транслокации, инсерции), наиболее эффективно выявляемые методом FISH, в отличие от нестабильных, не приводят к генетическому дисбалансу и могут накапливаться в ряду клеточных поколений. Поэтому их накопление с возрастом выявить проще.

Данные, полученные в настоящей работе на 128 здоровых донорах при анализе примерно 200 клеток на каждого, свидетельствуют о том, что спонтанная частота нестабильных ХА увеличивается с возрастом донора (рис. 1-3). Наиболее четкая зависимость «возраст-частота» ХА выявляется при разделении исследованной выборки на десятилетние возрастные интервалы (табл. 6), что, по-видимому, связано с уменьшением вклада межиндивидуальной изменчивости по частоте ХА. Эффект возраста на частоты аберраций хромосомного типа (НХО, ПФ) был подтверждён с помощью различных методов статистической обработки данных -корреляционный, дисперсионный, регрессионный анализы. Однако для аберраций хроматидного типа не было обнаружено достоверного увеличения частоты с возрастом, и даже отмечалась тенденция к возрастному снижению частоты ОФ у лиц старше 40 лет. Следует учесть, что в настоящем исследовании в контрольной выборке количество лиц 41-50 и 51-72 лет меньше, чем количество людей более молодых возрастов.

Анализ возрастной динамики уровня ХА в экспонированной выборке, проведённый с помощью тех же подходов и статистических методов, которые использовались при обработке данных по контрольным группам, показал, что скорость накопления нестабильных хромосомных нарушений в лимфоцитах у ранее облучённых людей выше, чем у необлучённых.

Исследование возрастной динамики уровня стабильных ХА, выявляемых методом FISH, также позволило установить, что как в контрольной, так и в экспонированной группе частота транслокаций существенно увеличивалась с возрастом (табл. 10, рис. 4). При этом процесс возрастного накопления этих ХА более выражен у людей, перенёсших ранее низкодозовое лучевое воздействие. Таким образом, облучённые лица одинакового с донорами контрольной группы календарного возраста, по-видимому, биологически являются более старыми, то есть низкодозовое облучение ускоряет старение. Подтверждением тому, что уровень стабильных ХА является показателем биологического возраста, могут служить данные, полученные на больном с прогерией Вернера -наследственным синдромом преждевременного старения (Воробцова И.Е. и др., 2004 а). У него при календарном возрасте 26 лет был определен уровень транслокация, соответствующий биологическому возрасту 56 лет. Таким образом, можно сделать вывод, что при старении в клетках накапливаются ХА, причем воздействие таких мутагенов как ионизирующая радиация ускоряет накопление ХА. Скорость накопления транслокаций как в контрольной, так и в экспонированной группах превышала таковую для нестабильных ХА (табл. 12).

Таким образом, впервые в рамках одного исследования было продемонстрировано, что базовый уровень различных типов ХА в лимфоцитах человека увеличивается по мере старения. Этот процесс более выражен в экспонированной группе по сравнению с контрольной, а так же по стабильным ХА по сравнению с нестабильным. Сходство в эффектах старения и низкодозового облучения подтверждают точку зрения о том, что воздействие ионизирующей радиации даже в небольших дозах ускоряет процесс естественного старения, а мутационные нарушения в клетках являются, по-видимому, одной из возможных причин развития инволютивных процессов. Вероятной причиной возрастного увеличения частоты хромосомных повреждений и более быстрого накопления их у облучённых лиц является развивающаяся при старении и низкодозовом радиационном воздействии нестабильность клеточного генома (Воробцова И. Е. и др., 1994; Воробцова И. Е. и др., 2004 а; Мельнов С. Б., 2004; Аклеев А. В., 2004; Севанькаев А. В. и др., 2005). Увеличение нестабильности генома было показано у потомства облучённых животных (Фоменко JI. А. и др., 2001; Vorobtsova I. Е., 2000) и облучённых клеток (Пелевина И. И. и др., 1993; Антощина М. М. и др., 2005; Bortoletto Е. et al, 2001) даже спустя несколько поколений. Как правило, в литературе о генетической нестабильности говорят, если уровень спонтанных ХА или других мутаций превышает норму. Однако увеличение частоты мутаций в клетках может быть отражением постоянного воздействия на организм тех или иных генотоксических факторов, с которыми человек соприкасается на протяжении всей жизни (Чеботарев А. Н. и др., 2001; Millillo С. P. at el, 1996). Для прямой оценки стабильности хромосомного аппарата лимфоцитов людей экспонированной и контрольной выборок в нашей работе был применен метод тестирующего облучения лимфоцитов in vitro. Если геному, подвергавшемуся ранее низкодозовому облучению, действительно свойственна нестабильность, то его чувствительность к мутагенным воздействиям должна быть повышена. В нашем исследовании повышенной по сравнению с контрольной хромосомной радиочувствительностью характеризовались дети, эвакуированные из зоны радиоактивного загрязнения. Аналогичным свойством обладали и клетки детей, чьи родители подвергались облучению до зачатия ребенка (Воробцова И. Е. и др., 1995 Ь; Пшнська М. А. и др., 2005). Таким образом, как у детей, облучённых на стадии родительских гамет, так и у детей, облучённых постнатально развивается генетическая нестабильность. В экспериментах на животных показано, что нестабильность генома, выявленная с помощью дополнительного мутагенного воздействия, положительно коррелируют с вероятностью возникновения индуцированных опухолей (Vorobtsova I. Е., 2000). На людях также было обнаружена связь между риском развития опухолей и чувствительностью лимфоцитов in vitro к мутагенам, оценённой по частоте индуцированных ХА (Bondy М. L. et al, 1996; Bondy М. L. et al, 2001; Ryabchenko N. Et al, 2003). Если рассматривать нестабильность генома как фактор предрасположенности к канцерогенезу, то можно, по-видимому, отнести этих детей к группе повышенного канцерогенного риска.

В отличие от детей для большинства экспонированных взрослых (JI, ВТ) характерна повышенная радиоустойчивость лимфоцитов по сравнению с соответствующим контролем. Возможно, реакция радиорезистентности лимфоцитов групп JI и ВТ, выявляемая тестирующим облучением in vitro, проявляется после хронического иизкодозового воздействия на человека. Большинство людей этих групп по роду своей работы ранее профессионально подвергались мутагенному воздействию (либо радиационному, либо химическому), в их лимфоцитах могла развиться реакция адаптивного ответа, проявившаяся в увеличении радиоустойчивости при тестирующем облучении in vitro. Исключением была группа ВЭ, у которой, так же как и у ДЭ, радиочувствительность лимфоцитов оказалась повышенной. Следует отметить, что эта группа в основном представлена женщинами, не работавшими с источниками ионизирующей радиации и эвакуированными в первые дни после аварии на ЧАЭС, то есть не подвергавшихся хроническому воздействию малых доз радиации. Разнонаправленность отличий от контрольной радиочувствительности лимфоцитов экспонированных детей и взрослых обуславливает и характер возрастной динамики уровня индуцированных ХА в этой группе, а именно отрицательную корреляцию «возраст-эффект», в отличие от группы контроля, где наблюдалась тенденция к возрастному увеличению радиочувствительности лимфоцитов. Однако в контрольной выборке не удалось обнаружить возрастного изменения радиочувствительности лимфоцитов. Поскольку в рамках данной работы не удалось набрать группу лиц старше 50 лет, судить о дальнейшей возрастной динамике уровня индуцированных ХА не представляется возможным.

Таким образом, полученные результаты свидетельствуют о том, что низкодозовое облучение ускоряет процесс естественного старения человека, оцениваемого по уровню стабильных и нестабильных ХА в лимфоцитах крови, и меняет возрастную динамику стабильности генома, оценённую частоте индуцированных in vitro ХА.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Любимова, Наталья Евгеньевна, Москва

1. Аклеев А. В., Алещенко А. В., Антощина М. М. и др. Цитогенетические последствия облучения жителей Южного Урала // Радиационная биология. Радиоэкология. 2002. Т. 42. № 6. - С. 696-699

2. Аклеев А. В., Алещенко А. В., Готлиб В. Я. и др. Адаптивные способности лимфоцитов крови у жителей южного Урала, подвергшихся хроническому облучению // Радиационная биология. Радиоэкология. -2004.Т.44. №4.-С.426-431

3. Аклеев А. В., Веремеева Г. А., Варфоломеева Т. А., Возилова А. В., Дегтярева Р. Г. Биологическая индикация хронического радиационного воздействия // Сибирский медицинский журнал. 2005. № 5. - С. 101108

4. Анисимов В. Н. Эволюция концепций в геронтологии: достижения и перспективы // Успехи геронтологии. 1999. Вып. 3. - С. 32-53

5. Антощина М. М., Рябченко Н. И., Насонова В. А. и др. Нестабильность генома в потомках клеток китайского хомячка, облучённых в низкой дозе при разных интенсивностях у-излучения // Радиационная биология. Радиоэкология. 2005. Т. 45. № 3. - С. 291-293

6. Бочков Н. П. Аналитический обзор цитогенетических исследований после Чернобыльской аварии // Вестник Российской Академии медицинских наук. 1993. - С. 51-56

7. Бочков Н. П., Бедельбаева К. А., Катосова JI. Д. и др. Хромосомные аберрации в лимфоцитах периферической крови людей, проживающих в районах с повышенным фоном радиации // Доклады Академии наук БССР. -1991. Т. 35. № 8. С. 745-748

8. Бочков Н.П., Козлов В.М., Пилосов Р.А. и др. Спонтанный уровень хромосомных аберраций в культуре лейкоцитов человека // Генетика. -1968. Т. 4. №6.-С. 93-98

9. Бочков Н. П., Кулешов Н. П. Зависимость интенсивности химического мутагенеза в клетках человека от возраста и пола // Генетика. 1971. - Т. 7. - №3. - С. 132-138

10. Бочков Н.П., Кулешов Н.П., Журков B.C. Анализ спонтанных хромосомных аберраций в культуре лейкоцитов человека. // Цитология. 1972. Т. 14. № 10. - С. 1267-1273

11. Бочков Н. П., Пилосов Р. А. Влияние гамма-облучения на хромосомы человека. Сообщение II. Зависимость частоты хромосомных аберраций от пола и возраста // Генетика. 1968. Т. 4. № 11. - С. 144-150

12. Бочков Н. П., Чеботарев А. Н., Катасова JI. Д. и др. База данных для анализа количественных характеристик частоты хромосомных аберраций в культуре лимфоцитов периферической крови человека // Генетика. 2001. Т. 37. № 4. - С. 549-557

13. Воробцова И. Е., Богомазова А. Н. Стабильные хромосомные аберрации в лимфоцитах периферической крови лиц, пострадавших в результатеаварии на ЧАЭС // Радиационная биология. Радиоэкология. 1995. Т. 35. Вып. 5.-С. 636-640

14. Воробцова И. Е., Воробьева М. В., Корытова JI. И. и др. Исследование цитогенетической реакции лимфоцитов на облучение in vitro у детей, рожденных пациентами после противоопухолевой лучевой и химиотерапии // Цитология. -1995 Ь. Т. 37. № 5/6. С. 449-457

15. Воробцова И. Е., Михельсон В. М., Воробьева М. В. и др. Результаты цитогенетического обследования ликвидаторов последствий аварии на ЧАЭС, проведенного в разные годы // Радиационная биология. Радиоэкология. -1994. Т. 34. Вып. 6. С 798-804

16. Воробцова И. Е., Канаева А. Ю., Петрова И. А. и др. Возрастная динамика частоты стабильных хромосомных аберраций у человека при естественном и патологическом старении // Цитология. 2004 а. Т. 46. № 12.-С. 1030-1034

17. Воробцова И. Е., Любимова Н. Е., Перова А. А и др. Исследование стабильных хромосомных аберраций, выявляемых FTSH-методом, уветеранов подразделения особого риска // Экологическая генетика. -2004 Ь.Т. 2. № 2. С. 35-40

18. Воробцова И. Е., Семенов А. В. Комплексная цитогенетическая характеристика лиц, пострадавших в результате аварии на Чернобыльской АЭС // Радиационная биология. Радиоэкология. 2006. Т. 46. №2.-С. 140-151

19. Воробцова И. Е., Такер Дж. Д., Тимофеева Н. М. и др. Влияние возраста и облучения на частоту транслокаций и дицентриков, определяемых методом FISH, в лимфоцитах человека // Радиационная биология. Радиоэкология. 2000. Т. 40. № 2. - С. 142-148

20. Ганина К. П., Полищук JI. 3., Бучинская JI. Г. и др. Цитогенетическое обследование лиц, подвергавшихся радиационному воздействию в некоторых регионах Украины // Цитология и генетика. 1994. Т. 28. № 3.- С. 32-37

21. Глушкова И. В., Моссэ И. Б., Аксютик Т. В. Процессы адаптации природных популяций дрозофилы из радиационно-загрязнённых районов Беларуси до и после снятия радиационной нагрузки // Радиационная биология. Радиоэкология. 2003. Т. 43. № 2. - С. 210-212

22. Губицкая Е. Г., Ахматуллина Б., Всеволодов Э. Б. и др. Частота аберраций хромосом у жителей Семипалатинской области // Генетика. -1999. Т. 35. №6.-С. 842-846

23. Дубинина JI. Г. Культура лейкоцитов человека как тест-система при анализе мутагенности факторов среды. В кн. Генетические последствия загрязнения окружающей среды. М.: Наука. 1977. - С. 89 - 95

24. Елисеева И. М, Иофа Э. Д., Сотоян Е. Ф. и др. Анализ аберраций хромосом и СХО у детей из радиационно-загрязнённых районов Украины // Радиационная биология. Радиоэкология. 1994. Т.34. Вып. 2. -С. 163-171

25. Зайнуллин В. Г., Таскаев А. И., Москалев А. И. и др. генетические эффекты, индуцированные облучением в малых дозах у Drosophila melanogaster // Радиационная биология. Радиоэкология. 2006. Т. 46. № З.-С. 296-306

26. Захаров А. Ф., Бенюш В. А., Кулешов Н. П. и др. Хромосомы человека. Атлас. М.: Медицина, 1982. - 264 с.

27. Колюбаева С. Н., Ракецкая В. В., Борисова Е. А. и др. Исследование радиационных повреждений в лимфоцитах человека методом микроядерного и хромосомного анализа // Радиационная биология. Радиоэкология. -1995. Т. 35. Вып. 2. С. 150-156

28. Коноплянникова (Сысоева) О. А. Возрастные изменения цитогенетической радиочувствительности соматических клеток млекопитающих // Генетика. 1966. № 10. - С. 11-119

29. Кузнецов А. И., Кружалов А. И., Илющенко В. Г. и др. Возрастно-половая зависимость спонтанной частоты хромосомных аберраций в лимфоцитах периферической крови человека // Генетика. 1980. Т. 16. №7.-С. 1285-1293

30. Кулешов Н. П. Возрастная чувствительность хромосом лимфоцитов человека к действию цитозинарабинозида на стадии клеточного цикла //Цитология. 1972 а. Т. 14. № 11. С. 1368-1373

31. Кулешов Н. П. Индуцированные дегранолом хромосомные аберрации в культуре лейкоцитов лиц разного пола и возраста // Генетика. 1972 б. Т. 8. №3. - С. 123-131

32. Кузьмина Н. С., Сусков И. И. Экспрессирование геномной нестабильности в лимфоцитах детей, проживающих в условияхдлительного действия радиационных факторов // Радиационная биология. Радиоэкология. 2002. Т. 42. № 6. - С. 735-739

33. Лежава Т. А., Хмаладзе Е. В., Спонтанный уровень количественно-структурных изменений хромосом в старческом возрасте // Известия Академии наук Грузинской ССР. Серия биологическая. 1978. Т. 4. № 2. -С. 162-170

34. Мазник Н. А. Результаты динамического цитогенетического обследования и биологической дозиметрии у лиц, эвакуированных из 30-километровой зоны ЧАЭС // Радиационная биология. Радиоэкология. -2004. Т. 44. №5.-С. 566-573

35. Мазник Н. А., Винников В. А. Динамика цитогенетических эффектов в лимфоцитах периферической крови ликвидаторов последствий аварии на Чернобыльской АЭС // Цитология и генетика. 1997. Т. - 31. № 6. - С.

36. Мельнов С. Б. Молекулярно-генетнческие и фенотипические эффекты антропогенных мутагенных воздействий на человека: Автореферат диссертации на соискание учёной степени доктора биологических наук. Минск, 2004.-45 с.

37. Мельнов С. Б., Коротько С. С., Шиманец Т. В. Цитогенетические эффекты у ликвидаторов последствий аварии на ЧАЭС: ретроспективный анализ // Медицинские новости. 2000 а. № 2 (56). - С. 28-31

38. Мельнов С. Б., Коротько С. С., Шиманец Т. В. и др. Динамическое исследование цитогенетического статуса ликвидаторов последствий аварии на ЧАЭС // Медицинские новости. 2000 Ь. № 4 (58). - С. 68-71

39. Михайлова Н. Я. Возрастная динамика количества аберрантных клеток в различных тканях облучённого организма: Автореферат диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических наук. Ленинград, 1972.-18 с.

40. Мицейкене И-Т. К. Исследования влияния биологических и экологических факторов на стабильность генома крупного рогатогоскота: Автореферат диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических наук. С-Пб-Пушкин, 1992. 19 с.

41. Наследие Чернобыля: медицинские, экологические и социально-экономические последствия и рекомендации правительствам Беларуси, Российской Федерации и Украины. // Чернобыльский Форум: 2003-2005. Издание второе., 2006

42. Пелевина И. И., Афанасьев Г. Г., Алещенко А. В. и др. Радиоиндуцированный адаптивный ответ у детей и влияние на него внешних факторов // Радиационная биология. Радиоэкология. 1999. Т. 39. № 1.-С. 106-112

43. Пелевина И. И., Алещенко А. В., Готлиб В. Я. и др. Реакция лимфоцитов крови индивидуумов с соматическими заболеваниями на воздействие радиации в малых дозах // Радиационная биология. Радиоэкология. -2005. Т. 45. №4.-С. 412-415

44. Пилинская М. А., Шеметун А. М., Дыбский С. С. и др. Цитогенетический мониторинг лиц, пострадавших от аварии на Чернобыльской АЭС // Цитология и генетика. 1994. Т. 28. № 3. - С. 1825

45. Пилинская М. А., Дыбский С. С., Педан JI. Р. Модификация диматифом цитогенетического эффекта в лимфоцитах крови детей, подвергающихся постоянному радиационному воздействию малой интенсивности // Цитология и генетика. 1993. Т. 27. № 4. - С. 87-90

46. Пономарева А. В., Матвеева В. Г. Исследование цитогенетических нарушений у жителей Алтая в зонах радиационного загрязнения // Сибирский экологический журнал. 2000. № 1. - С. 73-78

47. Святотва Г. С., Абильдинова Г. Ж., Березина Г. М. Результаты цитогенетического исследования популяций различного радиационного риска Семипалатинского региона // Генетика. 2002. Т. 38. № 3. - С. 376-382

48. Севанькаев А. В., Козлов В. М., Гузеев Г. Г. и др. Частота спонтанных хромосомных аберраций в культуре лейкоцитов человека // Генетика. -1974. Т.10.№ 6. -С. 114-120

49. Снигирева Г. П., Любченко П. Н., Шевченко В. А. и др. Результаты цитогенетического обследования участников ликвидации последствий аварии на Чернобыльской АЭС через 5 лет // Гематология и трансфузиология. 1994. Т. 39. № 3. - С 19-21

50. Фоменко Л. А., Безлепкина Т. А., Ношкин А. Н. и др. Витаминно-антиоксидантная диета снижает уровень хромосомных повреждений и частоту генных мутаций у облучённых мышей // Известия Академии наук. Серия биологическая. -1997. № 4. С. 419-424

51. Чеботарев А. Н., Бочков Н. П., Катасова JI. Д. и др. Временные колебания спонтанного уровня хромосомных аберраций в культуре лимфоцитов периферической крови человека // Генетика. 2001. Т. 37. №6.-С. 848-853

52. Чудина А. П. Исследование радиочувствительности хромосом человека в норме и при болезни Дауна // Генетика. 1968. Т. 4. № 6. - С. 99-110

53. Шевченко В. А., Снигирева Г. П. Значимость цитогенетического обследования для оценки последствий Чернобыльской катастрофы // Радиационная биология. Радиоэкология 2006. Т. 46. № 2. - С. 133-139

54. Шкварова Т.Г. Изучение нестабильных и стабильных аберраций хромосом у работников ядерно-химических предприятий и лиц с острой лучевой болезнью в отдаленный пострадиационный период:

55. Автореферат диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических наук. Обнинск, 2002. 22 с.

56. Пшнська М. А., Дибський С. С., Дибська О. Б. et al. Виявлення хромосомно! нестабшьност1 у нащадюв батыйв, опромшених внаслщок Чорнобильсьюи катастрофи // Цитология и генетика. 2005. Т. 39. № 4. -С. 32-40

57. Фролов В. М., Бариляк I. Р., Пересадш М. О. et al. Результата цитогенетичного обстеження дотей, яю постраждали вщ аври на Чоронобильской АБС I проживають в еколопчно несприятливому райош // Цитология и генетика. 1994. Т. 28. № 3. - С. 25-31

58. An M.-Y., Kim Т.-Н. Frequencies of micronuclei in periferal lymphocytes in Korean populations after chronic low-dose radiation exposition // journal of veterinary science. 2002. Vol. 3. № 3 - P. 213-218

59. Awa A. Analysis of chromosome aberrations in atomic bomb survivors for dose assessment: studies at the radiation effects research foundation from 1968 to 1993 // Stem Cells. -1997. Vol. 2. - P. 163-173.

60. Ban S., Setlow R. В., Bender M. A. et al. Radiosensitivity of skin fibroblasts from atomic bomb survivors with and without breast cancer // Radiation effects research foundation. -1990. -19 p.

61. Barquinero J. F., Barrios L., Caballin M. R. et al. Occupational exposure to radiation induces an adaptive response in human lymphocytes // International journal of radiation biology. 1995. Vol. 67. № 2. - P. 187-191

62. Bauchinger M. Cytogenetic researches after accidental radiation exposure // Stem Cells. 1995. Vol. 13. Suppl. 1. - P. 182-190

63. Bauchinger M., Schmid E., Braselmann H. et al. Chromosome aberrations in peripheral lymphocytes from occupants of houses with elevated indoor radon concentrations // Mutation research. 1994. Vol. 310. - P. 135-142

64. Bauchinger M., Schmid E., Braselmann H. Cytogenetic evaluation of occupational exposure to external y-rays and internal241 Am contamination // Mutation Research. 1997. Vol. 395. - P. 173-178

65. Bender M. A., Gooch P. C. Types and rates of X-ray-induced chromosome aberrations in human blood irradiated in vitro // Proceedings of National Academy of sciences (U.S.A.). 1962. Vol. 48. - P. 522-532

66. Bender M. A., Preston R. J., Leonard R. C. et al. Chromosomal aberration and sister-chromatid exchange frequencies in peripheral blood lymphocytes of a large human population sample // Mutation research. 1988. Vol. 204. № 3. -P. 421-433

67. Bilban M., Vaupotic J. Chromosome aberration study of pupils in high radon level elementary school // Health physics. 2001. Vol. 80. № 2. - P. 157-163

68. Bochkov N. P., Kuleshov N. P. Age sensitivity of human chromosomes to alkylating agents // Mutation research. 1972. Vol. 14. № 3. - P. 345-353

69. Bolognesi C., Lando C., Forni A. et al. Chromosomal damage and ageing: effect on micronuclei frequency in peripheral blood lymphocytes // Age and ageing. 1999. Vol. 28. - P. 393-397

70. Bondy M. L., Kyritsis A., Gu J. et al. Mutagen sensitivity and risk of gliomas: a case-control analysis // Cancer research. -1996. Vol. 56. P. 1484-1486

71. Bondy M. L., Wang Li-E., El-Zein R. et al. y-radiation sensitivity and risk of glioma. // Journal of the National cancer institute. 2001. Vol. 93. № 20. - P. 1553-1557

72. Bortoletto E., Mognato M., Ferraro P. et al. Chromosome instability induced in the cell progeny of human T lymphocytes irradiated in G0 with y-rays // Mutagenesis. 2001. Vol. 16. № 6. - P. 529-537

73. Brogger A., Hagmar L., Hansteen I-L. et al. A Nordic data base on somatic chromosome damage in human // Mutation research. 1990. Vol. 241. № 3. -P. 325-337

74. Carbonell E., Peris F., Xamena N. et al. Chromosome aberration analysis in 85 control individuals. // Mutation research. 1996. - V. 370. - P. 29-37 3-35

75. Chung H. W., Ryu E. K., Kim Y. J. et al. Chromosome aberrations in workers of nuclear-power plants // Mutation research. 1996. Vol. 350. - P. 307-314

76. Cloos J., Braakhuis B. J. M., Steen I. et al. Increased mutagen sensitivity in head-and-neck squamous-cell carcinoma patients, particularly those withmultiple primary tumor // International journal of cancer. 1994. Vol. 56. - P. 816-819

77. Cloose J., Steen I., Joenje H. et al. Association between bleomycin genotoxicity and non-constitutional risk factors for head and neck cancer // Cancer letter. -1993. Vol. 74. P. 161-165

78. Cole J., Arlett C. F., Green M. H. et al. Mutant frequencies in workers at the Sellafield installation // Health physics. 1995. Vol. 68. № 3. - P. 388-393

79. Cole J., Green M. H. L., James S. E. et al. A further assessment of factors in influencing measurements of thioguanine-resistant mutant frequency in circulating T-lymphocytes // Mutation research. 1988. Vol. 204. № 3. - P. 493-507

80. Cole J., Waugh A. P. W., Beare D. M. et al. HPRT mutant frequencies in circulating lymphocytes: population studies using normal donors, exposed groups and cancer-prone syndromes, in New horizons in biological dosimetry. -1991.-P. 319-328

81. Curtis H. J. Biological mechanisms underlying the aging process // Science. -1963. Vol. 141.-P. 686-694

82. Curtis H. J. A composite theory of aging // The gerontologist. 1966. Vol. 6. №3. Parti.-P. 143-149

83. Curtis H. J., Leith J., Tilley J. Chromosome aberrations in liver cells of dogs of different ages // Journal of gerontology. 1966. Vol. 21. № 2. - P. 268-270

84. Curtis H. J., Miller R. Chromosome aberrations in liver cells of guinea pigs // Journal of gerontology. -1971. Vol. 26. № 3. P. 292-293

85. Duffaud F., Orsiere Т., Villani P. et al. Comparison between micronucleated lymphocyte rates observed in healthy subjects and cancer patients // Mutagenesis. 1997. - Vol. 12. № 4. - P. 227-231

86. Gadhia P. K. Possible age-dependent adaptive response to low dose of X-rays in human lymphocytes // Mutagenesis. 1998. Vol. 53.№ 2. - P. 151-152

87. Galloway S. M., Berry P. K., Nichols W. W. et al. Chromosome aberrations in individuals occupationally exposed to ethylene oxide, and in large control population // Mutation research. 1986. Vol. 170. - P. 55-74

88. Ganguly В. B. Cell division, chromosomal damage and micronucleus formation in peripheral lymphocytes of healthy donors: related to donor's age // Mutation research. 1993. Vol. 295. - P. 135-148

89. Ghiassi-nejad M., Mortazavi S. M. J., Cameron J. R. et al. Very high background radiation areas of Ramsar, Iran: preliminary biological studies // Health physics. 2002. Vol. 82. № 1. - P. 87-93

90. Gourabi H., Mozdarani H. A cytokinesis-blocked micronucleus study of the radioadaptive response of lymphocytes occupationally exposed to chronic doses of radiation // Mutagenesis. 1998. Vol. 13. № 5. - P. 475-480

91. Hagmar L., Brogger A., Hansteen I-L. et al. Cancer risk in humans predicted by increased levels of chromosomal aberrations in lymphocytes. Nordic study group on the health risk of chromosome damage // Cancer research. 1994. June 1.-P. 2919-2922

92. Hando J. C., Nath J., Tucker J. D. Sex chromosomes, micronuclei and aging in women // Chromosoma. 1994. Vol. 103. - P. 186-192

93. Heddle J. A., Swiger R. R. Risk estimation from somatic mutation assays // Mutation research. 1996. Vol. 365. - P. 107-117

94. Hedner K., Hogstedt В., Kolnig A-M. et al. Sister chromatid exchanges and structural chromosome aberrations in relation to age and sex // Human genetics. 1982. Vol. 62. № 4. - P. 305-309

95. Hill К. A., Wang J., Farwell K. D. et al. Spontaneous tandem-based mutations (TBM) show dramatic tissue, age, pattern and spectrum specificity // Mutation research. 2003. Vol. 534. - P. 173-186

96. Huber R., Braselmann H., Bauchinger M. Screening for interindividual differences in radiosensitivity by means of the micronucleus assay in human lymphocytes // Radiation environmental Biophysics. 1989. - Vol. 28. - P. 113-120

97. Hiittner E., Holzapfel В., Kropf S. Frequency of HPRT mutant lymphocytes in a human control population as determined by the T-cell cloning procedure // Mutation research. 1995. Vol. 348. - P. 83-91

98. Hiittner E., Holzapfel B. HPRT mutant frequencies and detection of large deletions by multiplex-PCR in human lymphocytes of vinyl chloride exposed and non-exposed population // Toxicology. 1996. Vol. 110. - P.l-9

99. Jacobs P., Court Brown W., Doll R. Distribution of human chromosome counts in relation to age // Nature. 1961. Vol. 191. - P. 1178-1180

100. Jensen R. H., Bigbee W. L., Langlois R. G. Multiple endpoints for somatic mutations in humans provide complementary views for biodosimetry, genotoxicity and health risks // Mutation and environment. 1990. Part C. -P. 81-92

101. Jiang Т., Hayata I., Wang Ch. et al. Dose-effect relationship of dicentric and ring chromosomes in lymphocytes of individuals living in the highbackground radiation areas in China // Journal of radiation research. 2000. Vol. 41.-P. 63-68

102. Jones I. M., Thomas С. В., Tucker B. et al. Impact of age and environment on somatic mutation at the hprt gene of T lymphocytes in humans // Mutation research. 1995. Vol. 338. - P. 129-139

103. Fenech M. Important variables that influence lymphocytes a biomarker for DNA damage in human populations // Mutation research. - 1998. Vol. 404. -P. 155-165

104. Fucic A., Zeljeiic D., Ka§uba V. et al. Stable and unstable chromosome aberrations measured after occupational exposure to ionizing radiation and ultrasound // Croatian medical journal. 2007. Vol. 48. - P. 371-377

105. Karsdon J., van Rijn J., Berger H. et al. Increased frequency of spontaneous and X-ray-induced chromosomal aberrations in lymphocytes from neonates and the influence of caffeine an in vitro study // Mutation research. - 1989. Vol. 226.-P. 13-19

106. Kelecsenyi Zs., Szfikely G., Gundy S. Sporadic chromosomal aberrations in healthy individuals studied between 1986-2001 // Hungarian Oncology. -2003. Vol. 47.-P. 169-176

107. King С. M., Gillespie E. S., McKenna P. G. et al. An investigation of mutation as a function of age in humans // Mutation research. 1994. Vol. 316.-P. 79-90

108. Kulka U., Huber R., Muller P. et al. Combined FISH painting and harlequin staining for cell cycle-controlled chromosome analysis in human lymphocytes // International journal of radiation biology. 1995. Vol. 68. № 1. - P. 25-27

109. Lazutka J. R. Chromosome aberration and rogue cells in lymphocytes of Chernobyl clean-up workers // Mutation research. 1996. Vol. 350. - P. 315329

110. Lazutka J. R., Dedonyte V. Increased frequency of sister chromatid exchanges in lymphocytes of Chernobyl clean-up workers // International journal of radiation biology. -1995. Vol. 67. № 6. P. 671-676

111. Lazutka J. R., Lekevicius, Dedonyte V. et al. Chromosomal aberrations and sister-chromatid exchanges in Lithuanian populations: effects of occupational and environmental exposures // Mutation research. 1999. Vol. 445. - P. 225239

112. Lezhava T. Chromosome and ageing: genetic conception of ageing // Biogerontology. 2001. Vol. 2. - P. 253-260

113. Lindholm C., Tekkel M., Weidenbaum T. et al. Persistence of translocations after accidental exposure to ionizing radiation // International journal of radiation biology. -1998. Vol. 74. P. 565-571

114. Lucas J. N., Awa A., Straume T. et al. Rapid translocation frequency analysis in humans decades after exposure to ionising radiation // International journal of radiation biology. 1992. Vol. 62. № 1. - P. 53-63

115. Maffei F., Angelini S., Cantelli Forti G. et al. Spectrum of chromosomal aberrations in peripheral lymphocytes of hospital workers occupationallyexposed to low doses of ionizing radiation // Mutation Research. 2004. Vol. 547.-P. 91-99

116. Marcon F., Andreoli C., Rossi S. et al. Assessment of individual sensitivity to ionizing radiation and DNA repair effeciency in a healthy population // Mutation research. 2003. Vol. 541. - P. 1-8

117. Maznik N. A., Vinnikov V. A. Possibilities and limitations of fluorescence in situ hybridization technique in retrospective detection of low dose radiation in exposure in post-Chernobyl human cohort // Цитология и генетика. 2005. Т. 39. №4.-С. 25-31

118. Menichini P., Abbondandolo A. Somatic gene mutations in humans // New horizons in biological dosimetry. 1991. - P. 267-279

119. Meszaros G., Bognar G., Koteles G. J. Long-term persistence of chromosome aberrations in uranium miners // Journal of occupational health. 2004. Vol. 46.-P. 310-315

120. Millillo С. P, Gemignani F., Sbrana I. et al. Chromosome aberrations in humans in relation to site of residence // Mutation research. 1996. Vol. 360. -P. 173-179

121. Montorro A., Rodriguez P., Almonacid M. et al. Biological dosimetry in a group of radiologists by the analysis if dicentrics and translocations // Radiation research. 2005. Vol. 164. № 5. - P. 612-617

122. Moor D. H. П, Tucker J. D., Jones I. M. et al. A study of exposure on cleanup workers at the Chernobyl nuclear reactor accident using multiple end points // Radiation research. -1997. Vol. 148. P. 463-475

123. Moorhead P. S., Nowell P. C., Mellman W. J. et al. Chromosome preparations of leukocytes cultured from human peripheral blood // Experimental cell research. 1960. Vol. 20. - P. 613-616

124. Mozdarani H., Mansouri Z., Haeri S. A. Cytogenetic radiosensitivity of Go-lymphocytes of breast and esophageal cancer patients as determined by micronucleus assay // Journal of radiation research. 2005. Vol. 46. - P. 111116

125. Natarajan A.T., Santos S.J., Darroudi F. et al. 137Cesium-induced chromosome aberrations analyzed by fluorescence in situ hybridization: eight years follow up of the Goiania radiation accident victims // Mutation research. 1998. Vol. 400. - P. 299-312

126. Neronova E., Slozina N., Nikiforov A. Chromosome aberrations in clean-up workers sampled years after the Chernobyl accident // Radiation research. -2003. Vol. 160.-P. 46-51

127. Odagiri Y., Dempsey J. L., Morley A. A. Damage to lymphocytes by X-ray and bleomycin measured with the cytokinesis-block micronucleus technique // Mutation research. 1990. Vol. 237. - P. 147-152

128. Padovani L., Appoloni M., Anzidei P. et al. Do human lymphocytes exposed to the fallout of the Chernobyl accident exhibit an adaptive response? 1. Challenge with ionizing radiation // Mutation research. 1995. Vol. 332. - P. 33-38

129. Padovani L., Caporossi D., Tedeschi B. et al. Cytogenetic study in lymphocytes from children exposed to ionizing radiation after the Chernobyl accident // Mutation research. 1993. Vol. 319. - P. 55-60

130. Pilinskaya M. A. Cytogenetic effects in somatic cells Of Chernobyl accident survivors as biomarker low radiation dose exposure // International journal of radiation medicine. 1999. Vol. 2. № 2. - P. 60-66

131. Rached E., Schindler R., Beer К. T. et al. No predictive value of the micronucleus assay for patients with severe acute reaction of normal tissue after radiotherapy // Europian journal of cancer. 1998. Vol. 32. № 3. - P. 378-383

132. Ramsey M. R., Moor II D. H., Briner J. F. The effect of age and lifestyle on the accumulation of cytogenetic damage as measured by chromosome painting // Mutation research. 1995. Vol. 338. - P. 95-106

133. Richard F., Muleris M., Dutrillaux B. et al. // The frequency of micronuclei with X chromosome increases with age in human females // Mutation research. 1994. Vol. 316. - P. 1-7

134. Rozgaj R., KaSuba V., Simic D. The frequency of dicentrics and acentrics and the incidence of rogue cells in radiation workers // Mutagenesis. 2002. Vol. 17. №2.-P. 135-139

135. Ryabchenko N., Nasonova V., Antoschina M. et al. Persistence of chromosome aberrations in peripheral lymphocytes from Hogkin's lymphoma remission patients // International journal of radiation biology. 2003. Vol. 79. №4.-P. 251-257

136. Salomaa S., Lindholm C., Tankimanova M.K. et al. Stable chromosome aberrations in the lymphocytes of a population living in the Semipalatinsk nuclear test site // Radiation research. 2002. Vol. 158. № 5. - P. 591-596.

137. Sasaki M. S., Tonomura A., Matsubara S. Chromosome constitution and its bearing on the chromosomal radiosensitivity in man // Mutation research. -1970. Vol. 10. № 6. P. 617-633

138. Scarpato R., Antonelli A., Ballardin M. et al. Analysis of chromosome damage in circulating lymphocytes of radiological workers affected by thyroid nodules // Mutatation research. 2006. Vol. 606. - P. 21-26

139. Scott D., Barber J. B. P., Spreadborough A. R. Increased chromosomal radiosensitivity in breast cancer patients: a comparison of two assays // International journal of radiation biology. 1999. Vol. 75. № 1. - P. 1-10

140. Scott D., Spreadborough A. R., Roberts S. A. Radiation-induced G2 delay and spontaneous chromosome aberrations in ataxia-telangiectasia homozygotes and heterozygotes // International journal of radiation biology. 1994. Vol. 66. № 6. - P. S157-S163

141. Sevan'kaev A.V., Lloyd D.C., Braselmann H. et al. A survey of chromosomal aberrations in lymphocytes of Chernobyl liquidators // Radiation Protection Dosimetry. 1995. Vol. 58. №. 2. - P. 85 - 91

142. Simon S.L., Baverstock K.F., Lindholm C. A summary of evidence on radiation exposures received near to the Semipalatisk nuclear weapons test site in Kazakhstan // Health Physics. 2003. Vol. 86. № 6. - P. 718-725

143. Slozina N., Neronova E., Kharchenko T. et al. Increased level of chromosomal aberrations in lymphocytes of Chernobyl liquidators 6-10 years after the accident // Mutation research. -1997. Vol. 379. P. 121-125

144. Slozina N., Neronova E., Nikiforov A. Persistence of dicentrics in Chernobyl clean-up workers who suffered from low doses of radiation // Applied radiation and isotoes. 2001. Vol. 55. - P. 335-338

145. Smerhovsky Zs., Landa K., Rossner P. et al. Risk of cancer in an occupationally exposed cohort with increased level of chromosomal aberrations // Environmental health perspectives. 2001. Vol. 109. № 1. - P. 41-45

146. Sorokine-Durm I., Durand V., Delbos M. FISH and biological dosimetry after radiation exposure: a brief state of art // Advences in radiation biology and peace.-1999.-P. 61-68

147. Sorokine-Durm I., Durand V., Delbos M. et al. A French view on FISH painting as a biodosimeter // Radiation protection dosimetry. 2000. Vol. 88. № 1. - P. 35-44

148. Steenland K., Carrano A., Ratcliffe J. et al. A cytogenetic study of papaya workers exposed to ethylene dibromide // Mutation research. 1986. Vol. 170. №3.-P. 151-160

149. Stephan G., Pressl S., Koshpessova G. Analysis of FTSH-painted chromosome in individuals living near the Semipalatinsk nuclear test site // Radiation research. 2001. Vol. 155. - P. 794-798

150. Storer J. В. Radiation resistance with age in normal and irradiated populations of mice // Radiation research. 1965. Vol. 25. № 3. - P. 435459

151. Tanaka K., Iida Sh., Takeichi N. et al. Unstable-type chromosome aberrations in limphocytes from indiviuals living near Semipalatinsk nuclear test site // Journal of radiation research. 2006. Vol. 47. - P. A159-A164

152. Tawn E. J., Whitehouse C. A. Frequency of chromosome aberrations in a control population determined by G banding // Mutation research. 2001. Vol. 490.-P. 171-177

153. Tawn E. J., Whitehouse C. A. Stable chromosome aberration frequencies in men in occupationally exposed to radiation // Journal of radiological protection. 2003. - Vol. 23. -P. 269-278

154. Tedeschi В., Caporossi D., Vernole P. et al. Do human lymphocytes exposed to the fallout of the Chernobyl accident exhibit an adaptive response? 2. Challenge with bleomycin // Mutation research. 1995. - Vol. 332. - P. 3944

155. Testa A., Stronati L., Ranaldi R. et al. Cytogenetic biomonitoring carried out in a village (Dolon) adjacent to the Semipalatinsk nuclear weapon test site // Radiation and environmental biophisycs. 2001. Vol. 40. - P. 125-129

156. Tucker J. D., Lee D. A., Ramsey M. J. et al. On the frequency of chromosome exchanges in a control population measured by chromosome painting // Mutation research. 1994. Vol. 313. - P. 193-202

157. Tucker J. D., Spruill M. D., Ramsey M. J. et al. frequency of spontaneous chromosome aberrations in mice: effect of age // Mutation research. 1999. Vol. 425.-P. 135-141

158. Vorobtsova I. E. Irradiation of male rats increases the chromosomal sensitivity of progeny to genotoxic agents // Mutagenesis. 2000. Vol. 15. № 1.-P. 33-38

159. Vorobtsova I., Semenov A., Timofeeva N. et al. An investigation of age-dependency of chromosome abnormalities in human populations exposed to low-dose ionizing radiation // Mechanisms of ageing and development. -2001. Vol. 122.-P. 1373-1382

160. Wang Z„ Boice J. D., Wei L. et al. Thyroid nodularity and chromosome aberrations among women in areas of high background radiation in China // Journal of National cancer institute. 1990. Vol. 82. - № 6.

161. Weirich-Schwaiger H., Weirich H. G., Gruber B. et al. Correlation between senescence and DNA repair in cells from young and individuals in premature aging syndromes // Mutation research. 1994. Vol. 316. - P. 37-48

162. Zaire R., Notter M., Riedel W. et al. Unexpected rates of chromosomal instabilities and alterations of hormone levels in Namibian miners // Radiation research. 1997. Vol. 147. - P. 579-584