Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Влияние некоторых факторов на блокообразование зараженных чумой блох в эксперименте

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Влияние некоторых факторов на блокообразование зараженных чумой блох в эксперименте"

л-:"", ¡'. ^ I'

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ РОССИИ ПО САНИТАРНО-ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКОМУ НАДЗОРУ

На правах рукописи

БРЮХАНОВА Галина Дмитриевна

УДК 576.895.775-092.9:579.842.23

ВЛИЯНИЕ НЕКОТОРЫХ ФАКТОРОВ НА ЕЛОКООБРАЗОВАНИЕ ЗАРАЖЕННЫХ ЧУМОЙ БЛОХ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ

03.00.07 - микробиология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Саратов - 1992

Работа выполнена в Научно-исследовательском противочумном институте Кавказа и Закавказья.

Научные руководители: кандидат медицинских наук, старший научный сотрудник Акиев А.К.

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор Самойлова Л.В., кандидат | мед.наук, с.н.с. Адамова Г.В.

Ведущая организация - Среднеазиатский Научно-исследовательский противочумный институт.

Автореферат разослан ¿¿V992 г.

Защита состоится " 1992 г. в 13 часов

на заседании специализированного Совета Д 074.32.01 по защите диссертаций на соискание ученой степени доктора наук при Всесоюзном ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательском противочумном институте "Микроб" (410071, г.Саратов, ул.Университетская, 46).

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке института.

Ученый секретарь специализированного Совета доктор биологических наук

Корнеев Г.А.

* | овида характеристика работы

•Актуальность проблемы. Зволгационно выработанное взаимоотношение чумного микроба и блохи составляет ос- -нову биологического переноса возбудителя чумы. Чумной микроб связан с группой видов блох, жизненная схема которых отвечает признакам периодически многократно нападающих кровососов, причина этого явления стоит в прямой связи с питательными потребностями чумного микроба (В.А.Бибикова,1974). В организме насекомого важнейшее значение приобретают признак Р+ и шероховатая форма роста I Е), выражающие способность бактерий чумы вызывать возникновение блока преджелудка у блох (Бибикова Ь.А.,1967; Классовс-кий Л.Н., Бибикова В.А.,1968; Классовский Д.Н., Степанов В.М., 1968). Влияние свойств крови прокормителя на блокообразование у блох изучено недостаточно, в большинстве исследований уделялось внимание форменным элементам - эритроцитам, лейкоцитам (Козлов М.П. и др.,1972, 1974; Якуба В.Н., Маевский М.Г.,1974). А.К.Акие-внм (1970) было высказано предположение о возможном значении в блокообразовании способности чумного микроба использовать гем (гемин) крови. В опытах А.К.Акиева с соавт.(1985) при подкормках плазмой с гемоглобином зараженных чумой х*сйеор1в были получены блокированные эктопаразиты в 5,5$ случаев. Однако роль составляющих плазму крови компонентов в процессе формирования блока у эффективных переносчиков отечественными и зарубежными исследователями до сих пор практически не рассматривалась. Очевидно, кормление блох на аппарате-кормилке жидкостями разных составов позволит конкретно определить роль различных факторов в этом явлении.

До настоящего времени не оценено состояние чумного микроба в процессе формирования "глыбок" и плотных скоплений его в "блоке" преджелудка у эффективных переносчиков, не предложен метод изучения этого явления вне организма блохи, хотя его можно трактовать как агрегированность микробных клеток, тем более, что прототипом агрегирования является формирование цепочек чумных бактерий в жидкой питательной среде. Вместе с тем, недостаточная изученность специфических взаимоотношений чумного микроба и блохи не только отражается на общем уровне теоретических исследований по чуме, но и препятствует решению ряда конкретных практических вопросов. Моделирование процесса агрегирования бактерий

чумы в опытах на искусственных питательных средах позволило бы изучить свойства возбудителя, определяющие реализацию трансмиссивного способа его передачи.

Заслуживают внимания исследования по изучению особенностей существования микроба в блохах под влиянием различных веществ, в том числе ядов системного действия. Борьба с носителями и переносчиками в настоящее время связана с применением интегрированных методов. Следует лишь заметить, что в этих исследованиях не уделяется должного внимания влиянию химических препаратов на чумной микроб в блохе, а следовательно, на векторную способность переносчиков. Поиск методов снижения векторной активности блох привлекает внимание в связи с проблемой ограничения применения ядов в очагах чумы и сложной экологической ситуацией.

Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы явилось изучение влияния некоторых факторов на блокообразование зараженных чумой блох.

В соответствии с этой целью были поставлены следующие задачи исследования:

1. Сравнительная оценка блокообразования у ХепорауПа сЬео-р1в при подкормках в аппарате-кормилке оптимальной средой с гемоглобином и другими компонентами Iаминокислотами, солями кальция,* магния).

2. Определение блокообразующей способности зараженных чумой блох при подкормках на животных с искусственно вызванной анемией.

3. Характеристика состояния агрегированности чумного микроба при выращивании в жидких средах и в средах с гемоглобином.

4. Изучение действия линдана на основные биологические свойства чумного микроба в жидкой питательной среде.

5. Исследование влияния на векторную способность зараженных чумой блох крови животных-прокормителей, отравленных линданом.

Научная новизна. Отобрана оптимальная среда для подкормки зараженных чумой блох на аппарате-кормилке. Проведен сравнительный анализ влияния некоторых ингредиентов (гемоглобина, аминокислот, солей кальция, магния), вводимых в"эту среду, на блокообразование у блох. Получена анемия токсического типа у лабораторных животных пероральным введением фенилгидразина. Впервые показано угнетение блокообразования у зараженных чумой переносчиков при кормлении их на таких животных. Впервые изучено состояние агрегированности чумного микроба при выращивании его в

жидких средах. Показано влияние гемоглобина на формирование агрегатов чумного микроба. Установлено повышение вирулентности чумного микроба в состоянии агрегированности. Впервые показано, что линдан обладает токсическим действием в отношении чумного микроба как в жидких питательных средах, так и в пищеварительном тракте блох (при подкормках зараженных эктопаразитов на отравленных линданом лабораторных животных). Впервые установлено, что подавляется Еекторная способность зараженных чутлой блох после кормления на отравленных линданом белых мышах. Это выражается в уменьшении выхода блокированных особей, снижении инфекциозности их укуса, укорочении продолжительности жизни блокированных блох.

Практическая значимость. С использованием оптимальной среды для изучения блокообразования у зараженных чумой блох получена возможность определить роль некоторых составных частей крови и их сочетанного влияния на этот процесс. Опыты по использованию фенилгидразина для получения токсической анемии у лабораторных животных и снижению блокообразования у зараженных чумой блох при кормлении на таких животных подтверждают значение свойств крови прокормителя в механизме формирования блока.

Показано, что формирование плотных компактных скоплений чумного микроба в организме зараженных чумой переносчиков возможно изучать на модели - в жидких средах с гемоглобином. Полученные результаты могут быть использованы для исследований степени и характера влияния организма блох на фазу адаптации и накопления чумного микроба в их пищеварительном тракте, а также для изучения роли агрегированности возбудителя чумы в патогенезе инфекционного процесса.

Угнетение векторной способности переносчиков при питании на отравленных линданом животных показывает необходимость учитывать влияние новых химических препаратов на чумной микроб, векторную способность переносчиков при внедрении этих соединений в практику работы противочумных учреждений. Разработана трехэтапная методика отбора ядов системного действия для подавления векторной способности зараженных чумой переносчиков.

В процессе выполнения работы разработаны и предложены Методические рекомендации "Изучение действия ядов на векторную способность блох при чуме". Заявлено изобретение "Способ моделирования блокообразования чумного микроба" Л 4884261/13/11 20 65.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены и обсуждены на межлабораторных и общеинститутских научных конференциях противочумного института Кавказа и Закавказья в 1990-1991гг., на областной научной конференции молодых ученых -"Эпидемиология, микробиология и иммунология бактериальных и вирусных инфекций", Ростов-на-Дону - 1989.

Публикации. По теме диссертации опубликовано четыре научных работы.

Структура и обьем диссертации. Диссертация изложена на 145 страницах машинописи и состоит из введения, обзора литературы 11 глава), собственных исследований 14 главы), заключения и выводов. Материалы диссертации иллюстрированы 16 таблицами, 14 рисунками. Указатель литературы содержит 203 наименования отечественных и 59 иностранных авторов.

Положения, выносимые на защиту:

1. Гемоглобин в составе оптимальной среда, используемой для подкормок через биомембрану зараженных чумой x.cheopis, способен увеличивать число блокированных блох.

2. Гемоглобин усиливает агрегированность чумного микроба в жидких средах, что приводит к повышению его вирулентности для белых мышей.

3.. Блок - это агрегированное состояние чумного микроба в преджелудке у зараженных чумой блох.

4. Векторная.способность зараженных чумой блох X.cheopis и Citellophilus tesquoru» угнетается при подкормках на животных с искусственно вызванной хронической анемией, полученной введением фенилгидразина этим животным.

5. В жидких средах линдан оказывает токсическое действие на бактерии чумы (бактериостатическое и бактерицидное).

6. Системное действие линдана проявляется в снижении векторной способности зараженных чумой блох X.cheopis и Cit.tesquo-rum , что выражается в уменьшении числа блокированных эктопаразитов, снижении инфекциозности их укуса, сокращении' срока жизни блокированных особей.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Использованные штаммы микроорганизмов. В работе использовали 2 штамма чумного микроба, выделенные из блохи ЕеорауНа seto-еа в Дагестанском равнинно-предгорном очаге и из органов полуден-

ной песчанки в Прикаспийском песчаном очаге. По морфологии и культуральным свойствам эти штат/мы чумного микроба были типичными для основного подвида.

Микробиологические методы исследования. В жидкие среды (0,9% раствор хлорида натрия, пептонную воду, бульон Хоттин-гера рН 7,2) засевали взвесь чумного микроба в дозе 1000 мт/мл. Гемоглобин получали путем лизирования эритроцитной массы дистиллированной водой и добавляли в опытные пробирки в конечной концентрации 3 т%. Контрольные культуры чумного микроба выращивали в средах без гемоглобина. Посевы инкубировали при 22, 28 и 37°С. . Агрегированность определяли в мазках из этих культур: на предметное стекло наносили каплю исследуемой жидкости, равномерно распределяли по поверхности, фиксировали, окрашивали по Граму, затем при микроскопировании считали одиночные микробы, цепочки, состоящие из разного числа микробных клеток, а также скопления бактерий.

Действие линдана на чумной микроб изучали в жидких средах: в физиологический раствор поваренной соли, бульон Хоттингера, сыворотку крови морской свинки засевали чумной микроб в дозе 1000 т/т. В опытные пробирки вносили 0,01 мг/мл линдана (в предварительных исследованиях определяли минимальную бактерицидную и бактериостатическув хокц&атрацкю яда дня чумного микроба). У одно- и двухсуточных культур чумного .микроба,, змращенного в средах с гемолизироваиной эритроцитной масосй и лицданом, изучали зависимость от ионов кальция при 37°С, ферментативные свойства по методикам, изложенным в "Учебно-методическом пособии по лабораторной диагностике и изучению биологических свойств чумного микроба и возбудителей некоторых других природноочаговых инфекций (Иркутск,1972). Исследовали пигментообразование на среде с гемином (Степанов В.М., Классовский Л.Н., Терентьева Л.И.,1969), чувствительность кпествдину 1 по методике"Л.И.Чепурной (1970). У культур чумного микроба, подвергнутых действию линдана, изучали чувствительность к чумным фагач Покровской, Л-413"С" и псевдотуберкулезному, согласно "Руководству по диагностике, лечению и профилактике чумы" (Саратов,1977). Определение чувствительности к антибиотикам проводили согласно "Методическим указаниям по определению чувствительности микроорганизмов к антибиотикам методом диффузии в агар с использованием дисков" (Москва.1983).

Биологические методы исследования. Изучение вирулентности возбудителя чумы, выращенного в средах с гемолизированной эрит-роцитной массой проводили на белых мышах методом подкожного заражения животных. Погибших и убитых на. 21 день зверьков подвергали бактериологическому исследованию на чуму. Определяли выживаемость чумных бактерий из сред с линданом методом подкожного заражения белых мышей, выживших животных исследовали серологически в системе реакций РГСГА-РНАт по методу, изложенному в "Инструктивно-методических материалах по применению серологических методов диагностики при эпизоотологическом обследовании природных очагов чумы" (Москва,1983). Заражение блох производили как на агонирующих от'экспериментальной чумы мышах, так и на аппа-рате-кормилке (Катtman. ,1954; Елкин Ю.М., Осилова С.П. ,1970). Заражаюцую способность блох изучали путем подсаживания на животное одной блокированной особи на один час. Эктопаразитов кормили на алпарате-кормилке через биомембрану кровезаменителями и препаратами крови: гемодезом, полиглюкином, протеином, альвези-нсм, сухой плазмой 0(1) группы крови; в них добавляли компоненты: гемоглобин человеческий и бычий, аминокислоты, глюконат кальция, сульфат магния. Для выяснения влияния вышеперечисленных препаратов на жизнедеятельность блох в каждый опыт включали группы незараженных эктопаразитов, которые питались кровезаменителями на алпарате-кормилке. Контрольные группы зараженных чумой блох подкармливали на белой мыши или на алпарате-кормилке дэфибринированной кровью, взвесью 2 и 4 млн эритроцитов человека в 0,9$ растворе хлорида натрия.

Изучали блокообразование методом кормления блох на животны: с искусственно вызванной фенилгидразином анемией. Фенилгидразин вводили животным внутрижелудочно, в опыт брали зверьков, у которых в крови содержалось не более 2-2,5 млн эритроцитов и 5-6 гемоглобина.

Изучение влияния ливдана на блокообразование у блох x.cheo-pis и Cit. tesquorum проводили на белых мышах, отрав-

ленных ядом в дозах 50 мг/кг, 100 мг/кг, 200 мг/кг, а также подкармливали блох на алпарате-кормилке смесью дефибринированной К] и линдана, содержащей 0,125 мг, 0,25 мг и 0,5 мг яда. В исследованиях учитывали: количество {%) блох, имеющих блок, сроки жизш блокированных особей, мышей,которые были заражены чумой (от общего количества мышей, на которых кормились блокированныё блохи

о

количество посевов от блох с ростом возбудителя чумы Сот члсла исследованных эктопаразитов ь определенные периоды олйта);й так же динамику изменений количественных показателей чудюго микроба в блохах з разные- сроки исследования.

Статистический анализ результатов исследований проводили по методам, изложенным в руководствах Л.М.Моркова, Л.Е.Полякова 11974), Б.А.Шоничнова, 5.Ф.Семенова 11974).

При выполнении работы в экспериментах использовано: 1060 белых мнаей, 12 морских свинок; 3180С экземпляров блох, в том числе :Х.сЬеор1в 27700, СЛЪ.Ъевдиогит 4100.

Результаты и обсуждение.

Значение некоторых компонентов крови человека в блокообра-зованки зараженных чумой блох. Блокированные блохи появлялись раньше (на 3-10 сутки,после второй подкормки) в группах х.сЬео-, которые питались 2 млн эритроцитов в физиологическом растворе поваренной соли. Количество"блокированных" экземпляров среди таких блох в указанные сроки было более высоким, чем среди эктопаразитов, которых подкармливали физиологическим раствором с 4 млн эритроцитов. При подкормках 0,9$ раствором хлорида натрия с 4 млн эритроцитов процесс блокообразования был более растянут во времени: "Блок" получен на 7-9 подкормках 120-25 сутки), чего не наблвдалось в опытах с 2 млн эритроцитов.

Гемодез и полиглюкин оказались токсичными для х.сЬеор1а , которые уже после первой подкормки становились малоактивными, до 90% таких особей погибало в течение 6-7 суток. Кормление оставшихся живыми к концу опыта блох на белых мышах не привело к заражению животных. У одной х.с!1еор1з , питавшейся гемодезом и гемоглобином, получен блок, белая мышь, на которую выпустили эту блоху, пала на 7 сутки от чумы (.посевом на пластинку агара из лимфоузла, сердца, печени, селезенки и легкого выделен чумной шкроб).

У х.сЬэор18 , питавшихся смесями кровезаменителей (альбумина и альвезина) с аминокислотами 1валином, лейцином, триптофаном, серином, аланином), гибель не превышала 14-175? к окончанию опытов. Среди блох этих групп не зарегистрировано ни одного случая блока, не произошло и заражения белых мышей, на которых выпускали таких блох на последней подкормке (через 21 день после заражения).

Добавление в качестве дополнительных ингредиентов глюконата

кальция и сульфата магния в среды для подкормки из альбумина и альвезина не привело к появлению блокированных особей, однако к не оказалось вредного влияния на блох.

Получен "блок" у Х.сЬеорхэ при подкормках на аппарате-кор-милке плазмой 0(1) группы крови человека с бычьим гемоглобином, осуществлена передача чумного микроба белой мыши, которая пала от генерализованной формы чумы (посевом на пластинки агара из всех органов выделен чумной микроб).

Выявлены существенные различия в инфицированности блох разных групп в отдаленные после заражения сроки. Так, к 30-32 суткам среди блох, питавшихся плазмой с гемоглобином, количество зараженных особей было значительно большим (41±1,2#) по сравнению с эктопаразитами, питавшимися плазмой 123*1,2$). Группы X.сЬеор1а , зараженные взвесью бактерий чумы в дефибринирован-ной крови через биомембрану на алпарате-йормилке и питавшиеся альбумином, альвезином, а также этими препаратами с глюконатом кальция и сульфатом магния, практически полностью освобождались от чумного микроба к 30 дню, Инфицированность же блох, питавшихся этими же компонентами, но зараженных кормлением на бактерие-мийной белой мыши, в эти же сроки составляла 21,8±2,1$.

Таким образом, оптимальной средой для кормления блох является плазма крови человека 0(1) группы (не оказывает токсического действия на эктопаразитов и на чумной микроб в них, обеспечивает жизнеспособность блох, легко растворяет биологические препараты и минеральные соли). Получены блокированные блохи при подкормках кровезаменителя!'® в смеси с гемоглобином. Значение гемоглобина в формировании блока подтверждается и тем, что в более поздние сроки после.заражения удается определить инфицированных эктопаразитов, получавших в смеси с кровезаменителями гемоглобин, по сравнению с блохами, питавшимися чистыми кровезаменителями, а также кровезаменителями в сочетании с аминокислотами, глюконатом кальция, сульфатом магния. Показано, что метод заражения (на агонирундем от экспериментальной чумы животном или на аппарате-кормилке взвесью чумных бактерий в дефибринированной крови) оказывает влияние на продолжительность сохранения чумных микробов в блохах при последующих подкормках кровезаменителями к препаратами крови.

Токсического влияния крови отравленных фенилгидразином белых мышей на не зараженных и зараженных возбудителем чумы X. сЬео-

pis и Cit.tesquorum. не отмечено. Установлено значительное снижение числа блокированных эктопаразитов в опытных группах по сравнению с контрольными. Так, блокообразование у X.cheopis , питавшихся на здоровых белых мышах, составило 26-42%, а на анемичных животных - лишь 10$. Кроме того, при подкормках блокированных x.cheopis на здоровом зверьке блок оказался нестойким и размн-валск, поэтому передача чумного микроба лабораторным животным происходила лишь в 20-50$ случаев, против 80-83% в контроле. У блох Сit.tesquorum не зарегистрировано ни одного случая блока при кормлении на отравленных животных, а в контроле количество блокированных составило 13-18$ от числа взятых в опыт. Фенилгид-разин не оказывал непосредственного токсического действия на чумной микроб в блохе. Так, после второй подкормки 15-6 сутки) среднее количество чумных микробов в одной блохе x.cheopis было несколько выше в опытных группах по сравнению с контрольными (соответственно,2470000 и 1800230 мт). Однако, к 30 суткам среднее число чумных микробов в блохах опытных групп было меньшим, чем в контрольных (соответственно, 264000 и 1395000 мт). Такая же тенденция изменёния численности бактерий чумы сохранялась и в блохах Cit.tesquorua.Таким образом, снижение количества эритроцитов и гемоглобина у белых мшей препятствует процессу формирования блока в организме зараженных чумой x.cheopis nCit.tesqu-rum. , приводит к уменьшению инфицированности блох в отдаленные от заражения сроки. Инфекциозность укуса блокированных при питании на анемичных мышах x.cheopis резко угнетается.

Агрегированность чумного микроба. Изучение особенностей существования чумного микроба в организме блохи остается сложной проблемой. Поэтому опыты с использованием искусственных питательных сред не теряют своего значения, так как они могут дать представление о факторах, влияидих в живом организме на судьбу микробов. Поскольку гемоглобин имеет важное значение в блокооб-разовании зараженных чумой блох, нами были проведены опыты по изучению влияния гемоглобина на некоторые свойства чумного микроба в жидких средах. У шигелл, сальмонелл происходит повышение патогенных свойств в состоянии агрегированности (Жалко-Титарен-ко В.П.,1988). В отношении чумного микроба подобные исследования не проводились, хотя это явление вполне сравнимо с формированием микробных цепочек и конгломератов бактериями чумы в жидкой питательной среде. Использование гемолизированной эритроцитной массы

ъ составе сред, применяемых для изучения агрегированности чумного микроба, приближает в определенной степени эти экспериментальные условия к условиям организма переносчика.

Ь наших опытах наибольшее количество коротких цепочек бактерий чумы (до 10 мт) формировалось в бульоне и полтонной воде при 37°С и экспозиции 18 и 24 часа. При добавлении в среды гемолк-зированкой эритроциткой массы резко усиливался процесс образования цепочек, даьо в физиологическом растворе поваренной соли встречались цепочки к скопления, состоящие из 10-15 микробов. Через 18 часов инкубации при 28° и 37°С в пептонной воде с гемоглобином микробы располагались в основном в виде цепочек или скоплениями, и при этом они состояли из 20-30, даже 90 чумных микробов. Следует отметить, что крупные конгломераты состояли в основном из длинных цепочек, свернутых в виде клубков.

Статистическая обработка полученных данных подтвердила значение гемолкзированной крови и температурного режима: уровень вероятности этих утверждений для пептонной воды р>> 0,99, причем более существенное влияние на этот процесс оказывает гемолизиро-ванная кровь (доля влияния 46,7$).

Повышение вирулентности чумного микроба, выращенного на средах с гемолизированкой эритроциткой массой, выразилось в сокращении минимальной к максимальной средней гармонической величины .тазни зараженных животных. Так, разница этого показателя для микроба, выращенного на пептонной воде при 28°С, по сравнению с контролем составила 0,2 суток по минимальной и 4,7 суток по максимальной средней гармонической величине срока жизни, гибель животных в опытных группах увеличилась на 2,5%, для культуры из бульона Хоттингера - по минимальной срока 0,8 суток, по максимальной - 3,4 суток; гибель подопытных животных возросла на 31,2%.

Отмечено увеличение максимальной средней гармонической величины срока жизни (на 1,2 суток) в группе животных, зараженных возбудителем чумы, выращенным при 37°С в пептонной воде с гемоглобином. Б этой же группе процент гибели имел самый малый прирост (на 1,6$). При 37°С в пептонной воде с гемоглобином регистрировалось наибольшее количество цепочек и, соответственно, наименьшее число конгломератоБ из бактерий чумы, следовательно, удлинение средней гармонической срока жизни связано с этим явлением. Очевидно, большее значение в вирулентности чумного микроба

алеют ого агрегированный формы в виде конгломератов.

Ферментативная активность бактерий т/мы, выращенных ь ходких средах с гемолизированной эритроцитной массой, имеет некоторые особенности. Культуры чумного микроба в бульоне и пептон-ной воде с гемоглобином при 37°С выращивания в отличие от контрольных культур на вторые сутки ферментировали лактозу и сахарозу, на 2 суток раньше ферментировали глицерин и галактозу. Чуткой микроб в физиологическом растворе поваренной соли с гемоглобином ферментировал арабинозу. При 28°С бактерии чумы, выращенные в физиологическом растворе с гемоглобином, на двое суток ::сз-ке ферментирован! галактозу, а в бульоне с гемоглобином на одни сутки раньше ферментировали глицерин.

фльтуры Т.резЪ18 , Еыращснкые в средах с гемолизированной эритроцитной массой, не отличались от контрольны^ по чувствительности к антибиотикам, пестициногенности, чувствительности к пестицкну 1, фаголизабельности чумными фагами Покровской, л-413 "С" к псевдотуберкулезным.

Таким образом, гемоглобин усиливает агрегацию чумного глпк-роба в жидких средах, при этом укорачивается ьрачя формирования агрегатов и увеличивается количество микробов в них ^что приводит к удлинению цепочек и /крушению групп бактерий с образованием конгломератов). Это важно .для образования глыбок чулшх лж-робов в блоке преджелудка ^ зараже:шых блох. Общепризнанным является факт чередования неравнозначных популяций чумного микроба в организме носителя и переносчика (.Бибикова ¿.А., 1368; Акиев А.К., 1970; Бибикова В.А., Классовский л.Е.,1974 и др.). С этих позиций агрегировакностъ является приспособительным для чумного :.жк-роба свойством к существованию в блохе, проявляющимся в присутствии гемоглобина и продуктов его расщепления, в результате чего чумной микроб приобретает способность быть переданным бЗюхой теплокровному хозяину.

Системное действие линдана на векторную способность блох при чуме. Экспериментальному изучению инфекционного потенциала блох в условиях применения инсектицидов, ратицидов и ядов системного действия уделяется недостаточное знимание, лишь некоторыми авторами (.Алексеев А.Н. ,1971; Попов Ь.А., 1979, 1984) проводились исследования в этом направлении. До настоящего времени не рассматривалось действие ядов на чумной микроб, а следовательно, и на векторную способность переносчиков. Б то же время известны

данные о бактерицидных свойствах хлорорганических соединений i отношении некоторых микроорганизмов ( bal, Saxena , 1982;

В наших опытах добавление в среды выращивания 0,01 мг/мл линдана приводило к гибели чумного микроба при первоначальной посевной дозе 1000 мт/мл. Через 18-24 часа инкубации в мазках из этих сред чумной микроб обнаруживали в единичных долях, зрея в виде измененных по морфологии форм: одиночных раздутых шаровидных клеток или клеток с нечеткими, размытыми контурами и не определенной формы. В посевах опытных культур на пластинках ai ра Хоттингера не выявлено роста чумного микроба. На среде с ге мином в единичных случаях регистрировали рост Р~ колоний. Sapa жение белых мышей взвесью 18 часовой культуры чумного микроба из этих сред не приводило, как правило, к гибели животных от ч мы, у 18$ (всех погибших) зверьков посевами из печени, легких выделяли сопутствующую флору. Среди убитых на 21 день зверькоЕ серопозитивных особей не обнаружено. Указанная доза яда была н достаточной для подавления роста 1 млрд мт/мл чумного микроба, но влияла на ферментативные свойства бактерий чумы. Культуры, выращенные в физиологическом растворе поваренной соли с линда-ыом на 1-3 суток позже ферментировали мальтозу, арабинозу, галактозу, глюкозу и маннозу по сравнению с контрольными культурами. Бактерии чумы, выращенные в пептонной воде с линданом, н трое суток позже ферментировали галактозу. Изменилась категори чувствительности таких культур к некоторым антибиотикам (тетра циюшну, гентшжцину) от устойчивой к чувствительной. Пестидин генноеть и чувствительность к пестицину-1 бактерий чумы под вл янием линдана не изменилась.

Токсическое действие яда на чумной микроб в сыворотке кро ей морской свинки, несколько уменьшилось. Об этом свидетельствует, гибель всех белых мышей, зараженных культурой чумного мик роба, выращенной в сыворотке с линданом .при 28°С. Однако посев: органов павших животных во всех случаях дали рост Y.pestie в в: де единичных изолированных колоний, часто с ростом сопутствую^ флоры.

Бактерии чумы в сыворотке крови с линданом ферментировали рамнозу, однако этот признак не отличался постоянством. Линдан не оказывал влияния на чувствительность таких культур к антиби( тикам.

Таким образом, чумной микроб, выращенный в жидких средах (

шданом, подвергался его токсическому действию, что выразилось изменении сроков ферментации углеводов, повышении чувствитель->сти к антибиотикам, однако степень проявления этих признаков шисит от состава среды выращивания: токсичность яда выше в фи-юлогическом растворе поваренной соли, меньше - в сыворотке >ови морской свинки.

Гибель зараженных чумой х.сЬеор1з в опытах с двух- и трех-затной подкормкой на белых мышах, отравленных разными дозами [а, была высокой. Так, на третьей подкормке (9-10 сутки после цэажаыцего кормления) в группе блох, накормленных на мышах, от-шленных 50 мг/кг яда, оставалось живыми только 5$ блох. В се-ш опытов, в которой введение яда блохам осуществлялось подкоркой на аппарате-кормилке, основная масса блох погибла после ¡рвой подкормки, однако из всех погибших только 30-40$ эктопа-шитов успевали напиться крови. Вероятно, причиной массовой 1бели блох, получавших яд на аппарате-кормилке, являлось соче-шное действие яда - кишечное и фумицидное. После первой под->рмки х.сЬеор1а на отравленных линданом животных регистрирова-I низкие по сравнению с контрольными группами блох показатели юеваемости чумного микроба - в среднем 600 мт на одну блоху шнимально - 105 мт, максимально 145000. мт лишь у одной особи I всех серий опытов). В контроле - в среднем на одну блоху вы-ютало 2 шш мт чумного микроба. После повторных кормлений X. 1еор1з на отравленных ядом (дозой 100 мг/кг и 200 мг/кг) белых ппах высеваемость чумного микроба была чрезвычайно низкой - от мт до 400 мт в одной блохе. К третьей подкормке (10 сутки) >еди эктопаразитов, питавшихся на животных, отравленных 50мг/кг щдана только единичные блохи (по одной из каждых 10 высевае-□с) сохранили чумной микроб, в'ореднем 26000 мт в одной блохе 1 контроле - 500000 мт). Обильный рост чумного микроба в посе-1хх.с!шор1а , получавших яд на аппарате-кормилке, отмечен шь среди.исследованных после первой подкормки (в 30-50$), а юле следующих кормлений дефибринированной кровью с ядом наб-щали рост в виде.единичных колоний, причем до 80$ посевов юх роста не дали.

Таким образом, максимальное количество микробов в одной сохе"ни разу не превысило максимального количества их сразу юле заражающего кормления, высоким оказалось количество блох, :вобождающижся в ходе опытов от чумного микроба. Это свидетель-

c'i'üji-т и то: i, что .¡улсроби .'.югу-г лишь сохраняться некоторое вре .;я в блохах п„:: питании па отравленных зверьках, но не размножаются. жтъ в одном случае среди блох, кормившихся на зверька .lOJijчавших эО мг/кг яда, наблюдала блокообразованке с передаче возбудителя белей мыши, павшей от чумы через 7 дней, однако бе генерализации инфекционного процесса - чумной микроб был выдел лишь посевом из пахового лимфоузла. В этой же группе блох отмс чади еще девять особей с подозрением на блок предаелудка, но с погибли за время суточной реаиимации. Средняя продолжительное1] жизни блокированных особей в контроле составляла 3,2 суток.

Образование преджелудочного блока yx.cheopis , однократ! питавшихся па зверьках, отравленных 50 мг/кг линдана, к 30-33 дню составило 4-10,1$, против 28,7-42f¿ блокированных в контро;

того, ::е все блохи, у которых блок предаелудка сформировался после питания на подопытных белых мышах, были способны i сдавать возбудителя лабораторным животным (число передач чу:.в гс микроба б злым' .мышам по отношению к числу животных, на kotoi выпускали блокированных особей, составляло 1:7). Это указываем на низкую способность распространения возбудителя такими блохг При питании на бактериемийном животном средняя заражающая доз; составляла 800000 мт чумного микроба на одну блоху, а после п< кормки x.cheopisHa отравленных 50 мг/кг линдана зверьках чис. чумных микробов в блохе составляло о.т нескольких сотен до нескольких тысяч 1от 800 до 54000), но при последующих подкормка на здоровых белых мышах постепенно увеличивалось к 20-25 дню , 76000-250000 мт, что однако в среднем было в 4 раза меньше по: зателей контрольных групп.

¿ажио отметить, что после подкормок блох на отравленных ; вотных число микробных клеток во всех сериях опыта не достига средней заражающей дозы. Кроме того, число зараженных блох ре: сокращалось после питания на отравленных животных до 4.0%, воЗ' настало до 80% после кормления на здоровых зверьках (в этот с ьо всех опытах появлялось самое большое количество блокирован: блох), резко падало - до ЗС# после третьей подкормки.

У эктопаразитов, питавшихся на животных, отравленных лиц ном в дозе 100 мг/кг и 200 мг/кг, наблюдали более резкое умен шение числа чумных микробов в каждой особи, встречаемость инф цированных блох не превышала 10-20$.

Таким образом, установлено снижение эффективности переда

трт блохами X.cheopis , питавшимися на отравленных животных.

Аналогичные результаты получены и в опытах с блохами Cit. tesquorua . Елокообразование среди блох, питавшихся на здоровых зверьках, составило 8-12%. У одной блохи сформировался блок преджелудка после питания на животном, отравленном 50 мг/кг яда, однако ее кормление на здоровом животном не вызывало заражения последнего. Таким образом, отсутствие блокообразования и передачи чумы блохами Cit.tesquorun^ питавшимися на подопытных зверьках, дает основание утверждать, что векторная способность переносчиков подавляется ядами системного действия. Полученные данные послужили основанием для разработки трехэтапного метода отбора ядов с целью снижения векторной способности эффективных переносчиков. Метод включает первичную оценку антибактериальной активности яда, определение сублетальной для блох дозы яда при кормлении на аппарате-кормилке или отравленных зверьках, выбор на основе первых двух этапов изучения оптимальной дозы яда, подавляющей векторную способность зараженных чумой блох при питании на отравленных животных. Становится очевидным, что поиск экологически щадящих методов подавления специфической передачи чумного микроба должен проводиться с учетом влияния ядов на бактерии чумы как при выращивании их на искусственных питательных средах, так и в организме переносчика.

ВЫВОДЫ

1. Оптимальной средой для подкормки блох на аппарате-кормил-ке признана плазма крови человека 0(1) группы. Рекомендовано использование этой среды в целях изучёния блокообразуюцей способности блох под влиянием различных факторов.

2. Сроки сохранения чумного микроба в блохах, питавшихся кровезаменителями и препаратами крови, находятся в прямой зависимости от способа заражения таких блох. Заражение эктопаразитов на бактериемийной белой мыши является методом выбора, поскольку при этом инфицированность блох чумой в сравнительно отдаленные сроки (30-32 сутки) выше, чем при заражении эктопаразитов взвесью чумных микробов в дефибринировачной крови на аппарате-кормилке.

3. Гемоглобин имеет важное значение в процессе формирования преджелудочного блока у блох. Питание зараженных чумой эктопаразитов на аппарате-кормилке кровезаменителями и препаратами крови, содержащими 14 i% гемоглобина, приводит к появлению блокированных

особей, способных передавать чуму восприимчивому животному и препятствует освобождению блох от чумного микроба.

4. Гемоглобин усиливает агрегированность чумного микроба в :.тццких сводах, что пр::1:одит к повышению его вирулентности для белых мышей, ::з:локск;по ферментативных свойств. Агрегированные формы чу:лнкх геиеробов в ].'Идо конгломератов имеют большее значение в проявлении игоулзнтпости чумного микроба для лабораторных гл.вотных, _че:1 цепочку, бактерий чумы и одиночные микробы, что является одним из ;?а:п:ых факторов в механизме трансмиссивной передачи возбудителя. Блек - это агрегированное состояние чумного 'ликроба в цродт.елудки адъективного переносчика.

5. Векторная способность зараженных чумой- блох угнетается при подкормках на животных с искусственно вызванной фенилгидра-зином анемией, что подтверждает значение свойств крови прокорми-теля в блокообразоЕании. При этом уменниается количество блокированных эктопаразитов, снижается их заражаацая способность.

6. линдан оказывает токсическое действие на чумной микроб

з жидких средах, содержащих 0,01 мг/мл этого яда, что выражаете* п его гибели е малых посевных дозах 11000 мт/мл), а при посеве 1 млрд мт/мл - в изменении сроков ферментации углеводов, повышении чувствительности к некоторым антибиотикам (гентамицину, тетрациклину), однако степень проявления этих признаков зависит от состава среди выращивания: токсичность яда выше в физиологическом растворе поваренной соли, меньше в сыворотке крови морской сеыш:.

7. Линдан подавляет векторную способность зараженных чумой блех, питающихся на отравленных этим ядом зверьках: уменьшается число блокированных эктопаразитов, снижается эффективность передач:: чумы такими блохами \число передач возбудителя восприимчивому животному составляет не более 15%). Сокращается срок жизни блокированных особей. 0 подавлении инфекционного потенциала блох, питающихся на отравленных зверьках, свидетельствует и уменьшение количества бактерий чумы в одной блохе в ранние сроки при одновременном увеличении числа блох, освободившихся от чум-пых микробов.

8. Необходимым звеном в разработке профилактических меро-пглятий в очагах чуш доезжен стать выбор ядов, обладающих анти-бнктериальной акт);:ностью в отношении чумного микроба при выра-щ.Ц)ании его на искуостъешшх питательных средах, а 'затем изуче-

ние действия отобранных препаратов на бактерии чумы в организыз переносчика.

ПУБЛИКАЦИИ ПО ТЕЛЕ ДИССЕРТАД^!

1. Халипова Г.Д., Акиев А.К., Бейер А.II. Ишянхе гемоглобина на физическое состояние чумного г.шкроба в видках питательных средах //Особо опасные инфекции на Кавказе: Тез.докл. к 6-й науч. краевой конф., посвящ. 70-летию Великой Октябрьской соц. революции (Дек. 1987).- С. 56-57.

2. Халипова Т.д., Акиев А.К., Бейер А.П. Опыт ко разработке стандартной среды для изучения процесса блокообразовакпя. Там но. - С. 381-382.

3. Брюханова Г.Д., Акиев А.К., Бейер А.П., .Лихайлова В.К, Влияние агрегированностп чумного микроба на его вирулентность для лабораторных животных //Эпидемиология, микробиология и иммунология бактериальных и вирусных инфекций: Тез. докл. обл. науч. конф. молодых ученых (17-20 октября 1989 г.).- Ростов-на-Дону, 1989.-.С. 13-15.

4. Брюханова Г.Д., Акиев А.К., Бейер А.П. Действие линдапа. на векторную способность зараженных чумой блох в эксперименте //Паразитология,- 1990.- Т. 24, вып. 4,- С. 347-349.

3«. М 5£У Подл. I печ.36. 03,33тир. МО

Ротеприят В И ИНОК. Ставрополь, пер.Зоотехнкчесанй, 1а