Влияние мутантных аллелей генов CCR5, CCR2 и SDF1 человека на ВИЧ-инфекцию

Рябов, Григорий Сергеевич

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Влияние мутантных аллелей генов CCR5, CCR2 и SDF1 человека на ВИЧ-инфекцию
ВАК РФ 03.00.03, Молекулярная биология

Автореферат диссертации по теме "Влияние мутантных аллелей генов CCR5, CCR2 и SDF1 человека на ВИЧ-инфекцию"

На правах рукописи

Рябов Григорий Сергеевич

ВЛИЯНИЕ МУТАНТНЫХ АЛЛЕЛЕЙ ГЕНОВ ССЯ5, ССЯ2 И БВГ1 ЧЕЛОВЕКА НА ВИЧ-ИНФЕКЦИЮ

03.00.03 - молекулярная биология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва 2004

Работа выполнена в ГУ вирусологии им. Д И. Ивановского РАМН. Научные руководители:

доктор биологических наук Бобков Алексей Филиппович кандидат медицинских наук Зверев Сергей Яковлевич

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор

Кущ Алла Александровна кандидат биологических наук Шадрина Мария Игоревна

Ведущая организация - ГУ ЦНИИ эпидемиологии Минздрава РФ

Защита диссертации состоится « ( » 2004г.в/^часовна заседании

Диссертационного совета Д 001.020.01 в Институте вирусологии им. Д.И. Ивановского РАМН по адресу: Москва, 123098, ул. Гамалеи, 16.

С диссертацией можно ознакомится в библиотеке Института вирусологии им. Д.И. Ивановского РАМН.

Автореферат разослан

2004 г.

Ученый секретарь Диссертационного совета доктор медицинских наук

Косякова HП

2004-4 27454

Актуальность проблемы. Вирус иммунодефицита человека первого типа (ВИЧ-1) активно изучается исследователями разных стран с момента его открытия в 1983 г. Однако, несмотря на это, на сегодняшний день эффективные способы борьбы с этим опасным заболеванием отсутствуют. В то же время, начиная с 1996 г., в литературе стали появляться данные о генетической устойчивости некоторых индивидов к заражению ВИЧ-1. Было показано, что мутации в генах хемокиновых рецепторов, используемых вирусом как корецепторы при проникновении в клетку, влияют на вероятность заражения. Первой обнаруженной мутацией была делеция в гене CCR5 (CCR5A32). Было установлено, что люди, гомозиготные по этому делеционному аллелю, обладают повышенной устойчивостью к заражению ВИЧ-1 (Dean et al. 1996; Liu et al., 1996; Samson et. al., 1996). Позднее появились сообщения о других мутациях, потенциально способных влиять не только на вероятность заражения, но и на течение заболевания (McDermott et al., 1998; Magierowska et al., 1999; Winkler et al., 1998). Однако необходимо отметить, что данные о возможной роли большинства мутаций (за исключением делеции CCR5A32) зачастую противоречивы. Более того, связь между сочетаниями мутантных аллелей в разных генах, отвечающих за функционирование иммунной системы человека, и возможностью инфицирования ВИЧ-1 практически не исследована.

Основным подходом к изучению влияния мутаций или аллельных полиморфизмов на возможность заражения ВИЧ-1 служит анализ генотипов предварительно отобранных и тщательно охарактеризованных групп лиц, подвергавшихся опасности заражения, но оставшихся не зараженными. В настоящий момент существуют такие группы неинфицированных людей, вступавших в половые контакты с ВИЧ-инфицированными без использования презервативов (Aarons et al. 1997, Dean et al., 1996; Winkler et al., 1998), а также реципиентов крови или ее продуктов, контаминированных вирусом (Dean et al. 1996; Salkowitz et al., 2001; Wilkinson et al. 1998). Необходимо отметить, что во всех перечисленных выше работах исследовалось влияние мутаций в геноме человека на возможность заражения ВИЧ-1 подтипа В. В связи с этим, представляло интерес выяснить возможную роль мутаций в генах хемокиновой системы CCR5, CCR2 и SDF1 при парентеральном пути передачи вируса в среде лиц, практикующих внутривенное применение психоактивных препаратов. При этом изучаемая группа подвергалась риску заражения вирусом подтипа А, что особенно важно в условиях распространяющейся в Российской Федерации эпидемии ВИЧ-1 среди наркоманов, вызванной именно этим вариантом ВИЧ-1 (Бобков и др., 1998).

РОС. НАЦИОНАЛЬНАЯ БИБЛИОТЕКА

Цель и задачи исследования. Основной целью настоящей работы явилось изучение влияния мутаций генов ССИ5, ССИ2 и 8ВИ и их сочетаний на возможность заражения ВИЧ-1 лиц, практикующих внутривенное введение психоактивных веществ. В связи с этим в задачи исследования входило:

1. Выявление группы лиц с общим источником заражения, основным фактором риска заражения которых явилось внутривенное употребление психоактивных препаратов.

2. Генетическая характеристика вируса, вызвавшего эпидемию.

3. Наблюдение за-ходом эпидемии, выделение группы наркоманов, неоднократно подвергавшихся риску заражения вирусом, но остававшихся не заразившимися («контактной» группы), и мониторинг этой группы на протяжении трех лет.

4. Изучение частот встречаемости аллельных состояний и сочетаний мутантных аллелей ССЯ5Л32, ССИ2-641, 8БН-3'А и полиморфизма ССИ5-59029Л/0 в группе здоровых доноров.

5. Изучение частот встречаемости, аллельных состояний и сочетаний мутантных аллелей ССИ5Л32, ССИ2-641, 8БН-3'А и полиморфизма ССИ5-59029Л/0 среди «контактных» лиц и ВИЧ-инфицированных наркоманов.

6. Сравнение значений частот встречаемости, аллельных состояний и сочетаний мутантных аллелей ССЯ5Л32, ССИ2-641, 8БР1-3'А и полиморфизма ССК5-59029Л/0, полученных в группах ВИЧ-инфицированных и здоровых доноров, с аналогичными значениями, полученными для группы «контактных» наркоманов.

Научная новизна работы. В результате проведенной работы были определены частоты встречаемости аллелей ССК5Л32, ССИ2-641, 8ВН-3'Л и полиморфизма ССИ5-89029Л/0 среди здоровых доноров на территории Российской Федерации. Была обнаружена и охарактеризована группа «контактных» наркоманов, неоднократно подвергавшихся риску заражения ВИЧ-1 подтипа А парентеральным путем, но остававшихся не зараженными. Получены данные о влиянии мутаций ССИ5Л32, ССИ2-641, 8ВН-3'Л и ССИ5-59029Л/0 полиморфизма, а также их сочетаний на вероятность заражения при парентеральном пути передачи ВИЧ-1 подтипа А.

Практическая ценность.

1. Полученные частоты встречаемости мутаций ССИ5Л32, ССИ2-641, 8ВН-3'Л и полиморфизма ССК5-59029Л/0 среди здоровых доноров могут быть использованы в качестве стандартных значений при дальнейшем изучении различных групп,

подвергавшихся риску заражения ВИЧ-1, а также для оценки генетической устойчивости популяции.

2. Обнаруженная и охарактеризованная группа наркоманов, неоднократно подвергавшихся риску заражения ВИЧ-1, но оставшихся неинфицированными, может быть использована для дальнейшего изучения генетических факторов, влияющих на вероятность заражения ВИЧ-1.

3. Полученные данные о протективной роли гомозиготного состояния аллеля CCR5A32 и сочетаний мутантных аллелей и CCR2-64I в гетерозиготном состоянии на фоне: полиморфного варианта CCR5-59029A/CCR5-59029A при парентеральном пути передачи вируса на заражение ВИЧ-1 могут использоваться при оценке генетической устойчивости популяции при передаче ВИЧ-1 парентеральным путем.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Вспышка ВИЧ-инфекции в г.Лысьва. среди лиц, практикующих внутривенное применение психоактивных препаратов, возникла из одного источника и была вызвана вариантом ВИЧ-1 подтипа А, характерным для этой группы риска в России.

2. Выявлена и охарактеризована группа лиц (п=75), подвергавшихся риску заражения ВИЧ-1 парентеральным путем, но оставшихся не инфицированными.

3. Генотип CCR5A32/CCR5A32 сообщает высокий уровень устойчивости к заражению ВИЧ-1 подтипа А при парентеральном пути передачи.

4. Сочетание мутаций CCR5A32 и CCR2-64I в гетерозиготном состоянии сообщает высокий уровень устойчивости к заражению ВИЧ-1 подтипа А при парентеральном пути передачи.

Апробация работы состоялась 18 декабря 2003 года на совместном заседании отдела молекулярной вирусологии и совета по предварительной экспертизе диссертационных работ НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского РАМН. Материалы диссертации были доложены на 8-й Европейской конференции по клиническим аспектам и лечению ВИЧ-инфекции (г. Афины, 2001 г.) и на научно-практической конференции "ВИЧ-инфекция и вирусные гепатиты с парентеральным механизмом заражения: Эпидемиология, Профилактика, Диагностика, Клиника, Лечение" (г. Суздаль, 2001 г.).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 5 научных работ.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части, обсуждения, заключения, выводов и

списка литературы, включающего 213 библиографических ссылок. Работа изложена на 132 страницах, включая 21 рисунок и 14 таблиц.

Экспериментальная часть

Материалы и методы. В данной работе нами было сформировано и исследовано три группы лиц. Первую группу составили ВИЧ-инфицированные (п=114) выявленные на территории Пермской области в период с 1996 г. по 2000 г. Вторую группу составили здоровые доноры (п=186). Третья группа была обнаружена во время проведения эпидемиологического расследования вспышки ВИЧ-инфекции в г. Лысьва Пермской области среди лиц, практикующих внутривенное употребление психоактивных веществ. В данную группу, вошли наркоманы, употреблявшие психоактивные вещества совместно с ВИЧ-инфицированными, но оставшиеся не зараженными (группа «контактных» наркоманов; п-75).

Для всех трех исследуемых групп были определены аллельные состояния мутаций CCR5A32, «Ж2-641, SDFl-3'A и полиморфизма CCR5-59029A/G. Детекция мутаций CCR5A32 проводилась с помощью метода полимеразной цепной реакции (ПЦР). Присутствие мутантного аллеля CCR5 оценивали по появлению меньшего фрагмента, размером 157 нуклеотидных пар, который выявлялся либо одновременно с фрагментом дикого типа (гетерозиготное состояние мутантного аллеля) либо без него (гомозиготное состояние мутантного аллеля).

В случае мутаций «Ж2-641, SDFl-3'A и полиморфизма CCR5-59029A/G, представляющих собой точковую замену одного нуклеотида на другой, полученные ПЦР фрагменты обрабатывались специфической эндонуклеазой, вносящей или не вносящей разрыв в зависимости от наличия или отсутствия замены. В случае мутации CCR2-641 использовалась эндонуклеаза Fok I, SDFl-3'A - Mspl и в случае полиморфизма CCR5-59029A/G - эндонуклеаза МЫ.

Для серологического анализа сывороток крови ВИЧ-инфицированных наркоманов были использованы 2 синтетических олигопептида, гомологичные основному нейтрализующему эпигону gpl20 ВИЧ-1 - PI (RKSIHIGPGRAFYATGD), реагирующий с сыворотками, полученными от пациентов, инфицированных вариантами вируса подтипа В и Р2 (RTSVRIGPGQVFYKTGD), реагирующий с сыворотками, полученными от пациентов, инфицированных вариантами вируса подтипа A (Cheingsong-Popov, et aL, 1994). Твердофазный иммуноферментный анализ (ИФА) с использованием синтетических пептидов проводили по ранее описанному методу (Bobkova й а1., 2001).

Для определения подтипов генов env и gag ВИЧ-1 использовали метод оценки электрофоретической подвижности гетеродуплексов. Оценку результатов проводили, сравнивая электрофоретическую подвижность гетеродуплексов, образованных в результате отжига анализируемого образца со стандартными продуктами ПЦР подтипов А-Н (Delwart et al., 1993; Heyndiickx et al, 2000).

Фрагменты ДНК, соответствующие области гена gag ВИЧ-1, с координатами 1348- 1881 (координаты приведены для нуклеотидной последовательности гена gag ВИЧ-1 штамма НХВ2) были амплифицированы с помощью ПЦР с использованием двух пар праймеров: 5'-GACACCAAGGAAGCTCTAGATAA-3'/5'-

AGACAGGCTAATTTTTTAGGGA-3' - для первого раунда и 5'-ATGCTGAACATAGTGGGGGQACACC-3'/5'-AGCAAGGGTTTTGGCTTGAGG€-3' для второго.

Для определения нуклеотидных последовательностей обоих цепей ДНК ВИЧ-1 использовали коммерческий набор dRhodamin Terminator Cycle Sequecing Kit (Perkin Elmer, Великобритания). Нуклеотидные последовательности определялись с помощью автоматического секвенатора (ABI Prism 310 Genetic Analyser, Perkin Elmer, Великобритания). Полученные нуклеотидные последовательности обрабатывали с помощью Editview 1.0.1 программы (Macintosh, США). Филогенетический анализ нуклеотидных последовательностей проводили с помощью метода «ближайших соседей» с использованием программы Mega2 (Arizona State University, США).

Статистическая обработка данных проводилась с использованием программ «Basic Statistics» и «Nonparametric Statistics» из пакета STATISTICA (StatSoft Inc., Tulsa, USA). Первая программа использовалась при описании полученных распределений близких к нормальным, а также расчета среднего значения, медианы распределения, стандартного отклонение и 95% доверительного интервала. Вторая программа использовалась для определения статистической достоверности отличия полученных долей мутантных генотипов в исследуемых группах. Для оценки использовался односторонний критерий Фишера, уровень статистической значимости был определен как 0,05.

Сбор и обработку эпидемиологических данных, проводили совместно с заведующим лабораторией Пермского областного центра по профилактике и борьбе со СПИДом кандидатом медицинских наук С.Я.Зверевым и врачом лаборатории Ю.И-Аликиной. Выявление факторов риска, возможных мест заражения, а также эпидемиологических связей между ВИЧ-инфицированными проводили на основе опроса пациентов при сборе эпидемиологического анамнеза. Во время исследования

проводилась регистрация всех случаев ВИЧ-инфекции, выявленных в г.Лысьва, с указанием Ф.И.О., даты рождения, пола, места жительства, причин обследования, дат первого положительного результата на антитела к ВИЧ методом ИФА и иммуноблота, потенциального источника заражения, также фиксировались факторы риска заражения и сопутствующие заболевания (гепатиты В и С и др.). На основе полученных данных были составлены цепочки, отражающие эпидемиологические связи между пациентами.

1. Изучение вспышки ВИЧ-инфекции в гЛысьва Пермской области

1.1. Эпидемиологическая характеристика вспышки ВИЧ-инфекции в гЛысьва,

среди лиц практикующих внутривенное введение психоактивных препаратов.

Нами была обнаружена и исследована вспышка ВИЧ-инфекции в городе Лысьва Пермской области. В результате проведенного эпидемиологического расследования был установлен первый ВИЧ-инфицированный житель города, им стал пациент № 62 (номера лиц с диагнозом "ВИЧ-инфекция" даны в порядке их регистрации на территории Пермской области), мужчина 1978 г. рождения. Предположительным местом инфицирования № 62 была Тверь, где он употреблял наркотики совместно с местными жителями в период службы в армии с ноября 1996 г. по ноябрь 1998 г. Одновременно с ним, по-видимому, заразился его сослуживец, выявленный 27 ноября 1998 г. под № 59. После прохождения воинской службы пациенты № 59 и № 62 возвратились в Лысьву, где пациент №.62, продолжая внутривенное употребление психоактивных веществ, явился источником инфекции еще для двух человек (пациенты № 77 и № 84). Далее эпидемия продолжала распространяться, и на начало июня 1999 г. количество ВИЧ-инфицированных в Лысьве составило 26 человек. Схема распространения эпидемии ВИЧ-инфекции на начало июня 1999 г. в г.Лысьва представлена на рисунке 1 А. Поскольку до регистрации этих пациентов случаи ВИЧ-инфекции в г.Лысьва не выявлялись, по-видимому, все последующие случаи ВИЧ-инфекции были связаны между собой. Эпидемия ВИЧ-инфекции в городе продолжала развиваться, и в мае-июне 1999 г. было зарегистрировано максимальное количество ВИЧ-инфицированных. Затем в эпидемии наметился спад, а, начиная с апреля 2000 г., выявлялось уже не более одного инфицированного в месяц. Общее число ВИЧ-инфицированных в городе к 30 ноября 2000 г. составило 72 человека, из которых, по крайней мере, 60 были, по данным эпидемического расследования, инфицированы из одного источника. Схема распространения эпидемии, по данным на конец ноября 2000 г., представлена на рисунке 1Б.

Рис. 1А. Схема распространения эпидемии ВИЧ-инфекции в г.Лысьва на начало июня 1999 г. ВИЧ-инфицированные.

С ) - ВИЧ-инфицированная женщина I | - ВИЧ-инфицированный мужнина

- - совместное употребление наркотиков

• - половые контакты

Рис 1Б Схема распространения эпидемии ВИЧ-инфекции в гЛысьва на 30 ноября 2000 г

- номера на схеме обозначают ВИЧ - инфицированных, пронумерованных в порядке их регистрации на территории Пермской области • - половые контакты

- - совместное употребление наркотиков

{ - помечены ВИЧ-инфицированные, от которых был получен клинический материал

1.2. Обнаружение и характеристика группы «контактных» наркоманов -наркоманов, неоднократно подвергавшихся риску заражения ВИЧ-1 парентеральным путем, но оставшихся серонегативными.

За весь период проведения исследования с 1999 г. по 2003 г. практически единственным психоактивным препаратом, употребляемым внутривенно в Лысьве, являлся кустарно изготовляемый из маковой соломки жидкий опиат-содержащий наркотик, известный под названием "ханка". Употребление данного наркотического вещества представляет собой групповую акцию, сопряженную с высоким риском заражения при условии, что хотя бы один из ее участников вирусоноситель. Таким образом, все остальные потребители, кроме ВИЧ-позитивного, «контактировали» с ним и подвергались риску заражения. Лица, характеризующиеся таким риском заражения, но оставшиеся не инфицированными, составили группу «контактных» наркоманов. Под совместным употреблением наркотиков в данной работе подразумевается наличие хотя бы одного из перечисленных ниже факторов: а) использование группой потребителей наркотиков одного общего шприца или иглы для внутривенного введения наркотических веществ; б) распределение готовых для употребления наркотиков из общей емкости; в) промывание использованных шприцев в одной общей емкости с целью их дальнейшего применения; г) использование цельной крови для контроля качества (по отсутствию гемолиза) кустарно приготовленного раствора наркотика.

Схема, отражающая возможные эпидемиологические контакты, связанные с совместным употреблением психоактивных веществ, между ВИЧ-инфицированными и «контактными» наркоманами, по данным на начало июня 1999 г., представлена на рисунке 2. Рисунок представляет собой схему распространения эпидемии ВИЧ-инфекции в г.Лысьва (Рис. 1А), дополненную сведениями о 36 «контактных» наркоманах, принимавших психоактивные вещества совместно с ВИЧ-инфицированными, выявленных на начало июня 1999 г. (здесь и далее номера «контактных» наркоманов даны в соответствии с базой данных Пермского областного центра по профилактике и борьбе со СПИДом). По мере развития эпидемии ВИЧ-инфекции число «контактных» увеличивалось. Однако постепенно темпы вовлечения новых лиц в эпидемический процесс замедлились, и после августа 1999 г. появление новых лиц в группе «контактных» мы отмечали уже крайне редко. Дополнительно, параллельно с ростом числа «контактных» наркоманов, с июля 1999 г. начался обратный процесс: группа «контактных» наркоманов начала сокращаться за счет того, что некоторые ее члены становились ВИЧ-инфицированными. Однако в начале 2000 г. ситуация окончательно стабилизировалась, и изменения в составе этой группы прекра-

Рис. 2. Схема распространения эпидемии ВИЧ-инфекции в г.Лысьва на начало июня 1999г. ВИЧ-инфицированные и "контактные" наркоманы.

) | ( 3 - "контактные" наркоманы (м/ж)

-ВИЧ-инфицированные наркоманы (м/ж)

- - совместное употребление наркотиков

• - половые контакты

тились. Размер группы «контактных» на этот момент составил 75 человек. Начиная с этого момента, ни один член этой группы не был идентифицирован до настоящего времени как серопозитивный.

1.3. Формирование двух контрольных групп: группы ВИЧ-инфицированных и группы здоровых доноров.

В процессе работы нами было сформировано две контрольные группы ВИЧ-инфицированных и здоровых доноров. В группу ВИЧ-инфицированных вошли 114 человек, 38 из них было заражено в результате эпидемии ВИЧ-инфекции в г.Лысьва. Число ВИЧ-инфицированных наркоманов было увеличено за счет тех, кто был выявлен в других городах Пермской области (п=76) в период с 1996 г. по 1999 г. Группа, здоровых доноров была составлена из 186 человек, без хронических заболеваний и не находящихся в близком родстве.

2. Характеристика вируса, вызвавшего эпидемию в гЛысьва -

2.1. Анализ сывороток, полученных от ВИЧ-инфицированных наркоманов гЛысьва, методом иммуноферментного анализа.

Образцы сывороток были получены нами в период с 1999 г. по 2000 г. от 38 ВИЧ-инфицированных (26 мужчина и 12 женщин) - жителей г. Лысьва. Результаты анализа показали, что 33 из 38 сывороток (86,8%) принадлежали к серотипу А. Остальные 5 сывороток не реагировали ни с одним из двух пептидов. Поскольку в 1999-2000 гг. на территории России среди наркоманов циркулировали варианты ВИЧ-1, относящиеся только к двум подтипам гена env - А и В, которые легко дифференцируются с помощью УЗ-ИФА, можно было предположить, что вспышка ВИЧ-инфекции в г.Лысьва была вызвана вариантом ВИЧ-1 подтипа А.

2.2. Генотипирование образцов ДНК, полученных от ВИЧ-инфицированных наркоманов гЛысьва, методом сравнительной оценки электрофоретической подвижности гетеродуплексов для генов env и gag.

Полученные данные серотипирования были подтверждены результатами анализа 21 образца (включая 5 не серотипированных образцов) с помощью метода сравнительной оценки электрофоретической подвижности гетеродуплексов для генов env и gag, как описано в Материалах и методах. Исследования показали, что все исследуемые образцы вируса имели генотип gagA/envA Так же необходимо отметить, что среди исследованных образцов пять было получено от пациентов, для которых не

была установлена эпидемиологическая связь с основной вспышхой (№№ 82, 83,97,99, 299), однако все они также обладали генотипом gagA/envA.

2.3. Анализ первичной структуры областей гена gag, кодирующих участок белка р24, вариантов ВИЧ-1, выделенных в гЛысьва.

Для пяти ВИЧ-инфицированных обнаруженных в г.Лысьва (№№ 59, 74, 76, 80 и 88), нами был проведен анализ первичной структуры областей гена gag с координатами 1373-1861 (координаты приведены для нуклеотидной последовательности гена gag ВИЧ-1 штамма НХВ2). Данный участок, содержит 489 нуклеотидов и кодирует внутреннюю последовательность белка р24 с 64 по 22S аминокислоту.

Нами было проведено сравнение исследуемых нуклеотидных последовательностей гена gag между собой и с контрольными последовательностями, выделенными от наркоманов, зараженных российским вариантом вируса gag-подтипа А, выявленными на территории Белоруссии (гМогилев) - AF414006, Украины (rJCnee) - AF413987 и России - AF193277 (г.Калининград), а так же с образцами подтипа А, выделенными из Кении - A_KE.Q2317 и Сенегала - A_SE.SE8131. Также при сравнении использовался образец B_US.DH123, относящийся к подтипу В.

Исследования показали, что образцы № 74, 76, 80 полностью идентичны, № 88 отличается от них одной нуклеотидной заменой, а № 59 - двумя, генетическая вариабельность в пределах группы составила 0,24 (стандартное отклонение 0,21, 95% доверительный интервал располагается в промежутке от 0,09 до 0,39). Максимальное значение составило 0,6, минимальное - 0,0.

Далее группа нуклеотдных последовательностей, полученных из Лысъвы, сравнивалась с группой контрольных последовательностей образцов вируса gag-подтипа A (AF414006, AF413987, AF193277), выделенных ранее от наркоманов на территории СНГ. Среднее значение генетической вариабельности между этими двумя группами нуклеотидных последовательностей 1,00, что достоверно указывает (р=0,01) на то, что эпидемия ВИЧ-инфекции в Лысьве вызвана ВИЧ-1 подтипа А, характерным для Восточной Европы. Для сравнения, среднее значение генетической изменчивости между лысьвинскими последовательностями и вариантами ВИЧ-1 подтипа А из Кении и Сенегала составило 8,10.

Эти данные подтверждаются результатами филогенетического анализа нуклеотидных последовательностей, представленными на рисунке 3. Видно, что нуклеотидные последовательности гена gag, выявленные у наркоманов Лысьвы, в 1000 независимых построениях из 1000 образуют общую ветвь с ранее опубликованными

нуклеотидными последовательностями вариантов ВИЧ-1 подтипа А, выделенными в странах СНГ.

Рис. 3. Сравнение нуклеотидных последовательностей областей гена gag, кодирующих участок белка р24. Цифрами на ветви указано число независимых построений из 1000, при которых данные последовательности оказывались на одной ветви филогенетического дерева; приведены значения, превышающие 950. Анализ проводился с помощью метода ближайших соседей из пакета Mega 2.

Аминокислотные последовательности гена gag, кодирующие участок белка р24, представлены на рисунке 4. Результаты анализа показывают высокую степень гомогенности исследованных образцов, принадлежащих к подтипу А. Было обнаружено всего две аминокислотные замены: в образце № 88 аланин заменен на валин в положении 77, а в образце № 59 пролин была заменен на серии в положении 206.

Таким образом, на основании серологического анализа и генотипирования образцов нами было установлено, что эпидемия ВИЧ-инфекции в Лысьве была вызвана вирусом подтипа А. Анализ нуклеотидных последовательностей показал, что вирус, вызвавший данную вспышку, представляет собой вариант подтипа А, выявленный ранее в этой группе риска в нашей стране, а также в других странах СНГ.

Consensus A: AAMQMLKDTXNEEAAEWDRLHPVHAGPIPPGQMREPRGSDIAGTTSTPQEQIGWMTGNPPIPVGDIYKRWIILGLNKIVRM

Cons. IUDs A: ----------------------AQ---F----------------------------S

59. ----------------------AQ---F----------------------------S

74. ----------------------AQ---F----------------------------S

76: ----------------------AQ---F----------------------------S

80: ----------------------AQ—F----------------------------S

88: -------------V--------AQ---F----------------------------S

Consensus A: YSPVSILDIKQGPKEPFRDyVTDRFFKTLRAEQATQDVKNVJMTETLLVQNANPDCKSILRALGAGATLEEMMTACQGVGGPG

Cons. IUDs A: ---------R---------------------------------------------T------P------------------

59: ---------R---------------------------------------------T------S------------------

74. ---------r---------------------------------------------T------P------------------

76: ---------R---------------------------------------------Г------P------------------

80:---------R---------------------------------------------T------P------------------

88; ---------R---------------------------------------------T------P------------------

Рис. 3. Аминокислотные последовательности области гена gag, кодирующей участок белка р24, обнаруженные в образцах №№ 59, 74 76, 80 и 88 ВИЧ-инфицированных наркоманов г.Лысьва. Приведен консенсусный вариант подтипа А и консенсусный вариант IDU-A созданный на основе последовательностей, ранее выделенных от наркоманов, зараженных российским вариантом вируса gag-подтип. A (AF414006, AF413987 и AF193277).

3. Изучение распространения мутантных аллелей генов CCR2, CCR5 и SDF1 среди группы здоровых доноров

На первом этапе генетических исследований было необходимо выяснить распространенность мутантных аллелей СС155А32, ССЯ2-641, 80Р1-3'А и полиморфизма ССЯ5-59029А/0 в контрольной группе здоровых доноров (п=18б). Полученные значения представлены в таблице 1, для каждого значения рассчитан 95% доверительный интервал.

Таблица 1. Частоты встречаемости мутаций ССЯ5Д32, СС!12-<>41, ЗОП-З'Аи полиморфного варианта ССК5-590290 в группе здоровых доноров.

Мутации (количество проанализированных образцов) Частота встречаемости мутации 95% доверительный интервал

CCRSA32 (п=180) 0,100 ±0,031

CCR5-59029G (п=175) 0,400 ±0,051

CCR2-64I (п=176) 0,119 ±0,034

SDFl-3'A(n=162) 0,204 ±0,044

Примечание, п - объем выборки.

Следующим изученным параметром было распределение аллельных состояний мутаций CCR5A32, CCR2-64I, SDFl-3'А и полиморфизма CCR5-59029A/G.

Полученные значения представлены в таблице 4 (вместе со значениями, полученными для двух других исследуемых групп). Как видно из таблицы, в группе здоровых доноров представлены все аллельные состояния изученных нами мутации.

Поскольку гены CCR2 и CCR5 располагаются на хромосоме в непосредственной близости один от другого (8 тпн.), мутации CCR5A32, CCR2-64I и полиморфный вариант образуют сочетания и определенным образом сцеплены

между собой, образуя четыре гаплотипа: 1) мутация CCRSA32 на фоне полиморфного варианта CCR5-59029A (далее обозначаемый как R5A) 2) мутация CCR2-64I на фоне полиморфного варианта CCR5-59029A (R2A) 3) отсутствие мутаций CCR5A32 И CCR2-641 на фоне полиморфного варианта CCR5-59029A (R0A) 4) отсутствие мутаций

ССЯ5Л32 И СС112-641 на фоне полиморфного варианта ССЛ5-590290 (КОй). Так

гомозиготное состояние мутации ССЯ5Л32 является гаплотипом К5Л, располагающимся на двух хромосомах (обозначается далее как К5Л/К5Л). Распределение гаплотипов, полученное в группе здоровых доноров, представлено в таблице 2.

Таблица 2. Распределение гаплотипов образованных мутациями СС115Д32, ССЯ2-641 и полиморфизмом ССК5-59029Л/0 в группе здоровых доноров.

Гаплотипы Здоровые доноры Процентное содержание

ROA/ROA 24 13,7%

R0A/R0G 52 29,7%

R0G/R0G 27 15,4%

R5 A/ROA 15 8,6%

R5A/R0G 16 9,1%

R2 A/ROA 20» 11,4%

R2A/R0G 18 10,3%

R5A/R2A 2 1,1%

R5A/R5A 1 0,6%

Общее количество N=175 100%

Примечание п - объем выборки.

* - один человек из двадцати обладает генотипом Я2Л/К2Л (т.е. мутацией ССЯ2-641 в гомозиготном состоянии).

Таким образом, нами были получены данные о частотах встречаемости и распределениях аллельных состояний мутаций ССЯ5Д32, ССК2-641, БОРКЗ'А и полиморфного варианта ССК5-59029АЛ5 1в группе здоровых доноров. Анализ показал,

что полученные значения не демонстрируют существенных отличий от аналогичных значений, полученных для белого населения Европы и США (Dean et aL, 1996; McDermott et al., 1998; Samson et. al., 1996; Smith et al., 1997; Winkler et al., 1998). Также было исследовано распределение гаплотипов, образованных мутациями CCR5Ä32 и CCR2-64I и полиморфизмом CCR5-59029A/G в группе здоровых доноров. Частоты, определенные для тех гаплотипов, которые, можно было сопоставить с ранее опубликованными данными, также существенно не отличались от соответствующих цифр, полученных для людей европеоидной расы в Европе и США (Gonzalez et al., 1999).

4. Сравнение распределений мутантных аллелей генов CCR2, CCR5 и SDF1 в группах ВИЧ-инфицированных, здоровых доноров и «контактных» наркоманов.

Как было указано выше, нами были описаны и генетически охарактеризованы следующие группы: группа ВИЧ-инфицированных (n=114), группа здоровых доноров (n=186) и группа «контактных» наркоманов (n=75). Сравнение частот встречаемости аллелей в исследуемых группах приведено в Таблице 3.

Таблица 3. Частоты встречаемости мутаций и

полиморфного варианта CCR5-59029G в группах ВИЧ-инфицированных, здоровых доноров и «контактных» наркоманов.

Мутации Частота встречаемости мутации (95% доверительный интервал)

ВИЧ- инфицированные Здоровые доноры «Контактные» наркоманы

CCR5A32 0,104 (±0,042) 0,100 (±0,031) 0,144 (±0,057)

CCR5-59029G 0,394 (±0,07) 0,400 (±0,051) 0,300 (±0,077)

CCR2-64I 0,114 (±0,046) 0,119 (±0,034) 0,121 (±0,053)

SDFl-3'A 0,176 (±0,063) 0,204 (±0,044) 0,178 (±0,064)

Как следует из данных таблицы, значения частот распространения мутантных аллелей ССЯ2-64!, 8ЭР1-3'Л и варианта ССЯ5-590290 для всех исследованных групп,

практически одинаковы. Ни одно из отличий не является достоверным (р>0,5, во всех случаях).

Следующим изученным параметром было распределение аллельных состояний

мутаций ССК5Д32, ССК2-641, БОБ 1-3*А и полиморфизма СС115-59029А/0 в

исследуемых группах. Полученные значения представлены в таблице 4. Как следует из данных таблицы, процентные соотношения гетерозиготных аллельных состояний и состояний «дикого типа», варьируют незначительно. Ни одно из отличий не является достоверным (р>0,5, ВО всех Случаях). Дальнейший анализ данных показывает, что статистически достоверными являются только отличия по количеству носителей гомозиготных состояний аллеля Данные, характеризующие степень отличия,

между разными исследуемыми группами приведены в таблице 5.

Таблица 5. Сравнение числа обладателей гомозиготного СС115А32 генотипа в группах ВИЧ-инфицированных, здоровых доноров и группы «контактных» наркоманов.

Сравниваемые группы ВИЧ-инфицированные (п=101) Здоровые доноры (п=180) «Контактные» наркоманы (п=73)

ВИЧ- инфицированные (п=101)

Здоровые доноры (п=180) 0(0%У1(0,6%) р=0,64 -

«Контактные» наркоманы (п=73) 0(0%)/4(5,5%) р=0,029 1(0,6%)/4(5,5%) р=0,025

Примечание. Оценивается достоверность разницы числа обладателей гомозиготного генотипа в исследуемых группах. В каждой ячейке таблицы количества

обладателей гомозиготного генотипа в группах соотнесены друг с другом как

А(%УБ(%) (где А и Б - абсолютные значения лиц - носителей соответствующего аллельного состояния в группах по вертикали и горизонтали, соответственно), на следующей строке дано значение р по критерию Фишера, И - объем выборки.

Таблица 4. Аллельные состояния ССЯ5А32, ССИ2-641, ББРЬЗ'А мутаций и полиморфизма ССЯ5-59029АЛЗ в группах ВИЧ-инфицированных, здоровых доноров и «контактных» наркоманов.

Мутация Дикий тип* Гетерозигота Гомозигота

ВИЧ-инфици-рованные Здоровые доноры «Контактные» наркоманы ВИЧ-инфицн- рованные Здоровые доноры «Контактные» наркоманы ВИЧ-инфицированные Здоровые доноры «Контактные» наркоманы

ССЯ5Д32 80 (79,8%) 145 (80,6%) 56 (76,7%) 21 (20,8%) 34 (18,9%) 13 (17,8%) 0 1 (0,6%) 4 (5,5%)

ССЯ5: 59029А/0 35 (36,8%) 62 (35,4%) 33 (47,8%) 45 (47,4%) 86 (49,1%) 30 (43,5%) 15 (15,8%) 27 (15,4%) 6 (8,7%)

ССЯ2-641 73 (79,3%) 135 (76,7%) 50 (75,8%) 17 (18,5%) 40 (22,7%) 16 (24,2%) 2 (2,2%) 1 (0,6%) 0

БОР 1-3'А 46 (64,8%) 99 (61,1%) 45 (64,3%) 25 (35,2%) 60 (37%) 25 (35,7%) 0 3 (1,9%) 0

Примечание.

* - Под диким типом в случае полиморфизма ССЯ5-59029АЛЗ подразумевается генотип ССЯ5-59029А/ССЯ5-59029А обозначаемый как «аа».

Как следует из данных таблицы, полученные различия для обладателей гомозиготных состояний аллеля (ХЖ5Д32 в группе «контактных» наркоманов и остальных исследуемых групп статистически достоверны Это означает, что гомозиготный CCR5A32 генотип действительно обладает протективными свойствами при передаче ВИЧ-1

Помимо частот встречаемости мутаций ССК5Л32, ССК2-641, вОРЮ'А и полиморфизма CCR5-59029A/G и аллельных состояний, нами были рассмотрены гаплотипы, образованные сочетаниями аллелей с

полиморфизмом CCR5-59029A/G Данные об обнаруженных гаплотипах представлены в таблице 6

Таблица 6 Распределение гаплотипов образованных мутациями СС115А32. (ХЖ2-641 и полиморфизмом CCR5-59029A/G в группах ВИЧ-инфицированных, здоровых доноров и «контактных» наркоманов

Гаплотипы ВИЧ-инфицированные Здоровые доноры «Контактные» наркоманы

R0A/R0A 14 (15,7%) 24 (13,7%) 12(18,5%)

R0A/R0G 23 (25,8%) 52 (29,7%) 20 (30,8%)

ROG/R0G 15 (16,9%) 27 (15,4%) 6(9,2%)

R5 A/ROA 9 (10,1%) 15 (8,6%) 3 (4,6%)

R5A/R0G 8 (9%) 16 (9,1%) 4 (6,1%)

R2A/R0A 10**(11%) 20*(11,4%) 6 (9,2%)

R2A/R0G 10(11%) 18(10,3%) 6 (9,2%)

R5A/R2A 0 2(1,1%) 4 (6,1%)

R5A/R5A 0 1 (0,6%) 4(6,1%)

Общее количество N=89 N=175 N=65

Примечание п - объем выборки, * и *• - один и два человека обладают гаплотипом 1*2АЛ12А (т е мутацией ССЙ2-641 в гомозиготном состоянии)

Как видно из данных таблицы, некоторые процентные соотношения варьируют в исследуемых группах достаточно сильно. Однако при поиске сочетания, обладающего протективными свойствами, мы должны учитывать, что его частота в ряду от ВИЧ-инфицированных (группы, не выдержавшей отбора), через группу здоровых доноров (не подвергавшихся отбору) к группе всех «контактных» наркоманов (группа созданная отбором) должна расти. Именно такую картину мы видим в случае гомозиготного состояния мутации которое отсутствует у ВИЧ-инфицированных, составляет

0,6 процента в группе здоровых доноров и достигает 5,5% в группе «контактных» (См. таблицы 4, 5). Однако дальнейший анализ представленных в таблице значений показывает, что существует еще одна комбинация мутантных аллелей, распределенная аналогичным образом. Это гаплотип К5Л/К2Л (совокупность мутаций ССЖ5А32 и ССЯ2-641 в гетерозиготном состоянии на фоне полиморфного варианта ССЯ5-59029Л/ССК5-59029Л). Он отсутствует в группе ВИЧ-инфицированных, составляет 1,1 процента в группе здоровых доноров и достигает 6,1% в группе «контактных». Статистические значения, характеризующие степень отличия приведены в таблице 7.

Как следует из данных таблицы, полученные различия в частотах встречаемости гаплотипа R5A/R2A среди «контактных» наркоманов и остальных исследуемых группах, статистически достоверны. Это означает, что гаплотип R5A/R2A, включающий аллельные состояния СС115Л32/ССК5 И ССК2-641/ССЖ2 на фоне полиморфного варианта CCR5-59029A/CCR5-59029A, действительно обладает протективными свойствами при передаче ВИЧ-1 парентеральным путем.

Таким образом, в данной главе нами были описаны и генетически охарактеризованы следующие группы: группа ВИЧ-инфицированных группа

здоровых доноров (п=18б) и группа «контактных» н ар к ом ан^вй^р д н о кр атн о подвергавшихся риску заражения ВИЧ-1, но оставшихся не зараженными. В результате сравнения было обнаружено, что группа «контактных» наркоманов характеризуется высоким процентом гомозиготных состояний мутации достигающем 5,5% в

группе «контактных». Это означает, что гомозиготное состояние мутации действительно обладает протективными свойствами при передаче ВИЧ-1 парентеральным путем. Дальнейший генетический анализ группы «контактных» лиц позволил показать, что сочетание мутаций в гетерозиготном-

состоянии на фоне полиморфного варианта CCR5-59029A/CCR5-59029A (гаплотип R5A/R2A) также обладает протективными свойствами при передаче ВИЧ-1 парентеральным путем.

Таблица 7. Сравнение числа обладателей гаплотипа R5A/R2A (совокупность мутаций в гетерозиготном состоянии на фоне полиморфного варианта в группах ВИЧ-инфицированных, здоровых доноров и группы «контактных» наркоманов.

Сравниваемые группы ВИЧ-инфицированные (п=89) Здоровые доноры (11=173) «Контактные» наркоманы (п=65)

ВИЧ- инфицированные (п=89)

Здоровые доноры (п=173) 0(0%)/2(1,2%) р=0,43

«Контактные» наркоманы (п=65) 0(0%)/4{6,2%) р=0,030 2(1,2%)/4(6,2%) $=0,049

Примечание. В таблице оценивается статистическая достоверность разницы числа обладателей гаплотипа R5A/R2A в исследуемых группах В каждой ячейке таблицы количества обладателей гаплотипа R5A/R2A в группах соотнесены друг с другом как (где А и Б - абсолютные значения лиц - носителей соответствующего аллельного состояния в группах по вертикали и горизонтали, соответственно), на следующей строке дано значение р, рассчитанное по критерию Фишера, оценивающее достоверность различия обладателей гомозиготного генотипа в группах, выборки.

Обсуждение

Изученная нами эпидемия в г. Лысьва является примером вспышки ВИЧ-инфекции, возникшей из одного источника и вызванной попаданием вируса в среду наркоманов, внутривенно употребляющих психоактивные вещества. Как показали наши исследования, ее вызвал российский вариант вируса подтипа А. В пользу этого говорят как данные серотипирования, так и результаты анализа, полученные с помощью метода сравнительной оценки электрофоретической подвижности

гетеродуплексов для генов env и gag. Результаты прямого определения нуклеотидной последовательности области р24 гена gag также подтвердили эти данные и показали высокую степень генетической гомогенности вируса внутри группы лысьвенских образцов (генетическая вариабельность составила 0,24, стандартное отклонение 0,21). По данным эпидемиологического расследования, все ВИЧ-инфицированные, обнаруженные в г.Лысьва являлись наркоманами, заразившимися в результате внутривенного приема психоактивных препаратов.

Важнейшим и необходимым моментом работы было обнаружение среди наркоманов г.Лысьва, группы лиц, неоднократно подвергавшихся риску заражения ВИЧ-1, но остававшихся не заразившимися - «контактная» группа (Пг=75). В эту группу входили наркоманы, неоднократно употреблявшие психоактивные вещества совместно с ВИЧ-инфицированными. Правомочность выделения подобной группы, как устойчивой к заражению ВИЧ-1, была подтверждена в дальнейшем генетическим анализом. Так в работах, проведенных предыдущими исследователями, сообщалось, что важным фактором, свидетельствующим о том, что члены группы действительно подвергались риску заражения и их устойчивость может быть объяснена генетическими факторами, является высокое процентное содержание людей -обладателей гомозиготного состояния мутации CCR5A32 (обычно от 4 до 15%; Dean et al., 1996; Salkowitz et al, 2001; Gonzalez et aL, 1999). Таким образом, обнаруженный высокий процент гомозиготных состояний мутации обнаруженный в группе

«контактных» наркоманов (5,5%), подтверждают результаты эпидемиологических наблюдений и показывают, что члены этой группы действительно подвергались высокому риску заражения ВИЧ -1.

На следующем этапе исследований для изучения протективной роли мутаций CCR5A32, CCR2-64I и SDFl-3'A, а так же полиморфного варианта CCR5-59029A/G необходимо было провести сравнение полученных результатов с контрольными группами ВИЧ-инфицированных и здоровых доноров. Однако на момент исследования данные о распространении мутаций и полиморфного варианта

CCR5-59029A/G в России отсутствовали, сведения имелись только по частоте встречаемости мутантного аллеля CCR5A32 (Асеев и др., 1997; Галеева и др, 1998; Соломинский и др., 1997; Казеннова и др., 1998; Шадрина и др., 2000; Voevodin et aL, 1998; Yudinetal., 1998).

Нами было исследована группа, состоящая из 186 здоровых доноров (п=186), полученные данные о частотах аллелей

мы сравнили с аналогичными данными, полученными ранее. Частота встречаемости

мутации CCR5A32 составила 0,100 (95% доверительный интервал ±0,031), что соответствует частотам, полученным ранее на территории Российской Федерации. Ближайшее значение было получено для жителей Москвы (0,095, р=О,57) (Казеннова и др., 1998), частоты, полученные для остальных регионов России, чуть выше и располагаются в промежутке от 0,11 до 0,13 (Асеев и др., 1997; Соломинский и др., 1997; Voevodin et al., 1998; Yudin et al., 1998). Полученная нами частота также сходна (р>0,5) с аналогичными значениями, рассчитанными для белого населения Европы и США (0,092,) (Samson et al., 1996) Частота встречаемости аллеля CCR2-64I составила 0,119 (95% ДИ ±0,034). Это значение так же близко (р>0,5) к данным, полученным для белого населения США (Smith et al., 1997). С другой стороны полученное значение несколько выше аналогичного значения полученного для Дании (0,06, р=0,15) (EugenOlsen et al., 1998), и Бельгии (0,074, р=0,11) (Struyf et al., 2000). Однако для Греции частота мутации CCR2-64I составила (0,146, р=0, 10) (Papa et al., 2000), что превосходит полученное нами значение. Частота мутации в гене SDF1 составила 0,204 (95% ДИ ±0,044), что практически аналогично (р=0,95) данным, полученным для белого населения США (0,211) (Winkler et al, 1998). Частота встречаемости полиморфного варианта CCR5-59029G составила 0,4 (95% ДИ ±0,051), что так же идентично (р>0,5) рассчитанным ранее для белого населения США (0,43) (McDermott et al., 1998). Таким образом, данные о частотах встречаемости аллелей и

CCR5-59029G не показывают существенных отличий от значений, полученных ранее для представителей европеоидной расы в США и некоторых странах Европы.

В результате анализа распределения мутаций в группах ВИЧ-инфицированных (п=114), здоровых доноров (п=186) и «контактных» наркоманов (п=75) было установлено, что статистически достоверными в исследуемых группах являются только отличия по количеству носителей гомозиготных состояний аллеля (гашютип

R5A/R5A). Данный генотип отсутствует, как и следовало ожидать, у ВИЧ-инфицированных, составляет 0,6 процента в группе здоровых доноров и достигает 5,5% в группе «контактных». Достоверность имеющихся различий составила р=0,029 и р=0,025 при сравнении всей группы «контактных» наркоманов с группами ВИЧ-инфицированных и здоровых доноров (См. таблицу 5).

Как было указано ранее, в работах других исследователей уже отмечалось, что генотип CCR5A32/CCR5A32 сообщает устойчивость к заражению ВИЧ-1, однако эти данные были получены для полового пути передачи вируса (Dean et al., 1996). Парентеральный путь заражения изучался при анализе только групп людей, которым была перелита контаминированная вирусом кровь или ее отдельные продукты (Dean et

а1. 1996; Salkowitz et эй., 2001). Данные о протективной роли этого генотипа при передаче вируса при совместном приеме психоактивных препаратов внутривенно, через контаминированный раствор наркотика или оборудования для его изготовления или употребления, в литературе отсутствовали. Полученные нами данные показывают, что гомозиготный генотип действительно обладает протективными

свойствами при передаче ВИЧ-1 парентеральным путем.

Далее нами был проведен анализ гаплотипов, образованных сочетаниями мутаций ССК5А32 И ССЕ2-641 С ССЯ5-59029АУО полиморфизмом, в исследуемых группах. Оказалось, что гаплотип R5A/R2A (совокупность мутаций ССЖ5Д32 И ССЯ2-641 в гетерозиготном состоянии на фоне полиморфного варианта

59029А), демонстрирует- распределение, сходное с распределением гомозиготного состояния аллеля ССК5А32, снижающего вероятность заражения ВИЧ-1. Так гаплотип R5A/R2A отсутствовал в группе ВИЧ-инфицированных, составлял 1,1 процента в группе здоровых доноров и достигал 6,1% в группе «контактных». Достоверность имеющихся различий составила р=0,030 и р=О,049 при сравнении всей группы «контактных» наркоманов с группами ВИЧ-инфицированных и здоровых доноров (См. таблицу 7).

Как следует из данных таблицы, полученные различия в частотах встречаемости гаплотипа R5A/R2A среди «контактных» наркоманов и остальных исследуемых группах статистически достоверны. Это означает, что сочетание мутаций ССК5Л32 и CCR2-64I в гетерозиготном состоянии на фоне полиморфного варианта ССЯ5-59029А/ССЯ5-59029А (гаплотип R5A/R2A) действительно обладает протективными свойствами при передаче ВИЧ-1 парентеральным путем.

Полученные данные о протективной роли гомозиготного состояния аллеля и сочетаний мутантных аллелей в гетерозиготном

состоянии на фоне полиморфного варианта могут

использоваться при оценке генетической устойчивости популяции при передаче ВИЧ-1 парентеральным путем. Это особенно важно в условиях эпидемии ВИЧ-1-инфекции на территории Российской Федерации, где основным фактором риска заражения в настоящее время является практика внутривенного применения психоактивных препаратов.

Выводы

1. Частота встречаемости аллелей CCR5A32, CCR2-64I, SDFl-3'A И CCR5-59029G

среди здоровых доноров составляет 0,100 (95% доверительный интервал ±0,031), 0,119

соответственно.

2. Вспышка ВИЧ-инфекции в гЛысьва среди лиц, практикующих внутривенное применение психоактивных препаратов, возникла из одного источника и была вызвана вариантом ВИЧ-1 подтипа А, характерным для этой группы риска в России.

3. Выявлена и охарактеризована для долговременного наблюдения группа лиц (п=75), подвергавшихся риску заражения ВИЧ-1 парентеральным путем, но оставшихся не инфицированными.

4. Генотип ССИ5Д32/ССЯ5Д32 сообщает высокий уровень устойчивости к заражению ВИЧ-1 подтипа А при парентеральном пути передачи.

5. Частота встречаемости сочетания мутаций в гетерозиготном состоянии в группе «контактных» лиц была достоверно выше по сравнению с двумя контрольными группами здоровых доноров и ВИЧ-инфицированных наркоманов

что свидетельствует о протективном эффекте данного сочетания мутаций при заражении ВИЧ-1 подтипа А при парентеральном пути передачи.

Список публикаций по теме диссертации

1. Ryabov GS, Kazennova EV, Zverev SYa, Bobkov AF, Pokrovsky W, Weber JN. The homozygous CCR5A32 genotype accounts for high resistance of some injecting drug users (IDUs) to HTV-1 infectioa ХУШ European conferens on clinical aspects and treatment of HTV infection. Athens, Greece, 28-31 October 2001. Abstract P31. 2.. Рябов Г.С., Казеннова Е.В, Зверев СЯ., Покровский В.В., Бобков А.Ф. Генетический полиморфизм и ВИЧ-инфекция: генотип CCRSÄ32/CCR5A32 обеспечивает высокий уровень устойчивости при парентеральной передаче вируса. Тезисы научно-практической конференции- "ВИЧ-инфекция и вирусные гепатиты с парентеральным механизмом заражения: Эпидемиология, Профилактика, Диагностика, Клиника, Лечение". 13-15 ноября 2001 года, Суздаль.

3. Г.С.Рябов, Е.В.Казеннова, А.Ф. Бобков. Частота встречаемости аллелей CCR2-64I и SDF1-3,A, влияющих на развитие симптомов при ВИЧ-инфекции, среди жителей пМосквы. Генетика (2002), 2:278-280.

4. Г.С.Рябов, Е.В.Казеннова, Л.Б.Корепанова, Е.А-Мальцева, В.В.Жалнин, Л.А-Красникова, С.Я.Зверев, В.В.Покровский, А.Ф.Бобков, ДясИВебер. Изучение вспышки ВИЧ-инфекции в городе Лысьва Пермской области: гомозиготный генотип CCR5A32/CCR5A32 обеспечивает высокий уровень устойчивости при парентеральной передаче вируса. Вопросы вирусологии (2002), 4:13-16.

5. А.Ф.Бобков, Е.В.Казеннова, Л.М.Селимова, ТАХанина, КН.Ладная, М.Р.Бобкова, А.В.Кравченко, Г.С.Рябов, А.Л.Суханова, Е.В.Буравцова, В.В.Покровский, Дж.Н.Вебер. Молекулярно-вирусологические особенности эпидемии ВИЧ-инфекции в России и других странах СНГ. Вестник РАМН (2003), 16:83-85.

Издательство ООО "МАКС Пресс". Лицензия ИД № 00510 от 01.12.99 г. Подписано к печати 26.01.2004 г. Формат 60x90 1/16. Усл.печл. 1,75. Тираж 90 экз. Заказ 116. Тел. 939-3890,939-3891,928-1042. ТелУФакс 939-3891. 119992, ГСП-2, Москва, Ленинские горы, МГУ им. М.В Ломоносова.

»-21 33

РНБ Русский фонд

2004-4 27454

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Рябов, Григорий Сергеевич

ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

Глава 1. Вирус иммунодефицита человека первого типа.

1.1. Строение вириона ВИЧ-1.

1.2. Вирусные белки и их роль в жизненном цикле ВИЧ-1.

1.3. Деление вируса на подтипы.

1.4. Эпидемия ВИЧ-1-инфекции в России.

Глава 2. Хемокиновые рецепторы как корецепторы проникновения

ВИЧ в клетку.

2.1. Взаимодействие ВИЧ-1 с клеткой.

2.2. Хемокиновая система регуляции.

2.2.1 Классификация хемокинов.

2.2.2. Роль хемокинов в организме человека.

2.2.3. Хемокиновые рецепторы используемые ВИЧ-1.

2.3. Хемокиновый рецептор CCR5.

2.3.1. Организация гена хемокинового рецептора CCR5.

2.3.2. Структура хемокинового рецептора CCR5.

2.3.3. Возможные варианты использования хемокинового рецептора CCR5 в терапии ВИЧ-инфекции.

Глава 3. Мутации генов хемокиновой системы регуляции, оказывающие влияние на ВИЧ-инфекцию.

3.1. Мутации в гене хемокинового рецептора CCR5, оказывающие влияние на ВИЧ-инфекцию.

3.1.1. Делеция в открытой рамке считывания гена хемокинового рецептора CCR5.

3.1.2. Другие мутации гена хемокинового рецептора CCR и его лигандов.

3.2. Мутации других генов хемокиновой системы регуляции, оказывающие влияние на ВИЧ-инфекцию.

3.3. Гаплотипы гена хемокинового рецептора CCR5.

3.4. Описание групп, исследовавшихся при изучении роли мутаций влияющих на вероятность заражения и развитие ВИЧ.

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ.

Глава 1. Материалы и методы.

1.1. Метод получения «грубых» лизатов мононуклеарных клеток периферической крови.

1.2. Метод детекции мутантного аллеля гена CCR-5.

1.3. Метод детекции мутантного аллеля гена CCR-2.

1.4. Метод детекции мутантного аллеля гена SDF1.

1.5. Метод детекции полиморфизма CCR5-59029A/G, располагающегося в промоторной области гена CCR5.

1.6. Электрофоретический анализ препаратов ДНК.

1.7. Серологический метод определения подтипов вируса иммунодефицита человека первого типа.

1.8. Использование метода сравнительной электрофоретической подвижности гетеродуплексов для определения подтипа вируса.

1.9. Амплификация нуклеотидных последовательностей области р24 гена gag.

1.10. Определение и анализ нуклеотидной последовательности фрагментов ДНК.

1.11. Статистическая обработка данных.

1.12. Сбор эпидемиологических данных.

1.13. Формирование группы «контактных» наркоманов.

Глава 2. Изучение вспышки ВИЧ-инфекции в гЛысьва

Пермской области.

2.1. Необходимая информация о г. Лысьва.

2.2. Эпидемиологическая характеристика вспышки ВИЧ-инфекции в г. Лысьва, среди лиц практикующих внутривенное введение психоактивных препаратов.

2.3. Особенности употребления психоактивных препаратов в г.Лысьва.

2.4. Обнаружение и характеристика группы «контактных» наркоманов -наркоманов, неоднократно подвергавшихся риску заражения ВИЧ-1 парентеральным путем, но оставшихся серонегативными.

2.5. Формирование двух контрольных групп: группы

ВИЧ-инфицированных и группы здоровых доноров.

Глава 3. Характеристика вируса, вызвавшего эпидемию в гЛысьва.

3.1. Анализ сывороток, полученных от ВИЧ-инфицированных наркоманов г.Лысьва, методом иммуноферментного анализа.

3.2. Генотипирование образцов ДНК, полученных от ВИЧ-инфицированных наркоманов г.Лысьва, методом сравнительной оценки электрофоретической подвижности гетеродуплексов для генов env и gag.

3.3. Анализ первичной структуры областей гена gag, кодирующих участок белка р24, вариантов ВИЧ-1, выделенных в г.Лысьва.

Глава 4. Изучение распространения мутантных аллелей генов

CCR2, CCR5 и SDF1 среди группы здоровых доноров.

Глава 5. Изучение распространения мутантных аллелей генов

CCR2, CCR5 и SDF1 среди ВИЧ-инфицированных наркоманов и группы «контактных».

5.1. Изучение распространения мутантных аллелей генов CCR2,

CCR5 и SDF1 среди ВИЧ-инфицированных наркоманов.

5.2. Изучение распространения мутантных аллелей генов CCR2,

CCR5 и SDF1 в группе «контактных».

5.2.1. Выделение двух подгрупп в группе «контактных» наркоманов.

5.2.2. Изучение распространения мутантных аллелей генов CCR2, CCR5 и SDF1 среди группы «контактных» наркоманов и двух выделенных подгрупп.

5.3. Сравнение распределений мутантных аллелей генов CCR2, CCR5 и SDF1 в группах ВИЧ-инфицированных, здоровых доноров и «контактных» наркоманов.

ОБСУЖДЕНИЕ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Влияние мутантных аллелей генов CCR5, CCR2 и SDF1 человека на ВИЧ-инфекцию"

Цель и задачи исследования. Основной целью настоящей работы явилось изучение влияния мутаций генов CCR5, CCR2 и SDF1 и их сочетаний на возможность заражения ВИЧ-1 лиц, практикующих внутривенное введение психоактивных веществ.

В связи с этим в задачи исследования входило:

2. Генетическая характеристика вируса, вызвавшего эпидемию.

3. Наблюдение за ходом эпидемии, выделение группы наркоманов, неоднократно подвергавшихся риску заражения вирусом, но остававшихся не заразившимися («контактной» группы), и мониторинг этой группы на протяжении трех лет.

4. Изучение частот встречаемости аллельных состояний и сочетаний мутантных аллелей CCR5A32, CCR2-64I, SDFl-3'А и полиморфизма CCR5-59029A/G в группе здоровых доноров.

5. Изучение частот встречаемости, аллельных состояний и сочетаний мутантных аллелей CCR5A32, CCR2-64I, SDFl-3'А и полиморфизма CCR5-59029A/G среди «контактных» лиц и ВИЧ-инфицированных наркоманов.

6. Сравнение значений частот встречаемости, аллельных состояний и сочетаний мутантных аллелей CCR5A32, CCR2-64I, SDFl-3'А и полиморфизма CCR5-59029A/G, полученных в группах ВИЧ-инфицированных и здоровых доноров, с аналогичными значениями, полученными для группы «контактных» наркоманов.

Научная новизна работы. В результате проведенной работы были определены частоты встречаемости аллелей CCR5A32, CCR2-64I, SDFl-3'А и полиморфизма CCR5-59029A/G среди здоровых доноров жителей Российской Федерации. Была обнаружена и охарактеризована группа «контактных» наркоманов, неоднократно подвергавшихся риску заражения ВИЧ-1 подтипа А парентеральным путем, но остававшихся не зараженными. Получены данные о влиянии мутаций CCR5A32, CCR2-64I, SDFl-3'А и CCR5-59029A/G полиморфизма, а также их сочетаний на вероятность заражения при парентеральном пути передачи ВИЧ-1 подтипа А.

Практическая ценность.

1. Полученные частоты встречаемости мутаций CCR5A32, CCR2-64I, SDFl-3'А и полиморфизма CCR5-59029A/G среди здоровых доноров могут быть использованы в качестве стандартных значений при дальнейшем изучении различных групп, подвергавшихся риску заражения ВИЧ-1, а также для оценки генетической устойчивости популяции.

3. Полученные данные о протективной роли гомозиготного состояния аллеля CCR5A32 и сочетаний мутантных аллелей CCR5A32 и CCR2-64I в гетерозиготном состоянии на фоне полиморфного варианта CCR5-59029A/CCR5-59029А при парентеральном пути передачи вируса на заражение ВИЧ-1 могут использоваться при оценке генетической устойчивости популяции при передаче ВИЧ-1 парентеральным путем.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение Диссертация по теме "Молекулярная биология", Рябов, Григорий Сергеевич

выводы

1. Частота встречаемости аллелей CCR5A32, CCR2-64I, SDFl-3'А и CCR5-59029G среди здоровых доноров составляет 0,100 (95% доверительный интервал ±0,031), 0,119 (±0,034), 0,204 (±0,044) и 0,400 (±0,051), соответственно.

2. Вспышка ВИЧ-инфекции в г.Лысьва среди лиц, практикующих внутривенное применение психоактивных препаратов, возникла из одного источника и была вызвана вариантом ВИЧ-1 подтипа А, характерным для этой группы риска в России.

4. Генотип CCR5A32/CCR5A32 сообщает высокий уровень устойчивости к заражению ВИЧ-1 подтипа А при парентеральном пути передачи.

5. Частота встречаемости сочетания мутаций CCR5A32 и CCR2-64I в гетерозиготном состоянии в группе «контактных» лиц была достоверно выше по сравнению с двумя контрольными группами здоровых доноров и ВИЧ-инфицированных наркоманов (р=0,049 и р=0,030, соответственно), что свидетельствует о протективном эффекте данного сочетания мутаций при заражении ВИЧ-1 подтипа А при парентеральном пути передачи.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Таким образом, в результате проведенных исследований была впервые обнаружена и охарактеризована группа «контактных» наркоманов, неоднократно подвергавшихся риску заражения вирусом, но остававшихся не заразившимися (п=75). От исследованных ранее групп, также состоящих из не заразившихся ВИЧ-1 людей, ее отличает ряд факторов.

В первую очередь это высокая степень гомогенности как по возрасту, так и по этнической принадлежности, что позволяет уменьшить как генетическую, так и социальную гетерогенность, препятствующую выявлению генетических признаков влияющих на заражение ВИЧ-1. Во-вторых, все члены группа «контактных» наркоманов, неоднократно подвергались риску заражения ВИЧ-1 парентеральным путем. В аналогичных работах исследовалась устойчивость к заражению ВИЧ-1 при риске заражения половым путем или при переливании контаминированной вирусом крови или ее компонентов. Также необходимо отметить, важность исследования устойчивости к ВИЧ-1 подтипу А, что особенно актуально, поскольку, не менее 93% всех случаев ВИЧ-инфекции в нашей стране вызваны именно этим подтипом. Более того, изучение представителей европеоидной расы, инфицированных штаммом ВИЧ-1, характерным для Африканского континента, представляет особый интерес, так как в последнее время отмечается резкий рост числа случаев ВИЧ-инфекции, вызванных вариантами ВИЧ-1 подтипов, отличных от В, в Европе и США. Можно предположить, что африканские варианты вскоре могут начать доминировать и в этих странах, в первую очередь, из-за массовой миграции населения в направлении Юг-Север. Все это делает изучение наследственных факторов, влияющих на инфицирование вариантами ВИЧ-1 подтипов, отличных от В, важным моментом исследования. Таким образом, обнаруженная и охарактеризованная группа наркоманов, неоднократно подвергавшихся риску заражения ВИЧ-1, но оставшихся не инфицированными, является уникальной и может быть использована для дальнейшего изучения генетических факторов влияющих на вероятность заражения ВИЧ-1.

В работе были получены значения частот встречаемости мутаций CCR5A32, CCR2-64I, SDFl-3'А и полиморфизма CCR5-59029A/G среди здоровых доноров, которые могут быть использованы в качестве стандартных значений при дальнейшем изучении различных групп, подвергавшихся риску заражения ВИЧ-1, а также для оценки генетической устойчивости популяции. Значения частот встречаемости мутантных аллелей трех последних мутантных аллелей были определены впервые на территории Российской Федерации.

Полученные данные о протективной роли гомозиготного состояния аллеля CCR5A32 и сочетаний мутантных аллелей CCR5A32 и CCR2-64I в гетерозиготном состоянии на фоне полиморфного варианта CCR5-59029A/CCR5-59029A могут использоваться при оценке генетической устойчивости популяции при передаче ВИЧ-1 парентеральным путем. Это особенно важно в условиях эпидемии ВИЧ-1-инфекции на территории Российской Федерации, где основным фактором риска заражения в настоящее время является практика внутривенного применения психоактивных препаратов.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Рябов, Григорий Сергеевич, Москва

1. Асеев М.В., Шави А., Дин М., Баранов B.C. Популяционные особенности частот мутации гена хемокинового рецептора CKR-5, определяющего чувствительность к вирусу СПИДа // Генетика. -1997. -Т.ЗЗ. -С. 1724-1726.

2. Бобков А.Ф., Покровский ВВ., Селимова Л.М. и др. Генетическое разнообразие вирусов иммунодефицита человека первого типа (ВИЧ-1) на территории России//ДАН. -1997. -Т.353. -С.822-824.

3. Бобков А.Ф., Покровский В.В., Селимова Л.М. и др. Генетическая характеристика вариантов вируса иммунодефицита человека первого типа, вызвавших эпидемию среди наркоманов в странах СНГ// Вопр. Вирусол. -1998. -Т.43. -С.253-256.

4. Бобков АФ., Казеннова Е.В., Селимова Л.М. и др. Субтипы ВИЧ-1 в России// Журн. микробиол. -1999. -№ 1. -С.43-45.

5. Бобков АФ., Зверев С.Я., Бобкова М.Р. и др. Эпидемиологическая и генетическая характеристика первых 40 случаев ВИЧ-инфекции на территории пермской области// Вопр. вирусол. -2000. -Т.47 -С. 18-21.

6. Бобков А.Ф., Казеннова Е.В., Бобкова М.Р. и др. Молекулярно-эпидемиологическая характеристика ВИЧ-1 на территории России// Вестник Российской Академии Медицинских наук. -2002. -Т.8. -С. 18-20.

7. Бобкова М.Р., Бобков А.Ф., Буравцова Е.В. и др. Молекулярно-эпидемиологическая характеристика основных очагов эпидемии ВИЧ-инфекции среди наркоманов в России// Вопр. Вирусол. -1999. -Т.44. -С.220-224.

8. Бобкова MP., Самохвалов ЕИ., Кравченко АВ. и др. Генетические варианты вируса гепатита С циркулирующие в среде ВИЧ-инфицированных наркоманов в России// Вопр. Вирусол. -2002. -Т.47. -С. 15-20.

9. Галеева А.Р., Хуснутдинова Е.К., Сломинский П.А., Лимборская С.А. Распространенность делеции 32 пн в гене рецептора хемокинов CCR5 в популяциях волго-уральского региона// Генетика. -1998. -Т.34. -С.1160-1162.

10. Гланц С. Медицинская статистика. М.: Практика, 1999.

11. Казеннова Е.В., Аароне Э., Селимова Л.М. и др. Сравнительный анализ распространения мутантного аллеля гена, кодирующего хемокинов ый рецептор CCR5, среди инфицированных и не инфицированных ВИЧ-1 лиц в России // Вопр. вирусол. -1998. -Т.43. -С.30-32.

12. Соломинский ПА., Шадрина МИ., Спицин ВА. и др. Простой и быстрый способ диагностики делеции в 32 нуклеотида в гене хемокинового рецептора CCR5// Генетика. -1997. -Т.ЗЗ. -С. 1596-1598.

13. Маниатис Т., Фрич Э., Сэмбрук Д. Методы генетической инженерии. Молекулярное клонирование.- М.: Мир, 1984.

14. Научная деятельность ВОЗ. Вирус иммунодефицита человека// Бюллетень ВОЗ 1986,- Т.64, № I.-C.8-9.

15. Покровский В.В., Янкина З.К. Эпидемиологическое расследование первого случая СПИД, выявленного у гражданина СССР// Журнал микробиологии,-1987.- №12.- С.8-11.

16. Покровский В.В., Ладная Н.Н., Буравцова Е.В. ВИЧ-инфекция// Информационный бюллетень. -1999.-№ 15.

17. Покровский В В., Ладная Н.Н., Буравцова Е.В. и др. ВИЧ-инфекция// Информационный бюллетень. -2002.-№ 25.

18. Смольская Т.Т//Журн.микробиол.-1997.-№ 1.-С.45-48.

19. Шадрина МИ., Копылов ВМ., Милосердова ОВ. и др. Анализ делеции 32 пн в гене рецептора хемокинов CCR5 у лиц, инфицированных ВИЧ-1, из г.Москвы // Генетика. -2000. -Т.36 -С.718-720.

20. Aarons Е., Fernandez М., Rees A. et al. CC-chemokine receptor 5 genotypes and in vitro susceptibility to ШУ-1 of a cohort of British ШУ-exposed uninfected homosexual men // AIDS. -1997. -V.l 1. -P.688-689.

21. Aiken C, Konner J, Landau NR, et al. Nef induces CD4 endocytosis: Requirement for a critical dileucine motif in the membrane-proximal CD4 cytoplasmic domain// Cell -1994. V.76. -P.853-864

22. Ali S., Palmer AC., Baneijee В., et al. Examination of the function of RANTES, МПМ alpha, and MlP-lbeta following interaction with heparin-like glycosaminoglycans// J Biol Chem. -2000. -V.275. -P.l 1721-11727.

23. Alkhatib G., Combadiere C., Broder CC., et al. CC CKR5: A RANTES, MlP-la, MIP-ip receptor as a fusion cofactor for macrophage-tropic ШУ-1// Science. — 1996. -V.272. -P. 1955-1958.

24. Aramori I., Ferguson SS., Bieniasz PD., et al. Molecular mechanism of desensitization of the chemokine receptor CCR-5: receptor signaling and internalization are dissociable from its role as an ШУ-1 co-receptor// EMBO J. -1997. -V.16. -P.4606-4616.

25. Arya S.K., Ginsberg C.C., Davis-Warren A., D'Costa J. In vitro phenotype of SDF1 gene mutant that delays the onset of human immunodeficiency virus disease in vivo// J. Hum. Virol. -1999. -V.2. -P. 133-138.

26. Asante-Appiah E., Skalsa M. Molecular mechanisms in retrovirus DNA integration// Antiviral Res. -1997 .-V.36. -P. 139-156.

27. Ashom P, McQuade TJ, Thaisrivongs S, et al. An inhibitor of the protease blocks maturation of human and simian immunodeficiency viruses and spread of infection// Proc Natl Acad Sci USA -1990. V.87. -P.7472-7476.

28. Balotta C., Bagnarelli P., Violin M. et al. Homozygous delta 32 deletion of the CCR-5 chemokine receptor gene in an HIV-1-infected patient// AIDS. -1997. -V.ll. -P.F67-71.

29. Barre-Sinussi F., Cherman J.C., Rey F. et al. Isolation of T-lymphotrofic retrovirus from patient at risk to AIDS// Science.-1983,- V.220.- P.868-871.

30. Bargatze RF., Butcher EC. Rapid G-protein related activation event involved in lymphocyte binding to high endothelial venules// J. Exp. Med. -1993. -V.178. -P. 367-372.

31. Benkirane M., Jin DY., Chun RF., et al. Mechanism of transdominant inhibition of CCR5-mediated HIV-l infection by ccr5delta32// J Biol Chem. -1997. -V.272. -P.30603-30606.

32. Berger EA., Murphy PM., Farber JM. Chemokine receptors as HIV-l coreceptors: role in viral entry, tropism and disease// Ann Rev Immunol. -1999. -V.17. -P.657-700.

33. Berson J., Doms RW. Structure-function of the HIV-l coreceptors// Semin.Immunol. -1998. V.10. -P.237-248.

34. Bleul CC., Wu L., Hoxie JA., et al. The HIV coreceptors CXCR4 and CCR5 are differentially expressed and regulated on human T lymphocytes// Proc. Natl. Acad. Sci. USA. -1997. -V.94. -P. 1925-1930.

35. Bobkov A., Cheingsong-Popov R., Selimiva L., et al. An HIV type 1 epidemic among injecting drug users in the former Soviet Union caused by a homogeneous subtype A strain// AIDS Res.Hum.Retroviruses. -1997. -V.13. -P.1195-1201.

36. Bobkova M., Kazennova E., Selimova L., et al. Serological approaches to subtyping of HTV-1 in injecting drug users in Russia: evidence of subtype homogeneity at the main sites of the epidemic// Int J STD&AIDS. -2001. -V.12. -P.34-40.

37. Bowman EP. Developmental switches in chemokine response profiles during В cell differentiation and maturation// J. Exp. Med. -2000. -V.191. -P. 1303-1318.

38. Brambilla A, Villa C., Rizzardi G. et al. // J.Infect. Dis. -2000. -V.182. -P.311-315.

39. Brodine SK., Starkey MJ., Shaffer RA, et al. Diverse HIV-l subtypes and clinical, laboratory and behavioral factors in a recently infected US military cohort// AIDS. -2003. -V.17. -P.2521-2527.

40. Bryant M, Ratner L. Myristoylation-dependent replication and assembly of human immunodeficiency virus 1// Proc Natl Acad Sci USA -1990. V.87. -P.523-527

41. Bushman FD, Fujiwara T, Craigie R. Retroviral DNA integration directed by HIV integration protein in vitro// Science -1990. V.249. -P.1555-1558.

42. Campbel et al. Chemokines and the arrest of lymphocytes rolling under flow conditions// Science. -1998. -V.279. -P. 381-384.

43. Capon DJ, Ward RH. The CD4-gpl20 interaction and AIDS pathogenesis// Annu Rev Immunol-1991. V.9. -P.:649-678.

44. Carrington M., Kissner Т., Gerard В., et al. Novel alleles of chemokine receptor gene CCR5// Am. J. Hum. Genet. -1997. -V.61. -P. 1261-1267.

45. Cheingsong-Popov R., CallowD., Beddows S., et al. Serotyping HIV-l by antibody binding to the V3-loop: relationship to viral genotype// Ibid.- 1994,- Vol.- 10,-P. 1379-1386.

46. Chelli M., Alizon M. Determinants of the trans-dominant negative effect of truncated forms of the CCR5 chemokine receptor// J Biol Chem. -2001. -V.276. -P.46975-46982.

47. Choe H., Farzan M., Sun Y., et al. The beta chemokine receptors CCR3 and CCR5 facilitate infection by primary HIV-l isolates// Cell. -1996. -V.85. -P.621-628.

48. Clavel F., Guetard F., Brun-Vezinet S., et al. Isolation of a new human retrovirus from West African patients with AIDS// Science. -1986. -V.233. -P.343-346.

49. Cohen EA, Dehni G, Sodroski JG, et al. Human immunodeficiency virus vpr product is a virion-associated regulatory protein// J Virol -1990. V.64. -P.3097-3099.

50. Cudmore S., Reckman I., Way M. Viral manipulations of the actin cytoskeleton// Trends Microbiol. -1997. -V.5. -P. 142-148.

51. Darlix JL., Gabus C., Nugeyre M., et al. Cis elements and trans-acting factors involved in the RNA dimerization of the human immunodeficiency virus HIV-l//J.Mol.Biol.-1990.-V.216.-P.689-699.

52. Dean, M., Carrington, M., Winkler, C., et al. Genetic restriction of HIV infection and progression to AIDS by a deletion allele of the CKR5 structural gene// Science. -1996. -V.273. -P. 1856-1862.

53. Delwart E., Shpaer E.G., Louwagie J. Genetic relationships determined by a DNA heteroduplex mobility assay analysis of HIV-l env genes// Science. -1993. -V.262. -P. 1257-1261.

54. Delwart EL., Sheppard HW., Walker BD., et al. Human immunodeficiency virus type 1 evolution in vivo tracked by DNA heteroduplex mobility assays// J.Virol. -1994. -V.68. -P.6672- 6683.

55. Deng H., Liu R., Ellmier W., et al. Identification of a major co-receptor for primary isolates of HIV-l// Nature. -1996. -V.381. -P.661-666.

56. Deng HK., Unutmaz D., KewalRomani VN. & Littman DR. Expression cloning of new receptors used by simian and human immunodeficiency virus// Nature. -1997. -V.388. -P.296-300.

57. De Silva F., Venturini D., Wagner E., et al. CD4-independent infection of human В cells with HIV type 1: detection of unintegrated viral DNA// AIDS Res.Hum.Retroviruses. -2001. -V.17. -P.1585-1598.

58. Devreotes PN. & Zigmond SH. Chemotaxis in eukaryotic cells: a focus on leucocytes and dictyostelium// Ann. Rev. Biol. -1988. -V.4. -P.649-587.

59. Dieu MC., et al. Selective recruitment of immature and mature dendritic cells by distinct chemokine expressed in different anatomic sites// J. Exp. Med. -1998. -V.188.-P. 373-386.

60. Doranz, B.J., Rucker, J., Yi, Y., et al. A dual-tropic primary HTV-l isolate that uses fiisin and the (3-chemokine receptors CKR-5, CKR-3, and CKR-2b as fusion cofactors// Cell. -1996. -V.85. -P.1149-1158.

61. Dragic Т., Litwin V., Allaway G.P., et al. HIV-1 entry into CD4+cells is mediated by the chemokine receptor CC-CKR-5// Nature. -1996. -V.381. -P.667-673.

62. Dumonceaux J., Nosole S., Chanel L., et al. Spontaneous mutation in the env gene of the human immunodeficiency virus type 1 NDK isolate are associated with a CD4-independent entry phenotype// J.Virol. -1998. -V.72. -P.512-519.

63. Esser U., Speck RF., Deen КС., et al. Molecular function of the CD4 D1 domain in coreceptor-mediated entry by HIV type 1// AIDS Res Hum Retroviruses. -2000. -V.16. -P. 1845-1854.

64. Esteves A., Parreira R, Venenno Т., et al. Molecular epidemiology of HTV type 1 infection in Portugal: high prevalence of non-B subtypes// AIDS Res Hum Retroviruses. -2002. -V.18. -P.313-325.

65. Fauci, A. Host factors and the pathogenesis of HIV-induced disease// Nature. -1996. -V. 384. -P. 529-534.

66. Feng S, Holland EC. HIV-l tat trans-activation requires the loop sequence within tar// Nature -1988. V.334. -P. 165-167.

67. Feng Y., Broder C., Kennedy P., et al. HIV-l entry cofactor:Functional cDNA cloning of a seven-transmembrane G protein-coupled receptor// Science. -1996. -V.272. -P.872-877.

68. Fouchier R, Groenink N., Kootstra A., et al. Phenotype-associated sequence variation in the third variable domain of the human immunodeficiency virus type 1 gpl20 molecule// J.Virol.- 1992. -V.66. -P.3183-3187.

69. Franke EK, Yuan HE, Luban J. Specific incorporation of cyclophilin A into HIV-l virions// Nature -1994. V.372. -P.359-362.

70. Franke EK, Luban J. Inhibition of HIV-l replication by cyclosporine A or related compounds correlates with the ability to disrupt the Gag-cyclophilin A interaction// Virology -1996. V.222. -P.279-282.

71. Gabuzda DH., Lawrence K., LanghofF E., et al. Role of vif in replication of human immunodeficiency virus type 1 in CD4+ T lymphocytes// J Virol. -1992. -V.66. -P.6489-6495.

72. Gallo R.C. Frequent detection and isolation of cytopathic retroviruses (HTLV-Ш) from patient with AIDS and at risk for AIDS// Science. -1984. -V.224. -P.500-503.

73. Ganju RK., Dutt P., Wu L., et al. Beta-chemokine receptor CCR5 signals via the novel tyrosine kinase RAFTK// Blood. -1998. -V. 91. -P.791-797.

74. Gao F. Origin of HIV-l in the chimpanzee Pan troglodytes troglodytes!I Nature. -1999. -V.397. -P.436-441.

75. Gao F., Vidal N., Li Y., et al. Evidence of two distinct subsubtypes within the HIV-1 subtype A radiation// AIDS Res Hum Retroviruses. -2001. -V.17. -P.675-688.

76. Garred P. Chemokine-receptor polymorphisms: clarity or confusion for HIV-l prognosis?// Lancet. -1998. -V.351. -P.2-3.

77. Garcia-Albert L., Ortiz M., Garcia-Saiz A., et al. HIV type 1 non-B subtype prevalence in Spain, 1997-1998// AIDS Res Hum Retroviruses. -2001. -V.17. -P. 1317-1320.

78. Geijtenbeek ТВ., Kwon DS., Torensma R., et al. DC-SIGN, a dendritic cell-specific HIV-l-binding protein that enhances trans-infection of T cells// Cell. -2000. -100. -P.587-597.

79. Gerderblom Hans R. Assembly and morphology of HIV: potential effect of structure on viral function//AIDS.- 1991.- V.5.- P.617-638.

80. Gong W., Howard OM., Turpin JA., et al. Monocyte chemotactic protein-2 activates CCR5 and blocks CD4/CCR5-mediated HIV-l entry/replication// J Biol Chem. -1998. -V.273. -P. 4289-4292.

81. Gonzalez MA, Serrano F., Llorente M., et al. A hammerhead ribozyme targeted to the human chemokine receptor CCR5// Biochem Biophys Res Commun. -1998. — V.251. -P. 592-596.

82. Gonzalez E., Dhanda R., Bamshad M., et al. Global survey of genetic variation in CCR5, RANTES, and MDMA: impact of the epidemiology of the HTV-1 pandemic//Proc. Natl. Acad. Sci. USA. -2001. -V.98. -P.5199-5204.

83. Guignard F, Combadiere C, Tiffany HL, Murphy PM. Gene organization and promoter function for CC chemokine receptor 5 (CCR5)// J Immunol. -1998. — V.160. -P.985-992.

84. Hamm Т., Rekosh D., Hammarskjold M. Selection and characterisation of Human immunodeficiency virus type 1 mutants tha are resistant to inhibition by the transdominant negative RevMlO protein// J.Virol. -1999. -V.73. -P.5741-5747.

85. Harrison GP, Lever AM. The human immunodeficiency virus type 1 packaging signal and major splice donor region have a conserved stable secondary structure// J Virol -1992. V.66. —P.4144-4153.

86. He J, Choe S, Walker R, et al. Human immunodeficiency virus type 1 viral protein R (Vpr) arrests cells in the G2 phase of the cell cycle by inhibiting p34cdc2 activity// J Virol -1995. V.69. -P.6705-6711.

87. He J., Chen Y., Farzan M., et al. CCR3 and CCR5 are coreceptors for HIV-l infection of microglia// Nature. -1997. -V.385. -P.645-649.

88. Heinzinger NK, Bukinsky MI, Haggerty SA, et al. The Vpr protein of human immunodeficiency virus type 1 influences nuclear localization of viral nucleic acids in nondividing host cells// Proc Natl Acad Sci USA -1994. V.91. -P.7311-7315.

89. Helga-Maria C., Hammarskjold M., Rekosh D. An intact TAR element and cytoplasmic localisation are necessary for efficient packing of human immunodeficiency virus type 1 genomic RNA// J.Virol.-1999,- V.73.- P.4127-4135.

90. Heyndrickx L., Janssens W., Zekeng L., et al. Simplified Strategy for detection of recombinant human immunodeficiency virus type 1 Group M isolates by gag/env heteroduplex mobility assay// J. Virol. -2000. -Vol.74. -P. 363-370.

91. Hofman В., Hasetline W.A. Molecular biology of the AIDS virus: ten years of discovery hope for the future// Science Challenging AIDS, Basel, Karger. -1992 -V.l. -P.71-106.

92. Hoglund S., Ohagen A., Goncalves J., et al. Ultrastructure of HIV-l genomic RNA// Virol.-1997.- V.233.-P.271-279.

93. Hope TJ, McDonald D, Huang XJ, et al. Mutational analysis of the human immunodeficiency virus type 1 Rev transactivator: Essential residues near the amino terminus// J Virol -1990. V.64. -P.5360-5366.

94. Huang L., Bosch I., HofmannW., et al. Tat protein induces human immunodeficiency virus type 1 (HIV-l) coreceptors and promotes infection with both macrophage-tropic and T-lymphotropic HTV-1 strain//J.Virol. -1998. -V.72. -P.8952-8960.

95. Ioannidis JP., Rosenberg PS., Goedert JJ., et al. Effects of CCR5A32, CCR2-641, and SDF1-3'A alleles on HIV-l disease progression: an international metaanalysis of individual-patient data// Ann. Intern. Med. -2001. -V.136. -P.782-795.

96. Jacks T, Power MD, Masiarz FR, et al. Characterization of ribosomal frameshifting in HIV-l Gag-Pol expression// Nature -1988. V.331. -P.280-283.

97. Janssens W., Buve A., Nkengasong JN. The puzzle of HIV-l subtypes in Africa//AIDS.-1997.- V.11.-P.705-711.

98. Jowett JB, Planelles V, Poon B, et al. The human immunodeficiency virus type 1 vpr gene arrests infected T cells in the G2 + M phase of the cell cycle// J Virol -1995. V.69. -P.6304-6313.

99. Kolchinsky P., Mirzabekov Т., Farzan M., et al. Adaptation of a CCR5-using, primary human immunodeficiency virus typel isolate for CD4-independent replication//J.Virol. -1999. -V.73. -P.8120-8126.

100. Kolchinsky P., Kiprilov E., Bartley P., et al. Loss of single N-linked glycan allows CD4-independent human immunodeficiency virus type 1 infection by altering the position of the gpl20 V1/V2 variable loops// J.Virol. -2001. -V.75. -P.343 5-3443.

101. Kondo E., Mammano F., Cohen E., et al. The p6Gas domain of human immunodeficiency virus type 1 is sufficient for the incorporation of Vpr into heterologous viral particles//J.Virol.-1995.-V.69.-P.2759-2764.

102. Kim SY, Byrn R, Groopman J, et al. Temporal aspects of DNA and RNA synthesis during human immunodeficiency virus infection: Evidence for differential gene expression// J Virol -1989. V.63. -P.3708-3713.

103. Kitayama J., Mackay CR., Ponath PD„ Springer ТА. The C-C chemokine receptor CCR3 participates in stimulation of eosinophil arrest on inflammatory endothelium in shear flow// J. Clin. Invest. -1998. -V.101. -P. 2017-2024.

104. Klimkait T, Strebel K, Hoggan MA, et al. The human immunodeficiency virus type 1-specific protein vpu is required for efficient virus maturation and release// J Virol -1990. V.64. -P.621-629.

105. Kraft K., Olbrich H., Majoul I., et al. Characterization of sequence determinants within the carboxyl-terminal domain of chemokine receptor CCR5 that regulate signaling and receptor internalization// J Biol Chem. -2001. -V. 276. — P. 34408-34418.

106. Krogstad P, Eshleman SH, Geng Y., et al. Mother-to-child transmission in the United States of subtypes D and A/G human immunodeficiency virus type 1// AIDS Res Hum Retroviruses. -2002. -V.18. -V.413-417.

107. Kwong P.D., Wyatt R, Robinson J., et al. Structure of an HIV gp 120 envelope glycoprotein I complex with the CD4 receptor and neutralizing human antibody//Nature. -1998. -V.393. -P.648-659.

108. Lapadat-Tapolsky M, De Rocquigny H, Van Gent D, et al. Interactions between HIV-l nucleocapsid protein and viral DNA may have important functions in the viral life cycle// Nucleic Acids Res -1993. V.21. -P.831-839.

109. Levy J., Hoffman S., Kramer J., et al. Isolation of lymphocytopathic retroviruses from San Francisco patients with AIDS// Science. -1984. -V.225. -P. 840-842.

110. Lewis P, Hensel M, Emerman M. Human immunodeficiency virus infection of cells arrested in the cell cycle// EMBO J -1992. V.l 1. -P.3053-3058

111. Liao Z., Cimakasky LM., Hampton R, et al. Lipid rafts and HIV pathogenesis: host membrane cholesterol is required for infection by HTV type 1// AIDS Res Hum Retroviruses. -2001. -V.17. -P. 1009-1019.

112. Libert F., Cochaux P., Beckman GE., et al. The deltaccr5 mutation conferring protection against HTV-1 in Caucasian populations has a single and recent origin in Northeastern Europe // Hum. Mol. Genet. -1998. -V.7. -P.399-406.

113. Liu H., Chao D., Nakayama E.E. et al. Polymorphism in RANTES chemokine promoter affects HIV-l disease progression // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. -1999. -V.96. -P.4581-4585.

114. Liu, R, Paxton, W.A., Choe, S., et al. Homozygous defect in HIV-l coreceptor accounts for resistance of some multiply-exposed individuals to HIV-l infection// Cell. -1996. -V.86. -P.367-377.

115. Lu M., Blackow S., Kim P. A trimeric structural domain of the HIV-l transmembrane glycoprotein//Nature Struct.Biol. -1995. -V.2. -P. 1075-1082.

116. Lu M., Ji H., Shen S. Subdomain folding and biological activity of the core structure from human ummunodeficiency virus type 1 gp41 amplications for viral membrane fusion//J.Virol. -1999. -V.73. -P.4433-4438.

117. Luria S, Chambers I, Berg P. Expression of the type 1 human immunodeficiency virus Nef protein in T cells prevents antigen receptor-mediated induction of interleukin 2 mRNA// Proc Natl Acad Sci USA -1991. V.88. -P.5326-5330.

118. Mackay CR. Chemokines: immunology's high impact factors// Nat. Immun. -2001. -V.2. -P.95-101.

119. Magierowska M, Theodorou I, Debre P,. et al. Combined genotypes of CCR5, CCR2, SDF1, and HLA genes can predict the long-term nonprogressor status in human immunodeficiency virus-1-infected individuals// Blood. -1999. — V.93. -P. 936-941.

120. Malim MH, Hauber J, Le SY, et al. The HIV-l rev trans-activator acts through a structured target sequence to activate nuclear export of unspliced viral mRNA//Nature -1989. V.338. -P.254-257.

121. Manes S, Mira E, Gomez-Mouton C,. et al. Membrane raft microdomains mediate front-rear polarity in migrating cells// EMBO J. -1999. -V.18. -P.6211-6220.

122. Mangano А., Корка J., Batalla M. et al. Protective effect of CCR2-64I and not of CCR5-delta32 and SDFl-3'А in pediatric HIV-l infection// J. Acquir. Immune Defic. Syndr. -2000. -V.23. -P.52-57.

123. Mas A, Espanol Т., Heredia A. et al. CCR5 genotype and HIV-l infection in perinatally-exposed infants // J. Infect. -1999. -V.38. -P.9-11.

124. Martin M.P., Dean M., Smith M.W. et al. Genetic acceleration of AIDS progression by a promoter variant of CCR5// Science. -1998. -V.282. -P. 19071911.

125. Martinson JJ., Chapman NH., Rees DC., et al. Global distribution of the CCR5 gene 32-basepair deletion//Nat. Genet. -1997. -V.16. -P. 100-103.

126. Mastro T.D., Kitayaporn D. HIV type 1 transmission probabilities: estimates from epidemiological studies// AIDS Res. Hum. Retroviruses. -1998. -V.14. -P.223-227.

127. Masur H., Michelis M.A., Greene J.B. et al. An outbreak of community-acquired Pneumocystis carinii pneumonia: initial manifestation of cellular immune dysfunction//N. Eng. J. Med. -1981. -V.305. -P. 1431-1438.

128. McDermott, D.H., Zimmerman, P. A., Guignard, F., et al. CCR5 promoter polymorphism and HIV-l disease progression// Lancet. -1998. -V.352. -P.866-870.

129. Mellado M., Rodriguez-Frade J.M., Vila-Coro A.J. et al. Chemokine control of HIV-l infection//Nature. -1999. -V.400. -P.723-724.

130. Milich 1., Margolin В., Swanstrom R. Patterns of amino acid variability in NSI-like and Si-like V3 sequences and a linked change in the CD4 binding domain of the HIV-l env protein// Virology. -1997. -V.239. -P.108-118.

131. Miller MD, Warmerdam MT, Gaston I, et al. The human immunodeficiency virus-1 nef gene product: A positive factor for viral infection and replication in primary lymphocytes and macrophages//J Exp Med -1994. V.179. -P.101-113.

132. Miller R, Sarver N. HIV accessory proteins as therapeutic targets// Nat.Med. -1997. -V.3. -P.389-394.

133. Muesing MA, Smith DH, Cabradilla CD, et al. Nucleic acid structure and expression of the human AIDS/lymphadenopathy retrovirus// Nature. -1985. -V. 313. -P.450-458.

134. Nath A., Conant K., Chen P., et al. Transient exposure to HIV-l Tat protein results in cytokine production in macrophages and astrocytes// J.Biol.Chem. -1999. -V.274.-P. 17098-17102.

135. Nieto M., Frade JM., Sancho D., et al. Polarization of chemokine receptors to the leading edge during lymphocyte chemotaxis// J Exp Med. -1997. -V.186. -P.153-158.

136. Nieto M., Navarro F., Perez-Villar JJ., et al. Roles of chemokines and receptor polarization in NK-target cell interactions// J Immunol. -1998. -V.161. — P.3330-3339.

137. O'Brien TR, Winkler C., Dean M., et al. HIV-l infection in a man homozygous for CCR5 delta 32// Lancet.-1997.-V.349.-P. 1219-1224.

138. Papa, A., Papadimitriou, E., Adwan, G., et al. HIV-l co-receptor CCR5 and CCR2 mutations among Greeks// FEMS Microbiol. Lett. -2000. -V.28. -P.87-89.

139. Parkin NT, Chamorro M, Varmus HE. Human immunodeficiency virus type 1 gag-pol frameshifting is dependent on mRNA secondary structure: Demonstration by expression in vivo// J Virol -1992. V.66. -P.5147-5151.

140. Pastinen, Т., Liitsola, K., Niini, P., et al. Contribution of the CCR5 and MBL genes to susceptibility to HIV type 1 infection in the Finnish population// AIDS Res. Hum. Retroviruses. -1998. -V.14. -P.695-698.

141. Paxton W., Connor RL, Landau NR. Incorporation of Vpr into human immunodeficiency virus type 1 virions: requirement for the рб region of gag and mutational analysis// J Virol. -1993. -V.67. -P.7229-7237.

142. Paxton WA, Martin SR., Tse D., et al. Relative resistance to HIV-l infection of CD4 lymphocytes from persons who remain uninfected despite multiple high-risk sexual exposures // Nat. Med. -1996. -V.2. -P.412-417.

143. Piot P., Bartos M., Ghys P., et al. The global impact of HIV/AIDS// Nature. -2001.-V.410. -P.968-973.

144. Poon D., Li G., Aldovini A Nucleocapsid and matrix protein contributions to selective human immunodeficiency virus type 1 genomic RNA packaging// J.ViroL -1998. -V.72. -P. 1983-1993.

145. Poulin L., Evans L., Tang S., et al. Several CD4 domains can play a role in human immunodeficiency virus infection of cells// J. Virol. -1991. -V.65. -P.4893-4901.

146. Poznansky M, Lever A, Bergeron L, et al. Gene transfer into human lymphocytes by a defective human immunodeficiency virus type 1 vector// J Virol -1991. V.65. -P.532-536.

147. Proost P., De Meester L, Schols D., et al. Ammo-terminal truncation of chemokines by CD26/dipeptidyl-peptidase IV. Conversion of RANTES into a potent inhibitor of monocyte chemotaxis and HTV-1-infection// J Biol Chem. -1998. -V.273. -P.7222-7227.

148. Raport CJ., Gosling J., Schweickart VL., et al. Molecular cloning and functional characterization of a novel human CC chemokine receptor (CCR5) for

149. RANTES, MlP-lbeta, and MIP-lalpha// J Biol Chem. -1996. -V.271. -P.17161-17166.

150. Rasola A., Gramaglia D., Baccaccio C., et al. Apoptosis enhancement by the HIV-l Nef protein//J.Immunol. -2001. -V.166. -P.81-88.

151. Robertson DL., Anderson JP., Bradac JA., et al. HIV-l nomenclature proposal// Science. -2000. -V.288. -P.55-56.

152. Rodriguez-Frade JM., Vila-Coro AJ., Martin A., et al. Similarities and differences in RANTES- and (AOP)-RANTES-triggered signals: implications for chemotaxis// J Cell Biol. -1999. -V.144. -P.755-765.

153. Romano-Spica, V., Ianni, A., Arzani, D., et al. Allelic distribution of CCR5 and CCR2 genes in an Italian population sample// AIDS Res. Hum. Retroviruses. -2000. —V.16. -P.99-101.

154. Roy S, Delling U, Chen CH, et al. A bulge structure in HIV-l TAR RNA is required for Tat binding and Tat-mediated trans-activation// Genes Dev -1990. V.4. -P. 1365.

155. Ruben S, Perkins A, Purcell R, et al. Structural and functional characterization of human immunodeficiency virus tat protein// J Virol -1989. V.63. -P. 1-8.

156. Ruffing N., Sullivan N., Sharmeen L., et al. CCR5 has an expanded ligand-binding repertoire and is the primary receptor used by MCP-2 on activated T cells// Cell Immunol. -1998. -V. 189. -P. 160-168.

157. Samson, M., Libert, F., Doranz, B.J., et al. Resistance to HIV-l infection in Caucasian individuals bearing mutant alleles of the CCR-5 chemokine receptor gene//Nature. -1996. -V.382. -P.722-725.

158. Salkowitz JR., Purvis SF., Meyerson H., et al. Characterization of high-risk HIV-l seronegative hemophiliacs// Clin. Immunol. -2001. -V.98. -P.200-201.

159. Sallusto F., et al. Rapid and coordinated switch in chemokine receptor expressing during dendritic cell maturation// Eur. J. Immunol. -1998. -V.28. -P. 2760-2769.

160. Sallusto F., Mackay CR. & Lanzavecchia A. The role of chemokine receptors in primary, effector, and memory immune response// Annu. Rev. Immunol. -2000. -V.18. -P.593-620.

161. Sato A, Igarashi H, Adachi A, et al. Identification and localization of vpr gene product of human immunodeficiency virus type 1// Virus Genes -1990. V.4. -P.303-312.

162. Sattentau QJ., Weiss RA. The CD4 antigen: physiological ligand and HIV receptor//Cell.-1988. -V.52. -P.631-633.

163. Scarlatti G., Tresoldi E., Bjorndal A, et al. In vivo evolution of HIV-l co-receptor usage and sensitivity to chemokine-mediated suppression// Nat Med. -1997.-V.3.-P. 1259-1265.

164. Schwartz S, Felber BK, Fenyo EM, et al. Env and Vpu proteins of human immunodeficiency virus type 1 are produced from multiple bicistronic mRNAs// J Virol -1990. V.64. -P.5448-5456.

165. Schwartz O., Marechal O., Danos O., et al. Human immunodeficiency virus type 1 Nef increases the efficiency of reverse transcriptation i the infected eel// J.Virol. -1995. -V.69. -P.4053-4059.

166. Signoret N., Rosenkilde MM., Klasse PJ., et al. Differential regulation of CXCR4 and CCR5 endocytosis// J Cell Sci. -1998. -V.lll. -P.2819-2830.

167. Simmons G., Wilkinson J., Reeves M., et al. Primary , syncytium-inducing human immunodeficiency virus type 1 isolates are dual-tropic and most can use either Lestr or CCR5 as coreceptors for virus entry// J.Virol. -1996. -V.70. -P.8355-8360.

168. Simon F., Mauclure P., Roques P., et al. Identification of a new human immunodeficiency virus type 1 distinct from group M and group O// Nature.-1998. -V.4. -P. 1032-1037.

169. Simon J., Sheeny A., Carpenter E., et al. Mutational analyses of the human immunodeficiency virus type 1 Vif protein// J.Virol -1999. -V.73. -P.2675-2681.

170. Skowronski J, Parks D, Mariani R. Altered T cell activation and development in transgenic mice expressing the HIV-l nef gene// EMBO J -1993. V.12. —P.703-713.

171. Smith MW., Dean M., Carrington M., et al. Contrasting genetic influense of CCR2 and CCR5 variants on HIV-l infection and disease progression // Science. -1997. -V.277. -P.959-965.

172. Staudinger R., Wang X., Bandres JC. Allosteric regulation of CCR5 by guanine nucleotides and HIV-l envelope// Biochem Biophys Res Commun. -2001. -V.286. -P. 41-47.

173. Starcich B.R., et al. Identification and characterization of conserved and variable regions of the envelope gene HTLV-m/LAV, the retrovirus of AIDS// Cell. -1986. -V.45. -P.637-648.

174. Strebel K, Daugherty D, Clouse K, et al. The HIV 'A' (sor) gene product is essential for virus infectivity// Nature -1987. V.328. -P.728-730.

175. Struyf F., Thoelen I., Charlier N., et al. Prevalence of CCR5 and CCR2 HTV-coreceptor gene polymorphisms in Belgium// Hum. Hered. -2000. -V.50. -P.304-307.

176. Tanaka Y., et al. T-cell adhesion induced by proteoglikan-immobilised cytokine MIP-IB//Nature. -1993. -V.361. -P.79-82.

177. Temin HM. Retrovirus variation and reverse transcription: abnormal strand transfers result in retrovirus genetic variation//Proc.Natl.Acad.Sci.USA. -1993. -V90. -P.6900-6903.

178. Thali M, Bukovsky A, Kondo E, et al. Functional association of cyclophilin A with HIV-l virions// Nature -1994. V.372. -P.363-365.

179. Thomson MM. & Najera R. Travel and the introduction of human immunodeficiency virus type 1 non-B subtype genetic forms into Western countries// Clin Infect Dis. -2001. -V.32. -P. 1732-1747.

180. Turville SG., Cameran PU., Handley A., et al. Diversity of receptors binding HIV on dendritic cell subsets// Nat Immunol. -2002. -V.10. -P.975-983.

181. Venkatesan S., Petrovic A., Locati M., et al. A membrane proximal basic domain and cysteine cluster in the C-terminal tail of CCR5 constitute a bi-partite motif critical for cell surface expression// J Biol Chem. -2001. -V.276. -P.40133-40145.

182. Wei P, Garber ME, Fang SM, Fischer WH, Jones К A. A novel CDK9-associated C-type cyclin interacts directly with HIV-l Tat and mediates its high-affinity, loop-specific binding to TAR RNA// Cell. -1998. V.92. -P.451-62.

183. Wen W, Meinkoth JL, Tsien RY, et al. Identification of a signal for rapid export of proteins from the nucleus// Cell -1995. V.82. -P.463-473.

184. Willey RL., Rutledge RA., Dias S., et al. Identification of conserved and divergent domains within the envelope gene of the acquired immunodeficiency syndrome retrovirus// Proc Natl Acad Sci U S A. -1986. -V.83. -P.5038-5042.

185. Willey R.L., Maldarelli F., Martin M.A., et al. Human immunodeficiency virus type 1 Vpu protein induces rapid degradation of CD4// J.Virol. -1992. -V.66. -P.7193-7200.

186. Winkler C., Modi W., Smith MW., et al. Genetic restriction of AIDS pathogenesis by an SDF-1 chemokine gene variant // Science. -1998. -V.279. -P.389-393.

187. Womack C., Roth W., Newman C., et al. Identification of non-B human immunodeficiency virus type 1 subtypes in rural Georgia// J Infect Dis. -2001. -V. 183.-P. 138-142.

188. Wong M. & Fish EN. RANTES and МПМ alpha activate stats in T cells// J Biol Chem. -1998. -V.273. -P.309-314.

189. Wong M., Uddin S., Majchrzak В., et al. Rantes activates Jak2 and Jak3 to regulate engagement of multiple signaling pathways in T cells// J Biol Chem. -2001. -V.276. -P. 11427-11431.

190. Wyatt R. & Sodorski J. The HIV-l envelope glycoproteins: fusogens, antigens, and immunogens// Sciense. -1998. -V.280. -P. 1884-1888.

191. Xiao X., Wu L., Stantchev TS., et al. Constitutive cell surface association between CD4 and CCR5// Proc Natl Acad Sci USA. -1999. -V.96. -P.7496-7501.

192. Yoshimura Т., et al. Purification of a human monocyte derived neutrophil chemotactic factor thet has peptide sequence similarity to other host defense cytokines// Proc. Natl. Acad. Sci. USA. -1987. -V.84. -P.9233-9237.

193. Yudin NS., Vinogradov SV., Potapova ТА., Distribution of CCR5-delta 32 gene deletion across the Russian part of Eurasia// Hum. Genet. -1998. -V.102. — P.695-698.

194. Zapp ML, Green MR. Sequence-specific RNA binding by the HIV-l Rev protein//Nature -1989. V.342. -P.714-716.

195. Zapp ML, Hope TJ, Parslow TG, et al. Oligomerization and RNA binding domains of the type 1 human immunodeficiency virus Rev protein: A dual function for an arginine-rich binding motif// Proc Natl Acad Sci USA -1991. V.88. -P.7734-7738.

196. Zhou C, Rana TM. A bimolecular mechanism of HIV-l Tat protein interaction with RNA polymerase II transcription elongation complexes// J Mol Biol.- 2002,- V.320.-P.925-942.

197. Zou YR, Kottmann AH., Kuroda M., et al. Function of the chemokine receptor CXCR4 in hematopoesis and in cerebellar development// Nature. -1998. -V.393. -P. 595-599.

Информация о работе

Рябов, Григорий Сергеевич
кандидата биологических наук
Москва, 2004
ВАК 03.00.03

Диссертация

Влияние мутантных аллелей генов CCR5, CCR2 и SDF1 человека на ВИЧ-инфекцию - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему Влияние мутантных аллелей генов CCR5, CCR2 и SDF1 человека на ВИЧ-инфекцию ВАК РФ 03.00.03, Молекулярная биология

Автореферат диссертации по теме "Влияние мутантных аллелей генов CCR5, CCR2 и SDF1 человека на ВИЧ-инфекцию"

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Рябов, Григорий Сергеевич

Введение Диссертация по биологии, на тему "Влияние мутантных аллелей генов CCR5, CCR2 и SDF1 человека на ВИЧ-инфекцию"

Заключение Диссертация по теме "Молекулярная биология", Рябов, Григорий Сергеевич

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Рябов, Григорий Сергеевич, Москва

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Влияние мутантных аллелей генов CCR5, CCR2 и SDF1 человека на ВИЧ-инфекцию
ВАК РФ 03.00.03, Молекулярная биология