Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Влияние хронического радиационного воздействия на уровень соматических мутаций в клетках периферической крови людей в отдаленные сроки

ВАК РФ 03.00.01, Радиобиология

Автореферат диссертации по теме "Влияние хронического радиационного воздействия на уровень соматических мутаций в клетках периферической крови людей в отдаленные сроки"

МОСКОВСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ им. М.В. Ломоносова биологический факультет

Р Г 5 ОД

На правах рукописи

ВЕРЕМЕЕВА ГАЛИНА АНАТОЛЬЕВНА

УДК 539.612.014:575.24+612.014.4

ВЛИЯНИЕ ХРОНИЧЕСКОГО РАДИАЦИОННОГО ВОЗДЕЙСТВИЯ НА УРОВЕНЬ СОМАТИЧЕСКИХ МУТАЦИЙ В КЛЕТКАХ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ ЛЮДЕЙ В ОТДАЛЁННЫЕ СРОКИ

03.00.01 - радиобиология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических наук

Москва -1996

Работа выполнена в Уральском Научно-практическом Центре радиационной медицины, г. Челябинск.

Научный руководитель: доктор медицинских наук

A.B. Аклеев

Официальные оппоненты: доктор биологических наук,

профессор И.И. Пелевина

доктор биологических наук,

профессор

A.C. Саенко

Ведущее учреждение: Государственный научный центр -Институт иммунологии Министерства здравоохранения России

Защита состоится 1996 года в часов на

заседании диссертационного совета Д.053.05.74 Московского Государственного Университета им. М.В. Ломоносова по адресу 119899 Москва, Ленинские Горы, биологический факультет МГУ им. М.В.Ломоносова.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке

биологического факультета Московского Государственного Университета.

Автореферат разослан ИО£$/>* 1996 года.

Учёный секретарь диссертационного совета, доктор биологических наук,

профессор O.P. Колье

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Накопленный к настоящему времени мировой опыт эксплуатации ядерных обьектов (атомные электростанции, радиохимические заводы и др.) показывает, что в условиях крупномасштабных радиационных инцидентов население может подвергнуться хроническому облучению преимущественно в диапазоне малых доз. Вследствие непредвиденного характера радиационного аварийного воздействия применение методов физической дозиметрии в таких ситуациях ограничено. В связи с этим важное место может занять биологическая индикация и дозиметрия хронического радиационного воздействия. Особенно большое значение для ретроспективной реконструкции доз облучения могут иметь методы, основанные на определении уровня соматических мутаций в клетках периферической крови. Значительное внимание среди ограниченного числа методов исследования, используемых с этой целью, уделяется гликофориновому тесту и анализу числа мутантных лимфоцитов по системе Т-клеточного рецептора (К.в. Ьапд!о1з е! а1., 1986, Б. Куо12штм, 1992). Вышеуказанные методы показали свою эффективность для целей индикации радиационного воздействия в отдалённые сроки после острого облучения в результате атомной бомбардировки Хиросимы и Нагасаки (гликофориновый тест) (М. АМуата е{ а1., 1992, Я.в. Ьапдкзгё е{ а!., 1987, 1993) и при хроническом воздействии за счёт инкорпорированного 232т(п (анализ состояния Т-клеточного рецептора) (Б. 11тек1 е1 а1, 1991). Возможность использования вышеуказанных методов для целей биологической индикации и биологической дозиметрии при хроническом (особенно внутреннем неравномерном) облучении в отдалённые сроки до настоящего времени остаётся неясной.

Крайне актуальной в отдалённые сроки хронического облучения в диапазоне малых доз является проблема соматико-стохастических последствий радиационного воздействия. По результатам эпидемиологических исследований после аварии на комбинате "Маяк" у части облучённого населения (жители прибрежных сёл реки Теча в пределах Челябинской области) отмечено увеличение заболеваемости и смертности от лейкозов и злокачественных новообразований (М.М.Косенко и соавт., 1990; М.М.Косенко, М.О.Дёгтева, 1992 и др.). В

настоящее время установлено, что мутации, возникающие в результате воздействия ионизирующих излучений, могут стать одним из важнейших этапов радиационно-индуцированного канцерогенеза (Б.Димитров, 1990, М.М. Moore et al., 1993). В связи с этим методы, основанные на анализе уровня соматических мутаций, могут иметь большое значение для формирования групп повышенного риска (ГПР) в отношении отдалённых (прежде всего канцерогенных) последствий облучения. Принципиально важно, что уровень мутантных клеток периферической крови является интегральным показателем, отражающим не только величину поглощённой дозы (мощности), но и характер её распределения в организме, течение процессов репарации, индивидуальную радиочувствительность (A.V. Akleyev et al., 1994).

Цель и задачи исследования. Целью работы является анализ уровня соматических мутаций в лимфоцитах и эритроцитах периферической крови человека в отдалённые сроки после хронического радиационного воздействия, а также оценка возможности использования гликофоринового теста и анализа состояния Т-клеточного рецептора для реконструкции доз и формирования групп повышенного риска в отношении отдалённых (прежде всего канцерогенных) последствий облучения.

Для этого предполагалось решить следующие задачи:

- проанализировать уровень соматических мутаций в эритроцитах (по системе гликофорина А) и лимфоцитах (по состоянию Т-клеточного рецептора) у лиц, подвергшихся хроническому облучению в отдалённые сроки;

- Оценить зависимость частоты мутантных эритроцитов и лимфоцитов периферической крови от кумулятивной дозы на красный костный мозг (ККМ;

- изучить частоту мутантных клеток в периферической крови у людей, подвергшихся хроническому, преимущественно внешнему у- и преимущественно внутреннему, облучению в отдалённые сроки;

- исследовать зависимость уровня CD3-CD4+ лимфоцитов и вариантных по гликофорину А эритроцитов при пролонгированном, преимущественно внешнем у- и преимущественно внутреннем, радиационном воздействии от дозы облучения;

- провести сравнительный анализ уровня соматических мутаций в клетках периферической крови у лиц, подвергшихся преимущественно внутреннему и преимущественно внешнему облучению;

- изучить зависимость частоты соматических мутаций и уровня хромосомных аберраций стабильного и нестабильного типов в отдаленные сроки хронического радиационного воздействия.

Научная новизна. Проведенные с использованием гликофоринового теста и анализа состояния Т-клеточного рецептора исследования позволили впервые оценить фенотипическую частоту соматических мутаций в условиях хронического облучения человека в отдалённые сроки, что важно для понимания радиобиологических и патофизиологических механизмов развития отдалённых канцерогенных последствий облучения.

Впервые оценена возможность применения вышеуказанных методов для целей биологической индикации и биологической дозиметрии в отдалённые сроки хронического радиационного воздействия.

Впервые проведен сравнительный анализ частоты соматических мутаций в клетках периферической крови в условиях хронического относительно равномерного и неравномерного облучения.

Изучена сравнительная эффективность применения методов оценки уровня соматических мутаций и анализа стабильных хромосомных аберраций, оцененных методом флюоресцентной in situ гибридизации, для целей биологической индикации и дозиметрии

Практическая значимость. Обоснована возможность использования вышеуказанных методов при формировании ГПР в отношении отдалённых последствий (прежде всего рак, лейкоз) облучения. Анализ частоты мутантных по гликофорину А эритроцитов и CD3-CD4+ лимфоцитов у лиц, подвергшихся хроническому радиационному воздействию, позволяет, в отдалённые сроки после облучения, выделить людей с высоким уровнем соматических мутаций.

Формирование ГПР имеет большое практическое значение, так как позволяет проводить целенаправленную первичную профилактику канцерогенных эффектов и осуществлять раннюю диагностику злокачественных новообразований, что определяет радикальность лечения онкологических больных. В конечном счёте вышеуказанные

мероприятия позволят оптимизировать организацию медицинской помощи населению, подвергшемуся облучению, и повысить её эффективность.

Выявленное достоверное повышение уровня мутантных лимфоцитов у подвергшихся хроническому радиационному воздействию делает возможным применение анализа состояния Т-клеточного рецептора для целей индикации хронического комбинированного внешнего у- и внутреннего (за счёт Э^Бг и 137с5) облучения. Однако значительная дисперсия показателя в зависимости от дозы облучения красного костного мозга существенно ограничивает возможность его использования для целей индивидуальной биологической дозиметрии.

Показано, что отсутствие зависимости между частотой мутантных по гликофорину А эритроцитов и дозой облучения делают проблематичной возможность применения этого метода для целей биологической индикации и биологической дозиметрии в отдалённые сроки с начала хронического радиационного воздействия.

Положения, выносимые на защиту.

1. Показана принципиальная возможность использования метода анализа состояния Т-клеточного рецептора в условиях хронического комбинированного (внешнего у- и внутреннего, преимущественно за счёт 9°3г) облучения в отдалённые сроки в качестве биологического маркера радиационного воздействия.

2. Отсутствие выраженной дозовой зависимости частоты СОЗ-СЭ4+ лимфоцитов не позволяет использовать метод в качестве биологического маркера дозы хронического радиационного воздействия.

3. Гликофориновый тест оценен как малоинформативный при использовании его для целей биологической индикации хронического комбинированного облучения в отдалённые сроки.

4. Не установлено значимого влияния фактора неравномерности облучения ККМ на уровень соматических мутаций в клетках периферической крови, оцененный с использованием гликофоринового теста и анализа состояния Т-клеточного рецептора. .

5. Не выявлена зависимость между уровнем соматических мутаций и частотой хромосомных аберраций стабильного и

нестабильного типов у лиц, подвергшихся хроническому комбинированному радиационному воздействию в отдалённые сроки.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены на Симпозиуме Европейского комитета по отдалённым последствиям облучения, Ульм, (Германия), 1994 г., ежегодной конференции Health Physics Society, Сан-Франциско, 1994 г., I Международном симпозиуме "Хроническое радиационное воздействие: риск отдалённых эффектов", Челябинск, 1995 г., научно-практической конференции "Влияние радиации на живую природу и здоровье человека", Челябинск, 1995 г.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 4 печатных работы.

Структура и объём диссертации. Диссертация состоит из введения, 3 глав, заключения и выводов. Работа изложена на 111 страницах печатного текста, иллюстрирована 12 таблицами и 17 рисунками. Библиографический указатель включает 134 названия (32 отечественных и 102 зарубежных) печатных работ.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования. Исследование уровня соматических мутаций в клетках периферической крови людей, подвергшихся хроническому радиационному воздействию на Южном Урале, проводилось в период с 1993 по 1995 г.г.

Для проведения гликофоринового теста и анализа состояния Т-клеточного рецептора было отобрано 165 человек. За исключением 10 индивидов гомозиготных по ММ и 2 гомозиготных по NN типу, для которых гликофориновый (GPA) анализ не проводился, остальные являлись гетерозиготами по системе гликофорина А. Отбор лиц для обследования проводился по принципу слепого отбора среди людей с установленной дозой облучения красного костного мозга (ККМ).

В группу подвергшихся хроническому облучению были включены лица, проживающие в населённых пунктах, расположенных на побережье реки Теча (Челябинская область). Часть обследованных лиц (проживавшие в верховьях р.Теча) подверглась преимущественно внешнему у-, а часть (проживающие в среднем течении р.Теча) -

преимущественно внутреннему, за счёт инкорпорации остеотропного 905г и "^Сб, радиационному воздействию. Этот факт имеет принципиальное значение, т. к в обеих группах имели место существенные особенности в характере формирования дозы облучения. Так, доза внутреннего облучения была, в основном, сформирована в первые шесть лет с начала радиационного воздействия и характеризовалась значительной неравномерностью распределения в организме. Вследствие того, что основным дозообразующим радионуклидом являлся 903г, накапливаемый и длительное время удерживаемый костной тканью, критическим органом в этом случае являлся красный костный мозг (А.В.Аклеев и соавт., 1991). Радиационное воздействие на этот орган за счёт указанного радионуклида продолжается до настоящего момента, но при при очень низких значениях мощности (0.18-7.4 мЗв в 1993 г.). Доза внешнего облучения была сформирована в более короткий промежуток времени. Наибольшая интенсивность радиационного воздействия наблюдалась в 1950-1951 гг. К 1956 г. накопление дозы почти прекратилось. Следует отметить также, что в отличие от внутреннего, за счёт р-излучателя 90Бг, внешнее у- облучение носило гораздо более равномерный характер (А.В.Аклеев и соавт., 1991).

В связи с этим, среди облучённых были выделены две группы в зависимости от характера формирования дозы. Из всей выборки 50 человек подверглись пролонгированному, преимущественно внешнему 7- и 80 - хроническому, преимущественно внутреннему (за счёт 9°3г и 137С5), облучению. Среди подвергшихся преимущественно внешнему облучению выделены подгруппы с дозой на ККМ до 100 сЗв и более 100 сЗв. Люди, получившие основную дозу за счёт инкорпорированных радионуклидов, были подразделены на три дозовые подгруппы: до 100 сЗв, от 100 до 200 сЗв и более 200 сЗв.

В группе лиц, подвергшихся хроническому радиационному воздействию, средний возраст составил 61.7±0.8 года. Индивидуальные значения изменялись в педелах от 42 до 87 лет. Половой состав не был равномерным: 66 мужчин и 79 женщин.

Средний возраст в выборке облучённых за счёт 905г и 137Сз составил 62.5±1.0 года с разбросом максимального и минимального значений от 49 до 87 лет. В неё вошли 37 мужчин и 43 женщины.

В группе подвергшихся внешнему у-облучению средний возраст имел значение 60.2±1.5 года. Эта величина колебалась в пределах от

42 до 85 лет. Распределение по полу было следующим: 14 мужчин и 36 женщин.

Средний возраст в группе сравнения был равен 63.2±1.6 года и изменялся в интервале от 45 до 85 лет. В выборку включено 15 мужчин и 20 женщин.

Никто из обследованных не подвергался медицинскому терапевтическому облучению, не имел профессионального контакта с химическими -веществами, серьезных заболеваний (злокачественное новообразование, тяжелая аутоиммунная или инфекциоонная патология), требующих длительного применения цитостатиков, антибиотиков и др.

Для расчёта доз внешнего у-облучения использовались результаты замеров мощности экспозиционной дозы и оценки режимов поведения, типичных для различных возрастных групп сельских жителей (М.М.Сауров, 1968). Индивидуальные дозы внутреннего облучения на ККМ и динамика их мощности за весь период наблюдения были восстановлены на основании результатов прижизненных измерений на счетчике излучения человека (СИЧ-9.1) с использованием модели метаболизма стронция для людей различного возраста. Работа по расчёту доз облучения выполнена сотрудниками биофизической лаборатории УНПЦ РМ (зав. лабораторией М.О.Дёгтева).

Определение частоты соматических мутаций осуществлялось с использованием оригинальных методов: анализа состояния Т-клеточного рецептора (TCR-тест) (S. Kyoizumi et al., 1990) и гликофоринового (GPA) теста (R.G. Langlois et al., 1986).

Методики гликофоринового анализа и оценки состояния Т-клеточного рецептора впервые были разрботаны в Ливерморской национальной лаборатории (R.G. Langlois et al., 1986, S. Kyoizumi et al., 1990). Они основаны на определении числа мутантных клеток с изменённой экспрессией исследуемого маркера. При GPA-тесте это гликофорин А - белок наружной мембраны эритроцитов, при TCR-тесте - CD3 компонента Т-клеточного рецептора. Указанные маркеры выступают в роли антигенов, к которым присоединяются флюоресцентно меченные антитела. Непосредственно измерение осуществляется методом проточной цитометрии. В качестве

мутантных оцениваются клетки, имеющие резко сниженную интенсивность флюоресценции.

Гликофориновый анализ осуществлялся с использованием однолучевого проточного сортера FACStar (Becton Dickinson). Исследование проводилось с применением двух комбинаций четырёх моноклональных антител. Два моноклональных антитела использовались в первом варианте анализа, это антитело 6А7, которое специфично для GPA типа М и 10F7 - антитело, которое вступает во взаимодействие с обоими типами GPA. Эти антитела мечены различными флюоресцентными красителями. Типы MN, NN, и ММ эритроцитов имеют на мембранах примерно одинаковое количество GPA, т.е. реакция на 10F7 уравнивается. Однако ММ клетки присоединяют в два раза больше 6А7 антител, чем MN клетки, а эритроциты NN не вступают во взаимодействие с 6А7 антителами. С помощью комбинации этих моноклональных антител обнаруживались два типа мутантных клеток: N0 и NN. Окна каждого распознаются при помощи контрольной смеси эритроцитов. Второй метод анализа позволил обнаружить гемизиготные МО и гомозиготные ММ клетки. Для этого анализа применялось антитело, специфичное для GPA типа N -NN3 и антитело, специфичное для GPA типа М - 9АЗ. Нормальные MN клетки присоединяют оба типа антител, тогда как гемизиготные или гомозиготные только одно из двух моноклональных антител. В зависимости от интенсивности флюоресцентного окрашивания, далее выделялись гемизиготные МО или гомозиготные ММ варианты.

Все обьекты внутри окна вариантов отбирались на предметное стекло с помощью сортера, т.к. возможно искажение результатов вследствие загрязнения окна осколками клеток, электрическим шумом или клетками белой крови. Точная частота определялась с помощью подсчёта мутантных эритроцитов под флюоресцентным микроскопом.

Анализ состояния Т-клеточного рецептора проводился с использованием однолучевого проточного цитометра FACScan (Becton Dickinson). Фракция Т-лимфоцитов выделялась окрашиванием их флюоресцеин-меченными антителами anti-Leu3a (CD4). Область для определения Т-лимфоцитов на гистограмме цитометрии смещалась вправо. Присоединение фикоэритрин-меченных антител anty-Leu4 (CD3) сдвигало область CD4+CD3+ в правый верхний угол. При этом мутантными клетками считались те, у которых экспрессия рецептора CD3 составляла менее 1/25 от нормальных CD4+CD3+ лимфоцитов.

Окно для обнаружения вариантов находится в правой нижней части цитофлюорограммы (S.Kyoizumi etal., 1990).

Образцы крови отбирались в стерильные гепаринизированные пробирки (VACUTEINER Brand Evacuated Blood Collection Tubes). В них кровь сохраняется до 4 дней при комнатной температуре. Отобранные образцы транспортировались в Фонд по Исследованию Радиационных Эффектов (Хиросима, Япония) где и проводились исследования.

: Статистическая обработка результатов исследований и графические построения выполнены с использованием пакета программ "STATGRAF".

При оценке вариационных рядов определялись следующие показатели: средняя арифметическая величина (М), ошибка средней (т). Для характеристики дисперсии исследуемого показателя использовали максимальное и минимальное значение переменной в вариационном ряду (Xmax, Xmin) а также среднее квадратичное отклонение (о).

Достоверность различий между двумя средними оценивалась по Т-критерию Стьюдента (В.Ю. Урбах, 1963).

Взаимозависимость двух параметров определялась из предположения линейной модели ( Y = а + ЬХ ) (В.Ю. Урбах, 1963, А. Афифи и соавт., 1982). По имеющимся публикациям (S. Kyoizumi et al., 1989) известно, что она наиболее удачно отражает исследуемое соотношение уровня соматических мутаций и дозы облучения.

С использованием гликофоринового анализа не только определялись частоты МО, N0, ММ вариантов, но также рассчитывались величины D и R.* Значение D приравнивалось половине суммы числа клеток N0 и ММ типов и показывало среднюю частоту гемизиготного варианта у обследованного пациента. Величина D+R рассчитывалась как сумма общего количества ММ мутантных эритроцитов и показателя D. Она интегрально отражает уровень GPA-вариантов гемизиготного и гомозиготного типа (M.Akiyama et al., 1990).

Оценка стабильных и нестабильных хромосомных аберраций в лимфоцитах периферической крови методом флюоресцентной in situ гибридизации проводилась младшим научным сотрудником клинико-физиологической лаборатории УНПЦ РМ Возиловой А.В.

Автор выражает глубокую благодарность Dr. M.Akiyama и Dr. S.Kyoizumi за предоставленную возможность проведения оценки

уровня соматических мутаций на базе отдела радиобиологии Фонда по исследованию радиационных эффектов (Хиросима, Япония).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Влияние пола и возраста на уровень мутаций в клетках периферической крови. Анализ уровня соматических мутаций в клетках периферической крови, оцененный с использованием вРА- и ТСИ- тестов в возрастном диапазоне от 42 до 87 лет у необлучённых индивидов не позволил отметить его зависимости от возраста. В группе сравнения были вычислены коэффициенты корреляции между количеством N0, МО, ММ вариантных эритроцитов, величин й, й+Р, ТСР-мутантных лимфоцитов и возрастом на момент обследования. Они составили г—0.28, г=5.9-10"3 г=0.24, г=-0.23, г=0.09 и г=-0.08 соответственно. Низкие значения коэффициентов свидетельствуют об отсутствии взаимосвязи между уровнем соматических мутаций и возрастом. Пошаговый выбор переменной в группе облучённых лиц показал, что независимая переменная возраста при построении зависимости "уровень соматических мутаций - доза, возраст" не является значимой.

Достоверных различий средних значений величин соматических мутаций в группе сравнения для мужчин и для женщин не выявлено. Исключение составляет уровень МО вариантных эритроцитов, который у мужчин выше, чем у женщин. Скорее всего, это может быть обьяснено случайным разбросом величин. По литературным данным (М. АМуата е( а!., 1990) количество МО-мутантных клеток тесно коррелирует с уровнем N0 и ММ вариантов, средние значения которых достоверно не различаются у мужчин и женщин. Кроме того, расчётные величины Э и Э+Р, интегрально отражающие уровень вариантных эритроцитов различных типов, также не показали достоверных различий в исследуемых группах.

Уровень соматических мутаций у лиц. подвергшихся хроническому облучению. Анализ состояния Т-клеточного рецептора у всех лиц, подвергшихся комбинированному внешнему у- и внутреннему радиационному воздействию (без учёта преобладания какой либо из дозообразующих компонент), и в группе сравнения не

позволил выявить статистически значимого отличия числа мутантных лимфоцитов у облучённых людей и в контрольной выборке (табл. 1).

Таблица 1

Частота (М±т) мутаций по Т-клеточному рецептору у всех лиц, подвергшихся хроническому радиационному воздействию

Дозовая группа п, Средняя доза, Частота мутаций по

(чел.) сЗв Т-клеточному а

рецептору (■10~4)

Все облучённые 130 121.5+6 6 2.53Ю.25 2.86

(11.0-462.7) (0-31.7)

Все облучённые (а) 129 121.6±6.6 2.30+0.11* 1.25

■ (11.0-462.7) (0-7.2)

в том числе 58 62.7±3 5 2.34+0.17* 1.27

до 100 сЗв (11.0-99.6) (0.7-6.3)

100-200 сЗв 57 142.0+3.7 2.74±0.54 4.11

(103.8-199.9) (0-31.7)

100-200 сЗв(а) 56 142.6+3 7 2.22±0.17* 1.29

(103.8-199.9) (0-7.2)

Более 200 сЗв 15 270.9±19.3 2.46+0.28* 1.09

(204.7-462.7) (0.9-5.0)

Группа сравнения 35 0 1.70+0.14 0.82

(0.2-4.8)

Примечание: * - обозначена достоверность различий с группой сравнения; ^

а - обозначены величины, полученные после исключения из исследования индивида с крайне высокой частотой мутантных лимфоцитов.

Детальное рассмотрение количества С03-С04+ Т-клеток у каждого обследованного позволило выделить одного индивида, подвергшегося хроническому, преимущественно внешнему облучению (доза на ККМ 112.5 сЗв), с чрезвычайно высокой величиной анализируемого показателя (31.7-10"4). Обьяснить этот факт влиянием мутагенных факторов химической и физической природы достаточно трудно, но можно указать на имеющиеся в литературе данные о наличии в любой популяции лиц с врождённо повышенным уровнем соматических мутаций (\Л/.!.. В[дЬее е! а1., 1992). В проведённых ранее обследованиях при статистической обработке результатов такие лица

из исследования исключались (Б. (^¡гиггп е1 а1., 1989). Уровень мутантных лимфоцитов у людей, подвергшихся хроническому радиационному воздействию, без учёта этой крайней величины был достоверно выше, чем в группе сравнения (табл. 1).

При сравнительном анализе количества ТСЯ-мутантных клеток в трёх выделенных дозовых группах с их уровнем в контроле, выявлены достоверные различия при дозах до 100 сЗв и более 200 сЗв. В группе с дозой на ККМ от 100 до 200 сЗв достоверного отличия не обнаружено. Однако при исключении из исследования человека с крайне высокой величиной мутантных лимфоцитов, повышение их числа в этой выборке также становится статистически достоверным (табл. 1).

Следует отметить более высокие показатели среднеквадратичного отклонения в обследованных группах по сравнению с контролем (табл. 1). Это, а также значительный разброс максимальных и минимальных значений частот СйЗ-С04+ клеток свидетельствуют о большей дисперсии количества мутантных лимфоцитов у облучённых по отношению к группе сравнения. Однако зависимости дисперсии исследуемого показателя от дозы не установлено.

Проведён анализ зависимости уровня С03-С04+ клеток от кумулятивной дозы облучения ККМ. Полученный коэффициент корреляции составил г= 0.09 (при исключении крайней величины г=0.15), что свидетельствует об отсутствии взаимосвязи между указанными величинами в данной выборке людей.

Гликофориновый тест в труппе подвергшихся хроническому радиационному воздействию не позволил отметить статистически значимых различий числа вариантных клеток различных типов, а также рассчётных величин у всех облучённых с этими показателями в группе сравнения (табл. 2).

Проведен сравнительный анализ уровня вРА-мутантных эритроцитов, Э и й+Я в трёх обследованных дозовых группах с контролем. Достоверных различий не выявлено (табл. 2). Отмечен значительный разброс исследуемых показателей. Особенно высокие значения среднеквадратичного отклонения наблюдались для ММ типа эритроцитов, несколько меньшие для показателя Э+Я - во всех выборках, включая группу сравнения.

При построении зависимости вариантных эритроцитов N0, МО и ММ типов от дозы радиационного воздействия получены

Таблица 2

Частота (М±т) мутаций в системе гликофорина А у всех лиц, подвергшихся хроническому

радиационному воздействию.

Дозовая группа Количество обследованных, (чел.) Средняя доза, (сЗв) Частота вариантных эритроцитов различных типов (-Ю-6)

N0 а МО а ММ а О а 0+1} о

Все облучённые 118 119.9+7.2 (11.0-462.7) 29.3+2.5 (2-165) 27.6 22.0±3.4 (0-280) 36.4 12.5± 2.9 (0-304) 32.0 25.6±2.0 (5.5-152) 21.9 38.1+4.0 (6.5-344) 43.9

В том числе: До 100 сЗв 57 62.3+3.5 (11.0-99.6) 31.0+3.6 (5-164) 27.4 21.3±5.0 (0-280) 37.8 14.0± 5.8 (0-304) 43.6 26.1+2.9 (5.5-152) 22.2 40.1+7.3 (7.5-344) 55.1

100-200 сЗв 46 141.9+4.1 (103.8-199.9) 25.2+3.4 (2-156) 22.9 24.7±5.9 (0-239) 40.1 10.4+ 2.0 (0-66) 13.6 24.9±3.4 (6-131.5) 22.8 35.3+4.7 (8-197.5) 31.9

Более 200 сЗв 15 270.9±19.3 (204.7-462.7) 35.3± 10.22 (6-165) 39.6 15.9±3.0 (3-36) 11.5 13.0+ 4.6 (0-60) 17.6 25.6+5.0 (6.5-87) 19.3 38.6+6.6 (6.5-93) 25.5

Г руппа сравнения 35 0 34.7±4.1 (0-109) 24.5 18.0±3.0 (0-68) 17.5 12.3+ 4.5 (0-152) 26.3 26.3+2.5 (0-56) 14.8 38.6± 5.33 (0-185.5) 31.5

коэффициенты корреляции -0.04, 0.003 и -0.04 соответственно. Исследование корреляции между дозой и рассчётными величинами О и Э+К также показало крайне близкие к нулю коэффициенты -0.02 и -0.04. Полученные результаты позволяют судить об отсутствии линейной взаимосвязи между этими параметрами в данной группе обследованных.

Таким образом, статистически значимого изменения уровня мутаций в системе гликофорина А у всех лиц, подвергшихся хроническому радиационному воздействию в отдалённые сроки, и в различных дозовых группах по сравнению с контролем не обнаружено. Отмечено достоверное повышение количества С03-С04+ лимфоцитов в группах с дозой на ККМ до 100 сЗв и более 200 сЗв. Исключение из исследования индивида с крайне высоким количеством мутантных Т-клеток позволяет выявить достоверность различий с контролем во всех дозовых категориях. Однако, как при использовании гликофоринового, так и ТСЯ-теста имеет место значительная дисперсия исследуемых показателей. Значимой корреляционной взаимосвязи уровня соматических мутаций в клетках периферической крови с дозой облучения ККМ не выявлено.

Уровень соматических мутаций у лиц, подвергшихся хроническому, преимущественно внутреннему облучению. При оценке частоты TCR-мутантных лимфоцитов в условиях хронического, преимущественно внутреннего радиационного воздействия отмечено достоверное увеличение количества CD3-CD4+ клеток у облучённых лиц по отношению к группе сравнения (табл. 3).

В трёх дозовых группах (до 100, 100-200 и более 200 сЗв), так же как и в выборке, включающей всех подвергшихся хроническому преимущественно внутреннему облучению, различие средних значений числа мутантнтных по Т-клеточному рецептору лимфоцитов с их уровнем в контроле является достоверным (табл. 3).

Дисперсия исследуемого показателя, оцениваемая по разбросу максимального и минимального значений и среднеквадратичному отклонению, повышена в сравнении с контролем. Однако зависимости величины среднеквадратичного отклонения от дозы на ККМ не отмечено.

t

Исследована регрессионная зависимость частоты ТСК-мутантных лимфоцитов от кумулятивной дозы облучения ККМ. Коэффициент корреляции составил 0.25 и свидетельствует о наличии крайне слабой взаимосвязи.

• Таблица 3

Частота (М±т) мутаций по Т-клеточному рецептору у лиц, подвергшихся преимущественно внутреннему облучению

Дозовая группа п (чел.) Средняя доза, сЗв Частота мутаций по Т-клеточному рецептору (•10-4) а

Все облучённые 80 132.9±9.3 (25.7-462.7) 2.29±0.14» (0.4-7.2) 1.29

в том числе: до 100 сЗв 36 67.0+4.0 (25.7-99.6) 2.22±0.21* (0.7-6.2) 1.23

100 -200 сЗв 31 149.8+5.2 (103.8-199.9) 2.30±0.26* (0.4-7.2) 1.43

Более 200 сЗв 13 275.2±21.7 (204.7-462.7) 2.44±0.33* (0.5-5.0) 1.18

Группа сравнения 35 0 1.70±0.14 (0.2-4.8) 0.82

Примечание: * обозначена достоверность различий с группой сравнения

Представлялось интересным проанализировать зависимость уровня мутантных лимфоцитов от мощности дозы на период максимального радиационного воздействия (1950 г.). Полученный коэффициент корреляции составил 0.23, что указывает на незначительную линейную взаимосвязь между этими величинами.

Статистическая обработка результатов гликофоринового теста показала, что частота вариантов различного . типа в группе подвергшихся радиационному воздействию достоверно не отличалась от таковой в контроле. Однофакторный дисперсионный анализ частоты мутантных эритроцитов МО, N0 и ММ типов и рассчётных величин D и D+R для различных дозовых групп (контроль, до 100 Зев, от 100 до 200

сЗв, 200 и более сЗв) показал одну группу гомогенности. Статистически значимого различия в указанных величинах между этими выборками и группой сравнения не выявлено.

Отмечены высокие значения среднеквадратичного отклонения исследуемых показателей, что говорит об их значительной дисперсии.

При изучении дозовой зависимости уровня вариантных эритроцитов получены коэффициенты корреляции: г=-0.06, г=-1.1-10"3 и г=-0.03 для N0, МО и ММ типов соответственно. Корреляционные построения между дозой на ККМ и рассчётными величинами Э и О+Я в обоих случаях показали коэффициенты -0.05. Это указывает на отсутствие линейной зависимости между дозой на ККМ и частотой соматических мутаций в эритроцитах.

Таким образом, установлено увеличение частоты С03-С04+ клеток в отдалённые сроки (через 43-45 лет) после начала хронического, преимущественно внутреннего облучения. Однако анализ корреляции уровня мутантных лимфоцитов с дозой на ККМ и мощностью последней не позволил отметить какой-либо значимой зависимости. Повышения уровня мутантных по системе гликофорина А эритроцитов при хроническом, преимущественно внутреннем, облучении в отдалённые сроки не отмечено.

Уровень соматических мутаций у лиц, подвергшихся преимущественно внешнему у-облучению. При проведении исследования с использованием ТСЯ-теста отмечено, что уровень СйЗ-С04+ клеток у подвергшихся преимущественно внешнему радиационному воздействию был выше в сравнении с контролем (табл.4).

То же отмечено и в двух выделенных дозовых группах. Однако статистически значимое отличие наблюдалось только при дозах до 100 сЗв. По-видимому, на достоверность различий оказывает влияние упоминавшаяся ранее крайне высокая величина количества мутантных лимфоцитов у одного из обследованных лиц. Её исключение значительно снижает дисперсию показателя внутри выборки, а различие между группой всех облучённых и группой сравнения становится статистически значимым (табл. 4).

l

Значения среднеквадратичного отклонения у подвергшихся радиационному воздействию выше, чем в контроле, но его дозовой зависимости не отмечено.

Таблица 4

Частота (М±т) мутаций поТ-клеточному рецептору у лиц, подвергшихся преимущественно внешнему облучению

Дозовая группа п, (чел.) Средняя доза, сЗв Частота мутаций по Т-клеточному рецептору (•Ю-4) а

Все облучённые 50 103.3+7.7 2.91±0.60 4.32

(11.0-281.8) (0-31.7)

Все облучённые (а) 49 103.1 ±7.9 2.32+0.17* 1.20

(11.0-281.8) (0-6.3)

в том числе 22 55.8±6.4 2.54±0.28* 1.32

до 100 сЗв (11.0-88.9) (0.7-6.3)

более 100 сЗв 28 140.6±7.2 3.20±1.07 5.68

(106.2-281.8) (0-31.7)

Более 100 сЗв (а) 27 141.7+7.4 2.14+0.21 1.08

(106.2-281.8) (0-4.5)

Группа сравнения 35 0 1.7010.14 (0.2-4.8) 0.82

Примечание: * - обозначена достоверность различий с группой сравнения;

а - обозначены величины, полученные после исключения из исследования индивида с край не высокой частотой мутантных лимфоцитов.

При построении регрессионной зависимости получен коэффициент корреляции г=0.11. Исключение из анализа индивида с крайней величиной ТСЯ-мутантных лимфоцитов (об'яснение выше по тексту) не влияет на величину коэффициента корреляции (г=0.1). Это свидетельствует об отсутствии взаимосвязи между дозой на ККМ и уровнем мутантных по гену Т-клеточного рецептора лимфоцитов.

По результатам гликофоринового теста достоверных различий с контролем уровня МО, ММ клеток и рассчётных параметров И и О+Я не отмечено. Во всех дозовых группах частота гемизиготных

эритроцитов N0 типа была значительно ниже, чем в контроле. Различия являлись статистически значимыми. Для N0 вариантов отмечена значительно меньшая дисперсия средней частоты внутри дозовых групп. Анализ регрессионной зависимости частоты вариантых эритроцитов различных типов и величин й и О+Я от дозы внешнего облучения на ККМ не позволил выявить значимой взаимосвязи. Получены коэффициенты корреляции: г=0.01 для МО и г=0.08 для ММ вариантов. Видно, что положительной корреляции не обнаружено. Несколько выше коэффициент корреляции с дозой на ККМ для N0 вариантов, он равен -0.27. Однако зависимость рассчётных величин Э и О+Я, интегрально отображающих уровень всех типов вариантных клеток, от дозы (г=0.006 и г=-0.04 соответственно) не выявлена.

Таким образом, количество СОЗ-СЭ4+ клеток у облучённых достоверно выше, чем в группе сравнения, однако линейной зависимости исследуемого показателя от дозы в данной выборке людей не выявлено. Уровень мутантных по гену гликофорина А эритроцитов у подвергшихся хроническому преимущественно внешнему радиационному воздействию достоверно не отличается от контроля.

Проведенный сравнительный анализ частоты соматических мутаций в группах лиц, подвергшихся хроническому, преимущественно внутреннему, и пролонгированному, преимущественно внешнему облучению, не .позволил отметить между ними достоверных различий частоты СРА-мутантных эритроцитов МО, ММ типов, расчётных величин О и О+И, а также частоты ТСЯ-мутантных лимфоцитов.

Таким образом, несмотря на различия в характере формирования и распределения дозы при хроническом, преимущественно внутреннем (за счёт 90Бг и 137Сз), и преимущественно внешнем у- радиационном воздействии, изменение уровня соматических мутаций в клетках периферической крови однотипно.

Сравнительный анализ уровня соматических мутаций и хромосомных аберраций в клетках периферической крови лиц, подвергшихся хроническому радиационному воздействию.

Проведённый сравнительный анализ количества мутантных по Т-клеточному рецептору лимфоцитов периферической крови и частоты транслокаций, оцененной методом флюоресцентной in situ гибридизации, не позволил отметить чёткой взаимосвязи. Коэффициент корреляции при изучении регрессионной зависимости между уровнем . TCR-мутантных лимфоцитов и частотой транслокаций составил 0.10. Исключение из исследования индивида с необычно высоким уровнем CD3-CD4+ клеток существенно не изменило значение коэффициента (г=0.12).

Анализ зависимости количества хромосомных аберраций нестабильного типа (дицентрики) и уровня TCR-мутантных клеток в обследованной выборке лиц показал близкие к нулю значения коэффициентов корреляции как без исключения, так и с исключением человека с высокой частотой мутаций, которые составили -0.06 и -0.03.

Изучение взаимосвязи между количеством GPA-вариантных эритроцитов различного типа и частотой стабильных хромосомных аберраций не позволило выявить чёткой положительной корреляции. Коэффициенты равнялись 0.29, -0.37, 0.07, 0.15 и 0.15 для N0, МО, ММ вариантов и рассчётных величин D и D+R соответственно.

Какой-либо взаимосвязи частоты нестабильных хромосомных аберраций с количеством мутантных эритроцитов также не было обнаружено. Коэффициенты корреляции между частотой N0, МО, ММ, D, D+R и числом стабильных хромосомных аберраций составили 0.01, 0.01, -0,07, 0.02^-0.04 соответственно.

Таким образом, зависимости между частотой хромосомных аберраций стабильного и нестабильного типа и уровнем соматических мутаций в клетках периферической крови не выявлено.

Проведённые исследования позволяют прийти к заключению о том, что в отдалённые сроки (через 43-45) с начала хронического радиационного воздействия в периферической крови сохраняется повышенный уровень мутантных по Т-клеточному рецептору лимфоцитов, в то время как частота GPA-вариантных эритроцитов не превышает таковую у необлучённых людей.

Результаты настоящей работы - подтверждают данные, полученные в других исследованиях и свидетельствуют о высокой чувствительности генов системы Т-клеточного рецептора к

воздействию мутагенных факторов, в том числе радиации (Б. Куо1гиггм е1 а)., 1992). Однако ранее было показано, что с течением времени частота СйЗ-С04+ клеток заметно снижается вследствие элиминации мутантных клеток (1Ю. Ьапдкиэ е1 а1., 1987). По данным литературы период полувыведения ТСК-мутантных лимфоцитов из организма составляет около 2 лет (М. Ак1уата е1 а\., 1992). Так, через 40 и более лет после атомной бомбардировки Хиросимы и Нагасаки уровень СйЗ-С04+ лимфоцитов у облучённых лиц не отличался от фоновых показателей (Б. Куогал™ е1 а1.р 1992). Исследование образцов крови жителей Уральского региона также проводилось спустя длительное время (43-45 лет) после начала радиационного воздействия. Выявленные различия с результатами наблюдений за лицами, подвергшимися острому облучению вследствие атомной бомбардировки Хиросимы и Нагасаки, по-видимому, обусловлены существенными различиями в характере формирования дозы облучения. Повышение уровня мутантных лимфоцитов у лиц, подвергшихся хроническому облучению, может быть связано не только с высокой чувствительностью системы Т-клеточного рецептора к воздействию мутагенных факторов, но и с продолжающимся облучением ККМ жителей прибрежных сёл р. Теча за счёт инкорпорированного в костной тканью Э^Бг (А.В. Аклеев и соавт., 1995).

Результаты ранее проведённых исследований уровня соматических мутаций, прежде всего после острого облучения, свидетельствуют о меньшей чуствительности к действию радиации гена, ответственного за синтез гликофорина А, нежели генов системы Т-клеточного рецептора (М. АМуата е1 а1., 1992). Результатом этого, по-видимому и является отсутствие значимого повышения частоты мутантных по локусу гликофорина А эритроцитов у лиц, подвергшихся хроническому облучению на Южном Урале (средняя эквивалентная доза на ККМ 121.5+6.6 сЗв, диапазон индивидуальных значений от 11.0 до 462.7 сЗв) при низкой мощности дозы облучения. Однако, у лиц, подвергшихся острому радиационному воздействию (средняя доза внешнего облучения составила коло 150 сГр, диапазон индивидуальных значений от 10 до 502 сГр) высокой мощности примерно в те же сроки отмечалось увеличение частоты СРА-мутантных эритроцитов (Я.З. 1_апд1о1з е1 а!., 1987, Б. Куо^и1тн е1 а1., 1989). Вероятнее всего, основную роль в данном случае сыграли

различия в характере распределения дозы во времени. Невысокая чувствительность гена гликофорина А и низкая мощность облучения при хроническом радиационном воздействии не позволили выявить сколько-нибудь значимого . увеличения количества вариантных эритроцитов в отдалённые сроки у жителей прибрежных сёл р.Теча.

Отсутствие чёткой дозовой зависимости частоты мутантных по Т-клеточному рецептору лимфоцитов, вероятно, может быть связано с неопределённостями в оценке физических доз как внешнего, так и внутреннего облучения. К сожалению, индивидуальные дозы у-облучения в Южноуральском регионе пока не восстановлены, поэтому в данной работе использовались индивидуализированные дозы внешнего облучения с учётом места, сроков проживания на радиоактивно загрязнённых территориях и обусловленных возрастом особенностей режима поведения людей. Существует неопределённость и в оценке физических доз внутреннего облучения (У.Р. КогИеигсл/ е1 а1., 1994).

Большой разброс индивидуальных значений исследованных показателей (частоты ТСР-мутантных лимфоцитов и СРА-вариантных эритроцитов) и отсутствие выраженных дозовых зависимостей свидетельствуют о том, что для целей индивидуальной ретроспективной дозиметрии в отдалённые сроки, при хроническом радиационном воздействии, и гликофориновый тест, и анализ состояния Т-клеточного рецептора являются малоинформативными методами.

Достоверное повышение частоты СОЗ-СР4+ клеток вр всех обследованных дозовых группах при хроническом радиационном воздействии позволяет сделать предположение о возможном использовании этого метода, особенно в комплексе с другими методиками (анализ стабильных и нестабильных хромосомных аберраций), для целей биологической индикации и групповой дозиметрии хронического облучения в отдалённые сроки.

Выявленное увеличение количества СЭЗ-С04+ лимфоцитов как в группе лиц, подвергшихся преимущественно внутреннему (средняя эквивалентная доза на ККМ 132.9±9.3 сЗв, колебания индивидуальных значений от 25.7 сЗв до 462.7 сЗв), когда критическим органом является красный костный мозг - центральный орган гемо- и иммунопоэза, так и в выборке подвергшихся преимущественно внешнему (средняя эквивалентная доза на ККМ 103.3±7.7 сЗв,

диапазон индивидуальных значений от 11.0 сЗв до 281.8 сЗв) облучению в сопоставимых дозах свидетельствует об отсутствии значимого влияния характера радиационного воздействия на этот показатель. Увеличение частоты соматических мутаций в лимфоцитах периферической крови у лиц, подвергшихся преимущественно внешнему у-облучению, по-видимому, также как и при внутреннем радиационном воздействии, об'ясняется наличием

инкорпорированного 90Sr в костной ткани (доля внутреннего облучения в формировании кумулятивной дозы на ККМ, по данным A.B. Аклеева и соавт, (1991) у жителей верховьев р.Теча достигала 20-40%).

Факт увеличения частоты CD3-CD4+ клеток в отдалённые сроки после начала радиационного воздействия может свидетельствовать о возможном повышении уровня соматических мутаций в других органах и тканях. Это может иметь огромное значение для прогнозирования радиационно-индуцированных злокачественных новообразований. Вышеизложенное позволяет сделать вывод о возможности использования анализа состояния Т-клеточного рецептора в качестве индикатора, характеризующего соматический мутагенез не только в системе гемопоэза, но и во всём организме при хроническом радиационном воздействии в отдалённые сроки и предположить, что TCR-тест может быть эффективен для цели формирования групп повышенного онкологического риска. С другой стороны важно подчеркнуть, что отмеченное снижение экспрессии Т-клеточного рецептора в лимфоцитах у лиц, подвергшихся хроническому -» облучению, достаточно хорошо коррелирует со снижением функции Т-

звена иммунитета у части людей этой же когорты в отдалённые сроки (А.В.Аклеев, 1995).

Проведённые цитогенетические исследования у части жителей прибрежных сёл р.Теча позволили установить некоторое увеличение у них частоты стабильных и нестабильных хромосомных аберраций в лимфоцитах периферической крови. Однако, хотя в группе людей из этой же когорты отмечено повышение уровня CD3-CD4+ клеток, зависимости между частотой хромосомных аберраций и количеством TCR-мутантных лимфоцитов вышеназванными параметрами не было.

Исследование влияния возраста и пола на частоту TCR-мутантных лимфоцитов и GPA-вариантных эритроцитов приводит к заключению о том, что эти физиологические параметры не оказывают значимого влияния на уровень соматических мутаций.

ВЫВОДЫ

1. В отдалённые сроки (через 43-45 лет) после начала хронического комбинированного (внешнего у- и внутреннего, за счёт 905г и 137Сз) радиационного воздействия при средней кумулятивной дозе облучения красного костного мозга 119.9±7.2 сЗв (11.0 - 462.7 сЗв), у облучённых лиц сохраняется повышенный уровень С03-С04+ лимфоцитов.

2. Анализ состояния Т-клеточного рецептора лимфоцитов периферической крови позволяет осуществлять биологическую индикацию хронического радиационного воздействия в отдалённые сроки.

3. Частота соматических мутаций в эритроцитах периферической крови, оцененная методом гликофоринового анализа в отдалённые сроки хронического радиационного воздействия, не превышает таковую у лиц аналогичного возраста, не подвергавшихся облучению.

4. Через 43-45 лет после начала хроничесого радиационного воздействия не установлено зависимости частоты мутантных по системе Т-клеточного рецептора лимфоцитов от кумулятивной дозы облучения красного костного мозга.

5. В отдалённые сроки частота соматических мутаций в клетках (эритроцитах и лимфоцитах) периферической крови у лиц, подвергшихся преимущественно внешнему у-облучению (средняя эквивалентная доза на красный костный мозг 103.3+7.7 сЗв) соответствовала таковой у лиц, подвергшихся хроническому, преимущественно внутреннему, облучению в сопоставимых дозах (средняя эквивалентная доза на красный костный мозг 132.9±9.3 сЗв).

6. Не установлено зависимости уровня соматических мутаций, оцененных с использованием гликофоринового теста и метода оценки состояния Т-клеточного рецептора, от пола и возраста (возрастной диапазон от 42 до 87 лет).

7. У людей, подвергшихся хроническому радиационному воздействию, не отмечено зависимости между частотой соматических мутаций и хромосомных аберраций стабильного (транслокации) и нестабильного (дицентрики) типов в клетках периферической крови.

Практические рекомендации. Длительно сохраняющийся повышенный уровень CD3-CD4+ лимфоцитов в периферической крови лиц подвергшихся хроническому радиационному воздействию позволяет использовать анализ состояния Т-клеточного рецептора с целью выделения индивидов с высоким уровнем соматических мутаций. Последних, с учётом других факторов риска онкологических заболеваний, целесообразно относить к группе повышенного риска в отношении отдалённых соматико-стохастических (прежде всего, канцерогенных ) последствий облучения. Формирование групп повышенного риска отдалённых последствий облучения позволит повысить эффективность ранней диагностики рака и проводить мероприятия по его первичной профилактике.

Разработанная, с учётом анализа уровня соматических мутаций, система формирования групп повышенного риска в отношении отдалённых пострадиационных эффектов используется в практической деятельности Уральского Научно-практического Центра радиационной медицины при наблюдении за лицами, подвергшимися повышенным уровням облучения в Уральском регионе.

Список работ, опубликованных по теме диссертации.

1. Akleyev A.V., Awa A., Akiyama M., Veremeyeva G.A., Vozilova A.V., Kyoizumi S., Kozheurov V.P. Comparative aspects of long-term biological indication of acute and chronic population exposure //Problems of reconstruction of mdividual radiation doses as a resuit of large-scale radiation accidents and estimation of radiation riscs. - Moscow. - 1994. - P. 4.

2. Аклеев A.B., Силкина Л.А., Веремеева Г.А., Группы риска отдаленных последствий облучения человека //Влияние радиации на живую природу и здоровье человека //Ред. Бурдаков Н.С. - 1995,- С. 75 -83.

3. Akleyev A.V., Kossenko M.M., Silkina L.A., Degteva M.O., Yachmenyov V.A., Awa A., Akiyama M., Veremeyeva G.A., Vozilova A.V., Kyoizumi S., Kozheurov V.P., Vyushkova O.V. Health Effects of Radiation Incidents in the Southern Urals //Stem Cells. - 1995. - V. 13. - Suppl. 1. - P. 58-68.

4. Аклеев A.B., Ава A., Акияма M., Веремеева Г.А., Возилова A.B., Накамура H, Кодама Я., Нанако М., Охтаки К., Киоизуми С., Кожеуров

В.П. Биологическая, индикация хронического облучения в отдалённые сроки //Медицинская радиология и радиационная безопасность. Материалы 1-го Международного Симпозиума "Хроническое радиационное воздействие: риск отдалённых эффектов /Ред.: Л.А. Ильин, A.B. Аклеев. - 1996. -том 1. - С. 7-19.

•о