Влияние факторов среды на биологические свойства Listeria Monocytogenes, контаминирующей пищевые продукты

Цветкова, Наталья Борисовна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Влияние факторов среды на биологические свойства Listeria Monocytogenes, контаминирующей пищевые продукты
ВАК РФ 03.02.08, Экология (по отраслям)

Автореферат диссертации по теме "Влияние факторов среды на биологические свойства Listeria Monocytogenes, контаминирующей пищевые продукты"

Цветкова Наталья Борисовна

ВЛИЯНИЕ ФАКТОРОВ СРЕДЫ НА БИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА LISTERIA MONOCYTOGENES, КОНТАМИНИРУЮЩЕЙ ПИЩЕВЫЕ ПРОДУКТЫ

03.02.08-экология 03.02.03 - микробиология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

1 2 МАЙ 2011

Владивосток - 2011

4846127

Работа выполнена в Научно-исследовательском институте эпидемиологии и микробиологии Сибирского отделения РАМН (г. Владивосток)

Научный руководитель:

доктор биологических наук, профессор

Бузолева Любовь Степановна

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук Недашковская Ольга Ильинична

доктор медицинских наук Мартынова Алина Викторовна

Ведущая организация: Биолого-почвенный институт ДВО РАН, г. Владивосток

Защита состоится «27» мая 2011 г. в 10.00 часов на заседании диссертационного совета Д 212.056.02 при Дальневосточном федеральном университете МОН РФ по адресу: 690091, г. Владивосток, ул. Октябрьская, 27, ауд. № 435.

Отзывы на автореферат просим направлять по адресу: 690091, г. Владивосток, ул. Октябрьская, 27, комната 417, кафедра общей экологии. Факс: (4232) 45-94-09 E-mail: marineecology@rambler.rti

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке Дальневосточного федерального университета МОН РФ.

Автореферат разослан «25» апреля 2011 г.

Ученый секретарь диссертационного совета,

кандидат биологических наук

Ю.А. Галышева

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. В условиях высокого антропогенного загрязнения окружающей среды, а также роста иммунодефицита у населения, резко обострилась проблема пищевых инфекций человека. В конце прошлого столетия в пятерку наиболее опасных из них вошел листериоз, характеризующийся алиментарным путем передачи возбудителя, полиморфизмом клинических проявлений и высоким уровнем летальности (до 40%) (Farber, Peterkin, 2000; Wagner et al., 2005). В настоящее время доказано, что факторами передачи бактерий человеку являются готовые пищевые продукты (молочные, мясные, рыбные), в которых листерии размножаются, накапливаются и поддерживают высокую степень вирулентности (Тартаковский и др., 2002; Nakamura, 2004; Mengesha et al., 2009).

Эпидемиологический анализ, выявляющий доминирующую роль определенного продукта при распространении инфекции, не дает возможности определить механизмы регуляции численности и патогенный потенциал листерий, обсеменяющих пищевые продукты, под воздействием факторов среды. Только в единичных публикациях сообщается о влиянии абиотических факторов среды на изменение патогенных свойств L. monocytogenes, контаминирующей пищевые продукты (Conte et al., 2000). При этом изменчивость биологии возбудителя исследовалась либо на отдельных видах продуктов (Midelet-Bourdin et al., 2006), либо под воздействием определенного экологического фактора, чаще всего температуры или рН (Зайцева, 2006). Комплексные исследования, учитывающие влияние как абиотических, так и биотических факторов на размножение и биологические свойства листерий, обсеменяющих пищевые продукты, не проводились.

Цель работы: изучить влияние различных факторов среды (температура, пищевой субстрат, вакуумная упаковка, метаболиты сапрофитных бактерий, ассоциированных с листериями) на размножение и биологические свойства L. monocytogenes при культивировании на пищевых продуктах.

Задачи исследования:

1. В модельных экспериментах изучить влияние температуры и вида субстрата на размножение L. monocytogenes, культивируемой на пищевых продуктах.

2. Исследовать биологические свойства культур L. monocytogenes, обсеменяющих различные пищевые продукты, при разных условиях хранения.

3. Изучить влияние метаболитов сапрофитных бактерий пищевых продуктов, ассоциированных с листериями, на пролиферативные свойства патогенов.

4. Исследовать способность образования биопленок на неорганическом материале сообществом исследуемых культур L. monocytogenes и Bacillus spp.

пищевых продуктах и усиливающие их патогенные свойства. Показано, что хранение пищевых продуктов в вакуумной упаковке при низкой температуре способствует повышению вирулентности L. monocytogenes. Впервые установлено стимулирующее влияние метаболитов сапрофитных бактерий на репродуктивную активность культур L. monocytogenes, обсеменяющих пищевые продукты.

Практическая значимость работы. Создана модель для изучения динамики численности и биологических свойств L. monocytogenes, обсеменяющих пищевые продукты. Выявлены различия в сроках размножения листерий в зависимости от пищевого субстрата, что имеет важное эпидемиологическое значение и может быть использовано в практике. Данные по изменчивости биологических свойств листерий, обсеменяющих пищевые продукты, могут быть использованы в практической бактериологии. Выделен штамм бактерий рода Bacillus, метаболиты которого стимулируют размножение L. monocytogenes (штамм NCTC10527) и индуцируют переход некультивируемых форм листерий в пролиферативное состояние. Разработан новый способ реверсии некультивируемых форм L. monocytogenes в пролиферативное состояние с использованием метаболитов бактерий рода Bacillus, который является основой для создания листериозного диагностикума.

Положения, выносимые на защиту:

1. На размножение и биологические свойства культур L. monocytogenes, контаминирующих пищевые продукты, оказывают влияние температура, вид пищевого продукта, а так же вакуумная упаковка.

2. Сапрофитные микроорганизмы, обсеменяющие пищевые продукты, влияют на биологические свойства и стимулируют репродуктивную активность, ассоциированной с ними L. monocytogenes.

Апробация диссертационной работы. Материалы диссертационной работы были представлены на: всероссийской научной конференции «Проблемы современной эпидемиологии. Перспективные средства и методы лабораторной диагностики и профилактика актуальных инфекций» (Санкт-Петербург, 2009); всероссийской конференции, посвященной 70-летию теории академика Е. Н. Павловского о природной очаговости болезней (Омск, 2009); международной конференции «Развитие исследований и надзора за инфекционными заболеваниями» (Санкт-Петербург, 2010); IX региональной конференции студентов, аспирантов вузов и научных организаций Дальнего Востока России «Актуальные проблемы экологии, морской биологии и биотехнологии» (Владивосток, 2010); всероссийской научной школе для молодежи «Перспективы развития инноваций в биологии» (Владивосток, 2010); международной конференции «Этиологические, эпидемиологические и клинические аспекты инфекционных болезней» (К 90-летию кафедры микробиологии, вирусологии и иммунологии ИГМУ) (Иркутск, 2010); IV региональной научно-практической конференции «Актуальные вопросы инфекционной патологии на Дальнем Востоке Российской Федерации», посвященной 85-летию ФГУН (Хабаровск, 2010); III съезде военных врачей медико-профилактического профиля Вооруженных сил Российской Федерации (ВВМПП) «Достижения науки и практики в обеспечении санитарно-

эпидемиологического благополучия Вооруженных сил Российской Федерации» (Санкт-Петербург, 2010); V Региональной научно-практической конференции «Инфекционная патология в Приморском крае» (Владивосток, 2010); всероссийской Научной Школе для молодежи «Инновации в биологии для развития биоиндустрии сельскохозяйственной продукции» (Владивосток, 2010).

Публикации. По теме диссертации опубликовано И работ, в том числе 2 статьи в журналах, включенных в перечень изданий рекомендованных ВАК Министерства образования и науки РФ для публикации результатов диссертационных работ.

Структура и объем диссертации. Диссертационная работа изложена на 157 стр., состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, трех глав собственных исследований, заключения, выводов, списка литературы, состоящего из 346 источников, в том числе 235 иностранных, приложения. Работа содержит 24 рисунка и 8 таблиц.

Благодарности. Автор выражает искреннюю признательность заслуженному деятелю науки РФ, д.б.н. Н.К. Христофоровой за консультации и рекомендации, научному руководителю д.б.н., профессору Л.С. Бузолёвой за всестороннюю помощь и поддержку в работе. Автор благодарит сотрудников лаборатории экологии патогенных бактерий НИИ ЭМ СО РАМН: B.C. Обухову, С.Д. Жилину, Л.Н. Гомза, д.м.н. Е.А. Зайцеву, A.M. Кривошееву, Л.П. Орлову за практическую помощь, ценные замечания и моральную поддержку, к.б.н. Н.Л. Белькову (Лимнологический институт СО РАН, г. Иркутск), к.б.н. А.А. Карпенко (ИБМ ДВО РАН, г. Владивосток), Ю.Н. Хорошевскую (лаборатория ПЦР-анализа Центра по контролю качества пищевой продукции «Приморский», г. Владивосток) за помощь в проведении исследований.

СОДЕРЖАНИЕ ДИССЕРТАЦИИ

Глава 1. (Обзор литературы) Влияние экологических факторов среды на биологические свойства Listeria monocytogenes, контаминирующей пищевые продукты

В главе приведен анализ литературных источников. Дана эпидемиологическая характеристика пищевого листериоза, регистрируемого в России и зарубежных странах. Определены основные причины ухудшения эпидемиологической ситуации за последние десятилетия (Тартаковский и др., 2002; Van der Veen et а!., 2008). Рассмотрена роль пищевых продуктов, как факторов передачи L. monocytogenes человеку (Mena et al., 2004; Karakolev, 2009). Приведен анализ влияния ряда абиотических факторов среды обитания, на изменение биологических свойств внеорганизменных популяций листерий, обитающих в почве, воде, простейших (Сидоренко и др., 2003; Терехова, 2003; Сомов, Бузолева, 2004). Показано, что воздействие некоторых экологических факторов среды вызывает адаптационные изменения, приводящие к образованию биопленок (Bernett et al., 2001; Djordjevic et al., 2002) и некультивируемых форм L. monocytogenes (Oliver, 2005).

Глава 2. Материалы и методы

Экспериментальные исследования проведены на базе лаборатории экологии патогенных бактерий НИИЭМ СО РАМН (г. Владивосток). Отдельные фрагменты исследований выполнены в Лимнологическом институте СО РАН (г. Иркутск), лаборатории биофизики клетки ИБМ ДВО РАН (г. Владивосток) и лаборатории ПЦР-анализа Центра по контролю качества пищевой продукции «Приморский» (г. Владивосток).

Микроорганизмы. В работе использованы типовые штаммы бактерий L.monocytogenes (серовариантов 1/2а, 4Ъ), полученные из коллекции лаборатории экологии патогенных бактерий НИИ ЭМ СО РАМН (г. Владивосток).

Пищевые продукты. Для экспериментальных исследований использовались пищевые продукты, приобретенные в торговой сети г. Владивостока, являющиеся источниками выделения листерий (Тартаковский и др., 2002): рыба холодного копчения (горбуша); рыба свежемороженая (горбуша); креветка вареная; креветка свежемороженая; кальмар свежемороженый; гребешок свежемороженый; сыр «Ламбер»; творог «Домашний»; молоко сырое; молоко пастеризованное; сыр плавленый «Янтарь»; сыр «Камамбер» (вакуумная упаковка; сосиска «Молочная»; сосиска «Свиная» (вакуумная упаковка); сырое куриное и свиное мясо.

Лабораторные животные. Определение вирулентности исследуемых культур проводилось на неинбредных мышах массой 14 -18 г и морских свинках весом 150 - 200 г (разброс по массе ± 10%). Работа выполнялась согласно нормативному документу «Правила проведения работ и использования экспериментальных животных», утвержденного приказом министра здравоохранения СССР № 755 от 12.08.1977 г.

Методы. Исследование морфологических, культуральных и биохимических свойств листерий проводили согласно методов и сред, рекомендованных ГОСТ Р 51921-2002 и МУК 4.2.1122-02. Антигенные свойства культур листерий определяли в линейной реакции агглютинации на стекле с типовой поливалентной сывороткой (ВНИИВВиМ, г. Покров). Антибиотикорезистентность штаммов листерий изучали методом диско-диффузии в агар согласно МУК 4.2.1890-04. Определение адгезивной активности листерий проводили по методу В. И. Брилис с соавт. (1996). Вирулентность культур определяли на неинбредных мышах путем внутрибрюшинного заражения возрастающими дозами (от 10 до 109 КОЕ/мл), с вычислением LD50 и ее доверительного интервала при помощи метода Кербера, а также по кератоконъюнктивальной пробе на морских свинках. Признаки, констатирующие принадлежность исследуемых штаммов к роду Bacillus, определяли согласно общепринятым методам (Берджи, 1997). Для ускоренной идентификации Bacillus spp. по биохимическим признакам использовали стриповый диагностикум «API 5 СНВ» (BioMerieux, Франция). Изучение кинетики роста листерий на различных питательных субстратах проводили при периодическом культивировании с дальнейшим построением кривых роста. Все исследования проводились при температурах +22°С (комнатная температура) и +6°С

(температура холодильника), т.к. известно, что большинство продуктов, во избежание порчи, хранятся в холодильниках, а современные технологии делают возможным хранение продуктов при комнатной температуре. Определение активности летучих метаболитов, продуцируемых сапрофитной микрофлорой пищевых продуктов, проводили по методу JI. С. Тирранен (1980). Получение некультивируемых клеток L. monocytogenes проводили при сочетанном действии голодания и сниженной температуры инкубации по методике V. Besnard (2000) в модификации. Наращивание биопленок L. monocytogenes на предметных стеклах проводили по методике Min Seok Chae (1999). Формирование биопленок листериями в монокультуре оценивали без предварительной фиксации и окраски бактерий с помощью высокоразрешающей видеомикроскопии VE - DIC (Salmon, Phong, 1998). Образование биопленок L. monocytogenes в ассоциации с культурой Bacillus spp., оценивали с помощью эпифлюоресцентного микроскопа, используя методику R. К. Wright и P. М. Muriana (2004) в нашей модификации. Идентификацию листерий до вида L. monocytogenes, выделенных из образцов пищевых продуктов проводили с помощью тест-системы АмплиСенс Listeria monocytogenes (ООО «ИнтерЛабСервис», г. Москва) методом ПЦР, согласно приложенной инструкции по применению. Статистические методы. Нормальность распределения данных определяли W-критерием Шапиро-Уилка. Различия между данными опытных и контрольных групп выявляли t-критерием Стьюдента. В работе использовались графические приемы выражения статистических данных (Лакин, 1990). Расчеты произведены с использованием программного пакета Statistica 6,0 на компьютере типа IBM-PC, Pentium IV.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Глава 3. Влияние факторов среды на рост и размножение Listeria monocytogenes на пищевых субстратах

На первом этапе исследований экспериментально была подобрана модель для изучения динамики численности и изменчивости листерий на пищевых субстратах, взятых в различных концентрациях для приготовления питательных сред. Сравнительное исследование динамики численности листерий показало, что наиболее оптимальной для размножения L. monocytogenes (при +6°С и +22°С) была 1,0% концентрация всех исследуемых субстратов. В этом случае численность бактерий в поздней логарифмической фазе была наиболее высокой по сравнению с ростом на средах с другими концентрациями продукта.

Проведенные исследования позволили установить, что наиболее активное размножение листерий на всех пищевых субстратах происходило при +22°С. Так, на примере субстрата с сыром «Ламбер» показано увеличение численности листерий до 9,14±0,04 lg КОЕ/мл (р<0,05), по сравнению с контролем (6,5±0,01 lg КОЕ/мл, р<0,05). При температуре +6°С значение М-концентрации бактерий было ниже (7,1±0,05 lg КОЕ/мл, р<0,001), по сравнению с таковой при комнатной температуре. Если учесть, что низкая температура повышает вирулентные

свойства листерий, то даже небольшая концентрация возбудителя может способствовать возникновению инфекционного процесса (Зайцева, Сомов, 2006).

В ходе наших исследований было установлено, что вид питательного субстрата является фактором, регулирующим численность L. monocytogenes при разных температурах (рис. 1). Анализ полученных данных показал, что интенсивнее всего листерии размножались на субстратах с молочными продуктами, достигая максимального значения численности на сыре «Ламбер» (9,14±0,04 lg КОЕ/мл, р<0,05) уже после 18-20 часов инкубации.

Активный рост листерий на всех субстратах с мясными продуктами сопровождался явлением ауксотрофии, а М-концентрация бактерий (9,4±0,05 lg КОЕ/мл, р<0,001) достигалась на 2-5 сутки исследования.

Медленнее всего листерии размножались на субстратах с морепродуктами, достигая максимальной концентрации на креветочном субстрате (8,84±0,01 lg КОЕ/мл, р<0,001) только к 6 суткам исследования.

Достоверно меньшую численность листерий (для всех категорий продуктов) наблюдали на субстратах с сырыми пищевыми продуктами (от 6,6±0,03 lg КОЕ/мл до 7,2 lg КОЕ/мл, р<0,001), по сравнению с ферментативно или термически обработанными (от 8,84±0,01 lg КОЕ/мл до 9,14±0,04 lg КОЕ/мл, р<0,05).

Время исследования, сутки

Рис. 1. Динамика численности L. monocytogenes на пищевых субстратах разных категорий продуктов при +22°С: 1) питательный субстрат с молочным продуктом (сыр «Ламбер»); 2) питательный субстрат с мясным продуктом (сосиска «Молочная»); 3) питательный субстрат с морепродуктом (креветка вареная); контроль (ФБР ПК без субстрата): 4) штамм VIMVF-132; 5) штамм VIMVG-086; 6) штамм VIMVF-280; п=5.

Таким образом, максимальная численность листерий и время ее достижения зависели от температуры культивирования и вида пищевого продукта, что имеет важное эпидемиологическое значение в плане предупреждения распространения листериозной инфекции.

Глава 4. Изменение биологических свойств Listeria monocytogenes, контамшшрующих пищевые продукты, в зависимости от условий их

хранения

На следующем этапе работы изучали влияние условий хранения пищевых продуктов на биохимические (разложение Сахаров, используемых при диагностике листерий) и патогенные свойства (адгезия, гемолитическая и лецитиназная активность, вирулентность, подвижность, чувствительность к ряду антимикробных препаратов) штаммов L. monocytogenes, культивируемых на разных пищевых субстратах при температурах +6°С и +22"С.

Показано, что культуры листерий, выращенные на сыре «Ламбер» при комнатной температуре (+22°С), в отличие от контроля (без пищевого субстрата), приобрели способность дополнительно ферментировать 7 субстратов (табл 1). Подобные изменения были описаны у внеорганизменных популяций L. monocytogenes, длительно обитающих в почвах (Бузолева и др., 2004). Культуры листерий, выращенные на мясных субстратах и морепродуктах, как в условиях холода, так и при +22°С, в меньшей степени изменяли биохимические свойства.

Таблица 1

Влияние температуры и вида пищевого субстрата на диагностические признаки/,. monocytogene при периодическом культивировании

\ Штамм Гест \ VIMVF-132 V1MVF-280 VIMVG-086

Способность к ферментации

К1 б'С К1 22'С П1 б'С П1 22'С К2 б'С К2 22'С П2 б'С П2 22'С КЗ б'С КЗ 22'С пз б'С ПЗ 22'С

Сосиска «Молочная» Сыр «Ламбер» Креветка вареная

D-галактоза + + + + + + + + + + + +

L-сорбоза - - + + - - - + - - - +

L-рамноза + + + + + + + + + + + +

D-маннитол

D-сахароза - - - - - - - + - - - -

Инулин - - - - - - - + - - - -

D-мслсзидоза - - - - - - + + - - - -

D-раффиноза - - - - - - - + - - + -

Амидон - - - - - - - + - - - -

Гликоген - - - - - - - + - - - -

К1 б'С, К2 б'С, КЗ б'С (контроль I)- культура, выращенная на КД - агаре с глюкозой при +6'С; К1 22'С, К2 22'С, КЗ 22'С ( контроль 2)- культура, выращенная на КД - агаре при +22'С; П1 б'С, П2 б'С, ПЗ б'С - культура, выращенная на пищевом субстрате при +6"С; П1 22"С, П2 22'С, ПЗ 22'С - культура, выращенная на пищевом субстрате при +22°С; п=5.

Культивирование L. monocytogenes на мясном продукте при +6°С приводило к повышению адгезивной способности бактериальных клеток к эритроцитам человека (табл. 2) Вирулентность листерий усиливалась при низкой

температуре как на сырном, так и на мясном субстратах. Во всех остальных вариантах вирулентность оставалась неизменной, либо происходило ее снижение.

Таблица 2

Изменение биологических свойств у штаммов L. monocytogenes, культивируемых на пищевых субстратах при разных температурах.

\ Штамм VIMVF-132 VIMVF-280 VIMVG-086

К1 К1 П1 П1 К2 K2 П2 П2 КЗ КЗ ГО пз

б'С 22'С б'С 22'С б'С 22'С б'С 22'С б'С 22'С б'С 22'С

Сосиска Сыр «Ламбер» Креветка

Тест «Молочная» вареная

Подвиж- Ч7"С - - - - - - - - - - -

ность t-22'C + + + - + + - - + + -

Лецитиназа + + + - + + - - + + -

Гемолиз + + + - + + - - + + -

Адгезия (ИАМ) 5,31 3,81 7,06 5,14 3,96 3,4 2,52 2,76 1,15 1,65 2,5 1,65

в/а с/а в/а в/а с/а с/а н/а н/а н/а н/а с/а н/а

LD!0 2,5x10" 2,3x10' 1,5x10* 6,3x10" 1,5x10' 6,2хЮ4 6,3x103 1,5x10' 1,5x10' 6,3x10" ю" ю"

Примечание: (н/а) - низкоадгезивные; (с/а) - среднеадгезивные; (в/а) - высокоадгезивные; K1 6"С, К2 6°С, КЗ б'С (контроль 1)- культура, выращенная на КД - агаре с глюкозой при +6°С; K1 22°С, К2 22'С, КЗ 22'С ( контроль 2)- культура, выращенная на КД - агаре при +22'С; П1 6*С, П2 б'С, ПЗ 6°С - культура, выращенная на пищевом субстрате при +6°С; П1 22'С, П2 22°С, ПЗ 22'С - культура, выращенная на пищевом субстрате при +22'С; п=5.

Следовательно, в зависимости от вида субстрата и штамма листерий реализуются разные механизмы проявления факторов патогенности. При культивировании на молочных продуктах - за счет расширения спектра ферментов, разлагающих субстрат, а на мясных продуктах - за счет усиления адгезивных свойств L. monocytogenes.

Большинство пищевых продуктов хранится в вакуумной упаковке. При этом известно, что вакуум может оказывать влияние на патогенный потенциал листерий (Conte et al., 2000). Поэтому, для дальнейших исследований создали экспериментальную модель, позволяющую изучить влияние условий хранения пищевого продукта - вакуумной упаковки, температуры, а так же его вида (мясной, молочный) на биологические свойства L. monocytogenes.

На усиление вирулентности и адгезивных свойств листерий оказывали влияние не только условия вакуумной упаковки, вид контаминируемого продукта, но и температурный фактор. Так у штамма листерий, выращенного на сыре «Камамбер», наблюдали усиление патогенных свойств (адгезия, вирулентность) при обеих температурах культивирования, а у штамма выращенного на мясном продукте — только при +6°С (табл. 3).

В ходе исследования установлена способность листерий к дроблению бактериальных клеток при культивировании в условиях вакуумной упаковки и температуре +6°С, что, по-видимому, обеспечивает сохранение их функциональной полноценности.

Культивирование листерий в условиях вакуумной упаковки и низкой температуры, независимо от штамма и вида пищевого продукта, способствовало появлению капсулы.

Таблица 3

Биологические свойства L. monocytogenes при культивировании на пищевых продуктах в условиях вакуумной упаковки при б'С и 22°С.

\ Штамм VIMVF-I32 V1MVF-280

К1 К1 В1 В1 К2 К2 В2 В2

б'С 22'С б'С 22'С б'С 22*С б'С 22'С

Сосиска Сыр

Тест «Молочная» «Камамбер»

Подвиж- +37'С - - - - - - - -

ность Ш'С + + + - + + - -

Лецитиназа + + + - + + + -

Гемолиз + + + - + + + -

Адгезия 5,31 3,81 6,07 5,14 3,96 3,4 5,31 5,14

(ИАМ) в/а с/а в/а в/а с/а с/а в/а в/а

LD» 2,5х 2,3х 6,3 х 6,3х 1,5х 6,2х 3,9х 3,6х

104 104 10J 106 10s Ю4 10J 10J

Примечание: (с/а) - среднеадгезивные; (в/а) - высокоадгезивные; К1 б'С ,К2 6°С (контроль 1) -культуры листерий, выращенные на КД - агаре с глюкозой при +6°С; K1 22'С, К2 22'С (контроль 2) - культуры листерий, выращенные на КД - агаре при +22'С; В1 б'С, В2 б'С -культуры листерий, выращенные на продукте в вакуумной упаковке при +6'С; В1 22'С, В2 22'С - культуры листерий, выращенные на продукте в вакуумной упаковке при +22*С; п=5.

Таким образом, действие низкой температуры, вакуумной упаковки и вида пищевого продукта приводило к формированию соответствующих субпопуляций листерий, наиболее адекватных к условиям среды обитания. Полученные изменения носили фенотипический характер и являлись обратимыми при благоприятных условиях, что необходимо учитывать при выделении и идентификации L. monocytogenes из пищевых продуктов.

Глава 5. Влияние сапрофитных бакггерий, контаминирующих пищевые, продукты на репродуктивные и биологические свойства Listeria monocytogenes

Известно, что существование микроорганизмов в любой среде обитания определяется взаимным влиянием членов бактериального сообщества. При этом экзометаболиты сапрофитных бактерий могут оказывать стимулирующее действие на репродуктивные свойства условно патогенных или патогенных бактерий. Подобное влияние экзометаболитов сапрофитных микроорганизмов на размножение листерий было показано в бактериальных сообществах почв (Сидоренко, 2003).

Для выяснения этого вопроса, методом прямого смыва с поверхности пищевых продуктов получили 67 культур сапрофитных микроорганизмов.

Способность экзометаболитов данных бактерий стимулировать рост и размножение листерий при температурах +22°С и +6°С определяли скрининговым методом Л. С. Тирранен (1980). В результате были отобраны два изолята (№7 и №8), смытые с поверхности сыра «Российского» и стимулирующие размножение листерий при +6°С (рис. 2).

Рис. 2. Стимуляция роста штаммов L. monocytogenes экзометаболитами изолята №7 при +6"С: ! - стимуляция роста листерий; 2 - отсутствие стимуляции роста листерий.

Методом фильтрации получили экзометаболиты выделенных культур №7 и №8 в стадии активного роста, которые были использованы в качестве сред для культивирования листерий. Экспериментально подтвердили, что численность листерий под влиянием полученных экзометаболитов достоверно отличалась

Время исследования, сутки

Рис. 3. Динамика численности культуры L. monocytogenes (штамм NCTC10527) в присутствии экзометаболитов сапрофитных микроорганизмов при +22°С: 1 - рост L. monocytogenes в присутствии экзометаболитов изолята №7; 2 - рост L. monocytogenes в присутствии экзометаболитов изолята №8; 3 - рост L. monocytogenes без добавления метаболитов (контроль); п = 5.

Далее была исследована способность экзометаболитов бактерий (штаммов №7 и №8) реверсировать некультивируемые формы листерий в пролиферативное состояние. Для этого были получены некультивируемые формы листерий, как указано в главе «Материалы и методы», к которым были добавлены экзометаболиты сапрофитных изолятов. Культивирование проводили в течение суток при +22°С. В результате установлено, что только экзометаболиты изолята

№7 способствовали переходу некультивируемых форм листерий в культивируемое состояние с восстановлением их вегетативного роста. Последующая идентификация штамма №7 позволила отнести его к бактериям рода Bacillus (Берджи, 1997).

Показано, что экзометаболиты Bacillus spp. влияли на экспрессию биологических свойств листерий, что выражалось изменением морфологии колоний (рис. 4).

1 2

Рис. 4. Морфологические изменения колоний некультивируемого штамма L. monocytogenes NCTC 10527, реверсированного экзометаболитами изолята Bacillus spp., выделенного с 'поверхности сыра «Российский»: 1 - опыт; 2 - контроль.

Анализ биологических свойств восстановленных клеток L. monocytogenes (показал уменьшение ферментативной активности, замедленное продуцирование лецитиназы, значительное снижение вирулентности и адгезивной способности, появление подвижности при +37°С, усиление гемолитической активности (табл. 4).

Таблица 4

Биологические свойства штамма L. monocytogenes NCTC 10527, индуцированного в пролиферативное состояние метаболитами Bacillus spp.

Тест Контроль Опыт

L(+) рамноза + -

D(+) ксилоза - -

Манноза + -

Маннит - -

Подвижность +22°С + +

+37°С - +

Лецитиназа + +*

Гемолиз + +

Адгезия 5,14 в/а 1,65 н/а

LDso 2,5x10" 6,8x10'

Примечание: (+*) - индукция лецитиназы на 5-е сутки; (н/а) - низкоадгезивный; (в/а) -

высокоадгезивный.

Все изменения носили фенотипический характер, так как после 5 пассажа на питательных средах наблюдали восстановление первоначальных свойств исследуемого штамма листерий.

Таким образом, влияние экзометаболитов Bacillus spp. на L. monocytogenes выявило способность вызывать реверсию в культивируемое состояние некультивируемых форм патогенного микроба с проявлением у него дополнительных признаков изменчивости.

Возможность реверсировать некультивируемые формы листерий с помощью полученных экзометаболитов бактерий применили в диагностических целях при исследовании пищевых продуктов на присутствие возбудителя. Для этого исследовали 50 образцов пищевых продуктов бактериологическими (стандартные среды, рекомендованные МУК 4.2.1122 - 02 и ГОСТ Р 51921-2002) и генетическими (ПЦР) методами. Бактериологические методы не дали положительных результатов, однако применение ПЦР-метода выявило 8 образцов продуктов, контаминированных L. monocytogenes.

Добавление экзометаболитов Bacillus spp., к стандартным средам накопления, привело к оживлению некультивируемых форм листерий, что позволило регистрировать колонии бактерий на плотных питательных средах (рис. 5). Новый способ реверсии некультивируемых форм L. monocytogenes в пролиферативное состояние с использованием метаболитов бактерий рода Bacillus является основой для создания листериозного диагностикума.

Триптиказо — соевый бульон + продукт

Бульон Фрайзера I- продукт

I I I

Нет роста Рост L. monocytogenes Нет роста

Рис. 5 Схема эксперимента по восстановительному культивированию штаммов L. monocytogenes экзометаболитами Bacillus spp., выделенного с поверхности сыра «Российский»

Установленное влияние экзометаболитов сапрофитных бактерий может реализовываться в бактериальных сообществах биопленок, так как некультивируемые формы листерий способны существовать в данных структурах (Смирнова и др., 2010; Min Seok Chae, 1999). Возможность формирования биопленок испытуемыми штаммами листерий и бацилл в ассоциации на неорганическом материале изучили экспериментально.

На первом этапе провели сравнительное исследование и установили, что штаммы листерий, используемые в работе, формировали биопленки в монокультуре на неорганическом материале (стекло). Хорошо сформированные биопленки фиксировали через 72 часа инкубации. При этом различия в скорости ^гезии L. monocytogenes и площадях образованных биопленок не наблюдали (рис. 6).

1 2 3

Рис. 6. Биопленка, образованная штаммом L. monocytogenes V1MVF-280 на поверхности стекла: 1 - 24ч инкубации; 2 - 48 ч инкубации; 3 - 72 ч инкубации.

В результате дальнейшего изучения была доказана способность формирования биопленок исследуемыми штаммами L. monocytogenes и Bacillus ррр. в ассоциации (рис. 7). При этом отмечена стимуляция процесса адгезии ^истерий на поверхность стекла. Жизнеспособность исследуемых бактерий в биопленке была подтверждена бактериологическими методами.

1 2 |эис. 7. Биопленка, образованная штаммом L. monocytogenes NCTC10527 в ассоциации с бактериями рода Bacillus на стекле: 1 - ассоциация бактерий в биопленке (48 ч инкубации); ¡S - поверхность биопленки (72 ч инкубации, стрелками указаны разрывы мембраны)

I Принимая во внимание всю совокупность полученных данных можно

заключить, что образование ассоциации L. monocytogenes и Bacillus spp., в

которой складываются определенные взаимоотношения, регулируемые

посредством экзометаболитов бацилл, может играть важную роль при возникновении и распространении пищевого листериоза.

Проведенные исследования расширили представления о многообразии физиологических реакций, используемых патогенными листериями при адаптации к различным условиям существования. Изменение динамики численности культур L. monocytogenes и значительная изменчивость их биологических и патогенных свойств, позволили выявить роль некоторых абиотических и биотических факторов в реализации стратегий их существования на пищевых продуктах, что диктует особый подход к выделению и идентификации штаммов листерий «пищевого» происхождения. Для этого необходимо совершенствовать лабораторную диагностику, в том числе и методы экспресс-контроля листерий в продуктах питания, пищевом сырье и объектах производства, позволяющие выявить эпидемиологически опасные штаммы возбудителя.

ВЫВОДЫ

1. Численность жизнеспособных клеток L. monocytogenes на пищевых субстратах при низкой температуре (+6°С) достоверно ниже, чем при +22°С, однако низкая температура культивирования способствует усилению патогенных свойств листерий, независимо от вида пищевого субстрата.

2. Сравнительные исследования показали, что численность листерий при периодическом культивировании варьировала в зависимости от вида пищевого субстрата По скорости достижения М-концентрации листерий на пищевых продуктах, последние можно расположить в следующем порядке: молочные - 1820 ч; мясные 2-5 суток; морские - 6 суток.

3. Вид пищевого субстрата оказывает влияние на изменение биологических свойств L. monocytogenes. В зависимости от штамма бактерий и вида субстрата реализуются разные механизмы проявления факторов патогенности: на молочных продуктах - за счет расширения спектра ферментов, разлагающих субстрат, а на мясных продуктах - за счет усиления адгезивных свойств листерий.

4. Условия хранения пищевых продуктов оказывают влияние на изменение биологических свойств, контаминирующих их листерий. Независимо от температуры культивирования и вида продукта, условия вакуумной упаковки достоверно повышали адгезивные свойства L. monocytogenes. Сочетанное действие вакуумной упаковки и низкой температуры (+6°С) способствовало формированию у листерий капсулы.

5. Экзометаболиты Bacillus spp., контаминирующих пищевые продукты, оказывают стимулирующее влияние на рост и размножение ассоциированных с ними L. monocytogenes и способствуют реверсии некультивируемых форм листерий в пролиферативное состояние.

6. Подтверждена способность штаммов L. monocytogenes (VIMVF-280; NCTC10527) и Bacillus spp. формировать биопленки в консорциуме на неорганическом субстрате. Ассоциация исследуемых бактерий стимулирует процесс адгезии листерий на стеклянной поверхности.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

Статьи, опубликованные в ведущих рецензируемых научных журналах 1. Цветкова Н.Б., Бузолева Л.С. Влияние условий храпения пищевых продуктов на патогенные свойства Listeria monocytogenes // Дальневосточный журнал инфекционной патологии. 2010. №17. С. 211-215.

Цветкова Н.Б., Бузолева Л.С. Влияние условий хранения на изменение биологических свойств Listeria monocytogenes, контаминирующих пищевые продукты // Тихоокеанский медицинский журнал 2010. №4. С. 30-33.

Статьи, опубликованные в других периодических изданиях Цветкова Н.Б., Бузолева Л.С. Изменчивость биологических свойств Listeria monocytogenes под действием абиотических факторов при культивировании на пищевых продуктах // Актуальные проблемы природной очаговости болезней. 2009. №11. С. 135-136. Цветкова Н.Б., Бузолева Л.С. Размножение Listeria monocytogenes на пищевых продуктах //Журнал инфекционной патологии. 2010. №3(17). С. 153-154.

Работы, опубликованные в материалах научных конференций

Цветкова Н.Б., Бузолева Л.С. Активность размножения бактерий Listeria monocytogenes в зависимости от сроков хранения при разных температурах // Проблемы современной эпидемиологии. Перспективные средства и методы лабораторной диагностики и профилактика актуальных инфекций: материалы Всероссийской научной конференции, 19-20 ноября, 2009 г. - СПб: Изд-во ВМА им. Кирова С. 215-216.

Tsvetkova N.B., Buzoleva L.S. Bacteriological study of Listeria monocytogenes of food // Femily health in the XXI century. Papers of the XIII International Scientific Conference. Hurghada-Perm, 2009. P. 401-402.

Цветкова Н.Б., Бузолева Л.С. Изменчивость биологических свойств Listeria monocytogenes под воздействием абиотических факторов при культивировании на пищевых продуктах // Перспективы развития инноваций в биологии: материалы Всероссийской Научной Школы для молодежи, 2010 г. / Дальневост. Федер. ун-т,- Владивосток, 2010. С. 57-60. Цветкова Н.Б., Бузолева Л.С. Диагностика Listeria monocytogenes в сельскохозяйственной продукции для предупреждения экономического ущерба при ее реализации // Инновации в биологии для развития биоиндустрии сельскохозяйственной продукции: материалы Всероссийской Научной Школы для молодежи, 18-25 октября 2010 г. / Дальневост. Федер. ун-т,- Владивосток, 2010. С. 61-64.

Цветкова Н.Б., Бузолева Л.С. Влияние биотических факторов на пролиферативные и биологические свойства Listeria monocytogenes при культивировании на пищевых продуктах // Развитие исследований и надзора за инфекционными заболеваниями: материалы Международной конференции 18-20 мая, 2010 г. - СПб: Изд-во науч.-исслед. инст. им. Пастера. Разд. Кишечные инфекции. С. 109-110.

10. Цветкова Н.Б., Бузолева Л.С. Влияние биотических факторов на репродуктивные и биологические свойства Listeria monocytogenes при культивировании на пищевых продуктах // Актуальные проблемы экологии, морской биологии и биотехнологии: материалы IX региональной конференции студентов, аспирантов вузов и научных организаций Дальнего Востока России 14-17 апреля, 2010г. - Владивосток: Изд-во Дальневост. ун-та, 2010. С. 209-210.

11. Цветкова Н.Б., Бузолева Л.С. Влияние абиотических факторов на патогенные свойства Listeria monocytogenes, культивируемых на пищевых продуктах // Достижения науки и практики в обеспечении санитарно-эпидемиологического благополучия Вооруженных сил Российской Федерации: труды III съезда военных врачей медико-профилактического профиля Вооруженных сил Российской Федерации, 8-10 декабря, 2010 г. - СПб: Изд-во ВМА им. Кирова. Раздел 3. С. 222-223.

Цветкова Наталья Борисовна

ВЛИЯНИЕ ФАКТОРОВ СРЕДЫ НА БИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА LISTERIA MONOCYTOGENES, КОНТАМИНИРУЮЩЕЙ ПИЩЕВЫЕ ПРОДУКТЫ

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Формат 60 х 84/16 Заказ №452

Уч. изд. л. 1,0 Тираж 100 экз.

Отпечатано в типографии РПК МГУ им. адм. Г.И. Невельского 690059 г. Владивосток, ул. Верхнепортовая, 50а

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Цветкова, Наталья Борисовна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ) ВЛИЯНИЕ ЭКОЛОГИЧЕСКИХ ФАКТОРОВ СРЕДЫ НА БИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА LISTERIA MONOCYTOGENES, КОНТАМИНИРУЮЩЕЙ ПИЩЕВЫЕ ПРОДУКТЫ

1.1. Listeria monocytogenes, как возбудитель инфекционных заболеваний с пищевым путем передачи.

1.1.1. Особенности лабораторной диагностики листериоза.

1.1.2. Значение пищевых продуктов, контаминированных

L. monocytogenes, припередаче листериозной инфекции

1.2. Влияние абиотических факторов среды обитания на изменение биологических и патогенных свойств L. monocytogenes

1.3. Формы адаптации L. monocytogenes к неблагоприятным условиям среды обитания

1.3.1. Некультивируемое состояние листерий, как форма изменчивости в неблагоприятных условиях среды обитания

1.3.2. Способность к образованию биопленок, как адаптивная стратегия выживания L. monocytogenes во внешней среде

1.4. Влияние сапрофитной микрофлоры, контаминирующей пищевые продукты на размножение L. monocytogenes

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ 47 2.1. Материалы

2.1.1. Штаммы L. monocytogenes, использованные в работе

2.1.2. Животные

2.1.3. Пищевые продукты

2.1.4. Среды для культивирования и идентификации микроорганизмов

2.1.5. Использованная аппаратура 51 2.2. Методы исследования

2.2.1. Микробиологическиеметоды

2.2.2. Методы определения вирулентности на биологических моделях

2.2.3. Методы изучения кинетики роста

2.2.4. Методы изучения метаболической активности бактерий

2.2.5. Получение некультивируемых клеток L. monocytogenes

2.2.6. Методы исследования биопленок

2.2.7. Молекулярно-генетические методы

2.2.8. Статистические методы

ГЛАВА 3. ВЛИЯНИЕ ФАКТОРОВ СРЕДЫ НА РОСТ И РАЗМНОЖЕНИЕ LISTERIA MONOCYTOGENES НА ПИЩЕВЫХ СУБСТРАТАХ

3.1. Создание модели для изучения влияния абиотических факторов среды на размножение L. monocytogenes, контаминирующих пищевые продукты

3.2. Влияние температуры на пролиферативные свойства

L. monocytogenes, контаминирующих пищевые продукты

3.3. Сравнительная характеристика динамики размножения

L. monocytogenes на разных пищевых субстратах

3.3.1. Морепродукты

3.3.2. Молочные продукты

3.3.3. Мясные продукты

ГЛАВА 4. ИЗМЕНЕНИЕ БИОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ LISTERIA MONOCYTOGENES, КОНТАМИНИРУЮЩЕЙ ПИЩЕВЫЕ ПРОДУКЫ ПРИ РАЗНЫХ УСЛОВИЯХ ХРАНЕНИЯ 74 4.1. Влияние температуры и вида пищевого субстрата на изменение 74 биологических и патогенных свойств L. monocytogenes

4.2. Влияние вакуумной упаковки и температуры хранения пищевых продуктов на патогенные свойства L. monocytogenes

ГЛАВА 5. ВЛИЯНИЕ САПРОФИТНЫХ БАКТЕРИЙ,

КОНТАМИНИРУЮЩИХ ПИЩЕВЫЕ ПРОДУКТЫ, НА РЕПРОДУКТИВНЫЕ И БИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА LISTERIA MONOCYTOGENES

5.1. Влияние летучих метаболитов сапрофитных бактерий пищевых продуктов на репродуктивные свойства L. monocytogenes, при разных температурах культивирования

5.1.1. Исследование влияния летучих экзометаболитов сапрофитных бактерий, обсеменяющих пищевые продукты, на размножение

L. monocytogenes

5.1.2. Исследование способности экзометаболитов сапрофитных бактерий индуцировать реверсию некультивируемых форм

L. monocytogenes

5.1.3. Экспериментальное исследование способности метаболитов Bacillus spp. индуцировать реверсию некультивируемых форм листерий, обитающих в пищевых продуктах

5.2. Исследование формирования биопленок L. monocytogenes в ассоциации с бактериями рода Bacillus

5.2.1. Образование биопленок L. monocytogenes в монокультуре

5.2.2. Образование биопленок L. monocytogenes в ассоциации с Bacillus spp.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Влияние факторов среды на биологические свойства Listeria Monocytogenes, контаминирующей пищевые продукты"

Актуальность проблемы.

В условиях высокого антропогенного загрязнения окружающей среды, а также роста иммунодефицита у населения, резко обострилась проблема пищевых инфекций человека. В 80-х гг. XX столетия в пятерку наиболее опасных пищевых бактериальных инфекций вошел листериоз (Liston, 1990). Алиментарный путь передачи возбудителя, эпидемический характер заболевания, полиморфизм клинических проявлений, тяжесть течения, высокий уровень летальности (24 - 40%) (Mead et al., 1999; Farber, Peterkin, 2000; Wagner et al., 2005) явились основанием для разработки мер профилактики, связанных, в первую очередь, с контролем безопасности пищевых продуктов.

В. настоящее время не вызывает сомнение, что готовая продукция пищевой индустрии играет ведущую роль в возникновении и распространении листериозной инфекции (Тартаковский и др., 2002; Колбасов и др., 2006; Nakamura, 2004; Karakolev, 2009). Так, спорадические случаи и эпидемические вспышки пищевого листериоза последнего десятилетия, прежде всего, связывают с употреблением готовых молочных, мясных, рыбных продуктов, в которых листерии размножаются и накапливаются в значительных количествах, поддерживая высокую степень вирулентности (Mead et al., 1999; Slutsker et al., 2000; Schaffner, 2004; Mengesha et al., 2009). Эпидемиологический анализ, выявляющий доминирующую роль определенного продукта при распространении инфекции, не дает возможности определить механизмы регуляции численности и патогенный потенциал листерий, обсеменяющих пищевые продукты, под воздействием экологических факторов среды.

Исключительно широкие адаптивные способности внеорганизменных популяций L. monocytogenes, позволяющие им существовать в почве, воде, растениях, простейших (Литвин и др., 1998; Сомов, Бузолева, Зайцева, 2000; Wemekamp - Kamphuis et al. 2004), обусловлены изменчивостью их биологических свойств под действием факторов среды обитания, что описано рядом исследователей (Сидоренко и др., 2003; Терехова, 2003; Сомов, Бузолева, 2004). Только в единичных публикациях сообщается о влиянии абиотических факторов среды на изменение патогенных свойств L. monocytogenes, контаминирующей пищевые продукты (Conte et al., 2000). При этом изменение биологических свойств возбудителя исследовалось либо на отдельных видах продуктов (Midelet-Bourdin et al., 2006), либо под воздействием определенного экологического фактора, чаще всего температуры или рН (Зайцева, 2006).

В пищевых продуктах, как и в любой среде обитания, на свойства и численность возбудителя оказывают влияние и биотические факторы. Контаминируя пищевые продукты, листерии образуют сложные сообщества с обитающей на них сапрофитной микрофлорой, взаимодействия в которых осуществляются с помощью различных механизмов. Известно, что в почвенных и водных биоценозах регуляция численности L. monocytogenes может осуществляться посредством экзогенных метаболитов бактерий, стимулирующих их размножение (Тирранен, 1989; Сидоренко, 2001; Бухарин и др., 2003). Однако стимулирующее воздействие экзометаболитов сапрофитных бактерий микробных сообществ, обитающих в пищевых продуктах, на репродуктивные и биологические свойства листерий -практически не изучены, и к началу наших исследований эти вопросы в литературе почти не освещались.

Таким образом, комплексные исследования, учитывающие влияние как абиотических, так и биотических факторов среды на размножение и биологические свойства листерий, обсеменяющих пищевые продукты, не проводились.

В связи с этим цель исследования: изучить влияние различных факторов среды (температура, пищевой субстрат, вакуумная упаковка, метаболиты сапрофитных бактерий, ассоциированных с листериями) на размножение и биологические свойства L. monocytogenes при культивировании на пищевых продуктах.

Задачи исследования:

4. Исследовать способность образования биопленок на неорганическом материале сообществом культур L. monocytogenes и Bacillus spp.

Научная новизна работы. Впервые проведены комплексные исследования влияния факторов среды на размножение и биологические свойства L. monocytogenes, контаминирующей пищевые продукты и выявлены наиболее значимые из них. Показаны механизмы, ускоряющие размножение листерий на пищевых продуктах и усиливающие их патогенные свойства. Показано, что хранение пищевых продуктов в вакуумной упаковке при низкой температуре способствует повышению вирулентности L. monocytogenes. Впервые установлено стимулирующее влияние метаболитов сапрофитных бактерий на репродуктивную активность L. monocytogenes, обсеменяющей пищевые продукты.

Апробация работы. Материалы диссертационной работы были представлены на: Всероссийской научной конференции «Проблемы современной эпидемиологии. Перспективные средства и методы лабораторной диагностики и профилактика актуальных инфекций» (Санкт-Петербург, 2009); Всероссийской конференции, посвященной 70-летию теории академика Е. Н. Павловского о природной очаговости болезней (Омск, 2009); международной конференции «Развитие исследований и надзора за инфекционными заболеваниями» (Санкт-Петербург, 2010); IX региональной конференции студентов, аспирантов вузов и научных организаций Дальнего Востока России «Актуальные проблемы экологии, морской биологии и биотехнологии» (Владивосток, 2010); Всероссийской научной школе для молодежи «Перспективы развития инноваций в биологии» (Владивосток, 2010); конференции с международным участием «Этиологические, эпидемиологические и клинические аспекты инфекционных болезней» (К 90-летию кафедры микробиологии, вирусологии и иммунологии ИГМУ) (Иркутск, 2010); IV региональной научно-практической конференции «Актуальные вопросы инфекционной патологии на Дальнем Востоке Российской Федерации», посвященной 85-летию ФГУН (Хабаровск, 2010);. III съезде, военных врачей медико-профилактического профиля Вооруженных сил Российской Федерации- (ВВМПП) «Достижения, науки и практики в обеспечении санитарно-эпидемиологического благополучия Вооруженных сил Российской Федерации» (Санкт-Петербург, 2010); V региональной научно-практической конференции «Инфекционная патология в Приморском крае» (Владивосток, 2010); Всероссийской научной школе для молодежи «Инновации в биологии для развития биоиндустрии, сельскохозяйственной продукции» (Владивосток, 2010).

По теме диссертации опубликовано 11 работ, из них 2 статьи в журналах, включенных в перечень изданий рекомендованных. ВАК Министерства образования» и науки РФ для публикации результатов, диссертационных работ.

Структура И' объем диссертации. Диссертационная работа' изложена на, 157 стр:, состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов .исследования^ трех. глав, собственных исследований, заключения, выводов, списка литературы, состоящего из 346 источников, в том числе 235 иностранных, приложения. Работа содержит 24 рисунка и 8 таблиц.

Заключение Диссертация по теме "Экология (по отраслям)", Цветкова, Наталья Борисовна

ВЫВОДЫ

2. Сравнительные исследования показали, что численность листерий при периодическом культивировании варьировала в зависимости от вида пищевого субстрата. По скорости достижения М-концентрации листерий на пищевых продуктах, последние можно расположить в следующем порядке: молочные - 18-20 ч; мясные 2-5 суток; морские — 6 суток.

3. Вид пищевого субстрата оказывает влияние на изменение биологических свойств L. monocytogenes. В зависимости от штамма бактерий и вида субстрата реализуются разные механизмы проявления факторов патогенности: на молочных продуктах — за счет расширения спектра ферментов, разлагающих субстрат, а на мясных продуктах — за счет усиления адгезивных свойств листерий.

4. Условия хранения пищевых продуктов оказывают влияние на изменение биологических свойств, контаминирующих их листерий. Независимо от температуры культивирования и вида продукта, условия вакуумной упаковки достоверно повышали адгезивные свойства L. monocytogenes. Сочетанное действие вакуумной упаковки и низкой температуры (+6°С) способствовало- формированию у листерий капсулы.

6. Подтверждена способность штаммов L. monocytogenes (VIMVF-280; NCTC10527) и Bacillus spp. формировать биопленки в сообществе на неорганическом субстрате. Ассоциация исследуемых бактерий стимулирует процесс адгезии листерий на стеклянной поверхности.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Проблема листериоза, тяжелого инфекционного заболевания, вызываемого Listeria monocytogenes, остается актуальной и привлекает особое внимание исследователей. В настоящее время не вызывает сомнение, что основными факторами передачи патогенных листерий является готовая продукция пищевой индустрии, а ведущую роль в возникновении и распространении листериозных инфекций играют мясные, молочные и морепродукты, что подтверждается многочисленными эпидемиологическими данными (Мухина, Дмитриева, 2002; Тартаковский и др., 2002; Федянина, Зайцева, 2006; Колбасов и др., 2006; Nakamura, 2004; Wagner et al.; 2005; Mengesha et al., 2009; Karakolev, 2009).

Несмотря на профилактические меры и усиление эпидемиологического контроля, в последние десятилетия наблюдается увеличение вспышек и спорадических случаев пищевой листериозной инфекции в ряде европейских стран (Тартаковский и др., 2002; Подунова и др., 2000; Опочинский, 2001; Farber et al., 1991; Schuchat et al., 1991; Vazquez-Boland et al., 2001). В этой связи проводится всестороннее изучение возбудителя. Основные направления этих исследований касаются: эпидемиологии (Родина, Маненкова, 2002; Зайцева, Сомов, 2006; Gillespie, McLauchlin, 2006; Doorduyh et al., 2007), методов выделения и идентификации (Зайцева, 2010; Schindler, Shelef, 2006), факторов патогенности (Карпова и др., 2001; Тартаковский и др., 2003; Зайцева, Сомов, 2006), генетики (Карпова и др., 2005; Vallenhofer-Schrumpf et al., 2006). В меньшей степени изучается влияние абиотических факторов различных сред обитания (почва, вода, простейшие) на биологические и патогенные свойства внеорганизменных популяций листерий (Сидоренко, 2003; Терехова, 2003; Сомов, Бузолева, 2004). При этом практически не встречаются работы, посвященные изучению влияния факторов среды на численность и биологические свойства листерий, контаминирующих пищевые продукты. Для выяснения этих принципиально важных вопросов необходимы экспериментальные исследования.

Следует отметить, что такие единичные попытки предпринимались. Например, G. Midelet-Bourdin с соавторами (2006) культивировали листерии на отдельных видах пищевых продуктов при +37°С и изучали изменение адгезии к клеткам аденокарциномы человека (НТ-29), исходя из чего был сделан вывод, что рыбный экстракт усиливал адгезивные свойства листерий по сравнению с мясным. При этом не изучались другие факторы патогенности листерий. Более детальное изучение изменчивости патогенных свойств L. monocytogenes под действием абиотических факторов среды (температура, рН) проведено Е. А. Зайцевой (2006, 2010). Однако пищевые продукты при этом не использовались, а все исследования проводились на питательных средах.

Рассматривая пищевые продукты как среду обитания L. monocytogenes можно предположить, что на пролиферативные свойства и биологию возбудителя могут оказывать влияние, как абиотические факторы, так и взаимоотношения с сапрофитной микрофлорой, контаминирующей пищевые продукты, неизбежно возникающие в смешанных бактериологических сообществах. Что касается биотических факторов, то в доступной нам литературе была найдена только одна экспериментальная работа, в которой было показано, что изменение патогенного потенциала листерий может происходить при их совместном обитании в почве с инфузориями Tetrahymena pyriformis (Пушкарева и др., 2008). В отношении пищевых продуктов такие исследования не проводились.

Все вышесказанное вызвало необходимость изучения количественных и качественных изменений L. monocytogenes, контаминирующих пищевые продукты, под воздействием экологических факторов среды, чему была посвящена настоящая работа.

На первом этапе исследований нами экспериментально была подобрана модель, при создании которой использовался широкий спектр пищевых продуктов (факторов передачи возбудителя), взятых в различных концентрациях для приготовления питательных сред. Полученная модель использовалась при дальнейшем изучении динамики численности листерий и их биологических свойств на мясных, молочных и морских продуктах.

В ходе наших исследований было установлено, что вид питательного субстрата является фактором, регулирующим численность L. monocytogenes и, при этом, неоднозначно влияющим на рост и размножение бактерий. Отмечено, что интенсивнее всего листерии размножались на субстратах с молочными продуктами, достигая максимальной численности (109 КОЕ/ мл) уже после 18-20 ч инкубации. Активно размножались листерии и на субстратах с мясными продуктами, достигая практически такой же М-концентрации, на 2-5 сутки исследования. Медленнее всего L. monocytogenes размножались на субстратах с морепродуктами, достигая максимальной концентрации только к 6 суткам эксперимента. Полученные результаты могут иметь эпидемиологическую значимость с целью предупреждения распространения инфекции.

Необходимо отметить, что периодическое культивирование L. monocytogenes на всех исследуемых субстратах исключало фазу адаптации. Следовательно, используемые питательные среды являлись оптимальными для роста и размножения патогенных листерий. Однако, сравнительные исследования показали, что, листерии предпочтительнее размножались на готовых пищевых продуктах, чем на сырых. По данным литературы чаще всего листерии также выделяли из полуфабрикатов, ферментативно и термически обработанных продуктов (Johansson et al., 1999; Autio et al., 1999; Walter et al., 2000; Vazquez-Boland et al., 2001).

На следующем этапе наших исследований мы изучали влияние условий хранения пищевых продуктов на размножение и патогенные свойства листерий. Полученные результаты позволили сделать заключение, что хранение пищевых продуктов, инфицированных листериями, при комнатной температуре (+22°С) приводило к увеличению численности бактерий, что не наблюдалось в условиях холодильника (+6°С). Однако, рассматривая влияние температурного фактора на биологию листерозного микроба, мы увидели, что низкая температура хранения повышала вирулентность бактерий. По мнению ряда авторов, даже небольшая концентрация возбудителя при высокой вирулентности может способствовать возникновению инфекционного процесса (Тартаковский, 2002; Сомов, Бузолева, 2004).

Проведенные исследования позволили установить, что в зависимости от вида субстрата и штамма, реализуются разные механизмы проявления факторов патогенности. Так, исходя из наших данных, усиление патогенного потенциала листерий, обитающих на сырном субстрате, происходило за счет расширения спектра ферментов, разлагающих пищевой субстрат. Подобные изменения биохимической активности ранее были установлены для внеорганизменных популяций листерий, длительно обитающих в- почвах и морской воде (Сидоренко, 2003; Терехова, 2003; Сомов, Бузолева, 2004):

Изменение патогенных свойств у штамма L. monocytogenes, выращенного на субстрате с мясным продуктом, было обусловлено, в первую очередь, увеличением адгезивной способности и вирулентности. Показано, что усилению патогенных свойств листерий, независимо от субстрата и штамма, способствовала низкая температура культивирования.

Из литературных источников известно, что вакуум может оказывать влияние на патогенный потенциал листерий. Так, исследования М. P. Conte с соавторами (1996, 2000) показали, что ограниченное содержание кислорода в среде усиливало инвазивность листерий в клетки культуры Сасо-2, стимулируя экспрессию генов, отвечающих за синтез интерналинов и ActA. Поэтому, для дальнейших исследований нами была создана экспериментальная модель, позволяющая изучить влияние вакуумной упаковки, температуры хранения и вида пищевого субстрата на биологические и патогенные свойства L. monocytogenes, контаминирующих пищевые продукты.

Было установлено, что сочетанное действие вакуумной упаковки и низкой температуры хранения явилось сигналом к перестройке метаболических процессов, изменению морфологии бактериальных клеток и усилению патогенных свойств листерий. Такие условия хранения стимулировали у L. monocytogenes процесс капсулообразования, что являлось механизмом адаптивной изменчивости листерий к данным условиям существования.

Таким образом, сочетанное действие низкой температуры, вакуумной упаковки и определенного пищевого продукта приводило к формированию соответствующих субпопуляций микроорганизмов, наиболее адекватных к обитанию в данных условиях. Полученные изменения носили фенотипический характер, являлись обратимыми при благоприятных условиях, что необходимо учитывать при выделении и идентификации листерий из пищевых продуктов.

Известно, что существование микроорганизмов в той или иной среде обитания определяется не только абиотическими условиями, но и взаимным влиянием членов бактериального сообщества, которое может осуществляться посредством выделяемых ими газообразных веществ (Тирранен, 1980). Такие исследования проводились М. JI. Сидоренко и JI. С. Бузолевой (2004) на примере почвенных бактерий, оказывающих стимулирующее влияние на размножение L. monocytogenes.

В большинстве работ современных исследователей изучено ингибирующее действие метаболитов бактерий на рост и размножение L. monocytogenes (Семенихина и др., 2004; Aslim et al., 2004; Brillet, 2004; Alves, 2005). В наших исследованиях, в результате оценки взаимодействия микроорганизмов через продуцируемые летучие метаболиты (метод

JI. С. Тирранен, 1980), впервые было установлено, что бактерии рода Bacillus, обсеменяющие пищевые продукты, оказывали стимулирующее влияние на пролиферативные свойства L. monocytogenes. Известно, что Bacillus spp. относятся к убиквитарным микроорганизмам и являются частыми представителями микробных сообществ пищевых продуктов (Bassam et al., 2009). Способность к спорообразованию способствует сохранению их жизнеспособности при температурной обработке продуктов питания, что повышает вероятность контакта с листериями, контаминирующими пищевые продукты.

Одним из известных механизмов адаптации L. monocytogenes при существовании в объектах окружающей среды является способность длительного пребывания в некультивируемом состоянии (Пушкарева и др., 1997; Литвин и др., 1998; Colwell et al., 1985; Besnard et al., 2002). Ha сегодняшний день доказано, что реверсия листерий в пролиферативное состояние может происходить под воздействием химических и физических индукторов реверсии (Pitonzo, 1999; Cappelier et al., 2005). Однако из данных литературы известны факты перехода некультивируемых форм некоторых видов бактерий в пролиферативное состояние при участии экзогенных факторов, выделяемых этими же микроорганизмами (Шлеева и др., 2003; Mukamolova et al., 1998). Совместное культивирование D. vanriji и Bacillus spp. при различных температурных условиях приводило к стимуляции роста клеток дрожжей посредством внеклеточного фактора, выделяемого Bacillus spp. в культуральную жидкость (Бухарин и др., 2003). В экспериментах М. Steinert с соавторами (1997) показано, что восстановление пролиферации у некультивируемых форм Legionella pneumophill происходило только при совместном культивировании с клетками амебы Acanthamoeba castellani. В этой связи, нас интересовала возможность реверсии некультивируемых форм L. monocytogenes под влиянием экзометаболитов бактерий рода Bacillus.

В ходе наших исследований впервые было установлено, что воздействие экзометаболитов Bacillus spp. приводило к восстановлению пролиферации некультивируемых форм листерий. При этом отмечалось влияние на биологические свойства реверсированного штамма, что выражалось изменением морфологии колоний, снижением биохимической активности бактериальных клеток и усилением индукции некоторых факторов патогенности.

В настоящий момент достоверно установлено, что клетки L. monocytogenes способны переходить в некультивируемое состояние при обитании в пищевых продуктах (Ефимочкина, 2005; Sorensen, Attfield, 2002; Vollenhofer — Schrumpf et al., 2006). При этом, присутствие некультивируемых форм листерий невозможно подтвердить стандартными бактериологическими методами, что играет определенную роль при оценке безопасности продуктов питания. Возможность реверсировать некультивируемые формы листерий с помощью полученных экзометаболитов Bacillus spp. применили в диагностических целях при исследовании пищевых продуктов на присутствие возбудителя.

Проведенные нами эксперименты показали, что использование экзометаболитов Bacillus spp., как добавки к стандартным средам накопления, рекомендованных МУК 4.2.1122 - 02 (2002) и ГОСТ Р 519212002 (2002), привело к индукции вегетативного роста L. monocytogenes, подтвержденного регистрирацией колоний бактерий' на плотных питательных средах. Полученные результаты были использованы для разработки диагностикума, позволяющего выделять листерии, пребывающие в некультивируемом состоянии в пищевых продуктах.

На сегодняшний день достоверно показана возможность образования и сохранения некультивируемых форм листерий в составе биопленок (Смирнова и др., 2010; Min Seok Chae, 1999), которые являются основными формами существования бактериальных сообществ в изменяющихся условиях среды обитания (Смирнова и др., 2010; Min Seok Chae; 1999; Ghannoum, О Tool, 2004; Mai, Conner, 2007). Следовательно, установленное нами влияние экзометаболитов сапрофитных бактерий рода Bacillus на размножение и пролиферативные свойства L. monocytogenes, скорее всего, может реализовываться в данных структурах. Для выяснения этого вопроса необходимо было установить возможность формирования биопленок исследуемыми культурами L. monocytogenes в сообществе с Bacillus spp., что и было подтверждено в результате проведенных исследований. При этом отмечено, что ассоциация исследуемых бактерий стимулировала процесс адгезии листерий на неорганический материал (стекло).

Принимая во внимание всю совокупность полученных данных, можно заключить, что образование биопленочного сообщества L. monocytogenes и Bacillus spp., в котором складываются определенные взаимоотношения, регулируемые посредством экзометаболитов бацилл, может играть определенную роль при возникновении и распространении пищевого листериоза.

Таким образом, проведенные исследованияфасширили представления о многообразии физиологических реакций, используемых патогенными листериями при адаптации к различным условиям существования. Изменение динамики численности культур L. monocytogenes и значительная изменчивость их биологических и патогенных свойств, позволили выявить роль некоторых абиотических и биотических факторов среды обитания в реализации стратегий их существования в пищевых продуктах. Все это диктует особый подход к выделению и идентификации штаммов листерий «пищевого» происхождения, для чего необходимо совершенствовать лабораторную диагностику, в том числе и методы экспресс-контроля листерий в продуктах, пищевом сырье и объектах производства, позволяющие выявить эпидемиологически опасные штаммы возбудителя.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Цветкова, Наталья Борисовна, Владивосток

1. Алиева, Е.В. Современное состояние изученности и лабораторной диагностики возбудителя листериоза Текст.: Обзор литературы / Е.В. Алиева, И.В Ковальчук; Ставроп. н.-и. противочум. ин-т, Ставрополь. 2006. - №24. - 63с.

2. Анализ деятельности центров Госсанэпиднадзора РФ по лабораторной диагностике листериоза Текст. / Л.Г. Подунова, А.А. Ясинский, Э.Ф. Опочинский и др. // Инф. сборник статистических и аналитических материалов. Раздел 2. Москва, 2000. - С. 12-13.

3. Ашмарин, И.П. Статистические методы в микробиологических исследованиях Текст. / И.П. Ашмарин, А.А. Воробьев М., 1982. -180с.

4. Бакулов, И.А. Бактериологический контроль пищевых продуктов на наличие листерий. Текст. / И.А Бакулов, Д.Ф. Васильев — Изд-во Ульяновской гос. сельхоз. Академии, 1999. С. 37-38.

5. Бакулов, И.А. Листериоз как пищевая инфекция. Вопросы диагностики и профилактики. Текст. / И.А Бакулов, Д.Ф. Васильев — Ульяновск, 1991. -С. 22-23.

6. Беленева, И. А. Условно-патогенные бактерии, обнаруживаемые в культивируемых мидиях Текст. / И. А. Беленева, Э.Ф. Масленникова // Журн. микробиол. 2002. - № 2. - С. 81 - 83.

7. Беленева, И.А. Психрофильность Listeria monocytogenes и ее эколого-эпидемиологическое значение Текст.: дис. .канд. биол. наук/Беленева И.А. Владивосток: Дальнаука, 1996. — С. 29-31.

8. Бузолева, Л.С. Адаптация патогенных бактерий к абиотическим факторам окружающей среды Текст. : автореф. дис. . .д-ра. биол. Наук / Бузолева Л.С. Владивосток, 2001. - С. 16-18:

9. Бузолева, JI.C. Бифазные бентонитовые среды для диагностики кишечных инфекций Текст.: автореф. дис. .канд. биол. наук / Бузолева JI.C. Владивосток, 1990. - 23 с.

10. Бузолева, JI.C. Изменчивость патогенных бактерий, обитающих в почвах Приморского края Текст. / JI.C. Бузолева., Е.А. Зайцева, Терехова В.Е. // Сб. статей, посвящ. 60-летию Приморского края. — Владивосток, 1998. -С. 32-35.

11. Бухарин, О.В. Межбактериальные взаимодействия Текст. / О.В. Бухарин, Б .Я. Усвяцов, JI.M. Хуснутдинова // Журн. микробиол. — 2003.-№4.-С. 3-8.

12. Влияние температуры на изменчивость Listeria monocytogenes при длительном обитании в проточных почвенных колонках Текст. / JI.C. Бузолева, JI.M. Исачкова, А.С. Исаченко, Г.П. Сомов // Журн. микробиологии. 2004. - №2. - С. 29 - 33.

13. Гершун, В.И. Способность листерий размножаться в растительных субстратах Текст. / В.И Гершун // Вестн. с.-х. науки Казахстана. — 1979. № 4. - С. 91- 92.

14. Гершун, В.И. Экология листерий и пути их циркуляции в природном очаге Текст. / В.И. Герпгун // Экология возбудителей сапронозов. — М.: Медицина, 1988. С. 80- 85.

15. ГОСТ Р 51921-2002 «Продукты пищевые. Методы выделения и определения бактерий Listeria monocytogenes» Текст. — Минздрав России, Москва, 2002. 23с.

16. Емельяненко, Е.Н. Некультивируемые формы иерсиний и листерий в почве и при взаимодействии с растениями Текст. : дис. .канд. биол. наук / Емельяненко Е.Н. М.: НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф. Гамалеи РАМН, 1997. - С. 123-125.

17. Ермолаева, С.А. Генетические механизмы вирулентности Listeria monocytogenes Текст. / С.А. Ермолаева // Генетика. 2001. -том 37, №3. -С. 286-293.

18. Ермолаева, С.А. Изменение уровня экспрессии факторов вирулентности Listeria monocytogenes под влиянием внешних условий Текст. / С.А. Ермолаева, Ю.Ф. Белый, И.С. Тартаковский // Мол. ген. микробиол. вирусол. 2000. - №1. - С. 17-19.

19. Зайцева Е.А. Система анализа микробиологических и молекулярно-генетических маркеров для выявления высоковирулентных штаммов Listeria monocytogenes Текст. : автореф. дис. .д-ра. мед. наук / Зайцева Е.А. М., 2010. - 47с.

20. Зайцева, Е.А. Влияние температуры на адгезивные свойства листерий Текст. / Е.А. Зайцева, Г.П. Сомов // Журн. микробиол. эпидемиол. и иммунол. 2006. - №3. - С. 20-23.

21. Зайцева, Е.А. Микробиологическая характеристика Listeria monocytogenes, изолированных из различных источников в Приморском крае Текст. / Е.А. Зайцева, Г.П. Сомов // Журн. микробиол. 2006. — №2.-С. 3-6.

22. Зайцева, Е.А. Эколого-эпидемические особенности Listeia monocytogenes в Приморском крае Текст. / Е.А. Зайцева, В.Е. Терехова // Тихоокеанский мед. журн. — 2001. №22. — С. 29-31.

23. Зеелигер, X. Листериоз Текст. / X. М. Зеелигер Сельхозиздат, 1959. -. 309 с.

24. Изменение морфологии листерий в зависимости от температуры культивирования Текст. / Л.Г. Астапович., И.А. Бакулов., В.М. Котляров. и др. // Вопр. вирусологии и микробиологии. —1966. — №2.-С. 14-17.

25. Изоляция Listeria monocytogenes из различных объектов в Приморском крае и их биологические свойства Текст. / Е.А. Зайцева, Л.С. Бузолева,

26. В.Е. Терехова и др. // Эпидемиология и инфекционные болезни. — 2002. — №21.-С. 47-49.

27. Иммунитет при листериозе Текст. / А.Д. Середа, В.М. Котляров,

28. A.А. Воробьев, И.А. Бакулов // Журн. микробиол. 2000. -№5. - С. 98-102.

29. Исаченко, А.С. Изменение ультраструктуры Yersinia pseudotuberculosis и Listeria monocytogenes как результат адаптации к различным условиям существования Текст.: автореф. дис. .канд. биол. наук / Исаченко А.С. Владивосток, 2004. — 18с.

30. Итоги пятилетнего изучения листериоза в Украине Текст. /

31. B.В. Красовский, Н.В. Васильев, Н.А. Деркач, С.И. Похил // Журн. микробиол. 2000. - № 23. - С. 80-85.

32. Карликанова, Н.И. Листерии в молоке и в молочных продуктах Текст. / Н.И.Карликанова, И.В. Куваева, Г. М. Карликанова Углич, 1999. — 15с.

33. Коровина, В.П. Изучение механизма регуляции численности популяции в эксперименте на культурах бактерий Текст. / В.П. Коровина, А.А. Сазонова, И.Ш. Вайсман // Экология. 1974. -№ 6. - С. 5-9.

34. Костенко, Ю.Г. Листерии — критерий безопасности мясных продуктов

35. Текст. / Ю.Г. Костенко, Т.С. Шагова, К.С. Янковский // Мясн. Индустрия. 1997. -№ 23. -С. 23 - 24.

36. Костенко, Ю.Г. Пищевой листериоз: возбудители и способы подавления их роста, рекомендации для предприятий Текст. / Ю.Г. Костенко, Т.С. Шагова, Т.С. Янковский // Все о мясе. -1999. №3. - С. 23-26.

37. Лабинская, А.С. Микробиология с техникой микробиологических исследований Текст. / А.С. Лабинская — М., 1978. С. 47-53.

38. Лакин, Г.Ф. Биометрия Текст. / Г.Ф. Лакин М.: Высшая школа, 1990. -303с.

39. Ландау, Н.С. Некоторые особенности развития и биосинтетической активности смешанной культуры микроорганизмов Текст. / Н.С. Ландау, И.И. Милованова, Н.С. Егоров // Журн. микробиол. — 1985. -Т. 54. вып. 4. С. 529-532.

40. Listeria monocytogenes- новый микробиологический показатель опасности пищевых продуктов Текст. / Л.Н. Федянина, Е.А. Зайцева, Т.К. Каленик, В.Б. Светлов. Владивосток, 2006. - 22 с.

41. Листерии в инфекционной патологии человека современная концепция Текст., / И.С. Тартаковский, О.С. Палей, Э.Ф. Опочинский и др. // ЗНИСО. - 1994. - № 23. - С. 1 - 4.

42. Листериоз, передаваемый через продукты питания Текст. // Бюллетень ВОЗ. 1988. - Т. 66, № 4- С. 1-10.

43. Листериоз с поражением нервной системы Текст. / Н.Д. Ющук, Г.Н. Кареткина., Е.П. Деконенко и др. // Тер. архив. — 2007. — № 211. — С. 57-60.

44. Листериоз: варианты клинического течения Текст. / Н.Д. Ющук, Г.Н. Кареткина, Е.А. Климова и др. // Тер. архив. — 2001. — № 211. — С. 48-51.

45. Листериозный менингит и его осложнения Текст. / Е.П. Деконенко, Л.В. Куприянова, К.В. Головатенко-Абрамов и др. // Неврологический журнал.-2001.-№2.-С. 23-26.

46. Медицинская микробиология Текст. / Под ред. Покровского В.И., Поздеева O.K. М.: ГЭОТАР МЕДИЦИНА, 1999. - 1200 с.

47. Меньшикова, З.Н. Электронно-микроскопическая идентификация листерий — возбудителя пищевого листериза Текст. / З.Н. Меньшикова, Е.В. Тищенко // Актуальные вопросы ветеринарной медицины: материалы конференции. — Новосибирск, 2005. С. 37-38.

48. Методика изучения адгезивного процесса микроорганизмов Текст. /

49. B.И. Брилис., Т.А Брилене., Х.П. Ленцнер. и др. // Лаб. дело. 1996. -№4.-С. 210-212.

50. Методические подходы к лабораторной диагностике листериоза Текст. / Г.В. Гальцева, И.Н. Цепко, М.П. Маевский и др. // Листериоз на рубеже веков: тез. докл. Международ, симп., 18-20 мая 1999 г. — Покров, 1999.1. C. 73-76.

51. Методические указания МУК 4.2.1122-02 «Организация контроля и методы выявления бактерий Listeria monocytogenes в пищевых продуктах» Текст. М.: Минздрав России. -2002. - 21 с.

52. Методические указания МУК 4.2.1890-04. «Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам» Текст. М.: Минздрав России, 2004. - 147 с.

53. Механизмы низкотемпературной регуляции метаболизма у бактерий Текст. / Т.Н. Варвашевич, Л.С. Никифорова, А.Ф. Траценко и др. // Психрофильность патогенных микроорганизмов. Новосибирск, 1986. — С. 7-14.

54. Мукамолова, Г.В. Образование и биохимическая характеристика покоящихся форм неспорулирующей бактерии Micrococcus luteus Текст.: автореф. дис. . канд. биол. наук / Мукамолова Г.В. М., 1995.-25 с.

55. Мухина Л.Б. Взбудитель листериоза показатель биологической опасности рыбной продукции Текст. / Л.Б. Мухина, Е.Ю. Дмитриева // Технология. - 2002. - С. 50-51.

56. Новые методы идентификации Listeria monocytogenes Текст. / Т.И. Карпова, С.А. Ермолаева, И.В. Лопырев, Н.С. Бродинова. и др. // Журн. клин, микробиол. и антимикр. терапия. — 2001. — том 3, №3. — С. 266-273.

57. О существовании патогенных бактерий в окружающей среде Текст. / Т.П. Сомов, Л.С. Бузолева, Е.А. Зайцева и др. // Вестн. ДВО РАН. 2000. — №3. - С. 3 - 9.

58. Образование «некультивируемых» клеток Micobacterium tuberculosis и их оживление Текст. / М.О. Шлеева, Г.В. Мукамолова, М.В. Телков и др. // Журн. микробиол. 2003. - Т. 72, вып. 1. - С. 76-83.

59. Определитель бактерий Берджи Текст. / Под ред. Хоулта Дж., Крига Н. и др. М.: Мир. - 1997. - Т. II. - 567 с.

60. Особенности выживаемости бактериальных клеток в микробных сообществах Текст. / Н.В. Заславская., Н.К. Артеменко., М.М. Чижевская., В.В. Тец // Журн. клин, микробиол. антимикроб, химиотер. 2000. - №2. - С. 12-19.

61. Патогенные листерии в почве и в ассо Текст. / В.И. Пушкарева, Е.Н. Емельяненко, В.Ю. Литвин и др. // Журн. микробиол. — 1997. —№ 3. -С. 3-6.

62. Питательные среды для выделения и накопления листерий Текст. / С.М. Омарова, Ш.М. Меджидов, Э.М. Ахмедова, Г.М. Тагирова // Журн. микробиол. 2000. - №1. - С. 45-47.

63. Питательные среды для изучения биологических свойств листерий Текст. / Э.М. Ахмедова, С.М. Омарова, П.М. Муртузалиева, З.М. Нурмагомедова // Журн. микробиол. 2007. - №3. - С. 95- 97.

64. Поманская, А.А. О размножении листерий в воде Текст. / А.А. Поманская // Журн. микробиол 1962. - №9. - С. 102-105.

65. Пушкарева, В.И. Влияние микроводорослей на жизнеспособность Listeria monocytogenes Текст. / В.И. Пушкарева, Е.Н. Емельяненко, Л.В. Диденко // Журн. микробиол. 1998. - № 5. - С. 9-13.

66. Пушкарева, В.И. Патогенные листерии и почвенные простейшие: сопряженность жизненных циклов Текст. / В.И Пушкарева, С.А. Ермолаева, В.Ю. Литвин // Журн. Успехи современной биологи. — 2008.-том 128. №3.-С. 245-251.

67. Работнова, И.Л. Некоторые вопросы общей физиологии микроорганизмов Текст. / И.Л. Работнова, И.Н. Позмогова // Журн. микробиол. эпидемиол. и иммунобиологии. 1994. - №4. - С. 116-120.

68. Размножение, листерий в молочных продуктах Текст. / Т.И. Карпова, Н.М. Шустрова, Л.Е. Снегорева, С.А. Шевелева и др. // Журн. микробиол.-2001.-№1.-С. 80-81.

69. Родина, Л.В. Факторы и пути заражения листериозом населения Москвы Текст. / Л.В. Родина, Г.М. Маненкова, В.В. Тимошков // Эпидемиол. и инфекц. б-ни. 2002. - №4. - С. 48-50.

70. Родина, Л.В. Эпидемическая ситуация по листериозу в Москве Текст. / Л.В. Родина, Г.М. Маненкова, Л.А. Цвиль // Эпидемиол. и инфекц: б-ни. -2000.-№6.-С. 15-18.

71. Роль бактериальных ауторегуляторов роста группы алкилоксибензолов в ответе стафилококков на стрессовые воздействия Текст. / О.Н. Ильинская, А.И. Колпаков, М.И. Шмидт и др. // Журн. микробиол. 2002. -Т. 71, №1. - С. 23-29.

72. Романова, Ю.М: Некультивируемое состояние у патогенных бактерий: известные и возможные факторы индукции обратимого процесса Текст. / Ю.М. Романова, Е.В. Чегаев, А.Л. Гинцбург // Молек. генет. микробиол. и вирусол. -19981 №3. - С. 3-8.

73. Руководство по выделению и определению патогенных листерий в свежей, охлажденной и мороженой рыбе Текст. — М.: Госкомрыболовство РФ, 2000. —22 с.

74. Сазонова, Л.А. Моделирование эколого-популяционных отношений в эксперименте на культурах бактерий Текст. / Л.А. Сазонова, И.Ш. Вайсман // Докл. АН СССР. -1973. Т. 208. № 5. - С. 1217- 1220.

75. Сахаров П.П., Гудкова Е.И. Листереллезная инфекция Текст. М.: Изд-во АМН СССР. 1950. С. 205.

76. Семенихина В.Ф., Гуськова Л.Д., Рожкова И.В. Влияние молочнокислых бактерий на листерий при совместном культивировании в молоке: сборник научных трудов ГНУ ВНИМИ. 2004. Режим доступа: http://www.vnimi.Org/s publ2004-286.html Дата обращения 24.07.2010.

77. Серов, Г.Д. Усовершенствованная питательная среда для первичного определения разных микробов Текст. / Г.Д. Серов // Лаб. дело. 1978. — № 11.-С. 685-688.

78. Сидоренко, М.Л. Особенности биологии возбудителя листериоза при обитании в объектах окружающей среды Текст. / М.Л. Сидоренко, В.Е. Терехова, Л.С. Бузолева // Приоритет России XXI века: от биосферы и техносферы к ноосфере. Пенза, 2003. - С. 159-161.

79. Сидоренко, М.Л. Влияние летучих метаболитов бактерий рода Pseudomonas на размножение патогенных бактерий Текст. / М.Л. Сидоренко // Тихоокеанский медицинский журнал. — 2001. — №7. — С. 131-134.

80. Сидоренко, М.Л. Влияние летучих метаболитов сапрофитной микрофлоры почв на размножение патогенных бактерий Текст. / М.Л. Сидоренко, Л.С. Бузолева // Журн. микробиол. эпидемиол. и иммунобиол. 2004. - №3. - С. 18-23.

81. Сливко, В.В. Листереллез сельскохозяйственных животных Текст.: автореф. дис. . д-ра. вет. наук / Сливко B.B М., 1959. - 19 с.

82. Случай глазожелезистой формы листериоза в Ульяновской области Текст. / Л.М. Гусева, В.А. Старостин, О.С. Бабушкин, A.A. Нафеев // Вестн. офтальмол. 2004. - т. 120, №6. - С. 36-37.

83. Соколенко, A.B. Некультивируемые формы бактерий: распространение в природе, индукторы некультивируемого состояния и реверсии Текст. / A.B. Соколенко // Журн. Современные наукоемкие технологи. 2006. — №2.-С. 11-15.

84. Сомов, Г.П. Адаптация патогенных бактерий к абиотическим факторам окружающей среды Текст. / Г.П. Сомов, JI.C. Бузолева Владивосток: ОАО Примполиграфкомбинат, 2004. — 167 с.

85. Сомов, Г.П. Психрофильность патогенных бактерий Текст. / Г.П. Сомов, Т.Н. Варвашевич, Н.Ф. Тимченко Новосибирск: Наука, 1991. - 204 с.

86. Сомова, JI.M. Ультраструктура патогенных бактерий в разных экологических условиях Текст. / JI.M. Сомова, JI.C. Бузолева, Н.Г. Плехова Владивосток: Медицина ДВ, 2009. - С. 75-164.

87. Стейниер, Р. Мир микробов Текст. / Р. Стейниер, Э. Эдельберг, Дж. М. Ингрэм Мир. 1979. Т. 2. - С. 39-40.

88. Структурно функциональная характеристика бактериальных биопленок Текст. / Т.А. Смирнова, Л.В. Диденко, P.P. Азизбекян, Ю.М. Романова // Журн. микробиол. - 2010. - том 79. №4. - С. 435-446.

89. Тартаковский, И.С. Листерии: роль в инфекционной патологии человека и лабораторная диагностика Текст. / И.С. Тартаковский, В.В. Малеев, С.А. Ермолаева — М.: Медицина для всех, 2002. — 200 с.

90. Тартаковский, И.С. Факторы патогенности листерий и их роль в патогенезе и лабораторной диагностике листериоза Текст. / И.С. Тартаковский, С.А. Ермолаева, В.В. Малеев // Журн. микробиол. — 2003.-№4.-С. 31-36.

91. Терехова, В.Е. Микробиологические аспекты экологии Listeria monocytogenes в морской среде Текст. : автореф. дис. .канд. мед. наук/ Терехова В.Е. Владивосток, 2003. - 24 с.

92. Тирранен, JI.C. Роль летучих метаболитов в межмикробном взаимодействии. Новосибирск Текст. / JI.C. Тирранен Наука: Сиб. отд-ние, 1989.-104 с.

93. Тирранен, JI.C. Характер взаимодействия микроорганизмов через их газообразные метаболиты Текст. / JI.C. Тирранен., Б.Г. Ковров, О.А. Черепанов // Журн. микробиол. — 1980. Т. 49, вып. 5. -С. 788-793.

94. Торотенкова, В.Н. Взаимодействие микроорганизмов через продуцируемые ими летучие вещества Текст. / В.Н. Торотенкова, JI.C. Тирранен., О.В. Сысоева // Вестн. Красноярского государственного университета. 2009. - № 12. - С. 150 - 154.

95. Триполитова, А.А. Листериоз Текст. / А.А. Триполитова, Т.В. Борисова -Томск, 1965.-257 с.

96. Туякова, Р.К. Жизнеспособность листерий в молоке Текст. / Р.К. Туякова // Материалы международной научно-практической конференции. Астана, 1997. - С. 50 - 53 .

97. Фиштейн, А.В. Об изменчивости физиологических признаков микроорганизмов Текст. / А.В. Фиштейн // Журн. микробиол. — 1985. — Т. 54. вып. 4. С. 560-562.

98. ЮО.Хочачка, П. Стратегия биохимической адаптации Текст. / П. Хочачка, Д. Сомеро -М., 1977. 398 с.

99. Честнова, Т.В. Два случая листериоза с необычными клиническими проявлениями Текст. / Т.В. Честнова // Материалы международной научно-практической конференции. — Покров: ВНИИВ ВИМ, 2001. — С. 120-123.

100. Честнова, T.B. Диагностика листериоза у новорожденных Текст. / Т.В. Честнова // Эпидемиол. и инфекц. б-ни. 2001. - № 23. - С. 45 - 47.

101. Численность и изменчивость листерий в сообществе с инфузориями Текст. / В.И. Пушкарева, Н.Д. Константинова, И.С. Тартаковский и др. // Патогенные бактерии в сообществах. М.: Медицина, 1994. - С. 48-55.

102. Шарма, Р.К. Обнаружение листерий в продуктах морей и океанов // Листериоз на рубеже веков Текст. / Р.К. Шарма // Тез. докл. Международ, симп., 18-20 мая 1999 г. Покров, 1999. - С. 97 - 99.

103. Шлегель, Г. Общая микробиология Текст. / Г. Шлегель -М.: Мир, 1987. -567 с.

104. Юб.Шлыгина, К.Н. К вопросу об изменчивости возбудителя листериоза Текст. / К.Н. Шлыгина // Журн. микробиол. 1958. — № 10. - С. 56-61.

105. Эль-Регистан, Г.И: Динамика ауторегуляторных факторов в периодических культурах Pseudomonas carboxydoßava и Bacillus cereus Текст. / Г.И. Эль-Регистан., В.И. Дуда, В.А. Светличный, // Журн. микробиол. 1983. -Т. 52, вып. 2. - С. 238-243.

106. Эпидемиологические аспекты экологии бактерий Текст. / В.Ю. Литвин, А.Л. Гинцбург, В.И. Пушкарева и др. М.: Фармпринт, 1998. - 229 с.

107. Эффект конститутивной активности генов патогенности у Listeria monocytogenes Текст. / Т.И. Карпова, Б.И. Маракуша, Т.П. Сапенко, И.С. Тартаковский // Журн. микробиол. 2005. - №3. — С. 3-8.

108. Юдин, И.П. Современные подходы к оценке жизнеспособности бактерий с акцентом на феномене некультурабельности Текст. / И.П. Юдин // Annals of Mechnicov Institute. 2007. - №3. - С. 8-16.

109. Ш.Янковский, К.С. Контроль пищевых продуктов на наличие листерий Текст. / К.С. Янковский, Ю.Г. Костенко, Ю.К. Ерофеева // Журн. Мясная индустрия. 2003. - №1. - С. 26 - 29.

110. A bacteriocin from Carnobacterium piscicola for the control of Listeria monocytogenes in vacuum-packaged meat Text. / R. Schobitz, T. Zaror, O. Leon et al. // J. Food Microbiol. 1999. - Vol. 16. - P. 249-255.

111. A predictive model for the effect of temperature and predrying treatments in reducing Listeria monocytogenes populations during drying of beef sausage Text. / Y. Yoon, P.N. Skandamis, P.A. Kendall et al. // J. Food Prot. 2006. -Vol. 69.-P. 62-70.

112. A selective differential medium for the isolation Listeria monocytogenes Text. / G.D.W. Curtis, R.G. Mitchell, A.F. King et al. // J. Lett. Appl. Microbiol. 1989. Vol. 8. - P. 95-98.

113. Acid tolerance in Listeria monocytogenes influences invasiveness of enterocyte-like cells and macrophage-like cells Text. / M.P. Conte, G. Petrone, A.M. Di Biase, M.G. Ammendolia et al. // J. Microb. Pathog. -2000. Vol. 29. - P. 137-144.

114. Adsorption, attachment and biofilm formation among isolates of Listeria monocytogenes using model conditions Text. / M.L. Kalmokoff, J.W. Austin, X.D. Wan et al. // J. Appl. Microbiol. 2001. - Vol. 91, №4. - P. 725-733.

115. Albert, I. Stochastically modeling Listeria monocytogenes growth in farm tank milk Text. / I. Albert, R. Pouillot, J.B. Denis // Risk Analysis. 2005. -Vol. 25.-P. 1171-1185.

116. Alisarli, M. Contamination of some vacuum-packaged meat products with Listeria monocytogenes Text. / M. Alisarli, M. Atasever, M. Gokmen // Acta Alimentaria. 2005. - Vol. 34. - P. 331-334.

117. Amezquita, A. Competitive Inhibition of Listeria monocytogenes in Ready-to-Eat Meat Products by Lactic Acid Bacteria Text. / A. Amezquita, M.M. Brashears // J. Food Prot. 2002. - Vol. 65(2). - P. 316-325.

118. An outbreak of Listeria monocytogenes serotype 3a infections from butter in Finland Text. / O. Lyytikainen, R. Autio, P. Maijala et al. // J. Infect. Dis. — 2000.-Vol. 181.-P. 1838-1841.

119. Analysis of the role of the Listeria monocytogenes F0F1-ATPase operon in the acid tolerance response Text. / P.D. Cotter, G.M Cormac, C.G. Gahan et al. // Int. J. Food Microbiol 2000. - Vol. 60, №2-3. - P. 137-146.

120. Anti-adhesion activity of two biosurfactants prodused by Bacillus spp. Prevents biofilm formation of bacterial pathogens Text. / F. Rivardo, R.J. Turner, G. Allegrone et al. // J. Appl. Microbial. Cell Physiol. 2009. -Vol. 83, №3.-P. 541-553.

121. Antibiotic resistance among Listeria, including Listeria monocytogenes, in retail foods Text. / D. Walsh, G. Duffy, J.J. Sheridan, et al. // J. Appl. Microbiol. -2001. Vol. 90. - P. 517-522.

122. Arslan, S. Prevalence and antimicrobial resistance of Listeria spp. in homemade white cheese Text. / S. Arslan, F. Özdemir // J. Food Control. -2008.-Vol. 19.-P. 360-363.

123. Aslim, B. Effect of a bacteriocin-like substance (BLS) produced by Streptococcus thermophilus strains on Listeria spp. Strains Text. / B. Aslim, N.Yucel, Y. Beyatli // J. Food Proc. Pres. 2004. - Vol. 28. - P. 241-250.

124. Atkin, C.L. Rhodotorulic acid, a diketopiperazine dihydroxamic acid with growth-factor activity. I. Isolation and characterization Text. / C.L. Atkin, J.B. Neilands // J. Biochem. 1968. -Vol. 7. - P. 3734-3739.

125. Attachment of Listeria monocytogenes to stainless steel, glass, propylene and rubber-surfaces after short content time Text. / A.A. Mafu, D. Roy, J. Goulet et al. // J. Food Prot. 1990. -Vol. 53, №9. P. 742-746.

126. Avirulence of Viable But Non-Culturable Listeria monocytogenes cells demonstrated by in vitro and in vivo models Text. / J.M. Cappelier, V. Besnard, S. Roche, N. Garrec et al // J. Vet. Res. 2005. - Vol. 36. -P. 589-599.

127. Bacterial cytokine Text. / G.V. Mukamolova, A.S. Kaprelyants, D.I. Young et al. // Proc Natl Acad Sei USA. 1998. -Vol. 95. - P. 8916-8921.

128. Bacterial stress response in Listeria monocytogenes: jumping the hurdles imposed by minimal processing Text. / C. Hill, P.D. Cotter, R.D. Sleator et al. // Int. J. Dairy. 2002. - Vol. 12. - P. 273-283.

129. Bacteriocin-producing lactobacilli in Spanish-style fermented sausages: Characterization of bacteriocins Text. / M.T. Aymerich, M. Garriga., J.M. I.Monfort Nes, M. Hugas // J. Food Microbiol. 2000. - Vol. 17. -P. 33-45.

130. Barber, M.A Comporative study of Listerella and Erysipelothrix Text. / M.A. Barber // J. Path. Bact. 1939. - № 48. - P. 11-12.

131. Bassam, A.A. Quorum Sensing in Biofilms: Why Bacteria Behave the Way They Do Text. / A.A. Bassam, M.F. Pina, J.L. Smith // J. Food Science. -2009. -Vol. 74, №1. P. 24-37.

132. Bayles, D.O. Osmoprotectants and ctyoprotectants for Listeria monocytogenes Text. D.O. Bayles, B.J. Wilkinson // J. Lett. Appl. Microbiol. 2000. -Vol. 30.-P. 23-27.

133. Begley, M. Exposure to bile influence biofilm formation by Listeria monocytogenes Text. / M. Begley, C. Kerr, C. Hill // Gut Pathog. 2009. -Vol. l.-P. 11-15.

134. Behaviour of L. monocytogenes in sliced, vacuuv-packed mortadella Text. / L.S. Bersot, C.Gillio, P. Tavolaro, M. Landgraf et al // Braz. J. Microbiol. -2008. Vol. 39, №3. - P. 377-390.

135. Berestord, M.R. Listeria monocytogenes adheres to many materials found in food-processing environments Text. / M.R. Berestord, P.W. Andrew, G. Sharma // J. Appl. Microbiol. 2001. - Vol. 90. - P. 1000-1005.

136. Besnard, V. Development of a direct viable count procedure for the investigation of VBNC state in Listeria monocytogenes Text. / V. Besnard., M. Federighi., J.M. Cappelier. // J. Lett. Appl. Microbiol. 2002. - Vol. 31. -P. 77-81.

137. Besnard, V. Evidence of Viable But Non-Culturable state in Listeria monocytogenes by direct viable cut and CTC-DAPI double staining Text. / V. Besnard, M. Federighi, J.M. Cappelier // J. Food Microbiol. 2000. -Vol. 17(6).-P. 697-704.

138. Blakman, I.C. Grouth of Listeria monocytogenes a biofilm on various food processing surfaces Text. / I.C. Blakman, J. Frank // J. Food. Prot. 1996. -Vol. 59, №8.-P. 827-839.

139. Block, S.S. Peroxygen compounds. Chlorine and chlorine compounds Text. / S.S Block: In Disinfection, sterilization and preservation, 5th ed., edited by S. S. Block, Lippincott Williams &Wilkins, Philadelphia. 2001. P. 185-204.

140. Bremer, P.J. Survival of Listeria monocytogenes attached to stainless steel surfaces in the presence or absence of Flavobacterium spp. Text. / P.J. Bremer, I.Monk, C.M. Osborne // J. Food Prot 2001. - Vol. 64, №9. -P. 1369-1376.

141. Buchanan, R.L. Microbial competition: effect of culture conditions on the suppression of Listeria monocytogenes Scott A by Carnobacterium piscícola Text. / R.L. Buchanan., L.K. Bagi // J. Food Prot. 1997. - Vol. 60. -P. 254-261.

142. Buncic, S. Listeriolisin O production and pathogenecity of non-growing Listeria monocytogenes stored at refregiration temperature Text. / S. Buncic, S.M. Avery, A.R. Rogers // Int. J. Food Microbiol. 1996. - Vol. 31. -P. 133-147.

143. Buncic, S. Moorhead S.M. Insufficient antilisterial capacity of low inoculum Lactobacillus cultures on longterm stored meats at 48C Text. / S Buncic., S.M. Avery // Int. J. Food Microbiol. -1997. Vol. 34. - P. 157-170.

144. Carpertier, B. Interactions in biofilms between Listeria monocytogenes and resident microorganisms from food industry premises Text. / B. Carpertier, D. Chassaing // Int. J. Food Microbiol. 2004. - Vol. 97. - P. 111-122.

145. CDC. 2000. Multistate outbreak of listeriosis United State Text. // MMWR Morb Mortal Wkly rep.- 2000. - Vol. 49. - P. 1129-1130.

146. Changing pattern of human listeriosis, England and Wales, 2001-2004 Text. / I.A. Gillespie, J. McLauchlin, Grant K.A. et al. // Emerg. Infect. Dis. — 2006. -Vol. 12, №9.-P. 235-241.

147. Characterization of antimicrobial resistance of foodborne Listeria monocytogenes Text. / M.Conter, D. Paludi, E. Zanardi, S. Ghidini et al. // Int. J. Food Microbiol. 2009. -Vol. 128 (3). - P. 497-500.

148. Charpentier, E. Antibiotic Resistance in Listeria spp. Text. / E. Charpentier, P. Courvalin // J. Antim. Agents and Chemoth. 1999. - Vol. 43, №9. -P. 2103-2108.

149. Clinical presentation and outcome of listeriosis in patients with and without immuno-suppressive therapy Text. / K. Skogberg, J. Syrjanen, Jahkola M. et al. II J. Clin. Infect. Dis 1992. - Vol. 14. - P. 815-821.

150. Cold dependence of fatty acid profile of different lipid structure of Listeria monocytogenes Text. / S.K. Mastronicolis, N. Arvanitis, A. Karaliota et al. // J. Food Microbiol. 2005. - Vol. 22. - P. 213-219.

151. Comparative assessment of acid, alkalin and salt tolerance in Listeria monocytogenes virulent and avirulente strains. FEMS Text. / D. Lui, A.J. Ainsworth, M.L Lawrence et al. // Lett. Microbiol. 2005. - Vol. 243. -P. 373-378.

152. Cotter, P.D. A glutamate decarboxylase system protects Listeria monocytogenes in gastric fluid Text. / P.D. Cotter, C.G. Gahan, C. Hill // J. Mol. Microbiol. 2001. - Vol. 40, № 2. - P. 465-475.

153. Daskalov, H. Survival and growth of Listeria monocytogenes on sausage formulated with inoculated and stored rework product Text. / H. Daskalov, J. Momfre, J.N. Sofos // J. Food Control. 2006. - Vol. 17. - P. 981-986.

154. Datta, A.R. Effects of glucose, growth temperature, and pH on listeriolisine O production in Listeria monocytogenes Text. / A.R. Datta, M.H. Kothary // J. Appl. Environ. Microbiol. 1993. -Vol. 59. - P. 3495-3497.

155. Denny, J. Human Listeria monocytogenes infectios in Europe — an opportunity for improved European surveillance Text. / J. Denny, J. McLauchlin // Euro Surveill. 2008. - V.13, Iss. 13, 27. - P. 8082.

156. Detection and characterization of Listeria monocytogenes in Sao Jorge (Portugal) cheese production Text. / J.M. Kongo, F.X. Malcata, A.J. Ho et al. // J. Dairy Sei. 2006. - Vol. 89, №11. - P. 4456-4461.

157. Differentiation of the major Listeria monocytogenes serovars by multiplex PCR Text. / M. Doumith, C. Buchrieser, Glaser P., G. Jacquet et al. // J. Clin. Microbiol. 2004. - Vol. 42. - P. 3819-3822.

158. Djordjevic, D. Microtiter plate assay for assessment of Listeria monocytogenes biofilm formation Text. / D. Djordjevic, M. Wiedmann, L.A. McLandsborough // J. Appl. Environ. Microbiol. 2002. - Vol. 68, № 6. -P. 2950-2958.

159. Dormancy as a survival strategy of the fish pathogen in the marine environment Text. / M. Curras, Magarinos, Toranzo et al. // J. Dis. Aquat Organ. 2002. - Vol. 52, № 2. - P. 129-136.

160. Effect of flagella on initial attachment of Listeria monocytogenes to stainless steel Text. / S. Vantanyoopaisarn, A. Nazli, C.E.R. Dodd et al. // J. Appl. Environ. Microbiol. 2000: - Vol. 66. - P. 860-863.

161. Effect of milk proteins on adhesion of bacteria to stainless steel surfaces Text. / L.M. Barnes, M.F. Lo, M.R. Adams, A.H. Chamberlain // J. Appl. Environ. Microbiol. 1999. - Vol. 36, №1. -P. 287-294.

162. Effects of the growth procedure on the surface hydrophobicity of Listeria monocytogenes cells and their adhesion to stainless steel Text. / R. Briandet, V. Leriche, B. Carpentier, M.N. Bellon-Fontairie // J. Food Prot. 1999. -Vol. 62.-P. 994-998.

163. Electron paramagnetic, resonance studies of the membrane fluidity of the foodborne pathogenic psychrotroph Listeria monocytogenes Text. / M:R. Edcomb, B.J. Sirimanne, B.J. Wilkinson et al. // J. Biochim. Biophys. Acta. 2000. - Vol. 1463. - P. 31-42.

164. Environmental and physico-chemical factores induce VBNC state in Listeria monocytogenes Text. / V. Besnard, M. Federighi, E. Declerq, F Jugian, J.M. Cappelier // J. Vet. Res. 2002. - Vol. 33. - P. 359-370.

165. Epidemiology of human listeriosis and seafood Text. / J. Rocourt, C. Jacquet, A. Reilly // Int. J. Food Microbiol. 2000. -Vol. 62. - P. 197-209.

166. Evalution of a new chromogenic agar for the detection of Listeria in food Text. / C. Willis, T. Baalham, M. Greenwood et al. // J. Appl. Microbiol. -2006. Vol. 101, №3. - P. 711-717.

167. Extracellular phospholipids of isolated bacterial communities Text. / Tetz V.V., Korobov V.P., Artemenco N.K. et al. // Biofilms 2004. - Vol.1, Iss. 03.-P. 149-155.

168. Farber, J.M. Listeria monocytogenes Text. / J.M. Farber, P.I. Peterkin // The microbiological safety and quality of foods / Ed. by B.M. Lund, T.C. Bard -Parket, G.W. Gould. Gaithersburg (MD): Aspen, 2000. - P. 1178-1232.

169. Farber, J.M. Listeria monocytogenes, a food-borne pathogen Text. / Farber J.M., Peterkin P.I. // Microbiol. Rev. 1991. - Vol. 55. -P. 476-511.

170. Farrag, S.A. Growth of Listeria monocytogenes in the presence of Pseudomonas fluorescence at 7 or 13oC in skim milk Text. / S.A. Farrag, E.H. Marth // J. Food Prot. 1989. - Vol. 52. - P. 852-855.

171. Fatemi, P. Inactivation of Listeria monocytogenes!Pseudomonas biofilms by peracid sanitizers Text. / P. Fatemi, J.F. Frank // J. Food Prot. 1999. -Vol. 62.-P. 761-765.

172. Food related inness and death in the United States Text. / P.S. Mead, L. Slutsker, Y. Dietz et al. // J. Emerg. Infect. Dis. - 1999. - Vol. 5. -P. 607-625.

173. Food Control Department, Ministry of the Environment and Published in Food News, Singapore General Hospital Text. / Chua Sin Bin et al. —Dec, 2000.-P. 3-5.

174. Foster, P.L. Stress responses and genetic variation in bacteria Text. / P.L. Foster // Mutat Res. 2005. - Vol. 569. - P. 3-11.

175. Fraser, J.A. Rapid detection of Listeria spp. In food and environmental samples by esculin hydrolysis Text. / J.A. Fräser, W.H. Sperber // J. Food Prot. 1988. -Vol. 51, № 10. P. 762-765.

176. Freedman, DJ. Antagonism of foodborne bacteria by Pseudomonas spp.: a possible role for iron Text. / DJ. Freedman, J.K. Kondo, D.L. Willrett // J. Food Prot. 1989. -Vol. 52. - P. 484-489:

177. Gahan, C.G. The relationship between acid stress responses and virulence in Salmonella typhimutium and Listeria monocytogenes Text. / C.G. Gahan, C. Hill // Int J. Food Microbiol. 1999. -Vol. 50. - P. 93-100.

178. Galdicro, E. Effect of saline concentration, pH and growth temperature on the invasive capacity of Listeria monocytogenes Text. / E. Galdicro, M. D'Isanto, F. Alberti // J. Res. Microbiol. 1997. - Vol. 148. - P. 305-313.

179. Gellin, B.G. Listeriosis Text. / B.G. Gellin, C.V. Broome // JAMA. 1989. Vol. 261.-P. 1313-1320.

180. Genegen technology for detection of Salmonella spp. And genus Listeria/Listeria monocytogenes in chicken samples Text. / S. Vallenhofer-Schrumpf, R. Buresch, G. Unger et al. // J. Rapid Methods Auto Microbiol. -2006.-Vol. 14, №2.-P. 161-181.

181. Genegen technology for detection of Salmonella spp. and Listeria/Listeria monocytogenes in chicken samples Text. / S. Vollenhofer-Schrumpf, R. Buresch, G. Unger et al // J. of Rap. Meth. Automation in Microbiol. -2006.-Vol. 14, №2.-P. 161-181.

182. Genome diversification in phylogenetic lineages I and II of Listeria monocytogenes', identification of segments unique to lineage II populations Text. / C. Zhang, M. Zhang, J. Juet al. // J. Bacteriol. 2003. - Vol. 185. -P. 5573-5584.

183. Goulet, V. Listeriosis in 225 non-pregnant patients in 1992: clinical aspects and outcome in relation to predisposing condition. Scand Text. / V. Goulet, P. Marchetti // J. Infect. Dis. 1996. - Vol: 28. - P. 367-374.

184. Graham, J.C. Hospital acquired listeriosis Text. / J.C. Graham, S. Lanser, G. Bignardi et al. // J. Hosp. Infect. - 2002. - Vol. 51. - P. 136-139.

185. Gram, L. Potential hazards in cold-smoked fish: Listeria monocytogenes Text. / L. Gram // J. Food Science. 2001. -Vol. 66, №7. - P.1072-1081.

186. Gravesen, A. Surface attachment of Listeria monocytogenes is induced by subletal concentrations of alchogol at low temperatures Text. / A. Gravesen, C. Lekkas, S. Knöchel // J. App. Environ. Microbiol. 2005. - Vol. 71. -P.5601-5603.

187. Growth and survival of Listeria monocytogenes in vacuum-packaged ground beef inoculated with Lactobacillus alimentarius FloraCarn L-2 Text. /

188. B J. Juven, S.F. Barefoot, M.D. Pierson et al. // J. Food Prot. 1998. -Vol. 61.-P. 551-556.

189. Growth of Listeria monocytogenes on vacuuv-packed homseneat for human consumption Text. / P. Bonilauri, G. Liuzzo, G. Merialdy, S. Bentley et al // J. Meat Science. 2004. - Vol. 68, №4. - P. 671-674.

190. Growth of survival of Listeria monocytogenes in ready-to-eat meat products and combination deli salads during refregirated storage Text. / S.L. Bernett, E.L. Mertz, B. Bennie, T. Ford, A. Starobin // J. Food Science. — 2005. -Vol. 70, №6.-P. 301.

191. Harvey, J. Assessing biofilms formation by Listeria monocytogenes strains Text. / J. Harvey, K.P. Keenan, A. Gilmour // J. Food Microbiol. 2007. -Vol. 24, №4. - P.380-392.

192. Hassan, A.N. Behavior of Listeria monocytogenes in Pseudomonas putida biofilm on a condensate-forming surface Text. / A.N. Hassan, D.M. Birt, J.F. Frank // J. Food Prot. 2004. -Vol. 67, №2. - P. 322-327.

193. Hedberg, C. Listeria in Europe: The need for a European surveillance network is growing Text. / C. Hedberg // Eurosurveillanc. 2006. -Vol. 11, №4-6. -P. 75-76.

194. Heike, D.M. Attachment of Listeria monocytogenes and Salmonella typhimurium to stainless steel and Buna-N in the presence of milk and milk components Text. / D.M. Heike, B. Somers, A.C.L. Wong // J. Food Prot. — 1993. Vol. 56.-P. 479-484.

195. Herald, P.A. Attachment of Listeria monocytogenes at 10°C in biofilms with microorganisms isolated from meat and diary processing environments Text. / P.A. Herald, E.A. Zottola // J. Food Science. 1988. - Vol.53, Iss. 5. -P. 1549-1552, 1562.

196. Identification of Listeria monocytogenes genes expressed in response to growth at low temperature Text. / S. Liu, J.E. Graham, L. Bigelow et al. // J. Appl. Environ. Microbiol. 2002. - Vol. 68. - P. 1697-1705.

197. Incidence of Listeria monocytogenes in different food products commercialized in Portugal Text. / C. Mena, C. Almeda, L. Carneiro et al. // J. Food Microbiol. -2004. Vol. 21, №2. - P. 213-216.

198. Intensieve surveillance van Listeria monocytogenes in Nederland, 2006 Text. / Y. Doorduyh, C.V. de Jager, W.K. van der Zwaluw et al. // J. Infect. 2007. -Vol. 18.-P. 308-314.

199. Involvenment of cell fatty acid composition and lipid metabolism in adhesion mechanism of Listeria monocytogenes Text. / A. Gianotti, D. Serrazanetti, S. Sado Kamdem et al. // Int. J. Food Microbiol. 2008. - Vol. 123. - P. 9-17.

200. Iron availability affects entery of Listeria monocytogenes into the enterocytelike cell line Caco-2 Text. / M.P. Conte, C. Longhi, M. Polidoro, G. Petrone et al // J. Infect. Immunol. 1996. - Vol. 64. - P. 3925-3929.

201. Izolation and Characterization of Listeria monocytogenes isolated from ready-to-eat foods in Florida Text. / S. Yuelian, Y. Liu, Y. Zhang et al. // J. Appl. Environ. Microbiol. 2006. -Vol. 72, №7. - P. 5073-5076.

202. Jemmi, T. Listeria monocytogenes: food-borne pathogen and hygiene indicator Text. / T. Jemmi, R. Stephan // Rev. Sei. Tech. Off. Int. Epiz. -2006. Vol. 25, №2. P. 571-580.

203. Jeong, D.K. Growth of Listeria monocytogenes at 10°C in biofilms with microorganisms isolated from meat and dairy processing environments Text. / Jeong D.K. // J. Food Prot. 1994-b. -Vol. 57. - P. 576-586.

204. Jeong, D.K. Growth of Listeria monocytogenes at 21°C in biofilms with microorganisms isolated from meat and dairy processing environments Text. / D.K. Jeong, J.F. Frank // Lebensm. Wiss. Technol. 1994-a. - Vol. 27. -P. 415-424.

205. Jeppesen, V.F. Antagonistic activity of two strains of lactic acid bacteria against Listeria monocytogenes and Yersinia enterocolitica in a model product Text. / V.F. Jeppesen, H.H. Huss // Int. J. Food Microbiol. 1993. - Vol. 19. -P. 179-186.

206. Jinneman, R.C. Incidence and behavior of Listeria monocytogenes in fish and seafood Text. / R.C. Jinneman, M.M. Wekell, M.W. Erlund // Listeria, listeriosis and food safety. New-York: M. Dekker. - 1999. - P. 601-630.

207. Julianelle, L. Indification of Listerella monocytogenes Text. / L. Julianelle, C. Pons // Proc. exper. Biol. Med. 1939. -Vol. 40. - P. 362-363.

208. Karakolev, R. Incidence of Listeria monocytogenes in beef, pork, raw-dried and raw-smoked sausages in Bulgaria Text. / R. Karakolev // J. Food Control. -2009. -Vol. 20, №10. P. 953-955.

209. Koch, J. Significant increase of listeriosis in Germany — Epidemiological patterns 2001 2005 / J. Koch, K. Stark // Eurosurveillans. - 2006. - Vol. 11, №6. Режим доступа: http://www.eurosurveillance.org/ViewArticle.aspx Дата обращения 29. 09. 2009.

210. Koutsoumanis, K.P. Effect of inoculum size on the combinet temperature, pH and aw limits for growth of Listeria monocytogenes Text. / K.P. Koutsoumanis, J.N. Sofos // Int. J. Food Microbiol. 2005. - Vol. 104. -P. 83-91.

211. Laciar, A.L. Listeria species in seafood: isolation and characterization of Listeria spp. From seafood in San Luis, Argentina Text. / A.L. Laciar, de O.N.P. Centorbi // J. Food Microbiol. 2002. -Vol. 19, №6. - P. 645-651.

212. Leriche, V. Limitation of adhesion and growth of Listeria monocytogenes on stainless steel surfaces by Staphylococcus sciuri biofilms Text. / V. Leriche, B. Carpentier // J. Appl. Microbiol. 2000. -Vol. 4. - P. 594-605.

213. Leriche, V. Use of an enzyme-linked lectinsorbent assay to monitor the shift in polysaccharide composition in bacterial biofilms Text. / V. Leriche, P. Sibille, B. Carpentier // J. Appl. Environ. Microbiol. 2000. - Vol. 66. -Pi 1851-1856.

214. Listeria monocytogenes infection of Caco-2 cells: role of growth temperature Text. / M.P. Conte, C. Longhi, G. Petrone, M. Polidoro et al // Res. Microbiol. 1994. - Vol. 145. - P. 677-682.

215. Listeria monocytogenes isolated from cold-smoked fish products in Osaka City, Japan Text. / H. Nakamura, M. Hatanaka, K. Ochi et al. // Int. J. Food Mocrobiol. 2004. - Vol. 94, № 3. - P. 323-328.

216. Listeria pathogenesis and molecular determinants Text. / J.A. Vazquez-Boland, M. Kubn, P. Berche et al. // J. Clin. Microbiol. Rev. 2001. -Vol. 14.-P. 584-640.

217. Listeriosis: A model for the fine balance between immunity and morbidity Text. / O. Lavi, Y. Louzoun, E. Klement et al. // J. Epidem. 2008. -Vol. 19, №4.-P. 581-587.

218. Liston, J. Microbial hazards of seafood consumption. Toxins, bacteria and viruses are the principal causes of seafoodbome Text. / J. Liston // J. Food Technol. 1990. -Vol. 44, №12. - P. 58-62.

219. Low prevalence of Listeria monocytogenes in foods from Italy Text. / L. Latorre, A. Parisi, R. Fraccalvieri et. al // J. Food Prot. 2007. - Vol. 70, №6.-P. 1507-1512.

220. Mai, T. Effict of temperature and growth media on the attachment of Listeria monocytogenes to stainless ateel Text. / T. Mai, D.E. Conner // Int. J. Food Microbiol. 2007. - Vol. 120. - P. 282-286.

221. Marshall, D.L. Growth of Listeria monocytogenes at lOoC in milk preincubated with selected Pseudomonas Text. / D.L. Marshall, R. H. Schmidt// J. Food Prot. 1989. - Vol. 51. - P. 277-282.

222. McCarthy, S.A. Pathogenecity of nonstressed, Heat-stressed and resuscitated Listeria monocytogenes cells Text. / S.A. McCarthy // J. Appl. Environ. Microbiol. 1991. - Vol. 57. -P. 2389-2391.

223. McLauchlin, J. Distribution of serovars of Listeria monocytogenes isolated from different categories of patients with listeriosis Text. / J. McLauchlin // Eur J. Clin Microbiol. Infect. Dis. 1990. - Vol. 9. - P.210-213.

224. Microbial biofilms Text. / Ed. by M. Ghannoum, G.A. О Tool Washington. 2004.-P. 478.

225. Microplate technique to determine hemolytic activity for routine typing of Listeria strains Text. / L.D. Rodriguez, J.A. Vazquez-Boland, F. Garayzabal et al // J Clin. Microbiol. 1986. - Vol. 24, № 1. - P. 99-103.

226. Min Seok Chae. Comparative analysis of Listeria monocytogenes biofilm formation and characterization of cell viability and biofilm structure Text.: дисс. . магистр: защищена University of Guelph, Canada. 1999. -P. 129-141.

227. Mirphological changes in Listeria monocytogenes subjected to sublethal alkaline stress Text. / E.S. Giotis, I. Blair, D.A. McDowell // Int. J. Food Microbiol. 2007. - Vol. 3, №15. - P. 250-258.

228. Modelling transfer of Listeria monocytogenes during slicing of 'gravad' salmon Text. / K. Aarnisalo, S. Sheen, L. Raaska, M. J. Tamplin // Food Microbiol. 2007. - Vol. 118. - P. 69-78.

229. Modification of a virulence-associated phenotype after growth of Listeria monocytogenes on food Text. / G. Midelet-Bourdin, G. Leleu, S. Copin et al. // J. Appl. Microbiol. 2006. - Vol. 101, №2. - P. 300-308.

230. Modulation of actA gene expression in Listeria monocytogenes by iron Text. / M.P. Conte, С Longhi, G. Petrone., M Polidoro et al // J. Med. Microbiol. -2000. Vol. 49. - P. 681-683.

231. Molecular and physiological analisis of the role of osmolyte growth of Listeria monocytogenes at low temperatures Text. / H.H. Wemekamp

232. Kamphuis, R.D. Sleator, J.A. Wouters et al. // J. Appl. Environ. Microbiol. -2004. Vol. 70. - P. 2912-2918.

233. Moltz, A.G.Formation of biofilms by Listeria monocytogenes under various growth conditions Text. / A.G. Moltz, S. E. Martin // J. Food Prot. 2005. -Vol. 68.-P. 92-97.

234. Morphological and physiological characterization of Listeria monocytogenes subjected to high hydrostatic pressure Text. / M. Ritz, J.L. Tholozan, M. Fedeeighi et al. // J. Appl. Environ. Microbiol. 2001. - Vol. 67. -P. 2240-2247.

235. Morphological plasticity as bacterial survival strategy Text. / S.S. Justice, D.A. Hunstad, L. Cegelski et al. // J. Nature Rev. Microbiol. 2008. - Vol. 6. -P. 162-168.

236. Multistate outbreak of Listeria monocytogenes infection linked to delicatessen turkey meat Text. / S.J. Olsen, M. Patrick, S.B. Hunter et al. // J. Clin. Infect. Dis. 2005. - Vol. 40. - P. 962-967.

237. Najjar, M.B. Changes in Listeria monocytogenes membrane fluidity in response to temperature stress Text. / M.B. Najjar, M. Chikindas, T.J. Montvill // J. Appl. Environ. Microbiol. 2007. - Vol. 73, №20. -P. 6429-6435.

238. Nau, J-Y. Nouvelles interrogations a propos de la derniere epidemic de listeriose Text. / J-Y. Nau // Rev. Prat. Med. Gen. 2000. - Vol. 14. -P. 383.

239. New approach to determine the genetic divercity of viable and active bacteria in aquatic ecosystems Text. / L. Bernard, C. Courties, C. Duperray,

240. H. Schafer, G. Muyzer, P. A. Lebaron // Cytometry. 2001. - Vol. 43. -P. 314-321.

241. New methodology for isolation of Listeria monocytogenes from heavily contaminated environments Text. / L. Rodriguez, G. Fernandez,

242. F. Garayzabal et al. // J. Appl. Environ. Microbiol. 1984. - Vol. 5. -P. 1188-1190.

243. Nilsson, L. Growth control of Listeria monocytogenes on coldsmoked salmon using a competitive lactic acid bacteria flora Text. / L. Nilsson, L. Gram, H.H. Huss // J. Food Prot. 1999. - Vol. 62. - P. 336-342.

244. Norwood, D.E. Adherence of Listeria monocytogenes strains to stainless steel coupons Text. / D.E. Norwood, A. Gilmour // J. Appl. Microbiol. 1999. -Vol. 86. — P.576-582.

245. G.A. O'Tool, H.B. Kaplan, R. Kolter // Ann. Rev. Microbiol. 2000. -Vol. 54.-P. 49-79.

246. Occurrence and typing of Listeria monocytogenes strains in retail vacuum-packed fish products and in a production plant Text. / T. Johansson,

247. Rantala, L. Palmu et al. // Int. J. Food Microbiol. 1999. - Vol. 247.1. P. Ill 119. i

248. ODriscoll, B. Adaptive acid tolerance response in Listeria monocytogenes'. isolation of an acid-tolerant mutant which demonstrates increased virulrnce Text. / B. ODriscoll, C.G. Gahan, C. Hill // J. Appl. Microbiol. 1996. -Vol. 62.-P. 1693-1698.

249. Okatay, H.I. Evaluation of ISO method and Vidas Automated Sistem for identifying Listeria and Salmonella in selected foods Text. / H.I. Okatay, D. Heperkan // J. Rap. Meth. Microbiol. 2006. - Vol. 14, №2. - P. 133-145.

250. Oliver J.D. Formation of viable but nonculturable cells Text. / J.D. Oliver // Starvation in Bacteria / Ed by S. Kjellberg. Plenum Press, NY, 1993. -P. 239-272.

251. Oliver, J.D. The public health significance of viable but nonculturable bacteria Text. / J.D. Oliver // Nonculturable Microorganisms in Environment / Ed. by R.R. Colwell, D.J. Grimes. ASM Press, Washington DC, 2000. -P. 277-299.

252. Oliver, J.D. Viable but nonculturable bacteria in food environments Text. / J.D. Oliver // Food Borne Pathogens: Microbiology and Molecular Biology / Ed by P.M. Fratamico, A.K. Bhunia. Horizone Scientific Press, Norfolk, U. K. (in press). - 2005.

253. Outbreak of clinical listeriosis in sheep: evalution from possible contamination routes from feed to raw produce and humans Text. / M. Wagner, D. Melzner, Z. Bago et al // J. Vet. Med. Infect. 2005. -Vol. 52.-P. 278-283.

254. Outbreak of human listeriosis associated with tome cheese in northwest Switzerland Text. / J. Bille, D.S. Blanc, H. Schmid, K Boubaker et al // Euro Surveill. 2006. - Vol. 11. - P. 91-93.

255. Outbreak of listeriosis in the Czech republic, late 2006 preliminary report Text. / M. Vit, R. Olejnik, J. Dl Hy et al. //Euro Surveill. - 2007. - Vol.12, Iss. 6. - E070208.1

256. Peel, M. Temperature-dependent expression of flagella of Listeria monocytogenes studied by electron microscopy, SDS-PAGE and Western blotting Text. / M. Peel, W. Donachie, A. Shaw // J. Appl. Microbiol. 1988. -Vol. 134. P. 2171-2178.

257. Pini P.N., Gilbert RJ. The occurense in the U. K. of Listeria species in raw chickens and soft cheeses Text. //Int J. Food Microbiol. 1988 - Vol.6, № 4 -P.317-26.

258. Pitonzo, B .J. Resuscitation of microorganisms after gamma irradiation Text. /

259. B.J. Pitonzo, P.S. Amy, M. Rudin // J. Radiat. Res. 1999. - Vol. 152, №1. -P. 71-75.

260. Porter, J. Rapid assessment of physiological status in Escherichia coli and Listeria monocytogenes using fluorescent probes Text. / J. Porter,

261. C. Edwards, R.W. Pickup I I J. Appl. Bacteriol. 1995. - Vol. 4. - P. 399-408.

262. Posfay-Barbe, K.M. Listeriosis Text. / K.M. Posfay-Barbe, E.R. Waid // J. Pediatr. Res.-Vol. 25. P. 151-159.

263. Prevalence and contamination levels of Listeria monocytogenes in retail foods in Japan Text. / S. Inoue, T. Nakama, Y. Aria et al. // Int. J. Food Microbiol. -2000.-Vol. 59.-P. 73-77.

264. Prevalence and growth of Listeria monocytogenes in naturally contaminated cold-smoked salmon Text. / A. Beaufort, S. Rudelle, N. Gnanou-Besse, M.T. Toquin et al. // J. Lett. Appl. Microbiol. 2007. - Vol. 44. - P. 406-411.

265. Prevalence, antimicribial resistance profiles of Listeria monocytogenes from various foods in Gaborone, Botswana Text. / I.C. Morobe, C.L. Obi, M.A. Nyila et al. // African. J. Biotechn. 2009. - Vol. 8, № 22. -P. 6383-6387.

266. Puis — field gel electrophoresis applied for comparing Listeria monocytogenes strains involved in ourbreaks Text. / C. Buchrieser, R. Brosch, B. Catimel, J. Rocourt // J. Microbiol. 1993. - Vol. 39. - P. 395-401.

267. Rai B., Srivastava A.K., Singh D.B. Volatile and non-volatile metabolites of actinomycetes and the growth of some litter decomposing fungi Text. / B.Rai, A.K. Srivastava, D.B. Singh // J. Soil. Biol. Biochem. 1981. -Vol. 13, №1.-P. 75-76.

268. Results of a 12-month long enhanced surveillance of listeriosis in Italy Text. / M. Gianfranceschi, A. Gattuso, D'Ottavio et al. // Euro Surveill. 2007. -Vol. 12, № 11.-P. 746.

269. Risk factors for L. monocytogenes contamination of dairy products in Switzerland, 1990-1999 Text. / S.I. Pak, U. Spahr, T. Jemmi et al. // J. Prev. Vet. Med. -2002. Vol. 53, №1. - P. 55-65.

270. Roberts, A J. Pathogen, host and environmental factors contributing to the pathogenesis of listeriosis Text. / A.J. Roberts, M. Wiedmann // J. Cell. Mol. Life Sci. -2003. Vol. 60. - P. 904-918.

271. Role of FliF and Flil of Listeria monocytogenes in flagellar assembly and pathogenicity Text. / A. Bigot, H. Pagniez, E. Botton, C. Frehel et al // J. Inf. Immun. -2007. Vol. 75. - P. 1063-1064.

272. Ross, T. Predictive modeling of the growth and survival of Listeria in fishery products Text. / T. Ross, P. Dalgaard, S. Tienungoon // Int J. Food Microbiol. -2000. Vol. 62. - P. 231-245.

273. Roszak, D. Survival strategies of bacteria in the natural environment Text. /

274. D. Roszak, R. Collwel // J. Microbiol. Rev. 1987. -Vol. 51. - P. 365-379.

275. Salmon, E.D. High-resolution video-enhanced differential interference contrast (VE-DIC) light microscopy Text. / E.D. Salmon, T. Rhong // Methods in cell biology. 1998. - Vol.56 - P. 153-184.

276. Santiago, N.I. Influence of temperature and growth phase on expression of a 104-kilodalton Listeria adhesion protein in Listeria monocytogenes Text. / N.I. Santiago, A. Zipf, A.K. Bhunia // J. Appl. Environ. Microbiol. 2000. -Vol. 65.-P. 2765-2769.

277. Sasahara, K.C. Biofilm formation by Listeria monocytogenes utilizes a primary colonizing microorganism in flowing systems Text. /K.C. Sasahara,

278. Schindler B.D. Immobilization and detection of Listeria monocytogenes Text. / B.D. Schindler, L.A. Shelef// J. Appl. Environ. Microbiol. 2006. -Vol. 72, №6. - P. 4426-4428.

279. Schlech, W.F. Foodborne listeriosis Text. / W.F. Schlech // J. Clin. Infect. Dis.-2000.-Vol. 31.-P. 770-775.

280. Schneiter, R. The role of lipids in the biogenesis of integral membrane proteins Text. / R. Schneiter, A. Toulmay // J. Appl. Microbiol. Biotechnol. -2007.-Vol. 73. — P.1224-1232.

281. Schuchat, A. Epidemiology of human listerios Text. / A. Schuchat, B. Swaminathan, C.V. Broome // J. Cliln. Microbiol. Rev. 1991. -Vol. 4. -P. 169-183.

282. Seeliger, H.P.R. Listeriosis. Note: Some observers prefer a concave mirror Text. / H.P.R. Seeliger . Hafiier Publishing Co., New York, 1961.

283. Seeliger, H.P. Listeria and Law Text. / H.P. Seeliger // Listeria: ISOPOZ XI. Copenhagen, 1992. - P.l- 6.

284. Slater, J.H. The role of microbial communites Text. / J.H. Slater // Mixed culture fermentation's. / Ed. by M.E. Bushell, J.H. Slater. L., 1981.

285. Slutsker, L. Listeriosis Text. / L. Slutsker, M.C. Evans, A. Schuchat. -Washington: ASM Press, 2000. P. 83-106.

286. Smoot, L.M. Effect of environmental stress on the ability of Listeria monocytogenes Scott a to attach to food contact surfaces Text. / L.M. Smoot, M.D. Pierson// J. Food Pro. 1998. - Vol. 61, № 10. - P. 1293-1298.

287. Sofos, J.N. Safer food using predictive modeling; Novel approaches to control Listeria monocytogenes in ready-to-eat meat products Text. / J.N. Sofos, Y. Yoon-Fleischwirtschaft Int., 2006.-Vol. 3. P. 16-18, 21.

288. Sorensen, T.S., Attfield P.V. Inducible gene expression by nonculturable bacteria in milk after pasteurization Text. / T.S. Sorensen, P.V. Attfield // J. Appl. Environ. Mocrobiol. 2002. - Vol. 68, №4. - P. 1988-1992.

289. Steinert, M. Resuscitation of viable but nonculturable Legionella pneumophila Philadelphia JR32 by Acanthamoeba castellani Text. / M. Steinert, L. Emody, R. Amann // J. Appl. Environ Microbiol. 1997. - Vol. 63, № 5. -P. 2047-2053.

290. Tasara, T. Cold stress tolerance of Listeria monocytogenes: a review of molecular adaptive mechanisms and food safety implications Text. / T. Tasara, R. Stephen // J. Food Prot. 2006. - Vol. 69. - P. 1473-1484.

291. The growth limits of a large number of Listeria monocytogenes strains at combinations of stresses show serotype- and niche-specific traits Text. /

292. S. Van der Veen, R. Moezelaar, T. Abee et al. // J. Appl. Microbiol. 2008. -Vol. 105.-P. 1246-1258.

293. The involvement of cell-to-cell signals in the development of a bacterial biofilm Text. / D.G. Davis, M.R. Parsek, J.P. Pearson et al. // J. Science. -1998. Vol. 280. - P. 295-298.

294. Tracking of Listeria monocytogenes in smoked fish processing plants Text. / J. Thimothe, K.K. Nightingale, K. Gall et al. // J. Food Prot. 2004. - Vol. 67, №2.-P. 328-341.

295. Use of PCR methods for identification of Listeria monocytogenes in milk Text. / M. Wieckowska, R. Kotlowski, J. Kur et al. // J. Med. Dosw. Microbiol. -1998. Vol. 50, № 3-4. - P. 251-257.

296. Utilization of Exogenous Siderophores and Natural Catechols by Listeria monocytogenes Text. / N. Simon, V. Coulanges, P. Andre et al. // J. Appl. Environ. Microbiol. 1995. - Vol. 61. - P. 1643-1645.

297. Utilization of transferrin-bound iron by Listeria monocytogenes. FEMS Text. / T. Hartford, S. O'Brien, P.W. Andrew et al. // Lett. Microbiol. 1993. -Vol. 108. — P.311—318.

298. Uyttendaele, M. Incidence of Listeria monocytogenes in different types of meat products on the Belgian retail market Text. / M. Uyttendaele, P. De Troy, J. Debevere // Int. J. Food. Microbiol. 1999. - Vol. 53. - P. 75-80.

299. Variation in biofilm formation among strains of Listeria monocytogenes Text. / M. K Borucki, J. D. Peppin, D. White, F. Loge and all. // J. App. Environ. Microbiol. 2003. - Vol. 69. - P. 7336-7342.

300. Verheul, A. Utilization of Oligopeptides by Listeria monocytogenes Scott A Text. / A. Verheul, F.M. Rombouts, T. Abee // J. Appl. Environ Microbiol. -1998. Vol. 64, № 3. - P. 1059-1065.

301. Viable, but nonculturable Vibrio cholerae Ol in the aquatic environment of Argentina Text. / N. Binszten, M.C. Costagliola, M. Pichel et al // J. Appl Environ Mocrobiol. 2004. - Vol. 70(12). - P. 7481-7486.

302. Viable, but nonculturable Vibrio cholerae Ol revert to a culturable state in human intestine Text. / R.R. Colwell, P.R. Brayton., D. Herrington, B.D. Tall et al // J. Microb. Biotechnol. 1996. - Vol. 12. - P. 28-31.

303. Vitas, A J. Occurrence of Listeria monocytogenes in fresh and processed foods in Navarra Text. / A.I. Vitas, V. Aguado, I. Garcia-Jalon // Int. J. Food Microbiol. 2004. - Vol. 90, № 3. - P.349-356.

304. Wagner, M. Listeria monocytogenes: Klinik, Epidemiologie und lebensmittelhygienische Bedeutung Text. / M. Wagner, F. Allerberger, G. Stanek // Nova acta Leopoldina. 2005. -Vol. 89, №334. - P. 83-108.

305. Walter, F. Foodbome Listeriosis Text. / F. Walter, 1. Schlech // Clinical Infect. Dis. 2000. - Vol. 31. - P. 770-775.

306. Дата обращения 20.09.2009.

307. Yaron, S. A reverse transcriptase-polimerase chain reaction assay for detection of viable Escherichia coli 0157:H7: investigation of specific target genes Text. / S. Yaron, K. Matthews // J. Appl. Microbiol. 2002. - Vol. 92. - P. 633-640.

308. Youchimizu, M. Study of intestinal microflora of Salmonids Text. / M. Youchimizu, T. Kimura // J. Fish. Pathol. 1976. - Vol. 10, №2. - P. 243.

309. Zhang Y., Yeh E., Hall G., Cripe J., Bhagwat A.A., Meng J. Characterization of Listeria monocytogenes isolated from retail foods Text. / Y. Zhang, E. Yeh, G. Hall et al. // Int. J. Food Microbiol. 2007. - Vol. 113. - P. 47-53.

310. Zhao, T. Control of Listeria monocytogenes in a biofilm by competitive-exclusion microorganisms Text. / T. Zhao, M.P. Doyle, P. Zhao // J. Appl. Environ. Microbiol. 2004. - Vol. 70. - P. 3996-4003.

Информация о работе

Цветкова, Наталья Борисовна
кандидата биологических наук
Владивосток, 2011
ВАК 03.02.08

Диссертация

Влияние факторов среды на биологические свойства Listeria Monocytogenes, контаминирующей пищевые продукты - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы