Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Влияние экстрактов лекарственных растений на биологическую активность штамма Lactobacterium plantarum 8Р-А3
ВАК РФ 03.00.07, Микробиология
Автореферат диссертации по теме "Влияние экстрактов лекарственных растений на биологическую активность штамма Lactobacterium plantarum 8Р-А3"
г
На правах рукописи
Назырова Наиля Рамилевна
ВЛИЯНИЕ ЭКСТРАКТОВ ЛЕКАРСТВЕННЫХ РАСТЕНИЙ НА БИОЛОГИЧЕСКУЮ АКТИВНОСТЬ ШТАММА ЬАСТОВАСТЕШиМ РЬАШАНиМ 8Р-АЗ
03 00 07 - «Микробиология» 03.00 04 - «Биохимия»
003162050
Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук
Уфа-2007
003162050
Работа выполнена в департаменте науки и технологии филиала «Иммунопре-парат» Федерального государственного унитарного предприятия «Научно-производственное объединение по медицинским иммунобиологическим препаратам «Микроген» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации и Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Башкирский государственный университет»
Научные руководители
доктор медицинских наук, профессор Туйгунов Марсель Маратович, доктор биологических наук, профессор Шаяхметов Изгам Фазлиахметович
Официальные оппоненты
доктор биологических наук, профессор Маннапова Рамзия Тимергалеевна, доктор биологических наук, профессор Башкатов Сергей Александрович
Ведущая организация -
Институт экологии и генетики микроорганизмов Уральского отделения Российской академии наук, г Пермь
Защита диссертации состоится
« »
ноября 2007 г в 14 часов на заседании
Регионального диссертационного совета КМ 002 124 01 при Президиуме Академии наук Республики Башкортостан по адресу 450014, г Уфа, ул Новороссийская, 105
С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке филиала «Имму-нопрепарат» ФГУП «НПО «Микроген» МЗ РФ по адресу 450014, г Уфа, ул Новороссийская, 105
Р
Автореферат разослан « » октября 2007 г
Ученый секретарь
диссертационного совета ^ 7 Лукманова К А.
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность проблемы
Проблема терапии дисбактериозов, острых кишечных инфекций и других хронических заболеваний желудочно-кишечного тракта (ЖКТ) является одной из актуальных в современной медицине [Хилько Т В , 2003] Востребованность пробиоти-ческих препаратов на фармацевтическом рынке обусловлена широкой распространенностью дисбиотических состояний среди населения нашей страны [Бондаренко В.М, 2004] В то же время в условиях конкуренции с зарубежными аналогами весьма актуальна проблема создания пробиотиков нового поколения, содержащих, помимо микроорганизмов или средств, стимулирующих их рост и развитие, другие соединения, прежде всего растительного происхождения [Фетисова А Н и др., 2004, Шендеров Б А, 2004].
Особый интерес представляют растения, оказывающие влияние как на микро-организмы-пробионты, так и на организм человека [Решетникова А В., 1993, Попкова СМ и др , 2004] В последнее время внимание специалистов привлекают растения, непосредственно используемые для коррекции дисбактериоза В частности, к ним относятся источники изохинолиновых алкалоидов Chehdomum majus и Berberis vulgaris, являющиеся официнальным сырьем во многих странах и используемые как лекарственные средства с выраженными антибактериальными и желчегонными эффектами (European Pharmacopoeia, Hungarian Pharmacopoeia) Среди растений также заслуживает внимания, издавна применяемая в народной медицине, Medicago sativa, содержащая в своем составе богатый набор биологически активных веществ (БАВ) [Салихова Н X, 2003] Растения являются незаменимым источником получения лекарственных средств с различным спектром фармакологической активности, но процесс разработки эффективных и безопасных средств из растительного сырья требует проведения комплекса исследований, базирующихся на постулатах фармацевтической и медицинской науки [Попков В А и др , 2001, Куркин В А, 2004]
Исходя из этого, одним из актуальных направлений современной биотехнологии является разработка экспериментально-теоретической базы для создания лечебно-профилактических лекарственных препаратов природного происхождения на основе микроорганизмов-пробионтов и растительного сырья, характеризующихся явлениями синтрофии и синергизма медико-биологических свойств их составляющих
Цель исследования - экспериментально-теоретическое обоснование создания фитопробиотических композиций (ФПК) на основе лактобактерий и лекарственного растительного сырья, рекомендуемых для коррекции микроэкологических нарушений кишечника
Задачи исследования:
1 Выделить адгезивно-активные микроорганизмы из культуры лактобактерий фиколл-верографиновым методом в смоделированной in vitro системе «лактобакте-рии-кишечные энтероциты»
2. Охарактеризовать популяцию адгезивно-активных лактобактерий по совокупности биологических свойств антагонистической, кислотопродуцирующей, адгезивной активности, антибиотикорезистентности, устойчивости к биологическим жидкостям желудочно-кишечного тракта.
3 Сконструировать фитосодержащие питательные среды на основе экстрактов Chehdomum majus, Berberís vulgaris и Medicago sativa, обладающих ростстимули-рующей активностью в отношении лактобактерий штамма L plantarum 8Р-АЗ
4 Провести биологический и фотохимический анализ разработанных фито-пробиотических композиций, изучить их стабильность при хранении
5 Изучить безвредность и лечебно-профилактическую эффективность фито-пробиотических композиций на модели экспериментального дисбактериоза у животных
Научная новизна
Впервые выделены адгезивно-активные микроорганизмы штамма L plantarum 8Р-АЗ фиколл-верографиновым методом в смоделированной m vitro системе «лак-тобактерии - кишечные энтероциты»
Впервые подобраны концентрации растительных экстрактов Chehdomum majus, Berberís vulgaris и Medicago sativa, стимулирующие рост лактобактерий штамма L plantarum 8Р-АЗ
Сконструированы молочно-сывороточные питательные среды с ростстимули-рующим содержанием водных извлечений из травы Chehdomum majus, плодов Berberís vulgaris и травы Medicago sativa для культивирования лактобактерий
Выявлено стимулирующее влияние растительных экстрактов Chehdomum majus, Berberís vulgaris и Medicago sativa на биологические свойства фитопробиотиче-ских композиций специфическую, антагонистическую, адгезивную, лактозосбра-живающую активности и антибиотикорезистентность
Показана лечебно-профилактическая эффективность фитопробиотических композиций на модели экспериментального дисбактериоза у лабораторных животных
Практическая значимость работы
Предложен фиколл-верографиновый метод для выделения адгезивно-активных микроорганизмов со средним показателем адгезии более 10 из культуры L plantarum 8Р-АЗ
Разработаны рецептуры молочно-сывороточных сред с водными извлечениями из Chehdomum majus, Berberís vulgaris и Medicago sativa для культивирования микроорганизмов штамма L plantarum 8Р-АЗ
Предложена для промышленного внедрения технология получения фитопробиотических композиций, перспективных для создания иммунобиологических пре-паратов-пробиотиков на основе подобранных концентраций экстрактов лекарственных растений
Предложены методы контроля лактосодержащих фитопробиотических композиций
Внедрение результатов исследования в практику
Результаты исследования включены в программу расширения ассортимента препаратов-пробиотиков на базе участка препаратов иормофлоры сывороточного цеха филиала «Иммунопрепарат» ФГУП «НПО «Микроген» МЗ РФ
Для внедрения в производство предложен фиколл-верографиновый метод выделения адгезивно-активных микроорганизмов из культуры промышленных штаммов лактобактерий
Материалы диссертации используются в учебном процессе при изложении лекционного материала и проведении практических занятий на кафедре микробиологии, вирусологии и иммунологии ГОУ ВПО «Башкирский государственный медицинский университет» Росздрава и на кафедре биохимии и биотехнологии ГОУ ВПО «Башкирский государственный университет»
Основные положения, выносимые на защиту
1 Для выделения адгезивно-активных микроорганизмов со средним показателем адгезивности более 10 из культуры лактобактерий в смоделированной m vitro системе «лактобактерии - кишечные энтероциты» предложен фиколл-верографиновый метод
2 Стимулирующие рост лактобактерий концентрации растительных экстрактов травы Chehdomum majus (0,4-0,6 %), плодов Berberís vulgaris (0,2-0,3 %), травы М sativa (0,5-0,7 %) обеспечивают эффективные кинетические параметры роста и максимальный выход биомассы лактобактерий
3 Подобранные экстракты лекарственных растений оказывают стимулирующее влияние на скорость роста и основные биологические свойства фитопробиоти-ческих композиций специфическую, антагонистическую, адгезивную, лактозосбра-живающую активности и антибиотикорезистентность
4 Компонентный состав биологически активных веществ разработанных фи-топробиотических композиций различен по количественному содержанию флаво-ноидов, алкалоидов, органических кислот, пептидов и аминокислот
5 Лечебно-профилактическая эффективность фитопробиотических композиций на модели экспериментального дисбактериоза у животных наиболее выражена у фитопробиотической композиции на основе Chelidonmm majus
Апробация работы
Материалы диссертации представлены на Международной научной конференции «Фундаментальные и прикладные проблемы медицины и биологии», Тунис, 2005, IV Международной научной конференции молодых ученых и студентов «Актуальные вопросы современной биологии», Алматы, 2006, Международной научной конференции «Химия, химическая технология и биотехнология на рубеже тысячелетий», Томск, 2006, Всероссийской научно-практической конференции в рамках XVII Международной специализированной выставки «АгроКомплекс-2007» «Проблемы и перспективы развития инновационной деятельности в агропромышленном производстве», Уфа, 2007, III Всероссийской научно-практической конференции «Проблемы экологии Южного Урала», Оренбург, 2007
Публикации
По материалам диссертации опубликовано 9 научных работ, в том числе две в ведущих рецензируемых научных журналах
Объем и структура диссертации
Диссертации изложена на 147 страницах, содержит 25 таблиц и 23 рисунка Работа состоит из введения, обзора литературы (три главы), собственных исследований (шесть глав), заключения, выводов и практических рекомендаций Список литературы включает 243 источника (156 отечественных и 87 зарубежных)
СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ
Материалы и методы исследований
Производственные штаммы микроорганизмов-пробионтов в качестве объектов исследований использовали штаммы рода Lactobacterium L plantarum 8Р-АЗ, L fermentum 90T-C4, L acidophilum К3-Ш24, L acidophilum 100 АШ, L acidophilum NK¡, L delbruecka subsp bulgaricum 8-79
Лекарственное растительное сырье трава чистотела большого (Chehdonium majus) (ГФ XI, вып 2, ст 47), плоды барбариса обыкновенного (Berberís vulgaris) (ТУ 9700-014-26795008-2005), трава люцерны посевной {Medicago sativa) (ТУ 9700005-26795008-2003) Растительное сырье прошло радиационный контроль и соответствовало требованиям норматйвно-технической документации
Белковые основы для конструирования питательных сред дрожжевой аутоли-зат (РП № 1195-02 Лактобактерин сухой), сыворотка молочная сухая подсырная распылительной сушки производства ОАО «Белебеевский ордена «Знак Почета» молочный комбинат», г Белебей (ТУ 9223-123-04610209-2002)
Материалы для контроля биологических свойств фитопробиотических композиций (ФПК) 1) для контроля антагонистической активности использовали коллекцию музейных культур, депонированную в музее РГНИИСКМБП им Л А Тарасе-вича и включающую индикаторные тест-штаммы различных таксономических групп St aureus 209, Е coll 157, Pr mirabilis H-237, Pr vulgaris 177, Sh sonnei 5063, Sh flex-neri 170 и 337, 2) для контроля адгезивной активности использовали эритроциты барана и энтероциты кишечника аутбредных крыс, 3) для контроля антибиотикорези-стентности использовали стандартные диски, пропитанные антибиотиками пени-циллинового и цефалоспоринового рядов, аминогликозидами, макролидами, тетра-циклинами, левомицетинами, полимиксинами и антибиотиками других групп, 4) для контроля устойчивости к биологическим жидкостям ЖКТ использовали желудочный сок «Эквин» производства филиала «Иммунопрепарат» ФГУП «НПО «Микроген» МЗ РФ, г Уфа и желчь медицинскую консервированную производства ООО «Мясокомбинат ростовский», г Ростов-на-Дону
Материалы для изучения эффективности ФПК на модели экспериментального дисбактериоза у животных I) антибиотик рифампицин производства ОАО «Белмед-препараты», г Минск, 2) экспериментальные животные 345 беспородных белых мышей массой (15=1-1) г и 230 белых беспородных крыс массой (170±10) г, 3) селективные питательные среды МРС-4 (ФСП 42-0061-277802) (для выращивания лакто-бактерий), агар Сабуро (ФС 42-3729-99) (для выращивания плесени и грибов), агар Эндо (ФС 42-3504-98) (для выращивания кишечных палочек), среда Блаурокка (ФСП 42-0504722405) (для выращивания бифидобактерий)
Оценку качества белковых основ и питательных сред (цветность, прозрачность, рН, содержание аминного азота, пептидов) осуществляли в соответствии с ФС 42-3874-99 «Физико-химические, химические, физические и иммунохимические методы контроля медицинских иммунобиологических препаратов» и ГФ XI
Биомассу лактобактерий получали методами статического и периодического динамического гомогенного глубинного культивирования [Басканьян И А и др, 1985, Басканьян ИА, 1992]. Использовали разработанные молочно-сывороточные среды с подобранными концентрациями экстрактов лекарственных растений, полученных по методике, регламентированной ГФ XI
Содержание жизнеспособных клеток лактобактерий контролировали бактериологическим методом, отсутствие посторонних микроорганизмов и грибов определяли бактериологическим и бактериоскопическим методами в культуре лактобактерий (ФСП 42-0061-277802) Активность кислотообразования определяли титриметриче-ским методом [Лянная А М, Гончарова Г И, 1975]
Адгезивную активность микроорганизмов-пробионтов определяли методом цитадгезии на изолированных эритроцитах барана [Брилис В И и др, 1984, 1986] и энтероцитах кишечника аутбредных крыс [Горская Е.М и др, 1989, 1990] Для выделения адгезивно-активных микроорганизмов из культуры лактобактерий использовали фиколл-верографиновый метод [Махрова Т В , 2004] Антагонистическую активность ФПК в отношении индикаторных тест-штаммов определяли методом отсроченного антагонизма [Munana РМ, Klaenhammer TR, 1987] Резистентность ФПК к антибиотикам выявляли диско-диффузионным методом при использовании стандартных дисков, пропитанных антибиотиками [МУК, 2004] Устойчивость ФПК к биологическим жидкостям определяли по изменению количества живых бактерий после совместной 2-часовой экспозиции при температуре 37 °С [Несчисляев В А., 2004] Количественное определение флавоноидов, органических кислот в составе ФПК определяли по методикам, регламентированным ГФ XI издания Сумму алкалоидов определяли по методике Г Вейса [Потопальский АИ, 1989] Фитохи-мическое изучение БАВ проводили методом восходящей хроматографии на бумаге [Баширова Р М, 2004] Аминокислотный состав изучали на аминокислотном анализаторе AAA 400 фирмы «INGOS», Чехия с использованием метода гель-фильтрации Эффективность ФПК изучали на модели экспериментального дисбактериоза у животных, вызванного пероральным введением рифампицина [Митрохин С Д, 1989] Для оценки возникших дисбиотических изменений в кишечнике исследовали бактериологический паспорт фекалий и коэффициента массы слепой кишки (КМСК) - отношение массы слепой кишки к массе тела животного [Зельцер И 3 ,1989]
Статистическую обработку экспериментальных данных проводили общепринятыми методами вариационной статистики [Ашмарин И П, Воробьев А А , 1962] с использованием программы «Statistica 6 0» Оценку значимости различий средних арифметических проводили с использованием t-критерия Стьюдента Различия считали статистически значимыми при р<0,05
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
Выделение адгезивно-активных микроорганизмов из культуры лактобактерий
Учитывая, что адгезивность является важнейшим показателем эффективности лактобактерий, нами проведены исследования по выделению из культуры среднеад-гезивного производственного штамма L plantarum 8Р-АЗ микроорганизмов с повышенным адгезивным потенциалом
Выделенные фиколл-верографиновым методом адгезивно-активные микроорганизмы имели показатель адгезии более 10 лактобактерий на 1 энтероцит кишечника крыс, процент прочно адгезированных лактобактерий - (53,5±5,2) %
Сравнительный анализ выделенных микроорганизмов из штамма L plantarum 8Р-АЗ с другими промышленными штаммами показал, что адгезивно-активные микроорганизмы не уступают по биологическим свойствам (адгезивной, антагонистической и кислотопродуцирующей активностям, антибиотикорезистентности и устойчивости к биологическим жидкостям ЖКТ) производственным штаммам, а иногда даже превосходят их (табл 1)
Так, отмечены значительные межштаммовые различия адгезивности лактобактерий Результаты анализа позволили отнести адгезивно-активные микроорганизмы штамма L plantarum 8Р-АЗ к высокоадгезивным (СПА 10,6-13,5), промышленные штаммы лактобактерий L plantarum 8Р-АЗ (исходный) и L fermentum 90Т-С4 к среднеадгезивным (СПА 5,1-7,0), остальные изученные нами штаммы лактобактерий в опытах in vitro обладали низкой адгезивностью в отношении эритроцитов барана и энтероцитов крыс (СПА 1,6-5,0)
Таблица 1
Сравнительный анализ адгезивности штаммов лактобактерий к различным типам клеток
Микроорганизмы -пробионгы n Цитадгезия к эритроцитам Цитадгезия к энтероцитам
СПА К ИАМ СПА К ИАМ
исходный (контроль) 7 5,9±0,2 64,2±1,7 9,03 6,8±0,2 63,6±1,8 10,7
адгезивно-
s о, bJ активные микроорганизмы 7 10,8±0,2* 70,3±1,6* 15,2 12,7±0,8* 75,2±1Д* 16,8
L fermentum 90Т-С4 7 5,3±0,16* 59,2±2,4* 8,9 5,6±0,11* 59,1±2,2* 9,5
L acidophilum КЗ-Ш24 7 1,9±0,3* 33,3±2,1* 5,7 2,4±0,21* 31,7±2,1* 7,6
L acidophilum 100 AUI 7 2,24±0,3* 45,9±1,8* 4,8 2,6±0,15* 34,7±0,8* 7,5
L acidophilum NKt 7 3,54±1,3* 41,5±1,8* 8,5 4,1±1,11* 47,1±0,9* 8,7
L delbrueckii subsp bulgaricum 8-79 7 4,1±0,2* 46Д±2,5* 8,9 4,5±0,45* 49,4±0,8* 9,1
Примечания
1 - СПА - средний показатель адгезии,
2 - К - коэффициент участия клеток в адгезивном процессе,
3 - ИАМ - индекс адгезивности микроорганизмов,
4 - * - различие с контролем статистически значимо (р<0,05)
Разработка технологии получения фитопробиотических композиций,
перспективных для создания пробиотиков На основании изучения стабильности биологических свойств адгезивно-активных микроорганизмов нами разработана технология получения фитопробиотических композиций
С учетом разработок последних лет [Зеленков В Н., 2002, Козьминых Ю В , 2002, Мацулевич ТВ и др , 2002], доказавших преимущество фитокоррекции дис-бактериозов, выявивших определенный перечень растительных стимуляторов роста микроорганизмов, сконструированы питательные среды на основе сухой молочной сыворотки с добавлением водных экстрактов Chelidomum majus, Berberís vulgaris и Medicago sativa (рис 1)
Рис 1 Схема получения молочно-сывороточной среды
Сочетание составляющих компонентов среды позволяет удовлетворить основные трофические потребности лактобактерий, стимулировать их рост при оптимальном содержании аминного азота (0,10-0,12 %) и получить биомассу с улучшенными органолептическими характеристиками Использование сухой молочной сыворотки обусловлено высоким содержанием в ней азотистых соединений, углеводов, минеральных солей, витаминов и микроэлементов [Несчисляев В А и др, 2004, 2005] А фармакологическая активность растительных экстрактов, в свою очередь, обусловлена наличием в них флавоноидов, алкалоидов, органических кислот, витаминов, аминокислот и других БАВ [Куркин В А , 2004].
Внесение экстрактов лекарственных растений в питательную среду оказывало существенное стимулирующее влияние на развитие лактобактерий Причем наибо-
лее выраженное влияние оказывали экстракты Chehdomum majus и Berberís vulgar is, содержащие изохинолиновые алкалоиды Как видно из рис 2, максимальный стимулирующий эффект обнаружен при концентрации экстракта Ch majus 0,4-06 % Дальнейшее повышение концентрации экстракта Ch majus вызывало снижение количества жизнеспособных клеток лактобактерий
-OS ВД DiS 1fl is 2Д 2S ЭД
Ксвденгрщнк экстражгд,- V
Рис 2 Стимулирующие рост лактобактерий концентрации экстрактов лекарственных растений
Особенно чутко реагируют лактобактерий на внесение в питательную среду экстракта В vulgaris. Стимулирующее действие экстракта В vulgaris проявлялось в концентрации 0,2-0,3 %, что почти в два раза ниже, чем в случае Ch majus
Более эффективное действие экстрактов В vulgaris объясняется наличием в нем пектина и органических кислот (яблочной, лимонной) Дальнейшее увеличение концентрации растительного экстракта приводило к резкому угнетению роста лактобактерий
Действие экстрактов Medicago sativa было выражено слабее В диапазоне концентраций 0,5-0,7 % экстракта М sativa количество лактобактерий было намного ниже, чем в присутствии экстрактов алкалоидсодержащих растений
В результате культивирования лактобактерий в молочно-сывороточных средах с подобранными концентрациями растительных экстрактов были получены биомассы с содержанием жизнеспособных клеток (7,4-9,3)х109 КОЕ/мл
Для сравнения биологической активности экстрактов растений с их синтетическими аналогами культивирование лактобактерий проводили в молочно-сывороточных средах (МС-средах) с добавлением берберина бисульфата и рутина вместо растительных экстрактов Установлено, что максимальный стимулирующий эффект на культуру лактобактерий берберин оказывает в концентрациях 0,001-0,003 мг/мл, рутин - 0,5-1,5 мг/мл Получены биомассы с содержанием жизнеспособных клеток (2,5-3,9)х109 КОЕ/мл
Сравнительный анализ позволил выявить преимущество экстрактов растений по сравнению с биологической активностью их синтетических аналогов Экстракты растений, будучи сложными по составу, содержат много ингредиентов, которые придают им ценные свойства и обеспечивают многостороннее действие на орга-
и
низм, более сильное, чем действие каждого из них в отдельности, В дальнейших исследованиях в качестве источника ГСАВ, добавляемых в питательную среду, мы использовали растительные экстракты.
При сравнительном изучении биологических И биохимических свойств ФПК установлено, что наиболее выраженной ингибирующей антагонистической активностью обладала композиция на основе С/г. та]их с зоной подавления индикаторных тест-штаммов в пределах 37-42 мм (рис. 3).
Sh. Eh Sh. Е coli Sl. Pr РГ.
FleKTieri 'wei sonnei 157 aureus miratiiiis vulgaris 170 337 5063 209 237 177
тест-штаммы
Рис. 3. Антагонистическая активность фитопробиогических композиций на основе Chelidoniwm majus
* - различие с контролем статист чески Значимо (р<0,05)
Выявлено, что под влиянием водных извлечений из лекарственного растительного сырья происходит повышение адгезивных свойств ФПК (рис. 4),
Г"-
¡ja - vi' . гл- .
% > ^ 4 • и" «От ■ •
t Ч®
' кг
Е
1. • щ
аГ
J
-to-i 1 i-
Рис. 4. Влияние ф ито п роб и оти ч ее к их композиций на колонизацию кишечного эпителия крысы лактобактериями (окраска аз у ром А, ув, 300).
Примечание: А - JIE (К); Б - i\h-Ch. majas, В Jlb-íi. vulgaris; Г JIE-AÍ saliva.
При оценке адгезивной активности (АА) ФПК к эпителиальным клеткам кишечника крыс установлена статистическая значимость различий АА ЛБ-Сй majus, Ш-В vulgaris и ЛБ-М sativa с результатами АА ЛБ (К) Так, ФПК характеризуются высокой адгезивностью. ЛБ-Сй majus с СПА - (14,3±0,77) микробных клеток, адге-зированных на одной эпителиальной клетке, ЛБ-В vulgaris - (12,8±0,76) и ЛБ-М sativa — (11,3±0,75)
Сравнительное изучение резистентности ФПК к ряду из 18 антибиотиков позволило выявить высокую устойчивость ФПК к антибиотикам (табл 2)
Таблица 2
Антибиотикорезистентность фитопробиотических композиций
\Антибиотики Вариант \ Пенициллины Аминогликозиды Макролиды Цефало-спорины Антибиотики разных групп Тетрациклин Левомицетин Полимиксин
Ампициллин Пенициллин Карбенициллин Оксациллин Гентамицин Эритромицин Цефгазидин Цефалексин Цефазолин Цефтриаксон Линкомицин Ципрофлоксацин Норфлоксацин | Ванкомицин Имипинем Тетрациклин Левомицетин_j Ьолимиксин
Зона заде ржки роста микроорганизмов-пробионгов (мм)
ЛБ-Cft. majus 10 + + + + + + + 15 + 16 + + + + + + +
ЛБ-В vulgaris б 16 + + 10 + + 16 10 16 16 + 10 + + + + +
ЛБ-М saliva 10 16 10 + 10 10 + 18 10 16 20 8 + 8 + + 10 +
ЛБ (К) 15 30 18 10 22 15 + 24 20 20 10 6 8 20 10 + 12 +
Примечание
1 «+» - штамм микроорганизма устойчив к воздействию антибиотика в терапевтической концентрации (нет задержки роста исследуемого штамма),
«-» - штамм микроорганизма не устойчив к воздействию антибиотика в терапевтической концентрации (нет роста исследуемого штамма),
«п» - зона задержки роста исследуемого штамма (мм)
2 Резистентными считали штаммы, зона задержки роста которых составляла 0-5 мм, малочувствительными - 6-10 мм, чувствительными -11-20 мм, высокочувствительными - более 20 мм
При проведении контроля резистентности ФПК к биологическим жидкостям ЖКТ в жестких условиях m vitro также выявили высокую устойчивость ФПК к желчи и хлористоводородной кислоте желудочного сока, оказывающим неспецифическое бактерицидное действие на микроорганизмы-пробионты при прохождении через ЖКТ.
Далее нами был исследован компонентный состав ФПК При изучении содержания пептидов и аминокислот в ФПК до и после культивирования лактобактерий не выявлено статистической значимости различий (р>0,05) (табл 3) Это объясняется тем, что лактобактерии в процессе роста сами вырабатывают аминокислоты [Хавкин А И , 2006]
Таблица 3
Аминокислотный состав фитопробиотических композиций
Аминокислота Содержание аминокислот, мг/мл
ЛБ (К) ЛБ-СЛ majus ЛБ-fi vulgaris Ш-М. sativa
а 1 б а | б а | б а | б
I. Ациклические 1 алифатические незамещенные аминокислоты (моноаминомонокарбоновые кислоты)
глицин 1,039 1,023 1,090 1,071 1,078 1,057 3,690 3,574
аланин' 2,237 2,135 , 2,354 2,203 2,285 2,093 4,805 4,539
валин' 1,493 1,450 1,592 1,499 1,940 1,895 3,240 3,192
лейцин' 3,795 3,801 3,881 3,157 4,021 3,783 4,492 4,478
изолейцин' 1,284 1,145 1,321 1,302 1,509 1,448 2,829 2,750
2 алифатические замещенные аминокислоты гидроксиаминокислоты
серии 0,959 0,937 0,988 0,970 0,993 0,995 1,875 1,869
треонин1 0,803 0,805 0,872 0,853 2,312 2,138 3,954 3,670
фосфосерин - - - - - - 1,033 0,688
таурин - - - - - - 1,390 1,231
тиоаминокислоты
мегионин' | 0,541 | 0,529 | 0,844 | 0,733 | 0,703 | 0,680 | 1,207 | 0,967
карбоксиаминокислоты
аспарагиновая кислота 0,959 0,917 1,069 0,994 3,748 3,675 7,574 6,743
глутаминовая кислота 2,086 2,138 2,397 2,179 2,519 2,309 4,621 4,490
7-аминомасля-ная кислота - - - - - - 0,139 0,087
3. днаминомонокарбоновые кислоты
лизин' 13,565 12,049 14,490 13,107 14,276 13,793 14,72 12,48
аргинин1 3,244 2,905 11,247 10,338 5,918 5,545 4,351 4,290
II Циклические
тирозин 1,117 1,203 1,673 1,781 1,397 1,258 2,612 2,522
фенилаланин' 1,423 1,409 1,771 1,695 1,786 1,590 3,520 3,307
пролин 0,536 0,380 0,795 0,712 7,015 6,954 7,308 6,914
оксипролин - - - - 4,810 4,635 4,025 3,780
III. Гете роциклические
триптофан' 0,779 0,705 1,238 1,093 0,953 0,844 0,837 0,829
гистидин' 0,888 0,697 0,976 0,858 1,824 1,594 1,235 1,220
Сумма 36,75 34,23 48,59 44,55 59,08 56,29 79,45 73,63
Примечания 1) а - до культивирования, б - после культивирования, 2) ' - незаменимые ами-
нокислоты
Сравнительный анализ количественного и качественного состава аминокислот в ФПК показал, что наиболее богата аминокислотами ФПК на основе Medicago sativa, что согласуется с данными Н X Салиховой (2003), полученными при изучении препарата «Эраконд»
Терапевтическая эффективность растений обусловлена содержанием в них комплекса разнообразных и сложных по своему химическому составу и фармаколо-гичскому действию биологически активных соединений.
В процессе культивирования лактобактерии метаболизируют некоторые вторичные метаболиты растений, в частности флавоноиды, изохинолиновые алкалоиды и органические кислоты {рис. 5). Количественное содержание флавоноидов снижается в 1,5-2,0 раза, алкалоидов - 2,5-3,0 раза и органических кислот - 2,0-3,0 раза.
ЛБ(К) Л6-СП. Л 6-в. Л6-М. фитапробиотические композиции
РвОДШяЙ
Я ДО КуЛьТИВИрОВвНЯЯ О ПОСТ! 4 культнаироазння
ЛБ (К)
фитопробиотические композиции
□ водный экстракт
■ до культивирования
□ после культивирования
Б
Рис. 5. Сравнительная характеристика содержания флавоноидов и алкалоидов в растительных экстрактах и в фигосодержащих питательных средах до и после культивирования лактобактерий
Примечание: Л - флавоноиды; Б алкалоиды.
В процессе культивирования лактобактерий изменяется спектр поглощения ЬАВ, в частности исчезают длинноволновые максимумы, обусловленные поглощением света рутином при длине волны 362 им (рис. 6). При бактериальной деградации флавоноидов образуются фенолокнелоты, обладающие высокой фунгистатиче-
ской и антиоксидантной активностью [Георгиевский В П и др , 1990, Williamson et
«х
Рис 6 Спектры поглощения компонентов культуральной жидкости после культивирования лактобактерий
Примечания 1) среда L plantarían + экстракт травы Ch majus, 2) среда L plantarum + экстракт плодов В vulgaris, 3) берберин, 4) среда L plantation + экстракт травы М sativa
В результате анализа продуктов распада флавоноидов методом восходящей бумажной хроматографии нами идентифицированы кофейная и диоксибензойная кислоты
Также с помощью этого метода с использованием в качестве свидетеля бербе-рина показано снижение содержания изохинолиновых алкалоидов в культуральной жидкости Известно, что берберин, коптизин и коризамин имеют пики в области 230, 265 и 347 нм, хелетрин, сангвинарин и аллокриптин имеют максимум адсорбции при 230 и 283 нм, а гомохелидонин, хелидонинин и протопин - при 288-290 нм [Voloshchuk et al, 2006] Как видно из рисунка, на спектральных кривых эти пики отсутствуют, что видимо, свидетельствует о том, что лактобактерии в процессе культивирования использовали изохинолиновые алкалоиды в качестве источника азота
Оценка эффективности фитопробиотических композиций на модели экспериментального дисбактериоза у животных
Оценка эффективности фитопробиотических композиций была проведена на модели экспериментального дисбактериоза кишечника белых мышей и крыс, вызванного рифампицином Дисбиотические изменения кишечной микрофлоры оценивали по результатам бактериологических исследований фекалий толстой кишки и коэффициенту массы слепой кишки (КМСК).
Таблица 4
Состояние кишечного микробиоценоза и КМСК у животных после лечения экспериментального дисбактериоза, индуцированного рифампицином
Группа животных Количество кишечной микрофлоры, lg (M±m) КМСК, % (М±ш)
лакто-бактерии бифидо-бактерии кишечная палочка грибы
Интактная 7,34±0,05 9,89±0,1 4,89±0,08 3,22±0,11 1,35±0,06
Контрольная 5,48±0,18 5,62±0,13 6,25±0,13 5,96±0,06 2,26±0,14
ЛБ (К) 5,58±0,06 6,1±0,07 6,06±0,07 5,27±0,05 2,12±0,07
ЛБ-Сй majus 7,04±0,14* 8,92±0,14* 5,36±0,11* 3,51±0,06* 1,52±0,03*
ЛБ-jS vulgaris 6,81±0,11* 8,53±0,07* 5,42±0,04* 3,67±0,04* 1,64±0,05*
ЛБ-М sativa 6,64±0,05* 8,43±0,05* 5,54±0,05* 3,80±0,04* 1,69±0,02*
* - различие с контролем статистически значимо (р<0,05)
Использование ФПК для коррекции рифампицин-индуцированного дисбактериоза способствовало нормализации показателей кишечной микрофлоры и КМСК животных уже в первые дни лечения (табл 4) Наиболее ярко прослеживалась положительная направленность изменений фекального микробиоценоза у мышей, получавших ЛБ-Ch majus При этом, 10-дневный курс у животных, получавших ЛБ (К), не приводил к достижению уровня показателей кишечного микробиоценоза ин-тактной группы
Для оценки стабильности проведенного лечения ФПК изучали показатели кишечной микрофлоры у животных в динамике через 10 дней после отмены лечения (табл 5)
Наблюдение за состоянием кишечного микробиоценоза в динамике выявило положительные сдвиги качественного и количественного состава микробиоценоза в группах мышей, получавших ФПК При сравнительной оценке групп, получавших ФПК следует отметить, что ЛБ-Сй majus по сравнению с ЛБ-В vulgaris и ЛБ-М sativa дает более стойкий клинический эффект состояние кишечного микробиоценоза продолжает улучшаться и почти достигает показателей интактной группы
Таблица 5
Состояние кишечного микробиоценоза и КМСК у животных через 10 дней после лечения экспериментального дисбактериоза
Группы животных Количество кишечной микрофлоры, lg X (M±m) КМСК, % (М±ш)
лакто-бактерии бифидо-бактерии кишечная палочка грибы
Интактная 7,34±0,05 9,89±0,1 4,89±0,08 3,22±0,11 1,35±0,06
Контрольная 5,48±0,18 5,62±0,13 6,25±0,13 5,96±0,15 2,26±0,14
ЛБ (К) 5,75±0,07 6,23±0,05 5,99±0,08 5,45±0,09 2,05±0,05
ЛБ-С/г majus 7,28±0,09* 9,53±0,09* 5,02±0,1* 3,27±0,09* 1,39±0,04*
ЛБ-Л vulgaris 7,11±0,11* 9,11±0,1* 5,32±0,08* 3,38±0,05* 1,45±0,06*
ИЬ-М sativa 6,94±0,05* 9,3±0,16* 5,41±0,04* 3,60±0,10* 1,52±0,08*
* - различие с контролем статистически значимо (р<0,05)
Результаты исследований на животных свидетельствуют о высокой лечебной эффективности лактосодержащих фитопробиотических композиций и дают основание предполагать, что применение их в клинике позволит повысить эффективность лечения дисбиотических состояний и добиться стойких клинических результатов
Таким образом, сравнительная характеристика биологических свойств ФПК, полученных в сконструированных питательных средах, позволила сделать выводы, что БАВ, экстрагированные из Ch majus, В vulgaris и М sativa, обладают ростсти-мулирующим действием в отношении лактобактерий, повышая их специфическую, антагонистическую активность, адгезивность, антибиотикорезистентность и сохраняя их устойчивость к биологическим жидкостям макроорганизма Выраженное стимулирующее влияние растительных экстрактов (из корней алтея и солодки, травы пастушьей сумки и фиалки и др ) на рост ряда микроорганизмов показано также в работах Н Г Баронец и с соавт [Баронец Н Г. и др , 2001, 2003]
Установлено, что БАВ, экстрагированные из растений Ch majus, В vulgaris и М sativa в состав питательных сред, в определенных концентрациях оказывают стимулирующий эффект на рост лактобактерий, повышая их биологическую активность Идентифицированные нами концентрации БАВ, содержащихся в составе ФПК, наряду с микроорганизмами-пробионтами и продуктами их метаболизма в совокупности оказывают выраженный терапевтический эффект, показанный нами на модели экспериментального дисбактериоза у животных
ВЫВОДЫ
1 Использование фиколл-верографинового метода в смоделированной m vitro системе «лакгобактерии - кишечные энтероциты» позволяет выделить адгезивно-активные микроорганизмы из культуры лактобактерий
2 Показано, что адгезивно-активные микроорганизмы, выделенные из штамма L plantarum 8Р-АЗ, не уступают по биологическим свойствам (адгезивной, антагонистической и кислотопродуцирующей активностям, антибиотикорезистентности и устойчивости к биологическим жидкостям ЖКТ) производственным штаммам, а иногда даже превосходят их Выявлена высокая адгезивная активность выделенных микроорганизмов из культуры лактобактерий
3 Составлены рецептуры фитосодержащих питательных сред с высокой рост-стимулирующей активностью для культивирования лактобактерий Установлена низкая ростстимулирующая активность синтетических аналогов (берберина бисульфата и рутина) по сравнению с водными экстрактами Chehdonium majus, Berberís vulgaris и Medicago sativa в отношении лактобактерий
4 Разработана технология получения фитопробиотических композиций, обеспечивающая оптимальный выход биологически активных веществ и способствующая получению на их основе стабильных целевых продуктов с улучшенными орга-нолептическими характеристиками
5 На основании оценки биологических свойств фитопробиотических композиций установлено увеличение специфической, антагонистической и адгезивной активностей и устойчивости их к антибиотикам
6 На модели экспериментального дисбактериоза у животных установлена высокая лечебно-профилактическая эффективность фитопробиотических композиций
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
Для выделения адгезивно-активных микроорганизмов из культуры промышленных штаммов лактобактерий рекомендуется использование фиколл-верографинового метода
Для получения фитопробиотических композиций рекомендуется использование молочно-сывороточных сред с подобранными концентрациями водных извлечений Chehdonium majus, Berberís vulgaris и Medicago sativa
В качестве основы иммунобиологических препаратов-пробиотиков рекомендуется использование фитопробиотических композиций на основе лактобактерий и лекарственного растительного сырья
СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ
1 Тимербаева Р X, Туйгунов М М, Назырова Н Р, Байрамгулова Г Б Поиск перспективных штаммов лакто- и бифидобактерий для конструирования новых пробиотиков//Фундаментальные исследования -М,2005 -№5.-С 93-94.
2 Назырова Н Р , Тимербаева Р X, Туйгунов М М Антибактериальная резистентность штаммов-пробионтов // Актуальные вопросы современной биологии материалы IV Международной научной конференции молодых ученых и студентов -Алматы, 2006 - С 152-153
3 Назырова Н Р , Тимербаева Р X , Туйгунов М М Разработка методологии выделения адгезивно-активных лактобактерий // Там же - С 153-154
4 Назырова Н Р , Тимербаева Р X, Туйгунов М М, Шаяхметов И Ф Влияние лекарственных растений на метаболизм и адгезивный потенциал промышленного штамма Lactobacterium plantarum 8Р-АЗ // Вестник Башкирского университета -2006 -№2 - С 59-62
5 Назырова Н Р , Тимербаева Р X., Туйгунов М М Количественная оценка адгезии штаммов молочнокислых бактерий к эпителиальным клеткам кишечника in vitro // Химия, химическая технология и биотехнология на рубеже тысячелетий материалы IV международной научной конференции - Томск, 2006 - Т 2 - С 404-405
6 Назырова Н Р , Тимербаева Р X , Туйгунов М М Антибиотикорезистентность штаммов, входящих в состав препаратов-пробиотиков // Там же - С 406-407
7 Тимербаева Р X, Назырова Н Р , Туйгунов М М Оценка влияния водных извлечений лекарственных растений на биологические свойства лактобактерий //Тамже - С 436-438
8 Чистякова О Н, Андреева А В , Назырова Н Р , Тимербаева Р X Микробиоценоз желудочно-кишечного тракта телят при применении фитопробиотиков // Проблемы и перспективы развития инновационной деятельности в агропромышленном производстве Материалы всероссийской научно-практической конференции в рамках XVII Международной специализированной выставки «АгроКомплекс-2007» - Уфа, 2007, Ч 2 - С 236-239.
9 Назырова Н Р , Тимербаева Р X, Туйгунов М М, Шаяхметов И Ф Сравнительный анализ протекгивного действия лактосодержащих фитопробиотиков на модели антибиотикоиндуцированного дисбиоза у мышей // Вестник Оренбургского государственного университета - 2007 - № 75, октябрь - С 285-286
Назырова Наилн Рамилевна
W
ВЛИЯНИЕ ЭКСТРАКТОВ ЛЕКАРСТВЕННЫХ РАСТЕНИЙ НА БИОЛОГИЧЕСКУЮ АКТИВНОСТЬ ШТАММА LA CTOBACTERWM PLANTAR UM 8Р-АЗ
Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук
Ответственный за выпуск М X Шарафутдинов
Подписано в печать 08 10 07 г Бум офсетная Формат 60x84 1/16 Гарнитура «Times New Roman Суг» Отп на ризографе Уел печ л 1,16 Уч -изд. л 1,5 Тираж 100 экз Заказ №1609
РИО ФГУП «НПО «Микроген» МЗ РФ, филиал «Иммунопрепарат» 450014, г Уфа, ул Новороссийская, 105, тел (347) 229-92-86
Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Назырова, Наиля Рамилевна
Список сокращений и условных обозначений.
Введение.
Обзор литературы.
Глава 1 Пробиотики: назначение, классификация, перспективы использования.
Глава 2 Характеристика штаммов лактобактерий, их биологические свойства.
Требования к отбору производственных штаммов.
Глава 3 Лекарственные растения как источник неспецифических стимуляторов роста микроорганизмов-пробионтов.
Собственные исследования.
Глава 4 Материалы и методы исследований.
4.1 Материалы исследований.
4.2 Методы исследований.
Глава 5 Выделение адгезивно-активных микроорганизмов из культуры лактобактерий.
5.1 Выделение адгезивно-активных микроорганизмов из культуры лактобактерий фиколл-верографиновым методом.
5.2. Сравнительный анализ биологических свойств адгезивно-активных микроорганизмов, выделенных из штамма Lactobacterium plantarum 8Р-АЗ, и других промышленных штаммов лактобактерий.
Глава 6 Разработка способа получения фитопробиотических композиций, перспективных для создания пробиотиков.
6.1. Разработка рецептур фитосодержащих питательных основ для культивирования лактобактерий.
6.2. Определение стимулирующих и ингибирующих рост лактобактерий концентраций экстрактов лекарственных растений.
6.3 Влияние водных извлечений из растительного сырья и ведущих растительных ингредиентов на кинетику роста адгезивно-активных микроорганизмов штамма Lactobacterium plantarum 8Р-АЗ.
Глава 7 Биологическая активность лактосодержащих фитопробиотических композиций на основе чистотела большого Chelidonium majus L., барбариса обыкновенного Berberis vulgaris и люцерны посевной Medicago sativa.
Глава 8 Стабильность биологических и биохимических характеристик фитопробиотических композиций.
Глава 9 Доклиническое изучение лактосодержащих фитопробиотических композиций.
9.1 Изучение безвредности фитопробиотических композиций.
9.2 Изучение эффективности фитопробиотических композиций на модели экспериментального дисбактериоза у животных.
9.2.1 Изучение эффективности лечебного действия фитопробиотических композиций.
9.2.2 Изучение эффективности профилактического действия фитопробиотических композиций.
Введение Диссертация по биологии, на тему "Влияние экстрактов лекарственных растений на биологическую активность штамма Lactobacterium plantarum 8Р-А3"
Актуальность проблемы
Широкая распространенность нарушений естественных микробиоценозов человека - одна из характерных примет нашего времени [Попкова С.М. и др., 2002]. Использование антибиотиков, неправильное питание и стрессы приводят к распространению патологических состояний, при которых нарушается нормальная микрофлора желудочно-кишечного тракта (ЖКТ) [Чистяков В.Ю. и др., 2002; Хилько Т.В., 2003; Бондаренко В.М., 2003, 2004, 2007; Хавкин А.И., 2006; Sullivan A. et al., 2005; Goossens D.A.M. et al., 2006].
Востребованность медицинских пробиотических препаратов на фармацевтическом рынке обусловлена широкой распространенностью дисбиотиче-ских состояний среди взрослого и детского населения нашей страны [Бондаренко В.М., 2004; Shen В. et al., 2005]. В то же время в условиях конкуренции с зарубежными аналогами весьма актуальна проблема расширения номенклатуры лекарственных форм препаратов массового выпуска, переход на выпуск пробиотиков нового поколения. Только в России за последние 20 лет разработаны и в значительной мере внедрены в медицинскую практику уже несколько поколений пробиотиков. К последнему, 6-му поколению относятся препараты, содержащие, помимо микроорганизмов или средств, стимулирующих их рост и развитие, другие соединения, прежде всего природного происхождения, корригирующие функции эукариотических клеток органов и тканей человека (фитобактериопрепараты) [Шендеров Б.А., 1996, 2002].
Особый интерес представляют растения, оказывающие влияние как на микроорганизмы-пробионты, так и на организм человека. Специфическая особенность растений состоит в том, что они способны синтезировать и накапливать огромное количество биологически активных веществ (БАВ), которые могут оказывать стимулирующее влияние на рост микроорганизмов-пробионтов, но практическая реализация этой концепции требует детального и разностороннего изучения факторов, влияющих на рост, развитие и спектр биологических свойств популяций микроорганизмов-пробионтов [Решетникова А.В., 1993; Попкова С.М. и др., 2004; Goossens D.A.M. et al., 2006].
В последнее время внимание специалистов привлекают растения, непосредственно используемые для коррекции дисбактериоза. В частности, к ним относятся источники изохинолиновых алкалоидов чистотел большой (Cheli-doniurn majus L.) и барбарис обыкновенный (Berberis vulgaris), являющиеся официнальным сырьем во многих странах и используемые как лекарственные средства с выраженным антибактериальным и желчегонным эффектами [European Pharmacopoeia, Hungarian Pharmacopoeia]. Среди растений также заслуживает внимания издавна применяемая в народной медицине люцерна посевная (Medicago sativa), содержащая в своем составе богатый набор биологически активных веществ [Салихова Н.Х., 2003].
Актуализация проблемы дисбактериозов и появление ятрогенной патологии определяют современную тенденцию к расширению ассортимента лекарственных средств на основе растительного сырья [Фетисова А.Н., Попков В.А., 2004; Шендеров Б.А., 2002].
Известен успешный опыт создания и внедрения в практику комплексной программы биофитокоррекции дисбактериоза, апробированной в 2003 г. более чем у 1000 грудных детей. Предложенная схема включала в себя жидкие пробиотики в оптимальных соотношениях: «Нормофлорины JI и Б», фитопрепараты и сборы лекарственных трав, растительные гепатопротекторы и др. Под влиянием биофитокоррекции обеспечивался хороший клинический эффект [Ваулина О.В., Холодова И.Н., 2003; ХавкинА.И., 2006].
Многочисленные данные литературы свидетельствуют о широком поиске и изучении источников БАВ, позволяющих получить с использованием ресурсосберегающих технологий фитопробиотические композиции для создания на их основе качественных, эффективных и безопасных препаратов [Зеленков В.Н., 2002; Козьминых Ю.В. и др., 2002; Мацулевич Т.В. и др., 2002]. Вместе с тем, процесс разработки лекарственных средств из растительного сырья требует проведения комплекса исследований, базирующихся на постулатах фармацевтической и медицинской науки [Попков В.А. и др., 2001; Куркин В.А., 2004].
Исходя из этого, одним из актуальных направлений современной биотехнологии является разработка научно-практической базы для создания лечебно-профилактических препаратов природного происхождения на основе микроорганизмов-пробионтов и лекарственного растительного сырья, характеризующихся явлениями синтрофии и синергизма медико-биологических свойств их составляющих.
Цель исследования
Экспериментально-теоретическое обоснование создания фитопробиотических композиций на основе лактобактерий и лекарственного растительного сырья, рекомендуемых для коррекции микроэкологических нарушений кишечника.
Задачи исследования
1 Выделить адгезивно-активные микроорганизмы из культуры лактобактерий фиколл-верографиновым методом в смоделированной in vitro системе «лактобактерии - кишечные энтероциты».
2 Охарактеризовать популяцию адгезивно-активных лактобактерий по совокупности биологических свойств: антагонистической, кислотопродуци-рующей и адгезивной активности, антибиотикорезистентности.
3 Сконструировать питательные среды для культивирования лактобактерий на основе ростстимулирующих концентраций экстрактов травы Cheli-donium majus L., плодов Berberis vulgaris и травы Medicago sativa.
4 Провести биологический и фотохимический анализ разработанных фитопробиотических композиций, изучить их стабильность при хранении.
5 Изучить безвредность и лечебно-профилактическую эффективность фитопробиотических композиций на модели экспериментального дисбакте-риоза у животных.
Научная новизна
Впервые фиколл-верографиновым методом в смоделированной in vitro системе «лактобактерии - кишечные энтероциты» выделены высокоадгезивные микроорганизмы штамма Lactobacterium plantarum 8Р-АЗ.
Экспериментально подобраны стимулирующие рост лактобактерий штамма Lactobacterium plantarum 8Р-АЗ концентрации растительных экстрактов Chelidonium majus L., Berberis vulgaris и Medicago sativa.
Сконструированы питательные молочно-сывороточные среды для культивирования лактобактерий с ростстимулирующим содержанием водных извлечений из травы Chelidonium majus L., плодов Berberis vulgaris и травы Medicago sativa.
Выявлено стимулирующее влияние растительных экстрактов Chelidonium majus L., Berberis vulgaris и Medicago sativa на биологические свойства лактобактерий: специфическую, антагонистическую, адгезивную и лакто-зосбраживающую активности, антибиотикорезистентность.
Установлена высокая лечебно-профилактическая эффективность разработанных фитопробиотических композиций на модели экспериментального дисбактериоза у лабораторных животных.
Практическая значимость работы
Предложен фиколл-верографиновый метод для выделения адгезивно-активных микроорганизмов со средним показателем адгезии более 10 из культуры Lactobacterium plantarum 8Р-АЗ.
Разработаны рецептуры молочно-сывороточных сред с водными извлечениями из травы Chelidonium majus L., плодов Berberis vulgaris и травы Medicago sativa для культивирования микроорганизмов штамма Lactobacterium plantarum 8Р-АЗ.
Предложены способ получения и методы контроля лактосодержащих фитопробиотических композиций, перспективных для создания иммунобиологических препаратов-пробиотиков.
Внедрение результатов исследования в практику
Результаты исследования включены в программу расширения ассортимента препаратов-пробиотиков филиала «Иммунопрепарат» ФГУП «НПО «Микроген» МЗ РФ.
Для внедрения в производство предложен фиколл-верографиновый метод выделения высокоадгезивных микроорганизмов из культуры промышленных штаммов лактобактерий.
Материалы диссертации используются в учебном процессе при изложении лекционного материала и проведении практических занятий на кафедрах микробиологии, вирусологии и иммунологии ГОУ ВПО «Башкирский государственный медицинский университет» Росздрава, паразитологии, микробиологии и вирусологии; внутренних незаразных болезней, клинической диагностики и фармакологии ФГОУ ВПО «Башкирский государственный аграрный университет» и на биологическом факультете ГОУ ВПО «Башкирский государственный университет» (акты о внедрении).
Фитопробиотические композиции рекомендованы к внедрению в животноводческих хозяйствах республики Башкортостан для профилактики и лечения дисбактериозов кишечника и вторичных иммунодефицитов у животных.
Основные положения, выносимые на защиту
1 Для выделения адгезивно-активных микроорганизмов со средним показателем адгезии более 10 из культуры лактобактерий в смоделированной in vitro системе «лактобактерии - кишечные энтероциты» предложен фиколл-верографиновый метод.
2 Ростстимулирующие концентрации растительных экстрактов травы Chelidonium majus L. (0,4-0,6 %), плодов Berberis vulgaris (0,2-0,3 %), травы Medicago sativa (0,5-0,7 %) обеспечивают эффективные кинетические параметры роста и максимальный выход биомассы лактобактерий.
3 Экстракты лекарственных растений Chelidonium majus L., Berberis vulgaris и Medicago sativa оказывают стимулирующее влияние на биологическую активность лактобактерий, увеличивая специфическую, антагонистическую, адгезивную, лактозосбраживающую активности, антибиотикорези-стентность и устойчивость к биологическим жидкостям желудочно-кишечного тракта макроорганизма.
4 На основании результатов фитохимического анализа установлены различия компонентного состава фитопробиотических композиций: композиция на основе Chelidonium majus L. характеризуется высоким содержанием изохинолиновых алкалоидов и флавоноидов; композиция на основе Berberis vulgaris - высоким содержанием изохинолиновых алкалоидов и органических кислот; композиция на основе Medicago sativa отличается максимальным содержанием аминокислот и флавоноидов, отсутствием изохинолиновых алкалоидов.
5 Лечебно-профилактическая эффективность фитопробиотических композиций на модели экспериментального дисбактериоза у животных наиболее выражена у композиции на основе Chelidonium majus L.
Апробация работы
Материалы диссертации представлены на Международной научной конференции «Фундаментальные и прикладные проблемы медицины и биологии» (Тунис, 2005); IV Международной научной конференции молодых ученых и студентов «Актуальные вопросы современной биологии» (Алматы, 2006); Международной научной конференции «Химия, химическая технология и биотехнология на рубеже тысячелетий» (Томск, 2006); Всероссийской научно-практической конференции в рамках XVII Международной специализированной выставки «АгроКомплекс-2007» «Проблемы и перспективы развития инновационной деятельности в агропромышленном производстве» (Уфа, 2007); III Всероссийской научно-практической конференции «Проблемы экологии Южного Урала» (Оренбург, 2007).
12
Диссертация апробирована на заседании Ученого совета филиала «Им-мунопрепарат» ФГУП «НПО «Микроген» МЗ РФ (протокол от 19.09.2007 г. № 4) и на заседании Регионального диссертационного совета КМ 002.124.01 при Президиуме Академии наук Республики Башкортостан (протокол от 04.10.2007 г. №64).
Публикации
По материалам диссертации опубликовано 9 научных работ, в том числе две в центральной печати (в ведущих рецензируемых научных журналах «Вестник Башкирского университета» и «Вестник Оренбургского государственного университета»).
Объем и структура диссертации
Диссертации изложена на 147 страницах, иллюстрирована 25 таблицами и 23 рисунками. Работа состоит из введения, обзора литературы (три главы), собственных исследований (шесть глав), заключения, выводов и практических рекомендаций. Список литературы включает 243 источника (156 отечественных и 87 зарубежных).
Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Назырова, Наиля Рамилевна
ВЫВОДЫ
1 Использование фиколл-верографинового метода в смоделированной in vitro системе «лактобактерии - кишечные энтероциты» позволяет выделить адгезивно-активные микроорганизмы из культуры лактобактерий штамма Lactobacterium plantarum 8Р-АЗ со средним показателем адгезии более 10 бактерий на один кишечный энтероцит.
2 На основании сравнительного анализа биологической активности производственных штаммов лактобактерий, используемых в иммунобиологической и молочной промышленности, и популяции адгезивно-активных микроорганизмов, выделенных из культуры производственного штамма Lactobacterium plantarum 8Р-АЗ, установлена стабильность основных биологических свойств (специфической, антагонистической, адгезивной, кислотопро-дуцирующей активности) последних.
3 Для культивирования лактобактерий составлены рецептуры фитосо-держащих питательных сред с ростстимулирующими концентрациями экстрактов травы Chelidonium majus L. (0,4-0,6 %), плодов Berberis vulgaris (0,20,3 %) и травы Medicago sativa (0,5-0,7 %). При сравнительном анализе биологической активности водных экстрактов Chelidonium majus L., Berberis vulgaris и Medicago sativa и ведущих растительных ингредиентов, выпускаемых в виде препаративных форм - берберина бисульфата и рутина, установлена низкая ростстимулирующая активность последних в отношении лактобактерий.
4 Разработан способ получения фитопробиотических композиций на основе питательных сред с ростстимулирующими концентрациями экстрактов травы Chelidonium majus L., плодов Berberis vulgaris и травы Medicago sativa, обеспечивающий высокий выход биомассы лактобактерий, характеризующейся показателями специфической активности в пределах 9-10 lg КОЕ/мл, продуктов их метаболизма и биологически активных веществ из лекарственного растительного сырья.
5 При культивировании адгезивно-активных лактобактерий в питательных средах с добавлением экстрактов лекарственных растений происходит увеличение специфической активности на 1 lg КОЕ/мл, ингибирующей антагонистической активности в отношении индикаторных тест-штаммов - на 510 мм, адгезивной активности - до среднего показателя адгезии (14,3±0,8) бактерий на один кишечный энтероцит. Сохраняется резистентность адгезивно-активных лактобактерий к биологическим жидкостям желудочно-кишечного тракта макроорганизма. Наиболее высокая биологическая активность установлена у фитопробиотической композиции на основе Chelidonium majus L.
6 В процессе культивирования лактобактерии метаболизируют флаво-ноиды, органические кислоты и изохинолиновые алкалоиды. При бактериальной деградации флавоноидов образуются фенолокислоты (кофейная и ди-оксибензойная), обладающие высокой антибактериальной и фунгистатиче-ской активностью.
7 На модели экспериментального дисбактериоза у животных установлена высокая лечебно-профилактическая эффективность фитопробиотических композиций, максимально выраженная у композиции на основе Chelidonium majus L. Сравнительный анализ лечебно-профилактической эффективности фитопробиотических композиций на основе Chelidonium majus L., Berberis vulgaris и Medicago sativa позволил выявить статистически значимое увеличение в содержимом толстой кишки представителей облигатного микробиоценоза (на 2,0-3,0 lg КОЕ/г) и снижение содержания патогенных и условно-патогенных микроорганизмов (на 1,5-2,0 lg КОЕ/г).
121
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
Для выделения микроорганизмов с повышенным адгезивным потенциалом из культуры промышленных штаммов лактобактерий рекомендуется использование фиколл-верографинового метода.
Для получения лактосодержащих фитопробиотических композиций рекомендуется использование молочно-сывороточных сред с подобранными концентрациями водных извлечений Chelidonium majus L., Berberis vulgaris и Medicago sativa. В фитопробиотических композициях регламентированы характеристики и уровни содержания биологически активных веществ, подобраны методы их количественного определения в составе композиций. Разработанная методология получения фитопробиотических композиций рекомендуется для промышленного производства.
Для оценки лечебно-профилактической эффективности фитопробиотических композиций рекомендуется модель антибиотик-индуцированного дисбактериоза у животных.
Фитопробиотические композиции на основе адгезивно-активных лактобактерий и лекарственного растительного сырья перспективны в качестве основы различных лекарственных форм (свечи, аппликации, пробиотики в виде жидких и лиофилизированных форм, таблетки и др.) для применения в гастроэнтерологии, гинекологии, урологии и других разделах медицины.
Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Назырова, Наиля Рамилевна, Уфа
1. Адлова, Т.П. Разработка стимуляторов роста бактерий из растений / Г.П. Адлова, С.В. Денисова, А.К. Илиджев и др. // Журн. микробиол. - 1998. -№ 1.-С. 13-17.
2. Ашмарин, И.П. Статистические методы в микробиологических исследованиях / И.П. Ашмарин, А.А. Воробьев // Л.: Медгиз, 1962. - 180 с.
3. Баженов, Л.Г. Изучение антагонистического действия лактобацилл на Helicobacter Pylori / Л.Г. Баженов, В.М. Бондаренко, Е.А. Лыкова и др. // Журн. микробиол. 1997. - № 3. - С. 89-91.
4. Баронец, Н.Г. Влияние экстрактов лекарственных растений на рост микроорганизмов / Н.Г. Баронец, Г.П. Адлова, В.А. Мельникова. // Журн. микробиол.- 2001. -№ 5.-С.71-72.
5. Баронец, Н.Г. Получение стимуляторов роста микроорганизмов из лекарственных растений: Афтореф. дис. . канд. биол. наук: 03.00.07 / УфНИИВС. Москва, 2004. - 23 с.
6. Баснакьян, И.А. Культивирование микроорганизмов с заданными свойствами / И.А. Баснакьян. М.: Медицина, 1992. - 169 с.
7. Баширова, P.M. Вторичные метоболиты растений и методы их исследования: учебное пособие / Баширова P.M., Плеханова Т.И., Касьянова А.Ю., Кудашкина Н.В., Уфа: Изд-во «Здравоохранение Башкортостана». 2004.168 с.
8. Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования / Под ред. М.О. Биргера. 3-е издание, переработано и дополнено - М.: Медицина, 1982. - 464 с.
9. Бондаренко, В.М. Дисбактериозы кишечника, их диагностика и терапия // Лабораторная диагностика. 2004. - №3. - С. 14-18.
10. Бондаренко, В.М. Дисбактериозы кишечника у взрослых / В.М. Бондаренко, Н.М. Грачева, Т.В. Мацулевич // М.: 2003. -114 с.
11. Бондаренко, В.М. Дисбиозы и препараты с пробиотической функцией /
12. B.М. Бондаренко, А.А. Воробьев // Журн. микробиол. 2004. - № 1.1. C. 84-92.
13. Бондаренко, В.М. Микроэкологические изменения кишечника и их коррекция с помощью лечебно-профилактических препаратов / В.М. Бондаренко и др. // Рос. журн. гастроэнтерол., гепатол., колопроктол. 2003. -№ 4. - С. 66-75.
14. Бондаренко, В.М. Пробиотики, пребиотики и синбиотики в терапии и профилактике кишечных дисбактериозов / В.М. Бондаренко, Н.М. Грачева // Фарматека. 2003. - № 7. - С. 56-63.
15. Бондаренко, В.М. Характеристика и терапевтический потенциал пробиотиков по данным клинических испытаний / В.М. Бондаренко // БИОпрепараты. 2007. - № 1 (25). - С. 11-15.
16. Брилис, В.И. Методика изучения адгезивного процесса микроорганизмов / В.И. Брилис, Т.А. Брилене, Х.П. Ленцнер и др. // Лабораторное дело. -1986.-№4.-С. 210-212.
17. Булатов, А.А. Изменчивость качественного и количественного состава ал-колоидов чистотела большого в течение вегетации / А.А. Булатов, Г.Н. Бузук, М.Я. Ловкова и др. // Химико-фармацевтический журнал. 1990. -Т. 24. -№5. - С. 50-53.
18. Ваулина, О.В. Биофитокоррекция дисбактериоза у детей грудного возраста / О.В. Ваулина, И.Н. Холодова // Тез. докл. науч.-практ. семинара «Индивидуальные подходы к проблеме дисбактериоза» Москва, 2003. - С. 34-41.
19. Виноградов, В.М. Справочник по траволечению детей и взрослых / В.М. Виноградов и др. С.П.: ИКФ «Фолиант», 1996. - 591 с.
20. Волощук, Т.П. Об алколоидном составе семян чистотела большого / Т.П. Волощук, А.И. Потопальский.
21. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология: Учебник / Под. ред. А.А. Воробьева. М.: Медицинское информационное агенство, 2004.-691 с.
22. Воробьев, А.А. Бактерии нормальной микрофлоры: биологические свойства и защитные функции / А.А. Воробьев, Е.А. Лыкова // Журн. микро-биол. 1999. - № 6. - С. 102-105.
23. Высочина, Г.И. Фенольные соединения в систематике и филогении семейства гречишных / Г.И. Высочина // Новосибирск: Наука, 2004. 240 С.
24. Ганина, В.И. Пробиотики. Назначение, свойства и основы биотехнологии: Монография / В.И. Ганина М.: Наука, 1987. - 470 с.
25. Ганина, В.И. Пробиотики. Назначение, свойства и основы биотехнологии / В.И.Ганина М.: МГУПБ, 2001.-169 с.
26. Георгиевский, В.П. Биологически активные вещества лекарственных растений / В.П. Георгиевский, Н.Ф. Комисаренко, С.Е. Дмитрук Новосибирск: Наука. Сиб. отд-ние, 1990. - 333 с.
27. Способ оценки состояния микрофлоры кишечника человека по количеству адгезивно-активных бактерий и типу адгезинов / С.С. Гизатулина, М.О.
28. Биргер, Л.И. Кулинич и др. // Клиническая микробиология. М., 1991. -С. 21-23.
29. Голубева, И.С. Исследования по стандартизации сырья и водных извлечений алтея / И.С. Голубева, А.А. Сорокина // Фармация. 2007. - С. 30-33.
30. Горелов, Л.В. Адгезия клинических изолятов Campilobacter jejuni к эпителиальным клеткам кишечника in vitro / Л.В. Горелов, Е.М. Горская, В.П. Жуховицкий // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. -1990.-№7.-С. 32-34.
31. Горская, Е.М. Адгезия микробов к эпителиальным клеткам кишечника / Е.М. Горская // Антибиотики и микроэкология человека и животных. -1988.-С. 79.
32. Горская, Е.М. Методические рекомендации по определению адгезии бактерий кишечного происхождения к эпителиальным клеткам тонкого и толстого кишечника / Е.М. Горская, И.М. Манохина, А.В. Горелов и др. -М., 1989.-7 с.
33. Горская, Е.М. Адгезивные свойства бактерий кишечного происхождения / Е.М.Горская, Х.П. Ленцнер, А.А. Ленцнер и др. // Журн. микробиологии. -№ 4.- 1991.-С. 5-8.
34. Горская, Е.М. Биологическая характеристика штаммов лактобацилл, перспективных в качестве эубиотиков / Е.М. Горская, Н.Н. Лизько, А.А. Ленцнер и др. // ЖМЭИ. № 3. - 1992. - С. 17-20.
35. Государственная фармакопея СССР. 11-е изд. М.:Медицина, 1989. -Вып. 2. - 400 с.
36. Гравель, И.В. Содержание микроэлементов в БАД и водных извлечениях из них / И.В. Гравель // Фармация. 2005. - № 3. - С. 43-44.
37. Григорьев, А.В. Конструктивные особенности и механизм действия иммобилизованных пробиотиков // А.В. Григорьев, С.М. Егорова / Матер, конф. «Пробиотические микроорганизмы современное состояние вопроса и перспективы использования». - М., 2002. - 28 с.
38. Губергриц, Н.Б. Гепатофальк Планта: терапевтические свойства и преимущества / Н.Б. Губергриц // Сучасна гастроентеролопя. 2004. №1. -С. 77-83.
39. Гудков, С.А. Многокомпонентное обогащение молочной сыворотки / С.А. Гудков, Г.Г. Шиллер, Э.Ф. Кравченко и др. // Журн. Молочная промышленность. 1985. -№ 12. - С. 25-26.
40. Ермоленко, Е.И. Количественная оценка антагонистической активности лактобацилл / Е.И.Ермоленко, В.А.Исаков, С.Х. Ждан-Пушкина и др. // Журн. микробиологии. 2004. - № 5. - С. 94-98.
41. Исаева, Н.В. Биологически активные вещества плодов и настойки барбариса / Н.В. Исаева, И.А. Самылина // Фармация. 2006. - №1. - С. 22-23.
42. Карпунина, Т.И. Повышение эффективности терапевтического действия пробиотиков / Т.И. Карпунина, Э.С. Горовиц, А.Н. Чиненкова // Журн. микробиол. 1998. - №2. - С. 104-107.
43. Квасников, Е.И. Молочные бактерии и пути их использования / Е.И. Квасников, О.А. Нестеренко // М.: Наука, 1975.-384 С.
44. Киселев, С.А. Пребиотики: новая стратегия лечения дисбактериоза кишечника / С.А. Киселев, Д.С. Чичерин, Д.В. Харитонов // Качество жизни. Медицина. 2004. - №2.
45. Кисилева, А.В. Биологически активные вещества лекарственных растений Южной Сибири / А.В. Киселева, В.Е. Волхонская, В.Е. Кисилев -Новосибирск: Наука. Сиб. отд-ние, 1991. 136 с.
46. Коровина, Н.А. Роль пребиотиков и пробиотиков в функциональном питании детей / Н.А. Коровина, И.Н. Захарова, Н.Е. Малова, Н.А. Скуинь // Лечащий врач. 2005. - № 2.
47. Коротяев, А.И. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология / А.И. Коротяев, С.А. Бабичев // Учебник для медицинских ВУЗов. -2-е изд., испр. Спб.: СпецЛит, 2000. - 591 с.
48. Коршунов, В.М. Качественный состав нормальной микрофлоры кишечника у лиц различных возрастных групп / В.М. Коршунов, JI.B. Поташник, Б.А. Ефимов и др. //Журн. микробиол. 2001. -№2. - С. 57-61.
49. Коршунов, В.М. Характеристика биологических препаратов и пищевых добавок для функционального питания и коррекции микрофлоры кишечника / В.М. Коршунов, Б.А. Ефимов, А.П. Пикина // Журн. микробиол. -2000.-№3.-С. 86-91.
50. Краткий определитель бактерий Берги / Под ред. Дж. Хоулта. М.: Мир. -1980.-496 с.
51. Крикова, А.В. Биологическая активность растительных источников флавоноидов / А.В. Крикова, Н.С. Ляхова, B.C. Давыдов и др. // Фармация. 2006. - № 3. - С. 36-37.
52. Кругликов, В.Д. Возможность приживления Lactobacillus acidophilus в кишечнике белых мышей на фоне бактериальной терапии / В.Д. Кругликов, Р.И. Цураева, И.В. Рыжко и др. // Журн. микробиол. 1997. - № 1. -С. 67-69.
53. Куркин, В.А. Фармакогнозия: Учебник для студентов фармацевтических вузов Самара: ООО «Офорт», ГОУВПО «СамГМУ», 2004. - 1180 с.
54. Лабинская, А.С. Практикум по микробиологическим методам исследования / А.С. Лабинская. М.-.Наука, 1963.
55. Лабораторные тесты: Микробиологическая и вирусологическая диагностика / Под. ред. М.Х. Турьянова- М.: Каппа, 1995. С. 58-66.
56. Лихачева, А.Ю. Специфическая активность лактобацилл при совместном культивировании нескольких штаммов / А.Ю. Лихачева, Е.М. Горская // Новое в практике лабораторных исследований Нижний Новгород, 1991. -С. 33-37.
57. Лукманова, К.А. Аминокислотный и минеральный состав фитопрепарата люцерон / К.А. Лукманова, В.А. Рябчук, Н.Х. Салихова // Фармация. -2000.-№2.-С. 25-27.
58. Лукманова, К.А. Токсикологическое изучение фитопрепарата из экстракта люцерны посевной / К.А. Лукманова, Т.Б. Танирбергенов, Х.М. Насыров и др. // Экспериментальная и клиническая формакология. 2000. - Т. 63, № 1. - С. 62-65.
59. Лыкова, Е.А. Антибактериальная резистентность штаммов, входящих в состав пробиотиков / Е.А. Лыкова // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. 2000. - № 2. - С. 63-66.
60. Лянная, A.M. Кислотообразующие и антагонистические свойства бифи-добактерий / A.M. Лянная, Г.И. Гончарова // Эпидемиология, диагностика и профилактика кишечных респираторных и природно-очаговых инфекций.-М., 1975.-С. 92-93.
61. Лебентал, Е. (Lebenthal, Е.) Пробиотики: концепция лечебного применения, ожидающая своего признания / Е. Lebenthal, Y. Lebenthal // Журн. микробиол. 2003. - № 4. - С. 88-90.
62. Максимов, В.И. Кислотность кишечника как защитный фактор хозяина /
63. B.И. Максимов, В.Е. Родоман // Журн. микробиологии. 1998. - № 4.1. C. 96-101.
64. Малахов, Г.П. Современное траволечение: Индивидуальный подбор травяных сборов / Г.П. Малахов. Спб.: Генеша, 1999. - 192 с.
65. Махрова, Т.В. Факторы и условия, влияющие на адгезивную активность Candida albicans в системах с буккальными эпителиоцитами: Дис. . канд. мед. наук: 03.00.07 / ГОУ ВПО «Нижегородская Государственная академия МЗ РФ». Нижний Новгород, 2004. - 132 с.
66. Маянский, А.Н. Дисбактериоз: иллюзии и реальность / А.Н. Маянский // Педиатрия (журн. им. Г.Н. Сперанского). 2000. - № 4. - С. 80-88.
67. Минушкин, О.Н. Дисбактериоз кишечника / О.Н. Минушкин, М.Д. Ардатская, В.Н. Бабин и др. // Российский медицинский журнал. 1999. -№ 3. - С. 40-44.
68. Митрохин, С.Д. Микробиологические и биохимические показатели изменения микробной экологии толстой кишки крыс под влиянием рифампицина / С.Д. Митрохин, Б.А. Шендеров // Антибиотики и химиотерапия. -1989. Т. 34. - № 6. - С. 448-452.
69. Митрохин, С.Д. Дисбактериоз: современный взгляд на проблему // Инфекции и антимикробная терапия. -2000. №5. - Т. 2.
70. Молохова, Е.И. Лекарственные препараты-пробиотики на российском фармацевтическом рынке / Е.И. Молохова, В.Н. Тарасевич // Фармация.-2000.-№3.-С. 55-58.
71. Неберт, В.К. Подготовка молока и биологическая оценка сыропригодно-сти системы «молоко бактериальная закваска» / В.К. Неберт, И.Н. Доброва // Журн. Молочная промышленность. - 1985. - № 12. - С. 38-39.
72. Несвижский, Ю.В. Изучение изменчивости кишечного микробиоценоза человека в норме и патологии // Вестник РАМН. М. - 2003. - № 1. — С. 49-53.
73. Несчисляев, В.А. Пробиотики: микробиологические и технологические аспекты получения, контроля и конструирования препаратов: Афтореф. дис. . д-ра мед. наук: 03.00.07 / ФГУП «НПО «Микроген» МЗ РФ «Пермское НПО «Биомед». Пермь, 2005. - 44 с.
74. Никитина, Т.И. Фитология: Лекарственные растения в научной медицине / Т.И. Никитина, Х.М. Насыров Уфа: Башкортостан, 1993. - 256 с.
75. Пайков, B.JI. Гастроэнтерология детского возраста в схемах и таблицах / В.Л. Пайков, С.Б. Хацкель, Л.В. Эрман // Справочное руководство. — Спб.: Специальная литература, 1998. -534 с.
76. Пат. 2132199 С1 РФ, 6 А 61 К 35/78 Способ получения лечебно-профилактического средства из топинамбура, обладающего биологически активным действием на организм / В.Н. Зеленков. Заявл. 20.11.96; Опубл. 27.06.99 // БИПМ. - 1999.
77. Пат. 2170763 С2 РФ, 7 С 12 N 1/20 Способ получения основы микробиологических питательных сред / С.В. Водолажская, Е.Э. Куприна; Г.Г. Няникова др.-Заявл. 21.07.99; Опубл. 20.07.01 //БИПМ.-2001.
78. Пат. 2212902 С2 РФ, 7 А 61 L 15/36 Продукт и препарат, содержащий мо-лочно-кислые бактерии / Р. Андерссон, Б. Рунеман, У. Форсгрен-Бруск и др. Заявл. 08.10.98; Опубл. 27.09.03 // БИПМ. - 2003.
79. Пат. 2221582 С2 РФ, 7А 61 К 35/78 Средство для лечения дисбактериоза и способ его получения / К.Г. Гуревич. Заявл. 08.02.02; Опубл. 20.01.04 // БИПМ. - 2004.
80. Пат. 2222593 С1 РФ, 7 С12 N 1/20 Способ приготовления питательной среды для культивирования микроорганизмов / А.Г. Кощаев, И.В. Хмара, О.В. Кощаев и др. Заявл. 06.05.02; Опубл. 27.01.04 // БИПМ. - 2004.
81. Пат. 2244744 С2 РФ, 7 С 12 N 1/20 Способ получения жидкого лакто-бактерина / Н.А. Глушанова, А.И. Блинов, Б.М. Дворецкий. Заявл. 27.11.02; Опубл. 20.01.05 // БИПМ. - 2005.
82. Пат. 2254138 С1 РФ, 7 А 61 К 35/78 Способ получения лечебно-профилактической композиции на основе растительного сырья / JI.A. Прокопьева, А.К. Виноградов. Заявл. 26.11.03; Опубл. 20.06.05 // БИПМ. -2005.
83. Пат. 2287572 С2 РФ, С 12 N 1/20 Питательная среда для культивирования бифидо- или лактобактерий / В.А. Марьин, Е. И.-С. Райдна. Заявл. 15.12.04; Опубл. 20.11.06//БИПМ. - 2006.
84. Пат. 2053781 С1 РФ, 6 А 61 К 35/74. Препарат из живых лактобактерий / В.В.Поспелова, Н.Г. Рахимова, Н.Н. Ворошилина и др. Заявл. 28.12.93; Опубл. 10.02.96 // БИПМ. - 1996.
85. Пат. 2212902 С2 РФ, А 61 L 15/36, А 61 F 13/15. Продукт и препарат, содержащий молочнокислые бактерии / Р. Андерссон, Б. Рунеман, У. Форсгрен-Бруск и др. Заявл. 08.10.1998; Опубл. 27.09.2003 // БИПМ. -2003.
86. Пат. 2158302 С2 РФ, С 12 N 1/20. Питательная среда для роста бифидо-и лактобактерий / Р.С. Рахманов Заявл. 11.03.1996; Опубл. 27.10.2000 // БИПМ. - 2000.
87. Петров, J1 .Н. Основы конструирования пробиотиков повышенной терапевтической активности / JI.H. Петров // Пробиотические микроорганизмы современное состояние вопроса и перспективы использования: Мат. Международ, науч.-практ. конфер. М., 2002. - С. 12.
88. Поздеев, O.K. Медицинская микробиология. / Под ред. Акад. РАМН В.И. Покровского. М: ГЭОТАР-МЕД, 2001. - 768 с.
89. Попкова, С.М. Оценка влияния отваров лекарственных растений и про-тивобактериальных антител к бифидобактериям на их адгезию in vitro / С.М. Попкова, Е.Л. Кичигина, С.И. Лещук и др. // Журнал микробиол. -2004.-№2.-С. 70-73.
90. Поспелова, В.В. Принципы разработки фармакопейных бактерийных препаратов для коррекции микрофлоры организма человека / В.В.Поспелова, Н.Г.Рахимова, Г.И.Ханина // Аутофлора человека в норме и патологии и ее коррекция. Горький, 1988. - С. 85-92.
91. Постникова, Е.А. Поиск перспективных штаммов бифидобактерий и лактобацилл для разработки новых биопрепаратов. / Е.А. Постникова, Б.А. Ефимов, Н.Н. Володин, Л.И. Кафарская // Журн. микробиол. 2004. -№ 2. - С. 64-69.
92. Потопальский, А.И. Барбарис и его препараты в биологии и медицине / А.И. Потопальский, Л.И. Петличная, С.В. Ивасивка // Киев: Наук, думка, 1989.-288 с.
93. Программа восстановления микрофлоры (биофитокоррекция) и профилактика дисбактериоза: Методические рекомендации М., 2002.
94. Растительные ресурсы СССР: Цветковые растения, их химический состав, использование; Семейства Magnoliaceae Limoniaceae. - Л.: Наука, 1985.-460 с.
95. Работнова, И.Л. Питание микроорганизмов / И.Л. Работнова, Н.Н. Поз-могова // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. 1993. -№ Ю.-С. 112-116.
96. Радзинский, В.Е. Лекарственные растения и биологически активные добавки в акушерстве и гинекологии / В.Е. Радзинский, Е.Т. Михайленко, К.А. Захаров // 4-е изд., М: Медицина, 1997.
97. Салихова, Н.Х. Разработка составов и технологии ранозаживляющих коллагеновых пластин с экстрактом люцерны и интерфероном: Автореф. Дис. . канд. фарм. Наук: 15.00.01 /Москва, 2003. 23 с.
98. Самылина, И.А. Использование хлорида алюминия для определения суммы флавоноидов в цветках боярышника / И. А. Самылина, О.В.Евдокимова, М.В.Кашниукова // Фармация. 1994. -№6. - С. 42-45.
99. Самылина, И.А. Стандартизация свежего лекарственного растительного сырья / И.А. Самылина, Т.Л. Киселева // Фармация. 2007. - С. 49-51.
100. Смирнов, В.В Пробиотики на основе живых культур микроорганизмов / В.В. Смирнов, Н.К. Коваленко, B.C. Подгорский и др. // Журн. мик-робиол.- 2002. Т. 64. - № 4. - С. 62-80.
101. Смирнова, Г.А. Изучение пептидного и аминокислотного состава различных белковых основ питательных сред / Г.А. Смирнова, Б.М. Раскин, В.А. Мельников и др. // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. 1985. - № 12. - С. 22-26.
102. Соболева, В.А. Сравнительный анализ применения чистотела большого в научной, народной и гемеопатической медицине / В.А. Соболева, Л.Ю. Клименко // Провизор. 2001. - № 17.
103. Соколов, С .Я. Справочник по лекарственным растениям (Фитотерапия). / С .Я. Соколов, И.П. Замотаев 3-е издание, стереотипное. -М.: Металлургия, 1990. - 428 с.
104. Сорокина, А.А. Теоретическое и экспериментальное обоснование стандартизации настоев, отваров и сухих экстрактов из лекарственного растительного сырья / А.А. Сорокина // Фармация. 2003. - №5. - С. 35.
105. Сорокулова, И.Б. Разработка питательной среды для культивирования Lactobacillus plantarum 8R-A3 / И.Б. Сорокулова, Т.В. Хилько, А.И. Осад-чая // Журн. микробиол. 2003. - №3. - С. 39-45.
106. Сохина, А.А. Настройка чистотела новое противовоспалительное, антимикробное лекарственное средство / А.А. Сохина, С.В. Первушкин, В.А. Куркин и др. // Тез. докл. науч.-практ. конф. - Самара - СамГМУ. -1999. - С. 73-74.
107. Сохина, А.А. Создание и стандартизация геля «Чистотел» / А.А. Сохина, С.В. Первушкин, В.А. Куркин и др. // Тез. докл. науч.-практ. конф. -Самара СамГМУ. - 1999. - С. 72-73.
108. Степаненко, П.П. Микробиология молока и молочных продуктов // Учебник для ВУЗов. Сергиев Посад: ООО «Все для Вас - Подмосковье», 1999.-415 с.
109. Тейлор, Д., Грин, Н., Стаут, У. Биология: В 3-х т. Т. 1: Пер. с англ. / Под. ред. Р. Сопера 3-е изд., - М.: Мир, 2001. - 454 с.
110. Тимербаева, Р.Х. Оптимизация технологии получения препаратов-пробиотиков: Дис. . канд. мед. наук: 03.00.07 / УфНИИВС Уфа, 2005. -189 с.
111. Тихомирова, Н.А. Технология продуктов лечебно профилактического питания / Н.А. Тихомирова. - М.: МГУПБ, 2001. - 242 с
112. Ткачук, С.П. Ферментативный гидролиз лактозы сыворотки с помощью ультрафильтрации / С.П. Ткачук, Н.Н. Романская, Л.А. Иванова и др.// Журн. Молочная промышленность. 1985. -№9. - С. 9-12.
113. Турищев, С.Н. Лекарственные растения регуляторы функции кишечника / С.Н. Турищев // Фармация. - 2002. - №3. - С. 47-48.
114. Дисбактериоз кишечника / Под. ред. М.Х. Турьянова // Лабораторные тесты. Микробиологическая и вирусологическая диагностика. Ч. 2. -М.: Каппа, 1995.-С. 58-66.
115. Фазылова, А.А. Современная тактика лечения при нарушениях микробиоценоза кишечника у детей раннего возраста. / А.А. Фазылова, Э.И. Эткина // Методические рекомендации. Уфа, 2000. - 23 с.
116. Фисенко, В.П. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых формакологических веществ / В.П. Фисенко, Е.В. Арзамасцев, Э.А. Бабаян и др. М., 2000. - 398 с.
117. Фомичева, Е.А. Изучение компонентного состава флавоноидов и фенолкарбоновых кислот в гомеопатических настойках чистотела хрома-тографическими методами / Е.А. Фомичева, З.П. Костенникова // Фармация.-2001.-№3.-С. 17-19.
118. Фомичева, Е.А. Количественное определение флавоноидов в гомеопатической настойке чистотела методом спектрофотометрии. Сообщение 2 / Е.А. Фомичева, М.Н. Лякина, З.П. Костенникова // Фармация. 2001. -№5.-С. 13-15.
119. Фомичева, Е.А. Определение флавоноидов в гомеопатической настойке чистотела / Е.А. Фомичева, М.Н. Лякина, З.П. Костенникова // Фармация. -2004.-№2.-С. 44-46.
120. Хавкин, А.И. Микрофлора пищеварительного тракта / А.И. Хавкин. -М.: Фонд социальной педиатрии, 2006. 416 с.
121. Хамагаева, И.С. Исследование биологической ценности ацидофильного молока с гидролизованной лактозой / И.С. Хамагаева, А.К. Куликова, А.С. Тихомирова // Журн. Молочная промышленность. 1985. - № 12. -С. 19-20.
122. Хилько, Т.В. Разработка технологии создания нового комплексного пробиотика / Т.В. Хилько // РЖ 19. Химия: 19.0. Технология органических лекарственных веществ, ветеринарных препаратов и пестицидов. 2004. — № 12.-С. 4.
123. Хорошилова, Н.В. Иммуномодулирующее и лечебное действие пробиотиков / Н.В. Хорошилова // Иммунология. 2003. - № 6. - С. 352-356.
124. Чиков, П.С. Лекарственные растения / П.С. Чиков // Справочник -2-е изд., М.:Агропромиздат, 1989. - 431 с.
125. Шендеров, Б.А. Роль анаэробных неспорообразующих бактерий в поддержании здоровья человека / Б.А. Шендеров // Вестник РАМН. 1996. -№ 2. - С. 8-11.
126. Alamprese, С. Effects of Lactobacillus rhamnosus GG addition in ice cream / C. Alamprese et al. // International Journal of Dairy Technology. 2005. -Vol. 58.-№4. -P. 200-206.
127. Amin, A.H. Berberine sulfate: Antimicrobial activity, bioassay and mode of action / A.H. Amin, T.V. Subbaiah, K.M. Abbasi // Can. J. Microbiol. 1969. -Vol. 15.-P. 1067-1076.
128. Berger, A. Science commentary: Probiotics / A. Berger // BMJ. 2002. -Vol. 324.-P. 1364.
129. Boris, S. Adherence of Human Vaginal Lactobacilli to Vaginal Epithelial Cells and Interaction with Uropathogens / S. Boris, J.E. Suarez, F. Vazquez and et al. // Infection and Immunity. 1998. Vol. 66. - №5. - P. 1985-1989.
130. Brashears, M.M. Antagonistic action of cells of Lactobacillus lactis toward Escherichia coli 0157: H7 on refrigerated raw chicken meat / M.M. Brashears, S.S. Reilly, S.E. Gilliland // J. Food. Protection. 1998. - Vol. 61. -P. 166-170.
131. Canducci, F. A lyophilized and inactivated culture of Lactobacillus acidophilus increases Helicobacter pylori eradication rates / F. Canducci, A. Armuzzi, F. Cremonini // Aliment Pharmacol Ther. 2000. - № 14. -P. 1625-1629.
132. Canganella, F. A microbiology investigation on probiotic pharmaceutical products used for human health / F. Canganella, S. Paganini, M. Ovidi // Microbiol. Res.- 1997.-Vol. 152.-P. 171-179.
133. Charteris, W.P. Antibiotic susceptibility of potencially probiotic Lactobacillus species / W.P.Charteris, P.M.Kelly, J.K.Collins et al. // J. Food. Protection.- 1998.-Vol. 61.-P. 1636-1643.
134. Colombo, M.L. Pharmacological activities of Chelidonium majus L. (Papav-eraceae) / M.L. Colombo et al. // Pharmacol Res. 1996. - Vol. 33(2). -P. 127-134.
135. Corcoran, B.M. Comparative survival of probiotic lactobacilli spray-dried in the presence of prebiotic substances / B.M. Corcoran, R.P. Ross, G.F. Fitzgerald et al. // J. of Appl. Microbiol. -2004. Vol. 96. - P. 1024-1039.
136. Dai, D. Protective nutrients and bacterial colonization in the immunature human gut / D.Dai, W.A.Walcer // Adv. Pediatr. 1999. - 46. - P. 353-382.
137. De Waard, H. Voedingsmiddelentechnologie / H. De Waard, J. Stadhouders.- 1983 .-Vol. 16.-№22/23.-P. 141-145.
138. Eaton, N.R. Methods in microbiology / N.R.Eaton, J.R.Norris, D.W.Ribbons //Acad. Press. 1972. - Vol. 6B. - P. 321-346.
139. Elmer, G.W. Biotherapeutic agents. A neglected modulity for the treatment and prevention of selected intestinal and vaginal infections / G.W. Elmer, C.M. Surawicz, L.V. McFarland // JAMA. 1996. - Vol. 11. - P. 870-876.
140. European Pharmacopoeia. Fourth Edition. Strasbourg. France. - 2001. -2416 p.
141. Examination on antioxidant activity in the greater celandine (Chelidonium majus L.) extracts by FRAP method.
142. Fatehi, M. A pharmacological study on Berberis vulgaris fruit extract / M. Fatehi, T.M. Saleh, Z. Fatehi-Hassanabad et al. // Journal of Ethnopharmacology. 2005. -Vol. 102(1). - P. 46-52.
143. Fooks, L.J. Prebiotics, probiotics and human gut microbiology / L.J. Fooks, R. Fuller, G.R. Gibson // Inter. Dairy J. 1999. - Vol. 9. - P. 53-61.
144. Fuller, R. Probiotics in man an animals / R.Fuller // J. of Appl. Bacteriolog. 1989. - Vol. 66. - P. 365-378.
145. Functional Foods. Ed. By I. Goldberg. Charman and Hall, NY. 1994. -572 p.
146. Fujishiro, K. Purification and characterization of yeast protease В / К. Fu-jishiro, Y. Sanada, H. Tanaka et al. // J. Biochem. (Tokyo). 1980. - Vol. 87. -P. 1321-1326.
147. Ganzle, M.G. Effect of ecological factors on the inhibitory spectrum and activity of bacteriocins / M.G.Ganzle, S.Weber, W.P.Hammes // Int. J. Food. Microbiol. 1999. - Vol. 46. - P. 207-217.
148. Ganzle, M.G. Charaterisation of reuterocyclin produced by Lactobacillus reuteri LTH 2584 / M.G.Ganzle, A.Holtzel, J.Walter et al. // Appl. Environ. Microbiol. 2000. - 66 (10). - P. 4325-4333.
149. Gastaldi, E. Effect of Controlled Casein Hydrolysis on Rheological Properties of Acid Milk Gels / E. Gastaldi, N. Trial, C. Guillaume et al. // J. Dairy Sci. -2003.-Vol. 86.-P. 704-711.
150. Gibson, G.R. Aspects of In Vitro and In Vivo Research Approaches Directed Toward Identifying Probiotics and Prebiotics for Human / G.R.Gibson, R.Fuller // Use. J. Nutrition. 2000. - Vol. 130. - P. 391-395.
151. Gyosheve, B. Characteristics of the bulgarian yogurt lactic acid bacteria. Metabolism of lactose / B.Gyosheve, I.Petrova, M.Mutafchieca // Nahrung. -1996.-Vol. 40.-№2.-P. 68-71.
152. Gusils, C. Lactobacilli isolated from chicken intestines: potential use as probiotics / C.Gusils, A.Perez Chaia, S.Gonzalez et al. // J. Food. Protection. 1999. - Vol.62. - P. 252-256.
153. Hahn, F.E. Berberine / F.E. Hahn, Ciak // Antibiotics J. 1976. - Vol. 3. -P. 577-584.
154. Johansson, M.L. Survival of Lactobacillus plantarum DSM (299v) and effect on the short-chain fatty acid content of faeces after ingestion / M.L.Johansson, S.Nobaek, A.Berggren // Int. J. Food. Microbiol. 1998. - Vol. 42. - P. 29-38.
155. Kaneda, Y. In vitro effects of berberine sulphate on the growth and structure of Entamoeba histolytica, Giardia lamblia and Trichomonas vaginalis / M. To-rii, Т. Tanaka, M. Aikawa // Ann. Trop. Med. Parasitol. 1991. - Vol. 85(4). -P. 417-425.
156. Kato, A. Food proteins structure and functionality / A.Kato, K.Komatsu, K.Fujimoto et al. // J. Agric. Food. Chem. 1985. - Vol. 33. - № 5. -P.931-934.
157. Kato, A. Food proteins structure and functionality / A. Kato // Ed. K.D. Schwenke and R. Mothes. VCH. Germany. 1993. - P. 16-28.
158. Kenings, W.N. Lactic acid bacteria: the bugs of the new millenium / W.N.Kenings, J.Kok, O.P.Kuipers et al. // Cur. Opin. Microbiol. 2000. -Vol. l.-P. 276-282.
159. Kirjavainen, P.V. The ability of probiotic bacteria to bind to human intestinal mucus / P.V. Kirjavainen, A.C. Ouwehand, E. Isolauri et al. // FEMS Microbiol. 1998. - Vol. 167. - P. 185-189.
160. Klein, G. Taxonomy and physiology of probiotic lactis acid bacteria / G. Klein, A. Pack, C. Bonoparte et al. // Int. J. Food. Microbiol. 1998. -Vol. 41.-P. 103-125.
161. Koga, T. Antibacterial activity of Lactobacillus species against Vibrio species / T. Koga, T. Mizobe, K. Tacumi // Microbiol. Res. 1998. - Vol. 153. -P. 271-275.
162. Kontiokari, T. Randomised trial of cranberry-lingonberry juice and Lactobacillus GG drink for the prevention of urinary tract infections in women / T. Kontiokari, K. Sundqvist, M. Nuutinen. // BMJ. 2001. - Vol. 322.
163. Lesnau, A. Antiviral activity of berberine salts / J. Hils, G. Pohl, G. Beyer et al. // Pharmazie, 1990. Vol. 45. - P. 638-639.
164. Lidbeck, A. Lactobacillus and the normal human intestinal microflora / A. Lidbeck, C.E. Nord//Clin. Infect.Dis. 1993. - Vol. 1;16.-P. 181-187.
165. Liming, Y. Biofilm-Specific Cross-Species Induction of Antimicrobial Compounds / Y. Liming, G.B. Kenneth, R.A. David // Appl. and Environ. Microbiol. 2003. - Vol. 69. -№ 7. - P. 3719-3727.
166. Magnusson, J. Lactobacillus coryneformis subsp. Coryneformis Si3 produces a broad spectrum proteinaceous antifungal compound / J. Magnus-son, J. Schnurer // Appl. Environ. Microbiol. - 2001. - Vol. 1 (67). - P. 1-5.
167. Marshall, V.M. // J. Soc. Dairy Technol. 1993. - Vol. 46. - № 2. -P. 49-56.
168. Martindale, W. The Extra Pharmacopoeia. London. - 1993. - 2363 p.
169. Meisel, H. Nahrung / H. Meisel, S. Gunter. 1998. - Vol. 42. - P. 175-180.
170. Mistra, A.K. Bifidobacteria in food and health / A.K. Mistra, S. Sarkar // Ind. Dairy. 1996. -Vol. 48.-№6.-P. 13-16.
171. Muriana, P.M. Conjugal transfer of plasmid-encoted determinants for bacte-riocin production and immunity of Lactobacillus acidophilus 88 / P.M. Muriana, T.R. Klaenhammer // Appl. Environ. Microbiol. 1987. - Vol. 53. -P. 553-560.
172. Naidu, A.S. Probiotic spectra of lactis acid bacteria (LAB) / A.S. Naidu, W.R. Bidlack, R.A. Clemens // Crit. Rev. Food. Sci. Nutr. 1999. - Vol. 39. -P. 13-126.
173. Naik, R.R. Regulation of the proteinase В in Saccharomyces cerevisiae / R.R. Naik, V. Nebes, E.W. Jones et al. // J. Bacteriol. 1997. - Vol. 179. -P. 1469-1474.
174. Naik, R.R. In Handbook of Proteolytic Enzymes 1 edn // A.J.Barrett, N.D.Rawlings, J.F.Woessner et al. / Academic Press, London. 1998. -P. 317-320.
175. Orrhage, K. Bifidobacteria and Lactobacilli in human health / K. Orrhage, C.E. Nord // Drugs Exp. Clin. Res. 2000. - Vol. 26. - № 3. - P. 95-111.
176. Osset, J. Assessment of the capacity of Lactobacillus to inhibit the growth of uropathogens and block their adhesion to vaginal epithelial cells // J. Osset, R.M. Bartolome, E.A. Garcia // J. Infect. Dis. 2001. - Vol. 183 (3). -P. 485-491.
177. Ouwehand, A.C. Probiotics: mechanismus and estabished effect / A.C. Ou-wehand, P.V. Kirjavainen, C. Shortt et al. // Int. Dairy J. 1999. - Vol. 9. -№ 1. - P. 43-52.
178. Pre-, pro- and synbiotics / Fortified future for functional foods. M. Byrne // Eur. Ed. 1997.-P. 121.
179. Poch, M. / Poch M., Bezkorovainy A. // J. Dairy Sci. 1988. - № 12. -P. 3214-3221.
180. Rabbani, G.H. Randomized controlled trial of berberine sulfate therapy for diarrhea due to enterotoxigenic Escherichia coli and Vibrio cholerae /Т. Butler, J. Knight, S.C. Sanyal 11 J. Infect. Dis. 1987. - Vol. 155(5). - P. 979-984.
181. Reid, G. The scientific basis probiotics strins of Lactobacillus / G. Reid // Appl. Environ. Microbiol. 1999. - Vol. 65. - P. 3763-3766.
182. Roberfroid, M.B. Prebiotics and synbiotics: concepts and nutritional properties / M.B. Roberfroid // Br. J. Nutr. 1998. - Vol. 80. - P. 197-202.
183. Roberfroid, M.B. Prebiotics and probiotics: are they functional foods? / M.B. Roberfroid // Am. J. Clin. Nutr. 2000. - Vol. 71 (Suppl. 6). -P. 1682-1987.
184. Ross, R.P. Overcoming the technological hurdles in the development of pro-biotic foods / R.P. Ross, C. Desmond, G.F. Fitzgerald et al. // J. of Appl. Microbiol. -2005. Vol. 98. - P. 1410-1417.
185. Saarela, M. Stationary-phase acid and heat treatments for improvement of the viability of probiotic lactobacilli and bifidobacteria / M. Saarela, M. Ran-tala, K. Hallamaa et al. // J. of Appl. Microbiol. -2004. Vol. 96. - P. 12051214.
186. Salminen, S. Gut flora in normal and disordered states / S. Salminen, E. Iso-lauri, T. Onnela // Chemotherapy. 1995. - Vol. 41 (1). - P. 5-15.
187. Salminen, S. Clinical application of probiotic bacteria / S. Salminen, A.C. Ouwehand, E. Isolauri // Int. Dairy J. 1998. - Vol. 8. - № 5-6. - P. 563-572.
188. Sanders, M.E. Development of consumer probiotics for the US market / M.E. Sanders // Br. J. Nutr. 1998. - Vol. 80. - P. 213-218.
189. Sanders, M.E. Invited Review: The Scientific Basis of Lactobacillus acidophilus NCFM Functionality as a Probiotic / M.E. Sanders et al. J. Dairy Sci. - 2001. - Vol. 84. - № 2. - P. 319-331.
190. Scardovi, V. IX Bergey's Manual of Systematic Bacteriology. Baltimore. -1986.-Vol. 2.-P. 1209-1234.
191. Scardovi, V. Bergey's Manual of Systemic bacteriology. V. 2 / Eds. P.H.A. Sneath et al. Baltimore: Williams and Wilkins. - 1986. - P. 1418-1435.
192. Schillinger, U. Isolation and identification of lactobacilli from novel-type probiotic and mild yoghurts and their stability during refrigerated storage / U.Schillinger // Int. J. Food. Microbiol. 1999. - Vol. 47. - P. 79-87.
193. Schrezenmeir, J. Probiotics, prebiotics, and synbiotics approaching a definition / J. Schrezenmeir, M.D. Vrese // Am. J. Clin. Nutr. - 2001. - № 73. -S. 361S-4S.
194. Shen, B. Maintenance therapy with a probiotic in antibiotic dependent pouchitis: experience in clinical practice / B. Shen, A. Brzezinski, V.W. Fazio et al. // Aliment. Pharmacol. Ther. - 2005. - Vol. 22. - P. 721-728.
195. Shornicova, A.V. Lactobacillus reuteri as a therapeutic agent in acute diarrhea in young childern / A.V. Shornicova, I.A. Casas. E. Iaolauri // J. Pediatr. Gastroenterol. Nutr. 1997. - Vol. 24. - P. 399-404.
196. Smith, I.S. Hillier A.I., Lees G.I. J. Dairy Res. - 1975. - Vol. 42. -P.123-138.
197. Subbaiah, T.V. Effect of berberine sulphate on Entamoeba histolytica / T.V. Subbaiah, A.H. Amin // Nature. 1967. Vol. 215. - P. 527-528.
198. Then, M. Effect of sample handling on alkaloid and element content in aqueous extract of Chelidonium majus L. / M. Then, K. Szentmihalyi, A. Sarkoziet al. // J. Chromatography. 2000. - Vol. A 889. - P. 69-74.
199. Tuomola, E.M. Adhesion of some probiotic and dairy Lactobacillus strains to Caco-2 cell cultures / E.M. Tuomola, S.J. Salminen // Int. J. Food. Microbiol. 1998.-Vol. 41.-P. 45-51.
200. Verlaeds, M.C. Interference in initial adhesion of pathogenic bacteria and yeasts silicone rubber by a Lactobacillus acidophilus / M.C. Verlaeds, B. van der Belt, H.C. van der Mei // J. Med. Microbiol. 1998. - Vol. 49. -P. 790-794.
201. Voloshchuk, T.P. Study of Ukrain composition using HPLC and UVspectro-scopy methods / T.P. Voloshchuk, Yu.V. Patskovsky, L.A. Zayika // Ukrainica Bioorganica Acta. 2006. - № 2. - P. 27-32.
202. Williamson, G. Human metabolic pathways of dietary flavonoids and cinnamates / G. Williamson, A.J. Day, G.W. Plumb, D. Couteau // Biochemical Society Transactions. 2000. - Vol. 28. - P. 16-21.
203. Ziemer, C.J. An overview of probiotics, prebiotics and synbiotics in the functional food concept: perspektives and future strategies / C.J. Ziemer, G.R. Gibson // Int. Dairy J. 1998. - Vol. 8. - P. 473-479.
-
Назырова, Наиля Рамилевна
-
кандидата биологических наук
-
Уфа, 2007
-
ВАК 03.00.07
- Получение стимуляторов роста микроорганизмов из лекарственных растений
- Сравнительный анализ содержания вторичных метаболитов и ростовых характеристик культур клеток Polyscias fruticosa и Polyscias filicifolia
- Кишечная микрофлора и метаболизм оксалатов (Экспериментальное исследование)
- Селекция и конструирование штаммов молочнокислых бактерий, перспективных для использования в пробиотиках
- Получение и экспериментальная оценка новых пищевых источников органических форм селена
