Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Изучение трансгенерационного феномена геномной нестабильности у детей-потомков облученных родителей в результате аварии на ЧАЭС

ВАК РФ 03.00.15, Генетика

Автореферат диссертации по теме "Изучение трансгенерационного феномена геномной нестабильности у детей-потомков облученных родителей в результате аварии на ЧАЭС"

6

1

На правах рукописи

Агаджанян Анна Владимировна

Изучение трансгенерационного феномена геномной нестабильности у детей - потомков облученных родителей в результате аварии на ЧАЭС

03.00.15-генетика

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

ииа1БВ5ЭО

Москва 2008

003168590

Работа выполнена в лаборатории экологической генетики Института общей генетики им. Н. И. Вавилова Российской Академии Наук

Научный руководитель: кандидат биологических наук,

ведущий научный сотрудник Сусков Игорь Иванович

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук,

профессор Щипков Валерий Петрович

доктор биологических наук Осипов Аидриан Николаевич

Ведущая организация: Гематологический Научный Центр РАМН

Защита состоится » (МАЛ'_2008 года в « » часов на заседании

диссертационного совета Д 212.203.05 при Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Российском университете дружбы народов», по адресу 117198, г. Москва, ул. Миклухо-Маклая, д. 8.

С диссертацией можно ознакомиться в Научной библиотеке Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Российский университет дружбы народов» по адресу: 117198, г Москва, ул Миклухо-Маклая, д. 6.

Автореферат разослан влимр _ 2008 года

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат биологических наук, доцент

Гигани Ольга Борисовна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы

После аварии на Чернобыльской Атомной Электростанции у первого поколения детей (Fl) облученных родителей (дети отцов-ликвидаторов аварии и дети, постоянно проживающие на загрязненных радионуклидами территориях) наблюдаются достоверно повышенные уровни аберрантных геномов (Степанова Е И 1996, 2002, Пилинская M А 2002, Севанькаев AB 1995, 2005 и др ) Эти радиационно-индуцированные нарушения геномов соматических клеток, как правило, сопровождаются повышением заболеваемости, хронизацией болезней, частыми случаями рождения детей с пороками развития, онкопатологией (Балева JIС 2006, Сипягина А Е 2005, Иванов В К , Цыб А Ф , 2003, Devis S et al, 2004)

В последнее время повышение уровней хромосомных аберраций в организме людей связывают не только с последствием прямого действия радиации, но и с феноменом радиационно-индуцированной геномной нестабильности, обнаруженным в конце XX века как в экспериментальных исследованиях, так и в организме людей (Kadhim MA et al, 1992, 1995, 2000, Holmberg К. et al, 1993, Пелевина ИИ и др , 1996, 1998, Lambert В et al, 1998, Wright EG 1998, 2000, 2006, Salomaa S et al, 1998, Сусков ИИ и др, 2001, Кузьмина H С , 2003, Пшнска MA и др, 2005 и др ) В основе природы этого явления могут быть ранее описанные первичные, потенциальные повреждения ДНК, реализирующиеся в последующих клеточных делениях (Дубинин НП, 1978)

Спонтанная и радиационно-индуцированная геномная нестабильность клеток одного либо обоих облученных родителей, проходя множественные редупликации, может трансгенерационно проявляться и в соматических клетках их потомков Трансгенерационный феномен геномной нестабильности был обнаружен в экспериментах на животных при облучениях в средних и больших дозах (Воробцова ИЕ, 1987, Luke G A et al, 1997, Streffer С , 2006) У людей этот феномен был выявлен у детей во втором и в третьем поколениях в разных популяциях жителей, проживающих в загрязненных радионуклидами территориях Алтайского края, Челябинской области (Шевченко В А и др , 1995, Аклеев А В , 2004) Также в соматических клетках детей-потомков облученных родителей выявлена повышенная радиочувствительность после тестирующих облучений в средних дозах (Воробцовой ИЕ и др, 1992, 2006, Воробьевой MA, 1995)

Однако сведения о трансгенерационном феномене радиационно-индуцированной геномной нестабильности у потомков при облучении родителей в малых дозах немногочисленны, противоречивы и требуют дальнейшего изучения

Цели и задачи исследования

Цель данной работы заключалась в изучении трансгенерационного феномена геномной нестабильности в организме детей, первого поколения потомков облученных родителей, двух когорт (детей отцов-ликвидаторов и детей проживающих на загрязненных радионуклидами территориях) в результате аварии на ЧАЭС

В связи с этим были поставлены следующие задачи

1 Изучить спектр и частоту аберраций хромосом в лимфоцитах крови у детей, рожденных от облученных отцов-ликвидаторов и необлученных матерей, проживающих на незагрязненных радионуклидами территориях, и у детей, рожденных от облученных отцов и матерей, постоянно проживающих на загрязненных радионуклидами территориях, а также их родителей

2 Сравнительно изучить группы аберрантных хромосом в лимфоцитах детей и их родителей в семьях ликвидаторов аварии на ЧАЭС и жителей территорий, загрязненных радионуклидами.

3 Изучить геномную нестабильность в лимфоцитах детей и их родителей в модельных экспериментах по накоплению поглощенной радиации методом фракционного у-облучения 137Cs крови in vitro

Научная новизна результатов

Впервые выявлен трансгенерационный феномен геномной нестабильности в лимфоцитах крови при сравнительном изучении цитогенетических нарушений у детей двух когорт, являющихся потомками облученных в результате аварии на ЧАЭС родителей (отцов-ликвидаторов аварии и родителей, проживающих на загрязненных радионуклидами территориях)

Показано, что, несмотря на разные годы рождения детей обеих когорт (от 1987 до 2002 гг) не наблюдается возрастной зависимости по средним частотам аберрантных геномов и аберрациям хромосомного типа У детей проживающих на загрязненных территориях не выявлено дозовой зависимости от уровня загрязнения территорий радионуклидами

При изучении трансгенерационного феномена геномной нестабильности впервые проведено изучение частоты аберрантных хромосом по их группам в семьях ликвидаторов аварии на ЧАЭС и в семьях проживающих на загрязненных радионуклидами территориях Выявлены значимые различия в частотах отдельных групп аберрантных хромосом (в основном групп А, С, D ) у детей и у их облученных родителей по сравнению контролем. Наблюдается значимая корреляция между частотами пораженных хромосом отдельных групп у отцов-ликвидаторов и их детей и у облученных отцов и матерей-жителей загрязненных территорий и их детей

Впервые экспериментально проведено изучение спектра и частоты аберраций хромосом в 1-ом и 2-ом митозах при моделировании геномной нестабильности методом накопления поглощенной дозы после фракционного

у-облучения 137 Cs in vitro в дозах 10+10 сГр и 10+10+10 сГр лимфоцитов периферической крови детей и их родителей При этом было установлено, что у детей двух когорт, рожденных от облученных родителей, достоверно повышены средние частоты аберрантных геномов по сравнению с детьми необлученных родителей Выявлено, что возрастание уровня аберраций хромосом в 1-ом и 2-ом митозах в зависимости от исходных индивидуальных частот аберрантных геномов как у детей, так и у родителей и носит сходный характер после однократного и фракционного облучения в диапазоне доз 10-30 сГр

Полученные результаты имеют важное научное значение, т к подтверждают имеющиеся до сих пор представления о действии ионизирующего излучения в малых дозах на предзиготической и постнатальных стадиях развития, что может быть основой повышенной заболеваемости для детей

Практическая значимость работы

В практическом отношении полученные результаты важны для диспансерного наблюдения за детьми - потомками облученных родителей Проведенные исследования позволяют проводить экспертную оценку связи заболевания с облучением

Также важно проведение медико-генетического консультирования семей, подвергшихся воздействию малых доз радиации, и прогноза здоровья у их будущего потомства

Апробация работы

Полученные в диссертационной работе данные представлены на Международной конференции « Генетические последствия черезвычайных радиационных ситуаций», ИОГен РАН, МНТЦ, НСР РАН (РФ, Москва, 2002), на II Международной конференции «Современные проблемы генетики, радиобиологии, радиоэкологии и эволюции» (Армения, Ереван, 2005), на Международной конференции «Генетические последствия чрезвычайных радиационных ситуаций» (РФ, Дубна, 2005), на Международной научной конференции «Современные проблемы генетики» (Белоруссия, Минск, 2005), на V Съезде по радиационным исследованиям (РФ, Москва, 2006), на 35 Международном съезде Европейского радиационного общества (Киев, Украина, 2006)

Публикации: По теме диссертационной работы опубликовано 12 работ 10 тезисов и 2 статьи

Структура и объем диссертации: Диссертация построена по традиционному плану и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов, результатов исследований, обсуждения и выводов Изложена на 168 страницах машинописного текста Содержит 20 таблиц и 26 рисунков Библиографический указатель включает 170 наименований русских и иностранных авторов

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

1. Характеристика детей двух когорт и их родителей.

В работе были исследованы дети двух основных когорт, рожденные после аварии (дети отцов-ликвидаторов аварии на ЧАЭС и дети, проживающие на загрязненных радионуклидами территориях), сведенья о которых приведены в таблице 1(а,б)

Дети поступали для обследования в Детский центр противорадиационной защиты Института Педиатрии и Детской Хирургии Росздрава МЗ РФ (руководитель центра - проф Балева JIС) с различными нарушениями в состоянии здоровья Наиболее часто встречались заболевания нервной системы (23%), мочеполовой (15%), врожденные пороки центральной нервной системы (12%), эндокринной (12%), дыхательной (12%), пищеварительной (8%), косно-мышечной (8%), кровеносной (8%) и других систем (8%)

Одну когорту составляли дети, родившиеся от облученных отцов-ликвидаторов аварии на ЧАЭС и необлученных матерей, проживающих на территориях не загрязненных радионуклидами (Таблица 1а) Дозы облучения отцов не превышали 0,25 Гр Для анализа влияния времени от момента воздействия радиационного фактора на отцов до рождения ребенка эти дети были разделены на следующие возрастные группы I группа - дети рожденные 1987-1989гг, II группа - дети, рожденные 1991-1996гг, III группа - дети, рожденные 1998-2002

Другую когорту составляли дети, облученные внутриутробно, постоянно проживающие на территориях с радионуклидными загрязнениями в г Новозыбкове и Новозыбковском районе Брянской области, РФ Во время аварии на ЧАЭС их родители подверглись воздействию радиации в разные периоды своего онтогенетического развития и до становления детородной функции продолжали жить в условиях хронического действия малых доз радиации В соответствии с возрастными онтогенетическими периодами развития родителей на момент аварии на ЧАЭС эти дети были разделены на следующие возрастные группы I группа - дети, рожденные 1988-1992гг, II группа - дети, рожденные 1994-1995, III группа - дети, рожденные 1998- 2002гг

Контролем являлись жители территорий незагрязненных радионуклидами (Суражский и Унечский районы Брянской области) (Таблица 1в)

Анализ групповой классификации пораженных хромосом в аберрантных геномах был проведен в 26-ти семьях (4 многодетные) ликвидаторов аварии на ЧАЭС и в 15-ти семьях (1 многодетная) постоянно проживающих на территориях с радионуклидными загрязнениями (Таблица 2)

Таблица 1. Характеристика детей и их родителей.

а) Дети отцов ликвидаторов аварии на ЧАЭС и родители, проживающие на территориях незагрязненных радионуклидами

Дети: п=79 (с?п=41,?п=38) Родители: п=57 №=31, $ п=26)

Группы детей (число) Годы рождения (возраст на момент обследования) Обследованные лица Средний возраст до зачатия ребенка

I (п=46) 1987-1989 (10-12лет) отцы-ликвидаторы (п=31) 32 года

II (п=25) 1991-1996 (5-8 лет)

Ш (п=8) 1998-2002 (2-5 лет) необлученные матери (п=26) 26 лет

б) Дети-жители загрязненных радионуклидами территорий и родители Уровень загрязнения почвы по шСз - 135-688 кБк/м2 (3,66-18,6Ки/км2)

Дети. п=80 (<?п=47, $п= 33) Родители: п=75 (<?п=25, $п=50)

Группы детей (число) Годы рождения (возраст на момент обследования) Группы родителей (число) Средний возраст на момент аварии

I (п=44) 1987-1992(10-12лет) I (п=32) 18 лет

II (п=21) 1994-1995 (5-8 лет) П (п=22) 14 лет

Ш(п=15) 1998-2002 (2-5 лет) III (п=21) 8 лет

в) Дети и родители - жители территорий незагрязненных радионуклидами (Суражский и Унечский районы Брянской области, Московской области)

Дети: п=12 (<?п=5, $п= 7) 1987-1995 годов рождения (возраст на момент обследования 5-14 лет) Родители: п=13 (с?п=6, ?п=7)

Таблица 2. Характеристика семей детей двух когорт.

СЕМЬИ

ликвидаторов аварии на ЧАЭС, проживающие на территориях незагрязненных радионуклидами (п=26) проживающие на территориях, загрязненных радионуклидами (п=15)

Дети п=32 мальчики (п=15) Дети п=17 мальчики (п=6)

девочки (п=17) девочки (п=11)

Отцы (п=26) Отцы (п=15)

Матери (п=26) Матери (п=15)

2. Культивирование лимфоцитов и приготовление препаратов метафазных хромосом проводили по общепринятой методике согласно рекомендациям ВОЗ (1973) и МАГАТЭ (1986) Установление групповой классификации пораженных хромосом проводили методом неполного кариотипирования

3. Эксперименты по моделированию геномной нестабильности с

тестирующим у-облученим 137Cs проводили in vitro на образцах периферической крови девяти детей и шести родителей на установке ГУПОС-800 (мощность дозы 4,56 Гр/мин) в секторе источников облучения ИОГен РАН Однократные дозы составляли 10 сГр, 20 сГр, 30 сГр Фракционные дозы 10 сГр + 10 сГр и 10сГр+10 сГр +10 сГр Цельную кровь облучали с интервалом в 24 часа Все образцы крови до постановки культур хранили при температуре 37°С Культивирование лимфоцитов проводили в течение 48 и 72 часов Для изучения порядкового номера митоза добавляли 5-БДУ (Пяткин Е К , Нугис В Ю , 1980)

5. Статистическая обработка результатов проводилась общепринятыми статистическими методами с использованием параметрических критериев Стъюдента (t), корреляционного, регрессионного анализов (Урбах В Ю , 1964, Лакин Г Ф , 1990) Использовался пакет программ MS EXSEL и Statistika 6

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

1. Цитогенетические эффекты в лимфоцитах крови детей и родителей

***

У детей и родителей контрольной группы средние частоты аберрантных геномов соответствуют спонтанному уровню (Бочков НП и др, 1968) Аберрации хромосом представлены в основном одиночными хроматидными

фрагментами и весьма редкими парными фрагментами (Таблица 3)

***

У детей отцов-ликвидаторов и родителей наблюдаются почти все аберрации хроматидного и хромосомного типов (Таблица 4) У детей и отцов-ликвидаторов были выявлены достоверно повышенные по сравнению с контролем частоты аберрантных геномов и парных фрагментов Наблюдались повышенные частоты аберраций хромосомного типа У необлученных матерей уровень аберрантных геномов ниже, чем у детей и отцов Повышенные индивидуальные частоты аберрантных геномов выявлены у 76% детей, 93% отцов-ликвидаторов и 57% матерей, а аберраций хромосомного типа у 58% детей, 87% отцов-ликвидаторов и 40% матерей Аналогичные результаты получены на других популяциях детей отцов-ликвидаторов России и Украины (Степанова ЕИ 1996, 2002, Пилинская МА 2000) В работах Шевченко В А, СнигиревойГП идр, 1995,2006, Беуап'каеуа А V ах а\, 1995 и др у

Таблица 3. Типы и частоты аберраций хромосом в геномах лимфоцитов детей и родителей контрольной группы.

Обследованные лица Число проанализированных метафаз Аебррантные геномы (частота %) Аберрации хроматидного типа (частота на 100 клеток) Аберрации хромосомного типа (частота на 100 клеток)

[ одиночные фрагменты хроматидные обмены Ы 2 11 м § а я парные \ 1фрагменты . центромерные разрывы я - я § е? дицентрикн кольца я 5 я X о 5 Я а е- инверсии

Дети 3350 1,13±0,12 1,05± 0,12 0 0 0,08± 0,02 0 0 0 0 0 0

Отцы 1350 1,33±0,24 1,04± 0,14 0 0 0,29± 0,02 0 0 0 0 0 0

Матери 1600 1,19±0,22 0,87± 0,08 0 0 0,31± 0,03 0 0 0 0 0 0

ликвидаторов аварии на ЧАЭС, также установлены высокие уровни аберраций хромосом

Для анализа влияния времени, прошедшей от момента воздействия радиационного фактора на отцов-ликвидаторов до рождения их детей, было проведено изучение уровня аберрантных геномов и аберраций хромосом в зависимости от возраста ребенка У детей, рожденных в первые годы, спустя 5-6 и 12-16 лет после аварии на ЧАЭС, не выявлены различия по уровню аберрантных геномов и аберраций хромосом (Рис 1) В указанных возрастных группах детей отмечаются достоверные различия по сравнению с контролем по частотам аберрантных геномов и парных фрагментов При этом в 3-х возрастных группах детей наблюдаются повышенные частоты сложных обменных аберраций хромосомного типа в виде дицентриков+колец и траслокаций+инверсий

***

У облученных детей, отцов и матерей, проживающих на загрязненных радионуклидами территориях, наблюдаются аберрации хроматидного и хромосомного типов (Таблица 5) Средние часто гы аберрантных геномов и парных фрагментов значимо превышают контроль Наблюдаются повышенные частоты аберраций хромосомного типа. Повышенные индивидуальные частоты аберрантных геномов выявлены у 68% детей, 80% отцов-ликвидаторов и 82% матерей, а аберраций хромосомного типа у 56% детей, 84% отцов-ликвидаторов и 74% матерей При исследовании популяций детей, проживающих на загрязненных радионуклидами территориях России, Украины, Белоруссии были получены аналогичные результаты (Елисеева ИМ, 1991, Воробцова ИЕ, 1995, Севанькаев А В , 1995, 2005, Хандогина Е К, 1995, Раёоуат Ь , 1997 и др) В работах Севанькаева А В и др, 1995, Шевченко В А и др, 2006, и др

Таблица 4. Типы и частоты аберраций хромосом в геномах лимфоцитов детей отцов-ликвидаторов аварии на ЧАЭС и их родителей.

Обследованные липа Число проанализированных метафаз Абррантные геномы (%) Аберрации хроматндного гипа (частота на 100 клеток) Аберрации хромосомного типа (частота па 100 клеток)

одиночные Фрагменты хроматидные обмены изороматид-ные фрагменты парные фрагменты центромерны е разрывы делении дицентрики кольца транслокации инверсии

Дети 20257 2,28±0,17' 1,54 ±0,13 0,03 ±0,02 0,05 ±0,04 0,39 ±0,02 * 0,02 ±0,01 0,06 ±0,01 0,07 ±0,03 0,02 ±0,01 0,06 ±0,03 0,02 ±0,0)

Отцы 7160 3,52±0,4*" 1,99 ±0,38 0,04 ±0,01 0,01 ±0,01 0,81 ±0,11** 0,08 ±0,03 0,14 ±0,05 0,21 ±0,09 0,04 ±0,02 0,11 ±0,04 0,07 ±0,03

Матери 5862 1,82±0,21 1,24 ±0,16 0,02 ±0,01 0 0,44 ±0,09 0 0,02 ±0,01 0,05 ±0,03 0 0,05 ±0,02 0

Рис. 1. Цитогенетические эффекты в геномах лимфоцитов детей ликвидаторов аварии на ЧАЭС разных возрастных групп. 3-] Ш 1-1987-1989г.р.

Аберрантные геномы Одиночные Парные Дицентрики+кольца Траслокации+инверсии

фрагме нты+хро мати дные фрагме нты+це нтроме р н ые обмены+изохроматидные разрывы+делеции

фрагме нты

* * ** *** достоверные различия с контролем ( р<0,05, р<0,01, р<0,001)

Таблица 5. Тины и частоты аберраций хромосом в геномах лимфоцитов детей жителей загрязненных радионуклидами территорий и их родителей

Обследован -ные лица Число проанализированных метафаз Абррантные геномы (%) Аберрации хроматидного типа (частота на 100 клеток) Аберрации хромосомного типа (частота на 100 клеток)

одиночные фрагменты хроматидн-ые обмены | изороматид -ные фрагменты парные фрагменты центромерн -ые разрывы делении дицеитрики кольца транслокац -ни инверсии

Дети 21620 2,22±0,15* 1,57± 0,12 0,02 ±0,01 0,04 ±0,01 0,38 ±0,04* 0,03 ±0,02 0,13 ±0,03 0,08 ±0,01 0,02 ±0,02 0,11 ±0,02 0,01 ±0,01

Отцы 5910 2,77±0,3б" 1,61 ±0,26 0,05 ±0,04 0,08 ±0,02 0,49 ±0,12* 0,10 ±0,04 0,13 ±0,05 0,15 ±0,05 0,05 ±0,04 0,08 ±0,05 0,02 ±0,01

Матери 12672 2,57±0,19 " 1,47 ±0,12 0,05 ±0,01 0,04 ±0,02 0,46 ±0,07* 0,11 ±0,03 0,15 ±0,04 0,14 ±0,04 0,01 ±0,01 0,13 ±0,04 0,03 ±0,02

'достоверные различия с контролем (* р<0,05, "р<0,01, ***р<0,001)

Рис.

2. Цитогенетические эффекты в геномах лимфоцитов детей разных возрастных групп-жи гелей загрязненных радионуклидами территорий

Аберрантные геномы

Одиночные Парные

фрагменты+хроматидные фрагменты+центромерные

обмены*изохроматидиые разрывы+делеции фрагменты

Дицентрики+кольца

■ 1-1987-1992г.р. И М-1994-1995г.р. в Ш-1998-2002г.р.

Траслокации-нжве рсии

установлены повышенные уровни радиационно-индуцированных хромосомных аберраций у жителей загрязненных радионуклидами территорий.

С учетом особенностей периодов онтогенетического развития родителей на момент аварии на ЧАЭС у их детей был проведен анализ зависимости уровня аберрантных геномов и аберраций хромосом от возраста. При этом у детей, рожденных спустя 1-6, 8-9 и 12-16 лет после аварии на ЧАЭС, не выявлено различий по уровням аберрантных геномов и аберраций хромосом. (Рис. 2). Вместе с тем в первых 2-х возрастных группах детей были обнаружены достоверные различия по сравнению с контролем по частоте аберрантных геномов, а по частоте парных фрагментов в 3-х возрастных группах детей. Повышенные частоты сложных обменных аберраций хромосомного типа в виде дицентриков+колец и траслокаций+инверсий также наблюдались во всех 3-х возрастных группах детей.

При рассмотрении цитогенетических данных этих детей указанных возрастных групп с учетом степени загрязнения территорий их проживания (I зона - 627 -688 кБк/м2 (16,96-18,6 Ки/км2) 137Cs) и II зона - 135-402 кБк/м2 (3,66-10,86 Ки/км2) 137Cs) отмечена незначительная разница по уровню аберрантных геномов (Рис. 3). Полученные нами данные вероятно можно объяснить тем обстоятельством, что в этих зонах отселения проживают дети всех возрастных групп. Следует также учитывать, что каждый ребенок обладает индивидуальной радиочувствительностью, что более выражается при действии именно малых и сверхмалых доз радиации. В работах Padovani L. at al., 1997; Цыба А.Ф., 2003; Севанькаева A.B. и др., 2005 также не выявлено зависимости от степени загрязнения почвы.

Рис. 3. Средние частоты аберрантных геномов у детей разных возрастных групп, проживающих на территориях с различной плотностью загрязнения радиоануклидами.

■ 1-1987-1992г.р. S П-1994-1995г.р. S Ш-1998-2002г.р.

Контроль

I зона

II зона

Группы детей

2. Изучение групп аберрантных хромосом в семьях ликвидаторов аварии на ЧАЭС и жителей территорий, загрязненных радионуклидами.

Анализ аберрантных хромосом по группам в 26-ти семьях ликвидаторов, в 15-и семьях жителей территорий, загрязненных радионуклидами и в 6-и семьях контрольной группы показал, что у детей и их родителей наблюдается поражаемость хромосом практически всех групп (Рис 4)

Сравнение отдельных групп аберрантных хромосом в семьях ликвидаторов аварии на ЧАЭС и жителей загрязненных радионуклидами территорий не выявило достоверных различий между детьми и родителями в частотах пораженных хромосом В то же время у детей и их облученных родителей, выявлены достоверные различия по средним частотам пораженных хромосом различных групп по сравнению с контролем

У детей и их отцов-ликвидаторов наблюдается положительная корреляция по частотам хромосом групп А, Г (р<0,05), Е (р<0,01) и О (Таблица 6) У детей и их необлученных матерей наблюдается положительная корреляция по частотам хромосом группы А (р<0,05).

В семьях жителей загрязненных радионуклидами территорий у детей и их отцов наблюдается положительная корреляция по частотам хромосом групп В, Е, К (р<0,05) и Б (Таблица 6) У детей и их матерей наблюдается положительная корреляция по частотам хромосом групп А (р<0,05), В, С, Б, Е.

Таблица. 6. Корреляция по частотам пораженных хромосом у детей и их родителей.

СЕМЬИ ЛИКВИДАТОРОВ

Обследованные А В С(Х) Б Е Ж еоо

лица 1,2,3 4,5 6-12,23 13,14,15 16,17,18 19,20 21,22,23

Коэффициент корреляции (К)

Отцы-дети 0,47 р<0,01 -0,28 -0,04 0,21 0,57 р<0,01 1 р<0,05 0,12

Матери-дети 0,34 р<0,05 0,05 -0,16 0,22 -0,10 0,09 -0,08

СЕМЬИ-ЖИТЕЛИ ЗАГРЯЗНЕННЫХ ТЕРРИТОРИЙ

Обследованные лица А 1,2,3 В 4,5 С(Х) 6-12,23 Б 13,14,15 Е 16,17,18 Р 19,20 С(У) 21,22,23

Коэффициент кор реляции (К)

Отцы-дети 0,13 0,45 -0,23 0,38 0,47 0,56 -0,08

р<0,05 р<0,05 р<0,05

Матери-дети 0,45 р<0,05 0,39 0,29 0,36 0,36 0,19 -0,06

Рис. 4. Частоты аберрантных хромосом по группам.

1,6 1,2 0,8 0,4

Семьи контрольной группы

□ дети (п=7) ■ отцы (п=6) Ю матери (п=6)

ГШ ГШ

гиа

I . I ИГЧ

А(1,2,3) В(4,5) С(6-12),Х 0(13,14,15) Е(16,17,18)

Группы хромосом

1=419,20) (3(21,22),У

Семьи ликвидаторов

□ дети (п=32) ■ отцы (п=26) Ы матери (п=26)

А(1,2,3) В(4,5) С(6-12),Х 0(13,14,15) Е(16,17,13) 1={1Э,20) <3(21,22),У

Группы хромосом

1,6

1,2

о н о я X

0,8

0,4

Семьи жителей загрязненных территорий

□ дети (п=17) ■ отцы (п=15) И матери (п=15)

ГШз ,

□■а.

А(1,2,3)

В(4,5)

С(6-12),Х 0(13,14,15) £(16,17,18) Р(19,20) 0(21,22),У Группы хромосом

Достоверные различия с контролем (р<0,05)

3. Моделирование геномной нестабильности с тестирующим у-облучеиим 137Cs крови in vitro в малых дозах.

С целью экспериментального подтверждения феномена геномной нестабильности и его трансгенерационного эффекта у детей двух когорт были выполнены модельные эксперименты с использованием метода накопления поглощенной дозы после фракционного у-облучения 137 Cs крови in vitro детей и родителей в 1-ом и 2-ом митозах Облучение проводилось с суточным интервалом в дозах 10+10 сГр и 10+10+10 сГр

После тестирующих однократных и фракционных облучений крови ш vitro у детей - потомков облученных родителей как в 1-ом, так и во 2-ом митозах были выявлены достоверно повышенные частоты аберрантных геномов по сравнению с аналогичными показателями детей, рожденных от необлученных родителей в интактных лимфоцитах и при дозах 20 сГр и 30 сГр (Рис 5) У облученных отцов были выявлены достоверные различия по частоте аберрантных геномов при сравнении с необлученными матерями в 1-ом митозе после однократного облучения в дозе 20 сГр, а во 2-ом митозе после фракционного облучения в дозах 20 сГр и 30 сГр

Результаты данного эксперимента показали также, что после фракционного и однократного облучения частоты аберраций хромосом возрастают в 1-ом и во 2-ом митозах в диапазоне доз 10-30 сГр в зависимости от исходных индивидуальных частот аберрантных геномов как у детей, так и у родителей Кривые доза-эффект частот аберрантных геномов детей с высокой исходной частотой аберрантных геномов (3,0-4,0%) и облученных отцов сходны в 1-ом и 2-ом митозе Тогда как у детей с низкой исходной частотой аберрантных геномов (1,5-2,0%) кривая доза-эффект средних частот аберрантных геномов носит промежуточный характер по сравнению с кривыми для детей контрольной группы и необлученных матерями (Рис 6)

ОБСУЖДЕНИЕ

Дисгеномные эффекты у облученных отцов-ликвидаторов и их детей, выявленные по тесту хромосомных аберраций, указывают на радиационно-индуцированную геномную нестабильность в их организме Следует подчеркнуть, что эти дети не подвергались непосредственно действию радиации С чем это может быть связано7

Механизмы этого явления изучены недостаточно Тем не менее, можно полагать, что в процессе сперматогенеза стволовые сперматогонии с радиационно-индуцированными потенциальными повреждениями ДНК либо с аберрациями хромосом претерпевают размножение, рост, созревание, формирование в зрелые сперматозоиды и затем участвуют в оплодотворении. При этом нестабильный отцовский геном, будучи в зиготе, участвует также в различных периодах эмбриогенеза (гистогенезе, органогенезе, системогенезе) (Баранов В С , Кузнецова Т В , 2007) Вероятно, это и приводит к разным

Рис. 5. Частоты аберрантных геномов детей и родителей после фракционного и однократного у-облучения крови in vitro.

я 5

о 4 н

О 11 03 °

2 -о -

Аберрантные геномы детей (1 митоз)

■ I II II

10

20 30

Доза (сГр)

10+10 10+10+10

□ дети контрольной группы ■ дети-потомки облученных родителей

6 -

5 4

Аберрантные геномы детей (2 митоз)

I ll I I I

10

20 30

Доза (сГр)

10+10 10+10+10

] дети контрольной группы I дети-потомки облученных родителей

10+10+10

10+10+10

0 10 20 30 10+10

Доза (сГр)

В необлученные матери 0 облученные отцы

0 10 20 30 10+10

Доза (сГр)

11 необлученные матери И облученные отцы

Аберрантные геномы родителей (2 митоз)

Аберрантные геномы родителей (1 митоз)

* * достоверные различия с контролем ( р<0,05)

Рис. 6. Кривые доза-эффект индивидуальных частот аберрантных геномов в 1-ом и 2-ом митозах после "/-облучения т vitro лимфоцитов детей и родителей в соответствии с исходными уровнями аберрантных геномов.

Однократное облучение

Аберрантные геномы

z. 5

га 4 t-о

§ 3

zr

2

лО

А- А ..

ш

.с ' АА 'к -

""О*

Фракционное облучение

Аберрантные геномы

Доза (оГр)

Доза (сГр)

Однократное облучение

Аберрантные геномы

Фракционное облучение

Аберрантные геномы

Доза (сГр)

Доза (сГр)

1 - дети контрольной группы

2 - дети с низкой исходной частотой аберрантных геномов (1,5-2,0%)

3 - дети с высокой исходной частотой аберрантных геномов (3,0-4,0%)

4 - облученные отцы

5 - необлученные матери

проявлениям радиационно-индуцированной в малых дозах трансгенерационой (гаметической) геномной нестабильности в соматических клетках организма их детей Этот феномен был выявлен на других популяциях детей-ликвидаторов (Пшшская М А. и др, 2005; Weinberg HSh et al, 2001; Степанова ЕИ и др , 2006)

Дисгеномные эффекты, выявленные у детей, проживающих на радиоактивно-загрязненных территориях, облученных внутриутробно и постнатально в результате длительного действия ионизирующего излучения в малых дозах указывают на радиационно-индуцированную нестабильность генома в их организме Отцы и матери этих детей максимально облучились во время и в первые годы после аварии на ЧАЭС, на ранних этапах своего онтогенетического развития, когда происходит рост и развитие различных органов и систем организма и особенно генеративной системы Поэтому радиационно-индуцированная геномная нестабильность в организме указанных детей обусловлена не только хроническим воздействием долгоживущих изотопов 137Cs, 90Sr и др внутриутробно и постнатально, но имеет и трансгенерационный характер

Феномен геномной нестабильности был показан также при исследовании последовательных клеточных делений у детей-жителей Брянской области, Украины (Кузьмина Н С 2003, Пшшская М А и др , 2005) Посемейный анализ жителей других районов, загрязненных радионуклидами, также выявил у их потомков (Fl, F2) различные дисгеномные нарушения (Сусков ИИ и др, 1997, 2001, Dubrova YE et al, 1996, TanakaК et al., 2000)

Возможности радиационно-индуцированной передачи геномной нестабильности в организме детей двух когорт подтверждается выявленной положительной корреляцией по различным нестабильным группам аберрантных хромосом у детей и их облученных отцов-ликвидаторов (в основном групп А, Е, F) и у детей и их облученных отцов и матерей - жителей загрязненных радионуклидами территорий (в основном групп А, В, С, D, Е)

Известно, что действие ионизирующего излучения в малых дозах характеризуется принципом беспороговости доз, принципом биологического усиления индуцированных геномных нарушений, повышенной чувствительностью к эндогенным/экзогенным факторам (Ли ДЕ,1963; Тимофеев-Ресовский НВ и др, 1968, Бурлакова ЕБ. 1999) Отсутствие возрастных различий по средним частотам аберраций хромосом у детей отцов-ликвидаторов и детей, проживающих на загрязненных радионуклидами территориях, рожденных спустя 1-16 лет после аварии на ЧАЭС, подтверждает сложный характер низкоинтенсивного воздействия ионизирующего излучения в малых дозах на организм, как родителей, так и их детей Это подтверждается также отсутствием зависимости частот аберрантных геномов от уровня загрязнения почвы (дозы) у детей, проживающих на загрязненных радионуклидами территориях

Моделирование геномной нестабильности после однократных и фракционных облучений в малых дозах образцов крови in vitro детей показало повышенные уровни индуцированных хромосомных аберраций, выявленные в 1-

ом и во 2-ом митозах у детей-потомков облученных родителей Это подтверждает феномен геномной нестабильности и его трансгенерационного эффекта в организме детей исследованных когорт Аналогичные результаты были получены у детей облученных родителей после тестирующих облучений образцов крови в средней дозе (Воробцова И Е , 2006)

Дифференциальный характер возрастания уровней аберраций хромосом детей и родителей после воздействия в малых дозах т vitro в зависимости от их исходных индивидуальных частот аберрантных геномов по-видимому свидетельствует о генотипических особенностях геномной нестабильности и трансгенерационного феномена в их организме Это может быть связанно с индивидуальной радиочувствительностью и активацией репарационных систем

Таким образом, полученные результаты позволили выявить феномен радиационно-индуцированной в малых дозах трансгенерационной передачи геномной нестабильности у детей, рожденных от облученных отцов-ликвидаторов и необлученных матерей, и у детей, рожденных от облученных отцов и матерей - жителей загрязненных радионуклидами территорий, в результате аварии на ЧАЭС Этот феномен может быть основой повышенной заболеваемости у этих детей и требует дальнейшего изучения

ВЫВОДЫ

1. У детей ликвидаторов аварии на ЧАЭС и их облученных отцов частоты аберрантных геномов достоверно превышали контрольный уровень (р<0,05 и р<0,001, соответственно) с преобладанием аберраций хромосомного типа

2. У детей, отцов и матерей - жителей загрязненных радионуклидами территорий частоты аберрантных геномов достоверно превышали контрольный уровень (р<0,05, р<0,01, р<0,01, соответственно) с преобладанием аберраций хромосомного типа У детей не выявлено зависимости частот аберрантных геномов от уровня загрязнения почвы радионуклидами

3. У детей ликвидаторов аварии на ЧАЭС и у детей жителей загрязненных радионуклидами территорий разных годов рождения (1987-2002 гг) не выявлено возрастной зависимости по частотам аберрантных геномов и аберрациям хромосомного типа

4. При анализе аберрантных хромосом по группам в семьях ликвидаторов аварии на ЧАЭС и в семьях жителей загрязненных радионуклидами территорий, наблюдается прямая корреляция частот пораженных хромосом определенных групп у детей и их облученных родителей

5. В лимфоцитах детей, рожденных от одного или обоих облученных родителей, выявлены достоверно повышенные частоты аберрантных геномов в 1-ом и 2-ом митозах в интактных лимфоцитах и после фракционного и однократного "/-облучения 137Cs in vitro по сравнению с аналогичными частотами детей необлученных родителей

6. После фракционного и однократного у-облучения 137Cs in vitro крови в диапазоне доз 10-30сГр наблюдается сходный характер повышения средних

частот аберраций хромосом в 1-ом и 2-ом митозах, в зависимости от исходных индивидуальных уровней аберрантных геномов детей и родителей

7, В целом, представленные выше цитогенетические данные у детей-потомков облученных в малых дозах родителей (детей отцов-ликвидаторов и детей-жителей загрязненных территорий) в интактных лимфоцитах и после тестирующих облучений крови т vitro свидетельствуют о реальности трансгенерационного феномена радиационно-индуцированной геномной нестабильности в их организме

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1 Сусков И И., Кузьмина Н С, Иофа Э JI, Нилова И Н, Агаджанян А В , Рубцова Г А, Шевченко В А, и др «Дисгеномные эффекты у детей, проживающих на территориях, загрязненных радионуклидами» Межд конф «Генетические последствия чрезвычайных радиационных ситуаций», РФ, Москва, 10-13 июля 2002 г, изд РУДН, с 117

2 Aghajanyan А V, Suskov 11., Shevchenko V.A «Modeling of genome instability by the method of biological dose accumulation upon fractionated у -irradiation of lymphocytes of children and their parents.» The II Intern Conf "Modern problems of genetics, radiobiology, radioecology and evolution " Abst of the conf Armenia, Yerevan, September 8-11, 2005, Dubna JINR, p 105

3 Suskov 11, Aghajanyan A V, Kuzmma N S , lofa E L, Nilova IN , Tskhovrebova L V, Baleva L S, Sipyagina A E «The problem of transgeneration genome instability in children born from fathers-liquidators and unirradiated mothers » The II Intern Conf "Modern problems of genetics, radiobiology, radioecology and evolution" Abst of the conf Armenia, Yerevan, September 8-11, 2005, Dubna JINR, p 149

4 Сусков И И, Агаджанян А В , Кузьмина Н С , Иофа Э JI, Нилова И Н, Цховребова JIВ, Балева JI С. , Сипягина А Е, Бондаренко Н А «Цитогенетические исследования детей разных возрастных групп, проживающих на территориях с радионуклидными загрязнениями» ( «Cytogenetic examination of children of different age groups living on territories with radionuclide contamination») Тез П1 Международной конференции « Генетические последствия чрезвычайных радиационных ситуаций» РФ, Дубна, 4-7 октября, 2005, -М Изд-во РУДН, с 110-111

5 А В Агаджанян, ИИ Сусков «Экспериментальное изучение геномной нестабильности в лимфоцитах детей-жителей территорий с радиоактивными загрязнениями и детей- облученных отцов-ликвидаторов аварии на ЧАЭС» («An experimental study of genome instability in lymphocytes of children living on territories with radioactive contaminations and children born from irradiated fathers-Chernobyl clean-up workers» ) Тез Международной науч конференц «Современные проблемы генетики » Белоруссия, Минск, 17-18 ноября 2005, Минск Изд-во Центр сист анализа и стратегич исследов НАН Белоруссии, с 295

6 ИИ Сусков, А В Агаджанян, Н С Кузьмина, Т В Елисова, Э Л Иофа, И Н Нилова, Э А Акаева, Г И Кузнецова, А В Рубанович, Л В Цховребова, Л С Балева, А Е Сипягина «Проблема трансгенерационного феномена геномной нестабильности у больных детей разных возрастных групп после аварии на ЧАЭС » Радиац биол Радиоэкология, 2006, т 46, № 4, с 466-474

7 Сусков И И, Агаджанян А В , Кузьмина Н С , Цховребова Л В , Балева Л С, Сипягина А Е «Проблема трансгенерационного феномена геномной нестабильности у частоболеющих детей, рожденных от облученных отцов-ликвидаторов аварии на ЧАЭС» Тез V Съезда по радиационным исследованиям РФ Москва 10-14 апреля 2006 года, т 1, с 73

8 Агаджанян А В , Сусков И И «Моделирование геномной нестабильности методом фракционного у- облучения в малых дозах лимфоцитов детей двух когорт и их родителей» Тез V Съезда по радиационным исследованиям РФ Москва 10-14 апреля 2006 года, т 1, с 82

9 Сусков И И., Агаджанян А В , Кузьмина Н С , Елисова Т В , Иофа Э Л , Нилова И Н Костина Л Н, Кузнецова Г И, Акаева Э А , Рубанович А В , Балева Л С, Сипягина А Е «Прблема нестабильных геномов в организме больных детей, рожденных и проживающих в условиях хронического действия радиации в малых дозах» ТезV Съезда по радиационным исследованиям РФ Москва 10-14 апреля 2006 года, т 1, с 94

10 А V Aghajanyan, 11 Suskov «The study of genome instability after in vitro fractionated y-irradiation of blood lymphocytes of children living on the territories with radioactive contamination and children born from irradiated fathers-Chernobyl clean-up workers » Abst of the 35th Meeting of the EER-2006 Ukraine, Kiev, 22-24 august 2006, p 37

11 11 Suskov, A V Aghajanyan, L S Baleva, A E Sipyagina «Aberrant chromosomes and increased morbidity in children of fathers-liquidators of the accident at CNPP » Abst of the 35th Meeting of the EER-2006 Ukraine, Kiev, 22-24 august 2006, p 27

12 А Агаджанян, И Сусков «Моделирование геномной нестабильности методом накопления биологической дозы после фракционного у-облучения лимфоцитов периферической крови детей, постоянно проживающих на территориях с радионуклидными загрязнениями и детей, рожденных от отцов-ликвидаторов аварии на ЧАЭС» В сборнике «Современные проблемы генетики, радиобиологии, радиоэкологии и эволюции Труды второй международной конференции, посвященной 105-летию со дня рождения Н В.Тимофеева Ресовского" Под общ ред В Л Корогодиной, А А Чиньи, М Дуранте, Дубна Изд-во ОИАИ, 2007 -Т1 С 220-232

Агаджанян Анна Владимировна

ИЗУЧЕНИЕ ТРАНСГЕНЕРАЦИОННОГО ФЕНОМЕНА ГЕНОМНОЙ НЕСТАБИЛЬНОСТИ У ДЕТЕЙ - ПОТОМКОВ ОБЛУЧЕННЫХ РОДИТЕЛЕЙ В РЕЗУЛЬТАТЕ АВАРИИ НА ЧАЭС

У первого поколения детей (F1), рожденных после аварии на ЧАЭС детей облученных отцов-ликвидаторов и необлученных матерей, проживающих на территориях не загрязненных радионуклидами, и детей облученных отцов и матерей-жителей загрязненных радионуклидами территорий (135-688 кБк/м2 по 137Cs), наблюдаются повышенные уровни аберрантных геномов и аберраций хромосом, как и у их родителей У обследованных детей (1987-2002 гр) не выявлено возрастной зависимости по частотам аберрантных геномов и аберрациям хромосомного типа. У детей-жителей загрязненных радионуклидами территорий не выявлено зависимости по уровню загрязнения почвы В 26 семьях ликвидаторов аварии на ЧАЭС и 15 семьях - жителей загрязненных радионуклидами территорий наблюдается прямая корреляция по частотам пораженных хромосом различных групп (в основном А, В, D, Е) у детей и их облученных родителей После фракционного и однократного у-облучеиия 137Cs in vitro крови в диапазоне доз 10-30сГр у детей, рожденных от одного или обоих облученных родителей, выявлена повышенная радиочувствительность геномов лимфоцитов в 1 и 2 митозах по сравнению с детьми, необлученных родителей Наблюдается схожий характер повышения частот аберраций хромосом в зависимости от исходных индивидуальных уровней аберрантных геномов детей и родителей Результаты свидетельствуют о реальности радиационно-индуцированной геномной нестабильности в организме облученных в малых дозах родителей и ее трасгенерационного феномена в соматических клетках их детей, что указывает на необходимость проведения регулярного медико-генетического консультирования этих семей и прогноза здоровья у их будущего потомства

Aghajanyan Anna Vladimirovna

THE STUDY OF THE TRANSGENERATIONAL PHENOMENON OF GENOMIC INSTABILITY IN CHILDREN OF PARENTS IRRADIATED AS A RESULT OF THE ChNPP ACCIDENT

The first generation of children (Fl) born after the ChNPP accident was examined children of irradiated fathers (liquidators) and unirradiated mothers living on uncontaminated terntones and children of irradiated fathers and mothers from radiomiclide-contaminated areas (135-688 kBq/m2, 137Cs) Elevated levels of aberrant genomes and chromosome aberrations were also revealed in the children like in their parents No dependence between age and the frequencies of aberrant genomes and aberrations of the chromosomal type was established in the examined children (born m 19872002) The children living on radionuchde-contaminated terntones showed no dependence on the level of soil contamination In 26 families of liquidators of the Chernobyl accident and in 15 families of residents of radionuchde-contaminated areas there is a direct correlation by the frequencies of aberrant chromosomes of different groups (mainly А, В, D, E) in children and their irradiated parents After fractionated and single in vitro exposure to n7Cs doses in the range between 10 and 30 cGy an increased radiosensitivity of lymphocyte genomes m mitoses 1 and 2 was revealed in children born from irradiated (one or both) parents as compared to children of unirradiated parents In children and their parents the increase in the frequencies of chromosome aberrations depending on the initial individual levels of aberrant genomes is similar m character The results obtained confirm the reality of existence of radiation-induced genomic instability in the organisms of parents exposed to low-dose radiation and its transgenerational phenomenon in somatic cells of their children This necessitates regular medico-genetical consultations of the examined families and health prognosis for their future offspnngs

Подписано в печать 21 04 2008 г Печать трафаретная

Заказ № 300 Тираж ЮОзкз

Типография «11-й ФОРМАТ» ИНН 7726330900 115230, Москва, Варшавское ш , 36 (495)975-78-56, (499)788-78-56 www autoreferat ш

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Агаджанян, Анна Владимировна

Страницы

ВВЕДЕНИЕ.

I ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1. Цитогенетические эффекты в соматических клетках детей и взрослых в результате аварии на ЧАЭС.

1.1. Цитогенетические эффекты у детей-потомков - облученных родителей !.

1.2. Цитогенетические эффекты у ликвидаторов аварии на ЧАЭС и у жителей загрязненных радионуклидами территорий.

2. Трансгенерационный феномен геномной нестабильности.

2.1. Феномен радиационно-индуцируемой, геномной нестабильности.

2.2. Трасгенерационный феномен радиационно-индуцируемой геномной нестабильности в эксперименте. а) Трасгенерационный феномен геномной нестабильности в эксперименте по тесту хромосомных аберраций.30б) Трасгенерационные эффекты в экспериментах по мутациям в минии микросателитных локусах.

2.3.Трансгенерационный феномен геномной нестабильности у людей. а) Изучение трансгенерационного феномена геномной нестабильности по тесту хромосомных аберраций в соматических клетках детей. б) Изучение трансгенерационных эффектов в соматических клетках детей по мутациям в мини- и микросателитных локусах.

II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

1. Характеристика детей двух когорт и их родителей.

2. Культивирование лимфоцитов и приготовление препаратов метафазных хромосом.

3. Методика анализа хромосомных аберраций.

4. Моделирование геномной нестабильности методом фракционного у- облучения периферической крови in vitro детей и родителей с последующим анализом в 2-х клеточных генерациях.

5. Статистическая обработка результатов.

III. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

1.ЦИТОГЕНЕТИЧЕСКИЕ ЭФФЕКТЫ В ЛИМФОЦИТАХ КРОВИ ДЕТЕЙ И РОДИТЕЛЕЙ.

1 .Г.Цитогенетиче'ские эффекты в лимфоцитах крови детей и родителей контрольной группы.

1.1.1. Спектр и частота аберрагщй хромосом в геномах детей.

1.1.2. Спектр и частота аберраций хромосом в геномах родителей.

1.1.3. Аберрантные хромосомы детей и родителей контрольной группы.

1.2. Цитогенетические эффекты в лимфоцитах крови детей отцов-ликвидаторов аварии на ЧАЭС и необлученных матерей и их родителей.

1.2.1. Спектр и частота аберраций хромосом в геномах детей.

1.2.2. Спектр и частота аберраций хромосом в геномах отцов-ликвидаторов и необлученных матерей.

1.2.3. Аберрантные хромосомы в семьях ликвидаторов аварии на ЧАЭС.

1.3.Цитогенетические эффекты в лимфоцитах крови детей облученных отцов и матерей - жителей территорий, загрязненных радионуклидами и их родителей.

1.3.1. Спектр и частота аберраций хромосом в геномах детей.

1.3.2. Спектр и частота аберраций хромосом в геномах облученных отцов и матерей.

1.3.3. Аберрантные хромосомы в семьях жителей загрязненных территорий

2. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ МОДЕЛИРОВАНИЕ ГЕНОМНОЙ НЕСТАБИЛЬНОСТИ МЕТОДОМ ФРАКЦИОННОГО у-ОБЛУЧЕНИЯ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ IN VITRO ДЕТЕЙ И ИХ РОДИТЕЛЕЙ.

2.1. Спектр и частота аберраций хромосом в геномах интактных и облученных in vitro лимфоцитов при анализе в 1 и 2 митозах у детей контрольной группы

2.2. Спектр и частота аберраций хромосом в геномах интактных и облученных in vitro лимфоцитов при анализе в 1 и 2 митозах у детей — потомков облученных родителей.

2.3. Спектр и частота аберраций хромосом в геномах интактных и облученных in vitro лимфоцитов при анализе в 1 и 2 митозах у родителей. а) облученные отцы. б) "необлученные матери"- взрослый контроль.

2.4. Спектр и частота аберраций хромосом в зависимости от исходных индивидуальных частот аберрантных геномов.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Изучение трансгенерационного феномена геномной нестабильности у детей-потомков облученных родителей в результате аварии на ЧАЭС"

Актуальность темы

После аварии на ЧАЭС в 1986 году в окружающую среду выпали радионуклиды I31I, 137Cs, 90Sr и др. В результате этого воздействию ионизирующего излучения подверглись жители различных территорий Европейского континента, ликвидаторы аварии. Их обследование в первые и последующие годы показало, что в соматических клетках их организма » наблюдаются достоверно повышенные средние уровни аберрантных геномов с радиационно-индуцированными аберрациями хромосом (Sevan'kaev A.V., at al., 1995; Шевченко В.А. и др. 1995, 2006; Мазник М.А. 2004, 2005).

В результате аварии на ЧАЭС у первого поколения детей (F1) облученных родителей двух основных когорт (дети отцов-ликвидаторов аварии, проживающих на территориях не загрязненных радионуклидами, и дети отцов и матерей - жителей загрязненных радионуклидами территорий, облученные внутриутробно и постнатально вследствие хронического действия малых доз) также наблюдаются аналогичные радиационно-индуцированные дисгеномные эффекты, как и у их родителей, независимо от времени их обследования (Степанова Е.И. 1996, 2002; Бездробная Л.К.и др. 2002; Пилинская М.А. 2002; Севанькаев А.В. 1995, 2005).

Подобные эффекты отмечены и в нескольких поколениях (Fl, F2, F3) потомков людей - жителей других загрязненных радионуклидами территорий (Алтайского края, Челябинской, Семипалатинской областей) (Шевченко В.А. и др., 1995; Севанькаев А.В. и др, 1995; Возилова А.В и др., 1998).

Эта радиационно-индуцированные нарушения геномов соматических клеток, как правило, сопровождается ростом заболеваемости, хронизацией болезней, частыми случаями рождения детей с врожденными пороками развития, онкопатологией (Балева J1.C. 2006; Сипягина А.Е. 2005; Иванов В.К., Цыб А.Ф., 2003; Devis S. et al., 2004).

В последнее время повышенные уровни хромосомных аберраций в организме людей связывают не только с последствием прямого действия радиации, но и с феноменом радиационно-индуцированной геномной нестабильности. Этот феномен был обнаружен в конце XX века в экспериментальных исследованиях (на клональных культурах клеток, в организме животных) в виде хромосомных аберраций, генных мутаций и др. возникших de novo в отдаленных, митотически поделившихся клетках (Kadhim М.А. et al., 1992, 1995, 2000; Holmberg К. et al., 1993; Пелевина И.И. и др., 1996, 1998; Lambert В. et al., 1998; Wright E.G. 1998, 2000, 2006). Позже этот феномен был выявлен и в организме людей (Salassidis К. et al., 1995; Salomaa S. et al., 1998; Сусков И.И. и др., 2001; Кузьмина Н.С., 2003; Шлшска М.А. и др., 2005).

В основе природы этого явления могут быть ранее описанные первичные, потенциальные повреждения ДНК, реализирующиеся в последующих клеточных делениях (Дубинин Н.П., 1978).

Транссмисибельная спонтанная и радиационно-индуцированная геномная нестабильность клеток одного и обоих облученных родителей, проходя множественные редупликации, может передаваться трансгенерационно (гаметически) и проявляться в соматических клетках их потомков. Изучение' действия радиации на клетки зародышевой линии у животных показало, что, несмотря на повышенную радиочувствительность их генома и элиминацию части из них, другая часть этих клеток с нестабильным геномом может участвовать в оплодотворении (vanBuul P.W. and Zwetsloot C.P., 1980; Kamiguchi Y. and Mikamo K., 1982; Jaquet P. at al., 2005).

Трасгенерационный феномен геномной нестабильности был показан в экспериментах на животных с использованием облучения в средних и больших дозах (Воробцова И.Е., 1987; Luke G.A. et al., 1997; Streffer С., 2006). У людей этот феномен был выявлен во втором и в третьем поколении в разных популяциях жителей, проживающих на загрязненных радионуклидами территориях (Шевченко В.А. и др., 1995; Сусков И.И. и др.,

1997, 2001 (а,б)), в первом поколении детей ликвидаторов аварии на ЧАЭС (Пилинская М.А. и др.; 2004; Степанова Е.И. и др., 2006). Также в соматических клетках детей-потомков облученных родителей показана повышенная радиочувствительность (Воробцова И.Е. и др., 1992, 2006; Воробьева М.А., 1995).

Однако сведения о трасгенерационном феномене радиационно-индуцированной малыми дозами геномной нестабильности немногочисленны и требуют дальнейшего изучения, так как известно, что здоровье человека связанно со стабильностью и нормальным функционированием генома клеток в организме.

Исходя из того, что действие ионизирующего излучения в малых дозах характеризуется принципом безпороговости доз, принципом биологического усиления индуцированных геномных нарушений, повышенной чувствительностью к эндогенным/экзогенным факторам (Тимофеев-Ресовский Н.В. и др., 1968; Бурлакова Е.Б. 1999) особенно важно экспериментальное изучение геномной нестабильности и подтверждения его -трансгенерационного феномена у детей, потомков родителей, облученных в малых дозах.

Цели и задачи исследования

Цель данной работы заключалась в изучении трансгенерационного феномена геномной нестабильности в организме детей - первого поколения потомков облученных родителей, двух когорт: детей отцов-ликвидаторов и детей-жителей загрязненных радионуклидами территорий в результате аварии на ЧАЭС.

В связи с этим были поставлены следующие задачи:

1. Изучить спектр и частоту аберраций хромосом в лимфоцитах крови у детей, рожденных от облученных отцов-ликвидаторов и необлученных матерей, проживающих на территориях, не загрязненных радионуклидами и у детей, рожденных от облученных во время аварии на ЧАЭС отцов и матерей, постоянно проживающих на загрязненных радионуклидами территориях и их родителей

2. Сравнительно изучить группы аберрантных хромосом в лимфоцитах у детей и их родителей в семьях ликвидаторов аварии на ЧАЭС и жителей территорий, загрязненных радионуклидами.

3. Изучить геномную нестабильность в лимфоцитах детей и их родителей в модельных экспериментах по накоплению поглощенной

1 37 радиации методом фракционного у-облучения Cs крови in vitro.

Научная новизна результатов

Впервые выявлен трансгенерационный феномен геномной нестабильности в лимфоцитах крови при сравнительном изучении цитогенетических нарушений у детей двух когорт - потомков облученных родителей (детей ликвидаторов и детей жителей загрязненных территорий в результате аварии на ЧАЭС) разных возрастных групп и их родителей.

Показано, что, несмотря на разные годы рождения детей обеих когорт (от 1987 до 2002 гг.) не выявлено возрастной зависимости по средним частотам аберрантных геномов, аберраций хромосомного типа.

У детей-жителей загрязненных территорий не выявлено дозовой зависимости от уровня загрязнения территорий радионуклидами.

У их облученных родителей (отцов-ликвидаторов, отцов и матерей -жителей загрязненных территорий) выявлены повышенные уровни аберрантных геномов, аберраций хромосомного типа по сравнению с контролем.

Впервые проведено изучение частоты аберрантных хромосом по группам в семьях ликвидаторов аварии на ЧАЭС и в семьях - жителей загрязненных радионуклидами территорий. В семьях двух основных когорт нет достоверных различий между собой по средним частотам пораженных хромосом различных групп ни у мальчиков и девочек, ни у детей и родителей. Выявлены значимые различия по средним частотам отдельных групп аберрантных хромосом (в основном групп А, В, С, D ) у детей и у их облученных родителей по сравнению контролем. Наблюдается значимая корреляция между средними частотами пораженных хромосом отдельных групп у отцов-ликвидаторов и их детей и у облученных отцов и матерей-жителей загрязненных территорий и их детей.

Впервые экспериментально проведено изучение спектра и частоты аберраций хромосом в 1 и 2 митозах при моделировании геномной нестабильности методом накопления поглощенной дозы после фракционного у-облучения 137 Cs in vitro в дозах 10+10сГр и 10+10+10сГр лимфоцитов периферической крови детей и их родителей. Выявлено: а) что у детей двух когорт, рожденных от облученных родителей, выявлены достоверно повышенные средние частоты аберрантных геномов по, сравнению с детьми необлученных родителей; б) возрастание уровня аберраций хромосом в 1 и 2 митозах зависит от исходных индивидуальных частот аберрантных геномов как у детей, так и у родителей и носит схожий характер после однократного и фракционного облучения в диапазоне доз 10-30сГр; в) у всех обследованных во 2 клеточном поколении наблюдается увеличение частоты аберрантных геномов по сравнению с 1, с преобладанием одноразрывных аберраций хромосомного типа, что может указывать на реальность геномной нестабильности в последующих клеточных поколениях.

Практическая значимость работы

Полученные результаты имеют важное научное значение, т.к. подтверждают имеющиеся до сих пор представления о действии ионизирующего излучения в малых дозах на предзиготической и постнататальных стадиях развития, что может быть основой повышенной заболеваемости для детей.

В практическом отношении полученные результаты важны: а) для проведения медико - генетического консультирования семей, подвергшихся воздействию малых доз радиации, и прогноза здоровья у их будущего потомства б) при экспертизе связи заболевания с облучением. и

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение Диссертация по теме "Генетика", Агаджанян, Анна Владимировна

ВЫВОДЫ

1. У детей ликвидаторов аварии на ЧАЭС и их облученных отцов средние частоты аберрантных геномов достоверно превышали контрольный уровень (р<0,05 и р<0,001, соответственно) с преобладанием аберраций хромосомного типа.

2. У детей, отцов и матерей - жителей территорий, загрязненных радионуклидами средние частоты аберрантных геномов достоверно превышали контрольный уровень (р<0,05, р<0,01, р<0,01„ соответственно) с преобладанием аберраций хромосомного типа. У детей не выявлено зависимости от уровня загрязнения почвы.

3. У детей ликвидаторов аварии на ЧАЭС и у детей жителей загрязненных радионуклидами территорий разных годов рождения (19872002 гг.) не выявлено возрастной зависимости по средним частотам аберрантных геномов, аберраций хромосомного типа.

4. При семейном анализе аберрантных хромосом по группам в семьях ликвидаторов аварии на ЧАЭС и в семьях - жителей загрязненных радионуклидами территорий наблюдается прямая корреляция по частотам пораженных хромосом различных групп детей и их облученных родителей.

5. В лимфоцитах детей, рожденных от одного или обоих облученных родителей, выявлены достоверно повышенные средние частоты аберрантных геномов в 1 и 2 митозах в интактных лимфоцитах и после фракционного и однократного у-облучения 137Cs in vitro по сравнению с детьми, необлученных родителей.

6. После фракционного и однократного у-облучения l37Cs in vitro крови в диапазоне доз 10-30сГр наблюдается схожий характер повышения средних частот аберраций хромосом в 1 и 2 митозах, в зависимости от исходных индивидуальных уровней аберрантных геномов детей и родителей.

7. В целом, выше представленные цитогенетические данные у детей-потомков облученных в малых дозах родителей (детей ликвидаторов и у детей-жителей и загрязненных территорий) в интактных лимфоцитах и после тестирующих облучений крови in vitro свидетельствуют о реальности трасгенерационного феномена радиационно-индуцированной геномной нестабильности в их организме.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Агаджанян, Анна Владимировна, Москва

1. Баннецкая Н.В., Амвросьев^ А.П., Павленко B.C. Динамика фолликулогенеза в яичнике потомства от облученных в эмбриогенезе и ранней постнатальной жизни животных. Радиац. биол. Радиоэкология. 2000. Т.40. Вып.З. С.250-253.

2. БарановВ.С. Генетические основы предрасположенности к- некоторым частым мультифакториальным заболеваниям. Медицинская Генетика. Т.З. №3. 2004, с. 102-112.

3. БарановВ.С., Кузнецова Т.В. Цитогенетика эмбрионального развития человека: научно-практические аспекты. СПб: Издательство Н-Л., 2007. 640с.

4. Бочков Н.П., Козлов В.М., Пилосов P.A., Севанькаев A.B. Спонтанный уровень хромосомных аберраций в культуре лейкоцитов человека. Генетика, IV, №6, 1968, с.93-98.

5. Бочков Н.П., Пилосов P.A. Влияние гамма-облучения на хромосомы человека. Сообщение II. Зависимость частоты хромосомных аберраций от пола и возраста. Генетика. 1968. IV, 11, С. 144-150.

6. Бочков Н.П., Чеботарев А.Н. Наследственность человека и мутагены внешней среды. М.: Медицина, 1989,272с.

7. Братанов Бр. и др. // Клиническая педиатрия. София. Изд-во Медицина и физкультура, 1987, т.1, с.41-48.

8. Бурлакова Е.Б., Голощапов А.Н., Жижина Г.П., Конрадов A.A. Новые аспекты закономерностей действия низкоинтенсивного облучения в малых дозах. Радиац. биол. Радиоэкология. 1999, Т.39 №1, с.26-34.

9. Х5.Бурлакова Е.Б., Михайлов В.Ф., Мазурик В.К. Система окислительно-востановительного гомеостаза при радиационно-индуцируемой нестабильности генома. Радиац. биол. Радиоэкология. 2001. Т.41. № 5. С. 489-499.

10. Бычковская И.Б., Гальяно Н.Я., Федорцева Р.Ф., Бедчер Ф.С. Об особой форме радиоиндуцированной нестабильности генома. Радиац. биол. Радиоэкология, 2005. Т.45, № 6, с.688-693.

11. Виленчик М.М. Нестабильность ДНК и отдаленные последствия воздействия излучений. М. Энергоатомиздат. 1984.192с.

12. Возилова A.B., Аклеев A.B., Бочков Н.П., Катосова Л.Д. Отдаленные цитогенетические эффекты хронического облучения населения Южного Урала. Радиац. биол. Радиоэкология. 1998, Т. 38, Вып. 4, С. 586-.

13. Верещако Г.Г., Ходосовская A.M., Конопля Е.Ф. Влияние внутриутробного облучения на морфофункциональное состояние семенников у потомства крыс. Радиац. биол. Радиоэкология. 1998. Т.38. Вып.4.С.483-487.

14. Воробцова И.Е. Мутабильность клеток печени потомства облученных самцов крыс. Радиобиология. 1987, Т.27, №3с.377-381.

15. Воробцова И. Е. Влияние облучения родителей на физиологическую полноценность и риск канцерогенеза у потомства первого поколения организмов разных видов: Автореферат дис. д-ра биол.наук. Л., ЦНИРРИ МЗ СССР, 1988. 43с.

16. Воробцова И.Е., Воробьева М.В. Радиочувствительность хромосом детей, родители которых подвергались противоопухлевой рентгенохимиотерапии. Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 12. 1992. С.655-657.

17. Воробцова И.Е., Богомазова А.Н. Стабильные хромосомные аберрации в лимфоцитах периферической крови лиц, пострадавших в результате аварии на ЧАЭС. Радиац. биол. Радиоэкология. 1995, Т.35. №5, С.636 -639.

18. Воробцова И.Е. Трансгенерационная передача радиационно индуцируемой геномной нестабильности. Радиац. биол. Радиоэкология. 2006, Т.46.№ 4, с.441-446.

19. Воробьева М.А. Исследование радиочувствительности хромосом детей облученных родителей. Автореферат дис. кн. биол.наук. Л., ЦНИРРИ МЗ РФ, 1995. 16с.

20. Гераськин С.А., Севанькаев А.В. Универсальный характер закономерностей индукции цитогенетических повреждений низкодозовым облучением и проблема оценки генетического риска. Радиац. биол. Радиоэкология. 1999. Т.39. № 1. С.35-40.

21. Глазко Т.Т., Гроздинский Д.М., Глазко В.И. Хроническое низкодозовое облучение и полифакторность адаптации. 2006. Радиац. биол.

22. Радиоэкология. Т.46 №4, С. 488-493.

23. Дубинин Н.П. Потенциальные изменения в ДНК и мутации. М. Наука. 1978.246 с.

24. Елисеева В.Г., Афанасьева Ю.И., Юрина H.A. Гистология. М.: Медицина , 1983, 592с.

25. Елисеева И.М. Цитогенетические эффекты, наблюдаемые у разных контингентов лиц, пострадавших от аварии на Чернобыльской АЭС. Автореферат дисер. к.б.н. М. ЙОГ им. Н.И. Вавилова АН СССР, 1991, 24с.

26. ЗЗ.Засухина Г.Д., Васильева И.М., Семячкина А.Н. Разобщенность процессов репарации гамма-повреждений ДНК и радиоадаптативного ответа в лимфоцитах пациентов с синдромом Блюма. Радиац. биол. Радиоэкология, 2000. Т.40, №5, с.513-515.

27. Захаров А.Ф., Бенюш В.А., Кулешов Н.П., Барановская Л.И. Хромосомы человека (Атлас) АМН СССР.-М.: Медицина, 1982, 264 с.

28. Иванов В.К., Цыб А.Ф. Медицинские и радиологические последствия Чернобыля для населения России: оценка радиационных рисков. М.: Медицина, 2000. 392 с.

29. Ижевский П.В., Аветисов Г.М., Курбатов A.B. Состояние репродуктивной функции в семьях персонала предприятия по производству ядерных расщепляющихся материалов. Мед. Радиология и радиац. безопастность. 1998.Т. 43.№2.С.23-27.

30. Козинова О.С., Аклеев A.B., Площанская О.Г., Дуброва Ю.Е. Анализ мутаций в минисателлитных локусах ДНК лиц из когорты реки Теча. Тез. V съезда по радиационным исследованиям. РФ. Москва. 10-14' апреля 2006. T.I. С. 86.

31. Косиченко Л.П.,. Алексян A.A. Цитогенетическое исследование клеток костного мозга детенышей первого поколения от облученных обезьян. Цитология. 1991.Т. 33, №7.с.

32. Кузьмина Н.С., Сусков И.И. Экспрессирование геномной нестабильности в лимфоцитах детей, проживающих в условиях длительного действия радиационного фактора. Радиац. биол. Радиоэкология, 2002, т.42, № 6, с.735-739.

33. Кузьмина Н.С. Изучение геномной нестабильности у детей, проживающих на территориях с радионуклидными загрязнениями. Автореферат дис. канд. мед. наук М. ЙОГ им. Н.И. Вавилова РАН РФ, 2003, с. 18.

34. Лакин Г.Ф. Биометрия: учебное пособие для биол. спец.вузов. Москва «Высшая школа» 1990.352с.

35. Ли Д.Е. Действие радиации на живые клетки. М.: Атомиздат, 1963. 287с.

36. Мазник H.A. Результаты цитогенетического обследования и биологической дозиметрии лиц, эвакуированных из 30-километровой зоны ЧАЭС. Радиац. биол. Радиоэкология, 2004, Т.44, № 5, с.566-573.

37. Мазник H.A., Винников В.А. Ретроспективная цитогенетическая дозиметрия по результатам классического хромосомного анализа у ликвидаторов последствий аварии на ЧАЭС. Радиац. биол. Радиоэкология, 2005, т.45, № 6, с.700-708.

38. Мазурик В.К., Михайлов В.Ф. Радиационно-индуцируемая нестабильность генома: феномен, молекулярные механизмы, патогенетическое значение. Радиац. биол. Радиоэкология, 2001, т.41, № 3, с.272-289.ч

39. Михайлов В.Ф., Мазурик В.К., Бурлакова Е.Б., Ушенкова Л.Н., Раева Н.Ф. Молекулярные проявления радиационно-индуцированнойнестабильности генома: возможность химической модификации. Радиационная биология. Радиоэкология, 2005, т.45, № 5, с. 561-570.

40. Нейфах Е.И., Алимбекова А.И., Сусков И.И. Биохимические механизмы радиогенных цитогенетических и соматических нарушений у детей-резидентов загрязненных радионуклидных регионов. Радиационная биология. Радиоэкология 2002,Т.42. №6.,618-626.

41. Нефедов И.Ю., Нефедова И.Ю., Палыга Г.Ф. Генетические последствия облучения одного и обоих родителей (результаты экспериментов на крысах линии Вистар). Радиац. биол. Радиоэкология. 2001. Т.41. №3. С.133-136.

42. Николаевич J1.H., Амвросьев А.П. Действие внешнего гамма-облучения на генетический аппарат соматических клеток зародышей крыс. Радиац. биол. Радиоэкология. 2004. Т.44. №2. С. 151-155.

43. Пелевина И.И., Готлиб В.Я., Кудряшова О.В., Антощина М.М., Серебряный A.M. Свойства потомков облученных клеток. Цитология. Т.40, №5, 1998, с.467-477.

44. Пилинская М.А., Шеметун A.M., Дыбский С.С. Результаты 14-летнего Цитогенетического мониторинга контингентов приоритетного наблюдения, пострадавших от действия факторов аварии на Чернобыльской АЭС. // Вест. РАМН, 2001, №10, с.80-84.

45. Пшшска М.А., Дибський С.С., Дибська О.Б., Педан JT.P. Виявлення хромосомно! нестабшьност1 у нащадк1 в батьк1в, опромшених внаслщок Чорнобильсько1 катастрофи. Цитология и генетика. 4.Т.39.2005.С.32-40.

46. Пузырев В.П., Степанов В.А. Патологическая анатомия генома человека. Новосибирск: Наука. Сибирское предприятие РАН, 1997. 224с.

47. Пяткин Е.К., Нугис В.Ю. Элиминация радиационно-индуцированных повреждений хромосом в культуре лимфоцитов периферической крови человека. II. Частота аберраций в первом и во втором митозе. Цитология. 1981. T.XXIII. № 11 .С. 1310-1316.

48. Семов А.Б. УФ-индуцированный внеплановый синтез ДНК в лимфоцитах периферической крови участников ликвидации последствий Чернобыльской аварии. Радиац. биол. Радиоэкология, 1995. Т.35, № 5, с.740-745.

49. Слозина Н.М., Неронова Е.Г. Хромосомные аномалии гамет человека и внутриутробный отбор. Исследование женских гамет. Цитология и генетика, 1992. Т. 26. №6, с58-63.

50. Спитковский Д.М., Вейко H.H., Моисеева O.e., Ермаков A.B., Терехов С.М. Структурные преобразования хроматина как процесс его самоорганизации в клетках эукариот и проблема репарации ДНК. Радиац. биол. Радиоэкология, 2005. Т.45, № 5, с.517-534.

51. Справочник по радиационной обстановке и дозам облучения в 1991г. вследствии аварии на Чернобыльской АЭС. Под ред. Балонова М.И. Институт радиационной гигиены ГКСЭН РФ. СПб. Ариадна-Аркадия. 1993. С.4-7.

52. Степанова И.Е., Ванюрихина Е.А., Кондрашова В.Г., Щеплягина JI.A. Клиническая и цитогенетическая характеристика детей, рожденных от отцов-участников ликвидации Чернобыльской аварии, перенесших острю лучевую болезнь. Педиатрия. 1996. №1.С.63-64.

53. Степанова Е.И., Мишарина Ж.А., Вдовенко В.Ю. Отдаленные цитогенетические эффекты у детей, облученных внутриутробно в результате аварии на Чернобыльской АЭС. Радиац. биол. Радиоэкология, 2002, т.42,№ 6, с. 700-703.

54. Сусков И.И., Кузьмина Н!С. Проблема индуцированной геномной нестабильности в детском организме в условиях длительного действия малых доз радиации. Радиац. биол. Радиоэкология. 2001, Т.41. № 5, с. 606614.

55. Сусков И.И., Кузьмина Н.С. Полигеномная реализация мутагенных эффектов в организме людей, подвергшихся воздействию радиации, в малых дозах. Радиац. биол. Радиоэкология. 2003, Т.43. № 2, с. 150-152.

56. Тельнов В.И. Оценка генетических последствий в популяции работников ПО «Маяк». Здоровье детей и радиация: Под ред. Балева JI.C., Царегородцева А.Д. Выпуск 2. Монографический сборник. Москва; 2006. С.123-129.

57. Тимофеев-Ресовский Н.В., Иванов В.И., Корогодин В.И. Применения принципа попадания в радиобиологии. М.: Атомиздат, 1968. с.3-228.

58. Урбах В.Ю. Биометрические,методы. М.Наука. 1964.415с.

59. Фоменко Л.А., Васильева Г.В., Безлепкин В.Г. В эритроцитах костного мозга самцов мышей, подвергнутых хроническому гамма-облучению в малых дозах повышена частота микроядер. Известия АН. Серия.биологическая, 2001, №4,с.419-423.

60. Хесин Р.Б. Непостоянство генома. М.: Наука, 1985.472с.

61. Шевченко В.А., Снигирева Г.П. Значимость цитогенетического обследования для оценки последствий Чернобыльской катастрофы. Радиац. биол. Радиоэкология, 2006, т.46, № 2, с. 133-139.

62. Шеметун О.В., Талан 0.0., ГПлшська М.А. Частота аберрацш хромосом: у дггей з хрошчним тереощитом, народжених до та теля аварп на ЧАЕС. Цитология и генетика. Г.Т.38. 2004. с. 15-20:

63. Хандогипа Е.К., Агейкин В.А., Зверева С.В., Марченко Л.Ф., Мутовин

64. Хейр А., Разин С.В., Васецкий E.G. Изменение организации хроматина в раннем развитии и при канцерогенезе. Онтогенез. 2002'. Т.ЗЗ, №2, с.85-89.

65. Ярмоненко С.П. Радиобиология человека и животных. М.: Высш. Шк., 1988. 424с.

66. Awa A. A. Chromosome damage in atomic bomb survivors and their offspring-Hirosima and Nogasaki. In book: Radiat-Inducen chromosome damage in man. New York. 1983, 439-453.

67. Baarends W.M., Van Der Laan R., Grootegoed J.A. DNK repair mechanisms and gametogenesis. Reproduction.2001.121(l).P: 31-39.

68. Barber R.C., Hickenbotham P., Hatch Т., Kelly ¡X, Topchy N., Almedia G.M, Johnson G.E., Parry J.M., Rothkamm К., Dubrova Y.E. Radiation-induced transgenerational alterations in genome stability and. DNA damage. Oncogene. (2006) 25. P. 7336-42.

69. Biological dosimertry: chromosomal aberration analysis for dose assessment. Technical reports series № 260. Vienna: Int.AtomicEnergy Agency. 1986. 69p.

70. Devis S., Stepanenko V., Rivkind N., Kopecky K.J., Voilleque P., Shakhtarin V. et al. Risk of thyroid canser in the Bryansk Oblast of the Russian Federation after the Chernobyl Power station assident. Radiat.Res. 162, 241248 (2004).

71. Dubrova Y.E., Nesterov V.N., Krouchinsky N.G. et al. Humman minisatellite mutation rate after the Chernobyl accident. Nature. 1996. V.380. № 6576. P.683-686.

72. Dubrova Y.E., Plumb M., Gutierrez B., Boulton E., Jeffreys A.J. Trasgenerational mutation by radiation. Nature. Vol. 405., 2000, p.

73. Dubrova Y.E., Grant G., Chumak A.A., Stezhka V.A., Karakasian A.N. Elevated minisatellite, mutation rate in the post-Chernobyl families from Ukraine, AM. J. Hum.Genet. 71(2002), 801-809.

74. Durante M., Grossi G.F., yang T.C. Radiation-induced chromosomal instability in human mammary epithelial cells. Adv. Space Res. 1996. V. 18, p. 99-108.

75. I Iolmberg K.,: Fait S., Johannsson A., Lambert B; Clonal, chromosome and genomic instability in X-irradiated human T-lymphocyte cyltures. Mutat. Res. 1993. V.286, p.321-330.

76. Ivanenko F., Suskov I.I;, Burlakova E.Bt. Possible Relationships between Plasma Glutathione Levels and Cytogenetic Indices in Peripheral Blood Lymphocytes of Children Exposed to: Low Doses of Radiation: Biology Bulletin, V.32, № 1, 2005, p. 4-11.

77. Jacquet P., de Saint-Georges L., Buset J., Baatout S., Vankerkom J., Baugnet-Mahieu L. Cytogenetic effects of X-rays mthe guinea pig female germ cells. I. The immature oocyte. Mutation Research 391, 1997, p. 189-192 (a).

78. Jacquet P., de Saint-Georges L., Buset J., Baatout S., Vankerkom J., Baugnet-Mahieu L. Cytogenetic effects of X-rays in the guinea pig female germ cells. I. The maturing oocyte. Mutation Research 391, 1997, p. 193-199 (b).

79. Jaquet P., Adriaens I., Buset J., Neefs M., Vankerkom J. Cytogenetic studies in mouse oocytes irradiated in vitro at different stages of maturation? By use ofan early preantral follicle culture system. Mutation Research 583, 2005, p. 168-177.

80. May C.A., Tamaki K., Neumann Rita, Wilson G., Zagars G., Pollack A., Dubrova Y.E., Jeffers A.J., Meistrich M.L. Minisatellite mutation frequencyin human sperm following radiotherapy. Mutation Research 453 (2000) 67-75.

81. Method for the analysis of human chromosome aberrations. Ed. by Buckton K.E., Evans H.J., WHO , Geneva, 1973.

82. Neronova, N. Slozina and A. Nikiforov. Chromosome Alterations in Cleanup Workers Sampled Years after the Chernobyl Accidents. Radiation Research 160, 46-51, 2003.

83. Padovani L., Stronati L., Mauro F., Testa A., appolloni m., Anzidei P., Caporossi D., tedeschi B.,Vernole P. Cytogenetic effect in lymphocytes from children exposed to radiation fall-out the Chernobyl accident. Mutat. Res. 1997. V.395. P. 249-254.

84. Pamfer S., Streffer G. Increased chromosome aberration levels in cells from mouse fetues after zygote X-irradiation. Int. J. Radiat. Biol. 1989.V.55, p.85-92.

85. Pilinskaya M. A., Dibskiy S.S. The frequency of chromosome exchanges in critical groups of Chernobyl accident victims according to conventional chromosome analysis and FISH method. Int. J. Radiat. Medcine. 2000, 1(5): 83-95.

86. Pohl-Ruling J., Fischer P., Haas O. et al. Effect of low dose acute X-irradiation on the frequencies of chromosomal aberrations in peripheral lymphocytes in vitro.Mutat.Res. 1983. V. 110. № 1 .P.71 -82.

87. Kadhim M.A., MacDonald D.A., Goodhead D.T., Lorimore S.A., Marsden S.J., Wright E.G. Transmission of chromosomal instability after plutonium a-particle irradiation. Natur.1992. V.355, p.738-740.

88. Kadhim M. A., Lorimore S. A., Townsend K. M. Radiation-induced genomic instability: delayed cytogenetic aberrations and apoptosis in primary human bone marrow cells. Int. J. Radiat. Biol. 1995. V.67, p.287-293.

89. Kadhim M. A., Moore S.R., Goodwin E.N. Interrelationships amongst radiation-indused genomic instability, bystander effects and, the adaptative response. Mutat. Res. 2004. 568(1): p.21-34.

90. Y. Kamiguchi and K. Mikamo. Dose-response relationship for induction of structural chromosome aberrations in Chinese hamster oocytes after X-irradiation. Mutation research, 103(1982) 33-37.

91. Kaufmann B. P. Induced chromosomal breaks in Drosophila. Cold Spring Harbor Sympos., 9, 82, 1941.

92. Kodaira M., Satoh Ch., Hiyama K. and Toyama K. Lack of effects of atomic bomb radiation on genetic instability of tandem-repetitive elements in human germ cells. Am. J. Hum. Genet. 57: 1275-1283, 1995.

93. Kovgan L.L., Vavilov S., Chepurny M., Ron E., Lubin J., Bouville A., Tronko N., Bogdanova T., Gulak L., Zablotska L. and Howe G. Post-Chernobyl thyroid cancers in Ukraine. Report 2: risk analysis. Radiation Research 166, 375-386 (2006).

94. Lambert B., Holmberg K., Hackman P., Wennborg A. radiation induced chromosomal instability in human T-lymphocytes. Mutat. Res. 1998.405(2), p.161-170.

95. Lloyd D.C., Edwards A.A., Leotard A. et al. Chromosomal aberrations in human lymphocytes in vitro by very low doses of X-rays. Int. J. Radiat. Biol. 1992.V.61 .P.335-343.

96. Luke G.A., Riches A.C., Bryant P.E. Genomic instability in haematopoetic cells of F1 generation mice of irradiated male parents. Mutagenesis. 1997. V.12. P.147-152.

97. Salomaa S., Hokmberg K., Lindhokm C. et.al. Chromosomal instability in vitro radiation exposed subjects. Int. J. Radiat. Biol. 1998. V.74.№ 6. P.771-779.

98. Sasaki M.S.h Miyata H. Biological dosimetry in atomic bomb survivors. Nature. 1968.220. 1189.

99. Sasaki M. Role of chromosomal mutation in the development of cancer. Cytogenet. Cell Genet. 33. 1982, p. 160-168.

100. Sax K. Mather K. Analysis of progressive chromosome splitting. J.Genetics, 37, 483, 1939.

101. Sevan'kaev A.V., Tsyb A.F., Lloyd D.C., Zhloba A.A., Moiseenko V. V., Skrjabin and Climov V.M. "Rogue" cells observed in children exposed to radiation from the Chernobyl accident. Int. J. Radiat. Biol., 1993, Vol. 63., № 3, p.361-367.

102. Sevan'kaev A.V., Lloyd D.C., Braselmann H., Edwards A.A., Moiseenko V.V. and Zhloba A.A., A survey of chromosomal aberrations in lymphocytes of Chernobyl liquidators. Radiation Protection Dosimetry.V.58, № 2, pp.85-91 (1995).

103. Streffer C. Transgenerational transmission of radiation damage: genomic instability and congenital malformation. J. Radiat. Res. (Tokyo). 2006; 47 Suppl B: B19-24.

104. Tahakashi E., Hirai M., Tobarie I. Radiation-induced chromosomal aberrations in lymphocytes from man and crab-eating monkey. The dose-response relationships at low doses. Mutat. Res. 1982, V.94, №1, P. 115-123.

105. Tanaka K., Tchaijunusova N.J., Takatsuji T., Gusev B.I., Sakerbaev A.H., Hoshi M. Kamada N. High incidence of micronyclei in lymphocytes from residents of the area near the Semipalatinsk nuclear explosion test site. J. Radiat. Res. 41, p.45-54 (2000).

106. Tawn E.J., Whitehouse C.A. and Tarone R.E. FISH Chromosome Aberration Analysis on Retired Radiation Workers from the Sellafield Nuclear Facility. Radiation Research. 162, 249-256 (2004).

107. Vulpic N., Panetta G., Tognacci L. Radiat-induced chromosopre aberration in radiobiological protection. Dose-response curves at low dose-levels. Intern. J. Radiat. Biol. 1976. V.29. №6. P.595-600.

108. Watson G.E., Pocock D.A., Papworth D., Lorimore S.A., Wraight E.G. In vivo chromosomal instability and transmissible aberration in the progeny of haemopoetic stem cells induced by high- and low-LET radiations. Int.J.Radiat.Biol. 2001.V.77. p.409-417.

109. Wright E.G. Inducible genomic instability: new insights into tne biological effects of ionizing radiation. Med. Confl. Surviv. 2000, 16(1): p. 117-130.

110. Wright E.G. Untargeted effects of ionizing radiation: implications for radiation pathology. Mutat. Res. 2006, 597( 1-2),p. 119-132.

111. Willett W.C. balancing life-style and genomics research for disease prevention. Science. 2002.Vol. 296, p.695-698.