Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Частота мутантных по локусу Т-клеточного рецептора лимфоцитов у облученных лиц

ВАК РФ 03.00.01, Радиобиология

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Смирнова, Светлана Гурьевна

Введение.

Глава 1. Обзор литературы

1.1. Генетические изменения в клетках периферической крови после облучения.

1.1.1. Генетические изменения, обусловленные прямым действием радиации.

1.1.2. Отдаленные генетические эффекты действия облучения.

1.2. Методы определения хромосомных аберраций в клетках периферической крови.

1.2.1. Анализ частоты нестабильных хромосомных аберраций.

1.2.2. Анализ частоты стабильных хромосомных аберраций.

1.2.3. Микроядерный тест.

1.3. Методы определения генных мутаций в эритроцитах периферической крови.

1.3.1 Определение частоты эритроцитов, мутантных по гену гликофорина А.

1.3.2. Определение частоты эритроцитов, мутантных по гену гемоглобина.

1.4. Методы определения генных мутаций в лимфоцитах периферической крови.

1.4.1. Определение частоты лимфоцитов, мутантных по локусу гипоксантин-гуанин фосфорибозил трансферазы.

1.4.2. Определение частоты лимфоцитов, мутантных по гену главного комплекса гистосовместимости.

1.4.3. Определение частоты лимфоцитов, мутантных по генам Т-клеточного рецептора.

1.4.3.1. Строение ТСК/СБЗ комплекса.

1.4.3.2. Селекция Т- клеток в тимусе.

1.4.3.3. Метод определения мутантных по генам Т- клеточного рецептора лимфоцитов.

1.4.3.4. Частота мутантных клеток у контрольных доноров.

1.4.3.5. Частота мутантных клеток у лиц, имевших контакт с ионизирующим излучением.

1.4.3.6. Изменение частоты мутантных клеток со временем после облучения.

1.4.3.7. Частота ТСЯ- мутантных клеток при наследственной нестабильности генома.

Глава 2. Материалы и методы

2.1. Обследованные лица.

2.2. Выделение мононуклеарной фракции лимфоцитов.

2.3. Иммуннофлуоресцентное окрашивание.

2.4. Проточноцитометрический анализ.

2.5. Влияние хранения образцов крови.

2.6. Статистическая обработка результатов.

Глава 3. Результаты исследования

3.1. Оценка воспроизводимости метода и возможности хранения образцов крови.

3.2. Частота лимфоцитов, мутантных по ТСЯ- генам, в группе контрольных доноров.

3.3. Частота мутантных клеток у лиц, получивших острое облучение за 16 и более лет до анализа.

3.4. Частота мутантных клеток у лиц, получивших острое облучение в результате аварии на ЧАЭС (9- 13 лет до анализа).

3.5. Частота мутантных клеток в близкие сроки после длительного фракционированного облучения.

3.6. Частота мутантных клеток у лиц, получивших пролонгированное облучение в дозах до 0,25 Гр, через 9-13 лет после облучения.

3.7. Частота мутантных клеток у работников радиационнохимических предприятий, являющихся носителями Ри

Глава 4. Обсуждение результатов

4.1. Частота мутантных клеток в группе контрольных доноров.

4.2. Использование ТС11- теста в отдаленные сроки после острого облучения.

4.3. Возможность проведения биологической дозиметрии с помощью ТСЯ- теста в близкие сроки после облучения.

4.4. Возможности использования ТСЯ- теста в отдаленные сроки после пролонгированного облучения в малых дозах.

4.5. Перспективность использования ТС11- теста для индикации хронического внутреннего облучения.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Частота мутантных по локусу Т-клеточного рецептора лимфоцитов у облученных лиц"

Актуальность проблемы

Оценка повреждений генетического аппарата соматических клеток человека в разные сроки после радиационного воздействия остается одной из наиболее актуальных проблем радиобиологии, особенно при облучении в малых дозах. В ближайшие сроки после облучения достаточно хорошо изучены структурные мутации, определяемые цитогенетическими методами в клетках периферической крови, а зависимость количества таких мутаций от дозы используется для биологической дозиметрии (Buckton et al., 1977; Awa et al., 1978). Несмотря на успешное во многих случаях использование цитогенетических методов, актуальной остается разработка новых методов биологической дозиметрии, более чувствительных и пригодных для проведения массовых обследований. Одним из возможных подходов является разработка и оценка информативности методов определения частоты клеток, несущих генные мутации в различных локусах.

В отдаленные сроки после облучения на состояние генома соматических клеток могут влиять различные факторы, как уменьшающие, так и увеличивающие поврежденность генетического материала. В частности, с одной стороны, хорошо известно, что со временем после облучения происходит элиминация части соматических клеток с мутациями (Lloyd et al., 1980; Seifert et al., 1987). В первую очередь погибают клетки с грубыми нарушениями, влияющими на их жизнеспособность. Затем происходит элиминация мутантных клеток с ограниченной продолжительностью жизни вследствие естественного обновления популяций дифференцированных клеток. Дольше всех сохраняются хромосомные и генные мутации, не влияющие на жизнеспособность, деление клетки и возникшие в долгоживущих клетках, например, стволовых предшественниках гемопоэза. С другой стороны, установлено, что действие радиации не ограничивается теми изменениями в геноме клеток, которые могут быть выявлены непосредственно после облучения (Little, 1998; Бурлакова, 2001; Мазурик, Михайлов, 2001). В экспериментах с животными и культивируемыми in vitro клетками млекопитающих показано, что в отдаленные сроки после облучения у части потомков облученных клеток может возникать нестабильность генома. Однако в отношении нестабильности генома соматических клеток человека в отдаленные сроки после облучения данные единичны и носят предположительный характер. Проблема оценки отдаленных генетических последствий действия радиации на соматические клетки человека является малоисследованной, хотя представляет несомненный интерес с теоретической и практической точек зрения, особенно в области малых доз. В частности, такая оценка может играть важную роль для прогноза канцерогенных эффектов облучения.

Для изучения этой проблемы могут быть использованы методы, позволяющие определять частоту клеток с хромосомными и генными мутациями, динамику частоты таких клеток и спектр мутаций.

Можно полагать, что информативность этих методов для изучения поврежденности генома соматических клеток человека in vivo и факторов, определяющих эту поврежденность, будет зависеть от ряда обстоятельств, в том числе и от возможности раздельного анализа мутаций, возникших вследствие прямого действия радиации и возможной радиационно-индуцированной нестабильности генома. При отсутствии указанной возможности важное значение приобретает скорость элиминации клеток с мутациями, индуцированными прямым действием радиации. По достижении достаточно полной элиминации клеток с такими мутациями открывается возможность оценки количества клеток с мутациями, возникающими de novo, в том числе и вследствие возможной нестабильности генома. Существенно также, чтобы метод позволял обследовать большие контингента людей.

С этой точки зрения, среди методов оценки генных мутаций достаточно перспективным является тест, позволяющий определять частоту мутантных по генам Т - клеточного рецептора (TCR) лимфоцитов периферической крови (Kyoizumi et al., 1990). Он быстр в исполнении, характеризуется высокой чувствительностью и хорошей воспроизводимостью. Данные литературы об изменении частоты мутантных клеток после лучевой терапии онкологических больных позволяют полагать, что время жизни клеток с TCR-мутациями, индуцированными прямым действием радиации, весьма ограничено. Это обусловливает необходимость изучения частоты TCR-мутантных клеток у лиц, подвергшихся тотальному облучению, в близкие сроки после воздействия, а также позволяет предположить, что метод может быть полезен для исследования отдаленных мутагенных эффектов облучения соматических клеток, в том числе возникающих de novo мутаций вследствие возможной нестабильности генома.

Данный метод пока редко используется для обследования лиц, подвергшихся радиационному воздействию. Судя по имеющимся публикациям, интенсивные исследования в этом направлении проводились только в 2-3-х лабораториях в мире (Kyoizumi et al., 1990; Аклеев с соавт., 1998; Lanza et al., 1999), поэтому многие вопросы остаются неясными и новые данные о частоте TCR-мутантных клеток у облученных лиц представляют несомненный интерес.

Цель и задачи исследования

Целью настоящей работы является изучение частоты TCR-мутантных лимфоцитов периферической крови человека в разные сроки после разных типов радиационного воздействия. Задачи:

- определить частоту ТСЫ-мутантных клеток у контрольных здоровых лиц, не имевших контакта с радиационным и другими генотоксическими воздействиями; исследовать зависимость этого показателя от возраста;

- изучить уровень ТСЯ- мутантных лимфоцитов у лиц, подвергшихся острому облучению в дозах 0,5- 9,0 Гр, через 10- 40 лет после воздействия; сравнить его с таковым в группе контрольных доноров сходного возраста; проанализировать корреляцию этого показателя с дозой облучения;

- исследовать частоту ТСЯ- мутантных клеток у ликвидаторов аварии на ЧАЭС, подвергшихся пролонгированному облучению в дозах до 0,25 Гр, через 10 лет после воздействия; сравнить этот показатель с таковым в группе контрольных доноров сходного возраста;

-проанализировать корреляцию частоты мутантных клеток в группе ликвидаторов, подвергшихся пролонгированному облучению в доза до 0,25 Гр, с дозой облучения, условиями радиационного воздействия и возрастом обследованных лиц;

- определить частоту ТСЫ- мутантных клеток у лиц, подвергшихся длительному (в течение нескольких лет) фракционированному облучению; проанализировать зависимость этого показателя от суммарной дозы облучения;

- проанализировать частоту ТСЯ- мутантных клеток у лиц, являющихся носителями Ри; провести сопоставление этого показателя с имеющимися расчетными величинами доз.

Научная новизна

В работе впервые определена частота ТСЯ- мутантных лимфоцитов в периферической крови у жителей экологически благоприятного региона Российской Федерации, не подвергавшихся зарегистрированным генотоксическим воздействиям.

Впервые установлено, что через 10 лет после пролонгированного облучения в дозах до 0,25 Гр у 15% обследуемых наблюдаются повышенные частоты ТСЫ-мутантных лимфоцитов.

Впервые показано, что в отдаленные сроки (10-40 лет) после острого облучения в дозах 0,5- 9.0 Гр около 30% обследованных имеют повышенные частоты ТСК- мутантных лимфоцитов.

Впервые проведен анализ частоты ТС Я- мутантных клеток у носителей радиоактивного плутония.

Теоретическая и практическая значимость работы

Выполненное в работе обследование контрольных лиц (жителей экологически благоприятного региона Российской Федерации) имеет как теоретическое, так и практическое значение. Во-первых, полученные результаты дают представление о вариабельности данного показателя и его зависимости от возраста, а также позволяют провести сопоставление с данными литературы о частоте ТСЯ- мутантных клеток у лиц другой расы. Во-вторых, полученные результаты являются практически важной основой для сравнительной оценки частоты ТСЯ-мутантных клеток у облученных лиц.

Результаты обследования облученных лиц в отдаленные сроки после воздействия вносят вклад в понимание процессов, происходящих в геноме соматических клеток в эти сроки после облучения. Повышенные частоты ТСЯ-мутантных клеток у части ликвидаторов аварии на ЧАЭС, получивших облучение в дозах до 0,25 Гр и обследованных через 9-13 лет после воздействия, свидетельствуют в пользу гипотезы возникновения нестабильности генома соматических клеток. Анализ частоты ТСЯ-мутантных клеток в данной группе ликвидаторов показал перспективность использования этого метода для дальнейшего изучения закономерностей и механизмов отдаленных последствий действия радиации на организм человека и объективной оценки эффектов действия малых доз облучения. Последний аспект имеет важное социально-экономическое значение, особенно, учитывая тот факт, что данному типу облучения подверглось огромное количество жителей Российской Федерации.

Учитывая ключевую роль мутаций в канцерогенезе, показанное в данной работе повышение частоты ТСЯ-мутантных клеток у части лиц в отдаленные сроки после облучения может быть использовано для формирования группы риска в отношении онкологических заболеваний.

Сопоставление полученных значений частот мутантных клеток с дозами облучения позволило оценить возможность использования ТСК-теста для биоиндикации и биодозиметрии в исследуемые сроки после острого и пролонгированного облучения, а также в случае внутреннего хронического облучения от инкарпорированного плутония.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. В отдаленные сроки (10-40 лет) после острого облучения людей в дозах 0,5- 6,0 Гр около трети обследованных имеет повышенные частоты ТС Я- мутантных лимфоцитов.

2. Через 10 лет после пролонгированного облучения в дозах до 0,25 Гр 15% обследованных имеет повышенные частоты ТСЯ- мутантных лимфоцитов.

3. Доля лиц с повышенными частотами ТС11- мутантных лимфоцитов в случае пролонгированного облучения в дозах до 0,25 Гр зависит от возраста облученных.

4. Среди носителей радиоактивного плутония 74 % обследованных имеет повышенные частоты ТСЯ- мутантных лимфоцитов.

Апробация работы.

Материалы диссертации доложены на Международной конференции по биодозиметрии и 5 международном симпозиуме по ЭПР- дозиметрии (Москва/Обнинск, 1998г.), Международном конгрессе "Энергетика- 3000" (Обнинск, 1998г.), IV съезде по радиационным исследованиям (Москва, 2001г.), конкурсе научных работ по фундаментальным проблемам радиобиологии (Обнинск, 2001).

По материалам диссертации опубликовано 8 печатных работ.

Структура и объем диссертации.

Диссертация состоит из введения, 3 глав, заключения, выводов и списка литературы. Работа изложена на 109 страницах печатного текста, иллюстрирована 11 таблицами и 12 рисунками. Библиографический указатель включает 123 названия (38 отечественных и 85 зарубежных) печатных работ.

Заключение Диссертация по теме "Радиобиология", Смирнова, Светлана Гурьевна

ВЫВОДЫ:

1. В группе контрольных доноров, жителей экологически благоприятного региона Российской Федерации, увеличение частоты ТСЯ- мутантных лимфоцитов с возрастом составляет 1% в год от исходного значения, что сопоставимо с результатами, полученными японскими исследователями для контрольной группы жителей Японии.

2. В отдаленные сроки после облучения (10- 40 лет) во всех группах обследованных процент лиц с повышенными частотами мутантных клеток статистически значимо выше, чем в контроле.

3. В отдаленные сроки (10-40 лет) после острого облучения людей в дозах 0,5- 6,0 Гр частоты ТСЛ- мутантных клеток статистически значимо выше, чем в контроле (р< 0,05), однако они не коррелируют с дозами облучения, в связи с чем ТСЯ- тест не может быть информативен для биологической дозиметрии.

4. Через 10 лет после пролонгированного облучения в дозах до 0,25 Гр частоты ТСЯ- мутантных клеток статистически значимо выше, чем в контрольной группе (р< 0,05). Повышенные частоты не являются следствием прямого действия радиации.

5. Частота ТСЯ- мутантных лимфоцитов в последней группе обследованных не зависит от дозы и мощности облучения. Повышенные частоты мутантных клеток чаще встречаются среди лиц, облученных в более молодом возрасте.

6. У носителей Ри частоты ТСЫ- мутантных клеток клеток статистически значимо выше, чем в контроле (р< 0,01). ТСЯ- тест может быть использован для индикации хронического радиационного воздействия, обусловленного инкорпорацией радиоактивного плутония.

Заключение

В ходе работы был определен диапазон частот ТСЯ- мутантных клеток для группы контрольных доноров, являющихся жителями экологически благоприятного региона Российской Федерации. Показано небольшое увеличение частоты мутантных клеток с возрастом (1% в год от исходного значения) и широкая вариабельность этого показателя в пределах возрастных групп. Полученные результаты согласуются с результатами японских исследователей о частоте ТСЯ- мутантных клеток у контрольной группы жителей Японии.

В близкие сроки (1-6 лет) после длительного фракционированного облучения частоты ТСЯ- мутантных клеток повышены в случаях, когда суммарная доза облучения была 3,6 Гр и выше. Из- за небольшого числа обследованных и сложного характера облучения нельзя сделать вывод об информативности ТСЯ- теста для биодозиметрии, однако, полученные данные не противоречат предположению о том, что в близкие сроки после облучения тест может быть использован в этих целях.

Обследование лиц, являющихся носителями радиоактивного плутония, показало, что большинство из них имеет повышенные частоты ТСЯ- мутантных клеток. Это согласуется с имеющимися в литературе данными о повышенной частоте хромосомных аберраций у лиц с инкорпорированным Ри через много лет после прекращения работы на радиационно- химических предприятиях. Результаты, полученные при анализе частоты мутантных клеток у носителей плутония, свидетельствуют о перспективности применения теста для биологической индикации радиационного воздействия и,возможно, биологической дозиметрии.

В отдаленные сроки (10- 40 лет) после острого тотального облучения около трети обследованных имеют повышенные частоты мутантных клеток. При этом частоты не коррелируют с дозой облучения. Повышенные частоты могут быть следствием как неполной элиминации ТС11- мутантных клеток, обусловленных прямым действием радиации (в основном это относится к случаям проведения анализа через 10 лет после облучения), так и возникшей нестабильности генома. Хотя возможны и какие- либо иные причины.

Через 10 лет после пролонгированного облучения в дозах до 0.25 Гр у 15% обследованных частоты мутантных клеток превышают контрольный уровень. Учитывая все особенности теста и характера облучения, было высказано предположение о том, что повышение частоты мутантных клеток в этом случае может быть следствием возникновения обусловленной облучением нестабильности генома. Использование именно этой модели, когда вклад прямого действия радиации минимален, может иметь большое значение для изучения закономерностей и механизмов возникновения нестабильности генома и объективной оценки эффекта действия малых доз облучения.

Таким образом, результаты, полученные в работе, расширили наши представления об информативности ТСЯ- теста при разных условиях облучения, а также открыли новые возможности в плане изучения отдаленных последствий действия облучения.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Смирнова, Светлана Гурьевна, Обнинск

1. Аклеев A.B., Веремеева Г.А., Киоизуми С. Влияние хронического радиационного воздействия на уровень соматических мутаций в клетках периферической крови людей в отдаленные сроки // Радиац. биология. Радиоэкология.- 1998.- Т. 38.- В. 4.- С. 573- 585.

2. Анкина М.А., Михайлова Г.Ф. Изучение зависимости доза эффект для частоты бинуклеарных клеток с микроядрами в культуре лимфоцитов человека после у- облучения // Радиобиология.- 1991.- Т. 31.- В. 1.- С. 71-76.

3. Ауэрбах Ш. Проблемы мутагенеза.- Москва. «Мир».- 1978.- 463 С.

4. Безлепкин В.Г., Газиев А.И. Индуцированная нестабильность генома половых клеток животных по мини- и микросателлитным последовательностям // Радиац. биология. Радиоэкология.- 2001.- Т. 41.-N. 5.-С. 475-488.

5. Бочков Н.П. Цитогенетические эффекты облучения у человека // Автореф. дис. д- ра. мед. наук.- Москва.- 1969.

6. Бурлакова Е.Б., Голощапов А.Н., Жижина Г.П., Конрадов A.A. Новые аспекты закономерностей действия низкоинтенсивного облучения в малых дозах // Радиац. биология. Радиоэкология,- 1999.- Т. 39.- N. 1.- С. 26- 34.

7. Бурлакова Е.Б., Михайлов В.Ф., Мазурик В.К. Система окислительно-восстановительного гомеостаза при радиационно- индуцированной нестабильности генома // Радиац. биология. Радиоэкология.- 2001.- Т. 41.- N. 5.-С. 489- 499.

8. Веремеева Г.А. Влияние хронического радиационного воздействия на уровень соматических мутаций в клетках периферической крови людей в отдаленные сроки // Автореф. дис. канд. биол. наук.- Москва.- 1996.

9. Возилова A.B., Аклеев A.B., Бочков Н.П., Катосова Л.Д. Отдаленныецитогенетические эффекты хронического облучения населения Южного Урала // Радиац. биология. Радиоэкология. 1998.- Т. 38.- В. 4.- С. 586590.

10. Ю.Воробцова И.Е. Влияние облучения родителей на физиологическую полноценность и риск канцерогенеза у потомства первого поколения организмов разных видов // Автореф. дис. д- ра. биол. наук,-Ленинград.- 1988.

11. Воробцова И.Е., Михельсон В.М., Воробьева М.В. с соавт. Результаты цитогенетического обследования ликвидаторов последствий аварии на ЧАЭС, проведенного в разные годы // Радиац. биология. Радиоэкология.- 1994.- Т. 34.- В. 6.- С. 798- 804.

12. И.Воробьева М.В. Исследование радиочувствительности хромосом детей облученных родителей // Автореф. дис. конд. биол. наук.- СПб.- 1995.

13. Галактионов В.Г. Иммунология.- Издательство Московского университета.- 1998.

14. Гилева Э.А., Нохрин Д.Ю., Стариченко В.И. Хромосомная нестабильность у потомков полевок из зоны радиационного неблагополучия // Генетика.- 2000.- Т. 36.- № 5.- С. 714- 717.

15. Мазурик В.К., Михайлов В.Ф. Радиационно-индуцируемая нестабильность генома: феномен, молекулярные механизмы, патогенетическое значение // Радиац. биология. Радиоэкология,- 2001.Т. 41.-№3.- С. 272- 289.

16. Моисеенко В.В. Применение методов биофизического моделирования для ретроспективной оценки доз по хромосомным аберрациям вразличные сроки после облучения // Автореф. дис. канд. биол. наук.-Обнинск,- 1993.-24 С.

17. Нугис В.Ю., Филюшкин И.В., Чистопольский A.C. Использование распределения дицентриков в лимфоцитах периферической крови человека для ретроспективной оценки дозы облучения // Радиац. биология. Радиоэкология,- 1996,- Т. 36.- В. 6.- С. 815- 824.

18. Нугис В.Ю. Элиминация радиационно-индуцированных аберраций хромосом с течением времени после аварийного облучения // Тез. IV съезда по радиац. исследованиям.- Москва,- 2001.- С. 133.

19. Окладникова Н.Д. Хромосомные аберрации в лимфоцитах периферической крови больных хронической лучевой болезнью через 25- 30 лет после прекращения контакта с радиационным фактором // Бюллетень радиационной медицины.- 1985.-N. 1.-С. 102- 106.

20. Окладникова Н.Д., Бурак Л.Е. Отдаленные цитогенетические эффекты хронического профессионального облучения // Бюллетень радиационной медицины.- 1993.- N. 1.- С. 85- 90.

21. Пелевина И.И., Афанасьев Г.Г., Алещенко с соавт. Радиоиндуцированный адаптивный ответ у детей и влияние на него внешних и внутренних факторов // Радиац. биология. Радиоэкология.-1999,- Т. 39,- N. 1.-С. 106-112.239

22. Плотникова Л.А. Распределение Pu в организме человека // Бюллетень радиационной медицины.- 1965,- N. 1.- С. 9- 16.

23. Ройт А., Бростофф Дж., Мейл Д.- Иммунология.- Москва. «Мир».- 2000.

24. Севанькаев A.B., Бочков Н.П. Влияние гамма- облучения на хромосомы человека. I. Зависимость частоты хромосомных аберраций от дозы при облучении in vitro //Генетика.- 1968.- Т. 4.- № 5.- С. 130- 137.

25. Севанькаев A.B., Насонов А.П. Применение анализа хромосомных аберраций в лимфоцитах периферической крови человека для биологической дозиметрии // В кн.: Радиация и организм.- Обнинск.-1975.- С. 93-94.

26. Севанькаев A.B., Насонов А.П. Калибровочные дозовые кривые хромосомных аберраций лимфоцитов человека // Мед. радиология.-1978.- Т. 23.-№6.- С. 26-33.

27. Севанькаев A.B., Потетня О.И., Жлоба A.A. с соавт. Результаты цитогенетического обследования детей и подростков, проживающих в загрязненных радионуклидами районах Калужской области // Радиац. биология. Радиоэкология.- 1995.- Т.35.- В. 5.- С. 581- 588.

28. Севанькаев A.B. Некоторые итоги цитогенетических исследований в связи с оценкой последствий Чернобыльской аварии // Радиац.биология. Радиоэкология.- 2000,- Т.40.- № 5.- С. 589- 595.

29. Снигирева Г.П., Шевченко В.А., Новицкая Н.Н. Использование FISH-метода для реконструкции поглощенных доз, полученных участниками ликвидации аварии на Чернобыльской АЭС // Радиац. биология. Радиоэкология.- 1995.- Т. 35.- В. 5. С. 654- 661.

30. Сусков И.И., Кузьмина Н.С. Проблема индуцированной геномной нестабильности в детском организме в условиях длительного действия малых доз радиации // Радиац. биология. Радиоэкология.- 2001.- Т.41.-№5.-С. 606-614.

31. Урбах В.Ю. Биометрические методы // «Наука».- Москва.- 1964.- С. 247.

32. Akiyama М., Nakamura N., Yakoda М. Somatic cell mutations in atomic bomb survivors // J. Radiat. Res.- 1991.- V. 32,- Suppl. 1.- P. 278- 282.

33. Akiyama M., Kyoizumi S., Hirai Y. et al. Mutation frequency in humanblood cells increases with age // Mutat. Res.- 1995a.- V. 338.- P. 141-149.

34. Akiyama M., Umeki S., Kusunoki Y. et al. Somatic- cell mutations as a possible predictor of cancer risk // Health Physics.- 1995b.- V. 68 N 5.- P. 643- 649.

35. Albertini R.J., Castle K.L., Borchering W.R. T-cell cloning to detect the mutant 6- thioguanine resistant lymphocytes present in human peripheral blood //Proc. Natl. Acad. Sci. -1982.- V. 79.- P. 6617- 6621.

36. Awa A.A., Sofuni T., Honda T. et al. Relationship between the radiation dose and chromosome aberrations in atomic bomb survivors of Hiroshima and Nagasaki//J. Radiat. Res.- 1978.-V. 19.-P. 126-140.

37. Bender M.A. Biological dosimetry: chromosomal aberration analysis for dose assessment // Vienna: IAEA.- 1986.- P. 1- 69.

38. Bender M.A., Awa A.A., Brooks A.L. et al. Current status of cytogenetic procedures to detect and quantify previous exposures to radiation // Mutat. Res.- 1988.- V. 196.- P. 103-159.

39. Bernini L.F., Natarajan A.T., Schreuder- Rotteveel A.H.M. et al., Assay for somatic mutation of human hemoglobins in: Mortimer M.L. and Albertini R.J. (Eds.)Mutation and the Environment, Part C.- Wilay/Liss.- New York.-1990,-P. 57- 67.

40. Brenner M.B., MeLean J., Dialynas D.P. et al. Identification of a putative second T- cell receptor //Nature (Lond.).- 1986.- V. 332.- P. 145.

41. Buckton K.E., Langlands A.O., Smith P.C. et al. Further studies on chromosome aberration production after whole- body irradiation in man // Int. J. Radiat. Biol.- 1971.- V. 19.- P. 369- 378.

42. Clemenger J.F., Scott D. In vitro and in vivo sensitivity of cultured blood lymphocytes to radiation induction of chromosome aberrations // Nature New Biology.- 1971.-V. 234.-P. 154.

43. Clevers H., Alarcon B., Wileman T., Terhost C. The T cell receptor / CD3 complex: a dynamic protein ensemble // Annu. Rev. Immunol.- 1988.- V. 6.-P. 629- 662.

44. Coffmo P., and Scharff M.P. Rate of somatic mutation in immunoglobulin production by mouse myeloma cells // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.- 1971.-V. 68,- P. 219

45. Cole J., Skopek T.R. Somatic mutant frequency, mutation rates and mutational spectra in the human population in vivo // Mutat. Res.- 1994.- V. 304.-P. 33-105.

46. Dubrova Y.E., Plumb M., Brown J., Jeffreys A.J. Radiation- induced germline instability at minisatellite loci // Int. J. Radiat. Biol.- 1998.- V. 74.-N. 6,- P. 689- 696.

47. Evans H.C., Buckton K.E., Sumner A.T. Cytological mapping of human chromosomes: results obtained with quanocrine fluorescence and the acetic-saline- giemsa techniques // Chromosoma.- 1971.- V. 35.- P. 310- 325.

48. Fabry L., Lemaire M. Dose response relationships for radiation induced chromosome aberrations in human lymphocytes in vivo and in vitro //Strahlentherapia.- 1986,- V. 162.- P. 63- 67.

49. Fenech M., Morley A. A. Cytokinesis block micronucleus method in human lymphocytes effect of in vivo ageing and low dose x- irradiation // Mutat. Res.- 1986.- V. 161,- N. 2,- P. 193- 198.

50. Grist S.A., McCarron M., Kutlaca A. Et al. In vivo human somatic mutation:frequency and spectrum with age // Mutat. Res.- 1992.- V. 266 (2).- P. 189196.

51. Hagmar L., Brogger A., Hanstcen I-L. et al. Cancer risk in humans predicted by increased levels of chromosomal aberrations in lymphocytes: nordic study group on the health risk of chromosome damage // Cancer Res.- 1994.- V. 54,-P. 2919- 2922.

52. Ishioka N., Umeki S., Hirai Y. et al. Stimulated rapid expression in vitro for early detection of in T- cell receptor mutations induced by radiation exposure // Mutat. Ras.- 1997.- V. 390.- P. 269- 282.

53. Iwamoto K.S., Hirai Y. Umeki S. et al. A positive correlation between T cell receptor mutant frequencies and dicentric chromosome frequencies in lymphocytes from radiotherapy patients // J. Radiat. Res.- 1994.- V. 35.- P. 92-103.

54. Janatipour M., Trainor K.J., Kutlaca R. et al. Mutations in human lymphocytes studied by an HLA selection system // Mutat. Res.- 1988.- V. 198.-P. 221-226.

55. Jensen R.H., Langlois R.G., Begbee W.L. et al. Elevated frequency of glycophorin A mutations in erythrocytes from Chernobyl accident victims // Rad. Res.- 1995.- V. 141.- P. 129- 135.

56. Kodama Y., Kushiro J., Hirai Y. et al. Frequent involvement of visible chromosomal deletion in X-ray- induced mutants at the HLA-A locus in human T-lymphocytes // Mutat.Res.- 1994,- V. 309 (1).- P. 63- 72.

57. Kronenberg M., Sin G., Hood L.E., Shastri N. The molecular genetics of the T- cell antigen receptor and T- cell antigen recognition // Annu. Rev. Immunol.- 1986.- V. 4.- P. 529-591.

58. Kushiro J., Hirai Y., Kusunoki Y. et al. Development of a flow-cytometric HLA-A locus mutation assay for human peripheral blood lymphocytes // Mutat. Res.- 1992,- V. 272.- P. 17-29.

59. Kyoizumi S., Nakamure N., Hakoda M. et al. Detection of somatic mutations at the glycophorin A locus in erythrocytes of atomic bomb survivors using a single beam flow sorter// Cancer. Res.- 1989.- V. 49.- P. 581- 588.

60. Kyoizumi S., Akiyama M., Hirai Y. et al. Spontaneous loss and alteration of antigen receptor expression in mature CD4+ T cells // J. Exp. Med.- 1990.- V. 171.-P. 1981-1999.

61. Kyoizumi S., Umeki S., Akiyama M. et al. Frequency of mutant T lymphocytes defective in the expression of the T-cell antigen receptor gene among radiation- exposed people // Mutat. Res.- 1992.- V. 265.- P. 173-180.

62. Kyoizumi S., Akiyama M., Cologne J.B. et al. Somatic cell mutations at the glycophorin A locus in erythrocytes of atomic bomb survivors: implications for radiation carcinogenesis // Rad. Res.- 1996.- V. 146,- P. 43- 52.

63. Kyoizumi S., Kusunoki Y., Seyama T. et al. In vivo somatic mutations in Werner's syndrome // Human Genetics.- 1998.- V. 103.- P. 405- 410.

64. Langlois R.G., Bigbee W.L., Jensen R.H. Measurement of the frequency of human erythrocytes with gene expression loss phenotypes at the glycophorin A locus // Hum. Genet.- 1986.- V. 74,- P. 353- 362.

65. Langlois R.G., Bigbee W.L., Kyoizumi S. et al. Evidence for increased somatic mutations at the glycophorin A locus in atomic bomb survivors // Science.- 1987.- V. 236,- P. 445- 448.

66. Little J.B. Radiation- induced genomic instability // Int. J. Radiat. Biol.-1998.- V. 74.-N. 6.-P. 663-671.

67. Lloyd D.C., Purrott R.J., Reeder E.J. The incidence of unstable chromosome aberrations in peripheral blood lymphocytes from unirradiated and occupationally exposed people //Mutat. Res.- 1980.- V. 72.- P. 523- 532.

68. Lloyd D.C. New developments in chromosomal analysis for biological dosimetry // Radiation Protection Dosimetry.- 1998.- V. 77,- N 1-2.- P. 3336.

69. Lucas J.N., Awa A., Straume T. et al. Rapid translocation frequency analysis in humans decades after exposure to ionizing radiation // Int. J. Radiat. Biol.-1992,- V. 62.-N. l.-P. 53- 63.

70. Lucas J.N. Dose reconstraction for individuals exposed to ionizing radiation using chromosome painting // Rad. Res.- 1997.- V. 148.- Suppl 5.- S 33- S 38.

71. Marolleau J.P.JFondel J.D., Malissen M., et al. The joining of germline Va to Ja genes replaces the preexisting Va Ja complexes in a T cell receptor a, P positive T cell line // Cell.- 1983.- V. 55,- P. 291

72. McCarron M.A., Kutlaca A. and Morley A.A. The HLA-A mutation assay: improved technique and normal results // Mutat. Res.- 1989.- V. 225.- P. 189- 193.

73. Mei N., Kunugita N., Nomoto S., Norimura T. Comparison of frequency of T- cell receptor mutants and thioguanin resistence induced by x- rays and ethylnitrosurea in cultured human blood T- lymphocytes // Mutat. Res.-1996,- V. 357.- P. 191- 197.

74. Mombaerts P., Clark A.R., Rudnicki M.A. et al. Mutations in the T- cell antigen receptor alpha and beta block thymocyte development at different stages // 1992.- Natura.- V. 360.- P. 225- 231.

75. Moore D.H., Tucker J.D., Jones I.M. et al. A study of the effects of exposure on cleanup workers at the Chernobyl nuclear reactor accident using multiple end points // Radiat. Res.- 1997.- V. 148 (5).- P. 463- 475.

76. Morley A.A., Trainor K.J., Seshadri R., Ryall R.B. Measurement of in vivomutations in human lymphocytes // Nature.- 1983.- V. 302.- P. 155- 156.

77. Morley A.A., Grist S.A., Turner D.R. et al. Molecular nature of in vivo mutations in human cells at the autosomal HLA-A locus // Cancer Res.-1990.- V. 50.-P. 4584- 4587.

78. Mothersill C. and Seymour C. Radiation- induced bystander effects: past history and future directions // Radiat. Res.- 2001.- V. 155.- P. 759- 767.

79. Nakamura N., Umeki S., Hirai Y. et al. Evalution of four somatic mutation assays for biological dosimetry of radiation- exposed people including atomic bomb survivors // New horizons in biological dosimetry.- 1991.-Wiley- Liess, Inc.- P. 341- 350.

80. Nelson S.L., Giver C.R., Grosovsky A.J. Spectrum of X- ray- induced mutations in the human hprt gene // Carcinogenesis.- 1994.- V. 15.- № 3.- P. 495-502.

81. Padovan E., Casorati G., Dellabona P. Et al. Expression of two T cell receptor X chains: dual receptor T cells // Science.- 1993.- V. 262.- P. 422424.

82. Pilinskaya M.A. Cytogenetic effects in somatic cells of Chernobyl accident survivors as biomarker of low radiation doses exposure // Int. J. Rad. Med.-1999.-V. 2 (2).-P. 60- 66.

83. Pilinskaya M.A., Dibskiy S.S. The frequency of chromosome exchanges in critical groups of Chernobyl accident victims according to conventional chromosome analysis and FISH method // Int. J. Rad. Med.- 2000.- V. 1 (5).-P. 83- 95.

84. Pinkel D., Straume T., and Gray J.W. Cytogenetic analysis using quantitative, high- sensitivity, fluorescence hybridization // Proc. Natl. Acad. Sci.- 1986.- V. 83.- P. 2934- 2938.

85. Russo G., ïsobe M., Pegoraro L., et al. Molecular analysis of a t(7;14) (q35;q32) chromosome translocation in a T cell leukemia of a patient with ataxia telangiectasia//Cell.- 1988.- V. 53.- P. 137

86. Sanderson B.J.S., Dempsy J.L., Morley A.A. Mutation in human lymphocytes: effect of X- and UV- irradiation // Mutat. Res.- 1984,- V. 140.-P. 223-227.

87. Sasaki M.S., Takatsuji T., Ejima Y. et al. Chromosome aberration frequency and rediation dose to lymphocytes by alpha- particles from internal deposit of Thorotrast // Radiat. Environ. Biophys.- 1987.- V. 26.- P. 227-238.

88. Schmid E., Bauchinger M., Bunde E. Et al. Comparison of the chromosome damage and its dose response after whole body exposure to 60Co gamma rays and irradiation of blood in vitro // Int. J. Rad. Biol.- 1974.- V. 26.- N 1,- P. 31-37.

89. Seifert A.M., Bradley W.C. and Messimg K. Exposure of nuclear medicine patients to ionising radiation is associated with rises in HPRT mutation frequency in peripheral T- lymphocytes // Mutat. Res.- 1987.- V. 191.- P. 5763.

90. Sevan'kaev A.V., Lloyd D.C., Edwards A.A. et al. Protracted overexposure11*7to a Cs source: I. Dose reconstruction // Radiation Protection Dosimetry.-1999,- V. 81.- N. 2.-P. 85- 90.

91. Sevan'kaev A.V., Khvostunov I. K., Mikhailova G.F., Golub E.V., Potetnya O.I., Shepel N.N., Nugis V.Yu., Nadejina N.M. // Applied Radiation and Isotopes.- 2000.- V. 4- 4/2.- P. 1-4.

92. Silberstein E.B., Ewing C.J., Bahr G.K., Kereiakes J.K. The human lymphocytes as a radiobiological dosimeter after total body irradiation // Radiat. Res.- 1974.- V. 59,- P. 658- 664.

93. O.Simpson A.J.G. The natural somatic mutation frequency and human carcinogenesis // Cancer Res.- 1997.- P. 209- 240.

94. Strauss G.H. and Albertini R.J. 6- Tioguanine resistant lymphocytes in human blood, in: D. Scott, B.A. Bridges and F.H. Sobels ( Eds ). Progress in Genetic Toxicology, Elsevier, Amsterdam.- 1977.- P. 327- 334.

95. Tates A.D., Bernini L.F., Natajaran A.T. et al. Detection of somatic mutations in man: HPRT mutations in lymphocytes and hemoglobin mutations in erytrocytes // Mutat. Res.- 1989.- V. 213.- P. 73- 82.

96. Tawn E.J., Daniel C.P., Whitehouse C.A.et al. Advances in the approach to the study of somatic mutations in workes occupationally exposed to ionising radiation // Health effects of low dose radiation.- BNES.- London.-1997.- P. 16-21.

97. Turner D.R., Morley A.A. Human somatic mutation at the autosomal HLA-A locus // Prog. Clin. Biol. Res. 1990.- V. 340.- P. 37- 46.

98. Ullrich R.L., Ponnaiya B. Radiation- induced instability and its relation to radiation carcinogenesis // Int. J. Radiat. Biol. 1998.- V. 74,- N. 6,- P. 747754.

99. Umeki S., Suzuki T., Kusunoki Y. et al. Development of a mouse model for studying in vitro T-cell receoptor gene mutation // Mutat. Res.-Genetic Toxicology and Environmental Mutagenesis.- 1997.- V. 393.- N. 1-2.- P. 3746.

100. UNSCEAR 2001 Repot to the General Assembly with Scientific Annexes // V.R. 613: Hereditary effects of radiation.- Vena, 2001.- P.57- 69.

101. Williams J.R., Frank J. Induced hypermutability: A newly observed cellular effect of x- rays which may be important in carcinogenesis // Radiat. Res.-1982,- V. 91.-N. 2,-P. 368- 371.