Влияние гидролизата и экстракта из кукумарии японской на морфологию яичников крыс в разные стадии эстрального цикла

Зенкина, Виктория Геннадьевна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Влияние гидролизата и экстракта из кукумарии японской на морфологию яичников крыс в разные стадии эстрального цикла
ВАК РФ 03.00.25, Гистология, цитология, клеточная биология

Автореферат диссертации по теме "Влияние гидролизата и экстракта из кукумарии японской на морфологию яичников крыс в разные стадии эстрального цикла"

На правах рукописи

ЗЕНКИНА ВИКТОРИЯ ГЕННАДЬЕВНА

ВЛИЯНИЕ ГИДРОЛИЗАТА И ЭКСТРАКТА ИЗ КУКУМАРИИ ЯПОНСКОЙ НА МОРФОЛОГИЮ ЯИЧНИКОВ КРЫС В РАЗНЫЕ СТАДИИ ЭСТРАЛЬНОГО ЦИКЛА

03.00.25 - гистология, цитология, клеточная биология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени

кандидата медицинских наук

Владивосток - 2004

Работа выполнена во Владивостокском государственном медицинском университете

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор Каредина Валентина Семенова

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Черток Виктор Михайлович кандидат медицинских наук Грибань Андрей Николаевич

Ведущая организация:

Хабаровский филиал Дальневосточного научного центра физиологии и патологии дыхания СО РАМН - НИИ охраны материнства и детства

Защита состоится << 7<г » декабря 2004 года в 10.00 часов на заседании диссертационного совета Д 208.007.01 при Владивостокском государственном медицинском университете по адресу: 690990, г. Владивосток, пр. Острякова, 2

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Владивостокского государственного медицинского университета

Автореферат разослан ноября 2004 года

Ученый секретарь диссертационного совета Рева Г.В.

Введение

Актуальность проблемы Проблема регуляции процессов роста, созревания, овуляции, атрезии фолликулов, функционирования желтого тела в яичниках является одной из наиболее важных в репродуктивной биологии.

Интерес к этой проблеме связан с клиническими задачами - лечение и профилактика различного рода нарушений в репродуктивной функции женщин и не утрачивает свою актуальность до настоящего времени. В частности, дисгенезия гонад может быть результатом тотальной или субтотальной атрезии оогоний как во время, так и сразу после их миграции в эмбриональные гонады. Синдром истощения яичников является следствием усиленной атрезии фолликулов На одной или нескольких стадиях их развития. Недостаточность яичников, лечение которой химиотерапевтическими препаратами осложняется возможностью малигнизации, можно будет предупредить, конкурентно блокируя индукцию программированной клеточной гибели в фолликулах. Даже физиологическую недостаточность яичников, возникающую в климактерическом периоде, можно значительно отсрочить, если будет обнаружена возможность замедлить атретические процессы [B.C. Новиков, 19%; Г.Т. Сухих с соавторами, 1999].

В последние годы появилось много публикаций о биологической и фармакологической активности органических природных соединений морского происхождения [В.И. Калинин, B.C. Левин, ВА Стоник, 1994; Oshsima, 199S; ВА Мулынднн, 2002]. Мноте вилы морских организмов в настоящее время применяются в пищевых целях, в традиционной и нетрадиционной медицине, в качестве пищевых добавок. Из морских гидробионтов обращают на себя внимание, в качестве источников биологически активных веществ, представители класса голотурий, из которых наиболее распространенным в прибрежных водах Приморья, является кукумария японская (Cucumaria japónica). Биологически активные вещества (БАВ) кукумарии обладают антимикробным, фунгицидным действием. Они стимулируют фагоцитоз, проявляют иммуномодулирующие rnnfirrfl и

I »ИВЛМОТеКА I

¿гград

гипотензивное действие, задерживают рост опухолевых клеток [Elyakov, 1990; Conde, 1997; Т.К. Лебская, 2000], С.Н. Ефимова и Л.Ю. Савватеева (1999) установили, что отходы переработки кукумарии в качестве подкормки в рацион норок усиливают половую активность и улучшают качество спермы у самцов. У самок становится выше плодовитость, повышается жизнеспособность потомства. Изучение действия препаратов из иглокожих на морфологическом уровне репродуктивной системы самок экспериментальных животных до настоящего времени не проводилось. В связи с этим актуальны научные исследонания в этой области.

Цель исследования: ичучить морфологию яичников крыс на разных стадиях эстрального цикла при кормлении животных гидролизатом и экстрактом из кукумарии японской.

Задачи исследования:

1. Изучить особенности влияния гидролизата и экстракта из кукумарии на общеморфологические показатели животных, эстральный цикл.

2. Дать морфофункциональную характеристику тканевым базофилам мезовариальной брыжейки в разные стадии полового цикла в контроле и эксперименте.

3. Описать морфологию стероидпродуцирующих структур яичников в эструсе и диэструсе у интактных животных.

4. Изучить морфофункциональное состояние яичников крыс в эструсе и диэструсе после получения ими гидролизата и экстракта из кукумарии японской в половозрелом периоде.

5. Изучить морфофункциональное состояние яичников крыс в разные стадии полового цикла (эструс, диэструс) после получения ими гидролизата и экстракта из кукумарии японской до момента полового созревания.

6. Описать морфологию яичников неонатально андрогенизированных крыс до и песле получения ими экстракта из кукумарии японской.

Научная новизна

1. Впервые получены данные о состоянии астрального цикла самок крыс после получения ими гидролизата и экстракта из кукумарии японской.

2. Впервые проведен морфометрический и гистохимический анализ ТК мезовариальной брыжейки крыс в разные стадии эстрального цикла до и после введения в рацион животных пищевых добавок из кукумарии.

3. В работе впервые дана комплексная оценка состояния яичника в эструсе и диэструсе, базирующаяся на результатах количественного морфологического анализа после введения в рацион животных гидролизата и экстракта из кукумарии японской в половозрелом периоде и до момента полового созревания.

4. Впервые представлены данные об изменении морфологии гонад неонатально андрогенизированных крыс под воздействием экстракта из кукумарии японской, выявлено значение и степень нарушений морфологических структур в патологии репродуктивной системы.

Практическая значимость работы

Изложенные данные расширяют представления о морфологических особенностях тканевых элементов овариальных фолликулов и их производных в яичниках крыс в процессе физиологического фолликулогенеза и при некоторых формах его нарушения. Определен эффект действия гидролизата и экстракта из кукумарии на гонады самок крыс на морфологическом уровне, а также возможность формирования фолликулярных кист и кист желтого тела.

Основные положения, выносимые на защиту 1. Гидролизат и экстракт кукумарии японской не изменяют общеморфологические показатели крыс и не нарушают течение эстрального цикла. Пищевые добавки из кукумарии уменьшаю, количество агрегирующихся фолликулов в яичниках половозрелых животных, вызывают гипертрофию теки полостных фолликулов.

2. Достоверным критерием диагностики стадий астрального цикла является степень дегрануляции тучных клеток мезовариальной брыжейки с выходом биогенных моноаминов.

3. Экстракт из кукумарии японской у неонатально андрогенизированных животных, на фоне нарушенного фолликулогенеза стимулирует образование кист яичников.

Апробация работы

Материалы диссертации представлены на 1-й международной конференции «Морские прибрежные экосистемы: водоросли, беспозвоночные и продукты их переработки» (Москва, 2002); на конференции студентов и молодых ученых «Колосовские чтения-2002» (Санкт-Петербург, 2002); на III, IV, V Тихоокеанской научно-практической конференции студентов и молодых ученых с международным участием «Актуальные проблемы экспериментальной, профилактической и клинической медицины» (Владивосток, 2002, 2003, 2004) и на заседании Проблемной комиссии «Морфология, физиология, биохимия» Владивостокского государственного медицинского университета (25 мая 2004).

Публикации

Материалы диссертации опубликованы в 9 научных работах. Структура и объем работы

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, 5 глав собственных данных, заключения, выводов, списка литературы. Работа содержит 150 страниц машинописного текста, 19 таблиц, 37 рисунков, включающих 24 фотографии и 13 графиков. Указатель литературы представлен 130 работами отечественных и 81 работами зарубежных авторов.

Характеристика материалов и методов исследования Эксперименты прогодились на нелинейных белых крысах-самках, которых разделили на следующие группы: 1) интактные половозрелые животные (возраст

5,5 месяцев), получавшие обычный рацион, 2) половозрелые животные, получавшие наряду с обычным кормом ГКЯ в дозе 3 мл/кг в течение двух месяцев, 3) половозрелые животные, получавшие наряду с обычным кормом ЭКЯ в дозе 0,03 мл/кг в течение двух месяцев, 4) интактные половозрелые животные (возраст 3,5 месяца), получавшие обычный рацион, 5) животные, получавшие ГКЯ в дозе 3 мл/кг в качестве добавки к основному корму в неполовозрелом периоде, 6) животные, получавшие ЭКЯ в дозе 0,03 мл/кг в качестве добавки к основному корму в неполовозрелом периоде, 7) животные в возрасте 3,5 месяцев, которым в неонатальном периоде проводили гидрогенизацию путем подкожного введения 25 мкг тестостерона пропионата, 8) неонатально андрогенизированные крысы, получавшие наряду с обычным кормом ЭКЯ в дозе 0,03 мл/кг с 1,5 до 3,5 месяцев жизни.

Объектом исследования служили яичники 78 экспериментальных крыс и 34 интактных, содержавшихся в условиях одного вивария, при обычном световом и температурном режимах. В каждой экспериментальной группе просчитывали от 1,5 до 3,5 тысяч срезов. Кормление животных пищевыми добавками осуществлялось в осенне-зимний период. Исследования яичников проводились в разные фазы полового цикла, для чего каждую группу животных делили на две (эструс, диэструс). На протяжении второго месяца кормления животных пищевыми добавками оценивали функциональное состояние яичников путем изучения эстрального цикла (влагалищные мазки окрашивали по Романовскому - Гимза). Дополнительно стадия цикла подтверждалась методом Е.Н. Гордиенко и С.С. Целуйко (1999), Способ основан на идентификации фазы эстрального цикла при помощи морфометрической диагностики функциональной активности тучных клеток . (ТК) мезовариальной брыжейки, которую окрашивали толуидиновым синим. Для исследования содержания биогенных аминов в ТК применяли гистохимический метод Фурнесс и Коста (1979).

В эксперименте использовали пищевые общеукрепляющие лечебно-профилактические добавки ТИНРО - Центра г. Владивостока (директор центра Л.Н. Бочаров) под торговыми названиями «Тингол-1» (патент РФ № 2117435) и 2

«Тингол-2» (патент РФ №2210377). «Тингол-1» (ТУ9265-074-00472012-96, ТИ 36-72-96) представляет собой гидролизах из кукумарии японской (ГКЯ), полученный ферментативным гидролизом с помощью протеолитического фермента из внутренностей краба либо кислотным гидролизом, содержащий тритерпеновые гликозиды 100 мкг/см3 Массовая доля сухих веществ в данной пищевой добавке составляет 10% и включает в себя белки, гексозамины, сахара, витамины группы В, макро- и микроэлементы Mп, Zп).

Аминокислотный состав белков представлен незаменимыми (валин-2,4, лейцин-4,0, изилейцин-2,6, треонин-3,7, метионин-2,1, лизин-2,2, фенилаланин-2,8, гистидин-1,0% к белку) и заменимыми (глиция.1-27,3, аланин-10,1, серин-6,3, аспарагиновая кислота-10,5, глутаминовая кислота-17,1, аргинин-3,3, цистин-0,1, пролин-4,4, тирозин-0,6, оксипролин-3,6% к белку) аминокислотами. «Тингол-2» (ТУ 9265-165-00472012-06, ТИ 36-150-2000) - спиртовый экстракт из кукумарии японской (ЭКЯ), содержащий тритерпеновые гликозиды 550 мкг/см3.

Общеморфологический анализ включал в себя определение массы тела животного, массы яичника, матки, надпочечника, печени, селезенки, вычисление коэффициента массы внутренних органов (КМВО) клеток [И.М. Трахтенберг, 1978], изучение эстрального цикла, обзорное изучение препаратов яичников, окрашенных гематоксилином и эозином, метиленовым синим. На срезах яичников: среднее число примордиальных, растущих, преовуляторных, атретических фолликулов, желтых тел, общее число генеративных элементов в гонадах на разных стадиях эстрального цикла в контроле и эксперименте, соотношение между числом растущих и атретических фолликулов, измерение диаметра (в мкм) примордиальных, растущих, преовуляторных фолликулов (толщина теки, гранулезы, прозрачной зоны), диаметр, периметр, площадь овоцитов в них и их ядер, ядерно-цитоплазматическое соотношение, коэффициент формы овоцита, диаметр атретических фолликулов и желтых тел.

Характер созревания фолликулов в условиях гормонального дисбаланса изучался на модели Э.М. Китаева с соавторами (1986).

Морфометрию структурных элементов яичников осуществляли с помощью окуляр-микрометра и автоматизированной системы анализа изображений Allegro-MC, которая включает систему оцифровки изображений ATI-128 pro, стандартную программу «Statistica». Рассчитывались следующие показатели: средняя арифметическая (М), ошибка средней арифметической (т), среднее квадратичное отклонение, критерий Стьюдента (t), показатель достоверности различий (р). для оценки существенности различий полученных результатов использовали доверительный интервал 9 5 % (р<0,05).

Результаты исследования и их обсуждение

Наши исследования показали, что у животных контрольной группы и получавших дополнительно ГКЯ и ЭКЯ, содержавшихся в условиях одною вивария не наблюдалось изменения поведенческих реакций. Крысы во всех группах были активными, вовремя принимали пищу, отклонений физиологических отправлений не отмечалось. Выявили, что БАВ из кукумарии японской не обладают токсическим действием на различные органы и ткани. КМВО яичников, матки, надпочечников, печени, селезенки экспериментальных животных остается в пределах контрольных показателей. Пищевые добавки не вызывают каких либо отклонений в астральном цикле, его общей продолжительности и длительности отдельных стадий (табл. 1), а также не оказывают отрицательного влияния на качественный состав влагалищных мазков.

Другим компонентом, по которому можно судить о течении полового цикла являются ТК мезовариальной брыжейки [Е.Н. Гордиенко, С.С. Целуйко, 1999]. Тучные клетки - важный источник биогенных моноаминов которые могут быть существенными модуляторами различного рода нарушений в некоторых органах. Показано, что при определенных условиях тканевые базофилы могут депонировать, синтезировать, захватывать из окружающей ткани и секретировать в ткань моноамины. К настоящему времени ТК рассматриваются как источник основных медиаторов сосудисто-экссудативных явлений,

определяющих фазу повышенной проницаемости капилляров, которая характерна для стадии эструса. Известно, что тканевые базофилы реагируют дегрануляцией на любое изменение физиологических условий, это опосредовано наличием на их мембране рецепторов к нейромедиаторам [Н.А. Клименко, СВ. Татарко, 1997].

Таблица 1

Продолжительность стадий эстралыюго цикла у крыс в контрольной и экспериментальных группах

Стадия цикла Продолжительность стадии в часах

Контроль ГКЯ ЭКЯ

Диэструс 58,50+1,25 59,45+1,30 60,00+1,40

Проэструс 15,0+1,30 15,00+1,20 14,50+1,20

Эструс 26,00+1,00 26,50+1,00 26,0011,00

Метаэструс 6,50+0,35 6,00+0,30 6,00+0,35

Общая продолжительность 106,4+1,45 107,35+1,50 106,5+1,40

Примечание: Р>0,05

Результаты наших исследований доказали, что наиболее активная реакция этих клеток в контрольной группе животных наблюдается в стадию эструса: общее количество тканевых базофилов достоверно выше, преобладают дсгранулирующие клетки по сравнению с интактными, отмечается высокий коэффициент дегрануляции - 0,79 с выходом биогенных моноаминов за пределы клеток. У экспериментальных животных наблюдается аналогичная картина, что подтверждает отсутствие отрицательного влияния ГКЯ и ЭКЯ на местные механизмы регуляции через тучноклеточную популяцию (табл. 2). Поскольку для этой стадии характерен выброс определенного количества тропных гормонов гипофиза, вследствие чего происходит овуляция, можно считать, что тканевые базофилы мезовария являются определенным индикатором уровня данных гормонов. В связи с этим, различного рода нарушения полового цикла,

ановуляцию можно диагностировать по реакции ТК мезовариальной брыжейки. Таким образом, значение данных элементов определяется не только их участием в микроциркуляторных изменениях, возникающих в определенную стадию эстрального цикла, но и непосредственно воздействием секретируемых тканевыми базофилами веществ на местном уровне. Разная степень дегрануляции, выход биогенных моноаминов за пределы тучных клеток является диагностическим критерием стадий полового цикла как в контроле так и при экспериментальных воздействиях.

Таблица 2

Общая характеристика лучных клеток мезовариальной брыжейки крыс в контроле и после получения ими пищевых добавок

Показатели Контроль ГКЯ ЭКЯ

1. Общее количество ГК на 1 мм2 - эструс - диэструс 10,5+1,21 7,0+0,59 10,7+0,59 7,7+0,75 9,7+0,74 7,75+0,5

2. Количество ТК: - эструс: интактные дегранулирующие - диэструс: интактные дегранулирующие 2,2+0,42 8,3+0,86 7,8+0,74 1,4+0,14 2,85+0,27 7,85+0.77 6,5+0,60 1,2+0,06 1,05+0,31 7,654), 74 6,95+0,45 1,4+0,24

3. Коэффициент дегрануляции эструс диэструс 0,79+0,04 0,20+0,01 0,74+0,05 0,16+0,01 0,79+0,06 0,18+0,02

4. Средний диаметр ТК (мкм): интактные дегранулирующие 8,59+0,22 13,8+0,77 8,66+0,22 13,47+0,68 8,3910,27 14,29+0,74

5. Величина профильного поля: интактные дегранулирующие 39,41+2,07 104,16+9,43 41,63+2,22 99,63+8,52 42,47+3,06 99,92+7,61

Примечание: р>0,05

При изучении серийных срезов яичников половозрелых экспериментальных крыс с установившимися эстральными циклами (получавших ГКЯ и ЭКЯ с 3,5 до 5,5 месяцев) мы не выявили визуальных отклонений в гистоархитектонике

органа от таковой интактных животных. Численность примордиальных, растущих, зрелых фолликулов, желтых тел, общее число генеративных элементов колеблется у опытных животных по сравнению с интактными недостоверно (табл. 3). Количественные изменения достоверно коснулись лишь «молодых» атретических фолликулов, число которых сократилось на 38,8 -51,4% в обеих экспериментальных группах как в эструсе, так и в диэструсе по сравнению с интактными самками.

Таблица 3

Количество генеративных элементов (абсолютное число) в яичниках половозрелы! крыс (5,5 месяцев) контрольной н экспериментальных групп

Показатель контроль ГКЯ ЭКЯ

эструс диэструс эструс диэструс эструс диэструс

ОЧГЭ 2159,6+' 101,37 2269,0+ 109,85 1905,0+ 90,27 1982,2+ 98,54 1939,8+ 103,85 1979,7+ 105,26

примордиаль-ные фолликулы 1429,2+ 117,99 1455,8+ 127,54 1355,0+ 133,08 1438,3+ 127,53 1435,0+ 141,65 1448,3+ 136,61

растущие фолликулы 215,0+ 27,99 249,2+ 25,15 229,2+ 23,25 256,7+ 17,06 210,0+ 22,82 247,5+ 20,07

зрелые фолликулы 7,0+0,58 8,0+0,37 6,0+0,57 7,5+0,62 7,0+0,37 7,5+0,76

атретические фолликулы 498,3+ 25,3 546,7+ 25,8 305,0+ 17,84 * 269,2+ 24,53 • 278,3+ 17,50* 265,8+ 24,81 •

желтые тела 10,2+ 1,02 10,2+ 0,98 9,8+ 0,60 10,5+ 1,34 9,5+ 0,96 10,5+ 1,38

растущие/ атретичсские 0,54 0,46 0,76 0,96 0,76 0,94

Примечание: • - достоверность различий с показателем контрольной группы (р<0,05)

Известно, что апоптоз клеток гранулезы, а, следовательно, атрезия фолликула запускается Са^ТМр2* - зависимой эндонуклеазой, осуществляющей

расщепление ДНК, а фермент, возможно, активируется возрастающим уровнем кальция и/или магния [Д.Л. Аминин, М.М. Анисимов, 1990]. По данным Б.В. Рубцова с соавторами (1980) и И. Китагрчы (1988) БАВ голотурий, а именно тритерпеновые гликозиды, изменяют проницаемость биологических мембран для ионов кальция. Весьма вероятно, что снижение количества атрезирующихся фолликулов в данных экспериментальных группах связано с блокадой апоптогенного фермента. Учитывая, что количество растущих фолликулов в экспериментальных группах, получавших ГКЯ и ЭКЯ в половозрелом периоде не изменяется в сравнении с контрольной, а количество атрезирующихся фолликулов уменьшается, соотношение этих структур достоверно изменяется.

Несколько иная картина наблюдается в количественном составе структурных элементов в яичниках крыс, получавших пищевые добавки в возрасте 1,5-3,5 месяцев. Мы выявили достоверное уменьшение количества атрезирующихся фолликулов в диэструсе (в 1,27 раза в опытной группе, получавшей ГКЯ, в 1,36 раза - в группе, получавшей ЭКЯ) и увеличение растущих фолликулов в 1,5 раза в обеих экспериментальных группах в стадию эструса (табл. 4). Факт резкого увеличения растущих везикулярных фолликулов может быть объяснен переходом фолликулов предыдущих классов в последующие, следовательно, происходит естественный, свойственный эстральному циклу процесс. Однако не исключено, что определенная часть антральных фолликулов является фолликулами, «возвращенными» из состояния ранней атрезии [О.В. Волкова, 1983]. Таким образом, происходит закономерный процесс: при уменьшении одних стероидпродуцирующих структур увеличивается количество других. Соотношение растущих и атретических фолликулов в этих группах также изменяется по стадиям цикла, но менее выражено в диэструсе, приближаясь к контрольным показателям.

За счет чего же происходит компенсация количественной нехватки атретических фолликулов в экспериментальных группах, получавших пищевые добавки в половозрелом периоде, ведь атрезируюшиеся фолликулы - это не просто «погибшие» структурные элементы яичников, они важные

гормонообразующие «железы», поскольку от уровня их активности (выработка андрогенов) зависит рост новых фолликулов [И.Б. Манухин, 2001]? Качественные изменения (морфометрические показатели), произошедшие в стероидпродуцирующих структурах помогут нам разобраться в этом вопросе.

Таблица 4

Количество генеративных элементов в контроле и эксперименте (крысы 3,5- месячного возраста) в разные стадии эстрального цикла

показатель контроль гкя ЭКЯ

эструс диэструс эструс диэструс эструс диэструс

примордиаль- 1579,2+ 1555,7+ 1521,0+ 1576,3+ 1588,0+ 1509,0+

ныефолликулы 110,71 127,10 134,22 129,54 112,33 159,22

растущие 210,0+ 242,2+ 319,0+ 238,0+ 318,0+ 240,0+

фолликулы 20,11 ' 20,05 29,18 * 24,88 24,48 • 22,08

зрелые 4,6+0,5 6,2+0,79 4,6+0,24 6,0+0,19 5,0+0,73 6,4+0,24

фолликулы

атретические 440,3+ 496,7+ 393,0+ 391,0+ 400,0+ 365,0+

фолликулы 28,51 24,34 38,03 27,34 ♦ 27,16 28,24 *

растущие/ 0,48 0,49 0,81 0,61 0,80 0,66

атретические

желтые тела 7,4+0,5 7,2+0,37 7,0+0,67 7,0+0,77 7,8+0,80 7,6+0,60

очгэ 2241,5+ 2388,0+ 2244,6± 2218,3+ 2318,8+ 2128,0+

100,47 ¡05,75 95,29 101,54 99,77 103,28

Примечание: *- достоверность различий с показателем контрольной группы (р^О 05)

фолликулы на последовательных стадиях можно

рассматривать как совершенствующиеся морфологические системы, состоящие из генеративных элементов и соматических тканей [Т.Г. Боровая, О.В. Волкова, 1995]. Считают, что длительность развития фолликула зависит от возраста животных, но этот процесс несомненно значительно больше, чем половой цикл. У самок мышей она составляет не менее 60-70 дней, у женщин - около 85 дней

[И.В. Саноцкий, 1979; И.Б. Манухин, 2001]. Хотя развитие этих систем (гистионов) направляется аденогипофизарными механизмами, немаловажная роль в их регуляции принадлежит системе взаимодействия тканевых и клеточных компонентов гистионов. Нами выявлено достоверное увеличение диаметра антральных и зрелых фолликулов у экспериментальных половозрелых самок обеих групп в эструсе и диэструсе. Средний диаметр растущего преантрального фолликула в экспериментальных группах соответствует этому показателю у интактных животных в обе стадии эстрального цикла. Средний диаметр полостного фолликула в группе, получавшей гидролизат достоверно превышает этот показатель у контрольных животных в 1,2 раза в эструсе и 1,1 раза в диэструсе и составляет 255,98+7,55 и 268,43+7,31 мкм соответственно. В экспериментальной группе, получавшей экстракт кукумарии средний диаметр полостного фолликула также достоверно больше такового в контроле (245,98+7,00 - эструс, 260,11+6,10 - диэструс). Средний диаметр преовуляторного фолликула в эструсе у животных, получавших ГКЯ достоверно превышает этот показатель контрольной группы в 1,1 раза в обе стадии полового цикла и составляет 406,52+5,54 в эструсе и 513,24+7,20 в диэструсе. Аналогичные данные мы получили и в экспериментальной группе животных, получавшей ЭКЯ. Преовуляторные фолликулы яичников крыс в опытных группах содержат все те же структурные элементы, что и у интактных животных. Увеличение диаметра зрелого фолликула происходит, главным обратом, за счет толщины теки, она достоверно утолщается в 0,88 раз по сравнению с контрольным показателем. Развитие текальной оболочки фолликула является важным событием в фолликулогенезе. С этого момента фолликул вступает в контакт с кровью и начинает подвергаться действию ее юрмональной среды. Фолликул инициирует серию структурных и биохимических изменений, превращаясь в антральный. Возможно, причина этого явления заключена в клетках фолликулярного эпителия, поскольку они вырабатывают текальный организатор, способствующий формированию теки. Мы предполагаем, что гипертрофия теки, в данном случае, происходит

компенсаторно за счет увеличения в ней интерстициальных клеток, продуцирующих андрогены, в связи с тем, что уменьшается количество атрезирующихся фолликулов, выполняющих эту функцию. Андрогены в последствие ароматизируются в клетках гранулезы в эстрогены и по принципу обратной связи происходит выброс лютеинизирующего и фолликулостимулирующего гормонов, а далее овуляция [И.Б. Манухин, 2001]. Толщина гранулезы, зоны радиаты, прозрачной зоны остаются в пределах контрольных показателей.

Наши исследования показали, что в обеих экспериментальных группах животных признаки атрезии фолликулов появляются на любой стадии их развития, но основная часть возникает из многослойных, полостных фолликулов. Атрезия антральных фолликулов осуществляется в виде двух форм со своей спецификой трансформации фолликулярных клеток. В одних случаях в фолликулах некоторое время сохраняются обе оболочки, но в дальнейшем гранулеза дегенерирует и перестает существовать как элемент структуры. Тека при этом практически не изменяется, базальная мембрана, вступая в контакт с фолликулярной жидкостью гиалинизируется. При другой форме атрезии в фолликулах сохраняются обе оболочки, базальная мембрана остается неизмененной, но клетки внутренней теки гипертрофируются. При атрезии преантральных фолликулов первичные изменения отмечаются в овоците, а именно пикноз и рексис ядра, вакуолизация цитоплазмы вокруг ядра, деформация овоцита. Морфометрический анализ позволил установить достоверную разницу в размере атретических фолликулов у экспериментальных животных в зависимости от стадии эстрального цикла. В яичниках крыс, получавших ГКЯ и ЭКЯ в эструсе средний диаметр атрезирующихся фолликулов составляет 170,54+5,21 мкм и 172,20+4,38 мкм соответственно. Установлено, что диаметр выше указанных структур изменяется в зависимости от стадии эстральноого цикла, увеличиваясь в диэструсе в 1, 5 раза в обеих экспериментальных группах (рис. 1). При этом мы выявили, что атрезия фолликулов в контрольной группе чаще осуществляется на 6 стадии развития,

тогда как у экспериментальных животных - на 7. Это явление мы рассматриваем как попытку компенсировать количественный дефицит этих структур качественной перестройкой для поддержания гормонального баланса. Механизм этого явления, по-видимому, связан косвенным стероидоподобным действием тритерпеновых гликозидов, что не противоречит литературным данным [В.А. Стоник, 1999]. Атрезия атральных фолликулов при всех рассматриваемых состояниях (в контроле и эксперименте) осуществляется в виде двух форм со своей специфической трансформацией фолликулярных гистионов.

Рис. 1. Средний диаметр атретических фолликулов у половозрелых контрольных и экспериментальных животных

Одними из информативных показателей, отражающих физиологическое состояние половых клеток и их микроокружения являются площадь сечения овоцита, ширина его прозрачной зоны и их корреляционная взаимосвязь. Нарушение их корреляции указывает на изменение ово- и/или фолликулогенеза [С.Л. Бачалдин, 1994]. Результаты нашего исследования позволяют говорить о том, что ГКЯ и ЭКЯ в исследуемых дозах не вызывают нарушения образования прозрачной оболочки к фолликулах на разных этапах их развития. Что же касается овоцита, то размер его (диаметр, площадь, периметр) увеличивается параллельно росту фолликула до преантральной стадии, когда тот и другой растут одновременно (от 17,20+0,19 мкм - диаметр овоцита в примордиальном фолликуле до 23,7+0,65 мкм - диаметр овоцита в растущем фолликуле). На более поздних этапах рост фолликула продолжается до размеров, определенных

О Контроль ПГКЯ !'ЖЯ

эструс

диэструс

видовыми различиями, а овоцит при этом не увеличивается (диаметр овоцита остается в пределах 24,01+1,18 мкм). Эти данные не противоречат результатам других авторов [Мооге, 1974, О.В. Волкова, 1983]. В соответствии с этим, ядерно-цитоплазматическое соотношение площадей уменьшается от примордиального фолликула к растущему, и практически не изменяется уже в зрелых фолликулах как у контрольных животных, так и у крыс экспериментальных групп (рис. 2). Коэффициент формы овоцита также остается в пределах 1,0 у опытных и интактных животных.

В Контроль ОПОЯ ВЭКЯ

Прнморональиые Растушие фолликулы Зрелые фолликулы фолликулы

Рис. 2. Ядерно-цитоплазматическое соотношение площадей овоцитов в фолликулах разных стадий роста в контроле и эксперименте

Интегральным показателем оценки состояния яйцеклеток является способность к оплодотворению и к зачатию. Показателем также считается, плодовитость. Следует отметить, что данные пищевые добавки в исследуемых' дозах не нарушают эту способность и не оказываю г контрацептивного эффекта как некоторые тритерпеновые гликозиды.

О закономерностях и механизмах регуляции процессов роста, овуляции, «гибели» гистионов фолликулов в детском возрасте и препубертатном периоде известно очень маю. Согласно данным некоторых исследователей [А.И. Никитин, 1987], для яичников указанных периодов онтогенеза характерно наличие большого количества средних и крупных пузырчатых фолликулов. К моменту половой зрелости налаживается циклическое выделение гонадотропинов гипофизом, что обусловливает закономерное вступление

фолликулов в рост, формирование пузырчатых фолликулов и овуляцию. Все это подтверждает некоторые особенности изменений в яичниках на разных этапах онтогенеза (1,5-3,5 месяца и 3,5-5,5 месяцев). Интактные животные и самки, получавшие ГКЯ и ЭКЯ имеют достоверные отличия в количестве зрелых фолликулов и желтых тел в разные возрастные периоды (3,5 и 5,5 месяцев), что связано с особенностями строения половой системы на начальных этапах полового созревания и в период репродуктивной активности. Так абсолютное число преовуляторных фолликулов в яичниках интактных крыс 3,5 месяцев составляет, 4,6+0,5 в „струсе и 6,2+0,79 в дизструсе, в 5,5 месяцев данный показатель достоверно увеличивается до 7,0+0,58 в эструсе и 8,0+0,37 в дизструсе. Аналогичные изменения наблюдаются в яичниках экспериментальных животных разных возрастных групп. Желтые тела, образующиеся после овуляции, располагаются по всей поверхности срезов, разнообразны по величине и строению, в связи с тем, что находятся на разных этапах. Количество желтых тел в срединном срезе у интактных животных в возрасте 3,5 месяцев составляет 7,4+0,51 в эструсе, и практически не изменяется в стадию диэструса. При сравнении данного показателя с контрольной группой 5,5 месячного возраста, выявлено достоверное его увеличение в последней до 10,5+1,34. В экспериментальных группах животных также выявлено закономерное изменение данного показателя в зависимости от возраста самок. Средний диаметр данных структур у интактных крьх составляет 316,5+10,71 мкм в фазу эструса, в диэструсе их размер достоверно больше и равен 350,2+11,12 мкм. Диаметр желтых тел у опытных животных также изменяется в зависимости от стадии эстрального цикла, достоверно увеличиваясь в диэструсе.

Следует отметить, что рассмотренные выше процессы являются физиологическими. Однако хронический воспалительный процесс в малом тазу, различная эндокринная патология, при которых значительно страдает фолликулогенез, повышается интенсивность атрезии фолликулов разных стадий развития встречаются не редко [К.Ю. Боярский. 1996, В.И. Кулаков, 1997, И.Б. Манухин,2001].

По данным Э.М. Китаева с соавторами (1985, 1987), введение тестостерона новорожденным крысам приводит к нарушению роста и созревания фолликулов, отсутствию овуляции и бесплодию в половозрелом периоде. Результаты нашего исследования подтверждают эти данные. Так, на 1/3 снизилось количество примордиальных фолликулов, почти в 2 раза уменьшилось число растущих фолликулов с преобладанием неполостных. Многие фолликулы уже на стадии гримордиальчых имели признаки атрезии. Чувствительными к действию препарата оказываются и растущие, многослойные фолликулы. Количество их достоверно снижено по сравнению с контролем, причем основная масса растущих фолликулов находится на стадии преантральных, количество же полостных форм составляет около 7%. На этом фоне во многих вторичных фолликулах отмечается массовая гибель фолликулярного эпителия, утолщение блестящей оболочки, гранулеза и внутренняя текальная оболочки дезорганизованы. Количество атретических фолликулов у неонатально андрогенизированных животных достоверно больше по сравнению с контрольной группой. Соотношение растущих и атретических фолликулов в данной группе животных составило 0,18, что в 2,5 раза меньше по сравнению с контрольной группой. Зрелых, окончательно сформированных фолликулов в яичниках самок мы не выявили. На срединных срезах выявлены желтые тела в количестве до 3-4 на один яичник, имеющие вид островков среди интерстициальной ткани. Данные структуры, по нашему мнению, не являются полноценными желтыми телами, так как мы не нашли последовательных стадий развития желтых тел на препаратах, а также отсутствовали преовуляторные фолликулы, являющиеся их предшественниками.

Таким образом, введение андрсгенов крысам в раннем неонатальном периоде вызывает длительные нарушения роста и созревания фолликулов, отсутствие овуляции, а также гипертрофию с громы гонад с очагами лютеинизации последних.

У экспериментальных неонатально андрогенизированных животных, которым с 1,5 до 3 месяцев жизни дополнительно в рацион вводили ЭКЯ

наблюдаются неоднозначные результаты. Яичники андрогенизированных животных, получавших пищевую добавку характеризуются, также как и получавшие тестостерон без ЭКЯ, достоверно меньшим числом по сравнению с контрольной группой фолликулов разных стадий развития. В этой группе животных недостоверно увеличивается количество растущих фолликулов, возрастает в несколько раз число полостных, и, следовательно, изменяется соотношение неполостных и антральных фолликулов (табл. 5).

Таблица 5

Количество генеративных элементов в яичниках андрогенизированных

животных

показатель тестостерон Тестостерон+ЭКЯ

примордиальные фолликулы 1080,0+75,31 1110,0+91,71

растущие фолликулы: неполостные полостные 120,2+11,10 112,1+10,10 8,1+0,75 160,3+17,25 120,5+12,75 40,3+4,12

зрелые фолликулы 0 1,2+0,05

атлетические фолликулы 665,4+25,67 475,6+28,90

растущие/ атретические 0,18 0,34

желтые тела 3,3+0,55 3,2+0,12

общее число генеративных элементов 1868,11+71,65 1749,21+85,15

Примечание: * - достоверность различий с показателем контрольной группы (р<0,05)

Среди Пузырчатых фолликулов встречаются зрелые, но большинство из них имеют признаки деструкции и лютеинизации. Наши исследования показали наличие фолликулярных кист в данной группе самок. Фолликулярная киста представляет собой образование, размерами до 900 и более мкм, имеет истонченную оболочку, на одном из поносов сохраняется распластанная яичниковая ткань. Гранулеза - с признаками атрезии и в некоторых местах -лютеинизированная. На яйценосном бугорке сохраняется неовулировавший

овоцит. Полость кисты заполнена неоднородным содержимым. У животных, получавших ЭКЯ после введения тестостерона наблюдается достоверное уменьшение количества атрезирующихся фолликулов, а соотношение растущих и атретических фолликулов увеличивается по сравнению с крысами не получавшими пищевую добавку до 0,35. На срединном срезе гонады четко контурируют несколько мелких желтых тел, на фоне которых появляются кисты. Размер кист колеблется от 950 до 1200 мкм. Структура их неоднородна, на одном из полюсов сохраняется участок лютеинизированной ткани в виде островка, полость заполнена жидкостью, стенка кисты истончена. Общее число генеративных элементов составило 1749,0+85,15, что недостоверно отличается от не получавших пищевую добавку андрогенизированных крыс.

Таким образом, БАВ гидролизата и экстракта из кукумарии японской обладают целенаправленным действием на морфологические структуры яичников крыс, главным образом, на атрезирующиеся фолликулы. Следовательно, ГКЯ и ЭКЯ могут быть использованы о гинекологии в качестве биологически активных добавок в комплексном лечении заболеваний, сопровождающихся усиленной гибелью фолликулярного аппарата. Однако, учитывая возможность образования фолликулярных кист и кист желтого тела, необходимым условием применения данных пищевых добавок является определение исходного уровня стероидных гормонов.

Выводы

1. Гидролизат и экстракт из кукумарии японской не влияют на общемсрфологические показатели крыс и не вызывают отклонений в эстральном цикле, его общей продолжительности и длительности отдельных стадий (эструс, метаэструс, диэструс, проэструс), а также не оказывают отрицательного действия на качественный состав влагалищных мазков.

2. Тканевые базофилы мезовариальной брыжейки реагируют на изменения эстрального цикла, проявляя высокую функциональную активность в

эструсе. Разная степень дегрануляции, выход биогенных моноаминов за пределы тучных клеток является диагностическим критерием стадий полового цикла как в контроле так и при экспериментальных воздействиях.

3. Интактные животные и самки, получавшие гидролизат и экстракт из кукумарии имеют достоверные отличия в количестве морфологических структур яичника в разные возрастные периоды (3,5 и 5,5 месяцев), что связано с особенностями строения половой системы на начальных этапах полового созревания и в период репродуктивной активности.

4. Гидролизат и экстракт из кукумарии вызывают уменьшение числа атрезирующихся фолликулов в яичниках половозрелых животных в эструсе и диэструсе, при этом достоверно увеличивается соотношение растущих и атретических фолликулов, а также диаметр полостных и преовуляторных фолликулов за счет гипертрофии теки.

5. У животных, получавших пищевые добавки до момента нолоього созревания, гидролизат и экстракт из кукумарии вызывают эффект снятия ранних атретических явлений, при этом уменьшается число атретических фолликулов в диэструсе и увеличивается количество растущих фолликулов в эструсе по сравнению с контрольной группой.

6. При неонатальной гидрогенизации у животных в половозрелом периоде отмечаются нарушения фолликулогенеза, при этом уменьшается количество растущих фолликулов, отсутствуют полостные формы и полноценные зрелые фолликулы, отмечается их массовая атрезия. Экстракт из кукумарии японской у неонатально андрогенизированных крыс вызывает увеличение числа полостных фолликулов, уменьшение количества атретических фолликулов, при этом достоверно увеличивается соотношение растущих и атретических фолликулов, формируются фолликулярные кисты и кисты желтого тела.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Зенкина В.Г. Влияние тритерпеновых гликозидов на репродуктивную функцию неполовозрелых самок крыс // Актуальные проблемы экспериментальной, профилактической и клинической медицины (25 апреля 2002г.): тезисы докл. Ш-й Тихоокеан. научно-практ. конф. студентов и молодых ученых с международ, участием. - Владивосток, 2002.-С. 3-4.

2. Каредина B.C., Зенкина В.Г. Влияние биологически активных добавок «Тингол-1» и «Тингол-2» на морфофункциональное состояние яичников и плаценты крыс // Колосовские чтения-2002 (29-31 мая 2002г.). - СПб, 2002. -С.125.

3. Каредина B.C., Зенкина В.Г., Слуцкая Т.Н. Влияние тритерпеновых гликозидов (ТГ) морских гидробионтов на овогенез млекопитающих // I Междунар. конф.: Морские прибрежные экосистемы: водоросли, беспозвоночные и продукты их переработки (27-30 августа 2002г.). - М., 2002.-С. 80-81.

4. Влияние тритерпеновых 1ликозидов морских гидробионтов на надпочечники и яичники крыс / О.А Солодкова, В.Г. Зенкина. НА Никифорова, АЛ. Юферева // Актуальные проблемы экспериментальной, профилактической и клинической медицины (24 апреля 2003г.): тезисы докл IV-й Тихоокеан. научно-практ. конф. студентов и молодых ученых с международ, участием. - Владивосток, 2003. -С. 11.

5. Каредина B.C., Зенкина В.Г., Солодкова О.А. Морфология яичников неполовозрелых крыс при кормлении пищевыми добавками «Тингол-1» и « Тингол-2» // Успехи современ. естествознания. - 2003. - № 11. - С. 53.

6. Каренина JVC, Зенкина В.Г. Действие пищевых добавок «Тингол-1» и «Тингол-2» на яичники крыс // Тихоокеан. мед. журн.-2003. - № 4.- С.35-36.

7. В.Г. Зенкина, О.А. Солодкова. Общая характеристика тучных клеток мезометриальнон брыжейки крыс в разные стадии эстрального цикла //

Актуальные проблемы экспериментальной, профилактической и клинической медицины (24 апреля 2004г.): тезисы докл. V-й Тихоокеан. научно-практ. конф. студентов и молодых ученых с международ, участием.

- Владивосток, 2004. - С. 8.

8. В.Г. Зенкина, О.А. Солодкова. Общеморфо.г огические показатели некоторых органов крыс при кормлении животных «Тингол-1» и «Тингол-2» // Актуальные проблемы экспериментальной, профилактической и клинической медицины (24 апреля 2004г.): тезисы докл. V-й Тихоокеан. научно-практ. конф. студентов и молодых ученых с международ, участием.

- Владивосток, 2004. - С. 7-8.

9. Зенкина В.Г., Каредина B.C., Солодкова О.А. Яичники крыс под воздействием тритепеновых гликозидов из кукумарии японской // Фундаментальные исследования. - 2004. - № 2. - С. 53.

Список сокращений;

БАВ - биологически активные вещества

ГКЯ - гидролизат кукумарии японской

КМВО - коэффициент массы внутренних органов

ОЧГЭ - общее число генеративных элементов

ТК - тучные клетки

ЭКЯ - экстракт из кукумарии японской

Зенкина Виктория Геннадьевна

Влияние экстрактов кукумарии японской на морфологию яичников крыс в разные стадии эстрального цикла

АВТОРЕФЕРАТ

Подписано в печать 4.10.2004 г. Усл. п. л. 1,0. Формат60x84/16. Тираж 100 экз. Зак. № 68п. Печать офсетная с оригинала заказчика. Отпечатано в типографии ОАО «ДАЛЬПРИБОР» 690105,г. Владивосток, ул. Бородинская, 46/50. Тел. 32-70-49 (32-44)

P 2 S 1 4 S'

Содержание диссертации, кандидата медицинских наук, Зенкина, Виктория Геннадьевна

Список сокращений.

Введение.

Глава I. Обзор литературы.

1.1. Характеристика овариально-менструального цикла млекопитающих.

1.1.1. Особенности строения яичников на разных стадиях эстрального цикла. Характеристика влагалищных мазков.

1.1.2. Морфофункциональная характеристика тканевых базофилов. Тучные клетки мезовариальной брыжейки.

1.2. Регуляция овариально-менструального цикла.

1.3. Фармакологические свойства биологически активных веществ голотурий.

Глава II. Материалы и методы исследования.

Глава III. Общеморфологические показатели крыс контрольной и экспериментальных групп.

Глава IV. Характеристика стадий эстрального цикла.

4.1. Картина влагалищных мазков крыс контрольной и экспериментальных групп.

4.2. Общая характеристика тучных клеток мезовариальной брыжейки в контроле и эксперименте.

Глава V. Морфология яичников половозрелых и неполовозрелых крыс контрольной и экспериментальных групп.

5.1. Морфология яичников половозрелых крыс контрольной группы.

5.2. Морфологическая характеристика яичников половозрелых крыс, получавших гидролизат и экстракт кукумарии японской.

5.3. Морфологическая характеристика яичников крыс, получавших гидролизат и экстракт кукумарии японской в период от 1,5 до 3,5 месяцев.

Глава VI. Состояние фолликулогенеза у неонатально андрогенизированных крыс и после употребления ими экстракта из кукумарии японской.

6.1. Морфологическая характеристика яичников крыс, получивших тестостерон в неонатальном периоде

6.2. Морфологическая характеристика яичников крыс, получивших тестостерон в неонатальном периоде и экстракт из кукумарии японской от 1,5 до 3 месяцев жизни.

Обсуждение результатов исследования.

Выводы.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Влияние гидролизата и экстракта из кукумарии японской на морфологию яичников крыс в разные стадии эстрального цикла"

Актуальность проблемы. Проблема регуляции процессов роста, созревания, овуляции, атрезии фолликулов, функционирования желтого тела в яичниках является одной из наиболее важных в репродуктивной биологии.

Интерес к этой проблеме связан с клиническими задачами: лечение и профилактика различного рода нарушений в репродуктивной функции женщин, которые не утрачивают свою актуальность до настоящего времени. В частности, дисгенезия гонад может быть результатом тотальной или субтотальной атрезии оогоний как во время, так и сразу после их миграции в эмбриональные гонады. Синдром истощения яичников является следствием усиленной атрезии фолликулов на одной или нескольких стадиях их развития [72, 102, 110, 114]. Недостаточность яичников, лечение которой химиотерапевтическими препаратами осложняется возможностью малигнизации, можно будет предупредить конкурентно блокируя индукцию программированной клеточной гибели в фолликулах. Даже физиологическую недостаточность яичников, возникающую в климактерическом периоде, можно значительно отсрочить, если будет обнаружена возможность замедлить атретические процессы.

Среди причин, которые могут привести к отклонению от полового развития девушек определенную роль играют изменения структуры и функции яичников. Хорошо известна легкая повреждаемость гонад как у взрослых женщин, так и в детском возрасте. В связи с этим, работы по прогнозу репродуктивного здоровья в разные периоды онтогенеза важны с позиций выяснения сути происходящих процессов и факторов, влияющих на биологическую полноценность половых желез.

Многие аспекты регуляции морфогенетических основ овариальной функции хорошо известны. Однако в настоящее время правомерно дополнить известную базисную регулирующую систему (взаимодействие гипоталамус - гипофиз - гонады) комплексом экстра- и иытраорганных модуляторов.

В последние годы появилось много публикаций о биологической и фармакологической активности органических природных соединений морского происхождения [13, 46, 50, 52, 89, 97, 101, 104, 112, 120, 124, 134, 137, 147, 155, 159, 160, 170, 202]. Многие виды морских организмов в настоящее время применяются в пищевых целях, в традиционной и нетрадиционной медицине, а также в качестве пищевых добавок. Из морских гидробионтов обращают на себя внимание, в качестве источников биологически активных веществ, представители класса голотурий, из которых наиболее распространенным представителем в прибрежных водах Приморья является кукумария японская (Cucumaria japonica). Ткани голотурий содержат гликозиды но составу сходные с гликозидами женьшеня. Тритерпеновые гликозиды кукумарии обладают антимикробным, фунгицидным действием [106, 107]. Они стимулируют фагоцитоз, проявляют иммуномодулирующие свойства, оказывают антикоагулянтное и гипотензивное действие, задерживают рост опухолевых клеток [46, 49, 84, 97, 98, 99, 104, 147, 159, 160, 171, 180, 202].

С.Н. Ефимова и JI.IO. Савватеева (1999) установили, что отходы переработки кукумарии в качестве подкормки в рацион норок, усиливают половую активность и улучшают качество спермы у самцов. У самок становится выше плодовитость, повышается жизнеспособность потомства [43]. По данным В.А. Мулындина (2002) экстракт кукумарии японской позволяет повысить результативность осеменения коров, сократить продолжительность бесплодия, достоверно снизить индекс оплодотворения [84].

Изучение действия препаратов из иглокожих на морфологическом уровне репродуктивной системы самок экспериментальных животных до настоящего времени не проводилось. Отсутствуют данные о морфологических изменениях яичников крыс при применении гидролизата и экстракта кукумарии японской, в качестве активного компонента которых используются тритерпеновые гликозиды. В связи с этим актуальны научные исследования в этой области.

Цель работы: Изучить морфологию яичников крыс на разных стадиях эстрального цикла при введении в рацион животных гидролизата и экстракта из кукумарии японской. Задачи исследования:

1. Изучить особенности влияния гидролизата и экстракта из кукумарии японской на общеморфологические показатели животных и эстральный цикл.

3. Описать морфологию стероидпродуцирующих структур яичников в эструсе и диэструсе у интактных животных.

6. Описать морфологию яичников неонатально андрогенизированных крыс до и после получения ими экстракта из кукумарии японской. Научная новизна исследования:

1. Впервые получены данные о состоянии эстрального цикла самок крыс после получения ими гидролизата и экстракта из кукумарии японской.

2. Впервые проведен морфометрический и гистохимический анализ ТК мезовариальной брыжейки крыс в разные стадии эстрального цикла до и после введения в рацион животных гидролизата и экстракта из кукумарии японской.

4. Впервые представлены данные об изменении морфологии гонад пеонатально андрогенизированных крыс под воздействием экстракта из кукумарии японской, выявлено значение и степень нарушений морфологических структур в патологии репродуктивной системы. Практическая значимость работы состоит в том, что изложенные данные расширяют представления о морфологических особенностях тканевых элементов овариальных фолликулов и их производных в яичниках крыс в процессе физиологического фолликулогенеза и при некоторых формах его нарушения. Определен эффект действия гидролизата и экстракта из кукумарии на гонады самок крыс на морфологическом уровне, а также возможность формирования фолликулярных кист и кист желтого тела. Материалы работы могут быть использованы при чтении лекций по гистологии, гинекологии, фармакологии, репродуктивной биологии. Основные положения, выносимые на защиту:

1. Гидролизат и экстракт из кукумарии японской не изменяют общеморфологические показатели крыс и не нарушают течение эстрального цикла. Пищевые добавки из кукумарии уменьшают количество атрезирующихся фолликулов в яичниках половозрелых животных, вызывают гипертрофию теки полостных фолликулов.

2. Достоверным критерием диагностики стадий эстрального цикла является степень дегрануляции тучных клеток мезовариальной брыжейки с выходом биогенных моноаминов.

3. Экстракт из кукумарии японской у неонатально андрогенизированных животных на фоне нарушенного фолликулогенеза стимулирует образование кист яичников.

Апробация диссертации. Материалы диссертации представлены на 1-й международной конференции «Морские прибрежные экосистемы: водоросли, беспозвоночные и продукты их переработки» (Москва, 2002), на конференции студентов и молодых ученых «Колосовские чтения-2002» (Санкт-Петербург, 2002), на III, IV, V Тихоокеанской научно-практической конференции студентов и молодых ученых с международным участием «Актуальные проблемы экспериментальной, профилактической и клинической медицины» (Владивосток, 2002, 2003, 2004), и на заседании Проблемной комиссии «Морфология, физиология, биохимия» Владивостокского государственного медицинского университета (25 мая 2004).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 9 печатных работ. Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, 5 глав собственных данных, заключения, выводов, списка литературы. Работа содержит 150 страниц машинописного текста, 19 таблиц, 37 рисунков, включающих 24 фотографии и 13 графиков. Указатель литературы представлен 130 работами отечественных и 81 работами иностранных авторов.

Заключение Диссертация по теме "Гистология, цитология, клеточная биология", Зенкина, Виктория Геннадьевна

126 Выводы

1. Гидролизат и экстракт из кукумарии японской не влияют на общеморфологические показатели крыс и не вызывают отклонений в эстральном цикле, его общей продолжительности и длительности отдельных стадий (эструс, метаэструс, диэструс, проэструс), а также не оказывают отрицательного действия на качественный состав влагалищных мазков.

2. Тканевые базофилы мезовариальной брыжейки реагируют на изменения эстрального цикла, проявляя высокую функциональную активность в эструсе. Разная степень дегрануляции, выход биогенных моноаминов за пределы тучных клеток является диагностическим критерием стадий полового цикла как в контроле так и при экспериментальных воздействиях.

4. Гидолизат и экстракт из кукумарии японской вызывают уменьшение числа атрезирующихся фолликулов в яичниках половозрелых животных в эструсе и диэструсе, при этом достоверно увеличивается соотношение растущих и атретических фолликулов, а также диаметр полостных и преовуляторных фолликулов за счет гипертрофии теки.

5. У животных, получавших пищевые добавки до момента полового созревания, пищевые добавки из кукумарии вызывают эффект снятия ранних атретических явлений, при этом уменьшается число атретических фолликулов в диэструсе и увеличивается количество растущих фолликулов в эструсе по сравнению с контрольной группой.

6. При неонатальной андрогенизации у животных в половозрелом периоде отмечаются нарушения фолликулогенеза, при этом уменьшается количество растущих фолликулов, отсутствуют полостные формы и полноценные зрелые фолликулы, отмечается их массовая атрезия. Экстракт из кукумарии япнской у неонатально андрогенизированных крыс вызывает увеличение числа полостных фолликулов, уменьшение количества атретических фолликулов, при этом в два раза увеличивается соотношение растущих и атретических фолликулов, формируются фолликулярные кисты и кисты желтого тела.

128

Библиография Диссертация по биологии, кандидата медицинских наук, Зенкина, Виктория Геннадьевна, Владивосток

1. Абрамченко В.В., Богдашкин Н.Г. Простагландины и репродуктивная система женщины. Киев: Здоровье, 1998. - 165 с.

2. Авилов С.А., Стоник В.А., Калиновский А.И. Строение четырех новых тритерпеновых гликозидов из голотурии Cucumaria japonica // Химия природ, соединений. 1990. - №6. - С. 787-792

3. Акулин В.Н., Блинов Ю.Г. Исследования в области технологии использования рыб и нерыбных объектов Дальнего Востока // ТИНРО -70. Владивосток, 1995. - С. 32-51.

4. Аминин Д.Л., Анисимов М.М. Содержание голотоксинов в тканях голотурии Stichopus japonicus в разные сезоны года и их влияние на созревание ооцитов // Журн. эволюц. биохимии и физиологии. 1987. — Т. 23, №4. - С. 545-547.

5. Аминин Д.Л., Анисимов М.М. Влияние голотоксина Aj на транспорт Са2+ и мейотическое созревание ооцитов голотурии Stichopus japonicus // Журн. эволюц. биохимии и физиологии. 1990. - Т.26, № 1. - С.9-13.

6. Амстиславский С.Я., Ерошенко В.П. Влияние экоэстрогенов па развитие репродуктивной системы млекопитающих // Онтогенез. 2000. - Т. 31, №3. - С. 165-177.

7. Анисимов М.М. Тритерпеновые гликозиды и структурные свойства мембран // Биологические науки. 1987. - №10. - С. 49-63.

8. Анисимов М.М., Чирва В.Я. О биологической роли тритепеновых гликозидов // Успехи современ. биологии 1980. - №6. - С. 573-582.

9. Апоптоз в гормонально зависимых тканях репродуктивной систехмы / Г.Т. Сухих, М.М. Дементьева, В.Н. Серов и др. // Акушерство и гинекология. - 1999. - №5. - С. 12-14

10. Ю.Барышников А.Ю., Шинкин Ю.В. Иммунологические проблемы аноптоза. М.: УРСС, 2002. - 318с.

11. П.Бачалдин C.JI. Морфометрические и гистохимические особенности яичников новорожденных в зависимости от причин смерти: Дис. канд. мед. наук. Владивосток, 1994. - 24 с.

12. Беленький М.А. Элементы количественной оценки фармакологического эффекта. -J1.: Медицина, 1963.- 150с.

13. Биологически активные добавки в питании человека / В.А. Тутельян, Б.П. Суханов, А.Н. Австриевских, В.М. Позняковский Томск: HTJI, 1999. -296с.

14. Биомедицинское исследование концентрата каратиноидов, полученных из североатлантической голотурии Cucumaria frondosa / И.Р. Барильяк, О.Д. Ольшевская, Т.К. Лебская, В.Ф. Толкачева // Вопр. питания. 1999. -Т.68, №3. - С. 12-17.

15. Боровая Т.Г., Волкова О.В. Морфологическая характеристика гистионов развивающихся и атретических фолликулов яичников человека // Бюл. эксперим. биологии и медицины. 1995. - Т. 120, №8. - С. 188-191.

16. Боярский К.Ю. Старение репродуктивной системы и результативность вспомогательных репродуктивных технологий // Пробл. репродукции. -1996. -№4.-С.57-62.

17. Буторина О.Г., Донскова М.Д. Гистофизиологические особенности развития яичника в условиях изменения содержания тимических пептидов в инфантильном возрасте у мышей // Морфология. 1996. - №1. -С. 95-100.

18. Быков В.Л. Секреторные механизмы и секреторные продукты тучных клеток // Морфология. 1999. - Т.115, №2. - С. 64-72.

19. Величко М.А., Шевченко В.П. Биологически активные пищевые добавки // Воен.-мед. журн. 1998. -Т.319, №7. - С. 24-27.

20. Вельтищева Е.Ю. Простагландины как медиаторы иммунитета. Значение простагландинов в репродукции человека// Акушерство и гинекология. -1988.-№3.-С. 3-5.

21. Виноградов В.В., Воробьева Н.Ф. Тучные клетки (генез, структура, функции). Новосибирск: Наука, 1973. - 128с.

22. Влияние свободных тритерпеноидов на свойства модельных мембран / Г.Н. Лихацкая, A.M. Попов, Л.Э. Одинокова и др. // Известия АН СССР. Сер. биология. -1990. №6. - С. 942-946.

23. Влияние тритерпеновых гликозидов даммаранового ряда и их агликонов на фазовые переходы дипальмитоилфосфатидилхолина / В.Р. Акоев, Р.Е. Елемесов, Б.С. Абдрасилов и др. // Биол. мембраны. 1996. - Т. 13, №6. -С.605-611.

24. Волкова А.В. Функциональная морфология женской репродуктивной системы. -М.: Медицина, 1983. 223 с.

25. Волкова О.В., Боровая Т.Г. Состояние овариальной функции при экспериментальном моделировании гипертиреоза и гипертиреотропинемии // Бюл. эксперим. биологии и медицины . 1995. -Т. 120, №10.-С. 422-424.

26. Волкова О.В., Боровая Т.Г., Диденко JI.B. Механизмы селекции овариальных фолликулов для овуляции // Морфология. 1999. - №1. - С. 38-42.

27. Волкова О.В., Боровая Т.Г., Шаповалов Ф.А. Морфофункциональные изменения сети и покровного эпителия яичника в период старения // Морфология. 2000. - Т. 117, №3. - С. 32.

28. Гилязутдинова З.Ш., Гилязутдинов И.А. Факторы, участвующие в регуляции репродуктивной функции женщины // Вестн. Рос. ассоц. акушеров-гинекологов. 1999. - №4. - С. 38-41.

29. Говалло В.И. Иммунология репродукции. М.: Медицина, 1987. - 304 с.

30. Гольдберг Е.Д., Боровская Т.Г., Фомина Т.И. Морфологическое и функциональное состояние яичников крыс при введении противоопухолевых препаратов // Эксперим. и клинич. фармакология-1998.- Т.61, №6.-С.45-47.

31. Гончаренко О.Г., Гроссман Н.С. Лечебно-профилактическое питание из кукумарии // Вопр. питания. 1994. - №4. - С. 38-39.

32. Гудыма Б.И. Размерно массовый состав и некоторые свойства ампулярии // Таврийский науковий висник. - 1998. - С. 217-223.

33. Турин И.С., Ажгихин И.С. Биологически активные свойства гидробионтов источник новых лекарств и препаратов. - М.: Б.и., 1981. — 136 с.

34. Далмане А.Р. Атрезия фолликулов яичника млекопитающих // Арх. патологии, гистологии и эмбриологии. 1967. - Т. 53, №3. - С. 73-84.

35. Еляков Г.Б., Стоник В.А. Терпеноиды морских организмов. М.: Наука, 1986.-270 с.

36. Еременко И.Р. Постнатальное развитие яичников потомства гемиовариоэктомированных крыс: Дис. канд. мед. наук.- Хабаровск., 1991.- 170 с.

37. Ефимова С.Н., Савватеева Л.Ю. Экономическая эффективность использования для подкормки норок отходов кальмара и кукумарии: Информ. Лист № 87-81 / Приморский ЦНТИ. Владивосток, 1981. - 4с.

38. Иванова И.А. Справочник БАПД, разработанных на основе дальневосточного сырья животного, растительного, минерального происхождения. Владивосток: НИИ мед. климатол. и восстан. лечения, 2001.-52 с.

39. Изоляция и свойства лектина из целомической жидкости голотурии Cucumaria japonica / А.А. Булгаков, Э.Л. Назаренко, И.Я. Петрова, М.Г. Елисейкина // Биохимия. 2000. - Т.65, №8. - С. 12-17.

40. Изучение иммуномодулирующей активности тетрациклических тритерпеновых гликозидов даммаранового и голостанового ряда / A.M. Попов, Л.Н. Атопкина, Н.Ф. Самошина, Н.И. Уварова // Антибиотики и химиотерапия 1994. - Т.39, №9-10. - С. 19-25.

41. Изучение процесса апоптоза раковых клеток, индуцированного а-фетопротеином / Е.И. Дудич, Л.Н. Семенкова, И.В. Дудич и др. // Бюл. эксперим. биологии и медицины. -2000. Т. 130, №12. - С. 604-611.

42. Иммуностимуляторы для звероводства КМ и КМ-2 / Ю.Н. Гришин, A.M. Ковалевская, В.А. Стоник и др. // Новости звероводства. 1991. - №2. -С. 19-23.

43. Иммуномодулирующая активность тритерпенов растительного происхождения и их производных /Т.Н. Ильичева, Т.Р. Проняева, Э.Э. Шульц и др. // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. -2001.-№2.-С. 53-56.

44. Калинин В.И. Морфологические закономерности в эволюции тритепеновых гликозидов голотурий (Holothuriordea, Echinodermata) // Журн. общей биологии. 1992. - Т. 53, №5. - С. 672-688.

45. Калинин В.А. Тритерпеновые гликозиды голотурий (Holothurioidea, Echinodermata): структура, таксономическое распределение, эволюция: Автореф. дис. д-ра биол. наук / ДВНЦ РАН. Владивосток, 1998. - 62с.

46. Калинин В.А., Стоник В.А, Авилов С.А. Гомологическая изменчивость и направленность в эволюции тритепеновых гликозидов голотурий (Holothuriordea, Echinodermata) // Журн. общей биологии. 1990. - Т. 51, №2. - С. 247-260.

47. Калинин В.И., Левин B.C., Стоник В.А. Химическая морфология: тритерпеновые гликозиды голотурий. Владивосток: Дальнаука, 1994. -284с.

48. Каратун В.М. Морфофункциональная характеристика яичника гемиовариоэктомированных крыс при беременности и в разные фазы полового цикла: Дис. канд. мед наук. Хабаровск, 1994. - 19 с.

49. Клименко Н.А., Дыгай A.M. Роль ТК в реакциях системы крови при воспалении // Бюлл. эксперим. биологии и медицины. 1991.- Т. 112, №9. -С. 305-307.

50. Клименко Н.А., Татарко С.В. Роль ТК в репаративных процессах при воспалении // Бюл. эксперим. биологии и медицины. 1995. - Т.119, №3. -С. 262-265.

51. Клименко Н.А., Татарко С.В. Репопуляция и регрануляция тканевых базофилов на месте острого воспаления // Морфология.-1996.-№1- С. 51-56.

52. Клименко Н.А., Павлова Е.А. Реакция тучных клеток на облучение // Радиац. биология, радиоэкология. 1997. - Т. 37, №37. - С. 395-398.

53. Клименко Н.А., Татарко С.В. Морфологические критерии интенсивности дегрануляции свободных и фиксированных тканевых базофилов в зависимости от типа // Морфология. 1997. - Т. 111, №1. - С.100-103.

54. Ковальский Г.Б. Морфофункциоиальные особенности яичников в раннем репродуктивном периоде, при эндокринном бесплодии и климаксе: Автореф. дис. д-ра мед. наук. М. / АМН СССР НИИ морфологии человека, 1987. - 36 с.

55. Козак М.В. Половые различия уровня перикисного окисления липидов белых крыс в норме и его изменения после гоиадэктомии и введении а-токоферола // Вопр. мед. химии. 2000. - Т.46, №6. - С.574-580.

56. Контрацептивная активность тритерпеновых гликозидов суммы голотоксинов Ai и Bi и голотурина А в эксперименте / М.Н. Мац, В.В. Корхов, В.Р. Степанов и др. // Фармакология и токсикология. - 1990. - Т. 53, №2. - С. 45-47.

57. Косинская Е.Д. Морфофункциональная характеристика тканевых базофилов и системы моноаминов при черепно-мозговой травме (клинико-экспериментальное исследование): Дис. канд. мед. наук.-Владивосток., 2001. 145 с.

58. Кулаков В.И., Селезнева Н.Д., Краснопольский В.Н. Оперативная гинекология (руководство для врачей). Нижний Новгород: НГМА, 1997.-463 с.

59. Левин B.C. О биологической роли и происхождении гликозидов иглокожих // Журн. общей биологии. 1989. - Т. 50, №2. - С. 207-212.

60. Левин B.C. Дальневосточный трепанг. Биология, промысел, воспроизводство. СПб.: Голанд, 2000. - 2000с.

61. Липшиц Р.У., Клименко Н.А. Тучные клетки, гистамин, серотонин в сенсибилизированном организме // Физиол. журн. 1982. - Т.28, №5. - С. 616-619.

62. Литвинова Л.Б. Функциональная активность яичников крыс, «андрогенизированных» в период полового созревания // Физиол. журн. (Украина). 2001. - Т.47, №2. - С.93-99.

63. Ломоносова Н.Э. Морфометрическая характеристика клеток щитовидной железы при тонкоигольной аспирационной биопсии // Тихоокеан. мед. журн. 2003. - №2 (12). - С. 68-69.

64. Мальцева М.Ф., Пищулин А.А., Бронштейн М.Э. Стромальный текоматоз яичников // Пробл. эндокринологии. 1996. - Т.42, №3. - С.40-45.

65. Манухип И.Б., Тумилович Л.Г., Геворкян М.А. Клинические лекции по гинекологической эндокринологии. М.: МИА, 2001. - 247 с.

66. Маслова М.Г., Володарский В.Л. Ингибирующее действие кукумарии японской на рост экспериментальной опухоли // Медико-социальные аспекты проблемы человек-океан. Владивосток, 1988. - С. 272-273.

67. Матвеева НЛО. Апоптоз: морфологические особенности и молекулярные механизмы // Тихоокеан. мед. журн. 2003. - №4 (14). - С. 12-16.

68. Международная анатомическая терминология / Под редакцией Л.Л. Колесникова. М.: Медицина, 2003. - 424 с.

69. Момот Л.Н. Функциональная морфология микроциркуляторного русла фолликулов яичников млекопитающих в норме и при лазерном облучении / Дис.канд. мед. наук. Владивосток, 1992.-176 с.

70. Морфологические особенности яичников пациенток, перенесших синдром гиперстимуляции яичников / Н.И. Кондриков, Е.И. Сотникова,

71. ВJI. Гордеева, Т.А. Назаренко // Акушерство и гинекология. 1999. -№5. -С. 38-41.

72. Морфометрический анализ популяции тучных клеток / Д.П. Линднер, И.А. Поберий, М.Я. Розкин, В.Н. Ефимов // Арх. патологии. 1980. -Т.42, №6. - С. 60-64.

73. Морфофункциональное состояние яичников крыс после введения платидиама / Е.Д. Гольдберг, Т.Г. Боровская, Т.И. Фомина, М.Е. Смирнова // Бюл. эксперим. биологии и медицины 1996. - Т. 122, №11. -С.571-573.

74. Мотавкин П.А., Каредина B.C. Локализация биогенных аминов в тучных клетках//Арх. анатомии. 1985.-Т. 88, вып. 5.-С. 11-13.

75. Мотавкин П. А., Гельцер Б.И. Клиническая и экспериментальная патофизиология легких. — М., 1998. 366с.

76. Мулындин В.А. Влияние экстракта кукумарии японской на неспецифическую резистентность у экспериментальных животных / Дис.канд. биол. наук. Уссурийск, 2002.-231 с.

77. Нагорная В.Ф. Овуляция и протеолитические ферменты // Акушерство и гинекология. 1990. - №4. - С. 13-17.

78. Немченко О.И. Влияние простагландинов на процессы репродукции // Рос. Вестн. акушера-гинеколога. -2001. Т.1, №2. - С.21-24.

79. Никитин А.И., Китаев Э.М. Закономерности фолликулогенеза, его нарушения и формирование аномальных гамет // Арх. анатомии, гистологии и эмбриологии. 1987. - Т. 93, №7. - С. 69-78.

80. Новые гликозиды из голотурии Cucumaria japonica / О.А. Дроздова, С.А. Авилов, А.И. Калиновский и др. // Химия природ, соединений. 1993. -№2. - С. 242-248.

81. Новая пищевая продукция из кукумарии / Репина З.С., Святю С.В., Солодова Е.А. и др. // Известия ТИНРО. Владивосток, 1997.-Т.120. -С.136.

82. Перспективное использование в дерматологической практике биологически активных веществ морских организиов / А.Д. Юцковский, И.Ю. Долматов, Я.А. Бородай и др. // Вести, дерматологии и венерологии. 1995. - №2.-С. 8-11.

83. Пивкин М.В. Нитевидные грибки голотурий побережья Приморья России // Биологический бюл. 2000. - Вып. 198, №1. - С. 101-109.

84. Плотникова С.А., Рыжавский Б.Я. Возрастные особенности раннего овогенеза у экспериментальных животных // Актуальные проблемы педиатрии в Сибири и на Дальнем Востоке. Хабаровск, 1988. - С. 67 -68.

85. Показатели нормы у лабораторных животных в токсикологическом эксперименте / И.М. Трахтенберг, Р.Е. Сова, В.О. Шефтель, Ф.А. Оникиенко- М.: Медицина, 1978. 176 с.

86. Порядин Г.В., Зеличенко Л.И., Хитин Л.М. Способ количественной оценки дегрануляции тучных клеток // Иммунология. 1991. - №3. -С.59-61.94. О А

87. Потенциальный уровень активности Са /Mg -зависимой эндонуклеазы при гиперпластических процессах и раке эндометрия / Е.А. Колобова, А.В. Жданов, Д.А. Варламов и др. // Бюл. эксперим. биологии и медицины 1999. - Т. 127, №6. - С. 683 - 687.

88. Применение БАД «Рыбий жир с каратиноидами из морского огурца» в терапии больных гипертонической болезнью и ИБС с ожирением / Т.К.

89. Лебская, В.Ф. Толкачева, А.В. Васильев, А.В. Погожева, Г.Р. Покровская // Тезисы докл. Международ, симпозиума «Биологически активные добавки к пище: XXI век». СПб, 2000. - С. 89.

90. Противоопухолевые свойства голотоксина Аь выделенного из дальневосточной голотурии / Н.Г. Прокофьева, И.Г. Агафонова, М.И. Киселева, Т.А. Кузнецова и др. // Медико-социальные аспекты проблемы человек-океан. Владивосток, 1988. - С. 272-273.

91. Регуляция гемоноэза и иммуногенеза тритерпеновыми гликозидами из голотурий / Ю.Н. Гришин, Н.Н. Беседнова, В.А. Стоник и др. // Радиобиология. 1990. - Т. 30, №4. - С. 556.

92. Рубченко Т.И. Фитоэстрогены и менопауза // Рос. вестн. акушера-гинеколога. -2001. -Т. 1, №3. -С.52-53.

93. Рубцов Б.В., Ружицкий А.О. Действие некоторых тритерпеновых гликозидов морских беспозвоночных на проницаемость мембран. -Владивосток: Дальнаука, 1997.-28с.

94. Руководство Дьюхерста по акушерству и гинекологии для последипломного обучения / Под редакцией Ч.Р. Уитфилда М.: Медицина, 2003. - 795с.

95. Саноцкий И.В., Фоменко В.Н. Отдаленные последствия влияния химических соединений на организм. М.: Медицина, 1979. - 230 с.

96. Седов A.M., Елкина С, Сергеев В.В. Способность тритерпеновых гликозидов из голотурий стимулировать антибактериальную устойчивость на модели экспериментального сальмонеллеза мышей //

97. Журн. микробиол., эпидемиологии и иммунобиологии 1984. - №5. - С. 55-58.

98. Скулачев В.П. Феноптоз: запрограммированная смерть организма // Биохимия. 1999.-Т. 64,№12.-С. 1679-1688.

99. Сметник В.П., Тумилович Л.Г. Неоперативная гинекология. М.: МИА, 2000. -591с.

100. Смирнова Т.А., Галиева Л.Д., Свиридов Б.Е. Цитогенетический анализ антральных фолликулов // Пробл. репродукции. 1996. - №4. - С.8-12.

101. Современная теория позитивного питания и функциональные продукты / А.А. Кочеткова, А.Ю. Колеснов, В.И. Тужилкин и др. // Пищевая промышленность. 1999. - №4. - С. 7-10.

102. Справочник по акушерству и гинекологии / Под редакцией Г.М. Савельевой. -М.: Медицина, 1996. 383 с.

103. Стоник В.А. Морские физиологически активные вещества // Вестн. ДВО РАН. 1999. - №4. - С.25-33.

104. Структура тритерпеновых гликозидов и систематическое положение двух видов голотурий семейства Stichopodidae / B.C. Левин, В.И. Калинин, С.Н. Федоров, С. Смайли // Биология моря. 1986. - №4. - С. 72-77.

105. Трисульфатированные гликозиды из голотурии Cucumaria japonica / О.А. Дроздова, С.А. Авилов, А.И. Калиновский и др. // Химия природ, соединений 1993. - №3. - С. 369-374.

106. Тритерпеновые гликозиды голотурии Cucumaria frondosa / С.А. Авилов, В.И. Калинин, В.А. Дроздова и др. // Химия природ, соединений 1993. - №2. - С.49-52.

107. Турищев С.Н., Большакова Г.Б., Саканделидзе О.Г. Влияние комплексов тритерпеновых гликозидов из голотурий на репарацию печени // Изв. АН СССР. Серия биол. 1991. - №2. - С. 306-310.

108. Тутельян В.А. Стратегия разработки, применения и оценки эффективности биологически активных добавок к пище // Вопр. питания. 1996.-№6.-С. 3-11.

109. Хавинсон В.Х., Кветной И.М. Пептидные биорегуляторы ингибируют апоптоз // Бюл. эксперим. биологии и медицины. 2000. - Т.130, №12.-С.657-658.

110. Хамидов Д.Х., Этинген Л.Е., Рябченко В.П. Функциональная морфология овариальной железы. Ташкент: Фан, 1974. - 227 с.

111. Химический состав и свойства гидробионтов прибрежной зоны Баренцева и Белого морей / Т.К. Лебская, Ю.Ф. Двинин, Л.А. Константинова и др. Мурманск: ПИНРО, 1998. - 185 с.

112. Хиршфилд А.Н., Шмидт В.А. Кинетические аспекты развития фолликулов у крысы // Онтогенез. 1989. — Т. 20, №1. - С. 5 -27.

113. Цитогенетическое изучение мутагенности кукумариозида / С.Н. Поликарпова, О.Н. Волкова, A.M. Серов и др. 11 Генетика. 1990. - Т. 26, №9.-С. 1682-1684.

114. Шаииро Е.П. Морфофункциональная характеристика яичников женщин репродуктивного возраста при хронической ановуляции: Дис. канд. мед. наук. Хабаровск, 2003. -210с.

115. Шарова J1.B., Седов A.M., Стоник В.А. Доклиническое исследование эмбриотоксических свойств кукумариозида и его влияние на генеративную функцию взрослых особей // Фармакология и токсикология.-1991.-Т. 54, №1.-С. 60-61.

116. Швембергер И.Н., Гинкул Л.Б. Апоптоз: роль в нормальном онтогенезе и патологии // Вопр. онкологии. 2002. - Т.48, №2. - С. 153158.

117. Ярилин А.А. Апоптоз. Природа феномена и его роль в целостном организме// Патолог, физиология и эксперим. терапия 1998.- №2 - С. 38-48.

118. Adlercreutz H. Diet, breast cancer and sex hormone metabolism // Ann. N.Y. Acad. Sci. 1990. - Vol. 595. - P. 281 -290.

119. Antonov A.S., Kalinovsky A.I., Stonik V.A. Uloside B, a new unusual norlanostane-triterpene glycoside and its genuine aglycone from the Madagaskar sponge Ulosa sp. // Tetrahedron Lett. 1998. - Vol. 39. - P. 3807-3808.

120. Becker C., Kyle D.S. Developing functional foods containing algal docosahexaenoic acid // Food technology. 1998. - Vol.52, №7. - P. 68-71.

121. Befus D. Mast cell polymorphisms. Present concepts, future directions // Dig. Dis. Sci. 1988. - Suppl. 3. - P. 165-245.

122. Brower V. Nutraceutical: poised for a fealthy slice of the healhcare market? // Nature biothechnology. 1998. -Vol. 16.-P. 728-731.

123. Burnell D.S., ApSimon J.W. Echinoderm Saponins // Marine Natural Products Chemistry. Chemical and Biological Perspectives / Ed. Scheuer P. J.- N. Y.: Academic Press, 1985. Vol. 5. - P. 287-389.

124. Burkl W. Zur Kausalen Jenese der Follikulatresie // Arch. Gynacol. 1965.- Bd. 200, №7. P. 689-698.

125. Buskov A., Grinsted S. Production of germ cells and regulation of meiosis // Bioregulators of reproduction / Eds. G. Jagiello, H. Vrgel. N.-Y., London, 1981.-P. 109-118.

126. Canipari R., Stricland S. Studies on the hormonal regulation of plasminogen activator production in the rat ovary // J. Endocrinol. 1986.-Vol. 118.-P. 1652-1659.

127. Channing C., Anderson L., Heover D. Hormonal controle of granulosa cell secretion of oocyte maturation inhibitor and inhibin-F activity // Follicular maturation and ovulation / Eds. B. Rolland, E. Hall et al. Exp. Med., Amsterdam, 1982.-P. 128-137.

128. Conde J.E. Ahres les bebes phoques, les concombres de mer // Ecologic. -1997.-Vol. 304.-P. 60-64.

129. Constituents of Holothurioidea II. Six Newly Indentified Biologycally Active Triterpenoid Glycoside Sulfates from the Sea Cucumber Cucumaria echinata / T. Miamoto, K. Togava, R. Higuchi, T. Komori // Liebigs Ann. Chem. 1990. - P. 453-460.

130. Comparative Stadi of Cytotoxic Activity of Triterpene Glycosides from Marine Organisms / M.M. Anisimov, N.G. Procofieva, L.Y. Korotkikh et al. // Toxicon. 1980.-Vol. 18. P. 221-223.

131. Cytotoxic triterpene glycosides from Far-Eas sea cucumbers belonging to the genus Cucumaria / O.A. Drozdova, S.A. Avilov, V.I. Kalinin et al. // Liebigs Annalen. 1997. - №7. - P. 2351-2356.

132. Dekel N. Gonadotropin action on oocyte maturation // Prog. Endocrinology. 1988. - Vol.2. - P. 1033-1038.

133. Effect of Marine Glycosides on Adensinetriphosphatase activity / B.A. Gorshkov, I.A. Gorshkova, V.A. Stonik, G.B. Elyakov // Toxicon. 1982. -Vol. 20, №3. P. 655-658.

134. Effect of graded doses of nicotine on ovarian and uterine activities in albina rats / Somanathreddy Patil, Srinivasreddy Patil, B. Bhaktaraj, Saraswatti B. Patil // Indian J. Exp. Biol. 1999. - Vol.37, №2. - P. 184-186.

135. Evidense for a role of androgen in follicular maturation / J.P. Louvet, S.M. Harman, J.R. Schreiber, G.T. Ross // Endocrinology. 1975.- Vol.97. - P.366-372.

136. Elyakov G.B., Stonik V.A., Levina E.V. Marine Tetracyclic Isoprenoids: Structure and Biosynthesis // Pure and Appl. Chem. 1990. - Vol. 62, №7. -P. 1259-1262.

137. Erickson C.F., Hsueh A.J.W. Induction of aromatase activity by follicle stimulating hormone in rat granulosa cells in vivo and in vitro // Endocrinology. 1978.-Vol. 102.-P. 1275-1282.

138. Field В., Selub M., Hughes C.L. Reproductive effects of environmental agents // Semin. Reprod. Endocrinol. 1990. - Vol. 8. - P. 44-54.

139. Frondoside C, a new nonholostane triterpene glycoside from the sea cucumber Cucumaria frondosa: structure and cytoxicity of its desulfeted derivative / S.A. Avilov, O.V. Drozdova, V.I. Kalinin et al. // Can. J. Chem.-1998.-Vol. 76.-P. 137-141.

140. Gorshkova I.A., Gorshkov B.A., Stonik V.A. Inhibition of Rat Brian Na-K-ATFase by Triterpene Glycosides from Holothurians // Toxicon. 1989. -Vol.27, №8. - P.927-936.

141. Guraya S.S., Greenwald C.S. A comparative histochemical study of interstitial tissue and follicular atresia in the mammalian ovary // Anat. Rec. -1964. -Vol. 149.-P. 411-439.

142. Hemolytic activities of Triterpene Glycosides from Holothurian Order Dendrochirotida: Some Trends in the Evolution of This Group of Toxins. Combing the oceans for new therapeutic agents / Jack D. // Lancet. 1998. -Vol. 352. - P. 704.

143. Hemolytic activities of triterpene glycosides from the holothurian order dendrochirotida: some trends in dte evolution of this group of toxins / V.I. Kalinin, N.G. Procofieva, G.N. Likhatskaya et. al. // Toxicon. 1996. - Vol. 34, №4. - P.475-483.

144. Hirshfield A.N., Midgley A.R. Morphometric analysis of follicular development in the rat//Biol. Reprod. 1978. - Vol. 19. - P.597-605.

145. Hirshfield A.N. Effect of a low dose of pregnant mare's serum gonadotropin on follicular recruiment and atresia in cycling rats // Biol. Reprod. 1986.-Vol. 35.-P. 113-118.

146. Hirshfield A.N. Follicular recruiment in long-term hemicastrate rats // Biol. Reprod. 1982. - Vol. 27. - P. 48-53.

147. Inhibition of ovulation by tyrosine kinase inhibitors in the in vitro perfused rat ovary / M. Motousek, M. Mikuni, K. Mitsube et al. // J. Reprod. and Fert. -1999. Vol.117, №2. - P.379-385.

148. Jakowicki Jerry Andrzej. Molekularne podstawy owulacji // Post. Biol. Komorki. 1999. - Vol.26, №12. - P. 129-137.

149. Kaldas R.S., Hughes C.L. Reproductive and general metabolic effects of mammals // Reprod. Toxicol. 1989. - Vol. 3. - P.81-89.

150. Kalinin V.I., Stonik V.A. Application of morphological trends of evolution to phylogenetic interpretation of chemotaxonomic data // J. Thor. Biol. 1996. -Vol. 180.-P. 1-10.

151. Kitagawa I. Research of biologically active Marine Natural Products // Yakugaku Zasshi. 1988. - Vol. 108, №5. - P. 398-416.

152. Koos R.D., Le Maire W.D. Evidense for an angiogenic factor in rat follicles // Factors regulating ovarian function, N.Y.: Raven press, 1983. - P. 191-196.

153. Koreoside A C, a new nonholostane triterpene glycoside from the sea cucumber Cucumaria Koraensis / S.A. Avilov, A.I. Kalinovskiy, V.A. Stonik et. al. // J. Nat. Prod. (Lloydia). 1997. - Vol. 60. - P. 808-810.

154. Lasley B.J., Nigrelli R.F. The effects of grude holothurin on leucocytc phagocytosis // Toxicon. 1970. - Vol. 8. - P. 301-306.

155. Meredith S., Dudenhieffer G., Jackson K. Single-section counting error when distinguishing between primordial and early primary follicles in section of rat ovary of different thickness // J. Reprod. an Fert. 1999. - Vol.117, №2. - P.339 -343.

156. More stadies on biosynthesis by granulosa cells // Research in Reproduction. 1986. - Vol. 18. - P. 2.

157. Nang C., Leung A. Gonadotropins regulate plasminogen activator production by rat granulosa cells // Endocrinology. 1983. - Vol. 112. - P. 1201-1207.

158. Nigrelli R.F. The effects of Holothurin on Fish and Mice with Sarcoma 180 // Zoologica (New York). 1952. - Vol. 37. - P.89-90.

159. Nigrelli R.F., Jakowska S. Effects of Holothurin, a Steroid Saponin from the Bahamian Sea Cucumber (Actinopyga agassiri) on Various Biological Sistem // Ann. N. Y. Acad. Sci. 1960. - Vol.90. - P. 884-892.

160. Non-seroidal ovarian inhibitors in human follicular fluid. In: Follicular maturation and ovarian / E. Daume, S. Chari, T. Hillensjo, C. Magnusson Eds. B. Rolland, E. Hall et al. Exp. Med., Amsterdam, 1982. P. 237-248.

161. Oestrogenic effects of neonatal administration of raloxifene on hypothalamic pituitary-gonadal axis in male and female rats / L. Pinila, L.C.

162. Gonzalez, F. Gaytan et al. // Reproduction. 2001. - Vol.121, №6. - P.915-924.

163. Ohshima T. Recovery and use of natraceutical products from marine resources // Food technology. 1998. - Vol. 52, №6. - P. 50-54.

164. Ophiuroid type steroids in starfish of the genus Pteraster / E.V. Levina, V.A. Stonik, P.V. Andriyaschenko, A.I. Kalinovskiy // Сотр. Biochem. Physiol. - 1996. - Vol. 114 B. - P. 49-52.

165. O'Shea J.D. An ultrastructural stady of smooth muscle like cells in the theca externa of ovarian follicles in the rat //Anat. Rec. — 1970. Vol. 167. - P. 127- 131.

166. Paradoxical action of activin A on folliculogenesis in immature and adalt mice / Yokota Hidami, Yamada Kiyohiko, Lio Xiaowei et al. // Endocrinology. 1997. - Vol.138, №11. - P. 4572-4576.

167. Physicochemical Characteristics of Interaction of Toxic Triterpene Glycosides from Holothurians with Rat Brian Na-K-ATFase / I.A. Gorshkova, A.I. Kalinovskiy, S.G. Ilyin, B.A. Gorshkov, V.A. Stonik // Toxicon. 1989. -Vol.27,№8.-P. 937-945.

168. Recombinant growth differentiation factor-9 (G-DF-9) enhances growh and differentiation of cultured early ovarian follicles / Masary Hayashi, E.A. McGee, Gyesik Min et al. // Endocrinology. 1999. - Vol.140, №3. - C.1236-1244.

169. Regulation and role of insulin-like growth factor I system in rat luteal cells / N. Sugino, C.M. Telleria, C. Tessier, G. Gibori // J. Reprod. and Fert. 1999. -Vol.115, №2.-P. 349-355.

170. Relaxin production by the porcine ovarian Graafian follicle in vitro / G.D. Bryant-Greenwood, R. Jeffrey, M.M. Ralph, R.F. Seamark // Biol. Reprod. -1980.- Vol. 23.-P. 792-800.

171. Research needs for the risk assessment of health and environmental effects of endocrine disruptors: a repot of the U.S. EPA-sponsored workshop / R.S.

172. Kavlock, G.P. Daston, C. DeRosa et al. // Environ. Health. Perspect. 1996. -Vol.l., Suppl. 4. - P. 715-740.

173. Richards J., Midgley A. Protein hormone action: A key to understanding ovarian follicular and luteal cell development// Biol. Reprod. 1976.-Vol.14, №1. - P. 82-94.

174. Rodriguez J., Castro R., Riguera R. Holothurinosides : New Antitumor Non Sulphated Triterpenoid Glycoside from the Sea Cucumber Holothuria forskali // Tetrahedron. 1991. -Vol.47, №26. - P. 47-53.

175. Rohrborn G. a Hansmann I. Oral contraceptives and chromosome segregation in oocytes of mice // Mut. Res. 1974. - Vol. 26, №5. - p. 535544.

176. Sander H.J., Van Leeuwen E.C.M., de Joung F.H. Inhibin-like activity in media from cultured rat dranulosa cells collected thought the oestrus cycle // J. Endocrinol. 1984. - Vol. 103. - P. 77-84.

177. Schoonmaker J., Erickson G. Glucocorticoid modulation of follicle-stimulating hormone-mediated granulosa cell differentiation // Endocrinology. 1983. - Vol.l 13, №4. - P.l356-1362.

178. Sortur S.M., Kaliwal B.B. Effect of methyl parathion formulation on estrous cycle and reproductive performance in albinos rats // Indian J. Exp. Biol. 1999.-Vol. 37, №2. - C.176-178.

179. Spornitz U.M., Socin C.D., Dravid A.A. Estrous stage determination in rats by means of scanning electron microscopic images of uterine surface epithelium // Anat. Rec. 1999. - Vol. 254, № 1. - P. 116-126.

180. Stoklosowa Stanislawa. Cytokiny, modulatory funkcji jajnika // Post. Biol, komorki. 1999. - Vol. 26, №12. - P. 17-22.

181. Stonik V.A., Elyakov G.B. Structure and biologic activities of sponge and sea Cucumber Toxins // Handbook of Natural Toxins and Venoms / Ed. A. Tu Dekker Marcel Inc.-N.Y., 1988.-P. 107-120.

182. Structure of eximisoside A, a novel triterpene glycoside from the Far-Eastern sea cucumber Psolus exemius / V.I. Kalinin, S.A. Avilov, E.Y. Kalinina, O.G. Korolkova et al. // J. Nat. Prod. (Lloydia). 1997. - Vol.60, №8.- P. 817-819.

183. Structure of cucumarioside G2, a novel nonholostane glycoside from the sea cucumber Eupentacta fraudatrix / S.A. Avilov, V.I. Kalinin, T.N. Makarieva, V.A. Stonik, A.I. Kalinovskiy // J. Nat. Prod. (Lloydia). 1994. - Vol.57. -№8. - P. 1166-1171.

184. Substances of Potential Biomedical Importans from Marine Organisms / R.F. Nigrelli, M.F. Stempien, G.D. Ruggieri et al. // Fed. Proc. 1967. -Vol.26.-P. 1197-1205.

185. Tang Guomei, Wang Engi. Huadong Shifan daxue xuebao. Ziran kexue ban // J. East China Norm. Univ. Natur. Sci. 1999. - №4. - P.85-92.

186. The effects of perinatal / juvenile methoxychlor exposure on adult rat ervous, immune and reproductive system function / R.E. Chapin, M.W. Harris, B.J. Davis et al. // Fundam. Appl. Toxicol. 1997. - Vol. 40. - P. 138157.

187. The ovarian androgen producing cells: a review of structure / function relationships / C.F. Erickson, D.A. Magottin, C.A. Dyer et. al. // Endocrinol. Rev. 1985. - Vol.6. - P. 371-399.

188. Zhao Hai-Bo, Liu Yi. Disi junyi daxue xuebao // J. Forth Milit. Med Univ. 2001.-Vol.22, №5. - P.429-431.

Информация о работе

Зенкина, Виктория Геннадьевна
кандидата медицинских наук
Владивосток, 2005
ВАК 03.00.25

Диссертация

Влияние гидролизата и экстракта из кукумарии японской на морфологию яичников крыс в разные стадии эстрального цикла - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы