Влияние эктопической имплантации аллогенного гидроксиапатита на показатели метаболизма костной ткани, функцию коры надпочечников и состояние иммунокомпетентных органов у животных

Власов, Михаил Юрьевич

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Влияние эктопической имплантации аллогенного гидроксиапатита на показатели метаболизма костной ткани, функцию коры надпочечников и состояние иммунокомпетентных органов у животных
ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Влияние эктопической имплантации аллогенного гидроксиапатита на показатели метаболизма костной ткани, функцию коры надпочечников и состояние иммунокомпетентных органов у животных"

На правах рукописи

ВЛАСОВ МИХАИЛ ЮРЬЕВИЧ

Влияние эктопической имплантации аллогенного гидроксиапатнта па показатели метаболизма костной ткани, функцию коры надпочечников и состояние иммунокомпетентных органов у животных

03.00.13-физиология, 03.00.04-биохимия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Самара - 2003

Работа выполнена в Самарском государственном университете

Научные руководители: доктор биологических наук,

профессор Подковкин Владимир Георгиевич;

доктор медицинских наук, профессор Волова Лариса Теодоровна

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук,

профессор Боринский Юрий Николаевич;

доктор биологических наук,

профессор Зайцев Владимир Владимирович

Ведущая организация:

Волгоградский государственный медицинский университет

Защита состоится $ " £2003 г. в часов на заседании диссертационного совета К212.218.02 при Самарском государственном университете по адресу: 443011, г. Самара, ул. академика Павлова, 1.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Самарского государственного университета

Автореферат разослан

"¿Г" 2003 года

Ученый секретарь диссертационного совета,

кандидат биологических наук,

доцент

Ведясова О.А.

"Т

Общая характеристика работы

Актуальность проблемы. В настоящее время заболевания опорно-двигательной системы являются широко распространенными, а проблема методов их лечения занимает одно из первых мест в медицине.

Известно, что сложные физиолого-биохимические процессы в органах зависят от функционального состояния соединительной ткани, которая, обладая механическими, защитными и пластическими свойствами, в конечном счете поддерживает гомеостаз. Поэтому главными причинами заболеваний опорно-двигательной системы являются нарушения обменных процессов в организме, сопровождающиеся деструкцией специализированного вида соединительной ткани - костной ткани. Процессы метаболизма последней обеспечиваются сложными взаимосвязанными механизмами регуляции. Наряду с местными факторами существенное значение в регуляции обмена костной ткани имеют центральные механизмы, выяснение роли которых, в частности, системы "гипоталамус-гипофиз", имеет как теоретическое, так и практическое значение.

Ключевую роль в постоянном возобновлении органического и минерального компонентов кости играют гормональные и ферментативные системы. В связи с этим актуальной представляется задача по поиску новых способов управления регенерацией костной ткани.

Для восстановления поврежденных участков кости, реконструкции ее анатомической целостности, широко используют разнообразные пластические материалы биологического (Волова JT.T., 1986, 1988; Брус И.Г. с соавт., 1989) и неорганического (Хамраев Т.К. с соавт., 1994; Панкратов A.C., 1995; Строганова Е.Е. с соавт., 2001; Oda S. е.а., 1997; Yuan Н. е.а., 2001) происхождения. Однако в ряде случаев, когда уменьшение костной массы происходит при различных нарушениях обменных процессов в организме, возникает необходимость в нормализации костного ремоделирования на системном уровне.

За последнее десятилетие в литературе появились экспериментальные данные демонстрирующие остеогенные свойства синтетического кальций-фосфатного соединения - гидроксиапатита (ГАП) - и биосовместимых материалов на его основе (Безруков В.М., Григоръян A.C., 1996; Литвинов С.Д., 1995; Снетков А.И. с соавт., 2001; Zambonin G., Grano М., 1995; Bonucci Е. е.а., 1997; Goto Т. е.а. 2001). В ряде экспериментальных моделей на животных показано, что эктопическое введение ГАП в мышечную ткань влияет на остеоин-дуктивные процессы (Ripamonti U., 1996, 2000; Zong J. е.а., 1997; Gosain A.K. е.а., 2002). Существенным недостатком данных работ является отсутствие системного подхода в изучении реакции организма в ответ на введение композитных биоматериалов, которые существенно отличаются по химическому составу и биологическим свойствам от естественного ГАП костной ткани. Прежде всего, недостаточное внимание уделено изменениям со стороны эндокринной системы и их взаимосвязи с обменом основного белка костной ткани - коллагена -при использовании ГАП. До настоящего времени остается неясным вопрос о

РОС. НАЦИОНАЛЬНАЯ БИБЛИОТЕКА С.Петербург г

ЬЗ

регулирующем влиянии гормональных и ферментативных систем на остеоген-ные процессы, происходящие в костной ткани.

Вышеизложенное свидетельствует о том, что применение новых видов кальций-фосфатных препаратов и изучение их влияния на обменные процессы в настоящее время заслуживает особого внимания.

В ЦНИЛ СамГМУ предложен и запатентован (Волова Л.Т., Подковкин В.Г., 2000), а в представленной работе детально разработан новый способ получения аллогенного ГАП путем выделения его непосредственно из костной ткани. Данный способ может стать звеном замкнутого цикла производства костнопластических материалов, не требующим дорогостоящего оборудования, использующегося при получении синтетических аналогов. Кроме того, предполагается, что аллогенный ГАП обладает большей биосовместимостью по сравнению с искусственными препаратами. Поэтому настоящая работа была направлена на изучение физиологических и биохимических свойств аллогенного ГАП.

Цель исследования. Разработать технологию производства аллогенного ГАП и произвести в эксперименте комплексную оценку реакции организма при эктопическом введении данного препарата в сочетании с деминерализованным костным матриксом.

Основные задачи исследования.

1. Разработать технологию получения аллогенного ГАП из костной ткани.

2. Выявить влияние эктопической имплантации аллогенного ГАП на биохимические показатели метаболизма костной ткани, функционального состояния коры и мозгового слоя надпочечников, уровень кальция в крови и перекис-ное окисление липидов в печени, селезенке и мышечной ткани крыс.

3. Изучить реакцию организма животных на одновременную имплантацию ДКМ и аллогенного ГАП.

4. Проанализировать реакцию организма животных на имплантацию комбинированных препаратов, содержащих аллогенный ГАП и измельченный костный матрикс.

Научная новизна.

1. В проведенном исследовании впервые дана комплексная оценка реакции организма животных на эктопическую имплантацию аллогенного ГАП и его комбинации с ДКМ на ряд жизненно важных систем. Выявлены изменения биохимических показателей метаболизма костной ткани, свидетельствующие о стимуляции остеогенеза.

2. Впервые проанализированы изменения гормонального фона, характеризующие состояние САС, ГГНС при внутримышечном введении ГАП и обнаружено слабовыраженное увеличение их функциональной активности.

3. Впервые изучено модифицирующее влияние ГАП на реакцию организма животных, которым был имплантирован ДКМ, проявившееся в угнетении перекисного окисления липидов в селезенке, печени и мышцах.

Теоретическое и практическое значение работы. Результаты проведенной работы дополняют современные представления о реакции организма на костно-пластические материалы неорганической природы.

Установлено, что реакция организма на эктопическую имплантацию ГАП и его смесь с измельченным ДКМ носит комплексный характер и включает физиологические изменения ряда систем: метаболизма костной ткани, функционального состояния САС, ГГНС, перекисного окисления липидов.

Выявлены особенности реакции ГГНС и САС на имплантацию аллоген-ного ГАП, а также изменения в обмене коллагена костной ткани после имплантации ГАП в зависимости от его типа и способа введения. Полученные данные дают дополнительное теоретическое обоснование для применения биопластических материалов при лечении заболеваний опорно-двигательного аппарата.

Разработана технология получения ГАП из костной ткани, близкого по составу к минеральному компоненту кости. На его основе созданы новые кост-но-пластические материалы, которые в настоящее время применяются в практическом здравоохранении. Дано экспериментальное обоснование их эффективности. Установлено, что эктопическая имплантация этих материалов не вызывает отрицательных сдвигов в состоянии исследованных показателей метаболизма костной ткани, перекисного окисления липидов, периферических органов иммуногенеза, САС и ГГНС.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Эктопическая имплантация аллогенного ГАП вызывает изменения биохимических показателей метаболизма костной ткани, свидетельствующие об активизации остеогенеза. Эти изменения не выходят за пределы физиологической нормы и не приводят к нарушению гомеостаза кальция.

2. Гормональные показатели ГГНС и САС в ответ на имплантацию ГАП свидетельствуют о физиологической реакции организма животных, не носящей характер стрессовой.

3. Введение ГАП модифицирует системную реакцию организма при имплантации ДКМ, что проявляется в уменьшении выраженности изменений биохимических показателей свободнорадикального окисления в селезенке, печени и мышцах.

4. Морфологические исследования периферических органов иммуногенеза при имплантации смеси ГАП и измельченной деминерализованной кости не обнаруживают наличия у имплантатов иммуногенных свойств.

Апробация работы. Апробация работы проведена на кафедрах биохимии и физиологии Самарского государственного университета. Материалы диссертации доложены на международном симпозиуме по проблемам тканевых банков "Биоимплантология на пороге XXI века " (Москва, 2001); на 68-й итоговой научной сессии Курского государственного медицинского университета (Курск, 2002); на итоговых научных конференциях Самарского государственного университета и Самарского военно-медицинского института (Самара, 2002, 2003).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 9 научных работ, получено положительное решение на выдачу патента.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 135 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания использованных методов, результатов собственных исследований, анализа и обсуждения полученных данных, выводов, списка цитированной литературы и приложения. Работа содержит 32 рисунка и 13 таблиц. Список литературы включает 176 источников, в том числе 105 зарубежных.

Эксперименты на животных выполнены на базе ДНИ Л СамГМУ.

Список использованных сокращений ГАП - гидроксиапатит

ГГНС - гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковая система ДКМ - деминерализованный костный матрикс САС — симпато-адреналовая система 11-ОКС - 11-оксикортикостероиды ЩФ - щелочная фосфатаза

Материалы и методы исследований

Исследования проведены на 126 белых беспородных половозрелых крысах (самцах) массой 180-290 г. Все опытные животные были разделены на 3 основные группы, соответствующие следующим сериям экспериментов:

1. Изучение функции надпочечных желез и показателей обмена костной ткани при внутримышечных инъекциях суспензии аллогенного ГАП и имплантации ДКМ;

2. Изучение состояния функции надпочечных желез, показателей обмена костной ткани и морфо-функциональное состояния селезенки и лимфатических узлов после эктопической имплантации комбинированных препаратов, содержащих ГАП и измельченную деминерализованную кость.

3. Изучение влияния внутримышечной имплантации гранулированного ГАП на исследуемые показатели функции надпочечных желез и показатели обмена костной ткани.

Схема экспериментов представлена в табл. 1.

Животным вводили ГАП (суспензии в физиологическом растворе 40 мг/0,2 мл; гранулы массой 44,8±0,9 мг) и ДКМ в виде блоков (диафизные участки длинных трубчатых костей), а также комбинированные гранулированные имплантаты массой 41,6±1,2 мг, содержащие ГАП и измельченную кость. Под эфирным наркозом в стерильных условиях рассекали кожу и фасции бедра с внешней стороны на 0,5 см, тупо раздвигали мышечные волокна, глубоко в рану помещали стерильные (обработанные ионизирующим излучением) имплантаты, после чего рану ушивали единичными швами и обрабатывали 3% раство-

ром йода. Инъекции суспензий стерильного ГАП в физиологическом растворе делали однократно с помощью одноразового шприца в бедренные мышцы.

Таблица 1

Схема экспериментов

№ серии и усло- Группы животных, Срок выведе- Количество

вия эксперимента вид имплантатов ния животных животных в

Левая бедрен- Правая бедрен- из экспери- группах

ная мышца ная мышца ментов

1. Эктопическое • ГАП рН 12 Ложная

(внутримышеч- операция 1 месяц и 12

ное) введение • ГАП рН 12 ДКМ 2 месяца

инъекций сус- • ГАП рН 7 ДКМ 12

пензии аллоген- • Ложная 12

ного ГАП и им- операция ДКМ 14

плантация ДКМ

• Контроль

(ложнооперированные живот- 1 п

ные)

2. Внутримы- • ГАП/измел ГАП/ измель- 2 месяца 6

шечная имплан- ьченная кость ченная кость 1:1

тация комбини- 1:1

рованных препа- • ГАП/из- ДКМ

ратов мельченная 8

(ГАП/измель- кость 2:1

ченная кость) и • Контроль 6

ДКМ

3. Внутримы- ГАП рН 12 из раствора первой 2 месяца 8

шечная имплан- + фосфат недели

тация гранулиро- деминерализации

ванного ГАП. • ГАП рН 7 8

• ГАП рН 7 из раствора 8

+фосфат ► второй недели

деминерализации

• ГАП рН 12 б

• ГАП рН 12

+фосфат У 8

Итого животных • Контроль 6

126

После операции все животные содержались в одинаковых условиях вивария на стандартном рационе при комнатной температуре. Каждая экспериментальная серия содержала контрольную группу животных, которые не подвергались описанным выше воздействиям.

Объектом исследований являлись кровь, надпочечники, печень, селезенка мышечная ткань и лимфатические узлы животных. В экспериментах изучали содержание 11-ОКС (Подковкин В.Г., 1988) в надпочечниках, печени и плазме; адреналина (Подковкин В.Г., 1988) в надпочечниках; белковосвязанного и свободного оксипролина (Крель A.A., Фурцева J1.H., 1968) в плазме; активность ЩФ (Колб В.Г., Камышников B.C., 1982) в сыворотке крови; концентрацию неорганического фосфата (Колб В.Г., Камышников B.C., 1982) и Са2+ (Вишневская Т.М., Ляшевская Т.Н., 1976) в сыворотке крови; содержание малонового диальдегида (Стальная И.Д., Гаришвили Т.Г., 1977), диеновых кетонов и конь-югатов (Костюк В.А., 1991), активность каталазы (Королюк М.А. с соавт., 1988) в печени, мышечной ткани и селезенке.

В образцах ГАП количественно определяли Са2+, Mg2+ (Крешков А.П., Ярославцев A.A., 1968), Р043" (Колб В.Г., Камышников B.C., 1982), Fe3+ (Асатиани B.C., 1965); качественно - Zn2+, Си2', Mn2+, F (Алексеев В.Н., 1973).

Препараты селезенки и лимфоузлов для морфологических исследований приготовляли общегистологическими методами, окрашивали гематоксилин-эозином и пикрофуксином по ван-Гизон (Меркулов Г.А., 1969). Исследование препаратов проводили светооптически на микроскопе МБИ-11. Определяли размеры лимфоидных узелков и их реактивных центров.

Полученные в экспериментах результаты подвергали статистической обработке стандартным способом, используя t критерий Стьюдента (Фролов Ю.П., 1996). Изменения исследуемых показателей считались статистически значимыми при р<0,05.

Результаты исследований и их обсуждение

1. Технология получения аллогенного ГАП.

Исходя из цели работы, задачей первого этапа стала разработка метода получения аллогенного ГАП. Известно, что при деминерализации ДКМ, широко используемого в качестве остеопластического материала, из костной ткани в процессе деминерализации вымываются все минеральные вещества (Савельев В.И., Родюкова E.H., 1992; Urist M.R., 1968). Поэтому ГАП получали из солянокислых растворов после деминерализации компактной костной ткани путем осаждения гидроокисью натрия при значениях pH 7 и pH 12 с добавлением фосфатного буфера (Na2HP04 + КН2Р04; 0,1 М; pH 7,4) и без него.

Деминерализацию кадаверной костной ткани (диафизные участки бедренной кости) осуществляли путем обработки соляной кислотой (3,6 н) при +4°С после предварительной механической очистки и промывания в 7 % перекиси водорода. Отношение массы обрабатываемой ткани к массе кислоты 1:5. Смену экстрагирующих растворов производили ежедневно до выхода минеральных элементов.

Деминерализацию трубчатых костей крыс после предварительной обработки проводили в растворе соляной кислоты (1,8 н) в течение 24 часов до вы-

хода минеральной фазы. После деминерализации костный матрикс подвергали лиофилизации на установке LZ-9C фирмы Фригера и в дальнейшем использовали в качестве имплантационного материала.

После осаждения из деминерализатов и центрифугирования суспензию ГАП промывали пятикратным объемом воды, вновь центрифугировали. Осажденный ГАП высушивали (20 часов 150 °С) и использовали на следующих этапах исследований. Полученный препарат содержал Са2+, Mg2+, РО4 ', Fe3+ в соотношениях, близких к составу минерального компонента кости (табл. 2). Путем качественного анализа выявлено наличие ионов Zn2+, Cu2+, Mn2+, F.

Таблица 2

Содержание микроэлементов в образцах ГАП, полученных из компактной костной ткани крыс, мг/г

микроэлементы способ получения ГАП Р043" Са2+ Mg2+ Fe2+

pH 7 с фосфатом, п=5 384,8±6,7 454,3±8,2 16,90±1,67 8,74±0,43

без фосфата, п=5 295,0±5,3 480,1 ±10,0 13,55±2,02 8,94±0,40

pH 12 с фосфатом, п=5 358,0±4,5 421,2±7,3 17,31 ±3,04 10,17±0,36

без фосфата, п=5 257,0±6,8 465,4±7,5 15,28±2,94 11,45±0,39

На основании анализа данных литературы (Торбенко В.П., Касавина Б.С., 1977; Nielsen F.H., 1992; Pallares I., 1996; Campos M.S. e.a., 1998) можно предположить, что минеральный состав естественного ГАП костной ткани может влиять на обменные процессы, поэтому следующий этап наших исследований бал направлен на изучение влияния однократных инъекций аплогенного ГАП.

2. Влияние инъекций суспензии ГАП в сочетании с имплантацией деминерализованного костного матрикса на показатели метаболизма костной ткани, уровень гормонов коры и мозгового слоя надпочечников.

Реакция организма на внутримышечное введение суспензии аллогенного ГАП носила комплексный характер и включала изменения физиологического состояния ряда систем. В первую очередь необходимо отметить выраженную ответную реакцию костной ткани, отмеченную в основном через 2 месяца после операций. В наших экспериментах отмечено изменение метаболизма коллагена, проявляющееся в колебаниях уровня свободного и белковосвязанного ок-сипролина.

Как видно на рис. 1, концентрация белковосвязанного оксипролина в плазме крови незначительно повышалась в первый месяц, оставаясь на уровне контрольного значения во всех экспериментальных группах. Весьма несущественными оказались колебания концентрации свободной аминокислоты (рис. 2), единственное достоверное снижение уровня которой в плазме на 30% наблюдалось при этом же сроке исследований в группе крыс, подвергавшихся комбини-

рованному воздействию (имплантация ДКМ и инъекции щелочного ГАП). Следовательно, подобный вид операций, в целом, не оказывает существенного влияния на обмен коллагена костной ткани, по крайней мере, через месяц.

По прошествии двух месяцев нами обнаружено достоверное повышение уровня связанного с белком оксипролина в плазме крыс с имплантированным ДКМ, а также у животных, которым на фоне введения ДКМ делали однократные инъекции нейтрального ГАП. Содержание свободного оксипролина через 2 месяца уменьшалось (в 1,4 - 1,8 раза) в плазме всех крыс, причем достоверные результаты отмечены нами в трех группах.

о/0 □ через 1 месяц

25 -| 20 -15 -10 -5 0

В через 2 месяца после операций

ДКМ, ГАП рН 12

ДКМ, ГАП рН 7

ГАП рН 12

ДКМ

Рис. 1. Изменение уровня белковосвязанного оксипролина (в % от контроля) в плазме крыс после инъекций суспензии аллогенного ГАП и имплантации ДКМ

Примечание: *- отличие от контроля достоверно (р<0,05)

□ через 1 месяц

—ш

И через 2 месяца после операций

ДКМ, ГАП рН 12

ДКМ, ГАП рН 7

ГАП рН 12

ДКМ

Рис. 2. Изменение уровня свободного оксипролина (в % от контроля) в плазме крыс после инъекций суспензии аллогенного ГАП и имплантации ДКМ

Примечание: *- отличие от контроля достоверно (р<0,05)

Как известно, уровень оксипролина характеризует интенсивность процессов костного ремоделирования (Мазуров В.И., 1974; Kivirikko K.I., Risteli L., 1976). Функциональное состояние костной ткани в наших экспериментах характеризовалось снижением катаболических процессов, что проявлялось в уменьшении содержания свободного оксипролина в плазме.

Таким образом, введение щелочного ГАП способствовало замедлению процессов биодеградации костной ткани, что проявлялось в значительном снижении уровня свободного оксипролина. В то же время следует отметить, что внутримышечная имплантация костного матрикса, широко используемого в качестве костно-пластического материала, вызывала усиление биосинтеза коллагена, выявленное по увеличению концентрации белковосвязанного оксипролина с одновременным снижением свободной фракции аминокислоты. Этот факт представляет значительный интерес, поскольку подтверждает остеогенные свойства деминерализованных костных имплантатов (Волова Л.Т., 1988; Iwata Н. е.а., 2002; Mott D.A. е.а., 2002).

Об изменении реактивности костной ткани свидетельствуют изменения активности ЩФ, играющей ключевую роль в процессах физиологической регенерации костной ткани. Повышение показателя через месяц после операций происходило только в первой группе животных, которым имплантировали ДКМ и делали инъекции щелочного ГАП (рис. 3). В трех других группах происходило снижение (на 32,5 %-80,1 %) активности фермента. Через два месяца активность ЩФ, напротив, возрастала во всех группах на 46,4%-108,7% по сравнению с контрольным значением. Наименьшие изменения касались группы крыс с имплантированным ДКМ. Следовательно, введение ГАП способствовало активации активности ЩФ, что может быть связано с действием ионов Mg2"1" и Zn2t являющихся активаторами фермента (PetitClerc С. е.а., 1975).

150 100 50 0 -50 -100

• VA »9 * *

■ •

ДКМ, ДКМ, ГАП pH 12 ГАП pH 7

ГАП pH 12 ДКМ

СЗ через 1 месяц

В через 2 месяца после операций

Рис. 3. Изменение активности щелочной фосфатазы (в % от контроля) в сыворотке крыс после инъекций суспензии аллогенного ГАП и имплантации ДКМ

Примечание: *- отличие от контроля достоверно (р<0,05)

Снижение активности фермента по истечении первого месяца происходило на фоне незначительных изменений коллагенсинтетических процессов, проявляющихся, как указывалось выше в слабых колебаниях уровня свободного и белковосвязанного оксипролина Повышение активности ЩФ через два месяца совпало с повышением содержания белковосвязанного оксипролина в плазме крови крыс, которым делали инъекции нейтрального ГАП на фоне имплантации ДКМ. Следовательно, обнаруженные изменения свидетельствуют о возможном усилении процессов минерализации костной ткани через 2 месяца после операций.

В то же время нами не были зафиксированы изменения в содержании неорганического фосфата в сыворотке крови практически всех животных. Данный факт может объясняться ускорением процессов иммобилизации неорганических фосфатов в костной ткани.

В регуляции неспецифических адаптивных реакций организма важную роль играет САС. В ответ на различные воздействия происходит усиление секреторной деятельности мозгового слоя надпочечников, что приводит к биохимическим и физиологическим изменениям, направленным на восстановления гомеостаза (Кассиль Г.Н., Матлина Э.Ш., 1973).

Состояние САС характеризовалось нарастанием в первый месяц содержания адреналина в надпочечниках животных, которым изолированно делали инъекции ГАП и имплантировали костный матрикс до 4,46±0,09 мкмоль/г и 4,10±0,10 мкмоль/г соответственно при контроле 3,41 ±0,07 мкмоль/г. Через два месяца показатель в этих группах возвращался к норме. То есть, реакция САС оказалась более выраженной через месяц после операций. Вероятно, реализация в этот период адренергических механизмов способствовала обеспечению биосинтетических процессов в организме пластическим и энергетическим материалом, поскольку САС является главным фактором срочной мобилизации защитных сил организма для восстановления нарушенного гомеостаза и обеспечивает преодоление неблагоприятного воздействия. Возвращение к норме уровня адреналина через два месяца свидетельствует о завершении ответной реакции организма на введение препарата.

Наряду с изменением реактивности костной ткани необходимо отметить выраженную ответную реакцию ГТНС на введение имплантатов, что свидетельствует о комплексной реакции организма.

У животных, которым имплантировали костный матрикс и делали инъекцию нейтрального ГАП, наблюдалось угнетение глюкокортикоидной реакции по истечении месяца, выражавшееся в уменьшении уровня 11-ОКС в надпочечниках (рис. 4) и плазме (рис. 5), в то время как имплантация костного матрикса без инъекций достоверных изменений глюкокортикоидов не вызывала. На основании этого можно заключить, что введение ГАП вызывает угнетение ответной реакции ГТНС на введение остеопластических материалов. В некоторых случаях это способствует их замещению собственной костной тканью реципиента.

60 -1 40 -20 -0

-20 --40 --60 -

□ через 1 месяц

И через 2 месяца после операций

дкм

ДКМ, ДКМ, ГАП рН 12

ГАП рН 12 ГАП рН 7

Рис. 4. Изменение уровня 11-ОКС (в % от контроля) в надпочечниках крыс после инъекций суспензии аллогенного ГАП и имплантации ДКМ

Примечание: *- отличие от контроля достоверно (р<0,05)

75 л 50 25 Н 0 -25 -50 -75

□ через 1 месяц 0 через 2 месяца

ДКМ, ДКМ, ГАП рН 12 ГАП рН 12 ГАП рН 7

ДКМ

Рис. 5. Изменение уровня 11-ОКС (в % от кош роля) в плазме крыс после инъекций суспензии аллогенного ГАП и имплантации ДКМ

Примечание: *- отличие от контроля достоверно (р<0,05)

Возрастание содержания 11-ОКС в надпочечниках и плазме животных, которым вводили щелочной ГАП, происходило спустя 2 месяца. Известные биохимические и физиологические эффекты глюкокортикоидов в данных условиях могут увеличить обеспечение регенерирующих тканей пластическим и энергетическим материалом.

В связи с вышеизложенным, необходимо подчеркнуть стимулирующее действие физиологических концентраций глюкокортикоидов на метаболизм костной ткани, что подтверждается данными исследований Delany A.M., е.а. (1994). Мы полагаем, что данный эффект гормонов, по-видимому, является системным и осуществляется не столько за счет их прямого действия на ткань,

сколько через регуляторные оси организма и функциональную активность других эндокринных желез.

При исследовании процессов свободнорадикального окисления нами получены следующие данные. Уровень первичных продуктов (диеновых кетонов и коньюгатов) перекисного окисления липидов в мышцах достоверно снижался через месяц на 15,8 % и 13,1 % соответственно. Об усилении антиокисидантной защиты свидетельствует увеличение активности каталазы в печени как через месяц, так и через два месяца после эктопического введения суспензии ГАП на фоне имплантации ДКМ.

Концентрация малонового диальдегида в печени достоверно снижалась через месяц на 49,3%-107,8 % в трех группах животных, которым делали инъекции суспензии ГАП как раздельно, так и на фоне имплантации ДКМ. Полученные результаты позволяют заключить, что ингибирование процессов перекисного окисления липидов в клетках печени происходило преимущественно в первый месяц имплантации костного матрикса при введении суспензии ГАП в мышечную ткань, а через два месяца показатели возвращались к контрольным значениям.

Следует подчеркнуть, что инъекции аллогенного ГАП, осажденного при щелочном значении рН, способствовали нормализации процессов перекисного окисления в печени крыс через два месяца.

Инъекции щелочного ГАП способствовали снижению уровня кальция в крови через месяц, спустя два месяца показатель возвращался к контрольным значениям. Следует отметить, что снижение показателя было в пределах допустимых отклонений, следовательно, не вызвало существенных физиологических нарушений. В то же время, в других группах изменений не наблюдалось. В целом, введение ГАП и ДКМ не приводит к нарушениям кальциевого гомеостаза, что выражается в отсутствии существенных изменений концентрации кальция в крови животных. Это обстоятельство имеет важное физиологическое значение, поскольку ионы кальция участвуют в регуляции нервно-мышечной активности, процессов свертываемости крови, ферментативной активности и ряда других функций организма.

3. Эффект применения комбинированных препаратов, содержащих ГАП и измельченную кость.

Оценив влияние раздельного введения аллогенного ГАП и костного матрикса на исследуемые показатели, на следующем этапе исследований нами была поставлена задача оценить эффект применения комбинированных препаратов, содержащих аллогенный ГАП и измельченную деминерализованную кость в различных соотношениях.

Нами отмечено достоверное увеличение на 51,4 % уровня белковосвязан-ного оксипролина в плазме крови. Одновременно зафиксировано снижение концентрации свободного оксипролина на 70,1 % по сравнению с контролем.

Полученные результаты свидетельствуют о преобладании биосинтеза коллагена над процессами его биодеградации

Трехкратное увеличение активности ЩФ сопровождалось значительным повышением уровня неорганического фосфата в сыворотке крови. Поэтому очевидно, что процессы коллагеногенеза сопровождались стимуляцией выработки и секреции ЩФ остеобластами, что подтверждается данными литературы (Deng L., 1998). По мнению J.R. Farley и В. Stilt-Coffing (2001), причиной выхода ЩФ из остеобластов является их апоптоз, который, в соответствии с высказываемым в последнее время мнением, индуцируется действием паратиреоид-ного гормона (Hock J.M. е.а., 2001). Одновременное возрастание данных показателей на фоне указанного выше увеличения содержания белковосвязанного оксипролина свидетельствует об активизации ростовых процессов костной ткани, сопровождающихся усилением синтеза коллагена, образованием органической матрицы и ее дальнейшей минерализацией.

Наряду с изменением реактивности костной ткани необходимо отметить выраженную ответную реакцию ГГНС на введение имплантатов, что свидетельствует о системной реакции организма. В наших исследованиях отмечено возрастание содержания 11-ОКС в надпочечниках в 2,4 раза, а в плазме - в 3,4 раза. На наш взгляд, подобное увеличение концентрации стероидов в организме стимулирует выработку коллагена.

При исследовании метаболизма животных второй группы, которым внутримышечно имплантировали как комбинированные образцы, содержащие ГАП и измельченную кость в соотношении 2:1, нами выявлена аналогичная тенденция в изменениях показателей, хотя и в меньшей степени по сравнению с результатами в первой группе.

Чтобы оценить степень общей реакции организма на введение комбинированных имплантатов и ДКМ, изучали гистологические препараты периферических органов иммуногенеза - региональных лимфатических узлов и селезенки. Данный метод используется для оценки иммуногенных свойств трансплантационного материала. О реакции органов иммуногенеза в ответ на поступление в организм антигенов можно судить по изменениям, происходящим в первую очередь в лимфоидных узелках периферических органов иммунной системы. У животных, которым вводили комбинированные имплантаты, на препаратах селезенки нами отмечено незначительное количество крупных единичных фолликулов с реактивными центрами размножения, занимающими менее 50% площади. Отношение количества фолликулов с реактивными центрами размножения лимфоцитов к общему числу фолликулов в селезенке и лимфоузлах не превышает 8% и 4% соответственно при контроле 6% и 3%.

В формирующихся фолликулах центры размножения практически не выявляются. Центры размножения в фолликулах лимфоузлов как опытной, так и контрольной групп в основном представлены лишь несколькими крупными клетками - моноцитами, что по данным Л.Т. Воловой (1988) свидетельствует о невыраженности антигенных свойств костных трансплантатов.

4. Реакция ГГНС, САС и особенности показателей метаболизма костной ткани после имплантации гранулированного ГАП.

Имплантация гранулированоого ГАП в виде блока вызывала достоверное повышение концентрации свободного оксипролина в плазме всех опытных групп животных. Аналогичная тенденция отмечена при изучении содержания белковосвязанного оксипролина (рис. 6). Эти данные согласуются с данными литературы (Зайдман A.M., Сигарева H.A., 2000), в которых указывается, что при усилении регенерационных процессов увеличивается содержание общего оксипролина, отражающее интенсивность ремоделирования поврежденной костной ткани.

И ГАП из раствора 2-ой недели деминерализации костной ткани с фосфатом 0 ГАП из раствора 2-ой недели деминерализации костной ткани без фосфата И ГАП из раствора 1 -ой недели деминерализации костной ткани с фосфатом

60 п %

50 40 30 20 10 0

ГАП pH 7

ГАП pH 12

Рис. 6. Изменение уровня свободного (А) и белковосвязанного (Б) оксипролина (в % от контроля) в плазме крыс после имплантации гранулированного ГАП

Усиление процессов биосинтеза коллагена подтверждается собственными морфологическими данными. Так, при анализе микропрепаратов имплантатов оперированных животных нами выявлена инкапсуляция гранул ГАП. Формирование соединительнотканной капсулы через 2 месяца было типичным процессом. По нашему мнению это свидетельствует о меньшей биосовместимости гранулированных образцов по сравнению с комбинированными препаратами.

В наших исследованиях увеличение содержания свободного оксипролина в плазме происходило параллельно с повышением концентрации белковосвя-занной фракции во всех группах животных, которым эктопически имплантировали ГАП различных видов. Одной из причин деструкции коллагена считается избыток паратгормона и кальцитриола. Эти гормоны, действуя на клетки костной ткани, стимулируют синтез и последующее высвобождение коллагеназы во внеклеточный матрикс (Kahn A.J., 1987; Meghji S., 1992).

Реакция ГГНС на имплантацию гранулированного ГАП характеризовалась определенными изменениями. Так, повышение концентрации 11-ОКС в надпочечниках (в 1,4 - 2,5 раза больше контрольного) наблюдалось только у тех животных, в мышцы которых имплантировали образцы ГАП с добавлением фосфатного буфера (рис. 7). В плазме уровень кортикостероидов практически во всех группах оставался на исходном уровне.

Возможным объяснением различий в уровне стероидов в надпочечниках и плазме является связывание значительной части синтезированных в надпочечниках гормонов плазменным белком транскортином. В комплексе с белком гормоны не обладают активностью, и, следовательно, не оказывают угнетающее действие на рост и пролиферацию фибробластов, клеток предшественников остеобластов, биосинтез проколлагена и протеогликанов. В пользу такого предположения свидетельствуют данные о регулирующем влиянии кортико-стерона (основного глюкокортикоида крыс) на синтез гликопротеинов в культурах остеобластов (Sodek J. е.а., 1995), коллагена I и П1 в культурах фибробластов (Fernandez М., Minguell J.J., 1997) и данные о поддержании остеобластиче-ской активности физиологическими дозами глюкокортикоидов (Fujieda М. е.а., 2001).

Ы ГАП из раствора 2-ой недели деминерализации с фосфатом ШГАП из раствора 2-ой недели деминерализации без фосфата ЫГАП из раствора 1-ой недели деминерализации с фосфатом

Рис. 7. Изменение 11-ОКС (в % от контроля) в надпочечниках крыс после имплантации гранулированного ГАП

Примечание: *- отличие от контроля достоверно (р<0,05)

Наименьшие изменения зафиксированы нами при определении неорганического фосфата и кальция в сыворотке, а также адреналина в надпочечниках. По мнению Су и Купера (Hsu W.H., Cooper C.W., 1975) адреналин, как и пара-тиреоидный гормон, способствует увеличению содержания кальция в крови путем мобилизации последнего из костной ткани. Однако подобный гиперкаль-циемический эффект адреналина компенсируется выделением кальцитонина

парафолликулярными клетками щитовидной железы. Вероятно, этим можно объяснить незначительные изменения уровня кальция в сыворотке крови экспериментальных животных.

По совокупности установленных в работе фактов можно сделать заключение о том, что использованная нами в опытах на животных экспериментальная модель позволила впервые оценить системные изменения в организме при эктопическом введении минерального компонента кости, полученного по оригинальной разработке. Полученные данные свидетельствуют о высокой эффективности препаратов и их безвредности для организма.

ВЫВОДЫ

1. Разработанная технология получения аллогенного гидроксиапатита позволила создать новый костно-пластический материал, содержащий кальций, фосфат, магний, железо и другие микроэлементы в соотношении, близком к составу минерального компонента кости.

2. Эктопическая имплантация суспензии аллогенного гидроксиапатита в мышцу приводит к фазным изменениям показателей метаболизма костной ткани в крови животных. Уменьшение активности щелочной фосфатазы в первый месяц сменяется ее возрастанием через два месяца. Это сопровождается системными отклонениями в обмене основного белка костной ткани - коллагена -в виде снижения концентрации продукта его биодеградации - свободного ок-сипролина.

3. Имплантация гидроксиапатита вызывает физиологическую реакцию симпато-адреналовой и гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковой систем, характерную для воздействия слабых раздражителей, в виде небольшого увеличения уровня адреналина в надпочечниках в первый месяц с последующим его возвращением к норме на фоне увеличения концентрации 11-оксикортикостероидов в надпочечниках и крови при их снижении в печени. Гормональные показатели состояния надпочечных желез у крыс не указывают на стрессорный эффект эктопической имплантации аллогенного гидроксиапатита.

4. Введение суспензии аллогенного гидроксиапатита, не вызывает в течение 2 месяцев отрицательных, выходящих за пределы физиологической нормы сдвигов в состоянии исследованных биохимических показателей крови, характеризующих метаболизм костной ткани, функционального состояния коркового и мозгового слоя надпочечников, перекисного окисления липидов. Небольшое снижение уровня кальция в крови при введении гидроксиапатита не выходит за пределы физиологической нормы и не может рассматриваться как проявление нарушения гомеостаза кальция.

оксипролин) в крови животных и сопровождается образованием соединительнотканной капсулы вокруг имплантата.

6. Внутримышечное введение суспензии гидроксиапатита животным, которым был одновременно имплантирован деминерализованный костный мат-рикс, приводит к уменьшению биохимических показателей свободнорадикаль-ного окисления, что проявляется в снижении уровня малонового диальдегида в печени и селезенке, диеновых конъюгатов и кетонов в мышцах и увеличении каталазной активности в печени по сравнению с животными, которым имплантировали деминерализованный костный матрикс без введения гидроксиапатита.

7. Имплантация смеси аллогенного гидроксиапатита с измельченным деминерализованным костным матриксом вызывает в крови животных значительные изменения биохимических показателей метаболизма костной ткани в виде увеличения концентрации белковосвязанного и снижения свободного ок-сипролина, возрастания активности щелочной фосфатазы, свидетельствующих об активизации процессов остеогенеза.

8. Комбинированный биопластический материал не вызывает изменений концентрации кальция в крови, уровня малонового диальдегида в печени и мышцах. Морфологические исследования периферических органов иммуногенеза не обнаруживают наличия у имплантатов иммуногенных свойств. Биохимические показатели состояния надпочечников у крыс не указывают на стрес-сорный эффект эктопической имплантации аллогенного гидроксиапатита с измельченным деминерализованным костным матриксом.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Волова Л.Т., Подковкин В.Г., Власов М.Ю. Безотходное производство и получение костного материала // Сб. тез. симпоз. по проблемам тканевых банков "Биоимплантология на пороге XXI века". Москва, 2001. С. 16-17, авт. ...0,25 с.

2. Власов М.Ю. Влияние внутримышечных инъекций гидроксиапатита на обмен коллагена // Вестник Самарского госуниверситета. 2002. № 4 (26). С. 157-161.

3. Власов М.Ю., Волова Л.Т., Подковкин В.Г. Регуляция обмена коллагена внутримышечным введением гидроксиапатита // Сб. работ 68-Й итоговой научной сессии Курского государственного медицинского университета. Курск, 2002. С. 11-12, авт. ...0,5 с.

4. Власов М.Ю., Грибкова О.В., Подковкин В.Г., Волова Л.Т. Особенности обмена соединительной ткани крыс при гетеротопической имплантации аллогенного гидроксиапатита // Вестник Самарского госуниверситета. 2002. № 2 (24). С. 137-143, авт. ...Зс.

5. Подковкин В.Г., Власов М.Ю. Влияние искаженного геомагнитного поля на метаболизм соединительной ткани крыс. Электромагнитные поля и

2oo3-fl

у 15 0 67 ícto^

здоровье человека: Материалы третьей международ, конф. Москва - Санкт-Петербург, 2002. С. 88-89, авт. ...0,5 с.

6. Подковкин В.Г., Власов М.Ю. Получение аллогенного гидроксиапати-та // Актуальные вопросы современной медицины: Материалы XXXV науч. конф. Самарского военно-медицинского института. Самара, 2002. С. 276-277, авт. ...0,5 с.

7. Власов М.Ю. Влияние инъекций суспензии аллогенного гидроксиапа-тита на некоторые биохимические показатели у крыс // Материалы XXXVI науч. конф. Самарского военно-медицинского института. Самара, 2003. С. 48-50 (статья).

8. Власов М.Ю., Волова Л.Т., Подковкин В.Г., Грибкова О.В., Мичурина Н.Ю. Изучение биохимических показателей в организме крыс при применении гидроксиапатит-содержащих преператов // Материалы XXXVI науч. конф. Самарского военно-медицинского института. Самара, 2003. С. 50-51, авт. ...0,25 с.

9. Власов М.Ю., Подковкин В.Г. Гуреева Е.Г. Влияние аллогенного гид-роксиапатита и деминерализованной костной ткани на содержание малонового диальдегида и активность каталазы у крыс // Вестник Самарского госуниверситета. 2003. Специальный выпуск. С. 165-172, авт. ...3,5 с.

Подписано в печать 19.09.03 Формат 60x84/16. Бумага офсетная. Печать оперативная. Объем 1,0 п.л. Тираж 100 экз. 443011 г. Самара, ул. Академика Павлова, 1. Заказ № .

Отпечатано ООО "Универс-групп"

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Власов, Михаил Юрьевич

Ф Введение

Глава 1. Современные представления о физиолого-биохимических механизмах функционирования костной ткани (обзор литературы)

1.1. Особенности строения костной ткани и применение костнопластических материалов.

1.2. Взаимодействие органического и неорганического компонентов в процессе формирования костной ткани.

1.3. Нейроэндокринная регуляция минерального обмена.

Глава 2. Материалы и методы исследований.

2.1. Объект исследований и условия постановки эксперимента . 34 • 2.2. Методы исследований

Глава 3. Результаты собственных исследований.

0 3.1. Технология получения аллогенного гидроксиапатита.

3.2. Влияние инъекций суспензии гидроксиапатита в сочетании с имплантацией деминерализованного костного матрикса на показатели метаболизма костной ткани, уровень гормонов коры и мозгового слоя надпочечников.

3.3. Эффект применения комбинированных препаратов, содержащих гидроксиапатит и измельченную кость

3.4. Реакция гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковой, симпатоадреналовой систем и особенности показателей метаболизма костной ткани после имплантации гранулированного гидроксиапатита.

Глава 4. Обсуждение результатов.

Выводы

Введение Диссертация по биологии, на тему "Влияние эктопической имплантации аллогенного гидроксиапатита на показатели метаболизма костной ткани, функцию коры надпочечников и состояние иммунокомпетентных органов у животных"

Известно, что сложные физиолого-биохимические процессы в органах зависят от функционального состояния соединительной ткани, которая, обладая механическими, защитными и пластическими свойствами, в конечном счете поддерживает гомеостаз. Поэтому главными причинами заболеваний опорно-двигательной системы являются нарушения обменных процессов в организме, сопровождающиеся деструкцией специализированного вида соединительной ткани костной ткани. Процессы метаболизма последней обеспечиваются сложными взаимосвязанными механизмами регуляции. Наряду с местными факторами существенное значение в регуляции обмена костной ткани имеют центральные механизмы, выяснение роли которых, в частности, системы "гипоталамус-гипофиз", имеет как теоретическое, так и практическое значение.

Для восстановления поврежденных участков кости, реконструкции ее анатомической целостности, широко используют разнообразные пластические материалы биологического (Волова JT.T., 1986; 1988; Брус И.Г. с соавт., 1989) и неорганического (Хамраев Т.К. с соавт., 1994; Панкратов А.С., 1995; Строганова Е.Е. с соавт., 2001; Oda S. е.а., 1997; Yuan Н. е.а., 2001) происхождения. Однако в ряде случаев, когда уменьшение костной массы происходит при различных нарушениях обменных процессов в организме, возникает необходимость в нормализации костного ремоделирования на системном уровне.

За последнее десятилетие в литературе появились экспериментальные данные демонстрирующие остеогенные свойства синтетического кальций-фосфатного соединения - гидроксиапатита (ГАП) - и биосовместимых материалов на его основе (Безруков В.М., Григоръян А.С., 1996; Литвинов С.Д., 1995; Снетков А.И. с соавт., 2001; Zambonin G., Grano М., 1995; Bonucci Е. е.а., 1997; Goto Т. е.а. 2001). В ряде экспериментальных моделей на животных показано, что эктопическое введение ГАП в мышечную ткань влияет на остеоин-дуктивные процессы (Ripamonti U., 1996, 2000; Zong J. е.а., 1997; Gosain А.К. е.а., 2002). Существенным недостатком данных работ является отсутствие системного подхода в изучении реакции организма в ответ на введение композитных биоматериалов, которые существенно отличаются по химическому составу и биологическим свойствам от естественного ГАП костной ткани. Прежде всего, недостаточное внимание уделено изменениям со стороны эндокринной системы и их взаимосвязи с обменом основного белка костной ткани - коллагена -при использовании ГАП. До настоящего времени остается неясным вопрос о регулирующем влиянии гормональных и ферментативных систем на остеогенные процессы, происходящие в костной ткани.

Основные задачи исследования.

1. Разработать технологию получения аллогенного ГАП из костной ткани.

3. Изучить реакцию организма животных на одновременную имплантацию ДКМ и аллогенного ГАП.

Научная новизна.

1. В проведенном исследовании впервые дана комплексная оценка реакции организма животных на эктопическую имплантацию аллогенного ГАП и его смеси с ДКМ на ряд жизненно важных систем. Выявлены изменения биохимических показателей метаболизма костной ткани, свидетельствующие о стимуляции остеогенеза.

Установлено, что реакция организма на эктопическую имплантацию ГАП и его смесь с измельченным ДКМ носит комплексный характер и включает физиологические изменения ряда систем: метаболизма костной ткани, функционального состояния С АС, ГГНС, перекисного окисления липидов.

Разработана технология получения ГАП из костной ткани, близкого по составу к минеральному компоненту кости. На его основе созданы новые костно-пластические материалы, которые в настоящее время применяются в практическом здравоохранении. Дано экспериментальное обоснование их эффективности. Установлено, что эктопическая имплантация этих материалов не вызывает отрицательных сдвигов в состоянии исследованных показателей метаболизма костной ткани, перекисного окисления липидов, периферических органов иммуногенеза, САС и ГГНС.

Основные положения, выносимые на защиту.

Заключение Диссертация по теме "Физиология", Власов, Михаил Юрьевич

Выводы

3. Имплантация гидроксиапатита вызывает физиологическую реакцию симпато-адреналовой и гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковой систем, характерную для воздействия слабых раздражителей, в виде небольшого увеличения уровня адреналина в надпочечниках в первый месяц с последующим его возвращением к норме на фоне увеличения концентрации 11 -оксикортикостероидов в надпочечниках и крови при их снижении в печени. Гормональные показатели состояния надпочечных желез у крыс не указывают на стрессорный эффект эктопической имплантации аллогенного гидроксиапатита.

4. Введение суспензии аллогенного гидроксиапатита не вызывает в течение 2 месяцев отрицательных, выходящих за пределы физиологической нормы сдвигов в состоянии исследованных биохимических показателей крови, характеризующих метаболизм костной ткани, функционального состояния коркового и мозгового слоя надпочечников, перекисного окисления липидов. Небольшое снижение уровня кальция в крови при введении гидроксиапатита не выходит за пределы физиологической нормы и не может рассматриваться как проявление нарушения гомеостаза кальция.

5. Имплантация гранулированного гидроксиапатита в виде блока вызывает одновременно увеличение биохимических показателей как процессов биосинтеза (белковосвязанный оксипролин), так и распада коллагена (свободный оксипролин) в крови животных и сопровождается образованием соединительнотканной капсулы вокруг имплантата.

7. Имплантация смеси аллогенного гидроксиапатита с измельченным деминерализованным костным матриксом вызывает в крови животных значительные изменения биохимических показателей метаболизма костной ткани в виде увеличения концентрации белковосвязанного и снижения свободного оксипролина, возрастания активности щелочной фосфатазы, свидетельствующих об активизации процессов остеогенеза.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Власов, Михаил Юрьевич, Самара

1. Александров В.Н. Гуморальный иммунный ответ после травмы различной тяжести // Патол. физиология и эксперим. терапия. 1983. № 4. С. 70-73.

2. Алексеев В.Н. Курс качественного полумикроанализа. М.: Химия, 1973. 584 с.

3. Ананькин В.П. Свободнорадикальное окисление и его роль в биологических процессах. / Биологический скрининг, механизм действия и токсиметрия новых продуктов органического синтеза: Пермь, 1986. 322 с.

4. Асатиани B.C. Новые методы биохимической фотометрии. М.: Наука, 1965. С. 436-437.

5. Ахкубекова Н.К., Марова Е.И., Рожинская Л.Я. и др. Показатели кальций-фосфорного обмена и костного метаболизма у больных диффузным токсическим зобом // Проблемы эндокринологии. 1997. Т. 43. № 5. С. 12-16.

6. Безруков В.М., Григорьян А.С. Гидроксилапатит как субстрат для костной пластики: теоретические и практические аспекты проблемы // Стоматология. 1996. Т. 75. №> 5. С. 7-12.

7. Белогоров С.Б. Закономерности и механизмы развития асептического воспаления при стрессе и адаптации к высотной гипоксии Автореф. дис.канд. мед. наук. Иркутск, 1994. 18 с.

8. Бельченко Д.И. Влияние блокады передачи нервного возбуждения в вегетативных ганглиях на секреторную и экскреторную функцию пищеварительного тракта / Труды Калининского мед. ин-та. 1962. Вып. 8. С. 132-140.

9. Берченко Г.Н. Биоактивные кальцио-фосфатные материалы (КФМ) и стимуляция репаративного остеогенеза. // Сб. тез. междунар. симпоз. "Биоимплантология на пороге XXI века". М.; 2001. С.37-38.

10. Бордюшкова Ю.Н., Гаркави JI.X. Квакина Е.Б. Куликов JI.A. Влияние электрического раздражения гипоталамуса на содержание в крови калия и кальция // Материалы XIV конф. физиологов Юга РСФСР. Краснодар, 1962. С.38.39.

11. Брискин А.И. Биологическое значение тирокальцитонина / Биохимические исследования в травматологии и ортопедии: Сб. науч. трудов. М.: Медицина, 1972. С. 150-153.

12. Брус И.Г., Топор Б.М., Беденкова О.Е. Костная пластика формализованными трансплантатами. Кишинев: Штиинца, 1989. 48 с.

13. Бутолин Е.Г., Данилов Г.Е., Шараев П.Н. Уровень гормонов надпочечников и обмен коллагена в стенке аорты при воздействиях на миндалевидный комплекс // Пробл. эндокринологии. 1982. Т. 28. № 4. С. 59-62.

14. Вишневская Т.М., Ляшевская Т.Н. Определение содержания кальция в сыворотке крови с помощью мурексид-глицеринового реактива // Лаб. Дело. 1976. №7. С. 444.

15. Волова Л.Т. Способ приготовления и свойства деминерализованного костного матрикса из костей плодов // Вопросы клинической и экспериментальной медицины / Куйб. мед. ин-т. Куйбышев, 1986. С 76-79.

16. Волова Л.Т. Биологические свойства деминерализованных костей плода и особенности регенерации костной ткани реципиента при их трансплантации / Материалы областной конференции ВОИР. Куйбышев, 1988. С.22-24.

17. Волова Л.Т., Кривощеков Е.П., Григорьев С.Г. и др. Заготовка и консервирование биологических тканей и их использование в практическом здравоохранении / Методические рекомендации. Куйбышев, 1987. С. 11-14.

18. Волова Л.Т., Подковкин В.Г. Способ получения аллогенного гидроксиапатита. Патент на изобретение № 2168998. Приоритет от 14.02.2000г. РФ.

19. Давыдов В В. Гипоталамо-гипофизарно-адреналовая система при шо-когенном стрессе в эксперименте и клинике / Нервные и эндокринные механизмы стресса. Кишинев: Штиинца, 1980. С. 104-121.

20. Ельский В.Н., Марева Т.Е., Якубенко Е.Д., Манаков А.К. Метаболические изменения в крови и тканях печени и почек крыс при травматическом шоке / Патогенез реакций организма на необычные стрессорные воздействия. Кишинев: Штиинца, 1988. С. 6-10.

21. Емельяненко С.М. Влияние интенсивности мышечной работы на некоторые биохимические показатели слюны спортсменов // Теория и практика физической культуры. 1972. № 2. С. 38-41.

22. Зайдман A.M., Сигарева Н.А. Влияние биологически активного препарата "Плазмарал" на регенерацию костной ткани в эксперименте // Ортопедия, травматология и протезирование. 2000. №2. С. 10-12.

23. Исаева В.А., Базанов Е.А. Изучение роли витамина D в обмене коллагена костной ткани белой крысы // Вопросы питания. 1974. №1. С. 45-59.

24. Кахана М.С. Патофизиология гипоталамуса. Кишинев: Картя молдо-веняскэ, 1961.

25. Колпаков М.Г. Механизмы кортикостероидной регуляции функций организма. Новосибирск. Наука, 1978. 153 С.

26. Колб В.Г., Камышников B.C. Справочник по клинической химии. Минск: Беларусь, 1982. С. 121-125.

27. Калиман П.А. Биохимия гормонов. Харьков, 1985. С. 9-22.

28. Каплан П.М. Рецепция эндокринных желез. Харьков: Изд-во Харьковского ун-та, 1961. С. 131-133.

29. Королюк М.А., Иванова Л.И., Майорова И.Г., Токарев В.Е. Метод определения активности каталазы // Лабораторное дело. 1988. №1. С. 16-19.

30. Костюк В.А. Использование системы гептан-изопропанол для экстракции первичных продуктов перекисного окисления липидов // Украинский биохимический журнал. 1991. №1. С. 98-101.

31. Крель А.А., Фурцева Л.Н. Методы определения оксипролина в биологических жидкостях и их применение в клинической практике // Вопр. мед. химии. 1968. № 6. С. 635-640.

32. Крешков А.П., Ярославцев А.А. Курс аналитической химии. Кн.2. Количественный анализ. М.: Химия, 1968. С. 343.

33. Куприянов В В., Караганов Я.Л., Козлов В.И. Микроциркуляторное русло. М. Медицина, 1975.

34. Кууз Д.А. Стероидная остеопатия // Проблемы эндокринологии. Т. 16. №1. 1970. С. 106-112.

35. Ланда В.А., Ковалева Г.В., Мурадов И. Состояние минерального компонента костной ткани при применении тирокальцитонина / Биохимические исследования в травматологии и ортопедии: Сб. науч. трудов. М.: Медицина, 1972. С. 163-164.

36. Литвинов С.Д. Ершов Ю.А. Костные протезы на основе гидроксосолей // Неорганические материалы. 1995. Т. 31. № 5. С. 690-693.

37. Мазуров В.И. Биохимия коллагеновых белков. М.: Медицина, 1974. 248 с.

38. Макарченко А.Ф., Златин Р.С. Гипоталамо-кортикальные влияния. Нейрофизиологические и нейробиохимические механизмы. Киев: АН УССР, 1980. С. 246.

39. Меркулов Г.А. Курс патогистологической техники. М.: Медицина, 1969.

40. Ньюмен У., Ньюмен М. Минеральный обмен кости. М.: Иностранная литература, 1961. 270 с.

41. Панкратов А.С. Лечение больных с переломами нижней челюсти с использованием ОС-ТИМ-100 (гидроксилапатит ультравысокой дисперсности) как оптимизатора репаративного остеогенеза: Автореф. дис. . канд. мед. наук. М„ 1995. 19 с.

42. Подковкин В.Г. Микромодификация метода определения 11-оксикортикостероидов. Деп. в ВИНИТИ 4.7.1988 №5348-В 88 (а).

43. Подковкин В.Г. Микрометод определения катехоламинов в крови и тканях мелких лабораторных животных. Деп. в ВИНИТИ 4.7.1988 №5349-В 88б).

44. Подрушняк Е.П., Суслов Е.И. Методы исследования костной системы. Киев: Здоров'я, 1975. 110 с.

45. Попов Е.М. Структурно-функциональная организация белков. М.: Наука, 1992. 358 с.

46. Прохончуков А.А., Жижина НА, Тигронян Р. А. Гомеостаз костной ткани в норме и при экстремальном воздействии // Проблемы космической биологии. Т. 49. М., 1984. С. 136 162.

47. Розен В.Б. Основы эндокринологии. М.: Наука, 1994. 386 с.

48. Романенко В.Д. Желчеобразовательная функция печени и ее значение в межуточном обмене кальция у собак с портокавальными анастомозами // Па-тол. физиол. и эксперим. терапия. 1967. № 4. С. 69-71.

49. Савельев В.И., Родюкова Е.Н. Реакция организма на трансплантацию костной ткани. Новосибирск: Наука, 1985. 168 с.

50. Савельев В.И., Родюкова Е.Н. Трансплантация костной ткани. Новосибирск: Наука, 1992. 220 с.

51. Сазонова Н И., Рожинская Л.Я., Марова Е.И. и соавт. Особенности развития остеопении при недостаточности гипоталамо-гипофизарной системы // Остеопороз и остеопатии. 1998. № 3. С. 24-27.

52. Селье Г. Очерки об адаптационном синдроме. М., 1960. 170 с.

53. Скоблин А.П., Белоус A.M. Микроэлементы костной ткани. М.; Медицина, 1968. 232 с.

54. Снетков А.И., Берченко Т.Н., Касымов А.И, Франтов А.Р. Использование гидроксиапатит-содержащего материала при переломах у детей // Сб. тез. междунар. симпоз. "Биоимплантология на пороге XXI века". М.; 2001. С.103.

55. Солодков А.С. Состояние основного обмена у подводников и водолазов // Военно-медицинский журнал. 1966. №5. С.60-61.

56. Стекольников Л.И. Современные представления о химическом строении и механизме действия тиреокальцитонина / Биохимические исследования в травматологии и ортопедии: Сб. науч. трудов. М.: Медицина, 1972. С. 153-155.

57. Строганова Е.Е., Михайленко Н.Ю., Батрак И.К. Биоактивная каль-цийфосфатная стеклокерамика для костного эндопротезирования. // Сб. тез. междунар. симпоз. "Биоимплантология на пороге XXI века". М.; 2001. С. 112113.

58. Ткачук В.А. Введение в молекулярную эндокринологию. М.: Изд-во МГУ, 1983. С. 121-160.

59. Торбенко В.П. Биохимические процессы обызвествления костной ткани. М.: Медицина, 1963. С. 776-783.

60. Торбенко В.П., Касавина Б.С. Функциональная биохимия костной ткани. М.; Медицина, 1977. 272 с.

61. Фролов Ю.П. Математические методы в биологии. ЭВМ и программирование: Теоретические основы и практикум. Самара: Самарский университет, 1997. 265 с.

62. Филаретов А.А., Подвигина Т Т., Филаретова Л.П. Адаптация как функция гипофизарно-адренокортикальной системы. С.-Пб.: Наука, 1994. 129 с.

63. Хамраев Т.К., Рассадин A.M., Емиленко Г.И. Восстановление костных дефектов челюстей гидроксилапатитколлагеновым биокомпозитным материалом / Вопросы организации и экономики в стоматологии. Екатеринбург, 1994. С. 135-136.

64. Хмельницкий O.K., Некачалов В.В., Зиновьев А.С. Общая патоморфо-логия костно-суставного аппарата. Новосибирск: Наука, 1983. 192с.

65. Хомулло Г.В. Роль гормональных факторов в регуляции репаративных процессов в тканях / Биохимические исследования в травматологии и ортопедии: Сб. науч. трудов. М.; Медицина, 1972. С. 157-159.

66. Хит Д., Маркс С. Дж. Нарушение обмена кальция. М.: Медицина, 1985. 334 с.

67. Хэм А., Кормак Д. Костная ткань / Гистология. Т. 3. М.: Мир, 1983. С. 19- 131.

68. Чулкова Т.М., Орехович В.Н. Биологическое исследование ростовогогормона по включению радиоактивного пролина в проколлаген кожи крыс П Прбл. эндокринол. 1967. Т. 13. № 2. С. 93-96.

69. Шаляпина В.Г., Ракицкая В.В. Гипофизарно-адреналовая система и мозг. J1.: Наука, 1976.

70. Шехтер А.Б., Николаев А.В., Берченко Г.Н. Заживление ран как ауто-регуляторный процесс // Арх. пат. 1977. № 5. С. 25-32.

71. Юдаев Н.А., Афиногенов С.А. Биохимия гормонов и гормональной регуляции. М.: Наука, 1976. С. 171-269.

72. Abu Е.О., Bord S., Horner А. е.а. The expression of thyroid hormone receptors in human bone//Bone. 1997. Vol. 21. No. 2. P. 137-142.

73. Aliopoulos M.A., Goldhaber P., Munson P.L. Thyrocalcitonin inhibition of bone resorbtion induced by parathyroid hormone in tissue culture // Science. 1966. Vol. 151. P. 330-331.

74. Anderson H.C. Normal and abnormal mineralization in mammals // Trans. Am. Soc. Artif. Intern. Organs. 1981. Vol. 27. P. 702-708.

75. Aspenberg P., Lohmander L.S., Thorngren K.G. Failure of bone induction by bone matrix in adult monkeys // J. Bone Joint. Surg. Br. 1988. Vol. 70. No. 4. P. 625-627.

76. Banovac K., Koren E. Triiodothyronine stimulates the release of membrane-bound alkaline phosphatase in osteoblastic cells // Calcif. Tissue Int. 2000. Vol. 67. No. 6. P. 460-465.

77. Benghuzzi H.A., England B.G., Bajpai P.K. Controlled release of hydro-philic compounds by resorbable and biodegradable ceramic drug delivery devices // Biomed. Sci. Instrum. 1992. Vol. 28. P. 179-182.

78. Bonucci E., Marini E., Valdinucci F., Fortunato G. Osteogenic response to hydroxyapatite-fibrin implants in maxillofacial bone defects // Eur. J. Oral Sci. 1997. Vol. 105. No. 6. P. 557-561.

79. Bockman R.S., Weinerman S.A. Steroid-induced osteoporosis // Orthop. Clin. North. Am. 1990. Vol. 21. No. 1. P. 97-107.

80. Boskey A.L. Current concepts of the physiology and biochemistry of calcification // Clin. Orthop. 1981. No. 157. P. 225-257.

81. Boissy P., Saltel F., Bouniol C. e.a. Transcriptional activity of nuclei in multinucleated osteoclasts and its modulation by calcitonin // Endocrinology. 2002. Vol. 143. No. 5. P.

82. Boskey A.L. Mineral-matrix interactions in bone and cartilage // Clin. Orthop. 1992. No. 281. P. 244-274.

83. Boskey A.L., Bullough P.G. Cartilage calcification: normal and aberrant // Scan. Electron Microsc. 1984. (Pt. 2). P. 943-952.

84. Campos M.S., Barrionuevo M., Alferez M.J. e.a. Interactions among iron, calcium, phosphorus and magnesium in the nutritionally iron-deficient rat // Exp. Physiol. 1998. Vol. 83. No. 6. P. 771-781.

85. Care A.D., Cooper C.W., Duncan Т., Orimo H. Parathyroid hormone and tyrocalcitonin // Excerpta Med. Found. 1968. P. 417-427.

86. Care A.D. Development of endocrine pathways in the regulation of calcium homeostasis // Baillieres Clin. Endocrinol. Metab. 1989. Vol. 3. No. 3. P. 671-688.

87. Caverzasio J., Bonjour J. Characteristics and regulation of Pi transport in osteogenic cells for bone metabolism // Kidney Int. 1996. Vol. 49. No. 4. P. 975-980.

88. Centrella M., Rosen V., Wozney J.M. e.a. Opposing effects by glucocorticoid and bone morphogenetic protein-2 in fetal rat bone cell cultures // J. Cell Bio-chem. 1997. Vol. 67 No. 4. P. 528-540.

89. Chai В., Tang X., Li H. Ultrastructural investigation of calcification and ossification in experimental fracture healing with special reference to osteogenic role of fibroblasts // Chin. Med. J. 1997. Vol. 110. No. 4. 274-278.

90. Chen Q., Kaji H., Sugimoto Т., Chihara K. Testosterone inhibits osteoclast formation stimulated by parathyroid hormone through androgen receptor // FEBS Letters. 2001. V. 491. № 1-2. P. 91-93.

91. Cole B.J., Bostrom M.P., Pritchard T.L. e.a. Use of bone morphogenetic protein 2 on ectopic porous coated implants in the rat // Clin. Orthop. 1997. No. 345. P. 219-228.

92. Cowles E.A, DeRome M.E., Pastizzo G. e.a. Mineralization and the expression of matrix proteins during in vivo bone development // Calcif. Tissue Int. 1998. Vol. 62. No. 1. P. 74-82.

93. Czerwiec F.S., Liaw J.J., Liu S.-B. e.a. Absence of androgen-mediated transcriptional effects in osteoblastic cells despite presence of androgen receptors // Bone. 1977. Vol .21. No. 1. P. 49-56.

94. Defranco D.J., Lian J.B., Glowacki J. Differential effects of glucocorticoid on recruitment and activity of osteoclasts induced by normal and osteocalcin-deficient bone implanted in rats // Endocrinology 1992.Vol. 131. No. 1. P. 114-121.

95. Delany A.M., Dong Y., Canalis E.J. Mechanisms of glucocorticoid action in bone cells // Cell Biochem. 1994. Vol. 56. No. 3. P. 295-302.

96. Dale D.C. Effect of calcitonin on parathyroid secretion // Endocrinology. 1965. Vol. 77. No. 4. P. 725-730.

97. Deng L., Tang X., Chai B. Regulatory factors of osteogenic phenotypical experession by fibroblasts in vitro // Zhongguo Xiu Fu Chong Jian Wai Ke Za Zhi. 1998. Vol. 12. No. 4. P. 236-240.

98. Dinkel K., Ogle W.O., Sapolsky R.M. Glucocorticoids and central nervous system inflammation // J. Neurovirol. 2002. Vol. 8. No. 6. P. 513-528.

99. Dinkel K., MacPherson A., Sapolsky R.M. Novel glucocorticoid effects on acute inflammation in the CNS // J. Neurochem. 2003. Vol. 84. No. 4. P. 705-716.

100. Erdmann J. Storch S., Pfeilschifter J. e.a. Effects of estrogen on the concentration of insulin-like growth factor-I in rat bone matrix // Bone. 1998. Vol. 22. No. 5. P. 503-507.

101. Farley J.R., Stilt-Coffing B. Apoptosis may determine the release of skeletal alkaline phosphatase activity from human osteoblast-line cells // Calcif. Tissue. Int. 2001. Vol. 68. No. l.P. 43-52.

102. Fernandez M., Minguell J.J. Hydrocortisone regulates types I and III collagen gene expression and collagen synthesis in human marrow stromal cells // Biol. Re. 1997. Vol. 30. No. 2. P. 85-90.

103. Foster G. V., Doyle F.H., Bordier P., Matrait H. Effect of thyrocalcitonin on bone//Lancet. 1966. Vol. 2. P. 1428-1431.

104. Fujieda M., Takao N., Kiriu M. e.a. Age-dependent decline in bone nodule formation stimulating activity in rat serum is mainly due to the change in the corti-costerone level // J. Cell Biochem. 2001. Vol. 81. No. 3. P. 547-556.

105. Fujisawa R., Nodasaka Y. Kuboki Y. Further characterization of interaction between bone sialoprotein and collagen // Calcif. Tiss. Int. 1995. Vol. 56. No. 2. P. 140-144.

106. Gabrielli M.A., Marcantonio Junior E., Goissis G. e.a. Hydroxylapatite implants with or without collagen in the zygomatic arch of rats // Braz. Dent. J. 2001. Vol. 12. No. l.P. 9-15.

107. Gosain A.K., Song L., Riordan P., Amarante M.T. e.a. A 1-year study of osteoinduction in hydroxyapatite-derived biomaterials in an adult sheep model: part I // Plast. Reconstr. Surg. 2002. Vol. 109. No. 2. P. 619-630.

108. Goto Т., Kojima Т., Iijima T. e.a. Resorption of synthetic porous hydroxy-apatite and replacement by newly formed bone // Orthop. Sci. 2001.Vol. 6. No. 5. P. 444-447.

109. Gur A., Colpan L., Nas K. e.a. The role of trace minerals in the pathogenesis of postmenopausal osteoporosis and a new effect of calcitonin // J. Bone Miner. Metab. 2002. Vol. 20. No. 1. P. 39-43.

110. Hauschka P.V., Chen T.L., Mavrakos A.E. Polypeptide growth factors in bone matrix // Ciba Found. Symp. 1988. No. 136. P. 207-225.

111. Henri H.L., Norman A.W. Vitamin D: metabolism and biological actions II Ann. Rew. Nutr. 1984. No. 4. P. 493-520.

112. Heersche J.N. Mechanism of osteoclastic bone resorption: a new hypothesis // Calcif. Tissue Res. 1978. Vol. 26. No. 1. P. 81-44.

113. Herr Y., Matsuura M., Lin W.L. e.a. The origin of fibroblasts and their role in the early stages of horizontal furcation defect healing in the beagle dog // J. Periodontal. 1995. Vol. 66. No. 8. P. 716-730.

114. Hock J.M., Krishnan V., Onyia J.E. e.a. Osteoblast apoptosis and bone turnover // J. Bone Miner. Res. 2001. Vol. 16. No. 6. P. 975-984.

115. Hsu W.H., Cooper C.W. Hypercalcemic effect of catecholamines and its prevention by thyrocalcitonin // Calcif. Tissue Res. 1975. Vol. 19. No. 2. P. 125-137.

116. Hunter G.K. Role of proteoglycan in the provisional calcification of cartilage. A review and reinterpretation // Clin. Orthop. 1991. No. 262. P. 256-280.

117. Jin Q.M., Takita H., Kohgo T. e.a. Effects of geometry of hydroxyapatite as a cell substratum in BMP-induced ectopic bone formation // Biomed. Mater. Res. 2000. Vol. 51. No. 3. P. 491-499.

118. Jowell P.S., Epstein S., Fallon M.D. e.a. 1,25-Dihydroxyvitamin D3 modulates glucocorticoid-induced alteration in serum bone Gla protein and bone histomor-phometry//Endocrinology. 1987. Vol. 120. No. 2. P. 531-536.

119. Itoh S., Kikuchi M., Tanaka J. e.a. Self-organization mechanism in a bonelike hydroxy apatite/collagen nanocomposite synthesized in vitro and its biological reaction in vivo// Biomaterials. 2001. Vol. 22. No. 13. P. 1705-1711.

120. Iwata H., Sakano S., Itoh Т., Bauer T.W. Demineralized bone matrix and native bone morphogenetic protein in orthopaedic surgery // Clin. Orthop. 2002. No.395. P 99-109.

121. Kahn A.J., Partridge N.C. New concepts in bone remodeling: an expanding role for the osteoblast // Am. J. Otolaryngol. 1987. Vol. 8. No.5. 258-264.

122. Kimmel P.L., Langman C.B., Bognar В. e.a. Zinc nutritional status modifies renal osteodystrophy in uremic rats // Clin. Nephrol. 2001. Vol. 56. No. 6. P. 445-458.

123. Kivirikko K.I., Risteli L. Biosynthesis of collagen and its alterations in pathological states //Med. Biol. 1976. Vol. 54. No. 23. P. 159-186.

124. Klein C., de Groot K., Weiqun C. e.a. Osseous substance formation induced in porous calcium phosphate ceramics in soft tissues // Biomaterials. 1994. Vol. 15. No 1. P. 31-34.

125. Klein D.C., Talmage R.V. Tyrocalcitonin suppression of hydroxyproline release from bone //Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 1968. Vol. 127. No. 1. P. 95-99.

126. Krebsbach P.H., Kuznetsov S.A., Satomura K. e.a. Bone formation in vivo: comparison of osteogenesis by transplanted mouse and human marrow stromal fibroblasts // Transplantation. 1997. Vol. 63. No. 8. P. 1059-1069.

127. Kumagai H., Sakamoto H., Guggino S., Filburn C.R., Sacktor B. Neurotransmitter regulation of cytosolic calcium in osteoblast-like bone cells // Calcif. Tissue Int. 1989. Vol. 45. No.4. P. 251-254.

128. Lallier Т.Е., Yukna R., Moses R.L. Extracellular matrix molecules improve periodontal ligament cell adhesion to anorganic bone matrix // J. Dent. Res. 2001. Vol. 80. No. 8. P. 1748-1752.

129. Laufer M., Ashkenazi C., Katz D., Wolman M. Orientation of collagen in wound healing // Brit. J. Exp. Path. 1974. Vol. 55. No. 3. P. 233-236.

130. Lennon D.P., Haynesworth S.E., Arm D.M. e.a. Dilution of human mesenchymal stem cells with dermal fibroblasts and the effects on in vitro and in vivo os-teochondrogenesis //Dev. Dyn. 2000. Vol. 219. No.l. P. 50-62.

131. Leone F.A., Ciancaglini P., Pizauro J.M., Rezende A.A. Rat osseous plate alkaline phosphatase: mechanism of action of manganese ions // Biometals. 1995. Vol. 8. No. 1. P. 86-91.

132. Leone F.A., Ciancaglini P., Pizauro J.M. Effect of calcium ions on rat osseous plate alkaline phosphatase activity // J. Inorg. Biochem. 1997. Vol. 68. No. 2. P. 123-127.

133. Ma Z., Yamaguchi M. Role of endogenous zinc in the enhancement of bone protein synthesis associated with bone growth of new-born rats // J. Bone Miner. Metab. 2001. Vol. 19. No. 1. P. 38-44.

134. Majeska R.J., Ryaby J.T., Einhorn T.A. Direct modulation of osteoblastic activity with estrogen // J. Bone Joint. Surg. Am. 1994. Vol. 76. No. 5. P. 713-721.

135. Mauras N. Growth hormone therapy in the glucocorticosteroid-dependent child: metabolic and linear growth effect // Horm. Res. 2001. No. 56 Suppl 1. P. 1318.

136. Meghji S. Bone remodelling // Br. Dent. J. 1992. Vol. 172. No. 6. P. 235542.

137. Mott D.A., Mailhot J., Cuenin M.F. e.a. Enhancement of osteoblast proliferation in vitro by selective enrichment of demineralized freeze-dried bone allograft with specific growth factors // J. Oral. Implantol. 2002. Vol. 28. No. 2. P. 57-66.

138. Nefussi J.R., Boy-Lefevre M.L., Boulekbache H., Forest N. Mineralization in vitro of matrix formed by osteoblasts isolated by collagenase digestion // Differentiation. 1985. Vol. 29. No. 2. P. 160-168.

139. Nishimura Y., Fukuoka H., Kiriyama M. Bone turnover and calcium metabolism during 20 days bed rest in young healthy males and females // Acta Physiol. Scand. 1994. Vol. 616. P. 27-35.

140. Nilsen R. Electronmicroscopic study of mineralization in induced heterotopic bone formation in guinea pigs // Scand. J. Dent. Res. 1980. Vol. 88. No. 4. P. 340-347.

141. Norman A.W. The mode of action of vitamin D // Biol. Rew. 1968. Vol. 43. P. 97-137.

142. Oda S., Kinoshita A., Higuchi T. e.a. Ectopic bone formation by biphasic calcium phosphate (BCP) combined with recombinant human bone morphogenetic protein-2 (rhBMP-2) // J. Med. Dent. Sci. 1997. Vol. 44. No.3. P. 53-62.

143. Ohgushi H., Goldberg V.M., Caplan A.I. Heterotopic osteogenesis in porous ceramics induced by marrow cells // J. Orthop. Res. 1989. Vol. 7. No. 4. P. 568578.

144. Okubo Y., Bessho K., Fujimura K. e.a. Comparative study of intramuscular and intraskeletal osteogenesis by recombinant human bone morphogenetic protein-2 // Oral. Surg. Oral. Med. Oral. Pathol. Oral. Radiol. Endod. 1999. Vol. 87. No. 1. P. 34-38.

145. Pallares I., Lopez-Aliaga I., Lisbona F. e.a. Effects of iron replenishment on iron, calcium, phosphorus and magnesium metabolism in iron-deficient rats // Int. J. Vitam. Nutr. Res. 1996. Vol. 66. No. 2. P. 158-165.

146. PetitClerc C., Delisle M., Martel M. e.a. Mechanism of action of Mg2+ and Zn2+ on rat placental alkaline phosphatase. I. Studies on the soluble Zn2+ and Mg2+ alkaline phosphatases // Biochem. 1975. Vol. 53. No. 10. P. 1089-1100.

147. Potts J.Т., Kronenberg H.M., Rosenblatt M. Parathyroid hormone: chemistry, biosynthesis and mode of action. // Adv. Protein Chem. 1982. Vol. 35. No. 323. P. 323-396.

148. Pepene C.E., Seek Т., Pfeilschifter J. e.a. The effects of triiodothyronine on human osteoblast-like cells metabolism and interactions with growth hormone // Exp. Clin. Endocrinol. Diabetes. 2003. Vol. 111. No.2. P. 66-72.

149. Reddi A.H. Implant-stimulated interface reactions during collagenous bone matrix-induced bone formation // J. Biomed. Mater. Res. 1985. Vol. 19. No. 3. P. 233-239.

150. Rees S.G., Shellis R.P., Embery G. Inhibition of hydroxyapatite crystal growth by bone proteoglycans and proteoglycan components // Biochem. Biophys. Res. Commun. 2002. Vol. 292. No. 3. P. 727-733.

151. Rey C., Collins В., Goehl T. e.a. The carbonate environment in bone mineral: a resolution-enhanced. Fourier transform infrared spectroscopy study // Calcif. Tiss. Int. 1989. Vol. 45. No. 2. P. 157-164.

152. Ripamonti U. Osteoinduction in porous hydroxyapatite implanted in heterotopic sites of different animal models // Biomaterials. 1996. Vol. 17. No. 1. P. 3135.

153. Ripamonti U., Crooks J., Matsaba Т., Tasker J. Induction of endochondral bone formation by recombinant human transforming growth factor-beta2 in the baboon (Papio ursinus) // Growth Factors. 2000. Vol. 17. No. 4. P. 269-285.

154. Robinson R. The significance of phosphoric esters in metabolism. 1932. 47 p. Цитировано по Скоблину А.П., Белоусу A.M. (53).

155. Rodan G.A. Introduction to bone biology // Bone. 1992. Vol. 13. Suppl. 1. S3-6.

156. Roach H. Why does bone matrix contain noncollagenous proteins? The possible roles of osteocalcin, osteonectin, osteopontin and bone sialoprotein in bone mineralization and resorption// Cell Biol. Int. 1994. Vol. 18. No. 6. P. 617-628.

157. Saltman P.D., Strause L.G. The role of trace minerals in osteoporosis // J. Am. Coll. Nutr. 1993. Vol. 12. No. 4. P. 384-389.

158. Sato К., Han D.C., Fujii Y. e.a. Thyroid hormone stimulates alkaline phosphatase activity in cultured rat osteoblastic cells (ROS 17/2.8) through 3,5,3-triiodo1.thyronine nuclear receptors // Endocrinology. 1987. Vol. 120. No. 5. P. 1873-1881.

159. Sela J., Schwartz Z., Amir D. e.a. The effect of bone injury on extracellular matrix vesicle proliferation and mineral formation // Bone Miner. 1992. Vol. 17 No. 2. P. 163-167.

160. Seto H., Aoki K., Kasugai S., Ohya K. Trabecular bone turnover, bone marrow cell development, and gene expression of bone matrix proteins after low calcium feeding in rats // Bone. 1999. Vol. 25. No. 6. P. 687-695.

161. Sodek J, Kim R.H, Ogata Y. e.a. Regulation of bone sialoprotein gene transcription by steroid hormones // Connect. Tissue Res. 1995. Vol. 32. No. 1-4. P. 209217.

162. VandenBos Т., Bronckers A.L., Goldberg H.A. Blood circulation as source for osteopontin in a cellular extrinsic fiber cementum and other mineralizing tissues // J. Dent. Res. 1999.Vol. 78. No. 11. P. 1688-1695.

163. Vaananen H.K., Hentunen Т., Lakkakorpi P. e.a. Mechanism of osteoclast mediated bone resorption // Ann. Chir. Gynaecol. 1988. Vol. 77. No 5-6. P. 193-196.

164. Vrkljan M., Thaller V., Lovricevic I. e.a. Depressive disorder as possible risk factor of osteoporosis // Coll. Antropol. 2001. Vol. 25. No. 2. P. 485-492.

165. Xia Z., Zhu Т., Du J., Wang L. Tissue response and the cytoconduction ability to collagen/hydroxyapatite heterotopic implantation // J. Tongji Med. Univ.

166. Ц, 1997. Vol. 17. No. 2. P. 118-122.

167. Yoshikawa Т., Ohgushi H., Dohi Y., Davies J.E. Viable bone formation in porous hydroxy apatite: marrow cell-derived in vitro bone on the surface of ceramics //Biomed. Mater. Eng. 1997. Vol. 7. No. 1. P. 49-58.

168. Zambonin G., Grano M. Biomaterials in orthopaedic surgery: effects of different hydroxyapatites and demineralized bone matrix synthesis by human osteoblasts //Biomaterials. 1995. Vol. 16. No. 5. P. 397-402.

169. Zileli M.S., Kanra C., Urunay G. e.a. Evidence for a hypocalcemie factor from pituitary gland // Experiencia. 1968. Vol. 24. No. 9. P. 960-961.

170. Zong J., Huipin Y., Ping Z. e.a. Osteogenic responses to extraskeletally implanted synthetic porous calcium phosphate ceramics: an early stage histomor-phological study in dogs // J. Mater. Sci. Vol. 8. 1997. P. 697-701.

Информация о работе

Власов, Михаил Юрьевич
кандидата биологических наук
Самара, 2003
ВАК 03.00.13

Диссертация

Влияние эктопической имплантации аллогенного гидроксиапатита на показатели метаболизма костной ткани, функцию коры надпочечников и состояние иммунокомпетентных органов у животных - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы